RU2818371C1 - Иммуноцитокины и их применение - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к иммуноцитокинам, которые содержат цитокин или его вариант, расположенные в шарнирном участке тяжелой цепи антитела или в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом и субъединицей Fc-домена или ее частью. Также раскрыты нуклеиновая кислота, кодирующая указанный иммуноцитокин, фармацевтический состав и применение иммуноцитокина. Изобретение эффективно для регуляции иммунных ответов. 4 н. и 23 з.п. ф-лы, 16 ил., 27 табл., 32 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[1] Для настоящей заявки испрашивается притязание на преимущества приоритета предварительной заявки на патент США № 63/130339, поданной 23 декабря 2020 г., содержание которой полностью включено в настоящее описание ссылкой.

ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ В ФОРМАТЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА ASCII

[2] Содержание следующего представления в формате текстового файла ASCII полностью включено в настоящий документ ссылкой: машиночитаемая форма (CRF) Перечня последовательностей (название файла: 754392000640SEQLIST.TXT, дата записи: 23 декабря 2021 г., размер: 1037246 байт).

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[3] Настоящее изобретение относится к иммуноцитокинам, содержащим цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенный в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором или фрагментом антитела) и субъединицей Fc-домена или ее частью, способам их получения и применения.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[4] Цитокины являются ключевыми регуляторами врожденной и адаптивной иммунной системы, которые позволяют иммунным клеткам взаимодействовать друг с другом. Цитокиновая терапия для активации иммунной системы больных раком остается ключевой областью клинических исследований рака. Достижение эффективного противоопухолевого ответа без развития токсичности, ограничивающей лечение, при монотерапии цитокинами представляет собой трудную задачу. Типичным примером этой проблемы является низкий показатель эффективности при печально известной токсичности терапии с использованием IL-2 и IL-12. Обнаружено, что высокие дозы IL-2 вызывают синдром сосудистого пропотевания (VLS), толерантность по отношению к опухоли, вызванную индуцированной активацией гибелью клеток (AICD), и иммуносупрессию, вызванную активацией регуляторных Т-клеток (Treg). Это тяжелое побочное действие часто ограничивает оптимальную дозировку IL-2, что ограничивает число пациентов с позитивным ответом на лечение. IL-12 продемонстрировал умеренный противоопухолевый ответ в клинических испытаниях, но часто сопровождался значительной токсичностью. (Lasek и др., Cancer Immunol Immunother., 2014). Было обнаружено, что лечение IL-12 сопровождалось системными гриппоподобными симптомами (например, лихорадкой, ознобом, утомляемостью, эритромелалгией и головной болью) и токсическим воздействием на костный мозг и печень. Исследования дозирования показали, что пациенты могли переносить IL-12 только в дозе менее 1 мкг/кг, что намного ниже терапевтически эффективной дозы. При использовании IL-12 в качестве монотерапии или в сочетании с другими агентами продемонстрировать сильное устойчивое терапевтическое действие в клинических испытаниях не удалось (Lasek и др., 2014).

[5] Было предпринято несколько попыток преодолеть проблемы, связанные с монотерапией цитокинами. Недавние исследования NKTR-214 - рекомбинантного человеческого IL-2, конъюгированного с полиэтиленгликолем (ПЭГ; «IL-2-ПЭГ») - показал многообещающие результаты на животных моделях. IL-2-ПЭГ обладает двумя преимуществами. Во-первых, стерические затруднения ПЭГ маскируют область на IL-2, которая взаимодействует с субъединицей α-рецептора IL-2 (IL-2Rα), ответственной за активацию иммуносупрессивных Treg, смещая активность в сторону уничтожения опухоли CD8+ T-клетками (Charych и др., Clin Cancer Res., 2016). Во-вторых, конъюгирование с ПЭГ значительно улучшает период полувыведения из плазмы и протеолитическую стабильность, а также снижает иммуногенность и всасывание в печени (Chaffee и др., J Clin Invest., 1992; Pyatak и др., Res Commun Chem Pathol Pharmacol., 1980). С целью преодоления побочных эффектов цитокиновой терапии нацеленная доставка цитокинов (например, IL-12) в области нахождения опухоли путем местной инъекции или с использованием иммуноцитокинов (цитокинов, слитых с антителами, фрагментами антител или составным белком лиганд/рецептор-Fc). Иммуноцитокины могут нацеливать цитокины на представляющие интерес клетки или ткани, такие как опухолевые клетки или иммунные эффекторные клетки (Klein и др., Oncoimmunology, 2017; King и др., J Clin Oncol., 2004).

[6] Раскрытия всех публикаций, патентов, патентных заявок и опубликованных патентных заявок, упомянутых в настоящем документе, настоящим полностью включены в данный документ ссылкой.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[7] В одном аспекте настоящей заявки предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело или составной белок лиганд/рецептор-Fc), специфично распознающий антиген-мишень; и b) цитокин или его вариант, причем антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь или составной полипептид лиганд/рецептор-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, фрагмент антитела, лиганд или рецептор), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N-конце, С-конце или внутри).

[8] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела или составного белка лиганд/рецептор-Fc) с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем на примерно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью.

[9] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела или составного белка лиганд/рецептор-Fc) с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта, расположенных в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6 %, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии.

[10] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, и активность варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии.

[11] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, антигенсвязывающий белок (например, антитело или составной белок лиганд/рецептор-Fc) содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелую цепь или составной полипептид лиганд/рецептор-Fc), каждый из которых содержит шарнирный участок, и только один антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида, каждый из которых содержит шарнирный участок, и каждый антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке.

[12] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, иммуноцитокин содержит два или более (например, 2, 3, 4 или более) цитокинов или их вариантов, и два или более цитокинов или их вариантов расположены последовательно в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи или составного полипептида лиганд/рецептор-Fc).

[13] В некоторых вариантах осуществления любого из иммуноцитокинов, описанных выше, цитокин или его вариант представляет собой мономерный цитокин или его вариант (например, IL-2, IFN-α, такой как IFN-α2b). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой димерный цитокин или его вариант (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23). В некоторых вариантах осуществления обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи или составного полипептида лиганд/рецептор-Fc). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида, каждый из которых содержит шарнирный участок, и одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке одного антигенсвязывающего полипептида, а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке другого антигенсвязывающего полипептида.

[14] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, два или более (например, 2, 3, 4 или более) цитокина или их варианты являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления два или более (например, 2, 3, 4 или более) цитокина или их варианты отличаются.

[15] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, антигенсвязывающий белок представляет собой моноспецифичный антигенсвязывающий белок (например, моноспецифичное антитело или составной белок лиганд/рецептор-Fc). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой мультиспецифичный антигенсвязывающий белок (например, мультиспецифичное антитело или составной белок лиганд/рецептор-Fc).

[16] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, антиген-мишень выбран из группы, состоящей из TIGIT, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, CD3, CD4, CD8, CD123, CD25 и HER2.

[17] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL -7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-35 , IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, VEGF, эритропоэтина, тромбопоэтина, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-10, IL-12, IL-23, IFN-α и IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из L18, Q22, F24, K35, R38, F42, K43, E61, P65, Q126 и S130, и соответствующем положению в IL-2 дикого типа, содержащем последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из L18R, Q22E, F24A, R38D, K43E, E61R, P65L, Q126T и S130R, в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит мутацию R38D/K43E/E61R, мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R, мутацию R38D/K43E/E61R/Q126T, мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T или мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 2 и 251-254. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-α или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α содержит одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из R22, L26, F27, L30, K31, D32, R33, H34, D35, F36, S68, T79, K83, Y85, Y89, R120, K121, Y122, Q124, Y129, K131, E132, R144 и E146, и соответствующем положению в IFN-α, содержащем последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из L30A, K31A, D32A, R33A, H34A и D35A, в отличие от IFN-α, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 4-9. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α содержит мутацию L30A в отличие от IFN-α, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-γ или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IFN-γ в положении, выбранном из группы, состоящей из V5, S20, D21, V22, A23, D24, N25, G26, H111 и Q115, и соответствующем положению в субъединице IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ в одной или обеих субъединицах IFN-γ содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из S20A, D21A, D21K, V22A, A23S, A23E, A23Q, A23V, D24A, D24E, N25A, N25K и H111D, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления в одной или обеих субъединицах IFN-γ варианта IFN-γ содержится одна или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из S20A/D21A, D21K, V22A/A23S, D24A/N25A, A23E/D24E/N25K, A23Q, и A23V, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 11-17. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит мутацию A23V в одной или обеих субъединицах IFN-γ, которые соотносятся с субъединицей IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IFN-γ или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-10 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10 в положении, выбранном из группы, состоящей из N21, M22, R24, D25, L26, R27, D28, A29, F30, S31, R32, H90 и S93, и соответствующем положению в субъединице IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A, L26A, R27A, D28A, A29S, F30A, S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A/L26A, R27A, D28A/A29S, F30A/S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 21-26. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит мутацию R27A в одной или обеих субъединицах IL-10, которые соотносятся с субъединицей IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IL-10 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, и соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащий последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит мутацию F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 и субъединица р35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36, 275, 331 или 332. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-23 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, и соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащий последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 194-242, такую как любая из SEQ ID NO: 227-229.

[18] В некоторых вариантах осуществления любого из иммуноцитокинов, описанных выше, цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи или составном полипептиде лиганд/рецептор-Fc).

[19] В некоторых вариантах осуществления любого из иммуноцитокинов, описанных выше, субъединица Fc-домена или ее часть содержит мутацию типа «выступы во впадины» (KIH).

[20] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к HER2, содержащее: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 154, (i) цитокин или его вариант, представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 156; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 157; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 158; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 159; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 160; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 161. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD3, содержащее: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 94, (i) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 96; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 97; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 98; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 99; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 100; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 101. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело представляет собой антитело к PD-1, содержащее VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 106, (i) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 108; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 109; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 110; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 111; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 112; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 113. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD4, содержащее: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 77, (i) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 79; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 80; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 81; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 82; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 83; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело представляет собой антитело к CD8, содержащее VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 117, (i) цитокин или его вариант, представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 119; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 120; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 121; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 122; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 123; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 124. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело представляет собой антитело к CTLA-4, содержащее VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 129, (i) цитокин или его вариант, представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 131; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 132; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 133; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 134; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 135; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-L1, содержащее: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 140, (i) цитокин или его вариант, представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 144; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 145; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 146; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 147; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 148; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 149. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело представляет собой антитело к CD25, содержащее VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 165, (i) цитокин или его вариант, представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 169; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 170; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, а тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 171; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 172; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 173; или (vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 174. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вторую тяжелую цепь, не содержащую цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем вторая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-1 со сниженным (сниженным по меньшей мере примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 50, 100, 1000 или более раз) сродством связывания с PD-1 по сравнению с ниволумабом. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело представляет собой антитело к PD-1, содержащее VH-CDR1, и VH-CDR2, и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103, где VH-CDR3 содержит любую из следующих мутаций в отличие от SEQ ID NO: 102: D100N, D100G, D100R, N99G, N99A или N99M. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 106, где цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, и где тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 268-273.

[21] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из иммуноцитокинов, описанных выше, (i) антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом; или (ii) антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления лиганд или рецептор выбран из группы, состоящей из IL-2, IL-2Rα (CD25), PD-1, PD-L1, PD-L2, NKG2A, NKG2C, NKG2F, NKG2D, BCMA, APRIL, BAFF, IL-3, IL-13, LLT1, AICL, DNAM-1 и NKp80. В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой PD-L2. В некоторых вариантах осуществления лиганд содержит последовательность SEQ ID NO: 176. В некоторых вариантах осуществления (i) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, а антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 180; (ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, и антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 182; (iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, и антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 183; (iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, а антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 184; (v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 186; (vi) где цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 275, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 274; или (vii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, а антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 187. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит второй антигенсвязывающий полипептид, не содержащий цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, а второй антигенсвязывающий полипептид содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 178, 179, 181 и 185. В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой внеклеточный домен PD-L1 или получен из него. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L1 усиливает (например, усиливает по меньшей мере примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 10, 20, 50, 100, 100 или более раз) связывание с PD-1 по сравнению с PD-L1 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L1 содержит любые мутации или их комбинации относительно SEQ ID NO: 249: I54Q, E58M, R113T, M115L, S117A и G119K. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L1 содержит любую из следующих мутаций относительно SEQ ID NO: 249: E58M/R113T/M115L/S117A/G119K, I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K, I54Q/R113T/M115L/S117A/G119K, I54Q/E58M/M115L/S117A/G119K, I54Q/E58M/R113T/S117A/G119K, I54Q/E58M/R113T/M115L/G119K или I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L1 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 255-261. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, а антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 277. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий второй цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке или на C' Fc-фрагмента. В некоторых вариантах осуществления второй цитокин или вариант представляет собой любой цитокин или вариант, описанный в данном документе, такой как IL-2 или IFN-γ или их вариант. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий второй цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, причем второй антигенсвязывающий полипептид содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 285-288 и 327. В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой внеклеточный домен PD-L2 или получен из него. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L2 усиливает (например, усиливает по меньшей мере примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 10, 20, 50, 100, 100 или более раз) связывание с PD-1 по сравнению с PD-L2 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L2 содержит любые мутации или их комбинации относительно SEQ ID NO: 176: T56V, S58V, Q60L или T56V/S58V/Q60L. В некоторых вариантах осуществления лиганд PD-L2 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 262-265. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, и при этом антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 293. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий второй цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке или на C' Fc-фрагмента. В некоторых вариантах осуществления второй цитокин или вариант представляет собой любой цитокин или вариант, описанный в данном документе, такой как IL-2 или IFN-γ или их вариант. В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой внеклеточный домен CD155 или получен из него. В некоторых вариантах осуществления лиганд CD155 содержит последовательность SEQ ID NO: 267.

[22] В настоящем изобретении также предложены любые антитела к PD-1, описанные в данном документе, такие как антитела е PD-1 с мутациями HC-CDR3, описанными в данном документе.

[23] В настоящем изобретении также предложены любые иммуноцитокины, описанные в данном документе, такие как любые конструкции, описанные в примерах, включая одноцепочечную вставку цитокина в шарнирном участке, двухцепочечную вставку цитокина (одинаковую или разную) в шарнирном участке, или конструкция, где один цитокин, составлен с шарнирным участком одной цепи, а другой составлен с C'-концом Fc-фрагмента другой цепи. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой любой цитокин или его вариант, описанный в данном документе, такой как IL-2, IL-12, IFN-γ и т.д.

[24] В данном документе также представлены иммуноцитокины, содержащие цитокин или его вариант, составленный с С' антигенсвязывающего белка, специфично распознающего антиген-мишень (например, с С' фрагмента Fc). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит: а) антигенсвязывающий белок, специфично распознающий антиген-мишень; и b) цитокин или его вариант (например, любой из описанных в данном документе), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, антитело к PD-1, PD-L1 или PD-L2), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, и где цитокин или его вариант расположены на C'-конце субъединицы Fc-домена или ее части.

[25] Также в данном документе предложены иммуноцитокины, включающие а) антигенсвязывающий белок, специфично распознающий антиген-мишень; b) первый цитокин (например, IL-2 или IFN-γ) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-12) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, где первый цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке; и второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, и где второй цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке.

[26] Также в данном документе предложены иммуноцитокины, включающие а) антигенсвязывающий белок, специфично распознающий антиген-мишень; b) первый цитокин (например, IL-2 или IFN-γ) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-12) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, где первый цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке; и второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, и где второй цитокин или его вариант расположен на C'-конце Fc-домена.

[27] В другом аспекте настоящей заявки предложен способ избирательного стимулирования активности цитокина или его варианта, направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень, у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина, где иммуноцитокин включает: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело или составной белок лиганд/рецептор-Fc), специфично распознающий антиген-мишень; и b) цитокин или его вариант, причем антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь или составной полипептид лиганд/рецептор-Fc), содержащий от, N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, фрагмент антитела, лиганд или рецептор), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N-конце, на С-конце или внутри), и активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен способ избирательного стимулирования активности цитокина или его варианта, направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень, у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов, описанных выше, причем активность цитокина или его варианта избирательно стимулируется при связывании антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью при отсутствиеи связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60 %, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, и активность варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления (i) антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом; или (ii) антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором.

[28] Кроме того, предложены выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из иммуноцитокинов, описанных в данном документе, векторы (например, лентивирусный вектор), содержащие такие нуклеиновые кислоты, клетки-хозяева (например, клетка СНО), содержащие такие нуклеиновые кислоты или векторы, и способы получения любого из описанных в данном документе иммуноцитокинов.

[29] Также предложены составы (например, фармацевтические составы), наборы и изделия, содержащие любой из описанных в данном документе иммуноцитокинов. Также предложены способы лечения заболевания или расстройства (например, рака, инфекции, аутоиммунного заболевания, аллергии, отторжения трансплантата или болезни трансплантат против хозяина (БТПХ)) у индивидуума с использованием эффективного количества любого из описанных в данном документе иммуноцитокинов или составов (например, фармацевтических составов), также представлены.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[30] На фигуре 1А показано строение полноразмерного антитела. На фигуре 1В показан пример строения иммуноцитокина, содержащего цитокин или его вариант, составленный с N-концом субъединицы Fc-фрагмента исходного полноразмерного антитела. На фигуре 1С показан пример строения иммуноцитокина, содержащего цитокин или его вариант, составленный с С-концом тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела. На фигуре 1D показан пример строения иммуноцитокина, содержащего цитокин или его вариант, составленный с N-концом вариабельного домена тяжелой цепи (VH) исходного полноразмерного антитела. На фигуре 1Е показан пример строения иммуноцитокина, содержащего цитокин или его вариант, составленный с С-концом константной области легкой цепи (CL) исходного полноразмерного антитела. Каркас исходного антитела обозначен заштрихованными светло-серыми участками.

[31] На фигурах 2A-2D показаны примеры строения иммуноцитокинов настоящегоизобретения, в которых один или несколько цитокинов или их вариантов (или их субъединиц) расположены в шарнирном участке одной или обеих тяжелых цепей исходного полноразмерного антитела. На фигуре 2A изображен мономерный цитокин или его вариант (например, IL-2 или IFN-α), расположенный в шарнирном участке одной тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела. На фигуре 2B изображен димерный (гомодимерный или гетеродимерный) цитокин или его вариант (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), экспрессированный в одиночной цепи и расположенный в шарнирном участке одной тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела. На фигуре 2C изображены два цитокина или их варианта, расположенные последовательно в шарнирном участке одной тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела. На фигуре 2D изображены два цитокина или их варианта, каждый из которых расположен в шарнирном участке одной тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела, или димерный (гомодимерный или гетеродимерный) цитокин или его вариант, причем каждая субъединица расположена в шарнирном участке одной тяжелой цепи исходного полноразмерного антитела. Каркас исходного антитела обозначен заштрихованными светло-серыми участками.

[32] На фигурах 3A-3C показаны альтернативные примеры строения иммуноцитокина настоящего изобретения, в которых цитокин или его вариант расположены между VH (например, внутри Fab или scFv) и субъединицей Fc-фрагмента. Каркас исходного антитела обозначен заштрихованными светло-серыми участками.

[33] На фигурах 4A-4C показаны примеры строения иммуноцитокинов настоящего изобретения, в которых один или несколько цитокинов или их вариантов (или их субъединиц) расположены в шарнирном участке одного или обоих полипептидов составного белка исходный лиганд/рецептор-шарнир-Fc. На фигуре 4A изображен мономерный цитокин или его вариант (например, IL-2 или IFN-α), расположенный в шарнирном участке одного полипептида составного белка исходный лиганд/рецептор-шарнир-Fc. На фигуре 4B изображены два цитокина или их варианты, каждый из которых расположен в шарнирном участке одного полипептида исходного составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc, или димерный (гомодимерный или гетеродимерный) цитокин или его вариант, причем каждая субъединица расположена в шарнирном участке одного полипептида исходного составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc. На фигуре 4С изображен димерный (гомодимерный или гетеродимерный) цитокин или его вариант (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), экспрессированный в виде одной цепи, или два цитокина или их варианты, составленные последовательно и расположенные в шарнирном участке одного полипептида исходного составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc. Светло-серые участки указывают на каркас исходного составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc.

[34] На фигуре 5 показан объем опухоли у мышей с сингенной опухолью 4T1, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48), иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29), иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/IL-2(R38D/K43E/E61R)/антитело к PD-1 (№54) или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций.

[35] На фигуре 6 показан объем опухоли у мышей с сингенной опухолью EMT6, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48), иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29), иммуноцитокином IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc (№11) или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций.

[36] На фигурах 7A и 7B показан объем опухоли у мышей с сингенной опухолью CT26, обработанных иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), иммуноцитокином PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций. На фигуре 7А показан средний объем опухоли для всех мышей, получавших указанный иммуноцитокин IL-12 или контроль. Средний размер опухоли (±STD) в каждой группе в момент проведения первой обработки показан в скобках. На фигуре 7B показаны объемы опухолей для отдельных мышей, получавших указанный иммуноцитокин IL-12.

[37] На фигуре 8 показаны объемы опухолей у мышей, ранее обработанных иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) или иммуноцитокином PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) против опухоли CT26, затем повторно - заражение клетками мышиного рака толстой кишки CT26 на правом фланге и клетками мышиного рака молочной железы EMT6 на левом фланге (в качестве контроля).

[38] На фигуре 9 показан объем опухоли у мышей с сингенной опухолью CT26 на поздней стадии, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№29) или иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30). Черными стрелками указаны дни инъекций. Размер опухоли каждой мыши в момент проведения первой обработки показан в скобках.

[39] На фигуре 10 показана регрессия размера опухоли в модели сингенной опухоли CT26 на поздних стадиях у мышей, получавших иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (конструкция №30).

[40] На фигурах 11A и 11B изображены объем опухоли у сингенных мышей с опухолью молочной железы EMT6, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№29), иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48) или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций. На фигуре 11А показан средний объем опухоли для всех групп мышей, в скобках указан средний размер опухоли (±STD) при первой обработке. На фигуре 11В показаны объемы опухоли для каждой мыши, получавшей указанные иммуноцитокины IL-12.

[41] На фигуре 12 показаны объемы опухолей у мышей, ранее получавших иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№29), иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) или иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48) против опухоли EMT6, затем мышей повторно заражали клетками рака молочной железы EMT6 в правом боку и клетками рака толстой кишки мыши CT26 в левом боку (в качестве контроля).

[42] На фигуре 13 показаны опухоли мышиного рака молочной железы 4T1, иссеченные из жировой ткани молочной железы мышей, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29), IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№ 30), комбинацией антител к PD-1 и к CTLA-4 или PBS (отрицательный контроль).

[43] На фигуре 14 показаны клетки мышиного рака молочной железы 4T1, метастазировавшие в легкие у мышей, которым вводили клетки 4T1 в жировую ткань молочной железы и лечили иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29), IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), комбинацией антител к PD-1 и к CTLA-4 или PBS (отрицательный контроль).

[44] На фигурах 15A и 15B показан объем опухоли у мышей с сингенной опухолью меланомы B16, обработанных иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), иммуноцитокином PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций. На фигуре 15А показан средний объем опухоли для всех групп мышей, в скобках указан средний размер опухоли (±STD) при первой обработке. На фигуре 15В показаны объемы опухоли для отдельной мыши, получавшей указанные иммуноцитокины IL-12.

[45] На фигурах 16A и 16B изображены объем опухоли у сингенных мышей с раком легкого LL2, обработанных иммуноцитокином IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), иммуноцитокином PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34), или PBS (отрицательный контроль). Черными стрелками указаны дни инъекций. На фигуре 16А показан средний объем опухоли для всех групп мышей, при этом в скобках показан средний размер опухоли (±STD) при первой обработке. На фигуре 16В показаны объемы опухоли для каждой мыши, получавшей указанные иммуноцитокины IL-12.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[46] Цитокины являются ключевыми медиаторами врожденного и адаптивного иммунитета. Однако цитокиновая терапия (например, для лечения рака) показали ограниченный успех из-за сильной токсичности, которая ограничивает дозировку до уровня намного ниже терапевтически эффективной дозы. Иммуноцитокины, которые представляют собой конструкции с цитокинами, слитыми с антителами, антигенсвязывающими фрагментами, составным белком лиганд-Fc или составным белком рецептор-Fc (далее в совокупности именуемые «составной белок лиганд/рецептор-Fc» или «составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc») может доставлять цитокины к клеткам-мишеням (например, опухолевым клеткам или иммунным эффекторным клеткам) или в ткани, что сопровождается распознаванием антигенов-мишеней антителами или антигенсвязывающими фрагментами (например, фрагментами антител, лигандами или рецепторами) в составе иммуноцитокинов, которые могут как снижать неспецифические (нецелевые) активности цитокинов и/или связанной с ними токсичности (например, токсичность в отношении здоровых клеток или тканей) и концентрировать терапевтическое действие цитокинов в целевых местоположениях (например, очагах заболевания). Активация иммуноцитокинов может происходить через транс-активацию, которая требует специфического связывания антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с антигенами-мишенями на опухолевых клетках; или цис-активацию, которая требует специфического связывания антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с антигенами-мишенями на иммунных клетках. Большинство иммуноцитокинов, разработанных в настоящее время, имеют цитокиновый фрагмент, составленный с N-концом или С-концом тяжелой цепи или легкой цепи полноразмерного антитела (например, Hu14.8-IL2, NHS-IL2LT, NHS-IL12, ВС1-IL12; см., например, фигуры 1C-1E) или составлены с N-концом или C-концом антигенсвязывающего фрагмента (например, диатела, scFv, таких как L19-IL2 или F16-IL2), поэтому связывание/активация цитокинового рецептора может происходить даже в отсутствие распознавания антитело-антиген, что приводит к нецелевой токсичности.

[47] Настоящее изобретение предлагает иммуноцитокины с уникальными конфигурациями, которые решают проблемы, с которыми сталкивается современная цитокиновая/иммуноцитокиновая терапия. В частности, иммуноцитокины настоящего изобретения снижают неспецифичную активность (т.е. независимое от антител или антигенсвязывающего фрагмента связывание) и увеличивают специфичную активность (т.е. зависимое от связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента) цитокинов путем размещения фрагмента цитокина (например, цитокина или его варианта) в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab ) и субъединицей Fc-домена или ее частью (например, фрагментом CH2-CH3, или только CH2, или только CH3), например, в шарнирном участке между scFv и субъединицей Fc-домена (например, антигенсвязывающий полипептид, содержащий VH-VL-цитокин-субъединица Fc или VL-VH-цитокин-субъединица Fc), в шарнирном участке между доменами Fab и Fc полноразмерного антитела (например, антигенсвязывающий полипептид, содержащий VH-CH1-цитокин-субъединица Fc), или в шарнирном участке между лигандом (или рецептором) и субъединицей Fc-домена (например, антигенсвязывающий полипептид, содержащий лиганд-цитокин-субъединица Fc или рецептор-цитокин-субъединица Fc). Не ограничиваясь теорией, полагают, что пространственные затруднения, создаваемые для антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) и Fc-домена или его части, снижают доступ рецептора цитокина или его варианта к цитокину или его варианту или «маскирует» цитокин или его вариант от связывания с его рецептором в отсутствие связывания антигена-мишени с антигенсвязывающим фрагментом. С другой стороны, цитокин активируется при наличии связывания антигена-мишени. Удивительно, но в отличие от других конструкций иммуноцитокинов, которые «обнажают» цитокиновый фрагмент на его N-конце или С-конце, уникальная конфигурация иммуноцитокина настоящего изобретения требует связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) с его антигеном-мишенью до связывания цитокинового фрагмента с его рецептором, таким образом гарантируя, что активация цитокинового рецептора полностью зависит от (специфичного) связывания антигена-мишени. Благодаря этой конструкции с повышенной специфичностью нацеливания цитокины можно безопасно доставлять в целевые местоположения (например, опухолевые клетки или иммунные клетки) для достижения терапевтического эффекта.

[48] Кроме того, авторы заявки обнаружили, что некоторые иммуноцитокины, например, сконструированные с исходным антигенсвязывающим белком (например, антитело или его фрагмент, или составной белок рецептор-Fc или лиганд-Fc) и фрагментом цитокина с противоположным воздействием на регуляцию иммунных ответов продемонстрировал значительно лучший профиль токсичности и терапевтическую эффективность. Например, при размещении цитокина IL-12 (провоспалительного) в шарнирном участке составного белка внеклеточный домен PD-L2-шарнир-Fc полученный иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc не только специфично нацеливался на активность IL-12 (например, активность связывания с рецептором IL-12 и/или провоспалительная активность IL-12) в отношении PD-1+клеток-мишеней, но также стимулировал ингибирующую PD-1 передачу сигналов иммунной контрольной точки путем связывания PD-L2-PD-1, создавая, таким образом, сигнал иммуносупрессии, который «уравновешивает» иммуностимулирующую активность IL-12 (далее также именуемый «уравновешивающим иммуноцитокином»). Любые антитела-агонисты или лиганды (например, PD-L2, PD-L1, CD80 или CD86), которые могут активировать или стимулировать иммуносупрессивный сигнальный путь (например, путем связывания с ингибирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как PD-1 или CTLA-4), или любые антагонистические антитела, лиганды или рецепторы, которые могут понижать или блокировать иммуностимулирующий сигнальный путь (например, путем связывания со стимулирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как CD27 или CD28, или с иммуностимулирующим рецептором, таким как IL-2R), могут использоваться в комбинации с иммуностимулирующим цитокином или его вариантом (например, IL-2, IL-12 или IL-23) для создания уравновешивающего иммуноцитокина с любой из описанных здесь конфигураций иммуноцитокина. Любые антагонистические антитела, лиганды или рецепторы, которые могут понижать или блокировать иммуносупрессивный сигнальный путь (например, путем связывания с ингибирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как PD-1 или CTLA-4), или любые агонистические антитела или лиганды (например, CD70, CD80, CD86 или IL-2), которые могут активировать или стимулировать иммуностимулирующий сигнальный путь (например, путем связывания со стимулирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как CD27 или CD28, или с иммуностимулирующим рецептором, таким как IL-2R), можно использовать в комбинации с иммуносупрессивным цитокином или его вариантом (например, IL-10, IL-27, IL-35, TGF-β) для конструирования уравновешивающего иммуноцитокина с любой из описанных здесь конфигураций иммуноцитокина. Такое «уравновешивание» конструкции иммунного ответа добавляет дополнительный регулирующий уровень для тонкой настройки биологической активности и токсичности иммуноцитокинов, описанных в данном документе, в дополнение к их уникальной конструкции для специфичности нацеливания.

[49] Иммуноцитокины, описанные в данном документе, можно также применять для лечения различных запущенных и/или трудно поддающихся лечению типов рака (например, ТНРМЖ, меланомы, рака легких), ингибирования метастазирования рака, лечения или замедления прогрессирования онкологических опухолей, устойчивых к современным иммунотерапевтическим средствам (например, к терапиии ингибиторами PD-1, терапии ингибиторами CTLA-4 или их комбинированной терапии) и/или продления продолжительности жизни таких пациентов. Описанные здесь иммуноцитокины обладают превосходными профилями безопасности со значительно сниженным побочным действием по сравнению с другими конфигурациями иммуноцитокинов, такими как C'-присоединение Fc.

[50] В сочетании с этой уникальной конструкцией иммуноцитокина также были созданы различные варианты цитокинов, которые были размещены в шарнирном участке, для скрининга вариантов цитокинов с невысокой или отсутствующей активностью (например, активностью связывания с рецептором цитокинов и/или биологической активностью цитокинов) в отсутствие связывания антигена-мишени, но у которых повышенная активность вновь «появляется», «восстанавливается» или «наблюдается» при наличии связывания антигена-мишени. Были получены различные иммуноцитокины, которые могут специфично нацеливать активность цитокинов (например, IFN-α2b, IL-12, IL-23, IL-10 или IFN-γ) на клетки-мишени (например, PD-1+ клетки, CD4+ T-клетки, или CD8+ Т-клетки), с минимальной или отсутствующей активностью цитокинов в отношении клеток, не являющихся мишенями (например, PD-1-клеток, CD8+ Т-клеток или CD4+ Т-клеток).

[51] Соответственно, в одном аспекте настоящей заявки предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, антиген клеточной поверхности, рецептор или лиганд); и b) цитокин или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), включающий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2 ), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри).

[52] В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (т.е. каркас антигенсвязывающего белка, используемый для конструирования иммуноцитокина, описанного в данном документе) представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело) или его фрагмент, специфично распознающий антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, при этом цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к иммуноцитокину, содержащему: а) антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень; и b) цитокин или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри). Иммуноцитокин, описанный в данном документе, в некоторых вариантах осуществления включает: (a) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: первый домен VH, необязательный первый CH1, цитокиновый фрагмент в шарнирном участке и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй домен VH, необязательный второй домен CH1, шарнирный участок и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); (c) третий антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: первый домен VL и необязательно первый CL; и (d) четвертый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй домен VL и необязательно второй CL; при этом первый VH и первый VL и необязательно первый CH1 и первый CL образуют первый антигенсвязывающий домен (например, Fab), специфично распознающий первый антиген-мишень; и при этом второй VH и второй VL и необязательно второй CH1 и второй CL образуют второй антигенсвязывающий домен (например, Fab), специфично распознающий второй антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой составной полипептид scFv-шарнир-Fc. Иммуноцитокин, описанный в данном документе, в некоторых вариантах осуществления включает: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: (первый домен VH и первый домен VL) или (первый домен VL и первый домен VH), цитокиновый фрагмент в шарнирном участке и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); и (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: (второй домен VH и второй домен VL) или (второй домен VL и второй домен VH), шарнирный участок и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); при этом первый VH и первый VL образуют первый антигенсвязывающий домен (например, scFv), специфично распознающий первый антиген-мишень; и при этом второй VH и второй VL образуют второй антигенсвязывающий домен (например, scFv), специфично распознающий второй антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой составной полипептид VHH-шарнир-Fc. Иммуноцитокин, описанный в данном документе, в некоторых вариантах осуществления включает: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: первый VHH, цитокиновый фрагмент в шарнирном участке и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); и (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй VHH, шарнирный участок и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); при этом первый VHH специфично распознает первый антиген-мишень; и при этом второй VHH специфично распознает второй антиген-мишень.

[53] В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой scFv. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой VHH. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к иммуноцитокину, содержащему: а) составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, специфично распознающий антиген-мишень (например, антиген клеточной поверхности, рецептор или лиганд); и b) цитокин или его вариант, где составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc содержит составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд , рецептор, VHH или scFv), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N', C' или внутри его). Иммуноцитокин, описанный в данном документе, в некоторых вариантах осуществления включает: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: первый антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), цитокиновый фрагмент в шарнирном участке и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); и (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), шарнирный участок и вторую субъединицу Fc домен или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); при этом первый антигенсвязывающий фрагмент специфично распознает первый антиген-мишень (например, антиген клеточной поверхности, рецептор или лиганд); и где второй антигенсвязывающий фрагмент специфично распознает второй антиген-мишень (например, антиген клеточной поверхности, рецептор или лиганд).

[54] Также предложены выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие такие иммуноцитокины, векторы, содержащие такие нуклеиновые кислоты, клетки-хозяева, содержащие такие нуклеиновые кислоты или векторы, способы получения таких иммуноцитокинов, фармацевтические составы и изготовленные продукты, содержащие такие иммуноцитокины, способы избирательного стимулирования активности цитокина или его варианта по отношению к клетке, экспрессирующей антиген-мишень, с помощью таких иммуноцитокинов или их фармацевтических составов, и способы лечения заболеваний (например, рака, вирусной инфекции, аутоиммунных заболеваний) с помощью таких иммуноцитокинов или содержащих их фармацевтических составов.

I. Определения

[55] В приложении на практике настоящего изобретения будут использоваться, если не указано иное, общепринятые методы вирусологии, иммунологии, микробиологии, молекулярной биологии и методы рекомбинантной ДНК, известные специалистам в данной области, многие из которых описаны ниже с целью иллюстрации. Такие методы полностью описаны в литературе. См., например, Current Protocols in Molecular Biology или Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York, Нью-Йорк (2009); Ausubel и др., Short Protocols in Molecular Biology, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1995; Sambrook и Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition, 2001); Maniatis и др., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982); DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I&II (D. Glover, ed.); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait, ed., 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. Hames & S. Higgins, eds., 1985); Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins, eds., 1984); Animal Cell Culture (R. Freshney, ed., 1986); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984) и другие подобные литературные источники.

[56] Термин «иммуноцитокин», используемый в данном документе, относится к формату антигенсвязывающего белка (например, антитела или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора или фрагмента антитела)), который составлен с молекулой цитокина. Конфигурация антигенсвязывающего белка (например, антитела или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора или фрагмента антитела)) может быть любой конфигурацией, описанной в данном документе, а цитокин может быть составлен непосредственно или посредством линкера или химической конъюгации с конфигурацией антигенсвязывающего белка.

[57] Термин «цитокиновый шторм», также известный как «цитокиновый каскад» или «гиперцитокинемия», представляет собой потенциально смертельную иммунную реакцию, обычно состоящую из петли положительной обратной связи между цитокинами и иммунными клетками с сильно повышенными уровнями различных цитокинов, например, IFN-γ, IL-10, IL-6, CCL2 и т.д.).

[58] В данном контексте, когда антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий фрагмент или лиганд) называют «антагонистом» антигена-мишени (например, рецептора или молекулы контрольной точки иммунной системы), это означает что при связывании антигена-мишени антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий фрагмент или лиганд) блокирует, подавляет или снижает биологическую активность антигена-мишени (например, блокирует передачу сигналов рецептора). Например, антагонистическое антитело к PD-1 представляет собой антитело, которое снижает или блокирует передачу сигналов PD-1. Когда антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий фрагмент или лиганд) называют «агонистом» антигена-мишени (например, рецептора или молекулы контрольной точки иммунного ответа), это означает, что при связывании антигена-мишени, антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий фрагмент или лиганд) стимулирует, активирует или усиливает биологическую активность антигена-мишени (например, активирует передачу сигналов рецептора). Например, лиганд PD-L2 дикого типа (например, внеклеточный домен) представляет собой агонист, который активирует передачу сигналов PD-1.

[59] Используемый здесь термин «лечение» или «проведение лечения» представляет собой подход для получения полезных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются этим, одно или несколько из следующего: облегчение одного или нескольких симптомов, возникающих в результате заболевания, уменьшение степени заболевания, стабилизацию заболевания (например, предотвращение или замедление ухудшения заболевания), предотвращение или замедление распространения (например, метастазирования) заболевания, предотвращение или замедление рецидива заболевания, отсрочка или замедление прогрессирования заболевания, улучшение болезненного состояния, обеспечение ремиссии (частичной или полной) заболевания, снижение дозы одного или нескольких других препаратов, необходимых для лечения заболевания, замедление прогрессирования заболевания, повышение качества жизни и/или продление выживаемости. Под «лечением» также подразумевается уменьшение патологических последствий заболевания. Способы изобретения предусматривают любой один или несколько из этих аспектов лечения. Например, «лечение» индивидуума проходит успешно, если один или несколько симптомов, связанных с вирусной инфекцией, смягчаются или устраняются, включая, но не ограничиваясь этим, уменьшение пролиферации (или уничтожение) инфекционного вируса, уменьшение симптомов, возникающих в результате заболевания (например, цитокинового шторма), повышение качества жизни больных, снижение дозы других лекарств, необходимых для лечения заболевания, и/или продление выживаемости людей.

[60] Термин «предотвратить» и подобные слова, такие как «предотвращенный», «предотвращая» и т.д., указывают на подход для предотвращения, подавления или снижения вероятности рецидива заболевания или состояния, например, рака. Это также относится к отсрочке рецидива заболевания или состояния или отсрочке рецидива симптомов заболевания или состояния. Используемый здесь термин «предотвращение» и подобные слова также включают снижение интенсивности, эффекта, симптомов и/или бремени заболевания или состояния перед рецидивом заболевания или состояния.

[61] Используемый здесь термин «задержка» или «отсрочка» развития заболевания означает откладывать, препятствовать, замедлять, задерживать, стабилизировать и/или отдалять развитие заболевания. Эта отсрочка может быть разной продолжительности, в зависимости от истории болезни и/или индивидуума, проходящего лечение. Способ, который «задерживает» развитие заболевания, представляет собой способ, который снижает вероятность развития заболевания в заданный период времени и/или уменьшает степень заболевания в заданный период времени по сравнению с отсутствием использования этого способа. Такие сравнения обычно основаны на клинических исследованиях с участием статистически значимого числа участников. Развитие рака можно обнаружить с помощью стандартных методов, включая, помимо прочего, компьютерную аксиальную томографию (CAT сканирование), магнитно-резонансную томографию (МРТ), УЗИ брюшной полости, тесты на свертываемость крови, артериографию или биопсию. Развитие может также относиться к прогрессированию заболевания (например, рака), которое изначально не было выявлено, и включает возникновение, рецидив и начало.

[62] Используемый здесь термин «эффективное количество» относится к количеству средства или комбинации средств, достаточному для лечения определенного расстройства, состояния или заболевания, такого как облегчение, облегчение, ослабление и/или задержка одного или нескольких симптомов расстройства. Что касается рака, эффективное количество включает количество, достаточное для того, чтобы вызвать уменьшение опухоли и/или снизить скорость роста опухоли (например, для подавления роста опухоли) или для предотвращения или задержки другой нежелательной клеточной пролиферации. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество представляет собой количество, достаточное для задержки развития. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество представляет собой количество, достаточное для предотвращения или задержки рецидива. Эффективное количество можно вводить в ходе одного или нескольких введений. Эффективное количество лекарственного средства или состава может: (i) уменьшить количество раковых клеток; (ii) уменьшить размер опухоли; (iii) подавлять, тормозить, до некоторой степени замедлять и предпочтительно останавливать инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; (iv) подавлять (т.е. в некоторой степени замедлить и предпочтительно остановить) метастазирование опухоли; (v) подавлять рост опухоли; (vi) предотвратить или отсрочить появление и/или рецидив опухоли; (vii) облегчить до некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком; (viii) стимулировать или активировать иммунные клетки (например, иммунные эффекторные клетки), например, для иммунного ответа, такого как продуцирование цитокина(ов), или для пролиферации и/или дифференцировки иммунных клеток; и/или (ix) предотвращать, уменьшать или устранять воспаление или аутоиммунный ответ, например, подавляя секрецию провоспалительных цитокинов. В случае вирусной инфекции эффективное количество средства может подавлять (т.е. снизить до некоторой степени и, предпочтительно, прекратить) активность вируса; контролировать, и/или ослаблять, и/или подавлять воспаление или цитокиновый шторм, индуцированный указанным вирусным патогеном; предотвращать ухудшение, останавливать и/или улучшать по меньшей мере один симптом указанной вирусной инфекции или повреждения у указанного субъекта или органа или ткани у указанного субъекта, возникающие в результате или связанные с указанной вирусной инфекцией; контролировать, уменьшать и/или подавлять некроз клеток в инфицированной и/или неинфицированной ткани и/или органе; контролировать, улучшать и/или предотвращать инфильтрацию воспалительных клеток (например, NK-клеток, цитотоксических Т-клеток, нейтрофилов) в инфицированных или неинфицированных тканях и/или органах; и/или стимулировать или активировать иммунные клетки (например, иммунные эффекторные клетки), например, для иммунного ответа, такого как продуцирования цитокина(ов), или для пролиферации и/или дифференцировки иммунных клеток.

[63] Используемый здесь термин «индивидуум» или «субъект» относится к млекопитающим, включая, но не ограничиваясь ими, человека, крупного рогатого скота, лошадь, кошку, собаку, грызуна или примата. В некоторых вариантах осуществления индивидуумом является человек.

[64] Термин «антитело» используется в самом широком смысле и охватывает различные строения антител, включая, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела), полноразмерные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, если они обладают желаемой антигенсвязывающей активностью. Термин «антитело» включает обычные 4-цепочечные антитела, однодоменные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты.

[65] Основная 4-цепочечная единица антитела представляет собой гетеротетрамерный гликопротеин, состоящий из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (Н) цепей. IgM-антитела состоят из 5 основных гетеротетрамерных звеньев вместе с дополнительным полипептидом, называемым J-цепью, и содержат 10 антигенсвязывающих участков, в то время как IgA-антитела состоят из 2-5 основных 4-цепочечных звеньев, которые могут полимеризоваться с образованием поливалентных сборок в сочетании с J-цепью. В случае IgG размер 4-цепочечная единица обычно составляет примерно 150 000 дальтон. Каждая L-цепь связана с H-цепью одной ковалентной дисульфидной связью, тогда как две H-цепи связаны друг с другом одной или несколькими дисульфидными связями в зависимости от изотипа H-цепи. Каждая цепь H и L также имеет регулярно расположенные внутрицепочечные дисульфидные мостики. Каждая H-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (V_Н), за которыми следуют три константных домена (C_H) для каждой из цепей α и γ и четыре C_Н домена для изотипов μ и ε. Каждая L-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (V_L), за которым следует константный домен на другом его конце. V_L выравнивается с V_Н и С_L выравнивается с первым константным доменом тяжелой цепи (C_H1). Считается, что определенные аминокислотные остатки образуют поверхность раздела между вариабельными доменами легкой цепи и тяжелой цепи. При спаривании вместе V_H и V_L образуется единый антигенсвязывающий сайт. Структуру и свойства различных классов антител см., например, в Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr и Tristram G. Parsolw (редакторы), Appleton & Lange, Norwalk, Conn., 1994, стр. 71 и Chapter 6. L-цепь любого вида позвоночных на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов можно отнести к одному из двух четко различающихся типов, называемых каппа и лямбда. Иммуноглобулины в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей (C_Н) можно отнести к разным классам или изотипам. Различают пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, имеющих тяжелые цепи, обозначенные α, δ, ε, γ и μ, соответственно. Классы γ и α далее делятся на подклассы на основе относительно незначительных различий в C_Н последовательности и функции, например, у людей экспрессируются следующие подклассы: IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2.

[66] «Выделенное» антитело (или конструкция) - это антитело, которое было идентифицировано, отделено и/или извлечено из компонента среды, в которой оно было выработано (например, природной или рекомбинантной). Предпочтительно, чтобы выделенный полипептид не был ассоциирован со всеми другими компонентами среды, в которой оно было выработано. Загрязняющие компоненты среды, в которой антитело было выработано, такие как продукты рекомбинантных трансфецированных клеток, представляют собой материалы, которые обычно мешают исследовательскому, диагностическому или терапевтическому применению антитела и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах полипептид очищают: (1) до содержания свыше 95% (по массе) антитела, как определено, например, методом Лоури, и в некоторых вариантах осуществления до содержания свыше 99% по массе; (2) в степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с использованием секвенатора с вращающейся чашкой; или (3) до гомогенного состояния с помощью SDS-PAGE в невосстанавливающих или восстанавливающих условиях с использованием красителя Coomassie Blue или, предпочтительно, окрашивания серебром. Выделенное антитело (или конструкция) включает антитело in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по крайней мере один компонент природной среды антитела не будет присутствовать. Однако обычно выделенный полипептид, антитело или конструкцию получают с помощью по меньшей мере одной стадии очистки.

[67] «Вариабельный участок» или «вариабельный домен» антитела относится к амино-концевым доменам тяжелой или легкой цепи антитела. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи могут обозначаться как «V_Н» и «V_L», соответственно. Эти домены обычно являются наиболее вариабельными частями антитела (относительно других антител того же класса) и содержат сайты связывания антигена. Только антитела с тяжелой цепью видов Camelid имеют единственную вариабельную область тяжелой цепи, которая обозначается как «V_НН». Таким образом, V_НH представляет собой особый тип V_Н.

[68] Термин «вариабельный» обозначает то, что у разных антител определенные сегменты последовательностей вариабельных доменов сильно различаются. Домен V опосредует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела к его конкретному антигену. Однако изменчивость неравномерно распределена по всей продолжительности вариабельных доменов. Вместо этого она сконцентрирована в трех сегментах, называемых участками, определяющими комплементарность (CDR), или гипервариабельными участками (HVR), как в вариабельных доменах тяжелой цепи, так и в легкой цепи. Более консервативные части вариабельных доменов называются каркасными участками (FR). Каждый из вариабельных доменов нативной тяжелой и легкой цепей содержит четыре FR-участка, в значительной степени принимающих конфигурацию бета-слоя, соединенных тремя CDR, которые образуют петли, соединяющие структуру бета-слоя и, в некоторых случаях, образующие ее часть. CDR в каждой цепи удерживаются вместе в непосредственной близости от FR-участков и вместе с CDR из другой цепи способствуют образованию антигенсвязывающего сайта антител (см. Kabat и др., Sequences oF Immunological Interest, FiFth Edition, National Institute oF Health, Bethesda, Мэриленд. (1991)). Константные домены не участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном, но выполняют различные эффекторные функции, такие как участие антитела в антителозависимой клеточной токсичности.

[69] Термин «моноклональное антитело», используемый в данном документе, относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, идентичны, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций и/или посттрансляционных модификаций (например, изомеризации, амидирования), которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела обладают высокой специфичностью и направлены против одного антигенного сайта. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты антигена. Помимо своей специфичности, преимущества моноклональных антител заключаются в том, что они синтезируются гибридомной культурой, незагрязненной другими иммуноглобулинами. Термин «моноклональный» указывает на то, что антитело получено из практически гомогенной популяции антител, и его не следует толковать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, можно получать разными методами, включая, например, гибридомный метод (например, Kohler и Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo и др., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow и др., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2^й изд. 1988 г.); Hammerling и др., в: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, Нью Йорк, 1981)), метод рекомбинантной ДНК (см, например, пат. США No. 4,816,567), технологии фагового дисплея (см, например, Clackson и др., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks и др., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu и др., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee и др., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); и Lee и др., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004), и технологии получения человеческих или человекоподобных антител у животных, которые имеют части или полные локусы или гены иммуноглобулина человека, кодирующие последовательности иммуноглобулина человека (см, например, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USА 90: 2551 (1993); Jakobovits и др., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann и др., Year in Immunol. 7:33 (1993); Пат. США. № 5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; и 5661016; Marks и др., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg и др., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild и др., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); и Lonberg и Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995).

[70] Термины «полноразмерное антитело», «интактное антитело» или «полное антитело» используются взаимозаменяемо для обозначения антитела в его практически интактной форме, в отличие от фрагмента антитела. В частности, полноразмерные 4-цепочечные антитела включают антитела с тяжелыми и легкими цепями, включая Fc-участок. Полноразмерные антитела, содержащего только тяжелую цепь, включают вариабельный домен тяжелой цепи (например, V_НH) и Fc-участок. Константные домены могут быть константными доменами нативной последовательности (например, константные домены нативной последовательности человека) или варианты их аминокислотной последовательности. В некоторых случаях интактное антитело может иметь одну или несколько эффекторных функций. Следует понимать, что для настоящего изобретения ссылка на «полноразмерное антитело» также включает каркас полноразмерного антитела или исходное полноразмерное антитело (например, полноразмерное 4-цепочечное антитело или полноразмерное антитело, содержащее только тяжелую цепь), в шарнирном участке которого находится цитокиновый фрагмент (см., например, фигуры 2А-2D).

[71] «Фрагмент антитела», «антигенсвязывающий домен» или «антигенсвязывающий фрагмент» включают часть интактного антитела, предпочтительно антигенсвязывающий и/или вариабельный участок интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваются ими, Fab, Fab', F(ab')₂ и фрагменты Fv; диатела; линейные антитела (см. Пат. США № 5641870, Example 2; Zapata и др., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); молекулы одноцепочечных антител (scFv); однодоменные антитела (такие как V_HH), и мультиспецифичные антитела, полученные из фрагментов антител. Расщепление антител папаином дает два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых Fab-фрагментами, и остаточный Fc-фрагмент, обозначение которого отображает его способность легко кристаллизоваться. Fab-фрагмент состоит из целой L-цепи вместе с вариабельным доменом H-цепи (V_H) и первым константным доменом одной тяжелой цепи (C_H1). Каждый Fab-фрагмент является моновалентным в отношении связывания антигена, т.е. он содержит единственный сайт связывания антигена. Обработкой антитела пепсином получают один большой F(ab')₂ фрагмент, который примерно соответствует двум Fab-фрагментам, связанным дисульфиным мостиком, которые обладают разной антигенсвязывающей активностью и по-прежнему способны к перекрестному связыванию антигена. Fab'-фрагменты отличаются от Fab-фрагментов наличием нескольких дополнительных остатков на карбокси-конце C_H1, включающем один или несколько цистеинов из шарнирного участка антитела. Fab'-SH представляет собой обозначение в данном документе для Fab', в котором цистеиновый остаток (остатки) константных доменов несет свободную тиольную группу. Фрагменты F(аb')₂ антител первоначально были получены в виде пар Fab'-фрагментов, между которыми находятся шарнирные цистеины. Также известны другие химические соединения фрагментов антител. Следует понимать, что в настоящем изобретении ссылка на «антигенсвязывающий домен» или «антигенсвязывающий фрагмент» также включает лиганд, который может специфично распознавать целевой рецептор, или рецептор, который может специфично распознавать целевой лиганд.

[72] Термин «константный домен» относится к части молекулы иммуноглобулина, имеющей более консервативную аминокислотную последовательность по сравнению с другой частью иммуноглобулина - вариабельным доменом - который содержит антигенсвязывающий сайт. Константный домен содержит C_H1, С_H2 и С_H3 домены (в совокупности - C_H) тяжелой цепи и CHL (или C_L) домен легкой цепи.

[73] «Тяжелая цепь» антител (иммуноглобулинов) можно разделить на три функциональные области: Fd-участок, шарнирный участок и Fc-участок (способный кристаллизоваться фрагмент). Fd-участок включает V_H и CH1 и в сочетании с легкой цепью образует Fab - антигенсвязывающий фрагмент. Fc-фрагмент отвечает за эффекторные функции иммуноглобулина, которые включают, например, фиксацию комплемента и связывание с родственными Fc-рецепторами эффекторных клеток. Шарнирный участок, присущий IgG, IgA и IgD классам иммуноглобулинов, действует как гибкий спейсер, который позволяет Fab-сегменту свободно перемещаться в пространстве относительно Fc-участка. В отличие от константных участков разнообразные по своей структуре шарнирные домены варьируются как по своей последовательности, так и по своей длине внутри классов и подклассов иммуноглобулинов. Для антитела, содержащего только тяжелую цепь, «тяжелая цепь» включает вариабельный домен тяжелой цепи (такой как V_НH), шарнирный участок и Fc-участок. Следует понимать, что в настоящем изобретении ссылка на «тяжелую цепь» также включает тяжелую цепь, содержащую домен VH, шарнирный участок и Fc-домен или его часть (например, субъединицу VL-VH-шарнир-Fc-домен или субъединицу VH-VL-шарнир-Fc-домен), и тяжелую цепь (например, тяжелую цепь полноразмерного 4-цепочечного антитела, антитела, содержащего VH-шарнир-Fc, или тяжелую цепь антитела, состоящего только из тяжелой цепи), содержащую цитокиновый фрагмент, расположенный в шарнирном участке (см., например, фигуры 2А-3С).

[74] «Легкие цепи» антител (иммуноглобулинов) любого вида млекопитающих на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов можно отнести к одному из двух четко различающихся типов, называемых каппа («κ») и лямбда («λ»).

[75] «Fv» представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный сайт распознавания и связывания антигена. Этот фрагмент состоит из димера домена вариабельного участка одной тяжелой цепи и одной легкой цепи, прочно связанных нековалентным образом. В результате укладки этих двух доменов образуются шесть гипервариабельных петель (по 3 петли в каждой из Н- и L-цепей), которые предоставляют аминокислотные остатки для связывания антигена и придают антителу специфичность связывания с антигеном. Однако даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащих только три CDR, специфичных для антигена) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низким сродством, чем сайт связывания целиком.

[76] «Одноцепочечные Fv», также сокращенно обозначаемые как «sFv» или «scFv», представляют собой фрагменты антител, которые содержат V_Н и V_L домены антител, соединенные в единую полипептидную цепь. Предпочтительный полипептид scFv дополнительно содержит полипептидный линкер между V_Н и V_L доменами, которые позволяют scFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена. Обзор scFv см. у Pluckthun в The Pharmacology oF Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, стр. 269-315 (1994).

[77] Термин «диатела» относится к небольшим фрагментам антител, полученным путем конструирования фрагментов sFv (см. предыдущий абзац) с короткими линкерами (примерно 5-10 остатков) между V_Н и V_L доменами таким образом, что достигается межцепочечное, но не внутрицепочечное спаривание доменов V, что приводит к двухвалентному фрагменту, т.е. фрагменту, имеющему два сайта связывания антигена. Биспецифичные диатела представляют собой гетеродимеры двух «перекрестных» фрагментов sFv, в которых V_Н и V_L домены двух антител присутствуют на разных полипептидных цепях. Диатела более подробно описаны, например, в EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993).

[78] Моноклональные антитела в данном документе конкретно включают «химерные» антитела (иммуноглобулины), в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, полученных от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи (цепей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, полученных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, если они проявляют желаемую биологическая активность (пат. США № 4816567; Morrison и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). «Гуманизированное антитело» используется в качестве подмножестве «химерных антител».

[79] «Гуманизированные» формы нечеловеческого (например, ламы или верблюда) представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой иммуноглобулин человека (антитело-реципиент), в котором остатки из CDR (описанные здесь и далее) реципиента заменены остатками из CDR вида, отличающегося от человека (донорное антитело), такого как мышь, крыса , кролик, верблюд, лама, альпака или примат, не являющийся человеком, обладающими желаемой специфичностью, сродством и/или емкостью. В некоторых случаях остатки каркаса («FR») человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками нечеловеческого происхождения. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которых нет в антителе-реципиенте или в донорном антителе. Эти модификации можно делать, чтобы дополнительно улучшить характеристики антител, таких как сродство связывания. Как правило, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного, а как правило - двух вариабельных доменов, в которых все или практически все гипервариабельные петли соответствуют петлям последовательности нечеловеческого иммуноглобулина, и все или по существу все FR-участки представляют собой участки последовательности иммуноглобулина человека, хотя участки FR могут включать одну или несколько замен отдельных остатков FR, которые улучшают характеристики антитела, такие как сродство связывания, изомеризация, иммуногенность и т.д. Количество таких аминокислотных замен в FR обычно не превышает 6 в H-цепи, а в L-цепи - не более 3. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константного участка иммуноглобулина (Fc), как правило, иммуноглобулина человека. Дополнительно см., например, Jones и др., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann и др., Nature 332:323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Также см, например, Vaswani и Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle и Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); и пат. США № 6982321 и № 7087409.

[80] «Человеческое антитело» представляет собой антитело, которое имеет аминокислотную последовательность, соответствующую последовательности аминокислот антитела, продуцируемого человеком, и/или было получено с использованием любой из описанных здесь методик получения человеческих антител. Это определение человеческого антитела специально исключает гуманизированное антитело, содержащее нечеловеческие антигенсвязывающие остатки. Человеческие антитела можно получать различными методами, известными в данной области, включая библиотеки фагового дисплея. Hoogenboom и Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks и др., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Для получения моноклональных антител человека также доступны способы, описанные в Cole. и др., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, стр. 77 (1985); Boerner и др., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991). Также см, van Dijk и van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001). Человеческие антитела можно получать путем введения антигена трансгенному животному, которое было модифицировано для выработки таких антител в ответ на антигенную стимуляцию, но чьи эндогенные локусы были отключены, например, методом иммунизированния ксеномышей (см., например, пат. США. №№ 6,075,181 и 6,150,584 относительно технологии XENOMOUSE™). См. также, например, Li и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006) относительно антител человека, полученных с помощью технологии гибридомы В-клеток человека.

[81] Термин «гипервариабельная область», «HVR» или «HV» в данном контексте относится к областям вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными по своей последовательности и/или образуют петли с четкой структурой. Как правило, однодоменные антитела содержат три HVR (или CDR): HVR1 (или CDR1), HVR2 (или CDR2) и HVR3 (или CDR3). HVR3 (или CDR3) демонстрирует наибольшее разнообразие из трех HVR и, как полагают, играет уникальную роль в придании тонкой специфичности антителам. См., например, Hamers-Casterman и др., Nature 363:446-448 (1993); SheriFF и др, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996).

[82] Термин «участок, определяющий комплементарность» или «CDR» используется для обозначения гипервариабельных участков, определенных по системе Kabat. See Kabat и др., Sequences oF Proteins oF Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes oF Health, Bethesda, Md. (1991).

[83] Настоящее описание охватывает ряд используемых здесь формирований HVR. Участки, определяющие комплементарность (CDR) по Kabat, основаны на изменчивости последовательностей и наиболее часто используются (Kabat и др., Sequences oF Proteins oF Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes oF Health, Bethesda, Md. (1991)). В отличие от этого в Chothia рассматривается расположение структурных петель (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR представляют собой компромисс между структурными петлями Kabat HVR и Chothia, они используются в программном обеспечении моделирования антител AbM OxFord Molecular. «Контактные» HVR основаны на анализе изученных сложных кристаллических структур. Остатки от каждого из этих HVR отмечены ниже в Таблице A.

Таблица A. Виды формирований HVR
Петля	Kabat	AbM	Chothia	Контакт
L1	L24-L34	L24-L34	L26-L32	L30-L36
L2	L50-L56	L50-L56	L50-L52	L46-L55
L3	L89-L97	L89-L97	L91-L96	L89-L96
H1	H31-H35B	H26-H35B	H26-H32	H30-H35B
(Нумерация по Kabat)
H1	H31-H35	H26-H35	H26-H32	H30-H35
(Нумерация по Chothia)
H2	H50-H65	H50-H58	H53-H55	H47-H58
H3	H95-H102	H95-H102	H96-H101	H93-H101

[84] HVR могут включать «расширенные HVR» следующим образом: 24-36 или 24-34 (L1), 46-56 или 50-56 (L2) и 89-97 или 89-96 (L3) в V_L и 26-35 (H1), 50-65 или 49-65 (H2) и 93-102, 94-102 или 95-102 (H3) в V_Н. Остатки вариабельного домена пронумерованы по Kabat и др., выше, для каждого из этих определений.

[85] Выражение «нумерация остатков вариабельного домена по Kabat» или «нумерация положений аминокислот по Kabat» и их варианты относятся к системе нумерации, используемой для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи компиляция антител по Кабату и др., выше. При использовании этой системы нумерации реальная линейная аминокислотная последовательность может содержать меньшее количество аминокислот или дополнительные аминокислоты, соответствующие укорочению или вставке в FR или HVR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать вставку одной аминокислоты (остаток 52а по Kabat) после остатка 52 H2 и вставленные остатки (например, остатки 82a, 82b и 82c и т.д. по Kabat) после остатка FR тяжелой цепи 82. Нумерацию остатков по Kabat можно определять для данного антитела путем выравнивания участков гомологии последовательности антитела со «стандартной» пронумерованной по Kabat последовательностью.

[86] Если здесь не указано иное, нумерация остатков в тяжелой цепи иммуноглобулина соответствует индексу ЕU по Kabat и др., выше. «Индекс ЕU по Kabat» относится к нумерации остатков человеческого антитела IgG1 EU.

[87] Остатки «каркаса» или «FR» представляют собой остатки вариабельного домена, отличающиеся от остатков HVR, как определено в данном документе.

[88] «Человеческий консенсусный каркас» или «человеческий акцепторный каркас» представляет собой каркас, который состоит из наиболее часто встречающихся аминокислотных остатков в каркасных последовательностях V_L или V_H ряда иммуноглобулинов человека . Как правило, последовательности V_L или V_H человеческого иммуноглобулина выбирают из подгруппы последовательностей вариабельных доменов. В общем случае, подгруппа последовательностей является подгруппой в соответствии с Kabat и др., Sequences oF Proteins oF Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes oF Health, Bethesda, Md. (1991). Примеры в случае V_L включают такие подгруппы, как подгруппа каппа I, каппа II, каппа III или каппа IV, в соответствии с Kabat и др., выше. Кроме того, для VH подгруппа может быть подгруппой I, подгруппой II или подгруппой III в соответствии с Kabat и др. В качестве альтернативы, человеческий консенсусный каркас можно получать из указанных выше определенных остатков, например, когда человеческий каркасный остаток выбирают, основываясь на его гомологии с донорным каркасом, путем выравнивания последовательности донорного каркаса с набором различных человеческих каркасных последовательностей. Человеческий акцепторный каркас, «происходящий из» каркаса человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркаса, может содержать ту же аминокислотную последовательность, или он может содержать уже существующие изменения в аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления количество уже существующих аминокислотных замен составляет 10 или меньше, 9 или меньше, 8 или меньше, 7 или меньше, 6 или меньше, 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше или 2 или меньше.

[89] Антитело с «созревшим сродством» представляет собой антитело с одним или несколькими изменениями в одной или нескольких его CDR, которые приводят к улучшению сродства антитела к антигену по сравнению с исходным антителом, которое не содержит таких изменений. В некоторых вариантах осуществления антитело с созревшим сродством имеет наномолярное или даже пикомолярное сродство к антигену-мишени. Антитела с созревшим сродством получают способами, известными в данной области. Например, Marks и др., Bio/Technology 10:779-783 (1992) описывает процесс созревания сродства с помощью перетасовки V_Н- и V_L- доменов. Случайный мутагенез CDR и/или каркасных остатков описан, например, в: Barbas и др., Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier и др., Gene 169:147-155 (1995); Yelton и др., J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson и др., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); и Hawkins и др., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).

[90] Термин «эпитоп» означает белковую детерминанту, способную специфично связываться с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv, Fab и т.д.). Эпитопы обычно состоят из химически активных поверхностных групп таких молекул, как аминокислоты или боковые цепи сахаров, и обычно имеют определенные трехмерные структурные характеристики, а также определенные характеристики заряда. Конформационные и неконформационные эпитопы различаются тем, что связывание с первыми, но не со вторыми, нарушается в присутствии денатурирующих растворителей.

[91] Используемый здесь термин «специфично связывает», «специфично распознает» или «специфично в отношении» относится к измеримым и воспроизводимым взаимодействиям, таким как связывание между мишенью и антигенсвязывающим белком (или цитокином и цитокиновым рецептором), которое является определяющим фактором присутствия мишени (или цитокина) в присутствии гетерогенной популяции молекул, включая биологические молекулы. Например, антигенсвязывающий белок (такой как Fab), который специфично связывается с мишенью (которая может быть эпитопом), представляет собой антигенсвязывающий белок, который связывает эту мишень с более сильным сродством, авидностью, с большей готовностью и/или в течение более продолжительного периода, чем он связывает другие цели. Цитокин, который специфично связывается с цитокиновым рецептором, представляет собой цитокин, который связывает этот цитокиновый рецептор с более сильным сродством, авидностью, с большей готовностью и/или в течение более продолжительного периода, чем он связывает другие цитокиновые рецепторы. В некоторых вариантах осуществления степень связывания антигенсвязывающего белка (или цитокина) с неродственной мишенью (или неродственным цитокиновым рецептором) составляет менее примерно 10% от связывания антигенсвязывающего белка (или цитокина) с мишенью согласно измерениям (или цитокинового рецептора согласно измерениям), например, с помощью радиоиммунного анализа (РИА). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок, который специфично связывается с мишенью (или цитокин, который специфично связывается с цитокиновым рецептором), имеет константу диссоциации (K_D) ≤10^-5 М, ≤10^-6 М, ≤10^-7 М, ≤10^-8 М, ≤10^-9 М, ≤10^-10 М, ≤10^-11 М или ≤10^-12 М. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (или цитокиновый рецептор) специфично связывает эпитоп на белке (или цитокине), который является консервативным эпитопом у белков от разных видов организмов. В некоторых вариантах осуществления специфичное связывание может необязательно включать эксклюзивное связывание. Специфичность связывания антигенсвязывающего белка (или цитокина и цитокинового рецептора) можно определить экспериментально с помощью любых способов связывания белка, известных в данной области. Такие методы включают, но не ограничиваются ими, вестерн-блоты, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORE™ -анализы и сканирование пептидов.

[92] Термин «специфичность» относится к избирательному распознаванию антигенсвязывающим белком определенного эпитопа антигена. Природные антитела являются, например, моноспецифичными. Термин «мультиспецифичный», используемый в данном документе, означает то, что антигенсвязывающий белок обладает полиэпитопной специфичностью (т.е. способен специфично связываться с двумя, тремя или более разными эпитопами на одной биологической молекуле или способен специфично связываться с эпитопами на двух, трех или более разных биологических молекулах). Термин «биспецифичный», используемый в данном документе, означает то, что антигенсвязывающий белок имеет две различные специфичности связывания антигена. Если не указано иное, порядок, в котором перечислены антигены, связанные с биспецифичным антителом, является произвольным. То есть, например, термины «антитело к CD3/HER2», «антитело к HER2/CD3», «CD3×HER2» и «HER2×CD3» могут использоваться взаимозаменяемо для обозначения биспецифичных антител, которые специфично связываются как с CD3, так и с HER2. Термин «моноспецифичный», используемый в данном документе, обозначает антигенсвязывающий белок, который имеет один или несколько сайтов связывания, каждый из которых связывает один и тот же эпитоп одного и того же антигена.

[93] Используемый здесь термин «валентный» означает наличие определенного количества сайтов связывания в антигенсвязывающем белке. Например, природное антитело или полноразмерное антитело имеет два сайта связывания и является двухвалентным. Таким образом, термины «трехвалентный», «четырехвалентный», «пятивалентный» и «шестивалентный» обозначают наличие двух сайтов связывания, трех сайтов связывания, четырех сайтов связывания, пяти сайтов связывания и шести сайтов связывания, соответственно, в антигенсвязывающем белке.

[94] «Эффекторные функции антитела» относятся к такой биологической активности, которая относится к Fc-участку (Fc-участку с нативной последовательностью или Fc-участку варианта аминокислотной последовательности) антитела и варьируется в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и зависимую от комплемента цитотоксичность; связывание рецептора Fc; антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточных рецепторов); и активацию В-клеток. «Сниженная или сведенная к минимуму» эффекторная функция антитела означает, что она снижена по меньшей мере на 50 % (альтернативно - на 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98% или 99%) по сравнению с диким типом или немодифицированным антителом. Эффекторная функция антитела может быть легко определена и измерена специалистом в данной области. В предпочтительном варианте осуществления затрагиваются эффекторные функции антитела по связыванию комплемента, комплементзависимой цитотоксичности и антителозависимой цитотоксичности. В некоторых вариантах осуществления эффекторная функция устраняется посредством мутации в константном участке, устраняющей гликозилирование, например, «безэффекторная мутация». В некоторых вариантах осуществления безэффекторная мутация представляет собой мутацию N297A или DANA (D265A+N297A) в C_H2 участке. Shields и др., J. Biol. Chem. 276 (9): 6591-6604 (2001). В альтернативном случае дополнительные мутации, приводящие к снижению или устранению эффекторной функции, включают: K322A и L234A/L235A (LALA). В качестве альтернативы, эффекторная функция может быть снижена или устранена при изготовлении с помощью таких методик, как экспрессия в клетках-хозяевах, в которых не происходит гликозилирования (например, в E. coli.), или которые приводят к измененному профилю гликозилирования, который неэффективен или менее эффективен для стимулирования эффекторной функции (например, Shinkawa и др., J. Biol. Chem. 278(5): 3466-3473 (2003).

[95] «Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность» или ADCC относится к форме цитотоксичности, при которой секретируемый Ig связывается с Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на некоторых цитотоксических клетках (например, естественных клетках-киллерах (NK), нейтрофилах и макрофагах), и при которой эти цитотоксические эффекторные клетки способны специфично связываться с несущей антиген клеткой-мишенью и затем уничтожать клетку-мишень цитотоксинами. Следуя этому механизму, антитела «вооружают» цитотоксические клетки, и они необходимы для уничтожения клетки-мишени. Первичные клетки для опосредования ADCC - NK-клетки - экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия Fc на гемопоэтических клетках представлена в таблице 2 на стр. 464 у Ravetch и Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991). Оценить активность ADCC интересующей молекулы можно с помощью анализа ADCC in vitro, такого как описан в патенте США № 5500362 или 5821337. Полезные эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) и природные клетки-киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно активность ADCC интересующей молекулы можно оценить in vivo, например, в животной модели, такой как раскрыта в Clynes и др., PNAS USA 95:652-656 (1998).

[96] «Комплементзависимая цитотоксичность» или «CDC» относится к лизису клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с антителами (соответствующего подкласса), которые связаны с родственным им антигеном. Для оценки активации комплемента используют анализ CDC, например, как описано у Gazzano-Santoro и др., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996). Варианты антител с измененными аминокислотными последовательностями Fc-участка и повышенной или пониженной способностью связывания с C1q описаны в патенте США № 6194551В1 и WO99/51642. Содержание этих патентных публикаций специально включено в настоящее описание ссылкой. См. также Idusogie и др. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[97] Термин «Fc-участок», «фрагмент кристаллизуемого участка», «Fc-фрагмент» или «Fc-домен» в данном документе используется для определения С-концевого участка тяжелой цепи иммуноглобулина, включая Fc-участки нативной последовательности и варианты Fc-участков. Хотя границы Fc-участка тяжелой цепи иммуноглобулина могут варьироваться, начало Fc-участка тяжелой цепи человеческого IgG обычно определяют как положение аминокислотного остатка Cys226 или Pro230, а его конец определяется карбокси-концом. С-концевой лизин (остаток 447 в соответствии с системой нумерации ЕС) Fc-участка можно удалять, например, во время получения или очистки антитела или Fc-составного белка, или путем рекомбинантной инженерии нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь антитела или Fc-составного белка. Соответственно, композиция интактных антител может включать популяции антител, в которых удалены все остатки K447, популяции антител без удаленных остатков K447 и популяции антител, содержащие смесь антител с остатком K447 и без него. Подходящие Fc-участки с нативной последовательностью для применения в иммуноцитокинах, описанных в данном документе, включают человеческие IgG1, IgG2 (IgG2A, IgG2B), IgG3 и IgG4.

[98] Термин «изотип» или «подкласс» IgG, используемый в данном документе, означает любой из подклассов иммуноглобулинов, которые характеризуются химическими и антигенными свойствами своих константных областей. Различают пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них можно дополнительно подразделять на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, γ, ε, γ и μ, соответственно. Строения субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны и описаны, например, в Abbas и др. Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000).

[99] «Fc-рецептор» или «FcR» описывает рецептор, который связывает Fc-участок антитела или составного Fc белка. Предпочтительный FcR представляет собой человеческий FcR с нативной последовательностью. Более того, предпочтительным FcR является тот, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, включая аллельные варианты и формы альтернативного сплайсинга этих рецепторов. Рецепторы FcγRII включают FcγRIIA («активирующий рецептор ") и FcγRIIB ("ингибирующий рецептор"), которые имеют сходные аминокислотные последовательности, отличающиеся, прежде всего, своими цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA содержит мотив активации иммунорецептора на основе тирозина (ITAM) в своем цитоплазматическом домене. Ингибирующий рецептор FcγRIIB содержит иммунорецепторный мотив ингибитора на основе тирозина (ITIM) в своем цитоплазматическом домене. (См. M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997). FcR рассмотрены в Ravetch и Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Cape и др., Immunomethods 4: 25-34 (1994); и de Haas и др., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995). Другие FcR, в том числе те, которые будут идентифицированы в будущем, охвачены в данном документе термином «FcR».

[100] Термин «Fc-рецептор» или «FcR» также включает неонатальный рецептор FcRn, который отвечает за перенос материнских IgG к плоду. Guyer и др., J. Immunol. 117: 587 (1976) и Kim и др., J. Immunol. 24: 249 (1994). Известны способы измерения связывания с FcRn (см, например, Ghetie и Ward, Immunol. Today 18: (12): 592-8 (1997); Ghetie и др., Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997); Hinton и др., J. Biol. Chem. 279 (8): 6213-6 (2004 г.); WO 2004/92219 (Hinton и др.). Связывание с FcRn in vivo и период полувывежегия их сыворотки человеческих полипептидов FcRn, обладающих высоким сродством связывания, можно проанализировать, например, в трансгенных мышах или трансфицированных клеточных линиях человека, экспрессирующих человеческий FcRn, или в приматах, которым вводят полипептиды, содержащие вариант Fc-участка. WO 2004/42072 (Presta) описывает варианты антител, которые улучшают или уменьшают связывание с FcR. См. также, например, Shields и др., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).

[101] «Сродство связывания» обычно относится к силе суммы нековалентных взаимодействий между одним участком связывания молекулы (например, антитела, антигенсвязывающего фрагмента (такого как лиганд, рецептор, VHH, scFv и т.д.) или цитокина) и его партнером по связыванию (например, антигеном (таким как молекула клеточной поверхности, рецептор, лиганд и т.д.) или рецептором цитокина). Если не указано иное, используемый здесь термин «сродство связывания» относится к характеристическому сродству связывания, которое отражает взаимодействие 1:1 между участниками связываемой пары. Сродство связывания может быть обозначена как K_d, K_oFF, K_on или К_а. Термин «К_oFF» в данном контексте относится к константе скорости диссоциации антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) из комплекса антитело (или антигенсвязывающий фрагмент)/антиген (например, комплекса лиганд-рецептор), или константе скорости диссоциации цитокина из комплекса цитокин/цитокиновый рецептор, которую определяют по набору кинетических данных и описывают в единицах сек^-1. Термин «К_on» данном контексте означает константу скорости связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном с образованием комплекса антитело (или антигенсвязывающий фрагмент)/антиген, или константу скорости связывания цитокина с рецептором цитокина с образованием комплекса цитокин/рецептор цитокина, которую выражают в единицах M^-1сек^-1. Термин равновесная константа диссоциации «K_D» или "К_d» в данном контексте, относится к константе диссоциации взаимодействия конкретного антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном (или взаимодействия цитокина с цитокиновым рецептором) и описывает концентрацию антигена (или цитокина), необходимую для того, чтобы занять половину всех антитело-связывающих доменов (или антигенсвязывающего фрагмента), присутствующими в растворе молекулами антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) (или рецептора цитокинов) в равновесном состоянии, и равно K_oFF/К_on, выраженному в единицах M. Измерение K_d предполагает, что все связывающие вещества находятся в растворе. В случае, когда антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) связано с клеточной стенкой, например, в системе экспрессии дрожжей, соответствующая константа скорости равновесия выражается как EC50, что дает хорошее приближение к K_d. Константа сродства - K_а - является обратной величиной константы диссоциации K_d и выражается в единицах M^-1. Константа диссоциации (K_D или К_d) используется в качестве индикатора, показывающего сродство антител (или их антигенсвязывающих фрагментов) к антигенам (или цитокинов к рецепторам цитокинов). Например, можно проводить простой анализ по методу Скэтчарда с использованием антител (или их антигенсвязывающих фрагментов), меченых различными маркерными агентами, или с помощью BIACORE™ X (производство Amersham Biosciences), который представляет собой продаваемый в розницу измерительный набор или аналогичный набор, в соответствии с руководством пользователя и методом проведения эксперимента, прилагаемым к набору. К_D значение, которое может быть получено с использованием этих методов, выражается в единицах М (моль). Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (или цитокин), которое специфично связывается с мишенью (или рецептором цитокина), может иметь константу диссоциации (K_d), например, ≤10^-5 М, ≤10^-6 М, ≤10^-7 М, ≤10^-8 М, ≤10^-9 М, ≤10^-10 М, ≤10^-11 М или ≤10^-12 М.

[102] Концентрация полумаксимального ингибирования (IC₅₀) является мерой эффективности вещества (такого как антитело или антигенсвязывающий фрагмент) в подавлении конкретной биологической или биохимической функции. Она указывает на количество конкретного лекарственного средства или другого вещества (ингибитора, такого как антитело или антигенсвязывающий фрагмент), которое необходимо для подавления данного биологического процесса наполовину. Значения обычно выражаются в виде молярной концентрации. IC₅₀ сравнима с «EC₅₀» для лекарственного средства-агониста или другого вещества (такого как антитело, антигенсвязывающий фрагмент или цитокин). ЕС₅₀ также представляет собой концентрацию в плазме, необходимую для получения 50% от максимального эффекта in vivo. Используемый здесь термин «IC₅₀» используется для обозначения эффективной концентрации антитела или антигенсвязывающего фрагмента, необходимой для нейтрализации 50% биологической активности антигена in vitro. IC₅₀ или ЕС₅₀ можно измерить с помощью биологических анализов, таких как ингибирование связывания лиганда с помощью анализа FACS (анализ конкурентного связывания), анализа высвобождения цитокинов на основе клеток или гомогенного анализа усиления люминесценции при сближении (AlphaLISA).

[103] «Ковалентная связь» в данном контексте относится к стабильной связи между двумя атомами, имеющими один или несколько общих электронов. Примеры ковалентных связей включают, но не ограничиваются ими, пептидные связи и дисульфидные связи. В данном контексте термин «пептидная связь» относится к ковалентной связи, образованной между карбоксильной группой аминокислоты и аминогруппой соседней аминокислоты. «Дисульфидная связь» в данном контексте относится к ковалентной связи между двумя атомами серы, такой как соединение двух Fc-фрагментов (или цитокиновых субъединиц) посредством одной или нескольких дисульфидных связей. Одна или несколько дисульфидных связей могут образоваться между двумя фрагментами при связывании тиоловых групп в двух фрагментах. В некоторых вариантах осуществления одна или несколько дисульфидных связей может быть образована между одним или несколькими цистеинами двух Fc-фрагментов. Дисульфидные связи могут образовываться при окислении двух тиоловых групп. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание обусловлено непосредственно ковалентной связью. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание осуществляется за счет пептидной связи или дисульфидной связи.

[104] «Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология», относящиеся к последовательности пептида, полипептида или антитела определяются как процентная доля аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретном пептиде или полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и, при необходимости, введения промежутков, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности, и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание с целью определения процентной идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, известными специалистам в данной области, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGN™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить подходящие параметры для измерения выравнивания, включая любые алгори™ы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

[105] Используемый здесь термин «С-конец» полипептида относится к последнему аминокислотному остатку полипептида, который предоставляет свою аминогруппу для образования пептидной связи с карбоксильной группой соседнего с ним аминокислотного остатка. «N-конец» полипептида, используемый здесь, относится к первой аминокислоте полипептида, которая предоставляет свою карбоксильную группу для образования пептидной связи с аминогруппой соседнего аминокислотного остатка.

[106] «Выделенная» или «изолированная» молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном документе, представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая идентифицирована и отделена по меньшей мере от одной загрязняющей молекулы нуклеиновой кислоты, с которой она обычно связана в среде, в которой она была получена. Предпочтительно, чтобы выделенная нуклеиновая кислота не была ассоциирована с какими-либо компонентами, связанными со средой, получающейся при производстве. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие описанные здесь конструкции, полипептиды и антитела, находятся в форме, отличающейся от формы или условий, в которых они встречаются в природе. Таким образом, выделенные молекулы нуклеиновой кислоты отличаются от нуклеиновой кислоты, кодирующей конструкции, полипептиды и антитела, описанные в данном документе, существующие в природных клетках. Выделенная нуклеиновая кислота включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, но молекула нуклеиновой кислоты присутствует внехромосомно или в хромосомном положении, которое отличается от ее природного хромосомного местоположения.

[107] Термин «контрольные последовательности» относится к последовательностям ДНК, необходимым для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Регулирующие последовательности, подходящие для прокариот, например, включают промотор, необязательно операторную последовательность и сайт связывания рибосомы. Известно, что эукариотические клетки используют промоторы, сигналы полиаденилирования и энхансеры.

[108] Нуклеиновая кислота является «функционально связанной», если она введена в функциональную взаимосвязь с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, ДНК препоследовательности или секреторного лидера функционально связана с ДНК полипептида, если она экспрессируется в виде белка-предшественника, который участвует в выработке полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью, если он расположен так, чтобы обеспечить трансляцию. Как правило, «функционально связанный» означает, что связываемые последовательности ДНК являются смежными, а в случае секреторного лидера - смежными и находятся в фазе считывания. Однако энхансеры не обязательно должны быть смежными. Связывание осуществляется лигированием в удобных сайтах рестрикции. Если таких сайтов не существует, то используют синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры в соответствии с общепринятой практикой.

[109] Термин «вектор», используемый в данном документе, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной к размножению другой нуклеиновой кислоты, с которой она связана. Термин включает вектор как самореплицирующуюся структуру нуклеиновой кислоты, а также вектор, включенный в геном клетки-хозяина, в которую он был введен. Некоторые векторы способны направлять экспрессию нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются здесь «векторами экспрессии».

[110] Используемый здесь термин «трансфицированный», или «трансформированный», или «трансдуцированный» относится к процессу, с помощью которого экзогенная нуклеиновая кислота переносится или вводится в клетку-хозяина. «Трансфицированная», или «трансформированная», или «трансдуцированная» клетка представляет собой клетку, которая была трансфицирована, трансформирована или трансдуцирована экзогенной нуклеиновой кислотой. Клетка включает первичную клетку и ее потомство.

[111] Термины «клетка-хозяин», «линия клеток-хозяев» и «культура клеток-хозяев» используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают «трансформанты» и «трансформированные клетки», которые включают первично трансформированную клетку и полученное из нее потомство независимо от количества пересевов. Потомство может не быть полностью идентичным исходной клетке по содержанию нуклеиновых кислот и может содержать мутации. Мутантное потомство, обладающее той же функцией или биологической активностью, что и скринированные или отобранные в исходно трансформированной клетке, включены в настоящий документ.

[112] Термин «фармацевтическая рецептура» или «фармацевтический состав» относится к препарату, который находится в такой форме, которая обеспечивает эффективность биологической активности активного ингредиента, и который не содержит дополнительных компонентов, являющихся неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет введена эта рецептура. Такие рецептуры стерильны. «Стерильная» рецептура является асептической или свободной от всех живых микроорганизмов и их спор.

[113] Понятно, что варианты осуществления изобретения, описанные здесь, включают варианты осуществления, «состоящие» и/или «практически состоящие из».

[114] Ссылка на значение или параметр «примерно» в данном документе включает (и описывает) варианты, которые относятся к этому значению или параметру, как таковые. Например, описание, относящееся к «примерно X», включает в себя описание «X».

[115] Используемая здесь ссылка на «не» в применении к значению или параметру обычно означает и описывает «отличное от» значение или параметр. Например, способ не используется для лечения рака типа X означает, что метод используется для лечения рака других типов, кроме X.

[116] Используемый здесь термин «примерно X-Y» имеет то же значение, что и «от примерно X до примерног Y».

[117] Используемые здесь и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают ссылки на формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное.

II. Иммуноцитокины

[118] Настоящее изобретение в одном аспекте относится к иммуноцитокину, содержащему цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи антитела или расположенный в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором или фрагментом антитела) и субъединицей Fc-домена или ее частью. Исходное антитело, которое служит каркасом для конструирования иммуноцитокинов, описанных в данном документе, может представлять собой любой вид антитела или антигенсвязывающего фрагмента, содержащий тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, такой как полноразмерное 4-цепочечное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент (например, scFv, Fab), составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью (например, CH2+CH3 или только CH2) через шарнирный участок. Исходный антигенсвязывающий белок, который служит каркасом для конструирования иммуноцитокинов, описанных в данном документе, также может представлять собой составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, содержащий два составных полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд или рецептор), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть.

[119] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент (например, scFv, Fab), составленное с субъединицей Fc-домена или ее частью его через шарнирный участок), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела или между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка). В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, и при этом тяжелая цепь содержит, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, цитокин или его вариант в шарнирном участке, домен CH2 и необязательно домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: первый домен VH, необязательно первый CH1, цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN -γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант в первом шарнирном участке (например, цитокиновый фрагмент находится между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка или между С-концом шарнирного участка и N-концом субъединицы Fc-домена или внутри шарнирного участка) и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй домен VH, необязательно второй домен CH1, второй шарнирный участок и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); (c) третий антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: первый домен VL и необязательно первый CL; и (d) четвертый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй домен VL и необязательно второй CL; при этом первый VH и первый VL и, необязательно, первый CH1 и первый CL образуют первый антигенсвязывающий домен (например, Fab), специфично распознающий первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и при этом второй VH и второй VL и необязательно второй CH1 и второй CL образуют второй антигенсвязывающий домен (например, Fab), специфично распознающий второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, содержит полноразмерное исходное антитело (далее также именуемое «иммуноцитокин с полноразмерным антителом»). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4 , CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, причем цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc (соответствующий иммуноцитокин в дальнейшем также упоминается как «иммуноцитокин составного белка Fc»), такой как составной белок scFv-шарнир-Fc, составной белок VHH-шарнир-Fc, составной белок лиганд-шарнир-Fc или составной белок рецептор-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок «антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc», используемый в качестве основы для конструирования иммуноцитокина, описанного в данном документе, содержит два составных полипептида «антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc», каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc содержит составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: первый антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант в первой шарнирном участке (например, цитокиновый фрагмент находится между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка, между С-концом шарнирного участка и N-концом субъединицы Fc-домена или внутри шарнирного участка) и первую субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH или scFv), второй шарнирный участок и вторую субъединицу Fc-домена или его часть (например, CH2+CH3 или только CH2); при этом первый антигенсвязывающий фрагмент специфично распознает первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и где второй антигенсвязывающий фрагмент специфично распознает второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8). В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с целевым антигеном, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (такой как не более, чем 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1 %, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, при этом активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более чем примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело (например, полноразмерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с Fc-доменом или его частью) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит шарнирный участок, и только одна тяжелая цепь содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелая цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), каждый из которых содержит шарнирный участок, и где только один антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелая цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), каждый из которых содержит шарнирный участок, и где каждый антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антитело (например, полноразмерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с Fc-доменом или его частью) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит шарнирный участок, и каждая тяжелая цепь содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит два или более (например, 2, 3, 4, 5 или более) цитокина или их варианта, где два или более цитокина или их варианта расположены последовательно (например, необязательно соединены через пептидный линкер) в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или составного полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой мономерный цитокин или его вариант, такой как IL-2 или IFN-α (например, IFN-α2a, IFN-α2b, IFN-α2c). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой димерный цитокин или его вариант. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант, такой как IL-10 или IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант, такой как IL-12 или IL-23. В некоторых вариантах осуществления обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно (например, необязательно соединены через пептидный линкер) в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или составного полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелые цепи или составные полипептиды антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такие как составные полипептиды лиганд/рецептор-шарнир-Fc), каждый из которых содержит шарнирный участок, одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке одного антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи или составного полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположены в шарнирном участке другого антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи или составного полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления два или более цитокина или их варианта являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления два или более цитокина или их варианта различаются. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является мультиспецифичным. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, эритропоэтин, VEGF, тромбопоэтин, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены между С-концом антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv, VHH, лиганда, рецептора) и N-концом шарнирного участка антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела (например, полноразмерного антитела) содержит константный участок 1 (СН1), а цитокин или его вариант расположены между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены между С-концом шарнирного участка и N-концом субъединицы Fc-домена (или ее части) антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела, или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, заменяют часть внутри шарнирного участка, встраиваются в шарнирный участок и вводят одну или несколько дополнительных шарнирных или линкерных аминокислот, или встраиваются в шарнирный участок без удаления аминокислоты шарнирного участка) антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или его фрагмента, или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелая цепь антитела или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), такой как субъединица Fc-домена или ее часть, содержит мутацию типа «выступы во впадины» (KIH) (например, каждый антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелая цепь полноразмерного антитела) содержит мутацию KIH). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело-агонист (или его антигенсвязывающий фрагмент) или лиганд (например, PD-L2, PD-L1, CD80 или CD86), которые могут активировать или стимулировать иммуносупрессивный сигнальный путь (например, путем связывания с ингибирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как PD-1 или CTLA-4, на клетке-мишени), а цитокин или его вариант представляет собой иммуностимулирующий цитокин или его вариант (например, IL-2, IL-12 или IL-23). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело-антагонист (или его антигенсвязывающий фрагмент), лиганд или рецептор, который может ослаблять или блокировать иммуностимулирующий сигнальный путь (например, путем связывания со стимулирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как CD27 или CD28, или иммуностимулирующим рецептором, таким как IL-2R), а цитокин или его вариант представляет собой иммуностимулирующий цитокин или его вариант (например, IL-2, IL-12 или IL-23). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело-антагонист (или его антигенсвязывающий фрагмент), лиганд или рецептор, который может ослаблять или блокировать иммуносупрессивный сигнальный путь (например, путем связывания с ингибирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как PD-1 или CTLA-4), а цитокин или его вариант представляет собой иммуносупрессивный цитокин или его вариант (например, IL-10, IL-27, IL-35, TGF-β). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело-агонист (или его антигенсвязывающий фрагмент) или лиганд (например, CD70, CD80, CD86 или IL-2), которые могут активировать или стимулировать иммуностимулирующий сигнальный путь (например, путем связывание со стимулирующей молекулой контрольной точки иммунного ответа, такой как CD27 или CD28, или с иммуностимулирующим рецептором, таким как IL-2R), а цитокин или его вариант представляет собой иммуносупрессивный цитокин или его вариант (например, IL-10, IL-27, IL- 35, TGF-β).

[120] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него); и где при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH , scFv, Fab) с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него); и где в отсутствии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH , scFv, Fab) с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более чем примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него); где при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH , scFv, Fab) с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью); и где в отсутствии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH , scFv, Fab) с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более чем примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленные с субъединицей Fc-домена или его частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую шарнирный участок, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела или между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка); и где при наличии связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем на примерно 20% (например, не менее чем на примерно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленные с субъединицей Fc-домена или его частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую шарнирный участок, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела или между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка); и где в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенных в шарнирном участке составляет не более, чем примерно 70% (например, не более чем примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) по сравнению с активностью соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленные с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую шарнирный участок, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела или между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка); где при наличии связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем на примерно 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью; и в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4 %, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где при наличии связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем на примерно 20% (например, не менее чем на примерно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7% , 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, причем цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; где при наличии связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью; и где в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7% , 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, при этом активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более чем примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом.

[121] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где первый цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него) первого антигенсвязывающего полипептида, и где второй цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него) второго антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит шарнирный участок, где первый цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первой тяжелой цепи антитела, и где второй цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второй тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит две тяжелые цепи, где первая тяжелая цепь содержит, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, первый цитокин или его вариант в первом шарнирном участке, домен CH2 и необязательно домен CH3; и где вторая тяжелая цепь содержит, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, второй цитокин или его вариант во втором шарнирном участке, домен CH2 и необязательно домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где первый цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первой тяжелой цепи полноразмерного антитела, где второй цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второй тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления первая тяжелая цепь и первая легкая цепь антитела образуют первый антигенсвязывающий фрагмент (например, первый Fab), специфично распознающий первый антиген-мишень, а вторая тяжелая цепь и вторая легкая цепь антитела образует второй антигенсвязывающий фрагмент (например, второй Fab), специфично распознающий второй антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH , scFv, Fab) с целевым антигеном (например, связывания первого антигенсвязывающего фрагмента, такого как Fab или лиганд, с первым целевым антигеном и/или связывания второго антигенсвязывающего фрагмента, такого как такого как Fab или лиганд, с вторым антигеном-мишенью) активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) первого и/или второго цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антиген-связывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, V HH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью (ни антигенсвязывающий фрагмент, такой как Fab, ни лиганд не связывается с антигеном-мишенью). В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью (например, ни антигенсвязывающий фрагмент, такой как Fab, ни лиганд не связывается с антигеном-мишенью), активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) первого и/или второго цитокина или его/их варианта(-ов), расположенного(-ых) в шарнирном участке каждого антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc), составляет не более чем примерно 70% (например, не более чем примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9% 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего первого и/или второго цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления первый и/или второй цитокин или его вариант представляют собой вариант цитокина, и при этом активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления два цитокина или их варианта являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления два цитокина или их варианта различаются. В некоторых вариантах осуществления первый цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах осуществления второй цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 36). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом.

[122] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор , VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где первый цитокин или его вариант и второй цитокин или его вариант расположены последовательно (например, соединенный через необязательный пептидный линкер) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или их вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где первый цитокин или его вариант и второй цитокин или его вариант расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или его частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую, от N-конца до С-конца: домен VH, необязательно домен CH1, первый цитокин или его вариант в шарнирном участке, необязательно линкер (например, пептидный линкер), второй цитокин или его вариант, домен CH2 и необязательно домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); b) первый цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и c) второй цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где первый цитокин или его вариант и второй цитокин или его вариант расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, такого антитела, как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с целевым антигеном, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) первого и второго цитокинов или их вариантов повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (такого, как лиганд, рецептор, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) первого и второго цитокинов или их вариантов, расположенных в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% , 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2 %, 0,1% или 0%) от активности соответствующих первого и второго цитокинов или их вариантов в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления первый и/или второй цитокин или его вариант представляют собой вариант цитокина, и при этом активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления два цитокина или их варианта являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления два цитокина или их варианта различаются. В некоторых вариантах осуществления первый цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах осуществления второй цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 36). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом.

[123] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой димерный цитокин или его вариант. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант, такой как IL-10 или IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант, такой как IL-12 или IL-23. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из последовательностей SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на C'-конце или внутри него) антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где обе субъединицы димерного цитокина или их варианты расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую, от N-конца к C-концу: домен VH, необязательно домен CH1, [первую субъединицу димерного цитокина или его варианта, необязательно линкер (например, пептидный линкер), вторую субъединицу димерного цитокина или его варианта] в шарнирном участке, домен CH2 и необязательно домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из последовательностей SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, такого антитела, как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с целевым антигеном, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) димерного цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (такого, как лиганд, рецептор, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) димерного цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% , 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2 %, 0,1% или 0%) от активности соответствующего димерного цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления димерный цитокин или его вариант представляет собой вариант димерного цитокина, и активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта димерного цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более чем примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего димерного цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант, такой как IL-10 или IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант, такой как IL-12 или IL-23. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом.

[124] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной лиганд/рецептор-шарнир-Fc белок), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH) , шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2); где одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке (например, на его N'-конце, на С'-конце или внутри него) первого антигенсвязывающего полипептида, а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке (например, не его N'-конце, на C'-конце или внутри него) второго антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит шарнирный участок, при этом одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первой тяжелой цепи, а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второй тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит две тяжелые цепи, где первая тяжелая цепь включает, от N-конца к C-концу: домен VH, необязательно домен CH1, первую субъединицу димерного цитокина или его варианта в первом шарнирном участке, домен CH2 и, необязательно, домен CH3, и где вторая тяжелая цепь включает, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, вторую субъединицу димерного цитокина или его варианта во второй шарнирном участке, домен CH2 и, необязательно, домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) димерный цитокин (например, IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первой тяжелой цепи полноразмерного антитела, а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположена на шарнирном участке (например, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второй тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления первая тяжелая цепь и первая легкая цепь антитела образуют первый антигенсвязывающий фрагмент (например, первый Fab), специфично распознающий первый антиген-мишень, а вторая тяжелая цепь и вторая легкая цепь антитела образует второй антигенсвязывающий фрагмент (например, второй Fab), специфично распознающий второй антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с целевым антигеном (например, связывания первого антигенсвязывающего фрагмента, такого как Fab или лиганд, с первым целевым антигеном и/или связывания второго антигенсвязывающего фрагмента, такого как Fab или лиганд, с вторым антигеном-мишенью) активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) димерного цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антиген-связывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, V HH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью (например, ни антигенсвязывающий фрагмент, такой как Fab, ни лиганд не связывается с антигеном-мишенью). В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью (например, ни антигенсвязывающий фрагмент, такой как Fab, ни лиганд не связывается с антигеном-мишенью), активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) димерного цитокина или его варианта, если каждая субъединица расположена в шарнирном участке каждого антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc), составляет не более чем примерно 70% (например, не более чем примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9% 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего димерного цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления димерный цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, и где активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта димерного цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более чем примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего димерного цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант, такой как IL-10 или IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант, такой как IL-12 или IL-23. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом.

[125] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок) специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) анти-IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, и где тяжелая цепь содержит, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно, домен CH1, IL-2 или его вариант в шарнирном участке, домен CH2 и, необязательно, домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-2, содержащий одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из L18, Q22, F24, K35, R38, F42, K43, E61 и P65, соответствующем положению в IL-2 дикого типа, содержащем последовательность SEQ ID NO: 1, где вариант IL-2 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-2, содержащий одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из F24A, R38D, K43E, E61R и P65L, в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1, где вариант IL-2 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-2, содержащий мутацию R38D/K43E/E61R, в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1, где вариант IL-2 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, где вариант IL-2 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IL-2 в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IL-2 дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[126] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 156. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащую последовательность SEQ ID NO: 156, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[127] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 96, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[128] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 108. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 108, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[129] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 79, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[130] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 119. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 119, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[131] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 131. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 131, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[132] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 144. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 144, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[133] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащую последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 169. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 169, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[134] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2 («иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc»), содержащий: а) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 180. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержащий последовательность SEQ ID NO: 180, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc содержит последовательность SEQ ID NO: 179. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-2 или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-2 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[135] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любая из SEQ ID NO: 3-9), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, а IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD -1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, и при этом тяжелая цепь содержит, от N-конца к C-концу: домен VH, необязательно домен CH1, IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант в шарнирном участке, домен CH2 и, необязательно, домен CH3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант, где IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из R22, L26, F27, L30, K31, D32, R33, H34, D35, F36, S68, T79, K83, Y85, Y89, R120, K121, Y122, Q124, Y129, K131, E132, R144 и E146, соответствующем положению в IFN-α, содержащем последовательность SEQ ID NO: 3, где вариант IFN-α (например, IFN-α2b) расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из L30А, K31A, D32A, R33A, H34A и D35A относительно IFN-α дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3, где вариант IFN-α (например, IFN-α2b) расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий любую последовательность из SEQ ID NO: 4-9, где вариант IFN-α (например, IFN-α2b) расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий мутацию L30A в отличие от IFN-α, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3, где вариант IFN-α (например, IFN-α2b) расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-α (например, IFN-α2b), содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, где вариант IFN-α (например, IFN-α2b) расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IFN-α (например, IFN-α2b) в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IFN-α (например, IFN-α2b) дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[136] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к HER2, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 157. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 157, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[137] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD3, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 97. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 97, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[138] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к PD-1, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α (например, IFN-α2b), расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 109. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 109, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[139] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD4, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 80, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[140] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD8, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 120, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[141] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CTLA-4, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 132. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 132, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[142] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к PD-L1, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α (например, IFN-α2b), расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 145. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 145, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[143] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом CH1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD25, содержащий: a) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-α (например, IFN-α2b), расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 170. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b)/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 170, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[144] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α (например, IFN-α2b) («иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc»), содержащий: a) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IFN-α (например, IFN-α2b) или его вариант (например, любую из SEQ ID NO: 3-9), и где IFN-α или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IFN-α (например, IFN-α2b), расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 182. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, который содержит последовательность SEQ ID NO: 182, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, который содержит последовательность SEQ ID NO: 181. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-α (например, IFN-α2b) или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0% ) соответствующего цитокина IFN-α или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[145] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-γ или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, и обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок) специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где указанное антитело содержит тяжелую цепь, включающую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, [первую субъединицу IFN-γ или ее вариант (например, любую из SEQ ID NO: 10-17), необязательно линкер (например, пептидный линкер), вторую субъединицу IFN-γ или его варианта (например, любую из SEQ ID NO: 10-17)] в шарнирном участке, домен СН2 и, необязательно, домен СН3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IFN-γ в положении, выбранном из группы, состоящей из V5, S20, D21, V22, A23, D24, N25, G26, H111 и Q115, соответствующем положению в субъединице IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10, где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IFN-γ, выбранных из группы, состоящей из S20A, D21A, D21K, V22A, A23S, A23E, A23Q, A23V, D24A, D24E, N25A, N25K и H111D, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10, где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IFN-γ, выбранных из группы, состоящей из S20A/D21A, D21K, V22A/A23S, D24A/N25A, A23E/D24E/N25K, A23Q и A23V, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10, где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, где одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 11-17, где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, содержащий мутацию A23V в одной или обеих субъединицах IFN-γ, соотносящихся с субъединицей IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10, где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, где одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13, и где обе субъединицы варианта IFN-γ расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IFN-γ или его варианта соединены линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229). В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, где вариант IFN-γ расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. . В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IFN-γ в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IFN-γ дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[146] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 158. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 158, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[147] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 98, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[148] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/анти-PD-1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 110. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 110, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[149] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 81, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[150] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 121. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 121, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[151] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 133. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 133, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[152] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 146. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 146, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[153] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 171. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 171, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[154] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ («иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc»), содержащий: а) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий? от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IFN-γ или его вариант (например, SEQ ID NO: 18 или 19), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 10-17) IFN-γ или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 183. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, который содержит последовательность SEQ ID NO: 183, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, который содержит последовательность SEQ ID NO: 181. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IFN-γ или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IFN-γ или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[155] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-10 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, и обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок) специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где указанное антитело содержит тяжелую цепь, включающую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, [первую субъединицу IL-10 или ее вариант (например, любую из SEQ ID NO: 20-26), необязательно линкер (например, пептидный линкер), вторую субъединицу IL-10 или его варианта (например, любую из SEQ ID NO: 20-26)] в шарнирном участке, домен СН2 и, необязательно, домен СН3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10 в положении, выбранном из группы, состоящей из N21, M22, R24, D25, L26, R27, D28, A29, F30, S31, R32, H90 и S93, соответствующем положению в субъединице IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20, где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A, L26A, R27A, D28A, A29S, F30A, S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20, где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, содержащий одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A/L26A, R27A, D28A/A29S, F30A/S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20, где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, где одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 21-26, и где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, содержащий мутацию R27A в одной или обеих субъединицах IL-10, соотносящихся с субъединицей IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20, где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, где одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23, и где обе субъединицы варианта IL-10 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IL-10 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, где вариант IL-10 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IL-10 в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IL-10 дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[156] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 159. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 159, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[157] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 99. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 99, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[158] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 111. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 111, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[159] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин Il-10/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 82, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[160] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 122. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 122, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[161] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин Il-10/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 134. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 134, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[162] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 147. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 147, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[163] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 172. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 172, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[164] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10 («иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc»), содержащий: а) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IL-10 или его вариант (например, SEQ ID NO: 27 или 28), где обе субъединицы (например, любая из SEQ ID NO: 20-26) IL-10 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 184. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержащий последовательность SEQ ID NO: 184, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий последовательность SEQ ID NO: 181. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-10 или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-10 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[165] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' до C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где обе субъединицы p35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, и обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок) специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где обе субъединицы p35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где указанное антитело содержит тяжелую цепь, включающую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, [первую субъединицу IL-12 или его варианта (например, р40, такой как любая из SEQ ID NO: 30-34), необязательно линкер (например, пептидный линкер), вторую субъединицу IL-12 или его варианта (например, p35, такой как SEQ ID NO: 29)] в шарнирном участке, домене СН2 и, необязательно, домене СН3. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, содержащий одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 варианта IL-12 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, содержащий одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 варианта IL-12 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, где субъединица p40 варианта IL-12 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34, где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 варианта IL-12 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, содержащий мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносящейся с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 варианта IL-12 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, где субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31, и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 варианта IL-12 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, р40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, где вариант IL-12 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IL-12 в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IL-12 дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[166] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 и субъединица р35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 160. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке и содержащий последовательность SEQ ID NO: 160, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[167] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 100, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[168] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 112, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[169] В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/IL-2 («иммуноцитокин IL-12/IL-2/антитело к PD-1»), содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36); и c) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2), где антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-Fc), каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, VHH, scFv или VH), шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где обе субъединицы p35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первого антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела), и где IL-2 или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второго антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела). В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/IL-2/антитело к PD-1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1, содержащее две тяжелые цепи; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36); и c) IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2); при этом обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) первой тяжелой цепи полноразмерного антитела; где IL-2 или его вариант (например, SEQ ID NO: 1 или 2) расположен в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) второй тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 108. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела) или антигенсвязывающего фрагмента с PD-1 (например, связывания первого антигенсвязывающего фрагмента с PD-1 и/или связывания второго антигенсвязывающего фрагмента с PD-1) активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или IL-2 (или его варианта) повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 (например, ни один антигенсвязывающий фрагмент не связывается с PD-1). В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела) или антигенсвязывающего фрагмента с PD-1 (например, ни один из антигенсвязывающих фрагментов не связывается с PD-1), активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 и/или IL-2 (или его варианта), расположенных в шарнирном участке каждого антигенсвязывающего полипептида (например, тяжелой цепи антитела или полипептида антигенсвязывающий фрагмент-Fc) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6 %, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-12 и/или IL-2 (или его варианта) в свободном состоянии. Исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело) может быть моноспецифичным или мультиспецифичным (например, биспецифичным). Исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело) может быть гомодимерным или гетеродимерным. Исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело) может быть агонистом или антагонистом.

[170] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 83, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[171] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 123. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 123, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[172] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 135. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 135, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[173] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 148, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[174] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 и субъединица р35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 173. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 173, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[175] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12 («иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc»), содержащий: а) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IL-12 или его вариант (например, SEQ ID NO: 35 или 36), где обе субъединицы р35 (например, SEQ ID NO: 29) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-12 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р35 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 29) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-р35). В некоторых вариантах осуществления субъединица р35 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р35-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 и субъединица р35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 186. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащий последовательность SEQ ID NO: 186, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий последовательность SEQ ID NO: 185. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 275. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 274. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержащий последовательность SEQ ID NO: 274, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий последовательность SEQ ID NO: 185. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-12 или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-12 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[176] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-23 или его вариант. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' до C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело (например, полноразмерное антитело), специфично распознающее антиген-мишень, антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела, и обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд, а антиген-мишень представляет собой рецептор, специфично распознаваемый лигандом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор, а антиген-мишень представляет собой лиганд, специфично распознаваемый рецептором. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок) специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где указанное антитело содержит тяжелую цепь, включающую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно домен CH1, [первую субъединицу IL-23 или его варианта (например, р40, такой как любая из SEQ ID NO: 30-34), необязательно линкер (например, пептидный линкер), вторую субъединицу IL-23 или его варианта (например, p19, такой как SEQ ID NO: 37)] в шарнирном участке, СН2-домене и, необязательно, СН3-домен. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, содержащий одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 варианта IL-23 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, содержащий одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 варианта IL-23 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, где субъединица p40 варианта IL-23 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34, где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 варианта IL-23 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, содержащий мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносящейся с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30, где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 варианта IL-23 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, где субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31, и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 варианта IL-23 расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, где вариант IL-23 расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта IL-23 в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего IL-23 дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело или его фрагмент, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является агонистом. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является антагонистом. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[177] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к HER2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее HER2; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее HER2; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к HER2 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к HER2 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 161. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 161, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 155. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с HER2. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с HER2 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[178] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD3. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD3; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD3; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD3 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD3 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 101. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 101, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD3. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD3 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[179] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к PD-1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-1; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-1; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к PD-1 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 113. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 113, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[180] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD4; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD4; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к CD4 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 84, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[181] В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело к CD8. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD8; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD8; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD8 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD8 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 124. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 124, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD8. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD8 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[182] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CTLA-4. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CTLA-4; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CTLA-4 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CTLA-4 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 124. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 129, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 136, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CTLA-4 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[183] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к PD-L1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее PD-L1; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее PD-L1; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где антитело к PD-L1 содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к PD-L1 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 149. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 140, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 149, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 143. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с PD-L1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным.

[184] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело к CD25. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25»), содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее CD25; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и где обе субъединицы p19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее CD25; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, в любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и при этом антитело к CD25 содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело к CD25 содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь, содержащая вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 174. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, содержащий: две легкие цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO: 165, одну тяжелую цепь, содержащую вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащем последовательность SEQ ID NO: 174, и одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 168. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) с CD25. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) с CD25 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления антитело является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления антитело является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-агонист. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой антитело-антагонист.

[185] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2)-шарнир-Fc. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23 («иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc»), содержащий: а) составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий, от N' к C': PD-L2 (например, SEQ ID NO: 176), специфично распознающий PD-1, шарнирный участок (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и субъединицу Fc-домена или ее часть; и b) IL-23 или его вариант (например, SEQ ID NO: 38 или 39), где обе субъединицы р19 (например, SEQ ID NO: 37) и субъединица p40 (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) IL-23 или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер, такой как любая из SEQ ID NO: 227-229) в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом PD-L2 и N-концом шарнирного участка) составного полипептида PD-L2-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc содержит два составных полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 или ее вариант (например, любая из SEQ ID NO: 30-34) находится на N-конце субъединицы р19 или ее варианта (например, SEQ ID NO: 37) (например, p40-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p19). В некоторых вариантах осуществления субъединица р19 или ее вариант находятся на N-конце субъединицы р40 или ее варианта (например, р19-необязательный линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229)-p40). В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p19 IL-23 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 187. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc, содержащий: составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержащий последовательность SEQ ID NO: 187, и составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий последовательность SEQ ID NO: 185. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания лиганда PD-L2 с PD-1 активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина IL-23 или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина IL-23 или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является мультиспецифичным (например, биспецифичным). В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой агонист, который может стимулировать или усиливать передачу сигналов PD-1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент PD-L2 представляет собой антагонист, который может снижать или блокировать передачу сигналов PD-1.

[186] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, не содержит полноразмерное исходное антитело (в дальнейшем также называемый «иммуноцитокин с частью антитела» или «иммуноцитокин, составленный с частью Fc»). См., например, части, окрашенные светло-серым, на фигурах 3А-3С. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение также относится к иммуноцитокину, содержащему: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: первый scFv (конфигурация VH-VL или VL-VH), специфично распознающий первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8), цитокин или его вариант (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) в шарнирном участке или ее части (например, в шарнирном участке или между C'-концом первого scFv и N'-концом шарнирного участка), и первую субъединицу Fc-домена (например, IgG1, IgG4 или неэффекторного IgG1) или ее части (например, CH2); и (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: второй scFv (конфигурация VH-VL или VL-VH), специфично распознающий второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1 , PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8), шарнирный участок или его часть (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть. См., например, фигуру 3А. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий от N-конца к С-концу: scFv (конфигурация VH-VL или VL-VH), специфично распознающий первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8), цитокин или его вариант (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) в шарнирном участке или его части (например, в шарнирном участке или между C'-концом scFv и N'-концом шарнирного участка), и первую субъединицу Fc-домена (например, IgG1, IgG4 или неэффекторный IgG1) или ее часть (например, CH2); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: VH, CH1, шарнирный участок или его часть (например, любую из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59), и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть; и (c) третий антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: VL и CL; где VH и CH1 второго антигенсвязывающего полипептида и VL и CL третьего антигенсвязывающего полипептида образуют Fab, специфично распознающий второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8). См., например, фигуру 3В. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: VH, CH1, цитокин или его вариант (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN- γ, IL-10, IL-12 или IL-23) в шарнирном участке или его части (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) и первую субъединицу Fc-домена (например, IgG1, IgG4 или неэффекторный IgG1) или ее часть (например, CH2); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий от N-конца к С-концу: VL и CL; где VH и CH1 первого антигенсвязывающего полипептида и VL и CL второго антигенсвязывающего полипептида образуют Fab, специфично распознающий первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и (c) третий антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: scFv (конфигурация VH-VL или VL-VH), специфично распознающий второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8), шарнирный участок или его часть и вторую субъединицу Fc-домена или ее часть. См., например, фигуру 3С. В некоторых вариантах осуществления предложен иммуноцитокин, содержащий: (а) первый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: VH, CH1, цитокин или его вариант (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN- γ, IL-10, IL-12 или IL-23) в шарнирном участке или его части (например, любой из SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59) и часть (например, CH2) первой субъединицы Fc-домена (например, IgG1, IgG4 или неэффекторный IgG1); (b) второй антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: VL и CL; (c) третий антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к C-концу: VH, CH1, шарнирный участок или его часть и часть (например, CH2) второй субъединицы Fc-домена; и (d) четвертый антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N-конца к С-концу: VL и CL; где VH и CH1 первого антигенсвязывающего полипептида и VL и CL второго антигенсвязывающего полипептида образуют первый Fab, специфично распознающий первый антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8), и где VH и CH1 третьего антигенсвязывающего полипептида и VL и CL четвертого антигенсвязывающего полипептида образуют второй Fab, специфично распознающий второй антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8). Другие конфигурации иммуноцитокинов, в которых цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, между С-концом антигенсвязывающего фрагмента и N-концом шарнирного участка или между С-концом шарнирного участка и N-конца субъединицы Fc-домена) между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, таким как внеклеточный домен PD-L2, рецептор, фрагмент антитела, такой как VHH) и субъединицей Fc-домена, или их часть также рассматривается в данном документе. Любую часть цитокина и конфигурацию шарнира, описанные для «иммуноцитокинов полноразмерного антитела» можно применять к любому из «иммуноцитокинов с частью антитела» или «иммуноцитокинов, составленных с частью Fc», описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% , 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка или антигенсвязывающего фрагмента с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv, or Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% , 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2 %, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления только один антигенсвязывающий полипептид, содержащий субъединицу Fc-домена или ее часть, содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления каждый антигенсвязывающий полипептид, содержащий субъединицу Fc-домена или ее часть, содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит два или более (например, 2, 3, 4, 5 или более) цитокина или их варианта, где два или более цитокина или их варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер) в шарнирном участке одного антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой мономерный цитокин или его вариант, такой как IL-2 или IFN-α (например, IFN-α2a, IFN-α2b, IFN-α2c). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой димерный цитокин или его вариант. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант, такой как IL-10 или IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант, такой как IL-12 или IL-23. В некоторых вариантах осуществления обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно (например, соединены через необязательный пептидный линкер) в шарнирном участке одного антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления одна субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке одного антигенсвязывающего полипептида, а другая субъединица димерного цитокина или его варианта расположена в шарнирном участке другого антигенсвязывающего полипептида. В некоторых вариантах осуществления два или более цитокина или их варианта являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления два или более цитокина или их варианта различаются. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин является моноспецифичным в отношении связывания антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин является мультиспецифичным (например, биспецифичным) в отношении связывания антигена-мишени. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, эритропоэтин, тромбопоэтин, VEGF, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены между С-концом CH1, scFv или лиганда/рецептора и N-концом шарнирного участка. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены между С-концом шарнирного участка и N-концом субъединицы Fc-домена или ее части. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, ими заменяют внутреннюю часть в шарнирном участке, или их вставляют в шарнирный участок без удаления аминокислоты в шарнирном участке, или вставляют в шарнирный участок и вводят одну или более аминокислот). В некоторых вариантах осуществления Fc-домен или его часть содержит мутации типа «выступы во впадины» (KIH). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий фрагмент или составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) является гомодимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок является гетеродимерным. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело или составной белок лиганд-шарнир-Fc, такой как составной белок PD-L2-шарнир-Fc) является агонистом. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок представляет собой антагонист.

Цитокины или их варианты

[187] Цитокины (также называемые взаимозаменяемо «молекулой цитокина» или «белком цитокина») представляют собой секретируемые белки, которые модулируют активность клеток иммунной системы. Примеры цитокинов включают интерлейкины, интерфероны, хемокины, лимфокины, факторы некроза опухоли, колониестимулирующие факторы для предшественников иммунных клеток и т.д. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой цитокин дикого типа. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой вариант существующих в природе видов цитокинов. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой подтип существующего в природе цитокина. «Вариант цитокина» в данном документе относится к любой молекуле цитокина, которая не существует в природе, такой как активный цитокиновый фрагмент (например, цитокиновый фрагмент, у которого сохранено по меньшей мере примерно 10% биологической активности или активности связывания цитокинового рецептора полноразмерного цитокина), мутант или его производное. «Цитокин или его вариант» также взаимозаменяемо упоминается здесь как «цитокиновый фрагмент», который может представлять собой молекулу цитокина или его видовой вариант, подтип, активный фрагмент, мутант или производное.

[188] Используемый здесь термин «гетеродимерный цитокин» или «гетеродимер цитокина» относится к цитокину, состоящему из двух отдельных белковых субъединиц. В настоящее время семейство IL-12 (включает IL-12, IL-23, IL-27 и IL-35) является единственным известным гетеродимерным семейством цитокинов, встречающихся в природе. Однако можно сконструировать искусственные гетеродимерные цитокины. Например, IL-6 и растворимый фрагмент IL-6R можно объединять с образованием гетеродимерного цитокина, как и CNTF и CNTF-R альфа (Trinchieri (1994) Blood 84:4008). «Гомодимерный цитокин» или «гомодимер цитокина» в данном контексте относится к цитокину, состоящему из двух идентичных белковых субъединиц, таких как IFN-γ или IL-10. «Мономерный цитокин» или «мономер цитокина» относится к цитокину, который состоит из одной единицы молекулы цитокина. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой мономерный цитокин или его вариант. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гомодимерный цитокин или его вариант. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой гетеродимерный цитокин или его вариант.

[189] В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой полноразмерную молекулу цитокина. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой функциональный фрагмент молекулы цитокина, который способен проявлять некоторую (например, не менее примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% , 90% или 95%) или полную биологическую активность и/или активность связывания цитокиновых рецепторов полноразмерной молекулы цитокина. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой молекулу-предшественник цитокина. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой молекулу зрелого цитокина (например, без сигнального пептида). В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой цитокин дикого типа. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой вариант существующих в природе видов цитокинов. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой подтип существующих в природе цитокинов. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет вариант цитокина, такой как мутантный цитокин, который способен проявлять некоторую (например, не менее примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% , 90% или 95%) или полную биологическую активность и/или активность связывания цитокиновых рецепторов цитокина дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина представляет собой модифицированный цитокин, такой как гликозилированный цитокин. Цитокин или его вариант, описанный в данном документе, может быть цитокином, выделенным из различных источников, например, из типов тканей человека или из другого источника, или полученным рекомбинантными или синтетическими способами. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой рекомбинантный цитокин. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент, описанный в данном документе, может представлять собой цитокин, полученный из любого организма, такого как млекопитающие, включая, но не ограничиваясь ими, домашний скот (например, коров, овец, коз, кошек, собак, ослов и лошадей), приматов (например, человекоподобных и нечеловекоподобных приматов, таких как обезьяны или шимпанзе), кроликов и грызунов (например, мышей, крыс, песчанок и хомяков). В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой человеческий цитокин, такой как рекомбинантный человеческий цитокин. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой мышиный цитокин, такой как рекомбинантный мышиный цитокин. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент представляет собой зрелый человеческий цитокин. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент содержит сигнальный пептид на N-конце молекулы цитокина, этот сигнальный пептид получен либо из другой молекулы, либо из той же молекулы цитокина.

[190] Варианты цитокинов могут быть укороченными версиями, посттрансляционно модифицированными версиями, гибридными вариантами, миметиками пептидов, биологически активными фрагментами, вариантами делеции, вариантами замены или вариантами присоединения, у которых сохранена некоторая степень (например, по меньшей мере примерно 10%) активности исходных цитокинов (активность связывания цитокиновых рецепторов и/или биологическая активность). «Исходный цитокин» или «цитокин-предшественник», описанные в данном документе, относятся к эталонной последовательности цитокина, из которой сконструирован, модифицирован или получен вариант цитокина.

[191] Если сказано, что иммуноцитокин настоящего изобретения содержит два или более различных цитокина (и необязательно включая дополнительные белковые фрагменты), это означает, что иммуноцитокин содержит две или более различные молекулы цитокина (а не две или более различные цитокиновые субъединицы). Например, гомодимерный цитокин (например, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-5, IL-8 или т.п.) обозначен в данном документе как отдельная молекула цитокина. Например, считается, что иммуноцитокин, содержащий два мономера/субъединицы IL-5 (либо на одной полипептидной цепи в виде одноцепочечного слияния, либо на разных полипептидных цепях), содержит только одну молекулу цитокина, т.е. IL-5. Точно так же гетеродимерный цитокин, такой как IL-12, хотя и содержит разные субъединицы, представляет собой один цитокин. Например, считается, что иммуноцитокин, содержащий субъединицу р35 и субъединицу р40 (либо на одной полипептидной цепи в виде одноцепочечного слияния, либо на разных полипептидных цепях), содержит только одну молекулу цитокина, т.е. IL-12. Кроме того, гетеродимерная форма обычно гомодимерных цитокинов, такая как гетеродимер MCP-1/MCP-2, или двух аллелей обычно гомодимерного цитокина (например, Zhang, J. Biol. Chem. [1994] 269:15918-24) представляет собой один цитокин. В некоторых вариантах осуществления цитокиновая субъединица (например, p35 в IL-12) в одной полипептидной цепи иммуноцитокина может димеризоваться с парной цитокиновой субъединицей (например, p40) либо в той же полипептидной цепи, либо в другой полипептидной цепи в пределах одного и того же иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления цитокиновая субъединица (например, p35 IL-12) иммуноцитокина может димеризоваться с парной цитокиновой субъединицей (например, p40) близлежащего иммуноцитокина.

[192] В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина включает мутацию или модификацию (например, посттрансляционную модификацию), которая приводит к селективности к первому типу рецептора (например, тримерному рецептору или рецептору с более высоким сродством) по сравнению со вторым типом рецептора соответствующей молекулы цитокина (например, димерным рецептором или рецептором с более слабым сродством), измеряемой как отношение активации клеток, экспрессирующих рецептор первого типа, к активации клеток, экспрессирующих рецептор второго типа. Например, в некоторых вариантах осуществления вариант цитокина представляет собой мутантный IL-2 (или посттрансляционно модифицированный IL-2), который связывает IL-2Rβγ с более высоким сродством (например, не менее чем примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз более сильным сродством) по сравнению с IL-2Rαβγ, или активирует клетки, экспрессирующие IL-2Rβγ в большей степени, чем (например, активирует не менее чем примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз сильнее) те, которые экспрессируют IL-2Rαβγ; обратное также верно. В некоторых вариантах осуществления, в зависимости от типа заболевания, подлежащего лечению, предпочтительные мутации или изменения увеличивают активацию фрагмента цитокина иммунных эффекторных клеток (например, CD8+ Т-клеток для лечения рака). Например, в некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит мутацию (или посттрансляционную модификацию), которая снижает активацию вариантом IL-2 клеток, экспрессирующих рецептор IL-2Rβγ, по сравнению с активацией вариантом IL-2 клеток, экспрессирующих рецептор IL-2Rαβγ.

[193] В некоторых вариантах осуществления мутация или модификация варианта цитокина приводит к различию в действии (например, такому как снижение связывания или активации клеток) по сравнению с иммуноцитокином без мутации или модификации такой части цитокина. В одном аспекте различие в действии измеряется по пролиферативному ответу клеток или клеточных линий, рост которых зависит от цитокина (например, IL-2). Этот ответ на иммуноцитокин выражается как значение EC50, которое получают путем построения кривой дозозависимого ответа и определения концентрации белка, которая приводит к полумаксимальному ответу. В некоторых вариантах осуществления сравнение отношения значений ЕС50, полученных для клеток, экспрессирующих рецептор первого типа (например, рецептор IL-2Rβγ), к клеткам, экспрессирующим рецептор второго типа (например, рецептор IL-2Rαβγ) для иммуноцитокина данного изобретения (например, иммуноцитокина варианта IL-2) с отношением значений EC50 для эталонного иммуноцитокина (например, иммуноцитокина IL-2 дикого типа той же конфигурации) дает меру в различии действия иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления сравнение значения EC50, полученного для иммуноцитокина данного изобретения (например, иммуноцитокина варианта IL-2) со значением EC50 для эталонного иммуноцитокина (например, иммуноцитокина IL-2 дикого типа той же конфигурации), дает меру в различии действия иммуноцитокина.

[194] В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина включает мутацию в одной или нескольких аминокислотах исходной молекулы цитокина (например, зрелый цитокин дикого типа). В одном варианте осуществления вариант цитокина включает аминокислотную замену в одном или нескольких аминокислотных положениях в цитокине. В другом варианте осуществления вариант цитокина включает делеции или вставки аминокислот в одном или нескольких аминокислотных положениях в цитокине. В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина включает изменение одной или нескольких аминокислот в цитокине.

[195] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, эритропоэтин, тромбопоэтин, VEGF, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF, или природных вариантов или их подтипов. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой противовоспалительный или иммуносупрессивный цитокин или его вариант, такой как IL-10, IL-27, IL-35, TGF-β и VEGF. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой провоспалительный или иммуностимулирующий цитокин или его вариант, такой как IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IFN-α, IFN-β, IFN -γ, TNF-α, эритропоэтин, тромбопоэтин, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-10, IL-12, IL-23, IFN-α (например, IFN-α2 или IFN-α2b) и IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой IL-12, а цитокиновые субъединицы представляют собой р35 и р40. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой IL-23, а цитокиновые субъединицы представляют собой p40 и p19. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой IL-27, а цитокиновые субъединицы представляют собой ген 3, индуцированный вирусом Эпштейна-Барр (EBI3), и IL-27p28. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой IL-35, а цитокиновые субъединицы представляют собой IL-12α (p35) и IL-27β. В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина представляет собой составление в одну цепь двух или более субъединиц разных цитокинов.

IL-2

[196] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант. Интерлейкин-2 (IL-2), также известный как фактор роста Т-клеток (TCGF), представляет собой мономерный белок с молекулярной массой 15,5 кДа, который играет ключевую роль в образовании, выживании и гомеостазе лимфоцитов. Он участвует в естественной реакции организма на микробную инфекцию и в распознавании «своих» и «чужих». IL-2 представляет собой интерлейкин, он принадлежит к семейству цитокинов, которое включает IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21. IL-2 опосредует свое действие путем связывания с рецепторами IL-2 (IL-2R), экспрессированными на лимфоцитах. Активированные CD4+ Т-клетки и активированные CD8+ Т-клетки являются основными источниками IL-2. Его способность увеличивать популяцию лимфоцитов и усиливать эффекторные функции этих клеток делает IL-2 привлекательным средством против рака. IL-2 был предложен для лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), неходжкинской лимфомы (НХЛ), кожной Т-клеточной лимфомы (КТКЛ), рака молочной железы и рака мочевого пузыря.

[197] Рецептор IL-2 (IL-2R) представляет собой комплекс, состоящий из трех цепей: α (CD25, p55), β (CD122, p75) и γ (CD132, p65). Цепь γ является общей для всех членов семейства цитокинов IL-2. Связывание IL-2 либо с димерным CD122/CD132 IL-2R со средним сродством (IL-2Rβγ, Kd ~ 10⁻⁹ M) или высоким сродством тримерного CD25/CD122/CD132 IL-2R (IL-2Rαβγ, Kd ~ 10⁻¹¹ M) может приводить к передаче сигнала, тогда как связывание только с CD25 не в состоянии передавть сигнал. β-цепь образует комплекс с Янус-киназой 1 (JAK1). Цепь γ образует комплекс с JAK3. При связывании IL-2 с IL-2R активируются JAK1 и JAK3, которые способны добавлять фосфатные группы к молекулам, таким образом инициируя три внутриклеточные сигнальные пути: путь MAP-киназы, путь фосфоинозитид-3-киназы (PI3K) и путь JAK-STAT. Димерный IL-2Rβγ экспрессируется CD8+ Т-клетками памяти, NK-клетками и В-клетками, тогда как высокие уровни трехмерного IL-2Rαβγ экспрессируются регуляторными Т-клетками (Treg) и активированными Т-клетками.

[198] Альдеслейкин (Proleukin®), рекомбинантный человеческий IL-2, был первым средством иммунотерапии рака и одним из первых рекомбинантных белков, одобренных FDA в 1992 году. В настоящее время алдеслейкин используется для лечения метастатического почечно-клеточного рака (мПКР) и метастатической меланомы (мМ) путем внутривенной инфузии. В связи с необходимостью частых внутривенных инфузий многочисленных доз введение алдеслейкина проводят в клинических условиях. Альдеслейкин продемонстрировал полную регрессию рака примерно у 10% пациентов, получавших лечение по поводу метастатической меланомы и рака почки (Klapper и др., Рак, 2008; Cancer, 2008; Rosenberg, Sci Transl Med., 2012; Smith и др., Clin Cancer Res., 2008). Примерно 70% пациентов с полным ответом были излечены, сохраняя полную регрессию в течение более 25 лет после первоначального лечения (Atkins и др., J Clin Oncol., 1999; Klapper и др., Cancer, 2008; Rosenberg, Sci Transl Med., 2012; Rosenberg и др., Ann Surg., 1998; Smith и др., Clin Cancer Res., 2008). Однако, высокие дозы IL-2 могут вызывать синдром сосудистого пропотевания (VLS), толерантность по отношению к опухоли, вызванную индуцированной активацией гибелью клеток (AICD), и иммуносупрессию, вызванную активацией Treg. Дополнительная проблема системного лечения с использаванием IL-2 связана с серьезным побочным действием при внутривенном введении, которые включают тяжелые сердечно-сосудистые, легочные, печеночные, желудочно-кишечные (ЖКТ), неврологические и гематологические явления (Proleukin (aldesleukin) Summary oF Product Characteristics [SmPC]: http://www.medicines.org.uk/emc/medicine/19322/SPC). Тяжелое побочное действие часто ограничивает оптимальную дозировку IL-2, что ограничивает число пациентов с позитивным ответом на лечение. Для более широкого применения в будущем необходимо решить проблемы токсичности и короткого периода полувыведения IL-2.

[199] Нативный полипептид-предшественник человеческого IL-2 состоит из 153 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-20 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 133 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-2 представляет собой зрелый человеческий IL-2. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-2 представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-2 не является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-2 является гликозилированным.

[200] В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-2 представляет собой (или практически состоит из) альдеслейкина (например, Proleukin®; см., например, https://www.drugbank.ca/drugs/DB00041). Альдеслейкин (десаланил-1, серин-125 человеческий интерлейкин-2) представляет собой противоопухолевый (противораковый) модификатор биологического ответа, одобренный FDA. Он имеет молекулярную массу примерно 15,3 кДа и является синонимом рекомбинантного интерлейкина-2 человека, интерлейкина-2 альдеслейкина, 125-L-серин-2-133-интерлейкина 2 (человеческий, восстановленный) или интерлейкина-2(2-133),125-ser. Альдеслейкин представляет собой рекомбинантный IL-2, он отличается от нативного IL-2 следующим образом: a) альдеслейкин не гликозилирован, поскольку от получен из E. coli; b) альдеслейкин не имеет N-концевого аланина (А); с) альдеслейкин содержит замену цистеина на серин в положении 125 (C125S); и d) состояние агрегации алдеслейкина, вероятно, отличается от состояния альдеслейкина нативного IL-2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит замену цистеина на серин в положении 125 (C125S) в зрелой форме человеческого IL-2.

[201] К. Sauve и др. (Proc Natl Acad Sci USA. 1991; 88(11):4636-4640) обнаружили, что аминокислотные остатки K35, R38, F42 и K43 IL-2 дикого типа оказались ключевыми для связывания с рецептором IL-2 (IL-2Rα, форма с низким сродством), а при мутациях R38A и F24A сохранялась значительная биологическая активность IL-2. R. Vazquez-Lombardi и др. (Nat Commun. 2017;8:15373) обнаружили, что мутации R38D, K43E и E61R в IL-2 вызывают сильную экспансию CD25 цитотоксической субпопуляции с минимальной экспансией Treg по сравнению с IL-2 дикого типа. Было обнаружено, что мутация P65L в IL-2 снижает системную токсичность и повышает противоопухолевую эффективность по сравнению с IL-2 дикого типа (Chen и др., Cell Death Dis. 2018;9(10):989).

[202] В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из F24, K35, R38, F42, K43, E61 и P65, соответствующему положению в IL-2 дикого типа, содержащем последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из F24A, R38D, K43E, E61R и P65L, в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит мутацию R38D/K43E/E61R, соотносительную с IL-2 дикого типа, содержащим последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-2 содержит последовательность SEQ ID NO: 2.

IFN-α

[203] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-α или его вариант, такой как IFN-α2 или его вариант, или IFN-α2b или его вариант. Человеческие интерфероны типа I (IFN) представляют собой большую группу IFN, которые помогают регулировать активность иммунной системы. Они связываются со специфическим комплексом рецепторов клеточной поверхности, известным как рецептор IFN-α (IFNAR), состоящим из цепей IFNAR1 и IFNAR2. IFN типа I млекопитающих содержат IFN-α, IFN-β, IFN-κ, IFN-, IFN-ε, IFN-τ, IFN-ω и IFN-ζ (также известен как лимитин).

[204] Белки IFN-α в основном продуцируются плазмоцитоидными дендритными клетками (pDC) и в основном участвуют во врожденном иммунитете против вирусной инфекции. Белки IFN-α представляют собой мономерные белки с молекулярной массой 19-26 кДа, которые широко применяют для лечения рака и вирусных заболеваний, таких как гепатит B и C. Существует 13 генов, ответственных за синтез 13 подтипов IFN-α: IFNA1, IFNA2, IFNA4, IFNA5, IFNA6, IFNA7, IFNA8, IFNA10, IFNA13, IFNA14, IFNA16, IFNA17, IFNA21.

[205] Человеческие IFN-α2a, IFN-α2b и IFN-α2c представляют собой аллельные варианты одного и того же гена. IFN-α2a и IFN-α2b содержат лизин и аргинин в положении 23 зрелого белка, соответственно. Человеческие IFN-α2a и IFN-α2b являются единственными подтипами IFN-α, у которых есть сайт O-гликозилирования (Th106). Интерферон альфа-2а (IFN-α2a; в продажу поступает под названием RoFeron-A® от HoFFmann-La Roche) и интерферон альфа-2b (IFN-α2b - рекомбинантная форма IFN-α2; в продажу поступает под названием Intron-A® от Schering-Plough) были одобрены для лечения волосатоклеточного лейкоза, меланомы, фолликулярной лимфомы, почечно-клеточного рака, саркомы Капоши, связанной со СПИДом, и хронического миелогенного лейкоза (M. Ferrantini и др., Biochimie. Jun-Jul 2007;89(6-7):884-893). Недавние исследования выявили новое иммуномодулирующее воздействие IFN-α, в том числе воздействие на Т-клетки и дендритные клетки, что может привести к возникновению стойкого противоопухолевого ответа. Однако использование IFN-α в клинической онкологии по-прежнему в основном основано на использовании антипролиферативной и антиангиогенной активности этих цитокинов. Полное использование роли IFN-α как регулятора иммунного ответа и противоопухолевого иммунитета потребует новых подходов к использованию этих цитокинов.

[206] hIFN-α2b представляет собой гликопротеин, состоящий из 166 аминокислот с O-гликозилированным треонином в положении 106. Каждый rhIFN-2b состоит из пяти α-спиралей (называемых спиралью A-E), соединенных петлей AB, BC, CD и DE. Остатки, которые важны для связывания с рецептором, представляют собой петлю AB (Arg22, Leu26, Phe27, Leu30, Lys31, Arg33 и His34), спираль B (Ser68), спираль C (Thr79, Lys83, Tyr85 и Tyr89), спираль D (Arg120, lys121, Gln124, Lys131 и Glu132) и спираль E (Arg144 и Glu146). Аминокислотными остатками, важными для биологической активности, являются Leu30, Lys31, Arg33, His34, Phe36, Arg120, Lys121, Gln124, Tyr122, Tyr129, Lys131, Glu132, Arg144 и Glu146 (Ratih Asmana Ningrum, ScientiFica (Cairo). 2014; 2014:970315).

[207] В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой IFN-α2. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой IFN-α2a. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой IFN-α2b. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой IFN-α2c. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой зрелый IFN-α. Нативный полипептид-предшественник человеческого IFN-α2b состоит из 188 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-23 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 165 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 3). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α не является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-α является гликозилированным.

[208] В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, вариант IFN-α2b) содержит одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из R22, L26, F27, L30, K31, D32, R33, H34, D35, F36, S68, T79, K83, Y85, Y89, R120, K121, Y122, Q124, Y129, K131, E132, R144 и E146, и соответствующем положению в IFN-α (например, IFN-α2b), содержащем последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, вариант IFN-α2b) содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из L30A, K31A, D32A, R33A, H34A и D35A, в отличие от IFN-α, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, вариант IFN-α2b) содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 4-9. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, вариант IFN-α2b) содержит мутацию L30A в отличие от IFN-α, содержащего последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-α (например, вариант IFN-α2b) содержит последовательность SEQ ID NO: 4.

IFN-γ

[209] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IFN-γ или его вариант. Гамма-интерферон (IFNγ) представляет собой димеризованный растворимый цитокин с дисульфидной связью, который является единственным членом класса интерферонов типа II. IFN-γ представляет собой гомодимер с ММ ~25 кДа с третичной укладкой, построенной вокруг необычного паттерна переплетающихся α-спиралей. Он продуцируется преимущественно Т-клетками и NK-клетками в ответ на различные воспалительные или иммунные стимулы. IFN-γ может служить как активатором, так и супрессором иммунной системы. Исследования показали, что иммунотерапия рака (ингибиторы контрольных точек) действует частично за счет увеличения экспрессии IFN-γ, что приводит к уничтожению раковых клеток. Устойчивость к иммунотерапии объясняется дефектами передачи сигналов IFN-γ. Однако IFN-γ также может позволить избежать онкологии, способствуя онкогенезу и ангиогенезу, вызывая экспрессию толерантных молекул, таких как PD-L1, и индуцируя программу гомеостаза. Из-за своего противоположного и конкурирующего воздействия на иммунную систему IFN-γ не был одобрен FDA для лечения онкологических больных, за исключением случаев злокачественного остеопороза (L. Ni и J. Lu, Cancer Med. 2018; 7(9):4509-4516).

[210] Мономерный пре-прополипептид нативного человеческого IFN-γ (hIFN-γ) состоит из 166 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-23 являются сигнальным пептидом); мономерный зрелый полипептид состоит из 138 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 10), соответствующих аминокислотам 24-161 пре-про-полипептида; аминокислоты 162-166 представляют собой пропептидную последовательность пре-про-полипептида. В некоторых вариантах осуществления мономерный фрагмент IFN-γ представляет собой мономерный зрелый IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления мономерный фрагмент IFN-γ представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления фрагмент (или субъединица) IFN-γ не является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент (или субъединица) IFN-γ является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-γ содержит два идентичных мономера/субъединицы IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-γ содержит два разных мономера/субъединицы IFN-γ. Например, в некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-γ содержит один мономер IFN-γ дикого типа и один мономер варианта IFN-γ. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-γ содержит два мономера IFN-γ (например, два мономера варианта IFN-γ или IFN-γ дикого типа), связанные вместе, например, через пептидный линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) или химический линкер.

[211] Аминокислотные остатки IFN-γ S20, A23, H111 и Q115 важны для связывания с рецептором; аминокислотные остатки V5, S20, A23, G26 и H111 важны для биологической активности IFN-γ (M. Randal и A. A. KossiakoFF, Structure. 2001;9(2):155-63). Lander и др. (J Mol Biol. 2000;299(1):169-79) разработали биологически активный одноцепочечный вариант hIFN-γ (IFN-γSC1), путем связывания двух мономерных IFN-γ линкером из 7 аминокислотных остатков и замены His111 в первом мономере IFN-γ на остаток аспарагиновой кислоты. Благодаря мутации H111D IFN-γSC1 может связывать только один IFN-γRα, но при этом полностью сохраняет свою биологическую активность, касающуюся клеточной пролиферации, индукции МНС класса I и антивирусных анализов.

[212] В некоторых вариантах осуществления мономерный IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IFN-γ в положении, выбранном из группы, состоящей из V5, S20, D21, V22, A23, D24, N25, G26, H111 и Q115, и соответствующем положению в субъединице IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ в одной или обеих субъединицах IFN-γ содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из S20A, D21A, D21K, V22A, A23S, A23E, A23Q, A23V, D24A, D24E, N25A, N25K и H111D, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления в одной или обеих субъединицах IFN-γ варианта IFN-γ содержится одна или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из S20A/D21A, D21K, V22A/A23S, D24A/N25A, A23E/D24E/N25K, A23Q, и A23V, в отличие от субъединицы IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 11-17. В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит мутацию A23V в одной или обеих субъединицах IFN-γ, которые соотносятся с субъединицей IFN-γ дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IFN-γ или его варианта соединены линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229). В некоторых вариантах осуществления вариант IFN-γ содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления обе субъединицы IFN-γ содержат последовательность SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IFN-γ представляет собой рекомбинантный IFN-γ «дикого типа», содержащий две субъединицы IFN-γ дикого типа, соединенные линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229), который содержит последовательность SEQ ID NO: 18.

IL-10

[213] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-10 или его вариант. Интерлейкин 10 (IL-10) представляет собой α-спиральный цитокин, который экспрессируется в виде нековалентно связанного гомодимера с ММ ~ 37 кДа, также известный как фактор, ингибирующий синтез цитокинов (CSIF) человека. Он играет ключевую роль в индукции и поддержании толерантности. Сигнализация IL-10 происходит через комплекс JAK-STAT. Рецептор IL-10 (IL-10R) имеет две субъединицы: α-субъединицу, которая в основном экспрессируется на иммунных клетках с наивысшей экспрессией на моноцитах и макрофагах, и повсеместно экспрессируемую β-субъединицу. IL-10 в основном продуцируется моноцитами и, в меньшей степени - лимфоцитами, в том числе Т-хелперными клетками II типа (TH2), тучными клетками, регуляторными Т-клетками CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ и подмножествами активированных Т-клеток и В-клеток. Дендритные клетки и NK-клетки также могут продуцировать IL-10. IL-10 подавляет секрецию провоспалительных цитокинов, таких как TNFα, IL-1, IL-6, IL-12, а также цитокинов Th1, таких как IL-2 и IFN-γ, и контролирует дифференцировку и пролиферацию макрофагов, B-клеток и Т-клеток (Glocker, EO и др., Ann. N.Y. Acad. Sci. 1246, 102-107 (2011); Moore, K. W. и др., Annu. Rev. Immunol. 19, 683-765 (2001); R. de Waal MaleFyt и др., J. Exp. Med. 174, 915-924 (1991); Williams, LM и др., Immunology 113, 281-292 (2004)). Кроме того, он является мощным ингибитором презентации антигена, подавляя экспрессию MHC II, а также повышая регуляцию костимулирующих молекул CD80 и CD86 (Mosser, DM & Zhang, X. Immunological Reviews 226, 205-218 (2008)). Если IL-10 отсутствует или не функционирует, воспаление становится неконтролируемым. Это делает IL-10 привлекательным терапевтическим кандидатом для лечения аутоиммунных заболеваний. Однако клинические испытания с использованием IL-10 и разработка рекомбинантного IL-10 (илодекакин, TENOVIL®, Schering-Plough Research Institue, Kenilworth, Нью-Джерси) были прекращены из-за недостаточной эффективности. Недавние исследования пролили свет на потенциальную роль IL-10 в лечении опухолей (Fujii и др., (October 2001). «Interleukin-10 promotes the maintenance oF antitumor CD8(+) T-cell eFFector Function in situ». Blood. 98(7):2143-51).

[214] Мономерный нативный полипептид-предшественник человеческого IL-10 состоит из 178 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-18 являются сигнальным пептидом), тогда как мономерный зрелый полипептид IL-10 состоит из 160 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 20). В некоторых вариантах осуществления фрагмент мономерного IL-10 представляет собой мономерный зрелый IL-10. В некоторых вариантах осуществления мономерный фрагмент IL-10 представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления фрагмент (или субъединица) IL-10 не является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления часть (или субъединица) IL-10 является гликозилированной. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-10 содержит два идентичных мономера/субъединицы IL-10. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-10 содержит два разных мономера/субъединицы IL-10. Например, в некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-10 содержит один мономер IL-10 дикого типа и один мономер варианта IL-10. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-10 содержит два мономера IL-10 (например, два мономера варианта IL-10 или IL-10 дикого типа), связанные вместе, например, через пептидный линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) или химический линкер, см., например, биологически активный одноцепочечный IL-10 в US 20130316404, содержание которого полностью включено в настоящее описание ссылкой.

[215] Аминокислотные остатки IL-10 N21, M22, R24, R32, H90, S31 и S93 важны для связывания с рецептором IL-10; остаток R24 имеет решающее значение для биологической активности IL-10 (Yoon и др., J Biol Chem. 2006;281(46):35088-35096; E. S. Acuner-Ozbabacan и др. BMC Genomics. 2014;15 Suppl 4(Suppl 4):S2).

[216] В некоторых вариантах осуществления мономерный IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10 в положении, выбранном из группы, состоящей из N21, M22, R24, D25, L26, R27, D28, A29, F30, S31, R32, H90 и S93, и соответствующем положению в субъединице IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A, L26A, R27A, D28A, A29S, F30A, S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит одну или несколько мутаций в одной или обеих субъединицах IL-10, выбранных из группы, состоящей из R24A, D25A/L26A, R27A, D28A/29S, F30A/S31A и R32A, в отличие от субъединицы IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат любую последовательность из SEQ ID NO: 21-26. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит мутацию R27A в одной или обеих субъединицах IL-10, которые соотносятся с субъединицей IL-10 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления одна или обе субъединицы варианта IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы IL-10 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-10 содержит последовательность SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления обе субъединицы IL-10 содержат последовательность SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-10 представляет собой рекомбинантный IL-10 «дикого типа», содержащий два мономера IL-10 дикого типа, соединенных линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229), который содержит последовательность SEQ ID NO: 27.

IL-12

[217] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант. IL-12 представляет собой гетеродимерный белок с ММ 70 кДа, состоящий из двух ковалентно связанных (дисульфидной связью) субъединиц p35 (IL-12A) и p40 (IL-12B). Субъединица P40 является общей для IL-12 и IL-23. Активный гетеродимер (обозначаемый как «р70») и гомодимер р40 образуются после синтеза белка. IL-12 представляет собой интерлейкин, принадлежащий к семейству IL-12, которое является единственным семейством, включающим гетеродимерные цитокины, такие как IL-12, IL-23, IL-27 и IL-35. IL-12 продуцируется дендритными клетками, макрофагами, нейтрофилами и В-лимфобластоидными клетками (NC-37) человека в ответ на антигенную стимуляцию. IL-12 функционирует путем связывания с рецептором IL-12 (IL-12R), который представляет собой гетеродимерный рецептор, образованный из IL-12Rβ1 и IL-12Rβ2, что, в свою очередь, приводит к активации сигнального пути JAK-STAT. IL-12 способствует развитию Th1-ответов и сильно индуцирует продуцирование IFNγ Т- и NK-клеток. Способность IL-12 активировать как врожденный (NK-клетки), так и адаптивный (цитотоксические Т-лимфоциты) иммунитеты сделала его многообещающим кандидатом для иммунотерапии рака. Несмотря на положительные результаты испытаний на животных, IL-12 продемонстрировал лишь скромный противоопухолевый ответ в клинических испытаниях и часто сопровождался значительными проблемами, вызванными токсичностью (Lasek и др., Cancer Immunol Immunother., 2014). Лечение IL-12 сопровождалось системными гриппоподобными симптомами (например, лихорадкой, ознобом, утомляемостью, эритромелалгией или головной болью) и токсическим воздействием на костный мозг и печень. Исследования дозирования показали, что пациенты могли переносить только дозы менее 1 мкг/кг, что намного ниже терапевтической дозы. В результате клинические испытания IL-12 либо в качестве монотерапии, либо в сочетании с другими средствами не продемонстрировали сильную устойчивую терапевтическую эффективность ((Lasek и др., Cancer Immunol Immunother., 2014).

[218] Нативный полипептид-предшественник человеческого р35 (IL-12A) состоит из 219 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-22 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 197 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 29). Нативный полипептид-предшественник человеческого р40 (IL-12B) состоит из 328 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-22 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 306 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 30). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 (или субъединица IL-12) представляет собой зрелый IL-12 (или зрелую субъединицу). В некоторых вариантах осуществления субъединица IL-12A (p35) или ее вариант представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления субъединица IL-12B (p40) или ее вариант представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления IL-12 (или его субъединица) или его вариант не являются гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления IL-12 (или его субъединица) или его вариант являются гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит одну субъединицу дикого типа (например, р35 дикого типа) и одну мутантную субъединицу (например, вариант р40). В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит две вариантные субъединицы (вариант р35 и вариант р40). В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит две субъединицы дикого типа (например, р35 и р40 дикого типа), которые связаны друг с другом через синтетический пептидный линкер (например, любой из SEQ ID NO: 227-229) или химический линкер.

[219] В субъединице p40 аминокислотными остатками, важными для связывания с рецептором IL-12, являются C177, E45, E59 и D62 (Luo и др. J Mol Biol. 2010;402(5):797-812). Исследования показали, что доступный N-конец субъединицы p40 важен для биологической активности IL-12. Lieschke и др. сконструировали одноцепочечный IL-12 (scIL-12) и о™етили, что порядок субъединиц влияет на биологическую активность IL-12: если субъединица p35 находилась на N-конце субъединицы p40, то активность IL-12 значительно снижалась; если субъединица p40 находилась на N-конце субъединицы p35, то биологическая активность scIL-12 была сравнима с активностью rIL-12 (Lieschke и др., Nat Biotechnol. 1997;15(1):35-40).

[220] В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит субъединицу р35 дикого типа (SEQ ID NO: 29). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит субъединицу варианта p35. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит субъединицу p40 дикого типа (SEQ ID NO: 30). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит субъединицу варианта p40. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит субъединицу р35 дикого типа или его варианта и субъединицу р40 дикого типа или варианта р40, соединенные пептидным линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу р40 дикого типа или варианта р40 - линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р35 дикого типа или варианта р35. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу р35 дикого типа или варианта р35 - линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р40 дикого типа или варианта р40. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, и соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащий последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит мутацию F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 и субъединица p35 IL-12 или его варианта соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36 или 275. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-12 представляет собой рекомбинантный IL-12 «дикого типа», содержащий субъединицу р35 дикого типа и субъединицу р40 дикого типа, соединенные линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229), который содержит последовательность SEQ ID NO: 35.

IL-23

[221] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-23 или его вариант. Интерлейкин-23 (IL-23) принадлежит к семейству цитокинов IL-12, и представляет собой гетеродимерный цитокин, состоящий из субъединицы IL12B (p40) (такой же, как у IL-12) и субъединицы IL23A (p19). IL-23 функционирует путем связывания с рецептором IL-23, состоящим из IL-12R β1 и IL-23R (субъединица p19 связывает IL-23R, тогда как субъединица p40 связывает IL-12Rβ1), что приводит к рекрутированию и фосфорилированию Янус-киназы 2 и тирозинкиназы 2 и фосфорилированию STAT3 и STAT4, что приводит к активации генов. STAT3 отвечает за ключевые характеристики развития Th17, такие как экспрессия RORγt или транскрипция цитокинов Th17, таких как IL-17, IL-21, IL-22 и GM-CSF, с помощью которых происходит защита от грибков и бактерий, и которые участвуют в барьерном иммунитете. IL-23 в основном секретируется активированными дендритными клетками, макрофагами или моноцитами, стимулируемыми антигенным стимулом. Рецептор IL-23 экспрессируется на клетках Th17 и NK-клетках. Было обнаружено, что аутоиммунные и раковые заболевания связаны с дисбалансом IL-23 и повышением его уровня. Наиболее важной функцией IL-23 является его роль в развитии и дифференцировке эффекторных клеток Th17. В условиях хронического воспаления активированные DC и макрофаги продуцируют IL-23, который способствует развитию клеток Th17. Недавно было обнаружено, что аутоиммунные заболевания, такие как псориаз, болезнь Крона, ревматоидный артрит или рассеянный склероз, связаны с опосредованной IL-23 передачей сигналов, стимулируемой T_H-17 и другими субпопуляциями лимфоцитов, экспрессирующими рецептор IL-23.

[222] Нативный полипептид-предшественник человеческого р19 (IL-23A) состоит из 189 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-19 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 170 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 37). Нативный полипептид-предшественник человеческого р40 (IL-12B) состоит из 328 аминокислотных остатков (аминокислоты 1-22 являются сигнальным пептидом), тогда как зрелый полипептид состоит из 306 аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 30). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 (или субъединица IL-23) представляет собой зрелый IL-23 (или зрелую субъединицу IL-23). В некоторых вариантах осуществления IL-23A (p19) или его вариант представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37. В некоторых вариантах осуществления субъединица IL-12B (p40) или ее вариант представляет собой полипептид, практически гомологичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30, например, по меньшей мере примерно на 85% (например, по меньшей мере примерно на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления IL-23 (или его субъединица) или его вариант не являются гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления IL-23 (или его субъединица) или его вариант являются гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит одну субъединицу дикого типа (например, р19 дикого типа) и одну мутантную субъединицу (например, вариант р40). В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит две вариантные субъединицы (вариант р19 и вариант р40). В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит две субъединицы дикого типа (например, р19 и р40 дикого типа), которые связаны друг с другом через синтетический пептидный линкер (например, любой из SEQ ID NO: 227-229) или химический линкер. В субъединице p40 аминокислотными остатками, важными для связывания с рецептором IL-23, являются C177, E45, E59 и D62 (Luo и др. J Mol Biol. 2010;402(5):797-812).

[223] В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит субъединицу p19 дикого типа (SEQ ID NO: 37). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит субъединицу варианта p19. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит субъединицу p40 дикого типа (SEQ ID NO: 30). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит субъединицу варианта p40. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит субъединицу р19 дикого типа или его варианта и субъединицу р40 дикого типа или варианта р40, соединенные пептидным линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229). В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу р40 дикого типа или варианта р40 - линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р19 дикого типа или варианта р19. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу р19 дикого типа или варианта р19 - линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р40 дикого типа или варианта р40. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, и соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащий последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34. В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит мутацию E59A/F60A в субъединице р40, соотносительной с субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления субъединица p40 варианта IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах осуществления субъединица р40 и субъединица р19 IL-23 или его варианта соединены линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229). В некоторых вариантах осуществления вариант IL-23 содержит последовательность SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления фрагмент IL-23 представляет собой рекомбинантный IL-23 «дикого типа», содержащий субъединицу р35 дикого типа и субъединицу р40 дикого типа, соединенные линкером (например, любой из SEQ ID NO: 227-229), который содержит последовательность SEQ ID NO: 38.

IL-17

[224] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой IL-17 или его вариант. Семейство IL-17 включает IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E (также известный как IL-25) и IL-17F. Интерлейкин 17A (IL-17A или IL-17) представляет собой дисульфид-связанный гомодимерный секретируемый гликопротеин с молекулярной массой примерно 35 кДа. Каждая субъединица гомодимера составляет примерно 15-20 кДа. IL-17A представляет собой провоспалительный цитокин, продуцируемый Т-хелперными клетками 17 (Th17) в ответ на их стимуляцию со стороны IL-23. IL-17 взаимодействует с IL-17R и активирует несколько сигнальных каскадов, которые, в свою очередь, приводят к индукции хемокинов. Эти хемокины действуют как хемоаттрактанты, привлекая иммунные клетки, такие как моноциты и нейтрофилы, к месту воспаления.

Активность цитокинов или их вариантов

[225] «Активность» (или «действие») цитокина или его варианта, описанного в данном документе, включает сродство связывания цитокина или его варианта с соответствующим рецептором цитокина; и/или биологическую активность (или биоактивность) цитокина или его варианта, такую как индуцирование или ингибирование передачи сигнала, индуцирование или ингибирование клеточной пролиферации, дифференцировки и/или активации, индуцирование или ингибирование секреции действующего(их) цитокина(ов) (например, провоспалительных цитокинов) и т.д. после связывания цитокина/цитокинового рецептора. Такие виды биологической активности также упоминаются в данном документе как прямая биологическая активность. В некоторых вариантах осуществления биологическая активность цитокина или его варианта также включает косвенную биологическую активность, такую как любая биологическая активность, возникающая в результате прямой биологической активности. Например, в некоторых вариантах биологическая активность также включает уничтожение раковых клеток иммунными клетками, привлеченными к месту опухоли благодаря секретируемым воздействующим цитокинам, таким как маркеры воспаления IL-6, MIP-2 (GRO-β)/CXCL2, G-CSF/CSF3, TIMP-1, KC (GRO-α)/CXCL1 и т.д.

[226] В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400 , 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно в 2 раза (например, не менее чем примерно в 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 раз) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента с антигеном-мишенью.

[227] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv, или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью), см. фигуры 2A-4C) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии.

[228] В некоторых вариантах осуществления «соответствующий цитокин или его вариант» является таким же, как цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, но экспрессируемый в другом состоянии или в другом положении. Цитокин или его вариант «в свободном состоянии» в данном документе относится к цитокину или его варианту в растворимой форме, без присоединения к какой-либо части, такой как клеточная мембрана или другая молекула (например, Fc-фрагмент или N-конец или C-конец) полноразмерного антитела или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab)).

[229] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv, или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью), см. фигуры 2A-4C)) составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6% , 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности этого соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии; а при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или выше) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) с антигеном-мишенью.

[230] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH полноразмерного антитела, ii) N-конце VL полноразмерного антитела, iii) C-конце тяжелой цепи полноразмерного антитела, iv) С-конце CL полноразмерного антитела и v) N-конце субъединицы Fc-домена полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 3A-3C) составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), ii) N-конце VL антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), iii) С-конце субъединицы Fc-домена (или ее части), iv) С-конце CL антигенсвязывающего фрагмента (Fab) и v) N-конце субъединицы Fc-домена. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, VHH, лигандом или рецептором) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 4A-4C), составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора), ii) C-конце субъединицы Fc-домена (или его части) и iii) N-конце субъединицы Fc-домена.

[231] В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела составляет не менее примерно 70% (например, не менее примерно 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 0,9%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или больше) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH полноразмерного антитела, ii) N-конце VL полноразмерного антитела, iii) C-конце тяжелой цепи полноразмерного антитела, iv) С-конце CL полноразмерного антитела и v) N-конце субъединицы Fc полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 3A-3C) составляет не менее примерно 70% (например, не менее примерно 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 0,9%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), ii) N-конце VL антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), iii) С-конце субъединицы Fc-домена (или ее части), iv) С-конце CL антигенсвязывающего фрагмента (Fab) и v) N-конце субъединицы Fc-домена. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, VHH, лигандом или рецептором) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 4A-4C), составляет не менее примерно 70% (например, не более примерно 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 0,9%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора), ii) C-конце субъединицы Fc-домена (или его части) и iii) N-конце субъединицы Fc-домена.

[232] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH полноразмерного антитела, ii) N-конце VL полноразмерного антитела, iii) C-конце тяжелой цепи полноразмерного антитела, iv) С-конце CL полноразмерного антитела и v) N-конце субъединицы Fc-домена полноразмерного антитела; а при наличии связывания полноразмерного антитела с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела составляет не менее примерно 70% (например, не менее примерно 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170% , 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH полноразмерного антитела, ii) N-конце VL полноразмерного антитела, iii) C-конце тяжелой цепи полноразмерного антитела, iv) C-конце CL полноразмерного антитела и v) N-конце Fc-субъединицы полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 3A-3C) составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от актисности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), ii) N-конце VL антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), iii) С-конце субъединицы Fc-домена (или ее части), iv) С-конце CL антигенсвязывающего фрагмента (Fab) и v) N-конце субъединицы Fc-домена; а при наличии связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) составляет не менее примерно 70% (например, не менее примерно 80%, 90%, 100%, 110% , 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце VH антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), ii) N-конце VL антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv или Fab), iii) С-конце субъединицы Fc-домена (или ее части), iv) С-конце CL антигенсвязывающего фрагмента (Fab) и v) N-конце субъединицы Fc-домена. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, VHH, лигандом или рецептором) и субъединицей Fc-домена (или ее частью) (см. фигуры 4A-4C) составляет не более примерно 50% (например, не более примерно 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора), ii) C-конце субъединицы Fc-домена (или его части) и iii) N- конце субъединицы Fc-домена; а при наличии связывания антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, VHH, лигандом или рецептором) и субъединицей Fc-домена (или его частью) составляет не менее примерно 70% (например, не менее примерно 80%, 90% , 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) от активности соответствующего цитокина или его варианта, экспрессированного на любом из следующего: i) N-конце антигенсвязывающего фрагмента (например, VHH, лиганда или рецептора), ii) C-конце субъединицы Fc-домена (или его части), и iii) N-конце субъединицы Fc-домена.

[233] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим цитокиновым рецептором или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70 %, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии такая же или примерно такая же (например, с разницей примерно в ±20%), как и активность соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии.

[234] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью)) составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9% , 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1 % или 0%) от активности соответствующего цитокина дикого типа (или соответствующего рекомбинантного цитокина «дикого типа», экспрессированного в том же формате, но содержащего субъединицы дикого типа), расположенного в том же участке. Например, в некоторых вариантах осуществления вариант IL-12 содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу варианта p40 - линкер (например, любую из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р35 дикого типа, а соответствующий рекомбинантный IL-12 «дикого типа» содержит, от N-конца к С-концу: субъединицу р40 дикого типа - линкер (например, любая из SEQ ID NO: 227-229) - субъединицу р35 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина представляет собой вариант IL-2, а соответствующий цитокин дикого типа представляет собой IL-2 «дикого типа».

[235] В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью)) составляет не менее примерно 1% (например, не менее примерно 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% , 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180 %, 190% или более) от активности соответствующего цитокина дикого типа (или соответствующего рекомбинантного цитокина «дикого типа», экспрессированного в том же формате, но содержащего субъединицы дикого типа), расположенного в том же участке.

[236] В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептид (например, расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенный в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью)) составляет не более примерно 80% (например, не более примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9% , 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1 % или 0%) от активности соответствующего цитокина дикого типа (или соответствующего рекомбинантного цитокина «дикого типа» в том же формате, но содержащего субъединицы дикого типа), расположенного в том же участке; а при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv , или Fab) иммуноцитокина, описанного в данном документе, с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина, расположенного в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенного в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или ее частью)) составляет не менее примерно 1% (например, не менее примерно 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20 %, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200% или более) от активности соответствующего цитокина дикого типа (или соответствующего рекомбинантного цитокина «дикого типа» в том же формате, но содержащего субъединицы дикого типа), расположенного в том же участке.

Сродство связывания

[237] Сродство связывания молекулы (например, фрагмента цитокина или иммуноцитокина, содержащего цитокиновый фрагмент) и его партнера по связыванию (например, рецептора цитокина или его субъединиц) можно определить экспериментально с помощью любых подходящих анализов связывания лиганда или анализов связывания антител/антигенов, известных в данной области техники, например, с использованием Вестерн-блотов, твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), электрохемилюминесценции Meso Scale Discovery (MSD), мультиплексный иммуноанализа на микрочастицах (MIA), RIA, поверхностно-плазменного резонанса (SPR), ECL, IRMA, FACS, EIA, анализа Biacore, анализа октетов, сканирования пептидов и т.д. Например, простой анализ возможен с использованием цитокина или его варианта, иммуноцитокина, содержащего цитокин или его вариант, или его соответствующего рецептора или его субъединиц, помеченных различными маркерными агентами, а также с использованием BiacoreX (производства Amersham Biosciences), который является продаваемым в розницу измерительным набором или аналогичным набором, в соответствии с руководством пользователя и методом проведения эксперимента, прилагаемым к набору.

[238] В некоторых вариантах осуществления белковый микрочип используется для анализа взаимодействия, функции и активности цитокинового фрагмента или иммуноцитокина, описанного в данном документе, с соответствующим рецептором цитокина в крупном масштабе. Белковый чип имеет подложку, на которой закреплен ряд захватывающих белков (например, цитокиновый рецептор или его субъединицы). Затем к матрице добавляют молекулы-зонды с флуоресцентной меткой (например, цитокиновый фрагмент или иммуноцитокин, описанные в данном документе), и при взаимодействии с закрепленным захватывающим белком высвобождается флуоресцентный сигнал, который считывается лазерным сканером.

[239] В некоторых вариантах осуществления сродство связывания фрагмента цитокина или иммуноцитокина, описанного в данном документе, и его соответствующего цитокинового рецептора (или его субъединицы) измеряют с использованием SPR (Biacore T-200). Например, антитело к человеческому антителу закрепляют на поверхности сенсорного чипа CM-5 (например, с использованием химического процесса EDC/NHS). Затем составной белок человеческого цитокинового рецептора-Fc (например, IL-2Rα-Fc, IL-2Rβ-Fc, IL-2Rγ-Fc) используют в качестве захваченного лиганда на этой поверхности. Серийные разведения иммуноцитокина, содержащего цитокиновый фрагмент (например, вариант IL-2), позволяют связываться с захваченными лигандами (вариант IL-2 в свободном состоянии служит контролем), а единицы ответа (RU) можно наносить на график зависимости от концентрации иммуноцитокина, чтобы определить значения EC50, или построить график зависимости от времени для отслеживания связывания и диссоциации иммуноцитокина с цитокиновым рецептором-Fc в режиме реального времени. Константу равновесной диссоциации (K_D) и константу скорости диссоциации можно определить путем проведения кинетического анализа с использованием программного обеспечения Biacore. Cродство связывания каждого исследуемого иммуноцитокина с рецептором цитокина можно рассчитывать в процентах от уровня сродства соответствующего фрагмента цитокина в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления клеточную линию, экспрессирующую рецептор цитокина (например, IL-2R) на клеточной поверхности, инкубируют с иммуноцитокином, содержащим цитокиновый фрагмент (например, вариант IL-2), описанный в данном документе, после культивирования клетки промывают, затем добавляют антитела к IgG, конъюгированные с флуоресцентным белком (например, APC), для определения сродства связывания иммуноцитокина с клетками, например, с помощью FACS.

[240] В некоторых вариантах осуществления K_D связывания между цитокином или его вариантом в свободном состоянии и соответствующим ему цитокиновым рецептором (или его субъединицами) составляет примерно ≤ 10^-5 М , ≤ 10^-6 М , ≤ 10^-7 М, ≤ 10^-8 М, ≤ 10^-9 М, ≤ 10^-10 М, ≤ 10^-11 М или ≤ 10^-12 M. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) описанного в данном документе иммуноцитокина с целевым антигеном, K_D связывания между цитокином или его вариантом, расположенным в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида (например, расположенным в шарнирном участке тяжелой цепи антитела (например, полноразмерного антитела) или расположенным в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена (или его частью)) и его соответствующим цитокиновым рецептором (или его субъединицами) не поддается обнаружению (например, отсутствие связывания), или К_D выше, чем (т.е. связывается слабее, чем) в присутствии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела (например, полноразмерного антитела) или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) описанного здесь иммуноцитокина к антигену-мишени.

Биологическая активность

[241] В данной области техники описаны различные способы определения биологической активности (или биоактивности) цитокинов или их вариантов или иммуноцитокинов, такие как биоанализы. Любые анализы цитокинов, известные в данной области, можно адаптировать для исследования биологической активности фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе.

[242] Биоанализ фокусируется на биологической активности цитокинов и использовании ее в качестве считываемого параметра. В биологическом анализе активность образца исследуют на чувствительной клеточной линии (например, на первичных клеточных культурах или адаптированные in vitro клеточные линии, которые зависят и/или реагируют на исследуемый образец) и результаты этой активности (например, клеточная пролиферация) сравнивают со стандартным препаратом цитокинов. Другие аспекты биологической активности цитокинов включают индукцию дальнейшей секреции цитокинов, индукцию лизинга, противовирусную активность, дегрануляцию, цитотоксичность, хемотаксис и стимулирование образования колоний. Анализы in vitro для измерения всех этих видов активности доступны. См., например, «Cytokine Bioassays» в Bioassays - BestProtocols® от eBioscience® (http://tools.thermoFisher.com/content/sFs/manuals/cytokine-bioassays.pdF), содержание которого полностью включено в настоящий документ ссылкой.

[243] Например, в анализе индуцированной цитокинами пролиферации образцы (например, фрагмент IL-2 или иммуноцитокин IL-2) и стандарт (например, IL-2 в свободном состоянии) разбавляют путем серийного разведения в планшете для анализа, заполненном культуральной средой, индикаторными клетками (например, CTLL-2 или PBMC, стимулированными антителом к CD3) промывают и повторно суспендируют в культуральной среде, затем добавляют в каждую лунку. Клетки инкубируют в течение достаточного времени (например, 24 часа или дольше) при 37°C, 5% CO₂ во влажной камере. Затем в планшет можно добавить реагенты для тестирования жизнеспособности клеток (например, резазурин, реагенты для анализа МТТ) и проводить культивирование в течение достаточного периода, а затем измерять с помощью спектрофотометра. Значения EC50 (концентрация исследуемого образца, необходимая для проявления 50% максимального ответа) для клеточной пролиферации затем можно вычислить с помощью анализа нелинейной регрессии кривых зависимости эффекта от дозы. Количество клеток также можно подсчитать под микроскопом и сравнить с количеством при обработке стандартом или контролем. В качестве другого примера, в анализе продуцирования цитокинов, индуцированного цитокинами, образцы (например, фрагмент IL-12 или IL-23, или иммуноцитокин IL-12 или IL-23) и стандарт (например, IL-12 или IL-23 в свободном состоянии) разводят путем серийного разведения в планшете для анализа, заполненном культуральной средой, индикаторные клетки (например, спленоциты, активированные CD4+ Т-клетки или активированные CD8+ Т-клетки) промывают и ресуспендируют в культуральной среде, а затем добавляют в каждую лунку. Клетки культивируют в течение достаточного времени (например, 24-48 часов) при 37°С, 5% СО₂ во влажной камере, затем надосадочные жидкости собирают для определения экспрессии цитокинов с помощью ELISA, следуя протоколу ELISA для интересующего целевого цитокина (например, IFN-γ). В качестве другого примера, в анализе индуцированной цитокинами экспрессии маркера клеточной поверхности образцы (например, фрагмент IFN-γ или иммуноцитокин IFN-γ) и стандарт (например, IFN-γ в свободном состоянии) разводят путем серийного разведения в планшете для анализа, заполненном культуральной средой, индикаторными клеткми (например, клетками HEK-Blue™ IFN-γ), промывают и повторно суспендируют в культуральной среде, затем вносят в каждую лунку. Клетки культивируют в течение достаточного времени (например, 24-48 часов) при 37°С, 5% СО₂ во влажной камере, затем экспрессию биомаркера (например, PD-L1) на клеточной поверхности можно обнаружить (например, с использованием человекого антитела к PD-L1, конъюгированного с APC) и измерять с помощью ELISA или FACS. Иллюстративные способы см. также в примерах 1, 5 и 11.

[244] Биоактивность фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе, также может быть отражена в экспериментах in vivo или ex vivo, например, путем измерения пролиферации индикаторных клеток (например, пролиферации CD8+ клеток, NK-клеток или Treg после введения частей IL-2 или иммуноцитокинов IL-2); путем измерения индукции или ингибирования секреции цитокинов; путем измерения уменьшения объема опухоли у мышей с ксенотрансплантатом опухоли после инъекции фрагментов тестируемых цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе; или путем измерения аутоиммунного балла.

[245] Исследование биологической активности фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе, также можно проводить с помощью анализов сигнальной системы клетки. В продаже можно приобрести различные наборы для анализа сигнальной системы клетки, например, для обнаружения аналитов, образующихся во время ферментативных реакций, участвующих в передаче сигналов, таких как АДФ, АМФ, УДФ, ВВП и факторы роста, или анализов фосфатазы для количественного определения как общего белка, так и фосфорилированных форм сигнальных белков. Например, после культивирования клеток с фрагментами цитокинов или иммуноцитокинами, описанными в данном документе, для определения активности конкретной киназы клеточный лизат подвергают воздействию известного субстрата для фермента в присутствии радиоактивного фосфата. Продукты разделяют электрофорезом (с иммунопреципитацией или без нее), затем гель подвергают воздействию рентгеновской пленки, чтобы определить, включены ли в белки изотопы. В некоторых вариантах осуществления биоактивность фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе, на клетках измеряют с помощью иммуногистохимии для обнаружения сигнальных белков. Например, можно использовать антитела к самим сигнальным белкам или сигнальные белки в их активированном состоянии. Эти антитела имеют распознающие эпитопы, которые включают фосфатную или другую активирующую конформацию. В некоторых вариантах осуществления перемещение специфических сигнальных белков (например, ядерную транслокацию сигнальных молекул) можно отслеживать путем внедрения гена флуоресцентного белка, например, зеленого флуоресцентного белка (GFP), в генетические векторы, кодирующие исследуемый белок. В некоторых вариантах осуществления биоактивность фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе, направленную на клетки исследуют с помощью вестерн-блоттинга. Например, все тирозин-фосфорилированные белки (или другие фосфорилированные аминокислоты, например, серин или треонин) можно обнаружить с помощью антитела к фосфотирозина (или антител к другим фосфорилированным аминокислотам) на вестерн-блоте клеточных лизатов, полученных после стимуляции во временной последовательности. В некоторых вариантах осуществления биоактивность фрагментов цитокинов или иммуноцитокинов, описанных в данном документе, направленную на клетки, можно измерять с помощью иммунопреципитации. Например, первичные антитела к определенному сигнальному белку или ко всем тирозин-фосфорилированным белкам перекрестно связаны с микрогранулами. Клетки после инкубирования с фрагментами цитокинов или иммуноцитокинами, описанными в данном документе, подвергают лизису в буфере, содержащем ингибиторы протеазы, а затем инкубируют с микрогранулами, покрытыми антителами. Белки разделяют с помощью электрофореза с SDS, а затем белки идентифицируют с использованием процедур, описанных для вестерн-блоттинга. В некоторых вариантах осуществления также можно использовать связывание глутатион-S-трансферазы (GST) или иммунопреципитацию, с помощью которой определяют прямые взаимодействия белок-белок (например, сигнальный белок). Также можно использовать анализы сигнальной трансдукции на основе клеток. Вкратце, репортерная клеточная линия (например, HEK-Blue™), стабильно экспрессирующая соответствующий рецептор фрагмента исследуемого цитокина или иммуноцитокина - соответствующие сигнальные факторы цитокинового сигнального пути (например, STAT, JAK), а репортер, индуцируемый цитокиновым сигнальным путем (например, флуоресцентный белок или секретируемую эмбриональную щелочную фосфатазу) можно культивировать в присутствии фрагмента тестируемого цитокина или иммуноцитокина при 37°C в CO₂ камере в течение достаточного времени (например, 24-48 часов), затем репортер можно регистрировать, например, с помощью микроскопии или FACS с участием флуоресцентного белка, или путем выявления секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы в среде для культивирования клеток с использованием колориметрического ферментативного анализа активности щелочной фосфатазы (например, QUANTI-Blue™). Иллюстративные способы см. также в примерах 1, 4, 7, 9, 10 и 12.

[246] Используя IL-2 в качестве примера, передачу сигналов STAT5 и ERK1/2 можно измерить, чтобы отразить биологическую активность фрагмента IL-2 или иммуноцитокина, например, путем измерения фосфорилирования STAT5 и ERK1/2 с использованием любого подходящего метода, известного в данной области. Например, фосфорилирование STAT5 и ERK1/2 можно измерить с использованием антител, специфичных к фосфорилированной версии этих молекул, в сочетании с анализом проточной цитометрией. Например, свежевыделенные РВМС инкубируют при 37°C с IL-2 или его вариантом, или иммуноцитокином IL-2. После культивирования клетки немедленно фиксируют (например, с помощью буфера CytoFix) для сохранения статуса фосфорилирования и пермеабилизируют (например, с помощью буфера PhosFlow Perm III). Клетки окрашивают меченными флуорофором антителами к фосфорилированному STAT5 или ERK1/2 и анализируют с помощью проточной цитометрии. Альтернативно, исследуемые образцы (например, фрагменты цитокинов IL-2 или иммуноцитокины IL-2, описанные в данном документе) можно вводить путем инъекции внутрибрюшинно мышам, затем выделять все спленоциты, немедленно фиксировать (например, буфером PhosphoFlow™ Lyse/Fix), промывать с помощью PBS, охлажденного льдом, окрашивть с использованием антител к CD4 и CD25, а затем пермеабилизировать (например, PhosFlow Perm BuFFer III). Затем клетки промывали ледяным буфером FACS, окрашивали антителом к FoxP3, промывали ледяным буфером FACS и окрашивали антителом к фосфо-STAT5, меченным флуорофором, при комнатной температуре. Клетки промывают буфером FACS, затем данные можно получить на цитометре FACS и проанализировать. Передачу сигналов PI 3-киназы можно измерять с использованием любого подходящего метода, известного в данной области техники, который также отражает биоактивность IL-2. Например, передачу сигналов PI 3-киназы можно измерить с использованием антител, специфичных к рибосомному белку фосфо-S6, в сочетании с анализом проточной цитометрией.

[247] В некоторых вариантах осуществления цитокиновые фрагменты или иммуноцитокины, описанные в данном документе, способны активировать иммунную клетку, например, индуцировать исследуемым цитокином (например, фрагментом IL-2 или иммуноцитокином IL-2, описанным в данном документе) пролиферацию, дифференцировку и/или активациу зависимой иммунной клетки (например, РВМС, NK-клетку, CD8+ Т-клетку, клетку Th17), секрецию цитокинов, активировать передачу сигналов (например, индуцировать фосфорилирование STAT5, фосфорилирование ERK1/2 или стимулировать передачу сигналов PI-3-киназы) и/или индуцировать иммунные клетки с целью уничтожения опухолевых клеток или инфицированных клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения фрагменты цитокинов или иммуноцитокины, описанные в данном документе, способны подавлять иммунную клетку, например, подавлять продуцирование цитокинов (например, провоспалительных цитокинов), презентацию антигена или экспрессию молекул MHC из иммунной клетки, или подавлять или снижать сигнальную трансдукцию. В некоторых вариантах осуществления иммунная клетка выбрана из группы, состоящей из моноцита, дендритной клетки, макрофага, В-клетки, Т-клетки-киллера (Т_с, цитотоксического Т-лимфоцита или ЦТЛ), Т-хелперной клетки (Т_h), регуляторных Т-клеток (Treg), γ Т-клетки, естественных Т-клеток- киллеров (NKT) и естественных клеток-киллеров (NK).

[248] В некоторых вариантах осуществления активность в отношении активации/подавления иммунной клетки вариантом цитокина в свободном состоянии такая же или примерно такая же (например, с разницей примерно в ±20%), что и активность соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления вариант цитокина содержит мутацию или модификацию (например, посттрансляционную модификацию), которая снижает его активность в отношении активации/подавления иммунной клетки по сравнению с цитокином дикого типа (например, она составляет не более чем примерно 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9% 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1% или 0% от биологической активности цитокина дикого типа) в свободном состоянии или в отсутствие связывания антигена-мишени и антитела описанного в данном документе иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления, при наличии связывания антиген-мишени и антитела иммуноцитокина, описанного в данном документе, активность варианта цитокина в отношении активации/подавления иммунной клетки составляет не менее примерно 1% (например, не менее примерно 2%, 3 %, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190% или 200%) от активности соответствующего цитокина дикого типа.

Антигенсвязывающий белок, антигенсвязывающий полипептид, антитело и антигенсвязывающий фрагмент

[249] «Исходный» антигенсвязывающий белок, описанный в данном документе, представляет собой антигенсвязывающий белок (например, антитело, фрагмент антитела или составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), который может специфично распознавать антиген-мишень и служит основой для конструирования иммуноцитокинов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, исходный антигенсвязывающий белок) содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv, Fab, VH или VL), необязательный линкер (такой как любые пептидные линкеры, описанные в данном документе), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, исходный антигенсвязывающий белок) содержит (например, практически состоит из или состоит из) гомодимерных антигенсвязывающих полипептидов, то есть двух идентичных антигенсвязывающих полипептидов. Например, в некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок содержит (например, практически состоит из или состоит из) двух антигенсвязывающих полипептидов, каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд (такой как PD-L2) или его часть, рецептор (например, PD-1) или его часть, VHH, scFv, VH или VL), необязательный линкер, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, исходный антигенсвязывающий белок) содержит (например, практически состоит из или состоит из) гетеродимерных антигенсвязывающих полипептидов, т.е. двух антигенсвязывающих полипептидов, отличающихся одним или несколькими антигенсвязывающими фрагментами (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv, VH или VL), необязательным линкером, шарнирным участком и субъединицей Fc-домена или ее частью. Например, в некоторых вариантах осуществления два антигенсвязывающих полипептида содержат разные антигенсвязывающие фрагменты (например, связываются с одним и тем же эпитопом-мишенью или с разными эпитопами-мишенями). В некоторых вариантах осуществления два антигенсвязывающих полипептида содержат разных шарнирных участка и/или разные субъединицы Fc-домена или их части, например, для гетеродимерного спаривания. Например, в некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий полипептид содержит шарнирный участок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 41, а парный антигенсвязывающий полипептид содержит шарнирный участок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 42. В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий полипептид содержит шарнирный участок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 51, а пареный антигенсвязывающий полипептид содержит шарнирный участок, содержащий последовательность SEQ ID NO: 52. В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий полипептид содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а пареный антигенсвязывающий полипептид содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) содержит два или более антигенсвязывающих фрагмента (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv, Fab, VH или VL). В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий полипептид содержит два или более антигенсвязывающих фрагмента (например, два или более лиганда и/или рецептора, составленных последовательно). В некоторых вариантах осуществления используют два или более одинаковых антигенсвязывающих фрагмента. В некоторых вариантах осуществления используют два или более разных антигенсвязывающих фрагмента, например, один представляет собой Fab, а другой представляет собой scFv; один - лиганд, а другой - рецептор. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или два или более антигенсвязывающих фрагмента специфично распознают два или более эпитопа-мишени (на одном и том же антигене-мишени или на разных антигенах-мишенях). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок или два или более антигенсвязывающих фрагмента специфично распознают один эпитоп-мишень. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок, антигенсвязывающий полипептид или антигенсвязывающий домен являются моноспецифичными и поливалентными (например, двухвалентными). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок, антигенсвязывающий полипептид или антигенсвязывающий домен являются мультиспецифичными (например, биспецифичными) и поливалентными (например, двухвалентными). В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок или антигенсвязывающий домен являются моноспецифичными и моновалентными, т.е. цитокиновый фрагмент расположен в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, Fab, scFv, VHH, лигандом или рецептором) и одной субъединицей Fc-домена (или ее частью), а другая субъединица Fc-домена (или ее часть) не составлена с другим антигенсвязывающим фрагментом; или цитокиновый фрагмент расположен в шарнирном участке между одним антигенсвязывающим фрагментом (например, Fab, scFv, VHH, лигандом или рецептором) и мономерной субъединицей Fc (или ее частью).

[250] Следует понимать, что для настоящего изобретения ссылка на «антигенсвязывающий белок», «составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc», «составной белок лиганд-шарнир-Fc» или «составной белок рецептор-шарнир-Fc» включает: i) каркас антигенсвязывающего белка (например, антитело, такое как полноразмерное антитело), каркас составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc или каркас составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc (см., например, фигуры 2А-4С светло-серые участки); или ii) исходный антигенсвязывающий белок, исходный составной белок исходный антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc или составной белок исходный лиганд/рецептор-шарнир-Fc, в шарнирном участке которого находится цитокиновый фрагмент (см., например, фигуры 2А-4С). Также следует понимать, что в настоящем изобретении ссылка на «составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc», «составной полипептид лиганд-шарнир-Fc» или «составной полипептид рецептор-шарнир-Fc» включает: i) каркас составного полипептида антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc (например, тяжелая цепь антитела) или каркас составного полипептида лиганд/рецептор-шарнир-Fc (см., например, светло-серые сегменты Fc-содержащей полипептидной цепи на фигурах 2A-4C), или ii) составной полипептид исходный антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc или составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc, в шарнирном участке которых находится цитокиновый фрагмент (см., например, полипептид, содержащий цепь цитокин-Fc на фигурах 2А-4С).

[251] В некоторых вариантах осуществления «исходный» антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок антигенсвязывающий фрагмент-необязательный линкер-шарнир-Fc, содержащий (например, состоящий по существу из или состоящий из) двух полипептидов антигенсвязывающий фрагмент-необязательный линкер-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления «исходный» антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок лиганд или часть лиганда-необязательный линкер-шарнир-Fc, содержащий (например, состоящий по существу из или состоящий из) двух полипептидов лиганд или часть лиганда-необязательный линкер-шарнир-Fc (см. фигуры 4А-4С, светло-серые сегменты). В некоторых вариантах осуществления «исходный» антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок рецептор или часть рецептора-необязательный линкер-шарнир-Fc, содержащий (например, состоящий по существу из или состоящий из) двух полипептидов рецептор или часть рецептора-необязательный линкер-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления лиганд или его рецепторная часть представляет собой внеклеточный домен лиганда или рецептора. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок представляет собой составной белок внеклеточный домен PD-L2-необязательный линкер-шарнир-Fc. Один или несколько цитокиновых фрагментов (или цитокиновых субъединиц) расположены в шарнирном участке одного или обоих полипептидов исходный антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc (см., например, темно-серые овалы или овалы с узорным рисунком на фигурах 4А-4С). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент может представлять собой любой лиганд или рецептор (или его часть, например, внеклеточный домен), известный в данной области, или полученный из любых подходящих лигандов или рецепторов, при условии, что связывание цитокинового фрагмента с его цитокиновым рецептором снижается в отсутствие связывания антигена-мишени с антигенсвязывающим(-ими) фрагментом(-ами), например, в отсутствие связывания антигена-мишени (например, соответствующего рецептора или лиганда), причем снижение активности (сродства связывания с цитокиновым рецептором и/или биологической активности) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, должно составлять не более примерно 70% от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. Например, лиганд или рецептор можно выбирать из любого лиганда или рецептора в приведенном ниже подразделе «Лиганд или рецептор клеточной поверхности».

[252] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело или его антигенсвязывающие фрагменты (например, фрагменты антител, такие как Fab, scFv, VHH и т. д.). «Исходное» антитело или антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном документе, представляют собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые служили каркасом для конструирования иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело иммуноцитокина, описанное в данном документе, представляет собой полноразмерное антитело. См., например, заштрихованные светло-серые сегменты на фигурах 1А-2D. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело иммуноцитокина, описанное в данном документе, представляет собой антигенсвязывающий фрагмент. См., например, светло-серые сегменты на фигурах 3А-3С. Например, в некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит два scFv, каждый из которых присоединен к N-концу субъединицы Fc-домена через шарнир или его часть (см. светло-серые сегменты на фигуре 3A). В некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит два scFv, каждый из которых присоединен к N-концу субъединицы части Fc-домена (например, CH2) через шарнир или его часть. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит два Fab, каждый из которых присоединен к N-концу субъединицы части Fc-домена (например, CH2) через шарнир или его часть. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит один scFv, который присоединен к N-концу одной субъединицы Fc-домена через шарнир или его часть, и один Fab, который присоединен к N-концу другой субъединицы Fc-домена через шарнир или его часть (см. фигуры 3B-3C светло-серые сегменты). В некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит один scFv, который присоединен к N-концу одной субъединицы части Fc-домена (например, CH2) через шарнир или его часть, и один Fab, который присоединен к N-концу другой субъединицы части Fc-домена (например, CH2) через шарнир или его часть. В некоторых вариантах осуществления исходное антитело содержит один VHH, который присоединен к N-концу одной субъединицы Fc-домена или его части через шарнир или его часть, и второй VHH, который присоединен к N-концу другой субъединицы Fc-домена или его части через шарнир или его часть (см. фигуры 4A-4C светло-серые сегменты, следует заменить «лиганд» или «рецептор» на VHH). Один или несколько цитокиновых фрагментов (или цитокиновых субъединиц) расположены в шарнирном участке любого исходного антитела (например, полноразмерного антитела) или антигенсвязывающего фрагмента (см., например, темно-серые овалы или овалы с узорным рисунком на фигурах 2А-4С).

[253] Антигенсвязывающий фрагмент может быть любого вида, известного в данной области, или полученный из любых подходящих антител, при условии, что связывание цитокинового фрагмента с его цитокиновым рецептором снижается в отсутствие связывания антигена-мишени с антигенсвязывающим(-ими) фрагментом(-ами), например, в отсутствие связывания антигена-мишени, причем снижение активности (сродства связывания с цитокиновым рецептором и/или биологической активности) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, должно составлять не более примерно 70% от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. Например, антигенсвязывающий фрагмент может быть выбран из scFv, VH, VL, scFv-scFv, Fv, Fab, Fab', (Fab')2, мини-антитела, диатела, варианта доменного антитела (dAb), однодоменного антитела (sdAb), такого как антитело верблюда (VHH) или V_НАР, варианта домена фибронектина 3, варианта анкиринового повтора и других антиген-специфичных связывающих доменов, полученных из других белковых основ. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой scFv. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент сформирован из VH первой полипептидной цепи и из VL второй полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент является человеческим. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент является гуманизированным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент является химерным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент получают из моноклонального антитела мыши, крысы, обезьяны или кролика и т.д.

[254] В некоторых вариантах осуществления два или более антигенсвязывающих фрагмента соединены последовательно через необязательный(е) линкер(ы). Например, в некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит, от N' к C': Fab1 - необязательный линкер1 - Fab2 - необязательный линкер2 - (необязательный шарнир или его часть - цитокиновый фрагмент - необязательный шарнир или его часть) - субъединицу Fc. Например, CH1 или CL из Fab1 связаны с VH или VL в Fab2 через необязательный линкер 1. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит, от N' к C': scFv1 (или sdAb1) - необязательный линкер 1 - scFv2 (или sdAb2) - необязательный линкер 2 - (необязательный шарнир или его часть - цитокиновый фрагмент - необязательный шарнир или его часть) - субъединицу Fc. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит, от N' до C': лиганд1 - необязательный линкер1 - лиганд2 - необязательный линкер 2 - (необязательный шарнир или его часть - цитокиновый фрагмент - необязательный шарнир или его часть) - субъединицу Fc. Цитокиновый фрагмент в скобках может отсутствовать в другой парной цепи иммуноцитокина. Например, иммуноцитокин может содержать первую полипептидную цепь, включающую, от N' до C': scFv1 (или sdAb1) - необязательный линкер1 - scFv2 (или sdAb2) - необязательный линкер2 - цитокиновый фрагмент - шарнир или его часть - субъединица1 Fc; и вторую полипептидную цепь, от N' до C': scFv3 (или sdAb3) - необязательный линкер3 - scFv4 (или sdAb4) - необязательный линкер4 - шарнир или его часть - субъединицу2 Fc.

[255] Сродство связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела или составного белка лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv, Fab, VHH, лиганда или рецептора) и его целевого антигена можно определить экспериментально с помощью любых подходящих анализов связывания антител/антигенов или других анализов связывания белков (например, связывания лиганд-рецептор), известных в данной области техники, например, вестерн-блоттинга, ELISA, электрохемилюминесценции MSD, MIA на основе микросфер, RIA, SPR, ECL, IRMA, EIA, анализа Biacore, анализа октетов, сканирования пептидов, FACS и т.д. Также см. приведенный выше подраздел «сродство связывания» для иллюстративных способов. В некоторых вариантах осуществления Kd связывания между антителом или антигенсвязывающим фрагментом и его антигеном-мишенью имеет примерно любое значение из ≤ 10^-5 М, ≤ 10^-6 М, ≤ 10^-7 М, ≤ 10^-8 М, ≤ 10^-9 М, ≤ 10^-10 М, ≤ 10^-11 М или ≤ 10^-12 М.

[256] Варианты аминокислотной последовательности антигенсвязывающего белка (например, составного белка антитело или лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента можно получать путем введения соответствующих модификаций в последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий белок или антигенсвязывающий фрагмент, или с помощью пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции, и/или вставки, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Можно использовать любую комбинацию делеций, вставок и замен для получения конечной конструкции при условии, что конечная конструкция обладает желаемыми свойствами, например, антигенсвязывающим свойством.

[257] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, составной белок антитело или лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающий фрагмент (например, scFv, Fab, VHH, лиганд или рецептор) содержит одну или несколько аминокислотных замен. Сайты, представляющие интерес для заместительного мутагенеза, включают HVR (или CDR) и FR антител или антигенсвязывающих фрагментов. Консервативные замены показаны в Таблице В под заголовком «Предпочтительные замены». Более существенные изменения представлены в Таблице В под заголовком «примеры замен», а также дополнительно описаны ниже в разделе, касающемся классов боковых цепей аминокислот. Аминокислотные замены можно вводить в интересующий антигенсвязывающий фрагмент, а полученные продукты подвергать скринингу на желаемую активность, например, сохраненное/улучшенное связывания антигена, сниженную иммуногенность.

Таблица B. Аминокислотные замены
Исходный остаток	Примеры замен	Предпочтительные замены
Ala (A)	Val; Leu; Ile	Val
Arg (R)	Lys; Gln; Asn	Lys
Asn (N)	Gln; His; Asp, Lys; Arg	Gln
Asp (D)	Glu; Asn	Glu
Cys (C)	Ser; Ala	Ser
Gln (Q)	Asn; Glu	Asn
Glu (E)	Asp; Gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	Asn; Gln; Lys; Arg	Arg
Ile (I)	Leu; Val; Met; Ala; Phe; норлейцин	Leu
Leu (L)	норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe	Ile
Lys (K)	Arg; Gln; Asn	Arg
Met (M)	Leu; Phe; Ile	Leu
Phe (F)	Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	Thr	Thr
Thr (T)	Val; Ser	Ser
Trp (W)	Tyr; Phe	Tyr
Tyr (Y)	Trp; Phe; Thr; Ser	Phe
Val (V)	Ile; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин	Leu

[258] Аминокислоты можно сгруппировать на основании сходства свойств, присущих боковым цепям: (1) гидрофобные: Норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) кислотные: Asp, Glu; (4) основные: His, Lys, Arg; (5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro; и (6) ароматические: Trp, Tyr, Phe. Неконсервативные замены повлекут за собой замену аминокислоты одного из этих классов на аминокислоту из другого класса.

[259] Один тип варианта замены включает замену одного или нескольких остатков HVR исходного антитела. Как правило, у полученных вариантов, отобранных для дальнейшего исследования, будут изменены (например, улучшены) определенные биологические свойства (например, повышено сродство, снижена иммуногенность) по сравнению с исходным антителом и/или у них определенные биологические свойства исходного антитела будут сохранены. Иллюстративный вариант замены представляет собой антитело с созревшим сродством, которое можно легко получить, например, с использованием методов созревания сродства на основе фагового дисплея, таких как описаны в данном документе. Вкратце, один или несколько остатков HVR подвергают мутации, а варианты антител экспонируют на фаге и подвергают скринингу на конкретную биологическую активность (например, сродство связывания).

[260] В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции могут происходить в одном или нескольких HVR при условии, что такие изменения существенно не снижают способность антитела или антигенсвязывающего домена связывать антиген. Например, в HVR можно делать консервативные изменения (например, консервативные замены, предусмотренные в данном документе), которые существенно не снижают сродство связывания. Такие изменения могут находиться за пределами «горячих точек» HVR или CDR.

[261] Изменения (например, замены) можно сделать в HVR, например, для улучшения сродства антител. Такие изменения можно сделать в «горячих точках» HVR, т.е. в остатках, кодируемых кодонами, которые подвергают мутациям с высокой частотой в процессе соматического созревания (см., например, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), и/или SDR (a-CDR), при этом полученный вариант VH или VL тестируют на сродство связывания. Был описан процесс созревания сродства путем создания и повторного отбора из вторичных библиотек, например, в Hoogenboom и др. в Chowdhury, Methods Mol. Biol. 178:1-37 (O'Brien и др., ed., Human Press, Totowa, Нью Джерси, (2001)). В некоторых вариантах, относящихся к созреванию сродства, разнообразие вводят в вариабельные гены, выбранные для созревания, любым из множества способов (например, ПЦР с ошибкам, перестановко цепей или олигонуклеотид-направленным мутагенезом). Затем создают вторичную библиотеку. Затем библиотеку подвергают скринингу для выявления любых вариантов антител с желаемом сродством. Другой метод введения разнообразия включает подходы, направленные на HVR, в которых несколько рандомизируют остатков HVR (например, 4-6 остатков за раз). Остатки HVR, участвующие в связывании антигена, можно направленно идентифицировать, например, используя аланин-сканирующий мутагенез или моделирование. В частности, в качестве мишени часто используют CDR-H3 и CDR-L3.

[262] Удобный метод идентификации остатков или областей антитела, которые можно использовать в качестве мишеней для мутагенеза, называется «аланин-сканирующий мутагенез», как описано Cunningham и Wells (1989). Science, 244:1081-1085. В этом методе остаток или группу целевых остатков (например, заряженные остатки, такие как Arg, Asp, His, Lys и Glu) идентифицируют и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином), чтобы определить, влияет ли это на взаимодействие антитела с антигеном. Дополнительные замены можно вводить в положения аминокислот, которые проявляют функциональную чувствительность к исходным заменам. Альтернативно или дополнительно, для выявления точек контакта между антителом и антигеном кристаллическая структура комплекса антиген-антитело. Такие контактные остатки и соседние остатки можно выбирать или исключать в качестве кандидатов на замену. Варианты можно проверять с целью выявить у них желаемые свойства.

Антигены-мишени

[263] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, содержит антигенсвязывающий белок, специфично распознающий антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или Fab), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. Используемый здесь термин «антиген-мишень» или «эпитоп-мишень» может относиться к любому белку или полипептиду, который может быть специфично распознан антигенсвязывающим белком, антигенсвязывающим полипептидом или антигенсвязывающим фрагментом, описанным в данном документе, такому как опухолевый антиген или эпитоп, антиген или эпитоп патогена, антиген или эпитоп, ассоциированный с аутоиммунным заболеванием, аллергей и/или отторжением трансплантата, лиганд или рецептор или его часть (например, внеклеточный домен лиганда/рецептора), антиген или эпитоп поверхности иммунной клетки и т. д. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является моновалентным и моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является поливалентным (например, двухвалентным) и моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок является мультивалентным (например, двухвалентным) и мультиспецифичным (например, биспецифичным). Валентность и специфичность антигенсвязывающего белка в данном документе относится к валентности и специфичности антигенсвязывающего фрагмента(ов) (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv или Fab) иммуноцитокина, не включая валентность или специфичность цитокина или его варианта.

[264] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд (например, внеклеточный домен CD155, PD-L1 или PD-L2), который специфично распознает рецептор клеточной поверхности (например, PD-1). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рецептор (например, внеклеточный домен TIGIT или PD-1), который специфично распознает лиганд (например, CD155, PD-L1 или PD-L2). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит два или более (например, 2) антигенсвязывающих полипептида, каждый из которых содержит, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий полипептид содержит, от N' к C': два или более антигенсвязывающих фрагмента (например, лиганд или рецептор), например, составленные последовательно, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть. Два или более антигенсвязывающих фрагмента могут быть одинаковыми или разными, могут специфично распознавать один и тот же эпитоп-мишень или разные эпитопы-мишени (на одном и том же антигене-мишени или на разных антигенах-мишенях). Например, в некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий фрагмент получен из первого лиганда (например, внеклеточного домена первого лиганда), который специфично распознает первый рецептор или его эпитоп (например, внеклеточный домен первого рецептора), другой антигенсвязывающий фрагмент получен от второго рецептора (например, внеклеточного домена второго рецептора), который специфично распознает второй лиганд или его эпитоп (например, внеклеточный домен второго лиганда). В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий фрагмент получен из первого лиганда (например, внеклеточного домена первого лиганда), который специфично распознает первый рецептор или его эпитоп (например, внеклеточный домен первого рецептора), другой антигенсвязывающий фрагмент получен от второго лиганда (например, внеклеточного домена второго лиганда), который специфично распознает второй рецептор или его эпитоп (например, внеклеточный домен второго рецептора). Первый и второй рецепторы (или их эпитопы) могут быть одинаковыми или разными. Первый и второй лиганды (или их эпитопы) могут быть одинаковыми или разными. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие фрагменты (лиганд или рецептор) специфично распознают один и тот же эпитоп антигена-мишени (соответствующего рецептора или лиганда, соответственно), т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие фрагменты (лиганд или рецептор) специфично распознают разные эпитопы одного и того же антигена-мишени (соответствующего рецептора или лиганда, соответственно), т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и биспецифичным. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие фрагменты (лиганд или рецептор) специфично распознают разные антигены-мишени (например, разные эпитопы разных антигенов-мишеней, такие как соответствующий рецептор или лиганд, соответственно), т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и биспецифичным.

[265] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой антитело или его часть. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, содержит антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее антиген-мишень. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит два или более антигенсвязывающих фрагмента (например, VHH, scFv или Fab). Два антигенсвязывающих домена (Fab) полноразмерного антитела или два или более антигенсвязывающих фрагмента (например, VHH, scFv или Fab) антитела могут быть одинаковыми или разными, могут специфично распознавать один и тот же эпитоп-мишень или разные эпитопы-мишени (на одном и том же антигене-мишени или на разных антигенах-мишенях). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, содержит один или несколько антигенсвязывающих доменов (например, scFv или Fab), которые специфично распознают один или несколько эпитопов-мишеней (могут быть одинаковыми или разными, могут находиться на одном и том же антигене-мишени или на разных антигенах-мишенях). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит первый антигенсвязывающий домен (например, VHH, scFv или Fab), специфично распознающий первый эпитоп-мишень, и второй антигенсвязывающий домен (например, VHH, scFv или Fab), специфично распознающий второй эпитоп-мишень. В некоторых вариантах осуществления первый и второй эпитопы-мишени одинаковые. В некоторых вариантах осуществления первый и второй эпитопы-мишени отличаются (например, разные эпитопы на одном и том же антигене-мишени или разные эпитопы на разных антигенах-мишенях). В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие домены специфично распознают один и тот же эпитоп антигена-мишени, т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и моноспецифичным. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие домены специфично распознают разные эпитопы одного и того же антигена-мишени, т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и биспецифичным. В некоторых вариантах осуществления первый и второй антигенсвязывающие домены специфично распознают разные антигены-мишени (например, разные эпитопы разных антигенов-мишеней), т.е. иммуноцитокин является двухвалентным и биспецифичным. В некоторых вариантах осуществления первый антиген-мишень представляет собой антиген на поверхности иммунных клеток, а второй антиген-мишень представляет собой опухолевый антиген.

[266] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень представляет собой молекулу клеточной поверхности (например, внеклеточный домен рецептора/лиганда). В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень действует как маркер клеточной поверхности на клетке-мишени (например, опухолевой клетке, иммунной клетке), которая ассоциируется с особым болезненным состоянием. Антигены-мишени (например, опухолевой антиген, внеклеточный домен рецептора/лиганда), специфично распознаваемый антигенсвязывающим доменом, могут представлять собой антигены на одной больной клетке или антигены, которые экспрессируются на разных клетках, каждая из которых способствует заболеванию. Антигены-мишени, специфично распознаваемые антигенсвязывающим доменом(ами), могут быть прямо или косвенно вовлечены в заболевания.

Опухолевой антиген

[267] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой опухолевый антиген или эпитоп.

[268] Опухолевые антигены представляют собой белки, продуцируемые опухолевыми клетками, которые могут вызывать иммунный ответ, особенно иммунный ответ, опосредованный Т-клетками. Выбор целевого антигена данного изобретения будет зависеть от конкретного типа рака, подлежащего лечению. Примеры опухолевых антигенов включают, например, антиген, ассоциированный с глиомой, BCMA (антиген созревания В-клеток), карциноэмбриональный антиген (СЕА), β-хорионический гонадотропин человека, альфа-фетопротеин (АФП), лектин-реактивный АФП, тиреоглобулин, RAGE-1, MN-CAIX, человеческую теломеразную обратную транскриптазу, RU1, RU2 (AS), карбоксилэстеразу кишечника, мутаци. hsp70-2, M-CSF, простазу, простатспецифический антиген (PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, простеин, PSMA, HER2/neu, сурвивин и теломеразу, опухолевый антиген-1 карциномы предстательной железы (PCTA-1), MAGE, ELF2M, нейтрофильную эластазу, эфринB2, CD22, инсулиновый фактор роста (IGF)-I , IGF-II, рецептор IGF-I и мезотелин. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген содержит один или несколько антигенных раковых эпитопов, связанных со злокачественной опухолью. Злокачественные опухоли экспрессируют ряд белков, которые могут служить антигенами-мишенями для иммунной атаки. Эти молекулы включают, но не ограничиваются ими, тканеспецифические антигены, такие как MART-1, тирозиназа и gp100 при меланоме, а также простатическую кислую фосфатазу (PAP) и простатспецифический антиген (ПСА) при раке предстательной железы. Другие молекулы-мишени принадлежат к группе молекул, связанных с трансформацией, таких как онкоген HER2/Neu/ErbB-2. Еще одна группа антигенов-мишеней представляет собой онкофетальные антигены, такие как карциноэмбриональный антиген (СЕА). При В-клеточной лимфоме опухолеспецифический идиотипический иммуноглобулин представляет собой в сущности опухолеспецифический иммуноглобулиновый антиген, который уникален для каждой определенной опухоли. Антигены дифференцировки В-клеток, такие как CD19, CD20 и CD37, являются другими кандидатами на роль антигенов-мишеней при В-клеточной лимфоме.

[269] В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген представляет собой опухолеспецифический антиген (TSA) или опухолеассоциированный антиген (TAA). TSA присущ только опухолевым клеткам и не встречается в других клетках организма. ТАА характерен не только для опухолевых клеток, напротив - он также экспрессируется в нормальной клетке в условиях, при которых не индуцируется состояние иммунологической толерантности к антигену. Экспрессия антигена на опухоли может происходить в условиях, позволяющих иммунной системе реагировать на антиген. ТАА могут быть антигенами, которые экспрессируются на нормальных клетках во время внутриутробного развития, когда иммунная система не созрела и неспособна реагировать, или они могут быть антигенами, которые в норме присутствуют на очень низких уровнях в нормальных клетках, но которые экспрессируются на гораздо более высоких уровнях на опухолевых клетках. Неограничивающие примеры антигенов TSA или TAA включают следующее: антигены дифференцировки, такие как MART-1/MelanA (MART-I), gp 100 (Pmel 17), тирозиназу, TRP-1, TRP-2 и опухолеспецифические мультилинейные антигены, такие как MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15; сверхэкспрессированные эмбриональные антигены, такие как СЕА; сверхэкспрессированные онкогены и мутированные гены-супрессоры опухолей, такие как p53, Ras, HER2/neu; уникальные опухолевые антигены, возникающие в результате хромосомных транслокаций; такие как BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR; и вирусные антигены, такие как антигены вируса Эпштейна-Барра EBVA и антигены вируса папилломы человека (HPV) E6 и E7. Другие крупные белковые антигены включают TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, RAGE, NY-ESO, pl85erbB2, pl80erbB-3, c-met, nm-23HI, ПСА, TAG-72, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, бета-катенин, CDK4, Mum-1, p 15, p 16, 43-9F, 5T4 (TPBG), 791Tgp72, альфа-фетопротеин, бета-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3\CA 27,29\BCAA, CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68\P1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733\EpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS 1, SDCCAG16, TA-90\Mac-2 связывающий белок\циклофилин С-ассоциированный белок, TAAL6, TAG72, TLP и TPS.

[270] В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из FIXa, FX, DLL3, DLL4, Ang-2, нектина-4, FOLRα, GPNMB, CD56 (NCAM), TACSTD2 (TROP-2), тканевого фактора, ENPP3, P-кадгерина, STEAP1, CEACAM5, Муцина 1 (сиалогликотопа CA6), гуанилатциклазы C (GCC), SLC44A4, LIV1 (ZIP6), NaPi2b, SLITRK6, SC-16, фибронектина, экстрадомена B (EDB), рецептора эндотелия ETB, ROBO4, коллагена IV, периостина, тенасцина c, CD74, CD98, мезотелина, TSHR, CD19, CD123, CD22, CD30, CD171, CS-1, CLL-1, CD33, EGFRvIII, GD2, GD3, BCMA, Tn Ag , специфического мембранного антигена простаты (PSMA), ROR1, FLT3, FAP, TAG72, CD38, CD44v6, CEA, EPCAM, B7H3, KIT, IL-13Ra2, рецептора интерлейкина-11 a (IL-11Ra), PSCA, PRSS21, VEGFR2 ( CD309), антигена Leu, CD24, бета-рецептора тромбоцитарного фактора роста (PDGFR-бета), SSEA-4, CD20, альфа-рецептора фолиевой кислоты, ERBB2 (HER2/neu), MUC1, рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), NCAM, Простазы, PAP, ELF2M, эфрина B2, рецептора IGF-I, CAIX, LMP2, gp100, bcr-abl, тирозиназы, EphA2, фукозила GM1, sLe, GM3, TGS5, HMWMAA, о-ацетил-GD2, бета-рецептора фолиевой кислоты, TEM1/CD248, TEM7R, CLDN6, CLDN18.2, GPRC5D, CXORF61, CD97, CD179a, ALK, полисиаловой кислоты, PLAC1, GloboH, NY -BR-1, UPK2, HAVCR1, ADRB3, PANX3, GPR20, LY6K, OR51E2, TARP, WT1, NY-ESO-1, LAGE-1a, MAGE-A1, легумаина, HPV E6,E7, MAGE A1, ETV6-AML, белка спермы 17, XAGE1, Tie 2, MAD-CT-1, MAD-CT-2, Fos-родственного антигена 1, p53, мутанта p53, простеина, сурвивина и теломеразы, PCTA-1/галектина 8, MelanA/MART1, Ras-мутанта, hTERT, точек разрыва транслокации саркомы, ML-IAP, ERG (составного гена TMPRSS2 ETS), NA17, PAX3, андрогенного рецептора, циклина B1, MYCN, RhoC, TRP-2, CYP1B1, BORIS, SART3, PAX5, OY-TES1, LCK, AKAP-4, SSX2, RAGE-1, теломеразной обратной транскриптазы человека, RU1, RU2, карбоксилэстеразы кишечника, мутации hsp70-2, CD79a, CD79b, CD72, LAIR1, FCAR, LILRA2, CD300LF, CLEC12A, BST2, EMR2, LY75, GPC3, FCRL5 и IGLL1. В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из BCMA, EphA2, HER2, GD2, глипикана-3, 5T4, 8H9, α_vβ₆ интегрина, B7-H3, B7-H6, CAIX, CA9, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD70 (TNFSF7), CD123, CD138, CD171, CEA, CSPG4, EGFR , EGFRvIII, EGP2, EGP40, EpCAM, ERBB3, ERBB4, ErbB3/4, FAP, FAR, FBP, фетального AchR, рецептора фолиевой кислоты a, GD2, GD3, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2, IL11Ra, IL13Ra2, KDR, антигена Leu, MCSP, мезотелина, Muc1, Muc16, NCAM, лигандов NKG2D, NY-ESO-1, PRAME, PSCA, PSC1, PSMA, ROR1, SURVIVIN, TAG72, TEM1, TEM8, VEGFR2, карциноэмбрионального антигена и HMW-MAA. См. также типичные опухолевые антигены, описанные в Shim H. (Biomolecules. 2020 Mar; 10(3): 360) и Diamantis N. и Banerji U. Br J Cancer. 2016; 114(4): 362-367, содержание которых полностью включено в настоящее описание ссылкой.

[271] В некоторых вариантах осуществления опухолевый антиген представляет собой HER2. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие HER2, получают из трастузумаба (например, Herceptin®), пертузумаба (например, Perjeta®), маргетуксимаба или 7C2. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие HER2, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все 6 CDR любого из трастузумаба, пертузумаба, маргетуксимаба или 7C2. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие HER2, содержат VH и/или VL трастузумаба, пертузумаба, маргетуксимаба или 7C2. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к HER2 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 188; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 189; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 190; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 191; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 192; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 150, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 151. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 152 или 153, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 154. В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело (т.е. содержащее две идентичные тяжелые цепи и две идентичные легкие цепи). В некоторых вариантах осуществления антитело к HER2 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

Антиген возбудителя заболевания

[272] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой антиген или эпитоп возбудителя заболевания, такого как грибковый, вирусный, бактериальный, протозойный или другой паразитарный антиген или эпитоп.

[273] В некоторых вариантах осуществления грибковый антиген относится к Aspergillus или Candida. Грибковые антигены, в отношении которых можно применять составы и способы данного изобретения, включают, но не ограничиваются ими, например, компоненты антигена грибов candida; антигены грибов aspergillus; антигены грибов histoplasma, такие как белок теплового шока 60 (HSP60) и другие компоненты антигена грибов histoplasma; криптококковые антигены, такие как капсульные полисахариды и другие компоненты криптококкового антигена; антигены грибов coccidioides, такие как антигены сферул и другие компоненты антигенов грибов coccidioides; и антигены грибкового дерматомикоза, такого как трихофитин и другие компоненты антигена грибов coccidioides.

[274] Бактериальные антигены, в отношении которых можно применять раскрытый в данном документе иммуноцитокин включают, но не ограничиваются ими, например, бактериальные антигены, такие как токсин коклюша, филаментозный гемагглютинин, пертактин, FIM2, FIM3, аденилатциклазу и другие компоненты бактериального антигена коклюша; дифтерийные бактериальные антигены, такие как дифтерийный токсин или анатоксин и другие компоненты дифтерийного бактериального антигена; столбнячные бактериальные антигены, такие как столбнячный токсин или анатоксин и другие компоненты столбнячного бактериального антигена; стрептококковые бактериальные антигены, такие как М-белки и другие компоненты стрептококковых бактериальных антигенов; бактериальные антигены грамотрицательных бацилл, такие как липополисахариды и другие компоненты антигенов грамотрицательных бактерий, антигены бактерий Mycobacterium tuberculosis, такие как миколовая кислота, белок теплового шока 65 (HSP65), главный секретируемый белок 30 кДа, антиген 85А и другие компоненты микобактериального антигена; компоненты антигена бактерий Helicobacter pylori; пневмококковые бактериальные антигены, такие как пневмолизин, пневмококковые капсулярные полисахариды и другие компоненты пневмококкового бактериального антигена; антигены бактерий haemophilus inFluenzae, такие как капсульные полисахариды и другие компоненты антигена бактерий haemophilus inFluenzae; бактериальные антигены сибирской язвы, такие как защитный антиген сибирской язвы и другие компоненты бактериального антигена сибирской язвы; риккетсиозные бактериальные антигены, такие как rompA и другой компонент антигена бактерий rickettsia. В описываемые в данном документе бактериальные антигены также включены любые другие бактериальные, микобактериальные, микоплазменные, риккетсиозные или хламидийные антигены. Также можно упомянуть неполные или цельные патогены: haemophilus inFluenzae; Plasmodium Falciparum; neisseria meningitidis; streptococcus pneumoniae; neisseria gonorrhoeae; salmonella serotype typhi; shigella; vibrio cholerae; Лихорадка денге; энцефалиты; Японский энцефалит; болезнь Лайма; Yersinia pestis; вирус Западного Нила; желтая лихорадка; туляремия; гепатит (вирусный; бактериальный); РСВ (респираторно-синцитиальный вирус); вирусы парагриппа человека HPIV 1 and HPIV 3; аденовирус; оспа; аллергии и онкологические заболевания.

[275] Примеры протозойных и других паразитарных антигенов включают, но не ограничиваются ими, например, антигены plasmodium Falciparum, такие как поверхностные антигены мерозоитов, поверхностные антигены спорозоитов, антигены циркумспорозоитов, поверхностные антигены гаметоцитов/гамет, гематостадийный антиген pF 155/RESA и другие компоненты плазмодиального антигена; антигены toxoplasma, такие как SAG-1, p30 и другие компоненты токсоплазменного антигена; антигены шистосом, такие как глутатион-S-трансфераза, парамиозин и другие компоненты антигена шистосом; leishmania major и другие антигены лейшманиоза, такие как gp63, липофосфогликан и связанный с ним белок и другие компоненты антигена лейшманиоза; и антигены trypanosoma cruzi, такие как антиген 75-77 кДа, антиген 56 кДа и другие компоненты трипаносомного антигена.

[276] В некоторых вариантах осуществления вирусный антиген принадлежит вирусу простого герпеса (ВПГ), респираторно-синцитиальному вирусу (РСВ), метапневмовирусу (hMPV), риновирусу, парагриппу (PIV), вирусу Эпштейна-Барр (EBV), цитомегаловирусу (CMV), вирусу JC (вирусу Джона Каннингема), вирусу BK, ВИЧ, Зика вирусу, коронавирусу человека, норовирусу, вирусу энцефалита или лихорадки Эбола. В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус Orthomyxoviridae, выбранный из группы, состоящей из вируса гриппа А, вируса гриппа В, вируса гриппа С и любого их подтипа или реассортантного вируса. В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус гриппа А или любой его подтип или реассортант, такой как вирус гриппа А подтипа H1N1 (H1N1) или вирус гриппа А подтипа H5N1 (H5N1). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус Coronaviridae, выбранный из группы, состоящей из альфа-коронавирусов 229E (HCoV-229E), коронавируса Нью-Хейвена NL63 (HCoV-NL63), бета-коронавирусов OC43 (HCoV-OC43), коронавируса HKU1 (HCoV-HKU1), коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV), коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV) и тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой SARS-CoV, MERS-CoV или SARS-CoV-2. В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус Filoviridae, выбранный из вируса Эбола (EBOV) и вируса Марбург (MARV). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой вирус Filoviridae, выбранный из группы, состоящей из Зика вируса (ZIKV), вируса Западного Нила (WNV), вируса денге (DENV) и вируса желтой лихорадки (YFV).

Антигены, участвующие в аутоиммунных заболеваниях, аллергии и отторжении трансплантата

[277] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой антиген или эпитоп, участвующий в аутоиммунных заболеваниях, аллергии и/или в отторжении трансплантата. Например, в настоящем изобретении можно использовать антиген, вовлеченный в любое одно или несколько из следующих аутоиммунных заболеваний или нарушений: диабет, сахарный диабет, артрит (включая ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, псориатический артрит), рассеянный склероз, миастению, системную красную волчанку, аутоиммунный тиреоидит, дерматит (включая атопический дерматит и экзематозный дерматит), псориаз, синдром Шегрена, в том числе сухой кератоконъюнктивит, вторичный по отношению к синдрому Шегрена, гнездную алопецию, аллергические реакции на укусы членистоногих, болезнь Крона, афтозную язву, ирит, конъюнктивит, кератоконъюнктивит, язвенный колит, астму, аллергическую астму, кожную красную волчанку, склеродермию, вагинит, проктит, лекарственную сыпь, реверсивные реакции лепры, узловатую лепрозную эритему, аутоиммунный увеит, аллергический энцефаломиелит, острую некротизирующую геморрагическую энцефалопатию, идиопатическую двустороннюю прогрессирующую нейросенсорную тугоухость, апластическую анемию, врожденную апластическую анемию, идиопатическую тромбоцитопению, полихондрит, гранулематоз Вегенера, хронический активный гепатит, синдром Стивенса-Джонсона, трофические язвы неясного происхождения, красный плоский лишай, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), офтальмопатию Грейвса, саркоидоз, первичный билиарный цирроз, задний увеит и интерстициальный фиброз легких. Примеры антигенов, участвующих в аутоиммунных заболеваниях, включают декарбоксилазу 65 глутаминовой кислоты (GAD 65), нативную ДНК, основной белок миелина, протеолипидный белок миелина, компоненты рецептора ацетилхолина, тиреоглобулин и рецептор тиреотропного гормона (ТТГ). Примеры антигенов, вовлеченных в аллергию, включают антигены пыльцы, такие как антигены пыльцы японского кедра, антигены пыльцы амброзии, антигены пыльцы райграса, антигены животного происхождения, такие как антигены пылевых клещей и кошачьи антигены, антигены гистосовместимости, пенициллин и другие лекарственные препараты. Примеры антигенов, участвующих в отторжении трансплантата, включают антигенные компоненты трансплантата, подлежащего трансплантации реципиенту трансплантата, такие как сердце, легкое, печень, поджелудочная железа, почка и компоненты нервного трансплантата. Антиген может быть измененным пептидным лигандом, пригодным для лечения аутоиммунного заболевания. В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень представляет собой CD3, CD4, CD123 или CD8.

Молекула контрольной точки иммунной системы

[278] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой молекулу контрольной точки иммунной системы. Контрольные точки иммунной системы являются регуляторами иммунной системы.

[279] В некоторых вариантах осуществления молекула контрольного точки иммунной системы представляет собой стимулирующую молекулу контрольной точки иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления стимулирующая молекула контрольной точки иммунной системы выбрана из группы, состоящей из CD27, CD28, OX40, ICOS, GITR, 4-1BB, CD27, CD40, CD3 и HVEM. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий домен или составной белок лиганд/рецептор-Fc), описанный в данном документе, представляет собой активатор стимулирующей молекулы контрольной точки иммунной системы, которая может стимулировать, активировать или усиливать интенсивность иммунного ответа, опосредованного стимулирующей молекулой контрольного точки иммунной системы. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном документе, можно получать из любого известного в данной области антитела, которое активирует стимулирующую молекулу контрольной точки иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд или рецептор стимулирующей молекулы контрольной точки иммунной системы, например, может активировать передачу сигналов, стимулирующих контрольную точку иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий домен или составной белок лиганд/рецептор-Fc), описываемый в данном документе, представляет собой антагонист стимулирующей молекулы контрольной точки иммунной системы, который может снижать или блокировать интенсивность иммунного ответа, опосредованного стимулирующей молекулой контрольной точки иммунной системы.

[280] В некоторых вариантах осуществления молекула контрольной точки иммунного ответа представляет собой ингибирующую молекулу контрольной точки иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления ингибирующая молекула контрольной точки иммунной системы выбрана из группы, состоящей из PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, HHLA2, CD47, CXCR4, CD160, CD73, BLTA, B7-H4, TIGIT и VISTA. В некоторых вариантах осуществления ингибирующая молекула контрольной точки иммунной системы представляет собой PD-1, PD-L2 или PD-L1. В некоторых вариантах осуществления ингибирующая молекула контрольной точки иммунной системы представляет собой CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления ингибирующая молекула контрольной точки иммунной системы представляет собой TIGIT. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий домен или составной белок лиганд/рецептор-Fc) представляет собой ингибитор контрольной точки иммунного ответа, который полностью или частично уменьшает, ингибирует или препятствует действию одной или нескольких ингибиторных молекул контрольных точек иммунного ответа. Антитело или антигенсвязывающий домен, описанные в данном документе, можно получать из любого известного в данной области антитела, которое служит ингибитором контрольной точки иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент представляет собой лиганд (например, CD155, PD-L2 или PD-L1) или рецептор ингибирующей молекулы контрольной точки иммунной системы (например, TIGIT или PD-1), например, может активировать или стимулировать передачу ингибирующих сигналов контрольных точек иммунной системы (например, передачу сигналов TIGIT или PD-1). В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, антитело, антигенсвязывающий домен или составной белок лиганд/рецептор-Fc), описываемый в данном документе, представляет собой агонист ингибирующей молекулы контрольной точки иммунной системы, которая может стимулировать, активировать или повышать интенсивность иммунного ответа, опосредованного ингибирующей молекулой контрольной точки иммунной системы.

[281] PD-1 (белок 1 запрограммированной гибели клеток) является частью семейства костимулирующих молекул B7/CD28, которые регулируют активацию и толерантность Т-клеток, и, таким образом, антагонистические антитела к PD-1 или составной белок лиганд PD-1-Fc могут быть полезны для преодоления толерантности. PD-1 был идентифицирован как рецептор для B7-4. B7-4 может ингибировать активацию иммунных клеток при связывании с ингибирующим рецептором на иммунной клетке. Вовлечение пути PD-1/PD-L1 приводит к ингибированию эффекторной функции Т-клеток, секреции и пролиферации цитокинов. (Turnis и др, OncoImmunology 1(7):1172-1174, 2012). Высокие уровни PD-1 связаны с истощенными или хронически стимулируемыми Т-клетками. Более того, повышенная экспрессия PD-1 коррелирует со снижением выживаемости у онкологических больных. Средства, способствующие понижающей регуляции PD-1, B7-4 и взаимодействию между B7-4 и ингибирующим сигналом PD-1 в иммунной клетке могут приводить к усилению иммунного ответа. Типичные антитела к PD-1 включают, но не ограничиваются ими, пембролизумаб (например, Keytruda®), цемиплимаб (Libtayo®) и ниволумаб (например, Opdivo®). В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие PD-1, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR пембролизумаба, цемиплимаба или ниволумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие PD-1, содержат VH и/или VL пембролизумаба, цемиплимаба или ниволумаба. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к PD-1 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 102, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 104 или 105, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

[282] PD-L1 (лиганд 1 запрограммированной гибели клеток) также известен как кластер дифференцировки 274 (CD274) или гомолог 1 B7 (B7-H1). PD-L1 служит лигандом для PD-1, играя важную роль в подавлении иммунной системы во время определенных событий, таких как беременность, аллотранплантаты тканей, аутоиммунные заболевания и другие болезненные состояния, такие как гепатит и рак. Образование комплекса рецептор PD-1/лиганд PD-L1 передает ингибирующий сигнал, который снижает пролиферацию CD8+ Т-клеток в лимфатических узлах. Типичные антитела к PD-L1 включают, но не ограничиваются ими, атезолизумаб (например, Tecentriq®), авелумаб (например, Bavencio®) и дурвалумаб (например, IMFINZI™). В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие PD-L1, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR атезолизумаба, авелумаба или дурвалумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие PD-L1, содержат VH и/или VL атезолизумаба, авелумаба или дурвалумаба. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к PD-L1 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 243; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 244; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 245; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 246; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 247; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 248. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 137, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 139, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 141, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 142. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления исходный антигенсвязывающий белок содержит (например, состоит в основном из или состоит из) двух антигенсвязывающих полипептидов, каждый из которых содержит (например, состоит в основном из или состоит из), от N' к C': внеклеточный домен PD-L1 или его часть - необязательный пептидный линкер - шарнирный участок - субъединица Fc-домена или ее часть. В некоторых вариантах осуществления PD-L1 содержит последовательность SEQ ID NO: 249. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L1 содержит последовательность SEQ ID NO: 250. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L1 или его часть получены из PD-L1 дикого типа (например, человеческого, дикого типа). В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L1 или его часть содержит одну или несколько мутаций (например, делецию, вставку или замену). В некоторых вариантах осуществления мутантный внеклеточный домен PD-L1 или его часть обладают повышенным сродством к PD-1 по сравнению с внеклеточным доменом PD-L1 дикого типа или его частью. В некоторых вариантах осуществления мутантный внеклеточный домен PD-L1 или его часть имеет пониженное сродство к PD-1 по сравнению с внеклеточным доменом PD-L1 дикого типа или его частью. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L1-шарнир-Fc (например, исходный составной белок) представляет собой гомодимерный составной белок PD-L1-шарнир-Fc, т.е. два полипептида PD-L1-шарнир-Fc идентичны. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L1-шарнир-Fc (например, исходный составной белок) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, один полипептид PD-L1-шарнир-Fc содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другой полипептид PD-L1-шарнир-Fc содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления, например, в исходном составном белке PD-L1-шарнир-Fc, PD-L1 (например, внеклеточный домен PD-L1) и шарнирный участок соединены пептидным линкером, таким как любые пептидные линкеры, описанные в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 203, 206 или 213.

[283] PD-L2 (лиганд 2 белка запрограммированной клеточной гибели 1, B7-DC, CD273) представляет собой другую контрольную точку иммунной системы - лиганд рецептора PD-1. PD-L2 играет роль в негативной регуляции ответа адаптивного иммунитета. Взаимодействие PD-1 с PD-L2 резко подавляет опосредованную Т-клеточным рецептором (TCR) пролиферацию и продуцирование цитокинов Т-клетками. При низких концентрациях антигена взаимодействия PD-L2-PD-1 ингибируют сильные сигналы B7-CD28. Напротив, при высоких концентрациях антигена взаимодействия PD-L2-PD-1 снижают продуцирование цитокинов, но не подавляют пролиферацию Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок (например, исходный антигенсвязывающий белок) представляет собой составной белок PD-L2 (например, полноразмерный белок или его часть)-шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок содержит (например, состоит в основном из или состоит из) двух антигенсвязывающих полипептидов, каждый из которых содержит (например, состоит в основном из или состоит из), от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 или его часть - необязательный пептидный линкер - шарнирный участок - субъединица Fc-домена или ее часть. В некоторых вариантах осуществления PD-L2 содержит последовательность SEQ ID NO: 175. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L2 содержит последовательность SEQ ID NO: 176. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L2 или его часть получены из PD-L2 дикого типа (например, человеческого, дикого типа). В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L2 или его часть содержит одну или несколько мутаций (например, делецию, вставку или замену). В некоторых вариантах осуществления мутантный внеклеточный домен PD-L2 или его часть обладают повышенным сродством к PD-1 по сравнению с внеклеточным доменом PD-L2 дикого типа или его частью. В некоторых вариантах осуществления мутантный внеклеточный домен PD-L2 или его часть имеет пониженное сродство к PD-1 по сравнению с внеклеточным доменом PD-L2 дикого типа или его частью. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc (например, исходный составной белок) содержит два полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 177. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc (например, исходный составной белок) представляет собой гомодимерный составной белок PD-L2-шарнир-Fc, т.е. два полипептида PD-L2-шарнир-Fc идентичны. В некоторых вариантах осуществления составной белок PD-L2-шарнир-Fc (например, исходный составной белок) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, один полипептид PD-L2-шарнир-Fc содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другой полипептид PD-L2-шарнир-Fc содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62. В некоторых вариантах осуществления, например, в исходном составном белке PD-L2-шарнир-Fc, PD-L2 (например, внеклеточный домен PD-L2) и шарнирный участок соединены пептидным линкером, таким как любые пептидные линкеры, описанные в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 203, 206 или 213.

[284] Цитотоксический белок 4, ассоциированный с Т-лимфоцитами (CTLA-4 или CD152), является гомологом CD28 и известен как ингибирующая молекула контрольной точки иммунной системы, повышающая регулация которой происходит на активированных Т-клетках. CTLA-4 также связывается с B7-1 и B7-2, но с большей сродством, чем CD28. Взаимодействие между B7 и CTLA-4 ослабляет активацию Т-клеток, которая представляет собой важный механизм, с помощью которой опухоль избегает действия иммунной системы. Терапия антителами к CTLA-4 продемонстрировала многообещающие результаты в ряде онкологических заболеваний, таких как меланома. Типичные антитела к CTLA-4 включают, но не ограничиваются ими, ипилимумаб (например, Yervoy®). В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CTLA-4, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR ипилимумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CTLA-4, содержат VH и/или VL ипилимумаба. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к CTLA-4 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 125, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 125, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 126. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 127 или 128, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH тяжелой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 128, и VL легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 129. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA-4 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

[285] TIGIT (также называемый Т-клеточным иммунорецептором с доменами Ig и ITIM или VSTM3) представляет собой иммунный рецептор на некоторых Т-клетках и NK-клетках. Например, обнаружено, что TIGIT сверхэкспрессируется на опухолевых антиген-специфических CD8+ Т-клетках и инфильтрующих CD8+ опухоль лимфоцитах (TIL) при меланоме. Когда TIGIT связывается со своим лигандом CD155 (PVR), который экспрессируется на опухолевых клетках, дендритных клетках, макрофагах и т.д., TIGIT посылает ингибирующий сигнал на Т-клетки или NK-клетки.

Лиганд или рецептор клеточной поверхности

[286] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой лиганд или рецептор или его часть, такую как внеклеточный домен лиганда/рецептора. В некоторых вариантах осуществления лиганд или рецептор получают из молекулы, выбранной из группы, состоящей из IL-2, IL-2Rα (CD25), IL-3Rα (CD123), PD-1, PD-L1, PD-L2, CD155, NKG2A, NKG2C, NKG2F, NKG2D, BCMA, APRIL, BAFF, IL-3, IL-13, LLT1, AICL, DNAM-1 и NKp80. В некоторых вариантах осуществления лиганд берут от APRIL и/или BAFF, которые могут связываться с BCMA. В некоторых вариантах осуществления рецептор представляет собой FcR, а лиганд представляет собой молекулу, содержащую Fc. В некоторых вариантах осуществления FcR представляет собой рецептор Fcγ (FcγR). В некоторых вариантах осуществления FcγR выбран из группы, состоящей из FcγRIA (CD64A), FcγRIB (CD64B), FcγRIC (CD64C), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) и FcγRIIIB (CD16b). В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой PD-1, такой как внеклеточный домен (или его часть) PD-1. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антигенсвязывающего полипептида представляет собой PD-L2 или PD-L1, такой как внеклеточный домен (или его часть) PD-L2 или PD-L1. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L2 содержит последовательность SEQ ID NO: 176. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен PD-L1 содержит последовательность SEQ ID NO: 250. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антигенсвязывающего полипептида представляет собой CD155, такой как внеклеточный домен (или его часть) CD155. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный домен CD155 содержит последовательность SEQ ID NO: 267.

[287] Рецептор IL-2 - рецептор интерлейкина-2 (IL-2R) - представляет собой гетеротримерный белок, экспрессируемый на поверхности некоторых иммунных клеток, таких как лимфоциты. IL-2R имеет три формы, генерируемые различными комбинациями α-цепи (IL-2Rα, CD25, Tac антиген), β-цепи (IL-2Rβ, CD122) и γ-цепи (IL-2Rγ, γ_с, общая гамма-цепь или CD132). IL-2Rα связывает IL-2 с низким сродством, а комплекс IL-2Rβ и IL-2Rγ связывает IL-2 со сродством среднего уровня, прежде всего на Т-клетках памяти и NK-клетках. Комплекс всех цепей α, β и γ связывает IL-2 с высоким сродством на активированных Т-клетках и регуляторных Т-клетках (Tregs). CD25 (IL-2Rα) играет критическую роль в развитии и поддержании Treg и может играть роль в экспрессии Treg CD62L, которая необходима для проникновения Treg в лимфатические узлы (Malek и Bayer, 2004). CD25 является маркером активированных Т-клеток и Treg. Экспериментальные данные указывают на иммуносупрессивную способность антитела к CD25, которая значительно замедляет отторжение аллотрансплантатов сердца у мышей (Kirkman и др., 1985) и аллотрансплантатов почек у нечеловекообразных приматов (Reed и др., 1989). Примеры антител к CD25 включают, но не ограничиваются ими, базиликсимаб (например, Simulect®), даклизумаб (например, Zinbryta®). В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CD25, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR базиликсимаба или даклизумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CD25, содержат VH и/или VL базиликсимаба или даклизумаба. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к CD25 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 162, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащую последовательность SEQ ID NO: 162, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 164, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 165. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 тяжелой цепи, содержащей последовательность SEQ ID NO: 166, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 легкой цепи, содержащей последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH тяжелой цепи, содержащей последовательность SEQ ID NO: 166, и VL легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 166, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 167. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD25 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

Антиген поверхности иммунной клетки

[288] В некоторых вариантах осуществления антиген-мишень или эпитоп представляет собой антиген или эпитоп на поверхности иммунной клетки. Иммунные клетки имеют разные молекулы клеточной поверхности. Например, CD3 представляет собой молекулу клеточной поверхности на Т-клетках, тогда как CD16, NKG2D или NKp30 представляют собой молекулы клеточной поверхности на NK-клетках, а CD3 или инвариантный Т-клеточный рецептор (TCR) представляют собой молекулы клеточной поверхности на NKT-клетках. В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой Т-клетку, активирующая молекула представляет собой одну или несколько из CD3, например, CD3ε, CD3 или CD3γ; или CD2, CD4, CD8, CD27, CD28, CD40, CD134, CD137, CD278, ингибирующие молекулы контрольных точек иммунного ответа (например, CTLA-4, PD-1, TIM3, BTLA, VISTA, LARG-3 или TIGIT) и стимулирующие молекулы контрольных точек иммунного ответа (CD27, CD28, CD137, OX40, GITR или HVEM). В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой В-клетку, молекула клеточной поверхности представляет собой CD19, CD20 или CD138. В некоторых других вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой NK-клетку, молекула клеточной поверхности представляет собой CD16, CD56 (NCAM), NKp46, NKp44, CD244, CD226, TIGIT, CD96, LAG3, TIM3, PD-1, KLRG1, CD161, CD94/NKG2, KIR, NKG2D или NKp30. В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой NKT-клетку, молекула клеточной поверхности представляет собой CD3 или инвариантный TCR. В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой миелоидную дендритную клетку (mDC), молекула клеточной поверхности представляет собой CD11c, CD11b, CD13, CD45RO или CD33. В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой дендритную клетку плазмы (pDC), молекула клеточной поверхности представляет собой CD123, CD62L, CD45RA или CD36. В некоторых вариантах осуществления, где иммунная клетка представляет собой макрофаг, молекула клеточной поверхности представляет собой CD163 или CD206. В некоторых вариантах осуществления иммунная клетка выбрана из группы, состоящей из моноцита, дендритной клетки, макрофага, В-клетки, Т-клетки-киллера (Т_с, цитотоксический Т-лимфоцит или ЦТЛ), Т-хелперной клетки (Т_h), регуляторных Т-клеток (Treg), γ Т-клетки, естественных киллерных Т-клеток (NKT) и естественных киллерных (NK) клеток.

[289] В некоторых вариантах осуществления антиген на поверхности иммунной клетки выбран из группы, состоящей из CD3 (например, CD3ε, CD3, CD3γ), CD4, CD5, CD8, CD16, CD27, CD28, CD40, CD64, CD89, CD134, CD137, CD278, NKp46, NKp30, NKG2D, TCRα, TCRβ, TCRγ и TCR. В некоторых вариантах осуществления антиген на поверхности иммунной клетки представляет собой CD3, CD4 или CD8.

[290] CD3 состоит из трех различных полипептидных цепей (цепей ε, и γ), и представляет собой антиген, экспрессируемый Т-клетками, включая цитотоксические Т-клетки (необученные CD8+ Т-клетки) и Т-хелперные клетки (необученные CD4+ Т-клетки). Три полипептидные цепи CD3 связываются с TCR и ζ -цепью, образуя комплекс TCR, который выполняет функцию активации сигнальных каскадов в Т-клетках. В настоящее время многие терапевтические стратегии нацелены на трансдукцию сигнала TCR для лечения заболеваний с использованием моноклональных антител к человеческому CD3. CD3-специфичное антитело OKT3 является первым моноклональным антителом, одобренным для терапевтического применения у людей, и клинически используется в качестве иммуномодулятора для лечения отторжения аллогенного трансплантата. Отеликсизумаб (TRX4) представляет собой моноклональное антитело, специфично нацеленное на CD3ε, которое находится в стадии разработки для лечения диабета 1 типа и других аутоиммунных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CD3, содержат CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR из ОКТ3 или отеликсизумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий домен, специфично распознающие CD3, содержат VH и/или VL из OKT3 или отеликсизумаба. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 или его антигенсвязывающий фрагмент не конкурирует с антителом OKT3 за связывание с CD3 и неспособно активировать передачу сигнала TCR (т.е. неактивное антитело к CD3). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 или его антигенсвязывающий фрагмент специфично распознает CD3ε. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к CD3 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, CD3ε) или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 85; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 86; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 87; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 88; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 89; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, CD3ε) или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 91, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 93, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

[291] CD4 представляет собой гликопротеин, экспрессируемый на поверхности иммунных клеток, таких как Т-хелперные клетки (CD4+ Т-хелперные клетки), моноциты, макрофаги и дендритные клетки. CD4 является корецептором TCR и помогает TCR связываться с антигенпрезентирующими клетками. Примеры антител к CD4 включают, но не ограничиваются ими, ибализумаб (например, Trogarzo®), MAX.16H5 и IT1208. MAX.16H5 представляет собой антитело к человеческому CD4, применяемое внутривенно в клинических испытаниях для лечения аутоиммунных заболеваний (например, ревматоидного артрита) и острого позднего отторжения после трансплантации почечного аллотрансплантата. IT1208 представляет собой дефукозилированное гуманизированное истощающее антитело к CD4, которое в настоящее время проходит клинические испытания для лечения солидных опухолей на поздних стадиях. В некоторых вариантах осуществления ибализумаб использовали в качестве исходного антитела к CD4 (например, полноразмерного антитела). Ибализумаб представляет собой неиммуносупрессивное гуманизированное моноклональное антитело, одобренное FDA для лечения ВИЧ. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен, специфично распознающий CD4, содержит CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR ибализумаба, MAX.16H5 или IT1208. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен, специфично распознающий CD4, содержит VH и/или VL ибализумаба, MAX.16H5 или IT1208. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к CD4 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: i) VH-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 67; ii) VH-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 68; iii) VH-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 69; iv) VL-CDR1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 70; v) VL-CDR2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 71; и vi) VL-CDR3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 72. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 73, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 74. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 75 или 76, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD4 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

[292] CD8 представляет собой трансмембранный гликопротеин, который служит корецептором для TCR. CD8 связывается с белком MHC класса I и является специфичным для него. Наиболее распространенная форма CD8 состоит из цепи CD8-α и CD8-β. CD8 преимущественно экспрессируется на поверхности цитотоксических Т-клеток, но также может быть обнаружен на естественных клетках-киллерах, кортикальных тимоцитах и дендритных клетках. CD8 является маркером для популяции цитотоксических Т-клеток. CD8 экспрессируется при Т-клеточной лимфобластной лимфоме и гипопигментном грибовидном микозе. Типичные антитела к CD8 включают, но не ограничиваются ими, G10-1, OKT8, YTC182.20, 4B11 и DK25. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен, специфично распознающий CD8, содержит CDR тяжелой цепи, CDR легкой цепи или все шесть CDR любого из G10-1, OKT8, YTC182.20, 4B11 или DK25. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий домен, специфично распознающий CD8, содержит VH и/или VL любого из G10-1, OKT8, YTC182.20, 4B11 или DK25. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит исходное антитело к CD8 (например, полноразмерное антитело). В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к CD8 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 114, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит VH, содержащий последовательность SEQ ID NO: 114, и VL, содержащий последовательность SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 (например, исходное полноразмерное антитело) содержит две тяжелые цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 116, и две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 (например, исходное антитело) представляет собой гомодимерное полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD8 (например, исходное антитело) представляет собой гетеродимерное полноразмерное антитело, например, антитело KIH, например, одна тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 61, а другая тяжелая цепь содержит субъединицу Fc-домена, содержащую последовательность SEQ ID NO: 62.

Шарнир

[293] Шарнир соединяет Fd-участок (домены V_Н и CH1) и Fc-участок тяжелой цепи иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок соединяет антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или Fab) и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, только CH2, CH3 или CH2). Шарнирный участок, присущий IgG, IgA и IgD классам иммуноглобулинов, действует как гибкий спейсер, который позволяет Fab-сегменту иммуноглобулина свободно перемещаться в пространстве относительно Fc-участка. Разнообразные по своей структуре шарнирные домены варьируются, как по своей последовательности, так и по длине внутри классов и подклассов иммуноглобулинов. В шарнирном участке тяжелые цепи соединены между собой дисульфидными связями. Согласно кристаллографическим данным шарнирный участок иммуноглобулина можно подразделить по его структуре и функциям на три области: верхний шарнир, «сердцевину» и нижний шарнир. См. Shin и др., Immunological Reviews 130:87 (1992). Верхний шарнир включает аминокислоты от карбоксильного конца CH1 до первого остатка в шарнире, который ограничивает движение, обычно первый остаток цистеина, который образует межцепочечную дисульфидную связь между двумя тяжелыми цепями. Длина верхнего шарнирного участка коррелирует с гибкостью сегментов антитела. Сердцевинный шарнирный участок содержит дисульфидные мостики, соединяющие тяжелые цепи. Нижний шарнирный участок соединен с аминным концом CH2-домена, включая в себя остатки. Id. Шарнирный участок человеческого антитела IgG1 соответствует аминокислотам 216-230 в соответствии с нумерацией ЕС согласно Kabat. Сердцевинный шарнирный участок IgG человека₁ содержит последовательность Cys-Pro-Pro-Cys, которая при димеризации с образованием дисульфидной связи приводит к образованию циклического октапептида, который, как полагают, действует как центр вращения, тем самым придавая гибкость. Конформационные изменения, допускаемые структурой и гибкостью полипептидной последовательности шарнирного участка иммуноглобулина, могут влиять на эффекторные функции Fc-фрагмента антитела.

[294] В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок может содержать один или несколько сайтов гликозилирования, которые включают ряд структурно отличающихся типов сайтов для присоединения углеводов. Например, IgA₁ содержит пять сайтов гликозилирования в 17-аминокислотном сегменте шарнирного участка, что придает полипептиду шарнирного участка исключительную устойчивость к кишечным протеазам, что считается выигрышным свойством секреторного иммуноглобулина.

[295] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит шарнирный участок, который присутствует во встречающемся в природе исходном антителе. Например, исходное антитело представляет собой антитело IgG1, а шарнирный участок антитела или антигенсвязывающего фрагмента в иммуноцитокине, описанном в данном документе, представляет собой шарнирный участок типа IgG1. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит модификацию в шарнирном участке тяжелой цепи антитела. Например, шарнирный участок или его часть были модифицированы, например, путем делеции, вставки или замены, например, шарнирным участком или его частью, которые отличаются от шарнирного участка, присущего встречающемуся в природе антителу того же класса (например, IgG, IgA или IgE) и подкласса (например, IgG₁, IgG₂, IgG₃и IgG₄ и т.д.). Например, антитело IgG1, IgG2 или IgG3 может содержать шарнирный участок типа IgG4. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок или его часть содержит мутацию, например, делецию, вставку или замену, в одном или нескольких из верхнего шарнира, сердцевины и нижнего шарнира шарнирного участка, при условии, что межцепочечная дисульфидная связь (связи) все еще может быть образована, иммуноцитокин обладает гибкостью, чтобы обеспечить связывание целевого антигена и антигенсвязывающего фрагмента, при этом маскируя активность цитокина в отсутствие связывания целевого антигена и антитела, в то же время демаскируя активность цитокина при наличии связывания целевого антигена с антителом, тем самым обеспечивая гибкость и/или достаточное пространство между двумя цитокиновыми субъединицами или двумя фрагментами цитокина для обеспечения надлежащей активности цитокина (сродство связывания и/или биоактивность), и/или, необязательно, не прекращая эффекторную(ие) функцию(и) Fc-фрагмента. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок представляет собой или взят из шарнира человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок представляет собой мутантный шарнир человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько мутаций, например делецию, вставку или замену, вводят в один или несколько из верхнего шарнира, сердцевины и нижнего шарнира шарнирного участка для снижения или устранения эффекторной функции (например, ADCC и/или CDC) Fc-домена, такие как мутации L234 и/или L235 в нижнем шарнирном участке IgG1, например, одна или две мутации L234A, L234K, L234D, L235E, L235K и L235A. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит мутации L234K и L235K. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит мутации L234D и L235E. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок укорочен или подвергался мутациям с меньшим количеством цистеинов, чтобы уменьшить неправильное спаривание дисульфидных связей во время димеризации Fc-домена. В некоторых вариантах осуществления одну или более асимметричных заряженных мутаций вводят в нижний шарнир для облегчения образования гетеродимера, например, один полипептид содержит L234K+L235K в нижнем шарнирном участке IgG1, тогда как парный полипептид содержит L234D+L235E в нижнем шарнирном участке IgG1. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 40). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок представляет собой шарнир IgG1, содержащий мутации L234K и L235K. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность EPKSCDKTHTCPPCPAPEKKGGP (SEQ ID NO: 41). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок представляет собой шарнир IgG1, содержащий мутации L234D и L235E. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность EPKSCDKTHTCPPCPAPEDEGGP (SEQ ID NO: 42). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность ERKCCVECPPCPAPPVAGP (SEQ ID NO: 46). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность ESKYGPPCPSCPAPEFLGGP (SEQ ID NO: 47). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность ESKYGPCPPPCPAPEFLGGP (SEQ ID NO: 58). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую из аминокислотных последовательностей EPKSCDKDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 43), EPKSCDKDKTHTCPPCPAPEKKGGP (SEQ ID NO: 44) или EPKSCDKDKTHTCPPCPAPEDEGGP (SEQ ID NO: 45). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит любую из аминокислотных последовательностей EPKSCDKPDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 55), EPKSCDKPDKTHTCPPCPAPEKKGGP (SEQ ID NO: 56), EPKSCDKPDKTHTCPPCPAPEDEGGP (SEQ ID NO: 57) или EPPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 59). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок, такой как N'-часть шарнира, содержит любую из аминокислотных последовательностей EPKSCDKP (SEQ ID NO: 54), EPKSCDK (SEQ ID NO: 48) или EPKSC (SEQ ID NO: 49). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок содержит аминокислотную последовательность DKTHT (SEQ ID NO: 53). В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок, такой как С'-часть шарнира, содержит любую из аминокислотных последовательностей DKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 50), DKTHTCPPCPAPEKKGGP (SEQ ID NO: 51) или DKTHTCPPCPAPEDEGGP (SEQ ID NO: 52).

[296] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант, описанный в данном документе, расположен на N-конце шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела, т.е. расположен между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления составной полипептид тяжелой цепи содержит, от N' к C': VH-CH1-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены на N-конце шарнирного участка между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена или ее частью (например, CH2-CH3 или CH2). Например, в некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит любой из полипептидов, от N' к C': (1) VH-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (2) VL-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (3) VH-необязательный линкер-VL-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (4) VL-необязательный линкер-VH-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (5) VH-CH1-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (6) VH-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (7) VL-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (8) VH-необязательный линкер-VL-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (9) VL-необязательный линкер-VH-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (10) VH-CH1-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (11) лиганд-необязательный линкер-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; (12) лиганд-необязательный линкер-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2; (13) рецептор-необязательный линкер-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2-CH3; или (14) рецептор-необязательный линкер-цитокиновый фрагмент-шарнир-CH2. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены на N-конце шарнирного участка, содержащего любую из последовательностей SEQ ID NO: 50-52.

[297] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант, описанный в данном документе, расположен на С-конце шарнирного участка тяжелой цепи полноразмерного антитела, т.е. составной полипептид тяжелой цепи содержит, от N' к C': VH-CH1-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены на С-конце шарнирного участка между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена или ее частью (например, СН2). Например, в некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит любой из полипептидов, от N' к C': (1) VН-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; (2) VL-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; (3) VH-необязательный линкер-VL-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; (4) VL-необязательный линкер-VH-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; (5) VH-CH1-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; (6) VH-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (7) VL-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (8) VH-необязательный линкер-VL-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (9) VL-необязательный линкер-VH-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (10) VH-CH1-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (11) лиганд-шарнир-цитокиновый фрагмент-СН2-СН3; (12) лиганд-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2; (13) рецептор-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2-CH3; или (14) рецептор-шарнир-цитокиновый фрагмент-CH2. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены на С-конце шарнирного участка, содержащего любую из последовательностей SEQ ID NO: 40-47, 50-52 и 55-59.

[298] В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант, описанный в данном документе, расположен в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, т.е. составной полипептид тяжелой цепи содержит, от N' к C': VH-CH1-N'-часть шарнира-цитокиновый фрагмент-C'-часть шарнира-CH2-CH3. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант заменяет часть шарнирного участка. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант встроен в шарнирный участок без делеции какой-либо шарнирной аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант встроен в шарнирный участок, содержащий любую из последовательностей SEQ ID NO: 40-47 и 55-59. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант встроены между N'-концевой шарнирной частью, содержащей любую последовательность из SEQ ID NO: 48, 49 и 54, и C'-концевой шарнирной частью, содержащей любую из последовательностей SEQ ID NO: 50-52. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант с пептидным линкером, составленным с N'-концом цитокина или его варианта, встроен в шарнирный участок. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант с пептидным линкером, составленным с С'-концом цитокина или его варианта, встроен в шарнирный участок. Например, в некоторых вариантах осуществления часть шарнир-цитокин имеет строение, от N' к C': шарнирная N'-часть - необязательный N'-концевой пептидный линкер - цитокиновый фрагмент - необязательный C'-концевой пептидный линкер - шарнирная C'-часть. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок представляет собой шарнир IgG1, а цитокин или его вариант встроены между «EPKSC» (SEQ ID NO: 49) и «DKTHT» (SEQ ID NO: 53). В некоторых вариантах осуществления N'-концевой пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность DKP (SEQ ID NO: 231) или P (SEQ ID NO: 242). Поэтому, в некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант встроены между дополнительно введенными последовательностями «DKP» и «DKTHT». В некоторых вариантах осуществления N'-концевой пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность DKPGS (SEQ ID NO: 232), PGS (SEQ ID NO: 233) или GS (SEQ ID NO: 234). В некоторых вариантах осуществления N'-концевой пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность DKPGSG (SEQ ID NO: 235), PGSG (SEQ ID NO: 236) или GSG (SEQ ID NO: 203). В некоторых вариантах осуществления N'-концевой пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность DKPGSGS (SEQ ID NO: 237), PGSGS (SEQ ID NO: 238) или GSGS (SEQ ID NO: 239). В некоторых вариантах осуществления N'-концевой пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность DKPGSGGGGG (SEQ ID NO: 240), PGSGGGGG (SEQ ID NO: 241), GSGGGGG (SEQ ID NO: 206). В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант расположены в шарнирном участке между антигенсвязывающим фрагментом (например, лигандом, рецептором, VHH, scFv или Fab) и субъединицей Fc-домена или ее частью (например, CH2). Например, в некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин содержит любой из полипептидов, от N' к C': (1) VH-N'-часть шарнира-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2-CH3; (2) VL-N'-часть шарнира-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-СН2-СН3; (3) VH-необязательный линкер-VL-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-СН2-СН3; (4) VL-необязательный линкер-VH-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-СН2-СН3; (5) VH-CH1-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2-CH3; (6) Vh-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (7) Vl-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (8) VH-необязательный линкер-VL-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (9) VL-необязательный линкер-VH-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (10) VH-CH1-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (11) лиганд-необязательный линкер-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2-CH3; (12) лиганд-необязательный линкер-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2; (13) рецептор-необязательный линкер-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2-CH3; или (14) рецептор-необязательный линкер-шарнирная N'-часть-необязательный N'-пептидный линкер-цитокиновый фрагмент-необязательный C'-пептидный линкер-шарнирная C'-часть-CH2.

F c-домены

[299] Описанный здесь иммуноцитокин содержит Fc-домен или его часть на С-конце. Fc-домен включает CH2-домен и CH3-домен. В некоторых вариантах осуществления часть Fc-домена содержит (по существу состоит или состоит из) CH2-домена. В некоторых вариантах осуществления часть Fc-домена содержит (по существу состоит или состоит из) CH3-домена.

[300] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из любого из IgA, IgD, IgE, IgG и IgM и их подтипов. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит CH2 и CH3. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4). В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG1 или человеческого IgG4. В некоторых вариантах осуществления две субъединицы Fc-домена димеризуются с помощью одной или нескольких (например, 1, 2, 3, 4 или более) дисульфидных связей. В некоторых вариантах осуществления каждая субъединица Fc-домена содержит полноразмерную последовательность Fc. В некоторых вариантах осуществления каждая субъединица Fc-домена содержит укороченную на N-конце последовательность Fc. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен укорочен на N-конце, например, отсутствуют первые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот полного Fc-домена иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 60-66.

[301] Посредством Fc-домена иммуноцитокины могут активировать комплемент и взаимодействовать с рецепторами Fc. Это свойство, присущее иммуноглобулинам, считается неудачным, поскольку иммуноцитокины могут за счет этого нацеливаться на клетки, экспрессирующие Fc-рецепторы, а не на предпочтительные клетки, несущие антиген. Более того, одновременная активация рецепторов цитокинов и сигнальных путей Fc-рецепторов, приводящая к высвобождению цитокинов, особенно в сочетании с длительным периодом полувыведения составных белков иммуноглобулинов, затрудняет их применение в терапевтических условиях из-за системной токсичности. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления Fc-домен сконструирован так, чтобы иметь измененное связывание с рецептором Fc (FcR), специфически измененное связывание с рецептором Fcγ и/или измененную эффекторную функцию, такую как измененная (например, уменьшенная или устраненная) антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC), антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP) и/или комплементзависимая цитотоксичность (CDC).

[302] Хотя наличие Fc-домена необходимо для продления периода полувыведения иммуноцитокина, в некоторых ситуациях полезно устранять эффекторные функции, связанные с вовлечением Fc-рецепторов Fc-доменом. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления измененное связывание с Fc-рецептором и/или эффекторная функция представляет собой ослабление/уменьшение связывания и/или эффекторной функции. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, которые ослабляют связывание Fc-домена с рецептором Fc, в частности с рецептором Fcγ (отвечающим за ADCC). Предпочтительно, чтобы такая аминокислотная мутация не ослабляла связывания с рецепторами FcRn (отвечающими за период полувыведения). В некоторых вариантах осуществления субъединица Fc-домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 или 65. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG1 и содержит аминокислотную замену N295A. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG4 и содержит аминокислотные замены S228P и L235E в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG1 и содержит аминокислотные замены L234A и L235A ("LALA") в шарнирном участке. В некоторых вариантах осуществления Fc-домен получен из человеческого IgG1 и содержит аминокислотные замены L234A и L235A в шарнирном участке и P329G, например, в каждой из его субъединиц. См., например, Lo M. и др. J Biol Chem. 2017 Mar 3;292(9):3900-3908; Schlothauer T. и др., Protein Eng Des Sel. 2016 Oct;29(10):457-466.

[303] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен (например, человеческого IgG1) подвергают мутации с целью удаления одной или нескольких эффекторных функций, таких как ADCC, ADCP или CDC, а именно получая «безэффекторный» или «почти безэффекторный» Fc-домен. Например, в некоторых вариантах осуществления Fc-домен представляет собой безэффекторный Fc IgG1, содержащий одну или несколько из следующих мутаций (например, в каждой из его субъединиц): L234A, L235E, G237A, A330S и P331S. Комбинации K322A, L234A и L235A в IgG1 достаточны для почти полного устранения связывания FcγR и C1q (Hezareh и др., J Virol 75, 12161-12168, 2001). В MedImmune определили, что набор из трех мутаций L234F/L235E/P331S имеет очень похожий эффект (Oganesyan и др., Acta Crystallographica 64, 700-704, 2008). В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит модификацию гликозилирования N297 Fc-домена IgG1, которая, как известно, необходима для оптимального взаимодействия с FcR. Модификация Fc-домена может быть любым подходящим конструированием Fc IgG, упомянутым в Wang и др. («IgG Fc engineering to modulate antibody eFFector Functions», Protein Cell. 2018 Jan; 9(1): 63-73), содержание которого полностью включено в настоящее описание ссылкой.

[304] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит две идентичные полипептидные цепи (идентичные субъединицы Fc). Такие домены Fc здесь также называются «гомодимерными Fc-доменами». В некоторых вариантах осуществления каждая субъединица гомодимерного Fc-домена содержит любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 60 и 63-66.

[305] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит модификацию, способствующую гетеродимеризации двух неидентичных полипептидных цепей. Такие домены Fc здесь также называются «гетеродимерными доменами Fc». В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит модификацию «выступ-во-впадину» (KIH), включающую модификацию-выступ в одной из субъединиц Fc-домена и модификацию-впадину в другой из двух субъединиц Fc-домена. К иммуноцитокину, описанному в данном документе, можно применять любые подходящие модификации «выступ-во-впадину», такие как аминокислотные замены T22>Y (создание выступа) в цепи B первого CH3-домена и Y86>T (создание впадины) в цепи E партнерского CH3-домена. См. также US 20200087414, содержание которого полностью включено в настоящее описание ссылкой. В некоторых вариантах осуществления одна субъединица Fc-домена содержит одну или несколько мутаций T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V в отличие от Fc человеческого IgG1 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 60, а другая субъединица Fc-домена содержит одну или несколько мутаций T350V, T366L, N390R, K392M, T394W в отличие от Fc человеческого IgG1 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 60. В некоторых вариантах осуществления одна субъединица Fc-домена содержит последовательность SEQ ID NO: 61, а другая субъединица Fc-домена содержит последовательность SEQ ID NO: 62.

[306] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен представляет собой одноцепочечный Fc-домен, как описано в WO2017134140, содержание которого полностью включено в настоящее описание ссылкой.

Линкеры

[307] В некоторых вариантах осуществления в иммуноцитокине, описанном в данном документе, между двумя или более антигенсвязывающими фрагментами, соединенными последовательно, антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или Fab) и цитокиновый фрагмент, CH1-домен и цитокиновый фрагмент, два или более фрагмента цитокина, соединенные последовательно, две или более субъединицы цитокина или его варианта, соединенные последовательно, цитокиновый фрагмент и субъединица Fc-домена или ее часть, шарнирный участок и CH1-домен, шарнирный участок и CH2-домен, шарнирный участок и цитокиновый фрагмент, субъединица Fc-домена или ее часть и антигенсвязывающий фрагмент и/или CH1-домен и субъединица Fc-домена или ее часть соединены одним или несколькими необязательными линкерами (например, пептидным линкером, непептидным линкером). В некоторых вариантах осуществления используют один или несколько одинаковых линкеров. В некоторых вариантах осуществления используют один или несколько разных линкеров (например, отличающихся друг от друга). В некоторых вариантах осуществления один или несколько линкеров представляют собой гибкие линкеры. В некоторых вариантах осуществления один или несколько линкеров являются устойчивыми линкерами. В некоторых вариантах осуществления одни линкеры являются гибкими, тогда как другие являются устойчивыми. В общем случае линкер не влияет или несущественно влияет на правильную укладку и конформацию, формируемую конфигурацией иммуноцитокина. Предпочтительно линкер предоставляет гибкость и достаточное пространство для каждой части иммуноцитокина, например, делает возможным связывание целевого антигена и фрагмента, связывающего антиген, позволяет связывание лиганд-рецептор, маскирует активность цитокина в отсутствие связывания антигена-мишени с антителом (или связывания лиганд-рецептор), при этом раскрывая активность цитокинов при наличии связывания антигена-мишени с антителом (или связывания лиганд-рецептор), обеспечивая гибкость и/или достаточное пространство между двумя субъединицами цитокинов или двумя фрагментами цитокинов, позволяя проявляться надлежащей активности цитокинов (сродство связывания и/или биоактивность), и т.д.

[308] Линкеры могут быть пептидными линкерами любой длины. В некоторых вариантах осуществления длина пептидного линкера составляет от примерно 1 аминокислоты (ак) до примерно 10 ак, от примерно 2 ак до примерно 15 ак, от примерно 3 ак до примерно 12 ак, от примерно 4 ак до примерно 10 ак, от примерно 5 ак до примерно 9 ак, от примерно 6 ак до примерно 8 ак, от примерно 1 ак до примерно 20 ак, от примерно 21 ак до примерно 30 ак, от примерно 1 ак до примерно 30 ак, от примерно 2 ак до примерно 20 ак, от примерно 10 ак до примерно 30 ак, от примерно 1 ак до примерно 50 ак, от примерно 2 ак до примерно 19 ак, от примерно 2 ак до примерно 18 ак, от примерно 2 ак до примерно 17 ак, от примерно 2 ак до примерно 16 ак, от примерно 2 ак до примерно 10 ак, от примерно 2 ак до примерно 14 ак, от примерно 2 ак до примерно 13 ак, от примерно 2 ак до примерно 12 ак, от примерно 2 ак до примерно 11 ак, от примерно 2 ак до примерно 9 ак, от примерно 2 ак до примерно 8 ак, от примерно 2 ак до примерно 7 ак, от примерно 2 ак до примерно 6 ак, от примерно 2 ак до примерно 5 ак или от примерно 6 ак до примерно 30 ак. В некоторых вариантах осуществления длина пептидного линкера может быть примерно любой из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина пептидного линкера составляет примерно 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина пептидного линкера может быть примерно любой из 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина линкера составляет от примерно 10 до примерно 20 аминокислот.

[309] Пептидный линкер может иметь природную последовательность или не встречающуюся в природе последовательность. Например, в качестве линкера можно использовать последовательность, полученную из шарнирного участка антитела, состоящего только из тяжелой цепи. См., например, WO1996/34103. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер представляет собой шарнир из человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его часть. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер представляет собой мутантный шарнир из человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или его часть. В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой гибкий линкер. Примеры гибких линкеров включают, но не ограничиваются ими, глициновые полимеры (G)_n (SEQ ID NO: 194), глицин-сериновые полимеры (включая, например, (GS)_n (SEQ ID NO: 195), (GGS)_n (SEQ ID NO: 196), (GGGS)_n (SEQ ID NO: 197), (GGS)_n(GGGS)_n (SEQ ID NO: 198), (GSGGS)_n (SEQ ID NO: 199), (GGSGS)_n (SEQ ID NO: 200) или (GGGGS)_n (SEQ ID NO: 201), где n представляет собой целое число, равное по крайней мере единице), глицин-аланиновые полимеры, аланин-сериновые полимеры и другие гибкие линкеры, известные в данной области техники. Глициновые и глицин-сериновые полимеры относительно неструктурированы и поэтому могут служить нейтральным связующим звеном между компонентами. Глицин имеет доступ к значительно большему ϕ-ψ пространству, чем даже аланин, и гораздо менее ограничен, чем остатки с более длинными боковыми цепями (см. Scheraga, Rev. Computational Chem. 11 173-142 (1992)). Примеры гибких линкеров включают, но не ограничиваются ими, GG (SEQ ID NO: 202), GSG (SEQ ID NO: 203), GGSG (SEQ ID NO: 204), GGSGG (SEQ ID NO: 205), GSGGGGG (SEQ ID NO: 206), GSGSG (SEQ ID NO: 207), GSGGG (SEQ ID NO: 208), GGGSG (SEQ ID NO: 209), GSSSG (SEQ ID NO: 210), GGSGGS (SEQ ID NO: 211), SGGGGS (SEQ ID NO: 212), GGGGS (SEQ ID NO: 213), (GA)_n (SEQ ID NO: 214, n представляет собой целое число, равное по меньшей мере 1), GRAGGGGAGGGG (SEQ ID NO: 215), GRAGGG (SEQ ID NO: 216), GSGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 217), GGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 218), GGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 219), GGSGGSGGSGGSGGG (SEQ ID NO: 220), GGSGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 221), GGSGGSGGSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 222), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 229), GGGGGGSGGGGSGGGGSA (SEQ ID NO: 223), GSGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 224), KTGGGSGGGS (SEQ ID NO: 225), GGPGGGGSGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 226), GGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 227), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG (SEQ ID NO: 228) и т.п. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность ASTKGP (SEQ ID NO: 230). Специалисту средней квалификации в данной области известно, что конструкция иммуноцитокина может включать линкеры, гибкие полностью или частично, так что линкер может включать гибкую линкерную часть, а также одну или несколько частей, которые придают менее гибкую структуру для получения требуемого строения и функции иммуноцитокина (например, маскирование активности цитокинов в отсутствие связывания антигена-мишени с антителом, в то же время раскрытие активности цитокинов при наличии связывания антигена-мишени с антителом; или обеспечивают гибкость и/или достаточное пространство между двумя цитокиновыми субъединицами, позволяя проявляться надлежащей активности цитокинов (сродству связывания и/или биоактивности)). В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер обогащен серин-глицином. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер содержит любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 194-242. В некоторых вариантах осуществления пептидный линкер содержит (или по существу состоит из или состоит из) любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 227-229. В некоторых вариантах осуществления цитокиновый фрагмент, описанный в данном документе, содержит две цитокиновые субъединицы (дикого типа или мутанта), соединенные линкером, таким как линкер, содержащий любую последовательность из SEQ ID NO: 227-229.

[310] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой устойчивый линкер (например, не расщепляемый протеазой, особенно ММП).

[311] Любой один или все линкеры, описанные в данном документе, можно получать с помощью любой химической реакции, которая способна соединять антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или Fab) и шарнирный участок, шарнирный участок и цитокиновый фрагмент, CH1-домен и цитокиновый фрагмент, цитокиновые фрагменты, соединенные последовательно, цитокиновый фрагмент и субъединицу Fc-домена, две цитокиновые субъединицы, антигенсвязывающие фрагменты, антигенсвязывающий фрагмент и цитокиновый фрагмент, антигенсвязывающий фрагмент и субъединицу Fc-домена или ее часть, и/или CH1-домен и субъединицу Fc-домена или ее часть, при условии, что компоненты или фрагменты сохраняют присущую им активность, т.е. связывание с цитокиновым рецептором, связывание с антигеном(ами)-мишенью, связывание с лигандом или рецептором, связывание с FcR или ADCC. Такое образование связи может включать множество химических механизмов, например, ковалентное связывание, аффинное связывание, интеркаляцию, координационное связывание и комплексообразование. В некоторых вариантах осуществления связывание представляет собой ковалентное связывание. Ковалентное связывание может быть достигнуто либо путем прямой конденсации существующих боковых цепей, либо путем включения внешних мостиковых молекул. Многие двухвалентные или поливалентные связывающие реагенты применимы для соединения белковых молекул. Например, характерные реагенты присоединения могут включать органические соединения, такие как сложные тиоэфиры, карбодиимиды, сложные эфиры сукцинимида, диизоцианаты, глутаровый альдегид, диазобензолы и гексаметилендиамины. Этот список не является исчерпывающим для различных классов реагентов присоединения, известных в данной области техники, а скорее является примером более распространенных реагентов присоединения (см. Killen и Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen и др., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); и Vitetta и др., Science 238:1098 (1987)).

[312] Линкеры, которые можно применять в настоящем изобретении, описаны в литературе (см., например, Ramakrishnan, S. и др., Cancer Res. 44:201-208 (1984), описывающих применение MBS (M-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимидный эфир)). В некоторых вариантах осуществления непептидные линкеры, используемые в данном документе, включают: (i) EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид; (ii) SMPT (4-сукцинимидилоксикарбонил-альфа-метил-альфа-(2-пиридил-дитио)-толуол (Pierce Chem. Co., Кат. (21558Г); (iii) SPDP (сукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (Pierce Chem. Co., Кат. № 21651G); (iv) сульфо-LC-SPDP (сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)- пропионамид]гексаноат (Pierce Chem. Co. Кат. № 2165-Г); и (v) сульфо-NHS (N-гидроксисульфосукцинимид: Pierce Chem. Co., Кат. № 24510), конъюгированный с EDC.

[313] Описанные выше линкеры могут содержать компоненты с различными свойствами, что приводит к получению иммуноцитокинов с различными физико-химическими свойствами. Например, сульфо-NHS-эфиры алкилкарбоксилатов более стабильны, чем сульфо-NHS-эфиры ароматических карбоксилатов. Линкеры, содержащие сложные эфиры NHS, менее растворимы, чем сложные эфиры сульфо-NHS. Кроме того, линкер SMPT содержит стерически затрудненную дисульфидную связь и может образовывать гибридный белок с повышенной стабильностью. Дисульфидные связи, как правило, менее устойчивы, чем другие связи, потому что дисульфидная связь расщепляется in vitro, что приводит к меньшему количеству доступного гибридного белка. В частности, сульфо-NHS может повышать стабильность карбодиимидных сочетаний. Реагенты для карбодиимидного сочетания (такие как EDC) при использовании вместе с сульфо-NHS образуют сложные эфиры, которые более устойчивые к гидролизу, чем при реакции только с одним реагентом карбодиимидного сочетания.

[314] Другие аспекты линкера включают влияние на физические или фармакокинетические свойства полученного иммуноцитокина, такие как растворимость, липофильность, гидрофильность, гидрофобность, стабильность (умеренная стабильность в сочетании с планируемой деградацией), жесткость, гибкость, иммуногенность, модуляция цитокинового фрагмента/связывание цитокинового рецептора, модуляция связывания антигенсвязывающего домена/антигена-мишени, модуляция связывания лиганд-рецептор, способность к заключению в мицеллу или липосому и т.п.

Варианты иммуноцитокина

Варианты с модифицированным гликозилированием

[315] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин изменен для увеличения или уменьшения степени гликозилирования конструкции. Добавление или удаление сайтов гликозилирования в Fc-домене можно легко осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности так, чтобы создавать или удалять один или несколько сайтов гликозилирования.

[316] Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный биантенарный олигосахарид, который обычно присоединен N-связью к Asn297 в C_Н2-домене Fc-участка. См., например, Wright и др. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стержне» биантеннарной олигосахаридной структуры. В некоторых вариантах осуществления модификации олигосахарида в домене Fc можно создавать для улучшения определенных свойств.

[317] В некоторых вариантах осуществления описанный в данном документе иммуноцитокин имеет углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (прямо или косвенно) к домену Fc. Например, доля фукозы в таком иммуноцитокине может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Долю фукозы определяют путем расчета средней доли фукозы в сахарной цепи в Asn297 по отношению к сумме всех гликоструктур, присоединенных к Asn 297 (например, сложные, гибридные строения и строения с высоким содержанием маннозы), измеренных с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному примерно в положении 297 в домене Fc (нумерация ЕС остатков Fc-участка); однако Asn297 также может быть расположен примерно на ± 3 аминокислоты выше или ниже положения 297, т.е. между положениями 294 и 300 из-за незначительных вариаций последовательности в антителах. Такие варианты с модифицированным фукозилированием могут иметь улучшенную функцию ADCC. См., например, патентные публикации США № US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Rights Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «дефицитным по фукозе» вариантам антител, включают: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki и др. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki и др. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают клетки Lec13 CHO, дефицитные по фукозилированию белков (Ripka и др. Arch Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на патент США № US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams и др., особенно в примере 11), и нокаутные клеточные линии, такие как ген альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, нокаутные клетки СНО (см., например, Yamane-Ohnuki и др. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004 г.); Kanda, Y. и др., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).

Варианты с модицицированной эффекторной функцией

[318] В некоторых вариантах осуществления в настоящего изобретения рассматривается иммуноцитокин, который обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями Fc, что делает его желательным кандидатом для применений, в которых важен период полувыведения иммуноцитокина in vivo, но некоторые эффекторные функции (такие как CDC и ADCC) не нужны или вредны. Некоторые из вариантов домена Fc обсуждались выше. Анализы цитотоксичности in vitro и/или in vivo можно проводить для подтверждения снижения/истощения активности CDC и/или ADCC. Например, можно анализировать связывание Fc-рецептора (FcR), чтобы убедиться, что антитело не связывается с FcγR (следовательно, скорее всего не обладает ADCC-активностью), но сохраняет способность связывания с FcRn. Первичные клетки для опосредования ADCC - Nk-клетки - экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках представлена в таблице 2 на стр. 464 у Ravetch и Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991). Неограничивающие примеры in vitro анализы для оценки ADCC-активности интересующей молекулы описаны в патенте США № 5,500,362 (см., например, Hellstrom, I. и др. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, I и др., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5 821 337 (см. Bruggemann, M. и др., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). В качестве альтернативы можно использовать нерадиоактивные методы анализа (см., например, анализ нерадиоактивной цитотоксичности ACTI™ для проточной цитометрии (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox 96® (Promega, Madison, Висконсин). Полезные эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и клетки-естественные киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно можно оценить ADCC-активность интересующей молекулы in vivo, например, в животной модели, такой как описана у Clynes и др. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Анализы связывания C1q также можно проводить для подтверждения того, что антитело не способно связывать C1q и, следовательно, не обладает CDC-активностью. См., например, ELISA связывания C1q и C3c в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Оценку активации комплемента можно с помощью анализа CDC (см., например, Gazzano-Santoro и др., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. и др., Blood 101:1045-1052 (2003); и Cragg, M.S. и M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). Определения связывания FcRn и in vivo клиренса/периода полувыведения также можно с помощью методов, известных в данной области (см., например, Petkova, S.B. и др., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)).

[319] Fc-домены со сниженной эффекторной функцией включают домены с заменой одного или нескольких остатков 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 в Fc-участке (патент США № 6737056). Такие Fc-мутанты включают замены в двух или более положениях аминокислот 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый Fc-мутант «DANA» с заменой остатков 265 и 297 на аланин (патент США № 7332581). Описаны некоторые варианты антител с улучшенным или пониженным связыванием с FcR (см., например, патент США № 6737056; WO 2004/056312 и Shields и до., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)). В некоторых вариантах осуществления в Fc-домен вносят изменения, которые приводят к изменению (т.е. улучшению или ослаблению) связывания C1q и/или CDC, например, как описано в патенте США № 6194551, WO 99/51642 и у Idusogie и др. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[320] В некоторых вариантах осуществления Fc-домен содержит одну или несколько аминокислотных замен, которые продлевают период полувыведения и/или улучшают связывание с неонатальным Fc-рецептором (FcRn). Антитела с увеличенным периодом полувыведения и улучшенным связыванием с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который отвечает за перенос материнских IgG к плоду (Guyer и др., J. Immunol. 117:587 (1976) и Ким и др., J. Immunol. 24:249 (1994)), описаны в US 2005/0014934A1 (Hinton и др.). Эти антитела содержат Fc-домен с одной или несколькими заменами в нем, которые улучшают связывание Fc-участка с FcRn. Такие варианты Fc включают варианты с заменами в одном или нескольких остатках Fc-участка, например, замена остатка 434 в Fc-участке (патент США № 7371826).

[321] См. также Duncan и Winter, Nature 322:738-40 (1988); патент США № 5648260; патент США № 5624821; и WO 94/29351, касающиеся других примеров вариантов Fc-домена.

Варианты, модифицированные цистеином

[322] В некоторых вариантах осуществления может требоваться создание сконструированных с применением цистеина иммуноцитокинов, например, «thioMAb», в которых один или несколько остатков иммуноцитокина заменены остатками цистеина. В конкретных вариантах осуществления замещенные остатки встречаются в доступных участках иммуноцитокина. При замещении этих остатков цистеином реакционноспособные тиоловые группы располагаются в доступных участках иммуноцитокина, и их можно использовать для конъюгации иммуноцитокина с другими фрагментами, такими как фрагменты лекарственного средства или фрагменты линкер-лекарственное средство, для создания конъюгата иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления любой один или несколько из следующих остатков можно заменять цистеином: A118 (нумерация ЕС) а тяжелой цепи; и S400 (нумерация ЕС) в домене Fc тяжелой цепи. Иммуноцитокины, модифицированные цистеином, можно получать, как описано выше, например, в патенте США № 7521541.

Производные иммуноцитокина

[323] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокины, предложенные в данном документе, могут дополнительно содержать дополнительное терапевтическое соединение, такое как любые терапевтические соединения, известные в данной области. Например, исходное антитело в некоторых вариантах осуществления может представлять собой конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC). См., например, любой ADC, описанный у Shim H. (Biomolecules. 2020 март; 10(3): 360), и Diamantis N. и Banerji U. Br J Cancer. 2016; 114(4): 362-367, содержание которых полностью включено в настоящее описание ссылкой. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое соединение конъюгировано с Fc-доменом или его частью. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое соединение представляет собой цитотоксическое средство, химиотерапевтическое средство, средство, ингибирующее рост, или антибиотик.

[324] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин дополнительно содержит метку, выбранную из группы, состоящей из хромофора, флуорофора (например, кумарина, ксантена, цианина, пирена, бораполиазиндацена, оксазина и их производных), флуоресцентного белка (например, GFP, фикобилипротеинов и их производных), фосфоресцирующего красителя (например, диоксетановых, ксантеновых или карбоцианиновых красителей, хелатов лантанидов), тандемнго красителя (например, цианин-фикобилипротеинового производного и ксантен-фикобилипротеинового производного), частиц (например, кластеров золота, коллоидного золота микросферы, квантовых точек), гаптена, фермента (например, пероксидазы, фосфатазы, гликозидазы, люциферазы) и радиоизотопа (например, ¹²⁵I, ³H, ¹⁴С, ³²P).

III. Векторы, кодирующие иммуноцитокины

[325] Настоящее изобретение также относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим любой из иммуноцитокинов, описанных в данном документе (например, иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокин Il-10/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CTLA- 4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD25 или иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc), векторам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из описанных в данном документе иммуноцитокинов. Также предложены изолированные клетки-хозяева (например, клетки CHO, клетки HEK 293, клетки Hela, клетки COS), содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из иммуноцитокинов, описанных в данном документе, или векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из иммуноцитокинов, описанных в данном документе.

[326] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин, содержащий: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, такой как PD-L2, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин, содержащий: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин, содержащий: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, PD -1, CD3, CD4 или CD8); и b) и цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую, от N-конца к C-концу: домен VH, необязательно CH1-домен, цитокин или его вариант в шарнирном участке, CH2-домен и, необязательно, CH3-домен. В некоторых вариантах осуществления предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин, содержащий: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3 , CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, причем цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления каждый полипептид иммуноцитокина кодируется одной выделенной нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах осуществления одна выделенная нуклеиновая кислота кодирует два или более полипептида иммуноцитокина.

[327] В некоторых вариантах осуществления вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую любой из иммуноцитокинов, описанных в данном документе, подходит для репликации и интеграции в эукариотические клетки, такие как клетки млекопитающих (например, клетки CHO, клетки HEK 293, клетки Hela, клетки COS). В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой вирусный вектор. Примеры вирусных векторов включают, но не ограничиваются ими, аденовирусные векторы, аденоассоциированные вирусные векторы, лентивирусный вектор, ретровирусные векторы, вирусный вектор простого герпеса и их производные. Технология вирусных векторов хорошо известна в данной области и описана, например, в Sambrook и др. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Нью-Йорк) и в других руководствах по вирусологии и молекулярной биологии.

[328] Для переноса генов в клетки млекопитающих был разработан ряд основанных на вирусах систем. Например, ретровирусы обеспечивают удобную платформу для систем доставки генов. Гетерологичную нуклеиновую кислоту можно встраивать в вектор и упаковывать в ретровирусные частицы с использованием методик, известных в данной области. Затем рекомбинантный вирус можно выделить и доставить в сконструированную клетку млекопитающего in vitro или ex vivo. В данной области известен ряд ретровирусных систем. В некоторых вариантах осуществления используются аденовирусные векторы. В данной области известен ряд аденовирусных векторов. В некоторых вариантах осуществления используются лентивирусные векторы. В некоторых вариантах осуществления используются самоинактивирующиеся лентивирусные векторы. Например, самоинактивирующиеся лентивирусные векторы, несущие кодирующую(ие) иммуноцитокин последовательность(и), можно упаковывать, следуя протоколам, известным в данной области. Полученные лентивирусные векторы можно использовать для трансдукции клетки млекопитающего с использованием методов, известных в данной области. Векторы, полученные из ретровирусов, таких как лентивирус, являются подходящими инструментами для достижения долгосрочного переноса генов, поскольку они обеспечивают долгосрочную стабильную интеграцию трансгена и его размножение в клетках-потомках. Лентивирусные векторы также обладают низкой иммуногенностью и могут трансдуцировать непролиферирующие клетки.

[329] В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой невирусный вектор. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой транспозон, такой как система транспозонов «Спящая красавица» (SB) или система транспозонов PiggyBac. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой невирусный вектор на основе полимера, включая, например, поли(молочно-гликолевую кислоту) (PLGA) и полимолочную кислоту (PLA), поли(этиленимин) (PEI) и дендримеры. В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой невирусный вектор на основе катионного липида, такой как катионная липосома, липидная наноэмульсия и твердая липидная наночастица (SLN). В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой невирусный вектор на основе пептидного гена, такой как поли-L-лизин. Любой из известных невирусных векторов, подходящих для редактирования генома, можно использовать для введения нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноцитокин, в клетки-хозяева. См., например, Yin H. и др. Nature Rev. Genetics (2014) 15:521-555; Aronovich E.L. и др. «The Sleeping Beauty transposon system: a non-viral vector For gene therapy». Hum. Mol. Genet. (2011) R1: R14-20; и Zhao S. и др. «PiggyBac transposon vectors: the tools oF the human gene editing». Transl. Lung Cancer Res. (2016) 5(1): 120-125, которые включены в данной документе ссылкой. В некоторых вариантах осуществления любую одну или несколько нуклеиновых кислот или векторов, кодирующих иммуноцитокины, описанные в данном документе, вводят в клетки-хозяева (например, CHO, HEK 293, Hela или COS) физическим способом, включая, помимо прочего, электропорацию, сонопорацию, фотопорацию, магнитофекцию, гидропорацию.

[330] В некоторых вариантах осуществления вектор содержит селективный маркерный ген или репортерный ген для отбора клеток, экспрессирующих иммуноцитокины, описанные в данном документе, из популяции клеток-хозяев, трансфицированных векторами (например, лентивирусными векторами). Как селектируемые маркеры, так и репортерные гены можно фланкировать соответствующими регуляторными последовательностями, чтобы сделать возможной экспрессию в клетках-хозяевах. Например, вектор может содержать терминаторы транскрипции и трансляции, инициирующие последовательности и промоторы, пригодные для регуляции экспрессии последовательностей нуклеиновых кислот.

[331] В некоторых вариантах осуществления вектор (например, вирусный вектор) содержит любую из нуклеиновых кислот, кодирующих описанные здесь иммуноцитокины. Нуклеиновую кислоту можно клонировать в вектор с использованием любых известных в данной области методов молекулярного клонирования, включая, например, использование сайтов рестрикционных эндонуклеаз и одного или нескольких селектируемых маркеров. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота функционально связана с промотором. Были исследованы различные промоторы для экспрессии генов в клетках млекопитающих, и в настоящем изобретении можно использовать любой из промоторов, известных в данной области. Промоторы можно приблизительно классифицировать как конститутивные промоторы или регулируемые промоторы, такие как индуцибельные промоторы.

[332] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокины, описанные в данном документе, функционально связана с конститутивным промотором. Конститутивные промоторы позволяют конститутивно экспрессировать гетерологичные гены (также называемые трансгенами) в клетках-хозяевах. Типичные промоторы, рассматриваемые в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, немедленно-ранний промотор цитомегаловируса (CMV), человеческий фактор элонгации-1альфа (hEF1α), промотор убиквитина С (UbiC), промотор фосфоглицерокиназы (PGK), ранний промотор обезьяньего вируса 40 (SV40), куриный β-актиновый промотор в сочетании с ранним энхансером CMV (CAGG), вирус саркомы Рауса (RSV), промотор энхансера полиомы/тимидинкиназы простого герпеса (MC1), промотор бета-актина (β-ACT), промотор «энхансер вируса миелопролиферативной саркомы с удаленной областью отрицательного контроля и замещенным сайтом связывания праймера d1587rev (MND)». Огромное число исследований посвящено сравнению эффективности таких конститутивных промоторов в управлении экспрессией трансгена. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокины, описанные в данном документе, функционально связана с промотором CMV.

[333] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокины, описанные в данном документе, функционально связана с индуцибельным промотором. Индуцибельные промоторы относятся к категории регулируемых промоторов. Индуцибельный промотор может быть индуцирован одним или несколькими условиями, такими как физическое состояние, микроокружение клеток-хозяев или физиологическое состояние клеток-хозяев, индуктором (т.е., индуцирующим агентом) или их комбинацией. В некоторых вариантах осуществления индуцирующее условие не индуцирует экспрессию эндогенных генов в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления индуцирующие условия выбирают из группы, состоящей из индуктора, облучения (например, ионизирующего излучения, света), температуры (например, тепла), окислительно-восстановительных условий и активированного состояния клетки-хозяина. В некоторых вариантах осуществления индуцибельный промотор может представлять собой промотор NFAT, промотор TETON® или промотор NFκB. В некоторых вариантах осуществления индуцибельный промотор представляет собой tet-индуцибельный промотор.

[334] В некоторых вариантах осуществления вектор содержит более одной нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуноцитокины, описанные в данном документе, например, разные полипептиды иммуноцитокина. В некоторых вариантах осуществления каждый вектор содержит 2 нуклеиновые кислоты, кодирующие 2 полипептида иммуноцитокинов, описанных в данном документе.

[335] В некоторых вариантах осуществления две или более нуклеиновые кислоты, кодирующие описанные здесь иммуноцитокины, функционально регулируются одним и тем же промотором в векторе. В некоторых вариантах осуществления две или более нуклеиновые кислоты связаны последовательно через связывающую последовательность (например, IRES) или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую саморасщепляющийся пептид 2А, такой как P2A, T2A, E2A, F2A, BmCPV 2A, BmIFV. 2А. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая два или более полипептида иммуноцитокинов, содержит связывающую(ие) последовательность(и) (например, IRES) или последовательность(и) нуклеиновой кислоты, кодирующую(ие) саморасщепляющийся(е) пептид(ы) 2А (такой как Р2А, Т2А, Е2А , F2A, BmCPV 2A, BmIFV 2A) между последовательностями, кодирующими полипептид. В некоторых вариантах осуществления две или более нуклеиновые кислоты, кодирующие описанные здесь иммуноцитокины, функционально регулируются отдельными промоторами в векторе. В некоторых вариантах осуществления с каждой нуклеиновой кислотой функционально связаны разные промоторы. В некоторых вариантах осуществления с каждой нуклеиновой кислотой функционально связаны одинаковые промоторы. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, кодируется двумя или более векторами, например, каждый вектор кодирует одну тяжелую цепь (или один полипептид, содержащий VH и цитокиновый фрагмент) и одну парную легкую цепь, или каждый вектор кодирует один полипептид иммуноцитокина.

IV. Способы получения

[336] Также предложены способы получения иммуноцитокинов, описанных в данном документе (например, иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокин Il-10/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CTLA- 4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD25 или иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен способ получения иммуноцитокина, включающий: (a) культивирование клетки-хозяина (например, клетки CHO, клетки HEK 293, клетки Hela или клетки COS), содержащей любую из нуклеиновых кислот или векторов, кодирующих иммуноцитокины, описанные в данном документе, в условиях, эффективных для экспрессии кодируемого иммуноцитокина; и (b) получение экспрессированного иммуноцитокина из указанной клетки-хозяина. В некоторых вариантах осуществления способ на стадии (а) дополнительно включает получение клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту или вектор, кодирующий иммуноцитокин, описанный в данном документе. Иммуноцитокин, описанный в данном документе, может быть получен с использованием любых способов, известных в данной области, или как описано в данном документе. Также см. иллюстративные способы в Примерах 1, 4, 5, 7, 9, 10 и 12. В некоторых вариантах осуществления экспрессия иммуноцитокинов происходит в эукариотических клетках, таких как клетки млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления экспрессия иммуноцитокинов происходит в прокариотических клетках.

1. Рекомбинантное продуцирование в прокариотических клетках

а) Конструирование вектора

[337] Последовательности полинуклеиновых кислот, кодирующие иммуноцитокины настоящего изобретения, можно получать с использованием стандартных рекомбинантных методик. Требуемые последовательности полинуклеиновых кислот можно выделять и секвенировать из клеток, продуцирующих антитела или иммуноцитокины, таких как гибридомные клетки. Альтернативно, полинуклеотиды можно синтезировать, используя синтезатор нуклеотидов или методы ПЦР. После их получения последовательности, кодирующие полипептиды, встраивают в рекомбинантный вектор, способный к репликации и экспрессии гетерологичных полинуклеотидов в прокариотических хозяевах. Для целей настоящего изобретения можно использовать многие доступные и известные в данной области векторы. Выбор подходящего вектора будет зависеть главным образом от размера нуклеиновых кислот, которые необходимо вставить в вектор, и от конкретной клетки-хозяина, которую нужно трансформировать вектором. Каждый вектор содержит различные компоненты в зависимости от его функции (амплификации или экспрессии гетерологичного полинуклеотида или обеих функций) и его совместимости с конкретной клеткой-хозяином, в которой он находится. Компоненты вектора обычно включают, но не ограничиваются ими: точку начала репликации, маркерный ген селекции, промотор, сайт связывания рибосомы (RBS), сигнальную последовательность, вставку гетерологичной нуклеиновой кислоты и последовательность терминации транскрипции.

[338] Обычно в связи с этими хозяевами используют плазмидные векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, полученные от видов, совместимых с клеткой-хозяином. Вектор обычно несет сайт репликации, а также маркирующие последовательности, которые способны обеспечить фенотипическую селекцию в трансформированных клетках. Например, E. coli обычно трансформируют с использованием pBR322 - плазмиды, полученной из видов E. coli. pBR322 содержит гены, кодирующие устойчивость к ампициллину (Amp) и тетрациклину (Tet), и, таким образом, предоставляет простые средства для идентификации трансформированных клеток. pBR322, его производные или другие микробные плазмиды или бактериофаги могут также содержать или их можно модифицировать так, чтобы оин содержали промоторы, которые могут утилизироваться микробным организмом для экспрессии эндогенных белков. Примеры производных pBR322, используемых для экспрессии конкретных антител, подробно описаны в Carter. и др., патент США. № 5648237.

[339] Кроме того, фаговые векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, совместимые с микроорганизмом-хозяином, можно использовать в качестве трансформирующих векторов для этих хозяев. Например, бактериофаг, такой как GEM™-11, можно использовать для создания рекомбинантного вектора, который применим для трансформации восприимчивых клеток-хозяев, таких как E. coli LE392.

[340] Вектор экспрессии настоящего изобретения может содержать две или более пар промотор-цистрон, кодирующих каждый из полипептидных компонентов. Промотор представляет собой нетранслируемую регуляторную последовательность, расположенную выше (5') к цистрону, который изменяет ее экспрессию. Прокариотические промоторы обычно делятся на два класса: индуцибельные и конститутивные. Индуцибельный промотор - это промотор, который инициирует повышенные уровни транскрипции цистрона под его контролем в ответ на изменения в условиях культивирования, например, на присутствие или отсутствие питательных веществ или изменение температуры.

[341] Хорошо известно большое количество промоторов, распознаваемых различными потенциальными клетками-хозяевами. Выбранный промотор можно функционально связать с ДНК цистрона, кодирующей полипептид, удаляя промотор из исходной ДНК путем расщепления рестрикционными ферментами и встраивая выделенную последовательность промотора в вектор согласно настоящему изобретению. Для прямой амплификации и/или экспрессии генов-мишеней можно использовать как нативную промоторную последовательность, так и многие гетерологичные промоторы. В некоторых вариантах осуществления используются гетерологичные промоторы, поскольку они обычно обеспечивают более высокую транскрипцию и более высокие выходы экспрессированного гена-мишени по сравнению с промотором нативного полипептида-мишени.

[342] Промоторы, подходящие для использования в прокариотических хозяевах, включают промотор PhoA, промоторные системы β-галактамазы и лактозы, промоторную систему триптофана (trp) и гибридные промоторы, такие как промотор tac или trc. Однако также подходят и другие промоторы, функционирующие в бактериях (например, другие известные бактериальные или фаговые промоторы). Последовательности их нуклеиновых кислот опубликованы, что позволяет квалифицированному специалисту оперативно связывать их с цистронами, кодирующими целевые легкие и тяжелые цепи (Siebenlist и др. (1980) Cell 20: 269) с использованием линкеров или адаптеров для обеспечения любых необходимых сайтов рестрикции.

[343] В некоторых вариантах осуществления каждый цистрон в рекомбинантном векторе содержит компонент сигнальной последовательности секреции, который направляет перемещение экспрессируемых полипептидов через мембрану. Как правило, сигнальная последовательность может быть компонентом вектора или частью ДНК полипептида-мишени, встроенной в вектор. Сигнальная последовательность, выбранная для целей настоящего изобретения, должна распознаваться и перерабатываться (т.е. расщепляться сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином. Для прокариотических клеток-хозяев, которые не распознают и не перерабатывают сигнальные последовательности, нативные для гетерологичных полипептидов, сигнальную последовательность заменяют прокариотической сигнальной последовательностью, выбранной, например, из группы, состоящей из щелочной фосфатазы, пенициллиназы, Ipp или теплоустойчивых лидеров энтеротоксина II (STII), LamB, PhoE, PelB, OmpA и MBP. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения сигнальные последовательности, используемые в обоих цистронах системы экспрессии, представляют собой сигнальные последовательности STII или их варианты.

[344] В некоторых вариантах осуществления продуцирование иммуноцитокина настоящго изобретения может происходить в цитоплазме клетки-хозяина и, следовательно, не требует присутствия сигнальных последовательностей секреции в каждом цистроне. В некоторых вариантах осуществления полипептидные компоненты экспрессируются, укладываются и собираются, образуя иммуноцитокин (или часть иммуноцитокина) в цитоплазме. Некоторые штаммы-хозяева (например, в штаммах E. coli trxB^-) имеют условия цитоплазмы, благоприятные для образования дисульфидных связей, тем самым обеспечивая правильную укладку и сборку субъединиц экспрессированного белка. См. Proba и Pluckthun, Gene, 159:203 (1995).

[345] Настоящее изобретение предлагает экспрессионную систему, в которой можно изменять количественное соотношение экспрессируемых полипептидных компонентов, чтобы максимизировать выход секретируемых и надлежащим образом собранных иммуноцитокинов настоящего изобретения. Такая модуляция достижима, по крайней мере частично, путем одновременного изменения силы трансляции полипептидных компонентов. Один из методов изменения силы трансляции раскрыт у Simmons и др., патент США. № 5840523. В этом методе используются варианты участка инициации трансляции (TIR) внутри цистрона. Для данного TIR можно создать серию вариантов последовательностей аминокислот или нуклеиновых кислот с диапазоном сил трансляции, тем самым обеспечивая удобные средства для корректировки этого фактора до желаемого уровня экспрессии конкретной цепи. Варианты TIR можно получать с помощью обычных методов мутагенеза, которые приводят к изменениям кодонов, которые могут изменить аминокислотную последовательность, хотя предпочтительны молчащие изменения в последовательности нуклеиновой кислоты. Изменения в TIR могут включать, например, изменения количества или интервалов между последовательностями Шайна-Дальгарно, наряду с изменениями в сигнальной последовательности. Одним из методов создания мутантных сигнальных последовательностей является создание «банка кодонов» в начале кодирующей последовательности, который не изменяет аминокислотную последовательность сигнальной последовательности (т.е.эти изменения являются молчащими). Этого можно добиться, изменив положение третьего нуклеотида каждого кодона; кроме того, некоторые аминокислоты, такие как лейцин, серин и аргинин, имеют несколько первых и вторых позиций, что может усложнить создание банка. Этот метод мутагенеза подробно описан у Yansura и др. (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158.

[346] Предпочтительно, создают набор векторов с диапазоном интенсивностей TIR для каждого цистрона в них. Этот ограниченный набор позволяет сравнивать уровни экспрессии каждой цепи, а также выход желаемых белковых продуктов при различных комбинациях силы TIR. Силу TIR можно определить путем количественного определения уровня экспрессии репортерного гена, как подробно описано у Simmons и др. Пат. США. № 5840523. На основании сравнения силы трансляции выбирают требуемые отдельные TIR, чтобы объединить их в конструкциях вектора экспрессии настоящего изобретения.

b) Прокариотические клетки-хозяева

[347] Прокариотические клетки-хозяева, подходящие для экспрессии иммуноцитокинов настоящего изобретения, включают архебактерии и эубактерии, такие как грамотрицательные или грамположительные организмы. Примеры полезных бактерий включают Escherichia (например, E. coli), Bacilli (например, B. subtilis), энтеробактерии, виды Pseudomonas (например, P. aeruginosa), Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Klebsiella, Proteus, Shigella, Rhizobia, Vitreoscilla или Рaracoccus. В некоторых вариантах осуществления используют грамотрицательные клетки. В некоторых вариантах осуществления E. coli клетки используют в качестве хозяев согласно данному изобретению. Примеры E. coli штаммы включают штамм W3110 (Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, округ Колумбия: American Society For Microbiology, 1987), стр. 1190-1219; ATCC Deposit 27325) и их производные, включая штамм 33D3, имеющий генотип W3110 AFhuA (AtonA) ptr3 lac Iq lacL8 AompT A(nmpc-FepE) degP41 kan^р (патент США. № 5639635). Также подходят и другие штаммы и их производные, такие как E. coli 294 (ATCC 31,446), E. coli B, E. coli 1776 (ATCC 31,537) и E. coli RV308 (ATCC 31,608). Эти примеры являются иллюстративными, а не ограничивающими. Способы конструирования производных любой из вышеупомянутых бактерий с определенным генотипом известны в данной области и описаны, например, у Bass и др., Proteins, 8:309-314 (1990). Как правило, необходимо выбрать подходящие бактерии с учетом воспроизводимости репликона в клетках бактерии. Например, виды E. coli, Serratia или Salmonella подходят для использования в качестве хозяина, если в качестве источника репликона используют такие хорошо известные плазмиды, как pBR322, pBR325, pACYC177 или pKN410.

[348] Обычно клетка-хозяин должна секретировать минимальные количества протеолитических ферментов, а в клеточную культуру желательно включать дополнительные ингибиторы протеазы.

с) Продуцирование белка

[349] Клетки-хозяева трансформируют описанными выше векторами экспрессии и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных соответствующим образом, чтобы индуцировать промоторы, отбирать трансформанты или амплифицировать гены, кодирующие требуемые последовательности. Трансформация означает введение ДНК в прокариотического хозяина таким образом, чтобы ДНК реплицировалась либо как внехромосомный элемент, либо как хромосомный интегрант. В зависимости от используемой клетки-хозяина трансформацию проводят с использованием стандартных методик, подходящих для таких клеток. Обработку кальцием с использованием хлорида кальция обычно используют в случае бактериальных клеток, у которых клеточная стенка представляет собой существенный барьер. В другом методе трансформации используется полиэтиленгликоль/ДМСО. Еще одной используемой методикой является электропорация.

[350] Клетки-хозяева трансформируют описанными выше векторами экспрессии и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных соответствующим образом, чтобы индуцировать промоторы, отбирать трансформанты или амплифицировать гены, кодирующие требуемые последовательности. Трансформация означает введение ДНК в прокариотического хозяина таким образом, чтобы ДНК реплицировалась либо как внехромосомный элемент, либо как хромосомный интегрант. В зависимости от используемой клетки-хозяина трансформацию проводят с использованием стандартных методик, подходящих для таких клеток. Обработку кальцием с использованием хлорида кальция обычно используют в случае бактериальных клеток, у которых клеточная стенка представляет собой существенный барьер. В другом методе трансформации используется полиэтиленгликоль/ДМСО. Еще одной используемой методикой является электропорация.

[351] Прокариотические клетки, используемые для получения иммуноцитокинов настоящего изобретения, выращивают в среде, известной в данной области и подходящей для культивирования выбранных клеток-хозяев. Примеры подходящих сред включают среду Лурия (LB) с добавкой необходимых питательных веществ. В некоторых вариантах осуществления среда также содержит селективный реагент, выбранный на основе конструкции экспрессионного вектора, чтобы избирательно стимулировать рост прокариотических клеток, содержащих вектор экспрессии. Например, ампициллин добавляют в среду для роста клеток, экспрессирующих ген устойчивости к ампициллину.

[352] Можно также вводить в соответствующих концентрациях любые необходимые добавки помимо источников углерода, азота и неорганических фосфатов, отдельно или в смеси с другой добавкой или средой, такой как комплексный источник азота. Культуральная среда необязательно может содержать один или несколько восстанавливающих реагентов, выбранных из группы, состоящей из глутатиона, цистеина, цистамина, тиогликолята, дитиоэритрита и дитиотреитола. Прокариотические клетки-хозяева культивируют при подходящих температурах. Для роста E. coli, например, предпочтительная температура находится в пределах от примерно 20°С до примерно 39°С, более предпочтительно - от примерно 25°С до примерно 37°С, еще более предпочтительно - примерно 30°С. рН среды может быть любым в пределах от примерно 5 до примерно 9, обычно это зависит от организма-хозяина. Для E. coli рН предпочтительно составляет от примерно 6,8 до примерно 7,4 и более предпочтительно - примерно 7,0.

[353] Если в векторе экспрессии настоящего изобретения используется индуцируемый промотор, то экспрессию белка индуцируют в условиях, подходящих для активации промотора. В одном аспекте настоящей заявки для контроля транскрипции полипептидов используют промоторы PhoA. Соответственно, трансформированные клетки-хозяева для целей индукции культивируют в фосфатно-лимитирующей среде. Предпочтительно фосфат-лимитирующая среда представляет собой среду C.R.A.P. (см., например, Simmons и др., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147). Можно использовать множество других индукторов в соответствии с используемой векторной конструкцией, как известно в данной области.

[354] Экспрессированные иммуноцитокины настоящего изобретения секретируются в периплазму клеток-хозяев и извлекаются из нее. Восстановление белка обычно включает разрушение микроорганизма, как правило, такими средствами, как осмотический шок, обработка ультразвуком или лизис. После разрушения клеток клеточный детрит или целые клетки можно удалить центрифугированием или фильтрованием. Белки можно дополнительно очищать, например, с помощью хроматографии на аффинной смоле. Альтернативно, белки можно переносить в культуральную среду и выделять из нее. Клетки можно удалять из культуры, а надосадочную жидкость культуры отфильтровывать и концентрировать для дальнейшей очистки полученных белков. Экспрессированные полипептиды можно дополнительно выделять и идентифицировать, используя общеизвестные методы, такие как электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) и вестерн-блоттинг.

[355] В качестве альтернативы производство белка в больших количествах осуществляют, используя процесс ферментации. Для производства рекомбинантных белков применяют различные крупномасштабные процессы периодической ферментации с подпиткой. Объем крупномасштабной ферментации составляет не менее 1000 литров, предпочтительно - от 1000 до 100000 литров. В этих биореакторах используют лопастные мешалки для более равномерного распределения кислорода и питательных веществ, особенно глюкозы (предпочтительного источника углерода/энергии). Ферментация в малых масштабах обычно относится к ферментации в биореакторе, полезный объем которого составляет не более примерно 100 литров и может варьироваться от примерно 1 литра до примерно 100 литров.

[356] Во время процесса ферментации индукция экспрессии белка обычно инициируется после того, как клетки выращены в подходящих условиях до желаемой плотности, например, до OD₅₅₀ примерно 180-220, на этой стадии клетки находятся в ранней стационарной фазе. В зависимости от используемой векторной конструкцией можно использовать различные индукторы, известные в данной области и описанные выше. Клетки можно выращивать в течение более коротких периодов до индукции. Клетки обычно индуцируют в течение примерно 12-50 часов, хотя можно использовать более продолжительный или менее продолжительный период индукции.

[357] Чтобы улучшить выход продуцирования и качество иммуноцитокинов настоящего изобретения, можно изменить различные условия ферментации. Например, для улучшения правильной сборки и укладки секретируемых полипептидов можно использовать дополнительные векторы, сверхэкспрессирующие белки-шапероны, такие как белки Dsb (DsbA, DsbB, DsbC, DsbD или DsbG) или FkpA (пептидилпролил-цис, транс-изомераза с шаперонной активностью), можно использовать для совместной трансформации прокариотических клеток-хозяев. Было продемонстрировано, что белки-шапероны облегчают правильную укладку и растворимость гетерологичных белков, продуцируемых в бактериальных клетках-хозяевах. Chen и др. (1999) J Bio Chem 274:19601-19605; Georgiou и др., пат. США № 6,083,715; Georgiou и др., пат. США № 6,027,888; Bothmann и Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105; Ramm и Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113; Arie и др. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210.

[358] Чтобы свести к минимуму протеолиз экспрессированных гетерологичных белков (особенно тех, которые протеолитически чувствительны), для настоящего изобретения можно использовать определенные штаммы-хозяева, дефицитные в отношении протеолитических ферментов. Например, штаммы клеток-хозяев можно модифицировать для осуществления генетической мутации (мутаций) в генах, кодирующих известные бактериальные протеазы, такие как протеаза III, OmpT, DegP, Tsp, протеаза I, протеаза Mi, протеаза V, протеаза VI и их комбинации. Некоторый штаммы E. coli с дефицитом протеазы доступны и описаны, например, в Joly и др. (1998), см. выше; Georgiou и др., патент США № 5264365; Georgiou и др., патент США № 5508192; Hara и др., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996).

[359] Штаммы E. coli, дефицитные по протеолитическим ферментам и трансформированные плазмидами, сверхэкспрессирующими один или несколько белков-шаперонов, можно использовать в качестве клеток-хозяев в системе экспрессии, кодирующей иммуноцитокины настоящего изобретения.

d) Очистка белков

[360] Иммуноцитокины, полученные согласно данному документе, дополнительно очищают для получения практически гомогенных препаратов для дальнейших анализов и применения. Можно использовать стандартные методы очистки белка, известные в данной области. Следующие процедуры являются примерами подходящих процедур очистки: фракционирование на иммуноаффинных или ионообменных колонках, осаждение этанолом, ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматография на силикагеле или на катионообменной смоле, такой как DEAE, хроматофокусирование, SDS-PAGE, осаждение сульфатом аммония и гель-фильтрация с использованием, например, Sephadex G-75.

[361] В некоторых вариантах осуществления белок А, иммобилизованный на твердой фазе, используют для иммуноаффинной очистки иммуноцитокинов, содержащих Fc-участок настоящего изобретения. Белок А представляет собой поверхностный белок с молекулярной массой 42 кДа из Staphylococcus aureus, который связывается с высоким сродством с конструкциями, содержащими Fc, например, составными белками антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, антителами или иммуноцитокинами, описанными в данном документе. Lindmark и др. (1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13. Твердая фаза, на которой иммобилизован белок А, предпочтительно представляет собой колонку, содержащую поверхность из стекла или кремнезема, более предпочтительно - стеклянную колонку с контролируемым размером пор или колонку с кремниевой кислотой. В некоторых случаях колонку покрывают реагентом, например глицерином, чтобы предотвратить неспецифичное прилипание загрязняющих веществ. Затем твердую фазу промывают для удаления загрязняющих веществ, неспецифично связанных с твердой фазой. Наконец, представляющие интерес иммуноцитокины выделяют из твердой фазы путем элюирования.

2. Рекомбинантное продуцирование в эукариотических клетках

[362] Для эукариотической экспрессии компоненты вектора обычно включают, но не ограничиваются ими, одну или несколько из следующего: сигнальную последовательность, точку начала репликации, один или несколько маркерных генов и энхансерный элемент, промотор и последовательность терминации транскрипции.

а) Компонент сигнальной последовательности

[363] Вектор для применения в эукариотическом хозяине может также содержать вставку, кодирующую сигнальную последовательность или другой полипептид, имеющий специфический сайт расщепления на N-конце зрелого белка или полипептида. Выбранная гетерологичная сигнальная последовательность должна распознаваться и перерабатываться (т.е. расщепляться сигнальной пептидазой) клеткой-хозяином. При экспрессии в клетках млекопитающих можно применять сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например, сигнальную последовательность gD простого герпеса. ДНК для такого участка-предшественника соединяют в рамке считывания с ДНК, кодирующей иммуноцитокины настоящего изобретения.

b) Начало репликации

[364] Как правило, для векторов экспрессии млекопитающих компонент начала репликации не требуется (обычно можно использовать источник SV40 только потому, что он содержит ранний промотор).

c) Компонент селективного гена

[365] Векторы экспрессии и клонирования могут содержать селективный ген, также называемый селектируемым маркером. Типичные селективные гены кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например, ампициллину, неомицину, метотрексату или тетрациклину, (b) восполняют дефицит ауксотрофов или (c) обеспечивают критически важные питательные вещества, недоступные из сложных сред, например, ген, кодирующий D-аланинрацемазу в Bacilli.

[366] В одном примере в схеме отбора используют лекарственное средство, останавливающее рост клетки-хозяина. Те клетки, которые успешно трансформировались гетерологичным геном, продуцируют белок, придающий лекарственную устойчивость, и, таким образом, выживают в условиях отбора. Примерами такой доминантного отбора являются лекарственные средства неомицин, микофеноловая кислота и гигромицин.

[367] Другим примером подходящих селектируемых маркеров для клеток млекопитающих являются те, которые позволяют идентифицировать клетки, способные поглощать нуклеиновую кислоту, кодирующую иммуноцитокины настоящего изобретения, такие как DHFR, тимидинкиназа, металлотионеин-I и -II, предпочтительно гены металлотионеина приматов, аденозиндезаминаза, орнитиндекарбоксилаза и др.

[368] Например, клетки, трансформированные геном селекции DHFR, сначала идентифицируют путем культивирования всех трансформантов в культуральной среде, содержащей метотрексат (Mtx), конкурентный антагонист DHFR. Подходящей клеткой-хозяином при использовании DHFR дикого типа является клеточная линия яичника китайского хомячка (CHO), дефицитная по активности DHFR, например, ATCC CRL-9096).

[369] Альтернативно, клетки-хозяева (особенно хозяева дикого типа, которые содержат эндогенный DHFR), трансформированные или совместно трансформированные последовательностями ДНК, кодирующими полипептид, белок DHFR дикого типа и другой селектируемый маркер, такой как аминогликозид-3'-фосфотрансфераза (APH), можно отбирать по росту клеток в среде, содержащей реагент для отбора селектируемого маркера, такой как аминогликозидный антибиотик, например, канамицин, неомицин или G418. См. пат. США. № 4965199.

d) Промоторный компонент

[370] Векторы экспрессии и клонирования обычно содержат промотор, который распознается организмом-хозяином и функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей требуемые полипептидные последовательности. Практически все эукариотические гены имеют обогащенную АТ область, расположенную примерно на 25-30 нуклеотидов выше от сайта, где инициируется транскрипция. Другая последовательность, обнаруженная на 70-80 оснований выше начала транскрипции многих генов, представляет собой область CNCAAT, где N может быть любым нуклеотидом. На 3'-конце большинства эукариот находится последовательность ААТААА, которая может быть сигналом для добавления поли-А-хвоста к 3'-концу кодирующей последовательности. Все эти последовательности можно вставлять в эукариотические векторы экспрессии. См. также подраздел «Промоутеры» в разделе «III. Векторы, кодирующие иммуноцитокины», выше.

[371] Транскрипция полипептидов из векторов в клетках-хозяевах млекопитающих контролируют, например, с помощью промоторов, полученных из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус куриной оспы, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус птичьей саркомы, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и, наиболее предпочтительно, обезьяний вирус 40 (SV40), из гетерологичных промоторов млекопитающих, например, промотора актина или промотора иммуноглобулина, из промоторов ответа на тепловой шок при условии, что такие промоторы совместимы с системами клеток-хозяев.

[372] Ранние и поздние промоторы вируса SV40 удобно получать в виде рестрикционного фрагмента SV40, который также содержит точку начала репликации вируса SV40. Непосредственно ранний промотор цитомегаловируса человека удобно получать в виде рестрикционного фрагмента HindIII E. Система для экспрессии ДНК в хозяевах-млекопитающих с использованием вируса папилломы крупного рогатого скота в качестве вектора раскрыта в патенте США № 4419446. Модифицирование этой системы описано в патенте США № 4601978. См. также Reyes и др., Nature 297:598-601 (1982) об экспрессии кДНК человеческого интерферона в клетках мыши под контролем промотора тимидинкиназы вируса простого герпеса. Альтернативно, в качестве промотора можно использовать длинный терминальный повтор вируса саркомы Рауса.

e) Компонент элемента энхансера

[373] Транскрипцию ДНК, кодирующей иммуноцитокины настоящего изобретения, высшими эукариотами часто усиливают путем вставки в вектор энхансерной последовательности. В настоящее время известны многие энхансерные последовательности из генов млекопитающих (глобин, эластаза, альбумин, α-фетопротеин и инсулин). Однако обычно используют энхансер из вируса эукариотической клетки. Примеры включают энхансер SV40 на участке позднего начала репликации (100-270 п.н.), энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиомы на участке позднего начала репликации и энхансеры аденовируса. См. также Yaniv, Nature 297:17-18 (1982) об элементах энхансеров для активации эукариотических промоторов. Энхансер можно сплайсировать в вектор в положении 5' или 3' по отношению к последовательности, кодирующей полипептид, но предпочтительно расположен в положении 5' по отношению к промотору.

F) Компонент терминации транскрипции

[374] Векторы экспрессии, используемые в эукариотических клетках-хозяевах (из дрожжей, грибов, насекомых, растений, животных, человека или ядросодержащих клеток других многоклеточных организмов), также содержат последовательности, необходимые для терминации транскрипции и для стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно доступны из 5'- и иногда 3'-нетранслируемых областей эукариотических или вирусных ДНК или кДНК. Эти области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые в виде полиаденилированных фрагментов в нетранслируемой части мРНК, кодирующей полипептид. Одним из полезных компонентов терминации транскрипции является область полиаденилирования бычьего гормона роста. См. WO 94/11026 и раскрытый в ней вектор экспрессии.

g) Отбор и трансформация клеток-хозяев

[375] Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии ДНК в векторах, описанных в данном документе, включают клетки высших эукариот, описанные в данном документе, включая клетки-хозяева позвоночных. Размножение клеток позвоночных в культуре (тканевой культуре) стало рутинной процедурой. Примерами пригодных линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия CV1 почки обезьяны, трансформированная с использованием SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); линия эмбриональной почки человека (клетки 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham и др., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); клетки почек детенышей хомячков (BHK, ATCC CCL 10); клетки яичника китайского хомячка/-DHFR (CHO, Urlaub и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); клетки Сертоли мыши (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); клетки почки обезьяны (CV1 ATCC CCL 70); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76, ATCC CRL-1587); клетки карциномы шейки матки человека (HELA, ATCC CCL 2); клетки почек собак (MDCK, ATCC CCL 34); клетки печени крысы линии BuFFalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); клетки легкого человека (W138, ATCC CCL 75); клетки печени человека (Hep G2, HB 8065); опухоль молочной железы мыши (MMT 060562, ATCC CCL51); клетки TR1 (Mather и др., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); клетки MRC 5; клетки FS4; и линия гепатомы человека (Hep G2).

[376] Клетки-хозяева трансформируют описанными выше векторами экспрессии или клонирования для продуцирования иммуноцитокинов и культивируют в обычных питательных средах, модифицированных соответствующим образом для индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих желаемые последовательности.

h) Культивирование клеток-хозяев

[377] Клетки-хозяева, используемые для получения иммуноцитокинов настоящего изобретения, можно культивировать в различных средах. для культивирования клеток-хозяев подходят поступающие в продажу среды, такие как Ham's F10 (Sigma), минимальная питательная среда ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) и среда Игла, модифицированная по Дульбекко ((DMEM), Sigma). Кроме того, любая из сред, описанных в Ham и др., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes и др., Anal. Biochem. 102:255 (1980), патентах США №№ 4767704; 4657866; 4927762; 4560655 или 5122469; WO 90/03430; WO 87/00195; или патенте США Re. 30985, можно использовать в качестве питательной среды для клеток-хозяев. Любую из этих сред при необходимости можно дополнять гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальция, магния и фосфата), буферами (такими как HEPES), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как лекарственное средство GENTAMYCIN™), микроэлементами (определяемыми как неорганические соединения, конечная концентрация которых обычно находится в микромолярном диапазоне) и глюкозой или эквивалентными источниками энергии. Любые другие необходимые добавки также можно включать в соответствующих концентрациях, которые известны специалистам в данной области. Для культивирования применяют условия, такие как температура, рН и т.п., которые ранее использовались для клетки-хозяина, выбранной для экспрессии, и они очевидны для специалиста средней квалификации в данной области.

i) Очистка белка

[378] При использовании рекомбинантных методов иммуноцитокин может продуцироваться внутриклеточно, в периплазматическом пространстве или вырабатываться непосредственно в среду. Если иммуноцитокин продуцируется внутриклеточно, то в качестве первого шага частицы клеточного детрита - либо клеток-хозяев, либо лизированные фрагменты - удаляют, например, центрифугированием или ультрафильтрацией. Carter и др., Bio/Technology 10:163-167 (1992) описывают процедуру выделения антител, которые вырабатываются в периплазматическое пространство E. coli. Вкратце, клеточную пасту размораживают в присутствии ацетата натрия (рН 3,5), ЭДТА и фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ) в течение примерно 30 минут. Клеточный детрит можно удалить центрифугированием. Если иммуноцитокин вырабатывается в среду, надосадочные жидкости из таких систем экспрессии обычно сначала концентрируют с использованием имеющегося в продаже фильтра для концентрирования белков, например, устройства для ультрафильтрации Amicon или Millipore Pellicon. Ингибитор протеазы, такой как PMSF, можно вводить на любой из вышеперечисленных стадий для ингибирования протеолиза, а антибиотики можно вносить для предотвращения роста посторонних примесей.

[379] Белковую композицию, полученную из клеток, можно очистить, используя, например, хроматографию на гидроксиапатите, гель-электрофорез, диализ и аффинную хроматографию, при этом аффинная хроматография является предпочтительной методикой очистки. Пригодность белка А в качестве аффинного лиганда зависит от вида и изотипа любого Fc-домена иммуноглобулина, который присутствует в иммуноцитокине. Белок А можно использовать для очистки иммуноцитокинов, составных белков антигенсвязывающего фрагмента и Fc, или антител на основе иммуноглобулинов человека, содержащих 1, 2 или 4 тяжелых цепи (Lindmark и др., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)). Белок G рекомендуется для всех мышиных изотипов мышей и для человеческих изотипов γ3 (Guss и др., EMBO J. 5:15671575 (1986)). Матрица, к которой присоединен аффинный лиганд, чаще всего представляет собой агарозу, но можно использовать и другие доступные матрицы. Механически стабильные матрицы, такие как стекло с регулируемыми порами или поли(стирол-дивинил)бензол, обеспечивают более высокую скорость потока и более короткое время обработки, чем скорости, которые можно достичь при использовании агарозы. Если иммуноцитокин содержит C_Н3, то для очистки можно использовать смолу Bakerbond ABXTM (J.T. Baker, Phillipsburg, Нью-Джерси). Можно использовать другие методы очистки белка, такие как фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматография на силикагеле, хроматография на гепарине SEPHAROSE™, хроматография на анионообменной или катионообменной смоле (такой как колонка с полиаспарагиновой кислотой), хроматофокусирование, SDS-PAGE и осаждедние сульфатом аммония, в зависимости от иммуноцитокина, который необходимо восстановить.

[380] После любой предварительной(ых) стадии(й) очистки смесь, содержащая представляющий интерес иммуноцитокин и примеси, можно подвергать хроматографии с гидрофобным взаимодействием при низком рН с использованием элюирующего буфера при рН примерно 2,5-4,5, которую предпочтительно проводят при низких концентрациях соли (например, примерно от 0-0,25 М соли).

V. Фармацевтические составы

[381] Далее предложены фармацевтические составы, содержащие любые из иммуноцитокинов, описанных в данном документе (например, иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокин Il-10/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD25 или иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc) и, необязательно, фармацевтически пригодный носитель. Фармацевтические составы можно приготовить путем смешивания описанного здесь иммуноцитокина, имеющего желаемую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Также предложены противораковые вакцины, содержащие любой из описанных здесь иммуноцитокинов, или их фармацевтические составы.

[382] Восстановленный препарат можно приготовить путем растворения описанного здесь лиофилизированного иммуноцитокина в разбавителе таким образом, чтобы белок был диспергирован в нем. Типичные фармацевтически приемлемые (безопасные и нетоксичные для введения человеку) разбавители, подходящие для использования в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-солевой буфер), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы или водные растворы солей и/или буферы.

[383] В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав содержит гомогенную популяцию иммуноцитокинов, описанных в данном документе. Однородная популяция означает, что иммуноцитокины полностью идентичны друг другу, например, имеют одинаковую конфигурацию иммуноцитокина, одинаковый цитокиновый фрагмент, одни и те же антигенсвязывающие фрагменты (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или Fab), один и тот же линкер, если таковой имеется, один и тот же шарнирный участок и один и тот же Fc-домен. В некоторых вариантах осуществления не менее примерно 70 % (например, не менее примерно 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%) иммуноцитокинов в фармацевтическом составе являются однородными.

[384] Предпочтительный фармацевтический состав должен быть стабильным, при этом иммуноцитокин в нем практически полностью сохраняет свою физическую и химическую стабильность и целостность при хранении. В данной области техники доступны различные аналитические методики для измерения стабильности белка, и они рассмотрены в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, Нью-Йорк, Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993). Стабильность можно измерить при выбранной температуре в течение выбранного периода времени. Для ускоренного испытания препарат можно хранить при 40°С от 2 недель до 1 месяца, после чего измерять стабильность за этот период. Если препарат будет храниться при температуре 2-8°С, обычно состав должен быть стабилен при 30°С или 40°С в течение по крайней мере 1 месяца и/или стабилен при 2-8°С в течение по крайней мере 2 лет. Если препарат будет храниться при 30°С, обычно состав должен быть стабилен в течение по крайней мере 2 лет при 30°С и/или стабилен при 40°С в течение по крайней мере 6 месяцев. Например, в качестве индикатора стабильности белка при хранении можно использовать степень агрегации. В некоторых вариантах осуществления стабильный препарат иммуноцитокинов, описанный в данном документе, может содержать менее примерно 10% (предпочтительно менее примерно 5%) иммуноцитокинов, присутствующих в препарате в виде агрегата.

[385] Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы нетоксичны для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту, метионин, витамин Е, метабисульфит натрия; консерванты, изотонические вещества (например, хлорид натрия), стабилизаторы, комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); хелатирующие агенты, такие как ЭДТА и/или неионогенные поверхностно-активные вещества.

[386] Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и содержащие другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония, хлорид гексаметония, хлорид бензалкония, хлорид бензетония, фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен, катехол, резорцин, циклогексанол, 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярный (менее примерно 10 остатков) полипептид; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; металлокомплексы (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, полиэтиленгликоль (PEG) и PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (PEG).

[387] Буферы используются для регулирования рН в диапазоне, оптимизирующем терапевтическую эффективность, особенно если стабильность зависит от рН. Буферы предпочтительно присутствуют в концентрациях от примерно 50 мМ до примерно 250 мМ. Подходящие буферные средства для использования в настоящем изобретении включают как органические, так и неорганические кислоты и их соли. Например, цитрат, фосфат, сукцинат, тартрат, фумарат, глюконат, оксалат, лактат, ацетат. Кроме того, буферы могут содержать соли гистидина и триметиламина, такие как Tris.

[388] Консерванты добавляются для замедления роста микробов и обычно присутствуют в пределах от 0,2% до 1,0% (масса/объем). Добавление консерванта может, например, облегчить получение многоразового (многодозового) препарата. Подходящие консерванты для использования в настоящем изобретении включают хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; галогениды бензалкония (например, хлорид, бромид, йодид), бензетония хлорид; тимеросал, фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол, 3-пентанол и м-крезол.

[389] Средства, повышающие тоничность, иногда называемые «стабилизаторами», присутствуют для регулирования или поддержания тонуса жидкости в составе. При использовании с большими заряженными биомолекулами, такими как белки и антитела, их часто называют «стабилизаторами», поскольку они могут взаимодействовать с заряженными группами боковых цепей аминокислот, тем самым уменьшая возможность меж- и внутримолекулярных взаимодействий. Средства, повышающие тоничность, могут присутствовать в любом количестве от 0,1% до 25% по массе, предпочтительно от 1% до 5%, от содержания других ингредиентов. Предпочтительные средства, повышающие тоничность, включают многоатомные сахароспирты, предпочтительно трехатомные или более высокие сахароспирты, такие как глицерин, эритрит, арабит, ксилит, сорбит и маннит.

[390] Дополнительные вспомогательные вещества включают средства, которые могут выполнять одну или несколько из следующих функций: (1) наполнители, (2) усилители растворимости, (3) стабилизаторы и (4) и средства, предотвращающие денатурацию или прилипание к стенке контейнера. Такие вспомогательные вещества включают: многоатомные сахарные спирты (перечислены выше); аминокислоты, такие как аланин, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин, лизин, орнитин, лейцин, 2-фенилаланин, глутаминовая кислота, треонин и т.д.; органические сахара или сахарные спирты, такие как сахароза, лактоза, лактит, трегалоза, стахиоза, манноза, сорбоза, ксилоза, рибоза, рибит, миониситоза, миоинизитол, галактоза, галактит, глицерин, циклиты (например, инозитол), полиэтиленгликоль; серосодержащие восстановители, такие как мочевина, глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолят натрия, тиоглицерин, α-монотиоглицерин и тиосульфат натрия; низкомолекулярные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин, желатин или другие иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; моносахариды (например, ксилоза, манноза, фруктоза, глюкоза; дисахариды (например, лактоза, мальтоза, сахароза); трисахариды, такие как раффиноза; и полисахариды, такие как декстрин или декстран.

[391] Неионогенные поверхностно-активные вещества или детергенты (также известные как «смачивающие вещества») присутствуют, чтобы способствовать солюбилизации иммуноцитокинов, а также предотвратить агрегацию иммуноцитокинов, вызываемую перемешиванием, что также позволяет препарату подвергаться поверхностному напряжению сдвига, не вызывая денатурации активных иммуноцитокинов. Неионогенные поверхностно-активные вещества (ПАВ) присутствуют в пределах концентраций от примерно 0,05 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл, предпочтительно - от примерно 0,07 мг/мл до примерно 0,2 мг/мл.

[392] Подходящие неионогенные ПАВ включают полисорбаты (20, 40, 60, 65, 80 и т.д.), полоксамеры (184, 188 и т.д.), полиолы PLURONIC®, TRITON®, моноэфиры полиоксиэтиленсорбитана (TWEEN®-20, TWEEN®-80 и т.д.), лауромакрогол 400, полиоксил 40 стеарат, полиоксиэтилен гидрогенизированное касторовое масло 10, 50 и 60, моностеарат глицерина, эфир сахарозы и жирной кислоты, метилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза. Анионные ПАВ, пригодные для использования, включают лаурилсульфат натрия, диоктилсульфосукцинат натрия и диоктилсульфонат натрия. Катионные ПАВ включают хлорид бензалкония или хлорид бензетония.

[393] Фармацевтические составы должны быть стерильными, чтобы их можно было применять для введения in vivo. Фармацевтический состав можно сделать стерильным с помощью фильтрации через стерилизующие фильтрационные мембраны. Фармацевтические составы настоящего изобретения обычно помещают в контейнер, имеющий стерильное отверстие для доступа, например, пакет для внутривенного раствора или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожных инъекций.

[394] Можно изготавливать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антагонист, причем матрицы имеют вид формованных изделий, например, пленки или микрокапсулы. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт)), полилактиды (пат. США № 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и этил-L-глутамата, неразлагаемый этилен-винилацетат, разлагаемые сополимеры молочной и гликолевой кислот, такие как LUPRON DEPOT™ (инъекционные микросферы, состоящие из сополимера молочной и гликолевой кислот и ацетата лейпролида) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляная кислота.

[395] Фармацевтические составы в данном документе могут также содержать более одного активного соединения, если это необходимо для лечения конкретного показания, предпочтительно, чтобы это были соединения с дополняющей активностью, которые не оказывают неблагоприятного воздействия друг на друга. Альтернативно или дополнительно состав может содержать цитотоксическое средство, химиотерапевтическое средство, цитокин, иммунодепрессант или средство-ингибитор роста. Такие молекулы подходящим образом присутствуют в комбинации в количествах, которые эффективны для намеченной цели.

[396] Активные ингредиенты также можно заключать в микрокапсулы, приготовленные, например, методами коацервации или межфазной полимеризации, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметакрилатные) микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы), микросферы альбумина, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики раскрыты в Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition.

[397] В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав содержится в одноразовом флаконе, таком как одноразовый запечатанный флакон. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав содержится во флаконе многократного использования. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав содержится в контейнере без упаковки. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав криоконсервируют.

VI. Методы лечения заболеваний или направления активности цитокинов

[398] Иммуноцитокины, описанные в данном документе (например, иммуноцитокин IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокин Il-10/антитело к CD4, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокин IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокин IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокин IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокин IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CTLA- 4, иммуноцитокин IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокин IFN-α/антитело к CD25 или иммуноцитокин IFN-α/PD-L2-Fc) и их составы (например, фармацевтические составы) найдут различные применения, например, в диагностике, молекулярных анализах и терапии. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения заболевания (например, рака, инфекции, такой как вирусная инфекция, аутоиммунного заболевания, аллергии, отторжения трансплантата или БТПХ) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из описанных здесь иммуноцитокинов или их фармацевтических составов. В некоторых вариантах осуществления также предложен способ избирательного стимулирования активности цитокина или его варианта (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов, описанных в данном документе, или их фармацевтических составов, где активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании иммуноцитокина с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления индивидуум ранее проходил лечение любым из иммуноцитокинов, описанных в данном документе, или их фармацевтическим составом против рака, и лечение включает предотвращение рецидива рака у индивидуума. В некоторых вариантах осуществления лечение включает профилактику рака у индивидуума, независимо от того, был ли у индивидуума ранее рак или нет, проходил ли он лечение иммуноцитокинами, описанными в данном документе, или нет. В некоторых вариантах осуществления также предложен способ профилактики рака у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества любого из описанных здесь иммуноцитокинов, содержащего их фармацевтического состава или противораковой вакцины.

[399] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения заболевания (например, рака, инфекции, такой как вирусная инфекция, аутоиммунного заболевания, аллергии, БТПХ или отторжения трансплантата) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина, содержащего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий целевой антиген (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него); и необязательно фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения заболевания (например, рака, инфекции, такой как вирусная инфекция, аутоиммунного заболевания, аллергии, БТПХ или отторжения трансплантата) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина, содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленное с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи; и необязательно фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения заболевания (например, рака, инфекции, такой как вирусная инфекция, аутоиммунного заболевания, аллергии, БТПХ или отторжения трансплантата) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина, содержащего: а) антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно CH1-домен, цитокин или его вариант в шарнирном участке, CH2-домен и необязательно CH3-домен; и необязательно фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения заболевания (например, рака, инфекции, такой как вирусная инфекция, аутоиммунного заболевания, аллергии, БТПХ или отторжения трансплантата) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количество иммуноцитокина, содержащего: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8 ); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, причем цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и необязательно фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели.

[400] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетки плазмы, макрофаги) у индивидуума или путем избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокинов IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокинов IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокинов IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокинов IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IF N-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL- 10/антитело к CD25, иммуноцитокины IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IFN-α/PD-L2-Fc, описанных в данном документе, или содержащего их фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, Dc-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума или путем избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1 , PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N', на C' или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума или путем избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума или путем избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, HER2, PD-1, CD123, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, причем цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из рака легкого, рака печени, рака почки, колоректального рака, рака яичников, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака желчных протоков, плоскоклеточного рака, рака мочевого пузыря, рака пищевода, мезотелиомы, меланомы, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, саркомы, рака предстательной железы, глиобластомы, рака шейки матки, карциномы тимуса, лейкемии, лимфомы, миеломы, грибовидных микозов и рака из клеток Меркеля.

[401] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека) или способ избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень на раковой клетке (например, любой опухолевый антиген, такой как HER2, любой лиганд или рецептор на поверхности раковой клетки, или любую молекулу контрольной точки иммунной системы, экспрессируемую на раковых клетках, такую как PD-L1 или PD-L2) из раковой клетки; и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант , где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или вариант его расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека) или способ избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень на раковой клетке (например, любой опухолевый антиген, такой как HER2, любой лиганд или рецептор на поверхности раковой клетки, или любая молекула контрольной точки иммунной системы, экспрессируемая на раковых клетках, такая как PD-L1 или PD-L2) раковой клетки; и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и при этом цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека) или способ избирательного направления цитокиновой активности на раковую клетку у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), выбранного из группы, состоящей из: иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-L1 и иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-L1. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из рака легкого, рака печени, рака почки, колоректального рака, рака яичников, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака желчных протоков, плоскоклеточного рака, рака мочевого пузыря, рака пищевода, мезотелиомы, меланомы, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, саркомы, рака предстательной железы, глиобластомы, рака шейки матки, карциномы тимуса, лейкемии, лимфомы, миеломы, грибовидных микозов и рака из клеток Меркеля. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой HER2+ рак, такой как HER2+ рак молочной железы. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак PD-L1+ и/или PD-L2+.

[402] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, человека) или способ избирательного направления активности цитокинов на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень на иммунной клетке (например, любой антиген на поверхности иммунной клетки, такой как CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25, или любую молекулу контрольной точки иммунного ответа, экспрессированную на иммунных клетках, такую как PD-1 или CTLA-4); и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, человека) или способ избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащего только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень на иммунной клетке (например, любой иммунной антиген на поверхности клетки, такой как CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25, или любую молекулу контрольной точки иммунного ответа, экспрессируемую на иммунных клетках, такую как PD-1 или CTLA-4); и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и при этом цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у индивидуума (например, у человека) или способ избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), выбранного из группы, состоящей из: иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL- 2/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-α /антитело к CD4, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-2/PD -L2-Fc, иммуноцитокина IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-γ/PD-L2-Fc и иммуноцитокина IFN-α/PD-L2-Fc. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из рака легкого, рака печени, рака почки, колоректального рака, рака яичников, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака желчных протоков, плоскоклеточного рака, рака мочевого пузыря, рака пищевода, мезотелиомы, меланомы, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, саркомы, рака предстательной железы, глиобластомы, рака шейки матки, карциномы тимуса, лейкемии, лимфомы, миеломы, грибовидных микозов и рака из клеток Меркеля. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой PD-L1+ рак и/или PD-L2+ рак.

[403] В некоторых вариантах осуществления способ лечения рака обладает одним или несколькими из следующих видов биологического действия: (1) уничтожает раковые клетки; (2) подавляет пролиферацию раковых клеток; (3) индуцирует иммунный ответ в опухоли (например, индуцирует инфильтрацию иммунных эффекторных клеток в область опухоли, индуцируем пролиферацию, дифференцировку и/или активацию иммунных клеток и/или индуцирует секрецию провоспалительных цитокинов иммунными клетками); (4) уменьшает размер опухоли; (5) облегчает один или несколько симптомов у индивидуума, больного раком; (6) подавляет метастазирование опухоли; (7) продлевает выживание; (8) продлевает период до прогрессирования рака; и (9) предотвращает, ингибирует или снижает вероятностю рецидива рака. В некоторых вариантах осуществления с помощью способа уничтожения раковых клеток, опосредованного иммуноцитокином или фармацевтическим составом, описанными в данном документе, можно достичь процента о™ирания опухолевых клеток не ниже примерно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или выше. В некоторых вариантах осуществления с помощью способа уменьшения объема опухоли, опосредованного иммуноцитокином или фармацевтическим составом, описанными в данном документе, можно уменьшить объем опухоли не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90%, 80% или 100%). В некоторых вариантах осуществления с помощью способа подавления метастазирования опухоли, опосредованного иммуноцитокином или фармацевтическим составом, описанными в данном документе, можно подавить метастазирование не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90%, 80% или 100%). В некоторых вариантах осуществления способ продления жизни индивидуума (например, человека), опосредованный иммуноцитокином или фармацевтическим составом, описанными в данном документе, может продлить жизнь человека по меньшей мере на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 или 24 месяца. В некоторых вариантах осуществления способ продления периода до прогрессирования рака, опосредованный иммуноцитокином или фармацевтическим составом, описанными в данном документе, может продлить период до прогрессирования рака не менее чем на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 недель. В некоторых вариантах осуществления с помощью способа индукции иммунного ответа на опухоль можно повышать, усиливать или стимулировать иммунный ответ или иммунную функцию у субъекта. В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ или иммунная функция повышаются, усиливаются и/или стимулируются путем активации эффекторных клеток (например, Т-клеток, например, CD8+ и/или CD4+ Т-клеток), расширения (увеличения) популяции эффекторных клеток и/или уничтожения клеток-мишеней (например, опухолевых клеток-мишеней) у субъекта. В некоторых вариантах осуществления CD4 и/или CD8 Т-клетки у индивидуума имеют повышенные или усиленные праймирование, активацию, пролиферацию, высвобождение цитокинов и/или цитолитическую активность по сравнению с предшествующим введением иммуноцитокина или фармацевтического состава, описанных в данном документе.

[404] Описанные здесь способы подходят для лечения различных видов рака, включая солидные опухоли и гемобластозы. Методы применимы к раку всех стадий, включая рак ранней стадии, неметастатический рак, первичный рак, запущенный рак, местно-распространенный рак, метастатический рак или рак в стадии ремиссии. Описанные здесь способы можно использовать в качестве терапии первой линии, терапии второй линии, терапии третьей линии или комбинированной терапии с другими видами лечения рака, известными в данной области, такими как хирургия, лучевая терапия, химиотерапия, иммунотерапия, гормональная терапия или их комбинация. В некоторых вариантах осуществления способ применяют для лечения индивидуума, который уже ранее проходил лечение. В некоторых вариантах осуществления рак был резистентным к предшествующей терапии. В некоторых вариантах осуществления способ применяют для лечения индивидуума, который ранее не проходил лечение. В некоторых вариантах осуществления рак частично устойчив к монотерапии ингибитором контрольной точки иммунного ответа (например, частично устойчивы к монотерапии антителами к PD-1 или к PD-L1).

[405] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой HER2-положительный рак, и способ включает введение индивидууму (например, человеку) эффективного количества любых подходящих иммуноцитокинов, описанных в данном документе, таких как любой из иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN -α/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL- 12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL- 2/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-α /антитело к CD4, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-23 /PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-α/PD-L2-Fc. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак представляет собой рак молочной железы или рак желудка. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак молочной железы представляет собой рак молочной железы на ранней стадии. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак молочной железы представляет собой метастатический рак молочной железы. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак представляет собой рецидивирующий рак. В некоторых вариантах осуществления рецидивирующий рак представляет собой локально рецидивирующий рак. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак представляет собой распространенный рак. В некоторых вариантах осуществления HER2-положительный рак является нерезектабельным.

[406] В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак, экспрессирующий PD-L1, и способ включает введение индивидууму (например, человеку) эффективного количества любых подходящих иммуноцитокинов, описанных в данном документе, таких как любой из иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-10/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-12/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-23/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к HER2, иммуноцитокина IFN-α/антитело к HER2, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокина IFN -α/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL- 12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокина IL- 2/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокина IFN-α /антитело к CD4, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокина IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD25, иммуноцитокина IFN-α/антитело к CD25, иммуноцитокина IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-23 /PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-α/PD-L2-Fc. В некоторых вариантах осуществления способ подходит для лечения рака с аберрантной экспрессией PD-1 или PD-L1/PD-L2 (например, HER2+ рак), активность и/или передача сигналов включают, в качестве неограничивающего примера, гематологический рак и /или солидные опухоли. Некоторые виды рака, рост которых можно подавлять с помощью иммуноцитокинов данного изобретения, включают виды рака, обычно реагирующие на иммунотерапию. Неограничивающие примеры других видов рака, подлежащих лечению, включают меланому (например, метастатическая злокачественная меланома), рак почки (например, светлоклеточный рак), рак предстательной железы (например, гормонорезистентная аденокарцинома предстательной железы), рак молочной железы, рак толстой кишки и рак легких (например, немелкоклеточный рак легкого). Кроме того, изобретение включает рефрактерные или рецидивирующие злокачественные новообразования, рост которых можно подавлять с помощью иммуноцитокинов данного изобретения. Настоящее изобретение также применимо для лечения метастатической формы рака, особенно метастатической формы рака, при которой экспрессируется PD-L1 (Iwai и др. (2005) Int. Immunol. 17:133-144). В некоторых вариантах осуществления рак с аберрантной экспрессией, активностью и/или передачей сигналов PD-1 или PD-L1/PD-L2 является частично устойчивым к блокаде PD-1 или PD-L1 (например, частично устойчивым к антителу к PD-1 или лечению антителом к PD-L1).

[407] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, подходят для лечения солидного рака, выбранного из группы, состоящей из рака толстой кишки, рака прямой кишки, почечно-клеточного рака, рака печени, немелкоклеточного рака легкого, рака тонкой кишки, рака пищевода, меланомы, рака кости, рака поджелудочной железы, рака кожи, рака головы или шеи, кожной или внутриглазной злокачественной меланомы, рака матки, рака яичников, рака прямой кишки, рака анальной области, рака желудка, рака яичка, рака матки, рака фаллопиевых труб, рака эндометрия, рака шейки матки, рака влагалища, рака вульвы, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы (НХЛ), кожной Т-клеточной лимфомы (КТКЛ), рака эндокринной системы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака надпочечников, саркомы мягких тканей, рака уретры, рака полового члена, солидных опухолей детского возраста, рака мочевого пузыря, рака почки или мочеточника, рак почечной лоханки, новообразование в центральной нервной системе (ЦНС), первичной лимфомы ЦНС, опухолевого ангиогенеза, опухоли оси позвоночника, глиомы ствола головного мозга, аденомы гипофиза, саркомы Капоши, эпидермоидного рака, плоскоклеточного рака, Т-клеточной лимфомы, рака, индуцированного окружающей средой, комбинации указанных видов рака и метастатического поражения при указанных видах рака.

[408] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, подходят для лечения гематологического рака, выбранного из одного или нескольких из острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), хронического лимфолейкоза (ХЛЛ), острых лейкозов, острого лимфолейкоза (ОЛЛ), острого В-клеточного лимфолейкоза (В-ОЛЛ), Т-клеточного острого лимфолейкоза (Т-ОЛЛ), хронического миелогенного лейкоза (ХМЛ), В-клеточного пролимфоцитарного лейкоза, бластного новообразования из плазмацитоидных дендритных клеток, лимфомы Беркитта, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, волосатоклеточного лейкоза, мелкоклеточной или крупноклеточной фолликулярной лимфомы, злокачественных лимфопролиферативных состояний, MALT-лимфомы, мантийноклеточной лимфомы, лимфомы из клеток маргинальной зоны, множественной миеломы, миелодисплазии и миелодиспластического синдрома, неходжкинской лимфомы, ходжкинской лимфомы, плазмобластной лимфомы, плазмоцитоидного дендритноклеточного новообразования, макроглобулинемии Вальденстрема или предлейкоза.

[409] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, предназначены для лечения инфекции, например, грибковой, вирусной, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции. Инфекция может быть вызвана любым возбудителем, описанным выше в подразделе «Антиген возбудителя». Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокинво IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-2/антитело к -CD3, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокинов IFN-γ/анти-CD25 и иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD25, описанных в данном документе, или их фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека) путем избирательного направления активности цитокинов на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего: a) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, CD123, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека) путем избирательного направления активности цитокинов на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, CD25, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CD25, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, CD3, CD4, CD123 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека), такой как избирательное направление активности цитокинов на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень на иммунной клетке (например, любой антиген на поверхности иммунной клетки, такой как CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25, или любую молекулу контрольной точки иммунного ответа, экспрессированную на иммунных клетках, такую как PD-L1, PD-1 или CTLA-4); и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения инфекции (например, вирусной, грибковой, бактериальной, протозойной или другой паразитарной инфекции) у индивидуума (например, человека) путем избирательного направления цитокиновой активности на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или содержащего его фармацевтического состава), включающего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащего только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень на иммунной клетке (например, любой иммунной антиген на поверхности клетки, такой как CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25, или любую молекулу контрольной точки иммунного ответа, экспрессируемую на иммунных клетках, такую как PD-L1, PD-1 или CTLA-4); и b) цитокин (например, любой цитокин, описанный в данном документе, такой как IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и при этом цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления способ лечения инфекции, описанный в данном документе, предотвращает ухудшение, купирует и/или ослабляет по меньшей мере один симптом патогенной инфекции у индивидуума, нуждающегося в этом, уменьшает количество или устраняет патоген, предотвращает повреждение указанного индивидуума или органа или ткани у указанного индивидуума и/или предотвращает смерть. В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, позволяют достичь одного или нескольких из следующего: (a) контролирование, улучшение состояния и/или предотвращение повреждения тканей и/или органов или недостаточности их функции, например, вызванных вирусной инфекцией; (b) контролирование, снижение и/или подавление некроза клеток (например, снижение не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% % или 100%) некроза клеток), такого как некроз в инфицированной и/или неинфицированной ткани и/или органе; (c) контролирование и/или увеличение инфильтрации воспалительных клеток (например, NK-клеток, цитотоксических Т-клеток, нейтрофилов) в инфицированных тканях и/или органах, например увеличение не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%) воспалительной клеточной инфильтрации; (d) контролирование, ослабление и/или предотвращение воспаления в неинфицированных тканях и/или органе, системного воспаления и/или цитокинового шторма, например, подавление не мнее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%); (e) снижение уровня смертности, связанной с инфекцией патогеном, и/или предотвращение смерти, такое как снижение не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80 %, 90% или 100%) смертности; и (F) уменьшение количества или устранение патогена не менее чем примерно на 10% (включая, например, не менее чем примерно на 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%).

[410] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, предназначены для лечения иммунного заболевания, такого как аутоиммунное заболевание или иммуносупрессия.

[411] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, предназначены для лечения подавления иммунитета. Иммуносупрессия представляет собой снижение или полное отсутствие активации или эффективности иммунной системы, что приводит к неспособности иммунной системы бороться с болезнями, например инфекционными заболеваниями или раком. Иммуносупрессия может быть либо результатом заболеваний, либо вызвана лекарственными препаратами или инфекцией, что приводит к повышенной восприимчивости к вторичным инфекциям, вызываемым патогенами, такими как бактерии и вирусы. Для многих заболеваний характерно развитие прогрессирующей иммуносупрессии у больного. Наличие нарушенного иммунного ответа у пациентов со злокачественными новообразованиями (например, лейкемией, лимфомой, множественной миеломой) хорошо задокументировано. Прогрессирующая иммуносупрессия также наблюдалась при некоторых хронических инфекциях, таких как СПИД, сепсис, проказа, цитомегаловирусные инфекции, малярия, волчанка и т.п. Иммунодефицит также является потенциальным побочным эффектом многих терапевтических методов лечения (например, радиотерапии или химиотерапии). В качестве примера, но не ограничения, заболевания и состояния, связанных с иммунодефицитом или иммуносупрессией, включают: инфицирование вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), гипогаммаглобулинемию, гематологические виды рака, такие как лейкемия и лимфома, лимфоцитопения (лимфопения) любого происхождения, красную волчанку, кахексию, злоупотребление опиоидами, мастоцитоз, ревматизм, трипаносомоз и злоупотребление алкоголем. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессия связана с передачей сигналов контрольных точек иммунной системы (например, передачей сигналов PD-1 или CTLA-4). В таких непреднамеренных ситуациях иммуносупрессии пациентов обычно лечат иммуностимуляторами (например, цитокинами) для укрепления иммунной системы. Однако из-за недостаточной специфичности такие иммуностимуляторы активируют иммунную систему в целом и могут вызвать гиперактивацию иммунной системы.

[412] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения иммуносупрессии у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления цитокиновой активности (например, иммуностимулирующей или провоспалительной цитокиновой активности) на иммунную клетку (например, T клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, Dc-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокина IL-2/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IFN-α/антитело к PD-L1, иммуноцитокина IL-2/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-10/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-12/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IL-23/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-γ/PD-L2-Fc, иммуноцитокина IFN-α/PD-L2-Fc, иммуноцитокинов IL-2/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-23/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CTLA-4, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD3, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD4, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD8, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD8, иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-12/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-23/антитело к CD25, иммуноцитокинов IFN-γ/антитело к CD25 и иммуноцитокинов IFN-α/антитело к CD25, описываемых в данном документе, или их фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения иммуносупрессии у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммуностимулирующей или провоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, CTLA-4, CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25) на иммунной клетке; и b) иммуностимулирующий цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на N'-конце, на C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения иммуносупрессии у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммуностимулирующей или провоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, CTLA-4, CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25) на иммунной клетке; и b) иммуностимулирующий цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения иммуносупрессии у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммуностимулирующей или провоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, CTLA-4, CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25) на иммунной клетке; и b) иммуностимулирующий цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-12 или IL-23) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления способы лечения иммуносупрессии, описанные в данном документе, активируют или усиливают иммунный ответ, повышают соотношение CD8 и CD4, стимулируют пролиферацию и/или дифференцировку иммунных клеток, индуцируют или усиливают высвобождение цитокинов (например, IL-2, IL-6, IFN-γ), предотвращают ухудшение, останавливают и/или улучшают по меньшей мере один симптом иммуносупрессии у нуждающегося в этом индивидуума и/или предотвращают смерть.

[413] В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, предназначены для лечения аутоиммунных заболеваний. Аутоиммунное заболевание представляет собой заболевание, возникающее в результате иммунной реакции против собственной ткани или тканевого компонента, включая как реакцию со стороны собственных антител, так и клеточно-опосредованную реакцию. Термин «аутоиммунное заболевание», используемый в данном документе, охватывает органоспецифические аутоиммунные заболевания, при которых аутоиммунный ответ направлен против одного типа ткани, такие как сахарный диабет I типа (СД1), болезнь Крона, язвенный колит, тяжелая миастения, витилиго, болезнь Грейвса, болезнь Хашимото, болезнь Аддисона и аутоиммунный гастрит и аутоиммунный гепатит. Термин «аутоиммунное заболевание» также включает аутоиммунные заболевания, не относящиеся к органоспецифическим, при которых аутоиммунная реакция направлена против компонента, присутствующего в нескольких или многих органах по всему телу. Такие аутоиммунные заболевания включают, например, ревматоидное заболевание, системную красную волчанку, прогрессирующий системный склероз и его варианты, полимиозит и дерматомиозит. Дополнительные аутоиммунные заболевания включают пернициозную анемию, включая некоторые виды аутоиммунного гастрита, первичный билиарный цирроз, аутоиммунную тромбоцитопению, синдром Шегрена, рассеянный склероз и псориаз. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание выбрано из группы, состоящей из диабета, сахарного диабета, артрита (включая ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, псориатический артрит), рассеянного склероза, миастении, системной красной волчанки, аутоиммунного тиреоидита, дерматита (включая атопический дерматит и экзематозный дерматит), псориаз, синдром Шегрена, включая сухой кератоконъюнктивит, вторичный по отношению к синдрому Шегрена, очаговой алопеции, аллергические реакции, вызванные укусами членистоногих, болезнь Крона, афтозную язву, ирит, конъюнктивит, кератоконъюнктивит, язвенный колит, астму, аллергическую астму, кожную красную волчанку, склеродермию, вагинит, проктит, лекарственную сыпь, обратимую лепрозную реакцию, узловатую лепрозную эритему, аутоиммунный увеит, аллергический энцефаломиелит, острую некротизирующую геморрагическую энцефалопатию, идиопатическую двустороннюю прогрессирующую нейросенсорную тугоухость, апластическую анемию, врожденную апластическую анемию, идиопатическую тромбоцитопению, полихондрит, гранулематоз Вегенера, хронический активный гепатит, синдром Стивенса-Джонсона, трофические язвы неясного происхождения, красный плоский лишай, воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), болезнь Крона, офтальмопатию Грейвса, саркоидоз, первичный билиарный цирроз, задний увеит и интерстициальный фиброз легких. Специалисту в данной области понятно, что способы данного изобретения можно применять к этим или другим аутоиммунным заболеваниям по своему усмотрению.

[414] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения аутоиммунного заболевания у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, T-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CTLA-4 и иммуноцитокинов IL-10/PD-L2-Fc, описанных в данном документе, или их фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения аутоиммунного заболевания у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, CTLA-4, CD3, CD4, CD8 или CD25) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-27, IL-35 или TGF-β) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения аутоиммуного заболевания у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, PD-1, CTLA-4, PD-L1, CD3, CD4, CD123, CD25 или CD8) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-35, IL-23 или TGF-β) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения аутоиммунного заболевания у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидная DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-1, CD3, CD4, CD123, CD25 или CD8) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-27, IL-35 или TGF-β) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления способы лечения аутоиммунного заболевания, описанные в данном документе, предотвращают ухудшение, останавливают и/или улучшают по меньшей мере один симптом аутоиммунного заболевания у индивидуума, нуждающегося в этом, предотвращают повреждение собственных здоровых тканей или органов, контролируют, улучшают и/или предотвращают инфильтрацию иммунных клеток в здоровую ткань и/или орган, системное воспаление и/или цитокиновый шторм, и/или предотвращают смерть.

[415] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения отторжения трансплантата или БТПХ у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, T-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества любого из иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD4, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD3, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD8, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CD25, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к PD-L1, иммуноцитокинов IL-10/антитело к CTLA-4 и иммуноцитокинов IL-10/PD-L2-Fc, описанных в данном документе, или их фармацевтического состава. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения отторжения трансплантата или БТПХ у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающий антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, CD3, CD4, CD8, CD123 или CD25) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-27, IL-35 или TGF-β) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него). В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения отторжения трансплантата или БТПХ у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидную DC-клетку, DС-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающее антиген-мишень (например, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, CD3, CD4, CD25, CD123 или CD8) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-35, IL-23 или TGF-β) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения отторжения трансплантата или БТПХ у индивидуума (например, у человека), например, путем избирательного направления активности цитокинов (например, иммунодепрессивной или противовоспалительной активности цитокинов) на иммунную клетку (например, Т-клетку, В-клетку, моноцит, NK-клетку, миелоидная DC-клетку, DC-клетку плазмы, макрофаг) у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтического состава), содержащего: а) полноразмерное антитело, специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, CD3, CD4, CD25, CD123 или CD8) на иммунной клетке; и b) иммунодепрессивный цитокин (например, IL-10, IL-27, IL-35 или TGF-β) или его вариант, где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка, или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят внутривенно, подкожно или непосредственно в опухоль. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели. В некоторых вариантах осуществления способы лечения отторжения трансплантата, описанные в данном документе, предотвращают ухудшение, останавливают и/или облегчают по меньшей мере один симптом отторжения трансплантата у индивидуума, нуждающегося в этом; предотвращают повреждение донорских/чужеродных тканей или органов; позволяют контролировать, ослабляют и/или предотвращают инфильтрацию иммунных клеток в донорские/чужеродные ткани или органы, системное воспаление и/или цитокиновый шторм; уменьшают активацию клеток Th17; улучшают приживаемость трансплантата; продлевают выживаемость, повышают выживаемость и/или предотвращают смерть. В некоторых вариантах осуществления способы лечения БТПХ, описанные в данном документе, предотвращают ухудшение, останавливают и/или облегчают по меньшей мере один симптом БТПХ у индивидуума, нуждающегося в этом; уменьшают активацию клеток Th17; предотвращают повреждение собственных/здоровых тканей или органов; позволяют контролировать, ослабляют и/или предотвращают инфильтрацию иммунных клеток в донорские/чужеродные ткани или органы, системное воспаление и/или цитокиновый шторм; улучшают приживаемость трансплантата; продлевают выживаемость, повышают выживаемость и/или предотвращают смерть; и/или улучшают индекс активности заболевания (см., например, P.J. Martin, Biol Blood Marrow Transplant. 2009 Jul;15(7):777-784).

[416] В некоторых вариантах осуществления предложен способ избирательного стимулирования активности (сродства связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологической активности) цитокина или его варианта (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD123, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8), у индивидуума (например, у человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтических составов), где иммуноцитокин содержит: а) антигенсвязывающий белок (например, антитело, такое как полноразмерное антитело, или составной белок антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc), специфично распознающее антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD123, CD25, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид (например, тяжелую цепь антитела или составной полипептид антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такой как составной полипептид лиганд/рецептор-шарнир-Fc), содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент (например, лиганд, рецептор, VHH, scFv или VH), шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть (например, CH2+CH3 или только CH2), где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, на его N'-конце, C'-конце или внутри него); и при этом активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен способ избирательного стимулирования активности (сродства связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологической активности) цитокина или его варианта (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8), у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтических составов), где иммуноцитокин содержит: а) антитело (например, полноразмерное антитело, антитело, содержащее только тяжелую цепь, или антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающие антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, включающую шарнирный участок, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи; и где активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен способ избирательного стимулирования активности (сродства связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологической активности) цитокина или его варианта (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), направленной на клетку, экспрессирующую антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8), у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтических составов), где иммуноцитокин содержит: а) антитело (например, полноразмерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, составленный с субъединицей Fc-домена или ее частью через шарнирный участок), специфично распознающие антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую, от N-конца к С-концу: домен VH, необязательно CH1-домен, цитокин или его вариант в шарнирном участке, CH2-домен и необязательно CH3-домен; и где активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления предложен способ избирательного стимулирования активности (сродства связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологической активности) цитокина или его варианта (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23), направленную на клетку, экспрессирующую антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8), у индивидуума (например, человека), включающий введение индивидууму эффективного количества иммуноцитокина (или его фармацевтических составов), где иммуноцитокин содержит: а) полноразмерное антитело, специфично распознающие антиген-мишень (например, CTLA-4, PD-L1, PD-L2, CD25, CD123, HER2, PD-1, CD3, CD4 или CD8); и b) цитокин (например, IL-2, IFN-α (например, IFN-α2b), IFN-γ, IL-10, IL-12 или IL-23) или его вариант, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке (например, внутри шарнирного участка или между С-концом СН1 и N-концом шарнирного участка) тяжелой цепи полноразмерного антитела; и где активность цитокина или его варианта избирательно активируется при связывании полноразмерного антитела с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления при наличии связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с целевым антигеном, активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта повышается не менее чем примерно на 20% (например, не менее чем примерно на 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более) по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc) или антигенсвязывающего фрагмента (такого, как лиганд, рецептор, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью. В некоторых вариантах осуществления в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка (например, антитела, такого как полноразмерное антитело, или составного белка антигенсвязывающий фрагмент-шарнир-Fc, такого как составной белок лиганд/рецептор-шарнир-Fc, или антигенсвязывающего фрагмента (например, лиганда, рецептора, VHH, scFv, Fab) с антигеном-мишенью активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи составляет не более примерно 70% (например, не более примерно 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% , 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2 %, 0,1% или 0%) от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии. В некоторых вариантах осуществления цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина, при этом активность (сродство связывания с соответствующим рецептором цитокина или его субъединицей и/или биологическая активность) варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более примерно 80% (например, не более чем примерно 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% или 5%) от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии.

[417] Введение описанных здесь иммуноцитокинов или их фармацевтических составов можно осуществлять любым удобным способом, включая инъекцию или переливание. Путь введения соответствует известным и общепринятым способам, таким как однократный или многократный болюсное введение или вливание в течение длительного периода времени, осуществляемые подходящим образом. Иммуноцитокины или их фармацевтические составы можно вводить пациенту трансартериально, подкожно, внутрикожно, внутриопухолево, интранодально, интрамедуллярно, внутримышечно, внутривенно или внутрибрюшинно. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или его фармацевтический состав вводят системно. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или его фармацевтический состав вводят индивидууму путем вливания, такого как внутривенное вливание. Методы вливания применительно к иммунотерапии известны в данной области (см., например, Rosenberg и др., New Eng. J. oF Med. 319: 1676 (1988)). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или его фармацевтический состав индивидууму вводят путем внутрикожной или подкожной (т.е. под кожу) инъекции. В случае подкожных инъекций иммуноцитокины или фармацевтические составы можно вводить с помощью шприца. Однако пригодны и другие устройства для введения иммуноцитокинов или фармацевтических составов, такие как устройства для инъекций; инжекторные ручки; автоинъекционные устройства, безыгольные устройства; и системы подкожной доставки с помощью пластырей. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят путем внутривенной инъекции. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или его фармацевтический состав вводят непосредственно в опухоль или лимфатический узел. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или содержащий его фармацевтический состав вводят локально в участок опухоли, например, непосредственно в опухолевые клетки или в ткань, содержащую опухолевые клетки. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин или его фармацевтический состав вводят с помощью средств пролонгированного или замедленного высвобождения.

[418] Дозировки и желаемая концентрация лекарственного средства в фармацевтических составах настоящего изобретения могут варьироваться в зависимости от предполагаемого конкретного применения. Определение подходящей дозировки или пути введения находится в компетенции специалиста средней квалификации. Эксперименты на животных обеспечивают надежное руководство для определения эффективных доз для лечения людей. Межвидовое масштабирование эффективных доз может быть выполнено в соответствии с принципами, изложенными в Mordenti, J. и Chappell, W. «The Use oF Interspecies Scaling in Toxicokinetics», в Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi и др., Eds, Pergamon Press, Нью-Йорк, 1989, стр. 42-46. В объем настоящей заявки входит то, что разные составы будут эффективны для разных видов лечения и разных расстройств, и что введение, предназначенное для лечения конкретного органа или ткани, может потребовать доставки способом, отличным от способа доставки в другой орган или ткань.

[419] При введении in vivo иммуноцитокинов, описанных в данном документе, или содержащих их фармацевтических составов, нормальные дозы могут варьироваться от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг массы тела млекопитающего в зависимости от пути введения и типа млекопитающего. В объем настоящей заявки входит то, что разные составы будут эффективны для разных видов лечения и разных расстройств, и что введение, предназначенное для лечения конкретного органа или ткани, может потребовать доставки способом, отличным от способа доставки в другой орган или ткань. Помимо этого, дозы можно вводить одним или несколькими отдельными введениями или путем непрерывного вливания. При повторных введениях в течение нескольких дней или дольше в зависимости от состояния лечение продолжают до тех пор, пока не произойдет желаемое подавление симптомов заболевания. Однако могут быть полезны и другие режимы дозирования. Течение такого лечения легко контролировать с помощью обычных методик и анализов. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 10 мг/кг, например, в любом количестве от примерно 1 мкг/кг до примерно 500 мкг/кг, от примерно 500 мкг/кг до примерно 1 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 1 мкг/кг до примерно 1 мг/кг, от примерно 1 мкг/кг до примерно 200 мкг/кг, от примерно 100 мкг/кг до от примерно 500 мкг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 1 мг/кг или от примерно 500 мкг/кг до примерно 1 мг/кг.

[420] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят (например, путем вливания) индивидууму (например, человеку) в течение периода времени, не превышающего примерно 24 часа, 20 часов, 15 часов, 10 часов, 8 часов, 6 часов, 3 часа, 2 часа, 1 час, 30 минут или короче. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят (например, путем вливания) индивидууму (например, человеку) в течение любого периода времени от примерно 30 минут до примерно 1 часа, от примерно 1 часа до примерно 2 часов, от примерно 2 часов до примерно 4 часов, от примерно 4 часов до примерно 6 часов, от примерно 6 часов до примерно 8 часов, от примерно 8 часов до примерно 10 часов, от примерно 10 часов до примерно 12 часов, от примерно 12 часов до примерно 18 часов, от примерно 18 часов до примерно 24 часов, от примерно 30 минут до примерно 2 часов, от примерно 2 часов до примерно 5 часов, от примерно 5 часов до примерно 10 часов, от примерно 10 часов до примерно 20 часов, от примерно 30 минут до примерно 10 часов или от примерно 30 минут до примерно 24 часов.

[421] В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят однократно (например, болюсная инъекция). В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят многократно (например, 2, 3, 4, 5, 6 или более раз). При многократном введении их можно осуществлять одним и тем же или разными путями, и место введения может быть одним и тем же или другим. Введение иммуноцитокина, описанного в данном документе, или его фармацевтического состава может быть от ежедневного до одного раза в год. Интервал между введениями может составлять от 24 часов до года. Интервалы также могут быть нерегулярными (например, после прогрессирования опухоли). В некоторых вариантах осуществления график дозирования не прерывают. Специалист в области медицины может легко определить оптимальную дозировку и режим лечения для конкретного пациента, наблюдая у пациента наличие признаков заболевания и соответствующим образом корректируя лечение. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят один раз в день (ежедневно), один раз в 2 дня, один раз в 3 дня, один раз в 4 дня, один раз в 5 дней, один раз в 6 дней, один раз в неделю, 1 раз в 10 дней, 1 раз в 2 недели, 1 раз в 3 недели, 1 раз в 4 недели, 1 раз в месяц, 1 раз в 2 месяца, 1 раз в 3 месяца, 1 раз в 4 месяца, 1 раз в 5 месяцев, 1 раз в 6 месяцев, 1 раз в 7 месяцев, один раз в 8 месяцев, один раз в 9 месяцев или один раз в год. В некоторых вариантах осуществления интервал между введениями составляет от 1 недели до 2 недель, от 2 недель до 1 месяца, от 2 недель до 2 месяцев, от 1 месяца до 2 месяцев, от 1 месяца до 3 месяцев, от 3 месяцев до 6 месяцев или от 6 месяцев до года. В некоторых вариантах осуществления иммуноцитокин, описанный в данном документе, или его фармацевтический состав вводят один раз каждые три недели.

[422] В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав вводят дробными дозами, такими как примерно 2, 3, 4, 5 или более доз. В некоторых вариантах осуществления дробные дозы вводят в течение примерно недели, месяца, 2 месяцев, 3 месяцев или более длительного периода. В некоторых вариантах осуществления дозу делят поровну. В некоторых вариантах осуществления дробные дозы составляют примерно 20%, примерно 30% и примерно 50% от целой дозы. В некоторых вариантах осуществления интервал между последовательными дробными дозами составляет примерно 1 день, 2 дня, 3 дня, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, месяц или дольше. При повторных введениях в течение нескольких дней или более длительного периода в зависимости от состояния лечение продолжают до тех пор, пока не произойдет желаемое подавление симптомов заболевания. Однако могут быть полезны и другие режимы дозирования. Течение такого лечения легко контролировать с помощью обычных методик и анализов.

VII. Изделия и наборы

[423] Далее предложены наборы, стандартные дозировки и изделия, содержащие любой из описанных здесь иммуноцитокинов. В некоторых вариантах осуществления предложен набор, который содержит любую из фармацевтических составов, описанных в данном документе, и предпочтительно содержит инструкции по его применению, например, для применения в лечении расстройств, описанных в данном документе (например, рака, инфекции или аутоиммунного заболевания).

[424] Наборы согласно данному изобретению включают один или несколько контейнеров, содержащих иммуноцитокин, описанный в данном документе, для лечения заболевания. Например, инструкции содержат описание введения иммуноцитокина для лечения заболевания, такого как рак. Набор может дополнительно содержать описание выбора индивидуума (например, человека), подходящего для лечения, на основе выявления у этого индивидуума заболевания и стадии заболевания. Инструкции, относящиеся к применению иммуноцитокина, обычно включают информацию о дозировке, режиме дозирования и способе введения для предполагаемого лечения. Контейнеры могут представлять собой стандартные дозы, объемные упаковки (например, многодозовые упаковки) или частичные дозы. Инструкции, прилагаемые к наборам данного изобретения, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковку (например, лист бумаги, входящий в комплект), но также возможны и машиночитаемые инструкции (например, инструкции на магнитном или оптическом диске). Наборы настоящего изобретения содержатся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, помимо прочего, флаконы, бутылки, банки, мягкую упаковку (например, запечатанные майларовые или полиэтиленовые пакеты) и т.п. Также рассматриваются упаковки для использования в сочетании с конкретным устройством, таким как инфузионное устройство, такое как мининасос. Набор может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожных инъекций). По меньшей мере одно активное средство в составе представляет собой иммуноцитокин, как описано в данном документе. Контейнер может дополнительно содержать второй фармацевтически активное средство. Наборы могут необязательно содержать дополнительные компоненты, такие как буферы и разъясняющая информация. Обычно набор включает контейнер и этикетку или лист-вкладыш (вкладыши) на контейнере или вместе с ним.

[425] Таким образом, в настоящей заявке также предложены промышленные изделия, которые включают флаконы (такие как запечатанные флаконы), бутылки, банки, мягкую упаковку и т.п. Промышленное изделие может содержать контейнер и этикетку или лист-вкладыш на контейнере или вместе с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластик. Как правило, контейнер содержит состав, который эффективен для лечения заболевания или расстройства (например, рака), описанного в данном документе, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или флакон с прокалываемой иглой для подкожных инъекций пробкой). На этикетке или листке-вкладыше указывается, что состав применяется для лечения конкретного состояния у индивидуума. Этикетка или вкладыш в упаковке дополнительно содержат инструкции по введению состава индивидууму. На этикетке могут быть указаны инструкции по восстановлению состава и/или его применению. Контейнер, содержащий фармацевтический состав, может быть многоразовым флаконом, что позволяет повторное введение (например, 2-6 введений) восстановленной лекарственной формы. Вкладыш в упаковке относится к инструкциям, обычно включаемым в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно использования таких терапевтических продуктов. Кроме того, изделие может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), фосфатно-солевой буфер, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, он может включать другие материалы, желательные с коммерческой точки зрения и с точки зрения пользователя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

[426] Наборы или изделия могут включать несколько стандартных доз фармацевтического состава и инструкции по применению, расфасованные в количествах, достаточных для хранения и использования в аптеках, например, больничных аптеках и рецептурных аптеках.

ПРИМЕРЫ

[427] Приведенные ниже примеры предназначены только для иллюстрации изобретения и поэтому не должны рассматриваться как каким-либо образом ограничивающие изобретение. Следующие примеры и подробное описание прилагаются в качестве иллюстрации, а не в качестве ограничения.

Пример 1: Положение цитокина или его варианта в составе иммуноцитокина влияет на биологическую активность цитокина или его варианта.

Конструирование иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 различных конфигураций

[428] Антитело к HER2, содержащее VH (SEQ ID NO: 150) и VL (SEQ ID NO: 151) из трастузумаба (Herceptin®) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела (фигура 1А), содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 154. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Вариант IL-2, содержащий тройные мутации R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2) использовали в качестве варианта цитокина, блокирующего связывание IL-2 с IL-2Rα (CD25). При конструировании различных иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 вариант IL-2 размещали в положениях, указанных ниже: i) вариант IL-2 составляли с N-концом субъединицы Fc-фрагмента (пример строения см. на фигуре 1B), именуемый в дальнейшем «мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab»; ii) вариант IL-2 составляли с С-концом тяжелой цепи антитела к HER2 (пример строения см. на фигуре 1C), далее именуемый «Fab-Fc-мутантный IL-2-Her2 Ab»; и iii) вариант IL-2 размещали в шарнирном участке тяжелой цепи антитела к HER2 (пример строения см. на фигуре 2A), далее именуемый «Fab-мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab». Иммуноцитокин Fab-мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 154, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 155, и одну тяжелую цепь с вариантом IL-2, расположенным в шарнирном участке, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156.

[429] Нуклеиновые кислоты, кодирующие различные конфигурации иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2, синтезировали химическими методами, клонировали в лентивирусный вектор и трансфецировали в клетки СНО для экспрессии иммуноцитокинов. Экспрессированные иммуноцитокины собирали из надосадочной жидкости, очищали с помощью хроматографии на белке А и проверяли чистоту с помощью SDS-PAGE.

Анализ передачи сигнала IL-2

[430] Клетки HEK-Blue™ IL-2 (InvivoGen кат. № hkb-il2) и клетки HEK-PD-1-IL-2 (полученные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-2 с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IL-2 различных иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 в соответствии с руководством пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-il2), далее именуемым «репортерный анализ HEK-IL-2» или «репортерный анализ HEK-PD-1-IL-2». Репортерные клетки HEK-Blue™ IL-2 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-2 стабильно экспрессируют человеческий рецептор IL-2 (человеческие IL-2Rα, IL-2Rβ и IL-2Rγ) вместе с человеческим JAK3 и STAT5 для получения полностью функционального сигнального пути IL-2. Кроме того, эти репортерные клетки также несут репортерный ген секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP), индуцируемой STAT5. При стимуляции IL-2 репортерные клетки HEK-Blue™ IL-2 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-2 запускают активацию STAT5 и последующую секрецию SEAP, уровни которой можно контролировать с помощью колориметрического ферментного анализа QUANTI-Blue™ (InvivoGen кат. № rep-qbs) активности щелочной фосфатазы.

[431] Вкратце, клетки IL-2 HEK-Blue™ добавляли к различным иммуноцитокинам IL-2/антитела к HER2 в каждую лунку планшета (или к рекомбинантному человеческому IL-2 в лунке в качестве положительного контроля, антителу к HER2 - трастузумабу (Herceptin®) - в лунке в качестве отрицательного контроля) и инкубировали при 37°С в СО₂ камере в течение 20-24 часов или в течение ночи. После инкубирования надосадочную жидкость переносили в свежие лунки планшета, добавляли раствор QUANTI-Blue™ и инкубировали при 37°C в камере в течение 30 минут-3 часов. Затем определяли уровни SEAP с помощью спектрофотометра при 620-655 нм. Активность рекомбинантного человеческого IL-2 (положительный контроль) в активации сигнального пути IL-2 измеряли как 10 единиц/нг и использовали в качестве эталона. Процент передачи сигнала IL-2 для различных иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 рассчитывали путем деления полученных для иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 показателей на показатели рекомбинантного человеческого IL-2.

Анализ пролиферации РВМС

[432] Биологическую активность IL-2 также можно проверить с помощью анализа пролиферации/выживаемости мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC). IL-2 необходим для пролиферации и выживания активированных Т-клеток. РВМС человека (80 000 клеток/лунку) стимулировали антителом к CD3 (OKT3, 0,5 мкг/мл) в присутствии возрастающих концентраций рекомбинантного человеческого IL-2 («rIL-2»; 0, 0,04, 0,2, 1,0 или 5,0 нг/мл). Было определено, что 1 нг/мл rIL-2 является минимальной концентрацией, необходимой для пролиферации Т-клеток, исходя из количества клеток РВМС (<80 000 клеток/лунку) и жизнеспособности после 6-дневного культивирования. Для определения минимальной концентрации иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2, необходимой для пролиферации Т-клеток, РВМС (80 000 клеток/лунку) стимулировали антителом к CD3 (ОКТ3, 0,5 мкг/мл) в присутствии возрастающих концентраций различных конфигураций иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2 (0, 0,32, 1,6, 8, 40, 200 или 1000 нг/мл). rIL-2 в свободном состоянии служил положительным контролем (0,2 или 1 нг/мл). Процент Т-клеточной пролиферации иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2 по отношению к rIL-2 рассчитывали путем нормализации по соответствующим молекулярным массам. Молекулярная масса иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2 и rIL-2 составляет примерно 162 кДа и 12 кДа соответственно, поэтому примерно 13 нг иммуноцитокина IL-2/антитело к HER2 эквивалентны примерно 1 нг rIL-2 при той же молярной концентрации IL-2.

[433] Как видно из таблицы 1, при составлении варианта IL-2 с N-концом субъединицы Fc-фрагмента антитела к HER2 (мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab), такой вариант IL-2 сохранил примерно 12,0% своей биологической активности, измеренной с помощью анализа передачи сигнала IL-2, и примерно 4,3% своей биологической активности, измеренной с помощью анализа пролиферации РВМС. Если вариант IL-2 составлен с С-концом тяжелой цепи антитела к HER2 (Fab-Fc-мутантный IL-2-Her2 Ab), то такой вариант IL-2 сохранял примерно 6,3% своей биологической активности, как было измерено с помощью анализа передачи сигнала IL-2, и примерно 3,1% своей биологической активности, измеренной с помощью анализа пролиферации РВМС. Если вариант IL-2 расположен в шарнирном участке тяжелой цепи антитела к HER2 (Fab-мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab), то такой вариант IL-2 сохранял только примерно 2,3% своей биологической активности, как было измерено с помощью анализа передачи сигнала IL-2, а согласно измерениям с помощью анализа пролиферации РВМС вся его биологическая активность была утеряна. Можно считать, что эти результаты отражают активность варианта IL-2 в отсутствие связывания антигенсвязывающего фрагмента к HER2 с HER2, поскольку клетки HEK-IL-2 и РВМС имеют минимальную экспрессию HER2 на клеточной поверхности.

[434] Следовательно, цитокин (например, вариант IL-2), расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела (например, антитела к HER2) в отсутствие связывания антитела с антигеном-мишенью (например, с HER2) проявляли более ограниченную биологическую активность по сравнению с тем, когда такой цитокин располагался на N-конце субъединицы Fc-фрагмента или на С-конце тяжелой цепи полноразмерного антитела, например, как было измерено с помощью анализа передачи сигнала или анализа пролиферации РВМС.

Таблица 1. Биологическая активность IL-2 различных конфигураций иммуноцитокинов Il-2/антитело к HER2
	Процент передачи сигнала IL-2 (репортерный анализ HEK-IL-2)	Процент пролиферации Т-клеток (анализ пролиферации РВМС)
Рекомбинантный человеческий IL-2 (свободное состояние)	100,0%	100,0%
Антитело к HER2 (трастузумаб Герцептин®)	0,0%	0,0%
Мутантный IL-2-Fc-HER2 Ab	12,0%	4,3%
Fab-Fc-мутантный IL-2-HER2 Ab	6,3%	3,1%
Fab-мутантный IL-2-Fc-HER2 Ab	2,3%	0,0%

Пример 2: Иммуноцитокин с цитокином, расположенным в шарнирном участке, проявляет цитокиновую активность, зависящую от связывания с антигеном-мишенью

[435] Антитело к CD3, специфично распознающее CD3ε (собственного производства), содержащее VH (SEQ ID NO: 91) и VL (SEQ ID NO: 92) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94. Это антитело к CD3ε не конкурирует с антителом OKT3 за связывание с CD3 и не способно активировать передачу сигнала TCR (т.е. представляет собой неактивное антитело к CD3), и, следовательно, не может стимулировать пролиферацию РВМС или Т-клеток. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Вариант IL-2, содержащий тройные мутации R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2) размещали в положениях, указанных ниже, при конструировании различных иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD3: i) вариант IL-2 составляли с N-концом субъединицы Fc-фрагмента (пример строения см. на фигуре 1B), именуемый в дальнейшем «мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab»; ii) вариант IL-2 составляли с С-концом тяжелой цепи антитела к CD3 (пример строения см. на фигуре 1C), далее именуемый «Fab-Fc-мутантный IL-2-CD3 Ab»; и iii) вариант IL-2 размещали в шарнирном участке тяжелой цепи антитела к CD3 (пример строения см. на фигуре 2A), далее именуемый «Fab-мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab». Иммуноцитокин Fab-мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95, и одну тяжелую цепь с вариантом IL-2, расположенным в шарнирном участке, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96. Иммуноцитокины IL-2/антитело к CD3 конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1. Активность связывания различных конфигураций иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD3 с CD3+ Т-клетками была проверена с использованием FACS.

[436] Анализ передачи сигнала IL-2 с использованием клеток HEK-Blue™ IL-2 и анализ пролиферации РВМС проводили так же, как описано в примере 1, с различными конфигурациями иммуноцитокинов IL-2/антитело к CD3, rIL-2 (положительный контроль), или антитело к CD3 (собственного производства; отрицательный контроль).

Таблица 2. Биологическая активность IL-2 различных конфигураций иммуноцитокинов Il-2/антитело к CD3
	Процент передачи сигнала IL-2 (репортерный анализ HEK-IL-2)	Процент пролиферации Т-клеток (анализ пролиферации РВМС)
Рекомбинантный человеческий IL-2 (свободное состояние)	100,0%	100,0%
Антитело к CD3 (собственного производства)	0,0%	0,0%
Мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab	11,0%	39,0%
Fab-Fc-мутантный IL-2-CD3 Ab	6,7%	52,0%
Fab-мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab	2,5%	45,0%

[437] Поскольку клетки HEK-IL-2 не экспрессируют CD3 на клеточной поверхности, анализ передачи сигнала IL-2 с репортерными клетками HEK-IL-2 отражает активность варианта IL-2 в отсутствие связывания CD3-распознающего антигенсвязывающего фрагмента с CD3. Как видно из таблицы 2, при составлении варианта IL-2 с N-концом субъединицы Fc-фрагмента антитела CD3 (мутантантный IL-2-Fc-CD3 Ab) такой вариант IL-2 сохранял примерно 11,0% своей биологической активности; при составлении варианта IL-2 с С-концом тяжелой цепи антитела к CD3 (Fab-Fc-мутантный IL-2-CD3 Ab) такой вариант IL-2 сохранял примерно 6,7% своей биологической активности; если вариант IL-2 был расположен в шарнирном участке тяжелой цепи антитела к CD3 (Fab-мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab), то такой вариант IL-2 сохранял лишь примерно 2,5% своей биологической активности. Этот результат согласуется с результатом, приведенным в таблице 1 для иммуноцитокинов IL-2/антитело к HER2, измеренным с помощью анализа передачи сигнала IL-2.

[438] В присутствии связывания CD3-распознающего антигенсвязывающего фрагмента с CD3 в РВМС (CD3+ Т-клетках) все иммуноцитокины IL-2/антитело к CD3 продемонстрировали гораздо более высокую биологическую активность IL-2 по сравнению с активностью без связывания с CD3. Как показано в анализе пролиферации РВМС в таблице 2, при составлении варианта IL-2 с N-концом субъединицы Fc-фрагмента антитела к CD3 (мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab) биологическая активность варианта IL-2 повышалась примерно до 39,0% после связывания антитела к CD3 с CD3; при составлении варианта IL-2 с С-концом тяжелой цепи антитела к CD3 (Fab-Fc-мутантный IL-2-CD3 Ab) биологическая активность варианта IL-2 повышалась примерно до 52,0% после связывания антитела к CD3 с CD3. Такое увеличение биологической активности цитокинов, вероятно, было связано с тем, что связывание антиген-антитело приблизило цитокиновый фрагмент к его рецептору и увеличило вероятность связывания цитокина с рецептором, и/или происходило вследствие стабилизирующего эффекта от связывания антитела с антигеном. Неожиданно вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи антитела к CD3, проявил биологическую активность IL-2 при связывании антитела к CD3 с CD3, которая повысилась примерно до 45,0%, что было даже сильнее, чем когда цитокин составлен с N-концом (мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab).

[439] С учетом результатов, приведенных в таблице 1 и 2, биологическая активность цитокина (например, варианта IL-2), расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, зависит от связывания с антигеном-мишенью (например, с CD3). Иммуноцитокины IL-2/антитело к HER2 независимо от конфигурации были неспособны связываться с Т-клетками или клетками HEK-IL-2. Особенно в случае иммуноцитокина, в котором цитокин расположен в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, без связывания целевого антигена частью антитела, такой цитокин не может проявлять биологическую активность. См. 0,0% пролиферации РВМС в таблице 1 у Fab-мутантный IL-2-Fc-Her2 Ab. Напротив, иммуноцитокины IL-2/антитела к CD3, которые способны связываться с Т-клетками через CD3, проявляли биологическую активность цитокина, расположенного в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела. См. 45,0% пролиферации РВМС в таблице 2 у Fab-мутантный IL-2-Fc-CD3 Ab. Эти результаты позволяют предположить, что иммуноцитокин, содержащий цитокин, расположенный в шарнирном участке тяжелой цепи полноразмерного антитела, может обеспечивать специфичность к мишени и снижать цитокиновый шторм.

Пример 3: Иммуноцитокины с цитокином, расположенным в шарнирном участке, сначала способствуют связыванию антигена-мишени антителом (или лигандом-рецептором), а затем связыванию цитокина с цитокиновым рецептором.

[440] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Вариант IL-2, содержащий тройные мутации R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2) помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2А), чтобы сконструировать иммуноцитокин IL-2/антитело к PD-1 «Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab». Иммуноцитокин Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab (или «иммуноцитокин IL-2 (R38D/K43E/E61R)/антитело к PD-1») содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID НЕТ: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с вариантом IL-2, расположенным в шарнирном участке, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108.

[441] Составной белок PD-L2-Fc (внеклеточный домен PD-L2, составленный с N-концом Fc-фрагмента через N'-усеченный шарнир IgG1 (SEQ ID NO: 50); SEQ ID NO: 177) использовали в качестве другой исходной конструкции для конструирования иммуноцитокинов, связывающих PD-1. Для конструирования гетеродимерного составного белка PD-L2-Fc использовали один составной полипептид PD-L2-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 52, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другой составной полипептид PD-L2-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 51, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Иммуноцитокин IL-2/PD-L2-Fc «лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc» или «иммуноцитокин IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc» (или «конструкция № 11») содержит один составной полипептид (SEQ ID NO: 180), от N' до С': Внеклеточный домен PD-L2 - линкер GGGGS (SEQ ID NO: 213) - вариант IL-2 (SEQ ID NO: 2) - N'-усеченный шарнир IgG1 (SEQ ID NO: 52) - Fc-фрагмент и один спаренный полипептид (SEQ ID NO: 179), содержащий от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 - линкер GGGGS (SEQ ID NO: 213) - вариант IL-2 (SEQ ID NO: 2) - N'-усеченный шарнир IgG1 (SEQ ID NO: 51) - парный Fc-фрагмент.

[442] Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab и лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc были сконструированы, экспрессированы и очищены, как описано в примере 1. FACS использовали для подтверждения того, что как Fab-IL-2 мутантный Fc-PD-1 Ab, так и лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc связываются с клетками HEK-PD-1-IL-2 (созданными нами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-2 с использованием лентивирусного вектора), но не в клетках HEK-Blue™ IL-2 (InvivoGen кат. № hkb-il2).

[443] Клетки HEK-Blue™ IL-2 и клетки HEK-PD-1-IL-2 использовали для оценки активности активации сигнала IL-2 Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab и лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc, как описано в Примере 1. Рекомбинантный человеческий IL-2 (rIL-2) служил в качестве положительного контроля. Антитело к PD-1 - ниволумаб (Opdivo®) - и исходный составной белок PD-L2-Fc (каждая полипептидная цепь содержит SEQ ID NO: 177) служили отрицательным контролем.

Таблица 3. Биологическая активность Fab-IL-2 мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab и лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc
	Процент передачи сигнала IL-2 (репортерный анализ HEK-IL-2)	Процент передачи сигнала IL-2 (репортерный анализ HEK-PD-1-IL-2)
Рекомбинантный человеческий IL-2 (свободное состояние)	100,0%	100,0%
Антитело к PD-1 (ниволумаб (Opdivo®))	0,0%	0,0%
Исходный составной белок PD-L2-Fc	0,0%	0,0%
Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab	2,1%	35,2%
лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc	2,4%	43,5%

[444] В соответствии с данными, приведенными в примерах 1 и 2, в отсутствие связывания антигена-мишени (PD-1) IL-2, расположенный в шарнирном участке иммуноцитокина, проявлял невысокую биологическую активность (2,1% или 2,4%) по сравнению с rIL-2 в свободном состоянии (100,0%), измеренную с помощью репортерного анализа HEK-IL-2. Сравнение результатов репортерного анализа HEK-IL-2 и репортерного анализа HEK-PD-1-IL-2 в таблице 3 показывает, что связывание антигенсвязывающего фрагмента антитела к PD-1 или внеклеточного домена PD-L2 с PD-1 на клеточной поверхности значительно облегчает взаимодействие варианта IL-2 с рецептором IL-2. Другими словами, иммуноцитокины с цитокином, расположенным в шарнирном участке, благоприятствовали сначала связыванию антигена-мишени с антителом (Fab-мутантный IL-2-Fc-PD-1 Ab, 35,2% по сравнению с 2,1%) или связыванию лиганда с рецептором (лиганд-мутантный IL-2-PD-L2-Fc, 43,5% по сравнению с 2,4%), а затем - связыванию цитокина с цитокиновым рецептором.

Пример 4: Получение вариантов IL-12 со сниженной биологической активностью в отсутствие связывания антигена-мишени иммуноцитокинами

Конструирование вариантов IL-12 и их иммуноцитокинов

[445] IL-12 представляет собой гетеродимерный цитокин, состоящий из ковалентно связанных субъединиц p35 и p40. Варианты IL-12, содержащие аминокислотную замену в субъединице p40, конструировали путем замены аминокислот в положениях 56-65 в субъединице p40 аланином или серином (см. Таблицу 4) и получали одноцепочечный вариант IL-12, от N' к C': субъединица варианта p40 - линкер (SEQ ID NO: 228) - субъединица p35 дикого типа (SEQ ID NO: 29). Одноцепочечный IL-12 «дикого типа» также был сконструирован в качестве контроля (SEQ ID NO: 35), от N' к C': субъединица p40 дикого типа - линкер (SEQ ID NO: 228) - субъединица p35 дикого типа, обозначенная как «WT» в таблице 4.

[446] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другую тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Различные одноцепочечные варианты IL-12 (или одноцепочечный контрольный IL-12 «дикого типа») помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2B), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-12/антитело к PD-1 «Fab-IL-12-Fc-PD-1 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab (или «иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1» или «конструкция № 48»), содержащий одноцепочечный вариант IL-12 IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35), расположенный в шарнирном участке, содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-12(E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. Иммуноцитокин IL-12(G64A)/антитело к PD-1 («конструкция №47»), содержащий одноцепочечный вариант IL-12 IL-12B (p40 G64A)-линкер-IL-12A (wt p35), расположенный в шарнире, содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-12(G64A) (SEQ ID NO: 332), расположенным в шарнирном участке. Иммуноцитокин IL-12(E59A)/антитело к PD-1 («конструкция №46»), содержащий одноцепочечный вариант IL-12 IL-12B (p40 E59A)-линкер-IL-12A (wt p35), расположенный в шарнире, содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелая цепь с одноцепочечным вариантом IL-12(E59A) (SEQ ID NO: 331), расположенным в шарнирном участке. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

Анализ передачи сигнала IL-12

[447] Клетки HEK-Blue™ IL-12 (InvivoGen кат. № hkb-il12) и клетки HEK-PD-1-IL-12 (полученные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-12 с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IL-12 различных иммуноцитокинов Fab-IL-12-Fc-PD-1 Ab, содержащих различные фрагменты IL-12, в соответствии с руководством для пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-il12), далее именуемым «репортерный анализ HEK-IL-12» или «репортерный анализ HEK-PD-1-IL-12». Репортерные клетки HEK-Blue™ IL-12 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-12 стабильно экспрессируют рецепторный комплекс человеческого IL-12, состоящий из рецептора IL-12 β1 (IL-12Rβ1) и IL-12Rβ2, наряду с человеческим геном STAT4 для получения полностью функционального сигнального пути IL-12 (TyK2/JAK2/STAT4). Кроме того, эти репортерные клетки также несут STAT4-индуцируемый репортерный ген SEAP. При стимуляции IL-2 репортерные клетки HEK-Blue™ IL-12 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-12 запускают активацию STAT4 и последующую секрецию SEAP, уровни которой можно контролировать с помощью колориметрического ферментного анализа QUANTI-Blue™ (InvivoGen кат. № rep-qbs) активности щелочной фосфатазы. Экспериментальная процедура анализа передачи сигнала IL-2 была аналогична описанной в примере 1. Рекомбинантный человеческий IL-12 (rIL-12) в свободном состоянии служил в качестве положительного контроля и эталона для расчета процента активности.

Таблица 4. Биологическая активность IL-12 антител Fab-IL-12-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IL-12
	rIL-12	«WT»	Q56A	V57A	K58A	E59A	F60A
Клетки HEK-IL-12	100,0%	50,0%	55,0%	48,0%	39,0%	10,0%	9,0%
Клетки HEK-PD-1-IL-12	100,0%	120,0%	150,0%	91,0%	98,0%	45,0%	56,0%
	G61A	D62A	A63S	G64A	Q65A	E59A/F60A
Клетки HEK-IL-12	56,0%	57,0%	62,0%	69,0%	62,0%	0,1%
Клетки HEK-PD-1-IL-12	130,0%	93,0%	89,0%	150,0%	130,0%	5,9%

[448] В репортерном анализе HEK-IL-12 антитела Fab-IL-12-Fc-PD-1 были способны связываться с клетками HEK-IL-12 только черз взаимодействие фрагмента IL-12 с рецептором IL-12. Размещение IL-12, содержащего субъединицу p40 дикого типа, в шарнирном участке антитела к PD-1 («Fab-IL-12(WT)-Fc-PD-1 Ab») снижало активность IL-12 до 50,0% в отсутствие связывания с PD-1. Как видно из табл. 4, положения 59 и 60 в субъединице р40 являются ключевыми для биологической активности IL-12. Fab-IL-12-Fc-PD-1 Ab, содержащее двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-12 («Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab»), почти полностью прекратили активность IL-12, измеренную по передаче сигнала IL-12 (0,1%).

[449] В репортерном анализе HEK-PD-1-IL-12 антитела Fab-IL-12-Fc-PD-1 были способны связываться с клетками HEK-PD-1-IL-12 как путем взаимодействия IL-12 фрагмента с рецептором IL-12, так и путем взаимодействия антигенсвязывающего фрагмента антитела к PD-1 с PD-1. Как видно из таблицы 4, биологическая активность всех вариантов IL-12 (и IL-12 дикого типа) в Fab-IL-12-Fc-PD-1 Ab увеличивалась в присутствии связывания с PD-1. В частности, активность IL-12 антитела Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab была восстановлена до 5,9% за счет связывания PD-1/антитело к PD-1, что в 59 раз выше активности в отсутствие связывания PD-1/антитело к PD-1 (0,1%).

[450] Двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-12 продемонстрировали превосходный эффект по сравнению с другими мутациями в субъединице p40 IL-12. Помещая этот вариант IL-12 E59A/F60A в шарнирный участок тяжелой цепи полноразмерного антитела к PD-1, полученный иммуноцитокин Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab проявлял биологическую активность IL-12 только при наличии связывания антигена-мишени (PD-1) с антителом, но не в отсутствие связывания антигена-мишени (PD-1) с антителом, что демонстрирует направленную специфичность.

Пример 5: Получение иммуноцитокина IL-12/антитело к CD4 (Fab-IL-12-Fc-CD4 Ab) с биологической активностью IL-12, направленной на CD4+ Т-клетки

Конструирование иммуноцитокинов Fab-IL-12-Fc-CD4 Ab

[451] Антитело к CD4, содержащее ибализумаб (Trogarzo®) VH (SEQ ID NO: 73) и VL (SEQ ID NO: 74) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела к CD4, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77. Ибализумаб представляет собой неиммуносупрессивное гуманизированное моноклональное антитело, одобренное FDA для лечения ВИЧ. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другую тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Одноцепочечный IL-12 «дикого типа» или вариант IL-12, содержащий двойную мутацию E59A, F60A или E59A/F60A в субъединице p40 (SEQ ID NO: 31-33), как описано в примере 4, помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к CD4 (пример строения см. на фигуре 2В), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-12/антитело к CD4 «Fab-IL-12-Fc-CD4 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-CD4 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-12 (SEQ ID NO: 36), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1. FACS использовали для подтверждения того, что антитела Fab-IL-12-Fc-CD4 были способны связываться с CD4+ Т-клетками, но не с CD8+ Т-клетками (данные не показаны).

Анализ высвобождения гамма-интерферона (IGRA) для измерения биологической активности IL-12 или IL-23

[452] Биологическую активность IL-12 или IL-23 можно измерить по количеству IFN-γ, высвобождаемому из активированных Т-клеток. Связывание IL-12 с его рецептором (гетеродимерным рецептором, состоящим из субъединиц IL-12R-β1 и IL-12R-β2) запускает сигнальный путь с участием TyK2 (тирозинкиназы 2), JAK2 (янускиназы 2) и STAT4 (переносчика сигнала и активатора транскрипции 4), что приводит к выработке IFN-γ. CD4+ Т-клетки или CD8+ Т-клетки выделяли из РВМС и стимулировали антителом к CD3 (1 мкг/мл OKT3) в присутствии рекомбинантного человеческого IL-2 (30 единиц/мл) в течение 5 дней. Через 5 дней активированные CD4+ или CD8+ Т-клетки (80 000 клеток/лунку) культивировали в присутствии возрастающих концентраций рекомбинантного человеческого IL-12 (rIL-12) или рекомбинантного человеческого IL-23 (rIL-23) (0, 0,62, 1,25, 2,5, 5, 10 или 20 нг/мл). На следующий день содержание IFN-γ, высвобождаемого в среду для культивирования клеток, измеряли с помощью анализа ELISA. Процент биологической активности IL-12 или IL-23 рассчитывали путем деления показаний IL-12-иммуноцитокина или IL-23-иммуноцитокина на показания rIL-12 или rIL-23.

[453] Минимальная концентрация rIL-12, необходимая для стимуляции высвобождения IFN-γ из активированных Т-клеток, составляла 2,5 нг/мл, а для rIL-23 - 5 нг/мл. Чтобы определить минимальную концентрацию IL-12-иммуноцитокина или IL-23-иммуноцитокина для наблюдения положительного биологического ответа, активированные CD4+ или CD8+ T-клетки (80 000 клеток/лунку) культивировали в течение ночи в присутствии возрастающих концентраций IL- 12-иммуноцитокинов или IL-23-иммуноцитокинов (0, 0,32, 1,6, 8, 40, 200 или 1000 нг/мл). rIL-12 (2,5 нг/мл) или rIL-23 (5 нг/мл) служили положительным контролем. Биологическую активность IL-12-иммуноцитокина или IL-23-иммуноцитокина по отношению к активности соответствующего цитокина в свободном состоянии (rIL-12 или rIL-23), выраженную в процентах, рассчитывали путем нормализации к соответствующим молекулярным массам. Молекулярные массы IL-12-иммуноцитокина и rIL-12 составляют примерно 220 кДа и примерно 70 кДа, соответственно. Молекулярные массы IL-23-иммуноцитокина и rIL-23 составляют примерно 215 кДа и примерно 65 кДа, соответственно. Следовательно, примерно 3 нг IL-12-иммуноцитокина или IL-23-иммуноцитокина эквивалентны примерно 1 нг rIL-12 или rIL-23 при той же молярной концентрации IL-12 или IL-23.

Таблица 5. Биологическая активность IL-12 антител Fab-IL-12-Fc-CD4, содержащих различные фрагменты IL-12
	rIL-12	«WT»	E59A	F60A	E59A/F60A
CD4+ Т-клетки	100,0%	43,0%	29,8%	32,2%	8,2%
CD8+ Т-клетки	100,0%	25,0%	1,1%	1,5%	0,0%

[454] Как видно из Таблицы 5, при размещении IL-12, содержащего субъединицу p40 дикого типа, в шарнирном участке все еще сохранялось примерно 25,0% активности IL-12 даже в отсутствие связывания антигена-мишени (CD4) с антителом в CD8+ T-клетках. Мутации E59A и F60A в субъединице p40 значительно снижали активность IL-12 примерно до 1,1% или 1,5% в отсутствие связывания CD4/антитело к CD4, которая повышалась примерно до 29,8% или 32,2% при наличии связывания CD4+ Т-клетка/антитело к CD4. Антитело Fab-IL-12-Fc-CD4, содержащее двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-12 («Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-CD4 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IL-12, специфичную к CD4+ T-клетки, (8,2%), при отсутствии перекрестной реактивности с CD8+ Т-клетками (0,0%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к CD4, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IL-12) на CD4+ Т-клетки.

Пример 6: Получение иммуноцитокина IL-12/антитело к CD8 (Fab-IL-12-Fc-CD8 Ab) с биологической активностью IL-12, направленной на CD8+ Т-клетки

[455] Антитело к CD8, содержащее клон G10-1 VH (SEQ ID NO: 114) и VL (SEQ ID NO: 115) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела к CD8, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Одноцепочечный IL-12 «дикого типа» или вариант IL-12, содержащий двойную мутацию E59A, F60A или E59A/F60A в субъединице p40 (SEQ ID NO: 31-33), как описано в примере 4, помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к CD8 (пример строения см. на фигуре 2В), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-12/антитело к CD8 «Fab-IL-12-Fc-CD8 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-CD8 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-12 (SEQ ID NO: 36), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1. FACS использовали для подтверждения того, что антитела Fab-IL-12-Fc-CD8 были способны связываться с CD8+ Т-клетками, но не с CD4+ Т-клетками (данные не показаны).

[456] Анализ высвобождения IFN-γ проводили подобно тому, как описано в примере 5, путем культивирования активированных CD4+ или CD8+ Т-клеток в присутствии повышающихся концентраций rIL-12 (положительный контроль) или антител Fab-IL-12-Fc-CD8. На следующий день содержание IFN-γ, высвобождаемого в среду для культивирования клеток, измеряли с помощью анализа ELISA. Биологическую активность IL-12 в процентах рассчитывали путем деления данных для Fab-IL-12-Fc-CD8 Ab на данные для rIL-12.

Таблица 6. Биологическая активность IL-12 антител Fab-IL-12-Fc-CD8, содержащих различные фрагменты IL-12
	rIL-12	«WT»	E59A	F60A	E59A/F60A
CD4+ Т-клетки	100,0%	21,0%	2,1%	1,2%	0,0%
CD8+ Т-клетки	100,0%	56,0%	24,2%	21,9%	11,0%

[457] Как видно из Таблицы 6, при размещении IL-12, содержащего субъединицу p40 дикого типа, в шарнирном участке все еще сохранялся примерно 21,0% активности IL-12 даже в отсутствие связывания антигена-мишени (CD8) с антителом в CD4+ T-клетках. Мутации E59A и F60A в субъединице p40 значительно снижали активность IL-12 примерно до 2,1% или 1,2% в отсутствие связывания CD8/антитело к CD8, которая повышалась примерно до 24,2% или 21,9% при наличии связывания CD8+ Т-клетки/антитело к CD8. Антитело Fab-IL-12-Fc-CD8, содержащее двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-12 («Fab-IL-12(E59A/F60A)-Fc-CD8 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IL-12, специфичную к CD8+ T-клеткам, (11,0%), при отсутствии перекрестной реактивности с CD4+ Т-клетками (0,0%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к CD8, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IL-12) на CD8+ Т-клетки.

Пример 7: Получение иммуноцитокина IL-23/антитело к PD-1 (Fab-IL-23-Fc-PD-1 Ab) с биологической активностью IL-23, направленной на PD-1-положительные клетки

Конструирование вариантов IL-23 и их иммуноцитокинов

[458] IL-23 представляет собой гетеродимерный цитокин, состоящий из субъединицы р19 и субъединицы р40. Субъединица p40 является общей с IL-12. Варианты IL-23 конструировали подобно тому, как описано в примере 4, путем создания аминокислотных замен в общей субъединице p40 (см. Таблицу 7). Был получен одноцепочечный вариант IL-23, от N' к C': вариантная субъединица p40 (SEQ ID NO: 31-34) - линкер (SEQ ID NO: 229) - субъединица p19 дикого типа (SEQ ID NO: 37). Также конструировали одноцепочечный IL-23 «дикого типа» для использования в качестве контроля (SEQ ID NO: 38), от N' к C': субъединица p40 дикого типа - линкер (SEQ ID NO: 229) - субъединица p19 дикого типа, обозначенная как «WT» в таблице 7.

[459] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Различные одноцепочечные варианты IL-23 (или контрольный одноцепочечный IL-23 «дикого типа») помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2B), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-23/антитело к PD-1 «Fab-IL-23-Fc-PD-1 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-23(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab, содержащий одноцепочечный вариант IL-23 IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19), размещенный в шарнирном участке, содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-23 (SEQ ID NO: 39), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

Анализ передачи сигнала IL-23

[460] Клетки HEK-Blue™ IL-23 (InvivoGen кат. № hkb-il23) и клетки HEK-PD-1-IL-23 (полученные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-23 с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IL-23 различных иммуноцитокинов Fab-IL-23-Fc-PD-1 Ab, содержащих различные фрагменты IL-23, в соответствии с руководством для пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-il23), далее именуемым «репортерный анализ HEK-IL-23» или «репортерный анализ HEK-PD-1-IL-23». Репортерные клетки HEK-Blue™ IL-23 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-23 стабильно экспрессируют рецепторный комплекс, состоящий из IL-12Rβ1 и рецептора IL-23 (IL-23R), вместе с человеческим геном STAT3 для получения полностью функционального сигнального пути IL-23 (TyK2/JAK2/STAT3). Кроме того, эти репортерные клетки также несут STAT3-индуцируемый репортерный ген SEAP. При стимуляции IL-2 репортерные клетки HEK-Blue™ IL-23 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-23 запускают активацию STAT3 и последующую секрецию SEAP, уровни которой можно контролировать с помощью колориметрического ферментного анализа QUANTI-Blue™ (InvivoGen кат. № rep-qbs) активности щелочной фосфатазы. Экспериментальная процедура анализа передачи сигнала IL-2 была аналогична описанной в примере 1. Рекомбинантный человеческий IL-23 (rIL-23) в свободном состоянии служил в качестве положительного контроля и эталона для расчета процента активности.

Таблица 7. Биологическая активность IL-23 антител Fab-IL-23-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IL-23
	rIL-23	«WT»	G64A	E59A	F60A	E59A/F60A
Клетки HEK-IL-23	100,0%	70,0%	56,0%	6,9%	8,2%	0,0%
Клетки HEK-PD-1-IL-23	100,0%	150,0%	180,0%	39,0%	46,0%	4,8%

[461] Как видно из Таблицы 7, при размещении IL-23, содержащего субъединицу p40 дикого типа, в шарнирном участке сохранялось примерно 70,0% активности IL-23 даже в отсутствие связывания антигена-мишени (PD-1) с антителом в репортерном анализе HEK-IL-23. Мутации E59A и F60A в субъединице p40 значительно снижали активность IL-23 примерно до 6,9% или 8,2% в отсутствие связывания антител PD-1/анти-PD-1, которая повышалась примерно до 39,0% или 46,0% при наличии связывания PD-1/антитело к PD-1 в клетках HEK-PD-1-IL-23. Fab-IL-23-Fc-PD-1 Ab, содержащий двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-23 («Fab-IL-23(E59A/F60A)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировал специфическую в отношении PD-1-положительных клеток биологическую активность IL-23 (4,8%), при отсутствии перекрестной реактивности с PD-1-отрицательными клетками (0,0%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к PD-1, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IL-23) на PD-1+ клетки.

Пример 8: Получение иммуноцитокина IL-23/антитело к CD4 (Fab-IL-23-Fc-CD4 Ab) с биологической активностью IL-23, направленной на CD4+ Т-клетки

[462] Антитело к CD4, содержащее ибализумаб (Trogarzo®) VH (SEQ ID NO: 73) и VL (SEQ ID NO: 74) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела к CD4, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Одноцепочечный IL-23 «дикого типа» или вариант IL-23, содержащий двойную мутацию E59A, F60A или E59A/F60A в субъединице p40 (SEQ ID NO: 31-33), как описано в примере 7, помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к CD4 (пример строения см. на фигуре 2В), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-23/антитело к CD4 «Fab-IL-23-Fc-CD4 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-23(E59A/F60A)-Fc-CD4 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-23 (SEQ ID NO: 39), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1. FACS использовали для подтверждения того, что антитела Fab-IL-23-Fc-CD4 были способны связываться с CD4+ Т-клетками, но не с CD8+ Т-клетками (данные не показаны).

[463] IL-23 может стимулировать активированные CD4+ или CD8+ Т-клетки к высвобождению IFN-γ. Биологическую активность различных антител Fab-IL-23-Fc-CD4 в отношении IL-23 измеряли с использованием анализа высвобождения IFN-γ, как описано в примере 5. rIL-23 служил в качестве положительного контроля и эталона активности в процентах.

Таблица 8. Биологическая активность в отношении IL-23 антител Fab-IL-23-Fc-CD4, содержащих различные фрагменты IL-23
	rIL-23	«WT»	Е59А	F60A	E59A/F60A
CD4+ Т-клетки	100,0%	34,0%	24,0%	29,0%	6,8%
CD8+ Т-клетки	100,0%	21,0%	2,0%	1,5%	0,0%

[464] Как видно из Таблицы 8, размещение IL-23, содержащего субъединицу p40 дикого типа, в шарнирном участке по-прежнему сохраняло примерно 21,0% активности IL-23 даже в отсутствие связывания антигена-мишени (CD4) с антителом в CD8+ T-клетках. Мутации E59A и F60A в субъединице p40 значительно снижали активность IL-23 примерно до 2,0% или 1,5% в отсутствие связывания CD4/антитело к CD4, которая повышалась примерно до 24,0% или 29,0% при наличии связывания CD4+ Т-клетки/антитело к CD4. Антитело Fab-IL-23-Fc-CD4, содержащее двойные мутации E59A/F60A в субъединице p40 IL-23 («Fab-IL-23(E59A/F60A)-Fc-CD4 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IL-23, специфичную к CD4+ T-клеткам, (6,8%), при отсутствии перекрестной реактивности с CD8+ Т-клетками (0,0%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к CD4, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IL-23) на CD4+ Т-клетки.

Пример 9: Получение иммуноцитокина IL-10/антитело к PD-1 (Fab-IL-10-Fc-PD-1 Ab) с биологической активностью IL-10, направленной на PD-1-положительные клетки

Конструирование вариантов IL-10 и их иммуноцитокинов

[465] IL-10 естественным образом экспрессируется в виде нековалентно связанного гомодимера. Варианты IL-10 сконструировали путем замены аминокислот в положениях с 24 по 32 аланином или серином (см. Таблицу 9) и получали одноцепочечный вариант IL-10, от N' к C': субъединица варианта IL-10 (SEQ ID NO: 21-26) - линкер (SEQ ID NO: 227) - субъединица варианта IL-10. Также конструировали одноцепочечный IL-10 «дикого типа» для использования в качестве контроля (SEQ ID NO: 27), от N' к C': субъединица IL-10 дикого типа (SEQ ID NO: 20) -линкер (SEQ ID NO: 227) - субъединица IL-10 дикого типа, обозначенная как «WT» в таблице 9.

[466] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Различные одноцепочечные варианты IL-10 (или контрольный одноцепочечный IL-10 «дикого типа») помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2A), чтобы сконструировать иммуноцитокины IL-10/антитело к PD-1 «Fab-IL-10-Fc-PD-1 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IL-10(R27A)-Fc-PD-1 Ab, содержащий одноцепочечный вариант IL-10 IL-10(R27A)-линкер-IL-10(R27A), расположенный в шарнирном участке, содержит два легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-10 (SEQ ID NO: 28), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

Анализ передачи сигнала IL-10

[467] Клетки HEK-Blue™ IL-10 (InvivoGen кат. № hkb-il10) и клетки HEK-PD-1-IL-10 (полученные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-10 с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IL-10 различных Fab-IL-10-Fc-PD-1 Ab, содержащих различные фрагменты IL-10, в соответствии с руководством для пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-il10), далее именуемым «репортерный анализ HEK-IL-10» или «репортерный анализ HEK-PD-1-IL-10». Репортерные клетки HEK-Blue™ IL-10 и репортерные клетки HEK-PD-1-IL-10 стабильно экспрессируют цепи hIL-10Rα и hIL-10Rβ рецептора IL-10, человеческий STAT3 и STAT3-индуцируемый SEAP. Связывание IL-10 с его рецептором на поверхности клеток HEK-Blue™ IL-10 или репортерных клеток HEK-PD-1-IL-23 запускает передачу сигналов JAK1/STAT3 и последующее продуцирование SEAP, уровень которого в надосадочной жидкости клеточной культуры можно наблюдать с помощью QUANTI-Blue™ (InvivoGen кат. № rep-qbs). Экспериментальная процедура анализа передачи сигнала IL-2 была аналогична описанной в примере 1. Рекомбинантный человеческий IL-10 (rIL-10) в свободном состоянии служил в качестве положительного контроля и эталона для расчета процента активности.

Таблица 9. Биологическая активность IL-10 антител Fab-IL-10-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IL-10
	rIL-10	«WT»	R24A	D25A/L26A
клетки HEK-IL-10	100,0%	26,0%	15,0%	4,0%
клетки HEK-PD-1-IL-10	100,0%	200,0%	150,0%	56,0%
	R27A	D28A/A29S	F30A/S31A	R32A
клетки HEK-IL-10	<0,1%	17,0%	13,0%	10,0%
клетки HEK-PD-1-IL-10	21,0%	70,0%	67,0%	42,0%

[468] Как видно из таблицы 9, при размещении IL-10, содержащего субъединицу IL-10 дикого типа, в шарнирном участке все еще сохранялось примерно 26,0% активности IL-10 даже в отсутствие связывания антигена-мишени (PD-1) с антителом в клетках HEK-IL-10. Все протестированные варианты IL-10 снижали активность IL-10 в отсутствие связывания PD-1/антитело к PD-1 по сравнению с активностью IL-10 «дикого типа», и их активность IL-10 повышалась при наличии связывания PD-1/антитело к PD-1 в клетках HEK-PD-1-IL-10. Fab-IL-10-Fc-PD-1 Ab, содержащее мутацию R27A в IL-10 («Fab-IL-10(R27A)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IL-10 (21,0%), специфичную в отношении PD-1-положительных клеток, с минимальной перекрестной реактивностью с PD-1-негативными клетками (<0,1%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к PD-1, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IL-10) на PD-1-положительные клетки.

Пример 10: Получение иммуноцитокина IFN-γ/антитело к PD-1 (Fab-IFN-γ-Fc-PD-1 Ab) с биологической активностью IFN-γ, направленной на PD-1-положительные клетки

Конструирование вариантов IFN-γ и их иммуноцитокинов

[469] IFN-γ естественным образом экспрессируется в виде симметричного гомодимера. Варианты IFN-γ конструировали путем замены аминокислот в положениях с 20 по 25 на A, K, S, E, Q или V (см. Таблицу 10) и получали одноцепочечный вариант IFN-γ, от N' к C': субъединица варианта IFN-γ (SEQ ID NO: 11-17) - линкер (SEQ ID NO: 227) - субъединица варианта IFN-γ. Также конструировали одноцепочечный IFN-γ «дикого типа» для использования в качестве контроля (SEQ ID NO: 18), от N' к C': субъединица IFN-γ дикого типа (SEQ ID NO: 10)-линкер (SEQ ID NO: 227) - субъединица IFN-γ дикого типа, обозначенная как «WT» в Таблице 10.

[470] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Различные одноцепочечные варианты IFN-γ (или контрольный одноцепочечный IFN-γ «дикого типа») помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2A), чтобы сконструировать иммуноцитокины IFN-γ/антитело к PD-1 «Fab-IFN-γ-Fc-PD-1 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IFN-γ(A23V)-Fc-PD-1 Ab, содержащий одноцепочечный вариант IFN-γ IFN-γ(A23V)-линкер-IFN-γ(A23V), расположенный в шарнирном участке, содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IFN-γ (SEQ ID NO: 19), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

Анализ передачи сигнала IFN-γ

[471] Клетки HEK-Blue™ IFN-γ (InvivoGen кат. № hkb-iFng) и клетки HEK-PD-1-IFN-γ (полученные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IFN-γ с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IFN-γ различных Fab-IFN-γ-Fc-PD-1 Ab, содержащих различные фрагменты IFN-γ, в соответствии с руководством для пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-iFng), далее именуемым «репортерный анализ HEK-IFN-γ» или «репортерный анализ HEK-PD-1-IFN-γ». Репортерные клетки HEK-Blue™ IFN-γ и репортерные клетки HEK-PD-1-IFN-γ стабильно экспрессируют человеческий ген STAT1 и STAT1-индуцируемый SEAP. Другие гены сигнального пути естественно экспрессируются в достаточных количествах в репортерных клетках. Связывание IFN-γ с его гетеродимерным рецептором, состоящим из цепей IFNGR1 и IFNGR2, на поверхности клеток HEK-Blue™ IFN-γ или репортерных клеток HEK-PD-1-IFN-γ запускает передачу сигналов JAK1/JAK2/STAT1 и последующее продуцирование SEAP, уровень которого в надосадочной жидкости клеточной культуры можно наблюдать с помощью QUANTI-Blue™ (InvivoGen кат. № rep-qbs). Экспериментальная процедура анализа передачи сигнала IL-2 была аналогична описанной в примере 1. Рекомбинантный человеческий IFN-γ (rIFN-γ) в свободном состоянии служил в качестве положительного контроля и эталона для расчета процента активности.

Таблица 10. Биологическая активность IFN-γ антител Fab-IFN-γ-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IFN-γ
	rIFN-γ	«WT»	S20A/D21A	D21K	V22A/A23S
Клетки HEK-IFN-γ	100,0%	36,0%	30,0%	35,0%	1,2%
Клетки HEK-PD-1-IFN-γ	100,0%	130,0%	89,0%	110,0%	24,0%
	D24A/N25A	A23E/D24E/N25K		A23Q	A23V
Клетки HEK-IFN-γ	21,0%	0,2%		0,8%	0,6%
Клетки HEK-PD-1-IFN-γ	70,0%	23,0%		31,0%	27,0%

[472] Как видно из таблицы 10, при размещении IFN-γ, содержащего субъединицу IFN-γ дикого типа, в шарнирном участке сохранялось примерно 36,0% активности IFN-γ даже в отсутствие связывания антигена-мишени (PD-1) с антителом в клетках HEK-IFN-γ. Остаток A23 представляется критическим для биологической активности IFN-γ, поскольку все варианты IFN-γ, содержащие мутацию A23, значительно снижают активность IFN-γ в отсутствие связывания PD-1/антитело к PD-1 по сравнению со связыванием IFN-γ «дикого типа», и их IFN-γ активность восстанавливалась в присутствии связывания PD-1/антитело к PD-1 в клетках HEK-PD-1-IFN-γ. Fab-IFN-γ-Fc-PD-1 Ab, содержащее мутацию A23V в IFN-γ («Fab-IFN-γ(A23V)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IFN-γ (27,0%), специфичную в отношении PD-1-положительных клеток, с минимальной перекрестной реактивностью с PD-1-негативными клетками (0,6%). Fab-IFN-γ-Fc-PD-1 Ab, содержащее тройные мутации A23E/D24E/N25K в IFN-γ («Fab-IFN-γ(A23E/D24E/N25K)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировало биологическую активность IFN-γ (23,0%), специфичную в отношении PD-1-положительных клеток, с минимальной перекрестной реактивностью с PD-1-негативными клетками (0,2%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к PD-1, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IFN-γ) на PD-1-положительные клетки.

Пример 11: Получение иммуноцитокина IFN-γ/антитело к CD4 (Fab-IFN-γ-Fc-CD4 Ab) с биологической активностью IFN-γ, направленной на CD4+ Т-клетки

[473] Антитело к CD4, содержащее ибализумаб (Trogarzo®) VH (SEQ ID NO: 73) и VL (SEQ ID NO: 74) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела к CD4, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Одноцепочечный IFN-γ «дикого типа» или вариант IFN-γ, содержащий различные мутации, как описано в примере 10, помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к CD4 (пример строения см. на фигуре 2В), чтобы сконструировать иммуноцитокины IFN-γ/антитело к CD4 «Fab-IFN-γ-Fc-CD4 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IFN-γ(A23V)-Fc-CD4 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IFN-γ (SEQ ID NO: 19), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

[474] IFN-γ может индуцировать экспрессию PD-L1 на клеточной поверхности. Для оценки биологической активности различных фрагментов IFN-γ в Fab-IFN-γ-Fc-CD4 Ab клетки HEK-CD4-IFN-γ создавали собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого CD4 в клетках HEK-Blue™ IFN-γ (InvivoGen кат. № hkb-iFng) с использованием лентивирусного вектора. rIFN-γ служил положительным контролем. Антитело к PD-1 - ниволумаб (Opdivo®) - и отсутствие лечения с использованием IFN-γ служили в качестве отрицательного контроля. Вкратце, клетки HEK-Blue™ IFN-γ или клетки HEK-CD4-IFN-γ культивировали только в присутствии культуральной среды (без IFN-γ), rIFN-γ (20 нг/мл), антитела к PD-1 (1 мкг/мл) или различных антител Fab-IFN-γ-Fc-CD4 (1 мкг/мл) при 37°C в CO₂ камере в течение ночи. На следующий день клетки окрашивали конъюгированным с аллофикоцианином (APC) антителом к PD-L1 человека (BioLegend, кат. № 374513), для выявления экспрессии PD-L1. Активность связывания различных антител Fab-IFN-γ-Fc-CD4 (или контрольных) с клетками HEK-Blue™ IFN-γ или клетками HEK-CD4-IFN-γ выражали как среднюю интенсивность флуоресценции (MFI), измеренную с использованием FACS.

Таблица 11. Биологическая активность IFN-γ антител Fab-IFN-γ-Fc-CD4, содержащих различные фрагменты IFN-γ
(единицы: MFI)	без IFN-γ	rIFN-γ	Ab к PD-1	«WT»	V22A/A23S
Клетки HEK-IFN-γ	15	75	14	57	18
Клетки HEK-CD4-IFN-γ	13	67	15	85	68
(единицы: MFI)	D24A/N25A	A23E/D24E/N25K		A23Q	A23V
Клетки HEK-IFN-γ	63	13		17	12
Клетки HEK-CD4-IFN-γ	81	59		72	68

[475] Как видно из Таблицы 11, обработка репортерных клеток с использованием IFN-γ или антитела к PD-1 (отрицательный контроль) не продемонстрировала начальную экспрессию PD-L1 на уровне ~15 MFI. Размещение IFN-γ «дикого типа», содержащего субъединицу IFN-γ дикого типа, в шарнирном участке антитела к CD4, сохраняло активность IFN-γ на уровне примерно 57 MFI (по сравнению с rIFN-γ в свободном состоянии - 75 MFI) в отсутствие связывания антигена-мишени антителом к CD4 в клетках HEK-IFN-γ. В соответствии с данными из примера 10 остаток A23 представляется критическим для биологической активности IFN-γ, поскольку все варианты IFN-γ, содержащие мутацию в A23, значительно снижали IFN-γ активность практически до исходного уровня (~15 MFI) в отсутствие связывания CD4 с антителом к CD4 по сравнению со связыванием IFN-γ дикого типа или варианта IFN-γ D24A/N25A, и их IFN-γ активность повышалась в присутствии связывания CD4 с антителом к CD4 в клетках HEK-CD4-IFN-γ. Fab-IFN-γ-Fc-CD4 Ab, содержащее тройные мутации A23E/D24E/N25K в IFN-γ («Fab-IFN-γ(A23E/D24E/N25K)-Fc-CD4 Ab») или мутацию A23V («Fab-IFN-γ(A23V)-Fc-CD4 Ab») продемонстрировало специфичную в отношении клеток CD4 биологическую активность IFN-γ (59 MFI или 68 MFI, соответственно) при отсутствии перекрестной реактивности или с небольшой перекрестной реактивностью с CD4-отрицательными клетками (13 MFI или 12 MFI, соответственно, на уровне или ниже исходного уровня). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к CD4, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IFN-γ) на CD4-положительные клетки.

Пример 12: Получение иммуноцитокина IFN-α2b/антитело к PD-1 (Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1 Ab) с биологической активностью IFN-α2b, направленной на PD-1-положительные клетки

Конструирование вариантов IFN-α2b и их иммуноцитокинов

[476] IFN-α2b (Intron-A®) представляет собой противовирусный или противоопухолевый препарат. Это рекомбинантная форма IFN-α2. Варианты IFN-α2b конструировали путем замены аминокислот в положениях 30 и 32-34 аланином (SEQ ID NO: 4, 6, 7 и 8; см. Таблицу 12). Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Различные варианты IFN-α2b (или контрольный IFN-α2b дикого типа «WT») помещали в шарнирный участок тяжелой цепи антитела к PD-1 (пример строения см. на фигуре 2A), чтобы сконструировать иммуноцитокины IFN-α2b/антитело к PD-1 «Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1 Ab». Например, иммуноцитокин Fab-IFN-α2b(L30A)-Fc-PD-1 Ab содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с вариантом IFN-α2b(L30A) (SEQ ID NO: 4), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

Анализ передачи сигнала IFN-α/β

[477] Клетки HEK-BlueTM IFN-α/β (InvivoGen кат. № hkb-iFnab) и клетки HEK-PD-1-IFN-α/β (созданные собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IFN-α/β с использованием лентивирусного вектора) использовали для оценки активности активации сигнала IFN-α2b различных антител Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IFN-α2b, в соответствии с Руководством для пользователя InvivoGen (InvivoGen кат. № hkb-iFnab), далее также именуемый «репортерным анализом НЕК-IFN-α/β» или «репортерным анализом НЕК-PD-1-IFN-α/β». Репортерные клетки HEK-Blue™ IFN-α/β и репортерные клетки HEK-PD-1-IFN-α/β получали путем стабильной трансфекции клеток HEK293 человеческими генами STAT2 и IRF9 для создания полностью активного сигнального пути IFN I типа, индуцируемого SEAP под контролем промотора ISG54, индуцируемого IFN-α/β. Другие гены сигнального пути (IFNAR1, IFNAR2, JAK1, TyK2 и STAT1) экспрессируются этими клетками естественным образом. Связывание IFN-α или IFN-β с его гетеродимерным рецептором, состоящим из цепей IFNAR1 и IFNAR2, запускает передачу сигналов JAK/STAT/ISGF3 и последующее продуцирование SEAP, за уровнем которого в надосадочной жидкости клеточной культуры можно наблюдать с помощью QUANTI-Blue™ ( InvivoGen Кат. № rep-qbs). Экспериментальная процедура анализа передачи сигнала IL-2 была аналогична описанной в примере 1. IFN-α2b в свободном состоянии служил в качестве положительного контроля и эталона для расчета процента активности.

Таблица 12. Биологическая активность в отношении IFN-α2b антител Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1, содержащих различные фрагменты IFN-α2b
	IFN-α2b (свободное состояние)	«WT»	L30A	D32A	R33A	H34A
Клетки HEK-IFN-α/β	100,0%	54,0%	15,0%	9,0%	5,0%	20,0%
Клетки HEK-PD-1-IFN-α/β	100,0%	96,0%	110,0%	50,0%	25,0%	56,0%

[478] Как видно из Таблицы 12, размещение IFN-α2b дикого типа в шарнирном участке антитела к PD-1 сохраняло активность IFN-α2b примерно на 54,0% даже в отсутствие связывания целевого антигена (PD-1) с антителом в клетках HEK-IFN-α/β. Все остатки L30, D32, R33 и H34 проявили себя как критические для биологической IFN-α2b активности, поскольку все варианты IFN-α2b значительно снижают активность IFN-α2b в отсутствие связывания PD-1/антитело к PD-1 по сравнению с IFN-α2b дикого типа, и их IFN-α2b активность восстанавливалась в присутствии связывания PD-1/антитело к PD-1 в клетках HEK-PD-1-IFN-α/β. Антитело Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1, содержащее мутацию L30A в IFN-α2b («Fab-IFN-α2b(L30A)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировало биологическую специфичную в случае PD-1-положительных клеток активность IFN-α2b (110,0%) со значительно более низкой перекрестной реактивностью в случае PD-1-отрицательных клеток (15,0%). Антитело Fab-IFN-α2b-Fc-PD-1, содержащее мутацию R33A в IFN-α2b («Fab-IFN-α2b(R33A)-Fc-PD-1 Ab»), продемонстрировало биологическую специфичную в случае PD-1-положительных клеток активность IFN-α2b (25,0%) со значительно более низкой перекрестной реактивностью в случае PD-1-отрицательных клеток (5,0%). Эти данные демонстрируют успешное создание иммуноцитокинов на основе антител к PD-1, которые могут специфично нацеливать биологическую активность цитокинов (например, IFN-α2b) на PD-1-положительные клетки при сниженной биологической активности цитокинов в отношении PD-1-отрицательных клеток.

Пример 13: Размещение варианта IL-2 в шарнирном участке иммуноцитокина IL-2/PD-L2-Fc значительно снижает токсичность у мышей.

[479] Подобно тому, как описано в Примере 3, составной белок PD-L2-шарнир-Fc (два полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит SEQ ID NO: 177) использовали в качестве исходного антигенсвязывающего белка для конструирования иммуноцитокинов, связывающихся с PD-1. Для конструирования гетеродимерного составного белка PD-L2-шарнир-Fc использовали один составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 52, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другой составной полипептид PD-L2-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 51, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Вариант IL-2 (R38D/K43E/E61R; SEQ ID NO: 2) был либо расположен в шарнирном участке одного полипептида PD-L2-шарнир-Fc (далее именуемый «иммуноцитокин IL-2 (R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc» или «конструкция №11»), либо был составлен с С-концом одного полипептида PD-L2-шарнир-Fc (далее именуемый «иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-2(R38D/K43E/E61R»). Иммуноцитокин IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc содержит один составной полипептид IL-2, содержащий SEQ ID NO: 180, и один спаренный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 179.

[480] 25 мышей BALB/c случайным образом распределяли в 5 групп (по 5 мышей в каждой группе), и им внутрибрюшинно вводили 200 мкг или 1000 мкг иммуноцитокина IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc, имуноцитокина PD-L2-Fc/IL-2(R38D/K43E/E61R) или исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc в качестве контроля. Каждая группа получала внутрибрюшинные инъекции в 1-й и 5-й день. Мышей ежедневно обследовали по четырем параметрам: i) текстуре меха, ii) снижению активности, iii) клиническим проявлениям и iv) потере веса более 10%.

[481] Как видно из таблицы 13, в случае размещения варианта IL-2 на С-конце полипептида PD-L2-шарнир-Fc, пять из пяти мышей умерли через 4-6 дней после инъекции как в группах с высокой дозой, так и в группах с низкой дозой. Напротив, в случае размещения варианта IL-2 в шарнирном участке, все мыши выживали, даже при введении высоких доз иммуноцитокинов (1000 мкг). Такая же выживаемость наблюдалась в контрольной группе (PD-L2-Fc без слияния с IL-2). Для случая иммуноцитокинов с вариантом IL-2, расположенным в шарнирном участке, токсичность, по-видимому, зависит от дозы, на что указывает повышенная потеря веса и большее снижение активности при увеличении дозы с 200 мкг до 1000 мкг.

Таблица 13. Токсичность in vivo иммуноцитокинов IL-2/PD-L2-Fc с разными конфигурациями
Конструкция	Доза (мкг)	Смертность в группе	Симптомы токсичности
Иммуноцитокин IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc (IL-2 расположен в шарнирном участке; конструкция №11)	200	Нет	Текстура меха, снижение активности
	1000	Нет	Текстура меха, снижение активности, потеря веса
Иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-2(R38D/K43E/E61R) (IL-2 составлен с C'-концом Fc)	200	5/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
	1000	5/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
Исходный составной белок PD-L2-шарнир-Fc (контроль)	1000	Нет	Нет

Пример 14: Размещение варианта IL-12 в шарнирном участке иммуноцитокина IL-12/антитело к PD-1 значительно снижает токсичность у мышей

Конструирование вариантов IL-12 и их иммуноцитокинов

[482] Подобно тому, как описано в примере 4, были получены 3 варианта одноцепочечного IL-12. «IL-12 (F60A)» (SEQ ID NO: 275) содержит, от N' к C': субъединица варианта p40 F60A (SEQ ID NO: 33) - линкер (SEQ ID NO: 228) - субъединица p35 дикого типа (SEQ ID NO: 29). «IL-12 (G64A)» содержит, от N' к C': субъединица варианта p40 F60A (SEQ ID NO: 34) - линкер (SEQ ID NO: 228) - субъединица p35 дикого типа (SEQ ID NO: 29). «IL-12 (E59A/F60A)» (SEQ ID NO: 36) содержит, от N' к C': субъединица варианта p40 E59A/F60A (SEQ ID NO: 31) - линкер (SEQ ID NO: 228) - субъединица p35 дикого типа (SEQ ID NO: 29).

[483] Как описано в примере 4, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (конструкция № 48) содержит две легкие цепи, каждая из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 106, одну тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107, и одну тяжелую цепь с одноцепочечным вариантом IL-12(E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36), расположенным в шарнирном участке, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112. Вариант одноцепочечного IL-12(E59A/F60A) в составе иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 заменяли либо на одноцепочечный вариант IL-12 (F60A) (SEQ ID NO: 275), либо на вариант одноцепочечный IL-12 (G64A) (SEQ ID NO: 332) для конструирования иммуноцитокина IL-12(F60A)/антитело к PD-1 и иммуноцитокина IL-12(G64A)/антитело к PD-1, соответственно. Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

[484] 30 мышей BALB/c случайным образом распределяли в 6 групп (по 5 мышей в каждой группе), и им внутрибрюшинно вводили 200 мкг или 1000 мкг иммуноцитокина IL-12(F60A)/антитело к PD-1, иммуноцитокина IL-12(G64A)/антитело к PD-1 или иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1. Каждая группа получала внутрибрюшинные инъекции в 1-й и 5-й день. Мышей ежедневно обследовали по четырем параметрам: i) текстуре меха, ii) снижению активности, iii) клиническим проявлениям и iv) потере веса более 10%.

[485] Как видно из таблицы 14, иммуноцитокин IL-12/антетело к PD-1, содержащий вариант IL-12 (G64A), показал самую высокую токсичность, о чем свидетельствует гибель 4/5 мышей в группе с низкой дозой и гибель 5/5 мышей в группе с высокой дозой. В отличие от этого, лечение иммуноцитокином IL-12/антитело к PD-1, содержащим вариант IL-12 (F60A), вызывало только одну смерть в группе с высокой дозой (1000 мкг) и не вызывало смертей в группе с низкой дозой (200 мкг); лечение иммуноцитокином IL-12/антитело к PD-1, содержащим вариант IL-12 (E59A/F60A), не вызывало смертей ни при одной дозе. Иммуноцитокин IL-12/антитело к PD-1, содержащий двойную мутацию E59A/F60A в IL-12, также продемонстрировал уменьшенную токсичность по сравнению с иммуноцитокином, содержащим одиночную мутацию F60A в IL-12, на что указывают различия в тяжести симптомов токсичности.

Таблица 14. Токсичность in vivo иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1
Конструкция	Доза (мкг)	Смертность в группе	Симптомы токсичности
Иммуноцитокин IL-12(F60A)/антитело к PD-1	200	Нет	Текстура меха, снижение активности
	1000	1/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
Иммуноцитокин IL-12(G64A)/антитело к PD-1 (конструкция №47)	200	4/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
	1000	5/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (конструкция №48)	200	Нет	Текстура меха (умеренная)
	1000	Нет	Текстура меха, снижение активности

Пример 15: Замена исходного антитела к PD-1 составным белком PD-L2-шарнир-Fc значительно снижает токсичность иммуноцитокинов IL-12

Конструирование иммуноцитокинов IL-12/PD-L2-Fc

[486] Составной белок PD-L2-шарнир-Fc (два полипептида PD-L2-шарнир-Fc, каждый из которых содержит SEQ ID NO: 177) использовали в качестве исходного антигенсвязывающего белка для конструирования иммуноцитокинов, связывающихся с PD-1. Для конструирования гетеродимерного составного белка PD-L2-шарнир-Fc использовали один составной полипептид PD-L2-шарнир-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 52, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другой составной полипептид PD-L2-Fc, содержащий шарнирный участок с SEQ ID NO: 51, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Одноцепочечный вариант IL-12 (F60A, G64A или E59A/F60A), как описано в примере 14, был расположен либо в шарнирном участке одного полипептида PD-L2-шарнир-Fc (далее именуемого «иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc»), либо составлен с С-концом одного полипептида PD-L2-шарнир-Fc (далее именуемый «иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12»). Например, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc («конструкция № 29») содержит один составной полипептид IL-12, содержащий SEQ ID NO: 186 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один спаренный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 185 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) в иммуноцитокине IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc заменяли любо на одноцепочечный вариант IL-12 (F60A) (SEQ ID NO: 275), либо на одноцепочечный вариант IL-12 (G64A) (SEQ ID NO: 332) для конструирования иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc («конструкция № 30») и иммуноцитокина IL-12(G64A)/PD-L2-Fc, соответственно. Например, иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc содержит один составной полипептид IL-12, содержащий SEQ ID NO: 274 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - одноцепочечный вариант IL-12(F60A) (SEQ ID NO: 275) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один парный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 185 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) («конструкция № 34») содержит один составной полипептид IL-12, содержащий SEQ ID NO: 276 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 61) - линкер GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 229) - одноцепочечный вариант IL-12(F60A) (SEQ ID NO: 275)); и один парный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 185 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединицу Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Иммуноцитокины конструировали, экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

[487] 50 мышей BALB/c случайным образом разделяли на 10 групп (по 5 мышей в каждой группе) и им внутрибрюшинно вводили путем инъекции по 200 мкг или 1000 мкг: i) иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc, ii) иммуноцитокина IL-12 (G64A)/PD-L2-Fc, iii) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc, iv) иммуноцитокина PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (IL-12 на C' в Fc) или v) иммуноцитокина PD-L2-Fc/IL-12(E59A/F60A) (IL-12 на C' в Fc). Каждая группа получала внутрибрюшинные инъекции в 1-й и 5-й день. Мышей ежедневно обследовали по четырем параметрам: i) текстуре меха, ii) снижению активности, iii) клиническим проявлениям и iv) потере веса более 10%.

[488] Как видно из таблицы 15, среди иммуноцитокинов с вариантом IL-12, расположенным в шарнирном участке, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, содержащий вариант IL-12 (G64A), показал самую высокую токсичность, о чем свидетельствует гибель 3/5 мышей в группе с низкой дозой и гибель 5/5 мышей в группе с высокой дозой. Это согласуется с самыми высокими результатами по токсичности IL-12 (G64A) среди всех вариантов IL-12 в примере 14. При размещении варианта IL-12 (F60A) на С-конце полипептида PD-L2-шарнир-Fc 2 из 5 мышей погибли в группе с высокой дозой. Напротив, когда вариант IL-12 (F60A) был размещен в шарнирном участке, все мыши выживали, даже при введении высоких доз иммуноцитокинов (1000 мкг). В соответствии с результатами в примере 14, иммуноцитокин IL-12/PD-L2-Fc, содержащий двойную мутацию IL-12 E59A/F60A, продемонстрировал токсичность меньше, чем у иммуноцитокина, содержащего одиночную мутацию IL-12 F60A, независимо от того, был ли вариант IL-12 расположен в шарнирном участке или на С-конце Fc, на что указывают различия в тяжести симптомов токсичности. Для большинства иммуноцитокинов наблюдалась дозозависимая токсичность, на что указывало усиление симптомов токсичности, таких как ухудшение структуры шерсти, повышенная потеря веса и/или большее снижение активности при увеличении дозы с 200 мкг до 1000 мкг. Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, действительно продемонстрировал наименьшую токсичность in vivo среди всех иммуноцитокинов IL-12/PD-L2-Fc и PD-L2-Fc/IL-12 с нулевым уровнем смертности и отсутствием симптомов токсичности даже при введении высоких доз.

[489] Сравнивая полученные результаты в Таблице 14 и Таблице 15, можно заключить, что замена антигенсвязывающего фрагмента антитела к PD-1 лигандом PD-L2 в иммуноцитокинах на основе IL-12 может дополнительно снизить общую токсичность. Например, сравните уровень смертности 3/5 в группе низких доз иммуноцитокина IL-12(G64A)/PD-L2-Fc с уровнем смертности 4/5 в группе низких доз иммуноцитокина IL-12(G64A)/антитело к PD-1; сравните уровень смертности 0 в группе с высокой дозой иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc с уровнем смертности 1/5 в группе с высокой дозой иммуноцитокина IL-12(F60A)/антитело к PD-1. При сравнении симптомов токсичности между соответствующими иммуноцитокинами варианта IL-12 в примере 14 и примере 15 более низкая токсичность иммуноцитокинов на основе PD-L2-Fc становится еще более очевидной. Например, при введении как низкой, так и высокой дозы иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (конструкция №29) симптомов токсичности не наблюдали в отличие от иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (конструкция №48); в группе как с низкой, так и с высокой дозами иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) проявлялось меньше симптомов токсичности (только текстура меха) по сравнению с иммуноцитокином IL-12(F60A)/антитело к PD-1. Снижение токсичности, наблюдаемое для иммуноцитокинов IL-12 на основе PD-L2-Fc, вероятно, было связано со стимулированной передачей сигналов ингибирующей контрольной точки иммунной системы PD-1 при связывании PD-L2-PD-1, что создавало сигнал иммуносупрессии, который «уравновешивает» иммуностимулирующую/провоспалительную активность IL-12.

Таблица 15. Токсичность иммуноцитокинов IL-12/PD-L2-Fc in vivo
Положение	Конструкция	Доза (мкг)	Гибель	Симптомы токсичности
Шарнир	Иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (конструкция №30)	200	Нет	Текстура меха (умеренная)
		1000	Нет	Текстура меха
	Иммуноцитокин IL-12(G64A)/PD-L2-Fc	200	3/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
		1000	5/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
	Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (конструкция №29)	200	Нет	Нет
		1000	Нет	Нет
C-конец	Иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (конструкция №34)	200	Нет	Текстура меха, снижение активности, потеря веса
		1000	2/5	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления
	PD-L2-Fc/IL-12(E59A/F60A) иммуноцитокин	200	Нет	Текстура меха
		1000	Нет	Текстура меха, снижение активности, потеря веса

Пример 16: Эффективность иммуноцитокинов IL-12 in vivo в мышиной модели сингенной опухоли 4T1

Конструирование иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/IL-2(R38D/K43E/E61R)/антитело к PD-1

[490] Как описано в примерах 3 и 4, антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. Для конструирования гетеродимера одна тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Вариант IL-2 R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2) был расположен в шарнирном участке одной тяжелой цепи гетеродимерного антитела к PD-1, а одноцепочечный вариант IL-12 E59A/F60A (SEQ ID NO: 36) помещали в шарнирный участок другой тяжелой цепи гетеродимерного антитела к PD-1, чтобы сконструировать «иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/IL-2(R38D/K43E/E61R)/антитело к PD-1» (или «конструкцию № 54»). Иммуноцитокин экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.

[491] Мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток 4T1 рака молочной железы мышей. Через семь дней после инокуляции раковых клеток размер опухоли составил примерно 50-150 мм³. После замеров опухоли мышам вводили 10 мг/кг (~200 мкг) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (получен в примерах 4 и 14; конструкция №48 на фигуре 5), 10 мг/кг (~200 мкг) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (получен в примере 15; конструкция №29 на фигуре 5), 5 мг/кг (~100 мкг) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/IL-2(R38D/K43E/E61R)/антетело к PD-1 (конструкция №54 на фигуре 5) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (10 мг/кг или 5 мг/кг на инъекцию, соответственно) на 7, 13 и 19 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигуре 5). Размер опухоли измеряли каждые 3 дня с момента первой инъекции. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 2000 мм³.

[492] Рак молочной железы, как показано на модели мышей 4T1, обладает высокой устойчивостью к современной иммунотерапии, включая антитело к PD-1, антитело к CTLA-4 и комбинированное лечение антителами к PD-1 и к CTLA-4. Как видно из фигуры 5, все три иммуноцитокина IL-12 в значительной степени подавляли рост опухоли 4T1, демонстрируя многообещающие результаты эффективности in vivo.

[493] Кроме того, IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48) и IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29) продемонстрировали сходную цитотоксичность в отношении опухоли 4T1 при введении одной и той же дозы (фигура 5). В сочетании с результатами примеров 14 и 15 эти данные дополнительно демонстрируют, что по сравнению с антигенсвязывающим доменом к PD-1, который блокирует сигнал иммуносупрессии PD-1, использование внеклеточного домена PD-L2 в конструкции иммуноцитокина может не только обеспечить похожий противоопухолевый эффект, но также снижают нежелательную токсичность, вероятно, за счет уравновешивания иммуностимулирующей/провоспалительной активности цитокинов (например, IL-12) с сигналом иммуносупрессии по сигнальному пути PD-L2/PD-1.

Пример 17: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 и иммуноцитокинов IL-2 в модели сингенных опухолей EMT6 у мышей

[494] Мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток EMT6 мышиного рака молочной железы. Через семь дней после инокуляции раковых клеток размер опухоли составил примерно 50-150 мм³. После замера размера опухоли мышам вводили по 10 мг/кг (~200 мкг) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (сконструированного в примерах 4 и 14; конструкция № 48 на фигуре 6), по 10 мг/кг (~200 мкг) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (сконструированного в примере 15; конструкция № 29 на фигуре 6), по 10 мг/кг (~200 мкг) иммуноцитокина IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc (сконструированного в примере 3; конструкция № 11 на фигуре 6) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (по 10 мг/кг на инъекцию) на 7, 13 и 19 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигуре 6). Размер опухоли измеряли каждые 3 дня с момента первой инъекции. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 2000 мм³.

[495] Рост опухоли EMT6 устойчив к иммунотерапии против PD-1. Как видно из фигуры 6, все иммуноцитокины значительно подавляли рост опухоли EMT6, причем иммуноцитокины IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 и IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L2-Fc продемонстрировали лучшую эффективность по сравнению с иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc. Несколько сниженная эффективность, наблюдаемая у иммуноцитокина IL-12 на основе PD-L2-Fc, вероятно, была связана со стимулированной PD-1 передачей сигналов ингибирующей контрольной точки иммунной системы при связывании PD-L2-PD-1, что создавало сигнал иммуносупрессии, который «уравновешивает» иммуностимулирующий эффект/провоспалительную активность IL-12.

Пример 18: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в мышиной модели сингенных опухолей CT26

[496] Мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток CT26 мышиного рака толстой кишки. Когда размер опухоли достигал примерно 100-200 мм³ (примерно на 11 день после инокуляции), мышам вводили по 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (полученного в примере 15; конструкция № 30; 5 мышей), по 10 мг/кг иммуноцитокина PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (полученного в примере 15, конструкция № 34; 5 мышей) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (по 10 мг/кг на инъекцию) на 11, 14 и 18 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигурах 7А и 7В). Размер опухоли регистрировали с течением времени. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 2000 мм³. Размер опухоли в скобках на фиг. 7А показан средний размер опухоли (± стандартное отклонение) в каждой группе при введении первой инъекции.

[497] Как видно из фигур 7A и 7B, иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) успешно подавлял рост опухоли у всех пяти мышей (показатель излечения 100%), а иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) успешно подавлял рост опухоли у четырех из пяти мышей (показатель излечения 80%). Среди вылеченных мышей эффективность ингибирования опухоли обоими иммуноцитокинами IL-12 была одинаковой, что свидетельствует об отсутствии существенной разницы в эффективности между составлением IL-12 с шарниром и присоединением к C-концу. Этот результат показывает, что оба исследованных иммуноцитокина IL-12 могут обеспечивать полную регрессию сингенных опухолей толстой кишки CT26 у мышей.

Пример 19: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в качестве противораковой вакцины против опухолей CT26

[498] Чтобы исследовать, могут ли иммуноцитокины, описанные в данном документе, действовать как противораковая вакцина или предотвращать рецидив рака, была проведена повторная стимуляция опухоли у всех вылеченных мышей из примера 18. Через 30 дней после последней инъекции иммуноцитокина вылеченным мышам вводили 0,25×10⁶ клеток мышиного рака толстой кишки CT26 в правый бок и 0,25×10⁶ клеток мышиного рака молочной железы EMT6 в левый бок (в качестве контроля). Размеры опухоли регистрировали каждые 4 дня после повторной инокуляции опухоли.

[499] Как показано на фигуре 8, все вылеченные мыши, ранее получавшие иммуноцитокины против опухоли CD26, были защищены от повторного заражения опухолью CT26, но не от EMT6. Иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) и иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) продемонстрировали аналогичную эффективность защиты от повторного заражения опухолью CT26. Эти результаты указывают на успешное создание памяти против опухоли CT26, предполагая, что описанные здесь иммуноцитокины, такие как иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) и иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2- Fc (№30) могут служить противораковой вакциной (например, против мышиного рака толстой кишки CT26) и/или могут предотвращать рецидив рака.

Пример 20: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в мышиной модели поздних стадий сингенных опухолей CT26

[500] Настойчивая необходимость в успешной клинической терапии поздних стадий рака по-прежнему не удовлетворена. Чтобы исследовать возможную эффективность иммуноцитокинов, описанных в данном документе, в лечении поздних стадий рака, мышам инокулировали раковые клетки, опухоли давали возможность вырасти до размера более 250 мм³, который у мышей считается неизлечимым с применением иммунотерапии. Такой объем мышиной опухоли может имитировать опухолевую массу у больных людей на поздних стадиях раком.

[501] Вкратце, мышам (масса тела ~ 20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток CT26 мышиного рака толстой кишки. Когда размер опухоли достигал примерно 250-400 мм³ мышам вводили по 20 мг/кг иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (сконструированного в примере 15; конструкция № 29; 7 мышей) или по 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (сконструированного в примере 15; конструкция № 30; 5 мышей). Всего было сделано пять инъекций на 11, 15, 20, 26 и 30 день после инокуляции мышам, получавшим обработку конструкцией № 29, или на 22, 26, 30, 34 и 38 день после инокуляции мышам, получавшим обработку конструкцией № 30 (обозначены черными стрелками на фигуре 9). Размер опухоли в скобках на фигуре 9 указывает размер опухоли каждой мыши при введении первой инъекции, который был равен или превышал 250 мм³. Размер опухоли регистрировали с течением времени.

[502] Как показано на фигуре 9, у всех мышей, получавших иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30), значительно уменьшался размер опухоли (100% уровень излечения); в то время как у 5 из 7 (71,4% излечения) мышей, получавших иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№ 29), размер опухоли значительно уменьшился. Это указывает на то, что оба иммуноцитокина IL-12 эффективны в лечении поздней стадии рака (например, поздней стадии рака толстой кишки). Наблюдаемая разница в эффективности была связана с более низкой эффективностью (например, способностью связываться с рецептором и/или способностью активировать сигнал) двойной мутации IL-12 (E59A/F60A) по сравнению с одиночной мутацией IL-12 (F60A). Такую разницу в эффективности можно компенсировать введением более высокой дозы (например, 20 мг/кг, а не 10 мг/кг) или увеличением числа инъекций (например, увеличением с 3 до 5 инъекций) иммуноцитокинов на основе IL-12 (E59A/F60A).

[503] На фигуре 10 показана одна типичная мышь, инокулированная опухолью CT26, первоначальный объем опухоли согласно измерению составил 290,6 мм³. Снимки были сделаны через 0, 7 и 14 дней после первоначальной инъекции иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№ 30), что указывает на успешную регрессию огромной опухоли (эквивалентно запущенной, поздней стадии рака человека).

Пример 21: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в мышиной модели сингенных опухолей EMT6

[504] Мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток мышиного рака молочной железы EMT6. При размере опухоли примерно 50-100 мм³ (~7 дней после инокуляции опухоли) мышам вводили по 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (сконструированного в примере 15; конструкция № 29), по 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12( F60A)/PD-L2-Fc (сконструированного в примере 15; конструкция № 30), по 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (сконструированного в примере 4; конструкция № 48) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (по 10 мг/кг на инъекцию) на 7, 12 и 16 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигурах 11А и 11В). Размер опухоли регистрировали с течением времени. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 1500 мм³. Размер опухоли в скобках на фигуре 11А приведен как средний размер опухоли (± стандартное отклонение) в каждой группе при введении первой инъекции.

[505] Как видно на фигурах 11A и 11B, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№29) успешно подавлял рост опухоли у 3/5 мышей (показатель излечения 60%); иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) и иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48) успешно подавляли рост опухоли у всех пяти мышей (100% показатель излечения). Начальный средний размер опухоли в группе мышей, обработанных иммуноцитокином IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№48), был более чем в два раза больше, чем в двух других испытуемых группах. Эти результаты показывают, что все три протестированных иммуноцитокина IL-12 могут обеспечивать полную регрессию сингенных опухолей молочной железы EMT6 у мышей, при этом иммуноцитокин на основе антитела к PD-1 обладает наибольшей эффективностью.

Пример 22: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в качестве противораковой вакцины против опухолей EMT6

[506] Чтобы исследовать, могут ли иммуноцитокины, описанные в данном документе, действовать как противораковая вакцина или предотвращать рецидив рака, была проведена повторная стимуляция опухоли у всех вылеченных мышей из примера 21. Через 30 дней после последней инъекции иммуноцитокина вылеченным мышам вводили 0,25×10⁶ клеток мышиного рака молочной железы EMT6 в правый бок и 0,25×10⁶ клеток мышиного рака толстой кишки CT26 в левый бок (в качестве контроля). Размеры опухоли регистрировали каждые 4 дня после повторной инокуляции опухоли.

[507] Как видно из фигуры 12, все вылеченные мыши, ранее получавшие иммуноцитокины против опухоли EMT6, были защищены от повторного заражения опухолью EMT6, но не от CT26. Кроме того, все три иммуноцитокина IL-12 продемонстрировали сходную эффективность защиты от повторного заражения опухолью EMT6. Эти результаты указывают на успешное создание памяти против опухоли EMT6, предполагая, что описанные здесь иммуноцитокины, такие как иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2 Fc (№29), иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2- Fc (№ 30) и иммуноцитокин IL-12 (E59A/F60A)/антитело к PD-1 (№ 48) могут служить противораковой вакциной (например, против опухолей молочной железы (таких как EMT6)) у мышей и/или могут предотвратить рецидив рака.

Пример 23: Эффективность in vivo иммуноцитокинов IL-12 в мышиной модели тройного негативного рака молочной железы 4T1 (TNBC) с ортотопической опухолью

[508] 4T1 представляет собой стандартную мышиную модель опухоли молочной железы, используемую в доклинических исследованиях метастазов рака молочной железы. 4T1 является рефрактерной моделью для иммунотерапии и не отвечает на терапию антителами к PD-1, антителами к CTLA-4 или комбинацию антител к PD-1 и к CTLA-4. Инъекция 4T1 в жировую ткань молочной железы может воспроизводимо генерировать 4T1 метастазы рака молочной железы в легкие.

[509] Для проверки терапевтической эффективности иммуноцитокинов, описанных в данном документе, в отношении устойчивых к иммунотерапии типов рака, а также метастазов рака, мышам (масса тела ~ 20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток мышиного рака молочной железы 4T1 в жировую подушку молочной железы № 3. Развитие опухоли наблюдали в течение примерно 21-30 дней. Через четыре дня после инокуляции опухоли мышам вводили 20 мг/кг (на инъекцию) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (полученного в примере 15; конструкция № 29), 20 мг/кг (на одну инъекцию) иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (полученного в примере 15; конструкция № 30), комбинацию 10 мг/кг антитела к PD-1 и 10 мг/кг антитела к CTLA-4 (на инъекцию) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано пять инъекций на каждый четвертый день. Мышей умерщвляли через четыре недели и иссекали первичную опухоль из жировой ткани молочной железы.

[510] Как видно на фигуре 13 из сравнения с контролем PBS, иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) подавлял рост 4T1 в молочной железе у всех протестированных мышей, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29) подавлял рост 4T1 в молочной железе у 1 из 3 протестированных мышей, в то время как комбинированное лечение антителами к PD-1 и к CTLA-4 не подавляло рост 4T1 в молочной железе у всех 3 протестированных мышей. Как обсуждалось выше, разница в эффективности, вероятно, была связана с более низкой эффективностью (например, способностью связываться с рецептором и/или способностью активировать сигнал) двойной мутации IL-12 (E59A/F60A) по сравнению с одиночной мутацией IL-12 (F60A). Такую разницу в эффективности можно компенсировать введением более высокой дозы (например, 40 мг/кг, а не 20 мг/кг) или увеличением числа инъекций (например, увеличением с 5 до 7 инъекций) иммуноцитокинов на основе IL-12 (E59A/F60A).

[511] Для исследования терапевтической эффективности на метастазирование рака у умерщвленных мышей иссекали легкие. Ткань легкого суспендировали в растворе коллагеназы/ДНКазы и фильтровали через клеточное сито с размером 70 мкм. Клетки промывали, используя PBS, и ресуспендировали в среде. Были сделаны четыре серийных разведения 1:10. Клетки культивировали в инкубаторе с 7% CO₂ при 37°C в течение 14 дней с целью формирования колоний 4T1 клеток.

[512] Как видно из фигуры 14, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc (№29) и иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) в значительной степени подавляли метастазирование 4T1 в легкие по сравнению с комбинацией антитела к PD-1 и антитела к CTLA-4 антител или PBS (отрицательный контроль). Эти результаты статистически значимо различались (р-значение <0,001).

[513] Эти данные свидетельствуют о перспективной эффективность иммуноцитокинов IL-12 in vivo при лечении более поздних стадий и/или трудно поддающегося лечению рака молочной железы (например, ТНРМЖ), подавлении метастазирования рака и, возможно, при лечении других типов рака, устойчивых к современным иммунотерапиям.

Пример 24: Эффективность иммуноцитокинов IL-12 in vivo в мышиной модели сингенной опухоли B16

[514] B качестве модели рака кожи человека для исследований использовали линию клеток В16 мышиной опухоли меланомы. B16 является рефрактерной моделью для иммунотерапии и не отвечает на терапию антителами к PD-1, антителами к CTLA-4 или комбинацию антител к PD-1 и к CTLA-4.

[515] Для проверки терапевтической эффективности описанных здесь иммуноцитокинов в отношении более устойчивых к иммунотерапии типов рака мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток В16 мышиной меланомы. Когда размер опухоли достигал примерно 50-100 мм³, мышам вводили 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (полученного в примере 15; конструкция № 30), 10 мг/кг иммуноцитокина PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (полученного в примере 15, конструкция № 34) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (по 10 мг/кг на инъекцию) на 10, 13 и 16 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигурах 15А и 15В). Размер опухоли регистрировали с течением времени. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 1000 мм³. Размер опухоли в скобках на фигуре 15А приведен как средний размер опухоли (± стандартное отклонение) в каждой группе при введении первой инъекции.

[516] Как видно из фигур 15A и 15B, по сравнению с группой обработки с используванием PBS, в которой опухоль B16 резко выросла с 13-го дня после инокуляции, как иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34), так и иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) в значительной степени подавляли рост опухоли B16 вплоть до 24-го дня после инокуляции, что указывает на то, что оба иммуноцитокина IL-12 могут замедлять прогрессирование опухоли и/или увеличивать продолжительность жизни людей с резистентными к иммунотерапии раковыми заболеваниями (например, меланомой), демонстрируя многообещающую эффективность in vivo.

Пример 25: Эффективность иммуноцитокинов IL-12 in vivo в мышиной модели сингенной опухоли LL2

[517] Мышиная модель карциномы легкого LL2 представляет собой рефрактерную модель для иммунотерапии, которая не отвечает на терапию антителами к PD-1, антителами к CTLA-4 или комбинацией антител к PD-1 и к CTLA-4.

[518] Для проверки терапевтической эффективности описанных здесь иммуноцитокинов в отношении более устойчивых к иммунотерапии типов рака мышам (масса тела ~20 г) вводили 0,25×10⁶ клеток LL2 мышиного рака легкого. Когда размер опухоли достигал примерно 50-100 мм³ (~16 дней после инокуляции), мышам вводили 10 мг/кг иммуноцитокина IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (полученного в примере 15; конструкция № 30), 10 мг/кг иммуноцитокина PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (полученного в примере 15, конструкция № 34) или PBS (отрицательный контроль). Всего было сделано три инъекции (по 10 мг/кг на инъекцию) на 16, 20 и 23 дни после инокуляции (обозначены черными стрелками на фигурах 16А и 16В). Размер опухоли регистрировали с течением времени. Мышей умерщвляли, когда размер опухоли превышал 1000 мм³. Размер опухоли в скобках на фигуре 16А приведен как средний размер опухоли (± стандартное отклонение) в каждой группе при введении первой инъекции.

[519] Как видно из фигур 16A и 16B, по сравнению с группой обработки с используванием PBS, в которой опухоль LL2 резко выросла примерно с 20-го дня после инокуляции, иммуноцитокин PD-L2-Fc/IL-12(F60A) (№34) и иммуноцитокин IL-12(F60A)/PD-L2-Fc (№30) в значительной степени подавляли рост опухоли LL2 вплоть до 32-35-го дня после инокуляции, что указывает на то, что оба иммуноцитокина IL-12 могут замедлять прогрессирование опухоли и/или увеличивать продолжительность жизни людей с резистентными к иммунотерапии раковыми заболеваниями (например, раком легкого), демонстрируя многообещающую эффективность in vivo.

[520] В итоге приведенные выше данные (например, см. примеры 23-25) демонстрируют многообещающие результаты эффективности in vivo описанных здесь иммуноцитокинов (например, иммуноцитокинов на основе IL-12/PD-L2-Fc) в лечении различных запущенных и/или трудно поддающихся лечению типов рака (например, ТНРМЖ, меланомы, рака легких), подавлении метастазирования рака, лечении или замедлении прогрессирования опухолей различных типов рака, устойчивых к современным иммунотерапевтическим средствам (например, терапии антителом к PD-1, терапии антителом к CTLA-4 или их комбинированной терапии), и/или увеличение продолжительности жизни таких пациентов.

Пример 26: Положение цитокина или его варианта в иммуноцитокине влияет на неспецифичную активность иммуноцитокина

[521] Были созданы две конструкции иммуноцитокина для проверки того, как размещение цитокина или его варианта в шарнирном участке (между антигенсвязывающим доменом и Fc-фрагментом; скрытая конфигурация) или на С-конце Fc-фрагмента (например, C'-конце тяжелой цепи антитела; открытая конфигурация) может влиять на целевую активность цитокина или его варианта. Первая конструкция включала цитокин в шарнирном участке одной тяжелой цепи антитела к PD-1: внутри шарнирного участка между СН1 и СН2 (иммуноцитокины такой конфигурации названы «IL-12/антитело к PD-1»). Во второй конструкции цитокин составлен с С-концом одной тяжелой цепи антитела к PD-1 через линкер (иммуноцитокины такой конфигурации названы «антитело к PD-1/IL-12»), что представляет собой общую конструкцию для современных иммуноцитокинов.

[522] Антитело к PD-1 человека, содержащее ниволумаб (Opdivo®) VH (SEQ ID NO: 102) и VL (SEQ ID NO: 103) использовали в качестве исходного полноразмерного антитела, содержащего две легкие цепи, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106. При конструировании гетеродимера используют одну тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другую тяжелую цепь, содержащую шарнирный участок с SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62.

[523] Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (конструкция №48), иммуноцитокин IL-12(E59A)/антитело к PD-1 (конструкция №46) и иммуноцитокин IL-12(G64A)/антитело к PD-1 (конструкция № 47) с вариантом IL-12 (одноцепочечный, от N' к C': IL-12B (вариант p40)-линкер-IL-12A (wt p35)), расположенным в шарнирном участке одной тяжелой цепи гетеродимерного антитела к PD-1, конструировали, как описано в примерах 4 и 14.

[524] Чтобы получить составные конструкции цитокинов в положении C' тяжелой цепи, одноцепочечный вариант IL-12(E59A) (SEQ ID NO: 331), одноцепочечный вариант IL-12(G64A) (SEQ ID NO: 332) или одноцепочечный вариант IL-12 (E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36) соединяли C'-концом одной тяжелой цепи гетеродимерного антитела к PD-1 через пептидный линкер, G/S-содержащий. Конструкции в дальнейшем обозначаются как антитело к PD-1/IL-12(E59A) (конструкция № 46HC'; составной полипептид тяжелой цепи цитокина, несоставной полипептид тяжелой цепи SEQ ID NO: 107), антитело к PD-1/IL-12(G64A) (конструкция № 47HC'; составной полипептид тяжелой цепи цитокина, несоставной полипептид тяжелой цепи SEQ ID NO: 107) и антитело к PD-1/IL-12(E59A/F60A) (конструкция № 48HC'; составной полипептид тяжелой цепи цитокина, несоставной полипептид тяжелой цепи SEQ ID NO: 107) соответственно.

[525] Анализы трансдукции сигнала IL-12 с использованием клеток HEK-Blue™ IL-12 и HEK-PD-1-IL-12 (полученных собственными силами путем сверхэкспрессии человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-12 с использованием лентивирусного вектора) проводили так же, как описано в примере 4, с двумя конфигурациями иммуноцитокинов, описанными выше, и rIL-12 (положительный контроль).

Таблица 16. Биологическая активность IL-12 различных конфигураций иммуноцитокинов IL-12
Конструкция	Местоположение цитокина	Мутация IL-12 (в субъединице p40)	HEK-IL-12	HEK-PD-1-IL-12
rIL12 (контроль)	/	/	100%	100%
IL-12(G64A)/антитело к PD-1 (конструкция №47)	Шарнир одной тяжелой цепи	G64A	90%	230%
IL-12(E59A)/антитело к PD-1 (конструкция №46)		E59A	5%	78%
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 (конструкция №48)		E59A/F60A	<0,2%	32%
антитело к PD-1/IL-12(G64A) (конструкция № 47НС')	С-конец одной тяжелой цепи	G64A	85%	210%
антитело к PD-1/IL-12(E59A) (конструкция № 46HC')		E59A	15%	86%
антитело к PD-1/IL-12 (E59A/F60A) (конструкция № 48HC')		E59A/F60A	4%	37%

[526] Репортерный анализ HEK-IL-12 показал, что обе конфигурации иммуноцитокина IL-12 способны связываться с клетками HEK-IL-12 путем взаимодействия фрагмента IL-12/рецептора IL-12 только, если фрагмент IL-12 был доступен (например, конфигурация присоединения к тяжелой цепи по C'). Репортерный анализ HEK-PD-1-IL-12 показал, что обе конфигурации иммуноцитокина IL-12 способны связываться с клетками HEK-PD-1-IL-12 путем взаимодействия фрагмента IL-12/рецептора IL-12 и путем взаимодействия антигенсвязывающего фрагмента антитела к PD-1 с PD-1.

[527] Как видно из Таблицы 16, конфигурация, составленная с шарниром, значительно снижала неспецифичную активность (т.е. активность цитокинов в отсутствие связывания PD-1) по сравнению с конфигурацией, где присоединение выполнено на С-конце тяжелой цепи. В PD-1-отрицательных клетках (HEK-IL-12) конструкция № 48 показала почти неопределяемый уровень активности IL-12 (<0,2%) по сравнению с 4% для конструкции № 48HC'. Аналогичные результаты наблюдали для конструкции № 47 и конструкции № 47HC' (5% по сравнению с 15%, соответственно). Двойная мутация E59A/F60A в IL-12 также значительно снижает неспецифичную активность по сравнению с одиночной мутацией E59A или G64A. В PD-1-положительных клетках (HEK-PD-1-IL-12) целевая активность IL-12 у соответствующей конфигурации, составленной с шарниром, и у конфигурации, где присоединение выполнено на C-конце тяжелой цепи, была похожа, что позволяет предположить, что конструкция, составленная с шарниром, незначительно подавляет активность IL-12 в присутствии антигенпозитивных клеток (или при наличии связывания антигена). В совокупности шарнирное расположение цитокина (особенно некоторых вариантов цитокина) может значительно снизить неспецифичную активность IL-12 в отсутствие связывания антигенсвязывающего домена.

Пример 27: Получение иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1 со сниженным сродством к PD-1

Создание вариантов антител к PD-1 со сниженным сродством связывания с PD-1

[528] Из-за высокого сродства связывания ниволумаба с PD-1 иммуноцитокины IL-12/антитело к PD-1, в которых используется ниволумаб дикого типа в качестве исходного антитела, могут направлять активность IL-12 на все PD-1-положительные клетки, независимо от уровня экспрессии PD-1. Активация такой большой популяции PD-1-положительных клеток может привести к цитокиновому шторму или другим неблагоприятным побочным эффектам вследствие активации любых PD-1-положительных иммунных клеток.

[529] Для создания мутантных антител к PD-1 с пониженным сродством связывания с PD-1, которые были бы нацелены только на клетки с высокой экспрессией PD-1 (например, Т-клетки), мутации вводили в HC-CDR3 в положениях D100 или N99 ниволумаба: HC-CDR3 (D100N), HC-CDR3 (D100G), HC-CDR3 (D100R), HC-CDR3 (N99G), HC-CDR3 (N99A) и HC-CDR3 (N99M). Сродство этих антител к PD-1 измеряли с помощью Biacore и клеточных анализов, откалиброванных по сродству связывания ниволумаба дикого типа (см. Таблицу 17). «Н/О» указывает на то, что связывание с Pd-1 не обнаружено.

[530] В случае конструирования гетеродимерного антитела к PD-1 одна тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 42, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая тяжелая цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 41, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Каждая из двух легких цепей содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106.

Таблица 17. Сродство связывания с PD-1 у различных антител к PD-1 с мутациями в тяжелой цепи
Мутация тяжелой цепи	Сродство к PD-1 (Kd)
WT	2,6 нМ
D100N	25 нМ
D100G	130 нМ
D100R	910 нМ
N99G	2300 нМ
N99A	Н/О
N99M	Н/О

Конструирование иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1 со сниженным сродством к PD-1

[531] Различные иммуноцитокины IL-12/антитело к PD-1 получали, как описано в примере 4, путем размещения одноцепочечного варианта IL-12 (E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36) в шарнирном участке одной тяжелой цепи различных мутантов антител к PD-1, описанных выше. Последовательность составного полипептида цитокина и тяжелой цепи представлена в таблице 18 для каждой из конструкций. Соответствующая парная несоставная тяжелая цепь включает, от N' к C': VH (с соответствующей мутацией HC-CDR3) - CH1 - шарнир (SEQ ID NO: 41) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62).

Анализ передачи сигнала IL-12

[532] Анализы передачи сигнала IL-12 проводили так же, как описано в примере 4, с использованием иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1(мут.) с пониженным сродством связывания с PD-1 (IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(wt) и rIL-12 служили контролем) на клетках HEK-Blue™ IL-12 и клетках HEK-PD-1-IL-12. Использовали два варианта клеток HEK-PD-1-IL-12: один с высокой экспрессией PD-1 - «HEK-IL-12-PD-1 (высокая)» (как описано в примере 4, сверхэкспрессия PD-1), и один с 30-кратно более низкой экспрессией PD-1 «HEK-IL-12-PD-1 (низкий)» (созданы собственными силами путем экспрессии меньшего количества человеческого PD-1 в клетках HEK-Blue™ IL-12 с использованием лентивирусного вектора). Клетки инкубировали с 20 нг/мл различных иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1 (или контроля) в течение 24 часов.

Анализ высвобождения IFN-γ

[533] Анализы высвобождения IFN-γ проводили так же, как описано в примере 5, с использованием иммуноцитокинов IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(мут.) с пониженным сродством связывания с PD-1. IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(wt) и rIL-12 служили контролем. Вкратце, Т-клетки активировали путем инкубирования РВМС с антителом к CD3 (ОКТ3, 100 нг/мл) в течение трех дней. PBMC промывали для удаления антитела к CD3 и инкубировали с 200 нг/мл различных иммуноцитокинов IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(мут.) (или контроля) в течение 24 часов. Через один день измеряли содержание IFN-γ, высвобождаемого в культуральную среду.

Таблица 18. Биологическая активность IL-12 иммуноцитокинов IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1, содержащих различные мутации в тяжелой цепи антитела к PD-1 (сниженное сродство связывания с PD-1)
Конструкция (последовательность составной тяжелой цепи)	Сродство PD-1 (Kd)	HEK-IL-12	HEK-IL-12-PD-1 (высокая)	HEK-IL-12-PD-1 (низкая)	РВМС (IFN-γ нг/мл)
rIL-12		100%	100%	100%	2300
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(WT) (конструкция № 48; SEQ ID NO: 112)	2.6nM	<0,2%	36%	38%	1400
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100N) (SEQ ID NO: 268)	25 нM	<0,2%	38%	33%	820
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100G) (SEQ ID NO: 269)	130 нM	<0,2%	33%	17%	120
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100R) (SEQ ID NO: 270)	910 нM	<0,2%	10%	3%	69
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(N99G) (SEQ ID NO: 271)	2300 нM	<0,2%	5%	<0,2%	34
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(N99A) (SEQ ID NO: 272)	Н/О	<0,2%	3%	<0,2%	12
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(N99M) (SEQ ID NO: 273)	Н/О	<0,2%	<0,2%	<0,2%	13

[534] Как видно из Таблицы 18, для всех исследованных иммуноцитокинов не наблюдали неспецифичной активности IL-12 в отсутствие связывания антитела к PD-1 (см. колонку HEK-IL-12). Их способность передавать сигнал IL-12 при наличии связывания PD-1, а также их способность индуцировать высвобождение IFN-γ снижается по мере снижения сродства связывания антитела к PD-1, демонстрируя антигенсвязывающую цитокиновую активность конфигурации с шарниром. Иммуноцитокины IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1 с мутациями D100G, D100R или N99G в тяжелой цепи антитела к PD-1 показали заметные различия в связывании между клетками с высоким и низким уровнем экспрессии PD-1. Эти результаты показывают, что иммуноцитокины IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(мут.) с пониженным сродством к PD-1 могут быть специфично нацелены на клетки, экспрессирующие PD-1 на более высоком уровне. Выработка IFN-γ, индуцированная этими конструкциями, также была намного ниже по сравнению с контрольным иммуноцитокином IL-12/антитело к PD-1(wt) и rIL-12.

[535] Следовательно, описанные здесь иммуноцитокины IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(мут.) и, возможно, другие иммуноцитокины, сконструированные на основе антигенсвязывающего домена с пониженным сродством связывания антигена, можно использовать для специфичного нацеливания на интересующие клетки с высокой экспрессией антигена, что снизит побочные эффекты и/или цитокиновый шторм.

Пример 28: Снижение сродства связывания PD-1 у иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1 снижает токсичность у мышей

[536] Гуманизированным мышам PD-1 (гуманизированным путем встраивания в локус мышиного PD-1 химерного PD-1 с человеческим внеклеточным доменом, мышиным трансмембранным доменом и мышиным внутриклеточным доменом), полученные из штамма C57 (возраст 5-6 недель, самки весом 20 г) вводили по 10 мг/кг или 50 мг/кг (на инъекцию) различных иммуноцитокинов IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(мут.), описанных в примере 27. Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(wt) (конструкция №48) служил в качестве контроля. Всего было сделано четыре инъекции в дни 0, 4, 8 и 12. Мышей ежедневно обследовали на смертность и четыре симптома токсичности: i) текстуру меха, ii) снижение активности, iii) клинические проявлениям и iv) потерю веса.

[537] Мыши, которым вводили иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(wt), содержащий ниволумаб дикого типа, показали наибольшую токсичность, при этом все мыши в группе умерли после получения второй или третьей инъекции, даже при более низких дозах. Напротив, у мышей, которым вводили иммуноцитокины IL-12(E59A/F60A)антитело к PD-1(мут.), содержащие антитело к PD-1 со сниженным сродством связывания с PD-1, наблюдалась сниженная токсичность, при этом смерть наблюдалась только в группе, получавшей IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100N). Как видно из Таблицы 19, тяжесть симптома токсичности среди конструкций снижается по мере снижения сродства связывания с PD-1 и/или по мере уменьшения дозы.

Таблица 19. Токсичность in vivo иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1
Конструкция	Сродство к PD-1 (Kd)	Доза (мг/кг)	Симптомы токсичности	Гибель
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(WT) (конструкция №48)	2,6 нМ	10	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления	5/5
		50	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления	5/5
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100N)	25 нМ	10	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления	3/5
		50	Текстура меха, снижение активности, потеря веса, клинические проявления	5/5
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100G)	130 нМ	10	Текстура меха, снижение активности	Нет
		50	Текстура меха, снижение активности	Нет
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(D100R)	910 нМ	10	Текстура меха (умеренная)	Нет
		50	Текстура меха, снижение активности	Нет
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(N99G)	2300 нМ	10	Нет	Нет
		50	Текстура меха (умеренная)	Нет
IL-12(E59A/F60A)/антитело к PD-1(N99M)	Н/О	10	Нет	Нет
		50	Текстура меха (умеренная)	Нет

[538] Из-за высокого сродства связывания ниволумаба дикого типа с PD-1 (K_d≈10^-8-10^-9 M), IL-12(E59/F60A)/антитело к PD-1(WT), скорее всего, связывает и стимулирует (через цитокиновую активность) любую PD-1-положительную клетку. Это будет включать активированные Т-клетки и NK-клетки, что приводит к синдрому высвобождения цитокинов. Напротив, иммуноцитокины на основе IL-12/антитело к PD-1 с пониженным сродством связывания с hPD-1 могут связывать только значительно меньшую популяцию PD-1-положительных клеток, особенно клеток с очень высоким уровнем экспрессии PD-1, таких как истощенные T-клетки. Приведенные здесь данные согласуются с данными из in vitro анализа РВМС высвобождения IFN-γ в примере 27. Эти результаты показывают, что снижение сродства связывания PD-1 антигенсвязывающего домена антитела к PD-1 до K_d примерно 10^-6-10^-7 M (см., например, D100G, D100R, N99G в тяжелой цепи антитела к PD-1) может значительно повысить безопасность иммуноцитокинов IL-12/антитело к PD-1, сохраняя при этом терапевтическую эффективность.

Пример 29: Повышение сродства связывания PD-L1 и PD-L2 не увеличивает токсичность иммуноцитокинов IL-12/PD-L1-Fc и IL-12/PD-L2-Fc.

[539] Как показано в примерах 14-17, замена антигенсвязывающего фрагмента антитела к PD-1 внеклеточным доменом PD-L2 в иммуноцитокинах IL-12 может значительно снизить токсичность, вероятно из-за стимулированной передачи сигналов ингибирующей контрольной точки PD-1 иммунной системы при связывании PD-L2-PD-1, что создает сигнал иммуносупрессии, который «уравновешивает» иммуностимулирующую/провоспалительную активность IL-12. Чтобы исследовать, можно ли дополнительно улучшить профили безопасности этих «уравновешивающих» конструкций, были сконструированы иммуноцитокины IL-12, содержащие внеклеточный домен PD-L1 или PD-L2 с повышенным сродством связывания с PD-1, чтобы усилить сигнал иммуносупрессии PD-1.

Получение вариантов PD-L1 с повышенным сродством связывания с PD-1

[540] PD-L1 дикого типа имеет сродство связывания с PD-1 примерно 10^-5-10^-6 М, что ниже, чем у ниволумаба (Kd≈10^-8-10^-9 М). Для увеличения сродства к PD-1 были созданы мутанты PD-L1. Мутации вводили во внеклеточный домен PD-L1 дикого типа с положениями аминокислот, соотносящимися с SEQ ID NO: 249. Эти мутантные внеклеточные домены PD-L1 затем составляли с Fc-фрагментом через шарнирный участок для конструирования исходных конструкций PD-L1-Fc. При конструировании гетеродимера PD-L1-Fc одна полипептидная цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 52, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая полипептидная цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 51, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Названия мутантных конструкций были сделаны для конфигурации PD-L1(мут.)-Fc.

[541] Описание сделанных мутаций и сродства связывания с PD-1 (измеренные для конфигурации PD-L1-Fc) показаны в таблице 20. Сродство связывания каждого PD-L1(мут.)-Fc калибровали относительно сродства связывания PD-L1(wt)-Fc. Н/О указывает на то, что связывание PD-1 не выявлено. Эти результаты показывают, что все PD-L1(мут.) позволяют достичь примерно 4-60-кратного повышения сродства связывания с PD-1 по сравнению с PD-L1 дикого типа. Среди них PD-L1(I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K) (PD-L1(мут2)), PD-L1(I54Q/E58M/R113T/M115L/G119K) (PD-L1(мут6)) и PD-L1(I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A) (PD-L1(мут7)) продемонстрировали максимальное кратное повышение сродства к PD-1 по сравнению с PD-L1 дикого типа.

Таблица 20. Сродство связывания PD-1 различных мутантов PD-L1
Мутации (мут.) PD-L1	Сродство (Kd) к человеческому PD-1	Сродство (Kd) к мышиному PD-1
Нет (PD-L1(WT); SEQ ID NO: 250)	7500 нМ	5100 нМ
E58M/R113T/M115L/S117A/G119K (PD-L1(мут1); SEQ ID NO: 255)	н.о.	н.о.
I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K (PD-L1(мут2); SEQ ID NO: 256)	150 нМ	120 нМ
I54Q/R113T/M115L/S117A/G119K (PD-L1(мут3); SEQ ID NO: 257)	910 нМ	820 нМ
I54Q/E58M/M115L/S117A/G119K (PD-L1(мут4); SEQ ID NO: 258)	1090 нМ	980 нМ
I54Q/E58M/R113T/S117A/G119K (PD-L1(мут5); SEQ ID NO: 259)	1203 нМ	1100 нМ
I54Q/E58M/R113T/M115L/G119K (PD-L1(мут6); SEQ ID NO: 260)	555 нМ	420 нМ
I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A (PD-L1(мут7); SEQ ID NO: 261)	98 нМ	110 нМ

Получение вариантов PD-L2 с повышенным сродством связывания с PD-1

[542] PD-L2 имеет сродство связывания с PD-1 примерно 10^-6-10^-7 М, что ниже, чем у ниволумаба (Kd≈10^-8-10^-9 М). Для увеличения сродства к PD-1 были созданы мутанты PD-L2. Мутации вводили во внеклеточный домен PD-L2 дикого типа с положениями аминокислот, соотносящимися с SEQ ID NO: 175. Эти мутантные внеклеточные домены PD-L2 затем составляли с Fc-фрагментом через шарнирный участок при получении исходных конструкций PD-L2-Fc. При конструировании гетеродимера PD-L2-Fc одна полипептидная цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 52, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 61; другая полипептидная цепь содержит шарнирный участок, содержащий SEQ ID NO: 51, и субъединицу Fc-домена, содержащую SEQ ID NO: 62. Названия мутантных конструкции были сделаны для конфигурации PD-L2(мут.)-Fc.

[543] Описание сделанных мутаций и сродства связывания PD-1 (измеренные для конфигурации PD-L2-Fc) показаны в таблице 21. Сродство связывания для каждого PD-L2(мут.)-Fc калибровали относительно сродства связывания PD-L2(wt)-Fc. Эти результаты показывают, что все PD-L2(мут.) достигли примерно 2-5-кратного увеличения сродства связывания с PD-1 по сравнению с PD-L2 дикого типа. Среди них PD-L2(S58V) (PD-L2(мут2)) и PD-L2(T56V/S58V/Q60L) (PD-L2(мут4)) продемонстрировали максимальное кратное увеличение сродства к PD-1 по сравнению с PD-L2 дикого типа.

Таблица 21. Сродство связывания PD-1 различных мутантов PD-L2
Мутации PD-L2	Сродство (Kd) к человеческому PD-1	Сродство (Kd) к мышиному PD-1
Нет (PD-L2(WT); SEQ ID NO: 176)	1200 нM	980 нM
T56V (PD-L2(мут1); SEQ ID NO: 262)	520nM	430nM
S58V (PD-L2(мут2); SEQ ID NO: 263)	350 нM	230 нM
Q60L (PD-L2(мут3); SEQ ID NO: 264)	490 нM	320 нM
T56V/S58V/Q60L (PD-L2(мут4); SEQ ID NO: 265)	255 нM	220 нM

Конструирование иммуноцитокинов IL-12/PD-L1-Fc и IL-12/PD-L2-Fc с повышенным сродством к PD-1

[544] Подобно тому, как описано в примере 15, гетеродимерный PD-L1(мут.)-Fc или PD-L2(мут.)-Fc, полученный в данном документе, использовали в качестве исходных антигенсвязывающих белков для конструирования иммуноцитокинов IL-12, которые связываются с PD-1. Одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) помещали в N'-конец шарнира одной полипептидной цепи в исходных гетеродимерах PD-L1(мут.)-Fc или PD-L2(мут.)-Fc.

[545] Вкратце, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(wt)-Fc («конструкция № 29») содержит один составной полипептид IL-12, содержащий SEQ ID NO: 186 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG (SEQ ID NO: 203) - одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) (SEQ ID NO: 36) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один парный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 185 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2 (SEQ ID NO: 176) - линкер GSG - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(мут.)-Fc содержит один составной полипептид IL-12 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2(мут.) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один спаренный полипептид (от N' к C': внеклеточный домен PD-L2(мут.) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)).

[546] Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(wt)-Fc содержит один составной полипептид IL-12 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(WT) (SEQ ID NO: 250) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один спаренный полипептид (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(WT) (SEQ ID NO: 250) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут.)-Fc содержит один составной полипептид IL-12 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(мут.) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - одноцепочечный вариант IL-12(E59A/F60A) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 61)); и один спаренный полипептид (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(мут.) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)).

[547] Для проверки профилей безопасности иммуноцитокинов IL-12, сконструированных так, чтобы иметь повышенное сродство к PD-1, мышам C57 дикого типа (возраст 5-6 недель, самки 20 г) вводили 10 мг/кг или 50 мг/кг (на инъекцию) иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc или иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(mut2)-Fc, поскольку эти две конструкции показали сходное сродство связывания с PD-1 как человека, так и мыши PD-1 (~10^-7 М). В качестве контроля использовали иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(WT)-Fc или иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(WT)-Fc. Всего было сделано четыре инъекции в дни 0, 4, 8 и 12. Мышей ежедневно обследовали на смертность и четыре симптома токсичности: i) текстуру меха, ii) снижение активности, iii) клинические проявлениям и iv) потерю веса.

[548] Как видно из Таблицы 22, повышение сродства связывания с PD-1 не оказывает существенного влияния на профили безопасности иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L1-Fc или иммуноцитокина IL-12(E59A/F60A)/PD-L2-Fc. Эти результаты показывают, что иммуноцитокины IL-12, содержащие мутантные версии PD-L1 и PD-L2 с повышенным сродством связывания с PD-1, сохраняют профиль безопасности иммуноцитокинов IL-12/PD-L1-Fc дикого типа и IL-12/PD-L2-Fc. Это также может быть применено к другим иммуноцитокинам на основе PD-L1-Fc или PD-L2-Fc для конструирования других иммуноцитокинов (например, иммуноцитокинов IL-2).

Таблица 22. Токсичность иммуноцитокинов IL-12/PD-L2 in vivo
Конструкция (Последовательность цитокиновой составной цепи)	Сродство (Kd) к mPD-1	Доза (мг/кг)	Симптомы токсичности	Смертность в группе
IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(WT)-Fc	5100 нМ	10	Нет	Нет
		50	Нет	Нет
IL-12(E59A/F60A)/PD-L1 (I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K)-Fc («IL-12(E59A/F60A)/PD-L1 (mut2)-Fc»; SEQ ID NO: 277)	120 нМ	10	Нет	Нет
		50	Текстура меха (умеренная)	Нет
IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(WT)-Fc (конструкция № 29; SEQ ID NO: 186)	980 нМ	10	Нет	Нет
		50	Нет	Нет
IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(S58V)-Fc (IL-12(E59A/F60A)/PD-L2(mut2)-Fc; SEQ ID NO: 293)	230 нМ	10	Нет	Нет
		50	Нет	Нет

Пример 30: Получение иммуноцитокинов IL-2/PD-L1 с биологической активностью IL-2, направленной на PD-1-положительные клетки

[549] Некоторые цитокины обладают синергетическим действием, например IL-12 и IL-2, IL-12 и IFN-γ. Для снижения токсичности IL-2 и его иммуноцитокинов были созданы два набора мутаций IL-2: мутации в домене IL-2, которые взаимодействуют с IL2Rα (CD25) (R38D/K43E/E61R), и мутации в домене IL-2, которые взаимодействует с IL2Rγ (CD132) (L18R, Q22E, Q126T, S130R или любые их комбинации). См. Таблицу 23.

[550] Гетеродимерный PD-L1(mut2)-Fc использовали в качестве исходного белка, связывающего PD-1. Первая полипептидная цепь содержит SEQ ID NO: 281 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(mut2) (SEQ ID NO: 256) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 52) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 61)), вторая полипептидная цепь содержит SEQ ID NO: 283 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(mut2) (SEQ ID NO: 256) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)). Для конструирования иммуноцитокинов IL-2 вариант IL-2 помещали между внеклеточным доменом PD-L1(mut2) и шарниром. Вкратце, иммуноцитокин IL-2(мут.)/PD-L1(mut2)-Fc содержит один составной полипептид IL-2 (от N' к C': внеклеточный домен PD-L1(mut2) (SEQ ID NO: 256) - линкер GGGSG (SEQ ID NO: 209) - вариант IL-2(мут.) - линкер GGGGSGGG (SEQ ID NO: 334) - шарнир (SEQ ID NO: 51) - субъединица Fc-домена (SEQ ID NO: 62)); и один парный полипептид SEQ ID NO: 281.

[551] Клетки HEK-Blue™ IL-2 и клетки HEK-PD-1-IL-2 использовали для оценки активности конструкций по активации сигнала IL-2, как описано в примерах 1-3. Как видно из таблицы 23, IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc с мутациями IL-2 только в CD25-связывающем домене (R38D/K43E/E61R) по-прежнему сохраняли примерно 16% активности IL-2 согласно анализу HEK-IL-2 (без связывания с PD-1), в то время как иммуноцитокины IL-2, дополнительно несущие мутации IL-2 в CD132-связывающем домене, значительно снижали активность IL-2 в отсутствие связывания с PD-1 согласно анализу HEK-IL-2. Примечательно, что активность IL-2-некоторых иммуноцитокинов IL-2, дополнительно несущих мутации CD132-связывающего домена (см. конструкции, содержащие SEQ ID NO: 285, SEQ ID NO: 286 или SEQ ID NO: 287) можно частично восстановить при связывании с PD-1 (согласно анализу HEK-IL-2-PD-1). S130 может иметь решающее значение для активности IL-2, так как иммуноцитокин IL-2 дополнительно несущий мутацию S130R в CD132-связывающем домене (см. конструкцию, содержащую SEQ ID NO: 288) в сочетании с другими мутациями IL-2, не проявляет какой-либо активности IL-2 даже в присутствии связывания PD-1.

Таблица 23. Биологическая активность IL-2 иммуноцитокинов IL-2/антитело к PD-1
Конструкция	Несоставной полипептид PD-L1(mut2)-Fc SEQ ID NO:	Составной или несоставной полипептид IL-2 PD-L1(mut2)-Fc SEQ ID NO:	IL-2 SEQ ID NO:	Мутации в сайте связывания CD25	Мутации в сайте связывания CD132	HEK-IL-2	HEK-IL-2-PD-1
rIL2	/	/		/	/	100%	100%
PD-L1(мут2)-Fc	281	283	/	/	/	<0,1%	<0,1%
IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L1(мут2)-Fc	281	327	2	R38D/K43E/E61R	/	16%	76%
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/PD-L1(мут2)-Fc	281	285	251	R38D/K43E/E61R	L18R/Q22E	4%	35%
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/PD-L1(мут2)-Fc	281	286	252	R38D/K43E/E61R	Q126T	2%	20%
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)/PD-L1(мут2)-Fc	281	287	253	R38D/K43E/E61R	L18R/Q22E/Q126T	<0,1%	5%
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)/PD-L1(мут2)-Fc	281	288	254	R38D/K43E/E61R	L18R/Q22E/Q126T/S130R	<0,1%	<0,1%

Пример 31: Получение иммуноцитокинов IL-2/IL-12/PD-L1 с биологической активностью IL-2 и IL-12, направленной на PD-1-положительные клетки

[552] Некоторые цитокины, например IL-12 и IL-2, обладают синергетическим действием. Как показано в приведенных выше примерах, иммуноцитокин IL-12(E59A/F60A)/PD-L1-Fc (шарнирный участок) проявлял активность IL-12, зависящую от связывания PD-1. Чтобы исследовать, можно ли сконструировать иммуноцитокины, в которых будет присутствовать синергическая активность IL-12 и IL-2, и при этом будет сохранена зависимая от связывания PD-1 цитокиновая активность, были сконструированы различные конфигурации иммуноцитокинов. Гетеродимерный PD-L1(мут2)-Fc использовали в качестве исходного составного белка, связывающего PD-1 (сконструирован в примере 29). Серия I: одна полипептидная цепь содержит одноцепочечный полипептид IL-12(E59A/F60A), расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc (см. SEQ ID NO: 277, сконструированный в примере 29); парная полипептидная цепь не содержит фрагмент IL-2 (контроль; SEQ ID NO: 283, сконструирована в примере 29) или содержит вариант IL-2 (либо с мутацией L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 251), либо с мутацией R38D/K43E/E61R/Q126T (SEQ ID NO: 252)) расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc. Иммуноцитокины такой конфигурации названы IL-2/IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc. Серия 2: одна полипептидная цепь содержит IL-12(E59A/F60A), составленный с C'-концом PD-L1(мут2)-Fc через линкер GGGGSGGG (см. SEQ ID NO: 279); парная полипептидная цепь не содержит фрагмент IL-2 (контроль; SEQ ID NO: 283, сконструирована в примере 29), или содержит вариант IL-2 (либо с мутацией L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 251), либо с мутацией R38D/K43E/E61R/Q126T (SEQ ID NO: 252)) расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc. Иммуноцитокины такой конфигурации названы IL-2/PD-L1(мут2)-Fc/IL-12(E59A/F60A), указывая на то, что фрагмент IL-12 находится на C'-конце Fc. Последовательности конструкций см. в Таблице 24.

[553] Клетки HEK-Blue™ IL-2 и клетки HEK-PD-1-IL-2 использовали для оценки активности конструкций по активации сигнала IL-2, как описано в примерах 1-3. Клетки HEK-Blue™ IL-12 и клетки HEK-PD-1-IL-12 использовали для оценки активности конструкций по активации сигнала IL-12, как описано в примере 4.

[554] Как видно из таблицы 24, IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc (присоединение к шарниру) в отсутствие связывания с PD-1 не выявило активность IL-12, в то время как связывание с PD-1 восстанавливало активность IL-12 до 24%. Если IL-12(E59A/F60A) размещали на C'-конце Fc, как в PD-L1(мут2)-Fc/IL-12(E59A/F60A), активность IL-12 составляла примерно 1%-2% в отсутствие связывания PD-1, но активность IL-12 дополнительно восстанавливались за счет связывания с PD-1 (~ 25%) в той же степени, что и в случае присоединения IL-12 к шарниру.

[555] При добавлении IL-2 в парную цепь к шарнирному участку, в обоих конфигурациях присоединения IL-12 к шарниру и составления с C'-концом активность IL-2 составляла примерно 2-4% в отсутствие связывания с PD-1, но восстанавливалась примерно до 20%-35% за счет связывания PD-1.

[556] Эти данные указывают на то, что и IL-12, и IL-2 могут сохранять зависимую от связывания с PD-1 активность, если они включены в конфигурацию триспецифического иммуноцитокина. Кроме того, фрагменты IL-12 и IL-2 не оказывали существенного отрицательного влияния на активность друг друга.

Таблица 24. Биологическая активность IL-2 и IL-12 иммуноцитокинов IL-2/IL-12/PD-L1-Fc и иммуноцитокинов IL-2/PD-L1-Fc/IL-12
Конструкция	Составной полипептид IL-12 SEQ ID NO:	Составной или несоставной полипептид IL-2 SEQ ID NO:	HEK-IL-2	HEK-IL-2-PD-1	HEK-IL-12	HEK-IL-12-PD-1
rIL-2	/	/	100%	100%	/	/
rIL-12	/	/	/	/	100%	100%
IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc	277 (шарнир IL-12)	283 (без IL-2)	<0,1%	<0,1%	<0,2%	24%
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc	277 (шарнир IL-12)	285	4%	35%	<0,2%	19%
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc	277 (шарнир IL-12)	286	2%	20%	<0,2%	25%
PD-L1(mut2)-Fc/IL-12(E59A/F60A)	279 (IL-12 на С')	283 (без IL-2)	<0,1%	<0,1%	1%	25%
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc/IL-12(E59A/F60A)	279 (IL-12 на С')	285	3%	32%	2%	27%
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/PD-L1(mut2)-Fc/IL-12(E59A/F60A)	279 (IL-12 на С')	286	3%	31%	1%	30%

Пример 32: Размещение фрагмента IL-12 в шарнирном участке может значительно улучшить профили безопасности иммуноцитокинов IL-12/PD-L1-Fc и иммуноцитокинов IL-2/IL-12/PD-L1-Fc

[557] PD-L1(mut2)-Fc, сконструированный в примере 29, использовали в качестве исходного составного белка, связывающего PD-1, поскольку он проявлял сходное сродство связывания с PD-1 как у человека, так и у мышей.

[558] Для исследования профилей безопасности in vivo, вариант мышиного одноцепочечного IL-12 (SEQ ID NO: 330) с мутациями E59A/F60A в субъединице p40 и субъединице p35 дикого типа конструировали аналогично тому, как описано в данном документе: от N' к C': линкер p40(E59A/F60A)-GGPGGGGSGGGSGGGG (SEQ ID NO: 335)-p35(wt) (человеческий IL-12 не проявляет своих функций в организме мыши). Были сконструированы две серии составных полипептидов IL-12, аналогично примеру 31. Серия I: одна полипептидная цепь содержит одноцепочечный полипептид mIL-12(E59A/F60A), расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc (см. SEQ ID NO: 328); парная полипептидная цепь не содержит фрагмент IL-2 (контроль; SEQ ID NO: 283, сконструирована в примере 29) или содержит вариант IL-2 (с мутацией R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2), с мутацией L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 251) или с мутацией R38D/K43E/E61R/Q126T (SEQ ID NO: 252)) расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc. Иммуноцитокины такой конфигурации названы IL-2/IL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc. Набор 2: одна полипептидная цепь содержит одноцепочечный mIL-12(E59A/F60A), составленный с C'-концом PD-L1(мут2)-Fc через линкер GGGGSGGG (см. SEQ ID NO: 279); парная полипептидная цепь не содержит фрагмент IL-2 (контроль; SEQ ID NO: 283, сконструирована в примере 29) или содержит вариант IL-2 (с мутацией R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 2), с мутацией L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R (SEQ ID NO: 251), расположенный в шарнирном участке PD-L1(мут2)-Fc. Иммуноцитокины такой конфигурации названы IL-2/PD-L1(мут2)-Fc/IL-12(E59A/F60A), указывая на то, что фрагмент IL-12 находится на C'-конце Fc. Последовательности конструкций см. в Таблице 24. В контрольной серии не было фрагмента IL-12, составленного с PD-L1(мут2)-Fc (SEQ ID NO: 281).

[559] Для проверки профилей безопасности этих конструкций мышам C57 дикого типа (возраст 5-6 недель, вес 20 г, самки) вводили PBS (контроль) или описанные здесь иммуноцитокины (по 10 мг/кг на инъекцию). Всего было сделано 4 инъекции каждые 4 дня. Мышей обследовали на смерти и симптома токсичности, такие как текстура меха, снижение активности и потеря веса. 48 часов после 2^й после инъекции брали кровь и измеряли концентрацию IFN-γ в сыворотке.

[560] Как показано в Таблице 25, иммуноцитокины, содержащие дополнительные мутации IL-2 в CD132-связывающем домене (L18R/Q22E или Q126T) в дополнение к R38D/K43E/E61R в CD25-связывающем домене, продемонстрировали гораздо более высокие профили безопасности по сравнению с таковыми без мутаций в CD132-связывающем домене (см. конструкции, содержащие SEQ ID NO: 327), независимо от того, находится ли фрагмент IL-12 в на С' или в шарнире.

[561] Иммуноцитокины с IL-12 на C'-конце Fc - IL-2(мут.)/PD-L1(мут2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A) - показали более высокую токсичность по сравнению с IL-12, расположенным в шарнирном участке (IL -2(мут)/mIL-12(E59A/F60A)/PD-L1(мут2)-Fc). IL-2(мут.)/PD-L1(мут2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A) также индуцировал гораздо более высокое (в 20-30 раз выше) высвобождение цитокинов (см. уровень IFN-γ) по сравнению с IL-12 конфигураций, составленной с шарниром.

[562] В совокупности полученными наши данные in vivo и in vitro, представленные в настоящем документе, свидетельствуют о том, что иммуноцитокины с цитокином (например, IL-12 или его вариантом), расположенным в шарнирном участке, могут значительно улучшить профиль безопасности, даже если в той же конструкции присутствует больше цитокинов с синергетическим действием (например, IL-2/IL-12/PD-L1-Fc). Мутации в цитокинах, снижающие их активност, и/или мутации в антигенсвязывающем домене (например, антитело к PD-1, или PD-L1, или PD-L2) могут дополнительно повысить безопасность и/или терапевтическую эффективность конструкций.

Таблица 25. Биологическая активность к IL-2 и IL-12 у иммуноцитокинов IL-2/IL-12/PD-L1-Fc и иммуноцитокинов IL-2/PD-L1-Fc/IL-12
Конструкция	Составной или несоставной полипептид IL-12 SEQ ID NO:	Составной или несоставной полипептид IL-2 SEQ ID NO:	Доза (мг/кг)	Симптомы токсичности	Смертность в группе	IFN-γ в крови
PBS	/	/	/	Нет	Нет	5пг/мл
PD-L1(mut2)-Fc	281 (без IL-12)	283 (без IL-2)	10 мг/кг	Нет	Нет	6 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc	281 (без IL-12)	327	10 мг/кг	Текстура меха, снижение активности	Нет	45 пг/мл
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc	281 (без IL-12)	285	10 мг/кг	Нет	Нет	32 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/PD-L1(mut2)-Fc	281 (без IL-12)	286	10 мг/кг	Нет	Нет	24 пг/мл
mIL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc	328 (mIL-12 на шарнире)	283 (без IL-2)	10 мг/кг	Нет	Нет	80 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R)/mIL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc	328 (mIL-12 на шарнире)	327	10 мг/кг	Текстура меха, снижение активности	Нет	90 пг/мл
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/mIL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc	328 (mIL-12 на шарнире)	285	10 мг/кг	Нет	Нет	64 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/mIL-12(E59A/F60A)/PD-L1(mut2)-Fc	328 (mIL-12 на шарнире)	286	10 мг/кг	Нет	Нет	45 пг/мл
PD-L1(mut2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A)	329 (mIL-12 на С')	283 (без IL-2)	10 мг/кг	Текстура меха (умеренная)	Нет	1400 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A)	329 (mIL-12 на С')	327	10 мг/кг	Текстура меха, снижение активности	1/5	5600 пг/мл
IL-2(L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)/PD-L1(mut2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A)	329 (mIL-12 на С')	285	10 мг/кг	Текстура меха, снижение активности	Нет	1800 пг/мл
IL-2(R38D/K43E/E61R/Q126T)/PD-L1(mut2)-Fc/mIL-12(E59A/F60A)	329 (mIL-12 на С')	286	10 мг/кг	Текстура меха (умеренная)	Нет	2100 пг/мл

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO: 1 (зрелый человеческий IL-2 дикого типа)

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT

SEQ ID NO: 2 (IL-2 мутация R38D/K43E/E61R)

SEQ ID NO: 3 (зрелый человеческий IFN-α2b дикого типа)

CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE

SEQ ID NO: 4 (IFN-α2b мутация L30A)

SEQ ID NO: 5 (IFN-α2b мутация K31A)

SEQ ID NO: 6 (IFN-α2b мутация D32A)

SEQ ID NO: 7 (IFN-α2b мутация R33A)

SEQ ID NO: 8 (IFN-α2b мутация H34A)

SEQ ID NO: 9 (IFN-α2b мутация D35A)

SEQ ID NO: 10 (мономер зрелого человеческого IFN-γ дикого типа)

QDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRG

SEQ ID NO: 11 (мономер IFN-γ мутация S20A/D21A)

SEQ ID NO: 12 (мономер IFN-γ мутация V22A/A23S)

SEQ ID NO: 13 (мономер IFN-γ мутация А23V)

SEQ ID NO: 14 (мономер IFN-γ мутация D24A/N25A)

SEQ ID NO: 15 (мономер IFN-γ мутация A23E/D24E/N25K)

SEQ ID NO: 16 (мономер IFN-γ мутация A23Q)

SEQ ID NO: 17 (мономер IFN-γ мутация D21K)

SEQ ID NO: 18 (одноцепочечный гомодимер IFN-γ «дикого типа»; линкер выделен жирным шрифтом; мономер IFN-γ дикого типа выделен курсивом)

SEQ ID NO: 19 (одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V; линкер выделен жирным шрифтом; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 20 (мономер зрелого человеческого IL-10 дикого типа)

SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN

SEQ ID NO: 21 (мономер IL-10 мутация R24A)

SEQ ID NO: 22 (мономер IL-10 мутация D25A/L26A)

SEQ ID NO: 23 (мономер IL-10 мутация R27A)

SEQ ID NO: 24 (мономер IL-10 мутация D28A/A29S)

SEQ ID NO: 25 (мономер IL-10 мутация F30A/S31A)

SEQ ID NO: 26 (мономер IL-10 мутация R32A)

SEQ ID NO: 27 (одноцепочечный гомодимер IL-10 «дикого типа»; линкер выделен жирным шрифтом; мономер IL-10 дикого типа выделен курсивом)

SEQ ID NO: 28 (одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A; линкер выделен жирным шрифтом; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 29 (субъединица зрелого человеческого IL-12A (p35) дикого типа)

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

SEQ ID NO: 30 (субъединица зрелого человеческого IL-12B (p40) дикого типа)

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

SEQ ID NO: 31 (субъединица IL-12B (p40) мутация E59A/F60A)

SEQ ID NO: 32 (субъединица IL-12B (p40) мутация E59A)

SEQ ID NO: 33 (субъединица IL-12B (p40) мутация F60A)

SEQ ID NO: 34 (субъединица IL-12B (p40) мутация G64A)

SEQ ID NO: 35 (одноцепочечный гетеродимер IL-12 «дикого типа» IL-12B (p40 дикого типа) - линкер - IL-12A (p35 wt); линкер выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 36 (одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)- линкер - IL-12A (wt p35); линкер выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 37 (субъединица зрелого человеческого IL-23A (p19) дикого типа)

RAVPGGSSPAWTQCQQLSQKLCTLAWSAHPLVGHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIHQGLIFYEKLLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSLSPSQPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP

SEQ ID NO: 38 (одноцепочечный гетеродимер IL-23 «дикого типа» IL-12B (p40 дикого типа) - линкер - IL-23A (p19 wt); линкер выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 39 (одноцепочечный IL-23 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)- линкер - IL-23A (wt p19); линкер выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 40 (шарнир)

EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP

SEQ ID NO: 41 (шарнир)

SEQ ID NO: 42 (шарнир)

SEQ ID NO: 43 (шарнир)

SEQ ID NO: 44 (шарнир)

SEQ ID NO: 45 (шарнир)

SEQ ID NO: 46 (шарнир)

ERKCCVECPPCPAPPVAGP

SEQ ID NO: 47 (шарнир)

ESKYGPPCPSCPAPEFLGGP

SEQ ID NO: 48 (шарнир, например, шарнирная N'-часть)

EPKSCDK

SEQ ID NO: 49 (шарнир, например, шарнирная N'-часть)

EPKSC

SEQ ID NO: 50 (шарнир, например, шарнирная С'-часть)

DKTHTCPPCPAPELLGGP

SEQ ID NO: 51 (шарнир, например, шарнирная С'-часть)

SEQ ID NO: 52 (шарнир, например, шарнирная С'-часть)

SEQ ID NO: 53 (шарнир)

DKTHT

SEQ ID NO: 54 (шарнир, например, шарнирная N'-часть)

SEQ ID NO: 55 (шарнир)

SEQ ID NO: 56 (шарнир)

SEQ ID NO: 57 (шарнир)

SEQ ID NO: 58 (шарнир)

ESKYGPPCPPCPAPEFLGGP

SEQ ID NO: 59 (шарнир)

SEQ ID NO: 60 (Fc человеческого IgG1 дикого типа)

SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 61 (IgG1 Fc мутант1 T350V/L351Y/S400E/F405A/Y407V)

SEQ ID NO: 62 (IgG1 Fc мутант2 T350V/T366L/N390R/K392M/T394W)

SEQ ID NO: 63 (Fc человеческого IgG4 дикого типа)

SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO: 64 (мутант Fc IgG1)

SEQ ID NO: 65 (мутант Fc IgG1)

SEQ ID NO: 66 (мутант Fc IgG1)

SEQ ID NO: 67 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab HC-CDR1)

GYTFTSYVIH

SEQ ID NO: 68 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab HC-CDR2)

YNDGTDYDEKFKG

SEQ ID NO: 69 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab HC-CDR3)

EKDNYATGAWFAY

SEQ ID NO: 70 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab LC-CDR1)

KSSQSLLYSTNQKNYLA

SEQ ID NO: 71 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab LC-CDR2)

WASTRES

SEQ ID NO: 72 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab LC-CDR3)

QQYYSYRT

SEQ ID NO: 73 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab VH; CDR подчеркнуты)

SEQ ID NO: 74 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab VL; CDR подчеркнуты)

DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMNCKSSQSLLYSTNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQYYSYRTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO: 75 (anti-CD4 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 76 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab HC (Fc IgG4); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 77 (ибализумаб/Trogarzo anti-CD4 Ab LC; VL подчеркнут)

DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMNCKSSQSLLYSTNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQYYSYRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 78 (anti-CD4 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 79 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-IL-2 мутация R38D/K43E/E61R- шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 80 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 81 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 82 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 83 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 84 (anti-CD4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 85 (anti-CD3ε Ab HC-CDR1)

GFTFSYFWMN

SEQ ID NO: 86 (anti-CD3ε Ab HC-CDR2)

EIRLRSDNYATHYAESVKG

SEQ ID NO: 87 (anti-CD3ε Ab HC-CDR3)

DWEFTY

SEQ ID NO: 88 (anti-CD3ε Ab LC-CDR1)

SASLSVSFMH

SEQ ID NO: 89 (anti-CD3ε Ab LC-CDR2)

RTSNLAS

SEQ ID NO: 90 (anti-CD3ε Ab LC-CDR3)

QQRSSDPP

SEQ ID NO: 91 (anti-CD3ε Ab VH; CDR подчеркнуты)

SEQ ID NO: 92 (anti-CD3ε Ab VL; CDR подчеркнуты)

EIVMTQSPGTLSLSPGESATLSCSASLSVSFMHWFQQKPGHAPRLLIYRTSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSDPPTFGQGTRLEI

SEQ ID NO: 93 (anti-CD3ε Ab HC (мутант Fc IgG1; VH подчеркнут)

SEQ ID NO: 94 (anti-CD3ε Ab LC; VL подчеркнуто)

SEQ ID NO: 95 (anti-CD3ε Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 96 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 97 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 98 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 99 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 100 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 101 (anti-CD3ε Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 102 (ниволумаб/Опдиво anti-PD-1 Ab VH)

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO: 103 (ниволумаб/Опдиво anti-PD-1 Ab VL)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEI

SEQ ID NO: 104 (anti-PD-1 Ab HC (мутант Fc IgG1; VH подчеркнут)

SEQ ID NO: 105 (ниволумаб/Опдиво anti-PD-1 Ab HC; VH подчеркнут; шарниры выделены жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 106 (ниволумаб/Опдиво anti-PD-1 Ab LC; VL подчеркнут)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 107 (anti-PD-1 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 108 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 109 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 110 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 111 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 112 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 113 (anti-PD-1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 114 (G10-1 anti-CD8 Ab VH)

EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMKWVKQSHGKSLEWIGHINPNNDDTFYTQKFKGRATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCVRDDYDGGWFAYWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO: 115 (G10-1 anti-CD8 Ab VL)

DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDINNYLNWYQQKSDGTIKLLIYYTSRSYSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNRRQEDIATYFCQQGKTLPWTFGGGTKLEI

SEQ ID NO: 116 (anti-CD8 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 117 (G10-1 anti-CD8 Ab LC; VL подчеркнут)

DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDINNYLNWYQQKSDGTIKLLIYYTSRSYSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNRRQEDIATYFCQQGKTLPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 118 (anti-CD8 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 119 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 120 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 121 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 122 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 123 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 124 (anti-CD8 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 125 (anti-CTLA-4 Ab VH)

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO: 126 (ипилимумаб/Ервой anti-CTLA-4 Ab VL)

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEI

SEQ ID NO: 127 (anti-CTLA-4 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 128 (ипилимумаб/Ервой anti-CTLA-4 Ab HC; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 129 (ипилимумаб/Ервой anti-CTLA-4 Ab LC; VL подчеркнут)

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 130 (anti-CTLA-4 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 131 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 132 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 133 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 134 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 135 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 136 (anti-CTLA-4 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 243 (anti-PD-L1 Ab HC-CDR1)

DSWIH

SEQ ID NO: 244 (anti-PD-L1 Ab HC-CDR2)

WISPYGGSSY

SEQ ID NO: 245 (anti-PD-L1 Ab HC-CDR3)

RHWPGGF

SEQ ID NO: 246 (anti-PD-L1 Ab LC-CDR1)

VTTAVA

SEQ ID NO: 247 (anti-PD-L1 Ab LC-CDR2)

SASFPY

SEQ ID NO: 248 (anti-PD-L1 Ab LC-CDR3)

QQYMYHPST

SEQ ID NO: 137 (anti-PD-L1 Ab VH; CDR подчеркнуты)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASYFPFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSSYYADSVQDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKRHWPGGFDHWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO: 138 (anti-PD-L1 Ab VL; CDR подчеркнуты)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDVTTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFPYRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMYHPSTFGQGTKVEI

SEQ ID NO: 139 (anti-PD-L1 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 140 (anti-PD-L1 Ab LC; VL подчеркнут)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDVTTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFPYRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYMYHPSTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 141 (атезолизумаб/Тецентрик anti-PD-L1 Ab HC; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 142 (атезолизумаб/Тецентрик anti-PD-L1 Ab LC; VL подчеркнуто)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 143 (anti-PD-L1 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 144 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 145 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-мутантный IFN-α2b L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 146 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 147 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IL-10 R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 148 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 149 (anti-PD-L1 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 188 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab HC-CDR1)

GFNIKDTYIH

SEQ ID NO: 189 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab HC-CDR2)

RIYPTNGYTRYADSVKG

SEQ ID NO: 190 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab HC-CDR3)

WGGDGFYAMDY

SEQ ID NO: 191 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab LC-CDR1)

RASQDVNTAVA

SEQ ID NO: 192 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab LC-CDR2)

SASFLYS

SEQ ID NO: 193 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab LC-CDR3)

QQHYTTPPT

SEQ ID NO: 150 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab VH)

SEQ ID NO: 151 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab VL)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEI

SEQ ID NO: 152 (anti-HER2 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 153 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab HC; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 154 (трастузумаб/Герцептин anti-HER2 Ab LC; VL подчеркнут)

SEQ ID NO: 155 (anti-HER2 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 156 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутант IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 157 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-мутантный IFN-α2b L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 158 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 159 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный мунатный гомодимер IL-10 R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 160 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 161 (anti-HER2 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 162 (базиликсимаб/Симулект anti-CD25 Ab VH)

QLQQSGTVLARPGASVKMSCKASGYSFTRYWMHWIKQRPGQGLEWIGAIYPGNSDTSYNQKFEGKAKLTAVTSASTAYMELSSLTHEDSAVYYCSRDYGYYFDFWGQGTTLTVSSAS

SEQ ID NO: 163 (базиликсимаб/Симулект anti-CD25 Ab VL)

QIVSTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSRSYMQWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYTFGGGTKLEI

SEQ ID NO: 164 (anti-CD25 Ab HC (мутант Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 165 (базиликсимаб/Симулект anti-CD25 Ab LC; VL подчеркнут)

QIVSTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSRSYMQWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 166 (базиликсимаб/Симулект anti-CD25 Ab HC; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 167 (базиликсимаб/Симулект anti-CD25 Ab LC; VL подчеркнут)

QIVSTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSRSYMQWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE

SEQ ID NO: 168 (anti-CD25 Ab HC (мутант2 Fc IgG1); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 169 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-мутант IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутант IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 170 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-IFN-α2b мутация L30A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутант IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 171 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IFN-γ мутация A23V-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 172 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный гомодимер IL-10 мутация R27A-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 173 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 174 (anti-CD25 Ab VH-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-23, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 175 (человеческий PD-L2 дикого типа; сигнальный пептид выделен курсивом; внеклеточный домен подчеркнут; цитоплазматический домен выделен жирным шрифтом)

MIFLLLMLSLELQLHQIAA LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRTHPTWLLHIFIPFCIIAFIFIATVIALRKQLCQKLYSSKDTTKRPVTTTKREVNSAI

SEQ ID NO: 176 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа)

LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRTHPT

SEQ ID NO: 177 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-шарнир-мутантный Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRTHPT DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 178 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 179 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 180 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IL-2 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 181 (внеклеточный домен человекого PD-L2 дикого типа-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 182 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-мутантный IFN-α2b L30A-шарнирный мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный IFN-α2b выделен курсивом)

SEQ ID NO: 183 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ A23V-шарнирный-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный мономер IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 184 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IL-10 R27A-шарнирный-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; мутантный мономер IL-10 выделен курсивом)

SEQ ID NO: 185 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут)

SEQ ID NO: 186 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 187 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 дикого типа-линкер-одноцепочечный IL-23 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-23A (wt p19)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-23 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 194 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(G)_n

SEQ ID NO: 195 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GS)_n

SEQ ID NO: 196 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GGS)_n

SEQ ID NO: 197 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GGGS)_n

SEQ ID NO: 198 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GGS)_n(GGGS)_n

SEQ ID NO: 199 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GSGGS)_n

SEQ ID NO: 200 (линкер; n равно целому числу не меньше 1)

(GGSGS)_n

SEQ ID NO: 201 (линкер; n представляет собой целое число не менее 1)

(GGGGS)_n

SEQ ID NO: 202 (линкер)

GG

SEQ ID NO: 203 (линкер)

GSG

SEQ ID NO: 204 (линкер)

GGSG

SEQ ID NO: 205 (линкер)

GGSGG

SEQ ID NO: 206 (линкер)

GSGGGGG

SEQ ID NO: 207 (линкер)

GSGSG

SEQ ID NO: 208 (линкер)

GSGGG

SEQ ID NO: 209 (линкер)

GGGSG

SEQ ID NO: 210 (линкер)

GSSSG

SEQ ID NO: 211 (линкер)

GGSGGS

SEQ ID NO: 212 (линкер)

SGGGGS

SEQ ID NO: 213 (линкер)

GGGGS

SEQ ID NO: 214 (линкер; n представляет собой целое число не менее 1)

(GA)_n

SEQ ID NO: 215 (линкер)

GRAGGGGAGGGG

SEQ ID NO: 216 (линкер)

GRAGGG

SEQ ID NO: 217 (линкер)

GSGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 218 (линкер)

GGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 219 (линкер)

GGGSGGSGGS

SEQ ID NO: 220 (линкер)

GGSGGSGGSGGSGGG

SEQ ID NO: 221 (линкер)

GGSGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 222 (линкер)

GGSGGSGGSGGSGGSGGS

SEQ ID NO: 223 (линкер)

GGGGGGSGGGGSGGGGSA

SEQ ID NO: 224 (линкер)

GSGGGSGGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 225 (линкер)

KTGGGSGGGS

SEQ ID NO: 226 (линкер)

GGPGGGGSGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 227 (линкер)

GGGSGGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 228 (линкер)

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG

SEQ ID NO: 229 (линкер)

GGGGSGGGGSGGGGS

SEQ ID NO: 230 (линкер)

ASTKGP

SEQ ID NO: 231 (линкер)

DKP

SEQ ID NO: 232 (линкер)

DKPGS

SEQ ID NO: 233 (линкер)

PGS

SEQ ID NO: 234 (линкер)

GS

SEQ ID NO: 235 (линкер)

DKPGSG

SEQ ID NO: 236 (линкер)

PGSG

SEQ ID NO: 237 (линкер)

DKPGSGS

SEQ ID NO: 238 (линкер)

PGSGS

SEQ ID NO: 239 (линкер)

GSGS

SEQ ID NO: 240 (линкер)

DKPGSGGGGG

SEQ ID NO: 241 (линкер)

PGSGGGGG

SEQ ID NO: 242 (линкер)

P

SEQ ID NO: 249 (человеческий PD-L1 дикого типа; сигнальный пептид выделен курсивом; внеклеточный домен подчеркнут; цитоплазматический домен выделен жирным шрифтом)

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET

SEQ ID NO: 250 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 дикого типа)

FTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNER

SEQ ID NO: 251 (IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)

SEQ ID NO: 252 (IL-2 мутации R38D/K43E/E61R/Q126T)

SEQ ID NO: 253 (IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)

SEQ ID NO: 254 (IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)

SEQ ID NO: 255 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант1 E58M/R113T/M115L/S117A/G119K)

SEQ ID NO: 256 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K)

SEQ ID NO: 257 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант3 I54Q/R113T/M115L/S117A/G119K)

SEQ ID NO: 258 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант4 I54Q/E58M/M115L/S117A/G119K)

SEQ ID NO: 259 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант5 I54Q/E58M/R113T/S117A/G119K)

SEQ ID NO: 260 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант6 I54Q/E58M/R113T/M115L/G119K)

SEQ ID NO: 261 (внеклеточный домен человеческого PD-L1, мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A)

SEQ ID NO: 262 (внеклеточный домен человеческого PD-L2, мутант1 Т56В)

SEQ ID NO: 263 (внеклеточный домен человеческого PD-L2, мутант2 S58V)

SEQ ID NO: 264 (внеклеточный домен человеческого PD-L2, мутант3 Q60L)

SEQ ID NO: 265 (внеклеточный домен человеческого PD-L2, мутант4 T56V/S58V/Q60L)

SEQ ID NO: 266 (человеческий CD155 дикого типа)

MARAMAAAWPLLLVALLVLSWPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRNAIIFLVLGILVFLILLGIGIYFYWSKCSREVLWHCHLCPSSTEHASASANGHVSYSAVSRENSSSQDPQTEGTR

SEQ ID NO: 267 (внеклеточный домен человеческого CD155 дикого типа)

WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQ

TQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLR

VLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTV

TVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQN

EATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGA

RQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN

SEQ ID NO: 268 (anti-PD-1 Ab VH-(D100N)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 269 (anti-PD-1 Ab VH-(D100G)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 270 (anti-PD-1 Ab VH-(D100R)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 271 (anti-PD-1 Ab VH-(N99G)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 272 (anti-PD-1 Ab VH-(N99A)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 273 (anti-PD-1 Ab VH-(N99M)-CH1-шарнирная N'-часть-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер-IL-12A (wt p35)-шарнирная C'-часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 274 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 - шарнирная часть - линкер - одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 F60A) - линкер-IL-12A (wt p35)-C'-шарнирная часть-мутант1 Fc IgG1; VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 275 (одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 F60A)-линкер-IL-12A (wt p35); линкер выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 276 (внеклеточный домен человеческого PD-L2-линкер-шарнирная часть-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12, мутантный гетеродимер IL-12B (p40 F60A)-линкер- IL-12A (wt p35); VH подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 277 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 278 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 279 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 280 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 281 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 282 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 283 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 284 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 285 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-мутант IL-2 L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 286 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-мутант IL-2 R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 287 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 288 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 289 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 290 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 291 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 292 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 291 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 292 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 293 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 294 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 295 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 296 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 297 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 298 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 299 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом;

SEQ ID NO: 300 (человеческий PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом;

SEQ ID NO: 301 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 302 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 303 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 304 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 S58V внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации R38D/K43E/E61R)(L18R/Q22E/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 305 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 306 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 307 (человеческий PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 308 (человеческий PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-IL-2 мутации L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 309 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO:310 (внеклеточный домен человеческого СD155-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); СD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 311 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 312 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом)

SEQ ID NO: 313 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-мутантный IL-2 L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 314 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 315 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-мутантный IL-2 L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 316 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-мутантный IL-2 L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер заштрихован; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 317 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир- мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 318 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 319 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер заштрихован; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 320 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант7 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 321 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 С58В внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 322 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер -шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 323 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант2 С58V внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 324 (внеклеточный домен человеческого PD-L2 мутант4 T56V/S58V/Q60L внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L2 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 325 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 326 (внеклеточный домен человеческого CD155-линкер-одноцепочечный мутантный гомодимер IFN-γ (A23V/A23V)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; CD155 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; IFN-γ выделен курсивом)

SEQ ID NO: 327 (человеческий PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-мутантный IL-2 R38D/K43E/E61R)-линкер-шарнир-мутант2 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы IL-12 выделены курсивом.

SEQ ID NO: 328 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35)-шарнир-мутант1 Fc IgG1; PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы мышиного IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 329 (внеклеточный домен человеческого PD-L1 мутант2 I54Q/E58M/R113T/M115L/S117A/G119K внеклеточный домен-линкер-шарнир-мутант1 Fc IgG1-линкер-одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A/F60A)-линкер IL-12A (wt p35); PD-L1 подчеркнут; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; шарнир выделен жирным шрифтом; субъединицы мышиного IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 330 (мышиный IL-12 E59A/F60A; линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы мышиного IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 331 (одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 E59A)-линкер-IL-12A (wt p35); линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 332 (одноцепочечный IL-12 мутантный гетеродимер IL-12B (p40 G64A)-линкер-IL-12A (wt p35); линкер выделен жирным шрифтом и подчеркнут; субъединицы IL-12 выделены курсивом)

SEQ ID NO: 333

GGGGSGGGSGGGG

SEQ ID NO: 334

GGGGSGGG

SEQ ID NO: 335

GGPGGGGSGGGSGGGG

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ИММУНОВЭЙК ИНК.

<120> ИММУНОЦИТОКИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

<130> 75439-20006.40

<140> Пока еще не назначен

<141> Одновременно с этим

<150> US 63/130,339

<151> 2020-12-23

<160> 335

<170> FastSEQ для Windows версии 4.0

<210> 1

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 1

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 2

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 3

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 3

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 4

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 5

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Ala Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 6

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Ala

20 25 30

Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 7

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Ala His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 8

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 8

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg Ala Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 9

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 9

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg His Ala Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

35 40 45

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

85 90 95

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

100 105 110

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

115 120 125

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

130 135 140

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

145 150 155 160

Leu Arg Ser Lys Glu

165

<210> 10

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 10

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 11

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 11

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ala Ala Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 12

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 12

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Ala Ser Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 13

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 13

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 14

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 14

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Ala Ala Ala Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 15

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 15

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Glu Glu Lys Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 16

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 16

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Gln Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 17

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 17

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Lys Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 18

<211> 297

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 18

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

145 150 155 160

Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala

165 170 175

Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu

180 185 190

Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile

195 200 205

Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser

210 215 220

Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe

225 230 235 240

Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

245 250 255

Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu

260 265 270

Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg

275 280 285

Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

290 295

<210> 19

<211> 297

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 19

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

20 25 30

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

35 40 45

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

85 90 95

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

145 150 155 160

Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala

165 170 175

Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu

180 185 190

Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile

195 200 205

Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser

210 215 220

Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe

225 230 235 240

Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

245 250 255

Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu

260 265 270

Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg

275 280 285

Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

290 295

<210> 20

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 20

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 21

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 21

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Ala Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 22

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 22

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Ala Ala Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 23

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 23

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 24

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 24

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Ala Ser Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 25

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 25

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Ala Ala Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 26

<211> 160

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 26

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Ala

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 27

<211> 341

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 27

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

165 170 175

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser

180 185 190

Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg

195 200 205

Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu

210 215 220

Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr

225 230 235 240

Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu

245 250 255

Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val

260 265 270

Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg

275 280 285

Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln

290 295 300

Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala

305 310 315 320

Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr

325 330 335

Met Lys Ile Arg Asn

340

<210> 28

<211> 341

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 28

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

165 170 175

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser

180 185 190

Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala

195 200 205

Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu

210 215 220

Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr

225 230 235 240

Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu

245 250 255

Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val

260 265 270

Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg

275 280 285

Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln

290 295 300

Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala

305 310 315 320

Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr

325 330 335

Met Lys Ile Arg Asn

340

<210> 29

<211> 197

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 29

Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu

1 5 10 15

His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys

20 25 30

Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp

35 40 45

His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu

50 55 60

Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr

65 70 75 80

Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe

85 90 95

Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr

100 105 110

Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys

115 120 125

Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu

130 135 140

Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser

145 150 155 160

Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu

165 170 175

Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser

180 185 190

Tyr Leu Asn Ala Ser

195

<210> 30

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 30

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 31

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 31

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 32

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 32

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 33

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 33

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Ala Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 34

<211> 306

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 34

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Ala

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 35

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 35

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

325 330 335

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

340 345 350

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

355 360 365

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

370 375 380

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

435 440 445

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

450 455 460

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

465 470 475 480

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

485 490 495

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

500 505 510

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515 520

<210> 36

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 36

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

325 330 335

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

340 345 350

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

355 360 365

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

370 375 380

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

435 440 445

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

450 455 460

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

465 470 475 480

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

485 490 495

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

500 505 510

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515 520

<210> 37

<211> 170

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 37

Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln

1 5 10 15

Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val

20 25 30

Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp

35 40 45

Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg

50 55 60

Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe

65 70 75 80

Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu

85 90 95

Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu

100 105 110

Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile

115 120 125

Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe

130 135 140

Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val

145 150 155 160

Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro

165 170

<210> 38

<211> 497

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 38

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro

325 330 335

Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala

340 345 350

Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly

355 360 365

Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly

370 375 380

Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg

385 390 395 400

Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile

405 410 415

Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu

420 425 430

His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His

435 440 445

His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp

450 455 460

Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe

465 470 475 480

Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser

485 490 495

Pro

<210> 39

<211> 497

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 39

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro

325 330 335

Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala

340 345 350

Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly

355 360 365

Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly

370 375 380

Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg

385 390 395 400

Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile

405 410 415

Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu

420 425 430

His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His

435 440 445

His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp

450 455 460

Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe

465 470 475 480

Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser

485 490 495

Pro

<210> 40

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 40

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20

<210> 41

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 41

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

20

<210> 42

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 42

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

20

<210> 43

<211> 25

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 43

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5 10 15

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20 25

<210> 44

<211> 25

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 44

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5 10 15

Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

20 25

<210> 45

<211> 25

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 45

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5 10 15

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

20 25

<210> 46

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 46

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro

<210> 47

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 47

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro

20

<210> 48

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 48

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

1 5

<210> 49

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 49

Glu Pro Lys Ser Cys

1 5

<210> 50

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 50

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro

<210> 51

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 51

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly

1 5 10 15

Gly Pro

<210> 52

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 52

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

1 5 10 15

Gly Pro

<210> 53

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 53

Asp Lys Thr His Thr

1 5

<210> 54

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 54

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

1 5

<210> 55

<211> 26

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 55

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

1 5 10 15

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20 25

<210> 56

<211> 26

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 56

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

1 5 10 15

Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

20 25

<210> 57

<211> 26

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 57

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

1 5 10 15

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

20 25

<210> 58

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 58

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro

20

<210> 59

<211> 24

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 59

Glu Pro Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

20

<210> 60

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 60

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 61

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 61

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

100 105 110

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 62

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 62

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 63

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 63

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

195 200 205

Lys

<210> 64

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 64

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 65

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 65

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 66

<211> 209

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 66

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 67

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 67

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Ile His

1 5 10

<210> 68

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 68

Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe Lys Gly

1 5 10

<210> 69

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 69

Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 70

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 70

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Thr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 71

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 71

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 72

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 72

Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr

1 5

<210> 73

<211> 124

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 73

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 74

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 74

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Thr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 75

<211> 452

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 75

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 76

<211> 449

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 76

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 77

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 77

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Thr Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 78

<211> 452

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 78

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 79

<211> 588

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 79

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu

225 230 235 240

Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile

245 250 255

Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe

260 265 270

Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu

275 280 285

Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys

290 295 300

Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile

305 310 315 320

Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala

325 330 335

Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe

340 345 350

Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

355 360 365

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

370 375 380

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

385 390 395 400

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

405 410 415

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

420 425 430

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

435 440 445

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

450 455 460

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

465 470 475 480

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg

485 490 495

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

500 505 510

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

515 520 525

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser

530 535 540

Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

545 550 555 560

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

565 570 575

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580 585

<210> 80

<211> 627

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 80

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln

225 230 235 240

Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met

245 250 255

Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly

260 265 270

Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile

275 280 285

Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr

290 295 300

Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr

305 310 315 320

Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln

325 330 335

Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu

340 345 350

Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys

355 360 365

Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg

370 375 380

Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu

385 390 395 400

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

405 410 415

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

420 425 430

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

435 440 445

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

450 455 460

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

465 470 475 480

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

485 490 495

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

500 505 510

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

515 520 525

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

530 535 540

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

545 550 555 560

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

565 570 575

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

580 585 590

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

595 600 605

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

610 615 620

Pro Gly Lys

625

<210> 81

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 81

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu

225 230 235 240

Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn

245 250 255

Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp

260 265 270

Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe

275 280 285

Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile

290 295 300

Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg

305 310 315 320

Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val

325 330 335

Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser

340 345 350

Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg

355 360 365

Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn

385 390 395 400

Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly

405 410 415

Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg

420 425 430

Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys

435 440 445

Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys

450 455 460

Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp

465 470 475 480

Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln

485 490 495

Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro

500 505 510

Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 82

<211> 799

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 82

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu

225 230 235 240

Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp

245 250 255

Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp

260 265 270

Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys

275 280 285

Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu

290 295 300

Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala

305 310 315 320

His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu

325 330 335

Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val

340 345 350

Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr

355 360 365

Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr

370 375 380

Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

385 390 395 400

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln

405 410 415

Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro

420 425 430

Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe

435 440 445

Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu

450 455 460

Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met

465 470 475 480

Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp

485 490 495

Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr

500 505 510

Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn

515 520 525

Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln

530 535 540

Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn

545 550 555 560

Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His

565 570 575

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

580 585 590

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

595 600 605

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

610 615 620

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

625 630 635 640

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

645 650 655

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

660 665 670

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

675 680 685

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

690 695 700

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

705 710 715 720

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

725 730 735

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

740 745 750

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

755 760 765

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

770 775 780

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790 795

<210> 83

<211> 982

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 83

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr

225 230 235 240

Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val

245 250 255

Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp

260 265 270

Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val

275 280 285

Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu

290 295 300

Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile

305 310 315 320

Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr

325 330 335

Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp

340 345 350

Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser

355 360 365

Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu

370 375 380

Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val

385 390 395 400

Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro

405 410 415

Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr

420 425 430

Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys

435 440 445

Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser

450 455 460

Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu

465 470 475 480

Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp

485 490 495

Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn

500 505 510

Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp

515 520 525

Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

530 535 540

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn

545 550 555 560

Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His

565 570 575

Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg

580 585 590

Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu

595 600 605

Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu

610 615 620

Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe

625 630 635 640

Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met

645 650 655

Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val

660 665 670

Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln

675 680 685

Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln

690 695 700

Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu

705 710 715 720

Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His

725 730 735

Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu

740 745 750

Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

755 760 765

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

770 775 780

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

785 790 795 800

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

805 810 815

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

820 825 830

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

835 840 845

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

850 855 860

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

865 870 875 880

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

885 890 895

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

900 905 910

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

915 920 925

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

930 935 940

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

945 950 955 960

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

965 970 975

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

980

<210> 84

<211> 955

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 84

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asp Tyr Asp Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Asp Asn Tyr Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr

225 230 235 240

Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val

245 250 255

Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp

260 265 270

Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val

275 280 285

Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu

290 295 300

Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile

305 310 315 320

Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr

325 330 335

Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp

340 345 350

Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser

355 360 365

Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu

370 375 380

Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val

385 390 395 400

Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro

405 410 415

Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr

420 425 430

Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys

435 440 445

Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser

450 455 460

Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu

465 470 475 480

Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp

485 490 495

Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn

500 505 510

Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp

515 520 525

Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

530 535 540

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala

545 550 555 560

Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser

565 570 575

Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His

580 585 590

Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro

595 600 605

His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn

610 615 620

Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu

625 630 635 640

Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro

645 650 655

Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln

660 665 670

Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser

675 680 685

Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile

690 695 700

Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala

705 710 715 720

His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

725 730 735

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

740 745 750

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

755 760 765

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

770 775 780

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

785 790 795 800

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

805 810 815

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

820 825 830

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

835 840 845

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

850 855 860

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

865 870 875 880

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

885 890 895

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

900 905 910

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

915 920 925

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

930 935 940

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950 955

<210> 85

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 85

Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe Trp Met Asn

1 5 10

<210> 86

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 86

Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 87

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 87

Asp Trp Glu Phe Thr Tyr

1 5

<210> 88

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 88

Ser Ala Ser Leu Ser Val Ser Phe Met His

1 5 10

<210> 89

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 89

Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 90

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 90

Gln Gln Arg Ser Ser Asp Pro Pro

1 5

<210> 91

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115

<210> 92

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 92

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Leu Ser Val Ser Phe Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly His Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Asp Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile

100 105

<210> 93

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 93

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 94

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 94

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Leu Ser Val Ser Phe Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly His Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Asp Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 95

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 95

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 96

<211> 583

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 96

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Ala

210 215 220

Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu

225 230 235 240

Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn

245 250 255

Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys

260 265 270

Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro

275 280 285

Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg

290 295 300

Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys

305 310 315 320

Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr

325 330 335

Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile

340 345 350

Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

355 360 365

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

370 375 380

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

385 390 395 400

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

405 410 415

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

420 425 430

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

435 440 445

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

450 455 460

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

465 470 475 480

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

485 490 495

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

500 505 510

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

515 520 525

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

530 535 540

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

545 550 555 560

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

565 570 575

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580

<210> 97

<211> 622

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly

225 230 235 240

Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu

245 250 255

Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu

260 265 270

Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu

275 280 285

Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala

290 295 300

Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln

305 310 315 320

Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr

325 330 335

Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr

340 345 350

Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys

355 360 365

Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser

370 375 380

Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His Thr

385 390 395 400

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe

405 410 415

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

420 425 430

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

435 440 445

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

450 455 460

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

465 470 475 480

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

485 490 495

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

500 505 510

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro

515 520 525

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

530 535 540

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

545 550 555 560

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp

565 570 575

Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

580 585 590

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

595 600 605

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 98

<211> 750

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 98

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly

210 215 220

Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr

225 230 235 240

Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu

245 250 255

Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln

260 265 270

Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp

275 280 285

Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn

290 295 300

Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys

305 310 315 320

Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile

325 330 335

His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr

340 345 350

Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly

355 360 365

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

385 390 395 400

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

405 410 415

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

420 425 430

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

435 440 445

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

450 455 460

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

465 470 475 480

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

485 490 495

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

500 505 510

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His Thr

515 520 525

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe

530 535 540

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

545 550 555 560

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

565 570 575

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

580 585 590

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

595 600 605

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

610 615 620

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

625 630 635 640

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro

645 650 655

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

660 665 670

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

675 680 685

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp

690 695 700

Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

705 710 715 720

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

725 730 735

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745 750

<210> 99

<211> 794

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 99

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His

225 230 235 240

Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe

245 250 255

Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu

260 265 270

Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys

275 280 285

Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro

290 295 300

Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu

305 310 315 320

Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg

325 330 335

Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn

340 345 350

Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu

355 360 365

Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile

370 375 380

Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

385 390 395 400

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu

405 410 415

Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp

420 425 430

Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp

435 440 445

Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys

450 455 460

Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu

465 470 475 480

Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala

485 490 495

His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu

500 505 510

Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val

515 520 525

Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr

530 535 540

Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr

545 550 555 560

Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

565 570 575

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

580 585 590

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

595 600 605

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

610 615 620

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

625 630 635 640

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

645 650 655

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

660 665 670

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

675 680 685

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu

690 695 700

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

705 710 715 720

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

725 730 735

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala

740 745 750

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

755 760 765

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

770 775 780

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790

<210> 100

<211> 977

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 100

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly

210 215 220

Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

225 230 235 240

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

245 250 255

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

260 265 270

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp

275 280 285

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

290 295 300

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

305 310 315 320

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

325 330 335

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

340 345 350

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

355 360 365

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

370 375 380

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

385 390 395 400

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

405 410 415

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

420 425 430

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

435 440 445

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

450 455 460

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

465 470 475 480

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

485 490 495

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

500 505 510

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

515 520 525

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

530 535 540

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr

545 550 555 560

Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu

565 570 575

Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe

580 585 590

Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp

595 600 605

Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn

610 615 620

Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser

625 630 635 640

Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser

645 650 655

Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met

660 665 670

Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln

675 680 685

Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn

690 695 700

Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr

705 710 715 720

Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg

725 730 735

Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys

740 745 750

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

755 760 765

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

770 775 780

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

785 790 795 800

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

805 810 815

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

820 825 830

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

835 840 845

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

850 855 860

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

865 870 875 880

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

885 890 895

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

900 905 910

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

915 920 925

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

930 935 940

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

945 950 955 960

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

965 970 975

Lys

<210> 101

<211> 950

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 101

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Phe

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Asp Trp Glu Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly

210 215 220

Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

225 230 235 240

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

245 250 255

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

260 265 270

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp

275 280 285

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

290 295 300

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

305 310 315 320

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

325 330 335

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

340 345 350

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

355 360 365

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

370 375 380

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

385 390 395 400

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

405 410 415

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

420 425 430

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

435 440 445

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

450 455 460

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

465 470 475 480

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

485 490 495

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

500 505 510

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

515 520 525

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

530 535 540

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser

545 550 555 560

Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr

565 570 575

Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu

580 585 590

Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly

595 600 605

Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu

610 615 620

Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser

625 630 635 640

Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly

645 650 655

Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu

660 665 670

Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln

675 680 685

Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln

690 695 700

Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr

705 710 715 720

Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

725 730 735

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

740 745 750

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

755 760 765

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

770 775 780

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

785 790 795 800

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

805 810 815

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

820 825 830

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

835 840 845

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

850 855 860

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

865 870 875 880

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

885 890 895

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

900 905 910

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

915 920 925

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

930 935 940

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950

<210> 102

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 102

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser

115

<210> 103

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 103

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105

<210> 104

<211> 443

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 104

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

260 265 270

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

340 345 350

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

405 410 415

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

420 425 430

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 105

<211> 440

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 105

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser

115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys

180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 106

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 106

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 107

<211> 443

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 107

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

260 265 270

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu

340 345 350

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

405 410 415

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

420 425 430

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 108

<211> 579

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 108

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Ala Pro Thr Ser Ser

210 215 220

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

225 230 235 240

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

245 250 255

Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

260 265 270

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

275 280 285

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

290 295 300

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

305 310 315 320

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

325 330 335

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

340 345 350

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

355 360 365

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

370 375 380

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

385 390 395 400

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

405 410 415

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

420 425 430

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

435 440 445

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

450 455 460

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

465 470 475 480

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

485 490 495

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

500 505 510

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

515 520 525

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

530 535 540

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

545 550 555 560

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

565 570 575

Pro Gly Lys

<210> 109

<211> 618

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Gly Gly

210 215 220

Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr

225 230 235 240

Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Ala

245 250 255

Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln

260 265 270

Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln

275 280 285

Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu

290 295 300

Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp

305 310 315 320

Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu

325 330 335

Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile

340 345 350

Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val

355 360 365

Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln

370 375 380

Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

385 390 395 400

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

405 410 415

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

420 425 430

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

435 440 445

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

450 455 460

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

465 470 475 480

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

485 490 495

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

500 505 510

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu

515 520 525

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

530 535 540

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

545 550 555 560

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala

565 570 575

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

580 585 590

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

595 600 605

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615

<210> 110

<211> 746

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 110

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Gln Asp

210 215 220

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

225 230 235 240

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

245 250 255

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

260 265 270

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

275 280 285

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

290 295 300

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

305 310 315 320

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

325 330 335

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

340 345 350

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly

355 360 365

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro

370 375 380

Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His

385 390 395 400

Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn

405 410 415

Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser

420 425 430

Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

435 440 445

Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn

450 455 460

Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser

465 470 475 480

Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln

485 490 495

Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg

500 505 510

Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

515 520 525

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

530 535 540

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

545 550 555 560

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

565 570 575

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

580 585 590

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

595 600 605

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

610 615 620

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

625 630 635 640

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu

645 650 655

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

660 665 670

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

675 680 685

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala

690 695 700

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

705 710 715 720

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

725 730 735

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745

<210> 111

<211> 790

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ser Pro

210 215 220

Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn

225 230 235 240

Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys

245 250 255

Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu

260 265 270

Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser

275 280 285

Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn

290 295 300

Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu

305 310 315 320

Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys

325 330 335

Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys

340 345 350

Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe

355 360 365

Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Phe Glu

370 375 380

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

385 390 395 400

Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr

405 410 415

His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala

420 425 430

Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn

435 440 445

Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly

450 455 460

Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met

465 470 475 480

Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser

485 490 495

Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His

500 505 510

Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys

515 520 525

Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser

530 535 540

Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys

545 550 555 560

Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

565 570 575

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

580 585 590

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

595 600 605

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

610 615 620

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

625 630 635 640

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

645 650 655

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

660 665 670

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

675 680 685

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

690 695 700

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

705 710 715 720

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

725 730 735

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

740 745 750

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

755 760 765

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

770 775 780

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790

<210> 112

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 112

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 113

<211> 946

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp

545 550 555 560

Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser

565 570 575

Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu

580 585 590

Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp

595 600 605

Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His

610 615 620

Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr

625 630 635 640

Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala

645 650 655

Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp

660 665 670

Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg

675 680 685

Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala

690 695 700

Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro Asp

705 710 715 720

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly

725 730 735

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

740 745 750

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

755 760 765

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

770 775 780

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

785 790 795 800

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

805 810 815

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

820 825 830

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

835 840 845

Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

850 855 860

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

865 870 875 880

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

885 890 895

Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp

900 905 910

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

915 920 925

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

930 935 940

Gly Lys

945

<210> 114

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 114

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 115

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 115

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asp Gly Thr Ile Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Ser Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Arg Arg Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105

<210> 116

<211> 449

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 116

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 117

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 117

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asp Gly Thr Ile Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Ser Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Arg Arg Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 118

<211> 449

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 118

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 119

<211> 585

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 119

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

355 360 365

Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

370 375 380

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

385 390 395 400

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

405 410 415

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

420 425 430

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

435 440 445

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

450 455 460

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

465 470 475 480

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

485 490 495

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

500 505 510

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

515 520 525

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu

530 535 540

Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

545 550 555 560

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

565 570 575

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580 585

<210> 120

<211> 624

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 120

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser

225 230 235 240

Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile

245 250 255

Ser Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln

260 265 270

Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu

275 280 285

His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser

290 295 300

Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu

305 310 315 320

Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly

325 330 335

Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg

340 345 350

Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser

355 360 365

Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser

370 375 380

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 121

<211> 752

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 121

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys

225 230 235 240

Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu

245 250 255

Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile

260 265 270

Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe

275 280 285

Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp

290 295 300

Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe

305 310 315 320

Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys

325 330 335

Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala

340 345 350

Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu

355 360 365

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

370 375 380

Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys

385 390 395 400

Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe

405 410 415

Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met

420 425 430

Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys

435 440 445

Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met

450 455 460

Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu

465 470 475 480

Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala

485 490 495

Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys

500 505 510

Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr

515 520 525

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser

530 535 540

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

545 550 555 560

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

565 570 575

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

580 585 590

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

595 600 605

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

610 615 620

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

625 630 635 640

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr

645 650 655

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

660 665 670

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

675 680 685

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

690 695 700

Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

705 710 715 720

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

725 730 735

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745 750

<210> 122

<211> 796

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 122

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Gly Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys

225 230 235 240

Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp

245 250 255

Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp

260 265 270

Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu

275 280 285

Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val

290 295 300

Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn

305 310 315 320

Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys

325 330 335

His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val

340 345 350

Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met

355 360 365

Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met

370 375 380

Lys Ile Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

385 390 395 400

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln

405 410 415

Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu

420 425 430

Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met

435 440 445

Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp

450 455 460

Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe

465 470 475 480

Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile

485 490 495

Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu

500 505 510

Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys

515 520 525

Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly

530 535 540

Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu

545 550 555 560

Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

565 570 575

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

580 585 590

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

595 600 605

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

610 615 620

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

625 630 635 640

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

645 650 655

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

660 665 670

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

675 680 685

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg

690 695 700

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

705 710 715 720

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

725 730 735

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser

740 745 750

Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

755 760 765

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

770 775 780

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790 795

<210> 123

<211> 979

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 123

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

225 230 235 240

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

245 250 255

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

260 265 270

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala

275 280 285

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

290 295 300

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

305 310 315 320

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

325 330 335

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

340 345 350

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

355 360 365

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

370 375 380

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

385 390 395 400

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

405 410 415

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

420 425 430

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

435 440 445

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

450 455 460

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

465 470 475 480

Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe

485 490 495

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

500 505 510

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

515 520 525

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val

545 550 555 560

Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn

565 570 575

Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu

580 585 590

Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr

595 600 605

Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr

610 615 620

Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn

625 630 635 640

Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys

645 650 655

Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys

660 665 670

Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu

675 680 685

Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn

690 695 700

Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp

705 710 715 720

Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg

725 730 735

Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

740 745 750

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

755 760 765

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

770 775 780

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

785 790 795 800

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

805 810 815

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

820 825 830

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

835 840 845

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

850 855 860

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

865 870 875 880

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

885 890 895

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

900 905 910

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

915 920 925

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

930 935 940

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

945 950 955 960

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

965 970 975

Pro Gly Lys

<210> 124

<211> 952

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 124

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Asn Pro Asn Asn Asp Asp Thr Phe Tyr Thr Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Asp Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

225 230 235 240

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

245 250 255

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

260 265 270

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala

275 280 285

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

290 295 300

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

305 310 315 320

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

325 330 335

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

340 345 350

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

355 360 365

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

370 375 380

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

385 390 395 400

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

405 410 415

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

420 425 430

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

435 440 445

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

450 455 460

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

465 470 475 480

Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe

485 490 495

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

500 505 510

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

515 520 525

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly

545 550 555 560

Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu

565 570 575

Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu

580 585 590

Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln

595 600 605

Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe

610 615 620

Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu

625 630 635 640

Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro

645 650 655

Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln

660 665 670

Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro

675 680 685

Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser

690 695 700

Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala

705 710 715 720

Ala Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

725 730 735

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

740 745 750

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

755 760 765

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

770 775 780

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

785 790 795 800

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

805 810 815

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

820 825 830

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

835 840 845

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

850 855 860

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

865 870 875 880

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

885 890 895

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

900 905 910

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

915 920 925

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

930 935 940

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950

<210> 125

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 125

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 126

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 126

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105

<210> 127

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 127

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 128

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 128

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 129

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 129

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 130

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 130

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 131

<211> 584

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 131

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

225 230 235 240

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

245 250 255

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

260 265 270

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

275 280 285

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

290 295 300

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

305 310 315 320

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

325 330 335

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

340 345 350

Ile Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

355 360 365

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

370 375 380

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

385 390 395 400

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

405 410 415

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

420 425 430

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

435 440 445

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

450 455 460

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

465 470 475 480

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

485 490 495

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

500 505 510

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

515 520 525

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

530 535 540

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

545 550 555 560

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

565 570 575

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580

<210> 132

<211> 623

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 132

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu

225 230 235 240

Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser

245 250 255

Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu

260 265 270

Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His

275 280 285

Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser

290 295 300

Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr

305 310 315 320

Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val

325 330 335

Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys

340 345 350

Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro

355 360 365

Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu

370 375 380

Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His

385 390 395 400

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

405 410 415

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

420 425 430

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

435 440 445

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

450 455 460

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

465 470 475 480

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

485 490 495

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

500 505 510

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

515 520 525

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

530 535 540

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

545 550 555 560

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

565 570 575

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

580 585 590

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

595 600 605

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 133

<211> 751

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 133

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys

225 230 235 240

Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe

245 250 255

Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met

260 265 270

Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys

275 280 285

Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met

290 295 300

Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu

305 310 315 320

Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala

325 330 335

Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys

340 345 350

Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly

355 360 365

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

370 375 380

Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr

385 390 395 400

Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu

405 410 415

Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln

420 425 430

Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp

435 440 445

Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn

450 455 460

Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys

465 470 475 480

Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile

485 490 495

His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr

500 505 510

Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His

515 520 525

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

530 535 540

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

545 550 555 560

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

565 570 575

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

580 585 590

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

595 600 605

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

610 615 620

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

625 630 635 640

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

645 650 655

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

660 665 670

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

675 680 685

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

690 695 700

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

705 710 715 720

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

725 730 735

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745 750

<210> 134

<211> 795

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 134

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr

225 230 235 240

His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala

245 250 255

Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn

260 265 270

Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly

275 280 285

Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met

290 295 300

Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser

305 310 315 320

Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His

325 330 335

Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys

340 345 350

Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser

355 360 365

Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys

370 375 380

Ile Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

385 390 395 400

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser

405 410 415

Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg

420 425 430

Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys

435 440 445

Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe

450 455 460

Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr

465 470 475 480

Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys

485 490 495

Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg

500 505 510

Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala

515 520 525

Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile

530 535 540

Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala

545 550 555 560

Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

565 570 575

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

580 585 590

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

595 600 605

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

610 615 620

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

625 630 635 640

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

645 650 655

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

660 665 670

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

675 680 685

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

690 695 700

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

705 710 715 720

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

725 730 735

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

740 745 750

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

755 760 765

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

770 775 780

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790 795

<210> 135

<211> 978

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 135

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu

225 230 235 240

Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp

245 250 255

Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu

260 265 270

Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly

275 280 285

Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His

290 295 300

Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp

305 310 315 320

Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys

325 330 335

Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr

340 345 350

Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser

355 360 365

Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg

370 375 380

Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu

385 390 395 400

Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met

405 410 415

Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe

420 425 430

Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu

435 440 445

Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

450 455 460

Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val

465 470 475 480

Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr

485 490 495

Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser

500 505 510

Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala

515 520 525

Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala

545 550 555 560

Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu

565 570 575

Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu

580 585 590

Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys

595 600 605

Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys

610 615 620

Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly

625 630 635 640

Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu

645 650 655

Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr

660 665 670

Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp

675 680 685

Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe

690 695 700

Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe

705 710 715 720

Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile

725 730 735

Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp

740 745 750

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly

755 760 765

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

770 775 780

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

785 790 795 800

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

805 810 815

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

820 825 830

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

835 840 845

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

850 855 860

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

865 870 875 880

Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

885 890 895

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

900 905 910

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

915 920 925

Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp

930 935 940

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

945 950 955 960

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

965 970 975

Gly Lys

<210> 136

<211> 951

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 136

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu

225 230 235 240

Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp

245 250 255

Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu

260 265 270

Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly

275 280 285

Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His

290 295 300

Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp

305 310 315 320

Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys

325 330 335

Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr

340 345 350

Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser

355 360 365

Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg

370 375 380

Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu

385 390 395 400

Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met

405 410 415

Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe

420 425 430

Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu

435 440 445

Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

450 455 460

Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val

465 470 475 480

Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr

485 490 495

Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser

500 505 510

Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala

515 520 525

Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly

545 550 555 560

Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys

565 570 575

Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg

580 585 590

Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys

595 600 605

Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys

610 615 620

Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly

625 630 635 640

Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val

645 650 655

Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro

660 665 670

Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser

675 680 685

Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu

690 695 700

Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala

705 710 715 720

Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

725 730 735

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

740 745 750

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

755 760 765

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

770 775 780

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

785 790 795 800

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

805 810 815

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

820 825 830

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

835 840 845

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

850 855 860

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

865 870 875 880

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

885 890 895

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

900 905 910

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

915 920 925

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

930 935 940

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950

<210> 137

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 137

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 138

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 138

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Pro Tyr Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr His Pro Ser

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105

<210> 139

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 139

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 140

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 140

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Pro Tyr Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr His Pro Ser

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 141

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 141

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 142

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 142

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 143

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 143

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 144

<211> 584

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 144

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

225 230 235 240

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

245 250 255

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

260 265 270

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

275 280 285

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

290 295 300

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

305 310 315 320

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

325 330 335

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

340 345 350

Ile Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

355 360 365

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

370 375 380

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

385 390 395 400

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

405 410 415

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

420 425 430

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

435 440 445

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

450 455 460

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

465 470 475 480

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

485 490 495

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

500 505 510

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

515 520 525

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

530 535 540

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

545 550 555 560

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

565 570 575

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580

<210> 145

<211> 623

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 145

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu

225 230 235 240

Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser

245 250 255

Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu

260 265 270

Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His

275 280 285

Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser

290 295 300

Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr

305 310 315 320

Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val

325 330 335

Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys

340 345 350

Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro

355 360 365

Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu

370 375 380

Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His

385 390 395 400

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

405 410 415

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

420 425 430

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

435 440 445

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

450 455 460

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

465 470 475 480

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

485 490 495

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

500 505 510

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

515 520 525

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

530 535 540

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

545 550 555 560

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

565 570 575

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

580 585 590

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

595 600 605

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 146

<211> 751

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 146

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys

225 230 235 240

Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe

245 250 255

Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met

260 265 270

Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys

275 280 285

Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met

290 295 300

Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu

305 310 315 320

Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala

325 330 335

Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys

340 345 350

Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly

355 360 365

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

370 375 380

Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr

385 390 395 400

Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu

405 410 415

Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln

420 425 430

Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp

435 440 445

Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn

450 455 460

Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys

465 470 475 480

Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile

485 490 495

His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr

500 505 510

Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His

515 520 525

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

530 535 540

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

545 550 555 560

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

565 570 575

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

580 585 590

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

595 600 605

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

610 615 620

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

625 630 635 640

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

645 650 655

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

660 665 670

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

675 680 685

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

690 695 700

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

705 710 715 720

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

725 730 735

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745 750

<210> 147

<211> 795

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 147

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr

225 230 235 240

His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala

245 250 255

Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn

260 265 270

Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly

275 280 285

Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met

290 295 300

Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser

305 310 315 320

Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His

325 330 335

Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys

340 345 350

Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser

355 360 365

Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys

370 375 380

Ile Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

385 390 395 400

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser

405 410 415

Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg

420 425 430

Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys

435 440 445

Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe

450 455 460

Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr

465 470 475 480

Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys

485 490 495

Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg

500 505 510

Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala

515 520 525

Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile

530 535 540

Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala

545 550 555 560

Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

565 570 575

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

580 585 590

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

595 600 605

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

610 615 620

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

625 630 635 640

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

645 650 655

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

660 665 670

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

675 680 685

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

690 695 700

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

705 710 715 720

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

725 730 735

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

740 745 750

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

755 760 765

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

770 775 780

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790 795

<210> 148

<211> 978

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 148

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu

225 230 235 240

Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp

245 250 255

Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu

260 265 270

Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly

275 280 285

Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His

290 295 300

Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp

305 310 315 320

Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys

325 330 335

Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr

340 345 350

Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser

355 360 365

Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg

370 375 380

Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu

385 390 395 400

Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met

405 410 415

Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe

420 425 430

Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu

435 440 445

Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

450 455 460

Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val

465 470 475 480

Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr

485 490 495

Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser

500 505 510

Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala

515 520 525

Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala

545 550 555 560

Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu

565 570 575

Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu

580 585 590

Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys

595 600 605

Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys

610 615 620

Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly

625 630 635 640

Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu

645 650 655

Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr

660 665 670

Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp

675 680 685

Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe

690 695 700

Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe

705 710 715 720

Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile

725 730 735

Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp

740 745 750

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly

755 760 765

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

770 775 780

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

785 790 795 800

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

805 810 815

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

820 825 830

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

835 840 845

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

850 855 860

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

865 870 875 880

Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

885 890 895

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

900 905 910

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

915 920 925

Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp

930 935 940

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

945 950 955 960

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

965 970 975

Gly Lys

<210> 149

<211> 951

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 149

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Phe Pro Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro

210 215 220

Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu

225 230 235 240

Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp

245 250 255

Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu

260 265 270

Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly

275 280 285

Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His

290 295 300

Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp

305 310 315 320

Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys

325 330 335

Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr

340 345 350

Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser

355 360 365

Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg

370 375 380

Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu

385 390 395 400

Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met

405 410 415

Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe

420 425 430

Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu

435 440 445

Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro

450 455 460

Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val

465 470 475 480

Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr

485 490 495

Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser

500 505 510

Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala

515 520 525

Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly

545 550 555 560

Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys

565 570 575

Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg

580 585 590

Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys

595 600 605

Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys

610 615 620

Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly

625 630 635 640

Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val

645 650 655

Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro

660 665 670

Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser

675 680 685

Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu

690 695 700

Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala

705 710 715 720

Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

725 730 735

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

740 745 750

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

755 760 765

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

770 775 780

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

785 790 795 800

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

805 810 815

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

820 825 830

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

835 840 845

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

850 855 860

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

865 870 875 880

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

885 890 895

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

900 905 910

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

915 920 925

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

930 935 940

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950

<210> 150

<211> 122

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 150

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 151

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 151

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105

<210> 152

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 152

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 153

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 153

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 154

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 154

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 155

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 155

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 156

<211> 586

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 156

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

225 230 235 240

Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

245 250 255

Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met

260 265 270

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu

275 280 285

Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

290 295 300

His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

305 310 315 320

Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

325 330 335

Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln

340 345 350

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

355 360 365

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

370 375 380

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

385 390 395 400

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

405 410 415

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

420 425 430

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

435 440 445

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

450 455 460

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

465 470 475 480

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu

485 490 495

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

500 505 510

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

515 520 525

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala

530 535 540

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

545 550 555 560

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

565 570 575

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580 585

<210> 157

<211> 625

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 157

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His

225 230 235 240

Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys

245 250 255

Ile Ser Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro

260 265 270

Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val

275 280 285

Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp

290 295 300

Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu

305 310 315 320

Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val

325 330 335

Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val

340 345 350

Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr

355 360 365

Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe

370 375 380

Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys

385 390 395 400

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

405 410 415

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

420 425 430

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

435 440 445

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

450 455 460

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

465 470 475 480

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

485 490 495

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

500 505 510

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

515 520 525

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

530 535 540

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

545 550 555 560

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

565 570 575

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

580 585 590

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

595 600 605

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

610 615 620

Lys

625

<210> 158

<211> 753

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 158

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu

225 230 235 240

Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr

245 250 255

Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys

260 265 270

Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn

275 280 285

Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu

290 295 300

Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp

305 310 315 320

Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg

325 330 335

Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala

340 345 350

Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe

355 360 365

Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

370 375 380

Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys

385 390 395 400

Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu

405 410 415

Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile

420 425 430

Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe

435 440 445

Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp

450 455 460

Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe

465 470 475 480

Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys

485 490 495

Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala

500 505 510

Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys

515 520 525

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

530 535 540

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

545 550 555 560

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

565 570 575

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

580 585 590

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

595 600 605

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

610 615 620

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

625 630 635 640

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

645 650 655

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

660 665 670

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

675 680 685

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

690 695 700

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

705 710 715 720

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

725 730 735

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

740 745 750

Lys

<210> 159

<211> 797

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 159

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Gly Ser Gly Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser

225 230 235 240

Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala

245 250 255

Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu

260 265 270

Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr

275 280 285

Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu

290 295 300

Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val

305 310 315 320

Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg

325 330 335

Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln

340 345 350

Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala

355 360 365

Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr

370 375 380

Met Lys Ile Arg Asn Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

385 390 395 400

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr

405 410 415

Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met

420 425 430

Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln

435 440 445

Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu

450 455 460

Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln

465 470 475 480

Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp

485 490 495

Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg

500 505 510

Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser

515 520 525

Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys

530 535 540

Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile

545 550 555 560

Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys

565 570 575

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

580 585 590

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

595 600 605

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

610 615 620

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

625 630 635 640

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

645 650 655

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

660 665 670

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

675 680 685

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

690 695 700

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

705 710 715 720

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

725 730 735

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

740 745 750

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

755 760 765

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

770 775 780

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790 795

<210> 160

<211> 980

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 160

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val

225 230 235 240

Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr

245 250 255

Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser

260 265 270

Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala

275 280 285

Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu

290 295 300

Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser

305 310 315 320

Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu

325 330 335

Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu

340 345 350

Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly

355 360 365

Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala

370 375 380

Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys

385 390 395 400

Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu

405 410 415

Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser

420 425 430

Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu

435 440 445

Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu

450 455 460

Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe

465 470 475 480

Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val

485 490 495

Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser

500 505 510

Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu

515 520 525

Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

530 535 540

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro

545 550 555 560

Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln

565 570 575

Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr

580 585 590

Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile

595 600 605

Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu

610 615 620

Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr

625 630 635 640

Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu

645 650 655

Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe

660 665 670

Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe

675 680 685

Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu

690 695 700

Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro

705 710 715 720

Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe

725 730 735

Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala

740 745 750

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

755 760 765

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

770 775 780

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

785 790 795 800

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

805 810 815

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

820 825 830

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

835 840 845

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

850 855 860

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

865 870 875 880

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

885 890 895

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

900 905 910

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

915 920 925

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

930 935 940

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

945 950 955 960

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

965 970 975

Ser Pro Gly Lys

980

<210> 161

<211> 953

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 161

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val

225 230 235 240

Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr

245 250 255

Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser

260 265 270

Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala

275 280 285

Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu

290 295 300

Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser

305 310 315 320

Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu

325 330 335

Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu

340 345 350

Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly

355 360 365

Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala

370 375 380

Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys

385 390 395 400

Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu

405 410 415

Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser

420 425 430

Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu

435 440 445

Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu

450 455 460

Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe

465 470 475 480

Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val

485 490 495

Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser

500 505 510

Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu

515 520 525

Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

530 535 540

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro

545 550 555 560

Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys

565 570 575

Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp

580 585 590

Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile

595 600 605

Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln

610 615 620

Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu

625 630 635 640

Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser

645 650 655

Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu

660 665 670

Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser

675 680 685

Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg

690 695 700

Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly

705 710 715 720

Ala Ala Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

725 730 735

Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

740 745 750

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

755 760 765

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

770 775 780

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

785 790 795 800

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

805 810 815

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

820 825 830

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

835 840 845

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

850 855 860

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

865 870 875 880

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

885 890 895

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu

900 905 910

Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

915 920 925

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

930 935 940

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950

<210> 162

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 162

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser

115

<210> 163

<211> 103

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 163

Gln Ile Val Ser Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Arg Ser Tyr Met

20 25 30

Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Thr Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100

<210> 164

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 164

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 165

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 165

Gln Ile Val Ser Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Arg Ser Tyr Met

20 25 30

Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Thr Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu Cys

210

<210> 166

<211> 446

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 166

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 167

<211> 210

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 167

Gln Ile Val Ser Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Arg Ser Tyr Met

20 25 30

Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Thr Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu

210

<210> 168

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 168

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 169

<211> 581

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 169

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Ala Pro Thr

210 215 220

Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu

225 230 235 240

Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys

245 250 255

Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr

260 265 270

Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu

275 280 285

Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg

290 295 300

Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser

305 310 315 320

Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val

325 330 335

Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr

340 345 350

Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp

355 360 365

Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

370 375 380

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

385 390 395 400

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

405 410 415

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

420 425 430

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

435 440 445

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

450 455 460

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

465 470 475 480

Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

485 490 495

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

500 505 510

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

515 520 525

Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu

530 535 540

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

545 550 555 560

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

565 570 575

Leu Ser Pro Gly Lys

580

<210> 170

<211> 620

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 170

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly

210 215 220

Gly Gly Gly Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg

225 230 235 240

Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser

245 250 255

Cys Ala Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly

260 265 270

Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile

275 280 285

Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp

290 295 300

Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu

305 310 315 320

Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr

325 330 335

Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln

340 345 350

Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp

355 360 365

Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn

370 375 380

Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

385 390 395 400

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

405 410 415

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

420 425 430

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

435 440 445

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

450 455 460

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

465 470 475 480

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

485 490 495

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

500 505 510

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg

515 520 525

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

530 535 540

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

545 550 555 560

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser

565 570 575

Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

580 585 590

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

595 600 605

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 171

<211> 748

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 171

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly

210 215 220

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

225 230 235 240

Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

245 250 255

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

260 265 270

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

275 280 285

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

290 295 300

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

305 310 315 320

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

325 330 335

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

340 345 350

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser

355 360 365

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

370 375 380

Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala

385 390 395 400

Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu

405 410 415

Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile

420 425 430

Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser

435 440 445

Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe

450 455 460

Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

465 470 475 480

Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu

485 490 495

Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg

500 505 510

Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

515 520 525

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

530 535 540

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

545 550 555 560

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

565 570 575

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

580 585 590

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

595 600 605

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

610 615 620

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

625 630 635 640

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg

645 650 655

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

660 665 670

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

675 680 685

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser

690 695 700

Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

705 710 715 720

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

725 730 735

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

740 745

<210> 172

<211> 792

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 172

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

225 230 235 240

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg

245 250 255

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

260 265 270

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

275 280 285

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

290 295 300

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

305 310 315 320

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

325 330 335

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

340 345 350

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

355 360 365

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

370 375 380

Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

385 390 395 400

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser

405 410 415

Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala

420 425 430

Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu

435 440 445

Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr

450 455 460

Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu

465 470 475 480

Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val

485 490 495

Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg

500 505 510

Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln

515 520 525

Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala

530 535 540

Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr

545 550 555 560

Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

565 570 575

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

580 585 590

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

595 600 605

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

610 615 620

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

625 630 635 640

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

645 650 655

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

660 665 670

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

675 680 685

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

690 695 700

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

705 710 715 720

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

725 730 735

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

740 745 750

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

755 760 765

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

770 775 780

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

785 790

<210> 173

<211> 975

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 173

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly

210 215 220

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

225 230 235 240

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

245 250 255

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

260 265 270

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly

275 280 285

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

290 295 300

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

305 310 315 320

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

325 330 335

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

340 345 350

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

355 360 365

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

370 375 380

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

385 390 395 400

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

405 410 415

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

420 425 430

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

435 440 445

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

450 455 460

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

465 470 475 480

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

485 490 495

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

500 505 510

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

515 520 525

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

530 535 540

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

545 550 555 560

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

565 570 575

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

580 585 590

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

595 600 605

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

610 615 620

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

625 630 635 640

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

645 650 655

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

660 665 670

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

675 680 685

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

690 695 700

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

705 710 715 720

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

725 730 735

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His

740 745 750

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val

755 760 765

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

770 775 780

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

785 790 795 800

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

805 810 815

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

820 825 830

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

835 840 845

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

850 855 860

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro

865 870 875 880

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

885 890 895

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

900 905 910

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu

915 920 925

Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

930 935 940

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

945 950 955 960

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970 975

<210> 174

<211> 948

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 174

Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met

20 25 30

His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala

35 40 45

Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu Gly

50 55 60

Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

85 90 95

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly

210 215 220

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

225 230 235 240

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

245 250 255

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

260 265 270

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly

275 280 285

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

290 295 300

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

305 310 315 320

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

325 330 335

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

340 345 350

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

355 360 365

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

370 375 380

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

385 390 395 400

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

405 410 415

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

420 425 430

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

435 440 445

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

450 455 460

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

465 470 475 480

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

485 490 495

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

500 505 510

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

515 520 525

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

530 535 540

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro

545 550 555 560

Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala

565 570 575

Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly

580 585 590

Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly

595 600 605

Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg

610 615 620

Ile His Gln Gly Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile

625 630 635 640

Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu

645 650 655

His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His

660 665 670

His Trp Glu Thr Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp

675 680 685

Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe

690 695 700

Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser

705 710 715 720

Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

725 730 735

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

740 745 750

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

755 760 765

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

770 775 780

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

785 790 795 800

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

805 810 815

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

820 825 830

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

835 840 845

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

850 855 860

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

865 870 875 880

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

885 890 895

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

900 905 910

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

915 920 925

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

930 935 940

Ser Pro Gly Lys

945

<210> 175

<211> 273

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 175

Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln

1 5 10 15

Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile

20 25 30

Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser

35 40 45

His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn

50 55 60

Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu

65 70 75 80

Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp

85 90 95

Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr

100 105 110

Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr

115 120 125

His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln

130 135 140

Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val

145 150 155 160

Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val

165 170 175

Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys

180 185 190

Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp

195 200 205

Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His

210 215 220

Ile Phe Ile Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val

225 230 235 240

Ile Ala Leu Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp

245 250 255

Thr Thr Lys Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala

260 265 270

Ile

<210> 176

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 176

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr

195 200

<210> 177

<211> 428

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 177

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

195 200 205

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

210 215 220

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

225 230 235 240

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

245 250 255

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

260 265 270

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

275 280 285

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

290 295 300

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

305 310 315 320

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

325 330 335

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

340 345 350

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

355 360 365

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

370 375 380

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

385 390 395 400

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

405 410 415

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

420 425

<210> 178

<211> 428

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 178

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

195 200 205

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

210 215 220

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

225 230 235 240

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

245 250 255

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

260 265 270

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

275 280 285

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

290 295 300

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

305 310 315 320

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg

325 330 335

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly

340 345 350

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

355 360 365

Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

370 375 380

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

385 390 395 400

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

405 410 415

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

420 425

<210> 179

<211> 433

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 179

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys

195 200 205

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

210 215 220

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

225 230 235 240

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

245 250 255

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

260 265 270

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

275 280 285

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

290 295 300

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

305 310 315 320

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

325 330 335

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

340 345 350

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

355 360 365

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

370 375 380

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

385 390 395 400

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

405 410 415

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

420 425 430

Lys

<210> 180

<211> 566

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 180

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu

210 215 220

Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser

325 330 335

Thr Leu Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

340 345 350

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

355 360 365

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

370 375 380

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

385 390 395 400

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

405 410 415

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

420 425 430

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

435 440 445

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

450 455 460

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

465 470 475 480

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

485 490 495

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

500 505 510

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

515 520 525

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

530 535 540

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

545 550 555 560

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565

<210> 181

<211> 435

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 181

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

195 200 205

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly

210 215 220

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

225 230 235 240

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

245 250 255

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

260 265 270

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

275 280 285

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

290 295 300

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

305 310 315 320

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

325 330 335

Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

340 345 350

Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

355 360 365

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro

370 375 380

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

385 390 395 400

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

405 410 415

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

420 425 430

Pro Gly Lys

435

<210> 182

<211> 600

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 182

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

195 200 205

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met

210 215 220

Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Ala Lys Asp

225 230 235 240

Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln

245 250 255

Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe

260 265 270

Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu

275 280 285

Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu

290 295 300

Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys

305 310 315 320

Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu

325 330 335

Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg

340 345 350

Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser

355 360 365

Leu Arg Ser Lys Glu Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

370 375 380

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

385 390 395 400

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

405 410 415

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

420 425 430

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

435 440 445

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

450 455 460

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

465 470 475 480

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

485 490 495

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

500 505 510

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

515 520 525

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

530 535 540

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

545 550 555 560

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

565 570 575

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

580 585 590

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

595 600

<210> 183

<211> 732

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 183

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

195 200 205

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

210 215 220

Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

225 230 235 240

Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

245 250 255

Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

260 265 270

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

275 280 285

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

290 295 300

Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

305 310 315 320

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

325 330 335

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Phe Glu Gly Gly Gly Ser

340 345 350

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln

355 360 365

Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala

370 375 380

Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu

385 390 395 400

Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile

405 410 415

Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser

420 425 430

Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe

435 440 445

Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

450 455 460

Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu

465 470 475 480

Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg

485 490 495

Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

500 505 510

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

515 520 525

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

530 535 540

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

545 550 555 560

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

565 570 575

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

580 585 590

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

595 600 605

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

610 615 620

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg

625 630 635 640

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

645 650 655

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

660 665 670

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser

675 680 685

Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

690 695 700

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

705 710 715 720

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

725 730

<210> 184

<211> 776

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 184

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

195 200 205

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

210 215 220

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala Asp Ala Phe Ser Arg

225 230 235 240

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

245 250 255

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

260 265 270

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

275 280 285

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

290 295 300

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

305 310 315 320

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

325 330 335

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

340 345 350

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

355 360 365

Phe Glu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

370 375 380

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser

385 390 395 400

Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Ala

405 410 415

Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu

420 425 430

Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr

435 440 445

Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu

450 455 460

Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val

465 470 475 480

Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg

485 490 495

Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln

500 505 510

Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala

515 520 525

Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr

530 535 540

Met Lys Ile Arg Asn Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

545 550 555 560

Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

565 570 575

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

580 585 590

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

595 600 605

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

610 615 620

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

625 630 635 640

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

645 650 655

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

660 665 670

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

675 680 685

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

690 695 700

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

705 710 715 720

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val

725 730 735

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

740 745 750

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

755 760 765

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

770 775

<210> 185

<211> 431

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 185

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Asp Lys Thr His

195 200 205

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val

210 215 220

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

225 230 235 240

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

245 250 255

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

260 265 270

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

275 280 285

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

290 295 300

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

305 310 315 320

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

325 330 335

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu

340 345 350

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

355 360 365

Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser

370 375 380

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

385 390 395 400

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

405 410 415

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

420 425 430

<210> 186

<211> 955

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 186

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu

195 200 205

Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro

210 215 220

Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile

225 230 235 240

Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr

245 250 255

Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys

260 265 270

His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys

275 280 285

Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu

290 295 300

Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly

305 310 315 320

Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe

325 330 335

Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys

340 345 350

Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu

355 360 365

Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala

370 375 380

Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu

385 390 395 400

Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys

405 410 415

Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg

420 425 430

Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His

435 440 445

Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys

450 455 460

Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val

465 470 475 480

Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr

485 490 495

Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly

500 505 510

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

515 520 525

Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

530 535 540

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

545 550 555 560

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

565 570 575

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

580 585 590

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

595 600 605

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

610 615 620

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

625 630 635 640

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

645 650 655

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

660 665 670

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

675 680 685

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

690 695 700

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

705 710 715 720

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

725 730 735

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

740 745 750

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

755 760 765

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

770 775 780

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

785 790 795 800

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

805 810 815

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

820 825 830

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

835 840 845

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

850 855 860

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

865 870 875 880

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

885 890 895

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

900 905 910

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

915 920 925

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

930 935 940

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

945 950 955

<210> 187

<211> 928

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 187

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu

195 200 205

Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro

210 215 220

Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile

225 230 235 240

Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr

245 250 255

Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys

260 265 270

His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys

275 280 285

Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu

290 295 300

Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly

305 310 315 320

Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe

325 330 335

Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys

340 345 350

Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu

355 360 365

Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala

370 375 380

Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu

385 390 395 400

Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys

405 410 415

Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg

420 425 430

Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His

435 440 445

Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys

450 455 460

Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val

465 470 475 480

Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr

485 490 495

Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly

500 505 510

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

515 520 525

Gly Ser Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln

530 535 540

Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His

545 550 555 560

Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr

565 570 575

Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln

580 585 590

Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly

595 600 605

Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu

610 615 620

Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu

625 630 635 640

Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr

645 650 655

Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu

660 665 670

Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala

675 680 685

Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro Asp Lys Thr

690 695 700

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser

705 710 715 720

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

725 730 735

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

740 745 750

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

755 760 765

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

770 775 780

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

785 790 795 800

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

805 810 815

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr

820 825 830

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

835 840 845

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

850 855 860

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

865 870 875 880

Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

885 890 895

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

900 905 910

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

915 920 925

<210> 188

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 188

Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His

1 5 10

<210> 189

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 189

Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 190

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 190

Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 191

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 191

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 192

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 192

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 193

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 193

Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr

1 5

<210> 194

<211> 1

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> 1

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 194

Gly

1

<210> 195

<211> 2

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(2)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 195

Gly Ser

1

<210> 196

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(3)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 196

Gly Gly Ser

1

<210> 197

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(4)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 197

Gly Gly Gly Ser

1

<210> 198

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(3)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (4)..(7)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 198

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 199

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(5)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 199

Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 200

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(5)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 200

Gly Gly Ser Gly Ser

1 5

<210> 201

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(5)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 201

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 202

<211> 2

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 202

Gly Gly

1

<210> 203

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 203

Gly Ser Gly

1

<210> 204

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 204

Gly Gly Ser Gly

1

<210> 205

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 205

Gly Gly Ser Gly Gly

1 5

<210> 206

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 206

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 207

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 207

Gly Ser Gly Ser Gly

1 5

<210> 208

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 208

Gly Ser Gly Gly Gly

1 5

<210> 209

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 209

Gly Gly Gly Ser Gly

1 5

<210> 210

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 210

Gly Ser Ser Ser Gly

1 5

<210> 211

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 211

Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 212

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 212

Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 213

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 213

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 214

<211> 2

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (1)..(2)

<223> Может присутствовать в повторах любого целого числа

<400> 214

Gly Ala

1

<210> 215

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 215

Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly

1 5 10

<210> 216

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 216

Gly Arg Ala Gly Gly Gly

1 5

<210> 217

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 217

Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 218

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 218

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 219

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 219

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 220

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 220

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly

1 5 10 15

<210> 221

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 221

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 222

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 222

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Ser

<210> 223

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 223

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ala

<210> 224

<211> 21

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 224

Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Ser

20

<210> 225

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 225

Lys Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 226

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 226

Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser

<210> 227

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 227

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

1 5 10 15

Gly Gly Ser

<210> 228

<211> 21

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 228

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly

20

<210> 229

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 229

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 230

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 230

Ala Ser Thr Lys Gly Pro

1 5

<210> 231

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 231

Asp Lys Pro

1

<210> 232

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 232

Asp Lys Pro Gly Ser

1 5

<210> 233

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 233

Pro Gly Ser

1

<210> 234

<211> 2

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 234

Gly Ser

1

<210> 235

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 235

Asp Lys Pro Gly Ser Gly

1 5

<210> 236

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 236

Pro Gly Ser Gly

1

<210> 237

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 237

Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ser

1 5

<210> 238

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 238

Pro Gly Ser Gly Ser

1 5

<210> 239

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 239

Gly Ser Gly Ser

1

<210> 240

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 240

Asp Lys Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

1 5 10

<210> 241

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 241

Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 242

<211> 1

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 242

Pro

1

<210> 243

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 243

Asp Ser Trp Ile His

1 5

<210> 244

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 244

Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 245

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 245

Arg His Trp Pro Gly Gly Phe

1 5

<210> 246

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 246

Val Thr Thr Ala Val Ala

1 5

<210> 247

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 247

Ser Ala Ser Phe Pro Tyr

1 5

<210> 248

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 248

Gln Gln Tyr Met Tyr His Pro Ser Thr

1 5

<210> 249

<211> 290

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 249

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

20 25 30

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

35 40 45

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

50 55 60

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

65 70 75 80

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

100 105 110

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

115 120 125

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

130 135 140

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

165 170 175

Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn

180 185 190

Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr

195 200 205

Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu

210 215 220

Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His

225 230 235 240

Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr

245 250 255

Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys

260 265 270

Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu

275 280 285

Glu Thr

290

<210> 250

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 250

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys

85 90 95

Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 251

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 251

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 252

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 252

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 253

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 253

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 254

<211> 133

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 254

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile

115 120 125

Ile Arg Thr Leu Thr

130

<210> 255

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 255

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 256

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 256

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 257

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 257

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 258

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 258

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 259

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 259

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Met Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 260

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 260

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ser Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 261

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 261

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg

210 215 220

<210> 262

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 262

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr

195 200

<210> 263

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 263

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr

195 200

<210> 264

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 264

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr

195 200

<210> 265

<211> 201

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 265

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr

195 200

<210> 266

<211> 417

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 266

Met Ala Arg Ala Met Ala Ala Ala Trp Pro Leu Leu Leu Val Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Leu Ser Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln

20 25 30

Ala Pro Thr Gln Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro

35 40 45

Cys Tyr Leu Gln Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu

50 55 60

Thr Trp Ala Arg His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln

65 70 75 80

Thr Gln Gly Pro Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly

100 105 110

Leu Arg Val Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe

115 120 125

Pro Gln Gly Ser Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys

130 135 140

Pro Gln Asn Thr Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro

145 150 155 160

Val Pro Met Ala Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln

165 170 175

Ile Thr Trp His Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val

180 185 190

Pro Gly Phe Leu Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu

195 200 205

Val Pro Ser Ser Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu

210 215 220

His Glu Ser Phe Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Pro Pro Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr

245 250 255

Leu Gly Gln Asn Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro

260 265 270

Glu Pro Thr Gly Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro

275 280 285

Phe Ala Val Ala Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys

290 295 300

Pro Ile Asn Thr Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala

305 310 315 320

Arg Gln Ala Glu Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu

325 330 335

His Ser Gly Ile Ser Arg Asn Ala Ile Ile Phe Leu Val Leu Gly Ile

340 345 350

Leu Val Phe Leu Ile Leu Leu Gly Ile Gly Ile Tyr Phe Tyr Trp Ser

355 360 365

Lys Cys Ser Arg Glu Val Leu Trp His Cys His Leu Cys Pro Ser Ser

370 375 380

Thr Glu His Ala Ser Ala Ser Ala Asn Gly His Val Ser Tyr Ser Ala

385 390 395 400

Val Ser Arg Glu Asn Ser Ser Ser Gln Asp Pro Gln Thr Glu Gly Thr

405 410 415

Arg

<210> 267

<211> 323

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 267

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn

<210> 268

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 268

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asn Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 269

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 269

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 270

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 270

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 271

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 271

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 272

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 272

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Ala Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 273

<211> 973

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 273

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Met Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

115 120 125

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

180 185 190

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Pro Gly Ser Gly Ile Trp

210 215 220

Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp

225 230 235 240

Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp

245 250 255

Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly

260 265 270

Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr

275 280 285

Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu

290 295 300

His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln

305 310 315 320

Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr

325 330 335

Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu

340 345 350

Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val

355 360 365

Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn

370 375 380

Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro

385 390 395 400

Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His

405 410 415

Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

420 425 430

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn

435 440 445

Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr

450 455 460

Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys

465 470 475 480

Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala

485 490 495

Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp

500 505 510

Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly

545 550 555 560

Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser

565 570 575

Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr

580 585 590

Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr

595 600 605

Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu

610 615 620

Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser

625 630 635 640

Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu

645 650 655

Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu

660 665 670

Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala

675 680 685

Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val

690 695 700

Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile

705 710 715 720

Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile

725 730 735

Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

740 745 750

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

755 760 765

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

770 775 780

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

785 790 795 800

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

805 810 815

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

820 825 830

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

835 840 845

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

850 855 860

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

865 870 875 880

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

885 890 895

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

900 905 910

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

915 920 925

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

930 935 940

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

945 950 955 960

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

965 970

<210> 274

<211> 938

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 274

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Gly Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys

180 185 190

Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly

195 200 205

Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr

210 215 220

Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu

225 230 235 240

Thr Ile Gln Val Lys Glu Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His

245 250 255

Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys

260 265 270

Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro

275 280 285

Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg

290 295 300

Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser

305 310 315 320

Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly

325 330 335

Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr

340 345 350

Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu

355 360 365

Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys

370 375 380

Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro

385 390 395 400

Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln

405 410 415

Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser

420 425 430

Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg

435 440 445

Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile

450 455 460

Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr

465 470 475 480

Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly

485 490 495

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

500 505 510

Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro

515 520 525

Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu

530 535 540

Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu

545 550 555 560

Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala

565 570 575

Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg

580 585 590

Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr

595 600 605

Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys

610 615 620

Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp

625 630 635 640

Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp

645 650 655

Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys

660 665 670

Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys

675 680 685

Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val

690 695 700

Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

705 710 715 720

Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

725 730 735

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

740 745 750

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

755 760 765

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

770 775 780

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

785 790 795 800

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

805 810 815

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

820 825 830

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu

835 840 845

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

850 855 860

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

865 870 875 880

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala

885 890 895

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

900 905 910

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

915 920 925

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

930 935

<210> 275

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 275

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Ala Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

325 330 335

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

340 345 350

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

355 360 365

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

370 375 380

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

435 440 445

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

450 455 460

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

465 470 475 480

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

485 490 495

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

500 505 510

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515 520

<210> 276

<211> 953

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 276

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Gly Ser Gly Asp Lys Thr His Thr

180 185 190

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe

195 200 205

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

210 215 220

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

225 230 235 240

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

245 250 255

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

260 265 270

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

275 280 285

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

290 295 300

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro

305 310 315 320

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

325 330 335

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

340 345 350

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp

355 360 365

Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

370 375 380

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

385 390 395 400

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

405 410 415

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Trp Glu

420 425 430

Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala

435 440 445

Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly

450 455 460

Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys

465 470 475 480

Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr

485 490 495

Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His

500 505 510

Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys

515 520 525

Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser

530 535 540

Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr

545 550 555 560

Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr

565 570 575

Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys

580 585 590

Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala

595 600 605

Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys

610 615 620

Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile

625 630 635 640

Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser

645 650 655

Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro

660 665 670

His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser

675 680 685

Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr

690 695 700

Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg

705 710 715 720

Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly

725 730 735

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

740 745 750

Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met

755 760 765

Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn

770 775 780

Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser

785 790 795 800

Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val

805 810 815

Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn

820 825 830

Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg

835 840 845

Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp

850 855 860

Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu

865 870 875 880

Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val

885 890 895

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro

900 905 910

Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys

915 920 925

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp

930 935 940

Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

945 950

<210> 277

<211> 980

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 277

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

225 230 235 240

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

245 250 255

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

260 265 270

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala

275 280 285

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

290 295 300

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

305 310 315 320

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

325 330 335

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

340 345 350

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

355 360 365

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

370 375 380

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

385 390 395 400

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

405 410 415

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

420 425 430

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

435 440 445

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

450 455 460

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

465 470 475 480

Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe

485 490 495

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

500 505 510

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

515 520 525

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met

545 550 555 560

Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn

565 570 575

Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser

580 585 590

Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val

595 600 605

Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn

610 615 620

Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg

625 630 635 640

Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp

645 650 655

Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu

660 665 670

Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val

675 680 685

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro

690 695 700

Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys

705 710 715 720

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp

725 730 735

Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

740 745 750

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

755 760 765

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

770 775 780

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

785 790 795 800

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

805 810 815

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

820 825 830

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

835 840 845

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

850 855 860

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

865 870 875 880

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

885 890 895

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

900 905 910

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

915 920 925

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

930 935 940

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

945 950 955 960

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

965 970 975

Ser Pro Gly Lys

980

<210> 278

<211> 980

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 278

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

225 230 235 240

Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys

245 250 255

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser

260 265 270

Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala

275 280 285

Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser

290 295 300

His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr

305 310 315 320

Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg

325 330 335

Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr

340 345 350

Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser

355 360 365

Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu

370 375 380

Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln

385 390 395 400

Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val

405 410 415

Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser

420 425 430

Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln

435 440 445

Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr

450 455 460

Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys

465 470 475 480

Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe

485 490 495

Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile

500 505 510

Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp

515 520 525

Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

530 535 540

Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met

545 550 555 560

Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn

565 570 575

Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser

580 585 590

Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val

595 600 605

Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn

610 615 620

Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg

625 630 635 640

Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp

645 650 655

Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu

660 665 670

Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val

675 680 685

Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro

690 695 700

Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys

705 710 715 720

Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp

725 730 735

Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

740 745 750

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

755 760 765

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

770 775 780

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

785 790 795 800

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

805 810 815

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

820 825 830

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

835 840 845

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

850 855 860

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

865 870 875 880

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

885 890 895

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

900 905 910

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

915 920 925

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

930 935 940

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

945 950 955 960

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

965 970 975

Ser Pro Gly Lys

980

<210> 279

<211> 980

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 279

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile

450 455 460

Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro

465 470 475 480

Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu

485 490 495

Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser

500 505 510

Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln

515 520 525

Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu

530 535 540

Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp

545 550 555 560

Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn

565 570 575

Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp

580 585 590

Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly

595 600 605

Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp

610 615 620

Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys

625 630 635 640

Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val

645 650 655

His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp

660 665 670

Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys

675 680 685

Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser

690 695 700

Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly

705 710 715 720

Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser

725 730 735

Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln

740 745 750

Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys

755 760 765

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg

770 775 780

Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His

785 790 795 800

His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala

805 810 815

Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His

820 825 830

Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro

835 840 845

Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser

850 855 860

Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met

865 870 875 880

Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln

885 890 895

Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg

900 905 910

Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met

915 920 925

Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu

930 935 940

Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu

945 950 955 960

His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr

965 970 975

Leu Asn Ala Ser

980

<210> 280

<211> 980

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 280

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile

450 455 460

Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro

465 470 475 480

Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu

485 490 495

Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser

500 505 510

Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln

515 520 525

Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu

530 535 540

Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp

545 550 555 560

Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn

565 570 575

Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp

580 585 590

Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly

595 600 605

Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp

610 615 620

Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys

625 630 635 640

Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val

645 650 655

His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp

660 665 670

Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys

675 680 685

Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser

690 695 700

Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly

705 710 715 720

Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser

725 730 735

Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln

740 745 750

Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys

755 760 765

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg

770 775 780

Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His

785 790 795 800

His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala

805 810 815

Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His

820 825 830

Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro

835 840 845

Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser

850 855 860

Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met

865 870 875 880

Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln

885 890 895

Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg

900 905 910

Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met

915 920 925

Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu

930 935 940

Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu

945 950 955 960

His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr

965 970 975

Leu Asn Ala Ser

980

<210> 281

<211> 455

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 281

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 282

<211> 455

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 282

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 283

<211> 455

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 283

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met

385 390 395 400

Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 284

<211> 455

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 284

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met

385 390 395 400

Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 285

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 285

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 286

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 286

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 287

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 287

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 288

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 288

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Arg Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 289

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 289

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 290

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 290

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 291

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 291

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 292

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 292

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Ile Arg Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 293

<211> 961

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 293

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp

210 215 220

Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro

225 230 235 240

Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu

245 250 255

Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala

260 265 270

Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu

275 280 285

Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu

290 295 300

Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala

305 310 315 320

Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser

325 330 335

Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro

340 345 350

Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg

355 360 365

Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser

370 375 380

Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp

385 390 395 400

Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile

405 410 415

Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro

420 425 430

Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr

435 440 445

Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val

450 455 460

Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys

465 470 475 480

Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg

485 490 495

Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val

500 505 510

Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

515 520 525

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

530 535 540

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

545 550 555 560

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

565 570 575

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

580 585 590

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

595 600 605

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

610 615 620

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

625 630 635 640

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

645 650 655

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

660 665 670

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

675 680 685

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

690 695 700

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

705 710 715 720

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

725 730 735

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

740 745 750

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

755 760 765

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

770 775 780

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

785 790 795 800

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

805 810 815

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

820 825 830

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

835 840 845

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

850 855 860

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

865 870 875 880

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

885 890 895

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

900 905 910

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

915 920 925

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

930 935 940

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

945 950 955 960

Lys

<210> 294

<211> 961

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 294

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp

210 215 220

Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro

225 230 235 240

Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu

245 250 255

Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala

260 265 270

Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu

275 280 285

Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu

290 295 300

Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala

305 310 315 320

Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser

325 330 335

Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro

340 345 350

Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg

355 360 365

Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser

370 375 380

Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp

385 390 395 400

Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile

405 410 415

Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro

420 425 430

Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr

435 440 445

Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val

450 455 460

Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys

465 470 475 480

Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg

485 490 495

Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val

500 505 510

Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

515 520 525

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

530 535 540

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

545 550 555 560

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

565 570 575

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

580 585 590

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

595 600 605

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

610 615 620

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

625 630 635 640

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

645 650 655

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

660 665 670

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

675 680 685

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

690 695 700

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

705 710 715 720

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

725 730 735

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro

740 745 750

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

755 760 765

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

770 775 780

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

785 790 795 800

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

805 810 815

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

820 825 830

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

835 840 845

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

850 855 860

Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

865 870 875 880

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

885 890 895

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

900 905 910

Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

915 920 925

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

930 935 940

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

945 950 955 960

Lys

<210> 295

<211> 961

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 295

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu

435 440 445

Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro

450 455 460

Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile

465 470 475 480

Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr

485 490 495

Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys

500 505 510

His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys

515 520 525

Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu

530 535 540

Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly

545 550 555 560

Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe

565 570 575

Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys

580 585 590

Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu

595 600 605

Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala

610 615 620

Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu

625 630 635 640

Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys

645 650 655

Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg

660 665 670

Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His

675 680 685

Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys

690 695 700

Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val

705 710 715 720

Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr

725 730 735

Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly

740 745 750

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro

755 760 765

Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln

770 775 780

Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr

785 790 795 800

Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile

805 810 815

Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu

820 825 830

Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr

835 840 845

Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu

850 855 860

Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe

865 870 875 880

Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe

885 890 895

Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu

900 905 910

Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro

915 920 925

Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe

930 935 940

Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala

945 950 955 960

Ser

<210> 296

<211> 961

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 296

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu

435 440 445

Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro

450 455 460

Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile

465 470 475 480

Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr

485 490 495

Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys

500 505 510

His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys

515 520 525

Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu

530 535 540

Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly

545 550 555 560

Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe

565 570 575

Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys

580 585 590

Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu

595 600 605

Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala

610 615 620

Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu

625 630 635 640

Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys

645 650 655

Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg

660 665 670

Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His

675 680 685

Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys

690 695 700

Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val

705 710 715 720

Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr

725 730 735

Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly

740 745 750

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro

755 760 765

Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln

770 775 780

Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr

785 790 795 800

Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile

805 810 815

Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu

820 825 830

Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr

835 840 845

Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu

850 855 860

Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe

865 870 875 880

Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe

885 890 895

Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu

900 905 910

Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro

915 920 925

Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe

930 935 940

Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala

945 950 955 960

Ser

<210> 297

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 297

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 298

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 298

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 299

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 299

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 300

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 300

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys

210 215 220

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Pro Gly Lys

435

<210> 301

<211> 574

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 301

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg

210 215 220

Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser

325 330 335

Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

340 345 350

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

355 360 365

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

370 375 380

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

385 390 395 400

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

405 410 415

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

420 425 430

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

435 440 445

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

450 455 460

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

465 470 475 480

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

485 490 495

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

500 505 510

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

515 520 525

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

530 535 540

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

545 550 555 560

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 302

<211> 573

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 302

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Leu

145 150 155 160

Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp Asn

165 170 175

Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser Gln

180 185 190

Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr

195 200 205

Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu

210 215 220

Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys

225 230 235 240

Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr

245 250 255

Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu

260 265 270

Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg

275 280 285

Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser

290 295 300

Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val

305 310 315 320

Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser Thr

325 330 335

Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys

340 345 350

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

355 360 365

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

370 375 380

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

385 390 395 400

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

405 410 415

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

420 425 430

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

435 440 445

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

450 455 460

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser

465 470 475 480

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys

485 490 495

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

500 505 510

Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

515 520 525

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

530 535 540

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

545 550 555 560

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 303

<211> 573

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 303

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Leu

145 150 155 160

Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp Asn

165 170 175

Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser Gln

180 185 190

Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr

195 200 205

Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg Leu

210 215 220

Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys

225 230 235 240

Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr

245 250 255

Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu

260 265 270

Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg

275 280 285

Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser

290 295 300

Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val

305 310 315 320

Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser Thr

325 330 335

Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys

340 345 350

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

355 360 365

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

370 375 380

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

385 390 395 400

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

405 410 415

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

420 425 430

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

435 440 445

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

450 455 460

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser

465 470 475 480

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys

485 490 495

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

500 505 510

Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

515 520 525

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

530 535 540

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

545 550 555 560

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 304

<211> 573

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 304

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Leu

145 150 155 160

Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp Asn

165 170 175

Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser Gln

180 185 190

Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr

195 200 205

Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg Leu

210 215 220

Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys

225 230 235 240

Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr

245 250 255

Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu

260 265 270

Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg

275 280 285

Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser

290 295 300

Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val

305 310 315 320

Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Arg Thr

325 330 335

Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys

340 345 350

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

355 360 365

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

370 375 380

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

385 390 395 400

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

405 410 415

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

420 425 430

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

435 440 445

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

450 455 460

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser

465 470 475 480

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys

485 490 495

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

500 505 510

Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

515 520 525

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

530 535 540

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

545 550 555 560

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 305

<211> 574

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 305

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg

210 215 220

Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser

325 330 335

Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

340 345 350

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

355 360 365

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

370 375 380

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

385 390 395 400

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

405 410 415

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

420 425 430

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

435 440 445

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

450 455 460

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

465 470 475 480

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

485 490 495

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

500 505 510

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

515 520 525

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

530 535 540

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

545 550 555 560

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 306

<211> 574

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 306

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu

210 215 220

Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser

325 330 335

Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

340 345 350

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

355 360 365

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

370 375 380

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

385 390 395 400

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

405 410 415

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

420 425 430

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

435 440 445

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

450 455 460

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

465 470 475 480

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

485 490 495

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

500 505 510

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

515 520 525

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

530 535 540

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

545 550 555 560

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 307

<211> 574

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 307

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg

210 215 220

Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser

325 330 335

Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

340 345 350

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

355 360 365

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

370 375 380

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

385 390 395 400

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

405 410 415

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

420 425 430

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

435 440 445

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

450 455 460

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

465 470 475 480

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

485 490 495

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

500 505 510

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

515 520 525

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

530 535 540

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

545 550 555 560

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 308

<211> 574

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 308

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro

195 200 205

Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg

210 215 220

Leu Asp Leu Glu Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro

225 230 235 240

Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala

245 250 255

Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu

260 265 270

Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro

275 280 285

Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly

290 295 300

Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile

305 310 315 320

Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Arg

325 330 335

Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

340 345 350

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

355 360 365

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

370 375 380

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

385 390 395 400

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

405 410 415

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

420 425 430

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

435 440 445

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

450 455 460

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

465 470 475 480

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

485 490 495

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

500 505 510

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

515 520 525

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

530 535 540

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

545 550 555 560

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 309

<211> 1083

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 309

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu Lys

325 330 335

Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly

340 345 350

Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr

355 360 365

Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu

370 375 380

Thr Ile Gln Val Lys Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His

385 390 395 400

Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys

405 410 415

Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro

420 425 430

Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg

435 440 445

Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser

450 455 460

Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly

465 470 475 480

Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr

485 490 495

Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu

500 505 510

Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys

515 520 525

Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro

530 535 540

Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln

545 550 555 560

Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser

565 570 575

Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg

580 585 590

Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile

595 600 605

Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr

610 615 620

Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly

625 630 635 640

Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val

645 650 655

Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn

660 665 670

Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu

675 680 685

Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr

690 695 700

Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr

705 710 715 720

Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn

725 730 735

Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys

740 745 750

Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys

755 760 765

Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu

770 775 780

Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn

785 790 795 800

Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp

805 810 815

Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg

820 825 830

Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

835 840 845

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

850 855 860

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

865 870 875 880

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

885 890 895

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

900 905 910

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

915 920 925

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

930 935 940

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

945 950 955 960

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

965 970 975

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

980 985 990

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

995 1000 1005

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

1010 1015 1020

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

1025 1030 1035 1040

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

1045 1050 1055

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

1060 1065 1070

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

1075 1080

<210> 310

<211> 1083

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 310

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

325 330 335

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe

340 345 350

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

355 360 365

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

370 375 380

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

385 390 395 400

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

405 410 415

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

420 425 430

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

435 440 445

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro

450 455 460

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

465 470 475 480

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

485 490 495

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp

500 505 510

Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

515 520 525

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

530 535 540

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly

545 550 555 560

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val

565 570 575

Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu

580 585 590

Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln

595 600 605

Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys

610 615 620

Ala Ala Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val

625 630 635 640

Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp

645 650 655

Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe

660 665 670

Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp

675 680 685

Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg

690 695 700

Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser

705 710 715 720

Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu

725 730 735

Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile

740 745 750

Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr

755 760 765

Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn

770 775 780

Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp

785 790 795 800

Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr

805 810 815

Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg

820 825 830

Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala

835 840 845

Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser

850 855 860

Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

865 870 875 880

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro

885 890 895

Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val

900 905 910

Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys

915 920 925

Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser

930 935 940

Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys

945 950 955 960

Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala

965 970 975

Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr

980 985 990

Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys

995 1000 1005

Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu

1010 1015 1020

Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr

1025 1030 1035 1040

Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys

1045 1050 1055

Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr

1060 1065 1070

Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

1075 1080

<210> 311

<211> 557

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 311

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

325 330 335

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe

340 345 350

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

355 360 365

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

370 375 380

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

385 390 395 400

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

405 410 415

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

420 425 430

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

435 440 445

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro

450 455 460

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

465 470 475 480

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

485 490 495

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

500 505 510

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

515 520 525

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

530 535 540

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

545 550 555

<210> 312

<211> 558

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 312

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr

325 330 335

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe

340 345 350

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

355 360 365

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

370 375 380

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

385 390 395 400

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

405 410 415

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

420 425 430

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

435 440 445

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro

450 455 460

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val

465 470 475 480

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

485 490 495

Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

500 505 510

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

515 520 525

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

530 535 540

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

545 550 555

<210> 313

<211> 696

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 313

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys

325 330 335

Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile

340 345 350

Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu

355 360 365

Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu

370 375 380

Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu

385 390 395 400

Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn

405 410 415

Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met

420 425 430

Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg

435 440 445

Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly

450 455 460

Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

465 470 475 480

Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

485 490 495

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

500 505 510

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

515 520 525

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

530 535 540

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

545 550 555 560

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

565 570 575

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

580 585 590

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

595 600 605

Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

610 615 620

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr

625 630 635 640

Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

645 650 655

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

660 665 670

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

675 680 685

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 314

<211> 696

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 314

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys

325 330 335

Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile

340 345 350

Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu

355 360 365

Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu

370 375 380

Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu

385 390 395 400

Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn

405 410 415

Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met

420 425 430

Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg

435 440 445

Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly

450 455 460

Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

465 470 475 480

Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

485 490 495

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

500 505 510

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

515 520 525

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

530 535 540

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

545 550 555 560

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

565 570 575

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

580 585 590

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

595 600 605

Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

610 615 620

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr

625 630 635 640

Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

645 650 655

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

660 665 670

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

675 680 685

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 315

<211> 696

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 315

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys

325 330 335

Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile

340 345 350

Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu

355 360 365

Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu

370 375 380

Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu

385 390 395 400

Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn

405 410 415

Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met

420 425 430

Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg

435 440 445

Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly

450 455 460

Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

465 470 475 480

Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

485 490 495

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

500 505 510

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

515 520 525

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

530 535 540

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

545 550 555 560

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

565 570 575

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

580 585 590

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

595 600 605

Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

610 615 620

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr

625 630 635 640

Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

645 650 655

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

660 665 670

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

675 680 685

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 316

<211> 696

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 316

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Ser Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys

325 330 335

Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Arg Leu Asp Leu Glu Met Ile

340 345 350

Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu

355 360 365

Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu

370 375 380

Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu

385 390 395 400

Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn

405 410 415

Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met

420 425 430

Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg

435 440 445

Trp Ile Thr Phe Cys Thr Ser Ile Ile Arg Thr Leu Thr Gly Gly Gly

450 455 460

Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

465 470 475 480

Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

485 490 495

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

500 505 510

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

515 520 525

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

530 535 540

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

545 550 555 560

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

565 570 575

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

580 585 590

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

595 600 605

Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

610 615 620

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr

625 630 635 640

Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

645 650 655

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

660 665 670

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

675 680 685

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 317

<211> 758

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 317

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys

225 230 235 240

Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu

245 250 255

Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile

260 265 270

Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe

275 280 285

Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp

290 295 300

Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe

305 310 315 320

Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys

325 330 335

Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala

340 345 350

Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly

355 360 365

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

385 390 395 400

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

405 410 415

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

420 425 430

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

435 440 445

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

450 455 460

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

465 470 475 480

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

485 490 495

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

500 505 510

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

530 535 540

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

545 550 555 560

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

565 570 575

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

580 585 590

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

595 600 605

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

610 615 620

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

625 630 635 640

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

645 650 655

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

660 665 670

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

675 680 685

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

690 695 700

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

705 710 715 720

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

725 730 735

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

740 745 750

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

755

<210> 318

<211> 758

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 318

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys

225 230 235 240

Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu

245 250 255

Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile

260 265 270

Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe

275 280 285

Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp

290 295 300

Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe

305 310 315 320

Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys

325 330 335

Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala

340 345 350

Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly

355 360 365

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

385 390 395 400

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

405 410 415

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

420 425 430

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

435 440 445

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

450 455 460

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

465 470 475 480

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

485 490 495

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

500 505 510

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser

515 520 525

Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

530 535 540

Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

545 550 555 560

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

565 570 575

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

580 585 590

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

595 600 605

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

610 615 620

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

625 630 635 640

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

645 650 655

Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

660 665 670

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

675 680 685

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

690 695 700

Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys

705 710 715 720

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

725 730 735

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

740 745 750

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

755

<210> 319

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 319

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

225 230 235 240

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

245 250 255

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

260 265 270

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

275 280 285

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

290 295 300

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

305 310 315 320

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

325 330 335

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

340 345 350

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly

355 360 365

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp

370 375 380

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

385 390 395 400

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

405 410 415

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

420 425 430

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

435 440 445

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

450 455 460

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

465 470 475 480

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

485 490 495

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

500 505 510

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 320

<211> 755

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 320

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

225 230 235 240

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

245 250 255

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

260 265 270

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

275 280 285

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

290 295 300

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

305 310 315 320

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

325 330 335

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

340 345 350

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly

355 360 365

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp

370 375 380

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

385 390 395 400

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

405 410 415

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

420 425 430

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

435 440 445

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

450 455 460

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

465 470 475 480

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

485 490 495

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

500 505 510

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

515 520 525

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly

530 535 540

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

545 550 555 560

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

565 570 575

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

580 585 590

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

595 600 605

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

610 615 620

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

625 630 635 640

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

645 650 655

Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

660 665 670

Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

675 680 685

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro

690 695 700

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

705 710 715 720

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

725 730 735

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

740 745 750

Pro Gly Lys

755

<210> 321

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 321

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

210 215 220

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

245 250 255

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

260 265 270

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

275 280 285

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

290 295 300

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

305 310 315 320

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

325 330 335

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly

340 345 350

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp

355 360 365

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

370 375 380

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

385 390 395 400

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

405 410 415

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

420 425 430

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

435 440 445

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

450 455 460

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

465 470 475 480

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

485 490 495

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

500 505 510

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

515 520 525

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

530 535 540

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

545 550 555 560

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

565 570 575

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

580 585 590

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

595 600 605

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

610 615 620

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

625 630 635 640

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

645 650 655

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

660 665 670

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

675 680 685

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

690 695 700

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

705 710 715 720

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

725 730 735

Pro Gly Lys

<210> 322

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 322

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

195 200 205

Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe

210 215 220

Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly

225 230 235 240

Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser

245 250 255

Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp

260 265 270

Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val

275 280 285

Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu

290 295 300

Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His

305 310 315 320

Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

325 330 335

Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly

340 345 350

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp

355 360 365

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

370 375 380

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

385 390 395 400

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

405 410 415

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

420 425 430

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

435 440 445

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

450 455 460

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

465 470 475 480

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

485 490 495

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

500 505 510

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly

515 520 525

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

530 535 540

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

545 550 555 560

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

565 570 575

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

580 585 590

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

595 600 605

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

610 615 620

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

625 630 635 640

Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

645 650 655

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

660 665 670

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

675 680 685

Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val

690 695 700

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

705 710 715 720

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

725 730 735

Pro Gly Lys

<210> 323

<211> 736

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 323

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Thr Ala Val Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gln Asp

195 200 205

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

210 215 220

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

225 230 235 240

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

245 250 255

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

260 265 270

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

275 280 285

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

290 295 300

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

305 310 315 320

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

325 330 335

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val

355 360 365

Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp

370 375 380

Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

385 390 395 400

Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr

405 410 415

Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser

420 425 430

Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn

435 440 445

Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr

450 455 460

Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met

465 470 475 480

Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln

485 490 495

Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr

500 505 510

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser

515 520 525

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

530 535 540

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

545 550 555 560

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

565 570 575

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

580 585 590

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

595 600 605

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

610 615 620

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu

625 630 635 640

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys

645 650 655

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

660 665 670

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp

675 680 685

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

690 695 700

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

705 710 715 720

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

725 730 735

<210> 324

<211> 736

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 324

Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly

1 5 10 15

Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn

20 25 30

Leu Gly Ala Ile Val Ala Val Leu Leu Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser

35 40 45

Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly

50 55 60

Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln

65 70 75 80

Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu

85 90 95

Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu

100 105 110

Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn

130 135 140

Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val

145 150 155 160

Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp

165 170 175

Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gln Asp

195 200 205

Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly

210 215 220

His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys

225 230 235 240

Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val

245 250 255

Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile

260 265 270

Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

275 280 285

Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr

290 295 300

Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile

305 310 315 320

Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys

325 330 335

Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

340 345 350

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val

355 360 365

Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp

370 375 380

Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

385 390 395 400

Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr

405 410 415

Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser

420 425 430

Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn

435 440 445

Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr

450 455 460

Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met

465 470 475 480

Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln

485 490 495

Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr

500 505 510

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser

515 520 525

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

530 535 540

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

545 550 555 560

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

565 570 575

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

580 585 590

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

595 600 605

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

610 615 620

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu

625 630 635 640

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys

645 650 655

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

660 665 670

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp

675 680 685

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

690 695 700

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

705 710 715 720

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

725 730 735

<210> 325

<211> 861

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 325

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gln Asp Pro Tyr Val

325 330 335

Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp

340 345 350

Val Val Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

355 360 365

Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr

370 375 380

Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser

385 390 395 400

Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn

405 410 415

Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr

420 425 430

Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met

435 440 445

Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln

450 455 460

Met Leu Phe Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala

485 490 495

Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp

500 505 510

Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser

515 520 525

Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu

530 535 540

Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr

545 550 555 560

Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys

565 570 575

Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn

580 585 590

Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu

595 600 605

Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe

610 615 620

Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys

625 630 635 640

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

645 650 655

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

660 665 670

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

675 680 685

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

690 695 700

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

705 710 715 720

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

725 730 735

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

740 745 750

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser

755 760 765

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

770 775 780

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

785 790 795 800

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly

805 810 815

Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

820 825 830

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

835 840 845

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

850 855 860

<210> 326

<211> 858

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 326

Trp Pro Pro Pro Gly Thr Gly Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln

1 5 10 15

Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln

20 25 30

Val Pro Asn Met Glu Val Thr His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg

35 40 45

His Gly Glu Ser Gly Ser Met Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro

50 55 60

Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly

65 70 75 80

Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu

85 90 95

Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser

100 105 110

Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr

115 120 125

Ala Glu Val Gln Lys Val Gln Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala

130 135 140

Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His

145 150 155 160

Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu

165 170 175

Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser

180 185 190

Gln Val Asp Gly Lys Asn Val Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe

195 200 205

Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro

210 215 220

Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn

225 230 235 240

Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly

245 250 255

Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala

260 265 270

Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr

275 280 285

Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu

290 295 300

Leu Thr Val Gln Val Lys Glu Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Ile

305 310 315 320

Ser Arg Asn Gly Gly Gly Ser Gly Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala

325 330 335

Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp

340 345 350

Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser

355 360 365

Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu

370 375 380

Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr

385 390 395 400

Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys

405 410 415

Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn

420 425 430

Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu

435 440 445

Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe

450 455 460

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

465 470 475 480

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu

485 490 495

Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Val Asp Asn Gly Thr

500 505 510

Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys

515 520 525

Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn

530 535 540

Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu

545 550 555 560

Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp

565 570 575

Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg

580 585 590

Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala

595 600 605

Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Gly

610 615 620

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

625 630 635 640

Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

645 650 655

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

660 665 670

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

675 680 685

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

690 695 700

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

705 710 715 720

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

725 730 735

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

740 745 750

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

755 760 765

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

770 775 780

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

785 790 795 800

Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

805 810 815

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

820 825 830

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

835 840 845

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

850 855

<210> 327

<211> 593

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 327

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Gly Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu

225 230 235 240

His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr

245 250 255

Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asp Met Leu Thr Phe Glu Phe Tyr Met Pro

260 265 270

Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu

275 280 285

Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His

290 295 300

Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu

305 310 315 320

Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr

325 330 335

Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser

340 345 350

Ile Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys

355 360 365

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Lys Lys Gly Gly Pro

370 375 380

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

385 390 395 400

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

405 410 415

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

420 425 430

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

435 440 445

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

450 455 460

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

465 470 475 480

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val

485 490 495

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu

500 505 510

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

515 520 525

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu

530 535 540

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

565 570 575

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

580 585 590

Lys

<210> 328

<211> 987

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 328

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu

225 230 235 240

Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys

245 250 255

Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His

260 265 270

Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Ala Ala

275 280 285

Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser

290 295 300

His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr

305 310 315 320

Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala

325 330 335

Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn

340 345 350

Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser

355 360 365

Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr

370 375 380

Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp

385 390 395 400

Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu

405 410 415

Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe

420 425 430

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys

435 440 445

Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser

450 455 460

Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile

465 470 475 480

Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln

485 490 495

Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys

500 505 510

Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser

515 520 525

Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Pro

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg

545 550 555 560

Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn

565 570 575

Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu

580 585 590

Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr

595 600 605

Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His

610 615 620

Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg

625 630 635 640

Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys

645 650 655

Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln

660 665 670

Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu

675 680 685

Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn

690 695 700

His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp

705 710 715 720

Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser

725 730 735

Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

740 745 750

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

755 760 765

Cys Pro Ala Pro Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

770 775 780

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

785 790 795 800

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

805 810 815

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

820 825 830

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

835 840 845

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

850 855 860

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

865 870 875 880

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu

885 890 895

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

900 905 910

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

915 920 925

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe

930 935 940

Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

945 950 955 960

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

965 970 975

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

980 985

<210> 329

<211> 987

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 329

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

20 25 30

Ala Ala Leu Gln Val Tyr Trp Met Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

35 40 45

Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

50 55 60

Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

65 70 75 80

Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Ile Ala Tyr Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val

100 105 110

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

115 120 125

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

130 135 140

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

145 150 155 160

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

165 170 175

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

180 185 190

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

195 200 205

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Asp Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Met

450 455 460

Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr Pro

465 470 475 480

Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu

485 490 495

Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly Ser

500 505 510

Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Ala Ala Leu Asp Ala Gly Gln

515 520 525

Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu Leu

530 535 540

Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn

545 550 555 560

Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly

565 570 575

Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe

580 585 590

Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys

595 600 605

Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp

610 615 620

Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr

625 630 635 640

Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln

645 650 655

Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile

660 665 670

Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser

675 680 685

Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro His

690 695 700

Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu

705 710 715 720

Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu

725 730 735

Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys

740 745 750

Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala

755 760 765

Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser

770 775 780

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Val Ile Pro Val Ser

785 790 795 800

Gly Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr

805 810 815

Asp Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys

820 825 830

Thr Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser

835 840 845

Thr Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys

850 855 860

Leu Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro

865 870 875 880

Pro Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr

885 890 895

Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala

900 905 910

Leu Gln Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu

915 920 925

Val Ala Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr

930 935 940

Leu Arg Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys

945 950 955 960

Met Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr

965 970 975

Ile Asn Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

980 985

<210> 330

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 330

Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys Ala Ala Leu Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp Ser Thr Glu Ile Leu Lys

85 90 95

Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser

100 105 110

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys

115 120 125

Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr

130 135 140

Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg

145 150 155 160

Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro

165 170 175

Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln

180 185 190

Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile

195 200 205

Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn

210 215 220

Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro

225 230 235 240

His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val Arg Ile Gln Arg Lys Lys

245 250 255

Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe

260 265 270

Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val

275 280 285

Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn Ser Ser Cys Ser Lys Trp

290 295 300

Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Val Ile Pro Val

325 330 335

Ser Gly Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr

340 345 350

Thr Asp Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser

355 360 365

Cys Thr Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr

370 375 380

Ser Thr Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Pro Pro Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala

435 440 445

Ala Leu Gln Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met

450 455 460

Leu Val Ala Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu

465 470 475 480

Thr Leu Arg Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val

485 490 495

Lys Met Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val

500 505 510

Thr Ile Asn Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala

515 520

<210> 331

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 331

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Ala Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

325 330 335

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

340 345 350

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

355 360 365

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

370 375 380

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

435 440 445

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

450 455 460

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

465 470 475 480

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

485 490 495

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

500 505 510

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515 520

<210> 332

<211> 524

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 332

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Ala

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp

325 330 335

Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala

340 345 350

Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro

355 360 365

Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr

370 375 380

Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser

385 390 395 400

Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu

405 410 415

Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile

420 425 430

Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala

435 440 445

Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met

450 455 460

Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu

465 470 475 480

Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr

485 490 495

Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val

500 505 510

Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515 520

<210> 333

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 333

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10

<210> 334

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 334

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

1 5

<210> 335

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 335

Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

<---

Claims (37)

1. Иммуноцитокин для регуляции иммунных ответов, содержащий: а) антигенсвязывающий белок, специфично распознающий антиген-мишень; и b) цитокин или его вариант, где антигенсвязывающий белок содержит антигенсвязывающий полипептид, содержащий, от N' к C': антигенсвязывающий фрагмент, шарнирный участок и субъединицу Fc-домена или ее часть, и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке;

и где цитокин или его вариант выбран из группы, состоящей из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, VEGF, эритропоэтина, тромбопоэтина, G-CSF, M-CSF, SCF и GM-CSF, а антиген-мишень представляет собой PD-1;

антигенсвязывающий белок специфично связывает антиген-мишень с K_D в диапазоне 10^-8 M ˂ K_D ≤ ~10^-6 M, и

активность варианта цитокина в свободном состоянии составляет не более чем 80% от активности соответствующего цитокина дикого типа в свободном состоянии.

2. Иммуноцитокин по п. 1, где антигенсвязывающий фрагмент представляет собой PD-L2 или PD-L1.

3. Иммуноцитокин по п. 1 или 2, где антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, специфично распознающее PD-1, где антигенсвязывающий полипептид, содержащий шарнирный участок, представляет собой тяжелую цепь антитела и где цитокин или его вариант расположен в шарнирном участке тяжелой цепи.

4. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-3, где при наличии связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта повышается по меньшей мере на 20% по сравнению с активностью в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью, альтернативно, где в отсутствие связывания антигенсвязывающего белка с антигеном-мишенью активность цитокина или его варианта, расположенного в шарнирном участке, составляет не более 70% от активности соответствующего цитокина или его варианта в свободном состоянии, альтернативно, где цитокин или его вариант представляет собой вариант цитокина.

5. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-4, где антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида, каждый из которых содержит шарнирный участок, и где только один антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, альтернативно, где антигенсвязывающий белок содержит два антигенсвязывающих полипептида, каждый из которых содержит шарнирный участок, и где каждый антигенсвязывающий полипептид содержит цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, и указанные два цитокина или их варианта являются одинаковыми или разными.

6. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-5, где цитокин или его вариант представляет собой мономерный или димерный цитокин или его вариант, и когда цитокин или его вариант является димерным, обе субъединицы димерного цитокина или его варианта расположены последовательно в шарнирном участке антигенсвязывающего полипептида.

7. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-6, где цитокин или его вариант представляет собой IL-2 или его вариант.

8. Иммуноцитокин по п. 7, где вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций в положении, выбранном из группы, состоящей из L18, Q22, F24, K35, R38, F42, K43, E61, P65, Q126 и S130, и соответствующем положению в IL-2 дикого типа, содержащем последовательность SEQ ID NO: 1.

9. Иммуноцитокин по п. 7, где вариант IL-2 содержит одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из L18R, Q22E, F24A, R38D, K43E, E61R, P65L, Q126T и S130R, в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1.

10. Иммуноцитокин по п. 7, где вариант IL-2 содержит мутацию R38D/K43E/E61R, мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R, мутацию R38D/K43E/E61R/Q126T, мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T или мутацию L18R/Q22E/R38D/K43E/E61R/Q126T/S130R в отличие от IL-2 дикого типа, содержащего последовательность SEQ ID NO: 1.

11. Иммуноцитокин по п. 7, где вариант IL-2 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 2 и 251-254.

12. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-6, где цитокин или его вариант представляет собой IL-12 или его вариант.

13. Иммуноцитокин по п. 12, где вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40 в положении, выбранном из группы, состоящей из E45, Q56, V57, K58, E59, F60, G61, D62, A63, G64, Q65 и C177, и соответствующем положению в субъединице p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30.

14. Иммуноцитокин по п. 12, где вариант IL-12 содержит одну или несколько мутаций в субъединице p40, выбранных из группы, состоящей из Q56A, V57A, K58A, E59A, F60A, G61A, D62A, A63S, G64A и Q65A, в отличие от субъединицы p40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30.

15. Иммуноцитокин по п. 12, где субъединица p40 варианта IL-12 содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 31-34.

16. Иммуноцитокин по п. 12, где вариант IL-12 содержит мутацию E59A/F60A или мутацию F60A в субъединице р40, которые соотносятся субъединицей р40 дикого типа, содержащей последовательность SEQ ID NO: 30.

17. Иммуноцитокин по п. 12, где субъединица p40 варианта IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 31 или 33.

18. Иммуноцитокин по п. 12, где субъединица р40 и субъединица р35 IL-12 или его варианта соединены линкером.

19. Иммуноцитокин по п. 18, где вариант IL-12 содержит последовательность SEQ ID NO: 36, 275, 331 или 332.

20. Иммуноцитокин по п. 3, где указанное антитело представляет собой антитело к PD-1, содержащее VH-CDR1, VH-CDR2 и VH-CDR3 VH-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 102, и VL-CDR1, VL-CDR2 и VL-CDR3 VL-домена, содержащего последовательность SEQ ID NO: 103, и где VH-CDR3 содержит любую из следующих мутаций в отличие от SEQ ID NO: 102: D100N, D100G, D100R, N99G, N99A или N99M.

21. Иммуноцитокин по п. 20, где указанное антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 106, где цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, и при этом тяжелая цепь, содержащая вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 268-273.

22. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-21, где PD-L2 или PD-L1 содержит последовательность SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 250, любую последовательность из SEQ ID NO: 255-261 или любую последовательность из SEQ ID NO: 262-265.

23. Иммуноцитокин по п. 22, где

(i) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-2, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 180;

(ii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-α, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IFN-α, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 182;

(iii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IFN-γ, содержащий последовательность SEQ ID NO: 19, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IFN-γ, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 183;

(iv) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-10, содержащий последовательность SEQ ID NO: 28, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-10, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 184;

(v) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 36, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 186;

(vi) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-12, содержащий последовательность SEQ ID NO: 275, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-12, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 274; или

(vii) цитокин или его вариант представляет собой вариант IL-23, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, и где антигенсвязывающий полипептид, содержащий вариант IL-23, расположенный в шарнирном участке, содержит последовательность SEQ ID NO: 187.

24. Иммуноцитокин по п. 22 или 23, где антигенсвязывающий белок содержит второй антигенсвязывающий полипептид, не содержащий цитокин или его вариант, расположенный в шарнирном участке, и где второй антигенсвязывающий полипептид содержит любую последовательность из SEQ ID NO: 178, 179, 181 и 185.

25. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая иммуноцитокин по любому из пп. 1-24.

26. Фармацевтический состав для регуляции иммунных ответов, содержащий иммуноцитокин по любому из пп. 1-24 и фармацевтически приемлемый носитель.

27. Применение иммуноцитокина по любому из пп. 1-24 для регуляции иммунных ответов.