RU2821309C1 - Применение супероксиддисмутазы 2 в качестве антиоксиданта в сверхмалых дозировках - Google Patents
Применение супероксиддисмутазы 2 в качестве антиоксиданта в сверхмалых дозировках Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821309C1 RU2821309C1 RU2024104433A RU2024104433A RU2821309C1 RU 2821309 C1 RU2821309 C1 RU 2821309C1 RU 2024104433 A RU2024104433 A RU 2024104433A RU 2024104433 A RU2024104433 A RU 2024104433A RU 2821309 C1 RU2821309 C1 RU 2821309C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- superoxide dismutase
- experiment
- antioxidant
- ultra
- low dosages
- Prior art date
Links
- 108010045815 superoxide dismutase 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 102100032891 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title abstract description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 101150005399 sod2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 14
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 10
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 10
- 241000235856 Ceriodaphnia dubia Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 241001302161 Ceriodaphnia Species 0.000 description 8
- KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N potassium dichromate Chemical compound [K+].[K+].[O-][Cr](=O)(=O)O[Cr]([O-])(=O)=O KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 6
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 6
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 6
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 6
- 101150017120 sod gene Proteins 0.000 description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 101100366137 Mesembryanthemum crystallinum SODCC.1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101100096142 Panax ginseng SODCC gene Proteins 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 241000195661 Scenedesmus quadricauda Species 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000023821 Cymbella affinis Species 0.000 description 2
- SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N D-panthenol Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCO SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 235000004866 D-panthenol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011703 D-panthenol Substances 0.000 description 2
- 241000238578 Daphnia Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 2
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 2
- 229960003949 dexpanthenol Drugs 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 2
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 101000708493 Alternaria alternata Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000195627 Chlamydomonadales Species 0.000 description 1
- 241001354415 Coenobia Species 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 241001442240 Desmodesmus communis Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000868115 Homo sapiens Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000165800 Preussia dubia Species 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005008 domestic process Methods 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000008316 intracellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 150000003712 vitamin E derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, биологии и сельского хозяйства и касается применения супероксиддисмутазы 2 в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты в сверхмалых дозировках, а именно в разведении от 10-12 до 10-200. Изобретение позволяет эффективно использовать супероксиддисмутазу 2 в качестве антиоксиданта в сверхмалых дозировках в разведении от 10-12 до 10-200. 10 табл.
Description
Область техники
Изобретение относится к области биотехнологии, биологии и сельского хозяйства и касается применения супероксиддисмутазы 2 (СОД2) в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты в сверхмалых дозировках.
Данный препарат может быть эффективно использован для лечения воспалительных, инфекционных, сердечно-сосудистых, онкологических и нейродегенеративных заболеваний.
В сельском хозяйстве препарат может быть применен в животноводстве, повышая иммунную резистентность животных. В растениеводстве препарат может повышать стрессоустойчивость к факторам внешней среды, активировать выход зеленой массы и вызывать повышение урожайности сельскохозяйственных культур.
Применение препарата возможно в виде водных растворов, сухом виде для энтерального применения. В виде стерильных растворов для парентерального введения. В сельском хозяйстве в виде сухого вещества для приготовления водных растворов для полива и использовании в растворах для гидропонного выращивания растений.
Супероксиддисмутаза (СОД, КФ 1.15.1.1) относится к группе антиоксидантных ферментов. Она защищает организм человека от постоянно образующихся высокотоксичных кислородных радикалов. Супероксиддисмутаза катализирует дисмутацию супероксида в кислород и пероксид водорода. Следовательно, фермент играет большую роль в антиоксидантной защите многих клеток, находящихся в контакте с кислородом.
Фермент присутствует во всех аэробных организмах. В организме млекопитающих СОД2 локализована в митохондриальном матриксе. У человека супероксидисмутаза 2 кодируется геном SOD2 на хромосоме 6.
Уровень техники
В литературе широко описано использование супероксиддисмутазы ив качестве антиоксиданта. Однако нигде в литературе не встречается упоминание о влиянии сверхмалых доз на живые организмы.
Описано использование фермента супероксиддисмутазы в различных отраслях.
Так, в патентной литературе раскрыто использование супероксиддисмутазы в медицине, в косметологии, в сельском хозяйстве, в пищевой промышленности и т.д.
В патенте RU 2600843, опубликованном 27.10.2016, раскрыта композиция для профилактики или снижения риска развития метаболических дисфункций, связанных с ожирением, содержащая Saccharomycescerevisiaevarboulardii в количестве между 106 и 109 колониеобразующих единиц (КОЕ) на суточное введение и фермент супероксиддисмутазу в количестве между 1 и 100 мг.
В патенте RU 2557894, опубликованном 27.07.2015, раскрыто косметическое средство для быстрого восстановления кожи, содержащее супероксиддисмутазу, витамин группы В, янтарную кислоту, отличающееся тем, что дополнительно содержит водорастворимый аналог витамина Е тролокс и L-аргинин, активность супероксиддисмутазы составляет 200000- 300000 ЕД/мг, витамин группы В представлен декспантенолом, соотношение компонентов, мас. %: супероксиддисмутаза 0,01-32, декспантенол 0,1-20, янтарная кислота 0,5 - до рН 6,0, тролокс 0,13-45, L-аргинин 0,9-64, вода для инъекций - остальное.
В патенте RU 2789458, опубликованном 03.02.2023, описан способ повышения иммунного статуса пчелиных семей, зараженных нозематозом, подкормкой, полученной путем обогащения сахарного сиропа 1:1 высокомолекулярным антиоксидантным препаратом S.O.D. - супероксиддисмутаза + каталаза + глутатионпероксидаза, растворенным предварительно в воде, предназначенным для 3-кратной подкормки с периодичностью в 12 дней препаратом в дозировках 100 мг, 200 мг и 300 мг.
В патенте GB 2183658, опубликованном 10.06.1987, описана марганецзависимая супероксиддисмутаза MnSOD(SOD2), которую можно использовать для катализа восстановления супероксидных радикалов, уменьшения реперфузионного повреждения, продления времени выживания изолированных органов или лечения воспалений.
Патент CN 101420973, опубликованный 29.04.2009, относится к композициям, адаптированным для фармацевтического введения, содержащим по меньшей мере одну супероксиддисмутазу и по меньшей мере один пептидный фрагмент на основе проламина.
Раскрытие сущности изобретения.
Неожиданно авторами настоящего изобретения обнаружена способность фермента супероксиддисмутазы в сверхмалых дозах оказывать значительный эффект на экспрессию гена, кодирующего синтез внутриклеточной СОД2, с последующим выраженным антиоксидантным эффектом в живых организмах.
Таким образом, настоящее изобретение относится к применению супероксиддисмутазы 2 в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты в разведении от 10-12 до 10-200.
Технический результат настоящего изобретения заключается в эффективности использования супероксиддисмутазы 2 в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты в сверхмалых дозировках в разведении от 10-12 до 10-200.
В качестве супероксиддисмутазы 2 использовался рекомбинантный белок супероксиддисмутазы 2 человека, митохондриальный (SOD2) (NM_001024465) MVPro, производства OriGeneTechnologiesInc, USA. Использованная доза 10 мг. Указанная доза растворяется в стеклянном флаконе емкостью 3мл с винтовой крышкой в 99 каплях этилового спирта. Производится первичная динамизация матричного раствора путем ударов, зажатого в кулаке флакона, по кожаной подушке 10 раз. Полученный таким образом матричный раствор переносится во флакон с винтовой пробкой емкостью 200 мл, растворяется бидистилированной водой в объеме 99 мл, перемешивается и встряхивается о подушку 11 раз. Подобный процесс повторяется в новых одноразовых флаконах до получения всего спектра сотенных потенций от матричной до СН 200 (отечественная потенция С200), каждая последующая потенция прибавляет по одному удару до 40. Таким образом получали фермент в необходимом разведении от 10-12 до 10-200.
Осуществление изобретения
Проводили эксперименты при разведении супероксиддисмутазы 2, препарат В1 - разведение 10-12 и препарат В2 - 10-200, тест-объект Цериодафния, вид Ceriodaphnia dubia. Объект опыта - Цериодафния, вид Ceriodaphnia dubia(C 2016 года так обозначают группу трудноразличимых видов Цериодафния, куда входит собственно С.dubia, С.affinis и еще несколько видов. Во всех отечественных методиках этот вид называется С.affinis, но согласно WoRMS и мнению д.б.н. А.А. Котова правильно называть ее С.dubia.). Они мельче дафний, что усложняет с ними работу, но их срок жизни короче, всего около 2 месяцев, а потому нам удалось получить результат быстрее, чем при проведении экспериментов на дафниях, рыбах или мышах.
В каждой линии использовали по 20 Цериодафний с индивидуальной рассадкой в пенициллиновые пузырьки объемом 10 мл.
В опыте участвовали следующие линии:
К0 Чистый контроль (с добавками чистой воды 2 раза в неделю для единства манипуляций);
К Контроль с добавками физраствора 2раза в неделю на протяжении месяца (для сравнения с B1, В2);
К + Контроль с добавками физраствора 2раза в неделю на протяжении всего опыта (для сравнения с В1+, В2+,);
81 Опытные повторности с добавками препарата В1 2раза в неделю на протяжении месяца;
82 Опытные повторности с добавками препарата В2 2раза в неделю на протяжении месяца;
В1+ Опытные повторности с добавками препарата В1 2раза в неделю на протяжении всего опыта (58 суток);
В2+ Опытные повторности с добавками препарата В2 2раза в неделю на протяжении всего опыта (58 суток).
Всего: 7 линий по 20 пенициллиновых пузырьков =140 пенициллиновых пузырьков =140 Цериодафний.
Основными показателями изменения состояния организма служили параметры выживаемости, плодовитости и продолжительности жизни по сравнению с контрольными животными. Измерение этих параметров проводили 2-3 раза в неделю. Два раза в неделю среду в опыте заменяли на новую, и, соответственно, осуществляли добавки препарата. Эксперимент продолжали до момента гибели последней цериодафний в наблюдаемых выборках. Общая длительность опыта составила 58 суток.
Результаты, полученные в ходе проведения эксперимента
На протяжении первых двух недель опыта наилучшую выживаемость наблюдали в линиях с добавками В2 (95-100%) (табл. 2). На 31 сутки эксперимента численность рачков во всех исследуемых линиях упала до 50% и ниже (табл. 2;). При этом выживаемость в повторностях с добавками B1 и В2 были выше, чем при добавлении физраствора.
На 29 сутки опыта выживаемость С.Dubia при добавках чистого физраствора была выше, чем в нулевом контроле без его добавления (табл. 3).
По показателю средней продолжительности жизни Ceriodaphnia dubia в исследуемых линиях к 30 суткам опыта нами обнаружен статистически значимый стимулирующий эффект на 13,7 и 12,4% соответственно для препаратов В1 и В2 по сравнению с добавками чистого физраствора.
Максимальная продолжительность жизни особей в течение всего опыта составляла для препарата В1+ 58 суток, а для чистого физраствора - 47 суток. Таким образом, обнаружен эффект увеличения максимальной продолжительности особей цериодафний в 58-суточном эксперименте.
Таким образом, нами были изучены препараты В1 и В2 с использованием в качестве тест-объекта цериодафний Ceriodaphnia dubia в ходе 1- и 2-месячных экспериментов при добавлении их в среду в режиме добавки 2 раза в неделю в течение 1 и 2 месяцев.
По результатам биотестирования на 29 сутки опыта эффект на выживаемость рачков С.dubia при добавках препарата В2 и В1 был выражен лучше, чем при добавлении чистого физраствора.
По показателю средней продолжительности жизни Ceriodaphnia dubia в ходе 1-месячного эксперимента обнаружен статистически значимый стимулирующий эффект на 13,7 и 12,4% соответственно для препаратов В1 и В2 по сравнению с добавками чистого физраствора.
Следует отметить, что для такого важного общебиологического интегрального показателя как средняя продолжительность жизни отмеченное нами увеличение срока жизни рачков Ceriodaphnia dubia на 12-14% является весьма существенным.
По показателю максимальной продолжительности жизни особей цериодафний в 58-суточном эксперименте для препарата В1+ обнаружен эффект увеличения максимальной продолжительности жизни особей на 10 суток по сравнению с чистым физраствором.
Следующий эксперимент проводили с микроводорослями.
В1- супероксиддисмутаза 2 в разведении 10-12
В2- супероксиддисмутаза 2 в разведении 10-200
Тест-объектом исследования являлась альгологически чистая культура зеленой хлорококковой микроводоросли Scenedesmusquadricauda (Тиф.) Breb.(=Desmodesmuscommunis (E.Hegew.)E. Hegew.), широко распространенная в пресных водоемах Южного и Северного полушария и являющаяся важным звеном в их трофических цепях.
S. quadricauda получена из коллекции культур водорослей кафедры микробиологии Биологического факультета МГУ имени М. В. Ломоносова (DMMSU, штамм S-3). Данный вид водорослей относится к ценобиальным организмам. Чаще встречаются 2- и 4-клеточные ценобии, реже - 8- и 16-клеточные. При размножении в каждой клетке образуются автоспоры, которые внутри материнской клетки слагаются в молодую колонию. Данный вид широко используется в мировой практике в биотестировании по оценке качества водной среды и токсичности различных соединений и материалов.
Культуру выращивали на среде Успенского №1 (состав, г/л: 0,025 KNO3, 0,025 MgSO4, 0,1 KH2PO4, 0,025 Ca(NO3)2, 0,0345 K2CO3, 0,002 Fe2(SO4)3; рН 7,0-7,3) в люминостате при освещенности 3,5 клк со сменой дня и ночи (12:12 ч), температуре 22±2°С и перемешивали 2 раза в сут во избежание оседания клеток.
Тест-культуру предварительно адаптировали к веществам В1 (фермент супероксиддисмутаза 2 в разведении 10-12) и В2 (фермент супероксиддисмутаза 2 в разведении 10-200). Для этого с момента посева культуры на питательную среду с исходной численностью 40 тыс кл/мл вещества добавляли в культуру по следующей схеме:
B1 добавляли в колбы с культурой (объемом 50 мл) каждый рабочий день (на 0, 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 14 сутки адаптации) по 0,1 мл.
B2 добавляли в том же объеме, но два раза в неделю, в понедельник и пятницу (0, 4, 7, 11, 14 сутки адаптации).
Данные роста культуры в процессе добавления веществ В1 и В2 представлены в табл. 6.
Как видно из табл. 6, рост культуры в процессе адаптации к веществам В1 и В2 практически не отличался от контрольной неадаптированной культуры в течение всего 14 суточного периода адаптации. При этом во всех вариантах, включая контроль, абсолютная численность клеток в кл/мл за 14 суток адаптации возрастала примерно в 60 раз от 40 тыс кл/мл (в день посева) до 2,5 млн кл/мл.
По данным люминесцентной микроскопии доля живых клеток во всех вариантах и на все сроки наблюдения была на уровне контроля и составляла 97-99%.
На седьмые сутки добавки веществ была зафиксирована стимуляция показателя эффективности фотосинтеза по сравнению с контролем на 10% для вещества В2 и на 24% для вещества В1 (табл. 7).
Эксперимент с эталонным токсикантом бихроматом калия
На 14 сутки адаптации из колб с чистым контролем и колб с адаптированными к веществам В1 и В2 клетками водоросли, был взят инокулят для проведения основной части опыта с токсикантом. В этот же день поставлен эксперимент по изучению ответных реакций чистой и адаптированной к веществам В1 и В2 культуры Scenedesmusquadricauda на стандартный токсикант бихромат калия. Токсикант был взят в концентрациях 0,1; 1 и 5 мг/л (малая, средняя и высокотоксичная концентрации)бихромата калия. Численность клеток водорослей в каждой колбе составляла 40 тыс кл/мл. Объем питательной среды с культурой в каждой колбе - 50 мл. Для каждой исследованной концентрации токсиканта (0,1, 1 и 5 мг/л), и каждого типа культуры (чистой, адаптированной к В1, адаптированной к В2) были взяты по три повторности, всего 27 колб. В качестве контроля были взяты три колбы с чистой культурой без добавления токсиканта. Итого 30 колб.
Измерения проводили на 1, 3, 7, 10 и 14 сутки хронического опыта.
Исследуемые показатели - численность клеток, эффективность фотосинтеза и доля живых клеток в культуре.
Как видно из табл. 8, значительная стимуляция фотосинтеза культуры(на 15-76%) отмечена для всех случаев опыта с разными концентрациями токсиканта у адаптированных к веществам В1 и В2 культур уже на первые сутки опыта. При этом у адаптированных культур к В2 стимулирующий эффект был выражен сильнее. Так разница с контролем у адаптированных к В2 культур с разными концентрациями токсиканта была на 41-76%. Контролями в данном случае был фотосинтез в присутствии соответствующих концентраций токсиканта уже адаптированных к веществу культур. А разница с контролем у адаптированных к В1 культур при разных концентрациях токсиканта была на 15-29%.
Таким образом, нами был выявлен эффект уменьшения токсичности при всех исследованных концентрациях бихромата калия у адаптированных к веществам В1и В2 культур по физиологическому показателю - величине эффективности фотосинтеза, что может свидетельствовать о быстром (уже на первые сутки опыта) процессе интенсификации обменных процессов у адаптированных к веществам культур для детоксикации тяжелого металла хрома (в составе бихромата калия). В токсикологии этот показатель позволяет выявить более ранний ответ на токсическое воздействие по сравнению с интегральными показателями численности или выживаемости особей, слагающих популяцию (в данном случае популяции клеток водоросли).
Известно, что стимуляция процесса фотосинтеза может служить показателем ускорения выведения излишка токсичного металла из клетки. Этот процесс является одним из важных внутриклеточных механизмов детоксикации токсичного металла.
Таким образом, препараты В1 и В2 обладают антиоксидантным свойством, снижая токсическое влияние тяжелого металла хрома и уменьшая его токсичность для исследованного тест-объекта при разных уровнях интоксикации.
Экспериментально в длительном опыте на большом количестве поколений клеток тест-объекта показано снижение токсического влияния бихромата калия при разных уровнях его воздействия под действием препаратов В1 и В2.
Следующий эксперимент был проведен на курах-несушках кросса «Ломанн белый ЛСЛ» в возрасте 96-100 недель. Опытную и контрольную группу сформировали по принципу пар-аналогов с учетом яйценоскости и массы яйца, птица была разделена на 2 группы по 41 голове в каждой.
Куры контрольной и опытной группы получали полнорационный комбикорм в соответствии с рекомендациями производителя кросса. Птица опытной группы 2 раза в неделю получала экспериментальную кормовую добавку, представляющую собой препарат В2, т.е. супероксиддисмутазу 2 в разведении 10-200, нанесенный на сарахную крупку размером 38-41 шт в 1 грамме, а птица контрольной группы получала плацебо.
В конце эксперимента по 5 особей из каждой группы подвергли эвтаназии. Образцы тканей печени и миокарда отобрали для оценки экспрессии гена супероксиддисмутазы.
Были выполнены молекулярно-генетические исследования. Тотальную РНК из образцов выделяли вручную при помощи набора RNeasyMiniKit (QIAGEN, Германия) согласно протоколу. Количественная оценка выделенной РНК была выполнена на флуориметре Qubit 3.0 (Thermo Fisher Scientific, США) с помощью набора Qubit RNA HS (HighSensitivity) AssayKit (Thermo Fisher Scientific, США).Синтез кДНК из матрицы РЖ проводили с помощью набора iScriptcDNAsynthesiskit (Bio-Rad, США) с использованием термостата «Гном» (ДНК-Технология, Россия). Полимеразная цепная реакция в реальном времени была выполнена на амплификаторе LightCycler 96 (Roche, Швейцария) с использованием 96-луночных планшетов и с использованием мастер-микса PowerUp SYBR GreenMasterMix (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, США).Температурный профиль реакции амплификации состоял из: 95°С в течение 10 минут; 40 циклов при 95°С в течение 15 секунд, включая отжиг праймеров по индивидуальной температуре в течение 30 секунд и 72°С в течение 30 секунд. Каждый образец исследовался в трех повторах на ПЦР планшете. Количество кДНК на каждую ПЦР реакцию составило 2 мкл при концентрации праймеров равной 0,32 мкМ. Расчет экспрессии гена SOD относительно контрольного гена (ген домашнего хозяйства) был выполнен вручную с помощью Microsoft Office Excel с использованием метода 2-ΔΔCt. Полученные зоотехнические и молекулярно-генетические данные считали достоверными при р<0.05.
Из данных таблицы 9 можно сделать вывод, что экспрессия гена супероксиддисмутазы 2 в миокарде в опытной группе на 4% выше, чем в контрольной.
Таблица 10. Экспрессия гена супероксиддисмутазы 2 в печени
Из данных таблицы 10, можно сделать вывод, что экспрессия гена супероксиддисмутазы 2 в паренхиме печени в опытной группе на 28% выше, чем в контрольной.
Таким образом, в результате эксперимента был получен следующий результат: Экспрессия гена супероксиддисмутазы 2 в опытной группе повысилась на 4% в ткани миокарда и на 28% в паренхиме печени.
Таким образом, использование супероксиддисмутазы 2 (СОД2) в сверхмалых дозах, а именно, в разведении от 10-12 до 10-200 позволяет восстановить и поддерживать на оптимальном уровне экспрессию гена супероксиддусмутазы 2, тем самым повышая собственный внутриклеточный синтез фермента, с обеспечением выраженных системных биологических реакций.
Суммируя вышеизложенное, проведенные эксперименты позволяют утверждать, что супероксиддисмутазу 2 (СОД2) можно применять в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты в сверхмалых дозах, а именно, в разведении от 10-12 до 10-200.
Claims (1)
- Применение супероксиддисмутазы 2 в разведении от 10-12 до 10-200 в качестве активатора экспрессии гена СОД2 для увеличения синтеза собственной внутриклеточной СОД и стимуляции антиоксидантной защиты.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2821309C1 true RU2821309C1 (ru) | 2024-06-20 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101420973A (zh) * | 2006-03-15 | 2009-04-29 | 埃索谢尔制药公司 | 包含SODs和基于谷醇溶蛋白的肽片段的药物组份 |
RU2600843C2 (ru) * | 2011-08-03 | 2016-10-27 | Ньосис Спа | Композиции, содержащие saccharomyces boulardii и супероксиддисмутазу (sod) для борьбы с ожирением |
WO2022244757A1 (ja) * | 2021-05-18 | 2022-11-24 | 株式会社Lttバイオファーマ | 抗癌剤の投与に伴う障害を治療又は予防するための医薬組成物 |
RU2789458C1 (ru) * | 2022-01-12 | 2023-02-03 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Удмуртский государственный аграрный университет" | Способ повышения иммунного статуса пчелиных семей, зараженных нозематозом |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101420973A (zh) * | 2006-03-15 | 2009-04-29 | 埃索谢尔制药公司 | 包含SODs和基于谷醇溶蛋白的肽片段的药物组份 |
RU2600843C2 (ru) * | 2011-08-03 | 2016-10-27 | Ньосис Спа | Композиции, содержащие saccharomyces boulardii и супероксиддисмутазу (sod) для борьбы с ожирением |
WO2022244757A1 (ja) * | 2021-05-18 | 2022-11-24 | 株式会社Lttバイオファーマ | 抗癌剤の投与に伴う障害を治療又は予防するための医薬組成物 |
RU2789458C1 (ru) * | 2022-01-12 | 2023-02-03 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Удмуртский государственный аграрный университет" | Способ повышения иммунного статуса пчелиных семей, зараженных нозематозом |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6022722B2 (ja) | 汚染に対し過酸化水素を用いるHaematococcus pluvialisの培養方法 | |
RU2689730C1 (ru) | Способ кормления перепелов | |
Zhang et al. | Impact of static magnetic field (SMF) on microorganisms, plants and animals | |
RU2821309C1 (ru) | Применение супероксиддисмутазы 2 в качестве антиоксиданта в сверхмалых дозировках | |
RU2821311C1 (ru) | Способ применения супероксиддисмутазы 2 в качестве антиоксиданта в сверхмалых дозировках | |
KR20100095829A (ko) | 글루타치온을 고농도로 생산하는 사카로마이세스 세레비시애의 돌연변이체 및 이를 배양하여 글루타치온을 대량 생산하는 방법 | |
Suga et al. | Axenic culture of Brachionus plicatilis using antibiotics | |
JP2018520656A (ja) | 干渉rna分子を送達する飼料としてのトランスジェニック微細藻類およびその使用 | |
RU2619255C1 (ru) | Способ повышения инкубационного качества яиц при длительном их хранении | |
Yang et al. | Impact of SMFs on microorganisms, plants, and animals | |
Wang et al. | Isolation and identification of Saprolegnia parasitica from grass carp and screening of sensitive drugs | |
RU2700473C1 (ru) | Способ профилактики стресс-индуцированных нарушений как залог оптимизации становления механизмов адаптации у эмбрионов и молодняка кур | |
Nadirah et al. | The Effect of Heat Stress on the Oxidative Status of Red Hybrid Tilapia (Oreochromis sp.) Infected With Streptococcus Agalactiae. | |
RU2734835C1 (ru) | Способ повышения жизнестойкости эмбрионов рыб в аквакультуре | |
Mitiohlo et al. | Growth intensity of Trichoderma Viride at different doses and sources of copper in the medium | |
KR102277576B1 (ko) | 전복에서 유래한 항균 펩타이드 | |
RU2787241C2 (ru) | Способ повышения продуктивности цыплят-бройлеров | |
RU2812916C1 (ru) | Способ повышения эффективности выращивания рыбы | |
Hadie et al. | Adaptation strategy for Jambal Catfish (Pangasius djambal) to stress the aquatic environment | |
RU2156060C1 (ru) | Способ обслуживания пчел | |
WO2023007656A1 (ja) | 藻食性魚介類のための餌料の決定方法、藻食性魚介類への給餌方法、および餌料の製造方法 | |
Madzgarashvili et al. | Making Bee Bread from Pollen without honeycombs | |
Sen et al. | Effect of splenectomy on ‘Antrycide’therapy of Trypanosoma evansi infection in rats | |
RU2497945C2 (ru) | ШТАММ ОДНОКЛЕТОЧНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ Dunaliella salina - ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ | |
RU2613971C1 (ru) | Способ повышения жизнестойкости икры, личинок и молоди рыб |