RU2812491C2 - Композиции и способы лечения гемоглобинопатий - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к области генной инженерии, в частности к системам редактирования генома и способам лечения гемоглобинопатий. Предложена нацеливающая молекула РНК для редактирования области энхансера BCL11a. gРНК содержит tracr и crРНК, где crРНК содержит целевой домен с SEQ ID NO: 253. Также предложены нуклеиновая кислота, которая кодирует молекулу gРНК, экспрессионный вектор, способ изменения последовательности-мишени в CD34+ клетке, модифицированная CD34+ клетка и композиции для применения при лечении гемоглобинопатии. Изобретения приводят к высокой индукции фетального гемоглобина (HbF) и индукции HbF-положительных клеток, что способствует лечению гемоглобинопатии. 12 н. и 48 з.п. ф-лы, 49 ил., 34 табл., 10 пр.

Description

Для настоящей заявки испрашивается приоритет в соответствии с предварительной патентной заявкой США 62/271,968, поданной 28 декабря 2015 года, и предварительной патентной заявкой США 62/347,484, поданной 8 июня 2016 года. Содержание этих заявок включено в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте.

СПИСКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

В настоящей заявке содержится список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и, таким образом, полностью включен в настоящее описание посредством ссылки. Упомянутая копия ASCII, созданная 26 января 2017 года, называется PAT057179-WO-PCT_SL.txt и имеет размер 1,115,217 байт.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

CRISPRs (Clustered Regular Interspaced Short Palindromic Repeats) эволюционировали в бактериях в качестве системы адаптивного иммунитета для защиты от вирусных атак. При контакте с вирусом короткие фрагменты вирусной ДНК встраиваются в локус CRISPR бактериального генома. РНК транскрибируется из части локуса CRISPR, включающей вирусную последовательность. Эта РНК, содержащая последовательность, комплементарную вирусному геному, опосредует нацеливание белка Cas9 на ту же последовательность в вирусном геноме. Белок Cas9 расщепляет и таким образом нейтрализует вирусную мишень.

В настоящее время система CRISPR/Cas адаптирована для редактирования генома в эукариотических клетках. Введение сайт-специфичных одноцепочечных (SSB) или двуцепочечных разрывов (DSB) позволяет вносить изменения в последовательность-мишени, например, с помощью системы репарации по механизму негомологичного соединения концов(NHEJ) или репарации по механизму гомологичной рекомбинации (HDR).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Не ограничиваясь теорией, изобретение частично основывается на обнаружении того, что системы CRISPR, как например, системы Cas9 CRISPR, в качестве примера описанные здесь, могут быть использованы для модификации клеток (например, гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников (HSPC)) с целью увеличения экспрессии фетального гемоглобина (HbF) и/или снижения экспрессии бета-глобина (например, гена бета-глобина, несущего болезнетворную мутацию), и такие клетки могут применяться для лечения гемоглобинопатий, например, серповидно-клеточной анемии и бета-талассемии.

Таким образом, в некотором аспекте, изобретение предоставляет системы CRISPR (например, системы Cas CRISPR, а также системы Cas9 CRISPR, а также системы S.pyogenes Cas9 CRISPR), включающие одну или более одной молекулы gРНК, как, например, описано здесь. Любая из молекул gРНК, описанных здесь, может быть использована в таких системах, а также в описанных здесь способах и клетках.

В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую в себя tracrРНК и crРНК, где crРНК содержит целевой домен, комплементарный целевой последовательности BCL11A гена, BCL11-энхансера или области HFPH.

В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности BCL11A гена, например, комплементарный последовательности-мишени в кодирующей области BCL11a (например, в экзоне BCL11a, например, в экзоне 2 BCL11a). В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен, который включает, например, состоит из любой последовательности от SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO:85 или от SEQ ID NO:400 до SEQ ID NO:1231.

В другом аспекте, изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности энхансера BCL11A.

В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен, который включает, например, состоит из любой из последовательностей от SEQ ID NO: 1232 до SEQ ID NO: 1499.

В вариантах осуществления gРНК (комплементарная) к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой последовательность мишени в области +58 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из, например, любой (последовательности) от SEQ ID NO: 182 до SEQ ID NO: 277 или от SEQ ID NO: 334 до SEQ ID NO: 341. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 334, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 337. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, SEQ ID NO: 248. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 247. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 245. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из ID NO: 336. В вариантах осуществления, целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 337. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 338. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 335. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 252. В некотором варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК, содержащую crРНК, которая включает, например, состоит, например, от 5’до 3', из (последовательностей) SEQ ID NO:248 - SEQ ID NO:6607 и tracr, который включает, например, состоит, от 5’до 3', например из SEQ ID NO: 6660. В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК, включающую в себя crРНК, которая включает, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 247 - SEQ ID NO: 6607 и tracr, который, включает, например, состоит из, от 5’до 3', например SEQ ID NO: 6660. В варианте осуществления, молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, от 5'до 3', SEQ ID NO: 338 - SEQ ID NO: 6604-UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 335 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 336 - SEQ ID NO: 6604-UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', SEQ ID NO: 245 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК и включает, например, состоит например, от 5’до 3', из SEQ ID NO: 337 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU. В некотором варианте осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу sgРНК включает, например, состоит из, например, от 5’до 3', из SEQ ID NO: 252 - SEQ ID NO: 6604 - UUUU.

В вариантах осуществления gРНК к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой gРНК к целевой последовательности-мишени в области +62 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691.В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит например, из любой из SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 310, SEQ ID NO: 319, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 311, SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 317, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 289 или SEQ ID NO: 281. В вариантах осуществления целевой домен, включает, например, состоит из SEQ ID NO: 318.

В вариантах осуществления gРНК к целевой последовательности энхансера BCL11a представляет собой gРНК к целевой последовательности-мишени в области +55 энхансера BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691. В вариантах осуществления целевой доменный объект включает, например, любой из SEQ ID NO: 1683, SEQ ID NO: 1638, SEQ ID NO: 1647, SEQ ID NO: 1609, SEQ ID NO: 1621, SEQ ID NO: 1617, SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1631, SEQ ID NO: 1620, SEQ ID NO: 1637, SEQ ID NO: 1612, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1619, SEQ ID NO: 1675, SEQ ID NO: 1645, SEQ ID NO: 1598, SEQ ID NO: 1599, SEQ ID NO: 1663, SEQ ID NO: 1677 или SEQ ID NO: 1626.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую целевой домен, комплементарный целевой последовательности наследственной персистенции области фетального гемоглобина (HPFH). В одном варианте осуществления область HPFH является областью HPFH Френча. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой от SEQ ID NO: 86 до SEQ ID NO: 181 или от SEQ ID NO: 1500 до SEQ ID NO: 1595. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 1580, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 1503, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 1537, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 1536, SEQ ID NO: 1539, SEQ ID NO: 1585. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из, например, из SEQ ID NO: 100. В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 165. В вариантах осуществления целевой доменный адрес включает, например, состоит из SEQ ID NO: 113.

В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула gРНК может дополнительно иметь области и/или свойства, описанные здесь. В одном аспекте молекула gРНК (например, любого из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления) включает целевой домен, который содержит, например, состоит из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательные нуклеиновые кислоты, расположенные на 3'-конце указанной целевой последовательности домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательные нуклеиновые кислоты, расположенные на 5'-конце указанной последовательности целевого домена. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена не включают ни 5’, ни 3' нуклеиновую кислоту указанной последовательности целевого домена. В любом из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления целевой домен может состоять из указанной последовательности целевого домена.

В вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен включает в себя 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен состоит из 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности) 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена. В вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любые из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена являются 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности), или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательными нуклеиновыми кислотами расположенными на 3'-конце повторяющейся последовательности целевых доменов. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности) 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности), или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена представляют собой 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности), 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце указанной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления молекулы gРНК, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, 17, 18, 19, 20, 21 (если присутствует в упомянутой последовательности), 22 (если присутствует в упомянутой последовательности), 23 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 24 (если присутствует в упомянутой последовательности) или 25 (если присутствует в упомянутой последовательности) последовательных нуклеиновых кислот любой из указанных последовательностей целевого домена не включают ни 5', ни 3' нуклеиновых кислот в указанной последовательности целевого домена.

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, молекула gРНК включает часть crРНК и часть tracr, которые гибридизуются с образованием шпильки, включающей в себя SEQ ID NO: 6584 или 6585. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает в себя первое удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце к фрагменту crРНК шпильки, причем указанное первое удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6586. В вариантах осуществления, где шпилька дополнительно включает второе удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце по отношению к части crРНК шпильки и, при наличии первого удлинения шпильки, указанное второе удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6587.

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr, который включает, например, SEQ ID NO: 6660 или SEQ ID NO: 6661. В вариантах осуществления часть crРНК шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6607 или SEQ ID NO: 6608.

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr, содержащий SEQ ID NO: 6589 или 6590, и, необязательно, при наличие первого удлинения шпильки, первое удлинение tracr, расположенное на 5'-конце (последовательности) SEQ ID NO: 6589 или 6590, причем указанное первое удлинение tracr включает в себя SEQ ID NO: 6591.

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновых кислот (например, dgРНК молекулу).

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, настоящее изобретение предоставляет молекулу gРНК, в которой целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты (например, sgРНК молекуле), причём tracr расположен 3' (по отношению) к целевому домену. В вариантах осуществления молекула sgРНК включает в себя шпильку, расположенную 3' к целевому домену и 5' (по отношению) к tracr, например, шпильку, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 6588.

В одном аспекте, включая любой из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, настоящее изобретение предоставляет молекулу gРНК, включающую, от 5’до 3', [целевой домен]а:

(а) SEQ ID NO: 6601;

(б) SEQ ID NO: 6602;

(в) SEQ ID NO: 6603;

(г) SEQ ID NO: 6604; или

(д) любой из вышеперечисленных (а)-(г), дополнительно включающий на 3'-конце 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 4 нуклеотида урацила. В вариантах осуществления нет промежуточных нуклеотидов между целевым доменом и последовательностью любого из (а)-(е).

В другом аспекте изобретение предоставляет системы CRISPR, как, например системы Cas CRISPR, например, системы Cas9 CRISPR, например системы S.pyogenes Cas9 CRISPR, включающие одну или несколько, например, одну молекулу gРНК по любому из вышеупомянутых аспектов и вариантов. В одном аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, и дополнительно включающую молекулу Cas9. В вариантах осуществления молекула Cas9 представляет собой активную или неактивную Cas9 S. pyogenes. В вариантах осуществления первая молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).

В другом аспекте изобретение предоставляет композиции, которые включают более одной gРНК, как, например, описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления, включающем более одной молекулы gРНК. Таким образом, в следующем аспекте изобретение предоставляет композицию любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, включающих композиции, в которых дополнительно входит вторая молекула gРНК; вторая молекула gРНК и третья молекула gРНК; или вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК и четвертая молекула gРНК, где вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК (если присутствует) и четвертая молекула gРНК (если присутствует) представляют собой молекулу gРНК, как описано здесь, например, молекулу gРНК любого из вышеупомянутых аспектов или вариантов осуществления молекулы gРНК. В одном варианте осуществления каждая молекула gРНК композиции комплементарна отличной от других последовательности-мишени. В одном варианте осуществления каждая молекула gРНК комплементарна целевым последовательностям в пределах одного и того же гена или области. В одном аспекте первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, третья молекула gРНК (если присутствует) и четвертая молекула gРНК (если присутствует) комплементарны целевым последовательностям на расстоянии не более чем 20000 нуклеотидов, не более 10000 нуклеотидов, не более 6000, не более 5000 нуклеотидов, не более 4000, не более 1000 нуклеотидов, не более 500 нуклеотидов, не более 400 нуклеотидов, не более 300 нуклеотидов, не более 200 нуклеотидов, не более 100 нуклеотидов, не более 90 нуклеотидов, не более 80 нуклеотидов, не более 70 нуклеотидов, не более 60 нуклеотидов, не более 50 нуклеотидов, не более 40 нуклеотидов, не более 30 нуклеотидов, не более 20 нуклеотидов или не более 10 нуклеотидов. В другом аспекте каждая молекула gРНК композиции комплементарна целевой последовательности-мишени в пределах разных генов или области.

В данном описании описаны конкретные и предпочтительные комбинации более чем одной молекулы gРНК по изобретению. В одном аспекте композиция включает в себя первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК комплементарны различным целевым последовательностям-мишеням и являются:

(a) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарным гену BCL11a;

(b) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+58 BCL11a энкансера;

(c) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+65 BCL11a энкансера;

(d) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+55 BCL11a энкансера; или

(e) независимо выбранными из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH.

В одном аспекте композиция включает в себя первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК комплементарны различным целевым последовательностям и:

(a) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+58 BCL11a энхансера;

(b) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+62 BCL11a энхансера;

(c) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных (области)+55 BCL11a энхансера;

(d) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), (комплементарных) гену BCL11a, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;

(e) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области +58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера;

(f) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера;

(g) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+58 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;

(h) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера;

(i) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+62 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;

(j) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области+55 BCL11a энхансера, а вторая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH;

В другом аспекте композиция, содержащая первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, включает:

(a) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных области HPFH, а вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина; или

(b) первая молекула gРНК выбрана из молекул gРНК, описанных здесь (например, выше), комплементарных энхансеру BCL11a, например, области +58 BCL11a энхансера, области +55 BCL11a энхансера или области +62 BCL11a энхансера, а вторая gРНК молекула включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина.

В любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления относительно gРНК компонентов композиции, композиция может состоять из первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК.

В любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления композиции могут быть составлены в среде, подходящей для электропорации.

В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулу (молекулы) gРНК и/или Cas молекулы систем CRISPR. Не ограничиваясь теорией, полагают, что доставка таких нуклеиновых кислот в клетки приводит к экспрессии системы CRISPR внутри клетки. В одном аспекте изобретение предоставляет последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, которая кодирует одну или несколько молекул gРНК. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор, распознаваемый РНК-полимеразой II или РНК-полимеразой III. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор U6 или промотор HI.

В следующих аспектах нуклеиновая кислота дополнительно содержит последовательность, кодирующую молекулу Cas9. В вариантах осуществления, нуклеиновая кислота содержит промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей молекулу Cas9. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор EF-1, промотор гена CMV IE, промотор EF-1, промотор гена убиквитина С или промотор фосфоглицераткиназы (PGK).

В одном аспекте изобретение предоставляет вектор, включающий в себя нуклеиновые кислоты любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления вектор выбирают из группы, состоящей из лентивирусного вектора, аденовирусного вектора, адено-ассоциированного вирусного (AAV) вектора, вектора вируса простого герпеса (HSV), плазмиды, мини-кольца, наноплазмиды и РНК-вектора.

В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую одну или несколько молекул gРНК, как описано здесь, например, в любом из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9.

В другом аспекте, изобретение предоставляет композицию, включающую нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или несколько молекул gРНК (например, как описано здесь, в любом из предыдущих аспектов молекулы gРНК и вариантов осуществления) и молекулу Cas9.

В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, например, композицию любого из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, дополнительно включающую матричную нуклеиновую кислоту. В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, например композицию любого из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, включая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает нуклеотид, который соответствует нуклеотиду целевой последовательности молекулы gРНК. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает (может представлять собой) нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-глобин человека, например бета-глобин человека, несущий одну или несколько мутаций G16D, E22A и T87Q. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает (может представлять собой) нуклеиновую кислоту, кодирующую человеческий гамма-глобин.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетки, содержащие (или который когда-либо содержали) молекулу gРНК, систему CRISPR, композицию или нуклеиновую кислоту (например, как описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления). В данных аспектах изобретение представлено клетками, которые были модифицированы таким включением.

Таким образом, в одном аспекте изобретение предоставляет способ изменения, например, изменения структуры, например целевой последовательности в нуклеиновой кислоте клетки, который включает взаимодействие (нахождение в контакте) данной клетки с:

1) одной или несколькими молекулами gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления и молекулой Cas9 (например, как описано здесь);

2) одной или несколькими молекулами gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, как описано здесь);

3) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, и молекулой Cas9 (например, как описано здесь);

4) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления gРНК, и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, как описано здесь); или

5) любой из 1)-4) выше и матричной нуклеиновой кислотой (например, как описано здесь);

6) любой из 1)-4) выше и нуклеиновой кислотой, включая последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту (например, как описано здесь);

7) композицией, описанной здесь (например, по любому из вышеупомянутых аспектов и вариантов композиции); или

8) вектором любого из вышеупомянутых векторных аспектов и вариантов осуществления.

В вариантах осуществления молекула gРНК или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК, Cas9 молекула или нуклеиновая кислота кодирующая молекулу Cas9, составлены в виде одной композиции. В других вариантах осуществления молекула gРНК или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК, и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу Cas9, формулируются в более чем одной композиции. В вариантах осуществления композиции в количестве более одной доставляются одновременно или последовательно.

В вариантах осуществления клетка является клеткой животного. В вариантах осуществления клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку, или клетку-предшественник (прогениторную) (HSPC) (например, популяцию клеток HSPC). В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD90+/CD49f+ клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-/CD49f+. В вариантах осуществления способ включает в себя популяцию клеток, которая была обогащена клетками HSPC, например, CD34+ клетками.

В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из костного мозга. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была получена из пуповинной крови.

В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяция клеток).

В вариантах осуществления способов, описанных здесь, изменение приводит к увеличению экспрессии фетального гемоглобина в клетке. В вариантах осуществления способов, описанных здесь, изменение приводит к уменьшению экспрессии фетального гемоглобина в клетке.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, измененную способом, описанным в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления. В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, включающую в себя первую молекулу gРНК (например, как описано здесь), или композицию (например, как описано здесь), или нуклеиновую кислоту, кодирующую первую молекулу gРНК (например, как описано здесь) по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления клетка является клеткой животного. В вариантах осуществления клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку, или клетку-предшественник (HSPC) (например, популяцию HSPC). В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-клетку. В вариантах осуществления клетка представляет собой CD34+/CD90+/CD49f+ клетку. В вариантах осуществления способ включает в себя популяцию клеток, обогащённую HSPC, например, CD34+ клетками.

В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из костного мозга. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) была выделена из пуповинной крови.

В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления клетка (например, популяцию клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку (например, популяцию клеток).

В вариантах осуществления клетка включает в себя, включала или будет включать вторую молекулу gРНК, как, например, описано здесь, в любом из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК или нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую молекулу gРНК, причем первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают неидентичные целевые домены.

В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина в клетке увеличивается, например, по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь). В вариантах осуществления экспрессия бета-глобина в клетке уменьшена по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь). В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается и экспрессия бета-глобина снижается в клетке, по сравнению с клеткой того же типа, которая не была модифицирована включением молекулы gРНК (например, как описано здесь).

В некотором аспекте, клетки по изобретению (или способы, включающие клетку), контактируют с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, соединением 1, соединением 2, соединением 3 или Cоединением 4. В одном аспекте клетки (или способы, включающие клетку), контактировали с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, как описано здесь, например, с соединением 1, соединением 2, соединением 3, Cоединением 4 или их комбинацией (например, соединения 1 и Cоединения 4). В одном варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой соединение 4. В варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой комбинацию соединения 1 и Cоединения 4. В вариантах осуществления контакт (с соединением) происходит ex vivo.

В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет способ лечения, например, способ лечения гемоглобинопатий. В одном аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, который включает введение пациенту клетки (например, популяции клеток) по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления.

В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, включая введение пациенту клетки по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В одном варианте осуществления гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию или серповидно-клеточную анемию.

В другом аспекте изобретение предоставляет нацеливающую молекулу gРНК, например, как описано здесь, для применения в качестве лекарственного средства, например, для применения в лечении заболевания. В вариантах осуществления это заболевание представляет собой гемоглобинопатию, например, бета-талассемию или серповидно-клеточную анемию.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, например, как описано здесь и как описано в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, в которых, при введении CRISPR-системы, включающей в себя gРНК, в клетку (например, клетку CD34+, например, HSC), по меньшей мере, около 15% полученных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки; или (b) большую делецию относительно немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов геномного секвенирования NGS. В вариантах осуществления, по меньшей мере, около 25% полученных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки считывания; или (b) большую делецию относительно немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов NGS. В вариантах осуществления по меньшей мере, около 40%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95%, по меньшей мере, около 96% по меньшей мере, около 97%, по меньшей мере, около 98% или, по меньшей мере, около 99% произведенных инделов включают (а) мутацию сдвига рамки считывания; или (b) большую делецию по отношению к немодифицированной ДНК-мишени, измеренную при помощи методов NGS (геномного секвенирования).

В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет методы ex vivo экспансии и модификации клеток HSPC (например, клеток CD34+). В одном аспекте изобретение предоставляет способ модификации клеток (например, популяции клеток), включающий:

(a) предоставление популяции клеток;

(b) экспансия (культивирование) указанных клеток ex vivo в присутствии соединения, способствующего экспансии стволовых клеток; и

(c) введение в указанные клетки первой молекулы gРНК (как описано здесь, например, в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей первую молекулу gРНК, или композиции (как, например, описано здесь, в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления);

таким образом, что экспрессия гемоглобина, например, фетального гемоглобина, увеличивается в указанных клетках по сравнению с тем же типом клеток, не подвергавшихся стадии (с).

В вариантах осуществления клетки вводят субъекту, нуждающемуся в этом, например субъекту с гемоглобинопатией, например, серповидно-клеточной анемией или бета-талассемией.

В вариантах осуществления клетки являются или содержат CD34+ клетки. В вариантах осуществления клетки являются или содержат HSPC-клетки. В вариантах осуществления клетки выделяют из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.

В предпочтительном варианте осуществления клетки выделяют из костного мозга. В других вариантах осуществления клетки выделяют из мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому был назначен агент для мобилизации (периферической крови), отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В вариантах осуществления клетки представляют собой обогащенную популяцию клеток.

В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3 или Соединение 4, например, Соединение 4. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, комбинацию Cоединения 1 и Cоединения 4). В вариантах осуществления клетки контактируют с Cоединением 4 в концентрации от около 1 до около 200 микромолей (мкМ). В одном варианте осуществления концентрация Cоединения 4 составляет около 75 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления экспансия указанных клеток ex vivo в присутствии соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, происходит в течение примерно 1-10 дней, например, примерно 1-5 дней, например, около 2-5 дней, например, около 4 дней.

В вариантах осуществления клетки являются аутологичными пациенту, которому назначено введение указанных клеток. В вариантах осуществления клетки являются аллогенными для пациента, которому назначено введение указанных клеток.

В вариантах осуществления экспансия стадии (b) дополнительно проводится в присутствии тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L), фактора стволовых клеток человека (SCF) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6). В вариантах осуществления тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF) и человеческий интерлейкин-6 (IL-6) находятся в концентрации около 50 нг/мл каждый. В вариантах осуществления тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF) и человеческий интерлейкин-6 (IL-6) находятся в концентрации 50 нг/мл каждый.

Дополнительные аспекты и варианты осуществления описаны ниже.

В одном аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, которая включает в себя tracr и crРНК, где crРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена BCL11A ((например, гена BCL11a человека), энхансеру BCL11a (например, энхансеру BCL11a гена человека) или области HFPH (например, области HPFH человека).

В вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит гену BCL11A, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO: 85 или от SEQ ID NO: 400 до SEQ ID NO: 1231. Эти варианты осуществления упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №2.

В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из, например, любой из от SEQ ID NO: 1232 до SEQ ID NO: 1499. Эти варианты осуществления упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №3. В предпочтительных вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 182 до SEQ ID NO: 277 или от SEQ ID NO: 334 до SEQ ID NO: 341. Эти варианты воплощения упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №4. В более предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 244, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 334, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 337. Эти варианты воплощения упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №5. В еще более предпочтительных вариантах осуществления целевая область включает, например, состоит, из любого из SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 335, SEQ ID NO: 336, SEQ ID NO: 337 или SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №6), или, например, включает, любую из SEQ ID NO: 248 или SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №7). В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 248 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №8). В вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 338 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №9).

В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 278 до SEQ ID NO: 333 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №10). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 310, SEQ ID NO: 319, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 311, SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 317, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 289, или SEQ ID NO: 281 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №11). В одном предпочтительном варианте осуществления целевой домен включает, например, состоит из SEQ ID NO: 318 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №12).

В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит энхансеру BCL11a, а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 1596 до SEQ ID NO: 1691 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №13). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 1683, SEQ ID NO: 1638, SEQ ID NO: 1647, SEQ ID NO: 1609, SEQ ID NO: 1621, SEQ ID NO: 1621 : 1617, SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1631, SEQ ID NO: 1620, SEQ ID NO: 1637, SEQ ID NO: 1612, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1619, SEQ ID NO: 1675, SEQ ID NO: 1645, SEQ ID NO: 1598, SEQ ID NO: 1599, SEQ ID NO: 1663, SEQ ID NO: 1677 или SEQ ID NO: 1626 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №14).

В других вариантах осуществления целевая последовательность принадлежит области HFPH (например, области HPFH Френча), а целевой домен включает, например, состоит из любой из от SEQ ID NO: 86 до SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: от 1500 до SEQ ID NO: 1595 или от SEQ ID NO: 1692 до SEQ ID NO: 1761 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №15). В предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 1580, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 1503, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 1537, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 1536, SEQ ID NO: 1539, SEQ ID NO: 1585 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №16). В еще более предпочтительных вариантах осуществления целевой домен включает, например, состоит из любой из SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 1505, SEQ ID NO: 1589, SEQ ID NO: 1700 или SEQ ID NO: 1750 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №17). В других предпочтительных вариантах осуществления целевой домен, включает, например, состоит из любого из SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 165 или SEQ ID NO: 113 (упоминаются здесь как вариант осуществления молекулы gРНК №18).

В вариантах осуществления молекула gРНК включает целевой домен, который включает, например, состоит из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой описанной здесь последовательности целевого домена, например, любой из последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2. В вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из описанных здесь последовательностей целевых доменов, например последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 3'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, представляют собой 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевых доменов, представленных в Таблице 1 или Таблице 2, не включают расположенную на 5'- или 3'-конце нуклеиновую кислоту избранной последовательности целевого домена.

В вариантах осуществления молекула gРНК включает целевой домен, который включает, например, состоит из 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20, последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанной здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9. В вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20, последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблицы 8 или Таблицы 9 представляют собой 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 3'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9 представляет собой 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот, расположенных на 5'-конце избранной последовательности целевого домена. В других вариантах осуществления 17, 18, 19 или 20, предпочтительно 20 последовательных нуклеиновых кислот любой из последовательностей целевого домена, описанных здесь, например, последовательностей целевого домена, представленных в Таблице 5, Таблице 6, Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9, не включают расположенную на 5'- или 3'-конце нуклеиновую кислоту избранной последовательности целевого домена.

Следующие аспекты описывают особенности молекулы gРНК, которые могут быть объединены с любым из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления молекула gРНК, включая молекулы gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, включает фрагмент crРНК и фрагмент tracr, гибридизующиеся с образованием шпильки, которая включает в себя SEQ ID NO: 6584 или 6585. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает в себя первое удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце по отношению к фрагменту crРНК шпильки, причем указанное первое удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6586. В вариантах осуществления шпилька дополнительно включает (в дополнение или в качестве альтернативы первому удлинение шпильки) второе удлинение шпильки, расположенное на 3'-конце фрагмента crРНК шпильки, и, при наличии первого удлинения шпильки, указанное второе удлинение шпильки включает в себя SEQ ID NO: 6587.

В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и варианты осуществления изобретения, tracr включает SEQ ID NO: 6660 или SEQ ID NO: 6661. В вариантах осуществления tracr включает SEQ ID NO: 7812, и необязательно дополнительно включает на 3'-конце добавочные 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловые (U) нуклеотидов. В вариантах осуществления crРНК включает в себя от 5’до 3', [целевой домен]-: а) SEQ ID NO: 6584; b) SEQ ID NO: 6585; c) SEQ ID NO: 6605; d) SEQ ID NO: 6606; e) SEQ ID NO: 6607; f) SEQ ID NO: 6608; или g) SEQ ID NO: 7806.

В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, tracr включает в себя от 5’до 3': а) SEQ ID NO: 6589; b) SEQ ID NO: 6590; c) SEQ ID NO: 6609; d) SEQ ID NO: 6610; e) SEQ ID NO: 6660; f) SEQ ID NO: 6661; g) SEQ ID NO: 7812; h) SEQ ID NO: 7807; i) SEQ ID NO: 7808; j) SEQ ID NO: 7809; k) любой из пунктов а)-j), приведённый выше, дополнительно включающий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов; l) любой из пунктов a)-k) приведённый выше, дополнительно включающий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или m) любой из пунктов a)-l), приведённых выше, дополнительно включающий 5'(т.е. на 5'-конце), по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов.

В вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновых кислот. В вариантах осуществления таких молекул gРНК молекула нуклеиновой кислоты, включающая целевой домен, включает SEQ ID NO: 6607, необязательно расположенную прямо на 3'-конце целевого домена, и молекулу нуклеиновой кислоты, включающую tracr, который включает, например, состоит из SEQ ID NO: 6660.

В вариантах осуществления фрагмент crРНК шпильки включает SEQ ID NO: 6607 или SEQ ID NO: 6608.

В вариантах осуществления tracr включает в себя SEQ ID NO: 6589 или 6590 и, необязательно, при наличии первого удлинения шпильки, первое удлинение tracr, расположенное на 5'-конце SEQ ID NO: 6589 или 6590, причем указанное первое удлинение tracr включает в себя SEQ ID NO: 6591.

В вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен и tracr расположены на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты. В других вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты, например, tracr расположен 3' по отношению к целевому домену.

В вариантах осуществления, когда целевой домен и tracr расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты, молекула gРНК дополнительно включает в себя петлю, расположенную 3' по отношению к целевому домену и 5' по отношению к tracr. В вариантах осуществления петля включает, например, состоит из SEQ ID NO: 6588.

В вариантах осуществления, когда целевой домен и tracr расположены на единственной молекуле нуклеиновой кислоты, молекула gРНК включает от 5’до 3', [целевой домен]-: (a) SEQ ID NO: 6601; (b) SEQ ID NO: 6602; (c) SEQ ID NO: 6603; (d) SEQ ID NO: 6604; (e) SEQ ID NO: 7811; или (f) любой из (а) - (е), приведённых выше, и дополнительно включает на 3'-конце 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов. В вариантах осуществления молекула gРНК включает, например, состоит из указанного целевого домена и SEQ ID NO: 7811, необязательно расположенной сразу на 3'-конце указанного целевого домена.

В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, каждый из нуклеотидов нуклеиновой кислоты молекулы gРНК представляет собой немодифицированный нуклеотид A, U, G или C нуклеиновой кислоты с немодифицированными фосфатными связями между каждым нуклеотидом молекулы нуклеиновой кислоты. В других вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, один или, необязательно, более одной молекул нуклеиновой кислоты, которые составляют молекулу gРНК, включают: а) одну или несколько, например, три фосфоротионатных модификации на 3’-конце указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; б) одну или несколько, например, три фосфоротионатных модификации на 5'-конце указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; c) одну или более, например, три 2’O-метил-модификации на 3'-конце молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты; d) одну или несколько, например, три 2’O-метил-модификации на 5'-конце молекулы или молекул нуклеиновой кислоты; e) 2'-О-метильную модификацию на каждом из перечисленных нуклеотидов 3'-конца указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты: 4ом-от конца, 3ем-от-конца, 2ом-от конца; f) 2'-О-метильную модификацию на каждом из перечисленных нуклеотидов 5'-конца указанной молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты: 4-от конца, 3-от-конца, 2-от конца; или f) любую их комбинацию.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 342; (b) SEQ ID NO: 343; или (c) SEQ ID NO: 1762 (упоминаемую в этом описании изобретения как вариант осуществления gРНК молекулы №41).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 344 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 344 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 345 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 345 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения как вариант осуществления молекулы gРНК №42).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 347; (b) SEQ ID NO: 348; или (c) SEQ ID NO: 1763 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №43).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 349 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 349 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 350 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 350 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №44).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 351; (b) SEQ ID NO: 352; или (c) SEQ ID NO: 1764 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №45).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 353 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 353 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 354 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 354 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №46).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (а) SEQ ID NO: 355; (b) SEQ ID NO: 356; или (c) SEQ ID NO: 1765 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №47).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 357 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 357 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 358 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 358 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №48).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 359; (b) SEQ ID NO: 360; или (c) SEQ ID NO: 1766 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №49).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 361 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 361 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 362 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 362 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №50).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 363; (b) SEQ ID NO: 364; или (c) SEQ ID NO: 1767 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №51).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 365 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 365 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 366 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 366 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №52).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 367; (b) SEQ ID NO: 368; или (c) SEQ ID NO: 1768 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №53).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 369 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 369 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 370 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 370 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №54).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 371; (b) SEQ ID NO: 372; или (c) SEQ ID NO: 1769 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №55).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 373 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 373 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 374 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 374 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №56).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 375; (b) SEQ ID NO: 376; или (c) SEQ ID NO: 1770 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №57).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 377 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 377 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 378 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 378 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №58).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 379; (b) SEQ ID NO: 380; или (c) SEQ ID NO: 1771 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №59).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 381 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 381 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 382 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 382 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №60).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 383; (b) SEQ ID NO: 384; или (c) SEQ ID NO: 1772 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №61).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, SEQ ID NO: 385 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 385 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 386 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 386 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №62).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (а) SEQ ID NO: 387; (b) SEQ ID NO: 388; или (c) SEQ ID NO: 1773 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №63).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 389 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, последовательность SEQ ID NO: 389 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 390 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 390 и tracr, включающий, например, состоящий из последовательности SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №64).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 391; (b) SEQ ID NO: 392; или (c) SEQ ID NO: 1774 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №65).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (a) crРНК, включающую, например, из SEQ ID NO: 393 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 393 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 394 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 394 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №66).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, молекулу sgРНК), включающую, например, состоящую из последовательности: (a) SEQ ID NO: 395; (b) SEQ ID NO: 396; или (c) SEQ ID NO: 1775 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №67).

В других предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулу gРНК (например, двойную молекулу gРНК), включающую, например, состоящую из: (а) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 397 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; (b) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 397 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346; (c) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 398 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 6660; или (d) crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO: 398 и tracr, включающий, например, состоящий из SEQ ID NO: 346 (упоминаемую в этом описании изобретения, как вариант осуществления молекулы gРНК №68).

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, причём такую, что когда система CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающая молекулу gРНК, вводится в клетку, формируется индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК. В вариантах осуществления, в том числе в вариантах осуществления, содержащих целевой домен, комплементарный целевой последовательности +58 области энхансера, индел не включает нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или TAL-1. В вариантах осуществления индел не мешает связыванию GATA-1 и/или TAL-1 с их сайтами связывания. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где, при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, формируется индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК, по меньшей мере, примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95%, например, по меньшей мере примерно в 96%, например, по меньшей мере примерно в 97%, например, по меньшей мере примерно в 98%, например, по меньшей мере примерно в 99% % клеток популяции. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, причём такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, индел, не включающий нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или TAL-1, образуется внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК, по меньшей мере, примерно в 20%, например, по меньшей мере примерно в 30%, например, по меньшей мере, около 35%, например, по меньшей мере примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 45%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 55%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 65%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 85%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95%, например, по меньшей мере примерно в 99%, клеток популяции. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, индел является инделом, указанным в любой из Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления, по меньшей мере, примерно в 30%, например, по меньшей мере примерно в 40%, например, по меньшей мере примерно в 50%, например, по меньшей мере примерно в 60%, например, по меньшей мере примерно в 70%, например, по меньшей мере примерно в 80%, например, по меньшей мере примерно в 90%, например, по меньшей мере примерно в 95% %, например, по меньшей мере примерно в 96%, например, по меньшей мере примерно в 97%, например, по меньшей мере примерно в 98%, например, по меньшей мере примерно в 99% клеток популяции, индел является инделом, указанным в любой из Фиг 25, Таблицы 15, Таблицы 26, Таблицы 27 или Таблицы 37. В вариантах осуществления три наиболее часто обнаруживаемых индела в упомянутой популяции клеток включают инделы, связанные с любой молекулой gРНК из перечисленных в любой из Фиг. 25, Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления индел (или профиль наиболее часто формируемых инделов) измеряется методами секвенирования следующего поколения (NGS), как, например, как описано в данном уровне техники. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, никаких инделов по неспецифичным сайтам узнавания не образуется в указанной клетке, по крайней мере тех, которые, могли бы быть обнаружены методами секвенирования следующего поколения и/или с помощью нуклеотидного инсерционного анализа, например, в клетке HPCS, например, клетке CD34+. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в популяцию клеток, инделов по неспецифичным сайтам узнавания не обнаруживается в более чем 5%, например, в более чем 1%, например, в более чем 0,1%, например, в более чем 0,01% клеток популяции при проверке методами секвенирования следующего поколения и/или при помощи нуклеотидного инсерционного анализа, как, например, при исследовании популяции клеток HPSC, например, популяции клеток CD34+.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, где, при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве, например, в её потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов. В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве, например, в её потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов, по меньшей мере, примерно на 20%, например, по меньшей мере примерно 30%, например, по меньшей мере примерно на 40%, например, по меньшей мере примерно на 50%, например, по меньшей мере примерно на 60%, например, по меньшей мере примерно на 70%, например, по меньшей мере примерно на 80%, например, по меньшей мере примерно на 90%, например, по меньшей мере примерно на 95% например, по меньшей мере примерно на 96%, например, по меньшей мере примерно на 97%, например, по меньшей мере примерно на 98%, например, по меньшей мере примерно на 99%. В вариантах осуществления указанная клетка или ее потомство, например, ее потомство эритроидов, например, её потомство эритроцитов, вырабатывает по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, уровни мРНК фетального гемоглобина (например, гамма-глобина) увеличиваются в указанной клетке или ее потомстве, например, в ее потомстве эритроидов, например, в её потомстве эритроцитов.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, экспрессия мРНК BCL11a уменьшается в указанной клетке или ее потомстве, например, в потомстве эритроидов, например, в потомстве эритроцитов. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, изобретение предоставляет молекулу gРНК, такую, что при введении системы CRISPR (например, RNP, как описано здесь), включающей молекулу gРНК, в клетку, уровни мРНК BCL11a уменьшаются в указанной клетке или ее потомстве, например, ее потомство эритроидов, например, его потомство эритроцитов.

В любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, которые упоминают клетку, клетка является клеткой млекопитающего, примата или человека (или популяция клеток включает таковые), например, представляет собой человеческую клетку или популяцию клеток человека. В вариантах осуществления клетка является HSPC, например, представляет собой CD34+, например, представляет собой CD34+CD90+ (или популяция клеток включает таковые). В вариантах осуществления клетка (или популяция клеток) является аутологичной по отношению к пациенту, которому будут вводить указанную клетку. В других вариантах осуществления клетка (или популяция клеток) является аллогенной по отношению к пациенту, которому будут вводить указанную клетку.

В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую: 1) одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК) описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и молекулу Cas9, например, как описано здесь; 2) одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9 (описанную здесь); 3) нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанных здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и молекулу Cas9 (описанную здесь); 4) нуклеиновую кислоту, кодирующая одну или несколько молекул gРНК (включая первую молекулу gРНК), описанную здесь, например, одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9 (описанную здесь); или 5) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4), и матричную нуклеиновую кислоту; или 6) ) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4 и нуклеиновую кислоту, включающую последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет композицию, включающей первую молекулу gРНК (например, описанную здесь, например, первую молекулу gРНК любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), дополнительно включающий молекулу Cas9 (описанную здесь).

В вариантах осуществления молекула Cas9 представляет собой активную или неактивную S.pyogenes Cas9.

В вариантах осуществления молекула Cas9 включает SEQ ID NO: 6611. В вариантах осуществления молекула Cas9 включает, например, состоит из: (a) SEQ ID NO: 7821; (b) SEQ ID NO: 7822; (c) SEQ ID NO: 7823; (d) SEQ ID NO: 7824; (e) SEQ ID NO: 7825; (f) SEQ ID NO: 7826; (g) SEQ ID NO: 7827; (h) SEQ ID NO: 7828; (i) SEQ ID NO: 7829; (j) SEQ ID NO: 7830; или (k) SEQ ID NO: 7831.

В предпочтительных вариантах осуществления первая молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).

В вариантах осуществления изобретение предоставляет композицию, например, композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления, дополнительно включающую в себя вторую молекулу gРНК; вторую молекулу gРНК и третью молекулу gРНК; или молекулу второй gРНК, и, необязательно, третью молекулу gРНК и, необязательно, четвертую молекулу gРНК, где вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК представляют собой молекулу gРНК молекулы gРНК, описанной здесь, например, молекулы gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, где каждая молекула gРНК композиции комплементарна различной целевой последовательности.

В вариантах осуществления с двумя и более молекулами gРНК, первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК комплементарны целевым последовательностям в пределах одного и того же гена или области. В вариантах осуществления первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК комплементарны целевым последовательностям, удалённым друг от друга, не более чем на чем на 20000 нуклеотидов, не более чем на 10000 нуклеотидов, не более чем на 6000, не более чем на 5000 нуклеотидов, не более чем на 4000, не более чем на 1000 нуклеотидов, не более чем на 500 нуклеотидов, не более чем на 400 нуклеотидов, не более чем на 300 нуклеотидов, не более чем на 200 нуклеотидов, не более чем на 100 нуклеотидов, не более чем на 90 нуклеотидов, не более чем на 80 нуклеотидов, не более чем на 70 нуклеотидов, не более чем на чем на 60 нуклеотидов, не более чем на 50 нуклеотидов, не более чем на 40 нуклеотидов, не более чем на 30 нуклеотидов, не более чем на 20 нуклеотидов или не более чем на 10 нуклеотидов.

В вариантах осуществления с двумя и более молекулами gРНК, первая молекула gРНК, вторая молекула gРНК, необязательная третья молекула gРНК и необязательная четвертая молекула gРНК являются комплементарными целевой последовательности в разных генах или областях.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:

(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням;

(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням;

c) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или

(d) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или

(e) независимо выбранными из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:

(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням; или

(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11, и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням-мишеням.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:

(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13 являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням; или

(b) независимо выбранными из молекул gРНК молекулы варианта осуществления молекулы gРНК №14 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК являются:

(a) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням;

(b) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням;

(c) независимо выбранными из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням; или

(d) независимо выбранными из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68 и являются комплементарными различным целевым последовательностям-мишеням.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, или (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56; а также

(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, или (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, или (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56 молекулы gРНК; а также

(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления композиции, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (а выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, (e) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56; и

(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18, или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, или (b), выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11; и

(2) вторая молекула gРНК является собой: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (б) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10 или (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11; и (2) вторая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18, или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14; а также

(2) вторая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, включающую первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК, где:

(1) первая молекула gРНК является: (a) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №16 gРНК, (b) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №17, (c) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №18 или (d) выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №57-68; и

(2) вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина; или

(1) первая молекула gРНК является: (а) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №4, (б) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №5, (с) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №6, (d) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №7, (e выбранной из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-56, (f) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №10, (g) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №11, (h), выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №13 или (i) выбранной из молекул gРНК варианта осуществления молекулы gРНК №14; и

(2) вторая молекула gРНК включает целевой домен, комплементарный целевой последовательности гена бета-глобина.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, изобретение предоставляет композицию, в которой первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК независимо выбраны из молекул gРНК любого из вариантов осуществления молекулы gРНК №41-68.

В вариантах осуществления композиции, по отношению к компонентам молекулы gРНК композиции, композиция состоит из первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК.

В вариантах осуществления композиции каждая из указанных молекул gРНК находится в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP) с молекулой Cas9, описанной здесь.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов её осуществления, изобретение предоставляет композицию, дополнительно включающую матричную нуклеиновую кислоту, где матричная нуклеиновая кислота включает нуклеотид, соответствующий нуклеотиду внутри или вблизи целевой последовательности первой gРНК молекулы. В вариантах осуществления матричная нуклеиновая кислота включает нуклеиновую кислоту, кодирующую: (а) ген бета-глобина человека, например ген бета-глобина человека, включающий одну или несколько мутаций G16D, E22A и T87Q или его фрагмент; или (b) ген гамма-глобина человека или его фрагмент.

В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов композиции и вариантов осуществления, композиция составлена в среде, подходящей для электропорации, например, подходящей для электропорации в клетки HSPC. В вариантах осуществления композиции, включающей одну или несколько молекул gРНК, каждая из указанных молекул gРНК находится в RNP с молекулой Cas9, описанной здесь, причём каждый из указанных RNP находится в концентрации менее чем примерно 10 мкМ, например, менее, чем примерно 3мкM, например, менее чем примерно 1 мкМ, например, менее чем примерно 0,5 мкМ, например, менее чем примерно 0,3 мкМ, например, менее чем примерно 0,1 мкМ.

В другом аспекте изобретение предоставляет последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует одну или несколько молекул gРНК, описанных здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей одну или более молекул gРНК, например, промотор, распознаваемый РНК-полимеразой II или РНК-полимеразой III, например, промотор U6 или промотор HI. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота дополнительно кодирует молекулу Cas9, например, описанную здесь, например, молекулу Cas9, включающую (например, состоящую из любой из) SEQ ID NO: 6611, SEQ ID NO: 7821, SEQ ID NO: 7822, SEQ ID NO: 7823, SEQ ID NO: 7824, SEQ ID NO: 7825, SEQ ID NO: 7826, SEQ ID NO: 7827, SEQ ID NO: 7828, SEQ ID NO: 7829, SEQ ID NO: 7830, или SEQ ID NO: 7831. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота включает промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей молекулу Cas9, например, промотор EF-1, промотор гена CMV IE, промотор EF-1, промотор гена убиквитина C или промотор фосфоглицераткиназы (PGK).

В другом аспекте изобретение предоставляет вектор, включающий нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления вектор выбирают из группы, состоящей из лентивирусного вектора, аденовирусного вектора, аденоассоциированного вирусного (AAV) вектора, вектора вируса простого герпеса (HSV), плазмиды, мини-кольца, наноплазмиды и РНК-вектора.

В другом аспекте изобретение предоставляет способ изменения клетки (например, популяции клеток), например, изменение структуры (например, последовательности нуклеиновой кислоты) внутри или вблизи целевой последовательности в указанной клетке, который включает контакт (например, при введении) указанной клетки (например, популяции клеток) с: 1) одной или несколькими молекулами gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК и молекулой Cas9 (например, описанной здесь); 2) одной или несколькими молекулами gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК и нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9 (например, описанную здесь); 3) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, и молекулой Cas9 (например, описанной здесь); 4) нуклеиновой кислотой, кодирующей одну или несколько молекул gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов молекулы gРНК, и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9 (например, описанную здесь); 5) любой из вышеперечисленных пунктов 1)-4) и матричной нуклеиновой кислотой; 6) любой из вышеперечисленных 1)-4) и нуклеиновой кислотой, включающей последовательность, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту; 7) композицией любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции; или 8) вектором любого из предыдущих векторных аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления gРНК молекула или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующую молекулу Cas9, составлены в виде одной композиции. В других вариантах осуществления gРНК молекула или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу gРНК и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующую молекулу Cas9, составлены более чем в одной композиции. В вариантах осуществления, включающих более одной композиции, композиции (более одной) доставляются одновременно или последовательно. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку животного, например, клетку млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку или клетку-предшественник (HSPC) (например, популяцию HSPC), например, клетку CD34+, например, клетку собой CD34+CD90+. В вариантах осуществления клетка находится в композиции, включающей популяцию клеток, обогащённую CD34+ клетками. В вариантах осуществления клетка (например, популяция клеток) выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови. В вариантах осуществления клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В других вариантах осуществления клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В вариантах осуществления этот способ приводит к образованию индела внутри или вблизи последовательности-мишени геномной ДНК, комплементарной целевому домена одной или нескольких молекул gРНК, например, индела, представленного на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индела, ассоциированного с целевым доменом молекулы gРНК, как показано на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления индел представляет собой инсерцию или делецию менее 40 нуклеотидов, например, менее 30 нуклеотидов, например, менее 20 нуклеотидов, например, менее 10 нуклеотидов, например, представляет собой делецию одного нуклеотида. В вариантах осуществления способ приводит к популяции клеток, в которой, по меньшей мере около 50%, например, по меньшей мере около 60%, например, по меньшей мере около 70%, например, по меньшей мере около 80%, например, по меньшей мере около 90% (например, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или, по меньшей мере около 99%) клеток популяции были изменены, например, включают индел. В вариантах осуществления способ (например, способ, выполненный на популяции клеток, описанный здесь) приводит к клетке (например, популяции клеток), способной дифференцироваться в дифференцированную клетку эритроидной линии (например, эритроцит), причём указанная дифференцированная клетка показывает повышенный уровень фетального гемоглобина относительно неизмененной клетки (например, популяции клеток). В вариантах осуществления этот способ приводит к популяции клеток, способных дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии (например, в популяцию эритроцитов), причём указанная популяция дифференцированных клетки имеет повышенную фракцию F-клеток (например, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30% или, по меньшей мере, примерно на 40% выше), например, по отношению к популяции неизмененных клеток. В вариантах осуществления способ приводит к клетке, способной дифференцироваться в дифференцированную клетку, например клетку эритроидной линии (например, эритроцит), где указанная дифференцированная клетка производит по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления способ выполняется ex vivo. В других вариантах осуществления способ выполняется in vivo.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, измененную способом изменения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления способа.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, полученную способом изменения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления способа.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетку, включающую первую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов и вариантов молекулы gРНК, или композицию, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов композиции и вариантов осуществления, нуклеиновая кислоту, например, описанную здесь, например, любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты или вектор, например, описанный здесь, например, любого из предыдущих векторных аспектов и вариантов осуществления. В вариантах осуществления клетка дополнительно включает молекулу Cas9, например, описанную здесь, например, молекулу Cas9, включающую, например, состоящую из любой из: SEQ ID NO: 6611, SEQ ID NO: 7821, SEQ ID NO: 7822, SEQ ID NO: 7823, SEQ ID NO: 7824, SEQ ID NO: 7825, SEQ ID NO: 7826, SEQ ID NO: 7827, SEQ ID NO: 7828, SEQ ID NO: 7829, SEQ ID NO: 7830 или SEQ ID NO: ID NO: 7831. В вариантах осуществления клетка включает в себя, включала или будет включать вторую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК или нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую молекулу gРНК, например, описанную здесь, например, по любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, где первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают неидентичные целевые домены. В вариантах осуществления экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве (например, в потомстве эритроидов, например, в потомстве эритроцитов) относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК, или ее потомства. В вариантах осуществления клетка способна дифференцироваться в дифференцированную клетку, например клетку эритроидной линии (например, эритроцит), причём указанная дифференцированная клетка показывает повышенный уровень фетального гемоглобина, например, относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК. В вариантах осуществления дифференцированная клетка (например, клетка эритроидной линии, например эритроцит) производит, по меньшей мере примерно 6 пикограмм (например, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, примерно от 8 до 9 пикограмм или примерно от 9 до 10 пикограмм) фетального гемоглобина, например, относительно клетки того же типа, не модифицированной включением gРНК. В вариантах осуществления клетка контактировала, например, ex vivo, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например, описанным здесь, например, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, представляющим собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, соединение 1 и соединение 4), например, с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, представленным Cоединением 4. В вариантах осуществления, включающих любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, клетка включает в себя индел внутри последовательности геномной ДНК или рядом с ней, комплементарной целевому домену введённой молекулы gРНК (как описано здесь, например, молекуле gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления), например, индел, указанный на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, представленный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, и ассоциированный с молекулой gРНК (как описано здесь, например, с молекулой gРНК любого из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления), представленной выше. В вариантах осуществления индел представляет собой инсерцию или делецию менее чем примерно 40 нуклеотидов, например, менее 30 нуклеотидов, например, менее 20 нуклеотидов, например, менее 10 нуклеотидов, и, например, индел представляет собой делецию одного нуклеотида. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является клеткой животного, например клетка является клеткой животного, например, млекопитающего, примата или человека. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является гемопоэтической стволовый клеткой или клеткой-предшественником (HSPC) (например, популяцией HSPC), например, клетка представляет собой клетку CD34+, например, клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка (например, популяция клеток) выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления клеток, клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В вариантах осуществления клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому необходимо ввести указанную клетку. В другом аспекте изобретение предоставляет популяцию клеток, включая клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 50%, например, по меньшей мере около 60%, например, по меньшей мере около 70%, например, по меньшей мере около 80%, например, по меньшей мере около 90% (например, по меньшей мере около 95%, при по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или, по меньшей мере около 99%) клеток популяции являются клетками, соответствующими любому из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления, популяция клеток способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, например, популяцию клеток эритроидной линии (например, популяцию эритроцитов), причём указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную долю F-клеток (например, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30% или, по меньшей мере, около 40% выше), чем, например, популяция немодифицированных клеток того же типа. В вариантах осуществления, F-клетки популяции дифференцированных клеток вырабатывают, по меньшей мере около 6 пикограмм (например, по меньшей мере около 7 пикограмм, по меньшей мере около 8 пикограмм, по меньшей мере около 9 пикограмм, по меньшей мере около 10 пикограмм или от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм) фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления популяция включает в себя: 1) по меньшей мере 1e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому должны вводить клетки; 2) по меньшей мере 2e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; 3) по меньшей мере 3e6 CD34+ клетки/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; 4) по меньшей мере 4e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки; или 5) от 2e6 до 10e6 CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо вводить клетки. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 40%, например, по меньшей мере около 50% (например, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80% или, по меньшей мере около 90%) клеток популяции являются клетками CD34+. В вариантах осуществления, по меньшей мере около 10%, например, по меньшей мере около 15%, например, по меньшей мере около 20%, например, по меньшей мере около 30% клеток популяции являются CD34+CD90+ клетками. В вариантах осуществления популяция клеток получена из костного мозга, периферической крови (например, мобилизованной периферической крови), пуповинной крови или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs). В предпочтительном варианте осуществления популяция клеток получена из костного мозга. В вариантах осуществления популяция клеток включает, или, например, состоит из клеток млекопитающего, например человека. В вариантах осуществления популяция клеток является аутологичной по отношению к пациенту, которому она должна быть введена. В других вариантах осуществления популяция клеток является аллогенной по отношению к пациенту, которому она должна быть введена.

В другом аспекте изобретение предоставляет композицию, включающую в себя клетку любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, или популяцию клеток любой из предыдущих популяций аспектов и вариантов осуществления клеток. В вариантах осуществления композиция включает фармацевтически приемлемую среду, например, фармацевтически приемлемую среду, подходящую для криоконсервации.

В другом аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, включающий введение пациенту клетки любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, популяцию клеток любой из предыдущих популяций клеточных аспектов и вариантов осуществления или композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции. В вариантах осуществления гемоглобинопатия представляет собой талассемию, например, бета-талассемию или серповидноклеточную анемию.

В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, включающий введение пациенту клетки любого из предшествующих клеточных аспектов и вариантов осуществления, популяцию клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяций клеток, или композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции.

В другом аспекте изобретение предоставляет способ получения клетки (например, популяции клеток), включающий: (a) предоставление клетки (например, популяции клеток) (например, HSPC (например, популяции HSPC)); (b) культивирование указанной клетки (например, указанной популяции клеток) ex vivo в клеточной среде для культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток; и (c) введение в указанную клетку первой молекулы gРНК (например, описанной здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей первую молекулу gРНК (например, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК), композицию (например, описанную здесь, например, композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции), нуклеиновую кислоту (например, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты) или вектор (например, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора). В вариантах осуществления указанного способа после проведения стадии (с) указанная клетка (например, популяция клеток) способна дифференцироваться в дифференцированную клетку (например, популяцию дифференцированных клеток), например клетку эритроидной линии (например, в популяцию клеток эритроидного происхождения), например, в эритроциты (например, в популяцию эритроцитов), причём указанная дифференцированная клетка (например, популяция дифференцированных клеток) приводит к увеличению фетального гемоглобина, например, по отношению к тем же клеткам, которые не проходили стадии (с). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1, Соединение 2, Соединение 3, Соединение 4 или их комбинацию (например, Соединение 1 и Соединение 4), например, представляет собой Соединение 4. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, среда для культивирования клеток включает в себя тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L) и человеческий фактор роста стволовых клеток (SCF). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, среда для культивирования клеток дополнительно включает человеческий интерлейкин-6 (IL-6). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов способа, среда для культивирования клеток включает в себя тромбопоэтин (Tpo), лиганд Flt3 (Flt-3L) и фактор стволовых клеток человека (SCF) каждый в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, каждый в концентрации около 50 нг/мл, например, в концентрации 50 нг/мл. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, среда для культивирования клеток включает человеческий интерлейкин-6 (IL-6) в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, при концентрация около 50 нг/мл. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, среда для культивирования клеток включает в себя соединение, в концентрации от примерно 1 нМ до примерно 1 мМ, например, в концентрации от примерно 1 мкМ до примерно 100 мкМ, например, в концентрации от примерно 50 мкМ до примерно 75 мкМ, например, в концентрации примерно 50 мкМ, например, в концентрации точно 50 мкМ или в концентрации около 75 мкМ, например, в концентрации точно 75 мкМ. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, культивирование на стадии (b) включает период культивирования до проведения стадии (с), например, период культивирования до проведения стадии (с) составляет, по меньшей мере, 12 часов, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 3 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение примерно 2 дней. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов способа, культивирование на стадии (b) включает период культивирования после проведения стадии (с), например, период культивирования после проведения стадии (с) составляет, по меньшей мере, 12 часов, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение примерно 2 дней или в течение примерно 3 дней или в течение примерно 4 дней. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, популяция клеток увеличивается, по меньшей мере, в 4 раза, например, по меньшей мере в 5 раз, например, по меньшей мере в 10 раз, например, по отношению к клеткам, которые не подвергаются культивации согласно стадии (b). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, введение этапа (с) включает в себя электропорацию, например, электропорацию, включающую в себя от 1 до 5 импульсов, например, 1 импульс, причем каждый импульс даётся при напряжении от 700 вольт до 2000 вольт при длительности импульса от 10 мс до 100 мс. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, электропорация включает, например, 1 импульс. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, импульсное напряжение составляет от 1500 до 1900 вольт, например, составляет 1700 вольт. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, длительность импульса составляет от 10 мс до 40 мс, например, 20 мс. В вариантах осуществления, включая любой из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), представляет собой человеческую клетку (например, популяцию клеток человека). В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления способа, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), выделена из костного мозга, периферической крови (например, мобилизованной периферической крови), пуповинной крови или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC), предпочтительно костного мозга. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, клетка (например, популяция клеток), представленная на стадии (а), выделена из костного мозга, например, выделена из костного мозга пациента, страдающего гемоглобинопатией. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления, популяция клеток, представленных на этапе (а), обогащена клетками HSPC, например, CD34+ клетками. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, после проведения стадии (с), способствующей экспансии стволовых клеток, клетка (например, популяция клеток) подвергается криоконсервации. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов и вариантов осуществления изобретения, после проведения стадии (с) клетка (например, популяция клеток) включает в себя индел внутри или вблизи последовательности геномной ДНК, комплементарной целевому домену первой молекулы gРНК, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, как соответствующий первой молекуле gРНК. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых аспектов способа и вариантов осуществления, после проведения стадии (с), по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или по меньшей мере около 99% клеток популяции клеток включают индел в последовательности геномной ДНК или вблизи нее, комплементарный целевому домену первой молекулы gРНК, например, индел, указанный на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, например, индел, указанный на Фигуре 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, как соответствующий первой молекуле gРНК.

В другом аспекте изобретение предоставляет клетку (например, популяцию клеток), полученную способом получения клетки любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления. В другом аспекте изобретение предоставляет способ лечения гемоглобинопатии (например, талассемии (например, бета-талассемии) или серповидно-клеточной анемии, включающий введение пациенту-человеку композиции, включающей указанную клетку (например, популяцию клеток). В другом аспекте изобретение предоставляет способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у пациента-человека, включающий введение указанному пациенту-человеку композиции, включающей указанную клетку (например, популяцию клеток). В вариантах осуществления пациенту-человеку вводят композицию, включающую по меньшей мере примерно 1е6 клеток (например, клетки CD34+, например клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела пациента, например, по меньшей мере около 1e6 CD34+ клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента. В вариантах осуществления пациенту-человеку вводится композиция, включающая по меньшей мере примерно 2е6 клеток (например, клетки CD34+, например, клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела пациента, например, по меньшей мере около 2e6 CD34+ например клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента. В вариантах осуществления пациенту-человеку вводится композиция, включающая от примерно 2e6 до примерно 10e6 клеток (например, клетки CD34+, например, клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления) на кг массы тела человека например, по меньшей мере от примерно 2e6 до примерно 10e6 CD34+ клеток, полученных способом получения клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления на кг массы тела пациента.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, описанную здесь нуклеиновую кислоту, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток, для использования в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток, для использования при изготовлении лекарственного средства.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток для использования при лечении заболевания.

В другом аспекте изобретение предоставляет молекулу gРНК, описанную здесь, например, молекулу gРНК любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления молекулы gРНК, композицию, описанную здесь, например композицию любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления композиции, нуклеиновую кислоту, описанную здесь, например, нуклеиновую кислоту любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления нуклеиновой кислоты, вектор, описанный здесь, например, вектор любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления вектора, клетку, описанную здесь, например, клетку любого из предыдущих аспектов и вариантов осуществления клетки или популяцию клеток, описанную здесь, например, популяцию клеток любой из предыдущих аспектов и вариантов осуществления популяции клеток для использования при лечении заболевания, где заболевание представляет собой гемоглобинопатию, например талассемию (например, бета-талассемию) или серповидно-клеточную анемию.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1. Редактирование Cas9 в области +58 эритроидного энхансера Bcl11a. Фракция редактирования, обнаруженная способом NGS в HEK-293 Cas9GFP, 24-часа после доставки crРНК, нацеленной на область энхансера +58 и trРНК путем липофекции. Каждая точка указывает на различную crРНК, trРНК сохранялась постоянной. Геномные координаты указывают местоположение на хромосоме 2, например, в отношении hg38. (n=1)

Фиг. 2: Редактирование Cas9 в области +62 эритроидного энхансера Bcl11a. Фракция редактирования, обнаруженная способом NGS в HEK-293 Cas9GFP, через 24 часа после доставки crРНК, нацеленной на область +62 энхансера и trРНК путем липофекции. Каждая точка указывает на различную crРНК, trРНК сохранялась постоянной. Геномные координаты указывают местоположение на хромосоме 2, например, в отношении hg38. (n=1).

Фиг. 3. Стратегия гейтинга для сортировки клеток после введения системы редактирования Cas9.

Фиг. 4. Электрофорез в агарозном геле фрагментов генов из обработанных системой редактирования Cas9 CD34+ клеток (показаны как CD34+CD90+, так и CD34+CD90- популяции клеток вместе с контрольными несортированными клетками). Верхняя полоса представляет собой нерасщепленную гомодуплексную ДНК, а нижние полосы указывают на продукты расщепления гетеродуплексной ДНК. Крайняя левая полоса является ДНК-маркером. Интенсивность полосы была рассчитана путем интеграции пиков необработанных изображений с помощью программы ImageJ. % генной модификации (индел) рассчитан следующим образом: %модификации гена=100 х (1-(расщепление 1 фракцией)^1\2) и указан ниже каждой соответствующей полосы геля.

Фиг. 5. Область эритроидного энхансера, показывающая сайты геномной ДНК, на которые нацелены молекулы sgРНК, содержащие целевые домены, комплементарные подчеркнутым нуклеотидам. Фигура раскрывает SEQ ID NO: 2841.

Фиг. 6A/6B. Результаты NGS, показывающие инделы, сформированные sgEH1 (CR00276)(A) или sgEH2 (CR00275)(B) в клетках CD34+ HSC. Инсерции обозначены заглавными буквами. Делеции обозначены пунктирной линией. Области микрогомологии вблизи места разрыва подчернуты толстой линией. Фигура 6A раскрывает SEQ ID NOS 2842-2854, Фигура 6B раскрывает SEQ ID NOS 2855-2867, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 6C/6D. Результаты NGS, показывающие инделы, сформированные sgEH8 (CR00273)(C) или sgEH9 (CR00277)(D) в клетках CD34+ HSC. Инсерции обозначены заглавными буквами. Делеции обозначены пунктирной линией. Области микрогомологии вблизи места разрыва подчернуты толстой линией. Фигура 6С раскрывает SEQ ID NOS 2868-2880, Фигура 6D раскрывает SEQ ID NOS 2881-2893, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 7. Результаты NGS и формирование профиля инделов у нескольких доноров для g7, g8 и g2. Последовательности превалирующих 3 инделов по двум экспериментам, являющихся биологическими репликами, с использованием g7 и g8 были идентичны, а последовательность превалирующих 3 инделов с использованием g2 идентична последовательности предыдущего эксперимента. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2894-2911, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 8. Результаты NGS и формирование профиля инделов при применении модифицированной в области каркаса (области связывания с белком Cas9) gРНК последовательности (BC). Последовательности 3 (трёх) наиболее часто образующихся инделов этих экспериментов идентичны последовательностям, образующихся при использовании gРНК со стандартным каркасом. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2912-2921, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 9. Сравнение взаиморасположения инделов при разных методах доставки. AVG% является % NGS считываний, демонстрирующих указанный индел (усереднённое значение 2 экспериментов). Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2922-2946, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 10. Образование индела путем совместного введения g7 gРНК и g8 gРНК либо с областью шпильки без удлинения («reg»), либо с первым удлинением шпильки и первым удлинением tracr («BC»). Последовательности PAM для обоих gРНК заключены в «коробку». Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2947-2955, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 11: Наиболее эффективные последовательности gРНК, нацеленные на +58 область энхансера гена BCL11a в клетках CD34+, как измерено NGS (n=3).

Фиг. 12: Наиболее эффективные последовательности gРНК, нацеленные на +62 область энхансера гена BCL11a в клетках CD34+, как измерено NGS (n=3).

Фиг. 13: Предсказанные размеры вырезаемого участка, при введении 2 (двух) молекул gРНК, нацеленных на +62 область энхансера гена BCL11a, в клетки HEK293_Cas9, причём либо CR00187 (светло-серые полосы), либо CR00202 (темно-серые полосы) постоянны и совместно вводятся в клетки со второй молекулой gРНК, включающей указанный целевой домен.

Фиг. 14: Делеция геномной ДНК в области +62 энхансера BCL11a при добавлении молекул gРНК, включающих целевой домен CR00187 и второй молекулы gРНК, указанной на графике. Знак (*) обозначают делецию, наблюдаемую с частотой 30%; знак (^) указывает на делецию, наблюдаемую с более низкой частотой (<30%). Предсказанные продукты вырезания, приводящие к фрагментам менее 50 нп, не могли быть определены.

Фиг. 15: Делеция геномной ДНК в +62 области энхансера BCL11a при добавлении молекулы gРНК, включающую целевой домен CR00202 и второй молекулы gРНК, указанной на графике. Знак (*) обозначают делецию, наблюдаемую с частотой 30%; знак (^) указывает на делецию, наблюдаемую с более низкой частотой (<30%).

Фиг. 16: % образования инделов молекулами 192 gРНК, нацеленными на область HPFH Френча ((Sankaran VG et al. A functional element necessary for fetal hemoglobin silencing. NEJM (2011) 365:807-814.)

Фиг. 17. Экспериментальная схема доставки Cas9/gРНК рибонуклеопротеина (Cas9-RNP) в первичные человеческие CD34+ HSPC клетки для редактирования генома с последующей генетической и фенотипической характеристикой.

Фиг. 18. Жизнеспособность клеток после “ложной” (обозначена как Моск) (контрольной) электропорации или электропорации комплексов Cas9-RNP в CD34+HSPC. HSPC подвергали экспансии in vitro в течение 48 часов после электропорации комплексов RNP, при этом наблюдали за жизнеспособностью клеток и определяли процент жизнеспособности. Названия gРНКs, используемых для создания комплексов RNP, показаны по оси Х и соответствующие значения жизнеспособности клеток-по оси y. Идентификатор CRxxxx указывает целевой домен молекулы gРНК.

Фиг. 19. Обнаружение несоответствия при помощи метода анализа с помощью эндонуклеазы T7. HSC человека были электропорированы для доставки комплексов RNP для введения инделов в +58 DHS-область эритроидного энхансера BCL11A путем NHEJ (негомологичного соединения концов). ПЦР-ампликоны, охватывающие целевую область, анализировали T7E1-методом и полученные фрагменты анализировали с помощью электрофореза в 2%-ном агарозном геле. Области +58 эритроидного энхансера BCL11A были поражены обоими типами gРНК (как двойной нацеливающей gРНК, так и одиночной нацеливающей (двойная нацеливающая РНК показана черным, одиночная нацеливающая РНК-серым цветом (на нижнем графике g7BCL11a-BC (1) и g7BCL11A-BC (2) на верхнем графике)). Интенсивность полос ДНК оценивалась программой ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/) для определения процента отредактированных аллелей. Названия используемых gРНК и соответствующая им эффективность в редактировании гена, определяемая путём обнаружения неспаренных оснований, также показаны в Таблице ниже изображения геля.

Фиг. 20: Процент отредактированных аллелей, определённый секвенированием следующего поколения NGS. Обозначения соответствуют описанным на Фиг. 18 и 19.

Фиг. 21. Анализ выделения колониеобразующих единиц (КОЕ), показывающий количество колоний и типы колоний, наблюдаемых для пяти выбранных gРНК. Геном-отредактированные клетки HSPC, отредактированные по области +58 эритроидного энхансера, были перенесены на метилцеллюлозу, а образованные колонии классифицировали и подсчитывали по количеству и типам зрелых клеток с использованием морфологических и фенотипических критериев с использованием STEMvision. Колонии были классифицированы на колониеобразующие единицы-эритроиды (КОЕ-Э), бурст-образующие единицы (предшественники эритроидов)-(БОЕ-Э), колониеобразующие единицы-гранулоциты/макрофаги (КОЕ-ГМ) и колониеобразующие единицы-гранулоцит/эритроцит/макрофаг/мегакариоцит (КОЕ-ГЕММ).

Фиг. 22. Кинетика деления клеток при эритроидной дифференцировке. Общее количество клеток, определяемых в день 0, 7, 14 и 21 при эритроидной дифференцировке и расчёт кратности экспансии клеток.

Фиг. 23. Уровни мРНК BCL11A, гамма и бета-глобина в отредактированном геноме эритроидных дифференцированных HSC. Относительная экспрессия мРНК BCL11A, гамма- и бета-глобиновых цепей в культурах мультилинейных эритроидных клеток была количественно определена с помощью ПЦР в реальном времени. Уровни транскрипции были нормализованы по отношению к уровням транскрипции человеческого гена GAPDH.

Фиг. 24A. Эффективное редактирование генома HSC при использовании двойной нацеливающей gРНК/Сas9 системы для разрушения энхансера BCL11a (+58), приводит к высоким уровням индукции HbF. Клетки HSC через 48 часов после электропорации подвергали in vitro эритроидной дифференцировке с измерением экспрессии HbF. Процент HbF-положительных клеток (F-клеток) определяли анализом FACS на 7, 14 и 21 день. Данные, показанные на этой Фигуре, были получены с помощью систем dgРНК, где dgРНК включала указанный целевой домен.

Фиг. 24B. Эффективное редактирование генома HSC при использовании sgРНК/Сas9 системы для разрушения энхансера BCL11a (+58), приводит к высоким уровням индукции HbF. Клетки HSC через 48 часов после электропорации подвергали in vitro эритроидной дифференцировке с измерением экспрессии HbF. Процент HbF-положительных клеток (F-клеток) определяли анализом FACS на 7, 14 и 21 день. Данные, показанные на этом Фигуре, были получены с помощью систем sgРНК, где sgРНК включала указанный целевой домен.

Фиг. 25: Профиль инделов, сформированных в клетках HSPC при использовании gРНКs, включающих указанный целевой домен. Фигура раскрывает SEQ ID NOS 2956-2968, соответственно, в порядке появления.

Фиг. 26A: Фенотипирование отредактированных и нередактированных культур в CD34+ среде для экспансии клеток путем окрашивания маркеров клеточной поверхности. Все тестированные молекулы gРНК были использованы в dgРНК-формате. Используемый Tracr представляет собой SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат и последовательность с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2003), где N являются (нуклеотидными) остатками указанного целевого домена. Показаны репрезентативные точечные диаграммы, показывающие флуоресценцию клеток, окрашенных при применении панели антител, или соответствующего контроля изотипа, как описано в Материалах и Методах. Показанные клетки были предварительно выбраны из жизнеспособной популяции клеток с помощью свойств прямого и бокового рассеяния и DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). Процент каждой клеточной популяции, указанной в верхней части графика, определялся выбранной для анализа областью (гейтом), обозначенным заштрихованной областью.

Фиг. 26B: Фенотипирование отредактированных и нередактированных культур в CD34+ питательной среде для экспансии путем окрашивания маркеров клеточной поверхности. Все молекулы gРНК тестировались в dgРНК-формате. Используемый Tracr представляет собой SEQ ID NO: 7808, а crРНК имеет следующие структуру и последовательность с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2004), где N являются остатками указанного целевого домена. Показан процент каждой указанной популяции клеток в отредактированных и нередактированных культурах. Целевой домен отредактированных культур таков, как обозначен.

Фиг. 27. % F-клеток эритроцитов, дифференцировавшихся из популяций клеток CD34+, отредактированных с помощью RNP, содержащих dgРНК, нацеленные на два сайта в области HPFH. «g2» является положительным контролем (целевой домен кодирующей области гена BCL11a); «Cntrl»-отрицательным контролем (при введении только Cas9).

Фиг. 28A. % редактирование, определяемое NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащей указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). Контроли включают dgРНК, включающую немодифицированный (CR00317-m) целевой домен CR00317, или электропорацию только в буфере (без Cas9 или gРНК; “ложная» или Mock).

Фиг. 28Б. % редактирования, определённый NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). Контроли включают электропорацию только в буфере (без Cas9 или gРНК, “ложная» или Mock).

Фиг. 29. % редактирования, определённый NGS в CD34+ HSPC на 2-й день после электропорации RNP, содержащим указанную sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). В каждом случае номер соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например, Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312). Контроль включает электропорацию только белка Cas9 («Cas9»), электропорацию только с буфером (“ложная» или Mock) или без электропорации (None).

Фиг. 30A. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включают электропорацию только в буфере (“ложная» или Mock).

Фиг. 30B. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную dgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включают электропорацию только в буфере (“ложная» или Mock).

Фиг. 31. Нормализованный % эритроцитов (за вычетом % F клеток в «Ложной»), являющихся HbF+ после электропорации CD34+ HSPC с RNP, включающим указанную sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано). В каждом случае номер соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например, Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312), и индуцированных к дифференцировке в культуре в среде, способствующей дифференцировке эритроидов. Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и только tracr («Cas9+ TracRNA only»), электропорацию только с буфером («только клетки+ импульс»/Cells only+impulse) или без электропорации («Cells only no impulse»).

Фиг. 32. Кратность полной экспансии клеток CD34+ в культуре на 14-й день после эритроидной дифференцировки после электропорации RNP, содержащим указанную sgРНК (в каждом случае число соответствует идентификатору CRxxxxxx целевого домена, например Unmod sg312 относится к немодифицированной sgРНК, содержащей целевой домен CR00312). Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и только tracr (только «Cas9+ TracRNA»), электропорацию только с буфером («только клетки+ импульс/Cells only+impulse») или без электропорации («Клетки без импульса»/«Cells only no impulse»).

Фиг. 33. Оценка потенциальных участков неспецифичных разрывов, расщепляемых Cas9, направленной молекулами dgРНК, нацеленными на область энхансера BCL11a. Треугольники представляют собой сайт на целевом участке, в то время как окружности представляют собой потенциальные неспецифичные сайты для каждой тестируемой gРНК.

Фиг. 34. Эффективность редактирования в целевом локусе B2M в CD34+ гематопоэтических стволовых клетках при различных вариантах Cas9 по результатам NGS секвенирования и проточной цитометрии. NLS=SV40 NLS; His6 или His8 относится к 6 или 8 остаткам гистидина, соответственно (SEQ ID NOS 2969 и 2670, соответственно); TEV=сайт расщепления вируса табачной мозаики; Cas9=дикий тип S. pyogenes Cas9, мутации или варианты указаны, как обозначено).

Фиг. 35. Данные показывают кратность увеличения числа клеток после 10 дней культивирования в питательной среде, способствующей экспансии (3 дня культивирования до электропорации и 7 дней культивирования после электропорации). При тестировании всех нацеливающих РНК, включая как одиночные, так и двойные форматы нацеливающих РНК, экспансия клеток варьировалось от 2 до 7 раз. CR00312 и CR001128, обозначенные стрелками, показали увеличение в 3-6 раз после 10 дней экспансии клеток. Обозначения «Crxxxx» относятся к dgРНК, имеющей указанный целевой домен; «Sgxxxx» относятся к sgРНК, имеющей целевой домен идентификатора CRxxxxx с тем же номером (например, sg312 имеет целевой домен CR00312); «Unmod» указывает на отсутствие изменений в РНК(-ах); «O'MePS» при использовании по отношению к dgРНК относится к crРНК, которая имеет три 3’и три 5' модификации 2’OMe и фосфоротиоатные связи, в сочетании с немодифицированным tracr; «O'MePS», при использовании в отношении sgРНК, относится к gРНК, которая имеет три 5'-концевые модификации 2’OMe и фосфоротиоатные связи и три 3'-концевые фосфоротиоатные связи и три модификации 2'O-Me 4ого от 3'-конца, 3-его от 3'-конца и 2ого-от 3'-конца-нуклеотидов.

Фиг. 36. Гэйтинг-стратегия для выделения различных субпопуляций HSPC.

Фиг. 37. Частота каждого гематопоэтической субкультуры после 48 часов ex vivo культуры в указанной питательной среде (STF с добавлением IL6, Cоединения 4 или обоих: IL6 и Cоединения 4), но до электропорации системы CRISPR. STF=StemSpan SFEM.

Фиг. 38. Частота каждой гематопоэтической субкультуры через 7 дней после электропорации/введения системы CRISPR, нацеленной на область +58 энхансера BCL11a, культивированных в указанной среде (STF, с добавлением IL6, Cоединения 4 или обоих: IL6 и Cоединения 4). STF=StemSpan SFEM.

Фиг. 39A. Жизнеспособность клеток при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, при этом RNP содержит dgРНКs, нацеленные на область +58.

Фиг. 39B. Жизнеспособность клеток при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, при этом RNP содержит sgРНКs, нацеленные на область +58.

Фиг. 40A. Эффективность редактирования гена, измеренная NGS секвенированием при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим dgРНКs, нацеленные на область+58.

Фиг. 40B Эффективность редактирования гена, измеренная NGS секвенированием при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим sgРНКs, нацеленные на область+58.

Фиг. 41A. Процент индукции HbF, измеренный проточной цитометрией при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим dgРНКs, нацеленные на область+58.

Фиг. 41B. Процент индукции HbF, измеренный проточной цитометрией при редактировании генов с использованием различных концентраций RNP, с RNP, содержащим sgРНКs, нацеленные на область+58.

Фиг. 42A. Эффективность редактирования гена при использовании RNP с различными белками Cas9. Редактирование гена выполнялось с использованием различных вариантов Cas9 (перечисленных на оси X) в сочетании с либо немодифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128, либо с модифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128. Отредактированные клетки были исследованы методом NGS для определения % редактирования (ось Y).

Фиг. 42B. Индукция клеток HbF+ при редактировании гена с использованием различных белков Cas9. Редактирование гена выполнялось с использованием различных вариантов Cas9 (перечисленных на оси X) в сочетании как с немодифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128, так и с модифицированной версией sgРНК CR00312 и sgРНК CR001128. Отредактированные клетки были дифференцированы в эритроидную линию и результирующие HbF определялись с помощью проточной цитометрии с использованием антитела против HbF, конъюгированного с флуорофором.

Фиг. 43. % редактирования, как определено NGS в CD34+ HSPC, при электропорации RNP, содержащим указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36). Редактирование определяли через 2 дня (черные полосы) или 6 дней (серые полосы) после электропорации. Менее 1,5% редактирования было обнаружено на каждом сайте после контрольной электропорации только белка Cas9 и Tracr («None», данные не показаны). Показано среднее+ стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 44. Процент жизнеспособных клеток, представляющих собой CD71+ после электропорации в CD34+ HSPC RNP, содержащие указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 7 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколом 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None», данные не показаны). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 45. Процент эритроидных клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 7 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию только белка Cas9 и Tracr («None»). Показан среднее+ стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 46. Процент клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 14 дней. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 47. Процент эритроидных клеток, которые являются HbF+ после электропорации в CD34+ HSPCs RNP, и содержат указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36) и культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов в течение 21 дня. После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 1 (черные полосы) или по Протоколу 2 (серые полосы), как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 48. Кратность общей экспансии клеток культивируемых в условиях дифференцировки эритроидов на 7 (черные полосы) или 21 день (черные полосы) после электропорации CD34+ HSPCs RNP, содержащие указанную dgРНК или sgРНК (немодифицированную или модифицированную, как указано) (обозначения относятся к последовательностям gРНК, как указано в Таблице 36). После электропорации клетки поддерживались по Протоколу 2, как описано в примере 4.7. Контроли включает электропорацию белка Cas9 и только Tracr («None»). Показано среднее стандартное отклонение по 2 электропорациям-репликам.

Фиг. 49. Оценка потенциальных неспецифичных участков, расщепленных Cas9, направленной молекулами dgРНК, нацеленными на область HPFH. Треугольники обозначают специфичные сайты на целевом участке, в то время как окружности представляют собой потенциальные неспецифичные сайты для каждой тестируемой gРНК.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Термины «система «CRISPR», «система Cas» или «система CRISPR/Cas» относятся к набору молекул, содержащему РНК-управляемую нуклеазу или другую эффекторную молекулу, и молекулу gРНК, которые вместе являются необходимыми и достаточными для обеспечения направленной модификации нуклеиновой кислоты в целевой последовательности с помощью РНК-направляемой нуклеазы или другой эффекторной молекулы. В одном варианте осуществления система CRISPR содержит gРНК и белок Cas, например белок Cas9. Такие системы, содержащие молекулу Cas9 или модифицированную молекулу Cas9, называются здесь «системами Cas9» или «системами CRISPR/Cas9». В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Cas могут быть скомбинированы с образованием рибонуклеопротеинового комплекса (RNP).

Термины «направляющая РНК», «направляющая молекула РНК», «молекула gРНК» или «gРНК» используются взаимозаменяемо и относятся к набору молекул нуклеиновой кислоты, с определёнными указаниями, способствующими доставке РНК-управляемой нуклеазы или другой эффекторной молекулы (как правило, в комплексе с молекулой gРНК) к целевой последовательности. В некоторых вариантах осуществления указанное нацеливание осуществляют посредством гибридизации части gРНК с ДНК (например, по целевому домену gРНК), и путем связывания части молекулы gРНК с РНК-управляемой нуклеазой или другой эффекторной молекулой (например, по крайней мере, с помощью gРНК tracr). В вариантах осуществления молекула gРНК состоит из единственной непрерывной молекулы полинуклеотида, называемой здесь как «одиночная нацеливающая РНК» или «sgРНК» и тому подобное. В других вариантах осуществления молекула gРНК состоит из множества, обычно двух, полинуклеотидных молекул, которые сами по себе могут соединяться, как правило, посредством гибридизации, называемой здесь «двойной нацеливающей РНК» или «dgРНК», и тому подобное. Молекулы gРНК описаны более подробно ниже, но в общем случае включают целевой домен и tracr. В вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на одном полинуклеотиде. В других вариантах осуществления целевой домен и tracr расположены на отдельных полинуклеотидах.

Термин «целевой домен» в качестве термина используется в связи с gРНК и является частью молекулы gРНК, которая распознаёт, например, будучи комплементарной, целевую последовательность-мишень, например, целевую последовательность-мишень (далее-«целевая последовательность») в нуклеиновой кислоте клетки, например, внутри гена.

Термин «crРНК» в качестве термина используется в связи с молекулой gРНК, которая представляет собой часть молекулы gРНК, содержащую целевой домен и область, взаимодействующую с tracr для формирования шпильки.

Термин «целевая последовательность» относится к последовательности нуклеиновых кислот, комплементарной, например, полностью комплементарной, целевому домену gРНК. В вариантах осуществления целевая последовательность-мишень расположена на геномной ДНК. В варианте осуществления целевая последовательность прилегает к (находится на той же цепи, либо на комплементарной цепи ДНК) последовательности PAM (protospacer adjacent motif), распознаваемой белком с нуклеазной или другой эффекторной активностью, например, прилегает к последовательности PAM, распознаваемой Cas9, В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность внутри гена или локуса, влияющая на экспрессию гена глобина, например, на экспрессию бета-глобина или фетального гемоглобина (HbF). В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в локусе глобина. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в гене BCL11a. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в области энхансера BCL11a. В вариантах осуществления целевая последовательность представляет собой целевую последовательность в области HPFH.

Термин «шпилька», используемый здесь всвязи с молекулой gРНК, относится к части gРНК, где crРНК и tracr связываются, или гибридизуются друг с другом.

Термин «tracr», используемый здесь в связи с молекулой gРНК, относится к части gРНК, которая связывается с нуклеазой или другой эффекторной молекулой. В вариантах осуществления tracr включает последовательность нуклеиновой кислоты, которая специфически связывается с Cas9. В вариантах осуществления tracr содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая формирует часть шпильки.

Термины «Cas9» или «молекула Cas9» относятся к ферменту бактериальной системы типа II CRISPR/Cas, ответственной за расщепление ДНК. Cas9 также включает белок дикого типа, а также его функциональные и нефункциональные мутанты. В вариантах осуществления Cas9 представляет собой Cas9 of S. pyogenes.

Термин «комплементарный», используемый в связи с нуклеиновой кислотой, относится к спариванию оснований A с T или U и G с C. Термин «комплементарный» относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые являются полностью комплементарными, то есть образует пары A-T (или U) и пары G-C по всей указанной последовательности, а также к молекулам, которые по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 99% комплементарны.

Термин «матричная нуклеиновая кислота» используется в связи с репарацией, обусловленной гомологией, или по типу гомологичной рекомбинации, относится к нуклеиновой кислоте, встраиваемой в место модификации системой CRISPR как донорная последовательность для репарации гена (инсерции) в месте разрыва.

Термин «индел», используемый здесь, относится к нуклеиновой кислоте, содержащей одну или несколько вставок нуклеотидов, одну или несколько делеций нуклеотидов или комбинацию вставок и делеций нуклеотидов относительно эталонной нуклеиновой кислоты, образующийся как результат действия композиции, содержащей молекулу gРНК, например, системы CRISPR. Инделы могут быть определены путем секвенирования нуклеиновой кислоты после воздействия композиции, содержащей молекулу gРНК, например, с помощью NGS. По отношению к месту локализации индела, индел считается «внутри или вблизи» эталонной области (например, области, комплементарной целевому домену молекулы gРНК), если он включает, по меньшей мере, одну инсерцию (вставку) или делецию на расстоянии примерно 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов) от эталонной области или частично или полностью совпадает с ней (например, содержит, по меньшей мере, одну инсерцию или делецию, в пределах 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов от участка, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, например молекулы gРНК, описанной здесь, или совпадает с ней).

Термин «профиль инделов", используемый здесь, относится к комбинации инделов, возникающих после воздействия композиции, содержащей молекулу gРНК. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из трех инделов, статистически наиболее часто представленных в зависимости от частоты формирования. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из пяти инделов с наибольшей частотой формирования. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из инделов, присутствующих с частотой более 5% от общего числа инделов всех отсеквенированных образцов. В одном варианте осуществления профиль инделов состоит из инделов, которые формируются с частотой более примерно 10% от общего количества инделов всех отсеквенированных образцов (то есть тех образцов, которые не состоят из немодифицированной эталонной последовательности нуклеиновой кислоты). В одном варианте осуществления профиль инделов включает в себя любые 3 из пяти наиболее часто встречающихся индексов. Профиль инделов может быть определен, например, путем секвенирования ДНК клеток популяции, подвергнутых воздействию молекулы gРНК.

«Неспецифичный индел» в качестве используемого здесь термина относится к инделу внутри или вблизи участка, не соответствующему целевой последовательности комплементарной целевому домену молекулы gРНК. Такие участки могут содержать, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более нуклеотидов, не соответствующих последовательности целевого домена gРНК. В иллюстративных вариантав осуществления такие сайты обнаруживаются при использованием целенаправленного секвенирования участков, предсказанных компьютерным моделированием, которые не являются мишенями, или посредством метода инсерционного анализа, известного в данной области техники.

Термин «a» и «an» (неопределённый артикль, в англоязычном тексте) относится к одному или более чем одному (то есть, по меньшей мере, одного) грамматического объекта статьи. В качестве примера «элемент» (an element) означает один элемент или более одного элемента.

Термин «около, примерно», когда речь идет об измеряемом значении, таком как количество, временная продолжительность и т. д. предназначается для охвата изменений ±20% или в некоторых случаях ±10%, или в некоторых случаях ±5%, или в некоторых случаях ±1%, или в некоторых случаях ±0,1% от указанного значения, поскольку такие изменения подходят для выполнения раскрытых способов.

Термин «антиген» или «Ag» относится к молекуле, вызывающей иммунный ответ. Этот иммунный ответ может вызвать либо продуцирование антител, либо активацию специфических иммунологически компетентных клеток, либо и то и другое. Специалист в данной области поймет, что любая макромолекула, включая практически все белки или пептиды, может служить в качестве антигена. Кроме того, антигены могут быть получены при помощи рекомбинантной или геномной ДНК. Специалист в данной области техники поймет, что любая ДНК, содержащая целиком или частично нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, вызывающий иммунный ответ, таким образом, будет кодировать «антиген», поэтому данный термин используется здесь. Кроме того, специалист в данной области поймет, что антиген необязательно должен кодироваться исключительно полноразмерной нуклеотидной последовательностью гена. Легко увидеть, что настоящее изобретение включает использование частичных нуклеотидных последовательностей более чем одного гена и что эти нуклеотидные последовательности представлены в различных комбинациях для кодирования полипептидов, вызывающих желаемый иммунный ответ, но не ограничивается ими. Более того, квалифицированный специалист поймет, что антиген не обязательно должен кодироваться «геном» вообще. Легко увидеть, что антиген может быть синтезирован или получен из биологического образца или может быть макромолекулой, не являющейся полипептидом. Такой биологический образец может включать образец ткани, клетку или жидкость с другими биологическими компонентами, но не ограничивается ими.

Термин «аутологичный» относится к любому материалу, полученному от того же индивидуума, которому этот материал будет снова введён.

Термин «аллогенный» относится к любому материалу, полученному от другого животного того же вида, что и индивидуум, которому будет вводится материал. Два или более индивидуумов считаются аллогенными друг другу, когда гены в одном или нескольких локусах неидентичны. В некоторых аспектах аллогенный материал от особей одного и того же вида может быть в достаточной степени генетически неодинаковым, так что способен действовать в качестве антигена.

Термин «ксеногенный» относится к трансплантату, полученному от животного другого вида.

«Полученный из», в качестве термина используемого здесь, указывает на связь между первой и второй молекулами. Обычно это относится к структурному сходству между первой молекулой и второй молекулой и не включает ограничение на использование процесса или источника на первую молекулу, которая получена из второй молекулы.

Термин «кодирование» относится к присущему свойству конкретных последовательностей нуклеотидов в полинуклеотиде, таком как ген, кДНК или мРНК, быть использованным в качестве матрицы для синтеза других полимеров и макромолекул в биологических процессах, макромолекул, имеющих либо определенную последовательность нуклеотидов (например, gРНК, trРНК и мРНК) либо определенную последовательность аминокислот и вытекающих из этого биологических свойств. Таким образом, ген, кДНК или РНК кодирует белок, если транскрипция и трансляция мРНК, соответствующей этому гену, приводят к образованию белка в клетке или другой биологической системе. Как кодирующая цепь, нуклеотидная последовательность которой идентична последовательности мРНК и обычно предоставляется в списках последовательностей, так и некодирующая цепь, используемая в качестве матрицы для транскрипции гена или кДНК, может упоминаться как кодирующая белок или другой продукт этого гена или кДНК.

Если не указано иначе, «нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность» включает в себя все нуклеотидные последовательности, являющиеся вырожденными версиями друг друга, которые кодируют ту же самую аминокислотную последовательность. Фраза «нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок или РНК», может также включать интрон(ы) в той степени, в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, в некотором варианте включает интрон(ы).

Термины «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» используются здесь взаимозаменяемо и относятся к количеству соединения, формулы, материала или композиции, как описано здесь, для достижения определенного биологического результата.

Термин «эндогенный» относится к любому материалу который происходит или образуется внутри организма, клетки, ткани или системы.

Термин «экзогенный» относится к любому материалу, введенному или произведенному вне организма, клетки, ткани или системы.

Термин «экспрессия» относится к транскрипции и/или трансляции определенной нуклеотидной последовательности, приводимой в действие промотором.

Термин «вектор трансфекции» относится к композиции материалов, содержащей изолированную нуклеиновую кислоту, причём эта композиция может быть использована для доставки изолированной нуклеиновой кислоты внутрь клетки. Многочисленные векторы, известные в данной области, включают линейные полинуклеотиды, полинуклеотиды, связанные с ионными или амфифильными соединениями, плазмиды и вирусы, но не ограничиваются ими. Таким образом, термин «вектор трансфекции» включает автономно реплицируемую плазмиду или вирус. Этот термин также должен истолкован в дальнейшем как включающий неплазмидные и невирусные соединения, облегчающие перенос нуклеиновой кислоты в клетки, такие как, например, соединения полилизина, липосомы и тому подобное. Примеры вирусных векторов переноса включают аденовирусные векторы, адено-ассоциированные вирусные векторы, ретровирусные векторы, лентивирусные векторы и тому подобное, но не ограничиваются ими.

Термин «вектор экспрессии» относится к вектору, содержащему рекомбинантный полинуклеотид, включающий последовательности контроля экспрессии, функционально связанные с нуклеотидной последовательностью, подлежащей экспрессии. Вектор экспрессии содержит достаточные цис-регуляторные элементы для контроля экспрессии; другие элементы для экспрессии могут быть предоставлены клеткой-хозяином или системой экспрессии in vitro. Экспрессирующие векторы включают в себя все вектора, известные в данной области техники, включая космиды, плазмиды (например, «голые» или содержащиеся в липосомах) и вирусы (например, лентивирусы, ретровирусы, аденовирусы и адено-ассоциированные вирусы), включающие рекомбинантный полинуклеотиды.

Термин «гомологичный» или "идентичный" относится к идентичности последовательности субъединиц между двумя полимерными молекулами, например между двумя молекулами нуклеиновой кислоты, такими как две молекулы ДНК или две молекулы РНК, или между двумя молекулами полипептида. Когда позиция субъединицы в обеих молекулах занято одной и той же мономерной субъединицей; например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то они являются гомологичными или идентичными в этой позиции. Гомология между двумя последовательностями является прямой функцией числа совпадающих или гомологичных позиций; например, если половина (например, пять позиций при длине полимера 10 субъединиц) позиций в обоих последовательностях гомологичны, две последовательности гомологичны на 50%; если 90% позиций (например, 9 из 10) совпадают или гомологичны, две последовательности являются гомологичными на 90%.

Термин «изолированный/выделенный/полученный из» означает изменение или удаление из естественного состояния. Например, нуклеиновая кислота или пептид, естественно присутствующие в живом животном, не «изолированы», но одна и та же нуклеиновая кислота или пептид, частично или полностью отделенный от сосуществующих материалов его естественного состояния, является «изолированной/выделенной/полученной из». Выделенная нуклеиновая кислота или белок может существовать в практически очищенной форме или может существовать в неприродной среде, такой как, например, клетка-хозяин.

Термин «функционально связанный» или «контроль транскрипции» относится к функциональной связи между регуляторной последовательностью и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, приводящей к экспрессии последней. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, когда первая последовательность нуклеиновой кислоты находится в функциональном взаимодействии со второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности. Функционально связанные ДНК-последовательности могут быть смежными друг с другом или, например, если необходимо соединить две кодирующие белок области, находятся в одной и той же рамке считывания.

Термин «парентеральное» введение иммуногенной композиции включает, например, подкожную (sc), внутривенную (iv), внутримышечную (im) или интрастернальную инъекции, интрамуральные или инфузионные способы.

Термин «нуклеиновая кислота» или «полинуклеотид» относится к дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) или рибонуклеиновой кислоте (РНК) и их полимерам в одно- или двухцепочечной форме. Если нет конкретного ограничения, этот термин охватывает нуклеиновые кислоты, которые содержат известные аналоги природных нуклеотидов и обладающие сходными связывающими свойствами, как эталонная нуклеиновая кислота, и метаболизируются аналогично природным нуклеотидам. Если не указано иначе, подразумевается, что конкретная последовательность нуклеиновой кислоты также неявно охватывает ее консервативно модифицированные варианты (например, замены вырожденных кодонов), аллели, ортологи, однонуклеотидные полиморфизмы (SNPs) и комплементарные последовательности, а также указанную последовательность. В частности, замены вырожденных кодонов могут достигаться путем генерации последовательностей, в которых третье положение одного или нескольких выбранных (или всех) кодонов замещено (случайным образом) любым из канонических нуклеозидов и/или дезоксиинозином (Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19: 5081 (1991), Ohtsuka et al., J. Biol., Chem., 260: 2605-2608 (1985) и Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8: 91-98 (1994)).

Термины «пептид», «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо и относятся к соединению, состоящему из аминокислотных остатков, ковалентно связанных пептидными связями. Белок или пептид должен содержать по меньшей мере две аминокислоты, при этом нет ограничения на максимальное количество аминокислот, входящих в последовательность белка или пептида. Полипептиды включают любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислоты, соединенных друг с другом пептидными связями. Используемый здесь термин относится как к коротким последовательностям, обычно упоминаемым в данном уровне техники, например, как пептиды, олигопептиды и олигомеры, так и к более длинным цепям, обычно упоминаются в данном уровне техники как белки, представленные множеством типов. «Полипептиды» включают, например, биологически активные фрагменты, гомологичные в значительной степени полипептиды, олигопептиды, гомодимеры, гетеродимеры, варианты полипептидов, модифицированные полипептиды, производные полипептидов, аналоги, слитые/рекомбинантные белки и другие. Полипептид включает природный пептид, рекомбинантный пептид или их комбинацию.

Термин «промотор» относится к последовательности ДНК, распознаваемой синтетическим аппаратом клетки или принесённым синтетическим аппаратом, которая необходима для инициирования специфической транскрипции полинуклеотидной последовательности.

Термин «промотор/регуляторная последовательность» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, необходимой для экспрессии гена, функционально связанного с промоторной/регуляторной последовательностью. В некоторых случаях эта последовательность может быть представлена промоторной последовательностью «кора», а в других случаях может также включать энхансерную последовательность и другие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии продукта гена. Промотор/регуляторная последовательность может быть, например, такой, которая экспрессирует продукт гена ткане-специфическим образом.

Термин «конститутивный» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая, будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена при практически всех или всех физиологических условиях клетки.

Термин «индуцируемый» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая, будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена в значительной степени только тогда, когда соответствующий индуктор присутствует в клетке.

Термин «тканеспецифический» промотор относится к нуклеотидной последовательности, которая будучи функционально связанной с полинуклеотидом, кодирующим или идентифицирующим продукт гена, обеспечивает производство продукта гена в значительной степени только тогда, если клетка принадлежит к типу ткани, соответствующей промотору.

Используемый здесь в связи с матричной/информационной РНК (мРНК), РНК 5'-кэп (также называемый РНК-кэп, 7-метилгуанозин РНК кэп или m7G cap), представляет собой модифицированный гуаниновый нуклеотид, добавленный в «начало», или 5'-конец эукариотической матричной РНК сразу после начала транскрипции. 5'-кэп состоит из концевой группы, соединённой с первым транскрибируемым нуклеотидом. Его присутствие имеет решающее значение для распознавания мРНК рибосомой и защиты от РНКаз. Добавление кэпа связано с транскрипцией и происходит во время-транскрипции, причем транскрипция определяет ход кэпирования, а кэпирование влияет на ход транскрипции. Вскоре после начала транскрипции 5'-конец синтезируемой мРНК связывается с комплексом кэп-синтезирующих комплексов, ассоциированных с РНК-полимеразой. Этот ферментативный комплекс катализирует химические реакции, необходимые для кэпирования мРНК. Синтез протекает как многоступенчатая биохимическая реакция. Кэп-фрагмент может быть модифицирован для модуляции функциональных свойств мРНК, таких как её стабильность или эффективность трансляции.

Используемый здесь термин «транскрибируемая in vitro РНК» относится к РНК, предпочтительно к мРНК, которая была синтезирована in vitro. Как правило, транскрибируемую in vitro РНК получают при использовании вектора транскрипции in vitro. Вектор транскрипции in vitro содержит матрицу, используемую для получения транскрибируемой РНК in vitro.

Используемый здесь термин «поли(А)» представляет собой серию аденозинов, присоединенных полиаденилированием к мРНК. В предпочтительном варианте осуществления конструкции для скоротечной временнОй экспрессии, длина поли(А) последовательности составляет от 50 до 5000 (SEQ ID NO: 6596), предпочтительно более 64, более предпочтительно более 100, наиболее предпочтительно более 300 или 400. Поли(А) последовательности могут быть модифицированы химически или ферментативно для модуляции функциональных свойств мРНК, таких как локализация, стабильность или эффективность трансляции.

Используемый здесь термин «полиаденилирование» относится к ковалентному связыванию полиаденильной части или ее модифицированного варианта с молекулой матричной РНК. В эукариотических организмах большинство матричных РНК (мРНК) полиаденилируются на 3'-конце. 3’-поли(А)-хвост представляет собой длинную последовательность адениновых нуклеотидов (часто несколько сотен), добавляемых к пре-мРНК посредством действия фермента, поли(А)-полимеразы. У высших эукариот поли(А) хвост добавляется к транскриптам, которые содержат определенную последовательность, сигнал полиаденилирования. Поли(A)-хвост и связанный с ним белок способствуют защите мРНК от деградации экзонуклеазами. Полиаденилирование также важно для терминации транскрипции, экспорта мРНК из ядра и трансляции. Полиаденилирование происходит в ядре сразу после транскрипции ДНК в РНК, но дополнительно может также произойти позже в цитоплазме. После терминации транскрипции цепь мРНК разрезается под действием эндонуклеазного комплекса, связанного с РНК-полимеразой. Сайт разрезания обычно характеризуется наличием базовой последовательности AAUAAA вблизи сайта разрезания. После разрезания мРНК адезозиновые остатки добавляются к свободному 3'-концу в сайте разрезания.

Используемый здесь термин «кратковременная (transient)» относится к экспрессии неинтегрированного трансгена в течение нескольких часов, дней или недель, причём период экспрессии меньше, чем период времени для экспрессии гена, интегрированного в геном или содержащегося в стабильном репликоне плазмиды в клетке-хозяине.

Используемые здесь термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к уменьшению или улучшению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности расстройства, например гемоглобинопатии, или улучшению одного или нескольких симптомов (предпочтительно одного или нескольких заметных симптомов) расстройства, например гемоглобинопатии, в результате введения одного или нескольких терапевтических агентов (например, одного или нескольких терапевтических агентов, таких как молекула gРНК, системы CRISPR или модифицированной клетки по изобретению). В конкретных вариантах осуществления термины «лечение», «лечение» и «проводя лечение» относятся к улучшению, по меньшей мере, одного измеримого физического параметра расстройства гемоглобинопатии, незаметного пациенту. В других вариантах осуществления термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к замедлению прогрессирования расстройства либо физически, например, путем стабилизации заметного симптома, либо физиологически, например, путем стабилизации физического параметра, или к обоим случаям. В других вариантах осуществления термины «лечить», «лечение» и «проводя лечение» относятся к восстановлению или стабилизации симптома гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной анемии или бета-талассемии.

Термин «сигнальный каскад/путь передачи сигнала» относится к биохимической взаимосвязи между различными молекулами передачи сигнала, которые играют роль в передаче сигнала от одной части клетки к другой части клетки. Фраза «рецептор клеточной поверхности» включает молекулы и комплексы молекул, способных принимать сигнал и передавать сигнал через мембрану клетки.

Термин «субъект» предназначен для включения живых организмов, в которых может быть выявлен иммунный ответ (например, млекопитающих, человека).

Термин «практически чистая клетка» (или популяция клеток) относится к клетке (популяции), которая практически не содержит других типов клеток. «Практически чистая клетка» также относится к клетке, которая была отделена от других типов клеток, с которыми она обычно ассоциирована в естественном состоянии. В некоторых случаях практически чистая популяция относится к гомогенной популяции клеток. В других случаях этот термин относится просто к клетке, которая была отделена от клеток, с которыми она естественным образом ассоциирована в их естественном состоянии. В некоторых аспектах клетки были культивированы in vitro. В других аспектах клетки не были культивированы in vitro.

Используемый здесь термин «терапевтический» означает лечение/лечебный. Терапевтический эффект достигается путем восстановления, подавления, ремиссии или искоренения болезненного состояния.

Используемый здесь термин «профилактика» означает предотвращение или предварительное лечение заболевания или состояния болезни.

Термин «трансфицированный» или «трансформированный» или «трансдуцированный» относится к способу, посредством которого экзогенная нуклеиновая кислота и/или белок переносится или вводится в клетку-хозяина. «Трансфицированная» или «трансформированная» или «трансдуцированная» клетка представляет собой трансфицированную, трансформированную или трансдуцированную клетку, содержащую экзогенную нуклеиновую кислоту и/или белок. Клетка включает в себя первоначальную материнскую клетку и ее потомство.

Термин «специфически связывается» относится к молекуле, распознающей и связывающейся с ее партнером по связыванию (например, белком или нуклеиновой кислотой), присутствующей в образце, при этом такая молекула практически не распознает или не связывает другие молекулы в образце.

Термин «биоэквивалент» относится к количеству агента, отличному от эталонного соединения, необходимого для получения эффекта, эквивалентного эффекту, полученному посредством эталонной дозы или эталонного количества эталонного соединения.

«Невосприимчивый», используемый здесь, относится к заболеванию, например гемоглобинопатии, которая не реагирует на лечение. В вариантах осуществления невосприимчивая гемоглобинопатия может быть устойчивой к лечению до или в начале лечения. В других вариантах невосприимчивая гемоглобинопатия может стать устойчивой во время лечения. Невосприимчивую гемоглобинопатию называют также устойчивой гемоглобинопатией.

«Рецидив», как используется здесь, относится к возобновлению болезни (например, гемоглобинопатии) или возобновлению признаков и симптомов заболевания, такого как гемоглобинопатия, после периода улучшения, например, после предшествующего терапевтического лечения, например, терапии гемоглобинопатии.

«Диапазоны»: во всем этом раскрытии различные аспекты изобретения могут быть представлены в формате диапазонов (от и до). Следует понимать, что описание в формате диапазона представлено для удобства и краткости и не должно истолковываться как негибкое ограничение объема изобретения. Соответственно, описание диапазона следует рассматривать как конкретно раскрывающее все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в этом диапазоне. Например, описание диапазона, такого как от 1 до 6, следует рассматривать как специально раскрытые поддиапазоны, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и т. д., а также отдельные номера в этом диапазоне, например, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. В качестве другого примера диапазон, такой как идентификация 95-99%, включает в себя значения с 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью и включает поддиапазоны, такие как 96-99%, 96-98%, 96-97%, 97-99%, 97-98% и 98-99% идентичности. Это правило применимо вне зависимости от ширины диапазона.

Термин «BCL11a» относится к ДНК-связывающему белку B-клеточной лимфомы/лейкемии 11A, специфичному к последовательности проксимального района «кора» промотора РНК-полимеразы II, гену, кодирующему указанный белок вместе со всеми интронами и экзонами. Этот ген кодирует белок с «цинковыми пальцами» типа C2H2. Было установлено, что BCL11A играет роль в подавлении продукции фетального гемоглобина. BCL11a также известен как B-Cell CLL/лимфома 11A (белок с «цинковыми пальцами»), CTIP1, EVI9, белковый гомолог сайта экотропной вирусной интеграции 9, COUP-TF-взаимодействующий белок 1, белок «с цинковыми пальцами» 856, KIAA1809, BCL-11A, ZNF856, EVI-9 и белок B-Cell CLL/лимфомы 11A. Термин охватывает все изоформы и варианты сплайсинга BLC11a. Ген человека, кодирующий BCL11a, картирован в хромосомной позиции 2p16.1 (Ensembl). Человеческие и мышиные аминокислотные и нуклеотидные последовательности можно найти в публичной базе данных, такой как GenBank, UniProt и Swiss-Prot, а геномная последовательность BCL11a человека может быть найдена в GenBank в NC_000002.12. Ген BCL11a, включая все интроны и экзоны, указывается по отношению к этой позиции в геноме. Существует несколько известных изотипов BCL11a. Последовательность мРНК, кодирующая изоформу 1 человеческого BCL11a, можно найти в NM_022893. Пептидная последовательность изоформы 1 BCL11a человека такова:

10 20 30 40 50

MSRRKQGKPQ HLSKREFSPE PLEAILTDDE PDHGPLGAPE GDHDLLTCGQ

60 70 80 90 100

CQMNFPLGDI LIFIEHKRKQ CNGSLCLEKA VDKPPSPSPI EMKKASNPVE

110 120 130 140 150

VGIQVTPEDD DCLSTSSRGI CPKQEHIADK LLHWRGLSSP RSAHGALIPT

160 170 180 190 200

PGMSAEYAPQ GICKDEPSSY TCTTCKQPFT SAWFLLQHAQ NTHGLRIYLE

210 220 230 240 250

SEHGSPLTPR VGIPSGLGAE CPSQPPLHGI HIADNNPFNL LRIPGSVSRE

260 270 280 290 300

ASGLAEGRFP PTPPLFSPPP RHHLDPHRIE RLGAEEMALA THHPSAFDRV

310 320 330 340 350

LRLNPMAMEP PAMDFSRRLR ELAGNTSSPP LSPGRPSPMQ RLLQPFQPGS

360 370 380 390 400

KPPFLATPPL PPLQSAPPPS QPPVKSKSCE FCGKTFKFQS NLVVHRRSHT

410 420 430 440 450

GEKPYKCNLC DHACTQASKL KRHMKTHMHK SSPMTVKSDD GLSTASSPEP

460 470 480 490 500

GTSDLVGSAS SALKSVVAKF KSENDPNLIP ENGDEEEEED DEEEEEEEEE

510 520 530 540 550

EEEELTESER VDYGFGLSLE AARHHENSSR GAVVGVGDES RALPDVMQGM

560 570 580 590 600

VLSSMQHFSE AFHQVLGEKH KRGHLAEAEG HRDTCDEDSV AGESDRIDDG

610 620 630 640 650

TVNGRGCSPG ESASGGLSKK LLLGSPSSLS PFSKRIKLEK EFDLPPAAMP

660 670 680 690 700

NTENVYSQWL AGYAASRQLK DPFLSFGDSR QSPFASSSEH SSENGSLRFS

710 720 730 740 750

TPPGELDGGI SGRSGTGSGG STPHISGPGP GRPSSKEGRR SDTCEYCGKV

760 770 780 790 800

FKNCSNLTVH RRSHTGERPY KCELCNYACA QSSKLTRHMK THGQVGKDVY

810 820 830

KCEICKMPFS VYSTLEKHMK KWHSDRVLNN DIKTE

SEQ ID NO: 2005 (Идентификатор Q9H165-1 и NM_022893.3, а также ADL14508.1).

Последовательности других изоформ белков BCL11a представлены в:

Изоформа 2: Q9H165-2

Изоформа 3: Q9H165-3

Изоформа 4: Q9H165-4

Изоформа 5: Q9H165-5

Изоформа 6: Q9H165-6

Как термин, используемый здесь, белок BCL11a человека также включает белки, имеющие по всей своей длине по меньшей мере 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с изоформами 1-6 BCL11a, если такие белки по-прежнему имеют по меньшей мере одну из функций BCL11a.

Используемый здесь термин «локус глобина» относится к области хромосомы человека 11, содержащей гены эмбрионального (ε), фетальных (G (γ) и A (γ)), взрослых (γ и β) типов глобина, областей контроля локуса и сайтов гиперчувствительности ДНКазы I.

Термин «комплементарный», используемый в связи с нуклеиновой кислотой, относится к спариванию оснований А с Т или U и С с С. Термин «комплементарный» относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые являются полностью комплементарными, то есть образуют А T (А U) пары и G C пары по всей эталонной последовательности, а также молекулы, которые являются по меньшей мере, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% комплементарными.

Термин «HPFH» относится к наследственной персистенции фетального гемоглобина и характеризуется повышенным фетальным гемоглобином в эритроцитах взрослого. Термин «область HPFH» относится к сайту генома, который при модификации (например, мутированный или имеющий делецию) вызывает увеличение продукции HbF во взрослых эритроцитах и включает в себя сайты HPFH, описанные в литературе (см., например, Online Mendelian Inheritance in Man: http://www.omim.org/entry/141749)). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой областью внутри кластера гена бета-глобина на хромосоме 11p15 или включает его. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH находится внутри или охватывает, по меньшей мере, часть гена дельта-глобина. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область промотора HBG1. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область промотора HBG1. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, описанную в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой точку область HPFH Френча (с делецией), как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой алжирскую HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой Шри-Ланка HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH-3, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH-2, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH-1 представляет собой HPFH-3, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой HPFH Шри-Ланка (δβ)⁰- талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой сицилийскую (δβ)⁰-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой македонскую (δβ) 0-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой курдскую β0-талассемию HPFH, как описано в Sankaran VG et al. NEJM (2011) 365: 807-814. В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5213874-5214400 (hg18). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5215943-5215046 (hg18). В иллюстративном варианте осуществления область HPFH представляет собой область, расположенную в Chr11: 5234390-5238486 (hg38).

Термин «энхансер BCL11a», используемый здесь, относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая влияет, например, увеличивает экспрессию или функцию BCL11a, как описано, например, в Bauer et al., Science, vol. 342, 2013, стр. 253-257. Энхансер BCL11a может работать, например, только в определенных типах клеток, например, клетках эритроидной линии. Одним из примеров энхансера BCL11a является последовательность нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена гена BCL11a (например, нуклеиновая кислота в данных позициях или им соответствующих +55: Chr2: 60497676- 60498941; +58: Chr2: 60494251- 60495546; +62: Chr2: 60490409- 60491734, как указано в hg38). В одном варианте осуществления BCL11a энхансер представляет собой область +62 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a. В одном варианте осуществления BCL11a энхансер является областью +58 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a. В одном варианте осуществления BCL11a Энхансер является областью +55 последовательности нуклеиновой кислоты между экзоном 2 и экзоном 3 гена BCL11a.

Термины «гемопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники» или «HSPC» используются взаимозаменяемо и относятся к популяции клеток, содержащих как гемопоэтические стволовые клетки («HSCs»), так и гемопоэтические клетки-предшественники («HPCs»). Такие клетки характеризуются, например, как CD34+клетки. В примерных вариантах осуществления HSPC выделяют из костного мозга. В других примерных вариантах осуществления HSPC изолированы от периферической крови. В других примерных вариантах осуществления HSPC выделяют из пуповинной крови.

Термин «соединение, способствующее экспансии стволовых клеток», используемый здесь, относится к соединению, вызывающему пролиферацию клеток, например HSPC, HSC и/или HPC, например, возрастание численности клеток с более высокой скоростью относительно тех же типов клеток, но при отсутствии указанного агента. В одном иллюстративном аспекте соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, является ингибитором сигнального каскада арил-гидрокарбонового рецептора. Дополнительные примеры соединений, способствующих экспансии стволовых клеток, приведены ниже. В вариантах осуществления пролиферация, например, увеличение численности, выполняется ex vivo.

«Трансплантация» или «трансплантант» относится к включению клетки или ткани, например популяции HSPC, в организм реципиента, например, млекопитающего или человека. В одном примере трансплантатция включает в себя рост, экспансию и/или дифференцировку привитых клеток у реципиента. В одном примере, трансплантация HSPC включает рост, экспансию и дифференцировку указанных HSPC в эритроидные клетки в организме реципиента.

Термин «гемопоэтические клетки-предшественники» (или прогениторные клетки) (HSC), используемый здесь, относится к примитивным гематопоэтическим клеткам, обладающим ограниченной способностью к самовоспроизведению и плюрипотентностью - потенциалом к дифференцировке в клетки разных линий (например, миелоидной, лимфоидной), в клетки монолинии (например, миелоидной или лимфоидной) или ограниченной дифференцировке клеточного типа (например, в эритроидный предшественника) в зависимости от позиции внутри гемопоэтической иерархии (Doulatov et al., Cell Stem Cell 2012).

Термин «гемопоэтические стволовые клетки» (HSC), используемый здесь, относится к незрелым клеткам крови, обладающим способностью к самообновлению и дифференцировке в более зрелые клетки крови, включающие гранулоциты (например, промиелоциты, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), эритроциты (например, ретикулоциты, эритроциты), тромбоциты (например, мегакариобласты, тромбоциты, продуцирующие мегакариоциты, тромбоциты) и моноциты (например, моноциты, макрофаги). HSCs взаимозаменяемо описываются как стволовые клетки во всем описании. В данной области техники известно, что такие клетки могут включать или не включать CD34+ клетки. CD34+ клетки являются незрелыми клетками, экспрессирующими маркер поверхности клетки CD34. Считается, что клетки CD34+ включают субпопуляцию клеток с указанными выше свойствами стволовых клеток. В данной области техники хорошо известно, что HSC представляют собой мультипотентные клетки, которые могут давать начало примитивным клеткам-предшественникам (например, мультипотентным клеткам-предшественникам) и/или клеткам-предшественникам, связанным с определенными гематопоэзными линиями (например, лимфоидными клетками-предшественниками). Стволовые клетки, дающие начало специфическим гематопоэтическим линиям, могут быть линиями Т-клеток, линиями В-клеток, линиями дендритных клеток, линиями клеток Лангерганса и/или лимфоидной тканеспецифической линией макрофагов. Кроме того, HSC также могут принадлежать к долгосрочным HSC (LT-HSC) и краткосрочным HSC (ST-HSC). ST-HSC являются более активными и более пролиферирующими, чем LT-HSC. Тем не менее, LT-HSC обладают неограниченным самовоспроизведением (то есть, они могут находится в зрелом состоянии неограниченное время), тогда как ST-HSC обладают ограниченным самовоспроизведением (то есть они выживают только в течение ограниченного периода времени). Любая из этих HSC может использоваться в любом из способов, описанных здесь. Необязательно, ST-HSC могут быть использованы, поскольку они являются высокопролиферативными и, таким образом, быстро увеличивают численность HSC и их потомства. Гематопоэтические стволовые клетки необязательно получают из продуктов крови. Продукт крови включает продукт, полученный из организма или органа, содержащего клетки гемопоэтического происхождения. К таким источникам относятся нефракционированный костный мозг, пуповина, периферическая кровь (например, мобилизованная периферическая кровь, например, мобилизованная мобилизационным агентом, таким как G-CSF или Plerixafor® (AMD3100)), печень, тимус, лимфа и селезенка. Все вышеупомянутые сырые или нефракционированные продукты крови могут быть обогащены клетками, обладающими характеристиками гемопоэтических стволовых клеток, с помощью способов, известным специалистам в данной области техники. В одном варианте осуществления HSC характеризуются как CD34+/CD38-/CD90+/CD45RA-. В вариантах осуществления клетки HSC характеризуются как CD34+/CD90+/CD49f+ клетки.

«Экспансия» или «увеличиться» в контексте клеток относится к увеличению численности определённого типа\типов клеток из первоначальной клеточной популяции, который(ые) может быть или не быть идентичным(и) первоначальному. Исходные клетки, подвергнутые экспансии, могут быть не такими, как клетки, полученные при экспансии.

«Клеточная популяция» относится к эукариотическом клеткам млекопитающего, предпочтительно человека, выделенным из биологических источников, например, выделеннам из крови или ткани и происходящим из более чем одной клетки.

«Обогащенный» при использовании в контексте клеточной популяции относится к популяции клеток, выбранной на основе наличия одного или нескольких маркеров, например CD34+.

Термин «CD34+ клетки» относится к клеткам, экспрессирующим на своей поверхности CD34 маркер. CD34+ клетки могут быть обнаружены и подсчитаны с использованием, например, проточной цитометрии и флуоресцентно меченых анти-CD34-антител.

«Обогащенная клетками CD34+» означает, что популяция клеток была выбрана на основе наличия маркера CD34. Соответственно, процент клеток CD34+ в популяции клеток после отбора выше, чем был процент CD34+ клеток в начальной популяции клеток, до того этапа, на котором была проведена селекция на основе маркеров CD34. Например, клетки CD34+ могут представлять собой по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80% или по меньшей мере 90% клеток в популяции клеток, обогащенной клетками CD34+.

Термины «F клетка» и «F-клетка» относятся к клеткам, обычно эритроцитам (например, красным кровяным клеткам), которые содержат и/или производят (например, экспрессируют) фетальный гемоглобин. Например, F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или продуцирует обнаруживаемые уровни фетального гемоглобина. Например, F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает не менее 5 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина. В другом примере F-клетка представляет собой клетку, которая содержит или вырабатывает по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина. Уровни фетального гемоглобина могут быть измерены с использованием анализа, описанного здесь, или другим способом, известным в данной области техники, например, проточной цитометрией с использованием реагента для обнаружения фетального гемоглобина, высокоэффективной жидкостной хроматографии, масс-спектрометрии или ферментного иммуносорбентного анализа.

Если не указано иначе, все координаты генома или хромосомы соответствуют hg38.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Молекулы, композиции и способы gРНК, описанные здесь, относятся к редактированию генома в эукариотических клетках с использованием системы CRISPR/Cas9. В частности, молекулы, композиции и способы, описанные здесь, относятся к регуляции уровней глобина и применимы, например, для регуляции экспрессии и белкового синтеза генов глобина. Молекулы gРНК, композиции и способы могут быть применимы для лечения гемоглобинопатий.

I. Молекулы gРНК

Молекула gРНК может иметь несколько доменов, как описано ниже более подробно, но молекула gРНК обычно содержит, по меньшей мере, домен crРНК (содержащий целевой домен) и tracr. Молекулы gРНК по изобретению, используемые в качестве компонента системы CRISPR, применимы для модификации (например, модификации последовательности) ДНК внутри или вблизи целевого сайта. Такие модификации включают делеции и/или инсерции, приводящие, например, к уменьшению или прекращению экспрессии функционального продукта гена, последовательность которого содержит целевой сайт. Такие применения и дополнительные применения описаны ниже.

В одном варианте осуществления одиночная нацеливающая, или sgРНК содержит предпочтительно от 5’до 3': crРНК (содержащую целевой домен, комплементарный целевой последовательности, и область, формирующую часть шпильки (то есть области шпильки crРНК)); петлю; и tracr (содержащий домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает нуклеазу или другую эффекторную молекулу, например молекулу Cas, например молекулу aCas9) и может принимать следующий формат (от 5' до 3'):

[целевой домен]-[область шпильки crРНК]-[первое необязательное удлинение области шпильки]-[петля]-[первое необязательное удлинение tracr]-[область шпильки tracr]-[связывающий домен посадки нуклеазы tracr].

В вариантах осуществления связывающий нуклеазу домен tracr связывается с белком Cas, например, с белком Cas9.

В одном варианте осуществления двойная нацеливающая или dgРНК содержит два полинуклеотида; первый, предпочтительно от 5’до 3': crРНК (содержащая целевой домен, комплементарный целевой последовательности, и область, формирующую часть шпильки (то есть области шпильки crРНК), и второй, предпочтительно от 5’до 3': tracr (содержащий домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает нуклеазу или другую эффекторную молекулу, например молекулу Cas, например молекулу Cas9) и может принимать следующий формат (от 5' до 3'):

Полинуклеотид 1 (crРНК): [целевой домен]-[область шпильки crРНК]-[первое необязательное удлинение области шпильки]-[второе необязательное удлинение области шпильки]

Полинуклеотид 2 (tracr): [первое необязательное удлинение области tracr]-[область шпильки tracr]-[tracr домен связывания с нуклеазой].

В вариантах осуществления tracr, домен связывания с нуклеазой связывается с белком Cas, например, с белком Cas9. В некоторых аспектах целевой домен содержит или состоит из последовательности целевого домена, описанной здесь, например, целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6 или целевого домена, включающего или состоящего из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов целевого домена последовательности, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

В некоторых аспектах шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит от 5’до 3': GUUUUAGAGCUA (SEQ ID NO: 6584).

В некоторых аспектах шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит от 5’до 3': GUUUAAGAGCUA (SEQ ID NO: 6585).

В некоторых аспектах петля содержит от 5’до 3': GAAA (SEQ ID NO: 6588).

В некоторых аспектах tracr содержит от 5’до 3': UAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6589) и предпочтительно используется в молекуле gРНК, содержащей SEQ ID NO 6584.

В некоторых аспектах tracr содержит от 5’до 3': UAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6590) и предпочтительно используется в молекуле gРНК, содержащей SEQ ID NO 6585.

В некоторых аспектах, gРНК также может содержать на 3'-конце дополнительные U (урацил-содержащие) нуклеиновые кислоты. Например, gРНК может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 урацил-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006). В одном варианте осуществления gРНК содержит дополнительные 4 урациловые нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В случае dgРНК один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), могут включать на 3'-конце дополнительные U нуклеиновые кислоты. Например, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий нацеливающий домен и полинуклеотид, содержащий tracr), может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 U нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006). В одном варианте осуществления в случае dgРНК один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, включающий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), содержат дополнительные 4 U-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий tracr, содержит дополнительную U-нуклеиновую кислоту (кислоты), например, 4 U-нуклеиновых кислот. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий целевой домен, содержит дополнительную U-нуклеиновую кислоту (кислоты). В варианте осуществления dgРНК оба полинуклеотида, как содержащий целевой домен так и полинуклеотид, содержащий tracr, содержат дополнительные U-нуклеиновые кислоты, например, 4 U нуклеиновых кислоты.

В некоторых аспектах gРНК также может содержать на 3'-конце дополнительные А (аденин)-нуклеиновые кислоты. Например, gРНК может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 А-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007). В одном варианте осуществления gРНК содержит дополнительные 4 A-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr), могут содержать на 3'-конце дополнительные А-нуклеиновые кислоты. Например, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий нацеливающий домен и полинуклеотид, содержащий tracr), может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007). В одном варианте осуществления, в случае dgРНК, один или несколько полинуклеотидов dgРНК (например, полинуклеотид, содержащий целевой домен и полинуклеотид, содержащий tracr) содержит дополнительные 4 A-нуклеиновые кислоты на 3'-конце. В варианте осуществления dgРНК только полинуклеотид, содержащий tracr, содержит дополнительную нуклеиновую кислоту(ы), например, 4 А-нуклеиновых кислот. В предположении dgРНК только полинуклеотид, содержащий целевой домен, содержит дополнительную нуклеиновую кислоту(ы). В одном из вариантов осуществления dgРНК оба полинуклеотида, как содержащий целевой домен, так и полинуклеотид, содержащий tracr, содержат дополнительные A-нуклеиновые кислоты, например 4 А-нуклеиновых кислоты.

В вариантах осуществления один или несколько полинуклеотидов молекулы gРНК могут содержать кэп на 5'-конце.

В одном варианте осуществления мономолекулярная или sgРНК содержит предпочтительно от 5'до 3': crРНК (которая содержит целевой домен, комплементарный целевой последовательности, область шпильки crРНК, первое удлинение шпильки, петля, первое удлинение tracr (который содержит домен, комплементарный, по меньшей мере, части первого удлинения шпильки) и tracr (который содержит домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9). В некоторых аспектах целевой домен содержит описанную здесь последовательность целевого домена, например целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, или целевой домен, включающий или состоящий из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, например 3' 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

В аспектах, включающих в себя первое удлинение шпильки и/или первое удлинение tracr, последовательности шпильки, петли и tracr могут быть такими, как описано выше. В общем случае, может быть использовано любое первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr при условии, что они являются комплементарными. В вариантах осуществления первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr состоят из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более комплементарных нуклеотидов.

В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит от 5'до 3': UGCUG (SEQ ID NO: 6586). В некоторых аспектах первое удлинение шпильки состоит из SEQ ID NO: 6586.

В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит от 5’до 3': CAGCA (SEQ ID NO: 6591). В некоторых аспектах первое удлинение tracr состоит из SEQ ID NO: 6591.

В одном варианте осуществления dgРНК содержит две молекулы нуклеиновой кислоты. В некоторых аспектах dgРНК содержит первую нуклеиновую кислоту, включающую предпочтительно от 5’до 3': целевой домен, комплементарный целевой последовательности; область шпильки crРНК; возможно, первое удлинение шпильки; и, необязательно, второе удлинение шпильки; и вторую нуклеиновую кислоту (которая может упоминаться здесь как tracr) которая содержит по меньшей мере домен, связывающий молекулу Cas, например, молекулу Cas9, и содержащую предпочтительно от 5'до 3': необязательное первое удлинение tracr; и tracr (который содержит домен, комплементарный области шпильки crРНК, и домен, который дополнительно связывает молекулу Cas, например, Cas9). Вторая нуклеиновая кислота может дополнительно содержать на 3'-конце (например, 3' к tracr) дополнительные U-нуклеиновые кислоты. Например, tracr может содержать дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 U-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2006) (например, 3' к tracr). Вторая нуклеиновая кислота может дополнительно или альтернативно содержать на 3'-конце (например, 3' к tracr) дополнительные А-нуклеиновыех кислоты. Например, tracr может содержать дополнительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 A-нуклеиновых кислот на 3'-конце (SEQ ID NO: 2007) (например, 3’к tracr). В некоторых аспектах целевой домен включает последовательность целевого домена, описанную здесь, например, целевой домен, представленный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6, или целевой домен, содержащий или состоящий из 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 (предпочтительно 20) последовательных нуклеотидов последовательности целевого домена, описанной в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

В аспектах, связанных с dgРНК, crРНК область шпильки, необязательное первое удлинение шпильки, необязательное первое удлинения tracr и последовательности tracr могут быть такими, как описано выше.

В некоторых аспектах необязательное второе удлинение шпильки содержит от 5’до 3': UUUUG (SEQ ID NO: 6587).

В вариантах осуществления 3'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов, 5'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов или 3'- и 5'-концевые 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов молекулы gРНК (а также в случае молекулы dgРНК, полинуклеотида содержащего целевой домен и/или полинуклеотида, содержащего tracr), являются модифицированными нуклеиновыми кислотами, как описано более подробно в разделе XIII ниже. Домены кратко обсуждаются ниже.

1) Целевой домен:

Руководство по выбору целевых доменов можно найти, например, в Fu Y el al. NAT BIOTECHNOL 2014 (doi: 10.1038/ nbt.2808) и Sternberg SH el al. NATURE 2014 (doi: 10.1038/ naturel3011).

Целевой домен содержит комплементарную нуклеотидную последовательность, например, по меньшей мере 80, 85, 90, 95 или 99% комплементарную, или, например, полностью комплементарную целевой последовательности-мишени нуклеиновой кислоты. Целевой домен является частью молекулы РНК и поэтому содержит основание урацил (U), тогда как любая ДНК, кодирующая молекулу gРНК, содержит основание тимин (T). Не ограничиваясь теорией, считается, что комплементарность целевого домена с целевой последовательностью вносит свой вклад в специфику взаимодействия молекулы gРНК/Cas9 с целевой нуклеиновой кислотой-мишенью. Понятно, что при спаривании целевого домена и целевой последовательности основания урацила в целевом домене будут связываться с основаниями аденина в целевой последовательности.

В варианте осуществления длина целевого домена составляет от 5 до 50, например, от 10 до 40, например, от 10 до 30, например, от 15 до 30, например от 15 до 25 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 16 нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления длина целевого домена составляет 17 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 18 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 19 нуклеотидов. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 20 нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления длина целевого домена составляет 21 нуклеотид. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 22 нуклеотида. В варианте осуществления длина целевого домена составляет 23 нуклеотида. В варианте осуществления длина целевого домена составляет 24 нуклеотида по длине. В одном варианте осуществления длина целевого домена составляет 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления вышеупомянутые 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов содержат 5'-16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В вариантах осуществления вышеупомянутые 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов содержат 3'-16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов из целевого домена, описанного в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Не ограничиваясь теорией, считается, что 8, 9, 10, 11 или 12 нуклеиновых кислот целевого домена, расположенных на 3'-конце целевого домена, важны для нацеливания на целевую последовательность и, таким образом, могут называться «кором» (core), «основной нацеливающей» областью целевого домена. В одном варианте осуществления «кор», основная нацеливающая область целевого домена полностью комплементарна целевой последовательности.

Цепь целевой нуклеиновой кислоты, к которой комплементарен целевой домен, обозначается здесь как целевая последовательность (или последовательность-мишень). В некоторых аспектах целевая последовательность расположена на хромосоме, например, находится внутри гена. В некоторых аспектах целевая последовательность расположена внутри экзона гена. В некоторых аспектах целевая последовательность расположена внутри интрона гена. В некоторых аспектах целевая последовательность или расположена вблизи (например, в пределах 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеиновых кислот) от сайта связывания регуляторного элемента, например промотора или сайта связывания фактора транскрипции, или представляющего интерес гена. Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную в разделе XIII настоящего документа.

2) Область шпильки crРНК:

Шпилька формируется из частей как crРНК, так и tracr. Область шпильки crРНК комплементарна части tracr и в вариантах осуществления комплементарна в достаточной степени части tracr для образования дуплексной области по меньшей мере в некоторых физиологических условиях, например, в нормальных физиологических условиях. В одном варианте осуществления область шпильки crРНК имеет длину от 5 до 30 нуклеотидов. В одном варианте осуществления область шпильки crРНК имеет длину от 5 до 25 нуклеотидов. Область шпильки crРНК может быть гомологична естественной последовательности повторов бактериальной системы CRISPR или быть её производной. В одном из вариантов осуществления область шпильки, описанная здесь, имеет, по меньшей мере, 50% гомологии с областью шпильки crРНК S. pyogenes или S. thermophilus.

В одном варианте осуществления шпильки, например область шпильки crРНК, содержит SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80 %, 85%, 90%, 95% или 99% гомологии с SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, или 11 нуклеотидов SEQ ID NO: 6584. В одном варианте осуществления шпилька, например область шпильки crРНК, содержит SEQ ID NO: 6585. В одном варианте осуществления шпилька содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологии с SEQ ID NO: 6585. В одном варианте осуществления шпилька, например, область шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 нуклеотидов SEQ ID NO: 6585.

Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.

3) первое удлинение шпильки

При использовании tracr, содержащего первое удлинение tracr, crРНК может содержать первое удлинение шпильки. В общем случае, может быть использовано любое первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr при условии, что они являются комплементарными. В вариантах осуществления первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr состоят из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более комплементарных нуклеотидов.

Первое удлинение шпильки может содержать нуклеотиды, которые комплементарны, например, на 80%, 85%, 90%, 95% 99%, или, например, полностью комплементарны нуклеотидам первого удлинения tracr. В некоторых аспектах первые нуклеотиды удлинения шпильки, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения tracr, являются смежными. В некоторых аспектах первые нуклеотиды удлинения шпильки, которые гибридизуются с комплементарными нуклеотидами первого удлинения tracrа, являются прерывистыми, например, содержат две или более областей гибридизации, разделенных нуклеотидами, которые не образуют попарного спаривания с нуклеотидами первого удлинения tracr. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки содержит от 5’до 3': UGCUG (SEQ ID NO: 6586). В некоторых аспектах первое удлинение шпильки состоит из SEQ ID NO: 6586. В некоторых аспектах первое удлинение шпильки включает нуклеиновую кислоту, которая обладает, по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологией к SEQ ID NO: 6586.

Некоторые или все нуклеотиды первого удлинения tracr могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.

3) Петля

Петля служит для соединения области шпильки crРНК (или, при необходимости, первого удлинения шпильки, если оно присутствует) с tracr (или, возможно, первым удлинением tracr, если оно присутствует) в sgРНК. Петля может соединять область шпильки crРНК и tracr ковалентно или нековалентно. В одном варианте осуществления связь является ковалентной. В одном варианте осуществления петля ковалентно соединяет область шпильки crРНК и tracr. В одном варианте осуществления петля ковалентно соединяет первое удлинение шпильки и первое удлинение tracr. В одном из вариантов осуществления петля представляет собой или содержит ковалентную связь, расположенную между областью шпильки crРНК и доменом tracr, который гибридизуется с областью шпильки crРНК. Как правило, петля содержит один или несколько, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов.

В молекулах dgРНК две молекулы могут быть связаны при гибридизации между по меньшей мере частью crРНК (например, областью шпильки crРНК) и по меньшей мере частью tracr (например, доменом tracr, комплементарным области шпильки crРНК).

Широкое разнообразие петель подходит для использования в sgРНКs. Петли могут состоять из ковалентной связи или быть короткими, один или несколько нуклеотидов в длину, например, 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля представляет собой 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 или 25 или более нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля представляет собой от 2 до 50, от 2 до 40, от 2 до 30, от 2 до 20, от 2 до 10 или от 2 до 5 нуклеотидов. В одном варианте осуществления петля гомологична естественной последовательности или является ее производной. В одном из вариантов осуществления изобретения петля имеет гомологию не менее 50% с петлёй, описанной здесь. В одном варианте осуществления петля содержит SEQ ID NO: 6588.

Некоторые или все нуклеотиды домена могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную здесь в разделе XIII.

4) Второе удлинение шпильки

В одном варианте осуществления dgРНК может содержать дополнительную последовательность, 3' по отношению к области шпильки crРНК или, если присутствует, к первому удлинению шпильки, упоминаемую здесь как второе удлинение шпильки. В варианте осуществления второе удлинение шпильки имеет длину 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5 или 2-4 нуклеотидов. В одном варианте осуществления второе удлинение шпильки имеет длину 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более нуклеотидов. В варианте осуществления второе удлинение шпильки содержит SEQ ID NO: 6587.

5) Tracr:

Tracr представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, необходимую для связывания нуклеазы, например, Cas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что каждый вид Cas9 связывается с определенной последовательностью tracr. Последовательности tracr используются как в sgРНК, так и в dgРНК системах. В одном варианте осуществления tracr содержит последовательность соответствующую или происходящую из S. pyogenes tracr. В некоторых аспектах tracr имеет область, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, например, при достаточной комплементарности области шпильки crРНК для образования дуплексной области, по меньшей мере, в некоторых физиологических условиях (эти области упоминаются здесь как области шпильки tracr или домен tracr, комплементарный области шпильки crРНК). В вариантах осуществления домен tracr, гибридизующийся с областью шпильки crРНК, содержит по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов, гибридизующихся с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК. В некоторых аспектах, tracr-нуклеотиды, которые гибридизуются с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК, являются смежными. В некоторых аспектах tracr нуклеотиды, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами области шпильки crРНК, являются прерывистыми, например, содержат две или более областей гибридизации, разделенных нуклеотидами, которые не спариваются с нуклеотидами области шпильки crРНК. В некоторых аспектах часть tracr, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, содержит от 5'до 3': UAGCAAGUUAAAA (SEQ ID NO: 6597). В некоторых аспектах часть tracr, которая гибридизуется с областью шпилькаов crРНК, содержит от 5'до 3': UAGCAAGUUUAAA (SEQ ID NO: 6598). В вариантах осуществления последовательность, которая гибридизуется с областью шпильки crРНК, расположена в tracr 5' позиции по отношению к последовательности tracr, дополнительно связывающей нуклеазу, например молекулу Cas, например, молекулу Cas9.

Tracr дополнительно содержит домен, который дополнительно связывается с нуклеазой, например молекулой Cas, например, молекулой Cas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что Cas9 разных видов связывается с разными tracr последовательностями. В некоторых аспектах tracr включает последовательность, которая связывается с молекулой Cas9 S. pyogenes. В некоторых аспектах tracr содержит последовательность, которая связывается с молекулой Cas9, описанной здесь. В некоторых аспектах домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9, содержит от 5’до 3': UAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6599). В некоторых аспектах домен, который дополнительно связывает молекулу Cas9, содержит от 5’до 3': UAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 6600).

В некоторых вариантах осуществления tracr содержит SEQ ID NO: 6589. В некоторых вариантах осуществления tracr содержит SEQ ID NO: 6590. Некоторые или все нуклеотиды tracr могут быть модифицированы, например иметь модификацию, описанную в разделе XIII настоящего документа.

В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и или crРНК входящая в dgРНК), например, любой из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит модификацию, представляющую собой инвертированный абазивный остаток на 5'-конце, 3'-конце или как на 5', так и 3' концах gРНК. В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит одну или несколько фосфоротиоатных связей между остатками на 5'-конце полинуклеотида, например, фосфоротиоатную связь между первыми двумя 5'-остатками, между каждым из первых трех 5'-остатков, между каждым из первых четырех 5'-остатков или между каждым из первых пяти 5'-остатков. В вариантах осуществления компонент gРНК или gРНК может альтернативно или дополнительно содержать одну или более фосфоротиоатных связей между остатками на 3'-конце полинуклеотида, например, фосфоротиоатную связь между первыми двумя 3'-остатками, между каждым из первых трех 3'-остатков, между каждым из первых четырех 3'-остатков, или между каждым из первых пяти 3'-остатков. В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 5'-остатков (например, включает в себя, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце), и фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (включает, или, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 3'-конце). В одном варианте осуществления любой из описанных выше фосфоротиоатных модификаций дополнена модификацией, представляющей собой абазивный инвертированныйостаток на 5'-конце, 3'-конце или на обоих 5’и 3'-концах полинуклеотида. В таких вариантах осуществления модификация, представляющая собой абазивный инвертированныйостаток может быть связана с 5'- и/или 3'-нуклеотидом фосфатной или фосфоротиоатной связью. В вариантах осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящей в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, содержит один или несколько нуклеотидов, которые включают 2’O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более 5'-остатков содержит 2’O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более из 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления 4ый от конца, 3ий от конца и 2ой от конца 3'-остатки содержат 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 1, 2, 3 или более 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, и каждый из первых 1, 2, 3 или более из 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В одном варианте осуществления каждый из первых 3ёх 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, и каждый из первых 3ёх 3'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления каждый из первых 3ёх 5'-остатков содержит 2'O-метильную модификацию, а 4ый от конца, 3ий от конца и 2ой от конца 3'-остатки содержат 2'O-метильную модификацию. В вариантах осуществления любая из 2'О-метильных модификаций, например, как описано выше, может быть объединена с одной или несколькими модификациями фосфоротиоата, например, как описано выше, и/или с одной или несколькими модификациями, представляющими собой инвертированный абазивный остаток, например, как описано выше. В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, соединение фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатных связей между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков и 2’O-метильную модификацию в каждом из трех первых 3'-остатков.

В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК, входящей в dgРНК), например, любой из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, наличие фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов)), наличие фосфоротиоатной связи между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков и 2'-метильную модификацию на каждом из 4-х-концевых, 3-к-концевой и 2-к-концевой 3'-остаткам.

В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК dgРНК), например, любой из компонентов gРНК или gРНК, описанных выше, включает, например, фосфоротиоатной связ между каждым из первых четырёх 5'-остатка (включает, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2'О-метильную модификацию в каждом из первых трех 5'-остатков, 2’O-метильную модификацию в каждом из первых трех 3'-остатков, и дополнительный инвертирванный абазивный остаток на каждом из 5'и 3' концов.

В одном варианте осуществления gРНК (например, sgРНК или tracr и/или crРНК входящая в dgРНК), например, любая из gРНК или компонентов gРНК, описанных выше, включает, например, фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырёх 5'-остатков (содержит, например, состоит из трех фосфоротиоатных связей на 5'-конце полинуклеотида(ов), фосфоротиоатную связь между каждым из первых четырех 3'-остатков (например, включает, например, три фосфоротиоатные связи на 5'-конце полинуклеотида(ов)), 2’O-метил модификацию в каждом из первых трех 5' остатков и 2'O-метил-модификацию в каждом из остатков: 4ого-от конца, 3его от конца, и 2ого от конца 3' остатков, и модификацию, представляющую собой инвертированный абазивный остаток на каждом из 5' и 3'-концов.

В одном варианте осуществления gРНК является dgРНК и включает, например, состоит из:

crРНК:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2008), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660) (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например:

crРНК:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2009), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и

tracr:

mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).

В одном из вариантов осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:

crРНК:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2010), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце); и

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660) (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5' и/или 3'-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:

crРНК:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2011), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце); и

tracr:

mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой dgРНК и включает, например, состоит из:

crРНК:

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2012), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце); и

tracr:

mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 346), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 2013), где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 2014), где m обозначает основание с 2’O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).

В одном варианте осуществления gРНК представляет собой sgРНК и включает, например, состоит из:

mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO: 2015), где m обозначает основание с 2’O-метил модификацией, * обозначает фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки целевого домена, например, как описано здесь, (необязательно с инвертированным абазивным остатком на 5’ и/или 3’-конце).

6) Первое удлинение Tracr

Если gРНК содержит первое удлинение шпильки, tracr может содержать первое удлинение tracr. Первое удлинение tracr может содержать нуклеотиды, комплементарные, например, на 80%, 85%, 90%, 95% или 99%, или, например, полностью комплементарные нуклеотидам первого удлинения шпильки. В некоторых аспектах нуклеотиды первого удлинения tracr, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения шпильки, являются смежными. В некоторых аспектах, нуклеотиды первого удлинения tracr, гибридизующиеся с комплементарными нуклеотидами первого удлинения шпильки, не являются смежными, например, включают в себя две или более областей гибридизации, разделенной нуклеотидами, не образующими пар оснований с нуклеотидами первого удлинения шпильки. В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеотидов. В некоторых аспектах первое удлинение tracr содержит SEQ ID NO: 6591. В некоторых аспектах первое удлинение tracr включает нуклеиновую кислоту, которая по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95% или 99% гомологична SEQ ID NO: 6591.

Некоторые или все нуклеотиды первого удлинения tracr могут быть модифицированы, например иметь модификации, описанные в разделе XIII настоящего описания.

В некоторых вариантах осуществления sgРНК может содержать от 5'до 3', 3’ к целевому домену:

a) GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6601);

b)

GUUUAAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6602);

c)

GUUUUAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6603);

d)

GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6604);

e) любую из вышерасположенных а) -d), дополнительно содержащую на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов;

f) любую из вышерасположенных а) -d), дополнительно содержащую на 3'-конце, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или

g) любую из вышерасположенных а) -f), дополнительно содержащую на 5'-конце (например 5' по отношению к целевому домену), по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов. В вариантах осуществления любая из последовательностей из вариантов выше а) -g) расположена непосредственно 3' по отношению к целевому домену.

В одном варианте осуществления sgРНК по изобретению включает, например, состоит из, от 5’ к 3’: [целевой домен] - GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7811).

В одном варианте осуществления sgРНК по изобретению включает, например, состоит из, от 5’ к 3’: [целевой домен] - GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807).

В некоторых вариантах осуществления dgРНК может содержать:

crРНК, содержащую от 5’до 3', предпочтительно расположенную непосредственно 3’к целевому домену:

a) GUUUUAGAGCUA (SEQ ID NO: 6584);

b) GUUUAAGAGCUA (SEQ ID NO: 6585);

c) GUUUUAGAGCUAUGCUG (SEQ ID NO: 6605);

d) GUUUAAGAGCUAUGCUG (SEQ ID NO: 6606);

e) GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6607);

f) GUUUAAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6608); или

g) GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806):

и tracr, содержащий от 5' к 3' :

a) UAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6589);

b) UAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6590);

c) CAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6609);

d) CAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 6610);

e) AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660);

f) AACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6661);

g) AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC (SEQ ID NO: 7812)

h) GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807);

i) AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7808);

j) GUUGGAACCAUUCAAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7809);

k) любой вариант из вышерасположенных a)-j), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 урациловых (U) нуклеотидов;

l) любой вариант из вышерасположенных a)-j), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов; или

m) любой вариант из вышерасположенных a)-l), дополнительно содержащий на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 адениновых (А) нуклеотидов.

В одном варианте осуществления последовательность k), приведённая выше, содержит 3'-последовательность UUUUUUU, например, если промотор U6 используется для транскрипции. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность UUUU, например, если для транскрипции используется промотор HI. В варианте осуществления последовательность k), приведённая выше, содержит различное количество 3' U, зависящее, например, от сигнала терминации используемого промотора полимеразы-III. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если используется промотор T7. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если для генерации молекулы РНК используется транскрипция in vitro. В варианте осуществления последовательность k), приведенная выше, содержит 3'-последовательность различной длины, полученную на ДНК-матрице, если для управления транскрипцией используется промотор полимеразы-II.

В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из SEQ ID NO: 6607 а tracr включает, например, AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660).

В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из SEQ ID NO: 6608, а tracr включает, например, состоит из AACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6661).

В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенный 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806), а tracr включает, например, состоит из GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 7807).

В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенному непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCU (SEQ ID NO: 7806), и tracr включает, например, состоит из AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7808).

В одном варианте осуществления crРНК включает, например, состоит из целевого домена и расположенной 3' к целевому домену (например, расположенной непосредственно 3' к целевому домену), последовательности, включающей, например, состоящей из GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 6607), а tracr включает, например, состоит из GUUGGAACCAUUCAAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU (SEQ ID NO: 7809).

II. Целевые домены, используемые для изменения экспрессии генов глобина

В приведенных ниже таблицах указаны целевые домены для молекул gРНК для использования в различных аспектах настоящего изобретения, например, для изменении экспрессии генов глобина, например гена фетального гемоглобина или гена бета-гемоглобина.

Таблица 1: целевые домены gРНК, нацеленные на области экзонов BLC11a гена.

Id. целевого домена	Цель	Область нацеливания	Цепь	Сайт нацеливания (hg38)	Целевой домен gРНК	SEQ ID NO:
53335_5_1	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451170-60451195	CAGUCAUUAUUUAUUAUGAAUAAGC	400
53335_5_2	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451196-60451221	GGAAAUAAUUCACAUGCCAAUUAUU	401
53335_5_3	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451217-60451242	UAUUUGGCUAUCUUUUCACUAAGCU	402
53335_5_4	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451233-60451258	CACUAAGCUAGGUAAUCUAGCCAGA	403
53335_5_5	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451236-60451261	UAAGCUAGGUAAUCUAGCCAGAAGG	404
53335_5_6	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451241-60451266	UAGGUAAUCUAGCCAGAAGGUGGAU	405
53335_5_7	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451245-60451270	UAAUCUAGCCAGAAGGUGGAUAGGU	406
53335_5_8	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451261-60451286	UGGAUAGGUAGGAUUUUCCCCACUU	407
53335_5_9	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451268-60451293	GUAGGAUUUUCCCCACUUAGGUUCA	408
53335_5_10	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451295-60451320	GCCUGUAUGUGAAUCUACAGCACAC	409
53335_5_11	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451359-60451384	UGCUAUGUUGUUUCUAAUUCUCUUC	410
53335_5_12	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451414-60451439	UGAGAAAAGUUCUGUGCAAAUUAAC	411
53335_5_13	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451415-60451440	GAGAAAAGUUCUGUGCAAAUUAACU	412
53335_5_14	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451462-60451487	CCUGUUUGUAGAUGUAACUUAUUUG	413
53335_5_15	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451477-60451502	AACUUAUUUGUGGCACUAAUUUCUA	414
53335_5_16	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451625-60451650	GUCUGCAUUAAGAUAUAUUUCCUGA	415
53335_5_17	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451630-60451655	CAUUAAGAUAUAUUUCCUGAAGGUU	416
53335_5_18	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451631-60451656	AUUAAGAUAUAUUUCCUGAAGGUUU	417
53335_5_19	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451687-60451712	ACUACUGACAUUUAUCACCUUCUUU	418
53335_5_20	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451754-60451779	UUAAAAGACAAAUUCAAAUCCUGCA	419
53335_5_21	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451786-60451811	CACCAAAAGCAUAUAUUUGAAAAAC	420
53335_5_22	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451792-60451817	AAGCAUAUAUUUGAAAAACAGGAUU	421
53335_5_23	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451819-60451844	GCGUGCCAUAUUAUGCAUUAUUUAA	422
53335_5_24	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451847-60451872	UAUGCAAAUUAUAAGUCAGACAGUU	423
53335_5_25	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60451971-60451996	UUGAAAAUUUAUGCCAUCUGAUAAG	424
53335_5_26	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452037-60452062	AAAUCUGUUCCUCCUACCCACCCGA	425
53335_5_27	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452038-60452063	AAUCUGUUCCUCCUACCCACCCGAU	426
53335_5_28	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452048-60452073	UCCUACCCACCCGAUGGGUGUCUGU	427
53335_5_29	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452055-60452080	CACCCGAUGGGUGUCUGUAGGAAAC	428
53335_5_30	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452203-60452228	AGACAACAUAGAAUGUAUAGAAACA	429
53335_5_31	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452204-60452229	GACAACAUAGAAUGUAUAGAAACAA	430
53335_5_32	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452205-60452230	ACAACAUAGAAUGUAUAGAAACAAG	431
53335_5_33	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452209-60452234	CAUAGAAUGUAUAGAAACAAGGGGU	432
53335_5_34	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452210-60452235	AUAGAAUGUAUAGAAACAAGGGGUU	433
53335_5_35	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452211-60452236	UAGAAUGUAUAGAAACAAGGGGUUG	434
53335_5_36	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452237-60452262	GGACUCAUGCGCAUUUCCACAAUAC	435
53335_5_37	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452245-60452270	GCGCAUUUCCACAAUACAGGUAAUU	436
53335_5_38	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452249-60452274	AUUUCCACAAUACAGGUAAUUAGGU	437
53335_5_39	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452253-60452278	CCACAAUACAGGUAAUUAGGUUGGC	438
53335_5_40	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452263-60452288	GGUAAUUAGGUUGGCUGGUUUCAGA	439
53335_5_41	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452264-60452289	GUAAUUAGGUUGGCUGGUUUCAGAA	440
53335_5_42	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452269-60452294	UAGGUUGGCUGGUUUCAGAAGGGCC	441
53335_5_43	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452270-60452295	AGGUUGGCUGGUUUCAGAAGGGCCA	442
53335_5_44	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452291-60452316	GCCAGGGCAUCACUCAUGACAGCGA	443
53335_5_45	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452298-60452323	CAUCACUCAUGACAGCGAUGGUCCA	444
53335_5_46	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452299-60452324	AUCACUCAUGACAGCGAUGGUCCAC	445
53335_5_47	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452311-60452336	AGCGAUGGUCCACGGGCCCUCUCUA	446
53335_5_48	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452312-60452337	GCGAUGGUCCACGGGCCCUCUCUAU	447
53335_5_49	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452335-60452360	AUGGGACUGAUUCACUGUUCCAAUG	448
53335_5_50	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452336-60452361	UGGGACUGAUUCACUGUUCCAAUGU	449
53335_5_51	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452383-60452408	UUUUUAUUAAAAAAUAUAAAUAAAA	450
53335_5_52	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452392-60452417	AAAAAUAUAAAUAAAAUGGCGCUGC	451
53335_5_53	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452398-60452423	AUAAAUAAAAUGGCGCUGCAGGCCU	452
53335_5_54	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452402-60452427	AUAAAAUGGCGCUGCAGGCCUAGGC	453
53335_5_55	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452406-60452431	AAUGGCGCUGCAGGCCUAGGCUGGA	454
53335_5_56	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452416-60452441	CAGGCCUAGGCUGGAAGGACUCUGC	455
53335_5_57	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452436-60452461	UCUGCAGGACUCUGUCUUCGCACAA	456
53335_5_58	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452444-60452469	ACUCUGUCUUCGCACAACGGCUUCU	457
53335_5_59	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452447-60452472	CUGUCUUCGCACAACGGCUUCUUGG	458
53335_5_60	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452478-60452503	CUGUCAGAAAACAUCACAAACUAGC	459
53335_5_61	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452505-60452530	GAUGACAGACCACGCUGACGUCGAC	460
53335_5_62	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452506-60452531	AUGACAGACCACGCUGACGUCGACU	461
53335_5_63	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452509-60452534	ACAGACCACGCUGACGUCGACUGGG	462
53335_5_64	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452531-60452556	GGGCGGCACGCGUCCACCCCACCCC	463
53335_5_65	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452532-60452557	GGCGGCACGCGUCCACCCCACCCCU	464
53335_5_66	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452533-60452558	GCGGCACGCGUCCACCCCACCCCUG	465
53335_5_67	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452534-60452559	CGGCACGCGUCCACCCCACCCCUGG	466
53335_5_68	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452559-60452584	GGGCUUCAAAUUUUCUCAGAACUUA	467
53335_5_69	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452560-60452585	GGCUUCAAAUUUUCUCAGAACUUAA	468
53335_5_70	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452607-60452632	AAACUGCCACACAUCUUGAGCUCUC	469
53335_5_71	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452608-60452633	AACUGCCACACAUCUUGAGCUCUCU	470
53335_5_72	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452623-60452648	UGAGCUCUCUGGGUACUACGCCGAA	471
53335_5_73	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452624-60452649	GAGCUCUCUGGGUACUACGCCGAAU	472
53335_5_74	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452625-60452650	AGCUCUCUGGGUACUACGCCGAAUG	473
53335_5_75	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452626-60452651	GCUCUCUGGGUACUACGCCGAAUGG	474
53335_5_76	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452649-60452674	GGGGGUGUGUGAAGAACCUAGAAAG	475
53335_5_77	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452653-60452678	GUGUGUGAAGAACCUAGAAAGAGGU	476
53335_5_78	BCL11a	Экзон 5	+	chr2:60452662-60452687	GAACCUAGAAAGAGGUUGGAGACAG	477
53335_5_79	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451215-60451240	CUUAGUGAAAAGAUAGCCAAAUAAU	478
53335_5_80	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451256-60451281	GGGAAAAUCCUACCUAUCCACCUUC	479
53335_5_81	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451281-60451306	CACAUACAGGCCGUGAACCUAAGUG	480
53335_5_82	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451282-60451307	UCACAUACAGGCCGUGAACCUAAGU	481
53335_5_83	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451283-60451308	UUCACAUACAGGCCGUGAACCUAAG	482
53335_5_84	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451299-60451324	ACCUGUGUGCUGUAGAUUCACAUAC	483
53335_5_85	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451350-60451375	UAGAAACAACAUAGCAAAUUAAAAU	484
53335_5_86	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451394-60451419	UCUCAGUUUGGUAUUUUUUACUGCU	485
53335_5_87	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451411-60451436	AAUUUGCACAGAACUUUUCUCAGUU	486
53335_5_88	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451446-60451471	ACAAACAGGUGGUAAAAAUUCUUUC	487
53335_5_89	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451462-60451487	CAAAUAAGUUACAUCUACAAACAGG	488
53335_5_90	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451465-60451490	CCACAAAUAAGUUACAUCUACAAAC	489
53335_5_91	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451552-60451577	GAUUUUAGAGGGGGGAAAUUAUAGG	490
53335_5_92	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451555-60451580	GCAGAUUUUAGAGGGGGGAAAUUAU	491
53335_5_93	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451565-60451590	GAAAUUUGGGGCAGAUUUUAGAGGG	492
53335_5_94	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451566-60451591	GGAAAUUUGGGGCAGAUUUUAGAGG	493
53335_5_95	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451567-60451592	AGGAAAUUUGGGGCAGAUUUUAGAG	494
53335_5_96	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451568-60451593	CAGGAAAUUUGGGGCAGAUUUUAGA	495
53335_5_97	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451569-60451594	UCAGGAAAUUUGGGGCAGAUUUUAG	496
53335_5_98	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451582-60451607	UUUAGUACUUACAUCAGGAAAUUUG	497
53335_5_99	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451583-60451608	CUUUAGUACUUACAUCAGGAAAUUU	498
53335_5_100	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451584-60451609	UCUUUAGUACUUACAUCAGGAAAUU	499
53335_5_101	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451592-60451617	AUAAAACUUCUUUAGUACUUACAUC	500
53335_5_102	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451648-60451673	UCUAAUUUUAGGUUCCCAAACCUUC	501
53335_5_103	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451664-60451689	GUUUCUUAUUAAAUAUUCUAAUUUU	502
53335_5_104	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451707-60451732	CUGGGCGAGCGGUAAAUCCUAAAGA	503
53335_5_105	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451723-60451748	UUAGGAAAGAACAUCACUGGGCGAG	504
53335_5_106	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451730-60451755	AUUUAGCUUAGGAAAGAACAUCACU	505
53335_5_107	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451731-60451756	AAUUUAGCUUAGGAAAGAACAUCAC	506
53335_5_108	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451746-60451771	UUGAAUUUGUCUUUUAAUUUAGCUU	507
53335_5_109	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451776-60451801	UAUAUGCUUUUGGUGGCUACCAUGC	508
53335_5_110	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451788-60451813	CUGUUUUUCAAAUAUAUGCUUUUGG	509
53335_5_111	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451791-60451816	AUCCUGUUUUUCAAAUAUAUGCUUU	510
53335_5_112	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451827-60451852	GCAUACCAUUAAAUAAUGCAUAAUA	511
53335_5_113	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451882-60451907	AUUGCUGUUUAUUAAUGCUGAAGUG	512
53335_5_114	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451949-60451974	CAAGGAGAAUCAAAAUGCAAAACUU	513
53335_5_115	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451950-60451975	UCAAGGAGAAUCAAAAUGCAAAACU	514
53335_5_116	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451972-60451997	GCUUAUCAGAUGGCAUAAAUUUUCA	515
53335_5_117	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60451987-60452012	GGGAACUAGGUUACCGCUUAUCAGA	516
53335_5_118	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452005-60452030	GGGCAGGAGAUGUAGGAGGGGAACU	517
53335_5_119	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452012-60452037	GAGAAAUGGGCAGGAGAUGUAGGAG	518
53335_5_120	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452013-60452038	UGAGAAAUGGGCAGGAGAUGUAGGA	519
53335_5_121	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452014-60452039	UUGAGAAAUGGGCAGGAGAUGUAGG	520
53335_5_122	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452017-60452042	GAUUUGAGAAAUGGGCAGGAGAUGU	521
53335_5_123	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452026-60452051	GGAGGAACAGAUUUGAGAAAUGGGC	522
53335_5_124	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452030-60452055	GGUAGGAGGAACAGAUUUGAGAAAU	523
53335_5_125	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452031-60452056	GGGUAGGAGGAACAGAUUUGAGAAA	524
53335_5_126	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452049-60452074	UACAGACACCCAUCGGGUGGGUAGG	525
53335_5_127	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452052-60452077	UCCUACAGACACCCAUCGGGUGGGU	526
53335_5_128	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452056-60452081	UGUUUCCUACAGACACCCAUCGGGU	527
53335_5_129	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452057-60452082	CUGUUUCCUACAGACACCCAUCGGG	528
53335_5_130	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452060-60452085	UACCUGUUUCCUACAGACACCCAUC	529
53335_5_131	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452061-60452086	GUACCUGUUUCCUACAGACACCCAU	530
53335_5_132	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452111-60452136	AAUUUUUAAUGCUUAUAAGACAAUG	531
53335_5_133	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452155-60452180	ACACAAUAAAUGUUGGAGCUUUAGG	532
53335_5_134	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452158-60452183	UUGACACAAUAAAUGUUGGAGCUUU	533
53335_5_135	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452167-60452192	UGCUUAACAUUGACACAAUAAAUGU	534
53335_5_136	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452256-60452281	CCAGCCAACCUAAUUACCUGUAUUG	535
53335_5_137	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452295-60452320	ACCAUCGCUGUCAUGAGUGAUGCCC	536
53335_5_138	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452323-60452348	GAAUCAGUCCCAUAGAGAGGGCCCG	537
53335_5_139	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452330-60452355	GAACAGUGAAUCAGUCCCAUAGAGA	538
53335_5_140	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452331-60452356	GGAACAGUGAAUCAGUCCCAUAGAG	539
53335_5_141	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452357-60452382	UAAAAACAAAAAAACAGACCCACAU	540
53335_5_142	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452423-60452448	GAGUCCUGCAGAGUCCUUCCAGCCU	541
53335_5_143	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452517-60452542	GCGUGCCGCCCAGUCGACGUCAGCG	542
53335_5_144	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452547-60452572	AAAUUUGAAGCCCCCAGGGGUGGGG	543
53335_5_145	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452550-60452575	AGAAAAUUUGAAGCCCCCAGGGGUG	544
53335_5_146	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452551-60452576	GAGAAAAUUUGAAGCCCCCAGGGGU	545
53335_5_147	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452552-60452577	UGAGAAAAUUUGAAGCCCCCAGGGG	546
53335_5_148	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452555-60452580	UUCUGAGAAAAUUUGAAGCCCCCAG	547
53335_5_149	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452556-60452581	GUUCUGAGAAAAUUUGAAGCCCCCA	548
53335_5_150	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452557-60452582	AGUUCUGAGAAAAUUUGAAGCCCCC	549
53335_5_151	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452602-60452627	CUCAAGAUGUGUGGCAGUUUUCGGA	550
53335_5_152	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452606-60452631	AGAGCUCAAGAUGUGUGGCAGUUUU	551
53335_5_153	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452616-60452641	UAGUACCCAGAGAGCUCAAGAUGUG	552
53335_5_154	BCL11a	Экзон 5	-	chr2:60452646-60452671	UCUAGGUUCUUCACACACCCCCAUU	553
53335_4_1	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457199-60457224	UUAAUUUUUUUUAUUUUUUCAAUAA	554
53335_4_2	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457200-60457225	UAAUUUUUUUUAUUUUUUCAAUAAA	555
53335_4_3	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457209-60457234	UUAUUUUUUCAAUAAAGGGACAAAA	556
53335_4_4	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457210-60457235	UAUUUUUUCAAUAAAGGGACAAAAU	557
53335_4_5	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457222-60457247	AAAGGGACAAAAUGGGUGUAUGAAC	558
53335_4_6	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457259-60457284	ACAACUGCCAAAAAAACACAGACAG	559
53335_4_7	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457312-60457337	CCAGAAACAAAUACAAUAAAAAGCC	560
53335_4_8	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457328-60457353	UAAAAAGCCAGGUUGUAAUGACCUU	561
53335_4_9	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457401-60457426	CAAAUUAAGUGCCUCUGUUUUGAAC	562
53335_4_10	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457402-60457427	AAAUUAAGUGCCUCUGUUUUGAACA	563
53335_4_11	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457480-60457505	AGUUACGACAAACAGCUUUCAUUAC	564
53335_4_12	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457491-60457516	ACAGCUUUCAUUACAGGAAUAGAAA	565
53335_4_13	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457545-60457570	AUUUACAAAAAAGUAUUGACUAAAG	566
53335_4_14	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457546-60457571	UUUACAAAAAAGUAUUGACUAAAGC	567
53335_4_15	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457616-60457641	UAAAUAUAAAGCACCAUUUAGUUUU	568
53335_4_16	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457642-60457667	GGCAAUGAAAAAAACUGCAAAACAU	569
53335_4_17	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457695-60457720	UCUUUCUUUCUUUUACUGCAUAUGA	570
53335_4_18	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457706-60457731	UUUACUGCAUAUGAAGGUAAGAUGC	571
53335_4_19	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457714-60457739	AUAUGAAGGUAAGAUGCUGGAAUGU	572
53335_4_20	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457715-60457740	UAUGAAGGUAAGAUGCUGGAAUGUA	573
53335_4_21	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457725-60457750	AGAUGCUGGAAUGUAGGGUGAUAGA	574
53335_4_22	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457730-60457755	CUGGAAUGUAGGGUGAUAGAAGGAA	575
53335_4_23	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457731-60457756	UGGAAUGUAGGGUGAUAGAAGGAAA	576
53335_4_24	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457792-60457817	UUAGCUUGCAGUACUGCAUACAGUA	577
53335_4_25	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457799-60457824	GCAGUACUGCAUACAGUAUGGCAGC	578
53335_4_26	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457806-60457831	UGCAUACAGUAUGGCAGCAGGAAAA	579
53335_4_27	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457817-60457842	UGGCAGCAGGAAAAAGGAACAAAAA	580
53335_4_28	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457863-60457888	ACAGCCAUCCAUGUGACAUUCUAGC	581
53335_4_29	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457887-60457912	CAGGCUCCCCCAAACCGCCAUUAUA	582
53335_4_30	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60457996-60458021	CCUGCCAAAUUAAAAAAAUAUACUG	583
53335_4_31	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458031-60458056	UCUUUUUUUUUUCCACUACCAAAAA	584
53335_4_32	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458178-60458203	AAAGACCAUAAAUGUAUUUUAGCAU	585
53335_4_33	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458274-60458299	UUUUUUUUUUUUACAACCUGAAGAG	586
53335_4_34	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458287-60458312	CAACCUGAAGAGCGGUGUGUAUCCA	587
53335_4_35	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458317-60458342	UAGAAUUUCCACUACCAUUUUUAAA	588
53335_4_36	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458350-60458375	AAGUCUUGUAACACCACCAAGACAA	589
53335_4_37	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458564-60458589	UAAGUAAGCUCAAUAGUCAAGUAAA	590
53335_4_38	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458568-60458593	UAAGCUCAAUAGUCAAGUAAAUGGC	591
53335_4_39	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458677-60458702	UUCCCUUAAGUAUAGACCUGUAAAC	592
53335_4_40	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458678-60458703	UCCCUUAAGUAUAGACCUGUAAACU	593
53335_4_41	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458717-60458742	GUGCACUUAAUUGUCCUAUCUGAGC	594
53335_4_42	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458775-60458800	AUUAGAGAAAAGAUACAGAUAUCAC	595
53335_4_43	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458806-60458831	AGUCAAGUGCUAUUUGAACACCAAC	596
53335_4_44	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458807-60458832	GUCAAGUGCUAUUUGAACACCAACU	597
53335_4_45	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458808-60458833	UCAAGUGCUAUUUGAACACCAACUG	598
53335_4_46	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458904-60458929	GUUAACACAAAUAGCACACAGUGUA	599
53335_4_47	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458930-60458955	GGAAAAGAAAUGAAGUACAACUUUU	600
53335_4_48	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60458931-60458956	GAAAAGAAAUGAAGUACAACUUUUA	601
53335_4_49	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459074-60459099	CUUAUAUACCUGUUCUAGUUUUAAA	602
53335_4_50	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459165-60459190	UAUUGUCAGCCUCUUCCUUUCAAUA	603
53335_4_51	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459174-60459199	CCUCUUCCUUUCAAUAUGGUAUACA	604
53335_4_52	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459223-60459248	UGUCCACUUGACAACCAAGUAGAUC	605
53335_4_53	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459238-60459263	CAAGUAGAUCUGGAUCUAUUUCUUU	606
53335_4_54	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459322-60459347	UUACUAGUGUAUUUAAUUGCGUUCC	607
53335_4_55	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459323-60459348	UACUAGUGUAUUUAAUUGCGUUCCA	608
53335_4_56	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459378-60459403	UCAUUGUUUAAAAAAAAUAAAACUU	609
53335_4_57	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459379-60459404	CAUUGUUUAAAAAAAAUAAAACUUU	610
53335_4_58	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459413-60459438	AGCCCAUUUCUUUUAAGCUCUCACC	611
53335_4_59	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459435-60459460	ACCAGGAGCAAAGUAGCUUUUAUAC	612
53335_4_60	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459470-60459495	AGUUUUGUUUAUAAAAUUAAACUAA	613
53335_4_61	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459490-60459515	ACUAAAGGAAAAAUGAUGAUUAACU	614
53335_4_62	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459499-60459524	AAAAUGAUGAUUAACUAGGACAUAA	615
53335_4_63	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459500-60459525	AAAUGAUGAUUAACUAGGACAUAAU	616
53335_4_64	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459513-60459538	CUAGGACAUAAUGGGUCAUCUUUUU	617
53335_4_65	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459564-60459589	AUAUAGAAUUAUAUGCUAGUUCCUA	618
53335_4_66	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459632-60459657	UAACAAGUAGAAAGAACCAUCGAUG	619
53335_4_67	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459649-60459674	CAUCGAUGUGGUUUUAAUAGAUCCA	620
53335_4_68	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459718-60459743	GUUUUUCUGUUAAUUUGUCAAUUCA	621
53335_4_69	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459818-60459843	UCAGUGCUAUCUAUUCUGUCUAUAG	622
53335_4_70	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459819-60459844	CAGUGCUAUCUAUUCUGUCUAUAGA	623
53335_4_71	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459900-60459925	UAUGUAUUACAGAAUGUAUGCAGCA	624
53335_4_72	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459937-60459962	CUCUCUCUCUCUUUUUCUCUCAGAA	625
53335_4_73	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459943-60459968	CUCUCUUUUUCUCUCAGAACGGAAC	626
53335_4_74	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459977-60460002	CAACAUGUUUGCUCAGCAACGAAUU	627
53335_4_75	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60459978-60460003	AACAUGUUUGCUCAGCAACGAAUUA	628
53335_4_76	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460068-60460093	ACAUGUAAAUUAUUGCACAAGAGAA	629
53335_4_77	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460126-60460151	GCCCCAUACAGAUCAUGCAUUCAAA	630
53335_4_78	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460140-60460165	AUGCAUUCAAACGGUGAGAACAUAA	631
53335_4_79	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460193-60460218	AAAGAAAAAGAAAAAGAAAAAAAAC	632
53335_4_80	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460201-60460226	AGAAAAAGAAAAAAAACAGGUGUGC	633
53335_4_81	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460269-60460294	UGUUUGUUUGUUUGUUUAAAUCACA	634
53335_4_82	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460270-60460295	GUUUGUUUGUUUGUUUAAAUCACAU	635
53335_4_83	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460291-60460316	ACAUGGGACUAGAAAAAAAUCCUAC	636
53335_4_84	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460292-60460317	CAUGGGACUAGAAAAAAAUCCUACA	637
53335_4_85	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460297-60460322	GACUAGAAAAAAAUCCUACAGGGAG	638
53335_4_86	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460298-60460323	ACUAGAAAAAAAUCCUACAGGGAGU	639
53335_4_87	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460299-60460324	CUAGAAAAAAAUCCUACAGGGAGUG	640
53335_4_88	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460303-60460328	AAAAAAAUCCUACAGGGAGUGGGGC	641
53335_4_89	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460306-60460331	AAAAUCCUACAGGGAGUGGGGCUGG	642
53335_4_90	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460307-60460332	AAAUCCUACAGGGAGUGGGGCUGGA	643
53335_4_91	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460313-60460338	UACAGGGAGUGGGGCUGGAGGGCGA	644
53335_4_92	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460314-60460339	ACAGGGAGUGGGGCUGGAGGGCGAU	645
53335_4_93	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460315-60460340	CAGGGAGUGGGGCUGGAGGGCGAUG	646
53335_4_94	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460319-60460344	GAGUGGGGCUGGAGGGCGAUGGGGA	647
53335_4_95	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460320-60460345	AGUGGGGCUGGAGGGCGAUGGGGAA	648
53335_4_96	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460321-60460346	GUGGGGCUGGAGGGCGAUGGGGAAG	649
53335_4_97	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460326-60460351	GCUGGAGGGCGAUGGGGAAGGGGAG	650
53335_4_98	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460335-60460360	CGAUGGGGAAGGGGAGUGGUGAAAA	651
53335_4_99	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460336-60460361	GAUGGGGAAGGGGAGUGGUGAAAAA	652
53335_4_100	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460337-60460362	AUGGGGAAGGGGAGUGGUGAAAAAG	653
53335_4_101	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460338-60460363	UGGGGAAGGGGAGUGGUGAAAAAGG	654
53335_4_102	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460345-60460370	GGGGAGUGGUGAAAAAGGGGGUGUC	655
53335_4_103	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460348-60460373	GAGUGGUGAAAAAGGGGGUGUCAGG	656
53335_4_104	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460349-60460374	AGUGGUGAAAAAGGGGGUGUCAGGU	657
53335_4_105	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460356-60460381	AAAAAGGGGGUGUCAGGUGGGAGUG	658
53335_4_106	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460357-60460382	AAAAGGGGGUGUCAGGUGGGAGUGA	659
53335_4_107	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460360-60460385	AGGGGGUGUCAGGUGGGAGUGAGGG	660
53335_4_108	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460361-60460386	GGGGGUGUCAGGUGGGAGUGAGGGA	661
53335_4_109	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460362-60460387	GGGGUGUCAGGUGGGAGUGAGGGAG	662
53335_4_110	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460442-60460467	GUGCCAUUUUUUCAUGUGUUUCUCC	663
53335_4_111	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460443-60460468	UGCCAUUUUUUCAUGUGUUUCUCCA	664
53335_4_112	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460462-60460487	UCUCCAGGGUACUGUACACGCUAAA	665
53335_4_113	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460505-60460530	ACAUUUGUAAACGUCCUUCCCCACC	666
53335_4_114	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460527-60460552	ACCUGGCCAUGCGUUUUCAUGUGCC	667
53335_4_115	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460544-60460569	CAUGUGCCUGGUGAGCUUGCUACUC	668
53335_4_116	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460545-60460570	AUGUGCCUGGUGAGCUUGCUACUCU	669
53335_4_117	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460551-60460576	CUGGUGAGCUUGCUACUCUGGGCAC	670
53335_4_118	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460579-60460604	CAUAGUUGCACAGCUCGCAUUUAUA	671
53335_4_119	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460595-60460620	GCAUUUAUAAGGCCUUUCGCCCGUG	672
53335_4_120	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460607-60460632	CCUUUCGCCCGUGUGGCUUCUCCUG	673
53335_4_121	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460686-60460711	UCGCUGCGUCUGCCCUCUUUUGAGC	674
53335_4_122	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460687-60460712	CGCUGCGUCUGCCCUCUUUUGAGCU	675
53335_4_123	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460696-60460721	UGCCCUCUUUUGAGCUGGGCCUGCC	676
53335_4_124	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460697-60460722	GCCCUCUUUUGAGCUGGGCCUGCCC	677
53335_4_125	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460702-60460727	CUUUUGAGCUGGGCCUGCCCGGGCC	678
53335_4_126	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460715-60460740	CCUGCCCGGGCCCGGACCACUAAUA	679
53335_4_127	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460716-60460741	CUGCCCGGGCCCGGACCACUAAUAU	680
53335_4_128	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460717-60460742	UGCCCGGGCCCGGACCACUAAUAUG	681
53335_4_129	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460776-60460801	CCCGAGAUCCCUCCGUCCAGCUCCC	682
53335_4_130	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460777-60460802	CCGAGAUCCCUCCGUCCAGCUCCCC	683
53335_4_131	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460780-60460805	AGAUCCCUCCGUCCAGCUCCCCGGG	684
53335_4_132	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460785-60460810	CCUCCGUCCAGCUCCCCGGGCGGUG	685
53335_4_133	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460812-60460837	GAGAAGCGCAAACUCCCGUUCUCCG	686
53335_4_134	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460827-60460852	CCGUUCUCCGAGGAGUGCUCCGACG	687
53335_4_135	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460830-60460855	UUCUCCGAGGAGUGCUCCGACGAGG	688
53335_4_136	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460837-60460862	AGGAGUGCUCCGACGAGGAGGCAAA	689
53335_4_137	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460848-60460873	GACGAGGAGGCAAAAGGCGAUUGUC	690
53335_4_138	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460865-60460890	CGAUUGUCUGGAGUCUCCGAAGCUA	691
53335_4_139	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460869-60460894	UGUCUGGAGUCUCCGAAGCUAAGGA	692
53335_4_140	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460870-60460895	GUCUGGAGUCUCCGAAGCUAAGGAA	693
53335_4_141	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460887-60460912	CUAAGGAAGGGAUCUUUGAGCUGCC	694
53335_4_142	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460890-60460915	AGGAAGGGAUCUUUGAGCUGCCUGG	695
53335_4_143	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460902-60460927	UUGAGCUGCCUGGAGGCCGCGUAGC	696
53335_4_144	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460935-60460960	CACUGCGAGUACACGUUCUCCGUGU	697
53335_4_145	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460936-60460961	ACUGCGAGUACACGUUCUCCGUGUU	698
53335_4_146	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460944-60460969	UACACGUUCUCCGUGUUGGGCAUCG	699
53335_4_147	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460948-60460973	CGUUCUCCGUGUUGGGCAUCGCGGC	700
53335_4_148	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460949-60460974	GUUCUCCGUGUUGGGCAUCGCGGCC	701
53335_4_149	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460950-60460975	UUCUCCGUGUUGGGCAUCGCGGCCG	702
53335_4_150	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460951-60460976	UCUCCGUGUUGGGCAUCGCGGCCGG	703
53335_4_151	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460955-60460980	CGUGUUGGGCAUCGCGGCCGGGGGC	704
53335_4_152	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460992-60461017	UUCUCGAGCUUGAUGCGCUUAGAGA	705
53335_4_153	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460993-60461018	UCUCGAGCUUGAUGCGCUUAGAGAA	706
53335_4_154	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60460994-60461019	CUCGAGCUUGAUGCGCUUAGAGAAG	707
53335_4_155	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461007-60461032	CGCUUAGAGAAGGGGCUCAGCGAGC	708
53335_4_156	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461008-60461033	GCUUAGAGAAGGGGCUCAGCGAGCU	709
53335_4_157	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461009-60461034	CUUAGAGAAGGGGCUCAGCGAGCUG	710
53335_4_158	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461031-60461056	CUGGGGCUGCCCAGCAGCAGCUUUU	711
53335_4_159	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461036-60461061	GCUGCCCAGCAGCAGCUUUUUGGAC	712
53335_4_160	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461046-60461071	AGCAGCUUUUUGGACAGGCCCCCCG	713
53335_4_161	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461059-60461084	ACAGGCCCCCCGAGGCCGACUCGCC	714
53335_4_162	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461060-60461085	CAGGCCCCCCGAGGCCGACUCGCCC	715
53335_4_163	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461061-60461086	AGGCCCCCCGAGGCCGACUCGCCCG	716
53335_4_164	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461072-60461097	GGCCGACUCGCCCGGGGAGCAGCCG	717
53335_4_165	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461099-60461124	GCCAUUAACAGUGCCAUCGUCUAUG	718
53335_4_166	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461112-60461137	CCAUCGUCUAUGCGGUCCGACUCGC	719
53335_4_167	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461144-60461169	CGAGUCUUCGUCGCAAGUGUCCCUG	720
53335_4_168	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461151-60461176	UCGUCGCAAGUGUCCCUGUGGCCCU	721
53335_4_169	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461157-60461182	CAAGUGUCCCUGUGGCCCUCGGCCU	722
53335_4_170	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461162-60461187	GUCCCUGUGGCCCUCGGCCUCGGCC	723
53335_4_171	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461165-60461190	CCUGUGGCCCUCGGCCUCGGCCAGG	724
53335_4_172	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461189-60461214	GUGGCCGCGCUUAUGCUUCUCGCCC	725
53335_4_173	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461195-60461220	GCGCUUAUGCUUCUCGCCCAGGACC	726
53335_4_174	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461198-60461223	CUUAUGCUUCUCGCCCAGGACCUGG	727
53335_4_175	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461202-60461227	UGCUUCUCGCCCAGGACCUGGUGGA	728
53335_4_176	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461223-60461248	UGGAAGGCCUCGCUGAAGUGCUGCA	729
53335_4_177	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461253-60461278	CUGAGCACCAUGCCCUGCAUGACGU	730
53335_4_178	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461254-60461279	UGAGCACCAUGCCCUGCAUGACGUC	731
53335_4_179	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461258-60461283	CACCAUGCCCUGCAUGACGUCGGGC	732
53335_4_180	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461259-60461284	ACCAUGCCCUGCAUGACGUCGGGCA	733
53335_4_181	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461264-60461289	GCCCUGCAUGACGUCGGGCAGGGCG	734
53335_4_182	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461312-60461337	GACCGCGCCCCGCGAGCUGUUCUCG	735
53335_4_183	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461315-60461340	CGCGCCCCGCGAGCUGUUCUCGUGG	736
53335_4_184	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461330-60461355	GUUCUCGUGGUGGCGCGCCGCCUCC	737
53335_4_185	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461446-60461471	CCUCUUCCUCCUCGUCCCCGUUCUC	738
53335_4_186	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461447-60461472	CUCUUCCUCCUCGUCCCCGUUCUCC	739
53335_4_187	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461453-60461478	CUCCUCGUCCCCGUUCUCCGGGAUC	740
53335_4_188	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461457-60461482	UCGUCCCCGUUCUCCGGGAUCAGGU	741
53335_4_189	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461458-60461483	CGUCCCCGUUCUCCGGGAUCAGGUU	742
53335_4_190	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461459-60461484	GUCCCCGUUCUCCGGGAUCAGGUUG	743
53335_4_191	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461481-60461506	UUGGGGUCGUUCUCGCUCUUGAACU	744
53335_4_192	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461490-60461515	UUCUCGCUCUUGAACUUGGCCACCA	745
53335_4_193	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461508-60461533	GCCACCACGGACUUGAGCGCGCUGC	746
53335_4_194	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461529-60461554	CUGCUGGCGCUGCCCACCAAGUCGC	747
53335_4_195	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461535-60461560	GCGCUGCCCACCAAGUCGCUGGUGC	748
53335_4_196	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461536-60461561	CGCUGCCCACCAAGUCGCUGGUGCC	749
53335_4_197	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461542-60461567	CCACCAAGUCGCUGGUGCCGGGUUC	750
53335_4_198	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461543-60461568	CACCAAGUCGCUGGUGCCGGGUUCC	751
53335_4_199	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461544-60461569	ACCAAGUCGCUGGUGCCGGGUUCCG	752
53335_4_200	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461550-60461575	UCGCUGGUGCCGGGUUCCGGGGAGC	753
53335_4_201	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461553-60461578	CUGGUGCCGGGUUCCGGGGAGCUGG	754
53335_4_202	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461556-60461581	GUGCCGGGUUCCGGGGAGCUGGCGG	755
53335_4_203	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461571-60461596	GAGCUGGCGGUGGAGAGACCGUCGU	756
53335_4_204	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461586-60461611	AGACCGUCGUCGGACUUGACCGUCA	757
53335_4_205	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461587-60461612	GACCGUCGUCGGACUUGACCGUCAU	758
53335_4_206	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461588-60461613	ACCGUCGUCGGACUUGACCGUCAUG	759
53335_4_207	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461589-60461614	CCGUCGUCGGACUUGACCGUCAUGG	760
53335_4_208	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461618-60461643	CGAUUUGUGCAUGUGCGUCUUCAUG	761
53335_4_209	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461634-60461659	GUCUUCAUGUGGCGCUUCAGCUUGC	762
53335_4_210	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461639-60461664	CAUGUGGCGCUUCAGCUUGCUGGCC	763
53335_4_211	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461640-60461665	AUGUGGCGCUUCAGCUUGCUGGCCU	764
53335_4_212	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461651-60461676	CAGCUUGCUGGCCUGGGUGCACGCG	765
53335_4_213	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461660-60461685	GGCCUGGGUGCACGCGUGGUCGCAC	766
53335_4_214	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461673-60461698	GCGUGGUCGCACAGGUUGCACUUGU	767
53335_4_215	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461674-60461699	CGUGGUCGCACAGGUUGCACUUGUA	768
53335_4_216	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461690-60461715	GCACUUGUAGGGCUUCUCGCCCGUG	769
53335_4_217	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461699-60461724	GGGCUUCUCGCCCGUGUGGCUGCGC	770
53335_4_218	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461711-60461736	CGUGUGGCUGCGCCGGUGCACCACC	771
53335_4_219	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461757-60461782	GUCUUGCCGCAGAACUCGCAUGACU	772
53335_4_220	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461767-60461792	AGAACUCGCAUGACUUGGACUUGAC	773
53335_4_221	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461768-60461793	GAACUCGCAUGACUUGGACUUGACC	774
53335_4_222	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461769-60461794	AACUCGCAUGACUUGGACUUGACCG	775
53335_4_223	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461770-60461795	ACUCGCAUGACUUGGACUUGACCGG	776
53335_4_224	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461774-60461799	GCAUGACUUGGACUUGACCGGGGGC	777
53335_4_225	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461775-60461800	CAUGACUUGGACUUGACCGGGGGCU	778
53335_4_226	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461778-60461803	GACUUGGACUUGACCGGGGGCUGGG	779
53335_4_227	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461779-60461804	ACUUGGACUUGACCGGGGGCUGGGA	780
53335_4_228	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461782-60461807	UGGACUUGACCGGGGGCUGGGAGGG	781
53335_4_229	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461785-60461810	ACUUGACCGGGGGCUGGGAGGGAGG	782
53335_4_230	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461786-60461811	CUUGACCGGGGGCUGGGAGGGAGGA	783
53335_4_231	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461787-60461812	UUGACCGGGGGCUGGGAGGGAGGAG	784
53335_4_232	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461790-60461815	ACCGGGGGCUGGGAGGGAGGAGGGG	785
53335_4_233	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461800-60461825	GGGAGGGAGGAGGGGCGGAUUGCAG	786
53335_4_234	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461803-60461828	AGGGAGGAGGGGCGGAUUGCAGAGG	787
53335_4_235	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461804-60461829	GGGAGGAGGGGCGGAUUGCAGAGGA	788
53335_4_236	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461807-60461832	AGGAGGGGCGGAUUGCAGAGGAGGG	789
53335_4_237	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461808-60461833	GGAGGGGCGGAUUGCAGAGGAGGGA	790
53335_4_238	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461809-60461834	GAGGGGCGGAUUGCAGAGGAGGGAG	791
53335_4_239	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461810-60461835	AGGGGCGGAUUGCAGAGGAGGGAGG	792
53335_4_240	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461811-60461836	GGGGCGGAUUGCAGAGGAGGGAGGG	793
53335_4_241	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461812-60461837	GGGCGGAUUGCAGAGGAGGGAGGGG	794
53335_4_242	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461822-60461847	CAGAGGAGGGAGGGGGGGCGUCGCC	795
53335_4_243	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461826-60461851	GGAGGGAGGGGGGGCGUCGCCAGGA	796
53335_4_244	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461827-60461852	GAGGGAGGGGGGGCGUCGCCAGGAA	797
53335_4_245	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461830-60461855	GGAGGGGGGGCGUCGCCAGGAAGGG	798
53335_4_246	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461842-60461867	UCGCCAGGAAGGGCGGCUUGCUACC	799
53335_4_247	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461846-60461871	CAGGAAGGGCGGCUUGCUACCUGGC	800
53335_4_248	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461851-60461876	AGGGCGGCUUGCUACCUGGCUGGAA	801
53335_4_249	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461872-60461897	GGAAUGGUUGCAGUAACCUUUGCAU	802
53335_4_250	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461873-60461898	GAAUGGUUGCAGUAACCUUUGCAUA	803
53335_4_251	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461877-60461902	GGUUGCAGUAACCUUUGCAUAGGGC	804
53335_4_252	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461878-60461903	GUUGCAGUAACCUUUGCAUAGGGCU	805
53335_4_253	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461882-60461907	CAGUAACCUUUGCAUAGGGCUGGGC	806
53335_4_254	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461887-60461912	ACCUUUGCAUAGGGCUGGGCCGGCC	807
53335_4_255	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461888-60461913	CCUUUGCAUAGGGCUGGGCCGGCCU	808
53335_4_256	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461889-60461914	CUUUGCAUAGGGCUGGGCCGGCCUG	809
53335_4_257	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461896-60461921	UAGGGCUGGGCCGGCCUGGGGACAG	810
53335_4_258	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461899-60461924	GGCUGGGCCGGCCUGGGGACAGCGG	811
53335_4_259	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461900-60461925	GCUGGGCCGGCCUGGGGACAGCGGU	812
53335_4_260	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461949-60461974	UCUCUAAGUCUCCUAGAGAAAUCCA	813
53335_4_261	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461952-60461977	CUAAGUCUCCUAGAGAAAUCCAUGG	814
53335_4_262	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461953-60461978	UAAGUCUCCUAGAGAAAUCCAUGGC	815
53335_4_263	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461956-60461981	GUCUCCUAGAGAAAUCCAUGGCGGG	816
53335_4_264	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461971-60461996	CCAUGGCGGGAGGCUCCAUAGCCAU	817
53335_4_265	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60461997-60462022	GGAUUCAACCGCAGCACCCUGUCAA	818
53335_4_266	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462004-60462029	ACCGCAGCACCCUGUCAAAGGCACU	819
53335_4_267	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462005-60462030	CCGCAGCACCCUGUCAAAGGCACUC	820
53335_4_268	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462011-60462036	CACCCUGUCAAAGGCACUCGGGUGA	821
53335_4_269	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462012-60462037	ACCCUGUCAAAGGCACUCGGGUGAU	822
53335_4_270	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462015-60462040	CUGUCAAAGGCACUCGGGUGAUGGG	823
53335_4_271	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462020-60462045	AAAGGCACUCGGGUGAUGGGUGGCC	824
53335_4_272	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462021-60462046	AAGGCACUCGGGUGAUGGGUGGCCA	825
53335_4_273	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462041-60462066	GGCCAGGGCCAUCUCUUCCGCCCCC	826
53335_4_274	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462053-60462078	CUCUUCCGCCCCCAGGCGCUCUAUG	827
53335_4_275	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462056-60462081	UUCCGCCCCCAGGCGCUCUAUGCGG	828
53335_4_276	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462057-60462082	UCCGCCCCCAGGCGCUCUAUGCGGU	829
53335_4_277	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462058-60462083	CCGCCCCCAGGCGCUCUAUGCGGUG	830
53335_4_278	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462059-60462084	CGCCCCCAGGCGCUCUAUGCGGUGG	831
53335_4_279	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462076-60462101	UGCGGUGGGGGUCCAAGUGAUGUCU	832
53335_4_280	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462079-60462104	GGUGGGGGUCCAAGUGAUGUCUCGG	833
53335_4_281	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462082-60462107	GGGGGUCCAAGUGAUGUCUCGGUGG	834
53335_4_282	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462092-60462117	GUGAUGUCUCGGUGGUGGACUAAAC	835
53335_4_283	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462093-60462118	UGAUGUCUCGGUGGUGGACUAAACA	836
53335_4_284	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462094-60462119	GAUGUCUCGGUGGUGGACUAAACAG	837
53335_4_285	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462095-60462120	AUGUCUCGGUGGUGGACUAAACAGG	838
53335_4_286	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462096-60462121	UGUCUCGGUGGUGGACUAAACAGGG	839
53335_4_287	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462097-60462122	GUCUCGGUGGUGGACUAAACAGGGG	840
53335_4_288	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462102-60462127	GGUGGUGGACUAAACAGGGGGGGAG	841
53335_4_289	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462103-60462128	GUGGUGGACUAAACAGGGGGGGAGU	842
53335_4_290	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462106-60462131	GUGGACUAAACAGGGGGGGAGUGGG	843
53335_4_291	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462125-60462150	AGUGGGUGGAAAGCGCCCUUCUGCC	844
53335_4_292	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462129-60462154	GGUGGAAAGCGCCCUUCUGCCAGGC	845
53335_4_293	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462154-60462179	CGGAAGCCUCUCUCGAUACUGAUCC	846
53335_4_294	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462167-60462192	CGAUACUGAUCCUGGUAUUCUUAGC	847
53335_4_295	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462174-60462199	GAUCCUGGUAUUCUUAGCAGGUUAA	848
53335_4_296	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462175-60462200	AUCCUGGUAUUCUUAGCAGGUUAAA	849
53335_4_297	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462176-60462201	UCCUGGUAUUCUUAGCAGGUUAAAG	850
53335_4_298	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462203-60462228	GUUAUUGUCUGCAAUAUGAAUCCCA	851
53335_4_299	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462208-60462233	UGUCUGCAAUAUGAAUCCCAUGGAG	852
53335_4_300	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462211-60462236	CUGCAAUAUGAAUCCCAUGGAGAGG	853
53335_4_301	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462215-60462240	AAUAUGAAUCCCAUGGAGAGGUGGC	854
53335_4_302	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462216-60462241	AUAUGAAUCCCAUGGAGAGGUGGCU	855
53335_4_303	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462220-60462245	GAAUCCCAUGGAGAGGUGGCUGGGA	856
53335_4_304	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462244-60462269	AAGGACAUUCUGCACCUAGUCCUGA	857
53335_4_305	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462245-60462270	AGGACAUUCUGCACCUAGUCCUGAA	858
53335_4_306	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462259-60462284	CUAGUCCUGAAGGGAUACCAACCCG	859
53335_4_307	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462260-60462285	UAGUCCUGAAGGGAUACCAACCCGC	860
53335_4_308	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462261-60462286	AGUCCUGAAGGGAUACCAACCCGCG	861
53335_4_309	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462266-60462291	UGAAGGGAUACCAACCCGCGGGGUC	862
53335_4_310	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462267-60462292	GAAGGGAUACCAACCCGCGGGGUCA	863
53335_4_311	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462268-60462293	AAGGGAUACCAACCCGCGGGGUCAG	864
53335_4_312	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462345-60462370	GCGUGUUGCAAGAGAAACCAUGCAC	865
53335_4_313	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462352-60462377	GCAAGAGAAACCAUGCACUGGUGAA	866
53335_4_314	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462384-60462409	UUGCAAGUUGUACAUGUGUAGCUGC	867
53335_4_315	BCL11a	Экзон 4	+	chr2:60462385-60462410	UGCAAGUUGUACAUGUGUAGCUGCU	868
53335_4_316	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457269-60457294	GGAAAAACCACUGUCUGUGUUUUUU	869
53335_4_317	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457295-60457320	GUUUCUGGUCUUUGUUAAGUUCUAU	870
53335_4_318	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457315-60457340	CCUGGCUUUUUAUUGUAUUUGUUUC	871
53335_4_319	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457338-60457363	AAGAUGACCAAAGGUCAUUACAACC	872
53335_4_320	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457352-60457377	AAAAAAAAAAAUAAAAGAUGACCAA	873
53335_4_321	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457415-60457440	UGCUUAUGUGCCCUGUUCAAAACAG	874
53335_4_322	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457459-60457484	AACUUGAAAUUUUAUCUUUUACUAU	875
53335_4_323	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457460-60457485	UAACUUGAAAUUUUAUCUUUUACUA	876
53335_4_324	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457522-60457547	AUGGCAAUGCAGAAUAUUUUGUUAU	877
53335_4_325	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457546-60457571	GCUUUAGUCAAUACUUUUUUGUAAA	878
53335_4_326	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457613-60457638	ACUAAAUGGUGCUUUAUAUUUAGAU	879
53335_4_327	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457632-60457657	GUUUUUUUCAUUGCCAAAAACUAAA	880
53335_4_328	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457786-60457811	AUGCAGUACUGCAAGCUAAUAACGU	881
53335_4_329	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457858-60457883	AAUGUCACAUGGAUGGCUGUCAUAG	882
53335_4_330	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457859-60457884	GAAUGUCACAUGGAUGGCUGUCAUA	883
53335_4_331	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457860-60457885	AGAAUGUCACAUGGAUGGCUGUCAU	884
53335_4_332	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457870-60457895	GGAGCCUGCUAGAAUGUCACAUGGA	885
53335_4_333	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457874-60457899	UGGGGGAGCCUGCUAGAAUGUCACA	886
53335_4_334	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457896-60457921	GAGAAGCCAUAUAAUGGCGGUUUGG	887
53335_4_335	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457897-60457922	UGAGAAGCCAUAUAAUGGCGGUUUG	888
53335_4_336	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457898-60457923	AUGAGAAGCCAUAUAAUGGCGGUUU	889
53335_4_337	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457899-60457924	GAUGAGAAGCCAUAUAAUGGCGGUU	890
53335_4_338	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457904-60457929	UUACAGAUGAGAAGCCAUAUAAUGG	891
53335_4_339	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457907-60457932	ACAUUACAGAUGAGAAGCCAUAUAA	892
53335_4_340	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60457999-60458024	CCACAGUAUAUUUUUUUAAUUUGGC	893
53335_4_341	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458003-60458028	GCUGCCACAGUAUAUUUUUUUAAUU	894
53335_4_342	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458030-60458055	UUUUGGUAGUGGAAAAAAAAAAGAC	895
53335_4_343	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458046-60458071	GGUAUCAAUGUACCUUUUUUGGUAG	896
53335_4_344	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458052-60458077	UUAAAAGGUAUCAAUGUACCUUUUU	897
53335_4_345	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458072-60458097	UUUAACUGUUGCUUGUUCUCUUAAA	898
53335_4_346	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458130-60458155	UUGAAUUAAAUGUUCAUCUAGUGUU	899
53335_4_347	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458161-60458186	UGGUCUUUUUUCUGUAUUUCUAGAA	900
53335_4_348	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458186-60458211	UGAUUCCUAUGCUAAAAUACAUUUA	901
53335_4_349	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458231-60458256	UUAAGAUUAUAUAGUACUUAAAUAU	902
53335_4_350	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458260-60458285	AAAAAAAAAAACAUACAUUGGGGAA	903
53335_4_351	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458265-60458290	UUGUAAAAAAAAAAAACAUACAUUG	904
53335_4_352	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458266-60458291	GUUGUAAAAAAAAAAAACAUACAUU	905
53335_4_353	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458267-60458292	GGUUGUAAAAAAAAAAAACAUACAU	906
53335_4_354	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458293-60458318	AUGCCUUGGAUACACACCGCUCUUC	907
53335_4_355	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458312-60458337	AAAUGGUAGUGGAAAUUCUAUGCCU	908
53335_4_356	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458328-60458353	CUUGUUAUCCAUUUAAAAAUGGUAG	909
53335_4_357	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458334-60458359	ACAAGACUUGUUAUCCAUUUAAAAA	910
53335_4_358	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458366-60458391	GCAUUUUAGGGUUCCAUUGUCUUGG	911
53335_4_359	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458369-60458394	ACUGCAUUUUAGGGUUCCAUUGUCU	912
53335_4_360	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458383-60458408	AUGUUUAGGGGGGAACUGCAUUUUA	913
53335_4_361	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458384-60458409	UAUGUUUAGGGGGGAACUGCAUUUU	914
53335_4_362	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458398-60458423	AAAAAACACUUCAUUAUGUUUAGGG	915
53335_4_363	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458399-60458424	UAAAAAACACUUCAUUAUGUUUAGG	916
53335_4_364	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458400-60458425	UUAAAAAACACUUCAUUAUGUUUAG	917
53335_4_365	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458401-60458426	UUUAAAAAACACUUCAUUAUGUUUA	918
53335_4_366	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458402-60458427	UUUUAAAAAACACUUCAUUAUGUUU	919
53335_4_367	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458478-60458503	UGAUUGCUUUCGCUUCUACAGUGCA	920
53335_4_368	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458535-60458560	GACGCAACAUUGCAAGCGCUGUGAA	921
53335_4_369	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458562-60458587	UACUUGACUAUUGAGCUUACUUACU	922
53335_4_370	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458634-60458659	AAAAAAAUUGAACACAAUCUCAUUG	923
53335_4_371	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458682-60458707	UCCCAGUUUACAGGUCUAUACUUAA	924
53335_4_372	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458683-60458708	UUCCCAGUUUACAGGUCUAUACUUA	925
53335_4_373	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458696-60458721	GCACUGUACAAUUUUCCCAGUUUAC	926
53335_4_374	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458734-60458759	GAGUAUAAAAUAAACCUGCUCAGAU	927
53335_4_375	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458764-60458789	AUCUUUUCUCUAAUCAGAGAUACAG	928
53335_4_376	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458829-60458854	AAUAAAAGCUAGCAUCUGCCCCAGU	929
53335_4_377	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458897-60458922	UGUGCUAUUUGUGUUAACAUGGAAG	930
53335_4_378	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60458903-60458928	ACACUGUGUGCUAUUUGUGUUAACA	931
53335_4_379	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459085-60459110	ACUAUUUGCCAUUUAAAACUAGAAC	932
53335_4_380	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459114-60459139	AAUAAUAUGAUUUAUUAGCACAACG	933
53335_4_381	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459152-60459177	AGGCUGACAAUAAGGUUUGACAGAG	934
53335_4_382	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459153-60459178	GAGGCUGACAAUAAGGUUUGACAGA	935
53335_4_383	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459154-60459179	AGAGGCUGACAAUAAGGUUUGACAG	936
53335_4_384	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459165-60459190	UAUUGAAAGGAAGAGGCUGACAAUA	937
53335_4_385	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459177-60459202	CCUUGUAUACCAUAUUGAAAGGAAG	938
53335_4_386	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459183-60459208	UUAAGACCUUGUAUACCAUAUUGAA	939
53335_4_387	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459229-60459254	GAUCCAGAUCUACUUGGUUGUCAAG	940
53335_4_388	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459240-60459265	CAAAAGAAAUAGAUCCAGAUCUACU	941
53335_4_389	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459271-60459296	UUUAAUAAUGUCUUUUUAAAAAUAC	942
53335_4_390	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459323-60459348	UGGAACGCAAUUAAAUACACUAGUA	943
53335_4_391	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459348-60459373	UUGAAUGUGUAAUGUGCAAAAGCCC	944
53335_4_392	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459418-60459443	CUCCUGGUGAGAGCUUAAAAGAAAU	945
53335_4_393	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459419-60459444	GCUCCUGGUGAGAGCUUAAAAGAAA	946
53335_4_394	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459439-60459464	ACCAGUAUAAAAGCUACUUUGCUCC	947
53335_4_395	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459547-60459572	UUCUAUAUUGUAUUUCUCACAACAA	948
53335_4_396	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459588-60459613	AGCAUUGGGUGAGGUAAUAAACCUU	949
53335_4_397	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459602-60459627	UUGUAGCUUAAUUCAGCAUUGGGUG	950
53335_4_398	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459607-60459632	UAAACUUGUAGCUUAAUUCAGCAUU	951
53335_4_399	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459608-60459633	AUAAACUUGUAGCUUAAUUCAGCAU	952
53335_4_400	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459651-60459676	CUUGGAUCUAUUAAAACCACAUCGA	953
53335_4_401	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459674-60459699	AUUUGGUUUUAAAAUAUGAGUGCCU	954
53335_4_402	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459696-60459721	AACAGAACAAGUUUAUUCUAUCAUU	955
53335_4_403	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459749-60459774	UGUAUCAAUUGGAAAGGAAGAAAAA	956
53335_4_404	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459760-60459785	AAAGGGUUAAAUGUAUCAAUUGGAA	957
53335_4_405	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459765-60459790	UCUCUAAAGGGUUAAAUGUAUCAAU	958
53335_4_406	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459782-60459807	UAUGAGCUAAAUGUCUGUCUCUAAA	959
53335_4_407	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459783-60459808	CUAUGAGCUAAAUGUCUGUCUCUAA	960
53335_4_408	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459855-60459880	UAACGUGAGGAGGAAAAACAGUCUU	961
53335_4_409	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459870-60459895	UACAGUUUUAUUUUAUAACGUGAGG	962
53335_4_410	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60459873-60459898	AUGUACAGUUUUAUUUUAUAACGUG	963
53335_4_411	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460023-60460048	CUUAGACAGCAUGUAUGGUAUGUUA	964
53335_4_412	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460033-60460058	UUUUUUUAAACUUAGACAGCAUGUA	965
53335_4_413	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460130-60460155	ACCGUUUGAAUGCAUGAUCUGUAUG	966
53335_4_414	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460131-60460156	CACCGUUUGAAUGCAUGAUCUGUAU	967
53335_4_415	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460132-60460157	UCACCGUUUGAAUGCAUGAUCUGUA	968
53335_4_416	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460314-60460339	AUCGCCCUCCAGCCCCACUCCCUGU	969
53335_4_417	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460403-60460428	GAAUAAUGAUAUAAAAACUGAAUAG	970
53335_4_418	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460448-60460473	UACCCUGGAGAAACACAUGAAAAAA	971
53335_4_419	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460468-60460493	AUGCCUUUUAGCGUGUACAGUACCC	972
53335_4_420	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460522-60460547	AUGAAAACGCAUGGCCAGGUGGGGA	973
53335_4_421	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460526-60460551	GCACAUGAAAACGCAUGGCCAGGUG	974
53335_4_422	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460527-60460552	GGCACAUGAAAACGCAUGGCCAGGU	975
53335_4_423	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460528-60460553	AGGCACAUGAAAACGCAUGGCCAGG	976
53335_4_424	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460531-60460556	ACCAGGCACAUGAAAACGCAUGGCC	977
53335_4_425	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460536-60460561	AGCUCACCAGGCACAUGAAAACGCA	978
53335_4_426	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460553-60460578	CUGUGCCCAGAGUAGCAAGCUCACC	979
53335_4_427	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460610-60460635	CCACAGGAGAAGCCACACGGGCGAA	980
53335_4_428	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460617-60460642	UCACUGUCCACAGGAGAAGCCACAC	981
53335_4_429	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460618-60460643	CUCACUGUCCACAGGAGAAGCCACA	982
53335_4_430	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460631-60460656	GAACUGUAGCAAUCUCACUGUCCAC	983
53335_4_431	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460670-60460695	ACGCAGCGACACUUGUGAGUACUGU	984
53335_4_432	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460671-60460696	GACGCAGCGACACUUGUGAGUACUG	985
53335_4_433	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460701-60460726	GCCCGGGCAGGCCCAGCUCAAAAGA	986
53335_4_434	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460702-60460727	GGCCCGGGCAGGCCCAGCUCAAAAG	987
53335_4_435	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460718-60460743	CCAUAUUAGUGGUCCGGGCCCGGGC	988
53335_4_436	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460722-60460747	CGCCCCAUAUUAGUGGUCCGGGCCC	989
53335_4_437	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460723-60460748	ACGCCCCAUAUUAGUGGUCCGGGCC	990
53335_4_438	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460728-60460753	GGAGCACGCCCCAUAUUAGUGGUCC	991
53335_4_439	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460729-60460754	GGGAGCACGCCCCAUAUUAGUGGUC	992
53335_4_440	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460734-60460759	GUGGAGGGAGCACGCCCCAUAUUAG	993
53335_4_441	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460754-60460779	GGGGCGCAGCGGCACGGGAAGUGGA	994
53335_4_442	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460755-60460780	CGGGGCGCAGCGGCACGGGAAGUGG	995
53335_4_443	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460758-60460783	UCUCGGGGCGCAGCGGCACGGGAAG	996
53335_4_444	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460764-60460789	GAGGGAUCUCGGGGCGCAGCGGCAC	997
53335_4_445	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460765-60460790	GGAGGGAUCUCGGGGCGCAGCGGCA	998
53335_4_446	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460770-60460795	UGGACGGAGGGAUCUCGGGGCGCAG	999
53335_4_447	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460778-60460803	CGGGGAGCUGGACGGAGGGAUCUCG	1000
53335_4_448	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460779-60460804	CCGGGGAGCUGGACGGAGGGAUCUC	1001
53335_4_449	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460780-60460805	CCCGGGGAGCUGGACGGAGGGAUCU	1002
53335_4_450	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460787-60460812	CACACCGCCCGGGGAGCUGGACGGA	1003
53335_4_451	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460788-60460813	CCACACCGCCCGGGGAGCUGGACGG	1004
53335_4_452	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460791-60460816	UCUCCACACCGCCCGGGGAGCUGGA	1005
53335_4_453	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460795-60460820	CGCUUCUCCACACCGCCCGGGGAGC	1006
53335_4_454	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460801-60460826	AGUUUGCGCUUCUCCACACCGCCCG	1007
53335_4_455	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460802-60460827	GAGUUUGCGCUUCUCCACACCGCCC	1008
53335_4_456	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460803-60460828	GGAGUUUGCGCUUCUCCACACCGCC	1009
53335_4_457	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460829-60460854	CUCGUCGGAGCACUCCUCGGAGAAC	1010
53335_4_458	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460830-60460855	CCUCGUCGGAGCACUCCUCGGAGAA	1011
53335_4_459	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460837-60460862	UUUGCCUCCUCGUCGGAGCACUCCU	1012
53335_4_460	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460849-60460874	AGACAAUCGCCUUUUGCCUCCUCGU	1013
53335_4_461	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460884-60460909	AGCUCAAAGAUCCCUUCCUUAGCUU	1014
53335_4_462	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460913-60460938	GUGGCUCGCCGGCUACGCGGCCUCC	1015
53335_4_463	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460921-60460946	UACUCGCAGUGGCUCGCCGGCUACG	1016
53335_4_464	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460929-60460954	AGAACGUGUACUCGCAGUGGCUCGC	1017
53335_4_465	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460937-60460962	CAACACGGAGAACGUGUACUCGCAG	1018
53335_4_466	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460957-60460982	CUGCCCCCGGCCGCGAUGCCCAACA	1019
53335_4_467	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460975-60461000	CUCGAGAAGGAGUUCGACCUGCCCC	1020
53335_4_468	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60460993-60461018	UUCUCUAAGCGCAUCAAGCUCGAGA	1021
53335_4_469	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461043-60461068	GGGGCCUGUCCAAAAAGCUGCUGCU	1022
53335_4_470	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461044-60461069	GGGGGCCUGUCCAAAAAGCUGCUGC	1023
53335_4_471	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461067-60461092	GCUCCCCGGGCGAGUCGGCCUCGGG	1024
53335_4_472	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461068-60461093	UGCUCCCCGGGCGAGUCGGCCUCGG	1025
53335_4_473	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461069-60461094	CUGCUCCCCGGGCGAGUCGGCCUCG	1026
53335_4_474	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461070-60461095	GCUGCUCCCCGGGCGAGUCGGCCUC	1027
53335_4_475	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461071-60461096	GGCUGCUCCCCGGGCGAGUCGGCCU	1028
53335_4_476	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461077-60461102	GGCCGCGGCUGCUCCCCGGGCGAGU	1029
53335_4_477	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461085-60461110	CUGUUAAUGGCCGCGGCUGCUCCCC	1030
53335_4_478	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461086-60461111	ACUGUUAAUGGCCGCGGCUGCUCCC	1031
53335_4_479	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461097-60461122	UAGACGAUGGCACUGUUAAUGGCCG	1032
53335_4_480	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461103-60461128	ACCGCAUAGACGAUGGCACUGUUAA	1033
53335_4_481	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461115-60461140	CCGGCGAGUCGGACCGCAUAGACGA	1034
53335_4_482	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461131-60461156	GACGAAGACUCGGUGGCCGGCGAGU	1035
53335_4_483	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461139-60461164	ACACUUGCGACGAAGACUCGGUGGC	1036
53335_4_484	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461143-60461168	AGGGACACUUGCGACGAAGACUCGG	1037
53335_4_485	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461146-60461171	CACAGGGACACUUGCGACGAAGACU	1038
53335_4_486	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461167-60461192	CACCUGGCCGAGGCCGAGGGCCACA	1039
53335_4_487	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461168-60461193	CCACCUGGCCGAGGCCGAGGGCCAC	1040
53335_4_488	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461175-60461200	AGCGCGGCCACCUGGCCGAGGCCGA	1041
53335_4_489	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461176-60461201	AAGCGCGGCCACCUGGCCGAGGCCG	1042
53335_4_490	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461182-60461207	AAGCAUAAGCGCGGCCACCUGGCCG	1043
53335_4_491	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461188-60461213	GGCGAGAAGCAUAAGCGCGGCCACC	1044
53335_4_492	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461196-60461221	AGGUCCUGGGCGAGAAGCAUAAGCG	1045
53335_4_493	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461214-60461239	UCAGCGAGGCCUUCCACCAGGUCCU	1046
53335_4_494	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461215-60461240	UUCAGCGAGGCCUUCCACCAGGUCC	1047
53335_4_495	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461221-60461246	CAGCACUUCAGCGAGGCCUUCCACC	1048
53335_4_496	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461233-60461258	CUCAGCUCCAUGCAGCACUUCAGCG	1049
53335_4_497	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461263-60461288	GCCCUGCCCGACGUCAUGCAGGGCA	1050
53335_4_498	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461268-60461293	GCCGCGCCCUGCCCGACGUCAUGCA	1051
53335_4_499	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461269-60461294	AGCCGCGCCCUGCCCGACGUCAUGC	1052
53335_4_500	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461304-60461329	GCUCGCGGGGCGCGGUCGUGGGCGU	1053
53335_4_501	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461305-60461330	AGCUCGCGGGGCGCGGUCGUGGGCG	1054
53335_4_502	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461310-60461335	AGAACAGCUCGCGGGGCGCGGUCGU	1055
53335_4_503	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461311-60461336	GAGAACAGCUCGCGGGGCGCGGUCG	1056
53335_4_504	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461317-60461342	CACCACGAGAACAGCUCGCGGGGCG	1057
53335_4_505	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461322-60461347	CGCGCCACCACGAGAACAGCUCGCG	1058
53335_4_506	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461323-60461348	GCGCGCCACCACGAGAACAGCUCGC	1059
53335_4_507	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461324-60461349	GGCGCGCCACCACGAGAACAGCUCG	1060
53335_4_508	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461350-60461375	UACGGCUUCGGGCUGAGCCUGGAGG	1061
53335_4_509	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461353-60461378	GACUACGGCUUCGGGCUGAGCCUGG	1062
53335_4_510	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461356-60461381	CUGGACUACGGCUUCGGGCUGAGCC	1063
53335_4_511	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461366-60461391	CUCGCUCUCCCUGGACUACGGCUUC	1064
53335_4_512	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461367-60461392	UCUCGCUCUCCCUGGACUACGGCUU	1065
53335_4_513	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461373-60461398	ACUGCCUCUCGCUCUCCCUGGACUA	1066
53335_4_514	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461380-60461405	CUCCUCGACUGCCUCUCGCUCUCCC	1067
53335_4_515	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461512-60461537	GCCAGCAGCGCGCUCAAGUCCGUGG	1068
53335_4_516	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461515-60461540	AGCGCCAGCAGCGCGCUCAAGUCCG	1069
53335_4_517	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461544-60461569	CGGAACCCGGCACCAGCGACUUGGU	1070
53335_4_518	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461545-60461570	CCGGAACCCGGCACCAGCGACUUGG	1071
53335_4_519	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461548-60461573	UCCCCGGAACCCGGCACCAGCGACU	1072
53335_4_520	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461562-60461587	UCUCCACCGCCAGCUCCCCGGAACC	1073
53335_4_521	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461569-60461594	GACGGUCUCUCCACCGCCAGCUCCC	1074
53335_4_522	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461592-60461617	CCCCCAUGACGGUCAAGUCCGACGA	1075
53335_4_523	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461608-60461633	CACAUGCACAAAUCGUCCCCCAUGA	1076
53335_4_524	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461665-60461690	AACCUGUGCGACCACGCGUGCACCC	1077
53335_4_525	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461712-60461737	UGGUGGUGCACCGGCGCAGCCACAC	1078
53335_4_526	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461713-60461738	CUGGUGGUGCACCGGCGCAGCCACA	1079
53335_4_527	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461726-60461751	AUUUCAGAGCAACCUGGUGGUGCAC	1080
53335_4_528	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461734-60461759	ACGUUCAAAUUUCAGAGCAACCUGG	1081
53335_4_529	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461737-60461762	AAGACGUUCAAAUUUCAGAGCAACC	1082
53335_4_530	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461766-60461791	UCAAGUCCAAGUCAUGCGAGUUCUG	1083
53335_4_531	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461794-60461819	UCCGCCCCUCCUCCCUCCCAGCCCC	1084
53335_4_532	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461848-60461873	CAGCCAGGUAGCAAGCCGCCCUUCC	1085
53335_4_533	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461868-60461893	AAAGGUUACUGCAACCAUUCCAGCC	1086
53335_4_534	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461891-60461916	CCCAGGCCGGCCCAGCCCUAUGCAA	1087
53335_4_535	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461909-60461934	GUCUAGCCCACCGCUGUCCCCAGGC	1088
53335_4_536	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461913-60461938	ACACGUCUAGCCCACCGCUGUCCCC	1089
53335_4_537	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461942-60461967	CUCUAGGAGACUUAGAGAGCUGGCA	1090
53335_4_538	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461943-60461968	UCUCUAGGAGACUUAGAGAGCUGGC	1091
53335_4_539	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461947-60461972	GAUUUCUCUAGGAGACUUAGAGAGC	1092
53335_4_540	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461963-60461988	GGAGCCUCCCGCCAUGGAUUUCUCU	1093
53335_4_541	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461974-60461999	CCAAUGGCUAUGGAGCCUCCCGCCA	1094
53335_4_542	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461989-60462014	GUGCUGCGGUUGAAUCCAAUGGCUA	1095
53335_4_543	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60461995-60462020	GACAGGGUGCUGCGGUUGAAUCCAA	1096
53335_4_544	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462008-60462033	CCCGAGUGCCUUUGACAGGGUGCUG	1097
53335_4_545	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462016-60462041	ACCCAUCACCCGAGUGCCUUUGACA	1098
53335_4_546	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462017-60462042	CACCCAUCACCCGAGUGCCUUUGAC	1099
53335_4_547	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462046-60462071	CGCCUGGGGGCGGAAGAGAUGGCCC	1100
53335_4_548	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462052-60462077	AUAGAGCGCCUGGGGGCGGAAGAGA	1101
53335_4_549	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462061-60462086	CCCCACCGCAUAGAGCGCCUGGGGG	1102
53335_4_550	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462064-60462089	GACCCCCACCGCAUAGAGCGCCUGG	1103
53335_4_551	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462065-60462090	GGACCCCCACCGCAUAGAGCGCCUG	1104
53335_4_552	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462066-60462091	UGGACCCCCACCGCAUAGAGCGCCU	1105
53335_4_553	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462067-60462092	UUGGACCCCCACCGCAUAGAGCGCC	1106
53335_4_554	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462091-60462116	UUUAGUCCACCACCGAGACAUCACU	1107
53335_4_555	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462143-60462168	GAGAGAGGCUUCCGGCCUGGCAGAA	1108
53335_4_556	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462144-60462169	CGAGAGAGGCUUCCGGCCUGGCAGA	1109
53335_4_557	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462151-60462176	UCAGUAUCGAGAGAGGCUUCCGGCC	1110
53335_4_558	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462156-60462181	CAGGAUCAGUAUCGAGAGAGGCUUC	1111
53335_4_559	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462163-60462188	AGAAUACCAGGAUCAGUAUCGAGAG	1112
53335_4_560	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462180-60462205	ACCCCUUUAACCUGCUAAGAAUACC	1113
53335_4_561	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462227-60462252	AUGUCCUUCCCAGCCACCUCUCCAU	1114
53335_4_562	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462228-60462253	AAUGUCCUUCCCAGCCACCUCUCCA	1115
53335_4_563	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462261-60462286	CGCGGGUUGGUAUCCCUUCAGGACU	1116
53335_4_564	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462267-60462292	UGACCCCGCGGGUUGGUAUCCCUUC	1117
53335_4_565	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462279-60462304	ACGGAAGUCCCCUGACCCCGCGGGU	1118
53335_4_566	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462283-60462308	GAACACGGAAGUCCCCUGACCCCGC	1119
53335_4_567	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462284-60462309	CGAACACGGAAGUCCCCUGACCCCG	1120
53335_4_568	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462303-60462328	UAAGAAUCUACUUAGAAAGCGAACA	1121
53335_4_569	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462333-60462358	UCUUGCAACACGCACAGAACACUCA	1122
53335_4_570	BCL11a	Экзон 4	-	chr2:60462365-60462390	UUGCAAACAGCCAUUCACCAGUGCA	1123
53335_3_1	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468716-60468741	UAAGGCUCAACUUACAAAUACCCUG	1124
53335_3_2	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468717-60468742	AAGGCUCAACUUACAAAUACCCUGC	1125
53335_3_3	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468718-60468743	AGGCUCAACUUACAAAUACCCUGCG	1126
53335_3_4	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468740-60468765	GCGGGGCAUAUUCUGCACUCAUCCC	1127
53335_3_5	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468745-60468770	GCAUAUUCUGCACUCAUCCCAGGCG	1128
53335_3_6	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468746-60468771	CAUAUUCUGCACUCAUCCCAGGCGU	1129
53335_3_7	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468747-60468772	AUAUUCUGCACUCAUCCCAGGCGUG	1130
53335_3_8	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468773-60468798	GGAUUAGAGCUCCAUGUGCAGAACG	1131
53335_3_9	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468774-60468799	GAUUAGAGCUCCAUGUGCAGAACGA	1132
53335_3_10	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468775-60468800	AUUAGAGCUCCAUGUGCAGAACGAG	1133
53335_3_11	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468778-60468803	AGAGCUCCAUGUGCAGAACGAGGGG	1134
53335_3_12	BCL11a	Экзон 3	+	chr2:60468783-60468808	UCCAUGUGCAGAACGAGGGGAGGAG	1135
53335_3_13	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468739-60468764	GGAUGAGUGCAGAAUAUGCCCCGCA	1136
53335_3_14	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468740-60468765	GGGAUGAGUGCAGAAUAUGCCCCGC	1137
53335_3_15	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468765-60468790	ACAUGGAGCUCUAAUCCCCACGCCU	1138
53335_3_16	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468766-60468791	CACAUGGAGCUCUAAUCCCCACGCC	1139
53335_3_17	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468787-60468812	GCCUCUCCUCCCCUCGUUCUGCACA	1140
53335_3_18	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468814-60468839	UCACAGAUAAACUUCUGCACUGGAG	1141
53335_3_19	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468815-60468840	UUCACAGAUAAACUUCUGCACUGGA	1142
53335_3_20	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468816-60468841	UUUCACAGAUAAACUUCUGCACUGG	1143
53335_3_21	BCL11a	Экзон 3	-	chr2:60468819-60468844	UUCUUUCACAGAUAAACUUCUGCAC	1144
53335_2_1	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60545963-60545988	CAUUUACCUGCUAUGUGUUCCUGUU	1145
53335_2_2	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60545964-60545989	AUUUACCUGCUAUGUGUUCCUGUUU	1146
53335_2_3	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60545965-60545990	UUUACCUGCUAUGUGUUCCUGUUUG	1147
53335_2_4	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546009-60546034	ACGUUGAUAAACAAUCGUCAUCCUC	1148
53335_2_5	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546019-60546044	ACAAUCGUCAUCCUCUGGCGUGACC	1149
53335_2_6	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546035-60546060	GGCGUGACCUGGAUGCCAACCUCCA	1150
53335_2_7	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546036-60546061	GCGUGACCUGGAUGCCAACCUCCAC	1151
53335_2_8	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546041-60546066	ACCUGGAUGCCAACCUCCACGGGAU	1152
53335_2_9	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546063-60546088	GAUUGGAUGCUUUUUUCAUCUCGAU	1153
53335_2_10	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546069-60546094	AUGCUUUUUUCAUCUCGAUUGGUGA	1154
53335_2_11	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546070-60546095	UGCUUUUUUCAUCUCGAUUGGUGAA	1155
53335_2_12	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546071-60546096	GCUUUUUUCAUCUCGAUUGGUGAAG	1156
53335_2_13	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546075-60546100	UUUUCAUCUCGAUUGGUGAAGGGGA	1157
53335_2_14	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546078-60546103	UCAUCUCGAUUGGUGAAGGGGAAGG	1158
53335_2_15	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546106-60546131	CUUAUCCACAGCUUUUUCUAAGCAG	1159
53335_2_16	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546162-60546187	CGAUAAAAAUAAGAAUGUCCCCCAA	1160
53335_2_17	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546163-60546188	GAUAAAAAUAAGAAUGUCCCCCAAU	1161
53335_2_18	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546175-60546200	AAUGUCCCCCAAUGGGAAGUUCAUC	1162
53335_2_19	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546188-60546213	GGGAAGUUCAUCUGGCACUGCCCAC	1163
53335_2_20	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546193-60546218	GUUCAUCUGGCACUGCCCACAGGUG	1164
53335_2_21	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546196-60546221	CAUCUGGCACUGCCCACAGGUGAGG	1165
53335_2_22	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546213-60546238	AGGUGAGGAGGUCAUGAUCCCCUUC	1166
53335_2_23	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546225-60546250	CAUGAUCCCCUUCUGGAGCUCCCAA	1167
53335_2_24	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546226-60546251	AUGAUCCCCUUCUGGAGCUCCCAAC	1168
53335_2_25	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546232-60546257	CCCUUCUGGAGCUCCCAACGGGCCG	1169
53335_2_26	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546237-60546262	CUGGAGCUCCCAACGGGCCGUGGUC	1170
53335_2_27	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546257-60546282	UGGUCUGGUUCAUCAUCUGUAAGAA	1171
53335_2_28	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546267-60546292	CAUCAUCUGUAAGAAUGGCUUCAAG	1172
53335_2_29	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546272-60546297	UCUGUAAGAAUGGCUUCAAGAGGCU	1173
53335_2_30	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546278-60546303	AGAAUGGCUUCAAGAGGCUCGGCUG	1174
53335_2_31	BCL11a	Экзон 2	+	chr2:60546282-60546307	UGGCUUCAAGAGGCUCGGCUGUGGU	1175
53335_2_32	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60545956-60545981	ACACAUAGCAGGUAAAUGAGAAGCA	1176
53335_2_33	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60545972-60545997	UUUGCCCCAAACAGGAACACAUAGC	1177
53335_2_34	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60545985-60546010	UCAUCUAGAGGAAUUUGCCCCAAAC	1178
53335_2_35	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546002-60546027	ACGAUUGUUUAUCAACGUCAUCUAG	1179
53335_2_36	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546033-60546058	GAGGUUGGCAUCCAGGUCACGCCAG	1180
53335_2_37	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546045-60546070	UCCAAUCCCGUGGAGGUUGGCAUCC	1181
53335_2_38	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546053-60546078	AAAAAGCAUCCAAUCCCGUGGAGGU	1182
53335_2_39	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546057-60546082	AUGAAAAAAGCAUCCAAUCCCGUGG	1183
53335_2_40	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546060-60546085	GAGAUGAAAAAAGCAUCCAAUCCCG	1184
53335_2_41	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546114-60546139	GGCAGCCUCUGCUUAGAAAAAGCUG	1185
53335_2_42	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546140-60546165	UCGAGCACAAACGGAAACAAUGCAA	1186
53335_2_43	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546154-60546179	CAUUCUUAUUUUUAUCGAGCACAAA	1187
53335_2_44	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546183-60546208	CAGUGCCAGAUGAACUUCCCAUUGG	1188
53335_2_45	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546184-60546209	GCAGUGCCAGAUGAACUUCCCAUUG	1189
53335_2_46	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546185-60546210	GGCAGUGCCAGAUGAACUUCCCAUU	1190
53335_2_47	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546186-60546211	GGGCAGUGCCAGAUGAACUUCCCAU	1191
53335_2_48	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546211-60546236	AGGGGAUCAUGACCUCCUCACCUGU	1192
53335_2_49	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546212-60546237	AAGGGGAUCAUGACCUCCUCACCUG	1193
53335_2_50	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546234-60546259	CACGGCCCGUUGGGAGCUCCAGAAG	1194
53335_2_51	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546235-60546260	CCACGGCCCGUUGGGAGCUCCAGAA	1195
53335_2_52	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546236-60546261	ACCACGGCCCGUUGGGAGCUCCAGA	1196
53335_2_53	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546248-60546273	AUGAUGAACCAGACCACGGCCCGUU	1197
53335_2_54	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546249-60546274	GAUGAUGAACCAGACCACGGCCCGU	1198
53335_2_55	BCL11a	Экзон 2	-	chr2:60546257-60546282	UUCUUACAGAUGAUGAACCAGACCA	1199
53335_1_1	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553216-60553241	CGAGAAUUCCCGUUUGCUUAAGUGC	1200
53335_1_2	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553217-60553242	GAGAAUUCCCGUUUGCUUAAGUGCU	1201
53335_1_3	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553218-60553243	AGAAUUCCCGUUUGCUUAAGUGCUG	1202
53335_1_4	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553234-60553259	UAAGUGCUGGGGUUUGCCUUGCUUG	1203
53335_1_5	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553244-60553269	GGUUUGCCUUGCUUGCGGCGAGACA	1204
53335_1_6	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553247-60553272	UUGCCUUGCUUGCGGCGAGACAUGG	1205
53335_1_7	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553248-60553273	UGCCUUGCUUGCGGCGAGACAUGGU	1206
53335_1_8	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553254-60553279	GCUUGCGGCGAGACAUGGUGGGCUG	1207
53335_1_9	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553255-60553280	CUUGCGGCGAGACAUGGUGGGCUGC	1208
53335_1_10	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553256-60553281	UUGCGGCGAGACAUGGUGGGCUGCG	1209
53335_1_11	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553291-60553316	CGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGG	1210
53335_1_12	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553298-60553323	GGCGGCGGCGGCGGCGGGCGGACGA	1211
53335_1_13	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553303-60553328	CGGCGGCGGCGGGCGGACGACGGCU	1212
53335_1_14	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553313-60553338	GGGCGGACGACGGCUCGGUUCACAU	1213
53335_1_15	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553314-60553339	GGCGGACGACGGCUCGGUUCACAUC	1214
53335_1_16	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553322-60553347	ACGGCUCGGUUCACAUCGGGAGAGC	1215
53335_1_17	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553323-60553348	CGGCUCGGUUCACAUCGGGAGAGCC	1216
53335_1_18	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553335-60553360	CAUCGGGAGAGCCGGGUUAGAAAGA	1217
53335_1_19	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553406-60553431	AAAUAAAUUAGAAAUAAUACAAAGA	1218
53335_1_20	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553412-60553437	AUUAGAAAUAAUACAAAGAUGGCGC	1219
53335_1_21	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553413-60553438	UUAGAAAUAAUACAAAGAUGGCGCA	1220
53335_1_22	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553427-60553452	AAGAUGGCGCAGGGAAGAUGAAUUG	1221
53335_1_23	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553428-60553453	AGAUGGCGCAGGGAAGAUGAAUUGU	1222
53335_1_24	BCL11a	Экзон 1	+	chr2:60553441-60553466	AAGAUGAAUUGUGGGAGAGCCGUCA	1223
53335_1_25	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553227-60553252	GGCAAACCCCAGCACUUAAGCAAAC	1224
53335_1_26	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553228-60553253	AGGCAAACCCCAGCACUUAAGCAAA	1225
53335_1_27	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553253-60553278	AGCCCACCAUGUCUCGCCGCAAGCA	1226
53335_1_28	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553349-60553374	CUCUGGAGUCUCCUUCUUUCUAACC	1227
53335_1_29	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553371-60553396	AAGGCACUGAUGAAGAUAUUUUCUC	1228
53335_1_30	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553395-60553420	UUUCUAAUUUAUUUUGGAUGUCAAA	1229
53335_1_31	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553406-60553431	UCUUUGUAUUAUUUCUAAUUUAUUU	1230
53335_1_32	BCL11a	Экзон 1	-	chr2:60553463-60553488	AAAAAAGCUUAAAAAAAAGCCAUGA	1231

Таблица 2. Целевые домены gРНК, нацеленные на области интрона 2 BLC11a гена (т.е. на область энхансера BLC11a гена.

Id. целевого домена	Цель	Область нацеливания	Цепь	Сайт нацеливания (hg38)	Целевой домен gРНК	SEQ ID NO:
53335_I2_1	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494277-60494302	GGGAGUUUGGCUUCUCAUCUGUGCA	1232
53335_I2_2	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494289-60494314	UCUCAUCUGUGCAUGGCCUCUAAAC	1233
53335_I2_3	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494290-60494315	CUCAUCUGUGCAUGGCCUCUAAACU	1234
53335_I2_4	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494302-60494327	UGGCCUCUAAACUGGGCAGUGACCA	1235
53335_I2_5	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494307-60494332	UCUAAACUGGGCAGUGACCAUGGCC	1236
53335_I2_6	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494324-60494349	CCAUGGCCUGGUCACCUCCCCACUC	1237
53335_I2_7	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494330-60494355	CCUGGUCACCUCCCCACUCUGGACC	1238
53335_I2_8	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494331-60494356	CUGGUCACCUCCCCACUCUGGACCU	1239
53335_I2_9	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494351-60494376	GACCUGGGUUGCCCCUCUGUAAACA	1240
53335_I2_10	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494354-60494379	CUGGGUUGCCCCUCUGUAAACAAGG	1241
53335_I2_11	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494418-60494443	AAAUCUUAUGCAAUUUUUGCCAAGA	1242
53335_I2_12	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494419-60494444	AAUCUUAUGCAAUUUUUGCCAAGAU	1243
53335_I2_13	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494426-60494451	UGCAAUUUUUGCCAAGAUGGGAGUA	1244
53335_I2_14	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494427-60494452	GCAAUUUUUGCCAAGAUGGGAGUAU	1245
53335_I2_15	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494428-60494453	CAAUUUUUGCCAAGAUGGGAGUAUG	1246
53335_I2_16	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494440-60494465	AGAUGGGAGUAUGGGGAGAGAAGAG	1247
53335_I2_17	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494446-60494471	GAGUAUGGGGAGAGAAGAGUGGAAA	1248
53335_I2_18	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494477-60494502	AGAGCUCAGUGAGAUGAGAUAUCAA	1249
53335_I2_19	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494478-60494503	GAGCUCAGUGAGAUGAGAUAUCAAA	1250
53335_I2_20	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494479-60494504	AGCUCAGUGAGAUGAGAUAUCAAAG	1251
53335_I2_21	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494518-60494543	UCAUUCCAUCUCCCUAAUCUCCAAU	1252
53335_I2_22	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494533-60494558	AAUCUCCAAUUGGCAAAGCCAGACU	1253
53335_I2_23	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494534-60494559	AUCUCCAAUUGGCAAAGCCAGACUU	1254
53335_I2_24	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494535-60494560	UCUCCAAUUGGCAAAGCCAGACUUG	1255
53335_I2_25	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494548-60494573	AAGCCAGACUUGGGGCAAUACAGAC	1256
53335_I2_26	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494617-60494642	UAUCACCAAAUGUUCUUUCUUCAGC	1257
53335_I2_27	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494631-60494656	CUUUCUUCAGCUGGAAUUUAAAAUA	1258
53335_I2_28	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494649-60494674	UAAAAUAUGGACUCAUCCGUAAAAU	1259
53335_I2_29	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494675-60494700	GGAAUAAUAAUAGUAUAUGCUUCAU	1260
53335_I2_30	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494676-60494701	GAAUAAUAAUAGUAUAUGCUUCAUA	1261
53335_I2_31	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494766-60494791	GCUUGUGAACUAAAAUGCUGCCUCC	1262
53335_I2_32	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494806-60494831	ACACCUCAGCAGAAACAAAGUUAUC	1263
53335_I2_33	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494830-60494855	CAGGCCCUUUCCCCAAUUCCUAGUU	1264
53335_I2_34	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494831-60494856	AGGCCCUUUCCCCAAUUCCUAGUUU	1265
53335_I2_35	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494844-60494869	AAUUCCUAGUUUGGGUCAGAAGAAA	1266
53335_I2_36	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494845-60494870	AUUCCUAGUUUGGGUCAGAAGAAAA	1267
53335_I2_37	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494851-60494876	AGUUUGGGUCAGAAGAAAAGGGAAA	1268
53335_I2_38	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494852-60494877	GUUUGGGUCAGAAGAAAAGGGAAAA	1269
53335_I2_39	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494857-60494882	GGUCAGAAGAAAAGGGAAAAGGGAG	1270
53335_I2_40	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494864-60494889	AGAAAAGGGAAAAGGGAGAGGAAAA	1271
53335_I2_41	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494883-60494908	GGAAAAAGGAAAAGAAUAUGACGUC	1272
53335_I2_42	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494884-60494909	GAAAAAGGAAAAGAAUAUGACGUCA	1273
53335_I2_43	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494885-60494910	AAAAAGGAAAAGAAUAUGACGUCAG	1274
53335_I2_44	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494886-60494911	AAAAGGAAAAGAAUAUGACGUCAGG	1275
53335_I2_45	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494889-60494914	AGGAAAAGAAUAUGACGUCAGGGGG	1276
53335_I2_46	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494901-60494926	UGACGUCAGGGGGAGGCAAGUCAGU	1277
53335_I2_47	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494902-60494927	GACGUCAGGGGGAGGCAAGUCAGUU	1278
53335_I2_48	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494928-60494953	GGAACACAGAUCCUAACACAGUAGC	1279
53335_I2_49	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494939-60494964	CCUAACACAGUAGCUGGUACCUGAU	1280
53335_I2_50	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494955-60494980	GUACCUGAUAGGUGCCUAUAUGUGA	1281
53335_I2_51	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494959-60494984	CUGAUAGGUGCCUAUAUGUGAUGGA	1282
53335_I2_52	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494960-60494985	UGAUAGGUGCCUAUAUGUGAUGGAU	1283
53335_I2_53	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494963-60494988	UAGGUGCCUAUAUGUGAUGGAUGGG	1284
53335_I2_54	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494986-60495011	GGUGGACAGCCCGACAGAUGAAAAA	1285
53335_I2_55	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60494998-60495023	GACAGAUGAAAAAUGGACAAUUAUG	1286
53335_I2_56	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495001-60495026	AGAUGAAAAAUGGACAAUUAUGAGG	1287
53335_I2_57	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495002-60495027	GAUGAAAAAUGGACAAUUAUGAGGA	1288
53335_I2_58	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495003-60495028	AUGAAAAAUGGACAAUUAUGAGGAG	1289
53335_I2_59	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495017-60495042	AUUAUGAGGAGGGGAGAGUGCAGAC	1290
53335_I2_60	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495018-60495043	UUAUGAGGAGGGGAGAGUGCAGACA	1291
53335_I2_61	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495019-60495044	UAUGAGGAGGGGAGAGUGCAGACAG	1292
53335_I2_62	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495045-60495070	GGAAGCUUCACCUCCUUUACAAUUU	1293
53335_I2_63	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495046-60495071	GAAGCUUCACCUCCUUUACAAUUUU	1294
53335_I2_64	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495057-60495082	UCCUUUACAAUUUUGGGAGUCCACA	1295
53335_I2_65	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495062-60495087	UACAAUUUUGGGAGUCCACACGGCA	1296
53335_I2_66	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495135-60495160	CAUCACCAAGAGAGCCUUCCGAAAG	1297
53335_I2_67	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495144-60495169	GAGAGCCUUCCGAAAGAGGCCCCCC	1298
53335_I2_68	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495145-60495170	AGAGCCUUCCGAAAGAGGCCCCCCU	1299
53335_I2_69	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495152-60495177	UCCGAAAGAGGCCCCCCUGGGCAAA	1300
53335_I2_70	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495162-60495187	GCCCCCCUGGGCAAACGGCCACCGA	1301
53335_I2_71	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495167-60495192	CCUGGGCAAACGGCCACCGAUGGAG	1302
53335_I2_72	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495215-60495240	CCACCCACGCCCCCACCCUAAUCAG	1303
53335_I2_73	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495230-60495255	CCCUAAUCAGAGGCCAAACCCUUCC	1304
53335_I2_74	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495293-60495318	ACUAGCUUCAAAGUUGUAUUGACCC	1305
53335_I2_75	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495333-60495358	AAGAGUAGAUGCCAUAUCUCUUUUC	1306
53335_I2_76	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495354-60495379	UUUCUGGCCUAUGUUAUUACCUGUA	1307
53335_I2_77	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495366-60495391	GUUAUUACCUGUAUGGACUUUGCAC	1308
53335_I2_78	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495400-60495425	CUAUCUGCUCUUACUUAUGCACACC	1309
53335_I2_79	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495401-60495426	UAUCUGCUCUUACUUAUGCACACCU	1310
53335_I2_80	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495402-60495427	AUCUGCUCUUACUUAUGCACACCUG	1311
53335_I2_81	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495486-60495511	CCUGUCUAGCUGCCUUCCUUAUCAC	1312
53335_I2_82	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495500-60495525	UUCCUUAUCACAGGAAUAGCACCCA	1313
53335_I2_83	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495543-60495568	GAGUAGAACCCCCUAUAAACUAGUC	1314
53335_I2_84	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495554-60495579	CCUAUAAACUAGUCUGGUUUGCCCA	1315
53335_I2_85	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495555-60495580	CUAUAAACUAGUCUGGUUUGCCCAU	1316
53335_I2_86	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495556-60495581	UAUAAACUAGUCUGGUUUGCCCAUG	1317
53335_I2_87	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495566-60495591	UCUGGUUUGCCCAUGGGGCACAGUC	1318
53335_I2_88	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495578-60495603	AUGGGGCACAGUCAGGCUGUUUUCC	1319
53335_I2_89	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495579-60495604	UGGGGCACAGUCAGGCUGUUUUCCA	1320
53335_I2_90	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495582-60495607	GGCACAGUCAGGCUGUUUUCCAGGG	1321
53335_I2_91	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495583-60495608	GCACAGUCAGGCUGUUUUCCAGGGU	1322
53335_I2_92	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495584-60495609	CACAGUCAGGCUGUUUUCCAGGGUG	1323
53335_I2_93	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495661-60495686	ACACACGUAUGUGUUGUGAUCCCUG	1324
53335_I2_94	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495674-60495699	UUGUGAUCCCUGUGGUUUGAGAGUU	1325
53335_I2_95	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495706-60495731	UCCCUAAAAGUCAAAAUAUUCUCAA	1326
53335_I2_96	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495707-60495732	CCCUAAAAGUCAAAAUAUUCUCAAU	1327
53335_I2_97	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495735-60495760	CCCUCAAUCAGCACAUACACACAAA	1328
53335_I2_98	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495742-60495767	UCAGCACAUACACACAAAAGGUACC	1329
53335_I2_99	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495775-60495800	UGUAAUUCUUUUCCUGCUCAAAGAC	1330
53335_I2_100	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495820-60495845	CCCCAACCAAAAACCCUUGCCACCA	1331
53335_I2_101	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495821-60495846	CCCAACCAAAAACCCUUGCCACCAU	1332
53335_I2_102	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495828-60495853	AAAAACCCUUGCCACCAUGGGAGCC	1333
53335_I2_103	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495829-60495854	AAAACCCUUGCCACCAUGGGAGCCU	1334
53335_I2_104	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495830-60495855	AAACCCUUGCCACCAUGGGAGCCUG	1335
53335_I2_105	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495839-60495864	CCACCAUGGGAGCCUGGGGCAGAGA	1336
53335_I2_106	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495867-60495892	CACAGUGAAGUCAAACUGUAAUUCC	1337
53335_I2_107	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495877-60495902	UCAAACUGUAAUUCCAGGCUCUAAA	1338
53335_I2_108	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495913-60495938	UUUUUCUGAGAGUCUCUAAAUUACA	1339
53335_I2_109	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495914-60495939	UUUUCUGAGAGUCUCUAAAUUACAA	1340
53335_I2_110	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60495972-60495997	ACACCUAAGAAACAUACUGCAGCUC	1341
53335_I2_111	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496001-60496026	AAAGAGAACAAACAAACCAAAGAGA	1342
53335_I2_112	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496002-60496027	AAGAGAACAAACAAACCAAAGAGAA	1343
53335_I2_113	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496011-60496036	AACAAACCAAAGAGAAGGGAUCCAG	1344
53335_I2_114	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496048-60496073	UAUGUGAAAAGUCAAUUGAUAAUGA	1345
53335_I2_115	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496055-60496080	AAAGUCAAUUGAUAAUGAAGGCUUU	1346
53335_I2_116	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496063-60496088	UUGAUAAUGAAGGCUUUAGGAUAAC	1347
53335_I2_117	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496066-60496091	AUAAUGAAGGCUUUAGGAUAACCGG	1348
53335_I2_118	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496067-60496092	UAAUGAAGGCUUUAGGAUAACCGGA	1349
53335_I2_119	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496068-60496093	AAUGAAGGCUUUAGGAUAACCGGAG	1350
53335_I2_120	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496098-60496123	AUGAUUGAAAGCAAUGCACCUGUGC	1351
53335_I2_121	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496104-60496129	GAAAGCAAUGCACCUGUGCAGGAAA	1352
53335_I2_122	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496111-60496136	AUGCACCUGUGCAGGAAAUGGAUUA	1353
53335_I2_123	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496118-60496143	UGUGCAGGAAAUGGAUUACGGAAAC	1354
53335_I2_124	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496119-60496144	GUGCAGGAAAUGGAUUACGGAAACA	1355
53335_I2_125	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496153-60496178	UCAUGAAAUCCCAGAAAACCAGAAC	1356
53335_I2_126	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496154-60496179	CAUGAAAUCCCAGAAAACCAGAACC	1357
53335_I2_127	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496164-60496189	CAGAAAACCAGAACCGGGAAAGUUC	1358
53335_I2_128	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496171-60496196	CCAGAACCGGGAAAGUUCUGGAAGU	1359
53335_I2_129	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496198-60496223	GAAAAACAAAUCAUGACUUAAGCAA	1360
53335_I2_130	BCL11a	Интрон 2	+	chr2:60496238-60496263	CGUUUACAGAAUGCCUUGUCCCACG	1361
53335_I2_131	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494308-60494333	AGGCCAUGGUCACUGCCCAGUUUAG	1362
53335_I2_132	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494327-60494352	CCAGAGUGGGGAGGUGACCAGGCCA	1363
53335_I2_133	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494333-60494358	CCAGGUCCAGAGUGGGGAGGUGACC	1364
53335_I2_134	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494341-60494366	GGGGCAACCCAGGUCCAGAGUGGGG	1365
53335_I2_135	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494344-60494369	AGAGGGGCAACCCAGGUCCAGAGUG	1366
53335_I2_136	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494345-60494370	CAGAGGGGCAACCCAGGUCCAGAGU	1367
53335_I2_137	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494346-60494371	ACAGAGGGGCAACCCAGGUCCAGAG	1368
53335_I2_138	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494356-60494381	CUCCUUGUUUACAGAGGGGCAACCC	1369
53335_I2_139	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494365-60494390	UAUUACAACCUCCUUGUUUACAGAG	1370
53335_I2_140	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494366-60494391	UUAUUACAACCUCCUUGUUUACAGA	1371
53335_I2_141	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494367-60494392	UUUAUUACAACCUCCUUGUUUACAG	1372
53335_I2_142	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494401-60494426	UAAGAUUUAUAAGACAUUAGGGUAU	1373
53335_I2_143	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494407-60494432	AUUGCAUAAGAUUUAUAAGACAUUA	1374
53335_I2_144	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494408-60494433	AAUUGCAUAAGAUUUAUAAGACAUU	1375
53335_I2_145	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494440-60494465	CUCUUCUCUCCCCAUACUCCCAUCU	1376
53335_I2_146	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494477-60494502	UUGAUAUCUCAUCUCACUGAGCUCU	1377
53335_I2_147	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494478-60494503	UUUGAUAUCUCAUCUCACUGAGCUC	1378
53335_I2_148	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494526-60494551	CUUUGCCAAUUGGAGAUUAGGGAGA	1379
53335_I2_149	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494532-60494557	GUCUGGCUUUGCCAAUUGGAGAUUA	1380
53335_I2_150	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494533-60494558	AGUCUGGCUUUGCCAAUUGGAGAUU	1381
53335_I2_151	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494541-60494566	UUGCCCCAAGUCUGGCUUUGCCAAU	1382
53335_I2_152	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494554-60494579	GAACCAGUCUGUAUUGCCCCAAGUC	1383
53335_I2_153	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494599-60494624	GGUGAUAAAUCAUUAGGAAUGAGCU	1384
53335_I2_154	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494610-60494635	AAAGAACAUUUGGUGAUAAAUCAUU	1385
53335_I2_155	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494625-60494650	AAAUUCCAGCUGAAGAAAGAACAUU	1386
53335_I2_156	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494668-60494693	AUAUACUAUUAUUAUUCCUAUUUUA	1387
53335_I2_157	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494745-60494770	AAGCUCGGAGCACUUACUCUGCUCU	1388
53335_I2_158	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494765-60494790	GAGGCAGCAUUUUAGUUCACAAGCU	1389
53335_I2_159	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494789-60494814	UGAGGUGUAACUAAUAAAUACCAGG	1390
53335_I2_160	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494792-60494817	UGCUGAGGUGUAACUAAUAAAUACC	1391
53335_I2_161	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494812-60494837	GGGCCUGAUAACUUUGUUUCUGCUG	1392
53335_I2_162	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494837-60494862	UGACCCAAACUAGGAAUUGGGGAAA	1393
53335_I2_163	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494838-60494863	CUGACCCAAACUAGGAAUUGGGGAA	1394
53335_I2_164	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494843-60494868	UUCUUCUGACCCAAACUAGGAAUUG	1395
53335_I2_165	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494844-60494869	UUUCUUCUGACCCAAACUAGGAAUU	1396
53335_I2_166	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494845-60494870	UUUUCUUCUGACCCAAACUAGGAAU	1397
53335_I2_167	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494851-60494876	UUUCCCUUUUCUUCUGACCCAAACU	1398
53335_I2_168	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494942-60494967	CCUAUCAGGUACCAGCUACUGUGUU	1399
53335_I2_169	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494961-60494986	CAUCCAUCACAUAUAGGCACCUAUC	1400
53335_I2_170	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494972-60494997	GGCUGUCCACCCAUCCAUCACAUAU	1401
53335_I2_171	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494998-60495023	CAUAAUUGUCCAUUUUUCAUCUGUC	1402
53335_I2_172	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60494999-60495024	UCAUAAUUGUCCAUUUUUCAUCUGU	1403
53335_I2_173	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495058-60495083	GUGUGGACUCCCAAAAUUGUAAAGG	1404
53335_I2_174	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495061-60495086	GCCGUGUGGACUCCCAAAAUUGUAA	1405
53335_I2_175	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495080-60495105	GAAAUAAUUUGUAUGCCAUGCCGUG	1406
53335_I2_176	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495111-60495136	GGAGAAUUGGAUUUUAUUUCUCAAU	1407
53335_I2_177	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495112-60495137	UGGAGAAUUGGAUUUUAUUUCUCAA	1408
53335_I2_178	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495129-60495154	GAAGGCUCUCUUGGUGAUGGAGAAU	1409
53335_I2_179	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495137-60495162	CUCUUUCGGAAGGCUCUCUUGGUGA	1410
53335_I2_180	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495143-60495168	GGGGGCCUCUUUCGGAAGGCUCUCU	1411
53335_I2_181	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495152-60495177	UUUGCCCAGGGGGGCCUCUUUCGGA	1412
53335_I2_182	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495156-60495181	GCCGUUUGCCCAGGGGGGCCUCUUU	1413
53335_I2_183	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495166-60495191	UCCAUCGGUGGCCGUUUGCCCAGGG	1414
53335_I2_184	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495167-60495192	CUCCAUCGGUGGCCGUUUGCCCAGG	1415
53335_I2_185	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495168-60495193	UCUCCAUCGGUGGCCGUUUGCCCAG	1416
53335_I2_186	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495169-60495194	CUCUCCAUCGGUGGCCGUUUGCCCA	1417
53335_I2_187	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495170-60495195	CCUCUCCAUCGGUGGCCGUUUGCCC	1418
53335_I2_188	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495183-60495208	GAGGACUGGCAGACCUCUCCAUCGG	1419
53335_I2_189	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495186-60495211	GAAGAGGACUGGCAGACCUCUCCAU	1420
53335_I2_190	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495202-60495227	GGGCGUGGGUGGGGUAGAAGAGGAC	1421
53335_I2_191	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495207-60495232	GGUGGGGGCGUGGGUGGGGUAGAAG	1422
53335_I2_192	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495216-60495241	UCUGAUUAGGGUGGGGGCGUGGGUG	1423
53335_I2_193	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495217-60495242	CUCUGAUUAGGGUGGGGGCGUGGGU	1424
53335_I2_194	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495218-60495243	CCUCUGAUUAGGGUGGGGGCGUGGG	1425
53335_I2_195	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495221-60495246	UGGCCUCUGAUUAGGGUGGGGGCGU	1426
53335_I2_196	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495222-60495247	UUGGCCUCUGAUUAGGGUGGGGGCG	1427
53335_I2_197	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495227-60495252	AGGGUUUGGCCUCUGAUUAGGGUGG	1428
53335_I2_198	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495228-60495253	AAGGGUUUGGCCUCUGAUUAGGGUG	1429
53335_I2_199	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495229-60495254	GAAGGGUUUGGCCUCUGAUUAGGGU	1430
53335_I2_200	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495230-60495255	GGAAGGGUUUGGCCUCUGAUUAGGG	1431
53335_I2_201	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495233-60495258	CCAGGAAGGGUUUGGCCUCUGAUUA	1432
53335_I2_202	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495234-60495259	UCCAGGAAGGGUUUGGCCUCUGAUU	1433
53335_I2_203	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495246-60495271	UUUAUCACAGGCUCCAGGAAGGGUU	1434
53335_I2_204	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495251-60495276	UUGCUUUUAUCACAGGCUCCAGGAA	1435
53335_I2_205	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495252-60495277	GUUGCUUUUAUCACAGGCUCCAGGA	1436
53335_I2_206	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495256-60495281	AACAGUUGCUUUUAUCACAGGCUCC	1437
53335_I2_207	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495263-60495288	GCAAGCUAACAGUUGCUUUUAUCAC	1438
53335_I2_208	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495318-60495343	AUCUACUCUUAGACAUAACACACCA	1439
53335_I2_209	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495319-60495344	CAUCUACUCUUAGACAUAACACACC	1440
53335_I2_210	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495347-60495372	AAUAACAUAGGCCAGAAAAGAGAUA	1441
53335_I2_211	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495364-60495389	GCAAAGUCCAUACAGGUAAUAACAU	1442
53335_I2_212	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495376-60495401	GCUGAUUCCAGUGCAAAGUCCAUAC	1443
53335_I2_213	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495426-60495451	CGAUACAGGGCUGGCUCUAUGCCCC	1444
53335_I2_214	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495440-60495465	AGAUGGCUGAAAAGCGAUACAGGGC	1445
53335_I2_215	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495444-60495469	AGUGAGAUGGCUGAAAAGCGAUACA	1446
53335_I2_216	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495445-60495470	UAGUGAGAUGGCUGAAAAGCGAUAC	1447
53335_I2_217	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495462-60495487	GACUUGGGAGUUAUCUGUAGUGAGA	1448
53335_I2_218	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495482-60495507	UAAGGAAGGCAGCUAGACAGGACUU	1449
53335_I2_219	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495483-60495508	AUAAGGAAGGCAGCUAGACAGGACU	1450
53335_I2_220	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495489-60495514	CCUGUGAUAAGGAAGGCAGCUAGAC	1451
53335_I2_221	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495501-60495526	UUGGGUGCUAUUCCUGUGAUAAGGA	1452
53335_I2_222	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495505-60495530	GACCUUGGGUGCUAUUCCUGUGAUA	1453
53335_I2_223	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495524-60495549	CUACUCUGAGGUACUGAUGGACCUU	1454
53335_I2_224	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495525-60495550	UCUACUCUGAGGUACUGAUGGACCU	1455
53335_I2_225	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495532-60495557	AGGGGGUUCUACUCUGAGGUACUGA	1456
53335_I2_226	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495541-60495566	CUAGUUUAUAGGGGGUUCUACUCUG	1457
53335_I2_227	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495554-60495579	UGGGCAAACCAGACUAGUUUAUAGG	1458
53335_I2_228	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495555-60495580	AUGGGCAAACCAGACUAGUUUAUAG	1459
53335_I2_229	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495556-60495581	CAUGGGCAAACCAGACUAGUUUAUA	1460
53335_I2_230	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495557-60495582	CCAUGGGCAAACCAGACUAGUUUAU	1461
53335_I2_231	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495578-60495603	GGAAAACAGCCUGACUGUGCCCCAU	1462
53335_I2_232	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495579-60495604	UGGAAAACAGCCUGACUGUGCCCCA	1463
53335_I2_233	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495604-60495629	GGCAGAGAAUGUCUGCACCCCACCC	1464
53335_I2_234	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495630-60495655	UGACGUUAUAUGUAAGCAUCACAAC	1465
53335_I2_235	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495684-60495709	GGAAGCUCCAAACUCUCAAACCACA	1466
53335_I2_236	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495685-60495710	GGGAAGCUCCAAACUCUCAAACCAC	1467
53335_I2_237	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495710-60495735	CCCAUUGAGAAUAUUUUGACUUUUA	1468
53335_I2_238	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495711-60495736	GCCCAUUGAGAAUAUUUUGACUUUU	1469
53335_I2_239	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495738-60495763	CCUUUUGUGUGUAUGUGCUGAUUGA	1470
53335_I2_240	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495739-60495764	ACCUUUUGUGUGUAUGUGCUGAUUG	1471
53335_I2_241	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495768-60495793	AGCAGGAAAAGAAUUACAGUUUUCC	1472
53335_I2_242	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495790-60495815	GGUAUUGAAUUGCCUGUCUUUGAGC	1473
53335_I2_243	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495816-60495841	GGCAAGGGUUUUUGGUUGGGGGAAG	1474
53335_I2_244	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495817-60495842	UGGCAAGGGUUUUUGGUUGGGGGAA	1475
53335_I2_245	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495818-60495843	GUGGCAAGGGUUUUUGGUUGGGGGA	1476
53335_I2_246	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495822-60495847	CAUGGUGGCAAGGGUUUUUGGUUGG	1477
53335_I2_247	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495823-60495848	CCAUGGUGGCAAGGGUUUUUGGUUG	1478
53335_I2_248	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495824-60495849	CCCAUGGUGGCAAGGGUUUUUGGUU	1479
53335_I2_249	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495825-60495850	UCCCAUGGUGGCAAGGGUUUUUGGU	1480
53335_I2_250	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495829-60495854	AGGCUCCCAUGGUGGCAAGGGUUUU	1481
53335_I2_251	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495836-60495861	CUGCCCCAGGCUCCCAUGGUGGCAA	1482
53335_I2_252	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495837-60495862	UCUGCCCCAGGCUCCCAUGGUGGCA	1483
53335_I2_253	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495842-60495867	CCUUCUCUGCCCCAGGCUCCCAUGG	1484
53335_I2_254	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495845-60495870	GUGCCUUCUCUGCCCCAGGCUCCCA	1485
53335_I2_255	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495854-60495879	GACUUCACUGUGCCUUCUCUGCCCC	1486
53335_I2_256	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495893-60495918	AAAAAUGACAGCACCAUUUAGAGCC	1487
53335_I2_257	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60495978-60496003	UUUCCAGAGCUGCAGUAUGUUUCUU	1488
53335_I2_258	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496020-60496045	GGGUGACCUCUGGAUCCCUUCUCUU	1489
53335_I2_259	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496035-60496060	ACUUUUCACAUAUGAGGGUGACCUC	1490
53335_I2_260	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496045-60496070	UUAUCAAUUGACUUUUCACAUAUGA	1491
53335_I2_261	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496046-60496071	AUUAUCAAUUGACUUUUCACAUAUG	1492
53335_I2_262	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496090-60496115	GCAUUGCUUUCAAUCAUCUCCCCUC	1493
53335_I2_263	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496119-60496144	UGUUUCCGUAAUCCAUUUCCUGCAC	1494
53335_I2_264	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496165-60496190	AGAACUUUCCCGGUUCUGGUUUUCU	1495
53335_I2_265	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496166-60496191	CAGAACUUUCCCGGUUCUGGUUUUC	1496
53335_I2_266	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496174-60496199	CCGACUUCCAGAACUUUCCCGGUUC	1497
53335_I2_267	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496180-60496205	GUUUUUCCGACUUCCAGAACUUUCC	1498
53335_I2_268	BCL11a	Интрон 2	-	chr2:60496233-60496258	GACAAGGCAUUCUGUAAACGUGUAU	1499

В вариантах осуществления целевой домен gРНК состоит из 20 3'нп любой из последовательностей в таблице выше.

Типичные предпочтительные целевые домены gРНК, применимые в композициях и способах по изобретению, описаны в приведенных ниже таблицах.

Таблица 5. Предпочтительные целевые домены нацеливающих РНК, направленные на кодирующие области гена BCL11a.

Id. целевого домена	Цель	Целевой домен gРНК	Сайт нацеливания (Chr2)	SEQ ID NO:
CR000044	BCL11a	ACAGGCCGUGAACCUAAGUG	60678414-60678436	1
CR000056	BCL11a	UAGAGGGGGGAAAUUAUAGG	60678685-60678707	2
CR000068	BCL11a	CGAGCGGUAAAUCCUAAAGA	60678840-60678862	3
CR000079	BCL11a	AGACAAAUUCAAAUCCUGCA	60678895-60678917	4
CR000091	BCL11a	GCUUUUGGUGGCUACCAUGC	60678909-60678931	5
CR000102	BCL11a	AAUUUAUGCCAUCUGAUAAG	60679112-60679134	6
CR000033	BCL11a	UGUUCCUCCUACCCACCCGA	60679178-60679200	7
CR000045	BCL11a	AUAAAUGUUGGAGCUUUAGG	60679288-60679310	8
CR000069	BCL11a	CAACCUAAUUACCUGUAUUG	60679389-60679411	9
CR000080	BCL11a	CGCUGUCAUGAGUGAUGCCC	60679428-60679450	10
CR000092	BCL11a	GGCAUCACUCAUGACAGCGA	60679432-60679454	11
CR000103	BCL11a	AGUCCCAUAGAGAGGGCCCG	60679456-60679478	12
CR000115	BCL11a	ACUGAUUCACUGUUCCAAUG	60679476-60679498	13
CR000034	BCL11a	AGGACUCUGUCUUCGCACAA	60679577-60679599	14
CR000058	BCL11a	CCACGCUGACGUCGACUGGG	60679650-60679672	15
CR000070	BCL11a	GUUCUUCACACACCCCCAUU	60679779-60679801	16
CR000081	BCL11a	GCGCUUCUCCACACCGCCCG	60687934-60687956	17
CR000093	BCL11a	GUCUGGAGUCUCCGAAGCUA	60688006-60688028	18
CR000116	BCL11a	AAAGAUCCCUUCCUUAGCUU	60688017-60688039	19
CR000035	BCL11a	UCGCCGGCUACGCGGCCUCC	60688046-60688068	20
CR000047	BCL11a	CGGAGAACGUGUACUCGCAG	60688070-60688092	21
CR000071	BCL11a	GAGCUUGAUGCGCUUAGAGA	60688133-60688155	22
CR000082	BCL11a	CCCCCCGAGGCCGACUCGCC	60688200-60688222	23
CR000094	BCL11a	CACCAUGCCCUGCAUGACGU	60688394-60688416	24
CR000105	BCL11a	GAGAGCGAGAGGGUGGACUA	60688506-60688528	25
CR000117	BCL11a	CACGGACUUGAGCGCGCUGC	60688649-60688671	26
CR000036	BCL11a	GCCCACCAAGUCGCUGGUGC	60688676-60688698	27
CR000048	BCL11a	CCCACCAAGUCGCUGGUGCC	60688677-60688699	28
CR000060	BCL11a	GGCGGUGGAGAGACCGUCGU	60688712-60688734	29
CR000072	BCL11a	GCCGCAGAACUCGCAUGACU	60688898-60688920	30
CR000083	BCL11a	CCGCCCCCAGGCGCUCUAUG	60689194-60689216	31
CR000095	BCL11a	UGGGGGUCCAAGUGAUGUCU	60689217-60689239	32
CR000106	BCL11a	CUCAACUUACAAAUACCCUG	60695857-60695879	33
CR000118	BCL11a	AGUGCAGAAUAUGCCCCGCA	60695872-60695894	34
CR000037	BCL11a	GCAUAUUCUGCACUCAUCCC	60695881-60695903	35
CR000049	BCL11a	GAGCUCUAAUCCCCACGCCU	60695898-60695920	36
CR000061	BCL11a	AGAGCUCCAUGUGCAGAACG	60695914-60695936	37
CR000084	BCL11a	GAUAAACUUCUGCACUGGAG	60695947-60695969	38
CR000096	BCL11a	UAGCUGUAGUGCUUGAUUUU	60695981-60696003	39
CR000107	BCL11a	UAUCCAAAUUCAUACAAUAG	60716451-60716473	40
CR000119	BCL11a	AUGCCCUGAGUAUCCCAACA	60717068-60717090	41
CR000038	BCL11a	UAGUAACAGACCCAUGUGCU	60717232-60717254	42
CR000050	BCL11a	AUACUUCAAGGCCUCAAUGA	60717661-60717683	43
CR000062	BCL11a	GACUAGGUAGACCUUCAUUG	60717672-60717694	44
CR000073	BCL11a	CUGAGCUAGUGGGGGCUCUU	60720773-60720795	45
CR000085	BCL11a	CUGAGCACAUUCUUACGCCU	60721291-60721313	46
CR000097	BCL11a	UUUAUAAGACAUUAGGGUAt	60721534-60721556	47
CR000108	BCL11a	UGAUAGGUGCCUAUAUGUGA	60722096-60722118	48
CR000120	BCL11a	UCCACCCAUCCAUCACAUAU	60722105-60722127	49
CR000039	BCL11a	CUUCAAAGUUGUAUUGACCC	60722434-60722456	50
CR000051	BCL11a	AAACCAGACUAGUUUAUAGG	60722687-60722709	51
CR000063	BCL11a	UUUGAGACAGUUACCCCUUC	60723706-60723728	52
CR000074	BCL11a	AACCUGAGGGCUAGUUUCUA	60724541-60724563	53
CR000086	BCL11a	GCCUGGACCCACCGCUUCAU	60725058-60725080	54
CR000109	BCL11a	AAACCAGUGAGGUCAUCUAU	60725857-60725879	55
CR000121	BCL11a	ACCUGCUAUGUGUUCCUGUU	60773104-60773126	56
CR000040	BCL11a	UAGAGGAAUUUGCCCCAAAC	60773118-60773140	57
CR000052	BCL11a	GAUAAACAAUCGUCAUCCUC	60773150-60773172	58
CR000064	BCL11a	UGGCAUCCAGGUCACGCCAG	60773166-60773188	59
CR000075	BCL11a	GACCUGGAUGCCAACCUCCA	60773176-60773198	60
CR000087	BCL11a	AAAAGCAUCCAAUCCCGUGG	60773190-60773212	61
CR000110	BCL11a	GAUGCUUUUUUCAUCUCGAU	60773204-60773226	62
CR000122	BCL11a	CCACAGCUUUUUCUAAGCAG	60773247-60773269	63
CR000041	BCL11a	CCCCCAAUGGGAAGUUCAUC	60773316-60773338	64
CR000053	BCL11a	AUCAUGACCUCCUCACCUGU	60773344-60773366	65
CR000065	BCL11a	AGGAGGUCAUGAUCCCCUUC	60773354-60773376	66
CR000088	BCL11a	CCCCUUCUGGAGCUCCCAAC	60773367-60773389	67
CR000099	BCL11a	GCUCCCAACGGGCCGUGGUC	60773378-60773400	68
CR000111	BCL11a	ACAGAUGAUGAACCAGACCA	60773390-60773412	69
CR000123	BCL11a	UCUGUAAGAAUGGCUUCAAG	60773408-60773430	70
CR000042	BCL11a	CAAUUAUUAGAGUGCCAGAG	60773459-60773481	71
CR000054	BCL11a	GCCUUGCUUGCGGCGAGACA	60780385-60780407	72
CR000066	BCL11a	ACCAUGUCUCGCCGCAAGCA	60780386-60780408	73
CR000077	BCL11a	GAGUCUCCUUCUUUCUAACC	60780482-60780504	74
CR000089	BCL11a	GAAUUGUGGGAGAGCCGUCA	60780582-60780604	75
CR000100	BCL11a	AAAAUAGAGCGAGAGUGCAC	60781166-60781188	76
CR000112	BCL11a	GCCCCUGGCGUCCACACGCG	60781306-60781328	77
CR000124	BCL11a	CUCCUCGUUCUUUAUUCCUC	60781716-60781738	78
CR000043	BCL11a	GACUGCCCGCGCUUUGUCCU	60781815-60781837	79
CR000055	BCL11a	UUCCCAGGGACUGGGACUCC	60781838-60781860	80
CR000078	BCL11a	UGGCUCCUGGGUGUGCGCCU	60782123-60782145	81
CR000090	BCL11a	UGAAGCCCGCUUUUUGACAG	60782254-60782276	82
CR000101	BCL11a	AGGGUGGAGACGGGUCGCCA	60782526-60782548	83
CR000113	BCL11a	GCUCAGGGUCUCGCGGGCCA	60782543-60782565	84
CR000059	BCL11a	UGAGUCCGAGCAGAAGAAGA	73160981-73161003	85

Таблица 6: Предпочтительные целевые домены нацеливающих РНК, направленные на область HPFH Френча (French HPFH; Sankaran VG et al. A functional element necessary for fetal hemoglobin silencing. NEJM (2011) 365:807-814.)

Id. целевого домена	Цель	Цепь	Целевой домен gРНК	Геномная локализация цели	SEQ ID NO:
CR001016	HPFH	-	UCUUAAACCAACCUGCUCAC	chr11:5234538-5234558	86
CR001017	HPFH	+	CAGGUUGGUUUAAGAUAAGC	chr11:5234543-5234563	87
CR001018	HPFH	+	AGGUUGGUUUAAGAUAAGCA	chr11:5234544-5234564	88
CR001019	HPFH	-	UUAAGGGAAUAGUGGAAUGA	chr11:5234600-5234620	89
CR001020	HPFH	-	AGGGCAAGUUAAGGGAAUAG	chr11:5234608-5234628	90
CR001021	HPFH	+	CCCUUAACUUGCCCUGAGAU	chr11:5234613-5234633	91
CR001022	HPFH	-	CCAAUCUCAGGGCAAGUUAA	chr11:5234616-5234636	92
CR001023	HPFH	-	GCCAAUCUCAGGGCAAGUUA	chr11:5234617-5234637	93
CR001024	HPFH	-	UGACAGAACAGCCAAUCUCA	chr11:5234627-5234647	94
CR001025	HPFH	-	AUGACAGAACAGCCAAUCUC	chr11:5234628-5234648	95
CR001026	HPFH	-	GAGAUAUGUAGAGGAGAACA	chr11:5234670-5234690	96
CR001027	HPFH	-	GGAGAUAUGUAGAGGAGAAC	chr11:5234671-5234691	97
CR001028	HPFH	-	UGCGGUGGGGAGAUAUGUAG	chr11:5234679-5234699	98
CR001029	HPFH	-	CUGCUGAAAGAGAUGCGGUG	chr11:5234692-5234712	99
CR001030	HPFH	-	ACUGCUGAAAGAGAUGCGGU	chr11:5234693-5234713	100
CR001031	HPFH	-	AACUGCUGAAAGAGAUGCGG	chr11:5234694-5234714	101
CR001032	HPFH	-	AACAACUGCUGAAAGAGAUG	chr11:5234697-5234717	102
CR001033	HPFH	-	UCUGCAAAAAUGAAACUAGG	chr11:5234731-5234751	103
CR001034	HPFH	-	ACUUCUGCAAAAAUGAAACU	chr11:5234734-5234754	104
CR001035	HPFH	+	CAUUUUUGCAGAAGUGUUUU	chr11:5234739-5234759	105
CR001036	HPFH	+	AGUGUUUUAGGCUAAUAUAG	chr11:5234751-5234771	106
CR001037	HPFH	-	UUGGAGACAAAAAUCUCUAG	chr11:5234883-5234903	107
CR001038	HPFH	+	UCUAGAGAUUUUUGUCUCCA	chr11:5234882-5234902	108
CR001039	HPFH	+	CUAGAGAUUUUUGUCUCCAA	chr11:5234883-5234903	109
CR001040	HPFH	+	GUCUCCAAGGGAAUUUUGAG	chr11:5234895-5234915	110
CR001041	HPFH	+	CCAAGGGAAUUUUGAGAGGU	chr11:5234899-5234919	111
CR001042	HPFH	-	CCAACCUCUCAAAAUUCCCU	chr11:5234902-5234922	112
CR001043	HPFH	+	GGAAUUUUGAGAGGUUGGAA	chr11:5234904-5234924	113
CR001044	HPFH	+	UGCUUGCUUCCUCCUUCUUU	chr11:5234953-5234973	114
CR001045	HPFH	-	AAGAAUUUACCAAAAGAAGG	chr11:5234965-5234985	115
CR001046	HPFH	-	AGGAAGAAUUUACCAAAAGA	chr11:5234968-5234988	116
CR001047	HPFH	-	AAAAAUUAGAGUUUUAUUAU	chr11:5234988-5235008	117
CR001048	HPFH	-	UUUUUUAAAUAUUCUUUUAA	Chr11:5235023-5235045	118
CR001049	HPFH	+	UAUUUACCAGUUAUUGAAAU	chr11:5235062-5235082	119
CR001050	HPFH	+	CCAGUUAUUGAAAUAGGUUC	chr11:5235068-5235088	120
CR001051	HPFH	-	CCAGAACCUAUUUCAAUAAC	chr11:5235071-5235091	121
CR001052	HPFH	+	UUCUGGAAACAUGAAUUUUA	chr11:5235085-5235105	122
CR001053	HPFH	+	AUUUUGAAUGUUUAAAAUUA	chr11:5235151-5235171	123
CR001054	HPFH	-	AAAUUUAAUCUGGCUGAAUA	chr11:5235216-5235236	124
CR001055	HPFH	-	GAACUUCGUUAAAUUUAAUC	chr11:5235226-5235246	125
CR001056	HPFH	+	AUUAAAUUUAACGAAGUUCC	chr11:5235227-5235247	126
CR001057	HPFH	+	UUAAAUUUAACGAAGUUCCU	chr11:5235228-5235248	127
CR001058	HPFH	-	UUCUGUACUAGCAUAUUCCC	chr11:5235248-5235268	128
CR001059	HPFH	+	UGUGUUCUUAAAAAAAAAUG	Chr11:5235275-5235297	129
CR001060	HPFH	+	AAAAAUGUGGAAUUAGACCC	chr11:5235293-5235313	130
CR001061	HPFH	-	CUACUGGGAUCUUCAUUCCU	chr11:5235313-5235333	131
CR001062	HPFH	-	ACUACUGGGAUCUUCAUUCC	chr11:5235314-5235334	132
CR001063	HPFH	-	GAAAAGAGUGAAAAACUACU	chr11:5235328-5235348	133
CR001064	HPFH	-	AGAAAAGAGUGAAAAACUAC	chr11:5235329-5235349	134
CR001065	HPFH	+	GAAUUCAAAUAAUGCCACAA	chr11:5235349-5235369	135
CR001066	HPFH	-	UGUGUAUUUGUCUGCCAUUG	chr11:5235366-5235386	136
CR001067	HPFH	+	CACCCAUGAGCAUAUCCAAA	chr11:5235384-5235404	137
CR001068	HPFH	-	UUCCUUUUGGAUAUGCUCAU	chr11:5235389-5235409	138
CR001069	HPFH	-	CUUCCUUUUGGAUAUGCUCA	chr11:5235390-5235410	139
CR001070	HPFH	+	CAUGAGCAUAUCCAAAAGGA	chr11:5235388-5235408	140
CR001071	HPFH	+	UAUCCAAAAGGAAGGAUUGA	chr11:5235396-5235416	141
CR001072	HPFH	-	UUUCCUUCAAUCCUUCCUUU	chr11:5235402-5235422	142
CR001073	HPFH	+	AAGGAAGGAUUGAAGGAAAG	chr11:5235403-5235423	143
CR001074	HPFH	+	GAAGGAUUGAAGGAAAGAGG	chr11:5235406-5235426	144
CR001075	HPFH	+	GAGGAGGAAGAAAUGGAGAA	chr11:5235422-5235442	145
CR001076	HPFH	+	AGGAAGAAAUGGAGAAAGGA	chr11:5235426-5235446	146
CR001077	HPFH	+	GAAGGAAGAGGGGAAGAGAG	chr11:5235448-5235468	147
CR001078	HPFH	+	GAAGAGGGGAAGAGAGAGGA	chr11:5235452-5235472	148
CR001079	HPFH	+	AGGGGAAGAGAGAGGAUGGA	chr11:5235456-5235476	149
CR001080	HPFH	+	GGGGAAGAGAGAGGAUGGAA	chr11:5235457-5235477	150
CR001081	HPFH	+	AAGAGAGAGGAUGGAAGGGA	chr11:5235461-5235481	151
CR001082	HPFH	+	AGAGAGGAUGGAAGGGAUGG	chr11:5235464-5235484	152
CR001083	HPFH	+	GGAAGGGAUGGAGGAGAAGA	chr11:5235473-5235493	153
CR001084	HPFH	+	GAAGAAGGAAAAAUAAAUAA	Chr11:5235483-5235505	154
CR001085	HPFH	+	AGGAAAAAUAAAUAAUGGAG	Chr11:5235488-5235510	155
CR001086	HPFH	+	AAAUAAAUAAUGGAGAGGAG	chr11:5235498-5235518	156
CR001087	HPFH	+	UGGAGAGGAGAGGAGAAAAA	chr11:5235508-5235528	157
CR001088	HPFH	+	AGAGGAGAGGAGAAAAAAGG	chr11:5235511-5235531	158
CR001089	HPFH	+	GAGGAGAGGAGAAAAAAGGA	chr11:5235512-5235532	159
CR001090	HPFH	+	AGGAGAGGAGAAAAAAGGAG	chr11:5235513-5235533	160
CR001091	HPFH	+	AGGAGAAAAAAGGAGGGGAG	chr11:5235518-5235538	161
CR001092	HPFH	+	GAGAGGAGAGGAGAAGGGAU	chr11:5235535-5235555	162
CR001093	HPFH	+	AGAGGAGAGGAGAAGGGAUA	chr11:5235536-5235556	163
CR001094	HPFH	+	GAAGAGAAAGAGAAAGGGAA	Chr11:5235553-5235575	164
CR001095	HPFH	+	AAGAGAGGAAAGAAGAGAAG	chr11:5235581-5235601	165
CR001096	HPFH	+	GAGAGAAAAGAAACGAAGAG	Chr11:5235598-5235620	166
CR001097	HPFH	+	AGAGAAAAGAAACGAAGAGA	Chr11:5235599-5235621	167
CR001098	HPFH	+	GAGAAAAGAAACGAAGAGAG	Chr11:5235600-5235622	168
CR001099	HPFH	+	AAAGAAACGAAGAGAGGGGA	chr11:5235609-5235629	169
CR001100	HPFH	+	AAGAAACGAAGAGAGGGGAA	chr11:5235610-5235630	170
CR001101	HPFH	+	GGAAGGGAAGGAAAAAAAAG	chr11:5235626-5235646	171
CR001102	HPFH	+	AAGACUGACAGUUCAAAUUU	chr11:5235672-5235692	172
CR001103	HPFH	+	ACUGACAGUUCAAAUUUUGG	chr11:5235675-5235695	173
CR001104	HPFH	+	UUCAAAUUUUGGUGGUGAUA	chr11:5235683-5235703	174
CR001105	HPFH	+	AAUAGAAACUCAAACUCUGU	chr11:5235709-5235729	175
CR001106	HPFH	+	GUACAAUAGUAUAACCCCUU	chr11:5235739-5235759	176
CR001107	HPFH	-	CUAUUAAAGGUUUUCCAAAG	chr11:5235756-5235776	177
CR001108	HPFH	-	ACUAUUAAAGGUUUUCCAAA	chr11:5235757-5235777	178
CR001109	HPFH	-	UACUAUUAAAGGUUUUCCAA	chr11:5235758-5235778	179
CR001110	HPFH	-	GCAUUUGUGGAUACUAUUAA	chr11:5235769-5235789	180
CR001111	HPFH	+	UUAAUAGUAUCCACAAAUGC	chr11:5235769-5235789	181
CR001132	HPFH	-	UAUCAAGCAUCCAGCAUUUG	chr11:5235782-5235802	1500
CR001133	HPFH	-	UAUCUAAAAAUGUAAUUGCU	chr11:5235814-5235834	1501
CR001134	HPFH	-	AGCAUUUCUAUACAUGUCUU	chr11:5235862-5235882	1502
CR001135	HPFH	+	UAAUCAUAAAAACCUCAAAC	chr11:5235893-5235913	1503
CR001136	HPFH	-	UUUAAGUGGCUACCGGUUUG	chr11:5235908-5235928	1504
CR001137	HPFH	-	GUAAGCAUUUAAGUGGCUAC	chr11:5235915-5235935	1505
CR001138	HPFH	-	ACUGUUGGUAAGCAUUUAAG	chr11:5235922-5235942	1506
CR001139	HPFH	-	UAAUUUAUCAAUUCUACUGU	chr11:5235937-5235957	1507
CR001140	HPFH	+	ACAGUAGAAUUGAUAAAUUA	chr11:5235937-5235957	1508
CR001141	HPFH	+	CAAAUGCAUUUUACAGCAUU	chr11:5236027-5236047	1509
CR001142	HPFH	+	GGUUGAUUAAAAGUAACCAG	chr11:5236048-5236068	1510
CR001143	HPFH	-	AUAUAGUUUGAACUCACCUC	Chr11:5236059-5236081	1511
CR001144	HPFH	+	UUUAUUUGUAUAUAGAAAGA	chr11:5236090-5236110	1512
CR001145	HPFH	+	UGCCUGAGAUUCUGAUCACA	chr11:5236119-5236139	1513
CR001146	HPFH	+	GCCUGAGAUUCUGAUCACAA	chr11:5236120-5236140	1514
CR001147	HPFH	+	CCUGAGAUUCUGAUCACAAG	chr11:5236121-5236141	1515
CR001148	HPFH	-	CCCCUUGUGAUCAGAAUCUC	chr11:5236124-5236144	1516
CR001149	HPFH	+	AAGGGGAAAUGUUAUAAAAU	chr11:5236138-5236158	1517
CR001150	HPFH	+	AGGGGAAAUGUUAUAAAAUA	chr11:5236139-5236159	1518
CR001151	HPFH	+	UGUUAUAAAAUAGGGUAGAG	chr11:5236147-5236167	1519
CR001152	HPFH	-	CAAAGUUUAAAGGUCAUUCA	chr11:5236175-5236195	1520
CR001153	HPFH	-	UAACUUGUAACAAAGUUUAA	chr11:5236185-5236205	1521
CR001154	HPFH	+	CAAGUUAUUUUUCUGUAACC	chr11:5236198-5236218	1522
CR001155	HPFH	-	AAUAUCUUUCGUUGGCUUCC	chr11:5236219-5236239	1523
CR001156	HPFH	-	AAUUAUUCAAUAUCUUUCGU	chr11:5236227-5236247	1524
CR001157	HPFH	+	GAUAUUGAAUAAUUCAAGAA	chr11:5236233-5236253	1525
CR001158	HPFH	+	AUUGAAUAAUUCAAGAAAGG	chr11:5236236-5236256	1526
CR001159	HPFH	+	GAAUAAUUCAAGAAAGGUGG	chr11:5236239-5236259	1527
CR001160	HPFH	+	AUUCAAGAAAGGUGGUGGCA	chr11:5236244-5236264	1528
CR001161	HPFH	+	UAUUUUAGAAGUAGAGAAAA	chr11:5236313-5236333	1529
CR001162	HPFH	+	AUUUUAGAAGUAGAGAAAAU	chr11:5236314-5236334	1530
CR001163	HPFH	+	GAAAAUGGGAGACAAAUAGC	chr11:5236328-5236348	1531
CR001164	HPFH	+	AAAAUGGGAGACAAAUAGCU	chr11:5236329-5236349	1532
CR001165	HPFH	+	AGCUGGGCUUCUGUUGCAGU	chr11:5236345-5236365	1533
CR001166	HPFH	+	GCUGGGCUUCUGUUGCAGUA	chr11:5236346-5236366	1534
CR001167	HPFH	+	GCCAUUUCUAUUAUCAGACU	chr11:5236383-5236403	1535
CR001168	HPFH	-	UCCAAGUCUGAUAAUAGAAA	chr11:5236387-5236407	1536
CR001169	HPFH	+	UUAUCAGACUUGGACCAUGA	chr11:5236393-5236413	1537
CR001170	HPFH	-	CACGACUGACAUCACCGUCA	chr11:5236410-5236430	1538
CR001171	HPFH	+	UCAGUCGUGAACACAAGAAU	chr11:5236421-5236441	1539
CR001172	HPFH	+	CAGUCGUGAACACAAGAAUA	chr11:5236422-5236442	1540
CR001173	HPFH	+	GGCCACAUUUGUGAGUUUAG	chr11:5236443-5236463	1541
CR001174	HPFH	-	UACCACUAAACUCACAAAUG	chr11:5236448-5236468	1542
CR001175	HPFH	+	UAAAAUCAGAAAUACAGUCU	chr11:5236471-5236491	1543
CR001176	HPFH	+	AAAAGAUGUACUUAGAUAUG	chr11:5236528-5236548	1544
CR001177	HPFH	+	UGUACUUAGAUAUGUGGAUC	chr11:5236534-5236554	1545
CR001178	HPFH	+	AGCUCAGAAAGAAUACAACC	chr11:5236557-5236577	1546
CR001179	HPFH	+	ACCAGGUCAAGAAUACAGAA	chr11:5236574-5236594	1547
CR001180	HPFH	-	UCCAUUCUGUAUUCUUGACC	chr11:5236578-5236598	1548
CR001181	HPFH	-	CUGUCAUUUUUAACAGGUAG	chr11:5236646-5236666	1549
CR001182	HPFH	-	CAUCAUCUGUCAUUUUUAAC	chr11:5236652-5236672	1550
CR001183	HPFH	-	AAACACAUUCUAAGAUUUUA	chr11:5236691-5236711	1551
CR001184	HPFH	+	AAUCUUAGAAUGUGUUUGUG	chr11:5236694-5236714	1552
CR001185	HPFH	+	AUCUUAGAAUGUGUUUGUGA	chr11:5236695-5236715	1553
CR001186	HPFH	+	UUAGAAUGUGUUUGUGAGGG	chr11:5236698-5236718	1554
CR001187	HPFH	-	CAAUUUUCUUAUAUAUGAAU	chr11:5236734-5236754	1555
CR001188	HPFH	+	UUGAUUCUAAAAAAAAUGUU	Chr11:5236746-5236768	1556
CR001189	HPFH	+	AAAUGUUAGGUAAAUUCUUA	chr11:5236764-5236784	1557
CR001190	HPFH	+	GGUAAAUUCUUAAGGCCAUG	chr11:5236772-5236792	1558
CR001191	HPFH	-	AGAUCAAAUAACAGUCCUCA	chr11:5236790-5236810	1559
CR001192	HPFH	+	GUCUGUUAAUUCCAAAGACU	chr11:5236812-5236832	1560
CR001193	HPFH	-	AAAGUGAAAAGCCAAGUCUU	chr11:5236826-5236846	1561
CR001194	HPFH	+	CCUGAAAUGAUUUUACACAU	chr11:5236858-5236878	1562
CR001195	HPFH	-	CCAAUGUGUAAAAUCAUUUC	chr11:5236861-5236881	1563
CR001196	HPFH	+	CUGAAAUGAUUUUACACAUU	chr11:5236859-5236879	1564
CR001197	HPFH	+	AUUUUACACAUUGGGAGAUC	chr11:5236867-5236887	1565
CR001198	HPFH	+	GGUUACAUGUUUAUUCUAUA	chr11:5236888-5236908	1566
CR001199	HPFH	+	UCUAUAUGGAUUGCAUUGAG	chr11:5236902-5236922	1567
CR001200	HPFH	+	AGGAUUUGUAUAACAGAAUA	chr11:5236922-5236942	1568
CR001201	HPFH	+	UUUUCUUUUCUCUUCUGAGA	Chr11:5236945-5236967	1569
CR001202	HPFH	-	GCACUCUAGCUUGGGCAAUA	chr11:5236984-5237004	1570
CR001203	HPFH	-	UGCACUCUAGCUUGGGCAAU	chr11:5236985-5237005	1571
CR001204	HPFH	-	UGCACCAUUGCACUCUAGCU	Chr11:5236985-5237007	1572
CR001205	HPFH	-	GCUAUUCAGGUGGCUGAGGC	chr11:5237061-5237081	1573
CR001206	HPFH	+	ACCUGAAUAGCUGGGACUGC	Chr11:5237065-5237087	1574
CR001207	HPFH	+	GCAGGCAUGCACCACACGCC	Chr11:5237083-5237105	1575
CR001208	HPFH	-	UACAAAAUCAGCCGGGCGUG	chr11:5237102-5237122	1576
CR001209	HPFH	-	GGCUUGUAAACCCAGCACUU	chr11:5237208-5237228	1577
CR001210	HPFH	-	CUGGCUGGAUGCGGUGGCUC	chr11:5237229-5237249	1578
CR001211	HPFH	+	CUGAGCCACCGCAUCCAGCC	chr11:5237227-5237247	1579
CR001212	HPFH	-	CUUAUCCUGGCUGGAUGCGG	chr11:5237235-5237255	1580
CR001213	HPFH	+	CACCGCAUCCAGCCAGGAUA	chr11:5237233-5237253	1581
CR001214	HPFH	-	GACCUUAUCCUGGCUGGAUG	chr11:5237238-5237258	1582
CR001215	HPFH	-	CUUUUAGACCUUAUCCUGGC	chr11:5237244-5237264	1583
CR001216	HPFH	+	GCCAGGAUAAGGUCUAAAAG	chr11:5237244-5237264	1584
CR001217	HPFH	-	UCCACUUUUAGACCUUAUCC	chr11:5237248-5237268	1585
CR001218	HPFH	+	AAUAGCAUCUACUCUUGUUC	chr11:5237271-5237291	1586
CR001219	HPFH	+	CUCUUGUUCAGGAAACAAUG	chr11:5237282-5237302	1587
CR001220	HPFH	+	GGAAACAAUGAGGACCUGAC	chr11:5237292-5237312	1588
CR001221	HPFH	+	GAAACAAUGAGGACCUGACU	chr11:5237293-5237313	1589
CR001222	HPFH	+	ACCUGACUGGGCAGUAAGAG	chr11:5237305-5237325	1590
CR001223	HPFH	-	ACCACUCUUACUGCCCAGUC	chr11:5237309-5237329	1591
CR001224	HPFH	+	AAGAGUGGUGAUUAAUAGAU	chr11:5237320-5237340	1592
CR001225	HPFH	+	AGAGUGGUGAUUAAUAGAUA	chr11:5237321-5237341	1593
CR001226	HPFH	+	AGAAUCGAACUGUUGAUUAG	chr11:5237356-5237376	1594
CR001227	HPFH	+	UCGAACUGUUGAUUAGAGGU	chr11:5237360-5237380	1595
CR003027	HPFH	+	CGAACUGUUGAUUAGAGGUA	chr11:5237361-5237381	1692
CR003028	HPFH	+	AUGAUUUUAAUCUGUGACCU	chr11:5237386-5237406	1693
CR003029	HPFH	+	UAAUCUGUGACCUUGGUGAA	chr11:5237393-5237413	1694
CR003030	HPFH	+	AAUCUGUGACCUUGGUGAAU	chr11:5237394-5237414	1695
CR003031	HPFH	-	AGCUACUUGCCCAUUCACCA	chr11:5237406-5237426	1696
CR003032	HPFH	+	UAGCUAUCUAAUGACUAAAA	chr11:5237421-5237441	1697
CR003033	HPFH	+	AUGACUAAAAUGGAAAACAC	chr11:5237431-5237451	1698
CR003034	HPFH	+	AAAUACCCAUGCUGAGUCUG	chr11:5237482-5237502	1699
CR003035	HPFH	-	AGGCACCUCAGACUCAGCAU	chr11:5237490-5237510	1700
CR003036	HPFH	-	UAGGCACCUCAGACUCAGCA	chr11:5237491-5237511	1701
CR003037	HPFH	+	GCUGAGUCUGAGGUGCCUAU	chr11:5237492-5237512	1702
CR003038	HPFH	-	UAUUUAUAUAGAUGUCCUAU	chr11:5237510-5237530	1703
CR003039	HPFH	-	CAUAUAUCAAACAAUGUACU	chr11:5237535-5237555	1704
CR003040	HPFH	+	CCAGUACAUUGUUUGAUAUA	chr11:5237533-5237553	1705
CR003041	HPFH	-	CCAUAUAUCAAACAAUGUAC	chr11:5237536-5237556	1706
CR003042	HPFH	+	CAGUACAUUGUUUGAUAUAU	chr11:5237534-5237554	1707
CR003043	HPFH	+	CAUUGUUUGAUAUAUGGGUU	chr11:5237539-5237559	1708
CR003044	HPFH	+	GAUAUAUGGGUUUGGCACUG	chr11:5237547-5237567	1709
CR003045	HPFH	+	UAUGGGUUUGGCACUGAGGU	chr11:5237551-5237571	1710
CR003046	HPFH	+	GGGUUUGGCACUGAGGUUGG	chr11:5237554-5237574	1711
CR003047	HPFH	+	GCACUGAGGUUGGAGGUCAG	chr11:5237561-5237581	1712
CR003048	HPFH	+	CAGAGGUUAGAAAUCAGAGU	chr11:5237578-5237598	1713
CR003049	HPFH	+	AGAGGUUAGAAAUCAGAGUU	chr11:5237579-5237599	1714
CR003050	HPFH	+	UAGAAAUCAGAGUUGGGAAU	chr11:5237585-5237605	1715
CR003051	HPFH	+	AGAAAUCAGAGUUGGGAAUU	chr11:5237586-5237606	1716
CR003052	HPFH	+	GUUGGGAAUUGGGAUUAUAC	chr11:5237596-5237616	1717
CR003053	HPFH	-	CUUUGUAUUCAUCACACUCU	chr11:5237654-5237674	1718
CR003054	HPFH	+	AUGAAUACAAAGUUAAAUGA	chr11:5237662-5237682	1719
CR003055	HPFH	-	UAAAUGUUGGUGUUCAUUAA	chr11:5237689-5237709	1720
CR003056	HPFH	-	UGAGAUUUCACAUUAAAUGU	chr11:5237702-5237722	1721
CR003057	HPFH	+	ACAUUUAAUGUGAAAUCUCA	chr11:5237702-5237722	1722
CR003058	HPFH	-	UAAAAUCAUCGGGGAUUUUG	chr11:5237749-5237769	1723
CR003059	HPFH	-	CUAAAAUCAUCGGGGAUUUU	chr11:5237750-5237770	1724
CR003060	HPFH	-	UCUAAAAUCAUCGGGGAUUU	chr11:5237751-5237771	1725
CR003061	HPFH	-	ACUGAGUUCUAAAAUCAUCG	chr11:5237758-5237778	1726
CR003062	HPFH	-	UACUGAGUUCUAAAAUCAUC	chr11:5237759-5237779	1727
CR003063	HPFH	-	AUACUGAGUUCUAAAAUCAU	chr11:5237760-5237780	1728
CR003064	HPFH	+	UAAUUAGUGUAAUGCCAAUG	chr11:5237786-5237806	1729
CR003065	HPFH	+	AAUUAGUGUAAUGCCAAUGU	chr11:5237787-5237807	1730
CR003066	HPFH	+	AAUGCCAAUGUGGGUUAGAA	chr11:5237796-5237816	1731
CR003067	HPFH	-	ACUUCCAUUCUAACCCACAU	chr11:5237803-5237823	1732
CR003068	HPFH	+	AAUGGAAGUCAACUUGCUGU	chr11:5237814-5237834	1733
CR003069	HPFH	+	CUUGCUGUUGGUUUCAGAGC	chr11:5237826-5237846	1734
CR003070	HPFH	+	CUGUUGGUUUCAGAGCAGGU	chr11:5237830-5237850	1735
CR003071	HPFH	+	UUCAGAGCAGGUAGGAGAUA	chr11:5237838-5237858	1736
CR003072	HPFH	+	AGUGAAAAGCUGAAACAAAA	chr11:5237877-5237897	1737
CR003073	HPFH	+	AAGCUGAAACAAAAAGGAAA	chr11:5237883-5237903	1738
CR003074	HPFH	+	UGAAACAAAAAGGAAAAGGU	chr11:5237887-5237907	1739
CR003075	HPFH	+	GAAACAAAAAGGAAAAGGUA	chr11:5237888-5237908	1740
CR003076	HPFH	+	GGAAAAGGUAGGGUGAAAGA	chr11:5237898-5237918	1741
CR003077	HPFH	+	GAAAAGGUAGGGUGAAAGAU	chr11:5237899-5237919	1742
CR003078	HPFH	+	AAAGAUGGGAAAUGUAUGUA	chr11:5237913-5237933	1743
CR003079	HPFH	+	GAUGGGAAAUGUAUGUAAGG	chr11:5237916-5237936	1744
CR003080	HPFH	+	UGUAAGGAGGAUGAGCCACA	chr11:5237929-5237949	1745
CR003081	HPFH	+	GGAGGAUGAGCCACAUGGUA	chr11:5237934-5237954	1746
CR003082	HPFH	+	GAGGAUGAGCCACAUGGUAU	chr11:5237935-5237955	1747
CR003083	HPFH	+	GAUGAGCCACAUGGUAUGGG	chr11:5237938-5237958	1748
CR003084	HPFH	-	AGUAUACCUCCCAUACCAUG	chr11:5237947-5237967	1749
CR003085	HPFH	+	AUGGUAUGGGAGGUAUACUA	chr11:5237948-5237968	1750
CR003086	HPFH	+	GGAGGUAUACUAAGGACUCU	chr11:5237956-5237976	1751
CR003087	HPFH	+	GAGGUAUACUAAGGACUCUA	chr11:5237957-5237977	1752
CR003088	HPFH	+	ACUCUAGGGUCAGAGAAAUA	chr11:5237971-5237991	1753
CR003089	HPFH	+	CUCUAGGGUCAGAGAAAUAU	chr11:5237972-5237992	1754
CR003090	HPFH	-	AAGAAUGUGAAUUUUGUAGA	chr11:5238004-5238024	1755
CR003091	HPFH	+	UUCUACAAAAUUCACAUUCU	chr11:5238003-5238023	1756
CR003092	HPFH	+	ACAAAAUUCACAUUCUUGGC	chr11:5238007-5238027	1757
CR003093	HPFH	+	CAAAAUUCACAUUCUUGGCU	chr11:5238008-5238028	1758
CR003094	HPFH	+	UUCACAUUCUUGGCUGGGUG	chr11:5238013-5238033	1759
CR003095	HPFH	+	AGGGUGGAUCACCUGAUGUU	chr11:5238071-5238093	1760
CR003096	HPFH	-	GAUCUCGAACUCCUAACAUC	chr11:5238090-5238110	1761

В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область HPFH, включала, например, состояла из целевого домена gРНК, способного привести по меньшей мере примерно к 20% повышению численности F-клеток относительно контроля, например, с помощью способа, описанного в примере 4. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 113. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 99. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 112. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 98. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1580. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 106. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий например, состоящий из SEQ ID NO: 1589. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1503. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 160. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1537. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 159. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 101. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из, SEQ ID NO: 162. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 104. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: ID NO: 138. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1536. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1539. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 1585.

В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может оказаться выгодным включать молекулы gРНК, нацеленные более чем на один, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области HPFH. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащих целевые домены, перечисленные в Таблице 6. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1 00 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 165 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая gРНК молекула включает целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1589, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включает целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 159, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1580 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1589, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1503 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1589 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая gРНК mo лекула и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1537 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспектепервая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 104 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 138 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1539 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1536 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1539 и SEQ ID NO: 1585 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 165 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 113 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 99 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 112 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 98 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1580 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 106 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1503 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1589 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 160 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1537 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 159 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 101 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 162 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 104 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 138 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1536 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 1585 и SEQ ID NO: 1539 соответственно.

Таблица 7: Предпочтительные целевые домены нацеливающей gРНК, направленные на область +58 энхансера гена BCL11a (т.е. на BCL11a энхансер).

ID	Позиция в экзоне	Цепь ДНК	Целевой домен	Локализация	SEQ ID NO:
CR00242	58	+	UAUGCAAUUUUUGCCAAGAU	Chr2:60494419-60494441	182
CR00243	58	+	UUUUGCCAAGAUGGGAGUAU	Chr2:60494427-60494449	183
CR00244	58	+	UUUGCCAAGAUGGGAGUAUG	Chr2:60494428-60494450	184
CR00245	58	+	UCAGUGAGAUGAGAUAUCAA	Chr2:60494477-60494499	185
CR00246	58	+	CAGUGAGAUGAGAUAUCAAA	Chr2:60494478-60494500	186
CR00247	58	+	CCAUCUCCCUAAUCUCCAAU	Chr2:60494518-60494540	187
CR00248	58	-	CCAAUUGGAGAUUAGGGAGA	Chr2:60494518-60494540	188
CR00249	58	-	GCUUUGCCAAUUGGAGAUUA	Chr2:60494524-60494546	189
CR00250	58	-	GGCUUUGCCAAUUGGAGAUU	Chr2:60494525-60494547	190
CR00251	58	+	AAUUGGCAAAGCCAGACUUG	Chr2:60494535-60494557	191
CR00252	58	-	AGUCUGUAUUGCCCCAAGUC	Chr2:60494546-60494568	192
CR00253	58	+	AGACUUGGGGCAAUACAGAC	Chr2:60494548-60494570	193
CR00255	58	-	ACAUUUGGUGAUAAAUCAUU	Chr2:60494602-60494624	194
CR00256	58	+	CCAAAUGUUCUUUCUUCAGC	Chr2:60494617-60494639	195
CR00257	58	+	AUAAUAGUAUAUGCUUCAUA	Chr2:60494676-60494698	196
CR00258	58	-	CGGAGCACUUACUCUGCUCU	Chr2:60494737-60494759	197
CR00259	58	-	AGCAUUUUAGUUCACAAGCU	Chr2:60494757-60494779	198
CR00260	58	-	UGUAACUAAUAAAUACCAGG	Chr2:60494781-60494803	199
CR00261	58	-	AGGUGUAACUAAUAAAUACC	Chr2:60494784-60494806	200
CR00264	58	-	UCUGACCCAAACUAGGAAUU	Chr2:60494836-60494858	201
CR00266	58	+	AAGGAAAAGAAUAUGACGUC	Chr2:60494883-60494905	202
CR00267	58	+	AGGAAAAGAAUAUGACGUCA	Chr2:60494884-60494906	203
CR00268	58	+	GGAAAAGAAUAUGACGUCAG	Chr2:60494885-60494907	204
CR00269	58	+	GAAAAGAAUAUGACGUCAGG	Chr2:60494886-60494908	205
CR00270	58	+	UCAGGGGGAGGCAAGUCAGU	Chr2:60494901-60494923	206
CR00271	58	+	CAGGGGGAGGCAAGUCAGUU	Chr2:60494902-60494924	207
CR00272	58		AUCACAUAUAGGCACCUAUC	Chr2:60494939-60494961	208
CR00273	58		CAGGUACCAGCUACUGUGUU	Chr2:60494939-60494961	209
CR00274	58		ACUAUCCACGGAUAUACACU	Chr2:60494939-60494961	210
CR00275	58	+	CACAGUAGCUGGUACCUGAU	Chr2:60494939-60494961	211
CR00276	58	-	AUCACAUAUAGGCACCUAUC	Chr2:60494953-60494975	212
CR00277	58	+	UGAUAGGUGCCUAUAUGUGA	Chr2:60494955-60494977	213
CR00278	58	+	AGGUGCCUAUAUGUGAUGGA	Chr2:60494959-60494981	214
CR00279	58	+	GGUGCCUAUAUGUGAUGGAU	Chr2:60494960-60494982	215
CR00280	58	-	UCCACCCAUCCAUCACAUAU	Chr2:60494964-60494986	216
CR00281	58	+	ACAGCCCGACAGAUGAAAAA	Chr2:60494986-60495008	217
CR00282	58	+	AUGAAAAAUGGACAAUUAUG	Chr2:60494998-60495020	218
CR00283	58	+	AAAAAUGGACAAUUAUGAGG	Chr2:60495001-60495023	219
CR00284	58	+	AAAAUGGACAAUUAUGAGGA	Chr2:60495002-60495024	220
CR00285	58	+	AAAUGGACAAUUAUGAGGAG	Chr2:60495003-60495025	221
CR00286	58	+	GAGGAGGGGAGAGUGCAGAC	Chr2:60495017-60495039	222
CR00287	58	+	AGGAGGGGAGAGUGCAGACA	Chr2:60495018-60495040	223
CR00288	58	+	CUUCACCUCCUUUACAAUUU	Chr2:60495045-60495067	224
CR00289	58	+	UUCACCUCCUUUACAAUUUU	Chr2:60495046-60495068	225
CR00290	58	-	GACUCCCAAAAUUGUAAAGG	Chr2:60495050-60495072	226
CR00291	58	-	GUGGACUCCCAAAAUUGUAA	Chr2:60495053-60495075	227
CR00292	58	+	UUUUGGGAGUCCACACGGCA	Chr2:60495062-60495084	228
CR00293	58	-	AAUUUGUAUGCCAUGCCGUG	Chr2:60495072-60495094	229
CR00294	58	+	CCAAGAGAGCCUUCCGAAAG	Chr2:60495135-60495157	230
CR00295	58	-	CCAGGGGGGCCUCUUUCGGA	Chr2:60495144-60495166	231
CR00296	58	+	CCUUCCGAAAGAGGCCCCCC	Chr2:60495144-60495166	232
CR00297	58	+	CUUCCGAAAGAGGCCCCCCU	Chr2:60495145-60495167	233
CR00298	58	+	AAGAGGCCCCCCUGGGCAAA	Chr2:60495152-60495174	234
CR00299	58	-	CGGUGGCCGUUUGCCCAGGG	Chr2:60495158-60495180	235
CR00300	58	-	UCGGUGGCCGUUUGCCCAGG	Chr2:60495159-60495181	236
CR00301	58	-	AUCGGUGGCCGUUUGCCCAG	Chr2:60495160-60495182	237
CR00302	58	-	CAUCGGUGGCCGUUUGCCCA	Chr2:60495161-60495183	238
CR00303	58	+	CCUGGGCAAACGGCCACCGA	Chr2:60495162-60495184	239
CR00304	58	-	CCAUCGGUGGCCGUUUGCCC	Chr2:60495162-60495184	240
CR00305	58	+	GCAAACGGCCACCGAUGGAG	Chr2:60495167-60495189	241
CR00306	58	-	CUGGCAGACCUCUCCAUCGG	Chr2:60495175-60495197	242
CR00307	58	-	GGACUGGCAGACCUCUCCAU	Chr2:60495178-60495200	243
CR00308	58	-	UCUGAUUAGGGUGGGGGCGU	Chr2:60495213-60495235	244
CR00309	58	+	CACGCCCCCACCCUAAUCAG	Chr2:60495215-60495237	245
CR00310	58	-	UUGGCCUCUGAUUAGGGUGG	Chr2:60495219-60495241	246
CR00311	58	-	UUUGGCCUCUGAUUAGGGUG	Chr2:60495220-60495242	247
CR00312	58	-	GUUUGGCCUCUGAUUAGGGU	Chr2:60495221-60495243	248
CR00313	58	-	GGUUUGGCCUCUGAUUAGGG	Chr2:60495222-60495244	249
CR00314	58	-	AAGGGUUUGGCCUCUGAUUA	Chr2:60495225-60495247	250
CR00315	58	-	GAAGGGUUUGGCCUCUGAUU	Chr2:60495226-60495248	251
CR00316	58	-	UUGCUUUUAUCACAGGCUCC	Chr2:60495248-60495270	252
CR00317	58	-	CUAACAGUUGCUUUUAUCAC	Chr2:60495255-60495277	253
CR00318	58	+	CUUCAAAGUUGUAUUGACCC	Chr2:60495293-60495315	254
CR00319	58	-	ACUCUUAGACAUAACACACC	Chr2:60495311-60495333	255
CR00320	58	+	UAGAUGCCAUAUCUCUUUUC	Chr2:60495333-60495355	256
CR00321	58	-	CAUAGGCCAGAAAAGAGAUA	Chr2:60495339-60495361	257
CR00322	58	+	GGCCUAUGUUAUUACCUGUA	Chr2:60495354-60495376	258
CR00323	58	-	GUCCAUACAGGUAAUAACAU	Chr2:60495356-60495378	259
CR00324	58	+	UACCUGUAUGGACUUUGCAC	Chr2:60495366-60495388	260
CR00325	58	-	UUCCAGUGCAAAGUCCAUAC	Chr2:60495368-60495390	261
CR00326	58	+	UGCUCUUACUUAUGCACACC	Chr2:60495400-60495422	262
CR00327	58	+	GCUCUUACUUAUGCACACCU	Chr2:60495401-60495423	263
CR00328	58	+	CUCUUACUUAUGCACACCUG	Chr2:60495402-60495424	264
CR00329	58	-	CAGGGCUGGCUCUAUGCCCC	Chr2:60495418-60495440	265
CR00330	58	-	GCUGAAAAGCGAUACAGGGC	Chr2:60495432-60495454	266
CR00331	58	-	GAUGGCUGAAAAGCGAUACA	Chr2:60495436-60495458	267
CR00332	58	-	AGAUGGCUGAAAAGCGAUAC	Chr2:60495437-60495459	268
CR00333	58	-	GGGAGUUAUCUGUAGUGAGA	Chr2:60495454-60495476	269
CR00334	58	-	AAGGCAGCUAGACAGGACUU	Chr2:60495474-60495496	270
CR00335	58	-	GAAGGCAGCUAGACAGGACU	Chr2:60495475-60495497	271
CR00336	58	-	GAUAAGGAAGGCAGCUAGAC	Chr2:60495481-60495503	272
CR00337	58	+	CUAGCUGCCUUCCUUAUCAC	Chr2:60495486-60495508	273
CR00338	58	-	UGGGUGCUAUUCCUGUGAUA	Chr2:60495497-60495519	274
CR00339	58	+	UAUCACAGGAAUAGCACCCA	Chr2:60495500-60495522	275
CR00340	58	-	CUGAGGUACUGAUGGACCUU	Chr2:60495516-60495538	276
CR00341	58	-	UCUGAGGUACUGAUGGACCU	Chr2:60495517-60495539	277
CR001124	58	-	UUAGGGUGGGGGCGUGGGUG	Chr2:60495214-60495236	334
CR001125	58	-	UUUUAUCACAGGCUCCAGGA	Chr2:60495215-60495237	335
CR001126	58	-	UUUAUCACAGGCUCCAGGAA	Chr2:60495216-60495238	336
CR001127	58	-	CACAGGCUCCAGGAAGGGUU	Chr2:60495220-60495242	337
CR001128	58	+	AUCAGAGGCCAAACCCUUCC	Chr2:60495236-60495258	338
CR001129	58	-	CUCUGAUUAGGGUGGGGGCG	Chr2:60495244-60495266	339
CR001130	58	-	GAUUAGGGUGGGGGCGUGGG	Chr2:60495249-60495271	340
CR001131	58	-	AUUAGGGUGGGGGCGUGGGU	Chr2:60495250-60495272	341

В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК в области +58 энхансера BCL11a содержала целевой домен gРНК, представленный на Фиг. 11. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 341. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 246. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 248. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 247. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 245. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 249. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 244. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 199. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 251. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 250. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 334. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 185. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 186. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 336. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 337.

В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может оказаться выгодно включать молекулы gРНК, нацеленные на более чем один, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления два целевых сайта расположены в области +58 энхансера BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул рРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащей целевые домены, перечисленные в таблице 7. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК cule и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 341 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 248 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 199 соответственно.

В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включаюткоторые содержат, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 245 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 199 соответственно, В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК, включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 251 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 247, соответствующие LY. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают таргетирующие домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 336 и SEQ ID NO: 337 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 336 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 246 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 248 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 247 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 245 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 249 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 244 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 199 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 251 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 250 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 334 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 185 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 186 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 336 соответственно.

В вариантах осуществления аспекты изобретения включают или относятся к молекуле gРНК, которая комплементарна целевой последовательности-мишени в области +58 энхансера гена BCL11a, расположенной 3' по отношению к сайту связывания GATA-1, например, 3' по отношению к сайту связывания GATA1 и сайту связывания TAL-1. В вариантах осуществления система CRISPR, содержащая молекулу gРНК, описанную здесь, индуцирует один или несколько инделов внутри или вблизи целевого сайта. В вариантах осуществления индел не содержит нуклеотидов сайта связывания GATA-1 и/или нуклеотидов сайта связывания TAL-1. В вариантах осуществления система CRISPR индуцирует один или более инделов сдвига рамки считывания внутри или вблизи участка последовательности-мишени, например, по меньшей мере примерно в 10%, по меньшей мере примерно в 20%, по меньшей мере примерно в 30%, по меньшей мере примерно в 40 % или, по меньшей мере, примерно в 50% от общего числа инделов, вызывающих сдвиг рамки считывания, например, как определено NGS. В вариантах осуществления общий % формирования инделов составляет по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90% или по меньшей мере около 95%, например, как определено методами NGS.

Таблица 8: Предпочтительные целевые домены нацеливающей РНК (gРНК), нацеленной на область +62 область энхансера гена BCL11a (т.е. BCL11a энхансера).

ID	Позиция в экзоне	Цепь ДНК	Целевой домен	Локализация	SEQ ID NO:
CR00171	62	-	AGCUCUGGAAUGAUGGCUUA	Chr2:60490354-60490376	278
CR00172	62	-	AUUGUGGAGCUCUGGAAUGA	Chr2:60490361-60490383	279
CR00173	62	-	CUGGAAUAGAAAAUUGGAGU	Chr2:60490384-60490406	280
CR00174	62	-	UGGGUACGGGGAACUAAGAC	Chr2:60490403-60490425	281
CR00175	62	+	UUAGUUCCCCGUACCCAUCA	Chr2:60490409-60490431	282
CR00176	62	-	UAUUUUCCUUGAUGGGUACG	Chr2:60490415-60490437	283
CR00177	62	-	AUAUUUUCCUUGAUGGGUAC	Chr2:60490416-60490438	284
CR00178	62	-	AAUAUUUUCCUUGAUGGGUA	Chr2:60490417-60490439	285
CR00179	62	-	GGAAGGAAAUGAGAACGGAA	Chr2:60490456-60490478	286
CR00180	62	-	AGGAAGGAAAUGAGAACGGA	Chr2:60490457-60490479	287
CR00181	62	+	AUACUUCAAGGCCUCAAUGA	Chr2:60490520-60490542	288
CR00182	62	-	GACUAGGUAGACCUUCAUUG	Chr2:60490531-60490553	289
CR00183	62	-	UUCUUCUUGCUAAGGUGACU	Chr2:60490547-60490569	290
CR00184	62	-	GAGAUUGAUUCUUCUUGCUA	Chr2:60490555-60490577	291
CR00185	62	-	GUGUUCUAUGAGGUUGGAGA	Chr2:60490580-60490602	292
CR00186	62	-	GGAUGAGUGUUCUAUGAGGU	Chr2:60490586-60490608	293
CR00187	62	-	CAUGGGAUGAGUGUUCUAUG	Chr2:60490590-60490612	294
CR00188	62	-	UGAGUCAGGGAGUGGUGCAU	Chr2:60490607-60490629	295
CR00189	62	-	AUGAGUCAGGGAGUGGUGCA	Chr2:60490608-60490630	296
CR00190	62	+	CCACUCCCUGACUCAUAUCU	Chr2:60490615-60490637	297
CR00191	62	-	UAAGGCCUAGAUAUGAGUCA	Chr2:60490620-60490642	298
CR00192	62	-	GUAAGGCCUAGAUAUGAGUC	Chr2:60490621-60490643	299
CR00193	62	+	AUAUCUAGGCCUUACAUUGC	Chr2:60490629-60490651	300
CR00194	62	-	AAAUUAAUUAGAGGCAUAGA	Chr2:60490656-60490678	301
CR00195	62	-	GAAAUUAAUUAGAGGCAUAG	Chr2:60490657-60490679	302
CR00196	62	-	GAACACAUGAAAUUAAUUAG	Chr2:60490665-60490687	303
CR00197	62	+	CCAAUGAGUUUCUUCAAUAC	Chr2:60490688-60490710	304
CR00198	62	-	CAAAUAUAAUAGAAGCAAGU	Chr2:60490721-60490743	305
CR00199	62	-	AAAUAACUUCCCUUUUAGGA	Chr2:60490821-60490843	306
CR00200	62	-	GGAAAAAUAACUUCCCUUUU	Chr2:60490825-60490847	307
CR00201	62	-	UUUUGAACAGAAAUGAUAUU	Chr2:60490846-60490868	308
CR00202	62	-	AGUUCAAGUAGAUAUCAGAA	Chr2:60490905-60490927	309
CR00203	62	-	AAGUUCAAGUAGAUAUCAGA	Chr2:60490906-60490928	310
CR00204	62	-	GGGUGGCUGUUUAAAGAGGG	Chr2:60490994-60491016	311
CR00205	62	-	GUGGGGUGGCUGUUUAAAGA	Chr2:60490997-60491019	312
CR00206	62	-	UGUGGGGUGGCUGUUUAAAG	Chr2:60490998-60491020	313
CR00207	62	+	UGCCAACCAGACUGUGCGCC	Chr2:60491051-60491073	314
CR00208	62	-	AACCUGGCGCACAGUCUGGU	Chr2:60491053-60491075	315
CR00209	62	+	AACCAGACUGUGCGCCAGGU	Chr2:60491055-60491077	316
CR00210	62	-	UACCAACCUGGCGCACAGUC	Chr2:60491057-60491079	317
CR00211	62	-	UCUGUCAGACUUUACCAACC	Chr2:60491069-60491091	318
CR00212	62	+	AUAUGUGAAGCCCAACUACG	Chr2:60491118-60491140	319
CR00213	62	-	AGUUGCACAACCACGUAGUU	Chr2:60491128-60491150	320
CR00214	62	-	GAGUUGCACAACCACGUAGU	Chr2:60491129-60491151	321
CR00215	62	+	CUAUAGCUGACUUUCAACCA	Chr2:60491151-60491173	322
CR00216	62	-	AACUUCUUUGCAGAUGACCA	Chr2:60491168-60491190	323
CR00217	62	-	UUGCAUUGAGGAUGCGCAGG	Chr2:60491199-60491221	324
CR00218	62	-	UUUUUGCAUUGAGGAUGCGC	Chr2:60491202-60491224	325
CR00221	62	+	GACCUCAUUUUGAUGCCAGA	Chr2:60491281-60491303	326
CR00222	62	-	UGCCCUCUGGCAUCAAAAUG	Chr2:60491283-60491305	327
CR00223	62	+	AUGCCAGAGGGCAGCAAACA	Chr2:60491293-60491315	328
CR00224	62	-	CUGUACUUAAUAGCUGAAGG	Chr2:60491326-60491348	329
CR00225	62	-	ACUGUACUUAAUAGCUGAAG	Chr2:60491327-60491349	330
CR00227	62	+	CAGCUAUUAAGUACAGUAAA	Chr2:60491333-60491355	331
CR00228	62	-	GAGCAUUUCAAAUGAUAGUU	Chr2:60491360-60491382	332
CR00229	62	+	CAUUUGAAAUGCUCCCGGCC	Chr2:60491369-60491391	333

В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область +62 энхансера гена BCL11a, содержала целевой домен gРНК, представленный на Фиг. 12. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 318. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 312. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 313. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 294. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 310. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 319. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 298. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 322. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 311. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 315. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 290. В одном аспекте молекула gРНК включает в себя целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 317. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 309. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из, SEQ ID NO: 289. В одном аспекте молекула gРНК включает целевой домен, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO: 281.

В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может быть выгодно включить молекулы gРНК, нацеленные на более чем один целевой сайт, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области энхансера +62 BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), содержащих целевые домены, перечисленные в Таблице 8. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 318 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первый монокристалл gРНК cule и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 312 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 319, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 294 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 311 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 317 соответственно, В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 315 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 290 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 317 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 289 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 309 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают которые включают, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 281 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 312 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 313 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 294 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 310 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 319 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 298 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 322 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 311 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 315 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 290 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 317 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 309 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO: 281 и SEQ ID NO: 289 соответственно.

Таблица 9: Предпочтительные целевые домены нацеливающей РНК (gРНК), нацеленной на область +55 область энхансера гена BCL11a (т.е. BCL11a энхансера).

ID	Вид	Цепь	Локализация	Последовательность Целевого Домена	SEQ ID NO:
CR002142	h	+	Chr2:60498031-60498053	CCUGGCAGACCCUCAAGAGC	1596
CR002143	h	-	Chr2:60498031-60498053	CCUGGCAGACCCUCAAGAGC	1597
CR002144	h	+	Chr2:60498032-60498054	CUGGCAGACCCUCAAGAGCA	1598
CR002145	h	+	Chr2:60498033-60498055	UGGCAGACCCUCAAGAGCAG	1599
CR002146	h	-	Chr2:60498040-60498062	CCCUCAAGAGCAGGGGUCUU	1600
CR002147	h	-	Chr2:60498041-60498063	CCUCAAGAGCAGGGGUCUUC	1601
CR001262	h	+	Chr1:55039155-55039177	UAAGGCCAGUGGAAAGAAUU	1602
CR002148	h	+	Chr2:60498045-60498067	AAGAGCAGGGGUCUUCUCUU	1603
CR002149	h	+	Chr2:60498046-60498068	AGAGCAGGGGUCUUCUCUUU	1604
CR002150	h	+	Chr2:60498047-60498069	GAGCAGGGGUCUUCUCUUUG	1605
CR002151	h	+	Chr2:60498048-60498070	AGCAGGGGUCUUCUCUUUGG	1606
CR002152	h	+	Chr2:60498051-60498073	AGGGGUCUUCUCUUUGGGGG	1607
CR002153	h	+	Chr2:60498068-60498090	GGGAGGACAUCACUCUUAGC	1608
CR002154	h	+	Chr2:60498069-60498091	GGAGGACAUCACUCUUAGCA	1609
CR001261	h	-	Chr1:55039269-55039291	GCCAGACUCCAAGUUCUGCC	1610
CR002155	h	+	Chr2:60498073-60498095	GACAUCACUCUUAGCAGGGC	1611
CR002156	h	+	Chr2:60498074-60498096	ACAUCACUCUUAGCAGGGCU	1612
CR002157	h	+	Chr2:60498075-60498097	CAUCACUCUUAGCAGGGCUG	1613
CR002158	h	+	Chr2:60498091-60498113	GCUGGGGUGAGUCAAAAGUC	1614
CR002159	h	+	Chr2:60498092-60498114	CUGGGGUGAGUCAAAAGUCU	1615
CR002160	h	+	Chr2:60498099-60498121	GAGUCAAAAGUCUGGGAGAA	1616
CR002161	h	+	Chr2:60498102-60498124	UCAAAAGUCUGGGAGAAUGG	1617
CR002162	h	+	Chr2:60498107-60498129	AGUCUGGGAGAAUGGAGGUG	1618
CR002163	h	+	Chr2:60498110-60498132	CUGGGAGAAUGGAGGUGUGG	1619
CR002164	h	+	Chr2:60498111-60498133	UGGGAGAAUGGAGGUGUGGA	1620
CR002165	h	+	Chr2:60498112-60498134	GGGAGAAUGGAGGUGUGGAG	1621
CR002166	h	+	Chr2:60498120-60498142	GGAGGUGUGGAGGGGAUAAC	1622
CR001263	h	+	Chr1:55039180-55039202	GGCAGCGAGGAGUCCACAGU	1623
CR002167	h	+	Chr2:60498121-60498143	GAGGUGUGGAGGGGAUAACU	1624
CR002168	h	+	Chr2:60498137-60498159	AACUGGGUCAGACCCCAAGC	1625
CR002169	h	+	Chr2:60498141-60498163	GGGUCAGACCCCAAGCAGGA	1626
CR002170	h	+	Chr2:60498142-60498164	GGUCAGACCCCAAGCAGGAA	1627
CR002171	h	-	Chr2:60498149-60498171	CCCCAAGCAGGAAGGGCCUC	1628
CR002172	h	-	Chr2:60498150-60498172	CCCAAGCAGGAAGGGCCUCU	1629
CR002173	h	-	Chr2:60498151-60498173	CCAAGCAGGAAGGGCCUCUA	1630
CR002174	h	+	Chr2:60498157-60498179	AGGAAGGGCCUCUAUGUAGA	1631
CR002175	h	+	Chr2:60498158-60498180	GGAAGGGCCUCUAUGUAGAC	1632
CR002176	h	+	Chr2:60498165-60498187	CCUCUAUGUAGACGGGUGUG	1633
CR002177	h	-	Chr2:60498165-60498187	CCUCUAUGUAGACGGGUGUG	1634
CR002178	h	+	Chr2:60498175-60498197	GACGGGUGUGUGGCUCCUUA	1635
CR002179	h	-	Chr2:60498190-60498212	CCUUAAGGUGACCCAGCAGC	1636
CR002180	h	+	Chr2:60498192-60498214	UUAAGGUGACCCAGCAGCCC	1637
CR002181	h	+	Chr2:60498193-60498215	UAAGGUGACCCAGCAGCCCU	1638
CR002182	h	-	Chr2:60498201-60498223	CCCAGCAGCCCUGGGCACAG	1639
CR002183	h	-	Chr2:60498202-60498224	CCAGCAGCCCUGGGCACAGA	1640
CR001261	h	-	Chr1:55039269-55039291	GCCAGACUCCAAGUUCUGCC	1641
CR002184	h	+	Chr2:60498204-60498226	AGCAGCCCUGGGCACAGAAG	1642
CR002185	h	-	Chr2:60498209-60498231	CCCUGGGCACAGAAGUGGUG	1643
CR002186	h	-	Chr2:60498210-60498232	CCUGGGCACAGAAGUGGUGC	1644
CR002187	h	+	Chr2:60498211-60498233	CUGGGCACAGAAGUGGUGCG	1645
CR002188	h	+	Chr2:60498240-60498262	UGCCAACAGUGAUAACCAGC	1646
CR002189	h	+	Chr2:60498241-60498263	GCCAACAGUGAUAACCAGCA	1647
CR001262	h	+	Chr1:55039155-55039177	UAAGGCCAGUGGAAAGAAUU	1648
CR002190	h	-	Chr2:60498242-60498264	CCAACAGUGAUAACCAGCAG	1649
CR002191	h	+	Chr2:60498255-60498277	CCAGCAGGGCCUGUCAGAAG	1650
CR002192	h	-	Chr2:60498255-60498277	CCAGCAGGGCCUGUCAGAAG	1651
CR002193	h	+	Chr2:60498261-60498283	GGGCCUGUCAGAAGAGGCCC	1652
CR002194	h	-	Chr2:60498264-60498286	CCUGUCAGAAGAGGCCCUGG	1653
CR002195	h	+	Chr2:60498271-60498293	GAAGAGGCCCUGGACACUGA	1654
CR002196	h	+	Chr2:60498275-60498297	AGGCCCUGGACACUGAAGGC	1655
CR002197	h	+	Chr2:60498276-60498298	GGCCCUGGACACUGAAGGCU	1656
CR001264	h	-	Chr1:55039149-55039171	UCUUUCCACUGGCCUUAACC	1657
CR002198	h	-	Chr2:60498278-60498300	CCCUGGACACUGAAGGCUGG	1658
CR002199	h	-	Chr2:60498279-60498301	CCUGGACACUGAAGGCUGGG	1659
CR002200	h	+	Chr2:60498287-60498309	CUGAAGGCUGGGCACAGCCU	1660
CR002201	h	+	Chr2:60498288-60498310	UGAAGGCUGGGCACAGCCUU	1661
CR002202	h	+	Chr2:60498289-60498311	GAAGGCUGGGCACAGCCUUG	1662
CR002203	h	+	Chr2:60498301-60498323	CAGCCUUGGGGACCGCUCAC	1663
CR002204	h	-	Chr2:60498304-60498326	CCUUGGGGACCGCUCACAGG	1664
CR002205	h	-	Chr2:60498313-60498335	CCGCUCACAGGACAUGCAGC	1665
CR002206	h	-	Chr2:60498341-60498363	CCGACAACUCCCUACCGCGA	1666
CR002207	h	-	Chr2:60498350-60498372	CCCUACCGCGACCCCUAUCA	1667
CR002208	h	-	Chr2:60498351-60498373	CCUACCGCGACCCCUAUCAG	1668
CR002209	h	-	Chr2:60498355-60498377	CCGCGACCCCUAUCAGUGCC	1669
CR002210	h	-	Chr2:60498361-60498383	CCCCUAUCAGUGCCGACCAA	1670
CR002211	h	-	Chr2:60498362-60498384	CCCUAUCAGUGCCGACCAAG	1671
CR002212	h	-	Chr2:60498363-60498385	CCUAUCAGUGCCGACCAAGC	1672
CR002213	h	-	Chr2:60498373-60498395	CCGACCAAGCACACAAGAUG	1673
CR002214	h	-	Chr2:60498377-60498399	CCAAGCACACAAGAUGCACA	1674
CR002215	h	+	Chr2:60498380-60498402	AGCACACAAGAUGCACACCC	1675
CR002216	h	+	Chr2:60498384-60498406	CACAAGAUGCACACCCAGGC	1676
CR002217	h	+	Chr2:60498385-60498407	ACAAGAUGCACACCCAGGCU	1677
CR001264	h	-	Chr1:55039149-55039171	UCUUUCCACUGGCCUUAACC	1678
CR002218	h	+	Chr2:60498389-60498411	GAUGCACACCCAGGCUGGGC	1679
CR002219	h	+	Chr2:60498396-60498418	ACCCAGGCUGGGCUGGACAG	1680
CR002220	h	+	Chr2:60498397-60498419	CCCAGGCUGGGCUGGACAGA	1681
CR002221	h	-	Chr2:60498397-60498419	CCCAGGCUGGGCUGGACAGA	1682
CR002222	h	+	Chr2:60498398-60498420	CCAGGCUGGGCUGGACAGAG	1683
CR002223	h	-	Chr2:60498398-60498420	CCAGGCUGGGCUGGACAGAG	1684
CR002224	h	+	Chr2:60498415-60498437	GAGGGGUCCCACAAGAUCAC	1685
CR002225	h	+	Chr2:60498416-60498438	AGGGGUCCCACAAGAUCACA	1686
CR002226	h	-	Chr2:60498422-60498444	CCCACAAGAUCACAGGGUGU	1687
CR001263	h	+	Chr1:55039180-55039202	GGCAGCGAGGAGUCCACAGU	1688
CR002227	h	-	Chr2:60498423-60498445	CCACAAGAUCACAGGGUGUG	1689
CR002228	h	+	Chr2:60498431-60498453	UCACAGGGUGUGCCCUGAGA	1690
CR002229	h	+	Chr2:60498434-60498456	CAGGGUGUGCCCUGAGAAGG	1691

В некоторых аспектах изобретения предпочтительно, чтобы молекула gРНК, нацеленная на область +55 энхансера гена BCL11a, включала целевой домен, содержащий, например, или состоящий из последовательности целевого домена, выбранной из SEQ ID NO:1683, SEQ ID NO:1638, SEQ ID NO:1647, SEQ ID NO:1609, SEQ ID NO:1621, SEQ ID NO:1617, SEQ ID NO:1654, SEQ ID NO:1631, SEQ ID NO:1620, SEQ ID NO:1637, SEQ ID NO:1612, SEQ ID NO:1656, SEQ ID NO:1619, SEQ ID NO:1675, SEQ ID NO:1645, SEQ ID NO:1598, SEQ ID NO:1599, SEQ ID NO:1663, SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1626.

В некоторых аспектах изобретения, например, как указано здесь, может быть выгодно включать молекулы gРНК, нацеленные на более чем один целевой сайт, например, на два целевых сайта (например, первую молекулу gРНК и вторую молекулу gРНК). В некоторых вариантах осуществления оба целевых сайта расположены в области энхансера +55 BCL11a. В таких аспектах может быть использована любая комбинация из нескольких, например, двух молекул gРНК (например, первой молекулы gРНК и второй молекулы gРНК), включающая, например, состоящих из целевых доменов, перечисленных в Таблице 9, нацеленных на различные целевые последовательности сайтов области энхансера +55 BCL11a. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1683 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящий из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1621, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1638 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SE Q ID NO:1645, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1647 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1609 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1621 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1617 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1654 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, составляющие например, состоящей из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1637, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1631 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1620 a й SEQ ID NO:1626, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1637 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте, первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1612 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1656 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и seco nd молекула gРНК включает в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1619 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены включающий, например, состоящий из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1645, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1675 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1645 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1612, соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1598 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1599 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1677 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1663 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включает в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1677 и SEQ ID NO:1626 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1638 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1647 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1609 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1621 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1617 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1654 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1631 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1620 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1637 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1612 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1656 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1619 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1675 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1645 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1598 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1599 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1663 соответственно. В одном аспекте первая молекула gРНК и вторая молекула gРНК включают в себя целевые домены, содержащие, например, состоящие из SEQ ID NO:1626 и SEQ ID NO:1677 соответственно.

III. Способы дизайна последовательностей gРНК.

Способы проектирования последовательностей gРНК описаны здесь, включая способы выбора, дизайна и тестирования целевых последовательностей. Типичные целевые домены также представлены здесь. Целевые домены, обсуждаемые здесь, могут быть включены в gРНК, описанные здесь.

Способы отбора и тестирования целевых последовательностей-мишеней, а также анализ неспецифических сайтов описаны, например, в Mali el al., 2013 SCIENCE 339 (6121): 823-826; Hsu et al, 2013 NAT BIOTECHNOL, 31 (9): 827-32; Fu et al., 2014 NAT BIOTECHNOL, doi: 10.1038/nbt.2808. PubMed PM ID: 24463574; Heigwer et al, 2014 NAT METHODS ll (2): 122-3. doi: 10.1038/nmeth.2812. PubMed PMID: 24481216; Bae el al, 2014 BIOINFORMATICS PubMed PMID: 24463181; Xiao A el al, 2014 BIOINFORMATICS PubMed PMID: 24389662.

Например, сервис или програмное обеспечение может быть использован(о) для оптимизации выбора gРНК к целевой последовательности предложенной пользователем, например, для сведения к минимуму общей неспецифической активности в пределах всего генома. Неспецифическая активность может состоять не только в образовании разрывов ДНК. Для каждой потенциально возможной последовательности gРНК, например, для использования в системе S. pyogenes Сas9, эта программа способна определить все неспецифичные последовательности (например, предшествующие NAG или NGG PAM) генома, которые содержат до определенного числа (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) неспаренных оснований. Эффективность разрыва каждой неспецифичной последовательности может быть предсказана, например, при использованием экспериментально обоснованной схемы расчёта. Каждая потенциальная gРНК ранжируется в соответствии с ее общим количеством предсказанных неспецифических разрывов; gРНК высшей категории представляют собой те, которые, наиболее вероятно, будут иметь наибольшее количество разрывов на целевом участке и наименьшее количество неспецифических разрывов. Другие функции, например, автоматический выбор реагента для конструкции CRISPR, выбор праймера для анализа целевого домена методом Surveyor и выбор праймера для высокоточного обнаружения и количественного определения неспецифических разрывов с помощью методов NGS (методами секвенирования нового поколения), также могут быть сделаны с помощью программы/сервиса. Молекулы-кандидаты gРНК могут быть оценены известными способами или описанными здесь.

Хотя программные алгоритмы могут использоваться для создания исходного списка потенциальных молекул gРНК, эффективность внесения разрывов и их специфичность не обязательно будут отражать предсказанные значения, и молекулы gРНК обычно требуют скрининга в конкретных клеточных линиях, например, в первичных клеточных линиях человека, например в HSPC человека, например, в клетках CD34+ человека, для определения, например, эффективности внесения разрывов, формирования индела, специфичности разрывов и изменения желаемого фенотипа. Эти свойства могут быть проанализированы описанными здесь способами.

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00312 (SEQ ID NO:248, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, например, описанной здесь:

sgРНК CR00312 #1:

GUUUGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:342)

sgРНК CR00312 #2:

mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:343)

sgРНК CR00312 #3:

mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1762))

dgРНК CR00312 #1:

crРНК: GUUUGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:344)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR00312 #2:

crРНК:

mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:345)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR00312 #3:

crРНК:

mG*mU*mU*UGGCCUCUGAUUAGGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:345)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001128 (SEQ ID NO:338, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001128 #1:

AUCAGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:347)

sgРНК CR001128 #2:

mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:348)

sgРНК CR001128 #3:

mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1763)

dgРНК CR001128 #1:

crРНК: AUCAGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:349)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001128 #2:

crРНК: mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:350)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001128 #3:

crРНК: mA*mU*mC*AGAGGCCAAACCCUUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:350)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001126 (SEQ ID NO:336, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001126 #1:

UUUAUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:351)

sgРНК CR001126 #2:

mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:352)

sgРНК CR001126 #3:

mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1764)

dgРНК CR001126 #1:

crРНК: UUUAUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:353)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001126 #2:

crРНК: mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:354)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001126 #3:

crРНК: mU*mU*mU*AUCACAGGCUCCAGGAAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:354)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00311 (SEQ ID NO:247, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR00311 #1:

UUUGGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:355)

sgРНК CR00311 #2:

mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:356)

sgРНК CR00311 #3:

mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1765)

dgРНК CR00311 #1:

crРНК: UUUGGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:357)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR00311 #2:

crРНК: mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:358)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR00311 #3:

crРНК: mU*mU*mU*GGCCUCUGAUUAGGGUGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:358)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00309 (SEQ ID NO:245, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR00309 #1:

CACGCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:359)

sgРНК CR00309 #2:

mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:360)

sgРНК CR00309 #3:

mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1766)

dgРНК CR00309 #1:

crРНК: CACGCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:361)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR00309 #2:

crРНК: mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:362)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR00309 #3:

crРНК: mC*mA*mC*GCCCCCACCCUAAUCAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:362)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001127 (SEQ ID NO:337, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001127 #1:

CACAGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:363)

sgРНК CR001127 #2:

mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:364)

sgРНК CR001127 #3:

mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1767)

dgРНК CR001127 #1:

crРНК: CACAGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:365)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001127 #2:

crРНК: mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:366)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001127 #3:

crРНК: mC*mA*mC*AGGCUCCAGGAAGGGUUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:366)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR00316 (SEQ ID NO:252, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR00316 #1:

UUGCUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:367)

sgРНК CR00316 #2:

mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:368)

sgРНК CR00316 #3:

mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1768)

dgРНК CR00316 #1:

crРНК: UUGCUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:369)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR00316 #2:

crРНК: mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:370)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR00316 #3:

crРНК: mU*mU*mG*CUUUUAUCACAGGCUCCGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:370)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001125 (SEQ ID NO:335,, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001125 #1:

UUUUAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:371)

sgРНК CR001125 #2:

mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:372)

sgРНК CR001125 #3:

mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1769)

dgРНК CR001125 #1:

crРНК: UUUUAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:373)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001125 #2:

crРНК: mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:374)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001125 #3:

crРНК: mU*mU*mU*UAUCACAGGCUCCAGGAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:374)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001030 (SEQ ID NO:100, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001030 #1:

ACUGCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:375)

sgРНК CR001030 #2:

mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:376)

sgРНК CR001030 #3:

mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1770)

dgРНК CR001030 #1:

crРНК: ACUGCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:377)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001030 #2:

crРНК: mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:378)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001030 #3:

crРНК: mA*mC*mU*GCUGAAAGAGAUGCGGUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:378)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001028 (SEQ ID NO:98, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001028 #1:

UGCGGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:379)

sgРНК CR001028 #2:

mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:380)

sgРНК CR001028 #3:

mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1771)

dgРНК CR001028 #1:

crРНК: UGCGGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:381)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001028 #2:

crРНК: mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:382)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001028 #3:

crРНК: mU*mG*mC*GGUGGGGAGAUAUGUAGGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:382)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001221 (SEQ ID NO:1589, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как, например, описано здесь.

sgРНК CR001221 #1:

GAAACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 383)

sgРНК CR001221 #2:

mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:384)

sgРНК CR001221 #3:

mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1772)

dgРНК CR001221 #1:

crРНК: GAAACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:385)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001221 #2:

crРНК: mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:386)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001221 #3:

crРНК: mG*mA*mA*ACAAUGAGGACCUGACUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:386)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR001137 (SEQ ID NO:1505, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR001137 #1:

GUAAGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:387)

sgРНК CR001137 #2:

mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:388)

sgРНК CR001137 #3:

mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1773)

dgРНК CR001137 #1:

crРНК: GUAAGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:389)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR001137 #2:

crРНК: mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:390)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR001137 #3:

crРНК: mG*mU*mA*AGCAUUUAAGUGGCUACGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:390)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR003035 (SEQ ID NO:1505, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR003035 #1:

AGGCACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO:391)

sgРНК CR003035 #2:

mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:392)

sgРНК CR003035 #3:

mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1774)

dgРНК CR003035 #1:

crРНК: AGGCACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:393)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR003035 #2:

crРНК: mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:394)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR003035 #3:

crРНК: mA*mG*mG*CACCUCAGACUCAGCAUGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:394)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В аспектах изобретения gРНК, содержащая целевой домен CR003085 (SEQ ID NO:1750, подчеркнутая ниже), например, одна из молекул gРНК, описанных ниже, используется в системах CRISPR, способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, в том числе и в аспектах, включающих более одной молекулы gРНК, как например, описано здесь.

sgРНК CR003085 #1:

AUGGUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 395)

sgРНК CR003085 #2:

mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:396)

sgРНК CR003085 #3:

mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO:1775)

dgРНК CR003085 #1:

crРНК: AUGGUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO:397)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660)

dgРНК CR003085 #2:

crРНК: mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:398)

tracr: mA*mA*mC*AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU*mU*mU*mU (SEQ ID NO:346)

dgРНК CR003085 #3:

crРНК: mA*mU*mG*GUAUGGGAGGUAUACUAGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO:398)

tracr: AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO:6660).

В каждой из молекул gРНК, описанных выше, «*» обозначает фосфоротиоатную связь между соседними нуклеотидами, а «mN» (где N=A, G, C или U) обозначает модифицированный нуклеотид 2'-OMe. В вариантах осуществления любая из молекул gРНК, описанных здесь, например, описанная выше, скомбинирована с молекулой Сas9, например, как описано здесь, с образованием рибонуклеопротеинового комплекса (RNP). Такие RNP в высшей степени применимы в способах, клетках и других аспектах и вариантах осуществления изобретения, например, описанных здесь.

IV. Молекулы Cas

Молекулы Сas9

В предпочтительных вариантах осуществления молекула Cas представляет собой молекулу Сas9. Молекулы Сas9 различных видов могут быть использованы в описанных здесь способах и композициях. В то время как молекула S. pyogenes Сas9 раскрыта здесь в наибольшей степени, молекулы Сas9, полученные из или на основе белков Сas9 других видов, перечисленных здесь, также могут быть использованы. Другими словами, в системах, способах, и композициях, описанных здесь, могут быть использованы другие молекулы Сas9, например, S. thermophilus, Staphylococcus aureus и/или Neisseria meningitidis Сas9. Дополнительные виды Сas9 включают::Acidovorax avenae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus succinogenes, Actinobacillus suis, Actinomyces sp., cycliphilus denitrificans, Aminomonas paucivorans, Bacillus cereus, Bacillus smithii, Bacillus thuringiensis, Bacteroides sp., Blastopirellula marina, Bradyrhiz^' obium sp., Brevibacillus latemsporus, Campylobacter coli, Campylobacter jejuni, Campylobacter lad, Candidatus Puniceispirillum, Clostridiu cellulolyticum, Clostridium perfringens, Corynebacterium accolens, Corynebacterium diphtheria, Corynebacterium matruchotii, Dinoroseobacter sliibae, Eubacterium dolichum, gamma proteobacterium, Gluconacetobacler diazotrophicus, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus sputorum, Helicobacter canadensis, Helicobacter cinaedi, Helicobacter mustelae, Ilyobacler polytropus, Kingella kingae, Lactobacillus crispatus, Listeria ivanovii, Listeria monocytogenes, Listeriaceae bacterium, Methylocystis sp., Methylosinus trichosporium, Mobiluncus mulieris, Neisseria bacilliformis, Neisseria cinerea, Neisseria flavescens, Neisseria lactamica. Neisseria sp., Neisseria wadsworthii, Nitrosomonas sp., Parvibaculum lavamentivorans, Pasteurella multocida, Phascolarctobacterium succinatutens, Ralstonia syzygii, Rhodopseudomonas palustris, Rhodovulum sp., Simonsiella muelleri, Sphingomonas sp., Sporolactobacillus vineae, Staphylococcus lugdunensis, Streptococcus sp., Subdoligranulum sp., Tislrella mobilis, Treponema sp. или Verminephrobacter eiseniae.

Молекула Сas9, как термин, используемый здесь, относится к молекуле, способной взаимодействовать с молекулой gРНК (например, последовательность домена tracr) и, в сочетании с молекулой gРНК, способной локализовать (например, нацелиться на или двигаться по направлению к) сайт(у), содержащему целевую последовательность-мишень и последовательность PAM.

В варианте осуществления, если молекула Сas9 способна разрезать молекулу целевой нуклеиновой кислоты, то в этом случае на неё ссылаются как на активную молекулу Сas9. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит один или несколько из следующих видов активности: активность никазы, то есть способность разрезать одну цепь дуплексной молекулы ДНК, например, некомплементарную или комплементарную цепь, двухцепочечную нуклеазную активность, то есть способность разрезать обе нити дуплексной нуклеиновой кислоты и создавать двухцепочечный разрыв, который в одном варианте осуществления рассматривается как наличие двух активностей никазы; активность эндонуклеазы; активность экзонуклеазы; и активность хеликазы, то есть способность раскручивать спиральную структуру двухцепочечной нуклеиновой кислоты.

В одном варианте осуществления ферментативно активная молекула Сas9 разрезает обе цепи ДНК и приводит к двухцепочному разрыву. В одном варианте осуществления молекула Сas9 расщепляет только одну цепь, например, цепь, с которой гибридизуется gРНК, или цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активность расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активностью расщепления, ассоциированной с N-концевым RuvC-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает ферментативной активность расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом и активностью расщепления, ассоциированной с N-концевым доменом, подобным RuvC. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 обладает активным, или способным вносить разрывы HNH-подобным доменом и неактивным, или неспособным к внесению разрывов N-концевым RuvC-подобным доменом. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит неактивный или неспособный к внесению разрывов HNH-подобный домен и активный, или способный вносить разрывы N-концевой RuvC-подобный домен.

В одном варианте осуществления способность активной молекулы Сas9 взаимодействовать с нуклеиновой кислотой-мишенью и расщеплять ее (вносить разрывы) зависит от последовательности PAM. Последовательность PАМ представляет собой последовательность в нуклеиновой кислоте-мишени. В одном варианте осуществления расщепление нуклеиновой кислоты-мишени происходит выше по течению (впереди) от последовательности PAM. Активные молекулы Сas9 разных видов бактерий могут распознавать различные последовательности мотивов ДНК (например, последовательности PAM). В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. pyogenes распознает мотив последовательности NGG и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Mali el ai, SCIENCE 2013; 339 (6121): 823- 826. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. thermophilus распознает мотив последовательности NGGNG и NNAG AAW (W=A или T) и способствует расщеплению последовательности кора нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Horvath et al., SCIENCE 2010; 327 (5962): 167-170 и Deveau et al., J BACTERIOL 2008; 190 (4): 1390-1400. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. mulans распознает мотив последовательности NGG или NAAR (R-A или G) и способствует расщеплению последовательности кора нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Deveau et al., J BACTERIOL 2008; 190 (4): 1 390-1400. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 S. aureus распознает мотив последовательности NNGRR (R=A или G) и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Ran F. et al., NATURE, vol. 520, 2015, стр. 186-191. В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 N. meningitidis распознает мотив последовательности NNNNGATT и способствует расщеплению последовательности нуклеиновой кислоты-мишени в районе от 1 до 10, например от 3 до 5 пар оснований, расположенных выше по течению (впереди) от этой последовательности. См., например, Hou et al., PNAS EARLY EDITION 2013, 1-6. Способность молекулы Сas9 распознавать последовательность PAM может быть определена, например, методом трансформации, описанным в Jinek et al, SCIENCE 2012, 337: 816.

Некоторые молекулы Сas9 обладают способностью взаимодействовать с молекулой gРНК и, в сочетании с молекулой gРНК, двигаться целенаправленно (например, к мишени или к её локализации) к основному целевому домену, но не способны расщеплять нуклеиновую кислоту-мишень вообще или с достаточной степенью эффективности. Молекулы Сas9, не обладающие активностью расщепления вообще или не имеющие активности расщепления в достаточной степени, могут упоминаться здесь как неактивные Сas9 (ферментативно неактивные Сas9), мертвые Сas9 молекулы или молекулы dСas9. Например, неактивная молекула Сas9 может не иметь активности расщепления или иметь её в существенно меньшей степени, например, менее 20, 10, 5, 1 или 0,1% от активности расщепления стандартной молекулы Сas9, как определено при помощи описанного здесь анализа.

Примеры встречающихся в природе молекул Сas9 описаны в Chylinski et al., RNA Biology 2013; 10: 5, 727-737. Такие молекулы Сas9 включают в себя молекулы Сas9 бактериального сообщества кластера 1, бактериального сообщества кластера 2, бактериального сообщества кластера 3, бактериального сообщества кластера 4, бактериального сообщества кластера 5, бактериального сообщества кластера 6, бактериального сообщества кластера 7, бактериального сообщества кластера 8, бактериального сообщества кластера 9, бактериального сообщества кластера 10, бактериального сообщества кластера 11, бактериального сообщества кластера 12, бактериального сообщества кластера 13, бактериального сообщества кластера 14, бактериального сообщества кластера 15, бактериального сообщества кластера 16, бактериального сообщества кластера 17, бактериального сообщества кластера 18, бактериального сообщества кластера 19, бактериального сообщества кластера 20, бактериального сообщества кластера 21, бактериального сообщества кластера 22, бактериального сообщества кластера 23, бактериального сообщества кластера 24, бактериального сообщества кластера 25, бактериального сообщества кластера 26, бактериального сообщества кластера 27, бактериального сообщества кластера 28, бактериального сообщества кластера 29, бактериального сообщества кластера 30, бактериального сообщества кластера 31, бактериального сообщества кластера 32, бактериального сообщества кластера 33, бактериального сообщества кластера 34, бактериального сообщества кластера 35, бактериального сообщества кластера 36, бактериального сообщества кластера 37, бактериального сообщества кластера 38, бактериального сообщества кластера 39, бактериального сообщества кластера 40, бактериального сообщества кластера 41, бактериального сообщества кластера 42, бактериального сообщества кластера 43, бактериального сообщества кластера 44, бактериального сообщества кластера 45, бактериального сообщества кластера 46, бактериального сообщества кластера 47, бактериального сообщества кластера 48, бактериального сообщества кластера 49, бактериального сообщества кластера 50, бактериального сообщества кластера 51, бактериального сообщества кластера 52, бактериального сообщества кластера 53, бактериального сообщества кластера 54, бактериального сообщества кластера 55, бактериального сообщества кластера 56, бактериального сообщества кластера 57, бактериального сообщества кластера 58, бактериального сообщества кластера 59, бактериального сообщества кластера 60, бактериального сообщества кластера 61, бактериального сообщества кластера 62, бактериального сообщества кластера 63, бактериального сообщества кластера 64, бактериального сообщества кластера 65, бактериального сообщества кластера 66, бактериального сообщества кластера 67, бактериального сообщества кластера 68, бактериального сообщества кластера 69, бактериального сообщества кластера 70, бактериального сообщества кластера 71, бактериального сообщества кластера 72, бактериального сообщества кластера 73, бактериального сообщества кластера 74, бактериального сообщества кластера 75, бактериального сообщества кластера 76, бактериального сообщества кластера 77, бактериального сообщества кластера 78.

Примеры встречающихся в природе молекулы Сas9 включают молекулу Сas9 бактериального сообщества кластера 1. Примеры включают молекулу Сas9 следующих видов: S. pyogenes (например, штамм SF370, MGAS 10270, MGAS 10750, MGAS2096, MGAS315, MGAS5005, MGAS6180, MGAS9429, NZ131 и SSI-1), S. thermophilus (например, штамм LMD-9), S. pseudoporcinus (например, штамм SPIN 20026), S. mutans (например, штамм UA 159, NN2025), S. macacae (например, штамм NCTC1 1558), S. gallolylicus (например, штамм UCN34, ATCC BAA-2069), S. equines (например, штамм ATCC 9812, MGCS 124), S. dysdalactiae (например, штамм GGS 124), S. bovis (например, штамм ATCC 700338), S. anginosus (например, штамм F021 1), S. agalactia* (например, штамм NEM316, A909), Listeria monocytogenes (например, штамм F6854), Listeria innocua (L. innocua, например штамм Clip l 1262), Enterococcus italicus (например, штамм DSM 15952) или Enterococcus faecium (например, штамм 1,231,408). Дополнительными примерами молекул Сas9 являются молекула Сas9 Neisseria meningitidis (Hou et al. PNAS Early Edition 2013, 1 -6) и молекула Сas9 S. aureus.

В одном варианте осуществления молекула Сas9, например, активная молекула Сas9 или неактивная молекула Сas9, содержит аминокислотную последовательность содержащую 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% гомологии с; различающуюся не более чем на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30% или 40% аминокислотных остатков по сравнению с; различающуюся по меньшей мере 1, 2, 5, 10 или 20 аминокислотами, но не более чем на 100, 80, 70, 60, 50, 40 или 30 аминокислот; или идентичную любой описанной здесь последовательности молекулы Сas9, а также встречающейся в природе последовательности молекулы Сas9, например молекулы Сas9, из вида, перечисленного здесь, или описанного в Chylinski et al., RNA Biology 2013, 10: 5, Ί2Ί-Τ, 1 Hou et al. PNAS Early Edition 2013, 1-6.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 содержит аминокислотную последовательность, имеющую 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% гомологии с; различающуюся не более чем на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30% или 40% аминокислотных остатков по сравнению с; различающуюся по меньшей мере 1, 2, 5, 10 или 20 аминокислотами, но не более чем на 100, 80, 70, 60, 50, 40 или 30 аминокислот или идентичную молекуле Сas9 S. Pyogenes.

--->

Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val

1 5 10 15

Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe

20 25 30

Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile

35 40 45

Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu

50 55 60

Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser

85 90 95

Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys

100 105 110

His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr

115 120 125

His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp

130 135 140

Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His

145 150 155 160

Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro

165 170 175

Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr

180 185 190

Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala

195 200 205

Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn

210 215 220

Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn

225 230 235 240

Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe

245 250 255

Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp

260 265 270

Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp

275 280 285

Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp

290 295 300

Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser

305 310 315 320

Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys

325 330 335

Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe

340 345 350

Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser

355 360 365

Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp

370 375 380

Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg

385 390 395 400

Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu

405 410 415

Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe

420 425 430

Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile

435 440 445

Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp

450 455 460

Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu

465 470 475 480

Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr

485 490 495

Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser

500 505 510

Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys

515 520 525

Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln

530 535 540

Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr

545 550 555 560

Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp

565 570 575

Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly

580 585 590

Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp

595 600 605

Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr

610 615 620

Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala

625 630 635 640

His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr

645 650 655

Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp

660 665 670

Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe

675 680 685

Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe

690 695 700

Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu

705 710 715 720

His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly

725 730 735

Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly

740 745 750

Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln

755 760 765

Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile

770 775 780

Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro

785 790 795 800

Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu

805 810 815

Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg

820 825 830

Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys

835 840 845

Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg

850 855 860

Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys

865 870 875 880

Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys

885 890 895

Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp

900 905 910

Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr

915 920 925

Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp

930 935 940

Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser

945 950 955 960

Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg

965 970 975

Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val

980 985 990

Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe

995 1000 1005

Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys

1010 1015 1020

Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser

1025 1030 1035 1040

Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu

1045 1050 1055

Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile

1060 1065 1070

Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser

1075 1080 1085

Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly

1090 1095 1100

Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1105 1110 1115 1120

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser

1125 1130 1135

Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly

1140 1145 1150

Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile

1155 1160 1165

Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala

1170 1175 1180

Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys

1185 1190 1195 1200

Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser

1205 1210 1215

Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr

1220 1225 1230

Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser

1235 1240 1245

Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His

1250 1255 1260

Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val

1265 1270 1275 1280

Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys

1285 1290 1295

His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu

1300 1305 1310

Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp

1315 1320 1325

Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp

1330 1335 1340

Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1345 1350 1355 1360

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp

1365

<---

(SEQ ID NO:6611)

В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, включающий одну или несколько мутаций замещения положительно заряженных аминокислот (например, лизина, аргинина или гистидина), на незаряженную или неполярную аминокислоту, например, аланин, в указанную позициях. В вариантах осуществления мутация изменяет одну или несколько положительно заряженным аминокислот, расположенным в бороздке неспецифичного связывания (или nt-groove) Сas9. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, содержащий мутацию в позиции 855 SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин, в позиции 855 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 855 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 810, мутацию в позиции 1003 и/или мутацию в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения аланином в позиции 810, в позиции 1003 и/или в позиции 1060 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 810, позиции 1003 и позиции 1060 SEQ ID NO:6611, относительно SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация представляет собой мутацию замещения на аминокислоту не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 848, мутацию в позиции 1003 и/или мутацию в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения на аланин в позиции 848, в позиции 1003 и/или в позиции 1060 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 848, в позиции 1003 и в позиции 1060 SEQ ID NO:6611, относительно SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация является замещением на аминокислоту не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой молекулу Сas9, как описано в Slaymaker et al., Science Express, доступной онлайн 1 декабря 2015 года в Science DOI: 10.1126/science.aad5227.

В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 80 SEQ ID NO:6611, например, содержит лейцин в позиции 80 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, SEQ ID NO:6611 с мутацией C80L). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 574 SEQ ID NO:6611, например, включает глутаминовую кислоту в позиции 574 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, SEQ ID NO:6611 с мутацией C574E). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 80 и мутацию в позиции 574 SEQ ID NO:6611, например, содержит лейцин в позиции 80 SEQ ID NO:6611 и глутаминовую кислоту в позиции 574 SEQ ID NO:6611 (например, содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией C80L и мутацией C574E). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают свойства раствора молекулы Сas9.

В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 147 SEQ ID NO:6611, например, включает тирозин в позиции 147 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D147Y). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 411 SEQ ID NO:6611, например, включает треонин в позиции 411 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией P411T). В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 147 и мутацию в позиции 411 SEQ ID NO:6611, например, включает тирозин в позиции 147 SEQ ID NO:6611 и треонин в позиции 411 SEQ ID NO:6611 (например, содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D147Y и мутацией P411T). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают эффективность нацеливания молекулы Сas9, например, в дрожжах.

В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант S. pyogenes Сas9 SEQ ID NO:6611, который включает одну или несколько мутаций. В вариантах осуществления вариант Сas9 содержит мутацию в позиции 1135 SEQ ID NO:6611, например, включает глутаминовую кислоту в позиции 1135 SEQ ID NO:6611 (то есть содержит, например, состоит из SEQ ID NO:6611 с мутацией D1135E). Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации улучшают селективность молекулы Сas9 для последовательности NGG PAM по сравнению с последовательностью PAM NAG.

В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 855 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, мутацию замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например аланин. В вариантах осуществления молекула Сas9 представляет собой вариант Сas9 S. pyogenes SEQ ID NO:6611, который включает мутацию в позиции 497, мутацию в позиции 661, мутацию в позиции 695 и/или мутацию в позиции 926 SEQ ID NO:6611, например мутацию замещения на аланин в позиции 497, позиции 661, позиции 695 и/или позиции 926 SEQ ID NO:6611. В вариантах осуществления молекула Сas9 имеет мутацию только в позиции 497, позиции 661, позиции 695 и позиции 926 SEQ ID NO:6611 по отношению к SEQ ID NO:6611, например, где каждая мутация является мутацией замещения на аминокислоту, не несущую заряда, например, аланин. Не ограничиваясь теорией, считается, что такие мутации уменьшают разрезание ДНК молекулой Сas9 в неспецифичных участках.

Понятно, что мутации, описанные здесь для молекулы Сas9, могут быть объединены, и могут сочетаться с любым из слитых белков или другими модификациями, описанными здесь, и с молекулой Сas9, тестированной методами, описанными здесь.

Различные типы молекул Cas могут применяться для осуществления раскрытых здесь изобретений. В некоторых вариантах осуществления используются молекулы Cas систем Cas типа II. В других вариантах осуществления используют молекулы Cas других систем Cas. Например, могут быть использованы молекулы Cas типа I или типа III. Примеры молекул Cas (и систем Cas) описаны, например, в Haft et al, PLoS COMPUTATION BIOLOGY 2005, 1(6): e60 и Makarova et al., MICROBIOLOGY NATURE REVIEW 201 1, 9: 467-477, при этом содержание обоих включены в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 содержит один или несколько следующих видов активности: активность никазы; активность внесения двуцепочечных разрывов (например, активность эндонуклеазы и/или экзонуклеазы); активность хеликазы; или способность, вместе с молекулой gРНК, нацеливаться на нуклеиновую кислоту-мишень.

Модифицированные молекулы Сas9.

Встречающиеся в природе молекулы Сas9 обладают рядом свойств, включая активность никазы, активность нуклеазы (например, активность эндонуклеазы и/или экзонуклеазы); активность хеликазы; способность функционально связываться с молекулой gРНК; и способность нацеливаться (или локализовать) сайт на нуклеиновой кислоте (например, способность распознать PAM и способность распознать его специфично). В одном варианте осуществления молекулы Сas9 могут включать все или некоторые из этих свойств. В типичных вариантах осуществления молекулы Сas9 обладают способностью взаимодействовать с молекулой gРНК и, совместно с молекулой gРНК, связываться с сайтом на нуклеиновой кислоте. Другие активности, например, специфичное распознавание PAM, нуклеазная активность или активность хеликазы, могут варьироваться в широких пределах в молекулах Сas9. Молекулы Сas9 с желаемыми свойствами могут быть получены несколькими способами, например, путем изменения первоначальных, например, существующих в природе молекул Сas9, для получения измененной молекулы Сas9, имеющей требуемое свойство. Например, можно ввести одну или несколько мутаций или отличий по отношению к первоначальной молекуле Сas9. Такие мутации и отличия включают: замены (например, замены консервативных или неконсервативных аминокислот), вставки или делеции. В одном варианте осуществления молекула Сas9 может содержать одну или несколько мутаций или отличий, например, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40 или 50 мутаций, но менее 200, 100 или 80 мутаций относительно стандартной молекулы Сas9.

В одном варианте осуществления мутация или мутации не оказывают существенного влияния на активность Сas9, например на активность Сas9, описанную здесь. В одном варианте осуществления мутация или мутации оказывают существенное влияние на активность Сas9, например, на активность Сas9, описанную здесь. В одном варианте приведённые активности включают одну или более таких как: специфичность к распознаванию PAM, нуклеазную активность и активность хеликазы. Мутация(и) может присутствовать, например, в: одном или более RuvC-подобном домене, например N-концевом RuvC-подобном домене; HNH-подобном домене; области вне RuvC-подобных доменов и HNH-подобных доменов. В некоторых вариантах осуществления мутация(и) присутствует в N-концевом RuvC-подобном домене. В некоторых вариантах осуществления мутация(ии) присутствует(ют) в HNH-подобном домене. В некоторых вариантах осуществления мутации присутствуют как в N-концевом RuvC-подобном домене, так и в HNH-подобном домене.

Предсказать, будет ли конкретная (аминокислотная) последовательность, например, с заменой, влиять на одну или несколько активностей, таких как активность нацеливания, нуклеазная активность и т.д., и оценить степень влияния можно, например, путем оценки того, является ли мутация консервативной или способом, описанным в Разделе ΠΙ. В варианте осуществления «несущественный» аминокислотный остаток, используемый в контексте молекулы Сas9, представляет собой остаток, который может быть изменен по отношению к последовательности дикого типа молекулы Сas9, например, природной молекулы Сas9, например, активной молекулы Сas9 без потери или, более предпочтительно, без существенного изменения активности Сas9 (например, нуклеазной активности), тогда как изменение «существенного» аминокислотного остатка (консервативная замена) приводит к значительной потере активности (например, нуклеазной активности).

Молекулы Сas9 с измененным распознаванием PAM или без распознавания PAM.

Встречающиеся в природе молекулы Сas9 могут распознавать специфические последовательности PAM, например, распознавать PAM последовательности, описанные выше для S. pyogenes, S. thermo Philus, S. mutans, S. aureus и N. meningitidis.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 имеет ту же PAM-специфичность, что и природная молекула Сas9. В других вариантах осуществления молекула Сas9 обладает специфичностью PAM, не связанной с природной молекулой Сas9, или специфичностью PAM, не связанной с природной молекулой Сas9, последовательности которой она наиболее гомологична. Например, встречающаяся в природе молекула Сas9 может быть изменена, например, для изменения распознавания PAM, например, для изменения последовательности PAM, которую молекула Сas9 распознает, с целью уменьшить количество неспецифичного связывания и/или улучшить специфичность; или устранить распознавание PAM в целом. В одном варианте осуществления молекула Сas9 может быть изменена, например, при увеличении длины последовательности, распознающей PAM, для достижения высокого уровня идентичности и специфичности Сas9, что приводит к уменьшению неспецифичного связывания и повышению специфичности. В варианте осуществления длина распознающей ПАМ последовательности составляет по меньшей мере 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 15 аминокислот в длину. Молекулы Сas9, которые распознают различные последовательности PAM и/или уменьшают неспецифичное связывание, могут быть получены с использованием направленной эволюции.

Типовые методы и системы, которые могут быть использованы для направленной эволюции молекул Сas9, описаны, например, в Esvelt el al, Nature 2011, 472 (7344): 499-503. Молекулы-кандидаты Сas9 могут быть оценены, например, описанными здесь способами.

Молекулы Сas9 без активности расщепления или с модифицированной активностью расщепления.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 обладает нуклеазной активностью, отличающейся от активности природных молекул Сas9, например, отличающейся от активности природной наиболее гомологичной молекулы Сas9. Например, молекула Сas9 может отличаться от природных молекул Сas9, например молекулы Сas9 S. pyogenes, следующим образом: по ее способности модулировать, например, уменьшать или увеличивать, внесение двунитевого разрыва (эндонуклеазная и/или экзонуклеазная активность), например, по сравнению с природной молекулой Сas9 (например, молекулой Сas9 S. pyogenes); по её способности модулировать, например, уменьшать или увеличивать, расщепление одной цепи нуклеиновой кислоты, например некомплементарной цепи молекулы нуклеиновой кислоты или комплементарной цепи молекулы нуклеиновой кислоты (активность никазы), например, по сравнению с природной молекулой Сas9 (например, молекулой Сas9 S. pyogenes); или по её способности расщеплять молекулу нуклеиновой кислоты, например, двухцепочечную или одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты. Эти активности могут быть убраны.

Модифицированные активные молекулы Сas9 с активностью расщепления.

В одном варианте осуществления активная молекула Сas9 содержит один или несколько следующих видов активности: активность расщепления, связанная с N-концевым доменом, подобным RuvC; активность расщепления, связанная с HNH-подобным доменом; активность расщепления, связанной с доменом HNH, и активность расщепления, связанной с N-концевым доменом, подобным RuvC.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 представляет собой никазу Сas9, например, расщепляет только одну цепь ДНК. В одном варианте осуществления никаза Сas9 включает мутацию в позиции 10 и/или мутацию в позиции 840 SEQ ID NO:6611, например, содержит мутацию D10A и/или H840A до SEQ ID NO:6611.

Неактивные Сas9 Молекулы без активности расщепления.

В варианте осуществления измененная молекула Сas9 представляет собой неактивную молекулу Сas9, которая не расщепляет молекулу нуклеиновой кислоты (двуцепочечную или одноцепочечную), либо расщепляет молекулу нуклеиновой кислоты со значительно меньшей эффективностью, например, менее 20, 10, 5, 1 или 0,1% активности расщепления исходной молекулы Сas9, измеренной с помощью описанного здесь анализа. Исходная молекула Сas9 может быть встречающаяся в природе немодифицированная молекула Сas9, например, природная молекула Сas9, такая как Сas9 S. pyogenes, S. thermophilus, S. aureus или N. meningitidis. В одном варианте исходная молекула Сas9 представляет собой природную молекулу Сas9, имеющую самую близкую по структуре последовательность или гомологию. В одном варианте осуществления неактивная молекула Сas9 не обладает значительной активностью расщепления, связанной с N-концевым RuvC-подобным доменом и активностью расщепления, связанной с HNH-подобным доменом. В одном варианте осуществления молекула Сas9 представляет собой dСas9. Tsai et al. (2014), Nat. Biotech. 32: 569-577.

Каталитически неактивная молекула Сas9 может быть слита с транскрипционным репрессором. Неактивные рекомбинантные белковые комплексы Сas9 и gРНК нацеливаются на последовательность ДНК, указанную целевым доменом gРНК, но, в отличие от активного Сas9, комплекс не расщепляет ДНК-мишень. Сшивка эффекторного домена, такого как домен, репрессирующий транскрипцию, с неактивным Сas9 позволяет вводить эффектор на любой участок ДНК, определяемый gРНК. Сайт-специфичное нацеливание рекомбинантного белка Сas9 в промоторную область гена может блокировать или влиять на связывание полимеразы с промоторной областью, например, сшивка Сas9 с транскрипционным фактором (например, активатором транскрипции) и/или энхансером транскрипции связывающимися с нуклеиновой кислотой для увеличения или ингибирования активации транскрипции. В качестве альтернативы, сайт-специфичное нацеливание Сas9, слитого с репрессором транскрипции, на район промотора может использоваться для уменьшения активации транскрипции.

Репрессоры транскрипции или домены репрессора транскрипции, которые могут быть слиты с неактивной молекулой Сas9, могут включать Круппель-подобный домен (KRAB или SKD домен), домен взаимодействия Mad mSIN3 или домен репрессора ERF (ERD). В другом варианте осуществления неактивная молекула Сas9 может быть слита с белком, модифицирующим хроматин. Например, неактивная молекула Сas9 может быть слита с белком гетерохроматина 1(HPl), метилтрансферазой лизинов гистонов (например, SUV39H1, SUV39H2, G9A, ESET/SETDBl, Pr-SET7/8, SUV4-20H1, RIZ1), деметилазой лизинов гистонов (например, LSD1/BHC1 10, SpLsdl/Sw, l/Safl10, Su(var)3-3, JMJD2A/JHDM3A, JMJD2B, JMJD2C/GASC1, JMJD2D, Rphl, JARID 1 A/RНП2, JARI DIB/PLU-I, JAR1D 1C/SMCX, JARID1 D/SMCY, Lid, Jhn2, Jmj2), деацетилазой гистонов (например, HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC8, Rpd3, Hos l, Cir6, HDAC4, HDAC5, HDAC7, HDAC9, Hdal, Cir3, SIRT 1, SIRT2, Sir2, Hst1, Hst2, Hst3, Hst4, HDAC1 1), и ДНК-метилазой (DNMT1, DNMT2a/DMNT3b, MET1). Неактивный слитый белок модифицированной молекулы Сas9 можно использовать для изменения статуса хроматина, для уменьшения экспрессии гена-мишени.

Гетерологичная последовательность (например, домен репрессора транскрипции) может быть слита с N- или С-концом неактивного белка Сas9. В альтернативном варианте осуществления гетерологичная последовательность (например, домен репрессора транскрипции) может быть слита с внутренней частью (то есть частью, отличной от N-конца или С-конца) неактивного белка Сas9.

Способность молекулы Сas9/gРНК связываться и расщеплять нуклеиновую кислоту-мишень можно оценить, например, способами, описанными здесь в разделе ΠΙ. Активность молекулы Сas9, например либо активной, либо неактивной Сas9 молекулы, отдельно или в комплексе с молекулой gРНК, также может быть определена методами, хорошо известными в данной области техники, включая методы анализа экспрессии генов и методы анализа на основе хроматина, например, иммунопреципитация хроматина (ChiP) и анализ хроматина in vivo (CiA).

Другие слитые молекулы Cas9

В вариантах осуществления молекула Сas9, например Сas9 S. pyogenes, может дополнительно содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей с дополнительную активностью.

В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько последовательностей сигналов ядерной локализации (NLS), например, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS. В некоторых вариантах осуществления молекула Сas9 содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS на N-конце или около него, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более NLS на C-конце или около него или их комбинации (например, один или несколько NLS на N-оконце и один или несколько NLS на C-конце). При использовании более одного NLS, каждый может быть выбран независимо от других, так что один NLS может присутствовать более чем в одной копии и/или в сочетании с одним или несколькими другими NLS, присутствующими в одной или нескольких копиях. В некоторых вариантах осуществления NLS считается как расположенный вблизи N- или С-конца, если ближайшая аминокислота NLS находится в пределах примерно 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, или больше аминокислот вдоль полипептидной цепи из N- или С-конца. Как правило, NLS состоит из одной или нескольких коротких последовательностей из положительно заряженных лизинов или аргининов, выступающих на поверхности белка, однако известны другие типы NLS. Неограничивающие примеры NLS включают последовательность NLS, содержащую или производную от: NLS большого T-антигена вируса SV40, имеющего аминокислотную последовательность PKKKRKV (SEQ ID NO:6612); NLS нуклеоплазмина (например, двойного NLS нуклеоплазмина с последовательностью KRPAATKKAGQAKKKK (SEQ ID NO:6613), c-myc NLS, имеющей аминокислотную последовательность PAAKRVKLD (SEQ ID NO:6614) или RQRRNELKRSP (SEQ ID NO:6615); hLNPA1 M9 NLS, имеющей последовательность NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGYFAKPRNQGGY (SEQ ID NO:6616), последовательность RMRIZFKNKGKDTAELRRRVEVSVELRKAKKDEQILKRRNV (SEQ ID NO:6617) домена IBB импортина-альфа, последовательности VSRKRPRP (SEQ ID NO:6618) и PPKKARED (SEQ ID) NO: 6619) белка myoma T, последовательность PQPKKKPL (SEQ ID NO:6620) p53 гена человека, последовательность SALIKKKKKMAP (SEQ ID NO:6621) мышиного c-ab1 IV, последовательности DRLRR (SEQ ID NO:6622) ) и PKQKKRK (SEQ ID NO:6623) вируса гриппа NS1, последовательность RKLKKKIKKL (SEQ ID NO:6624) дельта-антигена вируса гепатита, последовательность REKKKFLKRR (SEQ ID NO:6625) белка Mx1 мыши; последовательность KRKGDEVDGVDEVAKKKSKK (SEQ ID NO:6626) полимеразы поли(ADP-рибозы) человека; и последовательность RKCLQAGMNLEARKTKK (SEQ ID NO:6627) рецепторов глюкокортикоидных стероидных гормонов (человека). Другие подходящие последовательности NLS известны в данной области (например, Sorokin, Biochemistry (Moscow) (2007) 72:13, 1439-1457; Lange, J Biol Chem. (2007) 282: 8, 5101-5).

В одном варианте осуществления, молекула Сas9, например молекула S. pyogenes Сas9, содержит NLS-последовательность SV40, например, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9. В одном варианте осуществления молекула Сas9, например молекула Сas9 S. pyogenes, содержит NLS-последовательность SV40, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9, и NLS-последовательность SV40, расположенную на C-конце по отношению к молекуле Сas9. В одном варианте осуществления молекула Сas9, например молекула Сas9 S. pyogenes, содержит NLS-последовательность SV40, расположенную на N-конце по отношению к молекуле Сas9, и NLS-последовательность нуклеоплазмина, расположенную на C-конце молекулы Сas9. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула может дополнительно содержать маркер, например, тег His, например His(6)-тег или His(8)-тег (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно), например, на N-конце или C-конце.

В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей, которые позволяют специфически распознавать молекулу Сas9, например тег. В одном варианте осуществления тег представляет собой гистидиновую метку, например гистидиновую метку, содержащую по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более гистидиновых аминокислот (SEQ ID NO: 2971). В вариантах осуществления гистидиновая метка является тегом His6 (шесть гистидинов) (SEQ ID NO: 2969). В других вариантах осуществления гистидиновый маркер является тегом His8 (восемь гистидинов) (SEQ ID NO: 2970). В вариантах осуществления гистидиновый тег может быть отделён от одной или нескольких других частей молекулы Сas9 линкером. В вариантах осуществления линкер представляет собой GGS. Примером такой сшивки является молекула Сas9 iProt106520.

В некоторых аспектах молекула Сas9 может содержать одну или несколько аминокислотных последовательностей, которые распознаются протеазой (например, содержат сайт расщепления протеазой). В вариантах осуществления сайт расщепления представляет собой сайт расщепления вируса табачной мозаики (TEV), например, содержит последовательность ENLYFQG (SEQ ID NO:7810). В некоторых аспектах сайт расщепления протеазы, например сайт расщепления TEV, расположен между тегом, например тегом His, например тегом His6 или His8 (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно), и остальной частью молекулы Сas9. Не ограничиваясь теорией, считается, что такое введение позволит использовать тег для, например, очистки молекулы Сas9, с последующем отщепление тега, чтобы тег не мешал функции молекулы Сas9.

В вариантах осуществления Сas9 молекула (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевую NLS (например, содержит от N- до C-терминала NLS-Сas9-NLS), например, где каждая NLS представляет собой SV40 NLS (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS, C-терминальную NLS и C-концевой His6-тег (SEQ ID NO: 2969) (например, содержит от N- до C-конца NLS-Сas9-NLS-His-тег), например, где каждый NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую His-метку (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)), N-концевую NLS и C-концевую NLS (например, содержит, из N- к C-концу His-тег-NLS-Сas9-NLS), например, где каждый NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевой His-тег (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)) (например, содержит от N- до C-конца His-тег-Сas9-NLS), например, где NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевую NLS и C-концевой His-тег (например, His6-тег (SEQ ID NO: 2969)) (например, содержит от N- к C-концу NLS-Сas9-His тег), например, где NLS представляет собой NLS SV40 (PKKKRKV (SEQ ID NO:6612)). В вариантах осуществления молекула Сas9 (например, молекула Сas9, как описано здесь) содержит N-концевой His-тег (например, His8-тег (SEQ ID NO: 2970)), N-концевой домен расщепления (например, домен расщепления вируса табачной мозаики (TEV) (например, содержит последовательность ENLYFQG (SEQ ID NO:7810)), N-концевую NLS (например, SV40 NLS, SEQ ID NO:6612) и C-концевую NLS (например, NLS SV40, SEQ ID NO:6612) (например, содержит от N- до С-конца His-тег-TEV-NLS-Сas9-NLS). В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления изобретения Сas9 имеет последовательность SEQ ID NO:6611. Альтернативно, в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления изобретения Сas9 имеет последовательность варианта Сas9 SEQ ID NO:6611, например, как описано здесь. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления молекула Сas9 содержит линкер между тегами His и другой частью молекулы, например GGS-линкер. Ниже приведены аминокислотные последовательности приведенных выше примеров молекул Сas9, описанных выше. Идентификаторы «iProt» соответствуют показанным на Фиг. 60.

iProt105026 (также обозначенный как iProt106154, iProt106331, iProt106545 и PID426303, в зависимости от получения белка) (SEQ ID NO:7821):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

iProt106518 (SEQ ID NO:7822):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRILYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI EEFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

iProt106519 (SEQ ID NO:7823):

MGSSHHHHHH HHENLYFQGS MDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDGG GSPKKKRKV

iProt106520 (SEQ ID NO:7824):

MAHHHHHHGG SPKKKRKVDK KYSIGLDIGT NSVGWAVITD EYKVPSKKFK VLGNTDRHSI KKNLIGALLF DSGETAEATR LKRTARRRYT RRKNRICYLQ EIFSNEMAKV DDSFFHRLEE SFLVEEDKKH ERHPIFGNIV DEVAYHEKYP TIYHLRKKLV DSTDKADLRL IYLALAHMIK FRGHFLIEGD LNPDNSDVDK LFIQLVQTYN QLFEENPINA SGVDAKAILS ARLSKSRRLE NLIAQLPGEK KNGLFGNLIA LSLGLTPNFK SNFDLAEDAK LQLSKDTYDD DLDNLLAQIG DQYADLFLAA KNLSDAILLS DILRVNTEIT KAPLSASMIK RYDEHHQDLT LLKALVRQQL PEKYKEIFFD QSKNGYAGYI DGGASQEEFY KFIKPILEKM DGTEELLVKL NREDLLRKQR TFDNGSIPHQ IHLGELHAIL RRQEDFYPFL KDNREKIEKI LTFRIPYYVG PLARGNSRFA WMTRKSEETI TPWNFEEVVD KGASAQSFIE RMTNFDKNLP NEKVLPKHSL LYEYFTVYNE LTKVKYVTEG MRKPAFLSGE QKKAIVDLLF KTNRKVTVKQ LKEDYFKKIE CFDSVEISGV EDRFNASLGT YHDLLKIIKD KDFLDNEENE DILEDIVLTL TLFEDREMIE ERLKTYAHLF DDKVMKQLKR RRYTGWGRLS RKLINGIRDK QSGKTILDFL KSDGFANRNF MQLIHDDSLT FKEDIQKAQV SGQGDSLHEH IANLAGSPAI KKGILQTVKV VDELVKVMGR HKPENIVIEM ARENQTTQKG QKNSRERMKR IEEGIKELGS QILKEHPVEN TQLQNEKLYL YYLQNGRDMY VDQELDINRL SDYDVDHIVP QSFLKDDSID NKVLTRSDKN RGKSDNVPSE EVVKKMKNYW RQLLNAKLIT QRKFDNLTKA ERGGLSELDK AGFIKRQLVE TRQITKHVAQ ILDSRMNTKY DENDKLIREV KVITLKSKLV SDFRKDFQFY KVREINNYHH AHDAYLNAVV GTALIKKYPK LESEFVYGDY KVYDVRKMIA KSEQEIGKAT AKYFFYSNIM NFFKTEITLA NGEIRKRPLI ETNGETGEIV WDKGRDFATV RKVLSMPQVN IVKKTEVQTG GFSKESILPK RNSDKLIARK KDWDPKKYGG FDSPTVAYSV LVVAKVEKGK SKKLKSVKEL LGITIMERSS FEKNPIDFLE AKGYKEVKKD LIIKLPKYSL FELENGRKRM LASAGELQKG NELALPSKYV NFLYLASHYE KLKGSPEDNE QKQLFVEQHK HYLDEIIEQI SEFSKRVILA DANLDKVLSA YNKHRDKPIR EQAENIIHLF TLTNLGAPAA FKYFDTTIDR KRYTSTKEVL DATLIHQSIT GLYETRIDLS QLGGDSRADP KKKRKV

iProt106521 (SEQ ID NO:7825):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD HHHHHH

iProt106522 (SEQ ID NO:7826):

MAHHHHHHGG SDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDSR ADPKKKRKV

iProt106658 (SEQ ID NO:7827):

MGSSHHHHHH HHENLYFQGS MDKKYSIGLD IGTNSVGWAV ITDEYKVPSK KFKVLGNTDR HSIKKNLIGA LLFDSGETAE ATRLKRTARR RYTRRKNRIC YLQEIFSNEM AKVDDSFFHR LEESFLVEED KKHERHPIFG NIVDEVAYHE KYPTIYHLRK KLVDSTDKAD LRLIYLALAH MIKFRGHFLI EGDLNPDNSD VDKLFIQLVQ TYNQLFEENP INASGVDAKA ILSARLSKSR RLENLIAQLP GEKKNGLFGN LIALSLGLTP NFKSNFDLAE DAKLQLSKDT YDDDLDNLLA QIGDQYADLF LAAKNLSDAI LLSDILRVNT EITKAPLSAS MIKRYDEHHQ DLTLLKALVR QQLPEKYKEI FFDQSKNGYA GYIDGGASQE EFYKFIKPIL EKMDGTEELL VKLNREDLLR KQRTFDNGSI PHQIHLGELH AILRRQEDFY PFLKDNREKI EKILTFRIPY YVGPLARGNS RFAWMTRKSE ETITPWNFEE VVDKGASAQS FIERMTNFDK NLPNEKVLPK HSLLYEYFTV YNELTKVKYV TEGMRKPAFL SGEQKKAIVD LLFKTNRKVT VKQLKEDYFK KIECFDSVEI SGVEDRFNAS LGTYHDLLKI IKDKDFLDNE ENEDILEDIV LTLTLFEDRE MIEERLKTYA HLFDDKVMKQ LKRRRYTGWG RLSRKLINGI RDKQSGKTIL DFLKSDGFAN RNFMQLIHDD SLTFKEDIQK AQVSGQGDSL HEHIANLAGS PAIKKGILQT VKVVDELVKV MGRHKPENIV IEMARENQTT QKGQKNSRER MKRIEEGIKE LGSQILKEHP VENTQLQNEK LYLYYLQNGR DMYVDQELDI NRLSDYDVDH IVPQSFLKDD SIDNKVLTRS DKNRGKSDNV PSEEVVKKMK NYWRQLLNAK LITQRKFDNL TKAERGGLSE LDKAGFIKRQ LVETRQITKH VAQILDSRMN TKYDENDKLI REVKVITLKS KLVSDFRKDF QFYKVREINN YHHAHDAYLN AVVGTALIKK YPKLESEFVY GDYKVYDVRK MIAKSEQEIG KATAKYFFYS NIMNFFKTEI TLANGEIRKR PLIETNGETG EIVWDKGRDF ATVRKVLSMP QVNIVKKTEV QTGGFSKESI LPKRNSDKLI ARKKDWDPKK YGGFDSPTVA YSVLVVAKVE KGKSKKLKSV KELLGITIME RSSFEKNPID FLEAKGYKEV KKDLIIKLPK YSLFELENGR KRMLASAGEL QKGNELALPS KYVNFLYLAS HYEKLKGSPE DNEQKQLFVE QHKHYLDEII EQISEFSKRV ILADANLDKV LSAYNKHRDK PIREQAENII HLFTLTNLGA PAAFKYFDTT IDRKRYTSTK EVLDATLIHQ SITGLYETRI DLSQLGGDGG GSPKKKRKV

iProt106745 (SEQ ID NO:7828):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNAVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

iProt106746 (SEQ ID NO:7829):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEALY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP ALESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKAPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

iProt106747 (SEQ ID NO:7830):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTNFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGRL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMQLIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLADDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRQITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP ALESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKAPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

iProt106884 (SEQ ID NO:7831):

MAPKKKRKVD KKYSIGLDIG TNSVGWAVIT DEYKVPSKKF KVLGNTDRHS IKKNLIGALL FDSGETAEAT RLKRTARRRY TRRKNRICYL QEIFSNEMAK VDDSFFHRLE ESFLVEEDKK HERHPIFGNI VDEVAYHEKY PTIYHLRKKL VDSTDKADLR LIYLALAHMI KFRGHFLIEG DLNPDNSDVD KLFIQLVQTY NQLFEENPIN ASGVDAKAIL SARLSKSRRL ENLIAQLPGE KKNGLFGNLI ALSLGLTPNF KSNFDLAEDA KLQLSKDTYD DDLDNLLAQI GDQYADLFLA AKNLSDAILL SDILRVNTEI TKAPLSASMI KRYDEHHQDL TLLKALVRQQ LPEKYKEIFF DQSKNGYAGY IDGGASQEEF YKFIKPILEK MDGTEELLVK LNREDLLRKQ RTFDNGSIPH QIHLGELHAI LRRQEDFYPF LKDNREKIEK ILTFRIPYYV GPLARGNSRF AWMTRKSEET ITPWNFEEVV DKGASAQSFI ERMTAFDKNL PNEKVLPKHS LLYEYFTVYN ELTKVKYVTE GMRKPAFLSG EQKKAIVDLL FKTNRKVTVK QLKEDYFKKI ECFDSVEISG VEDRFNASLG TYHDLLKIIK DKDFLDNEEN EDILEDIVLT LTLFEDREMI EERLKTYAHL FDDKVMKQLK RRRYTGWGAL SRKLINGIRD KQSGKTILDF LKSDGFANRN FMALIHDDSL TFKEDIQKAQ VSGQGDSLHE HIANLAGSPA IKKGILQTVK VVDELVKVMG RHKPENIVIE MARENQTTQK GQKNSRERMK RIEEGIKELG SQILKEHPVE NTQLQNEKLY LYYLQNGRDM YVDQELDINR LSDYDVDHIV PQSFLKDDSI DNKVLTRSDK NRGKSDNVPS EEVVKKMKNY WRQLLNAKLI TQRKFDNLTK AERGGLSELD KAGFIKRQLV ETRAITKHVA QILDSRMNTK YDENDKLIRE VKVITLKSKL VSDFRKDFQF YKVREINNYH HAHDAYLNAV VGTALIKKYP KLESEFVYGD YKVYDVRKMI AKSEQEIGKA TAKYFFYSNI MNFFKTEITL ANGEIRKRPL IETNGETGEI VWDKGRDFAT VRKVLSMPQV NIVKKTEVQT GGFSKESILP KRNSDKLIAR KKDWDPKKYG GFDSPTVAYS VLVVAKVEKG KSKKLKSVKE LLGITIMERS SFEKNPIDFL EAKGYKEVKK DLIIKLPKYS LFELENGRKR MLASAGELQK GNELALPSKY VNFLYLASHY EKLKGSPEDN EQKQLFVEQH KHYLDEIIEQ ISEFSKRVIL ADANLDKVLS AYNKHRDKPI REQAENIIHL FTLTNLGAPA AFKYFDTTID RKRYTSTKEV LDATLIHQSI TGLYETRIDL SQLGGDSRAD PKKKRKVHHH HHH

Нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы Сas9

Нуклеиновые кислоты, кодирующие молекулы Сas9, например, активную молекулу Сas9 или неактивную молекулу Сas9, приведены здесь.

Примеры нуклеиновых кислот, кодирующих молекулы Сas9, описаны в Cong et al., SCIENCE 2013, 399 (6121): 819-823; Wang et al, CELL 2013, 153 (4): 910-918; Mali et al., Science 2013, 399 (6121): 823-826; Jinek et al, SCIENCE 2012, 337 (6096): 816-821.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу Сas9, может быть синтетической последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, молекула синтетической нуклеиновой кислоты может быть химически модифицирована, например, как описано в разделе XIII. В одном варианте осуществления мРНК Сas9 имеет одно или несколько, например, следующих свойств: она имеет кэп, полиаденилирована, имеет замещения 5-метилцитидином и/или псевдоуридином.

Кроме того, или альтернативно, последовательность синтетической нуклеиновой кислоты может быть кодон-оптимизирована, например, по меньшей мере, один нераспространённый кодон или не очень распространённый кодон может быть заменен часто встречающимся кодоном. Например, синтетическая нуклеиновая кислота может направлять синтез оптимизированной информационной мРНК, например, оптимизированной для экспрессии в системе экспресии млекопитающих, например, описанной здесь.

Ниже представлена примерная последовательность нуклеиновой кислоты, кодон-оптимизированная, кодирующая молекулу Сas9 S.pyogenes.

atggataaaa agtacagcat cgggctggac atcggtacaa actcagtggg gtgggccgtg       60

attacggacg agtacaaggt accctccaaa aaatttaaag tgctgggtaa cacggacaga      120

cactctataa agaaaaatct tattggagcc ttgctgttcg actcaggcga gacagccgaa      180

gccacaaggt tgaagcggac cgccaggagg cggtatacca ggagaaagaa ccgcatatgc      240

tacctgcaag aaatcttcag taacgagatg gcaaaggttg acgatagctt tttccatcgc      300

ctggaagaat cctttcttgt tgaggaagac aagaagcacg aacggcaccc catctttggc      360

aatattgtcg acgaagtggc atatcacgaa aagtacccga ctatctacca cctcaggaag      420

aagctggtgg actctaccga taaggcggac ctcagactta tttatttggc actcgcccac      480

atgattaaat ttagaggaca tttcttgatc gagggcgacc tgaacccgga caacagtgac      540

gtcgataagc tgttcatcca acttgtgcag acctacaatc aactgttcga agaaaaccct      600

ataaatgctt caggagtcga cgctaaagca atcctgtccg cgcgcctctc aaaatctaga      660

agacttgaga atctgattgc tcagttgccc ggggaaaaga aaaatggatt gtttggcaac      720

ctgatcgccc tcagtctcgg actgacccca aatttcaaaa gtaacttcga cctggccgaa      780

gacgctaagc tccagctgtc caaggacaca tacgatgacg acctcgacaa tctgctggcc      840

cagattgggg atcagtacgc cgatctcttt ttggcagcaa agaacctgtc cgacgccatc      900

ctgttgagcg atatcttgag agtgaacacc gaaattacta aagcacccct tagcgcatct      960

atgatcaagc ggtacgacga gcatcatcag gatctgaccc tgctgaaggc tcttgtgagg     1020

caacagctcc ccgaaaaata caaggaaatc ttctttgacc agagcaaaaa cggctacgct     1080

ggctatatag atggtggggc cagtcaggag gaattctata aattcatcaa gcccattctc     1140

gagaaaatgg acggcacaga ggagttgctg gtcaaactta acagggagga cctgctgcgg     1200

aagcagcgga cctttgacaa cgggtctatc ccccaccaga ttcatctggg cgaactgcac     1260

gcaatcctga ggaggcagga ggatttttat ccttttctta aagataaccg cgagaaaata     1320

gaaaagattc ttacattcag gatcccgtac tacgtgggac ctctcgcccg gggcaattca     1380

cggtttgcct ggatgacaag gaagtcagag gagactatta caccttggaa cttcgaagaa     1440

gtggtggaca agggtgcatc tgcccagtct ttcatcgagc ggatgacaaa ttttgacaag     1500

aacctcccta atgagaaggt gctgcccaaa cattctctgc tctacgagta ctttaccgtc     1560

tacaatgaac tgactaaagt caagtacgtc accgagggaa tgaggaagcc ggcattcctt     1620

agtggagaac agaagaaggc gattgtagac ctgttgttca agaccaacag gaaggtgact     1680

gtgaagcaac ttaaagaaga ctactttaag aagatcgaat gttttgacag tgtggaaatt     1740

tcaggggttg aagaccgctt caatgcgtca ttggggactt accatgatct tctcaagatc     1800

ataaaggaca aagacttcct ggacaacgaa gaaaatgagg atattctcga agacatcgtc     1860

ctcaccctga ccctgttcga agacagggaa atgatagaag agcgcttgaa aacctatgcc     1920

cacctcttcg acgataaagt tatgaagcag ctgaagcgca ggagatacac aggatgggga     1980

agattgtcaa ggaagctgat caatggaatt agggataaac agagtggcaa gaccatactg     2040

gatttcctca aatctgatgg cttcgccaat aggaacttca tgcaactgat tcacgatgac     2100

tctcttacct tcaaggagga cattcaaaag gctcaggtga gcgggcaggg agactccctt     2160

catgaacaca tcgcgaattt ggcaggttcc cccgctatta aaaagggcat ccttcaaact     2220

gtcaaggtgg tggatgaatt ggtcaaggta atgggcagac ataagccaga aaatattgtg     2280

atcgagatgg cccgcgaaaa ccagaccaca cagaagggcc agaaaaatag tagagagcgg     2340

atgaagagga tcgaggaggg catcaaagag ctgggatctc agattctcaa agaacacccc     2400

gtagaaaaca cacagctgca gaacgaaaaa ttgtacttgt actatctgca gaacggcaga     2460

gacatgtacg tcgaccaaga acttgatatt aatagactgt ccgactatga cgtagaccat     2520

atcgtgcccc agtccttcct gaaggacgac tccattgata acaaagtctt gacaagaagc     2580

gacaagaaca ggggtaaaag tgataatgtg cctagcgagg aggtggtgaa aaaaatgaag     2640

aactactggc gacagctgct taatgcaaag ctcattacac aacggaagtt cgataatctg     2700

acgaaagcag agagaggtgg cttgtctgag ttggacaagg cagggtttat taagcggcag     2760

ctggtggaaa ctaggcagat cacaaagcac gtggcgcaga ttttggacag ccggatgaac     2820

acaaaatacg acgaaaatga taaactgata cgagaggtca aagttatcac gctgaaaagc     2880

aagctggtgt ccgattttcg gaaagacttc cagttctaca aagttcgcga gattaataac     2940

taccatcatg ctcacgatgc gtacctgaac gctgttgtcg ggaccgcctt gataaagaag     3000

tacccaaagc tggaatccga gttcgtatac ggggattaca aagtgtacga tgtgaggaaa     3060

atgatagcca agtccgagca ggagattgga aaggccacag ctaagtactt cttttattct     3120

aacatcatga atttttttaa gacggaaatt accctggcca acggagagat cagaaagcgg     3180

ccccttatag agacaaatgg tgaaacaggt gaaatcgtct gggataaggg cagggatttc     3240

gctactgtga ggaaggtgct gagtatgcca caggtaaata tcgtgaaaaa aaccgaagta     3300

cagaccggag gattttccaa ggaaagcatt ttgcctaaaa gaaactcaga caagctcatc     3360

gcccgcaaga aagattggga ccctaagaaa tacgggggat ttgactcacc caccgtagcc     3420

tattctgtgc tggtggtagc taaggtggaa aaaggaaagt ctaagaagct gaagtccgtg     3480

aaggaactct tgggaatcac tatcatggaa agatcatcct ttgaaaagaa ccctatcgat     3540

ttcctggagg ctaagggtta caaggaggtc aagaaagacc tcatcattaa actgccaaaa     3600

tactctctct tcgagctgga aaatggcagg aagagaatgt tggccagcgc cggagagctg     3660

caaaagggaa acgagcttgc tctgccctcc aaatatgtta attttctcta tctcgcttcc     3720

cactatgaaa agctgaaagg gtctcccgaa gataacgagc agaagcagct gttcgtcgaa     3780

cagcacaagc actatctgga tgaaataatc gaacaaataa gcgagttcag caaaagggtt     3840

atcctggcgg atgctaattt ggacaaagta ctgtctgctt ataacaagca ccgggataag     3900

cctattaggg aacaagccga gaatataatt cacctcttta cactcacgaa tctcggagcc     3960

cccgccgcct tcaaatactt tgatacgact atcgaccgga aacggtatac cagtaccaaa     4020

gaggtcctcg atgccaccct catccaccag tcaattactg gcctgtacga aacacggatc     4080

gacctctctc aactgggcgg cgactag                                         4107

Коррекция, обусловленная двухцепочечным разрывом.

В одном варианте осуществления двухцепочечный разрыв осуществляют молекулой Сas9, обладающей активностью расщепления, ассоциированной с HNH-подобным доменом, или активностью расщепления, ассоциированной с RuvC-подобным доменом, например с N-концевым RuvC-подобный доменом, например, Сas9 молекулы дикого типа. Такие варианты осуществления требуют только одиночной gРНК.

Коррекция, обусловленная одноцепочечным разрывом.

В других вариантах осуществления два одноцепочечных разрыва нитей, или два ника (nick) осуществляются молекулой Сas9, обладающей активностью никазы, например активностью расщепления, связанной с HNH-подобным доменом или связанной с N-концевым RuvC-подобным доменом. Для таких вариантов осуществления требуются две gРНК, по одной для осуществления каждого одноцепочечного разрыва. В одном варианте осуществления молекула Сas9, обладающая активностью никазы, расщепляет цепь, с которой гибридизуется gРНК, но не цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК. В одном варианте осуществления молекула Сas9, имеющая активность никазы, не расщепляет цепь, с которой гибридизуется gРНК, а расщепляет цепь, комплементарную цепи, с которой гибридизуется gРНК.

В одном варианте осуществления никаза обладает активностью HNH, т.е. представлена молекулой Сas9, в которой инактивирована активность RuvC, например, молекулой Сas9 с мутацией D10, например, с мутацией D10A. D10A инактивирует RuvC; поэтому никаза Сas9 имеет (только) активность HNH и будет вносить разрыв в ту цепь, с которой гибридизуется gРНК (например, в комплементарная цепь, не имеющую NGG PAM).

В других вариантах осуществления молекула Сas9, имеющая H840, например, мутацию H840A, может быть использована в качестве никазы. H840A инактивирует HNH; поэтому никаза Сas9 имеет (только) активность RuvC и может вносить разрывы в некомплементарную цепь (например, цепь, имеющую NGG PAM и последовательность которой идентична gРНК).

В варианте осуществления, в котором никаза и две gРНК используются для размещения двух одноцепочечных разрывов (ников), один разрыв находится на «+»цепи, а другой разрыв находится на «-»цепи целевой нуклеиновой кислоты-мишени. PAM обращены наружу. gGРНК могут быть выбраны таким образом, чтобы gРНК разделялись на примерно от 0-50, 0-100 или 0-200 нуклеотидов. В одном варианте осуществления не существует перекрывания между целевой последовательностью, которая комплементарна целевым доменам двух gРНК. В одном варианте осуществления gРНК не перекрываются и разделяются на целых 50, 100 или 200 нуклеотидов. В одном варианте осуществления использование двух gРНК может повысить специфичность, например, путем уменьшения нецелевого связывания (Ran el cil., CELL 2013).

В одном варианте осуществления один одноцепочечный разрыв может применяться для индуцирования HDR. Здесь предполагается, что один одноцепочечный разрыв может быть использован для увеличения соотношения эффективности систем HDR, HR или NHEJ на данном участке расщепления.

Размещение двухцепочечного разрыва двойной нити или одноцепочечного разрыва относительно целевого положения.

Двухцепочечный разрыв дуплексой молекулы ДНК или одноцепочечный разрыв любой из цепей должен находится достаточно близко к целевому положению для осуществления коррекции. В одном варианте осуществления расстояние составляет не более 50, 100, 200, 300, 350 или 400 нуклеотидов. Не ограничиваясь теорией, считается, что разрыв должен быть достаточно близок к целевому положению, так чтобы разрыв находится в пределах области, которая подлежит удалению при помощи экзонуклеазы при внесении второго концевого разрыва (края резекции). Если расстояние между целевым положением и первым разрывом слишком велико, мутация не может быть включена в последовательность, и, следовательно, не может быть исправлена, так как донорская последовательность может использоваться для коррекции последовательности только в области резекции.

В одном варианте осуществления, в котором gРНК (мономолекулярная (или «химерная)» или модульная) и нуклеаза Сas9 осуществляют двухцепочечный разрыв с целью активации репарации по типу гомологичной рекомбинации (HDR) или HR-опосредованной коррекции (по типу гомологичной рекомбинации), участок расщепления находится в пределах 0-200 нп (например, от 0 до 175, от 0 до 150, от 0 до 125, от 0 до 100, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 200, от 25 до 175, от 25 до 150, от 25 до 125, от 25 до 100, 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 200, от 50 до 175, от 50 до 150, от 50 до 125, от 50 до 100, от 50 до 75, от 75 до 200, от 75 до 175, от 75 до 150, от 75 до 125, от 75 до 100 нп) от целевой позиции. В одном варианте осуществления сайт расщепления находится в пределах 0-100 нп (например, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 1 00, от 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 100, от 50 до 75 или от 75 до 100 нп) от целевого положения.

В одном варианте осуществления, в котором две gРНК (независимые, мономолекулярные (или «химерные)» или модульные) в комплексе с никазой Сas9 осуществляют два одноцепочечных разрыва с целью коррекции путём репарации по типу гомологичной рекомбинации (HDR), более близкий одночепочный разрыв находится в пределах 0-200 нп (например, от 0 до 175, от 0 до 150, от 0 до 125, от 0 до 100, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 200, от 25 до 175, от 25 до 150, от 25 до 125, от 25 до 100, 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 200, от 50 до 175, от 50 до 150, от 50 до 125, от 50 до 100, от 50 до 75, от 75 до 200, от 75 до 175, от 75 до 150, от 75 до 125, от 75 до 100 нп) от целевого положения и оба одноцепочечных разрыва в идеале будут находиться в пределах 25-55 нп друг от друга (например, от 25 до 50, от 25 до 45, от 25 до 40, от 25 до 35, от 25 до 30, от 30 до 55, 30 до 50, от 30 до 45, от 30 до 40, от 30 до 35, от 35 до 55, от 35 до 50, от 35 до 45, от 35 до 40, от 40 до 55, от 40 до 50, от 40 до 45 пар оснований) и не более чем 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 или 5 нп друг от друга). В одном варианте осуществления сайт расщепления находится от 0 до 100 нп. (например, от 0 до 75, от 0 до 50, от 0 до 25, от 25 до 100, от 25 до 75, от 25 до 50, от 50 до 100, от 50 до 75 или от 75 до 100 нп) от целевой позиции.

В одном варианте осуществления две gРНК (независимые, мономолекулярные (или «химерные») или модульные), скомбинированы так, чтобы осуществить двухцепочечный разрыв по обеим сторонам целевого положения. В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, скомбинированы так, чтобы расположить двухцепочечный разрыв (то есть одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и два одиночных одноцепочечных разрыва либо два парных одноцепочечных разрыва (т. е. два комплекса gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от целевого положения, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевого положения). В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить две пары одноцепочечных разрывов (т.е. двух пар комплексов из gРНК с никазами Cas) причём первая пара gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от целевого положения, а вторая пара gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') от целевого положения. Двухцепочные разрыв(ы) или ближайшая пара двойных одноцепочечных разрывов в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от в целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, l00, 50 или 25 нп от целевого положения). При использовании никаз, оба парных одноцепочечных разрыва (ника) находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, между 25 и 50, 25 и 45, 25 и 40, 25 и 35, 25 и 30, 50 и 55, 45 и 55, 40 и 55, 35 и 55, 30 и 55, 30 и 50, 35 и 50, 40 и 50, 45 и 50, 35 и 45 или 40 и 45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нп).

В одном варианте осуществления, две gРНК (независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить двухцепочечный разрыв по обеим сторонам целевого положения. В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, скомбинированы так, чтобы расположить двухцепочечный разрыв (то есть одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и два одиночных одноцепочечных разрыва либо два парных одноцепочечных разрыва (т. е. два комплекса gРНК с никазами Сas9) на двух целевых последовательностях (например, первая gРНК используется для нацеливания на целевую последовательность вверх по течению (т.е. 5'), а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевой последовательности сайта инсерции. В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК), скомбинированы так, чтобы осуществить две пары одноцепочечных разрывов (т.е. с помощью двух пар комплексов из gРНК с никазами Cas) по обе стороны от сайта инсерции (т.е. первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т. е. 5') от целевой последовательности, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') от целевой последовательности, описанной здесь). Двухцепочные разрыв(ы) или ближайший из одноцепочечных разрывов в паре в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от в целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50 или 25 п.н. от целевого положения). При использовании никаз, два парных одноцепочечных разрыва (ника) находятся в пределах (например, между 25 и 50, 25 и 45, 25 и 40, 25 и 35, 25 и 30, 50 и 55, 45 и 55, 40 и 55, 35 и 55, 30 и 55, 30 и 50, 35 и 50, 40 и 50, 45 и 50, 35 и 45 или 40-45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нп).

Длина (последовательностей) «плеч» гомологии.

Плечо гомологии должно доходить, по меньшей мере, до области, в которой может находится край резекции, например, для того, чтобы образовавшийся при разрыве одноцепочечный конец ДНК мог найти комплементарную область, принадлежащую матрице-донору. Общая длина может быть ограничена такими параметрами, как размер плазмиды или размер вируса, ограниченный упаковочным капсидом. В одном варианте осуществления гомологичное плечо не распространяется на повторяющиеся элементы, например ALU повторы, LINE повторы. Матрица может иметь два плеча гомологии одинаковой или разной длины.

Примерные длины плеч гомологии включают по меньшей мере 25, 50, 100, 250, 500, 750 или 1000 нуклеотидов.

Целевое положение, как используется здесь, относится к местонахождению на нуклеиновой кислоте-мишени (например, хромосоме), которое модифицируется в процессе, опосредованным Cas молекулой. Например, целевое положение может подвергаться модификации при расщеплении молекулой Cas целевой нуклеиновой кислоты-мишени и модификации, обусловленной нуклеиновой кислотой-матрицей, например, являющейся коррекцией целевого положения. В одном варианте осуществления целевое положение может быть сайтом между двумя нуклеотидами, например смежными нуклеотидами, на нуклеиновой кислоте-мишени, в которую добавляется один или несколько нуклеотидов. Целевое положение может содержать один или несколько нуклеотидов, которые изменены, например, скорректированы с помощью нуклеиновой кислоты-матрицы. В варианте осуществления целевое положение находится в пределах целевой последовательности (например, последовательности, с которой связывается gРНК). В одном варианте осуществления целевое положение находится выше или ниже по течению последовательности-мишени (например, последовательности, к которой связывается gРНК).

Как правило, последовательность матрицы подвергается обусловленной разрывом или катализированной рекомбинации с целевой последовательностью. В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица включает последовательность, соответствующую участку на целевой последовательности, который расщепляется в результате действия молекулы Сas9. В варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица включает в себя последовательность, которая соответствует как первому сайту, расщепляемому в результате действия молекулы Сas9, так и второму сайту на целевой последовательности, расщепляемому в результате действия молекулы Сas9.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица может включать в себя последовательность, которая приводит к изменению кодирующей последовательности, подвергающейся трансляции, например, такому, которое приводит к замене одной аминокислоты на другую в белковом продукте, например, изменяя мутантный аллель на аллель дикого типа, изменяя аллель дикого типа в мутантный аллель и/или к приводит к введению стоп-кодона, представляет собой инсерцию аминокислотного остатка, делецию аминокислотного остатка или нонсенс-мутацию.

В других вариантах осуществления нуклеиновая кислота-матрица может включать в себя последовательность, которая приводит к изменению некодирующей последовательности, например, к изменению в экзоне или в 5'или 3' нетранслируемой или нетранскрибируемой области. Такие изменения включают в себя изменения в регуляторном элементе, например, промоторе, энхансере и элементе регуляции с цис-или транс-действием. Нуклеиновая кислота-матрица может включать последовательность, которая при интеграции приводит к:

уменьшению активности положительного регуляторного элемента;

увеличению активности положительного регуляторного элемента;

уменьшению активности отрицательного регуляторного элемента;

увеличению активности отрицательного регуляторного элемента;

уменьшению экспрессии гена; увеличению экспрессии гена;

повышению устойчивости к расстройству или заболеванию;

повышение устойчивости к вирусному проникновению;

коррекции мутации или изменению нежелательного аминокислотного остатка;

коррекции, увеличению, устранению или уменьшению биологического свойства продукта гена, например увеличению ферментативной активности фермента или увеличению способности продукта гена взаимодействовать с другой молекулой.

Нуклеиновая кислота-матрица может включать последовательность, которая приводит к изменению 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более нуклеотидов последовательности-мишени.

В варианте осуществления нуклеиновая кислота-матрица составляет 20+/-10, 30+/-10, 40+/-10, 50+/-10, 60+/-10, 70+/-10, 80+/-10, 90+/-10, 100+/-10, 1 10+/-10, 120+/-10, 130+/-10, 140+/-10, 150+/-10, 160+/-10, 170+/-10, 1 80+/-10, 190+/-10, 200+/-10, 210+/-10, 220+/-10, 200-300, 300-400, 400-500, 500 -600, 600-700, 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-2000, 2000-3000 или более 3000 нуклеотидов длиной.

Нуклеиновая кислота-матрица содержит следующие компоненты:

[5'-плечо гомологии]-[последовательность инсерции]-[3'-плечо гомологии].

Плечи гомологии обеспечивают рекомбинацию при встраивании в хромосому для замены нежелательного элемента, например мутации или её остатков (mutational signature) с помощью замещающей последовательности. В одном варианте осуществления плечи гомологиии находятся по краям самых дальних сайтов расщепления. В варианте осуществления 3'-конец 5'-плеча гомологии находится рядом с 5'-концом последовательности замены. В варианте осуществления 5'-плечо гомологии может распространяться на, по меньшей мере, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 180, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500 или 2000 нуклеотидов, находящихся в 5' позиции от 5'-конца замещающей последовательности.

В варианте осуществления 5'-конец 3'-плеча гомологии находится рядом с 3'-концом замещающей последовательности. В одном варианте осуществления 3'-плечо гомологии распространяться на, по меньшей мере, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 180, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500 или 2000 нуклеотидов, находящихся в 3' позиции от 3'-конца замещающей последовательности.

В настоящем описании предполагается, что одно или оба плеча гомологии могут быть сокращены, чтобы избежать включения последовательностиопределенных повторяющихся элементов, например, Alu повторов, LINE повторов. Например, 5'-плечо гомологии может быть укорочено, чтобы избежать включения последовательности повторяющегося элемента. В других вариантах осуществления 3'-плечо гомологии может быть укорочено, чтобы избежать включения последовательности повторяющегося элемента. В некоторых вариантах осуществления как 5'-, так и 3'-плечи гомологии могут быть укорочены, чтобы избежать включения последовательностей определенных повторяющихся элементов.

В настоящем описании предполагается, что матричные нуклеиновые кислоты для коррекции мутации могут быть спроектированы для использования в виде одноцепочечного олигонуклеотида (ssODN). При использовании ssODN 5'- и 3'-плечи гомологии могут иметь длину до 200 пар оснований (нп-нуклеотидных пар) в длину, например, по меньшей мере 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 или 200 нп в длину. Кроме того, более длинные плечи гомологии для ssODN могут быть рассмотрены по мере улучшения технологий олигонуклеотидного синтеза.

Подходы основанные на NHEJ для направленного изменения генов (таргетинга генов).

Как описано здесь, индуцированное нуклеазой негомологичное соединение концов (NHEJ) может применяться для осуществления ген-специфичных «нокаутов». Индуцированное нуклеазой негомологичное соединение концов (NHEJ) также может быть использовано для удаления (например, при делеции) последовательности в представляющем интерес гене.

Не ограничиваясь теорией, считается, что в одном из вариантов осуществления, геномные изменения, осуществлённые описанными здесь способами, сделаны с помощью репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), характеризующимся высокой вероятностью ошибок. NHEJ восстанавливает двухцепочечный разрыв ДНК, соединяя оба конца; однако, как правило, исходная последовательность восстанавливается только в том случае, если два комплементарных конца, в том же состоянии, как они были сформированы двунитевым разрывом, лигируются без ошибок. Концы ДНК двухцепочечного разрыва часто являются предметом ферментативной обработки, что приводит к добавлению или удалению нуклеотидов на одной или обеих нитях до воссоединения концов. Это приводит к наличию мутаций инсерции и/или делеции (индела) в последовательности ДНК в месте соединения концов путём NHEJ. Две трети этих мутаций могут изменить рамку считывания и, следовательно, создать нефункциональный белок. Кроме того, мутации, которые сохраняют рамку считывания, но вводят или удаляют значительную часть последовательности, могут свести к нулю функциональность белка. Это зависит от местоположения мутации, поскольку мутации в критических функциональных доменах, вероятно, менее переносимы, чем мутации в некритических областях белка.

Мутации-инделы, созданные путём NHEJ, непредсказуемы по своей природе; однако на конкретном сайте разрыва предпочтение отдается некоторым последовательностям инделов, такие инделы хорошо представлены в популяции. Длина делеций может сильно варьироваться; чаще всего они находятся в диапазоне 1-50 нп, но делеции могут легко достигать более 100-200 нп. Инсерции, как правило, короче и часто включают короткие дупликации последовательностей, непосредственно связанных с местом разрыва. Однако, можно получить большие инсерции, и в этих случаях последовательность инсерции часто происходит из других областей генома или плазмидной ДНК, присутствующей в клетках.

Поскольку NHEJ является мутагенным процессом, его также можно использовать для удаления небольшой последовательности ДНК, если не требуется формирования определенной конечной последовательности. Если разрыв обоих цепей ДНК спланирован вблизи короткой целевой последовательности, то делеционные мутации, возникающие при репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), часто охватывают и, следовательно, удаляют нежелательные нуклеотиды. Для удаления более крупных сегментов ДНК, введение двух двуцепочных разрывов, по одному с каждой стороны последовательности, может приводить к репарации концов по типу NHEJ с удалением всей промежуточной последовательности. Оба этих подхода могут быть использованы для удаления определенных последовательностей ДНК; однако большая вероятность ошибок в ходе NHEJ может все же производить мутации-инделы по сайту репарации.

В способах и композициях, описанных здесь, могут быть использованы обе молекулы Сas9, как с активностью расщепления дуплексной (двуцепочечной ДНК) так и с никазной активностью внесения одноцепочечного разрыва для образования NHEJ-опосредованных инделей. NHEJ-опосредованные инделы, нацеленные на ген, например кодирующую область, например раннюю кодирующую область представляющего интерес гена, могут быть использованы для нокаута (то есть устранения экспрессии) представляющего интерес гена. Ранняя кодирующая область представляющего интерес гена, например, включает в себя последовательность сразу после сайта начала транскрипции, в пределах первого экзона кодирующей последовательности или в пределах 500 пар оснований после начала транскрипции (например, менее 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100 или 50 нп).

Размещение двуцепочечных или одноцепочечных разрывов относительно целевого положения.

В одном варианте осуществления, в котором нуклеаза gРНК и Сas9 осуществляют разрыв двойной цепи с целью индуцирования NHEJ-опосредованных инделей, gРНК, например, мономолекулярная (или химерная) или модульная молекула gРНК, спроектирована так, чтобы произвести один двухцепочечный разрыв в непосредственной близости от нуклеотида целевой позиции. В одном варианте осуществления участок расщепления находится между 0-500 п.п. от целевого положения (например, менее 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нп от целевой позиции).

В одном варианте осуществления, в котором две gРНК в комплексе с Сas9 индуцируют два одноцепочечных разрыва с целью формирования NHEJ-опосредованных инделов, две gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы так, чтобы обеспечить NHEJ-опосредованное восстановление нуклеотида целевого положения. В одном варианте осуществления gРНК спроектированы для размещения разрезов в том же самом положении или в нескольких нуклеотидах друг от друга на разных нитях, в принципе имитирующих двухцепочечный разрыв ДНК. В варианте осуществления более близкий одноцепочечный разрыв находится в пределах 0-30 нп. от целевой позиции (например, менее 30, 25, 20, 1, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нп от целевой позиции), и два одноцепочечных разрыва находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, от 25 до 50, от 25 до 45, от 25 до 40, от 25 до 35, от 25 до 30, от 50 до 55, 45 до 55, от 40 до 55, от 35 до 55, от 30 до 55, от 30 до 50, от 35 до 50, от 40 до 50, от 45 до 50, от 35 до 45, или от 40 до 45 пар оснований) и не более чем на 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 пар оснований). В одном варианте осуществления gРНК спроектированы таким образом, чтобы поместить одноцепочечные разрывы по обе стороны от нуклеотида целевой позиции.

Обе Cas-молекулы, как Cas-молекула, создающая двухцепочечный разрыв, так и Cas-молекула с никазной активностью, создающая одноцепочечный разрыв, могут быть использованы в способах и композициях, описанных здесь, для внесения разрывов с обеих сторон целевого положения. Двухцепочечные или спаренные одноцепочечные разрывы могут быть внесены с обеих сторон целевого положения для удаления последовательности нуклеиновой кислоты между двумя разрывами (так, например, происходит делеция области между двумя разрывами). В одном варианте осуществления две gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы так, чтобы расположить двухцепочные разрывы по обеим сторонам целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т.е. 5') от мутации в гене или молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т.е. 3') мутации в гене или каскаде реакций, описанных здесь). В альтернативном варианте осуществления три gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярные (или химерные) или модульные gРНК, спроектированые для внесения двухцепочечного разрыва (т.е. осуществляемого одним комплексом gРНК с нуклеазой Сas9) и двух независимых одноцепочечных разрывов или парных одноцепочечных разрывов (т. е. осуществляемых двумя другими комплексами gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по течению (т. е. 5') от мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') от мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь). В другом варианте осуществления четыре gРНК, например, независимо друг от друга, мономолекулярная (или химерная) или модульная gРНК, спроектированы для внесения двух пар однонитевых разрывов (т.е. путём двух пар комплексов gРНК с никазами Сas9) по обе стороны от целевого положения (например, первая gРНК используется для нацеливания вверх по потоку (т. е. 5') мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь, а вторая gРНК используется для нацеливания вниз по течению (т. е. 3') мутации в гене или в молекулярном каскаде, описанных здесь). Двухцепочные разрыв(ы) нити или ближайшие друг к другу одноцепочечные разрывы в парных одноцепочечных разрывах в идеале должны находиться в пределах 0-500 нп от целевого положения (например, не более 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50 или 25 нп от целевой позиции). При использовании никаз, два парных одноцепочечных разрыва находятся в пределах 25-55 нп друг от друга (например, между 25 и 50, между 25 и 45, между 25 и 40, между 25 и 35, между 25 и 30, между 50 и 55, между 45 и 55, между 40 и 55, между 35 и 55, между 30 и 55, между 30 и 50, между 35 и 50, между 40 и 50, между 45 и 50, между 35 и 45 или между 40 и 45 нп) и не более 100 нп друг от друга (например, не более 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 пар оснований). В других вариантах осуществления введение нуклеиновой кислоты-матрицы может быть опосредовано присоединением конца микрогомологии (MMEJ). См., например, статью Saksuma et al., “MMEJ-assisted gene knock-in using TALENs and CRISPR-Сas9 with the PITCh systems.” Nature Protocols 11, 118-133 (2016) doi:10.1038/nprot.2015.140, опубликованую онлайн 17 декабря 2015, содержание которой включено в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.

VIII. Системы, содержащие более одной молекулы gРНК.

Хотя и не ограничено теорией, здесь было неожиданно продемонстрировано, что нацеливание сразу на две целевые последовательности (например, при использовании двух молекул gРНК в комплексе с Сas9-молекуламы, где каждый комплекс индуцируют одно- или двухцепочечный разрыв внутри или вблизи соответствующей им последовательности-мишени), расположенные в непосредственной близости на непрерывной нуклеиновой кислоте, приводит к удалению (например, делеции) последовательности нуклеиновой кислоты (или по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% последовательности нуклеиновой кислоты), расположенной между двумя целевыми последовательностями. В некоторых аспектах настоящее раскрытие предусматривает использование двух или более молекул gРНК, содержащих нацеливающие домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные в непосредственной близости на непрерывной нуклеиновой кислоте, например на хромосоме, например на нуклениновой кислоте гена или генетического локуса, включая его интроны, экзоны и регуляторные элементы. Это достигается, например, путём введения двух или более молекул gРНК вместе с одной или несколькими молекулами Сas9 (или нуклеиновой кислоты, кодирующей две или более молекулы gРНК и/или одну или более молекул Сas9) в клетку.

В некоторых аспектах целевые последовательности двух или более молекул gРНК расположены на расстоянии по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10 000, 11 000, 12 000, 13 000, 14 000 или 15000 нуклеотидов друг от друга на непрерывной нуклеиновой кислоте, но не более 25000 нуклеотидов на непрерывной нуклеиновой кислоте. В одном варианте осуществления целевые последовательности расположены примерно на расстоянии 4000 нуклеотидов. В одном варианте осуществления последовательности-мишени расположены примерно на расстоянии 6000 нуклеотидов.

В некоторых аспектах используется множество молекул gРНК где каждая нацелена на свою последовательность-мишень в пределах одного и того же гена или генетического локуса. В другом аспекте используется множество молекул gРНК где каждая нацелена на свою последовательность-мишень в двух или более различных генах.

В некоторых аспектах изобретение предоставляет композиции и клетки, содержащие множество, например, 2 или более, например, 2, молекулы gРНК по изобретению, в которых множество целевых последовательностей расположены на расстоянии менее 15 000, менее 14000, меньше, чем 13 000, менее 12 000, менее 11 000, менее 10 000, менее 9 000, менее 8 000, менее 7 000, менее 6 000, менее 5000, менее 4000, менее 3000, менее 2000, менее 800, менее 700, менее 700, менее 700, менее 600, менее 500, менее 400, менее 300, менее 200, менее 100, менее 90, менее 80, менее 70, 60, менее 50, менее 40 или менее 30 нуклеотидов друг от друга. В одном варианте осуществления целевые последовательности находятся на одной и той же цепи дуплексной нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления целевые последовательности находятся на разных цепях дуплексной нуклеиновой кислоты.

В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способ вырезания (например, делетирование) нуклеиновой кислоты, расположенной между двумя сайтами связывания gРНК, расположенными менее чем 25 000, менее чем 20 000, менее 15 000, менее 14 000, менее 13 000, менее 12 000, менее 11 000, менее 10 000, менее 9 000, менее 8 000, менее 7 000, менее 6 000, менее 5000, менее 4000, менее 3000, менее 2000, менее 1000, менее 900, менее 800, менее 700, менее 600, менее 500, менее 400, менее 300, менее 200, менее 100, менее 90, менее 80, менее 70, менее 60, менее 50, менее чем 40 или менее 30 нуклеотидов друг от друга на той же самой или разных цепях дуплексной нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления способ предусматривает делецию более 50%, более 60%, более 70%, более 80%, более 85%, более 86%, более 87%, более 88%, более 89%, более 90%, более 91%, более 92%, более 93%, более 94%, более 95%, более 96%, более 97%, более 98% более 99% или 100% нуклеотидов, расположенных между участками PAM, ассоциированными с каждым сайтом связывания gРНК. В вариантах осуществления делеция дополнительно включает один или несколько нуклеотидов в одном или более из сайтов PAM, ассоциированных с каждым сайтом связывания gРНК. В вариантах осуществления делеция также включает один или несколько нуклеотидов вне области между участками PAM, ассоциированными с каждым сайтом связывания gРНК.

В одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям регуляторного элемента гена, например сайта связывания промотора, области энхансера или области репрессора, так что удаление промежуточной последовательности (или части промежуточной последовательности) вызывает усиление или ослабление регуляции представляющего интерес гена.

В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК включают в себя целевые домены, включающие, например, последовательности целевого домена, представленные в Таблице 1 или Таблице 5. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям того же гена. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, состоящие, например, из последовательности целевых доменов, представленных в Таблице 6. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, состоящие, например, из последовательности целевых доменов, представленных в Таблице 2, Таблице 7, Таблице 8 и/или Таблице 9. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям в того же гена. В аспектах две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК выбраны из молекул gРНК Таблицы 7, Таблицы 8 и/или Таблицы 9. В одном варианте осуществления первая и вторая молекулы gРНК содержат целевые домены, содержащие, например, состоящие из последовательностей целевых доменов, выбранных из Таблиц 1-9, причём они выбираются из разных таблиц, т.е. содержат целевые домены, комплементарные последовательностям разных генов.

В одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям регуляторного элемента гена, например сайта связывания промотора, области энхансера или области репрессора, так что удаление промежуточной последовательности (или части промежуточной последовательности) вызывает увеличене или уменьшение регуляции представляющего интерес гена. В качестве примера, две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, нацеленные на целевые последовательности, расположенные по краям сайта связывания GATA1 (или его фрагмента) или сайта связывания TAL1 (или его фрагмента), области эритроидного энхансера гена BCL11a (например, +55, +58 или +62 области). В других вариантах осуществления молекула или молекулы gРНК не приводят к нарушению сайта связывания GATA1 или сайта связывания TAL1 в энхансере гена BCL11a.

В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 1. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 2. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 3. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 4. В одном варианте осуществления две или более gРНК молекулы содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 5. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 6. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 7. В одном варианте осуществления две или более gРНК молекулы содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 8. В одном варианте осуществления две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, которые включают, например, состоят из целевых доменов, выбранных из Таблицы 9.

В аспектах, две или более молекулы gРНК содержат целевые домены, включающие, например, состоящие из парных последовательностей целевых доменов, перечисленных выше в разделе II.

Не ограничиваясь теорией, считается, что увеличение экспрессии фетального гемоглобина (например, гамма-глобина), с одновременным уменьшением или прекращением экспрессии бета-глобина (например, бета-глобина, содержащим мутацию серповидно-клеточной анемии), приводит к повышению эффективности в лечении гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной анемии. Таким образом, в одном аспекте две или более молекулы gРНК содержат первую молекулу gРНК, приводящую к увеличению экспрессии гамма-глобина и вторую молекулу gРНК, приводящую к уменьшению или прекращению экспрессии бета-глобина, например бета-глобина, несущего мутацию серповидно-клеточной анемии. В вариантах осуществления две или более молекулы gРНК содержат первую молекулу gРНК, которая нацелена на последовательность в области энхансера BCL11a, например, как описано здесь, например, молекулу gРНК, содержащую целевой домен, включающий, например, состоящий из целевого домена представленного в Таблице 7, Таблице 8 или Таблице 9 и вторую молекула gРНК, нацеленую на последовательность гена глобина при серповидно-клеточной анемии, (т.е. гена, несущего мутацию серповидно-клеточной анемии).

IX. Свойства gРНК.

Далее, как показано в настоящем документе, неожиданно было обнаружено, что молекулы gРНК и CRISPR-системы, содержащие указанные молекулы gРНК, приводят к образованию одинаковых или идентичных профилей инделов в нескольких экспериментах с использованием одного и того же типа клеток, способа доставки и компонентов crРНК/tracr. Не ограничиваясь теорией, считается, что некоторые профили инделов могут быть более выгодными, чем другие. Например, инделы, преимущественно включающие в себя инсерции и/или делеции, приводящие к «мутации сдвига рамки считывания» (например, инсерция или делеция 1 или 2ух пар оснований, а также или любая инсерция или делеция, где n/3 не является целым числом (где n = количество нуклеотидов, соответствующих инсерции или делеции)) может способствовать уменьшению или прекращению экспрессии функционального белка. Подобным образом инделы, преимущественно состоящие из «больших делеций» (делеции более 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25 или 30 нуклеотидов), также могут оказаться полезными, например, для удаления критических регуляторных последовательностей, таких как сайты связывания промотора, что может оказывать благоприятный эффект на экспрессию функционального белка. Хотя, как неожиданно было обнаружено, профили инделов, индуцированные данной системой gРНК/CRISPR, последовательно воспроизводятся в типах клеток, как описано здесь, не следует ожидать, что любой отдельно взятый индел будет неизбежно сформирован в данной клетке при введении системы gРНК/CRISPR.

Таким образом, изобретение предоставляет молекулы gРНК, которые создают, например, профили (или структуру) инделов, преимущественно состоящие из мутаций сдвига рамки считывания и/или больших делеций. Такие молекулы gРНК могут быть выбраны при оценке (методом секвенирования NGS) структуры или профиля инделов, созданной молекулой-кандидатом-gРНК в тестовой клетке (например, клетке HEK293), или в интересующей нас клетке, например клетке HSPC, как описано здесь.

Как показано на примерах, были обнаружены молекулы gРНК, которые при введении в желаемую клеточную популяцию приводят к популяции клеток, содержащих значительную порцию клеток, имеющих мутацию сдвига рамки в целевом гене. В некоторых случаях частота мутаций со сдвигом рамки считывания достигает 75%, 80%, 85%, 90% и более. Таким образом, изобретение предоставляет популяции клеток, которые содержат по меньшей мере около 40% клеток (например, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65% по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или, по меньшей мере, около 99%), имеющих мутацию сдвига рамки считывания, как описано здесь, внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК, описанной здесь. Изобретение также предоставляет популяции клеток, которые содержат по меньшей мере около 50% клеток (например, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75% по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или, по меньшей мере, около 99%), имеющих мутацию сдвига рамки считывания, например, как описано здесь, внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК.

Изобретение предоставляет способы выбора молекул gРНК для использования в терапевтических способах по изобретению, которые включают: 1)обеспечение множества молекул gРНК для мишени, представляющей интерес 2) оценку структуры или профиля инделов, сформированного с использованием указанных молекул gРНК, 3) выбор молекулы gРНК, которая приводит к образованию структуры или профиля инделов, состоящих преимущественно из мутаций сдвига рамки считывания, больших делеций или их комбинации и 4) применение указанной выбранной gРНК в способах по изобретению.

Далее, изобретение предоставляет способы изменения клеток и сами измененные клетки, в которых определённый профиль инделов формируется постоянно при использовании определённой системы gРНК/CRISPR в этом типе клеток. Профили инделов, состоящие из 5 наиболее часто встречающихся инделов, наблюдаемых в системах gРНК/CRISPR, описанных здесь, раскрыты, например, в разделе Примеры. Как показано на примерах, образуются популяции клеток, в которых значительная фракция клеток содержит один из 5 наиболее часто встречающихся инделов (например, популяции клеток, в которых один из 5 наиболее часто встречающихся инделов присутствует более чем в 30%, больше, чем в 40%, более чем в 50%, более чем в 60% или более клеток популяции. Таким образом, настоящее изобретение предоставляет клетки, например HSPC (как описано здесь), которые содержат индел любого из 5 наиболее часто встречающихся инделов, наблюдаемых с определённой системой gРНК/CRISPR. Кроме того, изобретение предоставляет популяции клеток, например HSPC (как описано здесь), которые, при оценке, например, методами NGS, содержат высокий процент клеток, включающий один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных выше, для данной системы gРНК/CRISPR. При использовании в связи с анализом профиля инделов, «высокий процент» относится, по меньшей мере, к примерно 50% (например, по меньшей мере, примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или, по меньшей мере, примерно 99%) клеток популяции, содержащих один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных здесь для данной системы gРНК/CRISPR. В других вариантах популяция клеток содержит по меньшей мере примерно 25% (например, от примерно 25% до примерно 60%, например, от примерно 25% до примерно 50%, например, от примерно 25% до примерно 40%, например, от примерно 25% до примерно 35%) клеток, которые имеют один из 5 наиболее часто встречающихся инделов, описанных здесь для данной системы gРНК/CRISPR. В вариантах осуществления превалирующие инделы, например, 5 наиболее часто встречающихся инделов для данной системы gРНК/CRISPR, нацеленной на область +58 энхансера BCL11a, представлены в Таблице 15, на Фиг. 25 и в Таблице 37. В вариантах осуществления превалирующие инделы, например, 5 наиболее часто встречаемых инделов для определённой gРНК/CRISPR, нацеленной на область HPFH, приведены в Таблице 26, Таблице 27 и Таблице 37.

Также было обнаружено, что некоторые молекулы gРНК не формируют инделов на неспецифичных последовательностях в геноме клеток-мишенией или формируют их на неспецифичных участках с очень низкой частотой (например, в <5% клеток популяции) по сравнению с частотой формирования инделов на целевом сайте. Таким образом, изобретение предоставляет молекулы gРНК и системы CRISPR, которые либо не способствуют формированию инделов на неспецифичных сайтах в типах клеткок-мишеней, либо имеют частоту формирования неспецифичных инделов <5%. В вариантах осуществления изобретение предоставляет молекулы gРНК и системы CRISPR, которые не обнаруживают неспецифичных инделов, сформированных в типах клеток-мишеней. Таким образом, изобретение дополнительно предоставляет клетку, например, популяцию клеток, например HSPCs, например, как описано здесь, содержащую индел внутри или вблизи целевого сайта-мишени молекулы gРНК, описанной здесь (например, индел сдвига рамки считывания или любой из 5-ти наиболее часто встречаемых инделов, полученных с помощью данной системы gРНК/CRISPR, например, как описано здесь), но не содержит инделы в любом из неспецифичных сайтов молекулы gРНК. В других вариантах осуществления изобретение дополнительно предоставляет популяцию клеток, например HSPCs, например, как описано здесь, которая содержит >50% клеток, имеющих которые имеют индел внутри или вблизи целевого сайта молекулы gРНК, описанной здесь (например, индел сдвига рамки считывания или любой из 5-ти наиболее часто встречаемых инделов, полученных с помощью данной системы gРНК/CRISPR, например, как описано здесь), но которая содержит менее 5%, например, менее 4%, менее 3%, менее 2 % или менее 1% клеток, содержащих индел в любом нецелевом сайте молекулы gРНК.

В вариантах осуществления индел, сформированный системой CRISPR, описанной здесь (например, системой CRISPR, содержащей молекулу gРНК, описанную здесь), не включает нуклеотид связующего сайта GATA-1 и/или не включает нуклеотид сайта связывания TAL-1 (например, не включает нуклеотид сайта связывания GATA-1 и/или сайта связывания TAL-1, описанные на Фиг. 25).

X. Доставка/Конструкции

Компоненты, например, молекула Сas9 или молекула gРНК, или оба могут быть доставлены, составлены или введены в различных формах. В качестве неограничивающего примера молекула gРНК и молекула Сas9 могут быть составлены (в одной или нескольких композициях), непосредственно доставлены или введены в клетку, в которой желательно провести редактирование генома. Альтернативно, нуклеиновая кислота, кодирующая один или несколько компонентов, например молекулу Сas9 или молекулу gРНК, или обе молекулы, может входить в состав одной или нескольких композиций, быть доставленной или введеной в клетку. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу gРНК, также как и молекула Сas9 предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Сas9 кодируются на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты. В одном варианте осуществления молекула gРНК и молекула Сas9 кодируются той же молекулой нуклеиновой кислоты. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном варианте осуществления молекула gРНК несёт одну или несколько модификаций, например, как описано здесь. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 представлена в виде мРНК, кодирующей молекулу Сas9. В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде РНК, а молекула Сas9 представлена в виде белка. В одном варианте осуществления молекулы gРНК и Сas9 предоставлены в виде рибонуклеопротеинового комплекса (RNP). В одном аспекте молекула gРНК предоставляется в виде ДНК, кодирующей молекулу gРНК, а молекула Сas9 предоставляется в виде белка.

Доставка, например, доставка RNP (например, в клетки HSPC, как описано здесь), может быть выполнена, например, путём электропорации (например, как известно в данной области техники) или другим методом, делающим клеточную мембрану проницаемой для молекул нуклеиновой кислоты и/или полипептида. В вариантах осуществления система CRISPR, например, в виде RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием 4D-нуклеофектора (Lonza), например, при использовании программы CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). В вариантах осуществления система CRISPR, например RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием напряжения от примерно 800 вольт до примерно 2000 вольт, например, от примерно 1000 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1200 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1400 вольт до примерно 1800 вольт, например, от примерно 1600 вольт до примерно 1800 вольт, например, примерно 1700 вольт, например, при напряжении 1700 вольт. В вариантах осуществления ширина/длина импульса составляет от примерно 10 мс до примерно 50 мс, например, от примерно 10 мс до примерно 40 мс, например, от примерно 10 мс до примерно 30 мс, например, от примерно 15 мс до примерно 25 мс, например, около 20 мс, например, 20 мс. В вариантах осуществления используются 1, 2, 3, 4, 5 или более импульсов, например, 2, например, 1 импульс. В одном варианте осуществления система CRISPR, например RNP, как описано здесь, доставляется электропорацией с использованием напряжения примерно 1700 вольт (например, 1700 вольт), ширина импульса примерно 20 мс (например, 20 мс), при подаче одного (1) импульса. В вариантах осуществления электропорация осуществляется с использованием электропоратора Neon. Дополнительные способы повышения мембранной проницаемости известны в данной области техники и включают, например, сжатие клеток (например, как описано в WO2015/023982 и WO2013/059343, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте), наноструктуры, такие как нанотрубки и наноканалы (как, например, описано в Chiappini et al., Nat. Mat., 14, 532-39 или US2014/0295558, содержание которого включено сюда посредством ссылки во всей своей полноте) и как, например, описано в Xie, ACS Nano, 7 (5); 4351-58, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте).

Когда компонент доставляется в виде кодируещей ДНК, ДНК, как правило, включает регуляторную область, например, содержащую промотор, для осуществления экспрессии. Промоторы, применимые для последовательностей молекул Сas9 включают промоторы CMV, EF-1alpha, MSCV, PGK, CAG. Промоторы, применимые для gРНК, включают промоторы H1, EF-1a и U6. Промотеры с подобными или разнородными свойствами могут быть подобраны для настройки экспрессии компонентов. Последовательности, кодирующие молекулу Сas9, могут содержать сигнал ядерной локализации (NLS), например NLS SV40. В одном варианте осуществления промотор для молекулы Сas9 или молекулы gРНК может быть, независимо, индуцибельным, ткане-специфичным или клетко-специфичным.

Доставка молекул Сas9 и молекул gРНК, предоставленных в виде ДНК.

ДНК, кодирующая молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК, может вводиться субъектам или доставляться в клетки уже известными способами или способами, описанными здесь. Например, ДНК, кодирующую Сas9 и/или ДНК, кодирующую gРНК, можно доставлять, например, векторами (например,, вирусными или невирусными векторами), и методами, не связанными с вектором (например, с использованием депротеизированной («голой») ДНК или комплексов ДНК), или их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующая Сas9- и/или gРНК, доставляется вектором (например, вирусным вектором/вирусом, плазмидой, мини-кольцом или наноплазмидой).

Вектор может содержать последовательность, которая кодирует молекулу Сas9 и/или молекулу gРНК. Вектор также может содержать последовательность, кодирующую сигнальный пептид (например, для ядерной локализации, ядрышковой локализации, митохондриальной локализации), слитую, например, с последовательностью молекулы Сas9. Например, вектор может содержать одну или более последовательностей ядерной локализации (например, принадлежащую SV40), слитую с последовательностью, кодирующей молекулу Сas9. Один или несколько регуляторных/контролирующих элементов, например промотор, энхансер, интрон, сигнал полиаденилирования, консенсусная последовательность Козак, внутренние места входа рибосомы (IRES), последовательность 2А и последовательности точек донорного или акцепторного сайтов сплайсинга могут быть включены в векторы. В некоторых вариантах осуществления промотор распознается РНК-полимеразой II (например, промотор CMV). В других вариантах осуществления промотор распознается РНК-полимеразой III (например, промотор U6). В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой регулируемый промотор (например, индуцируемый промотор). В других вариантах осуществления промотор представляет собой конститутивный промотор. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой тканеспецифический промотор. В некоторых вариантах осуществления промотор является вирусным промотором. В других вариантах осуществления промотор является невирусным промотором.

В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является мини-кольцо. В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является наноплазмида.

В некоторых вариантах осуществления вектором или средством доставки является вирусный вектор (например, с целью образования рекомбинантных вирусов). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой ДНК вирус (например, вирус dsДНК или ssДНК). В других вариантах осуществления вирус представляет собой РНК-вирус (например, вирус ssРНК). Иллюстративные вирусные векторы/вирусы включают, например, ретровирусы, лентивирусы, аденовирус, аденоассоциированный вирус (AAV), вирусы вакцинии, поксвирусы и вирусы простого герпеса. Технология создания вирусных векторов хорошо известна в данной области техники и описана, например, в Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 -4, Cold Spring Harbor Press, NY), а также в других протоколах вирусологии и молекулярной биологии.

В некоторых вариантах осуществления вирус заражает делящиеся клетки. В других вариантах осуществления вирус заражает клетки, которые не делятся. В некоторых вариантах осуществления вирус заражает как делящиеся, так и неделящиеся клетки. В некоторых вариантах осуществления вирус может интегрироваться в геном хозяина. В некоторых вариантах осуществления вирус сконструирован так, чтобы снижать иммунитет хозяина, например, человека. В некоторых вариантах осуществления вирус спосбоен реплицироваться. В других вариантах осуществления вирус является дефектным по репликации, при этом одна или несколько областей вируса, кодирующая гены, необходимые для дополнительных раундов репликации вируса и/или упаковки, заменена другими генами или удалена. В некоторых вариантах осуществления вирус вызывает временную экспрессию молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК. В других вариантах осуществления вирус вызывает длительные, например, в течение по меньшей мере 1 недели, 2 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 6 месяцев, 9 месяцев, 1 года, 2 лет или постоянную экспрессию молекулы Сas9 и/или молекулы gРНК. Емкость упаковки вирусов может варьироваться, например, от по меньшей мере от примерно 4 кб до примерно 30 кб, например, по меньшей мере примерно 5 кб, 10 кб, 15 кб, 20 кб, 25 кб, 30 кб, 35 кб, 40 кб, 45 кб, или 50 кб. В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным ретровирусом. В некоторых вариантах осуществления ретровирус (например, вирус мышиного лейкоза Молони) содержит обратную транскриптазу, которая, например, позволяет интегрироваться в геном хозяина. В некоторых вариантах осуществления ретровирус способен к репликации. В других вариантах осуществления ретровирус является дефектным по репликации, при этом одна или несколько областей вируса, кодирующая гены, необходимые для дополнительных раундов репликации вируса и/или упаковки, заменена другими генами или удалена.

В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным лентивирусом. Например, лентивирус является дефектным по репликации, например, не содержит одного или нескольких генов, необходимых для репликации вируса.

В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным аденовирусом. В некоторых вариантах осуществления аденовирус сконструирован так, чтобы вызывать снижение иммунитета у человека.

В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующую Сas9- и/или gРНК, доставку осуществляют рекомбинантным AAV. В некоторых вариантах осуществления AAV может доставлять свой геном в клетку-хозяина, например клетку-мишень, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления AAV представляет собой самокомплементарный адено-ассоциированный вирус (scAAV), например scAAV, в который упаковано обе комплементарные цепи ДНК, которые гибридизуются с образованием дуплекса ДНК. Серотипы AAV, которые могут быть использованы в раскрытых способах, включают, например, AAV l, AAV2, модифицированный AAV2 (например, модификации Y444F, Y500F, Y730F и/или S662V), AAV3, модифицированный AAV3 (например, модификации Y705F, Y73 1 F и/или T492V), AAV4, AAV5, AAV6, модифицированный AAV6 (например, с модификациями в S663V и/или T492V), AAV8. AAV 8.2, AAV9, AAV rh 10 и псевдотипированные AAV, такие как AAV2/8, AAV2/5 и AAV2/6 также могут использоваться в раскрытых здесь способах.

В некоторых вариантах осуществления ДНК, кодирующая Сas9- и/или gРНК, доставляется гибридным вирусом, например гибридом одного или нескольких вирусов, описанных здесь.

Для получения вирусных частиц, которые способны инфицировать клетки-хозяев используют упаковывающие клетки. Такие клетки включают клетки 293, которые упаковывают аденовирус, и клетки ψ2 или клетки PA317, которые упаковывают ретровирус. Вирусные векторы, применяемые в генной терапии, обычно генерируются клеточной линией-продуцентом, которая упаковывает нуклеиновокислотный вектор в вирусную частицу. 

Векторы обычно содержат минимальные вирусные последовательности, необходимые для упаковки и последующей интеграции в хозяина или клетку-мишень (если применимо), другие вирусные последовательности заменяются экспрессионной кассетой, кодирующей белок, подвергаемый экспрессии. Например, векторы AAV, обычно применяемые в генной терапии, имеют только последовательности инвертированных концевых повторов (ITR) из генома AAV, необходимые для упаковки и интеграции в геном хозяина. Отсутствующие вирусные функции предоставляются упаковочной линией клеток посредством транс-взаимодействия. Вирусную ДНК упаковывают в клеточной линии, которая содержит хелперную плазмиду, кодирующую другие гены AAV, а именно rep и cap, но не содержит ITR последовательности. Клеточную линию также инфицируют аденовирусом в качестве хелпера. Хелперный вирус способствует репликации вектора AAV и экспрессии генов AAV из хелперной плазмиды. Хелперная плазмида не упаковывается в значительных количествах из-за отсутствия ITR последовательностей. Заражение аденовирусом можно снизить, например, посредством термообработки, к которой аденовирус более чувствителен, чем AAV.

В одном варианте осуществления вирусный вектор обладает способностью к распознаванию типа клеток и/или типа ткани. Например, вирусный вектор может быть псевдотипирован с другим/альтернативным гликопротеином вирусной оболочки; сконструирован с использованием специфичного для типа клеток рецептора (например, с генетической модификацией гликопротеинов вирусной оболочки для включения целевых лигандов, таких как пептидный лиганд, одноцепочечное антитело, фактор роста); и/или сконструированы так, чтобы иметь молекулярный мостик с двойной специфичностью, где один конец распознаёт вирусный гликопротеин, а другой конец распознает фрагмент поверхности клетки-мишени (например, лиганд-рецептор, моноклональное антитело, авидин-биотин и химические конъюгаты).

В одном варианте осуществления вирусный вектор обеспечивает экспрессию, соответствующую конкретному типу клетки. Например, тканеспецифический промотор может быть сконструирован чтобы позволить экспрессию трансгена (Cas9 и gРНК) только в клетке-мишени. Специфика вектора также может быть опосредована микроРНК-зависимым механизмом контроля экспрессии трансгена. В одном варианте осуществления вирусный вектор повышает эффективность слияния вирусного вектора и мембраны клеток-мишеней. Например, для увеличения проникновения вируса в клетки можно включить (в вектор) слитый белок, такой как грамотрицательный гемагглютин (НА). В одном варианте осуществления вирусный вектор обладает способностью к ядерной локализации. Например, вирус, для проникновения которого необходимо разрушение клеточной стенки (во время деления клеток), и который, следовательно, не будет заражать неделящиеся клетки, можно изменить, есливключить пептид ядерной локализации в матриксный белок вируса, тем самым делая возможной трансдукцию непролиферирующих клеток.

В некоторых вариантах осуществления доставку ДНК, кодирующей Сas9- и/или gРНК осуществляяют с помощью невекторного метода (например, с использованием депротеинизированной (голой) ДНК или комплексов ДНК). Например, доставка ДНК может быть осуществлена, например, с помощью органически модифицированного диоксида кремния или силиката (Ormosil), электропорации, генной пушки, сонопорации (обработки ультразвуком), магнитофикации, опосредованной липидами трансфекции (с помощью липосом), дендримеров, неорганических наночастиц, фосфата кальция или их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления доставка ДНК, кодирующей Сas9 и/или gРНК, осуществляется с помощью комбинации вектора и метода, не связанного с вектором. Например, виросома содержит липосому в сочетании с инактивированным вирусом (например, вирусом ВИЧ или вирусом гриппа), что может привести к более эффективному переносу гена, например, в респираторную эпителиальную клетку, по сравнению с вирусным или липосомальным методом по отдельности.

В одном варианте осуществления средство доставки является невирусным вектором. В одном варианте осуществления невирусным вектором является неорганическая наночастица (например, c желаемым грузом (payload), закреплённым на поверхности наночастицы). Примеры неорганических наночастиц включают, например, магнитные наночастицы (например, Fe lvln02) или диоксид кремния. Внешняя поверхность наночастицы может быть конъюгирована с положительно заряженным полимером (например, полиэтиленимином, полилизином, полисерином), который позволяет связывать (например, путём конъюгации или захвата) желаемый полезный груз. В одном варианте осуществления невирусный вектор представляет собой органическую наночастицу (например, с захватом желаемого груза внутри наночастицы). Примеры органических наночастиц включают, например, липосомы SNALP, содержащие катионные липиды в комплексе с нейтральными вспомогательными липидами, и покрытые полиэтиленгликолем (PEG) и комплекс протамина и нуклеиновой кислоты с липидным покрытием.

Проиллюстративные липиды и/или полимеры для доставки систем CRISPR или нуклеиновой кислоты, например вектора, кодирующие системы CRISPR или их компоненты, включают, например, те, которые описаны в WO2011/076807, WO2014/136086, WO2005/060697, WO2014/140211, WO2012/031046, WO2013/103467, WO2013/006825, WO2012/006378, WO2015/095340 и WO2015/095346, содержание каждого из вышеперечисленных здесь полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. В одном варианте осуществления средство доставки имеет целевые модификации, для увеличения обновления клеток-мишеней наночастицами и липосомами, такие как, например, клетко-специфичные антигены, моноклональные антитела, одноцепочечные антитела, аптамеры, полимеры, сахара и проникающие в клетки пептиды. В одном варианте осуществления средство доставки использует фузогенные (способствующие слиянию мембран клеток) и эндосомно-дестабилизирующие пептиды/полимеры. В одном варианте осуществления средство доставки подвергается конформационным изменениям, вызванным кислотой (например, для ускорения эндосомального высвобождения груза). В одном варианте осуществления используют расщепляемый под воздействием стимулов полимер, например, для высвобождения груза в клеточное пространство. Например, можно использовать дисульфидные катионные полимеры, расщепляемые в восстановительной клеточной среде.

В одном варианте осуществления средство доставки является биологическим невирусным средством доставки. В одном варианте осуществления транспортное средство представляет собой ослабленную бактерию (например, инвазивную, встречающуюся в природе или искусственно сконструированную, но ослабленную для предотвращения патогенеза, и экспрессирующую трансген (например, Listeria monocytogenes, определенные штаммы Salmonella, Bifidobacterium longum и модифицированные Escherichia coli), бактерии, имеющие питательный и тканеспецифический тропизм для нацеливания на специфические ткани, бактерии с модифицированными поверхностными белками для изменения целевой тканеспецифичности). В одном варианте осуществления средство доставки представляет собой генетически модифицированный бактериофаг (например, сконструированные фаги, обладающие большой упаковочной способностью, менее иммуногенные, содержащие последовательности поддерживающие плазмиды млекопитающих и включающие нацеливающие лиганды). В одном варианте осуществления транспортное средство представляет собой вирусоподобную частицу млекопитающих. Например, могут быть получены модифицированные вирусные частицы (например, путем очистки «пустых» частиц с последующей сборкой вируса ex vivo с желаемым грузом). Средство доставки также может быть сконструировано с включением целевых лигандов для изменения целевой тканеспецифичности. В одном варианте осуществления средство доставки представляет собой биологические липосомы. Например, биологическая липосома представляет собой частицу с фосфолипидной основой, происходящая из клеток человека (например, из эритроцитарных носителей (erythrocyte ghosts), которые представляют собой полученные от субъекта красные кровяные клетки, преобразованные в сферические структуры, (например, нацеливание на ткань может быть достигнуто путем прикрепления различных ткане- или клеточно-специфических лигандов) или секреторную экзосому-выделенную из субъекта (пациента), связанную с мембраной наночастицу-средство доставки (30-100 нм) эндоцитозного происхождения (которые, например, могут быть образованы разными типами клеток, и поэтому могут быть захвачены клетками без необходимости в нацеливающих лигандах).

В одном варианте осуществления одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты (например, молекул ДНК), отличных от компонентов системы Cas, например, компонента молекулы Сas9 и/или компонента молекулы gРНК, описанного здесь, подлежат доставке. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют одновременно с одним или несколькими компонентами системы Cas. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют до или после доставки одного или нескольких компонентов системы Сas9 (например, менее примерно 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов, 6 часов, 9 часов, 12 часов, 1 дня, 2 дней, 3 дней, 1 недели, 2 недель или 4 недель). В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют другим способом, чем применяемый для одного или нескольких компонентов системы Сas9, например компонента молекулы Сas9 и/или компонента молекулы gРНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена любым из способов доставки, описанных здесь. Например, молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена вирусным вектором, например, лентивирусом, неспособным к интеграции, или компонент молекулы Сas9 и/или компонент молекулы gРНК могут быть доставлены электропорацией, например, так, чтобы токсичность, вызываемая нуклеиновыми кислотами (например, ДНК) могла бы быть уменьшена. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует терапевтический белок, например, описанный здесь белок. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует молекулу РНК, например молекулу РНК, описанную здесь.

Доставка РНК, кодирующей молекулу Сas9

РНК, кодирующая молекулы Сas9 (например, активные молекулы Сas9, неактивные молекулы Сas9 или неактивные слитые белки Сas9) и/или молекулы gРНК, может быть доставлена в клетки, например, клетки-мишени, описанные здесь, методами, известными в данном уровне техники или описанными здесь. Например, РНК, кодирующую Сas9 и/или кодирующую gРНК, вводят, например, с помощью микроинъекции, электропорации, опосредованной липидами трансфекции, пептид-опосредованной доставки или их комбинации.

Доставка молекулы Сas9 в виде белка

Молекулы Сas9 (например, активные молекулы Сas9, неактивные молекулы Сas9 или неактивные слитые белки Сas9) в клетки может осуществляться методами, известными в данном уровне техники, или описанными здесь. Например, молекулы белка Сas9 могут быть доставлены, например, с помощью микроинъекции, электропорации, опосредованной липидами трансфекции, пептид-опосредованной доставки, метода сжатия или протыкания клеток (например, нанотрубочками) или их комбинации. Доставка может сопровождаться доставкой ДНК, кодирующей gРНК или доставкой gРНК, например, при заблаговременном создании рибонуклеопротеинового комплекса gРНК и белка Сas9 (RNP).

В одном аспекте молекула Сas9, например, как описано здесь, поставляется в виде белка, а молекула gРНК поставляется в виде одной или нескольких РНК (например, в виде dgРНК или sgРНК, как описано здесь). В вариантах осуществления белок Сas9 скомбинирован с молекулой gРНК до доставки в клетку, например, как описано здесь, в виде рибонуклеопротеинового комплекса («RNP»). В вариантах осуществления RNP может быть доставлен в клетки, например, описанные здесь, любым известным в данной области техники способом, например электропорацией. Как описано здесь, не ограничиваясь теорией, может оказаться предпочтительным использовать молекулу gРНК и молекулу Сas9, которые приводят к высокой степени (%) редактирования в целевой последовательности клетке-мишени (например,> 85%,> 90%,> 95%,> 98 %, или> 99%), например, описанной здесь, даже при уменьшении концентрации RNP, доставляемого в клетку. Опять же, не ограничиваясь теорией, доставка RNP в уменьшенной или низкой концентрации, содержащего молекулу gРНК, осбеспечивающую высокий % редакирования в целевой последовательности клетки-мишени (в том числе при низкой концентрации RNP), может быть выгодной, поскольку уменьшается частота и количество сайтов неспецифичного редактирования. В одном аспекте, при необходимости применения низкой или пониженной концентрации RNP, для получения RNP с молекулой dgРНК возможно использование следующей типовой процедуры:

1. Приготовьте раствор молекулы Сas9 и tracr в высокой концентрации (например, концентрации, превышающей конечную концентрацию RNP для доставки в клетку), позвольте компонентам достигнуть эквилибриума;

2. Добавьте молекулу crРНК и позвольте компонентам достигнуть динамического равновесия (эквилибриума) (тем самым образуя высококонцентрированный раствор RNP);

3. Разбавьте раствор RNP до желаемой концентрации;

4. Доставьте указанный RNP в указанной желаемой концентрации в клетки-мишени, например, путем электропорации.

Вышеописанная процедура может быть модифицирована для использования молекул sgРНК, для этого надо пропустить стадию 2 выше и обеспечить высокие концентраций молекулы Сas9 и молекулы sgРНК в растворе на стадии 1, при этом позволить компонентам достичь динамического равновесия (эквилибриума). В вариантах осуществления молекула Сas9 и каждый компонент gРНК находятся в растворе с соотношением 1:2 (Сas9: gРНК), например с молярным соотношением 1:2 молекулы Сas9:gРНК. Когда используют молекулы dgРНК, соотношение, например, молярное отношение, составляет 1:2:2 (Сas9: tracr: crРНК). В вариантах осуществления RNP образуется при концентрации 20 мкМ или выше, например, от примерно 20 мкМ до примерно 50 мкМ. В вариантах осуществления RNP образуется при концентрации 10 мкМ или выше, например, от примерно 10 мкМ до примерно 30 мкМ. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 10 мкМ или менее (например, до концентрации от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 3 мкМ или менее (например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 3 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 1 мкМ или менее (например, концентрацию от примерно 0,01 мкМ до примерно 1 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP разбавляют до конечной концентрации 0,3 мкМ или менее (например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 0,3 мкМ) в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 3 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется при конечной концентрации около 1 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется при конечной концентрации около 0,3 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,1 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,05 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,03 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP приготовляется в конечной концентрации около 0,01 мкМ в растворе, содержащем клетку-мишень (например, описанную здесь) для доставки в указанную клетку-мишень. В вариантах осуществления RNP составлен в среде, подходящей для электропорации. В вариантах осуществления RNP доставляется в клетки, например, клетки HSPC, например, как описано здесь, посредством электропорации, например, с использованием описанных здесь условий электропорации.

Бимодальная или дифференциальная доставка компонентов.

Доставка компонентов системы Cas по отдельности, например, молекулы Сas9 и молекулы gРНК как отдельных компонентов, и, более конкретно, доставка компонентов различными режимами, может повысить эффективность, например, путем улучшения тканевой специфичности и безопасности.

В одном варианте осуществления молекула Сas9 и молекула gРНК доставляются различными режимами, что иногда упоминается здесь как дифференциальные режимы. Различные или дифференциальные режимы, используемые здесь, относятся к способам доставки, которые добавляют различные фармакодинамические или фармакокинетические свойства молекулам данного компонента, например молекуле Сas9, молекуле gРНК или матричной нуклеиновой кислоте. Например, способы доставки могут приводить к различному распределению по тканям, изменённому периоду полураспада или другому временному распределению, например, в избранном компартменте, ткани или органе.

Некоторые способы доставки, например, доставка вектором состоящим из нуклеиновой кислоты, сохраняющимся в клетке, или в потомстве клетки, например, путем автономной репликации или введения в клеточную нуклеиновую кислоту, приводят к более стойкому проявлению и присутствию компонента.

XI. Способы лечения.

Системы Сas9, например, одна или несколько молекул gРНК и одна или несколько молекул Сas9, описанных здесь, применимы для лечения заболевания у млекопитающего, например у человека. Термины «лечить», «обработанный», «обрабатывая» и «лечение» включают в себя введение систем Сas9, например, одной или нескольких молекул gРНК и одной или нескольких молекул Сas9, в клетки для предотвращения или замедления наступления симптомов, осложнений или биохимических признаков заболевания, облегчение симптомов или прекращение или замедление дальнейшего развития болезни, состояния или расстройства. Лечение может также включать введение одной или нескольких (например, популяции) клеток, например HSPC, модифицированных путем введения молекулы gРНК (или более чем одной молекулы gРНК) по настоящему изобретению или посредством введения системы CRISPR, как описано здесь, или любым из способов получения указанных клеток, описанных здесь, для предотвращения или замедления появления симптомов, осложнений или биохимических признаков заболевания, облегчения симптомов или прекращения или замедления дальнейшего развития болезни, состояния или расстройства. Лечение может быть профилактическим (для предотвращения или отсрочки начала заболевания или для предотвращения проявления клинических или субклинических симптомов) или терапевтическим подавлением или облегчением симптомов после проявления заболевания. Лечение может быть оценено терапевтическими способами, описанными здесь. Таким образом, способы «лечения» по настоящему изобретению также включают введение клеток, измененных введением системы Сas9 (например, одной или более молекул gРНК и одной или более молекул Сas9) в указанные клетки, субъекту, с целью излечения, уменьшения тяжести или улучшения одного или нескольких симптомов заболевания или состояния, для того, чтобы продлить здоровое состояние или способствовать выживанию субъекта, с превышением ожидаемого в отсутствие такого лечения. Например, «лечение» включает в себя облегчение симптома заболевания у субъекта по меньшей мере на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15 %, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 80%, 85%, 90%, 95% или более.

Саs9-системы, включающие молекулы gРНК, содержащие целевые домены, описанные здесь, например, в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и/или 9, применимы для лечения гемоглобинопатий.

Гемоглобинопатии.

Гемоглобинопатии охватывают ряд анемий генетического происхождения, приводящих к снижению воспроизводства и/или увеличению распада (гемолизу) эритроцитов (RBCs). Они также включают генетические дефекты, приводящие к образованию аномальных гемоглобинов с сопутствующей нарушенной способностью поддержания концентрации кислорода. Некоторые из таких расстройств связаны с неспособностью продуцировать нормальный β-глобин в достаточных количествах, в то время как другие связаны с полной неспособностью производить нормальный β-глобин. Эти расстройства, связанные с β-глобиновым белком, обычно называются β-гемоглобинопатиями. Например, β-таласемия возникает в результате частичного или полного дефекта экспрессии гена β-глобина, что приводит к дефициту или отсутствию HbA. Серповидноклеточная анемия является результатом точечной мутации в структурном гене β-глобина, что приводит к образованию аномального (серповидного) гемоглобина (HbS). HbS подвержен полимеризации, особенно в дезоксигенированных условиях. Эритроциты с HbS более склонны к распаду, чем нормальные эритроциты, и легце подвергаются гемолизу, приводя в конечном итоге к анемии. В одном варианте осуществления генетический дефект альфа-глобина или бета-глобина корректируется, например, путем гомологичной рекомбинации при использовании молекул Сas9 и молекул gРНК, например, систем CRISPR, описанных здесь. В одном варианте осуществления ген, кодирующий копию альфа-глобина или бета-глобина дикого типа (например, не несущего мутации), вводится в геном клетки, например, в сайт «безопасной гавани», например, в сайте «безопасной гавани» AAVS1, путем гомологичной рекомбинации, с использованием системы CRISPR и способов, описанных здесь.

В одном варианте осуществления нацеливаются на ген, связанный с гемоглобинопатией, с помощью молекулы Сas9 и молекулы gРНК, описанных здесь. Подобные примеры генов-мишеней включают, например, гены, связанные с регуляцией генов гамма-глобина. В варианте осуществления мишенью является BCL11A. В варианте осуществления мишенью является энхансер BCL11a. В варианте осуществления мишенью является область HPFH.

Фетальный гемоглобин (также гемоглобин F или HbF или α2γ2) представляет собой тетрамер двух альфа-глобиновых полипептидов взрослого и двух фетальных бета-подобных гамма-глобиновых полипептидов. HbF является основным переносчиком кислорода человеческого плода в течение последних семи месяцев развития матки и новорожденного до примерно 6 месяцев. Функционально фетальный гемоглобин отличается от взрослого гемоглобина тем, что он способен связывать кислород с большей силой, чем взрослая форма, что дает развивающемуся плоду лучше доступ к кислороду из кровотока матери.

У новорожденных фетальный гемоглобин почти полностью заменен взрослой формой гемоглобина примерно к 6 месяцу после рождения. У взрослых производство фетального гемоглобина может быть реактивировано фармакологически, что применимо при лечении таких заболеваний, как гемоглобинопатии. Например, у некоторых пациентов с гемоглобинопатиями более высокие уровни экспрессии гамма-глобина могут частично компенсировать дефектное или поврежденное производство гена бета-глобина, что может улучшить клиническую картину этих заболеваний. Повышение количества HbF или F-клеток (HbF-содержащих эритроцитов) может уменьшить тяжесть заболевания гемоглобинопатий, например, таких как большой бета-талассемии и серповидно-клеточной анемии.

Повышенные уровни HbF или F-клеток могут быть связаны с уменьшением экспрессии BCL11A в клетках. Ген BCL11A кодирует фактор транскрипции с множественными доменами типа «цинковые пальцы». В одном варианте осуществления экспрессия BCL11A модулируется, например, уменьшается. В одном варианте осуществления ген BCL11A отредактирован. В одном варианте осуществления функция BCL11a, например, в клетках эритроидной линии, нарушена или снижена. В одном варианте осуществления клетка представляет собой кроветворную стволовую клетку или клетку-предшественник (прогениторную).

Серповидно-клеточные болезни.

Серповидно-клеточные болезни представляет собой группу расстройств, связанных с гемоглобином. Люди с этим расстройством имеют атипичные молекулы гемоглобина (гемоглобин S), которые изменяют форму эритроцитов на серповидную или полумесяца. Характерными особенностями этого расстройства являются низкое количество эритроцитов (анемия), повторяющиеся инфекции и периодические болевые эпизоды.

Мутации в гене HBB вызывают серповидно-клеточные болезни, т.е. HBB ген содержит инструкции для создания бета-глобина. Различные версии бета-глобина являются результатом различных мутаций в гене HBB. Одна конкретная мутация гена HBB вызывает аномальную версию бета-глобина, известную как гемоглобин S (HbS). Другие мутации в гене HBB приводят к дополнительным аномальным версиям бета-глобина, таким как гемоглобин C (HbC) и гемоглобин E (HbE). Генетические мутации HBB также могут приводить к необычно низкому уровню бета-глобина, т. е. бета-талассемии. У людей с серповидно-клеточной болезнью, по крайней мере, одна из бета-глобиновых субъединиц в гемоглобине заменена гемоглобином S. При серповидно-клеточной анемии, являющейся распространенной формой болезни серповидно-клеточной болезни, гемоглобин S заменяет обе бета-глобиновые субъединицы в молекуле гемоглобина. При других типах заболеваний серповидно-клеточной анемии только одна бета-глобиновая субъединица в гемоглобине заменяется гемоглобином S. Другая субъединица бета-глобина заменена другим аномальным вариантом, таким как гемоглобин С. Например, люди с гемоглобином С (HbSC) серповидно-клеточной анемии имеют молекулы гемоглобина с гемоглобином S и гемоглобином C замещающие молекулы бета-глобина. Если мутации, отвечающие за продукцию гемоглобина S и бета-талассемии, встречаются вместе, у индивидуумов присутствует заболевание S-бета-талассемии. (HbSBetaThal).

Бета-талассемия.

Бета-талассемия-это расстройство крови, снижающее выработку гемоглобина. У людей с бета-талассемией низкий уровень гемоглобина приводит к недостатку кислорода во многих частях тела. У пораженных людей также наблюдается дефицит эритроцитов (анемия), что вызывает бледность кожи, слабость, усталость и более серьезные осложнения. Люди с бета-талассемией подвергаются повышенному риску развития аномальных тромбов.

Бета-талассемия подразделяется на два типа в зависимости от тяжести симптомов: большая талассемия (также известная как анемия Кули) и средняя талассемия. Из двух типов большая талассемия является наиболее серьезной.

Мутации в гене HBB вызывают бета-талассемию. Ген HBB содержит инструкции для создания бета-глобина. Некоторые мутации в гене HBB предотвращают образование любого бета-глобина. Отсутствие бета-глобина называют бета-ноль (В°) талассемией. Другие мутации гена HBB позволяют продуцировать некоторый бета-глобин, но в меньших количествах, что приводит к бета-плюс (В +) талассемии. Люди с обоими типами талассемии диагностируются как имеющие большую талассемию, так и среднюю талассемию.

В одном варианте осуществления комплекс молекул gРНК/Сas9, нацеленный на первый ген, применяется для лечения расстройства, характеризующегося вторым геном, например вызванного мутацией во втором гене. В качестве примера, нацеливание на первый ген, например, путем редактирования или доставки полезной нагрузки, может компенсировать или ингибировать дальнейшее повреждение от влияния второго гена, например мутантного второго гена. В варианте осуществления аллель(и) первого гена субъекта не является причиной расстройства.

В одном аспекте изобретение относится к лечению млекопитающего, например человека, нуждающегося в увеличении фетального гемоглобина (HbF).

В одном аспекте изобретение относится к лечению млекопитающего, например человека, диагностированному или подверженному риску развития гемоглобинопатии.

В одном аспекте гемоглобинопатия представляет собой бета-гемоглобинопатию. В одном аспекте гемоглобинопатия является серповидно-клеточной болезнью. В одном аспекте гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию.

Способы лечения гемоглобинопатий.

В другом аспекте изобретение относится к способам лечения. В аспектах молекулы gРНК, системы CRISPR и/или клетки по изобретению используются для лечения пациента, нуждающегося в этом. В аспектах пациент является млекопитающим, например человеком. В аспектах пациент имеет гемоглобинопатию. В вариантах осуществления пациент имеет серповидно-клеточную болезнь. В вариантах осуществления пациент имеет бета-талассемию. В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему, например человеку, одной или нескольким молекул gРНК, например, одну или более молекул gРНК, содержащих целевой домен, описанный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь. В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему популяции клеток, где популяция клеток представляет собой популяцию клеток млекопитающего, например человека, которому вводили одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, содержащих целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9, и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, например, систему CRISPR, как описано здесь. В одном варианте осуществления введение одной или более молекул gРНК или систем CRISPR в клетку осуществляют in vivo. В одном варианте осуществления введение одной или более молекул gРНК или систем CRISPR в клетку осуществляют ex vivo.

В одном аспекте способ лечения включает введение млекопитающему, например человеку, эффективного количества клеточной популяции, содержащей клетки, которые содержат или в одно время содержали одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, включающих целевой домен, представленный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, или потомство указанных клеток. В одном варианте осуществления клетки являются аллогенными млекопитающему. В одном варианте осуществления клетки являются аутологичными млекопитающему. В одном варианте осуществления млекопитающее является донором клеток, клетки обрабатывают ex vivo и возвращают млекопитающему.

В аспектах клетки, которые содержат или в одно время содержали одну или несколько молекул gРНК, например одну или несколько молекул gРНК, включающих целевой домен, представленный в Таблице 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, и одну или несколько молекул Сas9, описанных здесь, или потомство указанных клеток, содержат стволовые клетки или клетки-предшественники. В одном аспекте стволовыми клетками являются гемопоэтические стволовые клетки. В одном аспекте клетки-предшественники представляют собой гемопоэтические клетки-предшественники. В одном аспекте клетки включают как гемопоэтические стволовые клетки, так и гемопоэтические клетки-предшественники, например HSPC. В одном аспекте клетки включают, например, состоят из CD34+ клеток. В одном аспекте клетки совершенно не содержат CD34- клеток. В одном аспекте клетки содержат, например, состоят из CD34+/CD90+ стволовых клеток. В одном аспекте клетки содержат, например, состоят из CD34+/CD90- клеток. В одном аспекте клетки представляют собой популяцию, включающую один или несколько типов клеток, описанных выше или описанных здесь.

В одном варианте осуществления раскрытие предоставляет способ лечения гемоглобинопатии, например серповидно-клеточной болезни или бета-талассемии, или способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, например человека, нуждающегося в этом, способа, включающего:

a) предоставление, например, сбор или выделение популяции HSPC (например, CD34+ клеток) из млекопитающего;

b) предоставление указанных клеток ex vivo, например, в клеточной культуральной среде, необязательно в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, спосбоствующее экспонсии стволовых клеток, в результате чего указанная популяция HSPC (например, CD34+ клеток) подвергается экпансии в большей степени, чем необработанная популяция;

c) контактирование популяции HSPC (например, CD34+ клеток) с эффективным количеством композиции, содержащей, по меньшей мере, одну молекулу gРНК, содержащую описанный здесь целевой домен, например, целевой домен, описанный в Таблицах 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8 или 9 или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу gРНК, и по меньшей мере одну молекулу Сas9, например, описанную здесь, или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу Сas9, т.е.,например, один или несколько RNP, описанных здесь, например, с системой CRISPR, описанной здесь;

d) образование по меньшей мере одной модификации, по меньшей мере, в части клеток популяции (например, по меньшей мере, в части клеток HSPC популяции, например в CD34+ клетках популяции), причём, например, при диффиренцировке указанных HSPC в клетки эритроидной линии, например в эритроциты, экспрессия фетального гемоглобина увеличивается, например, относительно клеток, не подвергавшихся контактированию на стадии с); и

f) возвращение популяции клеток, содержащих указанные модифицированные клетки HSPC (например, CD34+ клетки) млекопитающему.

В одном аспекте HSPC являются аллогенными для млекопитающего, которому они возвращаются. В одном аспекте HSPC аутологичны млекопитающему, к которому они возвращаются. В аспектах HSPC выделены из костного мозга. В аспектах HSPC выделены из от периферической крови, например, мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому был назначен агент для мобилизации, отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В аспектах HSPC выделяют из пуповинной крови.

В дополнительных вариантах осуществления способа, способ далее включает в себя, после предоставления популяции HSPC (например, клеток CD34+), например, из источника, описанного выше, стадию обогащения популяция клеток по HSPC (например, CD34+ клетками). В вариантах осуществления способа после указанного обогащения популяция клеток, например, HSPC, в значительной степени не содержит CD34- клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 70% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 75% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 80% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 85% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 90% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 95% жизнеспособных клеток. В вариантах осуществления количество клеток, возвращаемое млекопитающему, включает по меньшей мере 99% жизнеспособных клеток. Жизнеспособность может быть определена путем окрашивания репрезентативной части популяции клеток по маркеру жизнеспособности клеток, например, как известно из уровня техники.

В другом варианте осуществления раскрытие представляет способ лечения гемоглобинопатии, например, серповидно-клеточной болезни или бета-талассемии или способ увеличения экспрессии фетального гемоглобина у млекопитающего, например человека, нуждающегося в этом, способ, включающий стадии:

a) предоставления, например, сбора или выделения популяции HSPC (например, клеток CD34+), например, из млекопитающего, например, из костного мозга млекопитающего,

b) выделение CD34+ клеток из популяции клеток стадии а),

c) предоставление указанных CD34+ клеток ex vivo и культивирование указанных клеток, например, в клеточной культуральной среде, в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации от примерно 0,5 до примерно 0,75 микромоля, при этом указанная популяция клеток CD34+ подвергается экспансии в большей степени, чем необработанная популяция,

d) введение в клетки популяции CD34+ клеток эффективного количества композиции, содержащей молекулу Сas9, например, как описано здесь, и молекулу gРНК, например, как описано здесь, при том, например, необязательно, чтобы молекула Сas9 и молекула gРНК находились в форме RNP, например, как описано здесь, и, необязательно, чтобы указанное введение происходило путем электропорации указанного RNP в указанные клетки, например, как описано здесь,

e) образование по меньшей мере одной генетической модификации по крайней мере, в (например, по меньшей мере, в части клеток популяции HSPCs, например CD34+ клеток популяции), в результате чего, например, индел, например, как описано здесь, создается внутри или вблизи геномного сайта, комплементарного целевому домену gРНК, введенной на стадии г);

f) необязательное дополнительное культивирование указанных клеток после указанного введения, например, в клеточной культуральной среде, в присутствии эффективного количества композиции, содержащей, по меньшей мере, одно соединение, способствуюшее экспансии стволовых клеток, например, Соединение 4, например, Соединение 4 в концентрации от примерно 0,5 до около 0,75 микромоля, что вызывает, по меньшей мере, 2-х кратную экспансию клеток, например, по меньшей мере, 4-х кратную экспансию, например, по меньшей мере, 5-ти кратную экспансию клеток;

g) криоконсервация указанных клеток; и

h) возвращение клеток млекопитающему, причем клетки, возвращаемые млекопитающему, содержат клетки, которые

1) сохраняют способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например эритроциты;

2) будучи дифференцированы в эритроциты, продуцируют повышенный уровень фетального гемоглобина, например, по отношению к клеткам, не модифицированным с помощью gРНК на стадии e),

3. продуцируют, например, по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.

В одном аспекте HSPC являются аллогенными млекопитающему, которыму они возвращаются. В одном аспекте HSPC аутологичны млекопитающему, которому они возвращаются. В аспектах HSPC выделены из костного мозга. В аспектах HSPC выделены из периферической крови, например, мобилизованной периферической крови. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили G-CSF. В аспектах мобилизованная периферическая кровь получена от субъекта, которому вводили агент мобилизации, отличный от G-CSF, например Plerixafor® (AMD3100). В аспектах HSPC выделяют из пуповинной крови.

В вариантах осуществления вышеописанного способа, указанная стадия b) приводит к популяции клеток, которая, по-существу, не содержит CD34- клеток. В других вариантах осуществления способа, способ дополнительно включает, после получения популяции HSPC (например, CD34+ клеток), например, из источника, описанного выше, стадию обогащения популяции клеток по HSPC (например, CD34+ клеток).

В других вариантах осуществления данных способов популяция модифицированных HSPC (например, CD34+ стволовых клеток), обладающих способностью дифференцироваться и имеющая повышенную экспрессию фетального гемоглобина, подвергается криоконсервации и хранится до введения/возвращения млекопитающему. В вариантах осуществления криоконсервированная популяция HSPC, обладающая способностью дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например эритроциты, и/или будучи дифференцирована в клетки эритроидной линии, например эритроциты, приводящая к повышению уровня фетального гемоглобина, размораживается, а затем вводится/возвращается млекопитающему. В следующем варианте осуществления этих способов, способ включает химиотерапию и/или лучевую терапию для удаления или уменьшения эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В следующем варианте осуществления этих способов, способ не включает стадии химиотерапии и/или лучевой терапии для удаления или уменьшения эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В следующем варианте осуществления этих способов, способ включает химиотерапию и/или лучевую терапию для удаления или уменьшения (например, при частичнуй лимфодеплеции) эндогенного гемопоэтического предшественника или стволовых клеток у млекопитающего. В вариантах осуществления пациент обрабатвается дозой бусульфана, вызывающей полную лимфодеплецию, перед введением/возвращением модифицированных HSPC млекопитающему. В вариантах осуществления пациент обрабатвается дозой бусульфана, вызывающей частичную лимфодеплецию, перед введением/возвращением модифицированных HSPC млекопитающему.

В вариантах осуществления клетки контактируют с RNP, содержащим молекулу Сas9, например, как описано здесь, в комплексе с gРНК, комплементарной области +58 энхансера BCL11a. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR000312. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR000311. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001128. В вариантах осуществления g РНК включает целевой домен CR001125. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001126. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001127. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:248-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из [SEQ ID NO:7812], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, ID NO:248]-[SEQ ID NO:6601, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:248]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:6601, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:247]-[SEQ ID NO:7811], В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:338]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двунаправленную РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:335]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:336]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:337-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:337]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:337]-[SEQ ID NO:7811]. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления любые или все РНК-компоненты gРНК могут быть модифицированы в одном или нескольких нуклеотидах, например, как описано здесь. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:342. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:343. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1762. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:344 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:344 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:345 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:345 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:347. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:348. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1763. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:350 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:350 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:351. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:352. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1764. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:353 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:353 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:354 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:354 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:355 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:356. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1765. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:357 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:357 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:358 и SEQ ID NO:6660. В варианты осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:358 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:359. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:360. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1766. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:361 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:361 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:362 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:362 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:363. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:364. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1767. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:365 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:365 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:366 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:366 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:367. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:36 8. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1768. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:369 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:369 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:370 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:370 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:371. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:372. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1769. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:373 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:373 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:374 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой dgРНК молекула, которая состоит из SEQ ID NO:374 и SEQ ID NO:346.

В вариантах осуществления изобретения клетки контактируют с RNP, содержащим молекулу Сas9, например, как описано здесь, в комплексе с gРНК, комплементарной области HPFH. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001030. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001028. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001221. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR001137. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR003035. В вариантах осуществления gРНК содержит целевой домен CR003085. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:98]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урацилнуклеотидами, например [SEQ ID NO:100]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из SEQ ID NO:1589-SEQ ID NO:6607, и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SE Q ID NO:1589]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1589]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1505]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1700]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления gРНК представляет собой двойную нацеливающую РНК, содержащую crРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:6607], и tracr, содержащий, например, состоящий из SEQ ID NO:7812, необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления gРНК представляет собой sgРНК, включающую, например, состоящую из [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:6601], необязательно с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дополнительными 3'-урациловыми нуклеотидами, например [SEQ ID NO:1750]-[SEQ ID NO:7811]. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:375. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:376. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1770. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:377 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:377 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NOO:378 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:378 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:379. В вариантах осуществления, молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:380. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1771. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:381 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:381 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, который состоит из SEQ ID NO:382 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:382 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:383. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:384. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1772. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:385 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:385 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:386 и SEQ ID NO:6660 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:386 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:387. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:388 В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1773. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:389 и SEQ I D NO: 6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:389 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:390 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:390 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:391. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:392. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1774. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:393 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:393 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:394 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:394 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:395. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:396. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой SEQ ID NO:1775. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:397 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:397 и SEQ ID NO:346. В вариантах осуществления молекула gРНК le представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:398 и SEQ ID NO:6660. В вариантах осуществления молекула gРНК представляет собой молекулу dgРНК, которая состоит из SEQ ID NO:398 и SEQ ID NO:346.

В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 1. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 2. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 3. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4. В вариантах осуществления где соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4 и присутствует в концентрации 2-0,1 микромоля, например, 1-0,25 микромоля, например 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления соединение, способстующее экспансии стволовых клеток представляет собой молекулу, описанную в WO2010/059401 (например, молекулу, описанную в примере 1 WO2010/059401).

В вариантах осуществления клетки, например HSPC, например, как описано здесь, культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 15 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 12 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 4 дней, например в течение периода от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение периода примерно 1 дня до примерно 2 дней, до этапа контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь. В вариантах осуществления указанное культивирование до указанной стадии контактирования находится в композиции (например, клеточной культуральной среде), содержащей соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например, Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например, Соединение 4 при концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени, не превышающего примерно 1 день, например, не более 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, например, в клеточной культуральной среде, содержащей содержит соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации от около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например Соединение 4 в концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В других вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 15 дней, например, в течение периода от примерно 12 часов до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение периода от примерно 2 дней, примерно 3 дней или примерно 4 дней после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, в клеточной культуральной среде, например, которая содержит соединение, способстующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации от около 0,25 мкМ до около 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации около 0,75-0,5 микромоля. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo (например, культивируют до указанной стадии контактирования и/или культивируют после указанной стадии контактирования) в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 20 дней, например, в течение периода примерно 6-12 дней, например, в течение периода примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11 или примерно 12 дней.

В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 1 миллиона клеток (например, по меньшей мере около 1 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 2 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 2 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит, по меньшей мере, около 3 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 3 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 4 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 4 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 5 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 5 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере около 6 миллионов клеток (например, по меньшей мере около 6 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 1 миллион клеток (например, по меньшей мере 1 миллион клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 2 миллиона клеток (например, по меньшей мере 2 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 3 миллиона клеток (например, по меньшей мере 3 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 4 миллиона клеток (например, по меньшей мере 4 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращенные млекопитающему, содержит по меньшей мере 5 миллионов c (например, по меньшей мере 5 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 6 миллионов клеток (например, по меньшей мере 6 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 1 миллиона клеток (например, около 1 миллиона клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращенные млекопитающему, содержит около 2 миллионов клеток (например, около 2 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 3 миллионов клеток (например, около 3 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 4 миллионов клеток (например, около 4 миллионов клеток CD34+) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 5 миллионов клеток (например, около 5 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит около 6 миллионов клеток (например, около 6 миллионов CD34+ клеток) на кг. В вариантах осуществления популяция клеток, включающих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит примерно 2×10⁶ клеток на кг массы тела пациента.В вариантах воплощения популяция клеток, содержащих модифицированные HSPC, возвращаемые млекопитающему, содержит по меньшей мере 2×10⁶ клеток на кг массы тела пациента.

В вариантах осуществления любой из способов, описанных выше, приводит к тому, что по меньшей мере 80% циркулирующих CD34+ клеток пациента, содержат индел внутри или вблизи участка генома, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, используемой в способе, например, как измерено по меньшей мере через 15, например по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40 по меньшей мере 50 или по меньшей мере через 60 дней после введения/возвращения клеток млекопитающему.

В вариантах осуществления любой из способов, описанных выше, приводит к тому, что, по меньшей мере 20% клеток CD34+ костного мозга пациента содержат индел внутри или вблизи участка генома, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, используемой в способе, например, как измерено по меньшей мере через 15, например по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40 по меньшей мере 50 или по меньшей мере через 60 дней после введения/возвращения клеток млекопитающему.

В вариантах осуществления, HSPC, которые вводятся/возвращаются млекопитающему, способны дифференцироваться in vivo в клетки эритроидной линии, например, эритроциты, а указанные дифференцированные клетки демонстрируют повышенный уровень фетального гемоглобина, например, продуцируют по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, например, по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку, например, между примерно 9 и примерно 10 пикограммами фетального гемоглобина на клетку, например, таким образом, что гемоглобинопатия млекопитающего считается излеченной.

Следует иметь в виду, что, когда клетка характеризуется как имеющая повышенный уровень фетального гемоглобина, она включает те варианты осуществления, в которых потомство этой клетки, например дифференцированные клетки потомства, имеет повышенный уровень фетального гемоглобина. Например, в способах, описанных здесь, измененная или модифицированная клетка CD34+ (или популяция клеток) может не показывать повышенный уровень фетального гемоглобина, но при дифференцировке в клетки эритроидной линии, например в эритроциты, клетки показывают повышенный уровень фетального гемоглобин, например, повышенный уровень фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированной или неизменной клеткой в аналогичных условиях.

XII. Способы культивирования клеток и способы воспроизводства клеток.

В раскрытии представлены способы культивирования клеток, например HSPC, например гемопоэтических стволовых клеток, например CD34+ клеток, модифицированных или подготовленных для модификации молекулами gРНК, описанными здесь.

Ингибиторы пути восстановления ДНК

Не ограничиваясь теорией, считается, что профиль инделов, формируемых данной молекулой gРНК в конкретной целевой последовательности, является результатом каждого из активных клеточных механизмов репарации ДНК (например, негомологичное соединение концов, опосредованное микрогомологией соединение концов и т. д.). Не ограничиваясь теорией, считается, что особенно благоприятный индел можно сформировать или увеличить его количество путем контактирования клеток, подлежащих редактированию, с ингибитором того механизма репарации ДНК, который не способствует формированию желаемого индела. Таким образом, молекулы gРНК, системы CRISPR, способы и другие аспекты изобретения могут быть реализованы в комбинации с такими ингибиторами. Примеры таких ингибиторов включают те, которые описаны, например, в WO2014/130955, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей его полноте. В варианте осуществления ингибитор представляет собой ингибитор DNAPKc, например NU7441.

Соединения, способствующие экспансии стволовых клеток

В одном аспекте изобретение относится к культивированию клеток, например HSPCs, например, CD34+ клеток, модифицированных или подготовленных к модификации молекулами gРНК, описанными здесь, с одним или несколькими агентами, приводящими к увеличению скорости экспансии (экспансия-деление/размножение клеток на стадии экспоненциального роста, далее «экспансия»), увеличению уровня экспансии, или увеличению приживаемости при трансплантации по сравнению с клетками, не обработанными агентом. Такие агенты упоминаются здесь как соединения, способствующие экспансии стволовых клеток.

В одном аспекте один или несколько агентов, которые приводят к увеличению скорости экспансии или повышению уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, например соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, содержат агент, который является ингибитором каскада арильного углеводородного рецептора (AHR). В аспектах соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой соединение, раскрытое в WO2013/110198, или соединение, раскрытое в WO2010/059401, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.

В одном аспекте один или несколько агентов, которые приводят к увеличению скорости экспансии или повышенному уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, являются производным пиримидо[4,5-b]индола, например, как описано в WO2013/110198, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления агент представляет собой соединение 1((1r,4r)-N¹-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b] индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин):

Соединение 1

Compound 1

В другом аспекте агент представляет собой соединение 2 (метил-4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9Н-пиримидо [4,5-b] индол-7-карбоксилат):

Соединение 2:

В другом аспекте один или несколько агентов, приводящие к увеличению скорости экспансии или повышенному уровню экспансии по сравнению с клетками, не обработанными агентом, являются агентом, описанным в WO2010/059401, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В одном варианте осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-ил амино)этил)фенол, т.е. представляет собой соединение из примера 1 WO2010/059401, имеющего следующую структуру:

Соединение 3:

В другом аспекте соединение, способствующее экспансии стволовых клеток представляет собой Соединение 4((S)-2-(6-(2- (1Н-индол-3-ил) этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол, то есть представляет собой соединение 157S согласно WO2010/059401), имеющего следующую структуру:

Соединение 4:

В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4) перед введением системы CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC. В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например с соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4), после введения CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC. В вариантах осуществления популяция HSPC контактирует с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток, например соединением 1, соединением 2, соединением 3, соединением 4 или их комбинациями (например, комбинацией соединения 1 и соединения 4), как до, так и после введения системы CRISPR (например, молекулы gРНК и/или молекулы Cas9 по изобретению) в указанные HSPC.

В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в эффективном количестве для увеличения уровня экспансии HSPC по сравнению с клетками HSPC в той же среде, но в отсутствие соединения, способствующего экспансии стволовых клеток. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток присутствует в концентрации от примерно 0,01 до примерно 10 мкМ, например, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 1 мкМ, примерно 950 нМ, примерно 900 нМ, примерно 850 нМ, примерно 800 нМ, примерно 750 нМ, примерно 700 нМ, примерно 650 нМ, примерно 600 нМ, примерно 550 нМ, примерно 500 нМ, примерно 450 нМ, примерно 400 нМ, примерно 350 нМ, примерно 300 нМ, примерно 250 нМ, примерно 200 нМ, примерно 150 нМ, примерно 100 нМ, примерно 50 нМ, примерно 25 нМ или примерно 10 нМ. В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, присутствует в концентрации от примерно 500 нМ до примерно 750 нМ.

В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, и присутствует в среде культивирования клеток в концентрации от примерно 0,01 до примерно 10 мкмоль (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации от примерно 0,1 до примерно 1 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 0,75 микромолей (мкМ). В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой Соединение 4, которое присутствует в среде культивирования клеток в концентрации примерно 0,5 микромоля (мкМ). В любом из вышеперечисленных вариантах осуществления среда для культивирования клеток дополнительно содержит соединение 1.

В вариантах осуществления соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой смесь соединений 1 и 4.

В вариантах осуществления клетки по изобретению контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-10 000 раз, например, увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-1000 раз, например, увеличение экспансии клеток CD34+ в 2-100 раз, например, 20-200-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. Как описано здесь, контактирование с одним или несколькими соединениями, способствующими экспансии стволовых клеток, может быть проведено до того, как клетки контактируют с системой CRISPR, например, как описано здесь, или после того, как клетки контактировали с системой CRISPR, например, как описано здесь, или их комбинации. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 2-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, с соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 4-кратное увеличение экспансии клеток CD34+, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток например, с соединением 4, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 5-кратное увеличение экспансии клеток CD34+, например CD34+ клеток, содержащих индел внутри или вблизи целевого участка, комплементарного целевому домену gРНК системы CRISPR/Cas9, введенной в указанную клетку. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 10-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 20-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 30-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 40-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать по меньшей мере 50-кратное увеличение экспансии CD34+ клеток. В одном варианте осуществления клетки контактируют с одной или несколькими молекулами соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, в течение достаточного времени и в достаточном количестве, чтобы вызвать, по меньшей мере, 60-кратное увеличение экспансии клеток CD34+. В вариантах осуществления клетки контактируют с одним или несколькими соединениями, способствующими экспансии стволовых клеток, в течение примерно 1-60 дней, например, примерно 1-50 дней, например, примерно 1-40 дней, например, примерно 1-30 дней, например, 1-20 дней, например, примерно 1-10 дней, например, примерно 7 дней, например, примерно 1-5 дней, например, примерно 2-5 дней, например, примерно 2-4 дня, например, примерно 2 дня или, например, примерно 4 дня.

В вариантах осуществления клетки, например HSPC, например, как описано здесь, культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 12 часов до примерно 5 дней, например, в течение периода времени примерно 12 часов до 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 2 дней, например, в течение периода времени примерно 1 дня или в течение периода времени примерно 2 дней, перед стадией контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь. В вариантах осуществления указанное культивирование перед указанной стадией контактирования происходит при добавлении композиции (например, в среде культивирования клеток), содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например, Соединение 4 в концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации примерно 0,75-0,5 мкмоль. В вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени, не превышающего примерно 1 день, например, не более 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа(ов) после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, например, в среде культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, описанные здесь, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например Соединение 4 при концентрации примерно 0,75-0,5 микромоля. В других вариантах осуществления клетки культивируют ex vivo в течение периода времени от примерно 1 часа до примерно 14 дней, например, в течение периода времени от примерно 12 часов до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 10 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 5 дней, например, в течение периода времени от примерно 1 дня до примерно 4 дней, например, в течение периода времени от примерно 2 дней до примерно 4 дней, например, в течение периода времени примерно 2 дней, примерно 3 дней или примерно 4 дней после стадии контактирования клеток с системой CRISPR, например, описанной здесь, в среде культивирования клеток, например, которая содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, описанное здесь, например Соединение 4, например Соединение 4 при концентрации от примерно 0,25 мкМ до примерно 1 мкМ, например, Соединение 4 в концентрации примерно 0,75-0,5 микромоля.

В вариантах осуществления среда для культивирования клеток представляет собой химически определенную среду. В вариантах осуществления среда для культивирования клеток может дополнительно содержать, например, StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat № 09650). В вариантах осуществления среда для культивирования клеток может альтернативно или дополнительно содержать, например, HSC Brew, GMP (Miltenyi). В вариантах осуществления среда может быть дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), фактором стволовых клеток человека (SCF), человеческим интерлейкином-6, L-глутамином и/или пенициллином/стрептомицином. В вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), фактором стволовых клеток человека (SCF), человеческим интерлейкином-6 и L-глутамином. В других вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L), человеческим стволовым клеточным фактором (SCF) и человеческим интерлейкином-6. В других вариантах осуществления среда дополнена тромбопоэтином (TPO), лигандом Flt3 человека (Flt-3L) и фактором стволовых клеток человека (SCF), но не содержит человеческого интерлейкина-6. Когда в среде присутствуют тромбопоэтин (TPO), лиганд Flt3 человека (Flt-3L), фактор стволовых клеток человека (SCF), человеческий интерлейкин-6 и/или L-глутамин, то они присутствуют в концентрации от примерно 1 нг/мл до примерно 1000 нг/мл, например, в концентрации в пределах от примерно 10 нг/мл до примерно 500 нг/мл, например в концентрации от примерно 10 нг/мл до примерно 100 нг/мл, например в концентрации от примерно 25 нг/мл до примерно 75 нг/мл, например, в концентрации примерно 50 нг/мл. В вариантах осуществления каждый из дополнительных компонентов находится в одной и той же концентрации. В других вариантах осуществления каждый из дополненных компонентов находится в разных концентрациях. В одном варианте осуществления среда включает StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat No. 09650), 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo), 50 нг/мл Flt3 лиганда человека (Flt-3L), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF) и 50 нг/мл человеческого интерлейкина-6 (IL-6). В одном варианте осуществления среда включает StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat No. 09650), 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo), 50 нг/мл Flt3 лиганда человека (Flt-3L) и 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF) и не содержит IL-6. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4 в концентрации 0,75 мкМ. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4, например Соединение 4, в концентрации 0,5 мкМ. В вариантах осуществления среда дополнительно содержит 1% L-глутамина и 2% пенициллина/стрептомицина. В вариантах осуществления среда для культивирования клеток не содержит сыворотки.

XII. Комбинированная терапия.

Настоящее раскрытие рассматривает применение описанных здесь молекул gРНК или клеток (например, гемопоэтических стволовых клеток, например клеток CD34+), модифицированных молекулами gРНК, описанных здесь, в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами и/или агентами. Таким образом, помимо применения молекул gРНК или клеток, модифицированных молекулами gРНК, описанных здесь, также возможно использование одной или несколько «стандартных» терапий для лечения гемоглобинопатии субъекта.

Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатий могут включать, например, дополнительную трансплантацию стволовых клеток, например трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток. Трансплантация стволовых клеток может быть аллогенной или аутологичной.

Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатии могут включать, например, переливание крови и/или хелирование железа (т.е. удаление железа). Известные агенты для хелирования железа включают, например, дефероксамин и деферазирокс. Одна или несколько дополнительных терапий для лечения гемоглобинопатий могут включать, например, добавки фолиевой кислоты или гидроксимочевины (например, 5-гидроксимочевину). Одной или несколькими дополнительными терапиями для лечения гемоглобинопатии может быть гидроксимочевина. В вариантах осуществления гидроксимочевину можно вводить в дозе, например, 10-35 мг/кг в день, например 10-20 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 10 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 10 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят в дозе 20 мг/кг в день. В вариантах осуществления гидроксимочевину вводят до и/или после (введения) клетки (или популяции клеток), например CD34+ клетки (или популяции клеток) по изобретению, например, как описано здесь.

Один или несколько дополнительных терапевтических агентов могут включать, например, анти-р-селектин антитело, например SelG1 (Selexys). Антитела к P-селектину описаны, например, в публикации PCT WO1993/021956, публикации PCT WO1995/34324, публикации РСТ WO2005/100402, публикации PCT WO2008/069999, публикации патентной заявки США US2011/0293617, патенте США №5800815, патенте США №6667036, патенте США №8945565, патенте США №8377440 и патенте США №9068001, содержание каждого из которых включено в настоящий документ полностью посредством ссылки.

Один или несколько дополнительных агентов могут включать, например, небольшую молекулу, активирующую фетальный гемоглобин. Примеры таких молекул включают TN1 (например, как описано в Nam, T. et al., ChemMedChem 2011, 6, 777-780, DOI: 10.1002/cmdc.201000505, содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки).

Одна или несколько дополнительных терапий могут также включают в себя облучение или другую абляционную терапию костного мозга, известную в данной области техники. Примером такой терапии является бусульфан. Такая дополнительная терапия может быть проведена перед введением в субъекта клеток по изобретению. В одном варианте осуществления способы лечения, описанные здесь (например, способы лечения, которые включают введение клеток (например, HSPC), модифицированных описанными здесь способами (например, модифицированными с помощью системы CRISPR, описанной здесь, например, для увеличения продукции HbF)), не включают стадию абляции костного мозга. В вариантах осуществления способы включают стадию частичной абляции абсорбции костного мозга.

Терапии, описанные здесь (например, включающие введение популяции HSPC, например HSPC, модифицированных с использованием системы CRISPR, описанной здесь), также могут быть объединены с дополнительным терапевтическим агентом. В одном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор HDAC, например, панобиностат. В одном варианте осуществления дополнительным терапевтическим агентом является соединение, описанное в публикации PCT № WO2014/150256, например, соединение, описанное в Таблице 1 WO2014/150256, например GBT440. Другие примеры ингибиторов HDAC включают, например, субероиланилид-гидроксамовую кислоту (SAHA). Один или несколько дополнительных агентов могут включать, например, ингибитор метилирования ДНК. Было показано, что такие агенты увеличивают индукцию HbF в клетках, имеющих пониженную активность BCL11a (например, Jian Xu et al., Science 334, 993 (2011), DOI: 0.1126/science.1211053, содержание которого включено в настоящий документ полностью посредством ссылки). Другие ингибиторы HDAC включают любой ингибитор HDAC, известный в данной области техники, например, трихостатин A, HC-токсин, DACI-2, FK228, DACI-14, депудицин, DACI-16, тубацин, NK57, MAZ1536, NK125, Scriptaid, Pyroxamide, MS-275, ITF-2357, MCG-D0103, CRA-024781, CI-994 и LBH589 (см., например, Bradner JE и др., PNAS, 2010 (том 107: 28), 12617-12622 содержание которого включено в настоящий документ полностью посредством ссылки).

Молекулы gРНК, описанные здесь, или клетки (например, гематопоэтические стволовые клетки, например клетки CD34+), модифицированные молекулами gРНК, описанными здесь, и сопутствующий терапевтический агент или совместная терапия могут быть введены совместно в общем составе или по отдельности. В случае отдельного введения молекулы gРНК, описанные здесь, или клетки, модифицированные молекулами gРНК, описанные здесь, могут вводиться до, после или одновременно с сопутствующим терапевтическим агентом или совместной терапией. Один агент может предшествовать или следовать введению другого агента с интервалами в пределах от минут до нескольких недель. В вариантах осуществления, где два или более различных видов терапевтических агентов вводятся субъекту по отдельности, в общем случае, нужно убедиться, что бы между введениями не было значительного промежутка времени, для того чтобы эти различные виды агентов все еще могли оказывать полезное комбинированное воздействие на ткани или клетки-мишени.

XIII. Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты

Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут присутствовать в нуклеиновых кислотах, например, в частности gРНК, но также и других формах РНК, например мРНК, iРНК или siРНК. Как описано здесь, «нуклеозид» определяется как соединение, содержащее молекулу сахара с пятью углеродами (пентозу или рибозу) или её производное, и органическое основание, пурин или пиримидин или его производное. Как описано здесь, «нуклеотид» определяется как нуклеозид, дополнительно содержащий фосфатную группу.

Модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды могут включать одно или несколько из списка:

(i) изменения, например, замещения одного или обоих несвязанных атомов кислорода фосфата и/или одного или нескольких связанных атомов кислорода в фосфодиэфирной цепи остова;

(ii) изменение, например, замещение составляющих кольца рибозы, например, 2'-гидроксила кольца рибозы;

(iii) замену большинства фосфатных фрагментов линкерами «дефосфо»;

(iv) модификация или замещение естественных нуклеотидных оснований, в том числе неканоническим нуклеотидным основанием;

(v) замену или модификацию рибозо-фосфатного остова;

(vi) модификацию 3'-конца или 5'-конца олигонуклеотида, например удаление, модификацию или замещение концевой фосфатной группы или конъюгацию фрагмента, кэпа или линкера; и

(vii) модификацию или замена сахара.

Перечисленные выше модификации могут быть скомбинированы для создания модифицированных нуклеозидов и нуклеотидов, которые могут иметь две, три, четыре или более модификаций. Например, модифицированный нуклеозид или нуклеотид может иметь модифицированный сахар и модифицированную нуклеотидное основание. В варианте осуществления каждое основание gРНК модифицировано, например, все основания имеют модифицированную фосфатную группу, например, все имеют фосфоротиоатную группу. В одном варианте осуществления все или практически все фосфатные группы одноцепочечной или модульной молекулы gРНК заменяются фосфоротиоатными группами. В вариантах осуществления один или несколько из пяти 3'-концевых оснований и/или одного или нескольких из пяти 5'-концевых оснований gРНК модифицируются фосфоротиоатной группой.

В одном варианте осуществления модифицированные нуклеотиды, например нуклеотиды, имеющие модификации, как описано здесь, могут быть включены в нуклеиновую кислоту, например «модифицированную нуклеиновую кислоту». В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты включают один, два, три или более модифицированных нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере примерно 5% (например, по меньшей мере, примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или примерно 100%) положений в модифицированной нуклеиновой кислоте являются модифицированными нуклеотидами.

Немодифицированные нуклеиновые кислоты могут быть подвержены деградации, например, клеточными нуклеазами. Например, нуклеазы могут гидролизовывать фосфодиэфирные связи нуклеиновых кислот. Соответственно, в одном аспекте модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут содержать один или несколько модифицированных нуклеозидов или нуклеотидов, например, для придания стабильности к нуклеазам.

В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут приводить к сниженному врожденному иммунному ответу при введении в популяцию клеток как in vivo, так и ex vivo. Термин «врожденный иммунный ответ» обозначает клеточный ответ на экзогенные нуклеиновые кислоты, включая одноцепочечные нуклеиновые кислоты, как правило, вирусного или бактериального происхождения, который выражается в индукции экспрессии и высвобождении цитокинов, в частности интерферонов, и гибели клеток. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут нарушать связывание нуклеиновой кислоты с основным партнером, взаимодействующим с канавкой. В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеозиды, модифицированные нуклеотиды и модифицированные нуклеиновые кислоты, описанные здесь, могут вызывать пониженный врожденный иммунный ответ при введении в популяцию клеток как in vivo, так и ex vivo, а также нарушать связывание нуклеиновой кислоты с основным партнером, взаимодействующим с канавкой.

Определения химических групп

Используемый здесь термин «алкил» означает ссылку на насыщенную углеводородную группу, линейную или разветвленную. Примеры алкильных групп включают метил (Me), этил (Et), пропил (например, n-пропил и изопропил), бутил (например, n-бутил, изобутил, трет-бутил), пентил (например, n-пентил, изопентил, неопентил) и так далее. Алкильная группа может содержать от 1 до примерно 20, от 2 до примерно 20, от 1 до примерно 12, от 1 до примерно 8, от 1 до примерно 6, от 1 до примерно 4 или от 1 до примерно 3 атомов углерода.

Используемый здесь термин «арил» относится к моноциклическим или полициклическим (например, имеющим 2, 3 или 4 конденсированных кольца) ароматическим углеводородам, таким как, например, фенил, нафтил, антраценил, фенантренил, инданил, инденил и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления арильные группы имеют от 6 до 20 атомов углерода.

Используемый здесь термин «алкенил» относится к алифатической группе, содержащей по меньшей мере одну двойную связь.

Используемый здесь термин «алкинил» относится к линейной или разветвленной углеводородной цепи, содержащей 2-12 атомов углерода и характеризующейся наличием одной или нескольких тройных связей. Примеры алкинильных групп включают этинил, пропаргил и 3-гексинил, но не ограничиваются ими.

Используемый здесь термин «арилалкил» или «аралкил» относится к алкильной группе, в которой атом алкильного водорода замещен арильной группой. Аралкил включает группы, в которых более одного атома водорода замещено арильной группой. Примерами «арилалкила» или «аралкила» являются бензил, 2-фенилэтил, 3-фенилпропил, 9-флуоренил, бензгидрил и тритил - группы.

Используемый здесь термин «циклоалкил» относится к циклическим, бициклическим, трициклическим или полициклическим неароматическим углеводородным группам, имеющим от 3 до 12 атомов углерода. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропил, циклопентил и циклогексил, но не ограничиваются ими.

Используемый здесь термин «гетероциклил» относится к моновалентному радикалу гетероциклической кольцевой системы. Типичные гетероциклилы включают тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, пирролидинил, пирролидонил, пиперидинил, пирролинил, пиперазинил, диоксанил, диоксоланил, диазепинил, оксазепинил, тиазепинил и морфолинил, но не ограничиваются ими.

Используемый здесь термин «гетероарил» относится к моновалентному радикалу гетероароматической кольцевой системы. Примеры гетероарильных групп включают имидазолил, оксазолил, тиазолил, триазолил, пирролил, фуранил, индолил, тиофенилпиразолил, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил, индолизинил, пуринил, нафтиридинил, хинолил и птеридинил, но не ограничиваются ими.

Модификации фосфатного остова

Фосфатная группа.

В некоторых вариантах осуществления фосфатная группа модифицированного нуклеотида может быть модифицирована заменой одного или нескольких атомов кислорода другим заместителем. Кроме того, модифицированный нуклеотид, например модифицированный нуклеотид, присутствующий в модифицированной нуклеиновой кислоте, в значительной степени может включать замену немодифицированной фосфатной части модифицированным фосфатом, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления модификация фосфатного остова может включать в себя изменения, которые приводят либо к незаряженному линкеру, либо к заряженному линкеру с несимметричным распределением заряда.

Примеры модифицированных фосфатных групп включают фосфоротиоат, фосфороселенаты, боранофосфаты, сложные эфиры боранофосфата, гидрофосфонаты, фосфорамидаты, алкил- или арилфосфонаты и фосфортриэфиры. В некоторых вариантах осуществления один из атомов кислорода фосфатного остова, не входящий в состав мостиков, может быть заменен на любой из следующих групп: сера (S), селен (Se), BR₃ (где R может быть, например, водородом, алкилом, или арилом), C (например, алкильная группа, арильная группа и тому подобное), H, NR2 (где R может быть, например, водородом, алкилом или арилом) или OR (где R может быть, например, алкилом или арилом). Атом фосфора в немодифицированной фосфатной группе является ахиральным. Однако замена одного из атомов кислорода фосфатного остова, не входящих в состав мостиков, одним из вышеуказанных атомов или групп атомов может привести к хиральному атому фосфора; то есть атом фосфора в фосфатной группе, модифицированной таким образом, представляет собой стереогенный центр. Стереогенный атом фосфора может иметь либо конфигурацию «R» (обозначенную здесь Rp), либо конфигурацию «S» (обозначенную здесь Sp).

В фосфордитиоатах оба атома кислорода, не входящие в состав мостика, замещены серой. Центр фосфора в фосфородитиоатах является ахиральным, что препятствует образованию олигорибонуклеотидных диастереомеров. В некоторых вариантах осуществления модификации одного или обоих атомов кислорода, не входящих в состав мостиков, могут также включать замену атомов кислорода, не входящих в состав мостиков, группой, независимо выбранной из S, Se, B, C, H, N и OR (где R, например, представляетт собой алкил или арил).

Фосфатный линкер также может быть модифицирован путем замены атома кислорода, входящего в состав мостика (то есть кислорода, который связывает фосфат с нуклеозидом), азотом (мостиковые фосфорамидаты), серой (мостиковые фосфоротионаты) и углеродом (мостиковые метиленфосфонаты). Может быть произведена замена любого из связывающих атомов кислорода, либо сразу обоих атомов кислорода линкера.

Замена фосфатной группы.

Фосфатную группу можно заменить коннекторами, не содержащими фосфора. В некоторых вариантах осуществления заряженная фосфатная группа может быть заменена нейтральным фрагментом.

Примеры фрагментов, которые могут заменить фосфатную группу, могут включать, без ограничения, например, метилфосфонат, гидроксиламино, силоксаны, карбонаты, карбоксиметил, карбамат, амид, тиоэфир, этиленоксидный линкер, сульфонат, сульфонамид, тиоформальцеталь, формацеталь, оксим, метиленимино, метиленметилимино, метиленгидразо, метилендиметилгидразо и метиленоксиметилимино.

Замена рибозно-фосфатного остова

Структуры, имитирующие нуклеиновые кислоты, также могут быть сконструированы при замещении фосфатного линкера и сахара рибозы нуклеозидным или нуклеотидным суррогатом, устойчивым к нуклеазе. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидные основания могут быть привязаны суррогатным остовом. Примеры могут включать такие суррогаты нуклеиновых кислот как морфолино, циклобутил, пирролидин и пептид нуклеиновой кислоты (PNA), но не ограничиваться ими.

Модификации рибозы

Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут включать одну или несколько модификаций рибозной группы. Например, 2'-гидроксильная группа (OH) может быть модифицирована или заменена несколькими различными «окси» или «дезокси» заместителями. В некоторых вариантах осуществления модификации 2'-гидроксильной группы могут повысить стабильность нуклеиновой кислоты, поскольку гидроксил больше не может подвергаться депротонизации с образованием 2'-алкоксидного иона. 2'-алкоксид может катализировать деградацию путем внутримолекулярной нуклеофильной атаки на линкерный атом фосфора.

Примеры модификаций типа «окси» по 2'-гидроксильной группе могут включать алкокси или арилокси (OR, где «R» может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром); полиэтиленгликоли (ПЭГ), 0(CH₂CH₂0)_nCH₂CH₂OR, где R может быть, например, H или необязательно замещенным алкилом, и n может быть целым числом от 0 до 20 (например, от 0 до 4, от 0 до 8, от 0 до 10, от 0 до 16, от 1 до 4, от 1 до 8, от 1 до 10, от 1 до 16, от 1 до 20, от 2 до 4, от 2 до 8, от 2 до 10, от 2 до 16, от 2 до 20, от 4 до 8, от 4 до 10, от 4 до 16 и от 4 до 20). В некоторых вариантах осуществления модификация типа «окси» по 2' гидроксильной группе может включать «закрытые» нуклеиновые кислоты ("locked" nucleic acids LNA), в которых 2'-гидроксил может быть связан, например, с помощью C_i-6-алкиленового или C_j-6 гетероалкиленового мостика, c 4'-углеродом того же рибозного сахара, где типичные мостики могут включать метиленовые, пропиленовые, эфирные или амино-мостики; O-амино (где амино может быть, например, NH₂, алкиламино, диалкиламино, гетероциклилом, ариламино, диариламино, гетероариламино или дигетероариламино, этилендиамин или полиамино) и аминоалкокси, 0(CH₂)_n-амино, (где амино может быть, например, NH₂, алкиламино, диалкиламино, гетероциклил, ариламино, диариламино, гетероариламино или дигетероариламино, этилендиамин или полиамино). В некоторых вариантах осуществления модификация типа «окси» по 2'-гидроксильной группе может включать метоксиэтильную группу (MOЭ), (OCH₂CH₂OCH₃, например, производное ПЭГ).

Модификации типа «дезокси» могут включать водород (то есть дезоксирибозные сахара, например, на выступающих участках неполной dsРНК); галоген (например, бром, хлор, фтор или иод); амино (где амино может быть, например, NH₂, алкиламино, диалкиламино, гетероциклилом, ариламино, диариламино, гетероариламино, дигетероариламино или аминокислотой); NH(CH₂CH₂NH)nCH₂CH₂-амино (где амино может быть, например, как описано здесь), -NHC(0)R (где R может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), циано; меркапто; алкил-тио-алкил; тиоалкокси; и алкил, циклоалкил, арил, алкенил и алкинил, который может быть необязательно замещен, например, аминогруппой, как описано здесь.

Группа сахара также может содержать один или несколько атомов углерода, которые имеют противоположную стереохимическую конфигурацию, чем таковая соответствующего углерода в рибозе. Таким образом, модифицированная нуклеиновая кислота может включать нуклеотиды, содержащие, например, арабинозу, в качестве сахара. Нуклеотидный «мономер» может иметь альфа-связь в положении 1’ сахара, например, быть альфа-нуклеозидом. Модифицированные нуклеиновые кислоты могут также включать «абазивные» сахара, которые не имеют азотистого основания при С-. Эти абазивные сахара также могут быть дополнительно модифицированы по одному или нескольким атомам каркаса сахара. Модифицированные нуклеиновые кислоты могут также включать один или несколько сахаров в L-форме, например, L-нуклеозиды.

Как правило, РНК включает в себя сахар рибозу, которая представляет собой 5-членное кольцо, имеющее кислород. Типичные модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды могут включать, без ограничения, замещение атома кислорода в рибозе (например, серой (S), селеном (Se) или алкиленом, таким как, например, метилен или этилен); введение двойной связи (например, при замене рибозы циклопентенилом или циклогексенилом); сокращение кольца рибозы (например, с образованием 4-членного кольца циклобутана или оксетана); удлинение кольца рибозы (например, для образования 6- или 7-членного кольца, имеющего дополнительный углерод или гетероатом, такой как, например, ангидрид, альтритол, маннитол, циклогексанил, циклогексенил и морфолино, который также имеет фосфорамидатный остов). В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотиды могут включать в себя мульти-циклические формы (например, трициклические и «раскрытые/разблокированные» формы, такие как гликолевая нуклеиновая кислота (GNA) (например, R-GNA или S-GNA, где рибоза заменена гликолевыми единицами, присоединенными по фосфодиэфирным связям), треозо-нуклеиновая кислота (TNA, где рибоза замещена α-L-треофуранозил-(3'→2')).

Модификации азотистых оснований

Модифицированные нуклеозиды и модифицированные нуклеотиды, описанные здесь, которые могут быть включены в модифицированную нуклеиновые кислоты, могут содержать модифицированное азотистое основание нуклеотида (далее по тексту упоминается как «нуклеотидное основание»). Примеры оснований включают аденин (А), гуанин (G), цитозин (C) и урацил (U), но не ограничиваются ими. Эти нуклеотидные основания могут быть модифицированы или полностью заменены, для получения модифицированных нуклеозидов и модифицированных нуклеотидов, которые могут быть включены в модифицированные нуклеиновые кислоты. Нуклеотидное основание нуклеотида может быть независимо выбрано из пурина, пиримидина, пуринового или пиримидинового аналога. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная основа может включать, например, природные или синтетические производные основания.

Урацил

В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный урацил. Иллюстративные нуклеотиды и нуклеозиды, имеющие модифицированный урацил, включают без ограничения псевдоуридин (ψ), пиридин-4-он-рибонуклеозид, 5-аза-уридин, 6-аза-уридин, 2-тио-5-аза-уридин, 2-тиоуридин ((s2U), 4-тио-уридин (s4U), 4-тио-псевдоуридин, 2-тио-псевдоуридин, 5-гидрокси-уредин (ho⁵U), 5-аминоаллил-уридин, 5-галогенуридин (например, 5-йод-уридин или 5-бром-уридин), 3-метил-уридин (m³U), 5-метокси-уридин (mo⁵U), уридин-5-оксиуксусная кислота (cmo⁵U), метиловый эфир уридина 5- оксиуксусной кислоты (mcmo⁵U), 5-карбоксиметил-уридин (cm^sU ), 1-карбоксиметил-псевдоуридин, 5-карбоксигидроксиметил-уридин (chm⁵U), метиловый эфир 5-карбоксигидроксиметил-уридина (mchm⁵U), 5-метоксикарбонилметил-уридин (mcm⁵U), 5- метоксикарбонилметил-2-тио-уридин (mcm⁵s2U) 5-аминометил-2-тиоуридин (nm⁵s2U), 5-метиламинометил-уридин (mnm⁵U), 5-метиламинометил-2-тио-уридин (mnm⁵s2U), 5-метиламинометил-2-селеноуридин (mnm⁵se²U), 5-карбамоилметил-уридин (ncm⁵U), 5-карбоксиметиламинометил-уридин (cmnm⁵U), 5-карбоксиметиламинометил-2-тио-уридин (cmnm \s2U), 5-пропинил-уридин, 1-пропинил-псевдуридин, 5-тауринометил-уридин (xcm⁵U), 1-тауринометил-псевдоуридин, 5-тауринометил-2-тио-уридин (Trn⁵s2U), 1-тауринометил-4-тио-псевдоуридин, 5-метил-уридин (Trn⁵s2U, то есть нуклеотидное основание дезокситимин), 1-метил-псевдоуридин (ιτι'ψ). 5-метил-2-тиоуридин (m⁵s2U), 1-метил-4-тио-псевдоуридин (m's\|/), 4-тио-1-метил-псевдоуридин, 3-метил-псевдоуридин (m'V), 2-тио-1-метил-псевдоуридин, 1-метил-1-деаза-псевдоуридин, 2-тио-1-метил-1-деаза-псевдоуридин, дигидроуридин (D), дигидропсевдоуридин, 5,6-дигидроуридин, 5-метилдигидроуридин (m⁵D), 2-тиодигидроуридин, 2-тиодигидропсевдоуридин, 2-метоксиуридин, 2-метокси-4-тиоуридин, 4-метокси-псевдоуридин, 4-метокси-2-тио-псевдоуридин, N-метил-псевдоуридин, 3-(3-амино-3-карбоксипропил)уридин (acp³U), 1-метил-3-(3-амино-3-карбоксипропиловый псевдоуридин 5-(изопентениламинометил)уридин (inm⁵U), 5- (изопентениламинометил)) - 2-тио-уридин ((inm⁵s2U), а-тиоуридин, 2'-0-метил-уридина (Urn), 5,2'-0-диметил-уридин (m⁵Um), 2'-0-метил-псевдоуридин (ψπι), 2-тио-2'-0-метил-уридин (s2Um), 5-метоксикарбонилметил-2'-O-метил-уридин (mcm ⁵Um), 5-карбамоилметил-2'- 0-метил-уридина (ncm ⁵Um), 5-карбоксиметиламинометил-2'-0-метил-уридин (cmnm ⁵Um), 3,2'-0-диметил-уридин (m³Um), 5- (изопентениламинометил)-2'-0-метил-уридин (inm ⁵Um), 1-тио-уридин, дезокситимидин, 2'-F-ара-уридин, 2'-F-уридин, 2'-OH-ара-уридин, 5-(2-карбометоксивинил)уридин, 5-[3-(1E-пропениламино) уридин, пиразоло[3,4-d] пиримидины, ксантин и гипоксантин.

Цитозин

В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный цитозин. Примеры нуклеотидов и нуклеозидов, имеющих модифицированный цитозин, включают 5-азацитидин, 6-аза-цитидин, псевдоизоцитидин, 3-метилцитидин (m³C), N4-ацетил-цитидин (действие), 5- формилцитидин (f⁵C), N4-метилцитидин (m⁴C), 5-метилцитидин (m⁵C), 5-галогенцитидин (например, 5-йод-цитидин), 5-гидроксиметилцитидин (hm⁵C), 1-метил-псевдоизоцитидин, пирролоцитидин, пирролопсевдоизоцитидин, 2-тиоцитидин (s2C), 2-тио-5-метилцитидин, 4-тиопсевдоизоцитидин, 4-тио-1-метил-псевдоизоцитидин, 4-тио-1-метил-1-деаза-псевдоцитидин, 1-метил-1-деаза-псевдоизоцитидин, зебуларин, 5-аза-зебуларин, 5-метилзебуларин, 5-аза-2-тио-зебуларин, 2-тио-зебуларин, 2-метокси-цитидин, 2-метокси-5-метилцитидин, 4-метокси-псевдоизоцитидин, 4-метокси-1-метил-псевдоизоцитидин, лизидин (k²C), а-тиоцитидин, 2'-0-метилцитидин (Cm), 5,2'-O-диметилцитидин (m⁵Cm), N4-ацетил-2'-0-метилцитидин (ac⁴Cm), N4,2'-0-диметилцитидин (m⁴Cm), 5 -формил-2'-О-метилцитидин (f ⁵Cm), N4, N4,2'-0-триметилцитидин (m⁴ ₂Cm), 1-тиоцитидин, 2'-F-арацитидин, 2'-F-цитидин и 2'-OH-ара-цитидин, но не ограничиваются ими.

Аденин

В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный аденин. Иллюстративные нуклеотидные основания и нуклеозиды, имеющие модифицированный аденин, включают 2-аминопурин, 2,6-диаминопурин, 2-амино-6-гало-пурин (например, 2-амино-6-хлорпурин), 6-галоген-пурин (например, 6-хлор-пурин), 2-амино-6-метил-пурин, 8-азидоаденозин, 7-деаза-аденин, 7-деаза-8-аза-аденин, 7-деаза-2-амино-пурин, 7-деаза-8-аза-2-аминопурин, 7-дезаза-2,6-диаминопурин, 7-деаза-8-аза-2,6-диаминопурин, 1-метиладенозин (m'A), 2-метил-аденин (m A), N6-метиладенозин (m⁶A), 2-метилтио-N6-метиладенозин (ms²i⁶A), N6-изопентенил-аденозин (i⁶A), 2-метилтио-N6-изопентенил -аденозин (ms²i⁶A), N6- (цис-гидроксиизопентенил)аденозин (io⁶A), 2-метилтио-N6- (цис-гидроксиизопентенил)аденозин (ms2io⁶A), N6-глицинилкарбамоил-аденозин (g⁶A), N6-треонилкарбамоил-аденозин (t⁶A), N6-метил-N6-треонилкарбамоил-аденозин (m⁶t⁶A), 2-метилтио-N6-треонилкарбамоил-аденозин (ms²g⁶A), N6, N6-диметиладенозин (m⁶ ₂A), N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин (hn⁶A), 2-метил тио-N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин (ms2hn⁶A), N6-ацетиладенозин (ac⁶A), 7-метил-аденин, 2-метилтиоаденин, 2-метоксиаденин, a-тиоаденозин, 2'-0-метиладенозин (Am), N6,2'-0-диметиладенозин (m⁵Am), N6-метил-2'-дезоксиаденозин, N6, N6,2'-0-триметиладенозин (m⁶ ₂Am), 1,2'-O-диметиладенозин (m' Am), 2'-0-рибозиладенозин (фосфат) ((Ar(p)), 2-амино-N6-метилпурин, 1-тиоаденозин, 8-азидоаденозин, 2'-F-ара-аденозин, 2'-F-аденозин, 2'-OH-ара-аденозин и N6-(19-аминопентаоксанадецил)-аденозин, но не ограничиваются ими.

Гуанин

В некоторых вариантах осуществления модифицированная нуклеотидная основа представляет собой модифицированный гуанин. Типичные нуклеотиды и нуклеозиды, имеющие модифицированный гуанин, включают инозин (I), 1-метил-инозин (m 'l), виозин (imG), метилвиозин (mimG), 4-диметил-виозин ((imG- 14), изовиозин (imG2), вибутозин (yW), пероксивибутозин (o₂yW), гидроксивибутозин (OHyW), недостаточно модифицированный гидроксивибутозин  (OHyW*), 7-деаза-гуанозин, куозин(Q), эпоксикуозин (oQ), галактозил-куозин (galQ), маннозил-куозин (manQ), 7-циано-7-деаза-гуанозин (preQ₀), 7-аминометил-7-деаза-гуанозин (preQi), археозин (G+), 7-деаза-8-аза-гуанозин, 6-тиогуанозин, 6-тио-7-дезаза-гуанозин, 6-тио-7-деаза-8-аза-гуанозин, 7-метилгуанозин (m⁷G), 6-тио-7-метилгуанозин, 7-метил-инозин, 6-метокси-гуанозин, 1-метил-гуанозин (m'G), N2-метилгуанозин (m²G), N2,N2-диметилгуанозин (m² ₂G), N2,7-диметилгуанозин (m²,7G), N2,N2,7-диметилгуанозин (m²,2,7G), 8-оксогуанозин, 7-метил-8-оксогуанозин, 1-тиогуанозин, N2-метил-6-тиогуазин, N2,N2-диметил-6-тио-гуанозин, а-тиогуанозин, 2'-0-метилгуанозин (Gm), N2-метил-2'-0-метилгуанозин (m¾m), N2,N2-диметил-2'-O-метил-гуанозин (m² ₂Gm), 1-метил-2'-0-метилгуанозин (m'Gm), N2,7-диметил-2'-O-метилгуанозин (m²,7Gm), 2'-0-метил-инозин (Im), 1,2'-O-диметил-инозин (m'lm), 0⁶-фенил-2'-дезоксиинозин, 2'-0-рибозилгуанозин (фосфат) (Gr(p)), 1 -тиогуанозин, 0⁶-метил] гуанозин, 0⁶-метил-2'-дезоксигуанозин, 2'-F-арагуанозин и 2'-F-гуанозин, но не ограничиваются ими.

Модифицированные gРНК

В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеиновые кислоты могут представлять собой модифицированные gРНК. В некоторых вариантах осуществления gРНК могут быть модифицированы на 3'-конце. В этом варианте осуществления gРНК могут быть модифицированы по 3'-концевой U-рибозе. Например, две концевые гидроксильные группы U-рибозы могут быть окислены до альдегидных групп и сопутствующего открытия рибозного кольца с получением модифицированного нуклеозида, где U может быть немодифицированным или модифицированным уридином.

В другом варианте осуществления 3'-концевой U может быть модифицирован 2'3'-циклическим фосфатом, где U может быть немодифицированным или модифицированным уридином. В некоторых вариантах осуществления молекулы gРНК могут содержать 3'-нуклеотиды, стабилизированные против деградации, то есть, например, содержать один или нескольких модифицированных нуклеотидов, описанных здесь. В этом варианте осуществления, например, уридины могут быть заменены модифицированными уридинами, например 5-(2-амино) пропил-уридином и 5-бром-уридином, или любым из модифицированных уридинов, описанных здесь; аденозины и гуанозины могут быть заменены модифицированными аденозинами и гуанозинами, например, с модификациями в 8-положении, например 8-бромгуанозином, или любыми из модифицированных аденозинов или гуанозинов, описанных здесь. В некоторых вариантах осуществления деаза-нуклеотиды, например, 7-деаза-аденозин, могут быть включены в gРНК. В некоторых вариантах осуществления O-и N-алкилированные нуклеотиды, например N6-метиладенозин, могут быть включены в gРНК. В некоторых вариантах осуществления могут быть включены рибонуклеотиды с модифицированным сахаром, например, в котором 2'-OH-группа замещена группой, выбранной из списка: H, -OR, -R (где R может быть, например, метилом, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), галоген, -SH, -SR (где R может быть, например, алкилом, циклоалкилом, арилом, аралкилом, гетероарилом или сахаром), амино (где амино может быть, например, NH₂, алкиламино, диалкиламино, гетероциклил, ариламино, диариламино, гетероариламино, дигетероариламино или аминокислота); или циано (-CN). В некоторых вариантах осуществления фосфатный остов может быть модифицирован, как описано здесь, например, фосфоротиоатной группой. В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды в выступающей части gРНК могут независимо друг от друга быть модифицированными или немодифицированными, включая модифицикации по 2'-сахару, такие как 2-F 2'-0-метил, тимидин (T), 2'-O-метоксиэтил-5-метилуридин (Teo), 2'-O-метоксиэтиладенозин (Aeo), 2'-O-метоксиэтил-5-метилцитидин (m5Ceo) и любые их комбинации, но не ограничиваясь ими.

В одном варианте осуществления один или несколько или все нуклеотиды в одноцепочечном выступе молекулы РНК, например молекулы gРНК, являются дезоксинуклеотидами.

Фармацевтические композиции

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать описанную здесь молекулу gРНК, например, множество молекул рРНК, как описано здесь, или клетку (например, популяцию клеток, например, популяцию гемопоэтических стволовых клеток, например CD34+ клеток), содержащие одну или более клеток, модифицированных одной или несколькими молекулами gРНК, описанными здесь, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически или физиологически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. Такие композиции могут содержать буферы, такие как нейтральный забуференный физиологический раствор, фосфатный забуференный физиологический раствор и тому подобное; углеводы, такие как глюкоза, манноза, сахароза или декстраны, маннит; белки; полипептиды или аминокислоты, такие как глицин; антиоксиданты; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА или глутатион; адъюванты (например, гидроксид алюминия); и консерванты. Композиции по настоящему изобретению в одном аспекте составлены для внутривенного введения.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить способом, соответствующим заболеванию, подлежащему лечению (или предотвращению). Количество и частота введения будут определяться такими факторами, как состояние пациента, тип и тяжесть заболевания пациента, хотя соответствующие дозы могут быть определены клиническими испытаниями.

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция по существу не содержит примесей, например,, нет регистрируемых уровней примеси, например, выбранной из группы, состоящей из эндотоксина, микоплазмы, мышиных антител, объединенной человеческой сыворотки, альбумина бычьей сыворотки, бычьей сыворотки, компонентов среды для культивирования клеток, нежелательных компонентов системы CRISPR, бактерий и грибков. В одном варианте осуществления бактерия принадлежит по меньшей мере, к одному виду, выбранному из группы, состоящей из Alcaligenes faecalis, Candida albicans, Escherichia coli, Haemophilus influenza, Neisseria meningitides, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia, и Streptococcus pyogenes группы A.

Введение надлежащих композиций может быть выполнено любым удобным способом, в том числе путем аэрозольной ингаляции, инъекции, приема внутрь, трансфузии, имплантации или трансплантации. Композиции, описанные здесь, могут вводиться пациенту с помощью трансартериального, подкожного, внутрикожного, внутриматочного, интранодального, внутримедулярного, внутримышечного введения, внутривенной (i.v.) инъекцией или внутрибрюшинно. В одном аспекте композиции по настоящему изобретению вводят пациенту путем внутрикожной или подкожной инъекции. В одном аспекте клеточные композиции по настоящему изобретению вводят с помощью внутривенной инъекции.

Дозировка для вышеуказанных составов, подлежащих введению пациенту, варьируется в зависимости от деталей конкретного состояния, подлежащего лечению и субъекта лечения. Подбор дозировки для введения человеку может осуществляться в соответствии с практикой, принятой в данной области техники.

Клетки.

Изобретение также относится к клеткам, содержащим молекулу gРНК по изобретению, или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанные молекулы gРНК.

В одном аспекте клетки представляют собой клетки, полученные способом, описанным здесь.

В вариантах осуществления клетки представляют собой гематопоэтические стволовые клетки (например, гемопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники (прогениторные) HSPC), например, стволовые клетки CD34+. В вариантах осуществления клетки представляют собой стволовые клетки CD34+/CD90+. В вариантах осуществления клетки представляют собой CD34+/CD90-стволовые клетки. В вариантах осуществления клетки представляют собой гемопоэтические стволовые клетки человека. В вариантах осуществления клетки являются аутологичными. В вариантах осуществления клетки являются аллогенными.

В вариантах осуществления клетки получены из костного мозга, например, аутологичного костного мозга. В вариантах осуществления клетки получают из периферической крови, например, мобилизованной периферической крови, например аутологичной мобилизованной периферической крови. В вариантах осуществления, использующих мобилизованную периферическую кровь, клетки выделяют от пациентов, которым вводили мобилизирующий агент. В вариантах осуществления мобилизирующим агентом является G-CSF. В вариантах осуществления мобилизирующим агентом является Plerixafor® (AMD3100). В вариантах осуществления клетки получают из пуповинной крови, например, аллогенной пуповинной крови.

В вариантах осуществления клетки являются клетками млекопитающего. В вариантах осуществления клетки являются клетками человека.

В одном аспекте изобретение предоставляет клетку, содержащую модификацию или изменение, например, индел, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов)) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, например, как часть системы CRISPR, как описано здесь. В вариантах осуществления клетка представляет собой клетку CD34+. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, сохраняет способность дифференцироваться в клетки нескольких линий, например, сохраняет способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, прошла или может пройти по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или, по меньшей мере, 10 или более раундов удвоений в культуре, например, в культуре, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например, Соединение 4. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, прошла или может пройти по меньшей мере 5, например, примерно 5, раундов удвоения в культуре, например, в культуре, содержащей молекулы соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, например, Соединения 4. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, которая проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, на уровне экспрессии и/или уровне белка), например, по меньшей мере, на 20% увеличение уровня белка гемоглобина плода по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, который проявляет повышенный уровень гемоглобина плода ( например, на уровне экспрессии и/или уровне белка) по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой, например, производит не менее 6 пикограмм, например, по меньшей мере 7 пикограмм, по меньшей мере 8 пикограмм, по меньшей мере 9 пикограмм или по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина. В вариантах осуществления изменённая или модифицированная клетка, например клетка CD34+, проявляет и/или может дифференцироваться в клетку, например, в клетку эритроидной линии, например, в эритроцит, которая проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина (например, на уровне экспрессии и/или уровне белка) по сравнению с аналогичной немодифицированной или неизменённой клеткой, и, например, составляет от примерно 6 до примерно 12, от примерно 6 до примерно 7, от примерно 7 до примерно 8, от примерно 8 до примерно 9, от примерно 9 до примерно 10, от примерно 10 до примерно 11 или от примерно 11 до примерно 12 пикограмм фетального гемоглобина.

В одном аспекте изобретение предоставляет популяцию клеток, содержащих клетки, имеющие модификацию или изменение, например, индел, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, введенным в указанные клетки, например, как часть системы CRISPR, как описано здесь. В вариантах осуществления по меньшей мере 50%, например, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% клеток популяции имеют модификацию или изменение (например, имеют по меньшей мере одну модификацию или изменение), например, как определено NGS, например, как описано здесь, например, на второй день после введения системы gРНК и/или CRISPR по изобретению. В вариантах осуществления по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере, 99% клеток популяции имеют модификацию или изменение (например, имеют по меньшей мере одну модификацию или изменение), например, как определено NGS, например, как описано здесь, например, на второй день после введения gРНК и/или системы CRISPR по изобретению. В вариантах осуществления популяция клеток включает клетки CD34+, например, включает по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 98% CD34+ клеток. В вариантах воплощения популяция клеток, включающих измененные или модифицированные клетки, например CD34+ клетки, сохраняет способность развиваться в, например, дифференцироваться в клетки множественных линий, например, сохраняет способность развиваться в, например, дифференцироваться в клетки эритроидной линии. В вариантах осуществления популяция клеток, например, популяция CD34+ клеток, прошла или может пройти по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или, по меньшей мере, 10 или более раундов удвоения популяции в культуре, например, в культуре, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, например Соединение 4. В вариантах осуществления популяция измененных или модифицированных клеток, например, популяция CD34+ клеток, прошла или способна пройти, по меньшей мере, 5, например, примерно 5, раундов удвоения популяции в культуре, например, в культуре, содержащей молекулы соединения, способствующего экспансии стволовых клеток, например, как описано здесь, например, Соединение 4. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих измененные или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка), например, по меньшей мере на 20% повышение уровня белка фетального гемоглобина плода по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих изменённые или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка) по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками, например, содержат клетки, которые производят по меньшей мере 6 пикограмм, например, по меньшей мере 7 пикограмм, по меньшей мере 8 пикограмм, не менее 9 пикограмм или по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления количество клеток, содержащих измененные или модифицированные клетки, например, клетки CD34+, демонстрируют и/или могут дифференцироваться в популяцию клеток, например, в популяцию клеток эритроидной линии, например, в популяцию эритроцитов, которая демонстрирует повышенный уровень фетального гемоглобина плода (например, уровень экспрессии и/или уровень белка) по сравнению с аналогичными немодифицированными или неизменёнными клетками, например, содержит клетки, которые производят от примерно 6 до примерно 12, от примерно 6 до примерно 7, от примерно 7 до примерно 8, от примерно 8 до примерно 9, примерно 9 до примерно 10, от примерно 10 до примерно 11 или от примерно 11 до примерно 12 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.

В вариантах воплощения популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e3 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e4 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e5 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е6 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e7 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e8 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е9 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e10 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e11 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1e12 клеток. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, примерно 1е13 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9е6 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9е7 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1е8 клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществлений совокупность клеток может содержать по меньшей мере примерно 50% (например, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или, по меньшей мере, примерно 99%) HSPC, например, CD34+ клеток. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления популяция клеток может содержать примерно 60% HSPC, например, CD34+ клеток. В одном варианте осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e7 клеток и содержит примерно 2e7 HSPC, например, CD34+ клеток.

В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1e6 HSPC, например, CD34+ клеток на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1,5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит, по меньшей мере, приблизительно 1e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 6e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 7e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 8e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 9e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 1e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 2е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 3e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 4e8 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит по меньшей мере примерно 5e8 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.

В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1,5e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2e6 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 6e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 7e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 8e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 9e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 6e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 7e7 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 8e7 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 9e7 HSPCs, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 1е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 2е8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 3e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 4e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит примерно 5e8 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.

В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описанный здесь, включает от примерно 2e6 до примерно 10e6 HSPC, например, CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены. В вариантах осуществления популяция клеток, например, как описано здесь, содержит от 2e6 до 10e6 HSPC, например CD34+ клеток, на килограмм массы тела пациента, которому они должны быть введены.

Клетки по изобретению могут содержать gРНК молекулу по настоящему изобретению или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу gРНК, и молекулу Cas9 по настоящему изобретению или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанную молекулу Cas9. В одном варианте осуществления клетки по настоящему изобретению могут содержать комплекс рибонуклеопротеина (RNP), содержащего молекулу gРНК по изобретению и молекулу Cas9 по изобретению. Клетки по изобретению предпочтительно модифицируются с целью включения молекулы gРНК по изобретению ex vivo, например, способом, описанным здесь, например, путем электропорации.

Клетки по изобретению включают клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, снижена или ингибирована путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень экспрессии BCL11a по сравнению с немодифицированными клетками. В качестве другого примера клетки по настоящему изобретению могут иметь повышенный уровень экспрессии фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированными клетками. В качестве другого примера, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень экспрессии бета-глобина по сравнению с немодифицированными клетками. Альтернативно, или, кроме того, клетки по изобретению может вызвать, например, дифференцировку в другой тип клетки, например эритроцит, который имеет пониженный уровень экспрессии BCL11a по сравнению с клетками, дифференцированными от немодифицированных клеток. Альтернативно, или, кроме того, клетка по изобретению может создавать, например, дифференцироваться в другой тип клетки, например эритроцит, который имеет повышенный уровень экспрессии гемоглобина плода по сравнению с клетками, дифференцированными от немодифицированных клеток. Альтернативно, или, кроме того, клетки по изобретению может создавать, например, дифференцироваться в другой тип клеток, например эритроциты, который имеет сниженный уровень экспрессии бета-глобина по сравнению с дифференцированными клетками, происходящими от немодифицированных клеток.

Клетки по изобретению включает клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, снижена или ингибирована путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь пониженный уровень бета-гемоглобина, например, мутантного или бета-гемоглобина дикого типа, по отношению к экспрессии гена в немодифицированных клетках. В другом аспекте изобретение относится к клеткам, полученных, например, от клеток, в которые вводилась система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению. В таких аспектах клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, могут не проявлять пониженный уровень бета-гемоглобина, например мутантного или бета-гемоглобина дикого типа, но клетки, происходящие, например, дифференцированные от указанных клеток проявляют сниженный уровень бета-гемоглобина, например мутантного или бета-гемоглобина дикого типа. В вариантах осуществления формирование клеток, т.е. дифференцировка, выполняется in vivo (например, у пациента). В вариантах осуществления клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, представляют собой клетки CD34+, а клетки, полученные, например, дифференцированные из них, принадлежат к эритроидной линии, например эритроциты (красные кровяные клетки).

Клетки по изобретению включают клетки, в которых экспрессия одного или нескольких генов была изменена, например, увеличена или улучшена путем введения системы CRISPR, содержащей gРНК по изобретению. Например, клетки по настоящему изобретению могут иметь повышенный уровень экспрессии фетального гемоглобина по сравнению с немодифицированными клетками. В другом аспекте изобретение относится к клеткам, которые получены, например, из клеток, в которых введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению. В таких аспектах клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, не могут проявлять повышенный уровень фетального гемоглобина, но клетки, происходящие от них, например, дифференцированные от указанных клеток, проявляют повышенный уровень фетального гемоглобина. В вариантах осуществления деривация, например, дифференцировка, выполняется in vivo (например, у пациента). В вариантах осуществления клетки, в которые была введена система CRISPR, содержащая gРНК по изобретению, представляют собой клетки CD34+, а клетки, полученные, например, дифференцированные из них, принадлежат к эритроидной линии, например красные кровяные клетки.

В другом аспекте изобретение относится к клеткам, которые включают индел (например, внутри) или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида(ов)) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, введенным в указанную клетку. В вариантах осуществления индел представляет собой индел сдвига рамки считывания. В вариантах осуществления индел представляет собой индел, указанный в Таблице 15. В вариантах осуществления индел представляет собой индел, указанный в Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37. В вариантах осуществления изобретение относится к популяции клеток, например, как описано здесь, при этом совокупность клеток содержит клетки, имеющие индел, представленный в Таблице 15. В вариантах осуществления изобретение относится к популяции клеток, например, как описано здесь, при этом популяция клеток включает клетки, имеющие инделы, перечисленные в Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37.

В одном аспекте изобретение относится к популяции клеток, например, к популяции HSPC, которая содержит клетки, которые включают в себя индел, например, как описано здесь, например, индел или профиль инделов, описанных на Фиг. 25, в Таблице 15, Таблице 26, Таблице 27 или Таблице 37, внутри или вблизи (например, в пределах 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной молекуле gРНК или молекулам gРНК, например, как описано здесь, вводимой в указанные клетки, например, как описано здесь. В вариантах осуществления индел представляет собой индел сдвига рамки считывания. В вариантах осуществления 20%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 30%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 40%-100% клеток указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 50-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 60%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 70%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 80%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления 90%-100% клеток популяции включают указанный индел или инделы. В вариантах осуществления популяция клеток сохраняет способность дифференцироваться в несколько типов клеток, например, сохраняет способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например в эритроциты. В вариантах осуществления отредактированные и дифференцированные клетки (например, красные кровяные клетки) сохраняют способность к воспроизводству, например, к увеличению численности по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере В 25 раз, по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 35 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 45 раз, по меньшей мере в 50 раз или более через 7 дней в среде, способствующей дифференцировке эритроидов (EDM), например, как описано в Примерах и/или увеличивать численность по меньшей мере в 30 раз, по меньшей мере в 35 раз, по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 45 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 55 раз, по меньшей мере в 60 раз, по меньшей мере в 65 раз, по меньшей мере в 70 раз, по меньшей мере в 75 раз, по меньшей мере в 80 раз, по меньшей мере в 85 раз, по меньшей мере в 90 раз, по меньшей мере в 95 раз, по меньшей мере в 100 раз, при по меньшей мере в 110 раз, по меньшей мере в 120 раз, по меньшей мере в 130 раз, по меньшей мере в 140 раз, по меньшей мере в 150 раз, по меньшей мере в 200 раз, по меньшей мере в 300 раз, по меньшей мере в 400 раз, по меньшей мере 500 по меньшей мере в 600 раз, по меньшей мере в 700 раз, по меньшей мере в 800 раз, по меньшей мере в 900 раз, по меньшей мере в 1000 раз, по меньшей мере в 1100 раз, по меньшей мере 1200 по меньшей мере в 1300 раз, по меньшей мере в 1400 раз, по меньшей мере в 1500 раз или более после 21 дня в среде, способствующей дифференцировке эритроидов (EDM), например, как описано в Примерах.

В одном варианте осуществления изобретение предоставляет популяцию клеток, например, CD34+ клеток, из которых по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 98%, клеток популяции содержат индел, например, как описано здесь (не ограничиваясь теорией, считается, что введение молекулы gРНК или системы CRISPR, как описано здесь, в популяцию клеток, создает профиль инделов в указанной популяции, и, таким образом, каждая клетка популяции содержит индел, хотя и не тот же самый индел), внутри или вблизи участка, комплементарного целевому домену молекулы gРНК, описанной здесь; в то время как указанные клетки поддерживают способность дифференцироваться в клетки эритроидной линии, например в эритроциты; и/или где указанные клетки, дифференцированные из популяции клеток, имеют повышенный уровень фетального гемоглобина (например, популяция имеет более высокий % F-клеток) по сравнению с клетками, дифференцированными от аналогичной популяции немодифицированных клеток. В вариантах осуществления популяция клеток претерпела по меньшей мере 5-кратное увеличение экспансии ex vivo, например, в среде, содержащей Соединение 4.

В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 50 нуклеотидов, например, менее примерно 45, менее примерно 40, менее примерно 35, менее примерно 30 или менее примерно 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 25 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 20 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно примерно 15 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 10 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 9 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 9 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 7 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 6 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 5 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 4 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 3 нуклеотидов. В вариантах осуществления индел составляет менее примерно 2 нуклеотидов. В любом из вышеупомянутых вариантов осуществления индел представляет собой по меньшей мере 1 нуклеотид. В вариантах осуществления изобретения индел представляет собой 1 нуклеотид.

В одном аспекте изобретение предоставляет популяцию модифицированных HSPC или эритроидных клеток, дифференцированных от указанных HSPC (например, дифференцированных ex vivo или у пациента), например, как описано здесь, где по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65 %, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% клеток представлено F-клетками. В вариантах осуществления популяция клеток содержит (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая содержит) более высокий процент F-клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), по меньшей мере, на 20% больше, например, по меньшей мере на 21% больше, по меньшей мере на 22% больше по меньшей мере на 24% больше, по крайней мере на 24 больше %, по крайней мере на 25%, по крайней мере на 26%, по крайней мере на 27%, по крайней мере на 28% больше или по меньшей мере на 29% больше F клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), по меньшей мере, на 30% больше, например, по меньшей мере на 35% больше, по меньшей мере на 40% больше, по меньшей мере на 45% больше, по меньшей мере на 50% больше, по меньшей мере на 55% больше, по меньшей мере на 60% больше, по меньшей мере на 65% больше, по меньшей мере на 70% больше, по меньшей мере на 75% больше, по меньшей мере, на 80% больше, по меньшей мере на 85% больше, по меньшей мере на 90% больше или, по меньшей мере, на 95% больше F клеток, чем в аналогичной популяции клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток имеет (или способна дифференцироваться, например, in vivo, в популяцию эритроцитов, которая имеет), на 10-90%, 20%-80%, 20%-70%, 20%-60%, 20%-50%, 20%-40%, 20%-30%, 25%-80%, 25%-70%, 25%-60%, 25%-50%, 25%-40%, 25%-35%, 25%-30%, 30%-80%, 30%-70%, 30%-60%, 30%-50%, 30%-40% или 30%-35% больше F клеток, чем аналогичная популяция клеток, в которую не вводилось молекулы gРНК или молекул gРНК, например, как описано здесь, как вводились в указанные клетки. В вариантах осуществления популяция клеток, например, полученная описанным здесь способом, содержит достаточное количество клеток и/или достаточный % увеличения численности F клеток для лечения гемоглобинопатии, например, как описано здесь, например, серповидно-клеточной болезни и/или бета-талассемии у пациента, нуждающегося в этом, при введении их в указанного пациента, например, в терапевтически эффективном количестве. В вариантах осуществления увеличение F клеток измеряется методом анализа дифференцировки эритроидов, например, как описано здесь.

В вариантах осуществления, включая любой из вариантов осуществления и аспектов, описанных здесь, изобретение относится к клетке, например, к популяции клеток, например, модифицированный любой из gРНК, способом и/или системой CRISPR, описанных здесь, и содержащий F клетки, которые продуцируют по меньшей мере 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 7 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 8 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 9 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют по меньшей мере 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления F клетки продуцируют в среднем от 6,0 до 7,0 пикограмм от 7,0 до 8,0, от 8,0 до 9,0, от 9,0 до 10,0, от 10,0 до 11,0 или от 11,0 до 12,0 пикограмм фетального гемоглобина на клетку. В вариантах осуществления, в том числе в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления, клетка и/или популяция клеток по изобретению включает, например, состоит из клеток, которые не содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9.

Способы лечения

Сроки введения

В одном варианте осуществления доставляется одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты (например, молекул ДНК), отличных от компонентов системы Cas, например, компонента молекулы Cas9 и/или компонента молекулы gРНК, описанного здесь. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется одновременно с доставкой одного или нескольких компонентов системы Cas. В одном варианте осуществления молекулу нуклеиновой кислоты доставляют до или после (например, менее примерно 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов 6 часов, 9 часов, 12 часов, 1 дня, 2 дней, 3 дней, 1 недели, 2 недель или 4 недель) введения одного или нескольких компонентов системы Cas. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты доставляется другим способом, чем один или несколько компонентов системы Cas, например, молекула Cas9 компонент и/или молекула gРНК компонент. Молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена любым из способов доставки, описанных здесь. Например, молекула нуклеиновой кислоты может быть доставлена вирусным вектором, например, лентивирусом с дефектом интеграции, или компоненты такие как молекула Cas9 и/или молекула gРНК могут быть доставлены электропорацией, например так, чтобы токсичность, вызываемая нуклеиновой кислотой (например, ДНК) была уменьшена. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует терапевтический белок, например, описанный здесь белок. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует молекулу РНК, например молекулу РНК, описанную здесь.

Бимодальная или дифференциальная доставка компонентов

Доставка компонентов системы Cas по-отдельности, например компонента молекулы Cas9 и компонента молекулы gРНК, и, более конкретно, доставка компонентов различными способами может повысить эффективность, например, путем улучшения тканевой специфичности и надёжности. В одном варианте осуществления молекула Cas9 и молекула gРНК доставляются различными, или разнородными способами. Различными, или разнородные способы, используемые здесь, относятся к способам доставки, которые придают различные фармакодинамические или фармакокинетические свойства молекуле данного компонента, например молекуле Cas9, молекуле gРНК, матричной нуклеиновой кислоте или доставляемому полезному грузу. Например, способы доставки могут приводить к различному распределению по тканиям, изменённому периоду полураспада или другому временному распределению, например, в выбранной области, ткани или органе.

Некоторые способы доставки, например, доставка вектором, состоящим из нуклеиновой кислоты, который сохраняется в клетке или в потомстве клетки, например, путем автономной репликации или интеграции в клеточную нуклеиновую кислоту, приводят к более стойкому проявлению и присутствию компонента. Примеры включают доставку вирусными векторами, например, адено-ассоциированным вирусом или лентивирусом.

В качестве примера, компоненты, например молекула Cas9 и молекула gРНК, могут быть доставлены способами, которые различаются времененем полураспада или персистенцией доставляемого компонента тела или в определенной области, ткани или органе. В одном варианте осуществления молекула gРНК может быть доставлена такими способами. Компонент молекулы Cas9 может быть доставлен способом, который приводит к меньшей персистенции или меньшему воздействию на организм или конкретную область, ткань или орган.

В более общем плане в варианте осуществления один способ доставки используется для доставки первого компонента, а второй способ доставки используется для доставки второго компонента. Первый способ доставки придает первое фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство. Первым фармакодинамическим свойством может быть, например, распределение, персистенция или воздействие первого компонента или нуклеиновой кислоты, кодирующей компонент, в организме, области, ткани или органе. Второй способ доставки дает второе фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство. Вторым фармакодинамическим свойством может быть, например, распределение, персистенция или воздействие второго компонента или нуклеиновой кислоты, которая кодирует компонент, в организме, области, ткани или органе.

В одном варианте осуществления первое фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство, например распределение, персистенция или воздействие, является более ограниченным, чем второе фармакодинамическое или фармакокинетическое свойство.

В варианте осуществления первый способ доставки выбирается для оптимизации, например, минимизации, фармакодинамического или фармакокинетического свойства, например распределения, персистенции или времени воздействия.

В варианте осуществления второй способ доставки выбран для оптимизации, например, максимизации, фармакодинамического или фармакокинетического свойства, например распределения, стойкости или времени воздействия.

В одном варианте осуществления первый способ доставки включает использование относительно стойкого элемента, например нуклеиновой кислоты, например плазмиды или вирусного вектора, например AAV или лентивируса. Поскольку такие векторы являются относительно устойчивыми, то продукт их транскрипции будет относительно устойчивым.

В варианте осуществления второй способ доставки содержит относительно короткоживущий элемент, например, РНК или белок.

В одном варианте осуществления первый компонент содержит gРНК, а средство доставки является относительно устойчивым, например, gРНК транскрибируется с плазмиды или вирусного вектора, например AAV или лентивируса. Транскрипция этих генов будет иметь незначительные физиологические последствия, поскольку эти гены не кодируют белковый продукт, а gR As неспособны действовать изолированно. Второй компонент, молекула Cas9, доставляется в скоротечном режиме, например, в виде мРНК или в виде белка, гарантируя, что полный Cas9/gРНК комплекс присутствует только в течение короткого периода времени.

Более того, компоненты могут поставляться в разных молекулярных формах или различными векторами доставки, которые дополняют друг друга для усиления тканеспецифичности и безопасности препарата.

Использование разнородных способов доставки может повысить производительность, безопасность и эффективность. Например, вероятность возможной неспецифической модификации может быть уменьшена. Доставка иммуногенных компонентов, например молекул Cas9, способами, снижающими её персистенцию, может снизить иммуногенность препарата, поскольку пептиды фермента Cas как полученного из бактерий, выставляются поверхности клетки молекулами MHC. Двумодальная система доставки помогает преодолеть эти недостатки.

Разнородные способы доставки могут использоваться для доставки компонентов в разные, но перекрывающиеся целевые области. Формирование активного комплекса минимизируется за пределами перекрывания целевых областей. Таким образом, в одном варианте осуществления первый компонент, например молекула gРНК, доставляется первым способом доставки, который приводит к первому пространственному, например, тканеспецифичному распределению. Второй компонент, например молекула Cas9, доставляется вторым способом доставки, который приводит к (другому) пространственному, например, тканеспецифичному распределению. В одном варианте осуществления первый способ доставки включает один из элементов, выбранный из липосомы, наночастицы, например полимерной наночастицы, и нуклеиновой кислоты, например вирусного вектора. Второй способ содержит другой элемент, выбранный из этой группы. В одном варианте осуществления первый способ доставки содержит первый элемент целевой доставки, например, специфичный для клетки рецептор или антитело, а второй способ доставки не включает этот элемент. В варианте осуществления второй способ доставки содержит другой элемент целевой доставки, например, второй клеточный специфический рецептор или второе антитело.

Если молекула Cas9 доставляется в вирусном векторе доставки, липосоме или полимерной наночастице, то присутствует возможность доставки и наличия терапевтической активности в нескольких тканях, в то время как может быть желательна доставка только в одну ткань. Двухкомпонентная система доставки может повысить тканеспецифичность и разрешить эту проблему. Если молекула gРНК и молекула Cas9 упаковываются в раздельные средства доставки с четким, но перекрывающимся тканевым тропизмом, полностью функциональный комплекс образуется только в ткани, на которую нацелены оба вектора.

Потенциальные молекулы Cas, например молекулы Cas9, потенциальные молекулы gРНК, потенциальные молекулы комплекса Cas9/gРНК и потенциальные системы CRISPR могут быть оценены известными методами или методами, описанными здесь. Например, примеры методов оценки активности эндонуклеазы молекулы Cas9 описаны, например, в Jinek el al., SCIENCE 2012; 337 (6096): 8 16-821.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Выбор нацеливающих (РНК) и дизайн

Предварительный выбор нацеливающих (gРНК) выполнялся in silico с использованием стандартного человеческого генома и определенных пользователем геномных областей, представляющих интерес (например, ген, экзон гена, некодирующий регуляторный участок, и т.д.) для идентификации PAM в интересующих регионах. Для каждого идентифицированного PAM проводился статистический анализ. Далее выбранные молекулы gРНК были и ранжированы в порядке их эффективности и действенности при применении методов анализа, например, как описанно здесь.

В каждом из примеров экспериментов ниже использовались как молекулы sgРНК, так и молекулы dgРНК. Если не указано иначе, в случаях использования молекул dgРНК, gРНК включает следующее

crРНК: [целевой домен]-[SEQ ID NO: 6607]

tracr (trРНК): SEQ ID NO: 6660

Если не указано иначе, в экспериментах с использованием молекулы sgРНК, была использована следующая последовательность:

[целевой домен]-[SEQ ID NO: 6601]-UUUU.

Если не указано иначе, в экспериментах с использованием молекулы sgРНК обозначенной “BC”, была использована следующая последовательность:

[целевой домен]-[SEQ ID NO: 6604]-UUUU

Трансфекция клеток HEK-293_Cas9GFP для первичного скрининга нацеливающих (РНК)

Трансфекция клеток, экспрессирующих Cas9GFP HEK293 (HEK-293_Cas9GFP), была использована для первичного скрининга целевых специфических crРНК. В этом примере целевые специфические crРНК были разработаны и выбраны для первичного скрининга с использованием определенных критериев, в том числе для обнаружения неспецифичного связывания in silico, например, как описано здесь. Отобранные crРНК были химически синтезированы и помещены в плашку на 96 ячеек. Клетки HEK-293-Cas9GFP трансфицировали целевыми crРНК и стандартным (стоковым)trРНК в соотношении 1:1. Трансфекцию проводили с использованием технологии липофекции в соответствии с протоколом производителя (Lipofectamine 2000, Life Technologies). Трансфицированные клетки лизировали через 24 часа после липофекции и редактирование генома (например, расщепление) определялось в лизате с помощью метода T7E1 и/или секвенирования следующего поколения (NGS, ниже).

Метод T7E1

Метод T7E1 использовался для обнаружения мутационных перестроек в геномной ДНК, таких как вставки, делеции и замены, созданные при репарации по типу негомологичного соединения концов (NHEJ), вызванной расщеплением ДНК с помощью Cas9 (см. Cho et al., Targeted genome engineering in human cells with the Cas9 RNA-guided endonuclease. Nature Biotechnology. 2013; 31, 230-232).

Зоны геномной ДНК, предназначенные для расщепления системой CRISPR/Cas9, амплифицировали с помощью ПЦР, денатурировали при 95° С в течение 10 минут и затем повторно отжигали при снижении температуры от 95°C до 25°C со скоростью 0,5°C в секунду. Если мутации присутствовали в амплифицированной области, ДНК образовывали гетеродуплексов. Повторно отожженные гетеродуплексы затем расщепляли T7E1 (New England Biolabs) при 37°C в течение 25 минут или дольше. Эндонуклеаза T7E1 распознает неспаренные основания ДНК, гетеродуплексы и наличие одночепочных разрывов в ДНК-дуплексе и генерирует двухцепочечный разрыв на этих участках. Полученные фрагменты ДНК анализировали с использованием Fragment Analyzer по количеству для определения эффективности расщепления.

Секвенирование следующего поколения (NGS) и анализ для оценки эффективности расщепления по целевым сайтам и формирование инделов

Для определения эффективности редактирования генома (например, расщепления) по целевым сайтам, многократное секвенирование было применено для определения наличия вставок и делеций, сформированных с помощью негомологичного соединения концов.

Для начала, ПЦР-праймеры были сконструированы по краям целевого сайта, и геномная область, представляющая интерес, амплифицировалась ПЦР. Дополнительная ПЦР выполнялась в соответствии с протоколами производителя (Illumina) для получения количества, необходимого для секвенирования. Полученные ампликоны секвенировали на приборе Illumina MiSeq. Результаты считывания сопоставляли со стандартной последовательностью человеческого генома (например, hg38) после удаления низкокачественных результатов считывания. Из результирующих файлов, содержащих данные считывания, сопоставленных со стандартным эталонным геномом (файлы BAM), были выбраны результаты считывания, перекрывающие интересующую нас область генома, и подсчитано количество прочитанных последовательностей дикого типа по сравнению с количеством последовательностей, содержащих инсерцию или делецию. Процент редактирования определялся как общее число считываний с инсерциями или делециями к общему числу прочитанных последовательностей, включая дикий тип. Для определения профиля инсерций или делеций, полученных в результате редактирования, были выбраны результаты сравнения, содержащие инделы, и просуммировано число считываний для каждого индела. Информация была представлена в виде списка, а также визуализирована в форме гистограмм, представляющих частоту каждого индела.

Формирование RNP

Добавление crРНК и trРНК к белку Cas9 приводит к образованию активного рибонуклеопротеинового комплекса Cas9 (RNP), способствующего связыванию с целевой областью, заданной crРНК, и специфическому расщеплению целевой геномной ДНК. Этот комплекс образуется при загрузке trРНК и crРНК в Cas9, что, как полагают, вызывает конформационные изменения в Cas9, что позволяет ей связывать и расщеплять dsDNA.

crРНК и trРНК денатурировали отдельно при 95°С в течение 2 минут и оставляли до комнатной температуры. Белок Cas9 (10мг/мл) разбавляли в 5X CCE-буфере (20 мМ HEPES, 100 мМ KCl, 5 мМ MgCl2, 1 мМ DTT, 5% глицерин), а затем добавляли trРНК и различные crРНК (в отдельных реакциях) и инкубировали при 37°C в течение 10 минут для образования активного комплекса RNP. Комплекс был доставлен электропорацией и другими методами в широкий спектр клеток, включая клетки HEK-293 и CD34+ гематопоэтические клетки.

Доставка RNP в CD34+ HSCs

Cas9 RNP доставлялись в клетки CD34+ HSC. Клетки CD34+ HSC оттаивали и культивировали (при ~500000 клеток/мл) в течение ночи в среде StemSpan SFEM (StemCell Technologies) с добавками IL12, SCF, TPO, Flt3L и Pen/Strep. Примерно 90000 клеток были разделены на аликвоты и отцентрифугированы для каждой реакции доставки RNP. Затем клетки ресуспендировали в 60 мкл буферного раствора P3 (Lonza), к которому затем добавляли активный RNP. Клетки HSC затем электропорировали (например, подвергали нуклеофекции с использованием программы CA-137 на аппарате Lonza Nucleofector) в трех повторах (20 мкл/электропорация). После электропорации к клеткам HSC немедленно добавляли среду StemSpan SFEM (с IL12, SCF, TPO, Flt3L и Pen/Strep), и культивировали в течение по меньшей мере 24 часов. Затем HSC собирали и анализировали помощью методов T7E1, NGS и/или анализа экспрессии маркера клеточной поверхности.

Функциональный анализ клеток HSC

Клетки CD34+ HSC можно анализировать на фенотип стволовых клеток с использованием известных методов, таких как проточная цитометрия или метод выделения колониеобразующих единиц in vitro. В качестве примера, клетки анализировали методом подсчёта колоний in vitro (CFC) с использованием набора Optoc Methocult H4034 Optimum (StemCell Technologies) с использованием протокола производителя. Вкратце, 500-2000 CD34+ клеток в объеме <100 мкл добавляли к 1-1,25 мл MethoCult. Смесь интенсивно перемешивали на приборе Vortex в течение 4-5 секунд для тщательного перемешивания, затем оставляли на при комнатной температуре в течение по меньшей мере 5 минут. Используя шприц, 1-1,25 мл клеток в MethoCult переносили в 35-миллиметровую чашку или лунку на плашке из 6 ячеек. Число колоний и морфологию оценивали через 12-14 дней в соответствии с протоколом изготовителя.

Ксенотрансплантация in vivo

Клетки HSC функционально определяется их способностью к самообновлению и дифференцировке в клетки многих линий. Эта функциональность может быть оценена только in vivo. Золотым стандартом для определения функции HSC человека является ксенотрансплантация в гамма-мышь NOD-SCID (NSG), которая обладает ослабленным иммунитетом вследствие серии мутаций и, таким образом, может служить реципиентом клеток человека. Клетки HSC после редактирования трансплантируются в мышей линии NSG, для подтверждения того, что индуцированное редактирование не влияет на функцию HSC. Ежемесячный анализ периферической крови проводился для оценки степени химеризма и развития линии, а вторичная трансплантация через 20 недель проводилась для установления наличия функциональных клеток HSC.

Результаты.

Результаты редактирования с использованием молекул gРНК (например, молекул dgРНК, описанных выше), описанных здесь, в клетках HEK293_Cas9GFP, по результатам анализа T7E1 («T7») и/или NGS, суммированы на Фиг. 1 (молекулы gРНК в области энхансера +58 BCL11a) и Фиг. 2 (молекулы gРНК в области энхансера +62 BCL11a), а также в приведенных ниже таблицах, как указано. Среднестатистическое редактирование в CD34+ HSPC представлено, например, в Таблице 10 (молекулы gРНК в области энхансера +58 BCL11a), Таблице 11 (молекулы gРНК в области энхансера +62 BCL11a), Таблице 12B (молекулы gРНК в области энхансера +55 BCL11a), и Таблице 13 (молекулы gРНК в области HPFH Френча), ниже. В результатах анализа методом T7E1, «2» указывает на высокую эффективность расщепления; «1» указывает на низкую эффективность расщепления, а «0» означает отсутствие расщепления. В общем случае, результаты T7E1 коррелируют с количественной характеристикой расщеплений, определяемой по методу NGS. 15 наиболее представленных gРНК (имеющих наивысший % редактирования в CD34+ клетках) показаны на Фиг. 11 (+58 область энхансера BCL11a) и на Фиг. 12 (+62 область энхансера BCL11a).

Таблица 10: Результаты первичного скрининга crРНК к +58 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).

ID целевого домена	Средний % Редактирования (n=3)	Стандартное отклонение
CR000242	1,4%	0,3%
CR000243	n/a	n/a
CR000244	3,7%	1,0%
CR000245	24,7%	1,4%
CR000246	24,2%	0,3%
CR000247	3,6%	0,6%
CR000248	6,4%	0,5%
CR000249	13,3%	0,6%
CR000250	4,8%	0,5%
CR000251	4,7%	0,5%
CR000252	2,7%	0,5%
CR000253	9,0%	0,6%
CR000255	n/a	n/a
CR000256	1,3%	0,2%
CR000257	2,4%	0,4%
CR000258	2,0%	0,0%
CR000259	3,9%	0,4%
CR000260	32,7%	2,3%
CR000261	17,9%	0,9%
CR000264	2,1%	0,2%
CR000266	2,9%	0,1%
CR000267	3,9%	0,1%
CR000268	6,3%	0,6%
CR000269	4,4%	0,2%
CR000270	2,7%	0,9%
CR000271	7,2%	1,4%
CR000272	11,9%	2,9%
CR000273	3,1%	0,2%
CR000274	1,4%	0,1%
CR000275	9,6%	0,6%
CR000276	14,5%	0,5%
CR000277	8,6%	0,5%
CR000278	4,8%	0,6%
CR000279	6,5%	0,9%
CR000280	7,9%	0,8%
CR000281	3,3%	0,7%
CR000282	10,1%	1,2%
CR000283	4,7%	0,2%
CR000284	5,8%	0,1%
CR000285	8,9%	1,2%
CR000286	20,2%	1,1%
CR000287	10,1%	1,0%
CR000288	1,6%	0,1%
CR000289	3,0%	0,4%
CR000290	2,3%	0,4%
CR000291	2,8%	0,1%
CR000292	9,9%	0,9%
CR000293	n/a	n/a
CR000294	2,7%	0,5%
CR000295	1,9%	0,4%
CR000296	2,8%	0,4%
CR000297	5,7%	0,4%
CR000298	2,2%	0,2%
CR000299	2,9%	0,2%
CR000300	2,3%	0,2%
CR000301	10,2%	0,8%
CR000302	5,0%	0,6%
CR000303	3,7%	0,3%
CR000304	6,2%	0,8%
CR000305	7,7%	2,2%
CR000306	4,0%	2,2%
CR000307	8,8%	3,6%
CR000308	39,9%	1,7%
CR000309	38,3%	8,2%
CR000310	56,8%	1,0%
CR000311	46,0%	1,2%
CR000312	48,5%	1,7%
CR000313	41,2%	4,4%
CR000314	29,9%	0,9%
CR000315	32,0%	2,9%
CR000316	3,9%	1,0%
CR000317	2,8%	0,3%
CR000318	2,6%	0,2%
CR000319	7,9%	1,8%
CR000320	1,9%	0,1%
CR000321	13,2%	1,7%
CR000322	5,2%	0,8%
CR000323	20,3%	2,1%
CR000324	2,2%	0,4%
CR000325	8,4%	0,9%
CR000326	1,4%	0,2%
CR000327	6,9%	1,7%
CR000328	2,6%	0,4%
CR000329	1,1%	0,1%
CR000330	1,7%	0,2%
CR000331	22,0%	0,9%
CR000332	3,2%	1,0%
CR000333	3,8%	0,7%
CR000334	3,2%	0,1%
CR000335	2,7%	0,3%
CR000336	2,2%	0,2%
CR000337	7,2%	1,0%
CR000338	10,3%	1,8%
CR000339	4,2%	0,2%
CR000340	4,6%	0,6%
CR000341	7,5%	1,4%
CR001124	26,1%	2,0%
CR001125	8,4%	1,6%
CR001126	17,2%	5,8%
CR001127	7,4%	2,3%
CR001128	9,0%	0,9%
CR001129	16,5%	6,0%
CR001130	11,1%	8,3%
CR001131	54,1%	4,9%

Таблица 11: Результаты первичного скриининга crРНК к +62 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).

ID целевого домена	Средний % Редактирования (n=3)	Стандартное отклонение
CR000171	4,4	0,7
CR000172	4,6	2,4
CR000173	3,1	0,7
CR000174	27,6	6,5
CR000175	14,7	1,0
CR000176	2,1	0,6
CR000177	7,6	2,3
CR000178	7,1	1,7
CR000179	7,7	1,8
CR000180	2,8	0,5
CR000181	25,6	3,8
CR000182	27,6	3,5
CR000183	30,5	6,9
CR000184	4,2	1,9
CR000185	11,4	0,7
CR000186	7,2	3,7
CR000187	46,3	2,2
CR000188	21,0	6,0
CR000189	22,3	2,1
CR000190	20,2	5,7
CR000191	38,2	7,9
CR000192	5,4	1,8
CR000193	14,7	2,0
CR000194	13,5	0,7
CR000195	8,2	1,2
CR000196	27,0	6,4
CR000197	6,6	0,6
CR000198	8,7	3,2
CR000199	3,3	1,3
CR000200	6,9	0,5
CR000201	1,6	0,5
CR000202	28,1	5,6
CR000203	43,7	0,5
CR000204	35,1	2,2
CR000205	53,6	0,8
CR000206	52,8	6,0
CR000207	2,5	0,3
CR000208	31,5	7,5
CR000209	13,5	2,9
CR000210	28,7	6,6
CR000211	59,3	5,5
CR000212	40,0	1,6
CR000213	13,6	7,1
CR000214	9,4	0,7
CR000215	37,0	6,9
CR000216	25,3	2,6
CR000217	7,6	1,6
CR000218	5,1	1,3
CR000221	12,4	3,5
CR000222	7,2	2,6
CR000223	8,4	2,1
CR000224	13,9	5,3
CR000225	10,3	4,4
CR000227	12,6	1,8
CR000228	13,5	4,8
CR000229	3,2	0,8

Таблица 12A: Результаты первичного скрининга crРНК к +55 области энхансера Bcl11a в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).

ID целевого домена	Средний % Редактирования (n=3)	Стандартное отклонение
CR002142	25,0	2,0
CR002143	n/a	n/a
CR002144	51,2	8,3
CR002145	51,0	3,3
CR002146	n/a	n/a
CR002147	n/a	n/a
CR002148	13,7	4,3
CR002149	22,3	4,5
CR002150	43,8	9,0
CR002151	31,1	0,6
CR002152	33,2	8,7
CR002153	24,5	7,8
CR002154	62,1	3,9
CR002155	48,2	10,9
CR002156	57,4	8,5
CR002157	46,6	4,3
CR002158	11,0	1,7
CR002159	13,7	2,3
CR002160	37,8	0,8
CR002161	61,5	4,6
CR002162	47,0	14,0
CR002163	52,2	9,6
CR002164	58,5	4,4
CR002165	61,5	6,8
CR002166	42,6	11,3
CR002167	37,8	4,7
CR002168	32,0	12,9
CR002169	48,5	6,3
CR002170	44,8	2,9
CR002171	n/a	n/a
CR002172	n/a	n/a
CR002173	n/a	n/a
CR002174	59,8	3,8
CR002175	22,1	1,3
CR002176	35,4	5,9
CR002177	n/a	n/a
CR002178	25,9	3,2
CR002179	n/a	n/a
CR002180	57,6	6,4
CR002181	63,8	3,9
CR002182	n/a	n/a
CR002183	n/a	n/a
CR002184	30,0	4,0
CR002185	n/a	n/a
CR002186	n/a	n/a
CR002187	51,6	2,9
CR002188	35,8	8,7
CR002189	62,7	6,0
CR002190	n/a	n/a
CR002191	37,4	7,4
CR002192	n/a	n/a
CR002193	6,1	1,7
CR002194	n/a	n/a
CR002195	60,0	9,4
CR002196	42,9	13,7
CR002197	52,2	2,8
CR002198	n/a	n/a
CR002199	n/a	n/a
CR002200	4,3	1,0
CR002201	1,8	0,3
CR002202	2,6	0,3
CR002203	50,7	5,3
CR002204	n/a	n/a
CR002205	n/a	n/a
CR002206	n/a	n/a
CR002207	n/a	n/a
CR002208	n/a	n/a
CR002209	n/a	n/a
CR002210	n/a	n/a
CR002211	n/a	n/a
CR002212	n/a	n/a
CR002213	n/a	n/a
CR002214	n/a	n/a
CR002215	51,7	8,9
CR002216	14,1	8,3
CR002217	50,1	10,5
CR002218	45,0	19,4
CR002219	30,7	14,7
CR002220	44,7	13,3
CR002221	n/a	n/a
CR002222	64,0	3,9
CR002223	n/a	n/a
CR002224	n/a	n/a
CR002225	n/a	n/a
CR002226	n/a	n/a
CR002227	n/a	n/a
CR002228	10,4	5,6
CR002229	n/a	n/a

n/a=не проводилось

После эксперимента, описанного выше, те же самые молекулы нацеливающих РНК были снова троекратно протестированы как в клетках HEK-293-Cas9, так и в клетках CD34+ с использованием нового набора праймеров разработанного для анализа NGS. Результаты приведены ниже в Таблице 12B.

Таблица 12B: Результаты скрининга crРНК к +55 области энхансера Bcl11a в клетках HEK-293-Cas9 и в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).

ID	% Редактирования в HEK-293-Cas9 Cells (n=3)	% Редактирования в CD34+ HSPC (n=3)
CR002142	2,1	2,07
CR002143	39,6	2,31
CR002144	74,3	4,70
CR002145	72,1	11,46
CR002146	77,2	5,18
CR002147	37,3	3,13
CR002148	34,6	2,02
CR002149	40,7	3,16
CR002150	64,4	4,01
CR002151	70,5	5,05
CR002152	63,6	6,59
CR002153	42,2	2,82
CR002154	71,0	17,89
CR002155	60,3	6,01
CR002156	62,3	9,43
CR002157	38,5	4,72
CR002158	12,4	2,16
CR002159	14,8	3,64
CR002160	72,8	7,97
CR002161	74,5	18,12
CR002162	64,8	4,53
CR002163	86,7	13,92
CR002164	3,2	10,23
CR002165	78,3	9,74
CR002166	67,2	7,78
CR002167	51,6	29,26
CR002168	29,9	4,15
CR002169	80,2	9,11
CR002170	83,0	16,17
CR002171	67,8	4,83
CR002172	64,3	7,59
CR002173	80,7	6,00
CR002174	78,2	26,89
CR002175	79,4	27,08
CR002176	39,5	5,14
CR002177	66,7	21,45
CR002178	52,5	12,74
CR002179	83,1	38,88
CR002180	51,3	5,46
CR002181	54,0	12,54
CR002182	67,9	28,01
CR002183	30,3	3,52
CR002184	67,1	21,31
CR002185	65,6	8,18
CR002186	58,9	8,16
CR002187	70,2	10,05
CR002188	56,6	9,92
CR002189	71,9	31,14
CR002190	27,4	6,84
CR002191	70,0	17,54
CR002192	62,6	6,92
CR002193	1,6	0,67
CR002194	82,5	24,52
CR002195	64,4	36,32
CR002196	2,1	0,96
CR002197	63,8	37,29
CR002198	67,8	16,45
CR002199	61,3	9,78
CR002200	3,1	1,10
CR002201	1,2	0,84
CR002202	2,8	0,82
CR002203	49,9	0,84
CR002204	43,2	17,48
CR002205	60,6	11,06
CR002206	48,5	9,02
CR002207	49,4	12,29
CR002208	61,7	16,56
CR002209	61,2	9,36
CR002210	57,6	27,77
CR002211	45,4	30,93
CR002212	56,0	31,55
CR002213	34,4	10,40
CR002214	11,1	1,77
CR002215	49,3	40,23
CR002216	22,1	1,80
CR002217	52,3	11,29
CR002218	73,7	11,17
CR002219	34,2	7,94
CR002220	64,8	8,63
CR002221	20,7	5,66
CR002222	78,9	30,01
CR002223	8,2	1,21
CR002224	7,8	n,d
CR002225	n,d	n,d
CR002226	2,6	n,d
CR002227	n,d	n,d
CR002228	23,2	3,65
CR002229	39,0	n,d

n.d..=не определён

Таблица 13: Результаты скрининга crРНК к области HPFH Френча в клетках HEK-293-Cas9 и в клетках CD34+ HSPC (по результатам NGS, n=3).

ID Целевого домена	Средний % Редактирования в HEK-293-Cas9 (n=3)	Средний % Редактирования в CD34+ HSPCs (n=3)	Стандартное отклонение (%) для % Редактирования в CD34+ HSPCs
CR001016	33,1	24,0	1,2
CR001017	30,4	19,5	1,5
CR001018	46,5	53,0	3,4
CR001019	45,9	57,6	2,3
CR001020	62,1	47,7	9,3
CR001021	29,1	34,2	1,8
CR001022	66,1	66,2	2,3
CR001023	27,3	46,0	6,1
CR001024	62,5	73,4	6,9
CR001025	25,5	24,5	1,6
CR001026	61,4	72,1	2,9
CR001027	23,3	33,2	2,2
CR001028	47,7	72,1	4,9
CR001029	53,9	61,2	5,7
CR001030	49,2	49,9	29,0
CR001031	42,7	65,0	9,3
CR001032	67,6	50,1	9,7
CR001033	15,3	44,5	3,2
CR001034	28,5	52,9	2,7
CR001035	16,9	28,5	16,4
CR001036	28,0	68,3	3,7
CR001037	52,7	53,2	4,2
CR001038	1,9	23,7	20,6
CR001039	2,2	35,8	2,8
CR001040	nd	n/a	0,0
CR001041	nd	n/a	0,0
CR001042	2,7	n/a	0,0
CR001043	nd	n/a	0,0
CR001044	4,9	1,5	0,4
CR001045	38,1	31,2	2,0
CR001046	18,4	28,4	3,9
CR001047	nd	n/a	0,0
CR001048	1,6	0,2	0,3
CR001049	nd	n/a	0,0
CR001050	nd	n/a	0,0
CR001051	nd	n/a	0,0
CR001052	nd	n/a	0,0
CR001053	5,8	4,4	0,7
CR001054	9,0	4,1	0,4
CR001055	5,2	0,1	0,1
CR001056	7,7	5,0	0,3
CR001057	25,2	7,8	0,8
CR001058	41,6	29,5	6,7
CR001059	5,2	4,9	0,1
CR001060	43,5	18,7	5,2
CR001061	21,7	4,7	0,8
CR001062	12,2	5,2	1,1
CR001063	16,6	21,5	1,6
CR001064	6,0	4,2	0,7
CR001065	43,0	20,0	1,4
CR001066	11,1	4,2	0,4
CR001067	25,7	7,9	3,5
CR001068	11,3	5,9	1,6
CR001069	15,1	2,9	0,2
CR001070	38,2	11,1	3,1
CR001071	34,6	8,5	0,2
CR001072	22,8	3,5	0,4
CR001073	45,2	18,1	4,1
CR001074	40,1	38,1	2,5
CR001075	53,0	29,2	1,8
CR001076	25,6	1,8	0,1
CR001077	8,9	12,2	0,4
CR001078	10,9	17,7	3,3
CR001079	18,3	7,8	0,9
CR001080	21,3	17,4	5,6
CR001081	22,0	21,4	0,5
CR001082	5,4	8,5	0,6
CR001083	12,3	11,6	0,5
CR001084	25,4	9,5	4,5
CR001085	18,3	12,4	1,7
CR001086	25,3	4,4	2,0
CR001087	16,4	6,9	0,9
CR001088	9,6	18,4	1,9
CR001089	nd	15,8	12,9
CR001090	16,9	30,1	3,5
CR001091	11,4	0,8	0,5
CR001092	17,4	17,0	9,8
CR001093	23,0	13,0	4,5
CR001094	10,0	24,9	5,4
CR001095	22,1	34,8	3,6
CR001096	29,8	20,4	2,0
CR001097	17,9	20,5	0,5
CR001098	49,8	34,7	5,1
CR001099	24,7	39,9	1,8
CR001100	nd	33,2	2,8
CR001101	16,9	24,7	2,1
CR001102	29,4	13,9	0,7
CR001103	9,9	8,6	2,2
CR001104	11,3	3,3	0,7
CR001105	5,0	3,6	0,9
CR001106	15,7	13,1	1,6
CR001107	31,2	8,5	4,5
CR001108	16,1	3,2	0,5
CR001109	12,1	4,6	2,1
CR001110	23,5	6,0	3,0
CR001111	12,3	2,6	1,3
CR001132	18,7	3,4	0,4
CR001133	35,4	27,0	4,2
CR001134	12,3	0,3	0,2
CR001135	57,8	16,2	2,7
CR001136	7,1	1,7	0,5
CR001137	31,2	6,2	2,7
CR001138	45,4	9,6	1,2
CR001139	nd	3,3	0,3
CR001140	28,7	11,2	1,2
CR001141	3,6	1,5	0,5
CR001142	56,7	9,7	1,2
CR001143	58,4	4,6	1,3
CR001144	23,2	4,3	2,5
CR001145	4,9	0,1	0,0
CR001146	38,2	0,2	0,0
CR001147	16,0	0,1	0,1
CR001148	22,3	3,0	1,6
CR001149	19,4	6,0	3,9
CR001150	30,8	30,4	17,9
CR001151	35,8	0,8	0,2
CR001152	24,6	0,3	0,1
CR001153	5,4	0,3	0,4
CR001154	6,3	3,6	2,1
CR001155	nd	2,1	0,6
CR001156	19,6	4,8	0,8
CR001157	16,4	2,7	0,6
CR001158	36,5	5,1	3,2
CR001159	42,9	7,7	1,0
CR001160	32,5	8,5	1,9
CR001161	20,5	10,3	1,9
CR001162	35,0	30,5	4,5
CR001163	9,9	3,3	0,5
CR001164	23,3	14,4	8,8
CR001165	5,5	1,5	0,4
CR001166	49,8	27,1	4,4
CR001167	13,8	6,0	0,8
CR001168	nd	6,4	4,7
CR001169	43,9	n/a	0,0
CR001170	28,5	10,7	6,4
CR001171	37,5	2,7	2,6
CR001172	41,5	14,8	3,5
CR001173	49,5	16,7	3,9
CR001174	36,6	4,4	0,7
CR001175	17,0	5,3	1,7
CR001176	7,7	3,6	2,8
CR001177	4,0	4,1	2,3
CR001178	nd	27,0	15,6
CR001179	59,0	27,9	1,5
CR001180	nd	8,5	5,3
CR001181	30,9	5,7	0,8
CR001182	34,5	13,6	7,8
CR001183	6,9	0,4	0,3
CR001184	15,7	5,2	2,7
CR001185	18,2	7,6	1,2
CR001186	12,0	5,0	0,6
CR001187	8,3	4,1	0,3
CR001188	16,8	7,1	2,0
CR001189	13,3	3,7	1,3
CR001190	nd	5,6	1,1
CR001191	39,5	4,8	1,0
CR001192	27,5	3,9	1,3
CR001193	17,1	1,5	1,9
CR001194	17,8	5,9	4,1
CR001195	nd	16,4	9,5
CR001196	5,8	2,2	0,7
CR001197	32,4	8,1	3,1
CR001198	28,4	18,2	5,8
CR001199	40,8	7,9	4,0
CR001200	24,4	1,2	0,7
CR001201	1,7	0,3	0,1
CR001202	46,0	39,3	22,7
CR001203	11,9	3,1	1,6
CR001204	1,2	0,8	0,1
CR001205	3,0	0,2	0,1
CR001206	3,9	0,5	0,2
CR001207	7,6	2,4	1,2
CR001208	5,5	1,5	0,7
CR001209	4,4	1,7	0,2
CR001210	10,8	3,9	2,5
CR001211	6,8	3,4	2,0
CR001212	32,7	11,1	6,5
CR001213	21,6	6,2	1,5
CR001214	28,4	5,7	0,8
CR001215	9,0	1,5	0,5
CR001216	nd	2,5	1,4
CR001217	nd	n/a	0,0
CR001218	7,7	4,1	1,0
CR001219	40,0	20,3	0,6
CR001220	33,8	n/a	0,0
CR001221	41,3	n/a	0,0
CR001222	39,1	18,9	10,9
CR001223	35,9	n/a	0,0
CR001224	34,9	16,5	7,1
CR001225	55,0	24,6	1,1
CR001226	34,1	4,7	4,1
CR001227	46,4	6,4	0,6
CR003027	50,2	4,5	nd
CR003028	3,0	2,2	nd
CR003029	14,4	3,4	nd
CR003030	20,2	5,8	nd
CR003031	31,3	9,7	nd
CR003032	15,1	4,4	nd
CR003033	46,5	25,2	nd
CR003034	55,2	11,8	nd
CR003035	42,4	15,9	nd
CR003036	17,4	6,1	nd
CR003037	38,6	19,6	nd
CR003038	47,1	24,6	nd
CR003039	53,8	21,1	nd
CR003040	35,9	6,1	nd
CR003041	23,7	9,9	nd
CR003042	35,5	8,7	nd
CR003043	24,4	4,3	nd
CR003044	54,1	16,2	nd
CR003045	33,7	6,6	nd
CR003046	34,8	3,6	nd
CR003047	46,9	9,8	nd
CR003048	12,6	1,7	nd
CR003049	24,4	4,9	nd
CR003050	19,6	2,9	nd
CR003051	15,4	1,8	nd
CR003052	15,7	7,8	nd
CR003053	10,8	0,9	nd
CR003054	16,7	2,9	nd
CR003055	17,3	4,4	nd
CR003056	46,3	19,3	nd
CR003057	40,9	11,3	nd
CR003058	40,0	8,9	nd
CR003059	23,7	<2%	nd
CR003060	16,8	<2%	nd
CR003061	27,6	<2%	nd
CR003062	3,9	<2%	nd
CR003063	19,8	2,5	nd
CR003064	19,6	<2%	nd
CR003065	42,3	0,1	nd
CR003066	36,5	0,0	nd
CR003067	53,1	0,1	nd
CR003068	11,5	<2%	nd
CR003069	42,7	0,0	nd
CR003070	49,0	0,1	nd
CR003071	41,8	<2%	nd
CR003072	27,2	<2%	nd
CR003073	45,1	0,1	nd
CR003074	40,2	0,1	nd
CR003075	58,5	0,1	nd
CR003076	28,5	<2%	nd
CR003077	44,9	0,0	nd
CR003078	43,9	<2%	nd
CR003079	31,1	<2%	nd
CR003080	41,1	<2%	nd
CR003081	29,4	<2%	nd
CR003082	30,8	<2%	nd
CR003083	26,5	0,0	nd
CR003084	32,3	<2%	nd
CR003085	24,0	0,1	nd
CR003086	40,8	10,8	nd
CR003087	51,0	45,0	nd
CR003088	25,5	9,7	nd
CR003089	26,0	11,5	nd
CR003090	15,2	<2%	nd
CR003091	26,4	5,5	nd
CR003092	4,9	2,1	nd
CR003093	16,7	2,9	nd
CR003094	39,5	4,7	nd
CR003095	12,0	1,7	nd
CR003096	22,9	4,0	nd

n/a = не измерялся; nd = не определён

Редактирование генома в области энсансера BCL11a

Были заказаны синтетические молекулы sgРНК, содержащие целевые домены, специфичные для геномной ДНК в областях +58 или +62 эритроидного энхансера гена BCL11a. На Фиг. 5 показана геномная ДНК, на которую нацелены молекулы sgРНК, обозначенные как sgEH1-sgEH9.

sgEH1 Целевой домен (CR00276): AUCACAUAUAGGCACCUAUC (SEQ ID NO: 212)

sgEH2 Целевой домен (CR00275): CACAGUAGCUGGUACCUGAU (SEQ ID NO: 211)

sgEH8 Целевой домен (CR00273): CAGGUACCAGCUACUGUGUU (SEQ ID NO: 209)

sgEH9 Целевой домен (CR00277): UGAUAGGUGCCUAUAUGUGA (SEQ ID NO: 213)

RNP, содержащие sgEH[X], предварительно введённые в комплекс с Cas9, были введены в клетки CD34+ костного мозга (клетки костного мозга CD34+, заказанные у Lonza, Cat#2M-101C, Lot# 466977, 30y, F, B (96,8%)) с использованием электропорации (электропоратор NEON). Расщепление в стволовых клетках CD34+ определяли с использованием T7E1 и NGS. Результаты суммированы на Фиг. 6A-D, где показано обобщённое формирование инделов по четырем экспериментах (по два эксперимента от двух разных доноров), а также наиболее часто представленные профили инделов. sgEH1, 2 и 9 были способны направлять расщепление с высокой эффективностью.

Неожиданно было обнаружено, что в нескольких экспериментах, в том числе с использованием клеток от разных доноров, профиль инделов остаётся постоянным (см. Фиг. 6A-D). То есть, каждая gРНК приводит к определённому профилю формирования инделов. Кроме того, делеции, по-видимому, коррелируют с областями микрогомологии вблизи места расщепления.

Для дополнительного исследования этого явления, молекулы gРНК к локусу BCL11a были спроектированы и тестированы с использованием различных биологических образцов, а также разных способов доставки и Cas-связывающих (каркасных) последовательностей gРНК. Для этого эксперимента использовались gРНК со следующими целевыми доменами:

G7 (также обозначаемый g7) Целевой домен: GUGCCAGAUGAACUUCCCAU (SEQ ID NO: 2016) (т.е., 3' 20 нп SEQ ID NO: 1191);

G8 (также обозначаемый g8) Целевой домен: CACAAACGGAAACAAUGCAA (SEQ ID NO: 2017) (т.е., 3' 20 нп SEQ ID NO: 1186).

В первом эксперименте g7 и g8 тестировали на двух разных биологических образцах. Как показано на Фиг. 7, профили, состоящие из 3 наиболее часто встречаемых инделов для каждой gРНК были идентичными. Затем молекулы gРНК, содержащие домены G7 и G8, были протестированы с использованием другого компонента tracrРНК. В предыдущих экспериментах SEQ ID NO: 6601 с добавленной -UUUU непосредственно добавляли к целевому домену gРНК с образованием sgРНК. В следующей серии экспериментов SEQ ID NO: 6604 с добавленной -UUUU непосредственно присоединяли к g7 и g8 целевым доменам gРНК, для создания молекул sgРНК с другой Cas-связывающей последовательностью (молекулы gРНК, обозначенные как g7BC или g8BC). Как показано на Фиг. 8, профиль инделов сохраняется постоянным, даже при использовании различных sgРНК каркасных последовательностей для посадки Cas. Наконец, профиль инделов сравнивался при использовании разных методов доставки. Результаты исследования при доставке g7 в клетки-293 путём электропорации RNP и доставке g7-кодирующей плазмиды с помощью аппарата Lipofectamine 2000 представлены на Фиг. 9. Как показано, профиль инделов остаётся постоянным. Эти результаты, вместе взятые, свидетельствуют о том, что формирование профиля инделов зависит от последовательности (молекулы gРНК). Молекулы gРНК, нацеленые на последовательности, в которых результаты расщепления приводят к большим делециям и/или делециях сдвига рамки считывания могут применяться для обеспечения потери функции.

Удаление участка при использовании нескольких нацеливающих РНК.

Вышеперечисленные G7 и g8 нацелены на геномную ДНК в проксимальных участках (последовательности PAM находятся в пределах 50 нуклеотидов друг от друга в гене BCL11a). Для определения эффекта одновременного нацеливания на два проксимальных участка, проведена трансфекция клеток CD34+ с использованием RNP, содержащими gРНКs с целевым доменом G7, а также RNP, содержащим gРНКs с целевым доменом G8. Эффективность расщепления и профиль инделов определялись с помощью NGS. Как показано на Фиг. 10, первичный индел представляет собой делецию нуклеотидов между двумя сайтами связывания gРНК. Эти результаты показывают, что несколько, например, 2, нацеливающих РНК, которые связываются в непосредственной близости, могут быть использованы для удаления ДНК, расположенной между двумя сайтами связывания.

Редактирование генома в стволовых клетках CD34+

Редактирование генома в локусе BCL11a было продемонстрировано в CD34+ первичных гемопоэтических стволовых клетках. Вкратце, CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) с использованием иммуноселекции (на системе Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя. Гэйтинг клеток показан на Фиг.3. Клетки были разделены на аликвоты и криоконсервированы. Размороженные клетки высевали в количестве 2x10⁵/ml in SFEM (StemCell Technologies) + 1X антибиотик/антимикотик+50 нг/мл каждого цитокина (TPO, FLT3L, IL6 и SCF) + 500нМ Соединения 4 и культивировали в течение 5 дней при 37°C, в присутствии 5% CO2 в увлажненном инкубаторе. Концентрация клеток через 5 дней составляла 1x10⁶/мл.

Предварительно инкубированный комплекс RNP, состоящий из 150 нг каждого компонента: Cas9 (Genscript #265425-7) и sgРНК (TriLink, включающий целевой домен sgBCL11A_7 (т.е. целевой домен g7): GTGCCAGATGAACTTCCCATGTTTAAGAGCTATGCTGGAAACAGCATAGCAAGTTTAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTT) (SEQ ID NO: 2000) добавляли к 2x10⁵ клеткам с последующей электропорацией на системе Neon (L ifetechnologies) при параметрах импульсов: 1600 V, 20 мс, 1 импульс, согласно протоколу производителя. Проводились повторные электропорации. Были проведены контрольные (Mock) электропорации, без комплекса RNP. После электропорации клетки высевали в 1 мл среды и культивировали в течение ночи.

На следующий день после электропорации 1/20 несортированной культуры клеток высевали в SFEM (StemCell Technologies) +1X антибиотик/антимикотик + 50 нг/мл каждого из TPO, FLT3L, IL6, SCF, IL3 и GCSF и культивировали в течение 6 дней. Оставшиеся клетки окрашивали антителами к CD34 человека и CD90 человека и сортировали методом проточной цитометрии для получения CD34+CD90+ и CD34+CD90-популяций. Известно, что клетки CD34+CD90+ содержат гемопоэтические стволовые клетки, как показано долгосрочным культивированием мульти-линейного клеточного трансплантанта в иммунодефицитных мышах (см. Majeti et al., 2007 Cell Stem Cell 1, 635-645). Клеточные популяции, выбранные для сортировки, обозначены на представленной точечной гистограмме (графике дот-плот) на Фиг.3. Сортированные клетки культивировали в SFEM (StemCell Technologies) + 1X антибиотик/антимикотик + 50 нг/мл каждого из TPO, FLT3L, IL6, SCF, IL3 и GCSF в течение 6 дней, после чего все культуры собирали для анализа степени редактирования генома.

Геномная ДНК выделялась из собранных клеток и целевая область амплифицировалась следующими праймерами: BCL11A-7 F, gcttggctacagcacctctga (SEQ ID NO: 2018); BCL11A-7R, ggcatggggttgagatgtgct (SEQ ID NO: 2019). Продукт ПЦР подвергали денатурации и повторному отжигу с последующей инкубацией с T7E1 (New England Biolabs) в соответствии с рекомендациями производителя. Затем продукты реакции анализировали электрофорезом в агарозном геле (Фиг. 4). Верхняя полоса представляет собой нерасщепленную гомодуплексную ДНК, а нижние полосы указывают на продукты расщепления, полученные в результате гетеродуплексной ДНК. Крайняя левая дорожка представляет собой стандартный маркер длины ДНК. Интенсивность полосы была рассчитана путем пиковой интеграции необработанных изображений с помощью программного обеспечения ImageJ. % модификации гена (индел) рассчитывали следующим образом: % генной модификации=100 x (1- (1-расщепленная фракция)^1/2), что указано ниже каждой соответствующей дорожке геля.

Результаты показаны на Фиг 4. Эффективность редактирования гена в популяции CD34+CD90+, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, была эквивалентна таковой CD34+CD90-клеток или несортированых клеток. Эти эксперименты показывают, что редактирование гена может быть выполнено в CD34+HSPC и CD34+CD90+ клетках, дополнительно обогащённых по HSC.

Пример 3. Редактирование эритроидного энхансера гена BCL11A в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках (HSPC) с использованием CRISPR-Cas9 для возобновления экспрессии фетального глобина в эритроидных клетках взрослого.

Методы:

CD34+ культура клеток человека. Человеческие клетки CD34+ костного мозга человека были приобретены либо в AllCells (Cat#ABM017F), либо Lonza (Cat#2M-101C) и подращивались в течение 2-3 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) в которую добавляли 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo, Peprotech, Cat#300-18), 50 нг/мл Flt3-лиганда человека (Flt-3L, Peprotech, Cat#300-19), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF, Peprotech; Cat#300-07), человеческий интерлейкин-6 (IL-6, Peprotech, Cat#200-06), 1% L-глутамин; 2% пенициллин/стрептомицин и Cоединение 4 (0,75 мкМ). Через 2-3 дня разгонки культуры, её численность увеличилась в 2-3 раза по сравнению с начальным количеством клеток, приобретенных у AllCells, и в 1-1,5 раза от Lonza. Эти условия культивирования использовались для всех этапов экспансии/подращивания культуры CD34+, включая как до, так и после введения систем CRISPR/Cas, как описано здесь.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов из Cas9 и направляющих РНК, подготовка HSC и электропорация RNP в HSC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были приготовлены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных направляющих РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95^оC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка Cas9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,52 мкл буфера 5хCCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37^oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам, инкубировали в течение 5 мин при 37^oC. HSC собирали центрифугированием при 200×g в течение 15 мин и ресуспендировали в T-буфере, который поставляется в комплекте для электропорации Neon (Invitrogen; Cat#MPK1096) до плотности клеток 2x10⁷/мл. RNP смешивали с 12 мкл клеток путем осторожного пипетирования вверх и вниз 3 раза. Для получения комплексов Cas9 с одиночной нацеливающей РНК (sgРНК) 2,25 мкг sgРНК (в 1,5 мкл) смешивали с 2,25 мкг белка Cas9 (в 3 мкл) и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем комплекс sgРНК/Cas9 смешивали с 10,5 мкл клеток 2 x 10⁷/мл путем осторожного пипетирования вверх и вниз несколько раз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клеток (10 мкл) переносили в камеру электропоратора. Электропорацию проводили с помощью системы трансфекции Neon (Invitrogen, MPK5000S) с использованием 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса. После электропорации клетки переносили в 0,5 мл предварительно нагретой среды StemSpan SFEM, дополненной факторами роста и цитокинами, как описано выше, и культивировали при 37^oC в течение 2 дней.

Подготовка геномной ДНК. Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSC через 48 часов после электропорации. Клетки лизировали в 10 мМ Трис-HCl, pH 8,0; 0,05% SDS со свежедобавленной протеиназой K в концентрации 25мкг/мл и инкубировали при 37^oC в течение 1 часа с последующей дополнительной инкубацией при 85^oC в течение 15 минут для инактивации протеиназы K.

Анализ T7E1. Для определения эффективности редактирования HSC, был проведён анализ по методу T7E1. ПЦР проводили с использованием Phusion Hot Start II High-Fidelity kit (Thermo Scientific; Cat#: F-549L) со следующим протоколом циклов: 98^оC 30 сек; 35 циклов 98^оC 5сек, 68^оC для 20 мин, 72 ^оC 30сек; 72 ^оC в течение 5 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5'-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3 '(SEQ ID NO: 2001) и обратный праймер: 5'-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3' (SEQ ID NO: 2002). Продукты ПЦР денатурировали и повторно отжигали, используя следующие условия: 95^оC в течение 5 мин, 95-85^оC при -2^оC/сек, 85-25^оC при -0,1^оC/сек, завершение/удерживание при 4 ^оC. После отжига 1 мкл чувствительной к рассогласованию нуклеазы T7E1 (NEB, Cat#M0302L) добавляли к 10 мкл продукта ПЦР выше, дополнительно инкубировали при 37^оC в течение 15 минут для переваривания гетеродуплексов и полученные фрагменты ДНК анализировали с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Эффективность редактирования была определена количественно с помощью программного обеспечения ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/).

Секвенирование следующего поколения (NGS). Для более точного определения эффективности редактирования и профиля инсерций и делеций (инделов), продукты ПЦР подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). ПЦР проводили в двух репликах с использованием Titanium Taq PCR kit (Clontech Laboratories; Cat#: 639210) по следующему протоколу: 98^оC в течение 5 мин; 30 циклов 95^оC в течение 15 секунд, 68^оC в течение 15 секунд, 72^оC 1 мин; 72^оC в течение 7 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5'-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3 '(SEQ ID NO: 2001) и обратный праймер: 5'-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3' (SEQ ID NO: 2002). Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 2% агарозном геле и подготавливали для многократного секвенирования.

Анализ культуры клеток HSPC методом проточной цитометрии. Для того, чтобы охарактеризовать популяции стволовых клеток и клеток-предшественников, клетки HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии. Процент CD34+, CD34+CD90+ клеточных субкультур, до и после редактирования генома, определяли на аликвотах клеточных культур. Клетки инкубировали с анти-CD34 (BD Biosciences, Cat#555824), анти-CD90 (Biolegend, Cat#328109) в окрашивающем буфере, содержащем PBS, с добавлением 0,5% BSA при 4°C, в темноте в течение 30 мин. Жизнеспособность клеток определялась по 7ААД. Клетки промывали окрашивающим буфером и анализировали методом Multicolor FACS на FACSCanto (Becton Dickinson). Результаты проточной цитометрии анализировали с использованием Flowjo, данные представлены как процент клеток CD34+, CD34+CD90+ от общей популяции клеток. Абсолютные числа популяции каждой клеточной группы в культуре были рассчитаны исходя из общего числа клеток, умноженных на процент каждой популяции.

Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. Клетки HSC с отредактированным геномом, подвергали эритроидной дифференцировке in vitro через 48 часов после электропорации. Вкратце, клетки HSC с отредактированным геномом культивировали в среде дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Invitrogen, Cat#31980-097), с добавлением голотрансферрина человека 330 мкг/мл (Sigma, Cat#T0665), 10 мкг/мл рекомбинантного инсулина человека (Sigma, Cat#I3536), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, Cat#H3149), 5% плазму человека (Sigma, Cat#P9523), 3 МЕ/мл человеческого эритропоэтина (R&D, Cat#287-TC) 1% L-глутамина и 2% пенициллина/стрептомицина. В течение 0-7 дней культивирования в EDM дополнительно добавляли 10^-6M гидрокортизоном (Sigma, Cat#H0888), 100 нг/мл человеческого SCF (Peprotech, Cat#300-07) и 5 нг/мл IL-3 человека (Peprotech, Cat#200-03) в течение 7 дней. В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культивирования в EDM не добавляли дополнительных добавок. На 7, 14 и 21 дни культивирования клетки (2-10) ×10⁵) анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. Вкратце, клетки собирали центрифугированием при 350×g в течение 5 мин и один раз промывали окрашивающим буфером (Biolegend, Cat#420201). Затем клетки фиксировали добавлением 5 мл буфера для фиксации (Biolegend, Cat#420801) и три раза промывали 2 мл 1х внутриклеточного промывочного буфера для пермеализации (Biolegend, Cat#421002) центрифугированием при 350×g в течение 5 мин. Затем клетки инкубировали с 5 мкл анти-HbF-антитела (Life technologies, Cat#MHFH01) в 100мкл 1х внутриклеточного окрашивающего промывочного буфера в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего Perm/Wash буфера для промывания и ресуспендировали в 200 мкл окрашивающего буфера а затем проверяли на FACS Canto (Becton Dickinson) на экспрессию HbF. Результаты, проанализированные с использованием Flowjo и данных, были представлены в виде % HbF-положительных клеток (F клеток) от общей популяции плеток.

Методы анализы экспрессии генов. ~1×10⁶ клеток использовали для получения РНК с использованием набора RNeasy mini (Qiagen. Cat#74104). От 200 до 400 нг РНК использовали для синтеза 1-й цепи с использованием набора для синтеза кДНК qScript (Quanta, Cat#95047-500). Taq-man ПЦР была выполнена с использованием Taq-Man Fast Advance PR Mix (Life technologies, Cat#4444963) и GAPDH (Life technologies, ID#Hs02758991_g1), HbB (Life technologies, ID #: Hs00747223_g1), HbG2/HbG1 (Life technologies, ID#Hs00361131_g1) и BCL11A (Life technologies, ID #: Hs01093197_m1) в соответствии с протоколом производителя. Относительная экспрессия каждого гена была нормирована по экспрессии GAPDH.

Метод выявления колониеобразующих единиц (КОЕ). Для подсчёта колониеобразующих клеток (КОЕ) 300 клеток в 1,1 мл на чашку Methocult/35 мм в двух повторах помещали в метилцеллюлозную среду Methocult H4434, содержащую SCF, GM-CSF, IL-3 и эритропоэтин (StemCell Technologies). Пенициллин/Стрептомицин был добавлен в среду Methocult. Чашки инкубировали во увлажняющем инкубаторе при 37°С. Колонии, содержащие по меньшей мере 30 клеток, подсчитывали на 14 день после высева на чашки с использованием StemVision (StemCell Technologies), для получения изображения чашки целиком. Общее количество колоний, количество КОЕ-ГЕММ (гранулоцит, эритроцит, макрофаг, мегакариоцит), КОЕ-ГМ (гранулоцит, макрофаг), КОЕ-М (макрофаг), КОЕ-Е (эритроид) и БОЕ-Е (бурст-образующие единичные эритроиды), затем подсчитывали с помощью программного обеспечения анализатора изображений StemVision и подтверждалось вручную с помощью программного обеспечения StonyVision Colony Marker.

Изучение трансплантации in vivo. Исследования трансплантации in vivo проводились по протоколу, одобренному IACUC. Фракцию культуры геном-отредактированных клеток HSC, эквивалентную 30000 исходных клеток, вводили внутривенно через хвостовую вену в сублетально облученных (200 cGY) 6-8-недельных мышей линии NSG. Трансплантация проводилась в течение 24 ч после облучения. Трансплантация контролировалась проточным цитометрическим анализом крови, собираемой через 4, 8 и 12 недель после инфузии с использованием анти-CD45 человеческих и анти-45 мышиных антител. Мышей умерщвляли через 13 недель после трансплантации, а костный мозг, селезенку и тимус собирали для анализа методом проточной цитометрии и методом выявления колониеобразующих единиц. Для второй (последующей) трансплантации 50% костного мозга от каждой мыши-реципиента пересаживали в одну вторичную сублетально облученную мышь линии NSG. Трансплантацию контролировали проточным цитометрическим анализом крови, собираемой через 4, 8 и 12 недель после инфузии с использованием маркера панлейкоцитов и маркеров CD45 с использованием анти-человеческих CD45 и анти-мышиных CD45-антител. Через 15 недель после трансплантации костный мозг и селезенку собирали у вторичных мышей и анализировали с помощью проточной цитометрии и методом выявления колониеобразующих единиц.

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение эритроидного энхансера BCL11A в клетках HSC будет приводить к уменьшению экспрессии BCL11A избирательно в линии эритроидных клеток и уменьшать ингибирование подавления экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный уровень HbF белка, или F-клеток. Повышенный уровень белка HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и будет терапевтическим/лечебным средством для пациентов как с β-талассемией, так и с серповидно-клеточной анемией. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) с экспрессией HSCT, т.е. трансплантация отредактированных клеток HSC от пациентов с серповидно-клеточной анемией (далее SCD) ex vivo, была также объединена с технологией усиления клеточной экспансии стволовых клеток, например, с помощью ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки во всей полноте), например, с помощью Соединения 4 для увеличения экспансии клеток ex vivo и увеличения доставляемой дозы модифицированного гена HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы, Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет важное значение. Недавние сообщения продемонстрировали, что комплексы рибонуклеопротеинов c Cas9 (RNP), доставляемые в клетки-мишени электропорацией, могут осуществлять эффективное и специфическое редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего побочные эффекты, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно упростило бы перевод редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белковые и gРНКомплексы с Cas9 (RNPs) были доставлены в культивированные клетки HSPC, а общие схемы экспериментов показаны на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 очищали от Escherichia coli и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr или полноразмерной однонаправленной РНК (sgРНК) для формирования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список и последовательности gРНК, использованные в исследовании, показаны в Таблице 14. Комплексы RNP были электропорированы в клетки костного мозга CD34+HSPC здорового или SCD-пациента путём электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки подвергали экспансии в течение 2 дней в среде способствующей экспании клеток HSC, содержащей Cоединение 4, до доставки комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП при электропорации. Чтобы облегчить восстановление клеток после процесса трансфекции, клетки культивировали в течение двух дополнительных дней в модифицированной среде экспансии клеток, содержащей Cоединение 4. Жизнеспособность клеток через 48 часов после электропорации определялась проточной цитометрией с использованием 7AAD. Жизнеспособность была относительно высокой, при этом >80% клеток были жизнеспособны (Фиг. 18), что позволяло предположить, что клетки HSPC допускает электропорацию комплексов RNP относительно хорошо по сравнению с другими методами доставки системы Cas9 и gРНК, описанными в литературе.

Таблица 14. Список gРНКs, нацеленных на эритроидный специфичный энхансер BCL11A, используемых в данном исследовании.

ID целевого домена gРНК	Область/цепь	dgРНК тестирована	sgРНК тестирована	Целевая Последовательность	Координаты (hg38)	SEQ ID NO:
CR000245	+58/+	x		tcagtgagatgagatatcaa	chr2:60494483-60494502	2020
CR000246	+58/+	x		cagtgagatgagatatcaaa	chr2:60494484-60494503	2021
CR000260	+58/-	x		tgtaactaataaataccagg	chr2:60494790-60494809	2022
CR001124	+58/-	x		ttagggtgggggcgtgggtg	chr2:60495217-60495236	2023
CR001131	+58/-	x		attagggtgggggcgtgggt	chr2:60495218-60495237	2024
CR000309	+58/+	x	X	cacgcccccaccctaatcag	chr2:60495221-60495240	2025
CR000308	+58/-	x	X	tctgattagggtgggggcgt	chr2:60495222-60495241	2026
CR000310	+58/-	x	X	ttggcctctgattagggtgg	chr2:60495228-60495247	2027
CR000311	+58/-	x	X	tttggcctctgattagggtg	chr2:60495229-60495248	2028
CR000312	+58/-	x	X	gtttggcctctgattagggt	chr2:60495230-60495249	2029
CR000313	+58/-	x	X	ggtttggcctctgattaggg	chr2:60495231-60495250	2030
CR000314	+58/-	x	X	aagggtttggcctctgatta	chr2:60495234-60495253	2031
CR000315	+58/-	x	X	gaagggtttggcctctgatt	chr2:60495235-60495254	2032
CR001128 / sgEH15	+58/+		X	atcagaggccaaacccttcc	chr2:60495236-60495255	2033
CR001127 / sgEH14	+58/-		X	cacaggctccaggaagggtt	chr2:60495247-60495266	2034
CR001126 / sgEH13	+58/-	x	X	tttatcacaggctccaggaa	chr2:60495252-60495271	2035
CR001125 / sgEH12	+58/-		X	ttttatcacaggctccagga	chr2:60495253-60495272	2036
CR000316 / sgEH11	+58/-		X	ttgcttttatcacaggctcc	chr2:60495257-60495276	2037
CR000317 / sgEH4	+58/-			ctaacagttgcttttatcac	chr2:60495264-60495283	2038

Метод T7E1 удобен для оценки редактирования определенных сайтов генома. Геномную ДНК выделяли из клеток HSPC через 2 дня после электропорации. Целевую область энхансера гена BCL11A амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Продукты ПЦР подвергали анализу методом T7E1. Конечные продукты анализа T7E1 подвергали электрофорезу в 2%-ном агарозном геле, а проценты отредактированных аллелей определяли с помощью imageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/). Ожидаемые размеры ПЦР-продуктов и приблизительные ожидаемые размеры фрагментов, расщепленных T7E1, показаны на Фиг 19. Общие частоты редактирования указаны как процент от общего количества изменений ниже изображения агарозного геля. Редактирование генома в локусе BCL11A наблюдалось в клетках, обработанных BCL11A Cas9 RNP, но не в ложно-электропорированных контрольных клетках (Фиг. 19).

Геномные ПЦР-продукты области эритроидного энхансера +58 гена BCL11A также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). NGS облегчает одновременный мониторинг большого количества образцов, позволяя общий обзор аллелей. Кроме того, NGS предоставляет информацию о гетерогенности инсерций и делеций (инделов). Последовательности сравнивали с последовательностями из контрольных (Mock) обработанных клеток. Результаты анализа последовательности показали, что CRISPR-Cas9-индуцированные двухцепочные разрывы восстанавливались по типу NHEJ, что приводило к вариабельным частотам небольших делеций и инсерций (инделов) вблизи участка расщепления Cas9, расположенного в области эритроидного энхансера +58 BCL11A (Фиг. 20 и Таблица 15). В целом, наблюдаемая эффективность редактирования была выше для sgРНКs по сравнению с dgРНКs, нацеленными на одну и ту же последовательность, причем 12 из 14 sgРНК обеспечивали редактирование более чем в 50% аллелей (Фиг. 20 и Таблица 15), хотя (не ограничиваясь теорией) различия в эффекте между sgРНК и dgРНК могут зависеть от источника материалов.

Таблица 15. Генотипы, идентифицированные NGS в HSPC, отредактированные с помощью Cas9-RNP. Дана нуклеотидная последовательность для каждой популяции. Целевая последовательность, на которую нацелена каждая gРНК, указана выше каждой группы инделов, причем последовательности PAM указаны строчными буквами. Прочерки обозначают делетированные основания, а строчные буквы-вставки. В описании gРНК dgРНК относится к двойным молекулам gРНК, содержащим указанный целевой домен. sgРНК обозначает отдельные молекулы gРНК, содержащие указанный целевой домен. В тех случаях, когда несколько экспериментов проводились с той же самой dgРНК или sgРНК, последовательные эксперименты были помечены как «dgРНК», «d1gРНК», «d2gРНК» и т.д.

gРНК	Вариант	% Аллелей	Длина инделов	SEQ ID NO:
	CTAACAGTTGCTTTTATCACagg			2039
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAG---------------GCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	5,96%	-15	2040
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATtCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	5,77%	1	2041
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAGTTGCT-------------CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	4,69%	-13	2042
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCA--GGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	0,90%	-2	2043
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTA-CACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	0,88%	-1	2044
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTT--CACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	0,77%	-2	2045
CR00317-dgРНК	TAGTGCAAGCT-----------------------CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG	0,67%	-23	2046
	ATCAGAGGCCAAACCCTTCCacc			2047
CR001128-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	20,07%	-1	2048
CR001128-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	5,00%	-5	2049
CR001128-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	4,84%	1	2050
CR001128-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	4,01%	-4	2051
CR001128-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA--GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	2,99%	-2	2052
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	23,33%	-1	2053
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGG-TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	5,77%	-1	2054
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	5,77%	1	2055
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA--GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	5,37%	-2	2056
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAG--TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	3,70%	-2	2057
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----------CCTCTGATTAGGGTGGGG	3,62%	-10	2058
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGG	3,54%	-17	2059
CR001128-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA---GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	2,97%	-3	2060
	TTGCTTTTATCACAGGCTCCagg			2061
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	16,03%	-7	2062
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTtCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	8,25%	1	2063
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATC--------CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	8,04%	-8	2064
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCcTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	4,07%	1	2065
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC-CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	3,55%	-1	2066
CR00316-sgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC--CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	2,37%	-2	2067
CR00316-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	2,49%	-7	2068
CR00316-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTtCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,78%	1	2069
CR00316-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATC--------CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,32%	-8	2070
CR00316-dgРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCcTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,26%	1	2071
CR00316-d1gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	6,94%	-7	2072
CR00316-d1gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATC--------CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	4,99%	-8	2073
CR00316-d1gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTtCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	4,69%	1	2074
CR00316-d1gРНК	AGCTAACAGT-------------------------------------GATTAGGGTGGGG	2,90%	-37	2075
CR00316-d1gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC-CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,54%	-1	2076
CR00316-d2gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	11,64%	-7	2077
CR00316-d2gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATC--------CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	6,04%	-8	2078
CR00316-d2gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTtCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	5,40%	1	2079
CR00316-d2gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCcTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,80%	1	2080
CR00316-d2gРНК	AGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----GAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG	1,43%	-5	2081
	TTTTATCACAGGCTCCAGGAagg			2082
CR001125-dgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAaGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	13,50%	1	2083
CR001125-dgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	1,82%	-17	2084
CR001125-dgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGG-----------GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	1,76%	-11	2085
CR001125-dgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	1,59%	-7	2086
CR001125-dgРНК	AACAGTTGCTTTT------------------------------------GGTGGGGGCGT	1,33%	-36	2087
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAaGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	26,27%	1	2088
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGG-----------GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	4,64%	-11	2089
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGG-------AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	4,11%	-7	2090
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	2,66%	-17	2091
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGCT------------TGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	2,58%	-12	2092
CR001125-sgРНК	AACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCC-GGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGT	1,84%	-1	2093
	TTTATCACAGGCTCCAGGAAggg			2094
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAG-AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	9,38%	-1	2095
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGG-----------GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	3,28%	-11	2096
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGgAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	2,91%	1	2097
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	2,82%	-17	2098
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTTT---------------------------------------GGGGGCGTG	1,61%	-39	2099
CR001126-dgРНК	ACAGTTGCTTT----------------------------------------GGGGGCGTG	1,12%	-40	2100
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAG-AAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	12,70%	-1	2101
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGG-----------GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	4,37%	-11	2102
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGgAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	3,22%	1	2103
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGaT------------------AAGGTGGGGGCGTG	2,96%	-18	2104
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	2,68%	-17	2105
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	2,59%	-4	2106
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGcGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	1,80%	1	2107
CR001126-sgРНК	ACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCC-GGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTG	1,74%	-1	2108
	CACAGGCTCCAGGAAGGGTTtgg			2109
CR001127-dgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGG-TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	4,00%	-1	2110
CR001127-dgРНК	TGCTTTTATCACAGGCcT-----------------------------GGGGCGTGGGTGG	2,35%	-29	2111
CR001127-dgРНК	TGCTTTTATCACAGGC------------------------------------GTGGGTGG	2,19%	-36	2112
CR001127-dgРНК	TGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	1,59%	-17	2113
CR001127-dgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGG------CCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	1,48%	-6	2114
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	23,21%	-1	2115
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGG-TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	6,65%	-1	2116
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	5,20%	-17	2117
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	4,89%	1	2118
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----------------------------GCGTGGGTGG	4,30%	-28	2119
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	3,72%	-5	2120
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGC------------------------------------GTGGGTGG	3,71%	-36	2121
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAG--TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	3,53%	-2	2122
CR001127-sgРНК	TGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGGtC-----------------CGTTTGCGTGGGTGG	2,29%	-17	2123
	CACGCCCCCACCCTAATCAGagg			2124
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGA	11,56%	-19	2125
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGAaTTAGGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGA	7,29%	1	2126
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGA	6,16%	-24	2127
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGA	4,74%	-22	2128
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------GCGTGGGTGGGGTAGA	4,34%	-18	2129
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGA	3,45%	-24	2130
CR00309-sgРНК	TATCACAGGCTCCAGG---------------------------GGCGTGGGTGGGGTAGA	1,87%	-27	2131
	GAAGGGTTTGGCCTCTGATTagg			2132
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	5,80%	-19	2133
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	4,08%	-18	2134
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGG---------------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,80%	-27	2135
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGT------------------------------GGGGTAGAAGAGGA	2,62%	-30	2136
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTG------------GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,49%	-12	2137
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,44%	-24	2138
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGcG----------------------TAGAAGAGGA	1,55%	-22	2139
CR00315-dgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTT-------------------------GGGTGGGGTAGAAGAGGA	1,52%	-25	2140
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	8,40%	-19	2141
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	4,66%	-18	2142
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGT------------------------------GGGGTAGAAGAGGA	3,77%	-30	2143
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------------------GGTAGAAGAGGA	3,19%	-28	2144
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,78%	-22	2145
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGG-----------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,71%	-29	2146
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGA	2,50%	-24	2147
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGG---------------------------------------GTAGAAGAGGA	2,28%	-39	2148
CR00315-sgРНК	AGGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGA	2,25%	-24	2149
	AAGGGTTTGGCCTCTGATTAggg			2150
CR00314-dgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTccccATTGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	0,91%	4	2151
CR00314-dgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGG-------------------------TGGGGTAGAAGAGGAC	0,86%	-25	2152
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	4,47%	-19	2153
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	3,89%	-24	2154
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGAC	3,75%	-24	2155
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGA---------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	2,60%	-9	2156
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGGCC------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	2,26%	-18	2157
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGAaTTAGGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	2,11%	1	2158
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTG--------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGAC	2,05%	-20	2159
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------------------GGTAGAAGAGGAC	2,04%	-28	2160
CR00314-sgРНК	GGCTCCAGGAAGGGT--------------------------GGGTGGGGTAGAAGAGGAC	2,03%	-26	2161
	GGTTTGGCCTCTGATTAGGGtgg			2162
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	16,00%	-19	2163
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGT------------------------------GGGGTAGAAGAGGACTGG	5,69%	-30	2164
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	3,93%	-1	2165
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGT-----------------------------------AGAAGAGGACTGG	3,57%	-35	2166
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	2,75%	-22	2167
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	2,70%	-24	2168
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGG	2,66%	-24	2169
CR00313-dgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT-GGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	2,17%	-1	2170
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	11,86%	-19	2171
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	3,86%	-22	2172
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGG	3,36%	-24	2173
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	3,31%	-1	2174
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTT-----------------------------GGGGTAGAAGAGGACTGG	2,83%	-29	2175
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGGCCT-------------------GGGTGGGGTAGAAGAGGACTGG	2,76%	-19	2176
CR00313-sgРНК	TCCAGGAAGGGTTTGG------------------------------TAGAAGAGGACTGG	2,31%	-30	2177
	GTTTGGCCTCTGATTAGGGTggg			2178
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	16,87%	-1	2179
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	9,86%	-19	2180
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	5,65%	-2	2181
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	3,83%	-24	2182
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	3,42%	-22	2183
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,10%	-24	2184
CR00312-dgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGA----GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	1,85%	-4	2185
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	13,35%	-1	2186
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	7,85%	-19	2187
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	4,19%	-24	2188
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	3,98%	-2	2189
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG-----GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,95%	-5	2190
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,29%	-24	2191
CR00312-sgРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGaGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,09%	1	2192
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	19,22%	-1	2193
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	6,28%	-2	2194
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	5,31%	-24	2195
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	4,22%	-19	2196
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	3,10%	-16	2197
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,85%	-2	2198
CR00312-d1gРНК	CCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,74%	-24	2199
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	23,15%	-1	2200
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	8,99%	-19	2201
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	6,82%	-2	2202
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGG-----------------------GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,69%	-23	2203
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGG------------------------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,29%	-24	2204
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,25%	-2	2205
CR00312-d2gРНК	CCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGC	2,13%	-16	2206
	TTTGGCCTCTGATTAGGGTGggg			2207
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	19,62%	-1	2208
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	3,01%	-19	2209
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,77%	-2	2210
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG-----GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,23%	-5	2211
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGG------------------------GTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,21%	-24	2212
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGG-------------TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,05%	-13	2213
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTG-------TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	1,88%	-7	2214
CR00311-dgРНК	CAGGAAGGGT------------------------------GGGGTAGAAGAGGACTGGCA	1,76%	-30	2215
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	28,21%	-1	2216
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	4,88%	-19	2217
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGT------------------------------GGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,72%	-30	2218
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,62%	-2	2219
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG----GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,35%	-4	2220
CR00311-sgРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG-----GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,06%	-5	2221
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	31,34%	-1	2222
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	4,00%	-2	2223
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCT------------------------------AAGAGGACTGGCA	2,84%	-30	2224
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGG-----------------------------------GAGGACTGGCA	2,41%	-35	2225
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTT---------------------------------AGAAGAGGACTGGCA	2,35%	-33	2226
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTC-------------------------------GAGGACTGGCA	2,11%	-31	2227
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG----GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,03%	-4	2228
CR00311-d1gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG---GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	1,71%	-3	2229
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	30,20%	-1	2230
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	7,57%	-19	2231
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	3,57%	-2	2232
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGG----------------------------GGTAGAAGAGGACTGGCA	2,39%	-28	2233
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG-----GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	2,10%	-5	2234
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG----GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	1,50%	-4	2235
CR00311-d2gРНК	CAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCA	1,49%	-16	2236
	TTGGCCTCTGATTAGGGTGGggg			2237
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG----GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	7,70%	-4	2238
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	7,13%	-6	2239
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG-----GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	6,34%	-5	2240
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	5,38%	-1	2241
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	3,73%	-2	2242
CR00310-sgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT-----GGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAG	3,54%	-5	2243
CR00310-dgРНК	AGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGGG-TAGAAGAGGACTGGCAG	0,67%	-1	2244
	TCTGATTAGGGTGGGGGCGTggg			2245
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGG------------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	16,28%	-12	2246
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGG-----------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	5,59%	-11	2247
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGG--------TGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	4,51%	-8	2248
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGAT------------------GGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	3,54%	-18	2249
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTtA-----------------------------CTGGCAGACCTCT	2,76%	-29	2250
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTgG-------CCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	2,27%	-7	2251
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTAGGG----------------GTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	2,26%	-16	2252
CR00308-sgРНК	GGTTTGGCCTCTGATcC--AAGAGCCCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	1,99%	-2	2253
CR00308-dgРНК	GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGGG-TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCT	0,42%	-1	2254
	ATTAGGGTGGGGGCGTGGGTggg			2255
CR001131-dgРНК	TGGCCTCTGATTAGGGTGGGG------------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCAT	44,62%	-12	2256
CR001131-dgРНК	TGGCCTCTGATTAGGGTGGGGG-----------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCAT	3,19%	-11	2257
CR001131-dgРНК	TGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGG-TGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCAT	1,72%	-1	2258
CR001131-dgРНК	TGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCG------------AAGAGGACTGGCAGACCTCTCCAT	1,04%	-12	2259
	TTAGGGTGGGGGCGTGGGTGggg			2260
CR001124-dgРНК	GGCCTCTGATTAGGGTGGGG------------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCATC	8,52%	-12	2261
CR001124-dgРНК	GGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGG-TGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCATC	2,12%	-1	2262
CR001124-dgРНК	GGCCTCTGATTAGGGTGGGGG-----------TAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTCCATC	1,33%	-11	2263
	TGTAACTAATAAATACCagg			2264
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAATACC-GGAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	26,54%	-1	2265
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAATAC-AGGAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	12,39%	-1	2266
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAATACCcAGGAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	12,32%	1	2267
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAATACC--GAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	2,37%	-2	2268
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAAT--CAGGAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	1,89%	-2	2269
CR00260-dgРНК	CTGCTGAGGTGTAACTAATAAATA---GGAGGCAGCATTTTAGTTCACAAGCTCGGAGCA	1,28%	-3	2270
	CAGTGAGATGAGATATCAAAggg			2271
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGgATATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	7,56%	1	2272
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGAT--CTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	4,46%	-2	2273
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTG------CATCTCACTGAGCTCTGGGCC	3,50%	-6	2274
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTT-----CTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	2,98%	-5	2275
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTT-ATATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	2,97%	-1	2276
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTG---TCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	2,96%	-3	2277
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTT--TATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	2,93%	-2	2278
CR00246-dgРНК	GGGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTG-TATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCC	2,70%	-1	2279
	TCAGTGAGATGAGATATCAAagg			2280
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGAaTATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	22,36%	1	2281
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGA-ATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	8,97%	-1	2282
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGAT--CTCATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	4,03%	-2	2283
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTG-TATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	2,45%	-1	2284
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTT--ATATCTCATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	1,85%	-2	2285
CR00245-dgРНК	GGAGATGGAATGAACACTTTTCGTCCCCTTTGA-----CATCTCACTGAGCTCTGGGCCG	1,38%	-5	2286
	GTGCCAGATGAACTTCCCATtgg			2287
g7BCL11a-BC-1sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCC-ATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	15,63%	-1	2288
g7BCL11a-BC-1sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTC--ATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	7,36%	-2	2289
g7BCL11a-BC-1sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCCCcATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	6,88%	1	2290
g7BCL11a-BC-1sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAAC-----ATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	2,81%	-5	2291
g7BCL11a-BC-1sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCC--TTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	2,59%	-2	2292
g7BCL11a-BC-2sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCC-ATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	18,89%	-1	2293
g7BCL11a-BC-2sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTC--ATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	9,14%	-2	2294
g7BCL11a-BC-2sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCCCcATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	5,52%	1	2295
g7BCL11a-BC-2sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACTTCC--TTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	4,39%	-2	2296
g7BCL11a-BC-2sgРНК	CTGTGGGCAGTGCCAGATGAACT---CATTGGGGGACATTCTTATTTTTATCGAGCACAA	3,18%	-3	2297

Чтобы определить, сохранили ли CD34+ HSPC свой мультилинейный потенциал к дифференцировке в эффекторные клетки после манипуляций ex vivo, включая редактирование генома, для выборочных gРНК проводили анализ методом выявления колониеобразующих единиц (КОЕ) in vitro. Геном-отредактированные клетки суспендировали в метилцеллюлозе, дополненной цитокинами, и выдерживали в течение 14 дней при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. Выросшие дискретные колонии были классифицированы и подсчитано их количество, определены типы зрелых клеток с использованием морфологических и фенотипических критериев (STEMvision), и подсчитаны вклады различных фракций колонии-образующих единиц, таких как: колониеобразующая единица-эритроид (КОЕ-Э), бурст-образующие единичные эритроиды (БОЕ-Е), колониеобразующий блок-гранулоцит/макрофаг (КОЕ-ГМ), и колониеобразующая единица-гранулоцит/эритроцит/макрофаг/мегакариоцит (колониеобразующая единица-ГЕММ, Фиг. 21). Потенциал формирования колоний из ложных трансфицированных клеток был самым высоким, за ним следуют gРНК, нацеленные на область +58 эритроидного энхансера BCL11A. Аналогичное количество и типы колоний наблюдалось для gРНК, нацеленных на эритроидный энхансер BCL11A. Нацеливающая РНК, нацеленная на экзон 2 BCL11A, давала наименьшее количество колоний (Фиг. 22).

Относительные уровни экспрессии мРНК BCL11A, гамма- и бета-глобиновых цепей в унилинейной эритроидной культуре определяли количественно с помощью ПЦР в реальном времени. Уровни транскрипта были нормализованы по отношению к уровням транскрипта GAPDH человека. Уровни мРНК BCL11A были уменьшены в геном-редактированных клетках HSPC. Напротив, уровни мРНК BCL11A оставались неизмёнными в нередактированных или отредактированных по экзону 2 BCL11A клетках HSPC на 7 и 14 дни эритроидной дифференцировки (Фиг 23). Уровни мРНК гамма-глобина увеличивались, и, соответственно, мРНК бета-глобина постепенно уменьшались в отредактированных клетках HSPC при эритроидной дифференцировке (Фиг. 23). Увеличение уровня HbF и снижение уровня бета-глобина (серповидного глобина) в эритроцитах, полученных из геном-отредактированных клеток может иметь терапевтические последствия, выраженные в уменьшении выработки серповидно-клеточных эритроцитов.

Геном-отредактированные и нередактированные клетки HSPC на разных стадиях (7, 14 и 21 день) эритроидной дифференцировки анализировали с помощью проточной цитометрии по уровням экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки, рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a), используя антитела, конъюгированные с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гейтингу, исключая 7AAD. Редактирование генома не оказывало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали одинаковые уровни CD71 и CD235A, положительно коррелирующими с эритробластами на поздних стадиях развития. Редактирование генома в области +58 эритроидного энхансера привело к большему увеличению содержащихся в клетках (до 67%) HbF по сравнению с другими gРНК и контрольными клетками с ложной электропорацией (Фиг. 24). Наблюдалась очень высокая индукция HbF-положительных клеток при использовании g7 gРНК, нацеленной на экзон 2 BCL11A. Тем не менее, клеточная пролиферация и колониеобразующий потенциал клеток, отредактированных по экзону 2 были резко снижены (Фиг. 21 и 22).

При многократном секвенировании последовательности целевой района, мы заметили, что связывающие GATA1 и TAL1 последовательности были неповреждёнными в измененном целевом районе генома (Фиг. 25). Недавно опубликованные статьи указывают на важность сайта связывания GATA1 в регуляции экспрессии BCL11A и снятия репрессии фетального глобина. Viestra et al., Nature Methods. 2015, 12: 927. В отличие от опубликованных отчетов, в которых показана важность двух этих мотивов для поддержания уровней BCL11A во взрослых эритроидных клетках, наши результаты показывают, что последовательности, расположенные выше двух сайтов связывания транскрипционных факторов, также важны для регуляции экспрессии гена BCL11a и редактирование генома исключительно на этих вышерасположенных сайтах приводит к усилению экспрессии HbF, даже если сайты связывания GATA1 и TAL1 остаются незатронутыми.

Пример 3.1.

Методы:

CD34+ культура клеток человека. Человеческие CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) при использованием иммуноселекции (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя и подращивались в течение 3 дней с использованием StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) с добавлением 50 нг/мл каждого из тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L, Life Technologies, Cat.#PHC9413), человеческого фактора стволовых клеток (SCF, Life Technologies, Cat.#PHC2113) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Life Технологии, Cat.#PHC0063), а также 1x антибиотика/антимикотика (Gibco, Cat.#10378-016) и 500 нМ Соединения 4.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP)комплексов из Cas9 и нацеливающих РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в клетки HSPC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были приготовлены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных направляющих РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95^оC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка Cas9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,5 мкл буфера 5хCCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37^oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам, инкубировали в течение 5 мин при 37^oC. Для создания контрольной точки None в комплексы tracr/CAS9 добавляли транспортное средство, а не crРНК. HSPC собирали центрифугированием и ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza cat. No. PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Все 20 мкл электропорации были продублированы. Для экспериментов в этом примере 3.1 использовали tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующую структуру и последовательность, с обозначенными модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатная связь(*):

mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2298), где N являются нуклеотидами указанного целевого домена (т.е. как указано идентификатором CRxxxxx).

Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Hyclone, Cat#SH30228.01), 330 мкг/мл человеческого голотрансферрина (Invitria Cat#777TRF029), 10 мкг/мл рекомбинантного человеческого инсулина (Gibco Cat#A1138211), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, Cat#H3393), 5% человеческой AB-сыворотки (Sigma, Cat#H4522), 125 нг/мл человеческого эритропоэтина (Peprotech#10779- 058) и 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016). В среду EDM дополнительно добавляли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). Через 2 дня культуру клеток разбавляли свежей средой. Культуры поддерживали в общей сложности 7 дней, и в это время клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием на экспрессию HbF. Вкратце, клетки один раз промывали PBS, ресуспендировали в LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain (ThermoFisher L34963, 1: 1000 в PBS) и инкубировали в течение 30 мин. Затем клетки промывали и окрашивали анти-CD71-BV711 (Fisher Scientific Company Llc. BDB563767) и антителами против CD235a-APC (BD 551336) в течение 30 мин. Затем клетки промывали, а затем фиксировали буфером фиксации (Biolegend, Cat#420801) и пермеабилизировали 1х пермеабилизирующим внутриклеточным окрашивающим буфером (Biolegend, Cat#421002) в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки инкубировали с 0,5 мкл анти-HbF-PE-антитела (Life Technologies, часть № MHFH04) в 50 мкл 1х внутриклеточного окрашивающего перм-промывочного буфера в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего Perm/Wash буфера, ресуспендировали в буфере для окрашивания и анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) экспрессию HbF. Результаты анализировали с использованием Flowjo, данные были представлены в виде % HbF-положительных клеток (F клеток) в жизнеспособной эритроидной популяции клеток CD71

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC через 48 часов после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)). Для определения эффективности редактирования и профилей инсерций и делеций (инделов) проводилась ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих целевые сайты, и продукты ПЦР затем подвергали секвенированию следующего поколения (NGS). % редактирования соответствующих последовательностей в образцах, не подвергавшихся редактированию, в большинстве случаев случае был менее 1% и никогда не превышал 3%.

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области эритроидного энхансера BCL11A снижает репрессию экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки». В вариантах осуществления клетка считается F клеткой, если она производит как минимум 6 пикограмм фетального гемоглобина на клетку). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9/RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 17 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Таблица 17. Список gРНКs, нацеленных на область специфического энхансера эритроидов BCL11A, используемух в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК, как описано в Материалах и Методах.

ID целевого домена gРНК	% HbF+ (F клеток), среднее по репликам	% HbF+ (F клеток, стандартное отклонение	% редактированных, среднее по репликам	% редактированных, стандартное отклонение
CR000308	27,7	0,5	52,8	0,7
CR000309	43,1	1,4	74,8	7,5
CR000310	28,6	0,1	65,1	3,6
CR000311	27,2	0,7	50,5	1,9
CR000312	47,9	1,0	87,8	0,9
CR000313	36,8	1,2	66,6	2,7
CR000314	32,7	0,1	39,8	0,5
CR000316_EH11	34,4	0,8	52,9	1,3
CR000317_EH4	50,7	0,4	82,7	2,5
CR001124	28,6	0,1	2,5	0,1
CR001125_EH12	42,3	0,4	94,0	0,9
CR001126_EH13	44,6	1,7	76,7	6,1
CR001127_EH14	33,3	0,1	26,1	3,3
CR001128_EH15	46,4	1,2	84,6	5,6
CR001129	25,3	0,8	3,6	0,4
CR001130	27,1	0,8	11,8	1,7
CR001131	28,6	0,0	35,6	8,5
None/control	22,4	0,6	n/a	n/a
g8	66,3	0,7	94,2	1,1

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область специфичного эритроидного энхансера BCL11A привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 50,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (22,4%) (Таблица 17). Также параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Также, геномные ПЦР-продукты эритроидного энхансера BCL11A были подвергнуты секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. dgРНК, используемые в исследовании, приводили к получению более чем 40% HbF+ клеток с диапазоном редактирования от 74,8 до 94,0% (Таблица 17). Имея тот же самый целевой домен, dgРНК в этом Примере отличалась в последовательностях tracr и crРНК от последовательностей, описанных в примере 3; однако, редактирование и индукция HbF были одинаковыми для всех структурных вариаций (форматов) dgРНК для большинства целевых доменов. Следует отметить, что CR000317_EH4 в формате dgРНК в текущем исследовании привел к высокой индукции HbF, до 50,7% HbF+ клеток. Увеличение HbF содержащих эритроцитов, полученных из геном-отредактированных клеток, вероятно, будет иметь положительные терапевтические последствия за счёт уменьшения выработки серповидно-клеточных эритроцитов.

Пример 3.2. Оптимизация редактирования генома с помощью gРНК и положительная регуляция фетального гемоглобина при применении gРНК, нацеленных на область +58 энхансера BCL11a HSPC.

Основываясь на % редактирования являющегося детального скрининга молекул gРНКs, нацеленных на область +58 энхансера BCL11a, для дальнейшего изучения и оптимизации были отобраны 8 целевых доменов gРНК. Для выяснения влияния модификаций, внесённых в молекулы gРНК на% редактирования генома, дифференцировку эритроидов и экспрессию фетального гемоглобина, были разработаны различные версии восьми молекул gРНК, нацеленных на сайты в области +58 области энхансера BCL11a. Были созданы следующие версии gРНК, содержащие целевой домен: CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR01125, CR01126, CR01127 и CR01128:

dgРНК (все последовательности, отличные от последовательностей целевого домена, описанных в примере 1):

1. Немодифицированная crРНК и немодифицированный tracr («Unmodified» или «Unmod»)

2. Немодифицированная crРНК и немодифицированный tracr, но имеющий на 5'-конце 18 нп указанного целевого домена (вместо полных 20 нп) («18nt»)

3. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями, и немодифицированный tracr («PS»)

4. crРНК, имеющая дополнительные перевернутые абазивные остатоки как на 5'-, так и на 3'-конце и немодифицированный tracr («Invd»)

5. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-О-метильными группами, и немодифицированный tracr («OMePS»)

6. crРНК, имеющая три 3'нп и три 5' нп, модифицированные 2'-фторгруппой, и немодифицированный tracr («F»)

7. crРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-фторгруппой, и немодифицированный tracr («F-PS»)

sgРНК (все последовательности, отличные от последовательностей целевого домена, являются такими, как описаные в примере 1):

1. Немодифицированная sgРНК («Unmodified» или «Unmod»)

2. Немодифицированная sgРНК, но имеющая на 5'-конце 18 нп указанного целевого домена (вместо полных 20 нп) («18nt»)

3. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями («PS»)

4. sgРНК, имеющая дополнительные перевернутые абазивные остатки как на 5'-, так и на 3'-конце («Invd»)

5. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-О-метильными группами («OMePS»)

6. sgРНК, имеющая три 3'нп и три 5' нп, модифицированные 2'-фторгруппой («F»)

7. sgРНК, имеющая три 3' нп и три 5' нп, модифицированные фосфоротиоатными связями и 2'-фторгруппой («F-PS»)

Все остальные реагенты и способы были такими, как описано в Примере 3. Все результаты были выполнены в двух репликах, и результаты представлены на Фиг. 28-32. На Фиг. 28А и Фиг.28В показан % редактирования, определённый NGS в клетках CD34+ через 2 дня после электропорации RNP, содержащего указанные двойные нацеливающие РНК (dgРНКs). На Фиг. 29 показано показан % редактирования, определённый NGS в клетках CD34+ через 2 дня после электропорации RNP, содержащего указанные одиночные нацеливающие РНК (sgРНКs). На Фиг. 30 показан % положительных клеток HbF, определённый методом проточной цитометрией на 14-й день после переноса отредактированных CD34+ клеток в среду дифференцировки эритроидов после электропорации RNP, содержащего указанные двойные нацеливающие РНК (dgРНКs). На Фиг. 31 показан % положительных клеток HbF, определённый методом проточной цитометрией на 14-й день после переноса отредактированных CD34+ клеток в среду дифференцировки эритроидов после электропорации RNP, содержащего указанные одиночные нацеливающие РНК (sgРНКs). На Фиг. 32 показано кратность экспансии отредактированных клеток через 14 дней в среде дифференцировки эритроидов. Эти результаты показывают, что многие из выбранных молекул gРНК, как в форматах dgРНК, так и в sgРНК, способны достигать редактирования генома в целевом сайте с эффективностью более 90%, а в некоторых случаях, с эффективностью более 98% при доставке в CD34+ клетки в виде RNP путём электропорации. Также, многие из выбранных gРНК способны к увеличения на 20% F-клеток по сравнению с немодифицированными клетками («ложными» или “mock”). Наконец, хотя редактирование генома эритроидного энхансера BCL11A в HSPC снижало возможности экспансии эритроидных клеток, и этот эффект был более заметен у одних gРНК (например, CR00309) по сравнению с другими gРНК (например, CR00312), большинство отредактированных клеточных популяций, дифференцированных в эритроциты, не смотря ни на что, были способны проходить 500-1500 удвоений популяции за 14 дней в среде дифференцировки эритроидов ex vivo, что указывает на то, что отредактированные клетки могут быть полезны терапевтически при лечении гемоглобинопатий, таких как серповидноклеточная анемия или бета-талассемия у пациентов.

Пример 4. Редактирование HPFH области в гематопоэтических стволовых и прогениторных клетках с использованием CRISPR-Cas9 для де-репрессии экспрессии фетального глобина в эритроидных клетках взрослого.

Методы:

Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были выделены из мобилизованной периферической крови G-CSF у взрослых доноров (AllCells) с использованием иммуно-магнитной сепарации (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя и культивировались в течение 4-6 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650), дополненной 50 нг/мл каждого из тромбопоэтина (Tpo), лиганда Flt3 (Flt-3L, Life Technologies, Cat.#PHC9413), человеческого фактора стволовых клеток (SCF, Life Technologies, Cat.#PHC2113) и человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Life Technologies, Cat.#PHC0063), а также 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016) и 500 нМ соединения 4. На протяжении всего исследования описанного в этом примере (включая его подпункты), при любом указании в протоколе на процесс клеточной «экспансии», эта среда была использована. Эта среда также упоминается как «среда для культивирования стволовых клеток» или «культивирующая среда» на протяжении всего этого примера (включая подпункты этого примеры).

Сборка рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP) состоящих из Cas9 и нацеливающих РНК (RNP), подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), состоящие из Cas9 и нацеливающих РНК были получены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных РНК (dgРНКs) 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracr (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95^oC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 6 мкг белка CAS9 (от 0,8 до 1 мкл) смешивали с 0,5 мкл 5×CCE-буфера (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленного 1 мМ DTT). Tracr сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37oC в течение 5 мин. Затем crРНК добавляли к комплексам Tracr/CAS9 и инкубировали в течение 5 мин при 37oC. В качестве контроля (отсутствия нацеливания) в комплексы Tracr/CAS9 добавляли транспортное средство, а не crРНК. HSPC собирали центрифугированием и ресуспендировали в T-буфере, предоставленным в комплектем Neon для электропорации (Invitrogen, Cat#MPK1096) до плотности клеток 5×10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клеток (10 мкл) переносили в камеру электропоратора. Электропорацию проводили с помощью Neon transfection system (Invitrogen; MPK5000S) при режиме 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса. Электропорации 10 мкл были дублированы.

Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды дифференцировки эритроидов (EDM), состоящей из IMDM (Hyclone, Cat. #SH30228.01), 330 мкг/мл человеческого голотрансферрина ((Invitria Cat# 777TRF029), 10 мкг/мл рекомбинантного человеческого инсулина ((Gibco Cat#A1138211)), 2 МЕ/мл гепарина (Sigma, part #H3393), 5% человеческой AB-сыворотки (Sigma, Cat# H4522), 125 нг/мл человеческого эритропоэтина (Peprotech #10779-058) и 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat. #10378-016). EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat. #PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech #10779-598). Через 2 дня культуру клеток разбавляли в свежей средой. Культуры поддерживали в общей сложности 7 дней, и в это время клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. Вкратце, клетки один раз промывали PBS, ресуспендировали в LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain (ThermoFisher L34963; 1:1000 в PBS) и инкубировали в течение 30 мин.Затем клетки промывали и окрашивали анти-CD71-BV711 (Fisher Scientific Company Llc. BDB563767) и антиi-CD235a-APC (BD 551336) антителами в течение 30 мин. Затем клетки промывали, а затем фиксировали фиксирующим буфером ((Biolegend, Cat# 420801)) и пермеабилизировали 1x внутриклеточным пермеабилизирующим промывочным буфером для окрашивания (Biolegend, Cat# 421002) в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки инкубировали с добавлением 0,5 мкл анти-HbF-PE антитела ((Life Technologies, part #MHFH04) в 50 мкл 1х внутриклеточного окрашивающего PERM/WASH буфера в течение 20 мин при комнатной температуре Юр. Клетки дважды промывали 2 мл 1х внутриклеточного окрашивающего PERM/WASH буфера, ресуспендировали в буфере для окрашивания и анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) для обнаружения экспрессии HbF. Результаты анализировали с использованием Flowjo, и данные были представлены как % HbF-положительных клеток (F клеток) в жизнеспособной позитивной эритроидной популяции клеток CD71.

Анализ экспрессии генов. После 7 дней эритропоэза in vitro, приблизительно 1×10⁵ клеток было использовано для очистки РНК с помощью Zymo Research ZR-96 quick RNA Kit (Zymo Cat# R1053). До 1 мкг РНК использовали для синтеза 1-й цепи с использованием Quantiscript Reverse Transcription Kit (Qiagen, Cat# 205313). ТакМан (Taq-man) количественная ПЦР в реальном времени была проведена с 2x Taq-Man Fast Advance PR Mix (Life technologies, Cat# 4444963) и Taq-Man Gene Expression Assays for GAPDH (Life technologies, ID# Hs02758991_g1, VIC), HBB (Life technologies, ID# Hs00747223_g1, VIC) и HBG2/HBG1 (Life technologies, ID# Hs00361131_g1, FAM) согласно протоколу производителя. Относительная экспрессия каждого гена была нормализована по экспрессии GAPDH и представлена в виде кратности по отношению к экспресии None/контроль образцов, получаемых из RNP, доставленных методом ΔΔCt. Альтернативно, после преобразования в нормализованное по GAPDH относительное количество транскрипта (2 ^ -ΔCt), уровень экспрессии HBG2/HBG1 определяли как процент от суммы экспрессии HBB и HBG2/HBG1.

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS).

Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных HSPC через 48 часов после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050). Для определения эффективности редактирования и профилей инсерций и делеций (инделов) проводилась ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих целевые сайты, и продукты ПЦР затем подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). % редактирования соответствующих последовательностей в образцах, не подвергавшихся редактированию, в большинстве случаев случае был менее 1% и никогда не превышал 3%.

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F-клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что Cas9 комплексы рибонуклеопротеинов (RNP), когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 16 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Таблица 16. Список gРНКs, нацеленных на область HPFH, используемых в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК, описанном выше, за исключением g8 (crРНК, состоящей из mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU, где N являются остатками целевого домена, а модификации указаны следующим образом: 2'O-метил (m), фосфоротиоатная связь (*); последовательность track SEQ ID NO: 7808) и None/контроль, которые были протестрированы каждый в 16 репликах.

ID целевого домена gРНК	% HbF+ (F клеток), среднее по репликам	% HbF+ (F клеток), среднее отклонение	% CD71+, среднее по репликам	% CD71+, стандартное отклонение	% редактирования, среднее по репликам	% редактирования, стандартное отклонение
CR001030	51,4	5,2	84,4	0,6	84,5	1,6
CR001095	49,3	1,8	82,7	2,5	66,1	1,4
CR001043	44,8	2,0	84,1	0,8	80,0	0,7
CR001029	43,7	1,3	82,2	0,7	86,6	2,7
CR001142	43,4	0,6	83,9	0,1	76,9	0,4
CR001028	42,9	1,3	84,8	0,5	91,7	0,5
CR001212	42,6	5,8	83,1	0,9	81,6	1,5
CR001036	42,4	1,3	82,6	0,6	91,5	5,0
CR001135	42,4	0,7	83,7	0,1	84,4	13,3
CR001221	41,8	1,7	80,8	0,4	83,9	1,4
CR001158	41,7	1,3	81,7	0,2	72,4	2,7
CR001090	41,3	0,1	85,5	0,8	87,2	1,2
CR001169	41,3	1,5	82,4	2,6	80,2	2,5
CR001089	40,9	0,6	82,8	6,6	81,7	0,3
CR001031	40,8	0,1	81,5	1,8	90,7	1,8
CR001092	40,8	2,2	84,1	0,1	43,0	1,1
CR001034	40,7	1,0	84,5	0,0	72,7	3,8
CR001068	40,7	2,3	85,7	0,4	90,5	0,9
CR001168	40,2	3,4	82,6	0,1	74,2	7,1
CR001171	40,1	1,6	83,4	0,4	63,8	1,6
CR001217	40,1	0,8	81,9	0,1	80,9	0,8
CR001023	39,6	3,2	82,2	0,8	90,2	0,7
CR001093	39,3	0,3	86	1,1	38,3	14,5
CR001080	39,2	3,4	87,1	1,1	32,4	1,1
CR001164	38,6	2,0	84,4	0,4	92,0	0,7
CR001178	38,6	1,2	82,6	2,4	61,1	0,6
CR001032	38,4	9,2	82,4	0,6	57,6	32,9
CR001100	38,4	1,8	81,7	0,2	29,6	2,4
CR001156	38,4	1,2	81,6	0,3	91,2	3,6
CR001159	38,4	1,8	81,8	0,2	65,5	0,7
CR001042	38,2	0,4	83,1	1,0	90,8	0,3
CR001065	38,2	0,0	85,2	2,0	86,5	0,2
CR001133	38,1	0,0	83,6	0,5	92,1	0,8
CR001173	38	1,5	81,7	1,1	72,5	5,0
CR001161	37,7	4,6	82,3	1,7	54,8	10,7
CR001138	37,6	7,6	83,7	0,7	69,4	28,9
CR001037	37,4	1,3	81,2	0,8	90,5	1,5
CR001098	37,4	1,2	85,6	1,5	95,0	0,2
CR001150	37,3	2,0	84,8	0,4	52,8	7,5
CR001160	37,3	0,5	81,4	1,5	65,9	1,6
CR001197	37,3	1,1	83,3	1,6	83,8	2,8
CR001170	37,2	1,3	83,7	1,2	47,3	0,3
CR001226	37	1,0	82,5	1,3	65,3	2,0
CR001018	36,9	0,8	80,9	0,8	97,2	0,0
CR001109	36,8	0,3	84,7	1,4	91,0	2,4
CR001219	36,8	0,6	82,5	0,1	75,9	0,2
CR001047	36,7	0,6	83,2	0,3	70,8	1,5
CR001101	36,6	3,3	81,7	0,1	50,6	3,8
CR001046	36,5	1,0	84	0,3	76,9	4,2
CR001021	36,4	0,3	82,2	0,4	79,5	2,9
CR001060	36,3	3,2	84,1	1,1	50,0	0,4
CR001074	36,3	1,6	87,3	1,8	56,5	4,9
CR001097	36,3	0,2	87,1	1,3	58,5	2,1
CR001099	36,1	4,0	85,8	1,8	89,8	0,3
CR001172	36,1	1,7	82,2	0,7	71,1	3,7
CR001195	36,1	0,8	83,4	0,2	67,2	2,7
CR001075	36	1,9	87,2	0,1	56,8	2,6
CR001143	35,9	3,7	83,5	0,4	56,7	9,2
CR001063	35,8	1,3	84,3	0,4	71,7	1,9
CR001225	35,5	0,4	83,1	0,5	81,1	4,2
CR001027	35,4	0,9	81,9	0,8	71,1	0,5
CR001073	35,4	1,6	86,5	1,6	56,3	5,9
CR001180	35,3	1,1	79,6	1,4	86,2	4,0
CR001182	35,3	0,8	81,8	0,2	72,5	3,9
CR001162	35,2	9,1	85	0,0	62,6	35,7
CR001026	35,1	1,0	82,4	0,2	97,0	0,3
CR001078	35	1,1	85	1,7	12,7	1,8
CR001025	34,9	0,3	81,9	1,5	55,5	3,8
CR001187	34,9	2,5	79,4	2,3	70,1	3,7
CR001081	34,8	1,4	87,5	4,0	27,0	0,7
CR001137	34,8	13,6	83,8	1,6	41,5	39,8
CR001174	34,8	0,5	81,8	0,6	34,1	3,2
CR001058	34,6	1,0	83,3	1,5	71,4	6,2
CR001188	34,6	1,3	82,6	1,2	64,0	2,2
CR001079	34,4	2,5	89,2	0,2	12,8	2,0
CR001179	34,4	3,2	82	0,4	81,4	4,3
CR001214	34	2,2	82,1	1,5	58,1	1,0
CR001139	33,9	1,9	83	2,5	70,3	0,4
CR001222	33,9	1,6	80,6	0,8	35,5	1,4
CR001096	33,8	0,1	85,6	2,2	77,5	1,0
CR001148	33,6	2,1	84,5	0,4	50,9	4,0
CR001140	33,5	0,4	84	1,4	66,3	1,5
CR001191	33,5	2,5	83,2	0,3	83,4	5,1
CR001227	33,5	2,3	79	0,2	56,3	0,1
CR001110	33,4	0,4	85,2	0,1	70,3	0,1
CR001220	33,4	1,7	81,4	0,4	72,4	3,3
CR001224	33,4	3,1	82,2	1,3	71,3	2,3
CR001033	33,2	0,3	81,9	0,6	63,6	8,1
CR001051	33,2	0,6	82,2	0,6	42,2	0,5
CR001106	33,2	0,2	82,6	3,0	46,9	2,0
CR001020	32,9	8,9	81,9	1,3	67,7	29,4
CR001022	32,9	0,8	82,4	1,6	91,5	0,3
CR001045	32,9	0,4	80,5	0,0	88,5	0,4
CR001198	32,9	0,5	81,3	1,8	96,8	0,5
CR001084	32,8	1,7	87,5	0,1	55,1	5,4
CR001111	32,6	1,0	84,2	2,5	78,1	1,4
CR001087	32,5	0,1	87,6	0,7	89,6	2,6
CR001107	32,5	0,4	83,3	1,8	46,5	2,2
CR001108	31,8	1,8	84,7	0,6	75,2	3,3
CR001205	31,7	2,3	81,3	6,2	2,7	1,7
CR001085	31,6	2,1	86	0,3	31,2	1,2
CR001166	31,5	0,5	83,6	0,8	86,9	0,3
CR001019	31,3	2,3	80,6	0,9	35,1	4,0
CR001076	31,3	0,5	86,6	0,2	96,3	0,3
CR001016	31,2	1,2	80,2	0,7	95,0	1,9
CR001035	31,1	1,8	83,5	1,3	80,0	0,9
CR001192	31	2,5	79,9	0,7	60,4	5,1
CR001091	30,7	2,8	85,3	0,6	72,4	7,6
CR001105	30,7	0,1	84,8	0,1	12,1	1,1
CR001185	30,7	0,7	82,7	0,4	36,7	0,2
CR001190	30,7	0,1	82,4	0,7	53,2	0,8
CR001024	30,6	0,4	81,8	0,7	97,0	0,6
CR001132	30,5	2,3	84,6	0,1	26,4	2,2
CR001189	30,4	1,9	83,1	0,3	42,0	0,6
CR001040	30,1	8,3	77,5	2,2	73,6	33,6
CR001146	30,1	1,5	83,8	0,1	88,1	2,1
CR001070	29,8	0,9	82,7	0,4	44,9	0,8
CR001213	29,8	1,8	81,9	0,2	48,4	4,4
CR001017	29,6	11,8	81,3	1,5	44,3	36,8
CR001077	29,5	0,9	87,2	2,5	14,3	0,5
CR001083	29,4	1,1	84,3	9,1	26,6	10,6
CR001082	29	0,7	87,6	1,5	17,7	0,0
CR001175	29	1,1	81,7	0,1	6,3	0,7
CR001144	28,9	0,4	82,6	0,9	38,8	1,1
CR001194	28,8	4,3	81,8	0,6	70,2	1,9
CR001157	28,5	1,1	81	1,3	29,2	4,2
CR001163	28,4	0,6	83,5	0,7	13,4	3,0
CR001151	28,2	0,6	84,6	1,6	51,8	2,3
CR001181	28,2	0,2	80,3	0,8	46,0	0,5
CR001061	28	2,9	82,6	0,4	53,6	5,8
CR001152	27,8	0,8	84,9	0,2	37,0	1,9
CR001094	27,7	9,2	74,6	12,7	85,2	2,1
CR001202	27,7	6,3	84	2,3	61,7	8,4
CR001149	27,6	1,7	84,1	0,6	10,8	1,3
CR001207	27,6	5,7	83,3	0,1	31,5	17,5
CR001134	27,2	1,6	83,2	1,3	2,3	0,2
CR001206	27,2	1,8	84,4	0,2	11,1	0,4
CR001067	27	18,4	84,2	2,6	6,0	0,8
CR001167	27	0,5	81,7	0,2	32,3	0,1
CR001209	27	0,8	81,5	2,5	14,8	0,2
CR001165	26,9	0,5	81,6	1,3	12,9	2,1
CR001044	26,8	7,2	78,2	4,3	28,5	20,7
CR001052	26,6	0,3	82,5	1,5	26,5	0,9
CR001062	26,6	0,7	78,7	2,8	39,1	5,3
CR001071	26,6	1,0	84,2	0,4	15,1	1,1
CR001210	26,6	2,1	80,1	3,3	58,6	2,2
CR001223	26,6	0,9	80,2	0,8	40,3	1,9
CR001057	26,5	6,5	82,4	0,1	25,0	18,9
CR001147	26,5	1,3	83,5	0,4	33,1	2,7
CR001186	26,4	2,1	79,6	3,8	40,5	2,1
CR001103	26,1	0,2	84,3	0,0	51,2	3,6
CR001199	25,9	0,8	80,9	1,5	89,3	1,4
CR001216	25,7	1,0	77,7	0,0	43,2	2,7
CR001041	25,6	1,8	78,9	4,8	22,4	2,1
CR001053	25,5	1,4	82,4	1,9	38,4	0,3
CR001086	25,4	0,6	84,4	0,9	30,4	0,6
CR001050	25,1	0,4	80,6	1,1	4,9	0,2
CR001136	25,1	0,7	82,3	1,0	9,1	1,1
CR001203	25,1	4,0	83,4	1,8	22,0	13,1
CR001211	24,8	1,1	83,3	0,4	5,0	1,0
CR001066	24,4	0,4	86,1	0,1	15,2	1,8
CR001145	24,4	1,0	83,5	0,9	16,4	8,9
CR001049	24,3	0,3	83,9	1,9	3,7	0,0
CR001176	24,3	0,6	81,9	0,6	29,0	1,4
CR001218	24,1	0,2	81,9	0,1	21,6	2,4
CR001141	23,8	0,5	82,8	0,4	4,1	0,8
CR001196	23,6	0,8	82,5	0,6	18,2	2,9
CR001184	23,5	0,4	81,1	0,4	43,5	1,6
CR001204	23,3	1,1	81,5	0,7	0,5	0,2
CR001069	23,1	1,1	85	0,0	16,2	0,3
CR001072	23	0,3	84,2	0,7	15,6	0,3
CR001102	22,8	1,7	84,7	1,6	58,1	4,8
CR001153	22,8	1,3	82,8	0,1	17,2	2,6
CR001177	22,8	0,5	82,2	0,9	2,0	0,2
CR001104	22,7	1,7	84,8	1,1	29,4	5,0
CR001064	22,6	1,1	82,1	1,0	35,8	5,2
CR001200	22,6	0,1	82	0,0	9,8	0,7
CR001154	22,4	0,0	82,2	1,3	8,0	1,1
CR001055	22,3	1,0	83,4	1,1	19,0	0,8
CR001054	22	1,1	83,5	1,0	11,3	1,4
CR001039	21,9	0,2	80,8	0,2	16,6	1,5
CR001183	21,6	0,7	81,4	0,8	13,3	0,1
CR001155	21,4	0,0	81,6	0,8	5,0	1,0
CR001059	21,1	0,6	82,5	1,2	4,6	0,3
CR001056	20,8	0,9	83,2	0,2	3,7	0,9
CR001193	20,5	0,9	80,4	0,9	4,8	0,2
CR001208	20,5	0,1	81,1	0,9	12,6	3,0
CR001201	20,1	1,7	81,7	0,6	10,7	0,7
CR001048	19,3	3,0	82,3	1,1	0,4	0,3
CR001215	19,2	0,2	81,2	2,3	5,6	2,2
CR001038	19,1	0,1	80,8	1,3	6,5	1,1
CR001088	18,8	5,9	67,3	2,7	74,6	2,3
None/control	21,0	2,0	82,9	1,9	n/a	n/a
g8	59,2	3,0	74,3	4,4	95,1	1,8

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из неотредактированных клеток.

Нацеливание на область HPFH привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 51,4,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (21,0%) (Таблица 16). Также, параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на область HPFH. Также, геномные ПЦР-продукты области HPFH были подвергнуты секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Высокие проценты редактирования генома в области HFPH наблюдались во многих культурах клеток, которые были подвергнуты электропорации с RNP, содержащими Cas9, crРНК данного целевого домена и Tracr (таблица 16), но не в контрольных клетках без доставляемого целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). В частности, использование dgРНК, приводящей к более чем 40% HbF+ клеток, имела диапазон от 43,0 до 91,7% отредактированных аллелей (таблица 16).

Таблица 18. Анализ экспрессии генов выбранных культур, отредактированных с помощью gРНК, нацеленных на область HPFH в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в двух репликах в формате dgРНК. Экспрессия генов фетальных гамма-глобинов (гены γ-глобина, HBG2/HBG1), бета-глобина взрослого (β-глобин, ген HBB) и гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) была определена, результаты представлены как описано в Материалах и Методах.

ID целевого домена gРНК	Количество реплик электропорации	Экспрессия γ-глобина, кратность относительно контроля (среднее по репликам)	Экспрессия β-глобина, кратность относительно контроля (среднее по репликам)	% экспресии глобина, γ/(γ + β) (среднее по репликам)
CR001030	2	3,8	0,91	26,6
CR001142	2	1,6	0,76	20,0
CR001212	2	2,2	0,58	18,6
CR001036	2	2,6	0,91	19,7
CR001221	2	2,3	0,79	15,2
CR001217	2	1,9	0,72	13,8
None/контроль	5	1	1	7,7

Некоторые культуры в этом исследовании также были проанализированы на экспрессию гемоглобина. При применении этих целевых доменов индуцированная экспрессия гена фетального гамма-глобина была в 1,6-3,8 раза выше, чем в клетках None/контроль, что сопровождалось умеренным снижением экспрессии бета-глобина у взрослых (до 0,58-0,91-кратного к None/контроль) (Таблица 18). Эти эффекты, вместе взятые, приводили к уровням экспрессии гамма-глобина в диапазоне от 13,8% до 26,6% от общего количества глобинов бета-типа (γ/[γ+β]) в популяции клеток (Таблица 17) и относительная индукция фетального глобина у всех целевых доменов была похожа на ту, что наблюдается при индукции белка HbF (Таблица 16). Либо увеличение HbF/гамма-глобин, либо увеличение HbF/гамма-глобин при уменьшении уровней бета-глобина (серповидного глобина) в эритроцитах, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будут иметь терапевтические последствия, приводя к уменьшению выработки серповидно-клеточных эритроцитов.

Пример 4.2.

Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×10⁶/ мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza).

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает ингибирование экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F-клетками»). Повышенный уровень HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 16 (например, gРНКs, содержащие целевой домен идентификатора CRxxxxxx). Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, доставляемых электропорацией.

Таблица 19. Список gРНКs, нацеленных на область HPFH, используемых в текущем исследовании. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК (за исключением g8, который был протестирован в формате dgРНК с использованием: crРНК, состоящей из mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2300), где N являются остатками целевого домена, а модификации указаны следующим образом: 2'O-метил (m) и фосфоротиоатсвязь (*), и tracr с последовательностью SEQ ID NO: 7808).

ID целевых доменов gРНК	% HbF+ (F клеток)	% CD71+
CR003037	46,6	80,3
CR003033	45,4	75,9
CR003038	42,9	77,6
CR003035	42,1	77,8
CR003087	42,1	76,7
CR003085	41,8	77,6
CR003052	39,9	80,5
CR003080	38,0	80,1
CR003081	35,3	80,6
CR003031	34,8	77,7
CR003056	34,3	78,3
CR003070	33,9	81,2
CR003089	33,8	77,8
CR003065	33,0	76,4
CR003075	33,0	75,2
CR003088	33,0	77,3
CR003041	32,1	76,2
CR003039	31,9	75,7
CR003044	30,6	77,7
CR003084	29,7	77,2
CR003073	29,5	76,9
CR003066	29,3	77,9
CR003082	29,3	78,6
CR003067	29,2	78,1
CR003074	29,1	77,5
CR003095	28,8	80,4
CR003083	28,3	76,6
CR003030	27,9	78,4
CR003069	27,7	78,9
CR003055	27,6	78,9
CR003058	27,6	78,8
CR003054	27,5	79,0
CR003029	27,1	78,4
CR003086	27,1	76,6
CR003063	27,0	76,0
CR003071	26,5	79,5
CR003079	26,5	78,0
CR003042	26,4	77,0
CR003045	26,3	78,0
CR003034	25,9	76,8
CR003027	25,7	79,2
CR003043	25,0	76,0
CR003032	24,9	77,9
CR003040	24,9	75,7
CR003028	24,8	78,6
CR003048	24,8	80,4
CR003057	24,7	79,0
CR003096	24,6	78,9
CR003077	24,4	77,7
CR003036	24,3	76,8
CR003049	24,3	78,4
CR003047	24,0	78,2
CR003059	23,9	80,2
CR003051	23,7	77,2
CR003053	23,7	76,9
CR003091	23,7	80,2
CR003093	23,7	79,2
CR003060	23,6	78,9
CR003072	23,6	77,7
CR003076	23,6	78,0
CR003078	23,6	78,0
CR003064	23,4	75,9
CR003046	23,3	80,5
CR003092	22,9	81,7
CR003090	22,7	79,7
CR003050	22,6	77,2
CR003062	22,1	76,5
CR003061	21,5	76,3
CR003068	21,5	78,8
CR003094	21,0	79,6
None/контроль реплика 1	18,9	77,0
None/контроль реплика 2	21,1	79,7
g8 реплика 1	56,8	65,4
g8 реплика 2	56,4	65,8

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из нередактированных клеток.

Нацеливание на область HPFH привело к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF (до 46,7%) по сравнению с ложно-электропорированными клетками (18,9 и 21,1%) (Таблица 19). Также, параллельно наблюдалась индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на область экзона 2 BCL11A.

В заключение, методом NGS определяли профиль инделов, сформированных внутри или вблизи целевого сайта, на который была нацелена dgРНК, содержащая целевые домены CR003031, CR003033, CR003035, CR003037, CR003038, CR003052, CR003085. 5 наиболее часто встречающихся инделов для каждой локализации показаны в Таблице 27.

Таблица 27. 5 наиболее часто встречающихся инделов для каждой целевой последовательности после воздействия RNP, включающего указанную молекулу gРНК. Каждая gРНК тестировалась как dgРНК. Заглавные буквы являются естественными нуклеотидами внутри или вблизи последовательности-мишени. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции обозначены строчными буквами.

Целевой домен dgРНК	Данные NGS считывания (Геномная последовательность)	SEQ ID NO:	% от общего кол-ва считываний	Длина Индела
CR003031	ACTGTTGATTAGAGGTAGGGAAATGATTTTAATCTGTGACCTTGG-------GCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGG	2301	9,74%	-7
CR003031	ACTGTTGATTAGAGGTAGGGAAATGATTTTAATCTGTGACCTTGGTtGAATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGG	2302	7,82%	1
CR003031	ACTGTTGATTAGAGGTAGGGAAATGATTTTAATCTGTGACCTTG---AATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGG	2303	2,19%	-3
CR003031	ACTGTTGATTAGAGGTAGGGAAATGATTTTAATCTGTGACCTTG-TGAATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGG	2304	1,37%	-1
CR003031	ACTGTTGATTAGAGGTAGGGAAATGATTTTAATCTGTGA---------ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGG	2305	1,33%	-9
CR003031			,,,	,,,
CR003033	ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGGAA----------GAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT	2306	25,21%	-10
CR003033	ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGGAAAAaCACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT	2307	7,77%	1
CR003033	ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGGAA--CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT	2308	5,72%	-2
CR003033	ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGGAAAAC--TGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT	2309	2,94%	-2
CR003033	ATGGGCAAGTAGCTATCTAATGACTAAAATGGAAAACcACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT	2310	1,68%	1
CR003033			,,,	,,,
CR003035	CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAA	2311	10,87%	-3
CR003035	CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAA	2312	2,62%	-1
CR003035	CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAA	2313	2,04%	-2
CR003035	CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAA	2314	1,79%	-2
CR003035	CACTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCC----TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAA	2315	1,77%	-4
CR003035			,,,	,,,
CR003037	TAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGG----------ACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTGATATA	2316	7,19%	-10
CR003037	TAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCC-ATAGGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTGATATA	2317	6,13%	-1
CR003037	TAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCcTATAGGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTGATATA	2318	4,17%	1
CR003037	TAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTtATAGGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTGATATA	2319	3,89%	1
CR003037	TAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGC-TATAGGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTGATATA	2320	3,72%	-1
CR003037			,,,	,,,
CR003038	TAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATA-----------TAAATAAGCCCAGTACATTGTTTG	2321	14,85%	-11
CR003038	TAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAG-ACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTG	2322	6,25%	-1
CR003038	TAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTAT-GGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTG	2323	3,99%	-1
CR003038	TAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGgACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTG	2324	2,83%	1
CR003038	TAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAaGGACATCTATATAAATAAGCCCAGTACATTGTTTG	2325	2,76%	1
CR003038			,,,	,,,
CR003052	TCAGAGGTTAGAAATCAGAGTTGGGAATTGGGATTA--CAGGCTGTATTTAAGAGTTTAGATATAACTGTGAATCCAAGA	2326	14,04%	-2
CR003052	TCAGAGGTTAGAAATCAGAGTTGGGAATTGGGATTAaTACAGGCTGTATTTAAGAGTTTAGATATAACTGTGAATCCAAGA	2327	2,94%	1
CR003052	TCAGAGGTTAGAAATCAGAGTTGGGAATTGGGATT-TACAGGCTGTATTTAAGAGTTTAGATATAACTGTGAATCCAAGA	2328	2,41%	-1
CR003052	TCAGAGGTTAGAAATCAGAGTTGGGAATTGGGATTATtACAGGCTGTATTTAAGAGTTTAGATATAACTGTGAATCCAAGA	2329	2,37%	1
CR003052	TCAGAGGTTAGAAATCAGAGTTGGGAATTGGGATTAaaTACAGGCTGTATTTAAGAGTTTAGATATAACTGTGAATCCAAGA	2330	2,28%	2
CR003052			,,,	,,,
CR003085	TGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTAC	2331	12,03%	-1
CR003085	TGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTAC	2332	8,70%	-10
CR003085	TGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTAC	2333	4,42%	-13
CR003085	TGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTAC	2334	4,38%	1
CR003085	TGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTAC	2335	3,41%	-5
CR003085			,,,	,,,
CR003087	GATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATACTAAGGACTtCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTACAAAATTCAC	2336	24,73%	1
CR003087	GATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATACTA---------GGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTACAAAATTCAC	2337	15,83%	-9
CR003087	GATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATACTAAGG--------GTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTACAAAATTCAC	2338	8,50%	-8
CR003087	GATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATACTAAGGACT--AGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTACAAAATTCAC	2339	7,07%	-2
CR003087	GATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATACTAAGG---------TCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTACAAAATTCAC	2340	1,75%	-9
CR003087			,,,	,,,

Эти результаты подтверждают вывод из более ранних экспериментов, описанных здесь, что небольшие инделы (например, в данном случае, инделы от 1-20 нуклеотидов) в области HPFH, на которую нацелены указанные молекулы gРНК, могут оказать значительное влияние на экспрессию и продукцию HbF. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия путём уменьшения выработки серповидно-клеточных эритроцитов.

Пример 4.3.

Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.

Культура клеток CD34+ человека. Человеческие клетки CD34+ были культивированы 3 дня до доставки RNP в среду расширения.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 6,4×10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух экземплярах. Tracr был SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат с модификациями, включающими 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2341), где N представляют собой нуклеотиды целевого домена.

Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. После электропорации клетки сразу же переносили в 250 мкл предварительно нагретой среды EDM и добавок. В течение дней 0-7 культурирования клеток, в EDM дополнительно добавляли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779 -598). В течение 7-11 дней культуры в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культуры в EDM не вносили никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры инициировали при 2,6 ×10⁴ клеток на мл в день 0, доводили до 4,0×10⁴ клеток на мл на 7-й день и выравнивали до 1,0x10⁶ клеток на мл в день 11. На 14 и 19 день среда пополнялась. Жизнеспособные клетки подсчитывали через 1, 4, 7, 11, 14 и 21 сутки после доставки RNP. Все подсчёты жизнеспособные клетки проводили с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100), где нежизнеспособные клетки выявлялись путём окрашивания DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole). На 7, 16 и 21 день культуры клетки ((1 x 10⁵) анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. На 16 и 21 день внутриклеточное окрашивание для обнаружения экспрессии HbF не включало анти-CD71 и анти-CD235a антител, и определялся % положительных клеток HbF (F клеток) во всей жизнеспособной популяции клеток. На 21 день для окрашивания жизнеспособных клеток для жизнедеятельности использовался краситель LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain (ThermoFisher L34975).

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC через 7 дней после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)).

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что Cas9 комплексы рибонуклеопротеинов (RNP), когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 20. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Таблица 20. Относительная пролиферация жизнеспособных клеток в текущем исследовании. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировались в формате dgРНК с использованием tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат со следующими модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2342), где N представляют собой нуклеотиды целевого домена. (n.d.- не определено)

ID целевого домена gРНК и реплики	День 0	День 1	День 4	День 7	День 11	День 14	День 21
CR001030 реплика 1	1	0,66	4,3	43,1	627	680	772
CR001030 реплика 2	1	0,65	4,0	38,4	651	694	880
CR001028 реплика 1	1	0,61	4,0	33,2	588	509	742
CR001028 реплика 2	1	0,77	6,1	44,9	724	759	838
CR001095 реплика 1	1	0,66	4,0	40,7	665	503	835
CR001095 реплика 2	1	0,96	5,2	42,2	651	777	n,d,
CR001212 реплика 1	1	0,58	3,4	33,6	465	414	495
CR001212 реплика 2	1	0,74	3,6	32,4	490	519	572
g8 реплика 1	1	0,61	4,4	31,8	221	341	91
g8 реплика 2	1	0,60	5,2	33,2	269	270	103
None/контроль реплика 1	1	0,79	7,6	58,5	741	862	707
None/контроль реплика 2	1	0,71	8,2	51,4	923	1204	1075

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали на пролиферацию в соответствии с трёхстадийным протоколом дифференцировки эритроидов в клеточной культуре. Процент восстановления клеток через 1 день после электропорации варьировался от 58% до 96% и был одинаковым в разных условиях, включая нередактированный, подвергнутый электропорации контроль (Таблица 20). Пролиферация подавлялась в клетках, отредактированных с помощью dgРНК, включая целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 гена BCL11A (10-12% от нередактированного контроля на 21-й день, таблица 20), но пролиферация клеток, отредактированных с помощью dgРНК нацеленных на область HPFH, была сопоставима с контролем (47-99% нередактированного контроля на 21-й день, Таблица 20).

Таблица 21. Индукция HbF в текущем исследовании. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК. Все молекулы gРНК были испытаны в формате dgРНК с использованием tracr SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат со следующими модификациями: 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатные связи (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2343), где N представляет собой нуклеотиды целевого домена. (n.d.-не определено)

ID целевого домена gРНК и реплики	% редактирования, день 7	% CD71+, день 7	% HbF+ (F клетки), день 7	% HbF+ (F клетки), день 16	% HbF+ (F клетки), день 21
CR001030 реплика 1	90,7	91,2	61,0	45,4	53,7
CR001030 реплика 2	90,1	91,1	63,9	44,3	55,9
CR001028 реплика 1	91,9	90,0	61,6	40,9	52,0
CR001028 реплика 2	87,6	90,7	56,3	46,6	45,8
CR001095 реплика 1	25,7	91,4	51,3	36,8	43,7
CR001095 реплика 2	30,5	91,1	52,5	42,7	n,d,
CR001212 реплика 1	86,2	90,8	57,5	38,7	45,2
CR001212 реплика 2	80,9	90,4	54,7	36,5	42,7
g8 реплика 1	95,3	84,6	70,7	71,9	63,4
g8 реплика 2	94,3	82,6	70,0	72,6	54,8
None/контроль реплика 1	n/a	94,0	27,1	24,4	22,8
None/контроль реплика 2	n/a	93,8	26,2	25,7	21,1

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения с помощью Live/Dead Fixable Dead Cell Stain. Редактирование генома не оказало отрицательного влияния на эритроидную дифференцировку, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходное с таковым из неотредактированных клеток на 7-ой день дифференцировки. Культуры, обработанные dgРНК с целевым доменом, нацеленным на область HPFH, показывали увеличенный процент эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками в течение 21-дневного периода культивирования (Таблица 21). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, содержащей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Геномные продукты ПЦР области HPFH также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в локусе HFPH наблюдалось в культурах клеток, электропорированных с RNP, содержащих Cas9, crРНК данного целевого домена и Tracr (Таблица 21), но не в контрольных клетках без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из геном-отредактированных клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидно-клеточных эритроцитов.

Пример 4.4.

Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями. CD34+ культура клеток человека. В зависимости от исследования CD34+ клетки человека культивировались в течение 3-6 дней до осуществления доставки RNP в среде культивирования.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC.

Для некоторых исследований комплексы RNP были доставлены при использовании 4D-Nucleofector (Lonza). В этих исследованиях HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) при плотности клеток от 2,2x10⁶/мл до 6,4x10⁶/мл в зависимости от исследования. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Формат dgРНК варьировался между исследованиями и указан в Таблице 22 с помощью следующих обозначений. Форма А представляет собой формат dgРНК, описанный выше в Примере 1, с указанием последовательности целевого домена. Форма B представляет собой формат dgРНК с использованием crРНК rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArUrGrCrU (SEQ ID NO: 2344), где r указывает основание РНК, а N соответствует указанной последовательности целевого домена, и tracr, состоящий из SEQ ID NO: 7808. Форма C представляет собой формат dgРНК с использованием crРНК с последовательностью mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2345), где r обозначает основание РНК, N соответствует указанной последовательности доменов целевого домена, а tracr состоит из SEQ ID NO: 7808.

Эритропоэз in vitro и анализ FACS для HbF, содержащих эритроидные клетки. В одном исследовании клеточные культуры инициировали при 2,6x10⁴ клеток на мл в день 0. Для тех культур, которые инициировали посевом непосредственно в 250 мкл (как описано в примере 4), культуру клеток разбавляли в свежей средой через 1-3 дня, в зависимости от исследования.

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных HSPC в течение 24 часов до 7 дней после электропорации, в зависимости от исследования, используя Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050).

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продуцировать эритроциты, содержащие повышенный белок HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 22. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов RNP, поставляемых электропорацией.

Таблица 22. Обобщённые данные для нескольких исследований, в которых оцениваются указанные gРНК, нацеленные на область HPFH и контроли. Все молекулы gРНК тестировали в форматах dgРНК. Детали форматов dgРНК в указанных исследованиях указаны, как описано выше. Обратите внимание, что тестирования 4 и 5 выполнялись параллельно и, таким образом, имеют те же самые контрольные условия.

ID целевого домена gРНК		Номер эксперимента
		1	2	3	4	5	6	7	8
CR001028	Формат	A	A	B	B	C			C
	Реплики	2	2	2	2	2			2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	42,9	39,7	47,4	51,1	55,3			59,0
	% редактирования, среднее по репликам	91,7	78,0	87,5	90,9	84,6			89,8
CR001030	Формат	A	A	B	B	C	C	C	C
	Реплики	2	2	2	2	2	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	51,4	48,7	50,9	51,8	58,0	39,7	50,6	62,5
	% редактирования, среднее по репликам	84,5	61,8	74,3	75,0	85,6	94,1	85,4	90,4
CR001036	Формат	A	A	B
	Реплики	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	42,4	40,8	43,3
	% редактирования, среднее по репликам	84,4	78,3	92,6
CR001043	Формат	A	A	B
	Реплики	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	44,8	33,0	42,9
	% редактирования, среднее по репликам	80,0	42,7	87,7
CR001080	Формат	A	A			C
	Реплики	2	2			2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	39,2	34,9			49,3
	% редактирования, среднее по репликам	32,4	24,0			41,6
CR001095	Формат	A	A	B	B	C	C	C	C
	Реплики	2	2	1	2	2	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	49,3	41,5	47	51,8	51,8	32,9	46,8	51,9
	% редактирования, среднее по репликам	66,1	49,8	65,1	64,6	64,2	66,8	56,1	28,1
CR001137	Формат	A	A				C	C
	Реплики	2	2				2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	34,8	45,6				31,0	40,8
	% редактирования, среднее по репликам	41,5	46,9				69,0	57,9
CR001142	Формат	A	A			C
	Реплики	2	2			2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	43,4	45,5			48,1
	% редактирования, среднее по репликам	76,9	63,7			89,2
CR001158	Формат	A	A			C
	Реплики	2	2			2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	41,7	36,9			44,6
	% редактирования, среднее по репликам	72,4	43,9			78,4
CR001212	Формат	A	A	B	B	C	C	C	C
	Реплики	2	2	2	2	2	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	42,6	46,9	43,8	44,5	53,5	39,4	47,1	56,1
	% редактирования, среднее по репликам	81,6	58,1	48,6	47,5	69,2	82,0	67,0	83,6
CR001217	Формат	A	A				C	C
	Реплики	2	2				2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	40,1	41,5				29,9	45,9
	% редактирования, среднее по репликам	80,9	50,3				89,0	82,1
CR001221	Формат	A	A	B	B	C
	Реплики	2	2	1	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	41,8	45,2	44,6	46,2	48,6
	% редактирования, среднее по репликам	83,9	71,1	73,6	70,7	92,1
g8	Формат	C	C	C	C	C		C	C
	Реплики	16	2	2	2	2		2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	59,2	60,0	66,3	64,7	64,7		55,8	70,4
	% редактирования, среднее по репликам	95,1	85,4	94,2	94,6	94,6		91,7	94,8
None/control	Формат	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a
	Реплики	16	2	2	2	2	2	2	2
	% HbF+ (F клетки), среднее по репликам	21,0	20,3	22,4	22,4	22,4	13,9	24,0	26,7
	% редактирования, среднее по репликам	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a	n/a

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии по уровню экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область HPFH приводило к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными (Mock) электропорированными клетками, результат, подтверждённый при разных способах оценки и форматах dgРНК (Таблица 22). В некоторых случаях увеличение количества HbF + клеток ассоциировалось с конкретной структурой dgРНК, например Формой C для CR001028 (Таблица 22). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. Геномные продукты ПЦР области HPFH также подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в локусе HFPH наблюдалось в культурах клеток, подвергнутых электропорации комплексами RNP, содержащими Cas9, crРНК с данного целевым доменом и Tracr (Таблица 22), но не в контрольных клетках, подвергнутых электропорации без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr).

В заключение, методом NGS определялся профиль инделов для каждой gРНК а также частота каждого отдельного индела. Наиболее часто встречающиеся инделы для каждой целевой последовательности показаны в Таблице 26.

Таблица 26. 5 наиболее часто представленных инделов для каждой целевой последовательности после воздействия RNP, включающего указанную молекулу gРНК. Каждая gРНК была протестирована в формате dgРНК в двух отдельных экспериментах, и результаты показаны отдельно для каждого эксперимента. Заглавные буквы являются естественными нуклеотидами внутри или вблизи целевой последовательности-мишени. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции показаны строчными буквами.

Номер Эксперимента	Целевой домен dgРНК	Считывание NGS (Геномнаяч последовательность)	SEQ ID NO:	% от общего кол-ва считываний	Длина Индела
1	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2346	13,26%	-1
1	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2347	12,48%	-13
1	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2348	6,04%	-4
1	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2349	3,94%	-2
1	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2350	3,65%	-13
1	CR001028			,,,	,,,
2	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2351	14,30%	-13
2	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2352	11,51%	-1
2	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2353	5,63%	-2
2	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2354	4,98%	-4
2	CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2355	4,91%	-13
2	CR001028			,,,	,,,
1	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2356	9,10%	-13
1	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2357	4,77%	-1
1	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2358	3,54%	-2
1	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2359	2,51%	1
1	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2360	2,39%	-5
1	CR001030			,,,	,,,
2	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2361	9,67%	-13
2	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2362	4,87%	-1
2	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2363	3,33%	-2
2	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2364	2,93%	1
2	CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC-GCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2365	1,85%	-1
2	CR001030			,,,	,,,
1	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAAT-TAGTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2366	19,08%	-1
1	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAATA--GTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2367	17,13%	-2
1	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAG----------TGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2368	3,55%	-10
1	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAATAaTAGTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2369	2,42%	1
1	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAATA-AGTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2370	2,38%	-1
1	CR001036			,,,	,,,
2	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAATA--GTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2371	22,26%	-2
2	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAAT-TAGTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2372	19,77%	-1
2	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAG----------TGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2373	6,25%	-10
2	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGGCTAATA-AGTGGAATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2374	1,96%	-1
2	CR001036	CCTAGTTTCATTTTTGCAGAAGTGTTTTAGG------------AATGTATCTTAGAGTTTAACTTATTTGTTTCTGTCAC	2375	1,41%	-12
2	CR001036			,,,	,,,
1	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTG-AATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2376	5,28%	-1
1	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTGGA-----CAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2377	2,67%	-5
1	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGA---------ATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2378	2,62%	-9
1	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGG---------ACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2379	2,22%	-9
1	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTGGgAATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2380	2,06%	1
1	CR001043			,,,	,,,
2	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTG-AATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2381	5,87%	-1
2	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGG---------ACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2382	3,11%	-9
2	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTGGA-----CAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2383	2,42%	-5
2	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGAGAGGTTGGgAATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2384	1,90%	1
2	CR001043	TAGAGATTTTTGTCTCCAAGGGAATTTTGA---------ATGGACAAATCTATTGCTGCAGTTTAAACTTGCTTGCTTCC	2385	1,72%	-9
2	CR001043			,,,	,,,
1	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGATG-AAGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2386	2,72%	-1
1	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGATGGA---------GGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2387	2,22%	-9
1	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGG--------GATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2388	1,44%	-8
1	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGATGGgAAGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2389	1,41%	1
1	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGA----AGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2390	1,11%	-4
1	CR001080			,,,	,,,
2	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGATGGA---------GGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2391	3,43%	-9
2	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGATG-AAGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2392	3,17%	-1
2	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGA---------AGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2393	1,61%	-9
2	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGGA----AGGGATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2394	1,28%	-4
2	CR001080	GAGAAAGGAAGGAAGGAAGAGGGGAAGAGAGAGG--------GATGGAGGAGAAGAAGGAAAAATAAATAATGGAGAGGA	2395	1,16%	-8
2	CR001080			,,,	,,,
1	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAAGA--AGAGGAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2396	5,94%	-2
1	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAAGAG-----GAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2397	5,54%	-5
1	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGA---------------GAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2398	4,02%	-15
1	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAA--------------------ACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2399	3,23%	-20
1	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGA--------GGAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2400	2,49%	-8
1	CR001095			,,,	,,,
2	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAAGAG-----GAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2401	7,89%	-5
2	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAAGA--AGAGGAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2402	6,18%	-2
2	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGA---------------GAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2403	4,16%	-15
2	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGAAGAGAGGAAAGAAGAGgAAGAGGAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2404	2,77%	1
2	CR001095	GAGAAAGAGAAAGGGAAGGGA--------------------GGAGAGAAAAGAAACGAAGAGAGGGGAAGGGAAGGAAAA	2405	1,98%	-20
2	CR001095			,,,	,,,
1	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2406	6,73%	-7
1	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2407	4,02%	1
1	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2408	2,87%	1
1	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCA--------GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2409	1,71%	-8
1	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACC--------------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2410	0,95%	-14
1	CR001137			,,,	,,,
2	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2411	7,25%	-7
2	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2412	3,44%	1
2	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2413	2,50%	1
2	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2414	1,37%	-8
2	CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-------TAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2415	1,11%	-7
2	CR001137			,,,	,,,
1	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAGTAACCcAGAGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2416	8,00%	1
1	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAG-------AGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2417	6,63%	-7
1	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAGTAAC-AGAGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2418	2,86%	-1
1	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAG---------GTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2419	2,03%	-9
1	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGA--------------------GTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2420	1,71%	-20
1	CR001142			,,,	,,,
2	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAGTAACCcAGAGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2421	9,94%	1
2	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAG-------AGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2422	5,81%	-7
2	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAGTAAC-AGAGGTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2423	4,19%	-1
2	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGATTAAAAG---------GTGAGTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2424	2,59%	-9
2	CR001142	AAATGCATTTTACAGCATTTGGTTGA--------------------GTTCAAACTATATGACTTTATTTGTATATAGAAA	2425	2,26%	-20
2	CR001142			,,,	,,,
1	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGAAAaGGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2426	10,94%	1
1	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAG----GTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2427	10,03%	-4
1	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGAA-GGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2428	3,80%	-1
1	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGA--GGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2429	1,19%	-2
1	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCA-----GGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2430	0,78%	-5
1	CR001158			,,,	,,,
2	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGAAAaGGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2431	11,89%	1
2	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAG----GTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2432	9,97%	-4
2	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGAA-GGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2433	3,45%	-1
2	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGA--GGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2434	0,86%	-2
2	CR001158	CCTGGAAGCCAACGAAAGATATTGAATAATTCAAGAAcaAGGTGGTGGCATGGTTTGATTTGTGTCTTTAAAAGATTATTCT	2435	0,49%	2
2	CR001158			,,,	,,,
1	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCA-------------GGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2436	11,38%	-13
1	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACC-CATCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2437	3,98%	-1
1	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCA-----TCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2438	3,05%	-5
1	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCG-ATCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2439	2,94%	-1
1	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACC------AGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2440	2,82%	-6
1	CR001212			,,,	,,,
2	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCA-------------GGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2441	11,42%	-13
2	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACC-CATCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	SEQ ID NO:	6,41%	-1
2	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCG-ATCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2346	5,61%	-1
2	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCG--TCCAGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2347	2,85%	-2
2	CR001212	CCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACC------AGCCAGGATAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATA	2348	1,96%	-6
2	CR001212		2349	,,,	,,,
1	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGG------TCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2350	17,75%	-6
1	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGATtAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG		4,06%	1
1	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGAaTAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2351	2,38%	1
1	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGA-AAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2352	1,35%	-1
1	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGAT-----CTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2353	1,10%	-5
1	CR001217		2354	,,,	,,,
2	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGG------TCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2355	18,91%	-6
2	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGATtAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG		5,59%	1
2	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGAaTAAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2356	1,42%	1
2	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGA-AAGGTCTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2357	1,38%	-1
2	CR001217	AAGTGCTGGGTTTACAAGCCTGAGCCACCGCATCCAGCCAGGAT-----CTAAAAGTGGAAAGAATAGCATCTACTCTTG	2358	1,26%	-5
2	CR001217		2359	,,,	,,,
1	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2360	28,78%	-4
1	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA		9,51%	-1
1	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2361	4,35%	-5
1	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG-----------CAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2362	1,87%	-11
1	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATG------------GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2363	1,71%	-12
1	CR001221		2364	,,,	,,,
2	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2365	29,12%	-4
2	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA		10,32%	-1
2	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2366	4,26%	-5
2	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2367	1,89%	-10
2	CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG-----------CAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2368	1,67%	-11
2	CR001221		2369	,,,	,,,

Хотя в некоторых случаях относительное преобладание наиболее частых инделов варьировалось от эксперимента к эксперименту, наиболее представленные инделы были в основном одинаковыми в обоих экспериментах для любой выбранной gРНК. Это указывает на то, что для этих dgРНКs профиль инделов, формирующийся в клетках HSC, остается постоянным. Кроме того, данные результаты подтверждают неожиданный вывод из предыдущих экспериментов о том, что небольншие инделы (например, в данном случае, инделы длиной 1-20 нуклеотидов) в областях HPFH, на которую нацелены на эти gРНК, могут привести к значительному повышению фетального гемоглобина. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидноклеточных эритроцитов.

Пример 4.5.

Методы: Методы являются такими, как в Примере 4.1, со следующими исключениями.

Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были получены из костного мозга (Hemacare Corporation, Cat. No. BM34C-3). CD34+ клетки оттаивали и разгоняли в среде культивирования клеток в течение 1 дня до доставки RNP. После доставки RNP клетки сразу же переносили обратно в 200 мкл среды для культивирования клеток и оставляли на ночь. На следующий день делали подсчёт клеток культуры и приводили к 2,0x10⁵ жизнеспособных клеток на мл. Процент восстановления рассчитывали как количество жизнеспособных клеток через 1 день после доставки RNP от общего количества жизнеспособных клеток, подвергнутых электропорации. Через 7 дней в среде культивирования (через 8 дней после доставки RNP) снова определяли количество жизнеспособных клеток. Кратность пролиферации определялась как количество как количество жизнеспособных клеток через 7 дней в среде культивирования, разделенное на 2,0x10⁵ клеток на мл. Все подсчеты жизнеспособных клеток измеряли с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100), где нежизнеспособные клетки были отсеяны с помощью окрашивания по DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). После дополнительного 1 дня в среде культивирования (через 9 дней после доставки RNP) культуры клеток были фенотипированы проточной цитометрией, как описано в разделе «Фенотипирование клеток».

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 5.4x10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух экземплярах. crРНК имела последовательность mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2466), где r представляет собой основание РНК, m-основание с модификацией 2’О-метил, а * обозначает фосфоротиоатную связь. В качестве последовательност tracr была использована SEQ ID NO: 7808.

Метод выявления колониеобразующих единиц. На следующий день после доставки RNP жизнеспособные клетки подсчитывали, как описано в разделе «Культура клеток CD34+ человека». Для анализа гранулоцитов/макрофагов-предшественников колониеобразующей единицы (КОЕ) 227 клеток на 1 мл метилцеллюлозной среды Metocult H4035 (StemCell Technologies) высевали на чашку в двух экземплярах. В Methocult был добавлен 1x антибиотик/антимикотик (Gibco, Cat.#10378-016). Чашки с культурами инкубировали во влажном инкубаторе при 37° С. Колонии, содержащие по меньшей мере 50 клеток, подсчитывали на 15-й день после высева. Количество колоний на мл Methocult было разделено на 227 и умножено на 1000 для получения частоты КОЕ на 1000 клеток.

Фенотипирование клеток. Клетки анализировали на экспрессию маркеров поверхности после окрашивания с помощью следующих панелей антител. Панель 1: антитела специфичные CD38 (FITC-коньюгат, BD Biosciences #340926, клон HB7), CD133 epitope 1 (PE-коньюгат, Miltenyi #130-080-801, клон AC133), CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD90 (APC-коньюгат, BD Biosciences #598695, клон E10), CD45RA (Pe-Cy7-коньюгат, eBioscience #25-0458-42, клон HI100). Панель 2: CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD33 (PE-Cy7-коньюгат, BD Biosciences #333946, клон P67.6), CD14 (APC-H7-коньюгат, BD Biosciences #560270, клон MφP9), CD15 (PE-коньюгат, Biolegend #301905, клон HI98). Панель 3: CD34 (PerCP-коньюгат, BD Biosciences #340666, клон 8G12), CD41a (APC-H7-коньюгат, BD Biosciences #561422, клон HIP8), CD71 (FITC-коньюгат, BD Biosciences #555536, клон M-A712), CD19 (PE-коньюгат, BD Biosciences #340720, клон SJ25C1), CD56 (APC-коньюгат, Biolegend #318310, клон HCD56). Соответствующие панели с контрольными изотипами были параллельно использованы для окрашивания культур, за исключением того, что анти-CD45RA был включен вместо его изотипного контроля. Нежизнеспособные клетки отсеивались с помощью окрашивания DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). Окрашенные образцы анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences) на экспрессию белков клеточной поверхности. Результаты были проанализированы с использованием Flowjo, и данные были представлены как % DAPI-отрицательной жизнеспособной клеточной популяции.

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных и нередактированных клеток HSPC на 1 и 8 день после электропорации с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat#QE09050)).

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH или облпсти эритроидного энхансера BCL11A уменьшает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, иногда называются здесь «F клетками»). Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD, также была объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая эффекты побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, связанные с системой. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, используемых в исследовании, представлен в Таблице 23. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки были на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Таблица 23. Относительное восстановление жизнеспособных клеток, пролиферация в CD34+ среде культивирования и частота образования колоний прогениторных клеток гранулоцитов/макрофагов (КОЕ) для отредактированных и нередактированных культур клеток в текущем исследовании. Процент восстановления, кратность пролиферации и частоту КОЕ рассчитывали, как описано в Материалах и Методах. Показаны индивидуальные реплики электропорации. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК. Последовательность Tracr была представлена SEQ ID NO: 7808, а crРНК имела следующий формат с модификациями 2'O-Метил (m) и фосфоротиоатными связями (*): mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2467), где N являются остатками указанного целевого домена.

ID целевого домены gРНК и реплики	% восстановления	Кратность пролиферации (7 дней)	КОЕ (на 1000 клеток)
CR001030 реплика 1	77,7	7,1	117
CR001030 реплика 2	87,9	4,8	95
CR001028 реплика 1	85,3	10,6	176
CR001028 реплика 2	82,1	10,9	141
CR001095 реплика 1	72,5	7,3	121
CR001095 реплика 2	73,3	7,3	126
CR001212 реплика 1	75,6	7,7	123
CR001212 реплика 2	75,5	8,2	97
CR000312 реплика 1	77,7	12,2	145
CR000312 реплика 2	81,0	9,0	143
g8 реплика 1	80,0	16,6	145
g8 реплика 2	84,6	17,3	145
None/контроль реплика 1	89,8	19,3	185
None/контроль реплика 2	81,2	20,5	154

Процент восстановления клеток через 1 сутки после электропорации варьировалось от 72,5% до 89,8% и был одинаковым в разных условиях, включая нередактированный, но подвергнутый электропорации контроль (Таблица 23). Геном-отредактированные и нередактированные HSPC, анализировали на пролиферацию в среде культивирования CD34+ клеток. Пролиферация варьировала от 4,8 до 17,3 раз в течение 7 дней для отредактированных культур клеток и от 19,3 до 20,5 раз для нередактированных клеток (Таблица 22). Редактирование с помощью dgРНК в этом исследовании, нацеленных на районы эритроидного энхансера HPFH или BCL11A, не изменяло композицию типов клеток в культуре по сравнению с нередактированным контролем, как определено экспрессией поверхностного маркера, указывающей на то, что нацеливание на эти сайты не изменяет судьбу HSPC в этих условиях (Фиг. 26A-B). Напротив, редактирование с помощью dgРНК с доменом g8, нацеленным на экзон BCL11A привело к умеренному снижению пролиферации, но к значительному изменению композиции типов клеток, в частности уменьшению процента всех подтипов CD34+ HSPC, а также популяции эритроидов CD71 + и увеличение процента CD14+ моноцитов и CD15+ гранулоцитов (Таблица 23 и Фиг. 26A-B). Частота колониеобразующих единиц прогениторных клеток гранулоцитов/макрофагов (КОЕ) была сходной во всех отредактированных культурах, причем при наличии только небольшого снижения КОЕ в отредактированных культурах (от 95 до 145 КОЕ на 1000 клеток) по сравнению с необработанными культурами (от 154 до 185 КОЕ на 1000 клеток), позволяет предполагать, что прогениторная функция гранулоцитов/макрофагов не изменяется значительно при редактировании генома по этим двум сайтам (Таблица 23).

Пример 4.6.

Методы: Методы являются такими, как в Примере 4, со следующими исключениями.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. В некоторых случаях crРНК, содержащие два разных целевых домена, были доставлены в одну и ту же культуру клеток. В этих случаях общий RNP, доставляемый в клетки, содержал 6 мкг Cas9, 3 мкг crРНК и 3 мкг tracr, как в подпункте 4.1; однако две crРНК, содержащие по 1,5 мкг, независимо друг от друга представляли собой комплексные смеси tracr/CAS9, содержащие 1,5 мкг tracr и 3 мкг Cas9, их объединяли только при добавлении в клетки. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 2,5×10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на 4D-нуклеоформере (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Для dgРНК использовался tracr, имеющий SEQ ID NO: 7808, и crРНК с последовательностью mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2468), где r обозначает основание РНК, m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * указывает на фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки указанного целевого домена.

Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. Культуру клеток разбавляли свежей средой через 3 дня.

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК выделяли из отредактированных по геному и нередактированных HSPC на 3 день после электропорации, с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat # QE09050).

Результаты:

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH и области эритроидного энхансера BCL11A снижает репрессию экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки. Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD была также объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая проявление побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, присущие системе. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Список gРНК, использованных в исследовании представлен в Таблице 24. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки находились на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Таблица 24. Индукция HbF путем одновременного нацеливания на область эритроидного энхансера BCL11A и область HPFH. Все молекулы gРНК тестировали в формате dgРНК в двух экземплярах. Используемый tracr имеет последовательность SEQ ID NO: 7808, а crРНК имеет следующий формат, где m обозначает основание с 2'O-метил модификацией, * указывает на фосфоротиоатную связь, а N обозначает остатки указанного целевого домена: mN*mN*mN*rNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrNrGrUrUrUrUrArGrArGrCrUrArU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2469).

ID целевого домена gРНК #1	ID целевого домена gРНК #2	% HbF+ (F клеток), среднее по репликам	% редактирования по целевому сайту #1, среднее по репликам	% редактирования по целевому сайту #2, среднее по репликам
CR000312	n/a	41,3	91,3	n/a
CR001128_EH15	n/a	43,7	77,5	n/a
n/a	CR001030	58,0	n/a	85,6
n/a	CR001221	48,6	n/a	92,1
CR000312	CR001030	66,8	58,3	81,2
CR000312	CR001221	60,6	64,2	85,0
CR001128_EH15	CR001030	69,1	49,8	82,9
CR001128_EH15	CR001221	62,7	58,5	84,8
g8	n/a	64,7	94,6	n/a
None/контроль	n/a	23,8	n/a	n/a

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения Live Dead Violet. Нацеливание на область HPFH и область эритроидного энхансера BCL11A приводило к увеличению процента эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками, результат, подтверждённый при разных способах оценки и форматах dgРНК (Таблица 24. Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A. При одновременном нацеливании на область HPFH и область эритроидного энхансера гена BCL11A в одной и той же популяции клеток, процент клеток, содержащих HbF, превышал процент, соответствующий независимому нацеливанию на каждую область (Таблица 24). Таким образом, увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных клеток, может быть достигнуто путем нацеливания либо на область HPFH, либо на эритроидный энхансер BCL11A, а также в большей степени путем одновременного нацеливания на оба района.

Геномные продукты ПЦР обоих областей подвергались секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома наблюдалось в культурах клеток, подвергнутых электропорации комплексами RNP, содержащими Cas9, crРНК с определённым целевым доменом и Tracr (Таблица 24), но не в контрольных клетках, подвергнутых электропорации без доставки целевого домена (RNP, содержащие только Cas9 и Tracr). При доставке RNP нацеленных на оба домена в ту же самую клеточную популяцию, редактирование наблюдалось по обоим сайтам (Таблица 24). В некоторых примерах процент клеток, редактированных по конкретном сайте был незначительно уменьшен, при доставке двух (типов) RNP вместо одного, возможно, из-за более низкой концентрации RNP, нацеленного на данный сайт в первом случае. Более высокие процентные значения редактирования и потенциально более высокий процент HbF содержащих клеток могут быть достигнуты путем увеличения каждой отдельной концентрации RNP, когда два RNP доставляются одновременно. Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных геном клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшении выработки серповидноклеточных эритроцитов.

Пример 4.7.

Методы: Методы являются такими как в Примере 4, со следующими исключениями.

Культура клеток CD34+ человека. Человеческие CD34+ клетки были получены из костного мозга (Lonza, Cat. No. 2M-101D). Клетки CD34+ оттаивали и разгоняли до стадии экспоненциального роста в течение 2 дней в среде культивирования до доставки RNP.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. Для образования RNP с использованием однонаправленных РНК (sgРНКs) 6 мкг sgРНК добавляли к 6 мкг белка CAS9 (от 0,8 до 1 мкл) и 0,5 мкл 5×CCE-буфера (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприготовленный 1 мМ DTT) в общем объеме 5 мкл и инкубировали в течение 5 мин при 37^оC. HSPC собирали центрифугированием, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675) до плотности клеток 6,4×10⁶/мл. RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетка (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на нуклеофекторе 4D-Nucleofector (Lonza). Электропорации выполняли в двух репликах. Для dgРНК, dgРНК-PS и dgРНК-OMePS tracr был SEQ ID NO: 6660, за исключением g8, который использовался с tracr SEQ ID NO: 7808. Форматы для всех gРНК, используемых в этом эксперименте, показаны в Таблице 36, за исключением dgРНК g8 OMePS, которая включала crРНК с последовательностью mC*mA*mC*AAACGGAAACAAUGCAAGUUUUAGAGCUAU*mG*mC*mU (SEQ ID NO: 2470) и tracr, имеющий последовательность SEQ ID NO: 7808.

Эритропоэз in vitro и FACS анализ эритроидных клеток, содержащих HbF. После доставки RNP клетки поддерживались в соответствии с Протоколом 1 или Протоколом 2. По протоколу 1, клетки немедленно переносили в предварительно нагретую среду, состоящую из EDM и добавок. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 дней культивирования в EDM не добавляли никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры доводили до 4,0×10⁴ клеток на мл в день 7. В дни 11, 14 и 19 среду пополняли. По протоколу 2, клетки немедленно переносили обратно в 200 мкл среды для культивирования и оставляли расти еще 2 дня. Культуры подсчитывались через 2 дня после доставки RNP. Затем клетки осаждали и ресуспендировали в предварительно нагретой среде, состоящей из EDM и добавок. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779-598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM дополняли 100 нг/мл человеческого SCF. В течение 11-21 культивирования в EDM не добавляли никаких дополнительных добавок. Клеточные культуры инициировали при 4,0×10⁴ клеток на мл в день 0, разводили в 4 раза свежей средой на 4-й день и доводили до 2,0×10⁵ клеток на мл в день 7. В дни 11, 14 и 19 среду пополняли. Жизнеспособные клетки подсчитывали на 7, 18 и 21 день в среде культивирования EDM. Все подсчеты жизнеспособных клеток проводили с помощью проточной цитометрии с использованием счетчиков AccuCheck Counting Beads (ThermoFisher cat. No. PCB100) с вычетом нежизнеспособных клеток, подвергнутых окрашиванию DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол). По обоим протоколам, на 7, 14 и 21 день культивирования дифференцирующихся эритроидов, клетки анализировали внутриклеточным окрашиванием для обнаружения экспрессии HbF. В дни 14 и 21 внутриклеточное окрашивание для обнаружения экспрессии HbF не включало анти-CD71 и анти-CD235a антитела, и определялся % HbF-положительных клеток (F клеток) во всей жизнеспособной популяции клеток. LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain (ThermoFisher L34975) использовался в качестве красителя для определения жизнеспособности клеток.

Подготовка геномной ДНК и секвенирование следующего поколения (NGS). Геномную ДНК получали из отредактированных по геному и нередактированных HSPC на 2 и 6 день после электропорации, культивированных по протоколу 2, с использованием Quick Extract DNA Extraction Solution (Epicentre Cat# QE09050).

Результаты.

Не ограничиваясь теорией, считается, что целенаправленное генетическое нарушение области HPFH снижает подавление экспрессии γ-глобина, позволяя продукцию эритроцитов, содержащих повышенный уровень белка HbF (клетки, экспрессирующие фетальный гемоглобин, например, экспрессирующие повышенные уровни фетального гемоглобина, иногда упоминаются здесь как «F клетки. Повышенный HbF предотвращает образование эритроцитов серповидной формы в условиях недостатка кислорода и является терапевтическим/лечебным для пациентов как при β-талассемии, так и при SCD. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) ex vivo отредактированными HSC клетками пациентов с SCD была также объединена с технологией усиления экспансии (роста) стволовых клеток, например (при использовании) ингибитора арильного углеводородного рецептора (AHR), например, как описано в WO2010/059401 (содержание которого включено в настоящий документ во всей своей полноте посредством ссылки), например, (при использовании) Соединения 4 для усиления экспансии клеток ex vivo и увеличения дозы доставляемых генно-модифицированных HSC.

Для эффективного редактирования генома с помощью программируемой нуклеазы Cas9, успешная доставка нацеливающей РНК (gРНК) и белка Cas9 в клетки-мишени и ткани имеет решающее значение. Недавние сообщения показали, что комплексы рибонуклеопротеинов (RNP) Cas9, когда они доставляются в клетки-мишени электропорацией, могут выполнять эффективное и высокоспецифичное редактирование генома в нескольких разных типах клеток. Комплексы Cas9-RNP расщепляют хромосомную ДНК почти сразу после доставки и быстро деградируют в клетках, снижая проявление побочных эффектов. Напротив, использование плазмидных и вирусных векторных систем, используемых для доставки Cas9, приводит к длительной экспрессии фермента, усугубляющего эффекты неспецифичности редактирования, присущие системе. Кроме того, доставка RNP в клетки-мишени не требует дополнительных инструментов, что значительно облегчило бы перенос технологии редактирования генома в терапевтических целях в клиники. Очищенные рекомбинантные белки и комплексы gРНК (RNP-комплексы) были доставлены в культивированные HSPC, результаты обобщённых экспериментов представлены на Фиг.17.

Рекомбинантный белок Cas9 из Escherichia coli очищали и вводили в комплекс с синтетическими одиночными (sgРНК) или двойными gРНК (dgРНК), состоящими из crРНК и tracr для образования рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP). Форматы gРНК, использованные в исследовании представлены в Таблице 36. Комплексы RNP электропорировали в CD34+HSPC посредством электропорации, как описано в Материалах и Методах. Клетки находились на стадии экспоненциального роста перед доставкой комплексов RNP. Активно делящиеся клетки могут способствовать поглощению комплексов РНП, поставляемых электропорацией.

Геномные продукты ПЦР области HPFH подвергали секвенированию следующего поколения (NGS) для определения процента отредактированных аллелей в популяции клеток. Редактирование генома в области HFPH наблюдалось в культурах клеток, электропорированных с RNP, содержащих Cas9, crРНК с определённым целевым доменом и tracr (Фиг. 43), но не в контрольных клетках без доставки домена (электропорированных с RNP, содержащих только Cas9 и Tracr). В некоторых случаях редактирование на данном целевом сайте было больше при использовании модифицированных sgРНКs по сравнению с другими форматами gРНК (Фиг. 43). Наконец, профиль инделов также как и частота каждого индела были определены с помощью NGS для каждой gРНК. Профиль инделов для нескольких повторов-реплик с использованием той же самой gРНК/Cas9 сохранялся постоянным. Репрезентативные, наиболее часто встречающиеся инделы для каждого целевом сайта-мишени показаны в Таблице 37.

Таблица 36. gРНК-последовательности, используемые в экспериментах, описанных в этом примере. N обозначает остатки указанных целевых доменов; mN обозначает 2'-OMe-модифицированную нуклеиновую кислоту; * указывает на модификацию фосфоротиоата.

Маркировка	Формат	Последовательность
CRxxxxxx sg	sgRNA	NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 2471)
CRxxxxxx OMePS sg или CRxxxxxx sg OMePS	sgRNA	mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO: 2472)
CRxxxxxx PS sg или CRxxxxxx sg PS	sgRNA	N*N*N*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U (SEQ ID NO: 2473)
CRxxxxxx	dgRNA	NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2474) и AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)
CRxxxxxx OMePS	dgRNA	mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2475) и AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)
CRxxxxxx PS	dgRNA	N*N*N*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*U*U*G (SEQ ID NO: 2476) и AACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUUUUU (SEQ ID NO: 6660)

Таблица 37. Наиболее часто встречающиеся инделы, определённые для каждой gРНК (целевой домен и формат) методом секвенирования NGS на 6-ой день после введения RNP. Последовательности gРНК представлены в Таблице 36. Заглавные буквы представляют собой исходные (природные) нуклеотиды в последовательности-мишени и вблизи нее. Делеции относительно немодифицированной целевой последовательности показаны как «-»; инсерции показаны строчными буквами.

ID целевого домена gРНК и формат	Считывание NGS (Геномная последовательность)	SEQ ID NO:	% от общего кол-ва считываний	Длина Индела
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAATG-----GCAGCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2477	47,57%	-5
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAATG-AATGGCAGCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2478	13,92%	-1
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAATG--ATGGCAGCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2479	2,89%	-2
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAATGCA------GCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2480	2,01%	-6
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAAT-CAATGGCAGCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2481	1,65%	-1
g8 dgRNA OMePS	ACATTCTTATTTTTATCGAGCACAAACGGAAACAAaTGCAATGGCAGCCTCTGCTTAGAAAAAGCTGTGGATAAGCCACCT	2482	1,53%	1
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2483	14,45%	-13
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2484	7,55%	0
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2485	7,49%	-1
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2486	4,94%	-13
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2487	4,33%	-4
CR001028	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2488	2,83%	-2
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2489	19,29%	-13
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2490	7,11%	0
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2491	6,26%	-13
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2492	6,19%	-1
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2493	5,44%	-4
CR001028 OMePS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2494	2,89%	-2
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2495	15,91%	-13
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2496	8,91%	0
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2497	4,80%	-4
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2498	4,59%	-13
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2499	2,92%	-1
CR001028 OMePS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCtTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2500	1,75%	0
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2501	13,02%	-13
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2502	8,11%	0
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2503	6,08%	-1
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2504	4,43%	-13
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2505	3,86%	-4
CR001028 PS	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2506	2,96%	-2
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2507	17,48%	-13
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2508	7,01%	-13
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2509	6,84%	0
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2510	6,05%	-4
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2511	4,59%	-2
CR001028 PS sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2512	3,53%	-1
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCC-------------CCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2513	10,58%	-13
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2514	9,11%	0
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA-ATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2515	6,47%	-1
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA--TATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2516	4,78%	-2
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTC-------------ACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2517	4,06%	-13
CR001028 sg	TTCTGTCATGTGTGTCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTA----TCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTC	2518	3,41%	-4
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2519	8,30%	-13
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2520	4,39%	0
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2521	2,61%	-5
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2522	2,18%	-1
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCtTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2523	2,12%	0
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2524	2,10%	-2
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2525	10,40%	-13
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2526	4,56%	1
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC-GCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2527	3,83%	-1
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2528	3,68%	-2
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2529	2,87%	-5
CR001030 IDT	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCT---------------TTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2530	2,54%	-15
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2531	9,90%	-13
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2532	4,63%	1
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2533	3,71%	-1
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2534	2,39%	-2
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2535	2,03%	0
CR001030	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2536	1,95%	-5
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2537	19,91%	-13
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2538	5,76%	-1
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2539	3,09%	1
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCG----TCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2540	3,03%	-4
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC------TCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2541	2,98%	-6
CR001030 OMePS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCT---------------TTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2542	2,81%	-15
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2543	8,52%	-13
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2544	5,21%	0
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2545	2,63%	1
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC-GCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2546	2,25%	-1
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2547	1,81%	-5
CR001030 OMePS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2548	1,77%	-1
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2549	5,99%	-13
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTgCATATCTCCCCACCGCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2550	4,09%	0
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2551	3,90%	1
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2552	3,59%	-5
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2553	2,86%	-1
CR001030 PS	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2554	2,39%	-2
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2555	11,86%	-13
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2556	5,20%	-1
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2557	3,65%	1
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC--ATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2558	3,33%	-2
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2559	2,92%	-5
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACAT---------------CTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2560	2,14%	-15
CR001030 PS sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTC--------------------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2561	2,08%	-26
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTC-------------TTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2562	11,22%	-13
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACC-CATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2563	4,64%	-1
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCACCGgCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2564	2,78%	1
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCA-----TCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2565	2,73%	-5
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC-GCATCTCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2566	2,34%	-1
CR001030 sg	TCTTGACTCAGAAACCCTGTTCTCCTCTACATATCTCCCCAC------TCTTTCAGCAGTTGTTTCTAAAAATATCCTCC	2567	2,29%	-6
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2568	4,26%	1
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2569	3,80%	-7
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2570	1,32%	1
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2571	0,98%	-8
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-------TAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2572	0,97%	-7
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAA------GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2573	0,85%	-6
CR001137	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2574	0,73%	-1
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2575	19,40%	1
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2576	7,73%	-7
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAA-------GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2577	2,97%	-7
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2578	2,78%	-8
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2579	2,27%	1
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAAT-----------------------------------TACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2580	2,06%	-35
CR001137 OMePS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAA----------------TGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2581	2,04%	-16
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2582	5,27%	1
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2583	4,66%	-7
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2584	2,38%	-8
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-------TAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2585	1,91%	-7
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2586	1,72%	1
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAA-------GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2587	1,03%	-7
CR001137 OMePS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCA--------GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2588	0,82%	-8
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2589	7,49%	-7
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2590	6,85%	1
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2591	2,64%	-8
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2592	2,11%	1
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGG---CCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2593	1,91%	-3
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAAC----------TTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2594	1,81%	-10
CR001137 PS	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-------TAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2595	1,28%	-7
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2596	11,90%	1
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2597	7,45%	-7
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAG-------------------------AATTGATAAAT	2598	4,87%	-25
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-GCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2599	3,82%	-1
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2600	3,57%	1
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA-CCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2601	2,81%	-1
CR001137 PS sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA---ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2602	2,35%	-3
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACC-------ACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2603	6,84%	-7
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAGgCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2604	4,54%	1
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAaGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2605	2,46%	1
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGT-------TAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2606	1,83%	-7
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA--------AATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2607	1,11%	-8
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTA----CTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2608	0,78%	-4
CR001137 sg	AAATGCTTATGACAGCAATAATCATAAAAACCTCAAACCGGTAtGCCACTTAAATGCTTACCAACAGTAGAATTGATAAAT	2609	0,72%	1
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2610	29,13%	-4
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2611	4,65%	-1
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2612	4,27%	-5
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG----------GCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2613	1,47%	-10
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2614	1,14%	-10
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGG-------------------------TAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2615	1,04%	-25
CR001221	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTtACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2616	0,86%	0
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2617	26,33%	-4
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2618	15,83%	-1
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2619	6,26%	-5
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG--TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2620	3,75%	-2
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTGtACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2621	2,61%	1
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2622	2,15%	-10
CR001221 OMePS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTGAaCTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2623	1,82%	1
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2624	32,73%	-4
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2625	6,46%	-1
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2626	5,49%	-5
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG-----------CAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2627	3,16%	-11
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG----------GCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2628	2,03%	-10
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTGtACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2629	1,53%	1
CR001221 OMePS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATG------------GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2630	1,05%	-12
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2631	33,94%	-4
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2632	7,39%	-1
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2633	5,05%	-5
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2634	4,03%	-10
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTGtACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2635	1,52%	1
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATG------------GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2636	1,48%	-12
CR001221 PS	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG-----------CAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2637	1,43%	-11
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2638	27,00%	-4
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2639	13,43%	-1
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2640	6,57%	-5
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTGtACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2641	4,28%	1
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACC--ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2642	3,13%	-2
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2643	2,40%	-10
CR001221 PS sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG--------GTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2644	2,13%	-8
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG----GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2645	26,35%	-4
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCT-ACTGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2646	8,55%	-1
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC-----TGGGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2647	7,25%	-5
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGAC----------AGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2648	2,41%	-10
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGG-----------CAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2649	1,90%	-11
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATGAGGACCTG---------TAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2650	1,82%	-9
CR001221 sg	TAGCATCTACTCTTGTTCAGGAAACAATG------------GGCAGTAAGAGTGGTGATTAATAGATAGGGACAAATTGA	2651	1,81%	-12
CR003035	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2652	12,23%	-3
CR003035	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2653	8,25%	0
CR003035	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2654	4,47%	-3
CR003035	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2655	3,60%	-1
CR003035	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGA--------------GTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2656	2,79%	-14
CR003035	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2657	2,55%	-2
CR003035	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATAC------TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2658	1,68%	-6
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2659	13,59%	-3
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2660	5,56%	-2
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2661	5,34%	-1
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2662	5,30%	-2
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGA--------------GTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2663	4,70%	-14
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2664	4,44%	-3
CR003035 OMePS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG-TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2665	2,05%	-1
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2666	9,22%	-3
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2667	7,81%	0
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2668	3,79%	-3
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2669	2,63%	-1
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2670	2,00%	-2
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGA--------------GTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2671	1,92%	-14
CR003035 OMePS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACC-----TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2672	1,69%	-5
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2673	13,91%	-3
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2674	6,11%	-3
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2675	3,77%	0
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2676	3,64%	-1
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2677	2,39%	-2
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2678	2,16%	-2
CR003035 PS	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2679	1,87%	-1
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2680	8,32%	-1
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2681	6,41%	-3
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2682	4,19%	-2
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2683	4,08%	-2
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2684	3,31%	-1
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCC----TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2685	2,99%	-4
CR003035 PS sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACC-----TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2686	2,23%	-5
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2687	10,92%	-3
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG---AGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2688	6,05%	-3
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCAT-CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2689	5,42%	-1
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAAtAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATGCTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2690	4,55%	0
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCA--CTGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2691	4,53%	-2
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCCATG--GAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2692	3,59%	-2
CR003035 sg	CTGGAAGAGAAACAGTTTTAGTATAACAAGTGAAATACCC----TGAGTCTGAGGTGCCTATAGGACATCTATATAAATA	2693	2,30%	-4
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2694	10,38%	-1
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2695	5,87%	-4
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2696	5,50%	1
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2697	4,87%	-5
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC------------------------------------GTGGGTGG	2698	4,61%	-36
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAaC----------------------------ATCACAGGCTCCAGGATAGGGGGCGTGGGTGG	2699	2,38%	-28
CR001128	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA--GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2700	2,00%	-2
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----------------------TGGGGGCGTGGGTGG	2701	7,56%	-23
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2702	6,53%	-4
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2703	6,18%	-5
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2704	6,06%	-1
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2705	3,92%	1
CR001128 OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----------CCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2706	2,55%	-10
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2707	10,12%	-1
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2708	7,05%	-5
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2709	4,59%	-4
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2710	4,24%	1
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG---------------------------GGCGTGGGTGG	2711	2,21%	-27
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAG------------------------------CGTGGGTGG	2712	1,66%	-30
CR001128 sg	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGC-----------------CTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2713	1,48%	-17
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG-----TTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2714	10,59%	-5
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGG----GTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2715	7,59%	-4
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA-GGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2716	5,92%	-1
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAaGGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2717	3,38%	1
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGAAGagGGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2718	2,49%	2
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA----------------TTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2719	1,95%	-16
CR001128 sg OMePS	GTCTAGTGCAAGCTAACAGTTGCTTTTATCACAGGCTCCAGGA--GGTTTGGCCTCTGATTAGGGTGGGGGCGTGGGTGG	2720	1,85%	-2
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2721	11,83%	-1
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2722	5,11%	-16
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2723	4,33%	-19
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2724	3,63%	-2
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGG-----------------------GCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2725	2,50%	-23
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTG------GTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2726	2,47%	-6
CR000312	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTG---------GGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2727	2,35%	-9
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2728	12,06%	-1
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG-------------TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2729	4,75%	-13
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2730	4,32%	-2
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2731	3,97%	-19
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2732	3,28%	-16
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGaGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2733	3,25%	1
CR000312 OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2734	1,91%	-2
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2735	6,69%	-2
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2736	6,28%	-1
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGA-----------------------------AGGACTGGCAGACCTCTC	2737	4,58%	-29
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGaGGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2738	3,83%	1
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2739	3,74%	-16
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTG---------GGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2740	3,66%	-9
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGGG------CGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2741	3,19%	-6
CR000312 sg	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG-------------TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2742	3,18%	-13
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAGG-TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2743	12,59%	-1
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATT--GGTGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2744	7,73%	-2
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTG---------GGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2745	6,49%	-9
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG----------------GGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2746	5,32%	-16
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGC-------------------GTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2747	3,89%	-19
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGG----------------------GGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2748	2,50%	-22
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGG-------------TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2749	2,50%	-13
CR000312 sg OMePS	TATCACAGGCTCCAGGAAGGGTTTGGCCTCTGATTAG--TGGGGGCGTGGGTGGGGTAGAAGAGGACTGGCAGACCTCTC	2750	2,25%	-2
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2751	12,51%	-10
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2752	8,89%	-1
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2753	7,30%	1
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2754	6,20%	-13
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2755	3,50%	-14
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2756	3,09%	-5
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2757	2,29%	-3
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2758	1,64%	-1
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGG---------TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2759	1,43%	-9
CR003085	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA--AAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2760	1,39%	-2
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2761	13,65%	1
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2762	10,96%	-10
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2763	8,21%	-13
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2764	8,15%	-1
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2765	6,29%	-14
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2766	4,53%	-5
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2767	3,60%	-3
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA--CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2768	3,47%	-2
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2769	1,30%	-1
CR003085 OMePS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGG-------------------------------------TTATATCCTTCTA	2770	1,00%	-37
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2771	10,09%	1
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2772	9,05%	-10
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2773	6,52%	-1
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2774	4,94%	-13
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2775	4,55%	-14
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2776	2,40%	-5
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA--CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2777	2,00%	-2
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2778	1,82%	-3
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2779	1,57%	-1
CR003085 OMePS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGT----------------------------------TATATCCTTCTA	2780	1,16%	-34
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2781	15,06%	-10
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2782	11,15%	-1
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2783	8,37%	1
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2784	7,44%	-13
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2785	5,33%	-14
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2786	3,58%	-5
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2787	3,50%	-3
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA--CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2788	2,05%	-2
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGG--------------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2789	1,39%	-14
CR003085 PS	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2790	0,86%	-1
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2791	12,62%	-1
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2792	11,73%	1
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2793	8,86%	-10
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2794	6,59%	-13
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2795	4,88%	-14
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2796	3,68%	-3
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA--CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2797	3,62%	-2
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2798	3,48%	-1
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2799	2,90%	-5
CR003085 PS sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTAT------------AAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2800	1,10%	-12
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGG----------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2801	11,79%	-10
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTAT-CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2802	9,21%	-1
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATAaCTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2803	6,84%	1
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGA-------------CTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2804	6,44%	-13
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTA--------------AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2805	4,12%	-14
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA-----AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2806	3,46%	-5
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA---AGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2807	3,22%	-3
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTA--CTAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2808	1,65%	-2
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGGGAGGTATA-TAAGGACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2809	1,07%	-1
CR003085 sg	ATGTAAGGAGGATGAGCCACATGGTATGG--------------ACTCTAGGGTCAGAGAAATATGGGTTATATCCTTCTA	2810	0,95%	-14

Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали на пролиферацию и усиление экспрессии HbF в трехстадийном протоколе эритроидного дифференцирования клеточной культуры. Геном-отредактированные и нередактированные HSPC анализировали с помощью проточной цитометрии для обнаружения экспрессии фетального глобина и, на 7-ой день, двух маркеров поверхности эритроидной клетки: рецептора трансферрина (CD71) и гликофорина A (CD235a) с использованием антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями. Живые клетки идентифицировали и подвергали гэйтингу путем исключения Live/Dead Fixable Dead Cell Stain. Редактирование генома с включением gРНК, нацеленнных на область HPFH и область эритроидного энхансером BCL11A, не оказало отрицательного влияния на дифференцировку эритроидов, поскольку культивируемые клетки показали процентное содержание CD71+ клеток, соответствующих эритробластам, сходными с нередактированными клетками на 7-й день дифференцировки, хотя Протокол 1 и Протокол 2 отличались по процентам CD71+ в разных условиях. (Фиг. 44). Культуры, обработанные с включением gРНК, нацеленнным на область HPFH и область эритроидного энхансером BCL11A нацеливающимся на gРНК, приводили к аналогичным закономерностям относительных изменений процентного содержания эритроидных клеток, содержащих HbF, по сравнению с ложными электропорированными клетками на протяжение 21-дневного периода культивирования и между двумя протоколами (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). HbF индуцировался в клетках, подвергнутых воздействию RNP и поддерживаемых как в Протоколе 1, так и в Протоколе 2, однако процент клеток, которые были HbF-положительными, как правило, был ниже в при всех условиях и временных интервалах Протокола 2 (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). Индукция HbF наиболее заметна при использовании gРНК, состоящих из целевых доменов CR001030, CR00312 и CR001128, особенно на более поздних временных точках (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). По сравнению со всеми целевыми доменами sgРНКs имели тенденцию к более высокой индукции HbF, чем dgРНКs, в частности, модифицированные OMePS sgРНКs (Фиг. 45, Фиг. 46 и Фиг. 47). Относительно низкая индукция HbF целевым доменом CR001137 может быть объяснена более низким уровнем редактирования на этом целевом сайте (Фиг.43, Фиг.45-Фиг.47). Параллельно наблюдалась также индукция HbF-положительных клеток с помощью dgРНК, включающей целевой домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A (Фиг. 45-Фиг. 47). Увеличение HbF-содержащих эритроцитов, полученных из отредактированных по геному клеток, вероятно, будет иметь терапевтические последствия при уменьшии выработки серповидно-клеточных эритроцитов. Отредактированные клетки были способны к пролиферации в условиях дифференцировки эритроидов (от 9 до 53 кратной на 7-й день и от 36 до 143 кратной на день 21, Фиг. 48), однако в некоторых случаях пролиферация была подавлена относительно нередактированных контрольных клеток (14- 83% от нередактированного контроля на 7-й день и 18-95% от неотредактированного контроля на 21-й день) (Фиг. 48). Наименьшая пролиферация наблюдалась с клетками, отредактированными с помощью dgРНК, включая нацеливающий домен g8, нацеленный на экзон 2 BCL11A (30% от нередактированного контроля на 7-й день и 18% от нередактированного контроля на 21-й день) и со многими модифицированными OMePS sgРНКs (Фиг. 48).

Пример 5. Делеция при использовании двух gРНК нацеленных на область HPFH.

Первичные человеческие клетки CD34+HSPC были электропорированы с RNP, содержащим два разных молекулы gРНК, нацеленные на разные сайты в области HPFH. Для каждого RNP использовали молекулы dgРНК, как описано выше. Вкратце, RNP, содержащий dgРНК, нацеленную на первый сайт в области HPFH Френча и RNP, содержащий dgРНК, нацеленную на второй сайт в области HPFH Френча, объединяли и электропорировали в CD34+HSPCs в следующих соотношениях: 0,5X первая dgРНК RNP + 0,5X второй dgРНК RNP; 1,0X g2 dgРНК («g2»=положительный контроль, содержащий целевой домен CR000088, нацеленный на кодирующую последовательность гена BCL11a); без RNP («контроль»). Клетки культивировали, как описано выше, и дифференцировали в эритроциты с использованием протокола, описанного выше (см. Фиг. 17). Оценивалась экспрессия фетального гемоглобина. Результаты показаны на Фиг. 27 и Фиг.25. Не ограничиваясь теорией, считается, что одновременное введение RNP, содержащих молекулы gРНК нацеленные на две последовательности-мишени, приведет к делеции (т.е. удалению) ДНК между двумя разрывами по сайтам (например, всю или большую часть ДНК между двумя участками с внесёнными разрывами), включая любые регуляторные или кодирующие последовательности, содержащиеся в этом регионе. Эти результаты показывают, что RNP, нацеленные на два отдельных региона в области HPFH, могут быть доставлены одновременно в клетки CD34+ HSPC путем электропорации и индуцировать экспрессию фетального гемоглобина в отредактированных клетках, дифференцированных в эритроциты.

Таблица 25.

ID целевого домена gРНК 1/ID целевого домена gРНК 2	% HbF+ (F клеток), среднее по репликам
CR001016/CR001021	50,9
CR001021/CR001034	53,4
CR001034/CR001037	56,1
CR001037/CR001045	50,6
CR001045/CR001058	45,2
CR001058/CR001065	42,6
CR001065/CR001075	43,3
CR001075/CR001086	40,4
CR001086/CR001096	39,3
CR001096/CR001107	41,6
CR001107/CR001135	45,6
CR001143/CR001151	40,1
CR001151/CR001159	40,9
CR001159/CR001166	42,0
CR001166/CR001173	44,8
CR001173/CR001179	43,1
CR001179/CR001191	41,9
CR001191/CR001199	42,7
CR001199/CR001212	48,3
CR001212/CR001227	45,6
CR001016/CR001034	53,4
CR001034/CR001045	50,0
CR001045/CR001065	44,2
CR001065/CR001086	39,1
CR001086/CR001107	43,4
CR001107/CR001143	44,8
CR001143/CR001159	45,0
CR001159/CR001173	46,6
CR001173/CR001191	44,8
CR001191/CR001212	51,7
CR001021/CR001037	56,9
CR001037/CR001058	48,0
CR001058/CR001075	41,7
CR001075/CR001096	41,5
CR001096/CR001135	44,3
CR001135/CR001151	42,9
CR001151/CR001166	41,9
CR001166/CR001179	40,4
CR001179/CR001199	38,5
CR001199/CR001227	40,0
g2	54,0
контроль	34,5

Пример 6. Оценка возможного неспецифического редактирования для gРНКs, нацеленных на энхансер BCL11a

Метод анализа на основе инсерций олигонуклеотидов (см., например, Tsai et al. Nature Biotechnology, 33, 187-197, 2015) был использован для определения потенциальных неспецифических геномных сайтов, расщепляемых Cas9, нацеленной на энхансер BCL11a. В общей сложности 28 нацеливающих РНК (двойных нацеливающих РНК, содержащих указанный целевой домен), предназначенные для энхансера BCL11a и 10 gРНК, нацеленных на область HPFH, были скринированы в экспрессирующих Cas9 клетках HEK293, описанных выше, и результаты представлены на графиках Фиг. 33 (энхансер BCL11a) и Фиг. 49 (HPFH). Относительно gРНК, нацеленной на энхансер BCL11a, анализ идентифицировал потенциальные сайты с неспецифическими мишенями для некоторых нацеливающих молекул, однако многократное секвенирование целевых сайтов использовалось для того, чтобы понять, являются ли эти потенциальные сайты bona fide неспецифическими сайтами, расщепляемыми Cas9. Используя праймеры, фланкирующие потенциальные неспецифичные сайты, выделенную геномную ДНК амплифицировали и ампликоны секвенировали. Если потенциальный неспецифичный участок был расщеплен Cas9, на сайте должны быть обнаружены инделы. В этих последующих исследованиях потенциальных неспецифичных сайтов не было обнаружено инделов на потенциальных неспецифичных сайтов по меньшей мере для трех из нацеливающих gРНК: CR000311, CR000312, CR001128. Что касается gРНКs, нацеленных на энхансер BCL11a, анализ не выявил потенциальных неспецифичных сайтов по меньшей мере для gРНКs CR001137, CR001212 и CR001221. Многократное секвенирование последовательности ещё будет выполнено для определения того, являются ли потенциальные неспецифичные сайты, идентифицированные для других молекул gРНК, bona-fide неспецифичными сайтами, расщепляемыми Cas9.

Пример 7: Тестирование и оценка вариантов Cas9

Тестирование в CD34+ гематопоэтических стволовых клетках

Мы оценивали 14 очищенных Cas9 белков Streptococcus pyogenes (SPyCas9), измеряя их эффективность для нокаута гена бета-2-микроглобулина (B2M) в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека (HSCs). Эти белки были разделены на 3 группы: первая группа состояла из вариантов SPyCas9 с улучшенной селективностью (Slaymaker et al., 2015, Science 351: 84 (e1.0, e1.1 и K855A), Kleinstiver et al., 2016, Nature 529: 490 (HF)). Вторая группа состояла из дикого типа SPyCas9 с различным количеством копий и/или положениями сигнала ядерной локализации SV40 (NLS) и тега-хвоста из 6 или 8 гистидинов ((His6) или (His8) (SEQ ID NOS 2969 и 2970, соответственно)) с расщепляемым сайтом TEV или без него, и белка SPyCas9 с двумя цистеиновыми заменами (C80L, C574E), которые, как сообщается, стабилизируют Cas9 для структурных исследований (Nishimasu et al., 2014, Cell 156: 935). Третья группа состояла из одного и того же рекомбинантного SPyCas9, полученного различными способами (Фиг. 60). Нокаут B2M определялся FACS а также методом секвенирования следующего поколения (NGS).

Методы

Материалы

1. Аппарат для электропорации Neon (Invitrogen, MPK5000)

2. Набор для электропорации Neon (Invitrogen, MPK1025)

3. crРНК (последовательность целевого домена: GGCCACGGAGCGAGACAUCU (SEQ ID NO: 2811), комплементарная последовательности в гене B2M, слитая с SEQ ID NO: 6607)

4. tracrРНК (SEQ ID NO: 6660)

5. Буфер для хранения Cas9: 20 мМ Трис-Cl, pH 8,0, 200 мМ KCl, 10 мМ MgCl₂

6. CD34+HSC изолированные из костного мозга (Lonza, 2M-101C)

7. Среда для культивирования клеток (Stemcell Technologies, StemSpam SFEM II with StemSpam CC-100)

8. FACS буфер для промывки: 2% FCS в PBS

9. FACS блокирующий буфер: на мл PBS, добавляют 0,5 мкг мышиного IgG, 150 мкг Fc- блока, 20 мкл FCS

10. Суспензия 10% Chelex 100 (BioRad, Cat# 142-1253) in H₂O

11. Анти-B2M-антитело: Biolegend, Cat#316304

Технологический Процесс:

Разморозить и подрастить клетки в соответствии с рекомендациями Lonza, добавляя среду каждые 2-3 дня. На 5-й день клетки осаждить при 200g в течение 15 мин, один раз промыть PBS, ресуспендировать клетки с T-буфером из набора NEON до 2x10⁴/мкл, поставить на на лед. Разбавить белок Cas9 буфером для хранения Cas9 до 5 мг/мл. Довести crРНК и tracrРНК до 100 мкМ с H₂O.

Рибонуклеопротеиновый комплекс (RNP) получают при смешивании 0,8 мкл каждого белка CAS9, crРНК и tracrРНК с 0,6 мкл буфера для хранения Cas9, инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин. Далее-смешать 7 мкл HSC с комплексом RNP в течение двух минут и перенести все 10 мкл в капилляр-камеру пипетки Neon, провести электропорацию при 1700v, 20 мс и 1 импульсе. После электропорации немедленно перенести клетки в лунки 24-луночного планшета, содержащего 1 мл среды, предварительно отмеренной при 37^oC, 5% CO2. Собрать клетки через 72 часа после электропорации для проведения анализа FACS и NGS.

FACS: перенести 250 мкл клеток из каждой лунки 24-луночного планшета, в лунки 96-луночного планшета с U- округлым дном и осадить клетки. Промыть один раз с помощью 2% FCS (эмбриональная бычья сыворотка) в PBS. Добавить 50 мкл блокирующего буфера FACS к клеткам и инкубироывать на льду в течение 10 минут, добавить 1 мкл FITC-меченого B2M-антитела и инкубировать в течение 30 минут. Промыть клетки FACS буфером для промывки (150 мкл) один раз, а затем еще один раз с 200 мкл FACS буфера для промывки. Клетки ресуспендировать в 200 мкл FACS-буфера для FACS анализа.

Подготовка образцов NGS: перенести 250 мкл клеточной суспензии из каждой лунки 24-луночного планшета в 1,5-миллилитровую пробирку Эппендорфа, добавить 1 мл PBS и осадить клетки. Добавить 100 мкл суспензии Chelex, инкубировать при 99^oC в течение 8 минут и перемешать на вортексе 10 секунд, после чего инкубировать при 99^oC в течение 8 минут, перемешать на вортексе 10 секунд. Осадить гранулы суспензии центрифугированием при 10000×g в течение 3 минут и использовать супернатант-лизат для ПЦР. Взять 4 мкл лизата и провести реакцию ПЦР с праймерами b2m (b2mg67F: CAGACAGCAAACTCACCCAGT (SEQ ID NO: 2812), b2mg67R: CTGACGCTTATCGACGCCCT (SEQ ID NO: 2813)) с использованием набора Titanium (Clonetech, cat# 639208), следуя инструкциям производителя. ПЦР проводится при следующих условиях: 5 минут при 98^oC в течение 1 цикла; 15 секунд при 95^oC, 15 секунд при 62^oC и 1 минуту при 72^oC в течение 30 циклов; и, наконец, 3 минуты при 72^oC в течение 1 цикла. Продукты ПЦР используются для NGS.

Статистический анализ: процент клеток B2M KO, определённый путём FACS и процентное отношение инделов, определённое путём NGS, были использованы для оценки эффективности расщепления CAS 9. Эксперимент был разработан с использованием Cas9 как предиктора фиксированного эффекта. Результаты каждого эксперимента вложены в рамках «донора», в качестве вложенных случайных эффектов. Таким образом, для анализа данных FACS и NGS была применена смешанная линейная модель.

Результаты

Для нормализации экспериментальных и донорных вариаций, мы сопоставляли относительную активность каждого белка с белком iProt105026, спроектированным изначально с двумя SVL NLS, фланкирующими SPyCas9 дикого типа и хвостом-тегом His6 (SEQ ID NO: 2969) на С’-конце белка (Фиг. 34). Статистический анализ показывает, что по сравнению со стандартным белком Cas9 iProt105026, белки iProt106331, iProt106518, iProt106520 и iProt106521 существенно не отличаются по эффективности нокаута B2M в HSC, тогда как другие тестируемые варианты (PID426303, iProt106519, iProt106522, iProt106545, iProt106658, iProt106745, iProt106746, iProt106747, iProt106884) существенно отличаются от стандартного iProt105026 по эффективности нокаута B2M в HSC. Мы обнаружили, что перемещение хвоста His6 (SEQ ID NO: 2969) с C'-конца на N’-конец (iProt106520) не влияло на активность белка (Фиг. 34). Одной из NLS было достаточно для поддержания активности только тогда, когда она была помещена на С’-конец белка (iProt106521 по сравнению с iProt106522, Фиг.34). Белки, очищенные в соответствии с Процессом 1, имели более высокую эффективность нокаута, чем белки, очищенные в соответствии с Процессами 2 и 3 (iProt106331 по сравнению с iProt106545 & PID426303, Фиг.34). В общем, варианты SPyCas9 с улучшенной селективностью не были такими активными, как SPYCas9 дикого типа (iProt106745, iProt106746 и iProt106747, Фиг. 34). Интересно, что iProt106884 не расщеплял целевой сайт-мишень. Это согласуется с сообщением Kleinstiver и соавторов о том, что такая вариация не расщепляет до 20% легитимных целевых сайтов-мишений в клетках млекопитающих (Kleinstiver et al., 2016, Nature 529: 490). Наконец, вариант Cas9 с двумя цистеиновыми заменами (iProt106518) сохранял высокий уровень ферментативной активности (Фиг. 34).

Далее, эффективность редактирования c помощью RNP, содержащих различные варианты Cas9, тестировали либо с модифицированными, либо с немодифицированными gРНК, нацеленными на область +58 энхансера. Молекулы sgРНК, содержащие целевые домены cr00312 и cr1128, тестировали либо без модификаций (CR00312 = SEQ ID NO: 342; CR001128 = SEQ ID NO: 347), либо модифицированными (OMePS CR00312 = SEQ ID NO: 1762; OMePS CR001128 = SEQ ID NO: 1763), молекулы были предварительно введены в комплекс с вариантами Cas9, показанными в Таблице 35.

Таблица 35. Варианты белка Cas9, тестированные на биологическую функцию с молекулами gРНК, нацеленными на область +58.

iProt код	Конструкция
iProt106518	NLS-Cas9(C80L/C574E)-NLS-His6
iProt106331	NLS-Cas9-NLS-His6
iProt106745	NLS-Cas9(K855A)-NLS-His6
iProt106884	NLS-Cas9(HF)-NLS-His6

RNP, сформированный как описано выше, доставляли в клетки HSPC, как описано выше, и клетки оценивали на % редактирования (путём NGS) и % HbF индукции после дифференцировки эритроидов, как описано в этих примерах. Результаты показаны на Фиг. 42A (% редактирования) и на Фиг. 42B (индукция HbF). Результаты показывают, что варианты компонента Cas9 в тестируемых вариантах не влияют на эффективность редактирования генов как немодифицированных, так и модифицированных версий sgРНК CR00312 и CR001128, а также варианты Cas9 не влияют на способность эритроидных дифференцированных геном-отредактированных клеток продуцировать HbF.

Пример 8: Экспансия геном-отредактированных HSPC Ex Vivo и анализ редактирования в субпопуляциях HSPC.

Экспансия клеток перед редактированием генома

Человеческие клетки CD34+ костного мозга человека были приобретены в AllCells (Cat#ABM017F), или Lonza (Cat#2M-101C) и подрощены до фазы экспоненциального роста в течение 2-3 дней с использованием среды StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Cat#09650) с добавлением 50 нг/мл тромбопоэтина (Tpo, Peprotech, Cat#300-18), 50 нг/мл человеческого Flt3-лиганда (Flt-3L, Peprotech, Cat#300-19), 50 нг/мл фактора стволовых клеток человека (SCF, Peprotech; Cat#300-07), человеческого интерлейкина-6 (IL-6, Peprotech, Cat#200-06), 1% L-глутамина; 2% пенициллина/стрептомицина и Соединения 4 (0,75 мкМ).

Электропорация рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP), содержащих Cas9 и нацеливающую RNA, в клетки.

Рибонуклеопротеиновые комплексы (RNP), содержащие Cas9 и нацеливающие РНК, были получены непосредственно перед электропорацией. Для образования RNP с использованием двойных нацеливающих РНК, 3 мкг каждой из crРНК (в 2,24 мкл) и tracrРНК (в 1,25 мкл) сначала денатурировали при 95^oC в течение 2 мин в отдельных пробирках, а затем охлаждали до комнатной температуры. Для приготовления белка Cas9 7,3 мкг белка CAS9 (в 1,21 мкл) смешивали с 0,52 мкл буфера 5×CCE (20 мМ HEPES, 100 мМ KCL, 5 мМ MgCL2, 5% глицерина и свежеприведенного 1 мМ DTT). TracrРНК сначала смешивали с препаратом Cas9 и инкубировали при 37^oC в течение 5 мин. Затем сrРНК добавляли к комплексам TracrРНК/CAS9 и инкубировали в течение 5 мин при 37^oC. HSPC собирали путем центрифугирования при 200×g в течение 15 мин и ресуспендировали в T-буфере, предоставленным набором для электропорации Neon electroporation kit (Invitrogen; Cat#: MPK1096) до плотности клеток 2×10⁷/мл. RNP смешивали с 12 мкл клеток путем осторожного пипетирования вверх и вниз 3 раза. Для получения комплексов Cas9 с одиночной направляющей РНК (sgРНК), 2,25 мкг sgРНК (в 1,5 мкл) смешивали с 2,25 мкг белка Cas9 (в 3 мкл) и инкубировали при комнатной тепературе в течение 5 мин. Затем комплекс sgРНК/Cas9 смешивали с 10,5 мкл клеток 2×10⁷/мл путем осторожного пипетирования вверх и вниз несколько раз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетки (10 мкл) переносили в капилляр-камеру электропоратора Neon. Электропорацию проводили на аппарате Neon transfection system (Invitrogen; MPK5000S) с использованием 1700 вольт/20 миллисекунд и 1 импульса.

Экспансия клеток после редактирования генома.

После электропорации клетки переносили в 0,5 мл предварительно нагретой среды StemSpan SFEM, дополненной факторами роста, цитокинами и Соединением 4, как описано выше, и культивировали при 37^oC в течение 3 дней. После 10-дневной экспансии, за 3 дня до электропорации и через 7 дней после электропорации общее число клеток увеличилось в 2-7 раз по сравнению с численностью исходной культуры (Фиг. 35).

Подготовка геномной ДНК

Геномную ДНК получали из геном-отредактированных и нередактированныхо HSPC через 48 часов после электропорации. Клетки лизировали в 10 мМ Трис-HCl, pH 8,0; 0,05% SDS и 25 мкг/мл свежедобавленной протеиназой K и инкубировали при 37^oC в течение 1 часа с последующей дополнительной инкубацией при 85^oC в течение 15 мин дл инактивации протеиназы K.

T7E1 анализ

Для определения эффективности редактирования HSPC был проведен анализ T7E1. ПЦР проводили с использованием Phusion Hot Start II High-Fidelity kit (Thermo Scientific; Cat#: F-549L) по следующей программе: 98^oC 30 сек; 35 циклов 98^oC 5 сек; 68^oC для 20 мин, 72^oC для 30 сек; 72^oC в течение 5 мин. Использовали следующие праймеры: прямой праймер: 5’-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3’ (SEQ ID NO: 2814) и обратный праймер: 5’-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3’ (SEQ ID NO: 2815). Продукты ПЦР денатурировали и повторно отжигали, используя следующие условия: 95^oC в течение 5 мин, 95-85^oC при -2^oC/с, 85-25^oC при -0,1^oC/с, сохранение при 4^oC. После отжига 1 мкл чувствительной к гетеродуплексам нуклеазы T7 E1 (NEB, Cat#M0302L) добавляли в 10 мкл продукта ПЦР выше и дополнительно инкубировали при 37^oC в течение 15 минут для переваривания гетеродуплексов и полученные фрагменты ДНК анализировали с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Эффективность редактирования была количественно определена с помощью программного обеспечения ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/).

Подготовка ПЦР-продуктов для секвенирования следующего поколения (NGS)

Чтобы более точно определить эффективность редактирования и профили инсерций и делеций (инделы), продукты ПЦР подвергались секвенированию следующего поколения (NGS). ПЦР проводили в двух репликах с использованием набора Titanium Taq PCR kit (Clontech Laboratories; Cat#: 639210) со следующей программой циклов: 98^oC в течение 5 мин; 30 циклов 95^oC в течение 15 секунд, 68^oC в течение 15 секунд, 72^oC 1 мин; 72^oC в течение 7 мин. Использовались следующие праймеры: прямой праймер: 5’-AGCTCCAAACTCTCAAACCACAGGG-3’ (SEQ ID NO: 2816) и обратный праймер: 5’-TACAATTTTGGGAGTCCACACGGCA-3’ (SEQ ID NO: 2817). Продукты ПЦР анализировались с помощью электрофореза в 2% агарозном геле и подвергались многократному секвенированию.

Анализ эффективности редактирования в субпопуляциях гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток методом проточной цитометрии.

Клетки анализировали методом проточной цитометрии для характеристики эффективности редактирования в субпопуляциях стволовых и прогениторных клеток (HSPC). Частоты субпопуляций HSPC, включая CD34+ клетки, CD34+CD90+ клетки, CD34+CD90+ CD45RA-клетки и CD34+CD90+CD45RA-CD49f+ клетки, перед (48 часов культивирования) и после процедуры редактирования генома (10 дней культивирования, 3 дня после редактирования генома) определяли по выборочным аликвотам клеточных культур (Фиг. 36, Фиг. 37, Фиг. 38). Клетки инкубировали с анти-CD34 (BD Biosciences, Cat#555824), анти-CD38 (BD Biosciences, Cat#560677), анти-CD90 (BD Biosciences, Cat#555596), анти-CD45RA (BD Biosciences, Cat#563963), анти-CD49f (BD Biosciences, Cat#562582) в модифицированном буфере FACS, содержащем PBS, дополненном 0,5% BSA, 2 мМ EDTA, pH 7,4, при 4°C, в темноте в течение 30 мин. Жизнеспособность клеток определялась по 7ААД. Клетки промывали модифицированным буфером FACS, и многопараметрический (многоцветный) анализ FACS проводили на Fortessa (BD Biosciences). Результаты проточной цитометрии анализировали с использованием программного обеспечения Flowjo. Геном-отредактированные клетки, выращенные в присутствии Соединения 4 (только его одного), демонстрировали обнаруживаемые уровни всех субпопуляций клеток HSPC, включая CD34+, CD34+CD90+, CD34+CD90+ CD45RA- и CD34+CD90+ CD45RA-CD49f +, что указывает на то, что долгоживущие популяции HSC сохраняются в культуре клеток в присутствии Соединения 4 (только его одного) после редактирования генома (Фиг.38).

Через четыре часа после процедуры редактирования гена были отобраны аликвоты клеточных культур и клетки были сортированы по популяциям HSPC (CD34+, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 +, CD34+ CD38 + CD34+ CD38-, CD34+ CD38-CD45RA-, CD34+ CD38-CD45RA-CD90 + CD49f-, CD34+ CD38-CD45RA-CD90-CD49f- и CD34+ CD38-CD45RA-CD90-CD49f +) обработаны методами NGS для измерения эффективности редактирования (Таблица 28). Важно отметить, что все гематопоэтические субпопуляции, включая субпопуляции, обогащенные долгоживущими HSC популяциями, демонстрировали аналогичную высокую эффективность редактирования гена (> 95%). Эта высокая эффективность редактирования гена в долгоживущих HSC обладает значительным терапевтическим воздействием, поскольку эти клетки способны приживаться у пациентов в долгосрочной перспективе и поддерживать регенерацию множественных гематопоэтических линий клеток в течение всей жизни.

Таблица 28. Эффективность редактирования в каждой субпопуляции HSPC, определённая с помощью NGS.

gРНК	HSPC субпопуляции	Средний (%Инделов)
Dg CR00312	Всего (синглеты)	97,98%
	CD34+CD38-CD45RA-	98,66%
	CD34+CD38-CD45RA-CD90+CD49f-	98,19%
	CD34+CD38-CD45RA-CD90-CD49f-	98,70%
	CD34+CD38-CD45RA-CD90-CD49f+	98,81%
Dg CR001128	Всего (синглеты)	97,62%
	CD34+CD38-CD45RA-	95,93%
	CD34+CD38-CD45RA-CD90-CD49f-	98,00%
	CD34+CD38-CD45RA-CD90-CD49f+	99,01%

Пример 9 Оценка возможного неспецифичного редактирования

Культура HSPC и редактирование генома с помощью CRISPR/Cas9

Методы формирования RNP и операции с клетками приведены в примере 4 со следующими исключениями.

Культура клеток CD34+ человека. Клетки CD34+ человека были либо изолированы от G-CSF мобилизованной периферической крови взрослых доноров (AllCells, Кат. Номер mPB025-Reg.E) с использованием иммуно-магнитной сепарации (иммуноселекции) (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя или получены из костного мозга ((Hemacare Corporation, Cat. No. BM34C-3). Клетки CD34+ оттаивали и разгоняли/культивировали в течение 2 или 5 дней до доставки RNP. После доставки RNP клетки либо подращивали в течение дополнительных 13 дней в среде способствующей экспансии, либо культивировали в среде дифференцировки эритроидов в течение 7 или 11 дней следующим образом. В течение дней 0-7 культивирования в EDM дополнительно дополняли 1 мкМ гидрокортизона (Sigma H8672), 100 нг/мл человеческого SCF (Life Technologies, Cat.#PHC2113) и 5 нг/мл человеческого IL-3 (Peprotech#10779 -598). В течение 7-11 дней культивирования в EDM добавляли только 100 нг/мл человеческого SCF. По окончании периода культивирования клетки собирали для выделения и анализа геномной ДНК.

Сборка рибонуклеопротеиновых (RNP) комплексов, содержащих Cas9 и нацеливающие РНК, подготовка HSPC и электропорация RNP в HSPC. HSPC, собранные путем центрифугирования, ресуспендировали в P3 Primary Cell Solution (Lonza Cat#PBP3-00675). RNP смешивали с 20 мкл клеток путем пипетирования вверх и вниз и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 мин. Смесь RNP/клетки (20 мкл) подвергали электропорации с использованием кода CM-137 на нуклеофекторе 4D-Nucleofector (Lonza). Были использованы молекулы dgРНК, содержащие crРНК, имеющую последовательность NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2818), (где N обозначает остаток указанного нацеливающего домена) и tracr, имеющий последовательность SEQ ID NO: 6660.

Выделение геномной ДНК

Геномную ДНК выделяли из RNP обработанных и необработанных HSPC с использованием DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Cat # 69506) в соответствии с рекомендациями производителя.

In silico идентификация потенциальных неспецифичных локусов gРНК

Потенциальные неспецифичные локусы для молекул gРНК CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128, нацеленных на +58 область BCL11A и для молекул gРНК CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085, нацеленных на HPFH область, были определены следующим образом. Для каждойо gРНК, 20 нуклеотидная последовательность gРНК протоспейсера была приведена в соответствие со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием программы выравнивания последовательностей Bfast (version 0.6.4f, Homer et al, PLoS One, 2009, 4(11), e7767, PMID: 19907642) с использованием стандартных параметров, допускающих до 5 нуклеотидных гетеродуплексов. Из локусов определенных таким образом, были выделены те сайты, которые являются 5' прилегающими к Cas9 канонической 5'-NGG-3' PAM последовательности (т.е. 5'-неспецифичный сайт-PAM-3 '). При использовании протокола BEDTools (version 2.11.2, Quinlan and Hall, Bioinformatics, 2010 26(6):841-2, PMID: 20110278), сайты с 5 нуклеотидными несовпадениями были дополнительно отобраны в соответствии с аннотацией RefSeq ((Pruitt et al, Nucleic Acids Res., 2014 42(Database issue):D756-63, PMID: 24259432)), чтобы содержать только локусы, аннотированные как экзоны. Количество посчитанных потенциальных неспецифичных сайтов, идентифицированных для области BCL11A +58 и gРНК области HPFH представлены в Таблицах 1 и 2.

Таблица 29. Количество посчитанных in silico потенциальных неспецифичных сайтов, идентифицированных для молекул gРНКs BCL11A +58 CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128 с несоответствиями длиной 0, 1, 2, 3 и 4 нуклеотидов длиной и длиной в 5 нуклеотидов в пределах экзонов (RefSeq).

ID целевого домена gРНК	Количество неспецифических сайтов с N несоответствий
	0	1	2	3	4	5 RefSeq экзоны	Всего сайтов
CR00309	0	0	2	9	77	52	140
CR00311	0	0	3	13	213	38	267
CR00312	0	0	0	6	126	33	165
CR00316	0	0	0	22	234	90	346
CR001125	0	0	1	16	221	83	321
CR001126	0	0	2	26	235	86	349
CR001127	0	0	1	35	331	157	524
CR001128	0	0	0	9	156	42	207

Таблица 30. Количество посчитанных in silico потенциальных неспецифических сайтов, идентифицированных для молекул gРНКs HPFH, CRR101028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085 с несоответствиями 0, 1, 2, 3 и 4 нуклеотидов длиной и длиной в 5 нуклеотидов в пределах экзонов (RefSeq)

ID целевого домена gРНК	Количество неспецифических сайтов с N несогласований
	0	1	2	3	4	5 RefSeq экзоны	Всего сайтов
CR001028	0	0	1	11	154	67	233
CR001030	0	0	0	14	125	85	224
CR001137	0	0	1	6	85	21	113
CR001221	0	0	2	17	166	44	229
CR003035	0	0	4	10	158	77	249
CR003085	0	0	0	5	75	16	96

Выбор ПЦР-праймеров для целенаправленного усиления амплификации потенциальных неспецифических сайтов

ПЦР-ампликоны потенциальных неспецифичных локусов (и целевых локусов-мишеней), идентифицированные для gРНК области +58 BCL11A (CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128) и gРНК области HPFH (CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085) были выбраны с использованием Primer3 (версия 2.3.6, Untergasser et al., Nucleic Acids Res., 2012 40 (15): e115, PMID: 22730293) с использованием параметров по умолчанию, таких, чтобы размер ампликона находился в диапазоне приблизительно 160-300 пар оснований длиной и при этом последовательность протоспейсера в gРНК была расположенна в центре ампликона. Для gРНК CR001127 подбор ПЦР-праймеров проводился только для сайтов с несоответствиями в 0-4 нуклеотидов, а для сайтов с 5 нуклеотидными несоответствиями в экзонах RefSeq подбор праймеров не проводился. Полученные парные праймеры ПЦР и последовательности ампликонов были проверены на уникальность с помощью BLAST (version 2.2.19, Altschul et al, J Mol Biol., 1990, 215(3):403-10, PMID: 2231712) при сравнении последовательностей со стандартной последовательностью генома чеовека (стандарт GRCh38). Пары праймеров, приводящие к более чем одной последовательности ампликона, были отброшены и праймеры подбирались заново. В Таблицах 3 и 5 показано количество подобранных пар праймеров ПЦР, предназначенных для области +58 BCL11A и области HPFH соответственно.

Illumina-секвенирование: подготовка, упорядочивание и секвенирование библиотеки с помощью генетического анализатора Illumina.

Геномную ДНК из обработанных RNP (2 реплики на 1 gРНК) и необработанных (1 реплика на 1 gРНК) клеток HSPC квантифицировали с использованием набора Quant-iT PicoGreen dsDNA kit (Thermo Fisher, Cat # P7581) в соответствии с инструкциями производителя. Библиотеки Illumina (секвенирование синтезом), предназначенные для отдельных неспецифических локусов (и целевых локусов-мишеней), были сделаны для каждого образца с использованием двух последовательных реакций ПЦР. Первая ПЦР амплифицировала целевой локус с использованием целевых специфических ПЦР-праймеров (разработанных выше), которые были слиты с совместимыми универсальными последовательностями секвенирования Illumina. Вторая ПЦР добавляла дополнительные, совместимые с секвенированием, последовательности Illumina, включающие штрих-коды образцов для обеспечения мультиплексирования во время секвенирования, к ампликонам первой ПЦР. ПЦР-1 проводили в конечном объеме 10 мкл, причём каждая реакция содержала 3-6 нг gДНК (что эквивалентно приблизительно 500-1000 клеткам), пары праймеров ПЦР 1 (Integrated DNA Technologies) при конечной концентрации 0,25 мкМ и 1х конечной концентрации Q5 Hot Start Master Mix (New England BioLabs, Cat # 102500-140). В ПЦР-1 левые праймеры имели 5'-хвост (т.е. 5'-хвост-целевой специфический левый праймер-3’) в виде последовательности 5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’ (SEQ ID NO: 2819), а правые праймеры имели 5'-хвост (т.е. 5'-хвост-целевой специфичный правый праймер -3') в виде последовательностью 5’- GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3’ (SEQ ID NO: 2820). ПЦР 1 проводили на термоциклере, используя следующую программу: 1 цикл 98^oC в течение 1 мин; 25 циклов 98^oC в течение 10 секунд, 63^oC в течение 20 секунд и 72^oC в течение 30 секунд; 1 при 72^oC в течение 2 мин. ПЦР 1 затем разбавляли 1:100 с использованием свободной от нуклеазы воды (Ambion, Cat#AM9932) и использовали как матрицу для ПЦР 2. ПЦР 2 выполняли в конечном объеме 10 мкл для каждой реакции, содержащей 2 мкл разбавленного продукта ПЦР 1, пары праймеров для ПЦР 2 ((Integrated DNA Technologies) при конечной концентрации 0,5 мкМ и 1х конечной концентрации Q5 Hot Start Master Mix (New England BioLabs, Cat # 102500-140). ПЦР-2 последовательность левого праймера была 5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNNTCGTCGGCAGCGTC-3’ (SEQ ID NO: 2821), а используемая последовательность правого праймера ПЦР-2 представляла собой 5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNNNGTCTCGTGGGCTCGG-3’ (SEQ ID NO: 2822), где NNNNNNNN обозначает последовательность нуклеотидных штрих-кодов, используемую для мультиплексирования образца, как часть стандартного процесса секвенирования Illumina. ПЦР 2 проводили на термоциклере, используя следующую программу циклов: 1 цикл 72^oC в течение 3 мин; 1 цикл 98^oC в течение 2 мин; 15 циклов 98^oC в течение 10 секунд, 63^oC в течение 30 секунд и 72^oC в течение 2 мин. ПЦР-2-ампликоны, а ныне жизнеспособные библиотеки секвенирования Illumina, были очищены с использованием гранул Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, Cat # A63882) в соответствии с рекомендациями производителя. Затем очищенные библиотеки секвенирования Illumina квантифицировали путём стандартных методов количественного определения qПЦР с использованием Power SYBR Green PCR master mix (Life Technologies, Cat#4367660) и праймеров, специфичных к концам (последовательностей) библиотеки секвенирования Illumina (последовательность прямого праймера: 5’- CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’ (SEQ ID NO: 2823) и обратного праймера: 5’-AATGATACGGCGACCACCGAGA-3’ (SEQ ID NO: 2824)). Библиотеки секвенирования последовательности Illumina затем объединяли эквимолярно и подвергали секвенированию Illumina на секвенаторе MiSeq ((Illumina, Cat # SY-410-1003) со считываниями в 300 нуклеотидных пар при использованием набора реагентов MiSeq Reagent Kit v3 (Illumina, Cat # MS-102-3003), следуя рекомендациям производителя. Как минимум, 1000-кратное покрытие последовательности было сделано для каждого локуса по меньшей мере в одной обработанной реплике. ПЦР, очистку, объединение и секвенирование обработанных (отредактированных) и необработанных (нередактированных) образцов проводили отдельно, чтобы избежать любой возможности перекрестного загрязнения между обработанными и необработанными образцами или ампликонами ПЦР, полученными из них.

QC-данные секвенирования Illumina и вариационный анализ.

Используя параметры по умолчанию и программное обеспечение анализа Illumina MiSeq (MiSeq reporter, version 2.6.2, Illumina) для создания ампликон-специфичных FASTQ файлов данных секвенирования (Cock et al, Nucleic Acids Res. 2010, 38(6):1767-71, PMID: 20015970). Затем FASTQ файлы обрабатывались с помощью разработанного в лаборатории вариационного анализа, состоящего из ряда пакетов программного обеспечения общего пользования, объединенных вместе с использованием стандартной оболочки скрипта Perl. Используемый рабочий процесс был разделен на пять этапов.

Этап 1, PCR-праймер и специфичные и неспецифичные последовательности QC:

Для обоих типов сайтов, как целевых сайтов-мишеней, так и для неспецифичных сайтов, 20-нуклеотидная последовательность протоспейсера gРНК плюс последовательность PAM и целевые специфические последовательности праймеров PCR (левого и правого, без дополнительных последовательностей Illumina) были выровнены со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием программы поиска BLAST ((version 2.2.29+, Altschul et al, J Mol Biol., 1990, 215(3):403-10, PMID: 2231712). Были помечены сайты (как целевые, так и неспецифичные) имеющие множественные локазизации в геноме.

Этап 2, декомпрессия файла секвенсера

Файлы секвенирования FASTQ.GZ, сгенерированные Illumina, были распакованы в файлы FASTQ с использованием gzip-скрипта (version 1.3.12), и рассчитано количество считываний на файл. Файлы без считываний были исключены из дальнейшего анализа.

Этап 3, выравнивание последовательности и качественная обработка.

Считывания секвенирования файлов FASTQ были выровнены со стандартной последовательностью генома человека (стандарт GRCh38) с использованием алгоритма выравнивателя BWA-MEM (version 0.7.4-r385, Li and Durbin, Bioinformatics, 2009, 25(14):1754-60, PMID: 19451168) с использованием «жесткого отсечения» для удаления считываний 3’-концевых дополнительных последовательностей Illumina и низкокачественных оснований. Полученные выровненные считывания в формате файла BAM Li et al, Bioinformatics, 2009 25(16):2078-9, PMID: 19505943), были преобразованы в файлы FASTQ с использованием скрипта SAMtools (version 0.1.19-44428cd, Li et al, Bioinformatics, 2009 25(16):2078-9, PMID). Затем файлы FASTQ были снова выровнены по стандартной последовательности генома человека (стандарт GRCh38) с помощью алгоритма выравнивателя BWA-MEM, на этот раз без «жесткого отсечения».

Этап 4, вариационный анализ (SNP (снипов) и инделов)).

Файлы BAM выровненных считваний обрабатывались с использованием VarDict variant caller (version 1.0 ‘Cas9 aware’ modified by developer ZhangWu Lia, Lai et al, Nucleic Acids Res., 2016, 44(11): e108, PMID: 27060149) с пределом обнаружения частоты аллеля, установленным при >=0,0001 для определения вариантов снипов(SNP) и инделов. Cas9 aware VarDict caller основан на пакете паблик-домена, но способен перемещать неоднозначные варианты, возникающие из-за повторяющихся последовательностей в области выравнивания в различных вариантах событий, к потенциальному месту разреза нуклеазы Cas9 в последовательности протоспейсера gРНК, расположенного в 3нп от 5'последовательности PAM. Скрипт SAMtools использовался для вычисления охвата считывания на образец ампликона для определения того, были ли целевые и неспецифичные сайты представлены 1000-кратной отсеквенированной последовательностью. Были отмечены сайты с <1000-кратным охватом.

Этап 5, dbSNP-фильтрация и дифференциальный анализ обработанных/необработанных образцов.

Из идентифицированных вариантов были отобраны известные варианты снипов(SNP) и инделов, представленные в dbSNP (build 142, Shery et al, Nucleic Acids Res. 2001, 29(1):308-11, PMID: 11125122). Варианты обработанных образцов дополнительно фильтровали, чтобы исключить: 1) варианты, идентифицированные в необработанных контрольных образцах; 2) варианты VarDict strand bias of 2:1 (где количество прямых и обратных считываний по стандартной последовательности сбалансировано, но несбалансировано для нестандартной); 3) варианты, расположенные за пределами окна 100bp по обе стороны потенциального участка расщепления Cas9; 4) одиночные нуклеотидные варианты в пределах 100нп «окошка» от потенциального участка расщепления Cas9. Наконец, были рассмотрены только сайты с комбинированной частотой индела >2% (редактирование произошло более чем в 10-20 клетках) в пределах 100нп “окошка” от потенциального участка срасщепления Cas9. Потенциальные активные сайты редактирования были дополнительно исследованы при выравнивании считываний с помощью программы Integrative Genome Viewer (IGV version 2.3, Robinson et al, Nat Biotechnol. 2011, 9(1):24-6, PMID: 21221095), которая позволяет осуществлять визуальный контроль выравнивания считываний по стандартной последовательности генома.

Результаты анализов целевых и неспецифичных сайтов. Для целевых сайтов gРНК, нацеленных на область +58 BCL11A и область HPFH показано надёжное редактирование на предполагаемом участке расщепления среза Cas9 в обработанных образцах с частотой образования инделов, превышающей 88% для всех gРНК. В Таблицах 3 и 5 показано количество неспецифичных сайтов, характеризующихся, по меньшей мере, одной биологической репликой. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке.

Результаты анализа in silico целевых сайтов для области +58 BCL11A.

gРНК CR00309: На целевом сайте для gРНК CR00309 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 92%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало четыре неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 18%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CtCaCCtCCACCCTAATCAG-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2825)) и находится в интроне 1 гена аноктамина 5 (ANO5), на хромосоме 11 в положении 22,195,800-22,195,819 нп, примерно на 2,3 килобаз от экзона 1. Участок 2 имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 18%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера gРНК (5’- CACGCCCaCACCtTAATCAG -PAM-3’, PAM = GGG(SEQ ID NO: 2826)) и находится в межгенной области хромосомы 12 в позиции 3,311,901-3,311,926 нп. Участок 3 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 80%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CACGaCCCaACCCTAATCAG-PAM-3’, PAM=AGG (SEQ ID NO: 2827)) и находится в GenBank (Clark et al., Nucleic Acids Res. 2016 Jan 4; 44(Database issue): D67-D72, PMID: 26590407) (BC012501, не аннотированный в RefSeq) на хромосоме 1 в позиции 236,065,415-236,065,434 нп. Участок 4 имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 2%, имеет 4 несоответствия относительно последовательности протоспасера gРНК (5’-CtaGCCCCtACCCTAATaAG- PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2828)) и расположен в интроне 1 аннотированной последовательности GenBank, называемого полихомеотическим белком 2 (не аннотированный в RefSeq) на хромосоме 1 в позиции 33, 412, 659-33, 412, 678 нп.

gРНК CR00311: На целевом сайте для gРНК gРНК CR00311 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 95%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

gРНК CR000312: На целевом сайте для gРНК gРНК CR00012 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 98%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

РНК CR000316: На целевом сайте для gРНК gРНК CR000316 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%, однако большинство из неспецифичных сайтов еще предстоит охарактеризовать.

gРНК CR001125: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001125 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

gРНК CR001126: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001126 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 92%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Первый сайт имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’-TTTATaACAGGCTCCAGaAA -PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2829)) и расположен в межгенной области на хромосоме 4 в позиции 35,881,815-35,881,834 нп, примерно на 9,5 килобаз от ближайшего транскрипта GenBank (не аннотированного в RefSeq). Второй сайт имеет среднюю частоту инделов, составляющую приблизительно 1.7%, имеет 4 несоответствия относительно последовательности протоспейсера gРНК (5’ caTATCACAGGCcCCAGGAg -PAM-3’, PAM = GGG (SEQ ID NO: 2830)) и находится в интроне 6 гена аиаксина 1 (ATXN1), на хромосоме 6 в позиции 16519907-16519926 нп, примерно на 2,7 килобаз от экзона 6.

gРНК CR001127: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001127 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 97%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

gРНК CR001128: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001128 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 94%. В Таблице 31 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

Ручная проверка всех идентифицированных неспецифичных сайтов при активном редактировании области +58 BCL11 показала типичные профили инделов, окружающие предполагаемый участок расщепления Cas9, типичный для репарации путём негомологичного соединения концов, опосредованной двуцепочным разрывом опоры, вносимым Cas9. Остаётся неясным, оказывает ли редактирование на идентифицированных сайтах негативное воздействие на экспрессию генов или жизнеспособность клеток, для чего необходим дальнейший анализ.

Таблица 31. Количество in silico идентифицированных неспецифичных сайтов, хорошо охарактеризованных по меньшей мере в одний обработанной репликате и сайтов, демонстрирующих редактирование по области +58 BCL11A молекулами gРНК CR00309, CR00311, CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128. *-означает, что были исследованы только сайты с 0-4 нуклеотидными несоответствиями.

gРНК	Общее количество неспецифичных сайтов in silico	Количество охарактеризованных сайтов in silico	Количество активных неспецифичных сайтов обнаруженных in silico
CR00309	141	140	4
CR00311	267	245	0
CR00312	165	163	0
CR00316	346	TBD	TBD
CR001125	321	319	0
CR001126	349	348	2
CR001127*	367	365	0
CR001128	207	194	0

Результаты проверки неспецифичных сайтов расщепления при редактировании области +58 BCL11A с помощью GUIDE-Seq

Потенциальные неспецифичные сайты расщепления, представленные в GUIDE-seq (Tsai et al, Nat Biotechnol. 2015, 33(2):187-97, PMID: 25513782), были охарактеризованы в RNP-обработанных и необработанных HSPC с использованием методов секвенирования сайтов, описанных выше для for in silico найденных сайтов. С помощью GUIDE-seq выявлены потенциально возможные сайты расщепления для gРНКs CR00312, CR00316, CR001125, CR001126, CR001127 и CR001128. Для gРНК CR00311 и CR001128 не было обнаружено потенциальных сайтов расщепления. Когда потенциальные сайты расщепления были исследованы в HSPC с использованием целенаправленного секвенирования, ни один из потенциальных сайтов расщепления не был обнаружен в обработанных HSPC для gРНК CR00312, CR001125 и CR001127. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный для gРНК CR001126, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в интроне 6 ATXN1 (хромосома 6: 16 519 907-16 519 926 нп). Подтверждение потенциальных сайтов расщепления для gРНКs CR00309 и CR00316 все еще продолжается.

Результаты анализа in silico целевых сайтов для области HPFH.

gRNA CR001028: На целевом сайте для gРНК CR001028 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 91%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп «окошка» от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2.8%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’- TGgGGTGGGGAGATATGaAG -PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2831)) и расположен в интроне 2 некодирующей РНК (LF330410, не аннотированной в RefSeq), расположенный на хромосоме 4 в позиции 58,169,308-58,169,327 нп. Сайт 2 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 3,5%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’- gGaGGTGGGGAGAgATGTAG-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2832)) и находится в интроне 1 члена A2, субсемейства 3 бутирофилина (BTN3A2), расположенного на хромосоме 6 в позиции 26,367,733-26,366,752 нп, приблизительно 1,3 килобаз от экзона 2.

gРНК CR001030: На целевом сайте для gРНК CR001030 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 89%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов на сегодняшний день был идентифицирован один неспецифичный сайт со средней частотой инделов 57% в пределах 100 нп «окошка» от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Сайт имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’-caTGCgGAAAGAGATGCGGT-PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2833)) и расположен в экзоне 4 гена 3 пируватдегидрогеназного комплекса (PDK3), расположенном на Х-хромосоме в позиции 24,503,476-24,503,495 нп.

gРНК CR001137: на целевом сайте для gРНК CR0001037 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов около 84%. В Таблице 32 показано, что количество неспецифичных сайтов успешно характеризуется. Нехарактерные сайты не удались в конструкции праймера ПЦР или амплификации ПЦР и остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день не наблюдалась значительная нецелевая активность на исследуемых участках.

gРНК CR001221: На целевом сайте для gРНК gРНК CR001121 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 95%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. На сегодняшний день значительная неспецифичная активность на исследуемых участках не наблюдалась.

gРНК CR003035: На целевом сайте для gРНК CR003035 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 89%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов было идентифицировало два неспецифичных сайта в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 e в обоих обработанных репликах. Сайт 1 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 20%, имеет 2 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’- AGGtACCTCAaACTCAGCAT-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2834)) и расположен в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 66,281,781-66,281,800 нп и составляет приблизительно 7,1 килобаз от ближайшего транскрипта (JD432564, не аннотированного в RefSeq). Сайт 2 имеет среднюю частоту инделов приблизительно 2,5%, имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспасера целевой gРНК (5’-AGagACCcCAGACTCAGCAT-PAM-3’, PAM = AGG (SEQ ID NO: 2835)) и находится в межгенной области на хромосоме 10 в позиции 42,997,289-42,997,308 нп, что составляет приблизительно 0,3 килобаз от MicroRNA 5100 (MIR5100).

gРНК CR003085: На целевом сайте для gРНК CR003085 показано надежное редактирование на предполагаемом участке расщепления Cas9 со средней частотой инделов приблизительно 94%. В Таблице 32 показано количество успешно охарактеризованных неспецифичных сайтов. Неохарактеризованные сайты, к которым не удалось подобрать ПЦР-праймеры, не проведено ПЦР-амплификации остаются в дальнейшей разработке. При характеристике потенциальных неспецифичных сайтов на сегодняшний день был идентифицирован один неспецифичный сайт со средней частотой инделов 2% в пределах 100нп “окошка” от предполагаемого сайта расщепления Cas9 в обоих обработанных репликах. Сайт имеет 3 несоответствия относительно последовательности протоспейсера целевой gРНК (5’-ATGGTATGaGAaaTATACTA-PAM-3’, PAM = TGG (SEQ ID NO: 2836)) и расположен в интроне 2 гена-члена 12 семейства 25 переносчиков (транспортеров) растворов (Solute Carrier Family 25 (SLC25A12), расположенного на хромосоме 2 в позиции 171,872,630-171,872,649 нп, что составляет примерно 3,8 килобаз от экзона. 3.

Ручная проверка всех идентифицированных неспецифичных сайтов при активном редактировании области HPFH показала типичные профили инделов, окружающие предполагаемый участок расщепления Cas9, типичный для репарации путём негомологичного соединения концов, опосредованной двуцепочным разрывом, вносимым Cas9. Остаётся неясным, оказает ли редактирование на идентифицированных сайтах негативное воздействие на экспрессию генов или жизнеспособность клеток, для чего необходим дальнейший анализ.

Таблица 32. Количество in silico идентифицированных неспецифичных сайтов, которые успешно характеризующиеся, по меньшей мере, в одний обработанной репликате и сайтов, демонстрирующих редактирование по области HPFH молекулами gРНК CR001028, CR001030, CR001137, CR001221, CR003035 и CR003085.

gРНК	Общее кол-во неспецифических сайтов in silico	Количество охарактеризованных сайтов in silico	Количество активных неспецифических сайтов обнаруженных in silico
CR001028	233	217	2
CR001030	224	219	1
CR001137	113	109	0
CR001221	229	224	0
CR003035	249	243	2
CR003085	96	95	1

Результаты проверки неспецифичных сайтов расщепления при редактировании области HPFH с помощью GUIDE-Seq

Потенциальные неспецифичные сайты расщепления, представленные в GUIDE-seq (Tsai et al, Nat Biotechnol. 2015, 33(2):187-97, PMID: 25513782), были охарактеризованы в RNP-обработанных и необработанных HSPC с использованием методов секвенирования сайтов, описанных выше для in silico найденных сайтов. С помощью GUIDE-seq выявлены потенциально возможные сайты расщепления для gРНКs CR001028, CR001030, CR003035 и CR003085 (на сегодняшний день). Для gРНК CR001137 и CR001221 не было обнаружено потенциальных сайтов расщепления на сегодняшний день. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001028, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico на хромосоме 4 в позиции 58,169,308-58,169,327 нп). Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001030, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в экзоне 4 гена ПДК-3 (PDK3). Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001035, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 66,281,781-66,281,800 нп. Один потенциальный сайт расщепления, подтвержденный в HSPC для gРНК CR001085, был именно тем сайтом, идентифицированным методом in silico в межгенной области на хромосоме 2 в позиции 171,872,630-171,872,649 нп.

Анализ целевых сайтов для выявления эффективности редактирования gРНК.

ПЦР-ампликоны, соответствующие сайтам-мишеням gРНК, очищали с использованием гранул Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, Cat # A63882) в соответствии с рекомендациями изготовителя. Образцы квантифицировали с использованием набора Quant-iT PicoGreen dsDNA kit (Thermo Fisher, Cat # P7581) в соответствии с рекомендаций производителя. Ампликоны были преобразованы в библиотеки секвенирования Illumina с использованием набора для подготовки библиотеки ДНК Nextera DNA Library Preparation Kit (Illumina, Cat# FC-121-1031) в соответствии с рекомендациями производителя. Результирующие библиотеки последовательности были очищены AMPure, обработаны qPCR, объединены и секвенированы с помощью аппарата Illumina MiSeq, при использовании спаренных концевых фрагментов длиной в 150 нп (Illumina, Cat#MS-102-2002) или в 250 нп (Illumina, Cat#MS-102-2003), как описано в разделе анализа неспецифичных сайтов. Каждая библиотека была создана при, как минимум, 1000-кратном секвенировании, и варианты были выбраны с использованием серии разработанных нами алгоритмов. Короче говоря, данные секвенирования, охватывающие окно 80-100 нуклеотидных пар, с центром в последовательности gРНК, были идентифицированы с использованием поиска последовательности путём использования SAM-алгоритма (a string-based search algorithm), сравнены с последовательностью ампликона, сортированы по различию последовательностей и была подсчитана частота вариантов. Дополнительно, отсеквенированные последовательности были выровнены с последовательностью ампликона, используя программное обеспечение Illumina MiSeq reporter (Illumina version 2.6.1), и полученные выровненные последовательности были исследованы с использованием Integrative Genome Viewer (IGV version 2.3, Robinson et al, Nat Biotechnol. 2011, 9(1):24-6, PMID: 21221095).

Пример 10: Оценка (влияния) концентрации RNP на редактирование генома и индукцию HbF.

Анализ разведения RNP для определения оптимальной концентрации RNP для редактирования генома

Редактирование гена проводили с использованием серийного разведения концентраций Cas9 (iProt: 106331) и нацеливающих рибонуклеопротеиновых комплексов (RNP) (Таблица 33). Различные используемые gРНК, их форматы и модификации, применяемые в этом исследовании, перечислены в Таблице 34.

Таблица 33: Разбавление RNP, используемое для исследования влияния концентрации RNP на редактирование генов и индукцию HbF.

gРНК формат	RNP Компоненты	Концентрация RNP RNP-1	Концентрация RNP RNP-2	Концентрация RNP RNP-3	Концентрация RNP RNP-4	Концентрация RNP RNP-5
Одиночная gРНК	crRNA(мкг)	3	1,5	0,75	0,37	0,18
	Cas9((мкг)	3	1,5	0,75	0,37	0,18
	RNP(мкM)	1,94	0,97	0,48	0,24	0,12
Двойная gRNA	crRNA(мкг)	3,86	1,93	0,97	0,48	0,24
	tracrRNA(мкг)	3,86	1,93	0,97	0,48	0,24
	Cas9(мкг)	3,86	1,93	0,97	0,48	0,24
	RNP(мкM)	5,89	2,94	1,47	0,74	0,37

Таблица 34: Список молекул gРНКs, в формате одиночной или двойной нацеливающей РНК, с или без химической модификации, используемых в исследовании RNP разбавления. «OMePS» модификация по отношению к формату dgРНК, относится к модифицированным crРНК, имеющим следующую структуру: mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUU*mU*mU*mG (SEQ ID NO: 2837) в паре с немодифицированным tracr (т.е. tracrРНК) имеющим SEQ ID NO: 6660; и, по отношению к sgРНК, относится к gРНК, имеющей следующую структуру: mN*mN*mN*NNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCmU*mU*mU*U (SEQ ID NO: 2838), где N=нуклеотид нацеливающего домена, mN относится к 2'-ОМе-модифицированному нуклеотиду, и * относится к фосфоротиоатной связи. «Немодифицированная» обозначает gРНК, не имеющую каких-либо изменений РНК: dgРНК состоят из NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG (SEQ ID NO: 2839) в паре с SEQ ID NO: 6660; sgРНК относится к NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU (SEQ ID NO: 2840), где N=нуклеотиды указанного нацеливающего домена.

gРНК Формат	ID образца	ID целевого домена gРНК	gРНК модификации
Двойная gRNA	1	CR00312	Немодифицированная
	2	CR001128	Немодифицированная
	3	CR00312	OMePS
	4	CR001128	OMePS
Одиночная gRNA	5	CR00312	Немодифицированная
	6	CR001128	Немодифицированная
	7	CR00312	OMePS
	8	CR001128	OMePS
	9	Mock контроль электропорации	N/A

CD34+ клетки электропорировали, как описано ранее, и измеряли жизнеспособность клеток, эффективность редактирования генов и способность продуцировать HbF. При оценке жизнеспособности клеток результаты показали, что различная концентрация RNP не влияла на жизнеспособность клеток при электропорации при использовании любого формата, с одиночной или двойной нацеливающей РНК (Фиг.39A и Фиг.39B). При редактировании генов CD34+ клеток данные NGS показали, что концентрации RNP не ниже 1,47 мкМ обеспечивают максимальный % эффективности редактирования гена для неумодифицированных CR00312 и CR001128 и модифицированного CR00312, тогда как максимальный % эффективности редактирования гена для модифицированной CR001228 был достигнут при концентрациях RNP как минимум 2,94 мкМ (Фиг. 40А). Для форматов sgРНК все тестируемые gРНК достигали максимального % редактирования при концентрациях RNP не ниже 0,48 мкМ (Фиг. 40B). При изменении способности отредактированных генов клеток дифференцироваться в эритроидную линию и продуцировать HbF, наши данные показали, что концентрация RNP не ниже 2,94 мкМ для dgРНК-содержащего RNP (Фиг. 41A) и не ниже 0,97 мкМ для sgРНК-содержащего RNP (Фиг. 41B) приводят к максимальным уровням индукции HbF.

Эта заявка подается со списками последовательностей. При наличии расхождений между списками последовательностей и любой последовательностью, указанной в спецификации, последовательность, указанная в спецификации, должна считаться правильной последовательностью. Если не указано иначе, все геномные местоположения обозначены в соответствии с hg38.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

Все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые здесь, включены в настоящее описание посредстом ссылки во всей их полноте, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка были специально и индивидуально указаны для включения в качестве ссылки. В случае конфликта настоящая заявка, включая любые определения в настоящем документе, должна считаться приоритетной.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

Специалисты в данной области техники распознают или будут способны осуществить, используя не более чем обычные эксперименты, многие варианты конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных здесь. Хотя настоящее изобретение раскрыто со ссылкой на конкретные аспекты, очевидно, что другие аспекты и варианты настоящего изобретения могут быть разработаны другими специалистами в данной области техники без отхода от истинной сущности и объема изобретения. Прилагаемая формула изобретения должна толковаться как включающая все подобные аспекты и эквивалентные варианты.

--->

СПИСКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> НОВАРТИС АГ

ИНТЕЛЛИЯ ТЕРАПЮТИК, ИНК.

<120> КОМПОЗИЦИИ И МЕТОДЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНОПАТИЙ

<130> PAT057179-WO-PCT

<140> PCT/IB2016/058007

<141> 2016-12-26

<150> 62/347,484

<151> 2016-06-08

<150> 62/271,968

<151> 2015-12-28

<160> 7831

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1

acaggccgug aaccuaagug 20

<210> 2

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2

uagagggggg aaauuauagg 20

<210> 3

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 3

cgagcgguaa auccuaaaga 20

<210> 4

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 4

agacaaauuc aaauccugca 20

<210> 5

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 5

gcuuuuggug gcuaccaugc 20

<210> 6

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6

aauuuaugcc aucugauaag 20

<210> 7

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7

uguuccuccu acccacccga 20

<210> 8

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 8

auaaauguug gagcuuuagg 20

<210> 9

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 9

caaccuaauu accuguauug 20

<210> 10

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 10

cgcugucaug agugaugccc 20

<210> 11

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 11

ggcaucacuc augacagcga 20

<210> 12

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 12

agucccauag agagggcccg 20

<210> 13

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 13

acugauucac uguuccaaug 20

<210> 14

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 14

aggacucugu cuucgcacaa 20

<210> 15

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 15

ccacgcugac gucgacuggg 20

<210> 16

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 16

guucuucaca cacccccauu 20

<210> 17

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 17

gcgcuucucc acaccgcccg 20

<210> 18

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 18

gucuggaguc uccgaagcua 20

<210> 19

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 19

aaagaucccu uccuuagcuu 20

<210> 20

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 20

ucgccggcua cgcggccucc 20

<210> 21

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 21

cggagaacgu guacucgcag 20

<210> 22

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 22

gagcuugaug cgcuuagaga 20

<210> 23

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 23

ccccccgagg ccgacucgcc 20

<210> 24

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 24

caccaugccc ugcaugacgu 20

<210> 25

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 25

gagagcgaga ggguggacua 20

<210> 26

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 26

cacggacuug agcgcgcugc 20

<210> 27

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 27

gcccaccaag ucgcuggugc 20

<210> 28

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 28

cccaccaagu cgcuggugcc 20

<210> 29

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 29

ggcgguggag agaccgucgu 20

<210> 30

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 30

gccgcagaac ucgcaugacu 20

<210> 31

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 31

ccgcccccag gcgcucuaug 20

<210> 32

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 32

ugggggucca agugaugucu 20

<210> 33

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 33

cucaacuuac aaauacccug 20

<210> 34

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 34

agugcagaau augccccgca 20

<210> 35

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 35

gcauauucug cacucauccc 20

<210> 36

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 36

gagcucuaau ccccacgccu 20

<210> 37

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 37

agagcuccau gugcagaacg 20

<210> 38

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 38

gauaaacuuc ugcacuggag 20

<210> 39

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 39

uagcuguagu gcuugauuuu 20

<210> 40

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 40

uauccaaauu cauacaauag 20

<210> 41

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 41

augcccugag uaucccaaca 20

<210> 42

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 42

uaguaacaga cccaugugcu 20

<210> 43

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 43

auacuucaag gccucaauga 20

<210> 44

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 44

gacuagguag accuucauug 20

<210> 45

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 45

cugagcuagu gggggcucuu 20

<210> 46

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 46

cugagcacau ucuuacgccu 20

<210> 47

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> исходная

<223> /note="Description of Combined ДНК/РНК Molecule: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 47

uuuauaagac auuaggguat 20

<210> 48

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 48

ugauaggugc cuauauguga 20

<210> 49

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 49

uccacccauc caucacauau 20

<210> 50

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 50

cuucaaaguu guauugaccc 20

<210> 51

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 51

aaaccagacu aguuuauagg 20

<210> 52

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 52

uuugagacag uuaccccuuc 20

<210> 53

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 53

aaccugaggg cuaguuucua 20

<210> 54

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 54

gccuggaccc accgcuucau 20

<210> 55

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 55

aaaccaguga ggucaucuau 20

<210> 56

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 56

accugcuaug uguuccuguu 20

<210> 57

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 57

uagaggaauu ugccccaaac 20

<210> 58

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 58

gauaaacaau cgucauccuc 20

<210> 59

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 59

uggcauccag gucacgccag 20

<210> 60

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 60

gaccuggaug ccaaccucca 20

<210> 61

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 61

aaaagcaucc aaucccgugg 20

<210> 62

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 62

gaugcuuuuu ucaucucgau 20

<210> 63

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 63

ccacagcuuu uucuaagcag 20

<210> 64

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 64

cccccaaugg gaaguucauc 20

<210> 65

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 65

aucaugaccu ccucaccugu 20

<210> 66

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 66

aggaggucau gauccccuuc 20

<210> 67

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 67

ccccuucugg agcucccaac 20

<210> 68

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 68

gcucccaacg ggccgugguc 20

<210> 69

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 69

acagaugaug aaccagacca 20

<210> 70

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 70

ucuguaagaa uggcuucaag 20

<210> 71

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 71

caauuauuag agugccagag 20

<210> 72

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 72

gccuugcuug cggcgagaca 20

<210> 73

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 73

accaugucuc gccgcaagca 20

<210> 74

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 74

gagucuccuu cuuucuaacc 20

<210> 75

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 75

gaauuguggg agagccguca 20

<210> 76

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 76

aaaauagagc gagagugcac 20

<210> 77

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 77

gccccuggcg uccacacgcg 20

<210> 78

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 78

cuccucguuc uuuauuccuc 20

<210> 79

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 79

gacugcccgc gcuuuguccu 20

<210> 80

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 80

uucccaggga cugggacucc 20

<210> 81

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 81

uggcuccugg gugugcgccu 20

<210> 82

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 82

ugaagcccgc uuuuugacag 20

<210> 83

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 83

aggguggaga cgggucgcca 20

<210> 84

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 84

gcucaggguc ucgcgggcca 20

<210> 85

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 85

ugaguccgag cagaagaaga 20

<210> 86

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 86

ucuuaaacca accugcucac 20

<210> 87

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 87

cagguugguu uaagauaagc 20

<210> 88

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 88

agguugguuu aagauaagca 20

<210> 89

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 89

uuaagggaau aguggaauga 20

<210> 90

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 90

agggcaaguu aagggaauag 20

<210> 91

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 91

cccuuaacuu gcccugagau 20

<210> 92

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 92

ccaaucucag ggcaaguuaa 20

<210> 93

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 93

gccaaucuca gggcaaguua 20

<210> 94

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 94

ugacagaaca gccaaucuca 20

<210> 95

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 95

augacagaac agccaaucuc 20

<210> 96

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 96

gagauaugua gaggagaaca 20

<210> 97

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 97

ggagauaugu agaggagaac 20

<210> 98

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 98

ugcggugggg agauauguag 20

<210> 99

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 99

cugcugaaag agaugcggug 20

<210> 100

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 100

acugcugaaa gagaugcggu 20

<210> 101

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 101

aacugcugaa agagaugcgg 20

<210> 102

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 102

aacaacugcu gaaagagaug 20

<210> 103

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 103

ucugcaaaaa ugaaacuagg 20

<210> 104

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 104

acuucugcaa aaaugaaacu 20

<210> 105

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 105

cauuuuugca gaaguguuuu 20

<210> 106

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 106

aguguuuuag gcuaauauag 20

<210> 107

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 107

uuggagacaa aaaucucuag 20

<210> 108

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 108

ucuagagauu uuugucucca 20

<210> 109

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 109

cuagagauuu uugucuccaa 20

<210> 110

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 110

gucuccaagg gaauuuugag 20

<210> 111

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 111

ccaagggaau uuugagaggu 20

<210> 112

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 112

ccaaccucuc aaaauucccu 20

<210> 113

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 113

ggaauuuuga gagguuggaa 20

<210> 114

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 114

ugcuugcuuc cuccuucuuu 20

<210> 115

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 115

aagaauuuac caaaagaagg 20

<210> 116

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 116

aggaagaauu uaccaaaaga 20

<210> 117

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 117

aaaaauuaga guuuuauuau 20

<210> 118

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 118

uuuuuuaaau auucuuuuaa 20

<210> 119

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 119

uauuuaccag uuauugaaau 20

<210> 120

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 120

ccaguuauug aaauagguuc 20

<210> 121

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 121

ccagaaccua uuucaauaac 20

<210> 122

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 122

uucuggaaac augaauuuua 20

<210> 123

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 123

auuuugaaug uuuaaaauua 20

<210> 124

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 124

aaauuuaauc uggcugaaua 20

<210> 125

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 125

gaacuucguu aaauuuaauc 20

<210> 126

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 126

auuaaauuua acgaaguucc 20

<210> 127

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 127

uuaaauuuaa cgaaguuccu 20

<210> 128

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 128

uucuguacua gcauauuccc 20

<210> 129

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 129

uguguucuua aaaaaaaaug 20

<210> 130

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 130

aaaaaugugg aauuagaccc 20

<210> 131

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 131

cuacugggau cuucauuccu 20

<210> 132

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 132

acuacuggga ucuucauucc 20

<210> 133

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 133

gaaaagagug aaaaacuacu 20

<210> 134

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 134

agaaaagagu gaaaaacuac 20

<210> 135

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 135

gaauucaaau aaugccacaa 20

<210> 136

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 136

uguguauuug ucugccauug 20

<210> 137

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 137

cacccaugag cauauccaaa 20

<210> 138

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 138

uuccuuuugg auaugcucau 20

<210> 139

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 139

cuuccuuuug gauaugcuca 20

<210> 140

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 140

caugagcaua uccaaaagga 20

<210> 141

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 141

uauccaaaag gaaggauuga 20

<210> 142

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 142

uuuccuucaa uccuuccuuu 20

<210> 143

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 143

aaggaaggau ugaaggaaag 20

<210> 144

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 144

gaaggauuga aggaaagagg 20

<210> 145

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 145

gaggaggaag aaauggagaa 20

<210> 146

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 146

aggaagaaau ggagaaagga 20

<210> 147

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 147

gaaggaagag gggaagagag 20

<210> 148

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 148

gaagagggga agagagagga 20

<210> 149

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 149

aggggaagag agaggaugga 20

<210> 150

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 150

ggggaagaga gaggauggaa 20

<210> 151

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 151

aagagagagg auggaaggga 20

<210> 152

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 152

agagaggaug gaagggaugg 20

<210> 153

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 153

ggaagggaug gaggagaaga 20

<210> 154

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 154

gaagaaggaa aaauaaauaa 20

<210> 155

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 155

aggaaaaaua aauaauggag 20

<210> 156

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 156

aaauaaauaa uggagaggag 20

<210> 157

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 157

uggagaggag aggagaaaaa 20

<210> 158

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 158

agaggagagg agaaaaaagg 20

<210> 159

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 159

gaggagagga gaaaaaagga 20

<210> 160

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 160

aggagaggag aaaaaaggag 20

<210> 161

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 161

aggagaaaaa aggaggggag 20

<210> 162

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 162

gagaggagag gagaagggau 20

<210> 163

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 163

agaggagagg agaagggaua 20

<210> 164

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 164

gaagagaaag agaaagggaa 20

<210> 165

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 165

aagagaggaa agaagagaag 20

<210> 166

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 166

gagagaaaag aaacgaagag 20

<210> 167

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 167

agagaaaaga aacgaagaga 20

<210> 168

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 168

gagaaaagaa acgaagagag 20

<210> 169

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 169

aaagaaacga agagagggga 20

<210> 170

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 170

aagaaacgaa gagaggggaa 20

<210> 171

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 171

ggaagggaag gaaaaaaaag 20

<210> 172

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 172

aagacugaca guucaaauuu 20

<210> 173

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 173

acugacaguu caaauuuugg 20

<210> 174

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 174

uucaaauuuu gguggugaua 20

<210> 175

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 175

aauagaaacu caaacucugu 20

<210> 176

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 176

guacaauagu auaaccccuu 20

<210> 177

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 177

cuauuaaagg uuuuccaaag 20

<210> 178

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 178

acuauuaaag guuuuccaaa 20

<210> 179

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 179

uacuauuaaa gguuuuccaa 20

<210> 180

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 180

gcauuugugg auacuauuaa 20

<210> 181

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 181

uuaauaguau ccacaaaugc 20

<210> 182

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 182

uaugcaauuu uugccaagau 20

<210> 183

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 183

uuuugccaag augggaguau 20

<210> 184

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 184

uuugccaaga ugggaguaug 20

<210> 185

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 185

ucagugagau gagauaucaa 20

<210> 186

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 186

cagugagaug agauaucaaa 20

<210> 187

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 187

ccaucucccu aaucuccaau 20

<210> 188

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 188

ccaauuggag auuagggaga 20

<210> 189

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 189

gcuuugccaa uuggagauua 20

<210> 190

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 190

ggcuuugcca auuggagauu 20

<210> 191

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 191

aauuggcaaa gccagacuug 20

<210> 192

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 192

agucuguauu gccccaaguc 20

<210> 193

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 193

agacuugggg caauacagac 20

<210> 194

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 194

acauuuggug auaaaucauu 20

<210> 195

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 195

ccaaauguuc uuucuucagc 20

<210> 196

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 196

auaauaguau augcuucaua 20

<210> 197

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 197

cggagcacuu acucugcucu 20

<210> 198

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 198

agcauuuuag uucacaagcu 20

<210> 199

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 199

uguaacuaau aaauaccagg 20

<210> 200

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 200

agguguaacu aauaaauacc 20

<210> 201

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 201

ucugacccaa acuaggaauu 20

<210> 202

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 202

aaggaaaaga auaugacguc 20

<210> 203

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 203

aggaaaagaa uaugacguca 20

<210> 204

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 204

ggaaaagaau augacgucag 20

<210> 205

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 205

gaaaagaaua ugacgucagg 20

<210> 206

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 206

ucagggggag gcaagucagu 20

<210> 207

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 207

cagggggagg caagucaguu 20

<210> 208

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 208

aucacauaua ggcaccuauc 20

<210> 209

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 209

cagguaccag cuacuguguu 20

<210> 210

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 210

acuauccacg gauauacacu 20

<210> 211

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 211

cacaguagcu gguaccugau 20

<210> 212

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 212

aucacauaua ggcaccuauc 20

<210> 213

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 213

ugauaggugc cuauauguga 20

<210> 214

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 214

aggugccuau augugaugga 20

<210> 215

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 215

ggugccuaua ugugauggau 20

<210> 216

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 216

uccacccauc caucacauau 20

<210> 217

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 217

acagcccgac agaugaaaaa 20

<210> 218

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 218

augaaaaaug gacaauuaug 20

<210> 219

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 219

aaaaauggac aauuaugagg 20

<210> 220

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 220

aaaauggaca auuaugagga 20

<210> 221

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 221

aaauggacaa uuaugaggag 20

<210> 222

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 222

gaggagggga gagugcagac 20

<210> 223

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 223

aggaggggag agugcagaca 20

<210> 224

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 224

cuucaccucc uuuacaauuu 20

<210> 225

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 225

uucaccuccu uuacaauuuu 20

<210> 226

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 226

gacucccaaa auuguaaagg 20

<210> 227

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 227

guggacuccc aaaauuguaa 20

<210> 228

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 228

uuuugggagu ccacacggca 20

<210> 229

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 229

aauuuguaug ccaugccgug 20

<210> 230

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 230

ccaagagagc cuuccgaaag 20

<210> 231

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 231

ccaggggggc cucuuucgga 20

<210> 232

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 232

ccuuccgaaa gaggcccccc 20

<210> 233

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 233

cuuccgaaag aggccccccu 20

<210> 234

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 234

aagaggcccc ccugggcaaa 20

<210> 235

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 235

cgguggccgu uugcccaggg 20

<210> 236

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 236

ucgguggccg uuugcccagg 20

<210> 237

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 237

aucgguggcc guuugcccag 20

<210> 238

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 238

caucgguggc cguuugccca 20

<210> 239

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 239

ccugggcaaa cggccaccga 20

<210> 240

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 240

ccaucggugg ccguuugccc 20

<210> 241

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 241

gcaaacggcc accgauggag 20

<210> 242

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 242

cuggcagacc ucuccaucgg 20

<210> 243

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 243

ggacuggcag accucuccau 20

<210> 244

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 244

ucugauuagg gugggggcgu 20

<210> 245

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 245

cacgccccca cccuaaucag 20

<210> 246

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 246

uuggccucug auuagggugg 20

<210> 247

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 247

uuuggccucu gauuagggug 20

<210> 248

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 248

guuuggccuc ugauuagggu 20

<210> 249

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 249

gguuuggccu cugauuaggg 20

<210> 250

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 250

aaggguuugg ccucugauua 20

<210> 251

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 251

gaaggguuug gccucugauu 20

<210> 252

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 252

uugcuuuuau cacaggcucc 20

<210> 253

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 253

cuaacaguug cuuuuaucac 20

<210> 254

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 254

cuucaaaguu guauugaccc 20

<210> 255

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 255

acucuuagac auaacacacc 20

<210> 256

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 256

uagaugccau aucucuuuuc 20

<210> 257

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 257

cauaggccag aaaagagaua 20

<210> 258

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 258

ggccuauguu auuaccugua 20

<210> 259

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 259

guccauacag guaauaacau 20

<210> 260

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 260

uaccuguaug gacuuugcac 20

<210> 261

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 261

uuccagugca aaguccauac 20

<210> 262

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 262

ugcucuuacu uaugcacacc 20

<210> 263

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 263

gcucuuacuu augcacaccu 20

<210> 264

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 264

cucuuacuua ugcacaccug 20

<210> 265

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 265

cagggcuggc ucuaugcccc 20

<210> 266

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 266

gcugaaaagc gauacagggc 20

<210> 267

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 267

gauggcugaa aagcgauaca 20

<210> 268

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 268

agauggcuga aaagcgauac 20

<210> 269

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 269

gggaguuauc uguagugaga 20

<210> 270

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 270

aaggcagcua gacaggacuu 20

<210> 271

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 271

gaaggcagcu agacaggacu 20

<210> 272

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 272

gauaaggaag gcagcuagac 20

<210> 273

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 273

cuagcugccu uccuuaucac 20

<210> 274

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 274

ugggugcuau uccugugaua 20

<210> 275

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 275

uaucacagga auagcaccca 20

<210> 276

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 276

cugagguacu gauggaccuu 20

<210> 277

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 277

ucugagguac ugauggaccu 20

<210> 278

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 278

agcucuggaa ugauggcuua 20

<210> 279

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 279

auuguggagc ucuggaauga 20

<210> 280

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 280

cuggaauaga aaauuggagu 20

<210> 281

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 281

uggguacggg gaacuaagac 20

<210> 282

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 282

uuaguucccc guacccauca 20

<210> 283

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 283

uauuuuccuu gauggguacg 20

<210> 284

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 284

auauuuuccu ugauggguac 20

<210> 285

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 285

aauauuuucc uugaugggua 20

<210> 286

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 286

ggaaggaaau gagaacggaa 20

<210> 287

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 287

aggaaggaaa ugagaacgga 20

<210> 288

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 288

auacuucaag gccucaauga 20

<210> 289

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 289

gacuagguag accuucauug 20

<210> 290

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 290

uucuucuugc uaaggugacu 20

<210> 291

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 291

gagauugauu cuucuugcua 20

<210> 292

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 292

guguucuaug agguuggaga 20

<210> 293

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 293

ggaugagugu ucuaugaggu 20

<210> 294

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 294

caugggauga guguucuaug 20

<210> 295

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 295

ugagucaggg aguggugcau 20

<210> 296

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 296

augagucagg gaguggugca 20

<210> 297

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 297

ccacucccug acucauaucu 20

<210> 298

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 298

uaaggccuag auaugaguca 20

<210> 299

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 299

guaaggccua gauaugaguc 20

<210> 300

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 300

auaucuaggc cuuacauugc 20

<210> 301

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 301

aaauuaauua gaggcauaga 20

<210> 302

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 302

gaaauuaauu agaggcauag 20

<210> 303

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 303

gaacacauga aauuaauuag 20

<210> 304

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 304

ccaaugaguu ucuucaauac 20

<210> 305

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 305

caaauauaau agaagcaagu 20

<210> 306

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 306

aaauaacuuc ccuuuuagga 20

<210> 307

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 307

ggaaaaauaa cuucccuuuu 20

<210> 308

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 308

uuuugaacag aaaugauauu 20

<210> 309

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 309

aguucaagua gauaucagaa 20

<210> 310

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 310

aaguucaagu agauaucaga 20

<210> 311

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 311

ggguggcugu uuaaagaggg 20

<210> 312

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 312

gugggguggc uguuuaaaga 20

<210> 313

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 313

uguggggugg cuguuuaaag 20

<210> 314

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 314

ugccaaccag acugugcgcc 20

<210> 315

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 315

aaccuggcgc acagucuggu 20

<210> 316

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 316

aaccagacug ugcgccaggu 20

<210> 317

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 317

uaccaaccug gcgcacaguc 20

<210> 318

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 318

ucugucagac uuuaccaacc 20

<210> 319

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 319

auaugugaag cccaacuacg 20

<210> 320

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 320

aguugcacaa ccacguaguu 20

<210> 321

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 321

gaguugcaca accacguagu 20

<210> 322

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 322

cuauagcuga cuuucaacca 20

<210> 323

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 323

aacuucuuug cagaugacca 20

<210> 324

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 324

uugcauugag gaugcgcagg 20

<210> 325

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 325

uuuuugcauu gaggaugcgc 20

<210> 326

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 326

gaccucauuu ugaugccaga 20

<210> 327

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 327

ugcccucugg caucaaaaug 20

<210> 328

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 328

augccagagg gcagcaaaca 20

<210> 329

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 329

cuguacuuaa uagcugaagg 20

<210> 330

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 330

acuguacuua auagcugaag 20

<210> 331

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 331

cagcuauuaa guacaguaaa 20

<210> 332

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 332

gagcauuuca aaugauaguu 20

<210> 333

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 333

cauuugaaau gcucccggcc 20

<210> 334

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 334

uuaggguggg ggcgugggug 20

<210> 335

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 335

uuuuaucaca ggcuccagga 20

<210> 336

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 336

uuuaucacag gcuccaggaa 20

<210> 337

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 337

cacaggcucc aggaaggguu 20

<210> 338

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 338

aucagaggcc aaacccuucc 20

<210> 339

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 339

cucugauuag ggugggggcg 20

<210> 340

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 340

gauuagggug ggggcguggg 20

<210> 341

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 341

auuagggugg gggcgugggu 20

<210> 342

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 342

guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 343

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 343

guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 344

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 344

guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 345

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 345

guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 346

<211> 74

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 346

aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60

ucggugcuuu uuuu 74

<210> 347

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 347

aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 348

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 348

aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 349

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 349

aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 350

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 350

aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 351

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 351

uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 352

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 352

uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 353

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 353

uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 354

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 354

uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 355

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 355

uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 356

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 356

uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 357

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 357

uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 358

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 358

uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 359

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 359

cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 360

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 360

cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 361

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 361

cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 362

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 362

cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 363

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 363

cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 364

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 364

cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 365

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 365

cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 366

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 366

cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 367

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 367

uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 368

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 368

uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 369

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 369

uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 370

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 370

uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 371

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 371

uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 372

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 372

uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 373

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 373

uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 374

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 374

uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 375

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 375

acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 376

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 376

acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 377

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 377

acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 378

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 378

acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 379

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 379

ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 380

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 380

ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 381

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 381

ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 382

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 382

ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 383

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 383

gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 384

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 384

gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 385

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 385

gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 386

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 386

gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 387

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 387

guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 388

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 388

guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 389

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 389

guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 390

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 390

guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 391

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 391

aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 392

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 392

aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 393

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 393

aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 394

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 394

aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 395

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 395

augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 396

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 396

augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 397

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 397

augguauggg agguauacua guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 398

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 398

augguauggg agguauacua guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 399

<400> 399

000

<210> 400

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 400

cagucauuau uuauuaugaa uaagc 25

<210> 401

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 401

ggaaauaauu cacaugccaa uuauu 25

<210> 402

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 402

uauuuggcua ucuuuucacu aagcu 25

<210> 403

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 403

cacuaagcua gguaaucuag ccaga 25

<210> 404

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 404

uaagcuaggu aaucuagcca gaagg 25

<210> 405

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 405

uagguaaucu agccagaagg uggau 25

<210> 406

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 406

uaaucuagcc agaaggugga uaggu 25

<210> 407

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 407

uggauaggua ggauuuuccc cacuu 25

<210> 408

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 408

guaggauuuu ccccacuuag guuca 25

<210> 409

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 409

gccuguaugu gaaucuacag cacac 25

<210> 410

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 410

ugcuauguug uuucuaauuc ucuuc 25

<210> 411

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 411

ugagaaaagu ucugugcaaa uuaac 25

<210> 412

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 412

gagaaaaguu cugugcaaau uaacu 25

<210> 413

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 413

ccuguuugua gauguaacuu auuug 25

<210> 414

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 414

aacuuauuug uggcacuaau uucua 25

<210> 415

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 415

gucugcauua agauauauuu ccuga 25

<210> 416

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 416

cauuaagaua uauuuccuga agguu 25

<210> 417

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 417

auuaagauau auuuccugaa gguuu 25

<210> 418

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 418

acuacugaca uuuaucaccu ucuuu 25

<210> 419

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 419

uuaaaagaca aauucaaauc cugca 25

<210> 420

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 420

caccaaaagc auauauuuga aaaac 25

<210> 421

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 421

aagcauauau uugaaaaaca ggauu 25

<210> 422

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 422

gcgugccaua uuaugcauua uuuaa 25

<210> 423

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 423

uaugcaaauu auaagucaga caguu 25

<210> 424

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 424

uugaaaauuu augccaucug auaag 25

<210> 425

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 425

aaaucuguuc cuccuaccca cccga 25

<210> 426

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 426

aaucuguucc uccuacccac ccgau 25

<210> 427

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 427

uccuacccac ccgaugggug ucugu 25

<210> 428

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 428

cacccgaugg gugucuguag gaaac 25

<210> 429

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 429

agacaacaua gaauguauag aaaca 25

<210> 430

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 430

gacaacauag aauguauaga aacaa 25

<210> 431

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 431

acaacauaga auguauagaa acaag 25

<210> 432

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 432

cauagaaugu auagaaacaa ggggu 25

<210> 433

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 433

auagaaugua uagaaacaag ggguu 25

<210> 434

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 434

uagaauguau agaaacaagg gguug 25

<210> 435

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 435

ggacucaugc gcauuuccac aauac 25

<210> 436

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 436

gcgcauuucc acaauacagg uaauu 25

<210> 437

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 437

auuuccacaa uacagguaau uaggu 25

<210> 438

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 438

ccacaauaca gguaauuagg uuggc 25

<210> 439

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 439

gguaauuagg uuggcugguu ucaga 25

<210> 440

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 440

guaauuaggu uggcugguuu cagaa 25

<210> 441

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 441

uagguuggcu gguuucagaa gggcc 25

<210> 442

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 442

agguuggcug guuucagaag ggcca 25

<210> 443

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 443

gccagggcau cacucaugac agcga 25

<210> 444

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 444

caucacucau gacagcgaug gucca 25

<210> 445

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 445

aucacucaug acagcgaugg uccac 25

<210> 446

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 446

agcgaugguc cacgggcccu cucua 25

<210> 447

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 447

gcgauggucc acgggcccuc ucuau 25

<210> 448

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 448

augggacuga uucacuguuc caaug 25

<210> 449

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 449

ugggacugau ucacuguucc aaugu 25

<210> 450

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 450

uuuuuauuaa aaaauauaaa uaaaa 25

<210> 451

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 451

aaaaauauaa auaaaauggc gcugc 25

<210> 452

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 452

auaaauaaaa uggcgcugca ggccu 25

<210> 453

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 453

auaaaauggc gcugcaggcc uaggc 25

<210> 454

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 454

aauggcgcug caggccuagg cugga 25

<210> 455

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 455

caggccuagg cuggaaggac ucugc 25

<210> 456

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 456

ucugcaggac ucugucuucg cacaa 25

<210> 457

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 457

acucugucuu cgcacaacgg cuucu 25

<210> 458

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 458

cugucuucgc acaacggcuu cuugg 25

<210> 459

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 459

cugucagaaa acaucacaaa cuagc 25

<210> 460

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 460

gaugacagac cacgcugacg ucgac 25

<210> 461

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 461

augacagacc acgcugacgu cgacu 25

<210> 462

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 462

acagaccacg cugacgucga cuggg 25

<210> 463

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 463

gggcggcacg cguccacccc acccc 25

<210> 464

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 464

ggcggcacgc guccacccca ccccu 25

<210> 465

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 465

gcggcacgcg uccaccccac cccug 25

<210> 466

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 466

cggcacgcgu ccaccccacc ccugg 25

<210> 467

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 467

gggcuucaaa uuuucucaga acuua 25

<210> 468

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 468

ggcuucaaau uuucucagaa cuuaa 25

<210> 469

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 469

aaacugccac acaucuugag cucuc 25

<210> 470

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 470

aacugccaca caucuugagc ucucu 25

<210> 471

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 471

ugagcucucu ggguacuacg ccgaa 25

<210> 472

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 472

gagcucucug gguacuacgc cgaau 25

<210> 473

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 473

agcucucugg guacuacgcc gaaug 25

<210> 474

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 474

gcucucuggg uacuacgccg aaugg 25

<210> 475

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 475

gggggugugu gaagaaccua gaaag 25

<210> 476

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 476

gugugugaag aaccuagaaa gaggu 25

<210> 477

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 477

gaaccuagaa agagguugga gacag 25

<210> 478

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 478

cuuagugaaa agauagccaa auaau 25

<210> 479

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 479

gggaaaaucc uaccuaucca ccuuc 25

<210> 480

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 480

cacauacagg ccgugaaccu aagug 25

<210> 481

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 481

ucacauacag gccgugaacc uaagu 25

<210> 482

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 482

uucacauaca ggccgugaac cuaag 25

<210> 483

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 483

accugugugc uguagauuca cauac 25

<210> 484

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 484

uagaaacaac auagcaaauu aaaau 25

<210> 485

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 485

ucucaguuug guauuuuuua cugcu 25

<210> 486

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 486

aauuugcaca gaacuuuucu caguu 25

<210> 487

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 487

acaaacaggu gguaaaaauu cuuuc 25

<210> 488

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 488

caaauaaguu acaucuacaa acagg 25

<210> 489

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 489

ccacaaauaa guuacaucua caaac 25

<210> 490

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 490

gauuuuagag gggggaaauu auagg 25

<210> 491

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 491

gcagauuuua gaggggggaa auuau 25

<210> 492

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 492

gaaauuuggg gcagauuuua gaggg 25

<210> 493

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 493

ggaaauuugg ggcagauuuu agagg 25

<210> 494

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 494

aggaaauuug gggcagauuu uagag 25

<210> 495

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 495

caggaaauuu ggggcagauu uuaga 25

<210> 496

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 496

ucaggaaauu uggggcagau uuuag 25

<210> 497

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 497

uuuaguacuu acaucaggaa auuug 25

<210> 498

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 498

cuuuaguacu uacaucagga aauuu 25

<210> 499

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 499

ucuuuaguac uuacaucagg aaauu 25

<210> 500

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 500

auaaaacuuc uuuaguacuu acauc 25

<210> 501

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 501

ucuaauuuua gguucccaaa ccuuc 25

<210> 502

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 502

guuucuuauu aaauauucua auuuu 25

<210> 503

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 503

cugggcgagc gguaaauccu aaaga 25

<210> 504

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 504

uuaggaaaga acaucacugg gcgag 25

<210> 505

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 505

auuuagcuua ggaaagaaca ucacu 25

<210> 506

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 506

aauuuagcuu aggaaagaac aucac 25

<210> 507

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 507

uugaauuugu cuuuuaauuu agcuu 25

<210> 508

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 508

uauaugcuuu ugguggcuac caugc 25

<210> 509

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 509

cuguuuuuca aauauaugcu uuugg 25

<210> 510

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 510

auccuguuuu ucaaauauau gcuuu 25

<210> 511

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 511

gcauaccauu aaauaaugca uaaua 25

<210> 512

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 512

auugcuguuu auuaaugcug aagug 25

<210> 513

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 513

caaggagaau caaaaugcaa aacuu 25

<210> 514

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 514

ucaaggagaa ucaaaaugca aaacu 25

<210> 515

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 515

gcuuaucaga uggcauaaau uuuca 25

<210> 516

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 516

gggaacuagg uuaccgcuua ucaga 25

<210> 517

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 517

gggcaggaga uguaggaggg gaacu 25

<210> 518

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 518

gagaaauggg caggagaugu aggag 25

<210> 519

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 519

ugagaaaugg gcaggagaug uagga 25

<210> 520

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 520

uugagaaaug ggcaggagau guagg 25

<210> 521

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 521

gauuugagaa augggcagga gaugu 25

<210> 522

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 522

ggaggaacag auuugagaaa ugggc 25

<210> 523

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 523

gguaggagga acagauuuga gaaau 25

<210> 524

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 524

ggguaggagg aacagauuug agaaa 25

<210> 525

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 525

uacagacacc caucgggugg guagg 25

<210> 526

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 526

uccuacagac acccaucggg ugggu 25

<210> 527

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 527

uguuuccuac agacacccau cgggu 25

<210> 528

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 528

cuguuuccua cagacaccca ucggg 25

<210> 529

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 529

uaccuguuuc cuacagacac ccauc 25

<210> 530

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 530

guaccuguuu ccuacagaca cccau 25

<210> 531

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 531

aauuuuuaau gcuuauaaga caaug 25

<210> 532

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 532

acacaauaaa uguuggagcu uuagg 25

<210> 533

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 533

uugacacaau aaauguugga gcuuu 25

<210> 534

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 534

ugcuuaacau ugacacaaua aaugu 25

<210> 535

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 535

ccagccaacc uaauuaccug uauug 25

<210> 536

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 536

accaucgcug ucaugaguga ugccc 25

<210> 537

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 537

gaaucagucc cauagagagg gcccg 25

<210> 538

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 538

gaacagugaa ucagucccau agaga 25

<210> 539

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 539

ggaacaguga aucaguccca uagag 25

<210> 540

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 540

uaaaaacaaa aaaacagacc cacau 25

<210> 541

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 541

gaguccugca gaguccuucc agccu 25

<210> 542

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 542

gcgugccgcc cagucgacgu cagcg 25

<210> 543

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 543

aaauuugaag cccccagggg ugggg 25

<210> 544

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 544

agaaaauuug aagcccccag gggug 25

<210> 545

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 545

gagaaaauuu gaagccccca ggggu 25

<210> 546

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 546

ugagaaaauu ugaagccccc agggg 25

<210> 547

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 547

uucugagaaa auuugaagcc cccag 25

<210> 548

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 548

guucugagaa aauuugaagc cccca 25

<210> 549

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 549

aguucugaga aaauuugaag ccccc 25

<210> 550

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 550

cucaagaugu guggcaguuu ucgga 25

<210> 551

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 551

agagcucaag auguguggca guuuu 25

<210> 552

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 552

uaguacccag agagcucaag augug 25

<210> 553

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 553

ucuagguucu ucacacaccc ccauu 25

<210> 554

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 554

uuaauuuuuu uuauuuuuuc aauaa 25

<210> 555

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 555

uaauuuuuuu uauuuuuuca auaaa 25

<210> 556

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 556

uuauuuuuuc aauaaaggga caaaa 25

<210> 557

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 557

uauuuuuuca auaaagggac aaaau 25

<210> 558

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 558

aaagggacaa aaugggugua ugaac 25

<210> 559

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 559

acaacugcca aaaaaacaca gacag 25

<210> 560

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 560

ccagaaacaa auacaauaaa aagcc 25

<210> 561

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 561

uaaaaagcca gguuguaaug accuu 25

<210> 562

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 562

caaauuaagu gccucuguuu ugaac 25

<210> 563

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 563

aaauuaagug ccucuguuuu gaaca 25

<210> 564

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 564

aguuacgaca aacagcuuuc auuac 25

<210> 565

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 565

acagcuuuca uuacaggaau agaaa 25

<210> 566

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 566

auuuacaaaa aaguauugac uaaag 25

<210> 567

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 567

uuuacaaaaa aguauugacu aaagc 25

<210> 568

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 568

uaaauauaaa gcaccauuua guuuu 25

<210> 569

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 569

ggcaaugaaa aaaacugcaa aacau 25

<210> 570

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 570

ucuuucuuuc uuuuacugca uauga 25

<210> 571

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 571

uuuacugcau augaagguaa gaugc 25

<210> 572

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 572

auaugaaggu aagaugcugg aaugu 25

<210> 573

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 573

uaugaaggua agaugcugga augua 25

<210> 574

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 574

agaugcugga auguagggug auaga 25

<210> 575

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 575

cuggaaugua gggugauaga aggaa 25

<210> 576

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 576

uggaauguag ggugauagaa ggaaa 25

<210> 577

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 577

uuagcuugca guacugcaua cagua 25

<210> 578

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 578

gcaguacugc auacaguaug gcagc 25

<210> 579

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 579

ugcauacagu auggcagcag gaaaa 25

<210> 580

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 580

uggcagcagg aaaaaggaac aaaaa 25

<210> 581

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 581

acagccaucc augugacauu cuagc 25

<210> 582

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 582

caggcucccc caaaccgcca uuaua 25

<210> 583

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 583

ccugccaaau uaaaaaaaua uacug 25

<210> 584

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 584

ucuuuuuuuu uuccacuacc aaaaa 25

<210> 585

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 585

aaagaccaua aauguauuuu agcau 25

<210> 586

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 586

uuuuuuuuuu uuacaaccug aagag 25

<210> 587

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 587

caaccugaag agcggugugu aucca 25

<210> 588

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 588

uagaauuucc acuaccauuu uuaaa 25

<210> 589

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 589

aagucuugua acaccaccaa gacaa 25

<210> 590

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 590

uaaguaagcu caauagucaa guaaa 25

<210> 591

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 591

uaagcucaau agucaaguaa auggc 25

<210> 592

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 592

uucccuuaag uauagaccug uaaac 25

<210> 593

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 593

ucccuuaagu auagaccugu aaacu 25

<210> 594

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 594

gugcacuuaa uuguccuauc ugagc 25

<210> 595

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 595

auuagagaaa agauacagau aucac 25

<210> 596

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 596

agucaagugc uauuugaaca ccaac 25

<210> 597

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 597

gucaagugcu auuugaacac caacu 25

<210> 598

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 598

ucaagugcua uuugaacacc aacug 25

<210> 599

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 599

guuaacacaa auagcacaca gugua 25

<210> 600

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 600

ggaaaagaaa ugaaguacaa cuuuu 25

<210> 601

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 601

gaaaagaaau gaaguacaac uuuua 25

<210> 602

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 602

cuuauauacc uguucuaguu uuaaa 25

<210> 603

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 603

uauugucagc cucuuccuuu caaua 25

<210> 604

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 604

ccucuuccuu ucaauauggu auaca 25

<210> 605

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 605

uguccacuug acaaccaagu agauc 25

<210> 606

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 606

caaguagauc uggaucuauu ucuuu 25

<210> 607

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 607

uuacuagugu auuuaauugc guucc 25

<210> 608

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 608

uacuagugua uuuaauugcg uucca 25

<210> 609

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 609

ucauuguuua aaaaaaauaa aacuu 25

<210> 610

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 610

cauuguuuaa aaaaaauaaa acuuu 25

<210> 611

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 611

agcccauuuc uuuuaagcuc ucacc 25

<210> 612

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 612

accaggagca aaguagcuuu uauac 25

<210> 613

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 613

aguuuuguuu auaaaauuaa acuaa 25

<210> 614

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 614

acuaaaggaa aaaugaugau uaacu 25

<210> 615

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 615

aaaaugauga uuaacuagga cauaa 25

<210> 616

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 616

aaaugaugau uaacuaggac auaau 25

<210> 617

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 617

cuaggacaua augggucauc uuuuu 25

<210> 618

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 618

auauagaauu auaugcuagu uccua 25

<210> 619

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 619

uaacaaguag aaagaaccau cgaug 25

<210> 620

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 620

caucgaugug guuuuaauag aucca 25

<210> 621

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 621

guuuuucugu uaauuuguca auuca 25

<210> 622

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 622

ucagugcuau cuauucuguc uauag 25

<210> 623

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 623

cagugcuauc uauucugucu auaga 25

<210> 624

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 624

uauguauuac agaauguaug cagca 25

<210> 625

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 625

cucucucucu cuuuuucucu cagaa 25

<210> 626

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 626

cucucuuuuu cucucagaac ggaac 25

<210> 627

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 627

caacauguuu gcucagcaac gaauu 25

<210> 628

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 628

aacauguuug cucagcaacg aauua 25

<210> 629

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 629

acauguaaau uauugcacaa gagaa 25

<210> 630

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 630

gccccauaca gaucaugcau ucaaa 25

<210> 631

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 631

augcauucaa acggugagaa cauaa 25

<210> 632

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 632

aaagaaaaag aaaaagaaaa aaaac 25

<210> 633

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 633

agaaaaagaa aaaaaacagg ugugc 25

<210> 634

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 634

uguuuguuug uuuguuuaaa ucaca 25

<210> 635

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 635

guuuguuugu uuguuuaaau cacau 25

<210> 636

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 636

acaugggacu agaaaaaaau ccuac 25

<210> 637

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 637

caugggacua gaaaaaaauc cuaca 25

<210> 638

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 638

gacuagaaaa aaauccuaca gggag 25

<210> 639

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 639

acuagaaaaa aauccuacag ggagu 25

<210> 640

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 640

cuagaaaaaa auccuacagg gagug 25

<210> 641

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 641

aaaaaaaucc uacagggagu ggggc 25

<210> 642

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 642

aaaauccuac agggaguggg gcugg 25

<210> 643

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 643

aaauccuaca gggagugggg cugga 25

<210> 644

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 644

uacagggagu ggggcuggag ggcga 25

<210> 645

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 645

acagggagug gggcuggagg gcgau 25

<210> 646

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 646

cagggagugg ggcuggaggg cgaug 25

<210> 647

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 647

gaguggggcu ggagggcgau gggga 25

<210> 648

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 648

aguggggcug gagggcgaug gggaa 25

<210> 649

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 649

guggggcugg agggcgaugg ggaag 25

<210> 650

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 650

gcuggagggc gauggggaag gggag 25

<210> 651

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 651

cgauggggaa ggggaguggu gaaaa 25

<210> 652

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 652

gauggggaag gggaguggug aaaaa 25

<210> 653

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 653

auggggaagg ggagugguga aaaag 25

<210> 654

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 654

uggggaaggg gaguggugaa aaagg 25

<210> 655

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 655

ggggaguggu gaaaaagggg guguc 25

<210> 656

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 656

gaguggugaa aaagggggug ucagg 25

<210> 657

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 657

aguggugaaa aagggggugu caggu 25

<210> 658

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 658

aaaaaggggg ugucaggugg gagug 25

<210> 659

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 659

aaaagggggu gucagguggg aguga 25

<210> 660

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 660

aggggguguc aggugggagu gaggg 25

<210> 661

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 661

ggggguguca ggugggagug aggga 25

<210> 662

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 662

ggggugucag gugggaguga gggag 25

<210> 663

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 663

gugccauuuu uucauguguu ucucc 25

<210> 664

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 664

ugccauuuuu ucauguguuu cucca 25

<210> 665

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 665

ucuccagggu acuguacacg cuaaa 25

<210> 666

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 666

acauuuguaa acguccuucc ccacc 25

<210> 667

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 667

accuggccau gcguuuucau gugcc 25

<210> 668

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 668

caugugccug gugagcuugc uacuc 25

<210> 669

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 669

augugccugg ugagcuugcu acucu 25

<210> 670

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 670

cuggugagcu ugcuacucug ggcac 25

<210> 671

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 671

cauaguugca cagcucgcau uuaua 25

<210> 672

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 672

gcauuuauaa ggccuuucgc ccgug 25

<210> 673

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 673

ccuuucgccc guguggcuuc uccug 25

<210> 674

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 674

ucgcugcguc ugcccucuuu ugagc 25

<210> 675

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 675

cgcugcgucu gcccucuuuu gagcu 25

<210> 676

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 676

ugcccucuuu ugagcugggc cugcc 25

<210> 677

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 677

gcccucuuuu gagcugggcc ugccc 25

<210> 678

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 678

cuuuugagcu gggccugccc gggcc 25

<210> 679

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 679

ccugcccggg cccggaccac uaaua 25

<210> 680

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 680

cugcccgggc ccggaccacu aauau 25

<210> 681

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 681

ugcccgggcc cggaccacua auaug 25

<210> 682

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 682

cccgagaucc cuccguccag cuccc 25

<210> 683

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 683

ccgagauccc uccguccagc ucccc 25

<210> 684

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 684

agaucccucc guccagcucc ccggg 25

<210> 685

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 685

ccuccgucca gcuccccggg cggug 25

<210> 686

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 686

gagaagcgca aacucccguu cuccg 25

<210> 687

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 687

ccguucuccg aggagugcuc cgacg 25

<210> 688

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 688

uucuccgagg agugcuccga cgagg 25

<210> 689

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 689

aggagugcuc cgacgaggag gcaaa 25

<210> 690

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 690

gacgaggagg caaaaggcga uuguc 25

<210> 691

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 691

cgauugucug gagucuccga agcua 25

<210> 692

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 692

ugucuggagu cuccgaagcu aagga 25

<210> 693

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 693

gucuggaguc uccgaagcua aggaa 25

<210> 694

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 694

cuaaggaagg gaucuuugag cugcc 25

<210> 695

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 695

aggaagggau cuuugagcug ccugg 25

<210> 696

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 696

uugagcugcc uggaggccgc guagc 25

<210> 697

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 697

cacugcgagu acacguucuc cgugu 25

<210> 698

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 698

acugcgagua cacguucucc guguu 25

<210> 699

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 699

uacacguucu ccguguuggg caucg 25

<210> 700

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 700

cguucuccgu guugggcauc gcggc 25

<210> 701

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 701

guucuccgug uugggcaucg cggcc 25

<210> 702

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 702

uucuccgugu ugggcaucgc ggccg 25

<210> 703

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 703

ucuccguguu gggcaucgcg gccgg 25

<210> 704

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 704

cguguugggc aucgcggccg ggggc 25

<210> 705

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 705

uucucgagcu ugaugcgcuu agaga 25

<210> 706

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 706

ucucgagcuu gaugcgcuua gagaa 25

<210> 707

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 707

cucgagcuug augcgcuuag agaag 25

<210> 708

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 708

cgcuuagaga aggggcucag cgagc 25

<210> 709

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 709

gcuuagagaa ggggcucagc gagcu 25

<210> 710

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 710

cuuagagaag gggcucagcg agcug 25

<210> 711

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 711

cuggggcugc ccagcagcag cuuuu 25

<210> 712

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 712

gcugcccagc agcagcuuuu uggac 25

<210> 713

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 713

agcagcuuuu uggacaggcc ccccg 25

<210> 714

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 714

acaggccccc cgaggccgac ucgcc 25

<210> 715

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 715

caggcccccc gaggccgacu cgccc 25

<210> 716

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 716

aggccccccg aggccgacuc gcccg 25

<210> 717

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 717

ggccgacucg cccggggagc agccg 25

<210> 718

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 718

gccauuaaca gugccaucgu cuaug 25

<210> 719

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 719

ccaucgucua ugcgguccga cucgc 25

<210> 720

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 720

cgagucuucg ucgcaagugu cccug 25

<210> 721

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 721

ucgucgcaag ugucccugug gcccu 25

<210> 722

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 722

caaguguccc uguggcccuc ggccu 25

<210> 723

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 723

gucccugugg cccucggccu cggcc 25

<210> 724

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 724

ccuguggccc ucggccucgg ccagg 25

<210> 725

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 725

guggccgcgc uuaugcuucu cgccc 25

<210> 726

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 726

gcgcuuaugc uucucgccca ggacc 25

<210> 727

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 727

cuuaugcuuc ucgcccagga ccugg 25

<210> 728

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 728

ugcuucucgc ccaggaccug gugga 25

<210> 729

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 729

uggaaggccu cgcugaagug cugca 25

<210> 730

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 730

cugagcacca ugcccugcau gacgu 25

<210> 731

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 731

ugagcaccau gcccugcaug acguc 25

<210> 732

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 732

caccaugccc ugcaugacgu cgggc 25

<210> 733

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 733

accaugcccu gcaugacguc gggca 25

<210> 734

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 734

gcccugcaug acgucgggca gggcg 25

<210> 735

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 735

gaccgcgccc cgcgagcugu ucucg 25

<210> 736

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 736

cgcgccccgc gagcuguucu cgugg 25

<210> 737

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 737

guucucgugg uggcgcgccg ccucc 25

<210> 738

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 738

ccucuuccuc cucguccccg uucuc 25

<210> 739

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 739

cucuuccucc ucguccccgu ucucc 25

<210> 740

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 740

cuccucgucc ccguucuccg ggauc 25

<210> 741

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 741

ucguccccgu ucuccgggau caggu 25

<210> 742

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 742

cguccccguu cuccgggauc agguu 25

<210> 743

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 743

guccccguuc uccgggauca gguug 25

<210> 744

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 744

uuggggucgu ucucgcucuu gaacu 25

<210> 745

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 745

uucucgcucu ugaacuuggc cacca 25

<210> 746

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 746

gccaccacgg acuugagcgc gcugc 25

<210> 747

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 747

cugcuggcgc ugcccaccaa gucgc 25

<210> 748

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 748

gcgcugccca ccaagucgcu ggugc 25

<210> 749

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 749

cgcugcccac caagucgcug gugcc 25

<210> 750

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 750

ccaccaaguc gcuggugccg gguuc 25

<210> 751

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 751

caccaagucg cuggugccgg guucc 25

<210> 752

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 752

accaagucgc uggugccggg uuccg 25

<210> 753

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 753

ucgcuggugc cggguuccgg ggagc 25

<210> 754

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 754

cuggugccgg guuccgggga gcugg 25

<210> 755

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 755

gugccggguu ccggggagcu ggcgg 25

<210> 756

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 756

gagcuggcgg uggagagacc gucgu 25

<210> 757

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 757

agaccgucgu cggacuugac cguca 25

<210> 758

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 758

gaccgucguc ggacuugacc gucau 25

<210> 759

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 759

accgucgucg gacuugaccg ucaug 25

<210> 760

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 760

ccgucgucgg acuugaccgu caugg 25

<210> 761

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 761

cgauuugugc augugcgucu ucaug 25

<210> 762

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 762

gucuucaugu ggcgcuucag cuugc 25

<210> 763

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 763

cauguggcgc uucagcuugc uggcc 25

<210> 764

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 764

auguggcgcu ucagcuugcu ggccu 25

<210> 765

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 765

cagcuugcug gccugggugc acgcg 25

<210> 766

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 766

ggccugggug cacgcguggu cgcac 25

<210> 767

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 767

gcguggucgc acagguugca cuugu 25

<210> 768

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 768

cguggucgca cagguugcac uugua 25

<210> 769

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 769

gcacuuguag ggcuucucgc ccgug 25

<210> 770

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 770

gggcuucucg cccguguggc ugcgc 25

<210> 771

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 771

cguguggcug cgccggugca ccacc 25

<210> 772

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 772

gucuugccgc agaacucgca ugacu 25

<210> 773

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 773

agaacucgca ugacuuggac uugac 25

<210> 774

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 774

gaacucgcau gacuuggacu ugacc 25

<210> 775

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 775

aacucgcaug acuuggacuu gaccg 25

<210> 776

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 776

acucgcauga cuuggacuug accgg 25

<210> 777

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 777

gcaugacuug gacuugaccg ggggc 25

<210> 778

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 778

caugacuugg acuugaccgg gggcu 25

<210> 779

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 779

gacuuggacu ugaccggggg cuggg 25

<210> 780

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 780

acuuggacuu gaccgggggc uggga 25

<210> 781

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 781

uggacuugac cgggggcugg gaggg 25

<210> 782

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 782

acuugaccgg gggcugggag ggagg 25

<210> 783

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 783

cuugaccggg ggcugggagg gagga 25

<210> 784

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 784

uugaccgggg gcugggaggg aggag 25

<210> 785

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 785

accgggggcu gggagggagg agggg 25

<210> 786

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 786

gggagggagg aggggcggau ugcag 25

<210> 787

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 787

agggaggagg ggcggauugc agagg 25

<210> 788

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 788

gggaggaggg gcggauugca gagga 25

<210> 789

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 789

aggaggggcg gauugcagag gaggg 25

<210> 790

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 790

ggaggggcgg auugcagagg aggga 25

<210> 791

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 791

gaggggcgga uugcagagga gggag 25

<210> 792

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 792

aggggcggau ugcagaggag ggagg 25

<210> 793

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 793

ggggcggauu gcagaggagg gaggg 25

<210> 794

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 794

gggcggauug cagaggaggg agggg 25

<210> 795

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 795

cagaggaggg agggggggcg ucgcc 25

<210> 796

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 796

ggagggaggg ggggcgucgc cagga 25

<210> 797

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 797

gagggagggg gggcgucgcc aggaa 25

<210> 798

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 798

ggaggggggg cgucgccagg aaggg 25

<210> 799

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 799

ucgccaggaa gggcggcuug cuacc 25

<210> 800

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 800

caggaagggc ggcuugcuac cuggc 25

<210> 801

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 801

agggcggcuu gcuaccuggc uggaa 25

<210> 802

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 802

ggaaugguug caguaaccuu ugcau 25

<210> 803

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 803

gaaugguugc aguaaccuuu gcaua 25

<210> 804

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 804

gguugcagua accuuugcau agggc 25

<210> 805

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 805

guugcaguaa ccuuugcaua gggcu 25

<210> 806

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 806

caguaaccuu ugcauagggc ugggc 25

<210> 807

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 807

accuuugcau agggcugggc cggcc 25

<210> 808

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 808

ccuuugcaua gggcugggcc ggccu 25

<210> 809

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 809

cuuugcauag ggcugggccg gccug 25

<210> 810

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 810

uagggcuggg ccggccuggg gacag 25

<210> 811

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 811

ggcugggccg gccuggggac agcgg 25

<210> 812

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 812

gcugggccgg ccuggggaca gcggu 25

<210> 813

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 813

ucucuaaguc uccuagagaa aucca 25

<210> 814

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 814

cuaagucucc uagagaaauc caugg 25

<210> 815

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 815

uaagucuccu agagaaaucc auggc 25

<210> 816

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 816

gucuccuaga gaaauccaug gcggg 25

<210> 817

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 817

ccauggcggg aggcuccaua gccau 25

<210> 818

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 818

ggauucaacc gcagcacccu gucaa 25

<210> 819

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 819

accgcagcac ccugucaaag gcacu 25

<210> 820

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 820

ccgcagcacc cugucaaagg cacuc 25

<210> 821

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 821

cacccuguca aaggcacucg gguga 25

<210> 822

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 822

acccugucaa aggcacucgg gugau 25

<210> 823

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 823

cugucaaagg cacucgggug auggg 25

<210> 824

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 824

aaaggcacuc gggugauggg uggcc 25

<210> 825

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 825

aaggcacucg ggugaugggu ggcca 25

<210> 826

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 826

ggccagggcc aucucuuccg ccccc 25

<210> 827

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 827

cucuuccgcc cccaggcgcu cuaug 25

<210> 828

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 828

uuccgccccc aggcgcucua ugcgg 25

<210> 829

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 829

uccgccccca ggcgcucuau gcggu 25

<210> 830

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 830

ccgcccccag gcgcucuaug cggug 25

<210> 831

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 831

cgcccccagg cgcucuaugc ggugg 25

<210> 832

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 832

ugcggugggg guccaaguga ugucu 25

<210> 833

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 833

gguggggguc caagugaugu cucgg 25

<210> 834

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 834

ggggguccaa gugaugucuc ggugg 25

<210> 835

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 835

gugaugucuc ggugguggac uaaac 25

<210> 836

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 836

ugaugucucg gugguggacu aaaca 25

<210> 837

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 837

gaugucucgg ugguggacua aacag 25

<210> 838

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 838

augucucggu gguggacuaa acagg 25

<210> 839

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 839

ugucucggug guggacuaaa caggg 25

<210> 840

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 840

gucucggugg uggacuaaac agggg 25

<210> 841

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 841

ggugguggac uaaacagggg gggag 25

<210> 842

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 842

gugguggacu aaacaggggg ggagu 25

<210> 843

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 843

guggacuaaa caggggggga guggg 25

<210> 844

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 844

agugggugga aagcgcccuu cugcc 25

<210> 845

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 845

gguggaaagc gcccuucugc caggc 25

<210> 846

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 846

cggaagccuc ucucgauacu gaucc 25

<210> 847

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 847

cgauacugau ccugguauuc uuagc 25

<210> 848

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 848

gauccuggua uucuuagcag guuaa 25

<210> 849

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 849

auccugguau ucuuagcagg uuaaa 25

<210> 850

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 850

uccugguauu cuuagcaggu uaaag 25

<210> 851

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 851

guuauugucu gcaauaugaa uccca 25

<210> 852

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 852

ugucugcaau augaauccca uggag 25

<210> 853

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 853

cugcaauaug aaucccaugg agagg 25

<210> 854

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 854

aauaugaauc ccauggagag guggc 25

<210> 855

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 855

auaugaaucc cauggagagg uggcu 25

<210> 856

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 856

gaaucccaug gagagguggc uggga 25

<210> 857

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 857

aaggacauuc ugcaccuagu ccuga 25

<210> 858

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 858

aggacauucu gcaccuaguc cugaa 25

<210> 859

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 859

cuaguccuga agggauacca acccg 25

<210> 860

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 860

uaguccugaa gggauaccaa cccgc 25

<210> 861

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 861

aguccugaag ggauaccaac ccgcg 25

<210> 862

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 862

ugaagggaua ccaacccgcg ggguc 25

<210> 863

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 863

gaagggauac caacccgcgg gguca 25

<210> 864

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 864

aagggauacc aacccgcggg gucag 25

<210> 865

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 865

gcguguugca agagaaacca ugcac 25

<210> 866

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 866

gcaagagaaa ccaugcacug gugaa 25

<210> 867

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 867

uugcaaguug uacaugugua gcugc 25

<210> 868

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 868

ugcaaguugu acauguguag cugcu 25

<210> 869

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 869

ggaaaaacca cugucugugu uuuuu 25

<210> 870

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 870

guuucugguc uuuguuaagu ucuau 25

<210> 871

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 871

ccuggcuuuu uauuguauuu guuuc 25

<210> 872

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 872

aagaugacca aaggucauua caacc 25

<210> 873

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 873

aaaaaaaaaa auaaaagaug accaa 25

<210> 874

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 874

ugcuuaugug cccuguucaa aacag 25

<210> 875

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 875

aacuugaaau uuuaucuuuu acuau 25

<210> 876

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 876

uaacuugaaa uuuuaucuuu uacua 25

<210> 877

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 877

auggcaaugc agaauauuuu guuau 25

<210> 878

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 878

gcuuuaguca auacuuuuuu guaaa 25

<210> 879

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 879

acuaaauggu gcuuuauauu uagau 25

<210> 880

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 880

guuuuuuuca uugccaaaaa cuaaa 25

<210> 881

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 881

augcaguacu gcaagcuaau aacgu 25

<210> 882

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 882

aaugucacau ggauggcugu cauag 25

<210> 883

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 883

gaaugucaca uggauggcug ucaua 25

<210> 884

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 884

agaaugucac auggauggcu gucau 25

<210> 885

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 885

ggagccugcu agaaugucac augga 25

<210> 886

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 886

ugggggagcc ugcuagaaug ucaca 25

<210> 887

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 887

gagaagccau auaauggcgg uuugg 25

<210> 888

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 888

ugagaagcca uauaauggcg guuug 25

<210> 889

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 889

augagaagcc auauaauggc gguuu 25

<210> 890

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 890

gaugagaagc cauauaaugg cgguu 25

<210> 891

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 891

uuacagauga gaagccauau aaugg 25

<210> 892

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 892

acauuacaga ugagaagcca uauaa 25

<210> 893

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 893

ccacaguaua uuuuuuuaau uuggc 25

<210> 894

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 894

gcugccacag uauauuuuuu uaauu 25

<210> 895

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 895

uuuugguagu ggaaaaaaaa aagac 25

<210> 896

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 896

gguaucaaug uaccuuuuuu gguag 25

<210> 897

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 897

uuaaaaggua ucaauguacc uuuuu 25

<210> 898

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 898

uuuaacuguu gcuuguucuc uuaaa 25

<210> 899

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 899

uugaauuaaa uguucaucua guguu 25

<210> 900

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 900

uggucuuuuu ucuguauuuc uagaa 25

<210> 901

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 901

ugauuccuau gcuaaaauac auuua 25

<210> 902

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 902

uuaagauuau auaguacuua aauau 25

<210> 903

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 903

aaaaaaaaaa acauacauug gggaa 25

<210> 904

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 904

uuguaaaaaa aaaaaacaua cauug 25

<210> 905

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 905

guuguaaaaa aaaaaaacau acauu 25

<210> 906

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 906

gguuguaaaa aaaaaaaaca uacau 25

<210> 907

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 907

augccuugga uacacaccgc ucuuc 25

<210> 908

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 908

aaaugguagu ggaaauucua ugccu 25

<210> 909

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 909

cuuguuaucc auuuaaaaau gguag 25

<210> 910

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 910

acaagacuug uuauccauuu aaaaa 25

<210> 911

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 911

gcauuuuagg guuccauugu cuugg 25

<210> 912

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 912

acugcauuuu aggguuccau ugucu 25

<210> 913

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 913

auguuuaggg gggaacugca uuuua 25

<210> 914

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 914

uauguuuagg ggggaacugc auuuu 25

<210> 915

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 915

aaaaaacacu ucauuauguu uaggg 25

<210> 916

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 916

uaaaaaacac uucauuaugu uuagg 25

<210> 917

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 917

uuaaaaaaca cuucauuaug uuuag 25

<210> 918

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 918

uuuaaaaaac acuucauuau guuua 25

<210> 919

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 919

uuuuaaaaaa cacuucauua uguuu 25

<210> 920

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 920

ugauugcuuu cgcuucuaca gugca 25

<210> 921

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 921

gacgcaacau ugcaagcgcu gugaa 25

<210> 922

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 922

uacuugacua uugagcuuac uuacu 25

<210> 923

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 923

aaaaaaauug aacacaaucu cauug 25

<210> 924

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 924

ucccaguuua caggucuaua cuuaa 25

<210> 925

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 925

uucccaguuu acaggucuau acuua 25

<210> 926

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 926

gcacuguaca auuuucccag uuuac 25

<210> 927

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 927

gaguauaaaa uaaaccugcu cagau 25

<210> 928

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 928

aucuuuucuc uaaucagaga uacag 25

<210> 929

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 929

aauaaaagcu agcaucugcc ccagu 25

<210> 930

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 930

ugugcuauuu guguuaacau ggaag 25

<210> 931

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 931

acacugugug cuauuugugu uaaca 25

<210> 932

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 932

acuauuugcc auuuaaaacu agaac 25

<210> 933

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 933

aauaauauga uuuauuagca caacg 25

<210> 934

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 934

aggcugacaa uaagguuuga cagag 25

<210> 935

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 935

gaggcugaca auaagguuug acaga 25

<210> 936

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 936

agaggcugac aauaagguuu gacag 25

<210> 937

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 937

uauugaaagg aagaggcuga caaua 25

<210> 938

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 938

ccuuguauac cauauugaaa ggaag 25

<210> 939

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 939

uuaagaccuu guauaccaua uugaa 25

<210> 940

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 940

gauccagauc uacuugguug ucaag 25

<210> 941

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 941

caaaagaaau agauccagau cuacu 25

<210> 942

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 942

uuuaauaaug ucuuuuuaaa aauac 25

<210> 943

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 943

uggaacgcaa uuaaauacac uagua 25

<210> 944

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 944

uugaaugugu aaugugcaaa agccc 25

<210> 945

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 945

cuccugguga gagcuuaaaa gaaau 25

<210> 946

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 946

gcuccuggug agagcuuaaa agaaa 25

<210> 947

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 947

accaguauaa aagcuacuuu gcucc 25

<210> 948

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 948

uucuauauug uauuucucac aacaa 25

<210> 949

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 949

agcauugggu gagguaauaa accuu 25

<210> 950

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 950

uuguagcuua auucagcauu gggug 25

<210> 951

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 951

uaaacuugua gcuuaauuca gcauu 25

<210> 952

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 952

auaaacuugu agcuuaauuc agcau 25

<210> 953

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 953

cuuggaucua uuaaaaccac aucga 25

<210> 954

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 954

auuugguuuu aaaauaugag ugccu 25

<210> 955

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 955

aacagaacaa guuuauucua ucauu 25

<210> 956

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 956

uguaucaauu ggaaaggaag aaaaa 25

<210> 957

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 957

aaaggguuaa auguaucaau uggaa 25

<210> 958

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 958

ucucuaaagg guuaaaugua ucaau 25

<210> 959

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 959

uaugagcuaa augucugucu cuaaa 25

<210> 960

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 960

cuaugagcua aaugucuguc ucuaa 25

<210> 961

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 961

uaacgugagg aggaaaaaca gucuu 25

<210> 962

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 962

uacaguuuua uuuuauaacg ugagg 25

<210> 963

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 963

auguacaguu uuauuuuaua acgug 25

<210> 964

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 964

cuuagacagc auguauggua uguua 25

<210> 965

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 965

uuuuuuuaaa cuuagacagc augua 25

<210> 966

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 966

accguuugaa ugcaugaucu guaug 25

<210> 967

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 967

caccguuuga augcaugauc uguau 25

<210> 968

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 968

ucaccguuug aaugcaugau cugua 25

<210> 969

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 969

aucgcccucc agccccacuc ccugu 25

<210> 970

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 970

gaauaaugau auaaaaacug aauag 25

<210> 971

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 971

uacccuggag aaacacauga aaaaa 25

<210> 972

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 972

augccuuuua gcguguacag uaccc 25

<210> 973

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 973

augaaaacgc auggccaggu gggga 25

<210> 974

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 974

gcacaugaaa acgcauggcc aggug 25

<210> 975

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 975

ggcacaugaa aacgcauggc caggu 25

<210> 976

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 976

aggcacauga aaacgcaugg ccagg 25

<210> 977

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 977

accaggcaca ugaaaacgca uggcc 25

<210> 978

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 978

agcucaccag gcacaugaaa acgca 25

<210> 979

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 979

cugugcccag aguagcaagc ucacc 25

<210> 980

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 980

ccacaggaga agccacacgg gcgaa 25

<210> 981

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 981

ucacugucca caggagaagc cacac 25

<210> 982

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 982

cucacugucc acaggagaag ccaca 25

<210> 983

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 983

gaacuguagc aaucucacug uccac 25

<210> 984

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 984

acgcagcgac acuugugagu acugu 25

<210> 985

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 985

gacgcagcga cacuugugag uacug 25

<210> 986

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 986

gcccgggcag gcccagcuca aaaga 25

<210> 987

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 987

ggcccgggca ggcccagcuc aaaag 25

<210> 988

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 988

ccauauuagu gguccgggcc cgggc 25

<210> 989

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 989

cgccccauau uagugguccg ggccc 25

<210> 990

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 990

acgccccaua uuaguggucc gggcc 25

<210> 991

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 991

ggagcacgcc ccauauuagu ggucc 25

<210> 992

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 992

gggagcacgc cccauauuag ugguc 25

<210> 993

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 993

guggagggag cacgccccau auuag 25

<210> 994

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 994

ggggcgcagc ggcacgggaa gugga 25

<210> 995

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 995

cggggcgcag cggcacggga agugg 25

<210> 996

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 996

ucucggggcg cagcggcacg ggaag 25

<210> 997

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 997

gagggaucuc ggggcgcagc ggcac 25

<210> 998

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 998

ggagggaucu cggggcgcag cggca 25

<210> 999

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 999

uggacggagg gaucucgggg cgcag 25

<210> 1000

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1000

cggggagcug gacggaggga ucucg 25

<210> 1001

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1001

ccggggagcu ggacggaggg aucuc 25

<210> 1002

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1002

cccggggagc uggacggagg gaucu 25

<210> 1003

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1003

cacaccgccc ggggagcugg acgga 25

<210> 1004

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1004

ccacaccgcc cggggagcug gacgg 25

<210> 1005

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1005

ucuccacacc gcccggggag cugga 25

<210> 1006

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1006

cgcuucucca caccgcccgg ggagc 25

<210> 1007

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1007

aguuugcgcu ucuccacacc gcccg 25

<210> 1008

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1008

gaguuugcgc uucuccacac cgccc 25

<210> 1009

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1009

ggaguuugcg cuucuccaca ccgcc 25

<210> 1010

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1010

cucgucggag cacuccucgg agaac 25

<210> 1011

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1011

ccucgucgga gcacuccucg gagaa 25

<210> 1012

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1012

uuugccuccu cgucggagca cuccu 25

<210> 1013

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1013

agacaaucgc cuuuugccuc cucgu 25

<210> 1014

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1014

agcucaaaga ucccuuccuu agcuu 25

<210> 1015

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1015

guggcucgcc ggcuacgcgg ccucc 25

<210> 1016

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1016

uacucgcagu ggcucgccgg cuacg 25

<210> 1017

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1017

agaacgugua cucgcagugg cucgc 25

<210> 1018

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1018

caacacggag aacguguacu cgcag 25

<210> 1019

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1019

cugcccccgg ccgcgaugcc caaca 25

<210> 1020

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1020

cucgagaagg aguucgaccu gcccc 25

<210> 1021

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1021

uucucuaagc gcaucaagcu cgaga 25

<210> 1022

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1022

ggggccuguc caaaaagcug cugcu 25

<210> 1023

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1023

gggggccugu ccaaaaagcu gcugc 25

<210> 1024

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1024

gcuccccggg cgagucggcc ucggg 25

<210> 1025

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1025

ugcuccccgg gcgagucggc cucgg 25

<210> 1026

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1026

cugcuccccg ggcgagucgg ccucg 25

<210> 1027

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1027

gcugcucccc gggcgagucg gccuc 25

<210> 1028

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1028

ggcugcuccc cgggcgaguc ggccu 25

<210> 1029

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1029

ggccgcggcu gcuccccggg cgagu 25

<210> 1030

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1030

cuguuaaugg ccgcggcugc ucccc 25

<210> 1031

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1031

acuguuaaug gccgcggcug cuccc 25

<210> 1032

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1032

uagacgaugg cacuguuaau ggccg 25

<210> 1033

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1033

accgcauaga cgauggcacu guuaa 25

<210> 1034

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1034

ccggcgaguc ggaccgcaua gacga 25

<210> 1035

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1035

gacgaagacu cgguggccgg cgagu 25

<210> 1036

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1036

acacuugcga cgaagacucg guggc 25

<210> 1037

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1037

agggacacuu gcgacgaaga cucgg 25

<210> 1038

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1038

cacagggaca cuugcgacga agacu 25

<210> 1039

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1039

caccuggccg aggccgaggg ccaca 25

<210> 1040

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1040

ccaccuggcc gaggccgagg gccac 25

<210> 1041

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1041

agcgcggcca ccuggccgag gccga 25

<210> 1042

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1042

aagcgcggcc accuggccga ggccg 25

<210> 1043

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1043

aagcauaagc gcggccaccu ggccg 25

<210> 1044

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1044

ggcgagaagc auaagcgcgg ccacc 25

<210> 1045

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1045

agguccuggg cgagaagcau aagcg 25

<210> 1046

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1046

ucagcgaggc cuuccaccag guccu 25

<210> 1047

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1047

uucagcgagg ccuuccacca ggucc 25

<210> 1048

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1048

cagcacuuca gcgaggccuu ccacc 25

<210> 1049

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1049

cucagcucca ugcagcacuu cagcg 25

<210> 1050

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1050

gcccugcccg acgucaugca gggca 25

<210> 1051

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1051

gccgcgcccu gcccgacguc augca 25

<210> 1052

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1052

agccgcgccc ugcccgacgu caugc 25

<210> 1053

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1053

gcucgcgggg cgcggucgug ggcgu 25

<210> 1054

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1054

agcucgcggg gcgcggucgu gggcg 25

<210> 1055

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1055

agaacagcuc gcggggcgcg gucgu 25

<210> 1056

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1056

gagaacagcu cgcggggcgc ggucg 25

<210> 1057

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1057

caccacgaga acagcucgcg gggcg 25

<210> 1058

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1058

cgcgccacca cgagaacagc ucgcg 25

<210> 1059

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1059

gcgcgccacc acgagaacag cucgc 25

<210> 1060

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1060

ggcgcgccac cacgagaaca gcucg 25

<210> 1061

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1061

uacggcuucg ggcugagccu ggagg 25

<210> 1062

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1062

gacuacggcu ucgggcugag ccugg 25

<210> 1063

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1063

cuggacuacg gcuucgggcu gagcc 25

<210> 1064

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1064

cucgcucucc cuggacuacg gcuuc 25

<210> 1065

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1065

ucucgcucuc ccuggacuac ggcuu 25

<210> 1066

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1066

acugccucuc gcucucccug gacua 25

<210> 1067

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1067

cuccucgacu gccucucgcu cuccc 25

<210> 1068

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1068

gccagcagcg cgcucaaguc cgugg 25

<210> 1069

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1069

agcgccagca gcgcgcucaa guccg 25

<210> 1070

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1070

cggaacccgg caccagcgac uuggu 25

<210> 1071

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1071

ccggaacccg gcaccagcga cuugg 25

<210> 1072

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1072

uccccggaac ccggcaccag cgacu 25

<210> 1073

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1073

ucuccaccgc cagcuccccg gaacc 25

<210> 1074

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1074

gacggucucu ccaccgccag cuccc 25

<210> 1075

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1075

cccccaugac ggucaagucc gacga 25

<210> 1076

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1076

cacaugcaca aaucgucccc cauga 25

<210> 1077

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1077

aaccugugcg accacgcgug caccc 25

<210> 1078

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1078

ugguggugca ccggcgcagc cacac 25

<210> 1079

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1079

cugguggugc accggcgcag ccaca 25

<210> 1080

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1080

auuucagagc aaccuggugg ugcac 25

<210> 1081

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1081

acguucaaau uucagagcaa ccugg 25

<210> 1082

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1082

aagacguuca aauuucagag caacc 25

<210> 1083

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1083

ucaaguccaa gucaugcgag uucug 25

<210> 1084

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1084

uccgccccuc cucccuccca gcccc 25

<210> 1085

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1085

cagccaggua gcaagccgcc cuucc 25

<210> 1086

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1086

aaagguuacu gcaaccauuc cagcc 25

<210> 1087

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1087

cccaggccgg cccagcccua ugcaa 25

<210> 1088

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1088

gucuagccca ccgcuguccc caggc 25

<210> 1089

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1089

acacgucuag cccaccgcug ucccc 25

<210> 1090

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1090

cucuaggaga cuuagagagc uggca 25

<210> 1091

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1091

ucucuaggag acuuagagag cuggc 25

<210> 1092

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1092

gauuucucua ggagacuuag agagc 25

<210> 1093

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1093

ggagccuccc gccauggauu ucucu 25

<210> 1094

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1094

ccaauggcua uggagccucc cgcca 25

<210> 1095

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1095

gugcugcggu ugaauccaau ggcua 25

<210> 1096

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1096

gacagggugc ugcgguugaa uccaa 25

<210> 1097

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1097

cccgagugcc uuugacaggg ugcug 25

<210> 1098

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1098

acccaucacc cgagugccuu ugaca 25

<210> 1099

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1099

cacccaucac ccgagugccu uugac 25

<210> 1100

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1100

cgccuggggg cggaagagau ggccc 25

<210> 1101

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1101

auagagcgcc ugggggcgga agaga 25

<210> 1102

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1102

ccccaccgca uagagcgccu ggggg 25

<210> 1103

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1103

gacccccacc gcauagagcg ccugg 25

<210> 1104

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1104

ggacccccac cgcauagagc gccug 25

<210> 1105

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1105

uggaccccca ccgcauagag cgccu 25

<210> 1106

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1106

uuggaccccc accgcauaga gcgcc 25

<210> 1107

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1107

uuuaguccac caccgagaca ucacu 25

<210> 1108

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1108

gagagaggcu uccggccugg cagaa 25

<210> 1109

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1109

cgagagaggc uuccggccug gcaga 25

<210> 1110

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1110

ucaguaucga gagaggcuuc cggcc 25

<210> 1111

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1111

caggaucagu aucgagagag gcuuc 25

<210> 1112

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1112

agaauaccag gaucaguauc gagag 25

<210> 1113

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1113

accccuuuaa ccugcuaaga auacc 25

<210> 1114

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1114

auguccuucc cagccaccuc uccau 25

<210> 1115

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1115

aauguccuuc ccagccaccu cucca 25

<210> 1116

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1116

cgcggguugg uaucccuuca ggacu 25

<210> 1117

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1117

ugaccccgcg gguugguauc ccuuc 25

<210> 1118

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1118

acggaagucc ccugaccccg cgggu 25

<210> 1119

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1119

gaacacggaa guccccugac cccgc 25

<210> 1120

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1120

cgaacacgga aguccccuga ccccg 25

<210> 1121

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1121

uaagaaucua cuuagaaagc gaaca 25

<210> 1122

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1122

ucuugcaaca cgcacagaac acuca 25

<210> 1123

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1123

uugcaaacag ccauucacca gugca 25

<210> 1124

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1124

uaaggcucaa cuuacaaaua cccug 25

<210> 1125

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1125

aaggcucaac uuacaaauac ccugc 25

<210> 1126

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1126

aggcucaacu uacaaauacc cugcg 25

<210> 1127

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1127

gcggggcaua uucugcacuc auccc 25

<210> 1128

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1128

gcauauucug cacucauccc aggcg 25

<210> 1129

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1129

cauauucugc acucauccca ggcgu 25

<210> 1130

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1130

auauucugca cucaucccag gcgug 25

<210> 1131

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1131

ggauuagagc uccaugugca gaacg 25

<210> 1132

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1132

gauuagagcu ccaugugcag aacga 25

<210> 1133

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1133

auuagagcuc caugugcaga acgag 25

<210> 1134

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1134

agagcuccau gugcagaacg agggg 25

<210> 1135

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1135

uccaugugca gaacgagggg aggag 25

<210> 1136

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1136

ggaugagugc agaauaugcc ccgca 25

<210> 1137

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1137

gggaugagug cagaauaugc cccgc 25

<210> 1138

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1138

acauggagcu cuaaucccca cgccu 25

<210> 1139

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1139

cacauggagc ucuaaucccc acgcc 25

<210> 1140

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1140

gccucuccuc cccucguucu gcaca 25

<210> 1141

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1141

ucacagauaa acuucugcac uggag 25

<210> 1142

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1142

uucacagaua aacuucugca cugga 25

<210> 1143

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1143

uuucacagau aaacuucugc acugg 25

<210> 1144

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1144

uucuuucaca gauaaacuuc ugcac 25

<210> 1145

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1145

cauuuaccug cuauguguuc cuguu 25

<210> 1146

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1146

auuuaccugc uauguguucc uguuu 25

<210> 1147

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1147

uuuaccugcu auguguuccu guuug 25

<210> 1148

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1148

acguugauaa acaaucguca uccuc 25

<210> 1149

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1149

acaaucguca uccucuggcg ugacc 25

<210> 1150

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1150

ggcgugaccu ggaugccaac cucca 25

<210> 1151

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1151

gcgugaccug gaugccaacc uccac 25

<210> 1152

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1152

accuggaugc caaccuccac gggau 25

<210> 1153

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1153

gauuggaugc uuuuuucauc ucgau 25

<210> 1154

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1154

augcuuuuuu caucucgauu gguga 25

<210> 1155

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1155

ugcuuuuuuc aucucgauug gugaa 25

<210> 1156

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1156

gcuuuuuuca ucucgauugg ugaag 25

<210> 1157

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1157

uuuucaucuc gauuggugaa gggga 25

<210> 1158

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1158

ucaucucgau uggugaaggg gaagg 25

<210> 1159

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1159

cuuauccaca gcuuuuucua agcag 25

<210> 1160

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1160

cgauaaaaau aagaaugucc cccaa 25

<210> 1161

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1161

gauaaaaaua agaauguccc ccaau 25

<210> 1162

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1162

aauguccccc aaugggaagu ucauc 25

<210> 1163

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1163

gggaaguuca ucuggcacug cccac 25

<210> 1164

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1164

guucaucugg cacugcccac aggug 25

<210> 1165

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1165

caucuggcac ugcccacagg ugagg 25

<210> 1166

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1166

aggugaggag gucaugaucc ccuuc 25

<210> 1167

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1167

caugaucccc uucuggagcu cccaa 25

<210> 1168

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1168

augauccccu ucuggagcuc ccaac 25

<210> 1169

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1169

cccuucugga gcucccaacg ggccg 25

<210> 1170

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1170

cuggagcucc caacgggccg ugguc 25

<210> 1171

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1171

uggucugguu caucaucugu aagaa 25

<210> 1172

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1172

caucaucugu aagaauggcu ucaag 25

<210> 1173

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1173

ucuguaagaa uggcuucaag aggcu 25

<210> 1174

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1174

agaauggcuu caagaggcuc ggcug 25

<210> 1175

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1175

uggcuucaag aggcucggcu guggu 25

<210> 1176

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1176

acacauagca gguaaaugag aagca 25

<210> 1177

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1177

uuugccccaa acaggaacac auagc 25

<210> 1178

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1178

ucaucuagag gaauuugccc caaac 25

<210> 1179

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1179

acgauuguuu aucaacguca ucuag 25

<210> 1180

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1180

gagguuggca uccaggucac gccag 25

<210> 1181

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1181

uccaaucccg uggagguugg caucc 25

<210> 1182

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1182

aaaaagcauc caaucccgug gaggu 25

<210> 1183

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1183

augaaaaaag cauccaaucc cgugg 25

<210> 1184

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1184

gagaugaaaa aagcauccaa ucccg 25

<210> 1185

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1185

ggcagccucu gcuuagaaaa agcug 25

<210> 1186

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1186

ucgagcacaa acggaaacaa ugcaa 25

<210> 1187

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1187

cauucuuauu uuuaucgagc acaaa 25

<210> 1188

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1188

cagugccaga ugaacuuccc auugg 25

<210> 1189

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1189

gcagugccag augaacuucc cauug 25

<210> 1190

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1190

ggcagugcca gaugaacuuc ccauu 25

<210> 1191

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1191

gggcagugcc agaugaacuu cccau 25

<210> 1192

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1192

aggggaucau gaccuccuca ccugu 25

<210> 1193

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1193

aaggggauca ugaccuccuc accug 25

<210> 1194

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1194

cacggcccgu ugggagcucc agaag 25

<210> 1195

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1195

ccacggcccg uugggagcuc cagaa 25

<210> 1196

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1196

accacggccc guugggagcu ccaga 25

<210> 1197

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1197

augaugaacc agaccacggc ccguu 25

<210> 1198

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1198

gaugaugaac cagaccacgg cccgu 25

<210> 1199

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1199

uucuuacaga ugaugaacca gacca 25

<210> 1200

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1200

cgagaauucc cguuugcuua agugc 25

<210> 1201

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1201

gagaauuccc guuugcuuaa gugcu 25

<210> 1202

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1202

agaauucccg uuugcuuaag ugcug 25

<210> 1203

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1203

uaagugcugg gguuugccuu gcuug 25

<210> 1204

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1204

gguuugccuu gcuugcggcg agaca 25

<210> 1205

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1205

uugccuugcu ugcggcgaga caugg 25

<210> 1206

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1206

ugccuugcuu gcggcgagac auggu 25

<210> 1207

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1207

gcuugcggcg agacauggug ggcug 25

<210> 1208

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1208

cuugcggcga gacauggugg gcugc 25

<210> 1209

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1209

uugcggcgag acaugguggg cugcg 25

<210> 1210

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1210

cggcggcggc ggcggcggcg gcggg 25

<210> 1211

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1211

ggcggcggcg gcggcgggcg gacga 25

<210> 1212

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1212

cggcggcggc gggcggacga cggcu 25

<210> 1213

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1213

gggcggacga cggcucgguu cacau 25

<210> 1214

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1214

ggcggacgac ggcucgguuc acauc 25

<210> 1215

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1215

acggcucggu ucacaucggg agagc 25

<210> 1216

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1216

cggcucgguu cacaucggga gagcc 25

<210> 1217

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1217

caucgggaga gccggguuag aaaga 25

<210> 1218

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1218

aaauaaauua gaaauaauac aaaga 25

<210> 1219

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1219

auuagaaaua auacaaagau ggcgc 25

<210> 1220

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1220

uuagaaauaa uacaaagaug gcgca 25

<210> 1221

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1221

aagauggcgc agggaagaug aauug 25

<210> 1222

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1222

agauggcgca gggaagauga auugu 25

<210> 1223

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1223

aagaugaauu gugggagagc cguca 25

<210> 1224

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1224

ggcaaacccc agcacuuaag caaac 25

<210> 1225

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1225

aggcaaaccc cagcacuuaa gcaaa 25

<210> 1226

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1226

agcccaccau gucucgccgc aagca 25

<210> 1227

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1227

cucuggaguc uccuucuuuc uaacc 25

<210> 1228

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1228

aaggcacuga ugaagauauu uucuc 25

<210> 1229

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1229

uuucuaauuu auuuuggaug ucaaa 25

<210> 1230

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1230

ucuuuguauu auuucuaauu uauuu 25

<210> 1231

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1231

aaaaaagcuu aaaaaaaagc cauga 25

<210> 1232

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1232

gggaguuugg cuucucaucu gugca 25

<210> 1233

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1233

ucucaucugu gcauggccuc uaaac 25

<210> 1234

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1234

cucaucugug cauggccucu aaacu 25

<210> 1235

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1235

uggccucuaa acugggcagu gacca 25

<210> 1236

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1236

ucuaaacugg gcagugacca uggcc 25

<210> 1237

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1237

ccauggccug gucaccuccc cacuc 25

<210> 1238

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1238

ccuggucacc uccccacucu ggacc 25

<210> 1239

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1239

cuggucaccu ccccacucug gaccu 25

<210> 1240

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1240

gaccuggguu gccccucugu aaaca 25

<210> 1241

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1241

cuggguugcc ccucuguaaa caagg 25

<210> 1242

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1242

aaaucuuaug caauuuuugc caaga 25

<210> 1243

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1243

aaucuuaugc aauuuuugcc aagau 25

<210> 1244

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1244

ugcaauuuuu gccaagaugg gagua 25

<210> 1245

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1245

gcaauuuuug ccaagauggg aguau 25

<210> 1246

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1246

caauuuuugc caagauggga guaug 25

<210> 1247

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1247

agaugggagu auggggagag aagag 25

<210> 1248

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1248

gaguaugggg agagaagagu ggaaa 25

<210> 1249

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1249

agagcucagu gagaugagau aucaa 25

<210> 1250

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1250

gagcucagug agaugagaua ucaaa 25

<210> 1251

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1251

agcucaguga gaugagauau caaag 25

<210> 1252

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1252

ucauuccauc ucccuaaucu ccaau 25

<210> 1253

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1253

aaucuccaau uggcaaagcc agacu 25

<210> 1254

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1254

aucuccaauu ggcaaagcca gacuu 25

<210> 1255

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1255

ucuccaauug gcaaagccag acuug 25

<210> 1256

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1256

aagccagacu uggggcaaua cagac 25

<210> 1257

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1257

uaucaccaaa uguucuuucu ucagc 25

<210> 1258

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1258

cuuucuucag cuggaauuua aaaua 25

<210> 1259

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1259

uaaaauaugg acucauccgu aaaau 25

<210> 1260

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1260

ggaauaauaa uaguauaugc uucau 25

<210> 1261

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1261

gaauaauaau aguauaugcu ucaua 25

<210> 1262

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1262

gcuugugaac uaaaaugcug ccucc 25

<210> 1263

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1263

acaccucagc agaaacaaag uuauc 25

<210> 1264

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1264

caggcccuuu ccccaauucc uaguu 25

<210> 1265

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1265

aggcccuuuc cccaauuccu aguuu 25

<210> 1266

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1266

aauuccuagu uugggucaga agaaa 25

<210> 1267

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1267

auuccuaguu ugggucagaa gaaaa 25

<210> 1268

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1268

aguuuggguc agaagaaaag ggaaa 25

<210> 1269

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1269

guuuggguca gaagaaaagg gaaaa 25

<210> 1270

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1270

ggucagaaga aaagggaaaa gggag 25

<210> 1271

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1271

agaaaaggga aaagggagag gaaaa 25

<210> 1272

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1272

ggaaaaagga aaagaauaug acguc 25

<210> 1273

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1273

gaaaaaggaa aagaauauga cguca 25

<210> 1274

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1274

aaaaaggaaa agaauaugac gucag 25

<210> 1275

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1275

aaaaggaaaa gaauaugacg ucagg 25

<210> 1276

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1276

aggaaaagaa uaugacguca ggggg 25

<210> 1277

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1277

ugacgucagg gggaggcaag ucagu 25

<210> 1278

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1278

gacgucaggg ggaggcaagu caguu 25

<210> 1279

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1279

ggaacacaga uccuaacaca guagc 25

<210> 1280

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1280

ccuaacacag uagcugguac cugau 25

<210> 1281

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1281

guaccugaua ggugccuaua uguga 25

<210> 1282

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1282

cugauaggug ccuauaugug augga 25

<210> 1283

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1283

ugauaggugc cuauauguga uggau 25

<210> 1284

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1284

uaggugccua uaugugaugg auggg 25

<210> 1285

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1285

gguggacagc ccgacagaug aaaaa 25

<210> 1286

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1286

gacagaugaa aaauggacaa uuaug 25

<210> 1287

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1287

agaugaaaaa uggacaauua ugagg 25

<210> 1288

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1288

gaugaaaaau ggacaauuau gagga 25

<210> 1289

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1289

augaaaaaug gacaauuaug aggag 25

<210> 1290

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1290

auuaugagga ggggagagug cagac 25

<210> 1291

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1291

uuaugaggag gggagagugc agaca 25

<210> 1292

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1292

uaugaggagg ggagagugca gacag 25

<210> 1293

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1293

ggaagcuuca ccuccuuuac aauuu 25

<210> 1294

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1294

gaagcuucac cuccuuuaca auuuu 25

<210> 1295

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1295

uccuuuacaa uuuugggagu ccaca 25

<210> 1296

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1296

uacaauuuug ggaguccaca cggca 25

<210> 1297

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1297

caucaccaag agagccuucc gaaag 25

<210> 1298

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1298

gagagccuuc cgaaagaggc ccccc 25

<210> 1299

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1299

agagccuucc gaaagaggcc ccccu 25

<210> 1300

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1300

uccgaaagag gccccccugg gcaaa 25

<210> 1301

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1301

gccccccugg gcaaacggcc accga 25

<210> 1302

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1302

ccugggcaaa cggccaccga uggag 25

<210> 1303

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1303

ccacccacgc ccccacccua aucag 25

<210> 1304

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1304

cccuaaucag aggccaaacc cuucc 25

<210> 1305

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1305

acuagcuuca aaguuguauu gaccc 25

<210> 1306

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1306

aagaguagau gccauaucuc uuuuc 25

<210> 1307

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1307

uuucuggccu auguuauuac cugua 25

<210> 1308

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1308

guuauuaccu guauggacuu ugcac 25

<210> 1309

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1309

cuaucugcuc uuacuuaugc acacc 25

<210> 1310

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1310

uaucugcucu uacuuaugca caccu 25

<210> 1311

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1311

aucugcucuu acuuaugcac accug 25

<210> 1312

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1312

ccugucuagc ugccuuccuu aucac 25

<210> 1313

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1313

uuccuuauca caggaauagc accca 25

<210> 1314

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1314

gaguagaacc cccuauaaac uaguc 25

<210> 1315

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1315

ccuauaaacu agucugguuu gccca 25

<210> 1316

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1316

cuauaaacua gucugguuug cccau 25

<210> 1317

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1317

uauaaacuag ucugguuugc ccaug 25

<210> 1318

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1318

ucugguuugc ccauggggca caguc 25

<210> 1319

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1319

auggggcaca gucaggcugu uuucc 25

<210> 1320

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1320

uggggcacag ucaggcuguu uucca 25

<210> 1321

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1321

ggcacaguca ggcuguuuuc caggg 25

<210> 1322

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1322

gcacagucag gcuguuuucc agggu 25

<210> 1323

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1323

cacagucagg cuguuuucca gggug 25

<210> 1324

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1324

acacacguau guguugugau cccug 25

<210> 1325

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1325

uugugauccc ugugguuuga gaguu 25

<210> 1326

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1326

ucccuaaaag ucaaaauauu cucaa 25

<210> 1327

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1327

cccuaaaagu caaaauauuc ucaau 25

<210> 1328

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1328

cccucaauca gcacauacac acaaa 25

<210> 1329

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1329

ucagcacaua cacacaaaag guacc 25

<210> 1330

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1330

uguaauucuu uuccugcuca aagac 25

<210> 1331

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1331

ccccaaccaa aaacccuugc cacca 25

<210> 1332

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1332

cccaaccaaa aacccuugcc accau 25

<210> 1333

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1333

aaaaacccuu gccaccaugg gagcc 25

<210> 1334

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1334

aaaacccuug ccaccauggg agccu 25

<210> 1335

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1335

aaacccuugc caccauggga gccug 25

<210> 1336

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1336

ccaccauggg agccuggggc agaga 25

<210> 1337

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1337

cacagugaag ucaaacugua auucc 25

<210> 1338

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1338

ucaaacugua auuccaggcu cuaaa 25

<210> 1339

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1339

uuuuucugag agucucuaaa uuaca 25

<210> 1340

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1340

uuuucugaga gucucuaaau uacaa 25

<210> 1341

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1341

acaccuaaga aacauacugc agcuc 25

<210> 1342

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1342

aaagagaaca aacaaaccaa agaga 25

<210> 1343

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1343

aagagaacaa acaaaccaaa gagaa 25

<210> 1344

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1344

aacaaaccaa agagaaggga uccag 25

<210> 1345

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1345

uaugugaaaa gucaauugau aauga 25

<210> 1346

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1346

aaagucaauu gauaaugaag gcuuu 25

<210> 1347

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1347

uugauaauga aggcuuuagg auaac 25

<210> 1348

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1348

auaaugaagg cuuuaggaua accgg 25

<210> 1349

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1349

uaaugaaggc uuuaggauaa ccgga 25

<210> 1350

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1350

aaugaaggcu uuaggauaac cggag 25

<210> 1351

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1351

augauugaaa gcaaugcacc ugugc 25

<210> 1352

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1352

gaaagcaaug caccugugca ggaaa 25

<210> 1353

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1353

augcaccugu gcaggaaaug gauua 25

<210> 1354

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1354

ugugcaggaa auggauuacg gaaac 25

<210> 1355

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1355

gugcaggaaa uggauuacgg aaaca 25

<210> 1356

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1356

ucaugaaauc ccagaaaacc agaac 25

<210> 1357

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1357

caugaaaucc cagaaaacca gaacc 25

<210> 1358

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1358

cagaaaacca gaaccgggaa aguuc 25

<210> 1359

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1359

ccagaaccgg gaaaguucug gaagu 25

<210> 1360

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1360

gaaaaacaaa ucaugacuua agcaa 25

<210> 1361

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1361

cguuuacaga augccuuguc ccacg 25

<210> 1362

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1362

aggccauggu cacugcccag uuuag 25

<210> 1363

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1363

ccagaguggg gaggugacca ggcca 25

<210> 1364

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1364

ccagguccag aguggggagg ugacc 25

<210> 1365

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1365

ggggcaaccc agguccagag ugggg 25

<210> 1366

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1366

agaggggcaa cccaggucca gagug 25

<210> 1367

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1367

cagaggggca acccaggucc agagu 25

<210> 1368

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1368

acagaggggc aacccagguc cagag 25

<210> 1369

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1369

cuccuuguuu acagaggggc aaccc 25

<210> 1370

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1370

uauuacaacc uccuuguuua cagag 25

<210> 1371

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1371

uuauuacaac cuccuuguuu acaga 25

<210> 1372

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1372

uuuauuacaa ccuccuuguu uacag 25

<210> 1373

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1373

uaagauuuau aagacauuag gguau 25

<210> 1374

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1374

auugcauaag auuuauaaga cauua 25

<210> 1375

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1375

aauugcauaa gauuuauaag acauu 25

<210> 1376

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1376

cucuucucuc cccauacucc caucu 25

<210> 1377

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1377

uugauaucuc aucucacuga gcucu 25

<210> 1378

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1378

uuugauaucu caucucacug agcuc 25

<210> 1379

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1379

cuuugccaau uggagauuag ggaga 25

<210> 1380

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1380

gucuggcuuu gccaauugga gauua 25

<210> 1381

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1381

agucuggcuu ugccaauugg agauu 25

<210> 1382

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1382

uugccccaag ucuggcuuug ccaau 25

<210> 1383

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1383

gaaccagucu guauugcccc aaguc 25

<210> 1384

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1384

ggugauaaau cauuaggaau gagcu 25

<210> 1385

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1385

aaagaacauu uggugauaaa ucauu 25

<210> 1386

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1386

aaauuccagc ugaagaaaga acauu 25

<210> 1387

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1387

auauacuauu auuauuccua uuuua 25

<210> 1388

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1388

aagcucggag cacuuacucu gcucu 25

<210> 1389

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1389

gaggcagcau uuuaguucac aagcu 25

<210> 1390

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1390

ugagguguaa cuaauaaaua ccagg 25

<210> 1391

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1391

ugcugaggug uaacuaauaa auacc 25

<210> 1392

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1392

gggccugaua acuuuguuuc ugcug 25

<210> 1393

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1393

ugacccaaac uaggaauugg ggaaa 25

<210> 1394

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1394

cugacccaaa cuaggaauug gggaa 25

<210> 1395

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1395

uucuucugac ccaaacuagg aauug 25

<210> 1396

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1396

uuucuucuga cccaaacuag gaauu 25

<210> 1397

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1397

uuuucuucug acccaaacua ggaau 25

<210> 1398

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1398

uuucccuuuu cuucugaccc aaacu 25

<210> 1399

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1399

ccuaucaggu accagcuacu guguu 25

<210> 1400

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1400

cauccaucac auauaggcac cuauc 25

<210> 1401

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1401

ggcuguccac ccauccauca cauau 25

<210> 1402

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1402

cauaauuguc cauuuuucau cuguc 25

<210> 1403

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1403

ucauaauugu ccauuuuuca ucugu 25

<210> 1404

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1404

guguggacuc ccaaaauugu aaagg 25

<210> 1405

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1405

gccgugugga cucccaaaau uguaa 25

<210> 1406

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1406

gaaauaauuu guaugccaug ccgug 25

<210> 1407

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1407

ggagaauugg auuuuauuuc ucaau 25

<210> 1408

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1408

uggagaauug gauuuuauuu cucaa 25

<210> 1409

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1409

gaaggcucuc uuggugaugg agaau 25

<210> 1410

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1410

cucuuucgga aggcucucuu gguga 25

<210> 1411

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1411

gggggccucu uucggaaggc ucucu 25

<210> 1412

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1412

uuugcccagg ggggccucuu ucgga 25

<210> 1413

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1413

gccguuugcc caggggggcc ucuuu 25

<210> 1414

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1414

uccaucggug gccguuugcc caggg 25

<210> 1415

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1415

cuccaucggu ggccguuugc ccagg 25

<210> 1416

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1416

ucuccaucgg uggccguuug cccag 25

<210> 1417

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1417

cucuccaucg guggccguuu gccca 25

<210> 1418

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1418

ccucuccauc gguggccguu ugccc 25

<210> 1419

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1419

gaggacuggc agaccucucc aucgg 25

<210> 1420

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1420

gaagaggacu ggcagaccuc uccau 25

<210> 1421

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1421

gggcgugggu gggguagaag aggac 25

<210> 1422

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1422

ggugggggcg uggguggggu agaag 25

<210> 1423

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1423

ucugauuagg gugggggcgu gggug 25

<210> 1424

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1424

cucugauuag ggugggggcg ugggu 25

<210> 1425

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1425

ccucugauua gggugggggc guggg 25

<210> 1426

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1426

uggccucuga uuaggguggg ggcgu 25

<210> 1427

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1427

uuggccucug auuagggugg gggcg 25

<210> 1428

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1428

aggguuuggc cucugauuag ggugg 25

<210> 1429

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1429

aaggguuugg ccucugauua gggug 25

<210> 1430

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1430

gaaggguuug gccucugauu agggu 25

<210> 1431

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1431

ggaaggguuu ggccucugau uaggg 25

<210> 1432

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1432

ccaggaaggg uuuggccucu gauua 25

<210> 1433

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1433

uccaggaagg guuuggccuc ugauu 25

<210> 1434

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1434

uuuaucacag gcuccaggaa ggguu 25

<210> 1435

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1435

uugcuuuuau cacaggcucc aggaa 25

<210> 1436

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1436

guugcuuuua ucacaggcuc cagga 25

<210> 1437

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1437

aacaguugcu uuuaucacag gcucc 25

<210> 1438

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1438

gcaagcuaac aguugcuuuu aucac 25

<210> 1439

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1439

aucuacucuu agacauaaca cacca 25

<210> 1440

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1440

caucuacucu uagacauaac acacc 25

<210> 1441

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1441

aauaacauag gccagaaaag agaua 25

<210> 1442

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1442

gcaaagucca uacagguaau aacau 25

<210> 1443

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1443

gcugauucca gugcaaaguc cauac 25

<210> 1444

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1444

cgauacaggg cuggcucuau gcccc 25

<210> 1445

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1445

agauggcuga aaagcgauac agggc 25

<210> 1446

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1446

agugagaugg cugaaaagcg auaca 25

<210> 1447

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1447

uagugagaug gcugaaaagc gauac 25

<210> 1448

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1448

gacuugggag uuaucuguag ugaga 25

<210> 1449

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1449

uaaggaaggc agcuagacag gacuu 25

<210> 1450

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1450

auaaggaagg cagcuagaca ggacu 25

<210> 1451

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1451

ccugugauaa ggaaggcagc uagac 25

<210> 1452

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1452

uugggugcua uuccugugau aagga 25

<210> 1453

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1453

gaccuugggu gcuauuccug ugaua 25

<210> 1454

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1454

cuacucugag guacugaugg accuu 25

<210> 1455

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1455

ucuacucuga gguacugaug gaccu 25

<210> 1456

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1456

aggggguucu acucugaggu acuga 25

<210> 1457

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1457

cuaguuuaua ggggguucua cucug 25

<210> 1458

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1458

ugggcaaacc agacuaguuu auagg 25

<210> 1459

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1459

augggcaaac cagacuaguu uauag 25

<210> 1460

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1460

caugggcaaa ccagacuagu uuaua 25

<210> 1461

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1461

ccaugggcaa accagacuag uuuau 25

<210> 1462

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1462

ggaaaacagc cugacugugc cccau 25

<210> 1463

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1463

uggaaaacag ccugacugug cccca 25

<210> 1464

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1464

ggcagagaau gucugcaccc caccc 25

<210> 1465

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1465

ugacguuaua uguaagcauc acaac 25

<210> 1466

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1466

ggaagcucca aacucucaaa ccaca 25

<210> 1467

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1467

gggaagcucc aaacucucaa accac 25

<210> 1468

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1468

cccauugaga auauuuugac uuuua 25

<210> 1469

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1469

gcccauugag aauauuuuga cuuuu 25

<210> 1470

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1470

ccuuuugugu guaugugcug auuga 25

<210> 1471

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1471

accuuuugug uguaugugcu gauug 25

<210> 1472

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1472

agcaggaaaa gaauuacagu uuucc 25

<210> 1473

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1473

gguauugaau ugccugucuu ugagc 25

<210> 1474

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1474

ggcaaggguu uuugguuggg ggaag 25

<210> 1475

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1475

uggcaagggu uuuugguugg gggaa 25

<210> 1476

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1476

guggcaaggg uuuuugguug gggga 25

<210> 1477

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1477

caugguggca aggguuuuug guugg 25

<210> 1478

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1478

ccaugguggc aaggguuuuu gguug 25

<210> 1479

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1479

cccauggugg caaggguuuu ugguu 25

<210> 1480

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1480

ucccauggug gcaaggguuu uuggu 25

<210> 1481

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1481

aggcucccau gguggcaagg guuuu 25

<210> 1482

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1482

cugccccagg cucccauggu ggcaa 25

<210> 1483

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1483

ucugccccag gcucccaugg uggca 25

<210> 1484

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1484

ccuucucugc cccaggcucc caugg 25

<210> 1485

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1485

gugccuucuc ugccccaggc uccca 25

<210> 1486

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1486

gacuucacug ugccuucucu gcccc 25

<210> 1487

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1487

aaaaaugaca gcaccauuua gagcc 25

<210> 1488

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1488

uuuccagagc ugcaguaugu uucuu 25

<210> 1489

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1489

gggugaccuc uggaucccuu cucuu 25

<210> 1490

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1490

acuuuucaca uaugagggug accuc 25

<210> 1491

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1491

uuaucaauug acuuuucaca uauga 25

<210> 1492

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1492

auuaucaauu gacuuuucac auaug 25

<210> 1493

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1493

gcauugcuuu caaucaucuc cccuc 25

<210> 1494

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1494

uguuuccgua auccauuucc ugcac 25

<210> 1495

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1495

agaacuuucc cgguucuggu uuucu 25

<210> 1496

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1496

cagaacuuuc ccgguucugg uuuuc 25

<210> 1497

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1497

ccgacuucca gaacuuuccc gguuc 25

<210> 1498

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1498

guuuuuccga cuuccagaac uuucc 25

<210> 1499

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1499

gacaaggcau ucuguaaacg uguau 25

<210> 1500

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1500

uaucaagcau ccagcauuug 20

<210> 1501

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1501

uaucuaaaaa uguaauugcu 20

<210> 1502

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1502

agcauuucua uacaugucuu 20

<210> 1503

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1503

uaaucauaaa aaccucaaac 20

<210> 1504

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1504

uuuaaguggc uaccgguuug 20

<210> 1505

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1505

guaagcauuu aaguggcuac 20

<210> 1506

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1506

acuguuggua agcauuuaag 20

<210> 1507

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1507

uaauuuauca auucuacugu 20

<210> 1508

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1508

acaguagaau ugauaaauua 20

<210> 1509

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1509

caaaugcauu uuacagcauu 20

<210> 1510

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1510

gguugauuaa aaguaaccag 20

<210> 1511

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1511

auauaguuug aacucaccuc 20

<210> 1512

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1512

uuuauuugua uauagaaaga 20

<210> 1513

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1513

ugccugagau ucugaucaca 20

<210> 1514

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1514

gccugagauu cugaucacaa 20

<210> 1515

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1515

ccugagauuc ugaucacaag 20

<210> 1516

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1516

ccccuuguga ucagaaucuc 20

<210> 1517

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1517

aaggggaaau guuauaaaau 20

<210> 1518

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1518

aggggaaaug uuauaaaaua 20

<210> 1519

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1519

uguuauaaaa uaggguagag 20

<210> 1520

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1520

caaaguuuaa aggucauuca 20

<210> 1521

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1521

uaacuuguaa caaaguuuaa 20

<210> 1522

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1522

caaguuauuu uucuguaacc 20

<210> 1523

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1523

aauaucuuuc guuggcuucc 20

<210> 1524

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1524

aauuauucaa uaucuuucgu 20

<210> 1525

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1525

gauauugaau aauucaagaa 20

<210> 1526

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1526

auugaauaau ucaagaaagg 20

<210> 1527

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1527

gaauaauuca agaaaggugg 20

<210> 1528

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1528

auucaagaaa ggugguggca 20

<210> 1529

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1529

uauuuuagaa guagagaaaa 20

<210> 1530

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1530

auuuuagaag uagagaaaau 20

<210> 1531

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1531

gaaaauggga gacaaauagc 20

<210> 1532

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1532

aaaaugggag acaaauagcu 20

<210> 1533

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1533

agcugggcuu cuguugcagu 20

<210> 1534

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1534

gcugggcuuc uguugcagua 20

<210> 1535

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1535

gccauuucua uuaucagacu 20

<210> 1536

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1536

uccaagucug auaauagaaa 20

<210> 1537

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1537

uuaucagacu uggaccauga 20

<210> 1538

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1538

cacgacugac aucaccguca 20

<210> 1539

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1539

ucagucguga acacaagaau 20

<210> 1540

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1540

cagucgugaa cacaagaaua 20

<210> 1541

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1541

ggccacauuu gugaguuuag 20

<210> 1542

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1542

uaccacuaaa cucacaaaug 20

<210> 1543

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1543

uaaaaucaga aauacagucu 20

<210> 1544

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1544

aaaagaugua cuuagauaug 20

<210> 1545

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1545

uguacuuaga uauguggauc 20

<210> 1546

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1546

agcucagaaa gaauacaacc 20

<210> 1547

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1547

accaggucaa gaauacagaa 20

<210> 1548

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1548

uccauucugu auucuugacc 20

<210> 1549

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1549

cugucauuuu uaacagguag 20

<210> 1550

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1550

caucaucugu cauuuuuaac 20

<210> 1551

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1551

aaacacauuc uaagauuuua 20

<210> 1552

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1552

aaucuuagaa uguguuugug 20

<210> 1553

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1553

aucuuagaau guguuuguga 20

<210> 1554

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1554

uuagaaugug uuugugaggg 20

<210> 1555

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1555

caauuuucuu auauaugaau 20

<210> 1556

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1556

uugauucuaa aaaaaauguu 20

<210> 1557

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1557

aaauguuagg uaaauucuua 20

<210> 1558

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1558

gguaaauucu uaaggccaug 20

<210> 1559

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1559

agaucaaaua acaguccuca 20

<210> 1560

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1560

gucuguuaau uccaaagacu 20

<210> 1561

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1561

aaagugaaaa gccaagucuu 20

<210> 1562

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1562

ccugaaauga uuuuacacau 20

<210> 1563

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1563

ccaaugugua aaaucauuuc 20

<210> 1564

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1564

cugaaaugau uuuacacauu 20

<210> 1565

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1565

auuuuacaca uugggagauc 20

<210> 1566

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1566

gguuacaugu uuauucuaua 20

<210> 1567

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1567

ucuauaugga uugcauugag 20

<210> 1568

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1568

aggauuugua uaacagaaua 20

<210> 1569

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1569

uuuucuuuuc ucuucugaga 20

<210> 1570

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1570

gcacucuagc uugggcaaua 20

<210> 1571

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1571

ugcacucuag cuugggcaau 20

<210> 1572

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1572

ugcaccauug cacucuagcu 20

<210> 1573

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1573

gcuauucagg uggcugaggc 20

<210> 1574

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1574

accugaauag cugggacugc 20

<210> 1575

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1575

gcaggcaugc accacacgcc 20

<210> 1576

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1576

uacaaaauca gccgggcgug 20

<210> 1577

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1577

ggcuuguaaa cccagcacuu 20

<210> 1578

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1578

cuggcuggau gcgguggcuc 20

<210> 1579

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1579

cugagccacc gcauccagcc 20

<210> 1580

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1580

cuuauccugg cuggaugcgg 20

<210> 1581

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1581

caccgcaucc agccaggaua 20

<210> 1582

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1582

gaccuuaucc uggcuggaug 20

<210> 1583

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1583

cuuuuagacc uuauccuggc 20

<210> 1584

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1584

gccaggauaa ggucuaaaag 20

<210> 1585

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1585

uccacuuuua gaccuuaucc 20

<210> 1586

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1586

aauagcaucu acucuuguuc 20

<210> 1587

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1587

cucuuguuca ggaaacaaug 20

<210> 1588

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1588

ggaaacaaug aggaccugac 20

<210> 1589

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1589

gaaacaauga ggaccugacu 20

<210> 1590

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1590

accugacugg gcaguaagag 20

<210> 1591

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1591

accacucuua cugcccaguc 20

<210> 1592

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1592

aagaguggug auuaauagau 20

<210> 1593

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1593

agagugguga uuaauagaua 20

<210> 1594

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1594

agaaucgaac uguugauuag 20

<210> 1595

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1595

ucgaacuguu gauuagaggu 20

<210> 1596

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1596

ccuggcagac ccucaagagc 20

<210> 1597

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1597

ccuggcagac ccucaagagc 20

<210> 1598

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1598

cuggcagacc cucaagagca 20

<210> 1599

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1599

uggcagaccc ucaagagcag 20

<210> 1600

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1600

cccucaagag caggggucuu 20

<210> 1601

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1601

ccucaagagc aggggucuuc 20

<210> 1602

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1602

uaaggccagu ggaaagaauu 20

<210> 1603

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1603

aagagcaggg gucuucucuu 20

<210> 1604

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1604

agagcagggg ucuucucuuu 20

<210> 1605

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1605

gagcaggggu cuucucuuug 20

<210> 1606

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1606

agcagggguc uucucuuugg 20

<210> 1607

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1607

aggggucuuc ucuuuggggg 20

<210> 1608

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1608

gggaggacau cacucuuagc 20

<210> 1609

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1609

ggaggacauc acucuuagca 20

<210> 1610

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1610

gccagacucc aaguucugcc 20

<210> 1611

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1611

gacaucacuc uuagcagggc 20

<210> 1612

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1612

acaucacucu uagcagggcu 20

<210> 1613

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1613

caucacucuu agcagggcug 20

<210> 1614

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1614

gcugggguga gucaaaaguc 20

<210> 1615

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1615

cuggggugag ucaaaagucu 20

<210> 1616

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1616

gagucaaaag ucugggagaa 20

<210> 1617

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1617

ucaaaagucu gggagaaugg 20

<210> 1618

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1618

agucugggag aauggaggug 20

<210> 1619

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1619

cugggagaau ggaggugugg 20

<210> 1620

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1620

ugggagaaug gaggugugga 20

<210> 1621

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1621

gggagaaugg agguguggag 20

<210> 1622

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1622

ggaggugugg aggggauaac 20

<210> 1623

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1623

ggcagcgagg aguccacagu 20

<210> 1624

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1624

gaggugugga ggggauaacu 20

<210> 1625

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1625

aacuggguca gaccccaagc 20

<210> 1626

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1626

gggucagacc ccaagcagga 20

<210> 1627

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1627

ggucagaccc caagcaggaa 20

<210> 1628

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1628

ccccaagcag gaagggccuc 20

<210> 1629

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1629

cccaagcagg aagggccucu 20

<210> 1630

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1630

ccaagcagga agggccucua 20

<210> 1631

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1631

aggaagggcc ucuauguaga 20

<210> 1632

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1632

ggaagggccu cuauguagac 20

<210> 1633

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1633

ccucuaugua gacgggugug 20

<210> 1634

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1634

ccucuaugua gacgggugug 20

<210> 1635

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1635

gacgggugug uggcuccuua 20

<210> 1636

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1636

ccuuaaggug acccagcagc 20

<210> 1637

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1637

uuaaggugac ccagcagccc 20

<210> 1638

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1638

uaaggugacc cagcagcccu 20

<210> 1639

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1639

cccagcagcc cugggcacag 20

<210> 1640

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1640

ccagcagccc ugggcacaga 20

<210> 1641

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1641

gccagacucc aaguucugcc 20

<210> 1642

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1642

agcagcccug ggcacagaag 20

<210> 1643

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1643

cccugggcac agaaguggug 20

<210> 1644

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1644

ccugggcaca gaaguggugc 20

<210> 1645

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1645

cugggcacag aaguggugcg 20

<210> 1646

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1646

ugccaacagu gauaaccagc 20

<210> 1647

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1647

gccaacagug auaaccagca 20

<210> 1648

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1648

uaaggccagu ggaaagaauu 20

<210> 1649

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1649

ccaacaguga uaaccagcag 20

<210> 1650

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1650

ccagcagggc cugucagaag 20

<210> 1651

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1651

ccagcagggc cugucagaag 20

<210> 1652

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1652

gggccuguca gaagaggccc 20

<210> 1653

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1653

ccugucagaa gaggcccugg 20

<210> 1654

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1654

gaagaggccc uggacacuga 20

<210> 1655

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1655

aggcccugga cacugaaggc 20

<210> 1656

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1656

ggcccuggac acugaaggcu 20

<210> 1657

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1657

ucuuuccacu ggccuuaacc 20

<210> 1658

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1658

cccuggacac ugaaggcugg 20

<210> 1659

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1659

ccuggacacu gaaggcuggg 20

<210> 1660

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1660

cugaaggcug ggcacagccu 20

<210> 1661

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1661

ugaaggcugg gcacagccuu 20

<210> 1662

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1662

gaaggcuggg cacagccuug 20

<210> 1663

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1663

cagccuuggg gaccgcucac 20

<210> 1664

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1664

ccuuggggac cgcucacagg 20

<210> 1665

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1665

ccgcucacag gacaugcagc 20

<210> 1666

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1666

ccgacaacuc ccuaccgcga 20

<210> 1667

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1667

cccuaccgcg accccuauca 20

<210> 1668

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1668

ccuaccgcga ccccuaucag 20

<210> 1669

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1669

ccgcgacccc uaucagugcc 20

<210> 1670

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1670

ccccuaucag ugccgaccaa 20

<210> 1671

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1671

cccuaucagu gccgaccaag 20

<210> 1672

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1672

ccuaucagug ccgaccaagc 20

<210> 1673

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1673

ccgaccaagc acacaagaug 20

<210> 1674

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1674

ccaagcacac aagaugcaca 20

<210> 1675

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1675

agcacacaag augcacaccc 20

<210> 1676

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1676

cacaagaugc acacccaggc 20

<210> 1677

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1677

acaagaugca cacccaggcu 20

<210> 1678

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1678

ucuuuccacu ggccuuaacc 20

<210> 1679

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1679

gaugcacacc caggcugggc 20

<210> 1680

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1680

acccaggcug ggcuggacag 20

<210> 1681

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1681

cccaggcugg gcuggacaga 20

<210> 1682

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1682

cccaggcugg gcuggacaga 20

<210> 1683

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1683

ccaggcuggg cuggacagag 20

<210> 1684

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1684

ccaggcuggg cuggacagag 20

<210> 1685

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1685

gagggguccc acaagaucac 20

<210> 1686

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1686

agggguccca caagaucaca 20

<210> 1687

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1687

cccacaagau cacagggugu 20

<210> 1688

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1688

ggcagcgagg aguccacagu 20

<210> 1689

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1689

ccacaagauc acagggugug 20

<210> 1690

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1690

ucacagggug ugcccugaga 20

<210> 1691

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1691

cagggugugc ccugagaagg 20

<210> 1692

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1692

cgaacuguug auuagaggua 20

<210> 1693

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1693

augauuuuaa ucugugaccu 20

<210> 1694

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1694

uaaucuguga ccuuggugaa 20

<210> 1695

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1695

aaucugugac cuuggugaau 20

<210> 1696

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1696

agcuacuugc ccauucacca 20

<210> 1697

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1697

uagcuaucua augacuaaaa 20

<210> 1698

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1698

augacuaaaa uggaaaacac 20

<210> 1699

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1699

aaauacccau gcugagucug 20

<210> 1700

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1700

aggcaccuca gacucagcau 20

<210> 1701

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1701

uaggcaccuc agacucagca 20

<210> 1702

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1702

gcugagucug aggugccuau 20

<210> 1703

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1703

uauuuauaua gauguccuau 20

<210> 1704

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1704

cauauaucaa acaauguacu 20

<210> 1705

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1705

ccaguacauu guuugauaua 20

<210> 1706

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1706

ccauauauca aacaauguac 20

<210> 1707

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1707

caguacauug uuugauauau 20

<210> 1708

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1708

cauuguuuga uauauggguu 20

<210> 1709

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1709

gauauauggg uuuggcacug 20

<210> 1710

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1710

uauggguuug gcacugaggu 20

<210> 1711

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1711

ggguuuggca cugagguugg 20

<210> 1712

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1712

gcacugaggu uggaggucag 20

<210> 1713

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1713

cagagguuag aaaucagagu 20

<210> 1714

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1714

agagguuaga aaucagaguu 20

<210> 1715

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1715

uagaaaucag aguugggaau 20

<210> 1716

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1716

agaaaucaga guugggaauu 20

<210> 1717

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1717

guugggaauu gggauuauac 20

<210> 1718

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1718

cuuuguauuc aucacacucu 20

<210> 1719

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1719

augaauacaa aguuaaauga 20

<210> 1720

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1720

uaaauguugg uguucauuaa 20

<210> 1721

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1721

ugagauuuca cauuaaaugu 20

<210> 1722

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1722

acauuuaaug ugaaaucuca 20

<210> 1723

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1723

uaaaaucauc ggggauuuug 20

<210> 1724

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1724

cuaaaaucau cggggauuuu 20

<210> 1725

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1725

ucuaaaauca ucggggauuu 20

<210> 1726

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1726

acugaguucu aaaaucaucg 20

<210> 1727

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1727

uacugaguuc uaaaaucauc 20

<210> 1728

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1728

auacugaguu cuaaaaucau 20

<210> 1729

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1729

uaauuagugu aaugccaaug 20

<210> 1730

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1730

aauuagugua augccaaugu 20

<210> 1731

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1731

aaugccaaug uggguuagaa 20

<210> 1732

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1732

acuuccauuc uaacccacau 20

<210> 1733

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1733

aauggaaguc aacuugcugu 20

<210> 1734

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1734

cuugcuguug guuucagagc 20

<210> 1735

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1735

cuguugguuu cagagcaggu 20

<210> 1736

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1736

uucagagcag guaggagaua 20

<210> 1737

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1737

agugaaaagc ugaaacaaaa 20

<210> 1738

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1738

aagcugaaac aaaaaggaaa 20

<210> 1739

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1739

ugaaacaaaa aggaaaaggu 20

<210> 1740

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1740

gaaacaaaaa ggaaaaggua 20

<210> 1741

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1741

ggaaaaggua gggugaaaga 20

<210> 1742

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1742

gaaaagguag ggugaaagau 20

<210> 1743

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1743

aaagauggga aauguaugua 20

<210> 1744

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1744

gaugggaaau guauguaagg 20

<210> 1745

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1745

uguaaggagg augagccaca 20

<210> 1746

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1746

ggaggaugag ccacauggua 20

<210> 1747

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1747

gaggaugagc cacaugguau 20

<210> 1748

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1748

gaugagccac augguauggg 20

<210> 1749

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1749

aguauaccuc ccauaccaug 20

<210> 1750

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1750

augguauggg agguauacua 20

<210> 1751

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1751

ggagguauac uaaggacucu 20

<210> 1752

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1752

gagguauacu aaggacucua 20

<210> 1753

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1753

acucuagggu cagagaaaua 20

<210> 1754

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1754

cucuaggguc agagaaauau 20

<210> 1755

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1755

aagaauguga auuuuguaga 20

<210> 1756

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1756

uucuacaaaa uucacauucu 20

<210> 1757

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1757

acaaaauuca cauucuuggc 20

<210> 1758

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1758

caaaauucac auucuuggcu 20

<210> 1759

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1759

uucacauucu uggcugggug 20

<210> 1760

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1760

aggguggauc accugauguu 20

<210> 1761

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 1761

gaucucgaac uccuaacauc 20

<210> 1762

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1762

guuuggccuc ugauuagggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1763

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1763

aucagaggcc aaacccuucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1764

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1764

uuuaucacag gcuccaggaa guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1765

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1765

uuuggccucu gauuagggug guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1766

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1766

cacgccccca cccuaaucag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1767

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1767

cacaggcucc aggaaggguu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1768

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1768

uugcuuuuau cacaggcucc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1769

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1769

uuuuaucaca ggcuccagga guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1770

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1770

acugcugaaa gagaugcggu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1771

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1771

ugcggugggg agauauguag guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1772

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1772

gaaacaauga ggaccugacu guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1773

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1773

guaagcauuu aaguggcuac guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1774

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1774

aggcaccuca gacucagcau guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1775

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 1775

augguauggg agguauacua guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 1776

<400> 1776

000

<210> 1777

<400> 1777

000

<210> 1778

<400> 1778

000

<210> 1779

<400> 1779

000

<210> 1780

<400> 1780

000

<210> 1781

<400> 1781

000

<210> 1782

<400> 1782

000

<210> 1783

<400> 1783

000

<210> 1784

<400> 1784

000

<210> 1785

<400> 1785

000

<210> 1786

<400> 1786

000

<210> 1787

<400> 1787

000

<210> 1788

<400> 1788

000

<210> 1789

<400> 1789

000

<210> 1790

<400> 1790

000

<210> 1791

<400> 1791

000

<210> 1792

<400> 1792

000

<210> 1793

<400> 1793

000

<210> 1794

<400> 1794

000

<210> 1795

<400> 1795

000

<210> 1796

<400> 1796

000

<210> 1797

<400> 1797

000

<210> 1798

<400> 1798

000

<210> 1799

<400> 1799

000

<210> 1800

<400> 1800

000

<210> 1801

<400> 1801

000

<210> 1802

<400> 1802

000

<210> 1803

<400> 1803

000

<210> 1804

<400> 1804

000

<210> 1805

<400> 1805

000

<210> 1806

<400> 1806

000

<210> 1807

<400> 1807

000

<210> 1808

<400> 1808

000

<210> 1809

<400> 1809

000

<210> 1810

<400> 1810

000

<210> 1811

<400> 1811

000

<210> 1812

<400> 1812

000

<210> 1813

<400> 1813

000

<210> 1814

<400> 1814

000

<210> 1815

<400> 1815

000

<210> 1816

<400> 1816

000

<210> 1817

<400> 1817

000

<210> 1818

<400> 1818

000

<210> 1819

<400> 1819

000

<210> 1820

<400> 1820

000

<210> 1821

<400> 1821

000

<210> 1822

<400> 1822

000

<210> 1823

<400> 1823

000

<210> 1824

<400> 1824

000

<210> 1825

<400> 1825

000

<210> 1826

<400> 1826

000

<210> 1827

<400> 1827

000

<210> 1828

<400> 1828

000

<210> 1829

<400> 1829

000

<210> 1830

<400> 1830

000

<210> 1831

<400> 1831

000

<210> 1832

<400> 1832

000

<210> 1833

<400> 1833

000

<210> 1834

<400> 1834

000

<210> 1835

<400> 1835

000

<210> 1836

<400> 1836

000

<210> 1837

<400> 1837

000

<210> 1838

<400> 1838

000

<210> 1839

<400> 1839

000

<210> 1840

<400> 1840

000

<210> 1841

<400> 1841

000

<210> 1842

<400> 1842

000

<210> 1843

<400> 1843

000

<210> 1844

<400> 1844

000

<210> 1845

<400> 1845

000

<210> 1846

<400> 1846

000

<210> 1847

<400> 1847

000

<210> 1848

<400> 1848

000

<210> 1849

<400> 1849

000

<210> 1850

<400> 1850

000

<210> 1851

<400> 1851

000

<210> 1852

<400> 1852

000

<210> 1853

<400> 1853

000

<210> 1854

<400> 1854

000

<210> 1855

<400> 1855

000

<210> 1856

<400> 1856

000

<210> 1857

<400> 1857

000

<210> 1858

<400> 1858

000

<210> 1859

<400> 1859

000

<210> 1860

<400> 1860

000

<210> 1861

<400> 1861

000

<210> 1862

<400> 1862

000

<210> 1863

<400> 1863

000

<210> 1864

<400> 1864

000

<210> 1865

<400> 1865

000

<210> 1866

<400> 1866

000

<210> 1867

<400> 1867

000

<210> 1868

<400> 1868

000

<210> 1869

<400> 1869

000

<210> 1870

<400> 1870

000

<210> 1871

<400> 1871

000

<210> 1872

<400> 1872

000

<210> 1873

<400> 1873

000

<210> 1874

<400> 1874

000

<210> 1875

<400> 1875

000

<210> 1876

<400> 1876

000

<210> 1877

<400> 1877

000

<210> 1878

<400> 1878

000

<210> 1879

<400> 1879

000

<210> 1880

<400> 1880

000

<210> 1881

<400> 1881

000

<210> 1882

<400> 1882

000

<210> 1883

<400> 1883

000

<210> 1884

<400> 1884

000

<210> 1885

<400> 1885

000

<210> 1886

<400> 1886

000

<210> 1887

<400> 1887

000

<210> 1888

<400> 1888

000

<210> 1889

<400> 1889

000

<210> 1890

<400> 1890

000

<210> 1891

<400> 1891

000

<210> 1892

<400> 1892

000

<210> 1893

<400> 1893

000

<210> 1894

<400> 1894

000

<210> 1895

<400> 1895

000

<210> 1896

<400> 1896

000

<210> 1897

<400> 1897

000

<210> 1898

<400> 1898

000

<210> 1899

<400> 1899

000

<210> 1900

<400> 1900

000

<210> 1901

<400> 1901

000

<210> 1902

<400> 1902

000

<210> 1903

<400> 1903

000

<210> 1904

<400> 1904

000

<210> 1905

<400> 1905

000

<210> 1906

<400> 1906

000

<210> 1907

<400> 1907

000

<210> 1908

<400> 1908

000

<210> 1909

<400> 1909

000

<210> 1910

<400> 1910

000

<210> 1911

<400> 1911

000

<210> 1912

<400> 1912

000

<210> 1913

<400> 1913

000

<210> 1914

<400> 1914

000

<210> 1915

<400> 1915

000

<210> 1916

<400> 1916

000

<210> 1917

<400> 1917

000

<210> 1918

<400> 1918

000

<210> 1919

<400> 1919

000

<210> 1920

<400> 1920

000

<210> 1921

<400> 1921

000

<210> 1922

<400> 1922

000

<210> 1923

<400> 1923

000

<210> 1924

<400> 1924

000

<210> 1925

<400> 1925

000

<210> 1926

<400> 1926

000

<210> 1927

<400> 1927

000

<210> 1928

<400> 1928

000

<210> 1929

<400> 1929

000

<210> 1930

<400> 1930

000

<210> 1931

<400> 1931

000

<210> 1932

<400> 1932

000

<210> 1933

<400> 1933

000

<210> 1934

<400> 1934

000

<210> 1935

<400> 1935

000

<210> 1936

<400> 1936

000

<210> 1937

<400> 1937

000

<210> 1938

<400> 1938

000

<210> 1939

<400> 1939

000

<210> 1940

<400> 1940

000

<210> 1941

<400> 1941

000

<210> 1942

<400> 1942

000

<210> 1943

<400> 1943

000

<210> 1944

<400> 1944

000

<210> 1945

<400> 1945

000

<210> 1946

<400> 1946

000

<210> 1947

<400> 1947

000

<210> 1948

<400> 1948

000

<210> 1949

<400> 1949

000

<210> 1950

<400> 1950

000

<210> 1951

<400> 1951

000

<210> 1952

<400> 1952

000

<210> 1953

<400> 1953

000

<210> 1954

<400> 1954

000

<210> 1955

<400> 1955

000

<210> 1956

<400> 1956

000

<210> 1957

<400> 1957

000

<210> 1958

<400> 1958

000

<210> 1959

<400> 1959

000

<210> 1960

<400> 1960

000

<210> 1961

<400> 1961

000

<210> 1962

<400> 1962

000

<210> 1963

<400> 1963

000

<210> 1964

<400> 1964

000

<210> 1965

<400> 1965

000

<210> 1966

<400> 1966

000

<210> 1967

<400> 1967

000

<210> 1968

<400> 1968

000

<210> 1969

<400> 1969

000

<210> 1970

<400> 1970

000

<210> 1971

<400> 1971

000

<210> 1972

<400> 1972

000

<210> 1973

<400> 1973

000

<210> 1974

<400> 1974

000

<210> 1975

<400> 1975

000

<210> 1976

<400> 1976

000

<210> 1977

<400> 1977

000

<210> 1978

<400> 1978

000

<210> 1979

<400> 1979

000

<210> 1980

<400> 1980

000

<210> 1981

<400> 1981

000

<210> 1982

<400> 1982

000

<210> 1983

<400> 1983

000

<210> 1984

<400> 1984

000

<210> 1985

<400> 1985

000

<210> 1986

<400> 1986

000

<210> 1987

<400> 1987

000

<210> 1988

<400> 1988

000

<210> 1989

<400> 1989

000

<210> 1990

<400> 1990

000

<210> 1991

<400> 1991

000

<210> 1992

<400> 1992

000

<210> 1993

<400> 1993

000

<210> 1994

<400> 1994

000

<210> 1995

<400> 1995

000

<210> 1996

<400> 1996

000

<210> 1997

<400> 1997

000

<210> 1998

<400> 1998

000

<210> 1999

<400> 1999

000

<210> 2000

<211> 110

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 2000

gtgccagatg aacttcccat gtttaagagc tatgctggaa acagcatagc aagtttaaat 60

aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt 110

<210> 2001

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2001

agctccaaac tctcaaacca caggg 25

<210> 2002

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2002

tacaattttg ggagtccaca cggca 25

<210> 2003

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2003

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2004

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2004

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2005

<211> 835

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 2005

Met Ser Arg Arg Lys Gln Gly Lys Pro Gln His Leu Ser Lys Arg Glu

1 5 10 15

Phe Ser Pro Glu Pro Leu Glu Ala Ile Leu Thr Asp Asp Glu Pro Asp

20 25 30

His Gly Pro Leu Gly Ala Pro Glu Gly Asp His Asp Leu Leu Thr Cys

35 40 45

Gly Gln Cys Gln Met Asn Phe Pro Leu Gly Asp Ile Leu Ile Phe Ile

50 55 60

Glu His Lys Arg Lys Gln Cys Asn Gly Ser Leu Cys Leu Glu Lys Ala

65 70 75 80

Val Asp Lys Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ile Glu Met Lys Lys Ala Ser

85 90 95

Asn Pro Val Glu Val Gly Ile Gln Val Thr Pro Glu Asp Asp Asp Cys

100 105 110

Leu Ser Thr Ser Ser Arg Gly Ile Cys Pro Lys Gln Glu His Ile Ala

115 120 125

Asp Lys Leu Leu His Trp Arg Gly Leu Ser Ser Pro Arg Ser Ala His

130 135 140

Gly Ala Leu Ile Pro Thr Pro Gly Met Ser Ala Glu Tyr Ala Pro Gln

145 150 155 160

Gly Ile Cys Lys Asp Glu Pro Ser Ser Tyr Thr Cys Thr Thr Cys Lys

165 170 175

Gln Pro Phe Thr Ser Ala Trp Phe Leu Leu Gln His Ala Gln Asn Thr

180 185 190

His Gly Leu Arg Ile Tyr Leu Glu Ser Glu His Gly Ser Pro Leu Thr

195 200 205

Pro Arg Val Gly Ile Pro Ser Gly Leu Gly Ala Glu Cys Pro Ser Gln

210 215 220

Pro Pro Leu His Gly Ile His Ile Ala Asp Asn Asn Pro Phe Asn Leu

225 230 235 240

Leu Arg Ile Pro Gly Ser Val Ser Arg Glu Ala Ser Gly Leu Ala Glu

245 250 255

Gly Arg Phe Pro Pro Thr Pro Pro Leu Phe Ser Pro Pro Pro Arg His

260 265 270

His Leu Asp Pro His Arg Ile Glu Arg Leu Gly Ala Glu Glu Met Ala

275 280 285

Leu Ala Thr His His Pro Ser Ala Phe Asp Arg Val Leu Arg Leu Asn

290 295 300

Pro Met Ala Met Glu Pro Pro Ala Met Asp Phe Ser Arg Arg Leu Arg

305 310 315 320

Glu Leu Ala Gly Asn Thr Ser Ser Pro Pro Leu Ser Pro Gly Arg Pro

325 330 335

Ser Pro Met Gln Arg Leu Leu Gln Pro Phe Gln Pro Gly Ser Lys Pro

340 345 350

Pro Phe Leu Ala Thr Pro Pro Leu Pro Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro

355 360 365

Pro Ser Gln Pro Pro Val Lys Ser Lys Ser Cys Glu Phe Cys Gly Lys

370 375 380

Thr Phe Lys Phe Gln Ser Asn Leu Val Val His Arg Arg Ser His Thr

385 390 395 400

Gly Glu Lys Pro Tyr Lys Cys Asn Leu Cys Asp His Ala Cys Thr Gln

405 410 415

Ala Ser Lys Leu Lys Arg His Met Lys Thr His Met His Lys Ser Ser

420 425 430

Pro Met Thr Val Lys Ser Asp Asp Gly Leu Ser Thr Ala Ser Ser Pro

435 440 445

Glu Pro Gly Thr Ser Asp Leu Val Gly Ser Ala Ser Ser Ala Leu Lys

450 455 460

Ser Val Val Ala Lys Phe Lys Ser Glu Asn Asp Pro Asn Leu Ile Pro

465 470 475 480

Glu Asn Gly Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Glu Glu Glu Glu Glu

485 490 495

Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Glu Ser Glu Arg Val Asp

500 505 510

Tyr Gly Phe Gly Leu Ser Leu Glu Ala Ala Arg His His Glu Asn Ser

515 520 525

Ser Arg Gly Ala Val Val Gly Val Gly Asp Glu Ser Arg Ala Leu Pro

530 535 540

Asp Val Met Gln Gly Met Val Leu Ser Ser Met Gln His Phe Ser Glu

545 550 555 560

Ala Phe His Gln Val Leu Gly Glu Lys His Lys Arg Gly His Leu Ala

565 570 575

Glu Ala Glu Gly His Arg Asp Thr Cys Asp Glu Asp Ser Val Ala Gly

580 585 590

Glu Ser Asp Arg Ile Asp Asp Gly Thr Val Asn Gly Arg Gly Cys Ser

595 600 605

Pro Gly Glu Ser Ala Ser Gly Gly Leu Ser Lys Lys Leu Leu Leu Gly

610 615 620

Ser Pro Ser Ser Leu Ser Pro Phe Ser Lys Arg Ile Lys Leu Glu Lys

625 630 635 640

Glu Phe Asp Leu Pro Pro Ala Ala Met Pro Asn Thr Glu Asn Val Tyr

645 650 655

Ser Gln Trp Leu Ala Gly Tyr Ala Ala Ser Arg Gln Leu Lys Asp Pro

660 665 670

Phe Leu Ser Phe Gly Asp Ser Arg Gln Ser Pro Phe Ala Ser Ser Ser

675 680 685

Glu His Ser Ser Glu Asn Gly Ser Leu Arg Phe Ser Thr Pro Pro Gly

690 695 700

Glu Leu Asp Gly Gly Ile Ser Gly Arg Ser Gly Thr Gly Ser Gly Gly

705 710 715 720

Ser Thr Pro His Ile Ser Gly Pro Gly Pro Gly Arg Pro Ser Ser Lys

725 730 735

Glu Gly Arg Arg Ser Asp Thr Cys Glu Tyr Cys Gly Lys Val Phe Lys

740 745 750

Asn Cys Ser Asn Leu Thr Val His Arg Arg Ser His Thr Gly Glu Arg

755 760 765

Pro Tyr Lys Cys Glu Leu Cys Asn Tyr Ala Cys Ala Gln Ser Ser Lys

770 775 780

Leu Thr Arg His Met Lys Thr His Gly Gln Val Gly Lys Asp Val Tyr

785 790 795 800

Lys Cys Glu Ile Cys Lys Met Pro Phe Ser Val Tyr Ser Thr Leu Glu

805 810 815

Lys His Met Lys Lys Trp His Ser Asp Arg Val Leu Asn Asn Asp Ile

820 825 830

Lys Thr Glu

835

<210> 2006

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(10)

<223> /note="This Последовательность may encompass 1-10 nucleotides"

<400> 2006

uuuuuuuuuu 10

<210> 2007

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(10)

<223> /note="This Последовательность may encompass 1-10 nucleotides"

<400> 2007

aaaaaaaaaa 10

<210> 2008

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2008

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2009

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2009

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2010

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2010

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2011

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2011

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2012

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2012

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2013

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2013

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2014

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2014

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2015

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2015

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2016

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2016

gugccagaug aacuucccau 20

<210> 2017

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2017

cacaaacgga aacaaugcaa 20

<210> 2018

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2018

gcttggctac agcacctctg a 21

<210> 2019

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2019

ggcatggggt tgagatgtgc t 21

<210> 2020

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2020

tcagtgagat gagatatcaa 20

<210> 2021

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2021

cagtgagatg agatatcaaa 20

<210> 2022

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2022

tgtaactaat aaataccagg 20

<210> 2023

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2023

ttagggtggg ggcgtgggtg 20

<210> 2024

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2024

attagggtgg gggcgtgggt 20

<210> 2025

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2025

cacgccccca ccctaatcag 20

<210> 2026

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2026

tctgattagg gtgggggcgt 20

<210> 2027

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2027

ttggcctctg attagggtgg 20

<210> 2028

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2028

tttggcctct gattagggtg 20

<210> 2029

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2029

gtttggcctc tgattagggt 20

<210> 2030

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2030

ggtttggcct ctgattaggg 20

<210> 2031

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2031

aagggtttgg cctctgatta 20

<210> 2032

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2032

gaagggtttg gcctctgatt 20

<210> 2033

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2033

atcagaggcc aaacccttcc 20

<210> 2034

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2034

cacaggctcc aggaagggtt 20

<210> 2035

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2035

tttatcacag gctccaggaa 20

<210> 2036

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2036

ttttatcaca ggctccagga 20

<210> 2037

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2037

ttgcttttat cacaggctcc 20

<210> 2038

<211> 20

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2038

ctaacagttg cttttatcac 20

<210> 2039

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2039

ctaacagttg cttttatcac agg 23

<210> 2040

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2040

tagtgcaagc taacaggctc caggaagggt ttggcctctg attag 45

<210> 2041

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2041

tagtgcaagc taacagttgc ttttattcac aggctccagg aagggtttgg cctctgatta 60

g 61

<210> 2042

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2042

tagtgcaagc taacagttgc tccaggaagg gtttggcctc tgattag 47

<210> 2043

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2043

tagtgcaagc taacagttgc ttttatcagg ctccaggaag ggtttggcct ctgattag 58

<210> 2044

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2044

tagtgcaagc taacagttgc ttttacacag gctccaggaa gggtttggcc tctgattag 59

<210> 2045

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2045

tagtgcaagc taacagttgc ttttcacagg ctccaggaag ggtttggcct ctgattag 58

<210> 2046

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2046

tagtgcaagc tccaggaagg gtttggcctc tgattag 37

<210> 2047

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2047

atcagaggcc aaacccttcc acc 23

<210> 2048

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2048

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59

<210> 2049

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2049

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg tgggg 55

<210> 2050

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2050

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2051

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2051

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg gtgggg 56

<210> 2052

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2052

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta gggtgggg 58

<210> 2053

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2053

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59

<210> 2054

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2054

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtgggg 59

<210> 2055

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2055

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2056

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2056

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta gggtgggg 58

<210> 2057

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2057

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagtttgg cctctgatta gggtgggg 58

<210> 2058

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2058

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggcctctgat tagggtgggg 50

<210> 2059

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2059

agctaacagt tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggg 43

<210> 2060

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2060

agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagtttggc ctctgattag ggtgggg 57

<210> 2061

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2061

ttgcttttat cacaggctcc agg 23

<210> 2062

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2062

agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53

<210> 2063

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2063

agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2064

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2064

agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52

<210> 2065

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2065

agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2066

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2066

agctaacagt tgcttttatc acaggcccag gaagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59

<210> 2067

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2067

agctaacagt tgcttttatc acaggccagg aagggtttgg cctctgatta gggtgggg 58

<210> 2068

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2068

agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53

<210> 2069

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2069

agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2070

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2070

agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52

<210> 2071

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2071

agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2072

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2072

agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53

<210> 2073

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2073

agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52

<210> 2074

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2074

agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2075

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2075

agctaacagt gattagggtg ggg 23

<210> 2076

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2076

agctaacagt tgcttttatc acaggcccag gaagggtttg gcctctgatt agggtgggg 59

<210> 2077

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2077

agctaacagt tgcttttatc acaggaaggg tttggcctct gattagggtg ggg 53

<210> 2078

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2078

agctaacagt tgcttttatc caggaagggt ttggcctctg attagggtgg gg 52

<210> 2079

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2079

agctaacagt tgcttttatc acaggcttcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2080

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2080

agctaacagt tgcttttatc acaggcctcc aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg 60

g 61

<210> 2081

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2081

agctaacagt tgcttttatc acaggcgaag ggtttggcct ctgattaggg tgggg 55

<210> 2082

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2082

ttttatcaca ggctccagga agg 23

<210> 2083

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2083

aacagttgct tttatcacag gctccaagga agggtttggc ctctgattag ggtgggggcg 60

t 61

<210> 2084

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2084

aacagttgct tttatcacag gcctctgatt agggtggggg cgt 43

<210> 2085

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2085

aacagttgct tttatcacag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 49

<210> 2086

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2086

aacagttgct tttatcacag gaagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgt 53

<210> 2087

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2087

aacagttgct tttggtgggg gcgt 24

<210> 2088

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2088

aacagttgct tttatcacag gctccaagga agggtttggc ctctgattag ggtgggggcg 60

t 61

<210> 2089

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2089

aacagttgct tttatcacag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 49

<210> 2090

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2090

aacagttgct tttatcacag gaagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgt 53

<210> 2091

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2091

aacagttgct tttatcacag gcctctgatt agggtggggg cgt 43

<210> 2092

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2092

aacagttgct tttatcacag gcttggcctc tgattagggt gggggcgt 48

<210> 2093

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2093

aacagttgct tttatcacag gctccggaag ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgt 59

<210> 2094

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2094

tttatcacag gctccaggaa ggg 23

<210> 2095

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2095

acagttgctt ttatcacagg ctccagaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59

<210> 2096

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2096

acagttgctt ttatcacagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 49

<210> 2097

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2097

acagttgctt ttatcacagg ctccagggaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60

g 61

<210> 2098

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2098

acagttgctt ttatcacagg cctctgatta gggtgggggc gtg 43

<210> 2099

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2099

acagttgctt ttgggggcgt g 21

<210> 2100

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2100

acagttgctt tgggggcgtg 20

<210> 2101

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2101

acagttgctt ttatcacagg ctccagaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59

<210> 2102

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2102

acagttgctt ttatcacagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 49

<210> 2103

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2103

acagttgctt ttatcacagg ctccagggaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60

g 61

<210> 2104

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2104

acagttgctt ttatcacagg ctccagataa ggtgggggcg tg 42

<210> 2105

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2105

acagttgctt ttatcacagg cctctgatta gggtgggggc gtg 43

<210> 2106

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2106

acagttgctt ttatcacagg ctccagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtg 56

<210> 2107

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2107

acagttgctt ttatcacagg ctccagcgaa gggtttggcc tctgattagg gtgggggcgt 60

g 61

<210> 2108

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2108

acagttgctt ttatcacagg ctccggaagg gtttggcctc tgattagggt gggggcgtg 59

<210> 2109

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2109

cacaggctcc aggaagggtt tgg 23

<210> 2110

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2110

tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59

<210> 2111

<211> 31

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2111

tgcttttatc acaggcctgg ggcgtgggtg g 31

<210> 2112

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2112

tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 24

<210> 2113

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2113

tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg tgg 43

<210> 2114

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2114

tgcttttatc acaggctcca ggaaggcctc tgattagggt gggggcgtgg gtgg 54

<210> 2115

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2115

tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59

<210> 2116

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2116

tgcttttatc acaggctcca ggaaggtttg gcctctgatt agggtggggg cgtgggtgg 59

<210> 2117

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2117

tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg tgg 43

<210> 2118

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2118

tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtgggtg 60

g 61

<210> 2119

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2119

tgcttttatc acaggctcca gggcgtgggt gg 32

<210> 2120

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2120

tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgtg ggtgg 55

<210> 2121

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2121

tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 24

<210> 2122

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2122

tgcttttatc acaggctcca ggaagtttgg cctctgatta gggtgggggc gtgggtgg 58

<210> 2123

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2123

tgcttttatc acaggctcca ggaaggtccg tttgcgtggg tgg 43

<210> 2124

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2124

cacgccccca ccctaatcag agg 23

<210> 2125

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2125

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag a 41

<210> 2126

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2126

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgaattaggg tgggggcgtg ggtggggtag 60

a 61

<210> 2127

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2127

tatcacaggc tccaggaagg gcgtgggtgg ggtaga 36

<210> 2128

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2128

tatcacaggc tccaggaagg gggcgtgggt ggggtaga 38

<210> 2129

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2129

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggcgt gggtggggta ga 42

<210> 2130

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2130

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggtgg ggtaga 36

<210> 2131

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2131

tatcacaggc tccaggggcg tgggtggggt aga 33

<210> 2132

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2132

gaagggtttg gcctctgatt agg 23

<210> 2133

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2133

aggctccagg aagggtttgg cgtgggtggg gtagaagagg a 41

<210> 2134

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2134

aggctccagg aagggtttgg gcgtgggtgg ggtagaagag ga 42

<210> 2135

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2135

aggctccagg ggcgtgggtg gggtagaaga gga 33

<210> 2136

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2136

aggctccagg aagggtgggg tagaagagga 30

<210> 2137

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2137

aggctccagg aagggtttgg cctctggcgt gggtggggta gaagagga 48

<210> 2138

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2138

aggctccagg aagggcgtgg gtggggtaga agagga 36

<210> 2139

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2139

aggctccagg aagggtttgg cctctgcgta gaagagga 38

<210> 2140

<211> 35

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2140

aggctccagg aagggttggg tggggtagaa gagga 35

<210> 2141

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2141

aggctccagg aagggtttgg cgtgggtggg gtagaagagg a 41

<210> 2142

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2142

aggctccagg aagggtttgg gcgtgggtgg ggtagaagag ga 42

<210> 2143

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2143

aggctccagg aagggtgggg tagaagagga 30

<210> 2144

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2144

aggctccagg aagggtttgg ggtagaagag ga 32

<210> 2145

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2145

aggctccagg aagggggcgt gggtggggta gaagagga 38

<210> 2146

<211> 31

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2146

aggctccagg cgtgggtggg gtagaagagg a 31

<210> 2147

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2147

aggctccagg aagggcgtgg gtggggtaga agagga 36

<210> 2148

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2148

aggctccagg gtagaagagg a 21

<210> 2149

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2149

aggctccagg aagggtttgg gtggggtaga agagga 36

<210> 2150

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2150

aagggtttgg cctctgatta ggg 23

<210> 2151

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2151

ggctccagga agggtttggc ctctgattcc ccattgtggg ggcgtgggtg gggtagaaga 60

ggac 64

<210> 2152

<211> 35

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2152

ggctccagga agggtttggt ggggtagaag aggac 35

<210> 2153

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2153

ggctccagga agggtttggc gtgggtgggg tagaagagga c 41

<210> 2154

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2154

ggctccagga agggcgtggg tggggtagaa gaggac 36

<210> 2155

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2155

ggctccagga agggtttggg tggggtagaa gaggac 36

<210> 2156

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2156

ggctccagga agggtttggc ctctgagggc gtgggtgggg tagaagagga c 51

<210> 2157

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2157

ggctccagga agggtttggc cgtgggtggg gtagaagagg ac 42

<210> 2158

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2158

ggctccagga agggtttggc ctctgaatta gggtgggggc gtgggtgggg tagaagagga 60

c 61

<210> 2159

<211> 40

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2159

ggctccagga agggtttgcg tgggtggggt agaagaggac 40

<210> 2160

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2160

ggctccagga agggtttggg gtagaagagg ac 32

<210> 2161

<211> 34

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2161

ggctccagga agggtgggtg gggtagaaga ggac 34

<210> 2162

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2162

ggtttggcct ctgattaggg tgg 23

<210> 2163

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2163

tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg g 41

<210> 2164

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2164

tccaggaagg gtggggtaga agaggactgg 30

<210> 2165

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2165

tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59

<210> 2166

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2166

tccaggaagg gtagaagagg actgg 25

<210> 2167

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2167

tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactgg 38

<210> 2168

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2168

tccaggaagg gcgtgggtgg ggtagaagag gactgg 36

<210> 2169

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2169

tccaggaagg gtttgggtgg ggtagaagag gactgg 36

<210> 2170

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2170

tccaggaagg gtttggcctc tgattgggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59

<210> 2171

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2171

tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg g 41

<210> 2172

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2172

tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactgg 38

<210> 2173

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2173

tccaggaagg gtttgggtgg ggtagaagag gactgg 36

<210> 2174

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2174

tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa gaggactgg 59

<210> 2175

<211> 31

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2175

tccaggaagg gttggggtag aagaggactg g 31

<210> 2176

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2176

tccaggaagg gtttggcctg ggtggggtag aagaggactg g 41

<210> 2177

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2177

tccaggaagg gtttggtaga agaggactgg 30

<210> 2178

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2178

gtttggcctc tgattagggt ggg 23

<210> 2179

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2179

ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59

<210> 2180

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2180

ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41

<210> 2181

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2181

ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2182

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2182

ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2183

<211> 38

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2183

ccaggaaggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 38

<210> 2184

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2184

ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2185

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2185

ccaggaaggg tttggcctct gaggtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 56

<210> 2186

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2186

ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59

<210> 2187

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2187

ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41

<210> 2188

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2188

ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2189

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2189

ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2190

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2190

ccaggaaggg tttggcctct gattaggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggc 55

<210> 2191

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2191

ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2192

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2192

ccaggaaggg tttggcctct gattagaggt gggggcgtgg gtggggtaga agaggactgg 60

c 61

<210> 2193

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2193

ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59

<210> 2194

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2194

ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2195

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2195

ccaggaaggg tttgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2196

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2196

ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41

<210> 2197

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2197

ccaggaaggg tttgggggcg tgggtggggt agaagaggac tggc 44

<210> 2198

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2198

ccaggaaggg tttggcctct gattagtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2199

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2199

ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2200

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2200

ccaggaaggg tttggcctct gattaggtgg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggc 59

<210> 2201

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2201

ccaggaaggg tttggcgtgg gtggggtaga agaggactgg c 41

<210> 2202

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2202

ccaggaaggg tttggcctct gattggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2203

<211> 37

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2203

ccaggaaggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggc 37

<210> 2204

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2204

ccaggaaggg cgtgggtggg gtagaagagg actggc 36

<210> 2205

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2205

ccaggaaggg tttggcctct gattagtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggc 58

<210> 2206

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2206

ccaggaaggg tttgggggcg tgggtggggt agaagaggac tggc 44

<210> 2207

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2207

tttggcctct gattagggtg ggg 23

<210> 2208

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2208

caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59

<210> 2209

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2209

caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41

<210> 2210

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2210

caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58

<210> 2211

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2211

caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55

<210> 2212

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2212

caggaagggt ttgggtgggg tagaagagga ctggca 36

<210> 2213

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2213

caggaagggt ttggtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggca 47

<210> 2214

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2214

caggaagggt ttggcctctg tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg gca 53

<210> 2215

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2215

caggaagggt ggggtagaag aggactggca 30

<210> 2216

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2216

caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59

<210> 2217

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2217

caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41

<210> 2218

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2218

caggaagggt ggggtagaag aggactggca 30

<210> 2219

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2219

caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58

<210> 2220

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2220

caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56

<210> 2221

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2221

caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55

<210> 2222

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2222

caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59

<210> 2223

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2223

caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58

<210> 2224

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2224

caggaagggt ttggcctaag aggactggca 30

<210> 2225

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2225

caggaagggt ttgggaggac tggca 25

<210> 2226

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2226

caggaagggt ttagaagagg actggca 27

<210> 2227

<211> 29

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2227

caggaagggt ttggcctcga ggactggca 29

<210> 2228

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2228

caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56

<210> 2229

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2229

caggaagggt ttggcctctg attagggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggca 57

<210> 2230

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2230

caggaagggt ttggcctctg attaggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggca 59

<210> 2231

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2231

caggaagggt ttggcgtggg tggggtagaa gaggactggc a 41

<210> 2232

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2232

caggaagggt ttggcctctg attagtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggca 58

<210> 2233

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2233

caggaagggt ttggggtaga agaggactgg ca 32

<210> 2234

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2234

caggaagggt ttggcctctg attaggggcg tgggtggggt agaagaggac tggca 55

<210> 2235

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2235

caggaagggt ttggcctctg attagggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggca 56

<210> 2236

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2236

caggaagggt ttgggggcgt gggtggggta gaagaggact ggca 44

<210> 2237

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2237

ttggcctctg attagggtgg ggg 23

<210> 2238

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2238

aggaagggtt tggcctctga ttagggggcg tgggtggggt agaagaggac tggcag 56

<210> 2239

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2239

aggaagggtt tggcctctga ttagggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcag 54

<210> 2240

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2240

aggaagggtt tggcctctga ttaggggcgt gggtggggta gaagaggact ggcag 55

<210> 2241

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2241

aggaagggtt tggcctctga ttaggtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag gactggcag 59

<210> 2242

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2242

aggaagggtt tggcctctga ttagtggggg cgtgggtggg gtagaagagg actggcag 58

<210> 2243

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2243

aggaagggtt tggcctctga ttgggggcgt gggtggggta gaagaggact ggcag 55

<210> 2244

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2244

aggaagggtt tggcctctga ttagggtggg ggcgtgggtg ggtagaagag gactggcag 59

<210> 2245

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2245

tctgattagg gtgggggcgt ggg 23

<210> 2246

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2246

ggtttggcct ctgattaggg tggggtagaa gaggactggc agacctct 48

<210> 2247

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2247

ggtttggcct ctgattaggg tgggggtaga agaggactgg cagacctct 49

<210> 2248

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2248

ggtttggcct ctgattaggg tgggtggggt agaagaggac tggcagacct ct 52

<210> 2249

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2249

ggtttggcct ctgatggggt agaagaggac tggcagacct ct 42

<210> 2250

<211> 31

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2250

ggtttggcct ctgatttact ggcagacctc t 31

<210> 2251

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2251

ggtttggcct ctgattggcc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc tct 53

<210> 2252

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2252

ggtttggcct ctgattaggg gtagaagagg actggcagac ctct 44

<210> 2253

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2253

ggtttggcct ctgatccaag agcccgtggg tggggtagaa gaggactggc agacctct 58

<210> 2254

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2254

ggtttggcct ctgattaggg tgggggcgtg ggtgggtaga agaggactgg cagacctct 59

<210> 2255

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2255

attagggtgg gggcgtgggt ggg 23

<210> 2256

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2256

tggcctctga ttagggtggg gtagaagagg actggcagac ctctccat 48

<210> 2257

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2257

tggcctctga ttagggtggg ggtagaagag gactggcaga cctctccat 49

<210> 2258

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2258

tggcctctga ttagggtggg ggcgtggtgg ggtagaagag gactggcaga cctctccat 59

<210> 2259

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2259

tggcctctga ttagggtggg ggcgaagagg actggcagac ctctccat 48

<210> 2260

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2260

ttagggtggg ggcgtgggtg ggg 23

<210> 2261

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2261

ggcctctgat tagggtgggg tagaagagga ctggcagacc tctccatc 48

<210> 2262

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2262

ggcctctgat tagggtgggg gcgtggtggg gtagaagagg actggcagac ctctccatc 59

<210> 2263

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2263

ggcctctgat tagggtgggg gtagaagagg actggcagac ctctccatc 49

<210> 2264

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2264

tgtaactaat aaataccagg 20

<210> 2265

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2265

ctgctgaggt gtaactaata aataccggag gcagcatttt agttcacaag ctcggagca 59

<210> 2266

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2266

ctgctgaggt gtaactaata aatacaggag gcagcatttt agttcacaag ctcggagca 59

<210> 2267

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2267

ctgctgaggt gtaactaata aatacccagg aggcagcatt ttagttcaca agctcggagc 60

a 61

<210> 2268

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2268

ctgctgaggt gtaactaata aataccgagg cagcatttta gttcacaagc tcggagca 58

<210> 2269

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2269

ctgctgaggt gtaactaata aatcaggagg cagcatttta gttcacaagc tcggagca 58

<210> 2270

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2270

ctgctgaggt gtaactaata aataggaggc agcattttag ttcacaagct cggagca 57

<210> 2271

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2271

cagtgagatg agatatcaaa ggg 23

<210> 2272

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2272

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttggatatct catctcactg agctctgggc 60

c 61

<210> 2273

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2273

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgatctcat ctcactgagc tctgggcc 58

<210> 2274

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2274

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgcatctca ctgagctctg ggcc 54

<210> 2275

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2275

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttctcatctc actgagctct gggcc 55

<210> 2276

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2276

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttatatctca tctcactgag ctctgggcc 59

<210> 2277

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2277

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgtctcatc tcactgagct ctgggcc 57

<210> 2278

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2278

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct tttatctcat ctcactgagc tctgggcc 58

<210> 2279

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2279

gggagatgga atgaacactt ttcgtcccct ttgtatctca tctcactgag ctctgggcc 59

<210> 2280

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2280

tcagtgagat gagatatcaa agg 23

<210> 2281

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2281

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgaatatctc atctcactga gctctgggcc 60

g 61

<210> 2282

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2282

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgaatctcat ctcactgagc tctgggccg 59

<210> 2283

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2283

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgatctcatc tcactgagct ctgggccg 58

<210> 2284

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2284

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgtatctcat ctcactgagc tctgggccg 59

<210> 2285

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2285

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt atatctcatc tcactgagct ctgggccg 58

<210> 2286

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2286

ggagatggaa tgaacacttt tcgtcccctt tgacatctca ctgagctctg ggccg 55

<210> 2287

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2287

gtgccagatg aacttcccat tgg 23

<210> 2288

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2288

ctgtgggcag tgccagatga acttccattg ggggacattc ttatttttat cgagcacaa 59

<210> 2289

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2289

ctgtgggcag tgccagatga acttcattgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58

<210> 2290

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2290

ctgtgggcag tgccagatga acttccccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60

a 61

<210> 2291

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2291

ctgtgggcag tgccagatga acattggggg acattcttat ttttatcgag cacaa 55

<210> 2292

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2292

ctgtgggcag tgccagatga acttccttgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58

<210> 2293

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2293

ctgtgggcag tgccagatga acttccattg ggggacattc ttatttttat cgagcacaa 59

<210> 2294

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2294

ctgtgggcag tgccagatga acttcattgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58

<210> 2295

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2295

ctgtgggcag tgccagatga acttccccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60

a 61

<210> 2296

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2296

ctgtgggcag tgccagatga acttccttgg gggacattct tatttttatc gagcacaa 58

<210> 2297

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2297

ctgtgggcag tgccagatga actcattggg ggacattctt atttttatcg agcacaa 57

<210> 2298

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2298

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2299

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2299

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2300

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2300

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2301

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2301

actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgggcaag tagctatcta 60

atgactaaaa tgg 73

<210> 2302

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2302

actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttggttgaa tgggcaagta 60

gctatctaat gactaaaatg g 81

<210> 2303

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2303

actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgaatggg caagtagcta 60

tctaatgact aaaatgg 77

<210> 2304

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2304

actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgac cttgtgaatg ggcaagtagc 60

tatctaatga ctaaaatgg 79

<210> 2305

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2305

actgttgatt agaggtaggg aaatgatttt aatctgtgaa tgggcaagta gctatctaat 60

gactaaaatg g 71

<210> 2306

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2306

atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaagagaaa cagttttagt ataacaagtg 60

aaatacccat 70

<210> 2307

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2307

atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaaacac tggaagagaa acagttttag 60

tataacaagt gaaataccca t 81

<210> 2308

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2308

atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaacactgg aagagaaaca gttttagtat 60

aacaagtgaa atacccat 78

<210> 2309

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2309

atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaactgg aagagaaaca gttttagtat 60

aacaagtgaa atacccat 78

<210> 2310

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2310

atgggcaagt agctatctaa tgactaaaat ggaaaaccac tggaagagaa acagttttag 60

tataacaagt gaaataccca t 81

<210> 2311

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2311

cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaa 77

<210> 2312

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2312

cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatctgagt ctgaggtgcc 60

tataggacat ctatataaa 79

<210> 2313

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2313

cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccactgagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaa 78

<210> 2314

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2314

cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac ccatggagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaa 78

<210> 2315

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2315

cactggaaga gaaacagttt tagtataaca agtgaaatac cctgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaa 76

<210> 2316

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2316

taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggacatctat ataaataagc ccagtacatt 60

gtttgatata 70

<210> 2317

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2317

taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccatag gacatctata taaataagcc 60

cagtacattg tttgatata 79

<210> 2318

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2318

taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccctat aggacatcta tataaataag 60

cccagtacat tgtttgatat a 81

<210> 2319

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2319

taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgccttat aggacatcta tataaataag 60

cccagtacat tgtttgatat a 81

<210> 2320

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2320

taacaagtga aatacccatg ctgagtctga ggtgctatag gacatctata taaataagcc 60

cagtacattg tttgatata 79

<210> 2321

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2321

tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatataaat aagcccagta 60

cattgtttg 69

<210> 2322

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2322

tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatagacat ctatataaat 60

aagcccagta cattgtttg 79

<210> 2323

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2323

tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatggacat ctatataaat 60

aagcccagta cattgtttg 79

<210> 2324

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2324

tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctatagggac atctatataa 60

ataagcccag tacattgttt g 81

<210> 2325

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2325

tagtataaca agtgaaatac ccatgctgag tctgaggtgc ctataaggac atctatataa 60

ataagcccag tacattgttt g 81

<210> 2326

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2326

tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattacagg ctgtatttaa gagtttagat 60

ataactgtga atccaaga 78

<210> 2327

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2327

tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattaatac aggctgtatt taagagttta 60

gatataactg tgaatccaag a 81

<210> 2328

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2328

tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggatttacag gctgtattta agagtttaga 60

tataactgtg aatccaaga 79

<210> 2329

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2329

tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattattac aggctgtatt taagagttta 60

gatataactg tgaatccaag a 81

<210> 2330

<211> 82

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2330

tcagaggtta gaaatcagag ttgggaattg ggattaaata caggctgtat ttaagagttt 60

agatataact gtgaatccaa ga 82

<210> 2331

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2331

tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtatctaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttctac 79

<210> 2332

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2332

tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggactctagg gtcagagaaa tatgggttat 60

atccttctac 70

<210> 2333

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2333

tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttctac 67

<210> 2334

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2334

tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtataacta aggactctag ggtcagagaa 60

atatgggtta tatccttcta c 81

<210> 2335

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2335

tgtaaggagg atgagccaca tggtatggga ggtaaggact ctagggtcag agaaatatgg 60

gttatatcct tctac 75

<210> 2336

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2336

gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggacttcta gggtcagaga aatatgggtt 60

atatccttct acaaaattca c 81

<210> 2337

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2337

gatgagccac atggtatggg aggtatacta gggtcagaga aatatgggtt atatccttct 60

acaaaattca c 71

<210> 2338

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2338

gatgagccac atggtatggg aggtatacta agggtcagag aaatatgggt tatatccttc 60

tacaaaattc ac 72

<210> 2339

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2339

gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggactaggg tcagagaaat atgggttata 60

tccttctaca aaattcac 78

<210> 2340

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2340

gatgagccac atggtatggg aggtatacta aggtcagaga aatatgggtt atatccttct 60

acaaaattca c 71

<210> 2341

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2341

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2342

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2342

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2343

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2343

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2344

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2344

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2345

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2345

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2346

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2346

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2347

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2347

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2348

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2348

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2349

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2349

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2350

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2350

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2351

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2351

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2352

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2352

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2353

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2353

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2354

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2354

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2355

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2355

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2356

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2356

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2357

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2357

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2358

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2358

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2359

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2359

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2360

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2360

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2361

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2361

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2362

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2362

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2363

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2363

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2364

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2364

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2365

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2365

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2366

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2366

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaattagt ggaatgtatc ttagagttta 60

acttatttgt ttctgtcac 79

<210> 2367

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2367

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaatagtg gaatgtatct tagagtttaa 60

cttatttgtt tctgtcac 78

<210> 2368

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2368

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag tggaatgtat cttagagttt aacttatttg 60

tttctgtcac 70

<210> 2369

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2369

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataata gtggaatgta tcttagagtt 60

taacttattt gtttctgtca c 81

<210> 2370

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2370

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataagt ggaatgtatc ttagagttta 60

acttatttgt ttctgtcac 79

<210> 2371

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2371

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaatagtg gaatgtatct tagagtttaa 60

cttatttgtt tctgtcac 78

<210> 2372

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2372

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaattagt ggaatgtatc ttagagttta 60

acttatttgt ttctgtcac 79

<210> 2373

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2373

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag tggaatgtat cttagagttt aacttatttg 60

tttctgtcac 70

<210> 2374

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2374

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gctaataagt ggaatgtatc ttagagttta 60

acttatttgt ttctgtcac 79

<210> 2375

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2375

cctagtttca tttttgcaga agtgttttag gaatgtatct tagagtttaa cttatttgtt 60

tctgtcac 68

<210> 2376

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2376

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttgaat ggacaaatct attgctgcag 60

tttaaacttg cttgcttcc 79

<210> 2377

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2377

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggac aaatctattg ctgcagttta 60

aacttgcttg cttcc 75

<210> 2378

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2378

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga atggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60

tgcttgcttc c 71

<210> 2379

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2379

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60

tgcttgcttc c 71

<210> 2380

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2380

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggga atggacaaat ctattgctgc 60

agtttaaact tgcttgcttc c 81

<210> 2381

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2381

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttgaat ggacaaatct attgctgcag 60

tttaaacttg cttgcttcc 79

<210> 2382

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2382

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60

tgcttgcttc c 71

<210> 2383

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2383

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggac aaatctattg ctgcagttta 60

aacttgcttg cttcc 75

<210> 2384

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2384

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga gaggttggga atggacaaat ctattgctgc 60

agtttaaact tgcttgcttc c 81

<210> 2385

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2385

tagagatttt tgtctccaag ggaattttga atggacaaat ctattgctgc agtttaaact 60

tgcttgcttc c 71

<210> 2386

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2386

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatgaag ggatggagga gaagaaggaa 60

aaataaataa tggagagga 79

<210> 2387

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2387

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60

aatggagagg a 71

<210> 2388

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2388

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gagggatgga ggagaagaag gaaaaataaa 60

taatggagag ga 72

<210> 2389

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2389

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggga agggatggag gagaagaagg 60

aaaaataaat aatggagagg a 81

<210> 2390

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2390

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggaaggga tggaggagaa gaaggaaaaa 60

taaataatgg agagga 76

<210> 2391

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2391

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60

aatggagagg a 71

<210> 2392

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2392

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggatgaag ggatggagga gaagaaggaa 60

aaataaataa tggagagga 79

<210> 2393

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2393

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga agggatggag gagaagaagg aaaaataaat 60

aatggagagg a 71

<210> 2394

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2394

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gaggaaggga tggaggagaa gaaggaaaaa 60

taaataatgg agagga 76

<210> 2395

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2395

gagaaaggaa ggaaggaaga ggggaagaga gagggatgga ggagaagaag gaaaaataaa 60

taatggagag ga 72

<210> 2396

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2396

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaagag gagagaaaag aaacgaagag 60

aggggaaggg aaggaaaa 78

<210> 2397

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2397

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggag agaaaagaaa cgaagagagg 60

ggaagggaag gaaaa 75

<210> 2398

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2398

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggag agaaaagaaa cgaagagagg ggaagggaag 60

gaaaa 65

<210> 2399

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2399

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaaacgaag agaggggaag ggaaggaaaa 60

<210> 2400

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2400

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaggagaga aaagaaacga agagagggga 60

agggaaggaa aa 72

<210> 2401

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2401

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggag agaaaagaaa cgaagagagg 60

ggaagggaag gaaaa 75

<210> 2402

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2402

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaagag gagagaaaag aaacgaagag 60

aggggaaggg aaggaaaa 78

<210> 2403

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2403

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggag agaaaagaaa cgaagagagg ggaagggaag 60

gaaaa 65

<210> 2404

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2404

gagaaagaga aagggaaggg aagagaggaa agaagaggaa gaggagagaa aagaaacgaa 60

gagaggggaa gggaaggaaa a 81

<210> 2405

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2405

gagaaagaga aagggaaggg aggagagaaa agaaacgaag agaggggaag ggaaggaaaa 60

<210> 2406

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2406

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2407

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2407

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2408

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2408

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2409

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2409

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcagccac ttaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2410

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2410

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa ccacttaaat gcttaccaac agtagaattg 60

ataaat 66

<210> 2411

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2411

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2412

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2412

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2413

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2413

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2414

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2414

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2415

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2415

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2416

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2416

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaaccca gaggtgagtt caaactatat 60

gactttattt gtatatagaa a 81

<210> 2417

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2417

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagaggtgag ttcaaactat atgactttat 60

ttgtatatag aaa 73

<210> 2418

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2418

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaacaga ggtgagttca aactatatga 60

ctttatttgt atatagaaa 79

<210> 2419

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2419

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aaggtgagtt caaactatat gactttattt 60

gtatatagaa a 71

<210> 2420

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2420

aaatgcattt tacagcattt ggttgagttc aaactatatg actttatttg tatatagaaa 60

<210> 2421

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2421

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaaccca gaggtgagtt caaactatat 60

gactttattt gtatatagaa a 81

<210> 2422

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2422

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagaggtgag ttcaaactat atgactttat 60

ttgtatatag aaa 73

<210> 2423

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2423

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aagtaacaga ggtgagttca aactatatga 60

ctttatttgt atatagaaa 79

<210> 2424

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2424

aaatgcattt tacagcattt ggttgattaa aaggtgagtt caaactatat gactttattt 60

gtatatagaa a 71

<210> 2425

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2425

aaatgcattt tacagcattt ggttgagttc aaactatatg actttatttg tatatagaaa 60

<210> 2426

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2426

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaaag gtggtggcat ggtttgattt 60

gtgtctttaa aagattattc t 81

<210> 2427

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2427

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaaggtggt ggcatggttt gatttgtgtc 60

tttaaaagat tattct 76

<210> 2428

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2428

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaggt ggtggcatgg tttgatttgt 60

gtctttaaaa gattattct 79

<210> 2429

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2429

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaggtg gtggcatggt ttgatttgtg 60

tctttaaaag attattct 78

<210> 2430

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2430

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaggtggtg gcatggtttg atttgtgtct 60

ttaaaagatt attct 75

<210> 2431

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2431

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaaag gtggtggcat ggtttgattt 60

gtgtctttaa aagattattc t 81

<210> 2432

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2432

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaaggtggt ggcatggttt gatttgtgtc 60

tttaaaagat tattct 76

<210> 2433

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2433

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaaggt ggtggcatgg tttgatttgt 60

gtctttaaaa gattattct 79

<210> 2434

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2434

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaggtg gtggcatggt ttgatttgtg 60

tctttaaaag attattct 78

<210> 2435

<211> 82

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2435

cctggaagcc aacgaaagat attgaataat tcaagaacaa ggtggtggca tggtttgatt 60

tgtgtcttta aaagattatt ct 82

<210> 2436

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2436

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ggataaggtc taaaagtgga 60

aagaata 67

<210> 2437

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2437

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca cccatccagc caggataagg 60

tctaaaagtg gaaagaata 79

<210> 2438

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2438

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca tccagccagg ataaggtcta 60

aaagtggaaa gaata 75

<210> 2439

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2439

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgatccagc caggataagg 60

tctaaaagtg gaaagaata 79

<210> 2440

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2440

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccagccagga taaggtctaa 60

aagtggaaag aata 74

<210> 2441

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2441

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ggataaggtc taaaagtgga 60

aagaata 67

<210> 2442

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2442

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca cccatccagc caggataagg 60

tctaaaagtg gaaagaata 79

<210> 2443

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2443

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgatccagc caggataagg 60

tctaaaagtg gaaagaata 79

<210> 2444

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2444

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccgtccagcc aggataaggt 60

ctaaaagtgg aaagaata 78

<210> 2445

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2445

ccttggcctc ccaaagtgct gggtttacaa gcctgagcca ccagccagga taaggtctaa 60

aagtggaaag aata 74

<210> 2446

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2446

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggtctaaaag tggaaagaat 60

agcatctact cttg 74

<210> 2447

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2447

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggattaaggt ctaaaagtgg 60

aaagaatagc atctactctt g 81

<210> 2448

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2448

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaataaggt ctaaaagtgg 60

aaagaatagc atctactctt g 81

<210> 2449

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2449

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaaaggtct aaaagtggaa 60

agaatagcat ctactcttg 79

<210> 2450

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2450

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggatctaaaa gtggaaagaa 60

tagcatctac tcttg 75

<210> 2451

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2451

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggtctaaaag tggaaagaat 60

agcatctact cttg 74

<210> 2452

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2452

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggattaaggt ctaaaagtgg 60

aaagaatagc atctactctt g 81

<210> 2453

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2453

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaataaggt ctaaaagtgg 60

aaagaatagc atctactctt g 81

<210> 2454

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2454

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggaaaggtct aaaagtggaa 60

agaatagcat ctactcttg 79

<210> 2455

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2455

aagtgctggg tttacaagcc tgagccaccg catccagcca ggatctaaaa gtggaaagaa 60

tagcatctac tcttg 75

<210> 2456

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2456

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2457

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2457

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2458

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2458

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2459

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2459

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60

acaaattga 69

<210> 2460

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2460

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60

caaattga 68

<210> 2461

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2461

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2462

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2462

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2463

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2463

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2464

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2464

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2465

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2465

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60

acaaattga 69

<210> 2466

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2466

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2467

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2467

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2468

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2468

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2469

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2469

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2470

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2470

cacaaacgga aacaaugcaa guuuuagagc uaugcu 36

<210> 2471

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2471

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2472

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2472

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2473

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2473

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2474

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2474

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2475

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2475

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2476

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2476

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2477

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2477

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct 60

gtggataagc cacct 75

<210> 2478

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2478

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa 60

agctgtggat aagccacct 79

<210> 2479

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2479

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgatg gcagcctctg cttagaaaaa 60

gctgtggata agccacct 78

<210> 2480

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2480

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatgcag cctctgctta gaaaaagctg 60

tggataagcc acct 74

<210> 2481

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2481

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa 60

agctgtggat aagccacct 79

<210> 2482

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2482

acattcttat ttttatcgag cacaaacgga aacaaatgca atggcagcct ctgcttagaa 60

aaagctgtgg ataagccacc t 81

<210> 2483

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2483

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2484

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2484

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2485

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2485

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2486

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2486

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2487

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2487

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2488

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2488

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2489

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2489

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2490

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2490

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2491

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2491

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2492

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2492

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2493

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2493

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2494

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2494

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2495

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2495

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2496

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2496

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2497

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2497

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2498

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2498

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2499

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2499

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2500

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2500

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ttgttctcct ctacatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2501

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2501

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2502

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2502

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2503

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2503

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2504

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2504

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2505

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2505

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2506

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2506

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2507

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2507

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2508

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2508

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2509

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2509

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2510

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2510

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2511

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2511

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2512

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2512

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2513

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2513

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctccc caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2514

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2514

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctgcatatct ccccaccgca 60

tctctttcag cagttgtttc 80

<210> 2515

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2515

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctaatatctc cccaccgcat 60

ctctttcagc agttgtttc 79

<210> 2516

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2516

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatatctcc ccaccgcatc 60

tctttcagca gttgtttc 78

<210> 2517

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2517

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct caccgcatct ctttcagcag 60

ttgtttc 67

<210> 2518

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2518

ttctgtcatg tgtgtcttga ctcagaaacc ctgttctcct ctatctcccc accgcatctc 60

tttcagcagt tgtttc 76

<210> 2519

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2519

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2520

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2520

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60

tgtttctaaa aatatcctcc 80

<210> 2521

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2521

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2522

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2522

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2523

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2523

tcttgactca gaaaccttgt tctcctctac atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60

tgtttctaaa aatatcctcc 80

<210> 2524

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2524

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2525

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2525

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2526

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2526

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2527

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2527

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2528

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2528

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2529

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2529

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2530

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2530

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60

cctcc 65

<210> 2531

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2531

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2532

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2532

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2533

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2533

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2534

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2534

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2535

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2535

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60

tgtttctaaa aatatcctcc 80

<210> 2536

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2536

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2537

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2537

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2538

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2538

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2539

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2539

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2540

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2540

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accgtctttc agcagttgtt 60

tctaaaaata tcctcc 76

<210> 2541

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2541

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc actctttcag cagttgtttc 60

taaaaatatc ctcc 74

<210> 2542

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2542

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60

cctcc 65

<210> 2543

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2543

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2544

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2544

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60

tgtttctaaa aatatcctcc 80

<210> 2545

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2545

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2546

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2546

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2547

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2547

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2548

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2548

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2549

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2549

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2550

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2550

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctgc atatctcccc accgcatctc tttcagcagt 60

tgtttctaaa aatatcctcc 80

<210> 2551

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2551

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2552

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2552

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2553

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2553

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2554

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2554

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2555

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2555

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2556

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2556

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2557

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2557

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2558

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2558

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accatctctt tcagcagttg 60

tttctaaaaa tatcctcc 78

<210> 2559

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2559

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2560

<211> 65

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2560

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atctctttca gcagttgttt ctaaaaatat 60

cctcc 65

<210> 2561

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2561

tcttgactca gaaaccctgt tctctttcag cagttgtttc taaaaatatc ctcc 54

<210> 2562

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2562

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcttt cagcagttgt ttctaaaaat 60

atcctcc 67

<210> 2563

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2563

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acccatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2564

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2564

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc accggcatct ctttcagcag 60

ttgtttctaa aaatatcctc c 81

<210> 2565

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2565

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc atctctttca gcagttgttt 60

ctaaaaatat cctcc 75

<210> 2566

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2566

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc acgcatctct ttcagcagtt 60

gtttctaaaa atatcctcc 79

<210> 2567

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2567

tcttgactca gaaaccctgt tctcctctac atatctcccc actctttcag cagttgtttc 60

taaaaatatc ctcc 74

<210> 2568

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2568

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2569

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2569

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2570

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2570

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2571

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2571

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2572

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2572

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2573

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2573

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaagcc acttaaatgc ttaccaacag 60

tagaattgat aaat 74

<210> 2574

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2574

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtgccactta aatgcttacc 60

aacagtagaa ttgataaat 79

<210> 2575

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2575

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2576

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2576

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2577

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2577

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaagcca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2578

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2578

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2579

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2579

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2580

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2580

aaatgcttat gacagcaata attaccaaca gtagaattga taaat 45

<210> 2581

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2581

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaatgc ttaccaacag tagaattgat 60

aaat 64

<210> 2582

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2582

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2583

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2583

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2584

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2584

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2585

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2585

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2586

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2586

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2587

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2587

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaagcca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2588

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2588

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcagccac ttaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2589

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2589

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2590

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2590

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2591

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2591

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2592

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2592

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2593

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2593

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gccacttaaa tgcttaccaa 60

cagtagaatt gataaat 77

<210> 2594

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2594

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaactt aaatgcttac caacagtaga 60

attgataaat 70

<210> 2595

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2595

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2596

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2596

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2597

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2597

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2598

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2598

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtagaattga taaat 55

<210> 2599

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2599

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtgccactta aatgcttacc 60

aacagtagaa ttgataaat 79

<210> 2600

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2600

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2601

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2601

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaccactta aatgcttacc 60

aacagtagaa ttgataaat 79

<210> 2602

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2602

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaacttaaa tgcttaccaa 60

cagtagaatt gataaat 77

<210> 2603

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2603

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaacca cttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2604

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2604

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaggccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2605

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2605

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaagccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2606

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2606

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gttaaatgct taccaacagt 60

agaattgata aat 73

<210> 2607

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2607

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtaaatgctt accaacagta 60

gaattgataa at 72

<210> 2608

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2608

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtacttaaat gcttaccaac 60

agtagaattg ataaat 76

<210> 2609

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2609

aaatgcttat gacagcaata atcataaaaa cctcaaaccg gtatgccact taaatgctta 60

ccaacagtag aattgataaa t 81

<210> 2610

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2610

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2611

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2611

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2612

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2612

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2613

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2613

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga gggcagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2614

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2614

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2615

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2615

tagcatctac tcttgttcag gtaagagtgg tgattaatag atagggacaa attga 55

<210> 2616

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2616

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggaccttact gggcagtaag agtggtgatt 60

aatagatagg gacaaattga 80

<210> 2617

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2617

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2618

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2618

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2619

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2619

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2620

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2620

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtgg gcagtaagag tggtgattaa 60

tagataggga caaattga 78

<210> 2621

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2621

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60

taatagatag ggacaaattg a 81

<210> 2622

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2622

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2623

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2623

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgaac tgggcagtaa gagtggtgat 60

taatagatag ggacaaattg a 81

<210> 2624

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2624

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2625

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2625

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2626

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2626

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2627

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2627

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60

acaaattga 69

<210> 2628

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2628

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga gggcagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2629

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2629

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60

taatagatag ggacaaattg a 81

<210> 2630

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2630

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60

caaattga 68

<210> 2631

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2631

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2632

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2632

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2633

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2633

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2634

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2634

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2635

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2635

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60

taatagatag ggacaaattg a 81

<210> 2636

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2636

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60

caaattga 68

<210> 2637

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2637

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60

acaaattga 69

<210> 2638

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2638

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2639

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2639

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2640

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2640

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2641

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2641

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtac tgggcagtaa gagtggtgat 60

taatagatag ggacaaattg a 81

<210> 2642

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2642

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggaccactgg gcagtaagag tggtgattaa 60

tagataggga caaattga 78

<210> 2643

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2643

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2644

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2644

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctggta agagtggtga ttaatagata 60

gggacaaatt ga 72

<210> 2645

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2645

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgggc agtaagagtg gtgattaata 60

gatagggaca aattga 76

<210> 2646

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2646

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctactg ggcagtaaga gtggtgatta 60

atagataggg acaaattga 79

<210> 2647

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2647

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggactgggca gtaagagtgg tgattaatag 60

atagggacaa attga 75

<210> 2648

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2648

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacagtaag agtggtgatt aatagatagg 60

gacaaattga 70

<210> 2649

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2649

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggcagtaaga gtggtgatta atagataggg 60

acaaattga 69

<210> 2650

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2650

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatga ggacctgtaa gagtggtgat taatagatag 60

ggacaaattg a 71

<210> 2651

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2651

tagcatctac tcttgttcag gaaacaatgg gcagtaagag tggtgattaa tagataggga 60

caaattga 68

<210> 2652

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2652

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2653

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2653

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaata 80

<210> 2654

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2654

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2655

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2655

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2656

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2656

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60

taaata 66

<210> 2657

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2657

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2658

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2658

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatactg agtctgaggt gcctatagga 60

catctatata aata 74

<210> 2659

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2659

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2660

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2660

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2661

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2661

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2662

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2662

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2663

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2663

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60

taaata 66

<210> 2664

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2664

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2665

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2665

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgtgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2666

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2666

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2667

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2667

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaata 80

<210> 2668

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2668

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2669

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2669

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2670

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2670

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2671

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2671

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgagtctgag gtgcctatag gacatctata 60

taaata 66

<210> 2672

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2672

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatacct gagtctgagg tgcctatagg 60

acatctatat aaata 75

<210> 2673

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2673

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2674

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2674

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2675

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2675

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaata 80

<210> 2676

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2676

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2677

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2677

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2678

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2678

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2679

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2679

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2680

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2680

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2681

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2681

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2682

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2682

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2683

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2683

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2684

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2684

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2685

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2685

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc tgagtctgag gtgcctatag 60

gacatctata taaata 76

<210> 2686

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2686

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaatacct gagtctgagg tgcctatagg 60

acatctatat aaata 75

<210> 2687

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2687

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2688

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2688

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgagtctga ggtgcctata 60

ggacatctat ataaata 77

<210> 2689

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2689

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atctgagtct gaggtgccta 60

taggacatct atataaata 79

<210> 2690

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2690

ctggaagaga aatagtttta gtataacaag tgaaataccc atgctgagtc tgaggtgcct 60

ataggacatc tatataaata 80

<210> 2691

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2691

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc actgagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2692

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2692

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc atggagtctg aggtgcctat 60

aggacatcta tataaata 78

<210> 2693

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2693

ctggaagaga aacagtttta gtataacaag tgaaataccc tgagtctgag gtgcctatag 60

gacatctata taaata 76

<210> 2694

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2694

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60

agggtggggg cgtgggtgg 79

<210> 2695

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2695

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60

gtgggggcgt gggtgg 76

<210> 2696

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2696

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60

ttagggtggg ggcgtgggtg g 81

<210> 2697

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2697

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60

tgggggcgtg ggtgg 75

<210> 2698

<211> 44

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2698

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggcgtgg gtgg 44

<210> 2699

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2699

gtctagtgca agctaacaac atcacaggct ccaggatagg gggcgtgggt gg 52

<210> 2700

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2700

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta 60

gggtgggggc gtgggtgg 78

<210> 2701

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2701

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtgggggcg tgggtgg 57

<210> 2702

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2702

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60

gtgggggcgt gggtgg 76

<210> 2703

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2703

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60

tgggggcgtg ggtgg 75

<210> 2704

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2704

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60

agggtggggg cgtgggtgg 79

<210> 2705

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2705

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60

ttagggtggg ggcgtgggtg g 81

<210> 2706

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2706

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggcctctgat tagggtgggg 60

gcgtgggtgg 70

<210> 2707

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2707

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60

agggtggggg cgtgggtgg 79

<210> 2708

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2708

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60

tgggggcgtg ggtgg 75

<210> 2709

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2709

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60

gtgggggcgt gggtgg 76

<210> 2710

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2710

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60

ttagggtggg ggcgtgggtg g 81

<210> 2711

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2711

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggggcgtggg tgg 53

<210> 2712

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2712

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gcgtgggtgg 50

<210> 2713

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2713

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggcctct gattagggtg ggggcgtggg 60

tgg 63

<210> 2714

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2714

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggtttggcct ctgattaggg 60

tgggggcgtg ggtgg 75

<210> 2715

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2715

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca gggtttggcc tctgattagg 60

gtgggggcgt gggtgg 76

<210> 2716

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2716

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggagggtttg gcctctgatt 60

agggtggggg cgtgggtgg 79

<210> 2717

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2717

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaaagggtt tggcctctga 60

ttagggtggg ggcgtgggtg g 81

<210> 2718

<211> 82

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2718

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagagggt ttggcctctg 60

attagggtgg gggcgtgggt gg 82

<210> 2719

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2719

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggattagggt gggggcgtgg 60

gtgg 64

<210> 2720

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2720

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaggtttgg cctctgatta 60

gggtgggggc gtgggtgg 78

<210> 2721

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2721

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60

gaggactggc agacctctc 79

<210> 2722

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2722

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60

tctc 64

<210> 2723

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2723

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60

c 61

<210> 2724

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2724

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2725

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2725

tatcacaggc tccaggaagg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag acctctc 57

<210> 2726

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2726

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tggtgggggc gtgggtgggg tagaagagga 60

ctggcagacc tctc 74

<210> 2727

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2727

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60

gcagacctct c 71

<210> 2728

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2728

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60

gaggactggc agacctctc 79

<210> 2729

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2729

tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60

acctctc 67

<210> 2730

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2730

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2731

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2731

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60

c 61

<210> 2732

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2732

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60

tctc 64

<210> 2733

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2733

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagagg tgggggcgtg ggtggggtag 60

aagaggactg gcagacctct c 81

<210> 2734

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2734

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2735

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2735

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2736

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2736

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60

gaggactggc agacctctc 79

<210> 2737

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2737

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgaaggactg gcagacctct c 51

<210> 2738

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2738

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagagg tgggggcgtg ggtggggtag 60

aagaggactg gcagacctct c 81

<210> 2739

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2739

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60

tctc 64

<210> 2740

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2740

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60

gcagacctct c 71

<210> 2741

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2741

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagggc gtgggtgggg tagaagagga 60

ctggcagacc tctc 74

<210> 2742

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2742

tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60

acctctc 67

<210> 2743

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2743

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattaggtg ggggcgtggg tggggtagaa 60

gaggactggc agacctctc 79

<210> 2744

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2744

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattggtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2745

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2745

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgggggcgtg ggtggggtag aagaggactg 60

gcagacctct c 71

<210> 2746

<211> 64

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2746

tatcacaggc tccaggaagg gtttgggggc gtgggtgggg tagaagagga ctggcagacc 60

tctc 64

<210> 2747

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2747

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcgtg ggtggggtag aagaggactg gcagacctct 60

c 61

<210> 2748

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2748

tatcacaggc tccaggaagg gggcgtgggt ggggtagaag aggactggca gacctctc 58

<210> 2749

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2749

tatcacaggc tccaggaagg gtttggtggg ggcgtgggtg gggtagaaga ggactggcag 60

acctctc 67

<210> 2750

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2750

tatcacaggc tccaggaagg gtttggcctc tgattagtgg gggcgtgggt ggggtagaag 60

aggactggca gacctctc 78

<210> 2751

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2751

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2752

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2752

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2753

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2753

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2754

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2754

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2755

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2755

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2756

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2756

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2757

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2757

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2758

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2758

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2759

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2759

atgtaaggag gatgagccac atggtatggt aaggactcta gggtcagaga aatatgggtt 60

atatccttct a 71

<210> 2760

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2760

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2761

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2761

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2762

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2762

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2763

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2763

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2764

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2764

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2765

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2765

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2766

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2766

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2767

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2767

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2768

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2768

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2769

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2769

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2770

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2770

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg ttatatcctt cta 43

<210> 2771

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2771

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2772

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2772

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2773

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2773

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2774

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2774

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2775

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2775

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2776

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2776

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2777

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2777

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2778

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2778

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2779

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2779

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2780

<211> 46

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2780

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggttatatc cttcta 46

<210> 2781

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2781

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2782

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2782

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2783

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2783

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2784

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2784

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2785

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2785

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2786

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2786

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2787

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2787

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2788

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2788

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2789

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2789

atgtaaggag gatgagccac atggtatgga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2790

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2790

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2791

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2791

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2792

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2792

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2793

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2793

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2794

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2794

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2795

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2795

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2796

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2796

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2797

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2797

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2798

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2798

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2799

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2799

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2800

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2800

atgtaaggag gatgagccac atggtataag gactctaggg tcagagaaat atgggttata 60

tccttcta 68

<210> 2801

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2801

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggactctag ggtcagagaa atatgggtta 60

tatccttcta 70

<210> 2802

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2802

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatctaa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2803

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2803

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataact aaggactcta gggtcagaga 60

aatatgggtt atatccttct a 81

<210> 2804

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2804

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg actctagggt cagagaaata tgggttatat 60

ccttcta 67

<210> 2805

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2805

atgtaaggag gatgagccac atggtaagga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2806

<211> 75

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2806

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtaaggac tctagggtca gagaaatatg 60

ggttatatcc ttcta 75

<210> 2807

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2807

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtataagg actctagggt cagagaaata 60

tgggttatat ccttcta 77

<210> 2808

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2808

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtactaag gactctaggg tcagagaaat 60

atgggttata tccttcta 78

<210> 2809

<211> 79

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2809

atgtaaggag gatgagccac atggtatggg aggtatataa ggactctagg gtcagagaaa 60

tatgggttat atccttcta 79

<210> 2810

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2810

atgtaaggag gatgagccac atggtatgga ctctagggtc agagaaatat gggttatatc 60

cttcta 66

<210> 2811

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2811

ggccacggag cgagacaucu 20

<210> 2812

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2812

cagacagcaa actcacccag t 21

<210> 2813

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2813

ctgacgctta tcgacgccct 20

<210> 2814

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2814

agctccaaac tctcaaacca caggg 25

<210> 2815

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2815

tacaattttg ggagtccaca cggca 25

<210> 2816

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2816

agctccaaac tctcaaacca caggg 25

<210> 2817

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2817

tacaattttg ggagtccaca cggca 25

<210> 2818

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2818

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2819

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2819

tcgtcggcag cgtcagatgt gtataagaga cag 33

<210> 2820

<211> 34

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2820

gtctcgtggg ctcggagatg tgtataagag acag 34

<210> 2821

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<220>

<221> modified_base

<222> (30)..(37)

<223> a, c, t, g, неизвестно или другое

<400> 2821

aatgatacgg cgaccaccga gatctacacn nnnnnnntcg tcggcagcgt c 51

<210> 2822

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<220>

<221> modified_base

<222> (25)..(32)

<223> a, c, t, g, неизвестно или другое

<400> 2822

caagcagaag acggcatacg agatnnnnnn nngtctcgtg ggctcgg 47

<210> 2823

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2823

caagcagaag acggcatacg a 21

<210> 2824

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

праймер"

<400> 2824

aatgatacgg cgaccaccga ga 22

<210> 2825

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2825

ctcacctcca ccctaatcag agg 23

<210> 2826

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2826

cacgcccaca ccttaatcag ggg 23

<210> 2827

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2827

cacgacccaa ccctaatcag agg 23

<210> 2828

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2828

ctagccccta ccctaataag tgg 23

<210> 2829

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2829

tttataacag gctccagaaa tgg 23

<210> 2830

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2830

catatcacag gccccaggag ggg 23

<210> 2831

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2831

tggggtgggg agatatgaag agg 23

<210> 2832

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2832

ggaggtgggg agagatgtag agg 23

<210> 2833

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2833

catgcggaaa gagatgcggt tgg 23

<210> 2834

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2834

aggtacctca aactcagcat agg 23

<210> 2835

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2835

agagacccca gactcagcat agg 23

<210> 2836

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2836

atggtatgag aaatatacta tgg 23

<210> 2837

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2837

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2838

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2838

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2839

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2839

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uaugcuguuu ug 42

<210> 2840

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(20)

<223> a, c, u, g, неизвестно или другое

<400> 2840

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc 60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 100

<210> 2841

<211> 93

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2841

ctgtccaccc atccatcaca tataggcacc tatcaggtac cagctactgt gttaggatct 60

gtgttcccaa ctgacttgcc tccccctgac gtc 93

<210> 2842

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2842

cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct actgtgttag gatctg 56

<210> 2843

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2843

cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2844

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2844

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2845

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2845

cacccatcca tcacatatag gcaccatcag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55

<210> 2846

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2846

cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2847

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2847

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2848

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2848

cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2849

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2849

cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2850

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2850

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2851

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2851

cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2852

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2852

cacccatcca tcacatatag gcaccttatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2853

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2853

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2854

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2854

cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2855

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2855

cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct actgtgttag gatctg 56

<210> 2856

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2856

cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2857

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2857

cacccatcca tcacatatag gtaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2858

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2858

cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55

<210> 2859

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2859

cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2860

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2860

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2861

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2861

cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55

<210> 2862

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2862

cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2863

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2863

cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55

<210> 2864

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2864

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2865

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2865

cacccatcca tcacatatag gcacctatca aggtaccagc tactgtgtta ggatctg 57

<210> 2866

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2866

cacccatcca tcacatatag gcaccagcta ctgtgttagg atctg 45

<210> 2867

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2867

cacccatcca tcacatatag gcacctatcg gtaccagcta ctgtgttagg atctg 55

<210> 2868

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2868

ggcacctatc aggtaccagc tactgtgtta ggatctgtgt tcccaactga cttgcctccc 60

<210> 2869

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2869

ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60

c 61

<210> 2870

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2870

ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58

<210> 2871

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2871

ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48

<210> 2872

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2872

ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60

c 61

<210> 2873

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2873

ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58

<210> 2874

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2874

ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48

<210> 2875

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2875

ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60

c 61

<210> 2876

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2876

ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58

<210> 2877

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2877

ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48

<210> 2878

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2878

ggcacctatc aggtaccagc tactgttgtt aggatctgtg ttcccaactg acttgcctcc 60

c 61

<210> 2879

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2879

ggcacctatc aggtaccagc tactgttagg atctgtgttc ccaactgact tgcctccc 58

<210> 2880

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2880

ggcacctatc aggtaccagc tactgtgttc ccaactgact tgcctccc 48

<210> 2881

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2881

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcacatatag gcacctatca ggtaccagct 60

<210> 2882

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2882

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58

<210> 2883

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2883

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55

<210> 2884

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2884

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43

<210> 2885

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2885

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58

<210> 2886

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2886

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55

<210> 2887

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2887

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43

<210> 2888

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2888

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58

<210> 2889

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2889

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43

<210> 2890

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2890

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55

<210> 2891

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2891

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcatataggc acctatcagg taccagct 58

<210> 2892

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2892

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tataggcacc tatcaggtac cagct 55

<210> 2893

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2893

ttttcatctg tcgggctgtc cacccatcca tcaggtacca gct 43

<210> 2894

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2894

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60

<210> 2895

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2895

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2896

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2896

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2897

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2897

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2898

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2898

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2899

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2899

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2900

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2900

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2901

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2901

ttttatcgag cacaaacgga aacaatgcaa tggcagcctc tgcttagaaa aagctgtgga 60

<210> 2902

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2902

ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct gtgga 55

<210> 2903

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2903

ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59

<210> 2904

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2904

ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59

<210> 2905

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2905

ttttatcgag cacaaacgga aacaatggca gcctctgctt agaaaaagct gtgga 55

<210> 2906

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2906

ttttatcgag cacaaacgga aacaatgaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59

<210> 2907

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2907

ttttatcgag cacaaacgga aacaatcaat ggcagcctct gcttagaaaa agctgtgga 59

<210> 2908

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2908

atgagtgcag aatatgcccc gcagggtatt tgtaagttga gccttatttc ttctacgaaa 60

<210> 2909

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2909

atgagtgcag ggtatttgta agttgagcct tatttcttct acaaa 45

<210> 2910

<211> 54

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2910

atgagtgcag aatatgcagg gtatttgtaa gttgagcctt atttcttcta caaa 54

<210> 2911

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2911

atgagtgcag aatatgcccg cagggtattt gtaagttgag ccttatttct tctacgaaa 59

<210> 2912

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2912

gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacgg 60

aaacaatgca atggcagc 78

<210> 2913

<211> 80

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2913

gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt 60

ggcaccgagt cggtgctttt 80

<210> 2914

<211> 90

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2914

gtttaagagc tatgctggaa acagcatagc aagtttaaat aaggctagtc cgttatcaac 60

ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt 90

<210> 2915

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2915

agtgccagat gaacttccca ttgggggaca ttcttatttt ta 42

<210> 2916

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2916

agtgccagat gaacttccat tgggggacat tcttattttt a 41

<210> 2917

<211> 40

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2917

agtgccagat gaacttcatt gggggacatt cttattttta 40

<210> 2918

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2918

agtgccagat gaacttcccc attgggggac attcttattt tta 43

<210> 2919

<211> 41

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2919

agtgccagat gaacttccat tgggggacat tcttattttt a 41

<210> 2920

<211> 40

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2920

agtgccagat gaacttcatt gggggacatt cttattttta 40

<210> 2921

<211> 43

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2921

agtgccagat gaacttcccc attgggggac attcttattt tta 43

<210> 2922

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2922

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccat tgggggacat tcttattttt atcgagcaca 60

<210> 2923

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2923

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2924

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2924

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2925

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2925

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2926

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2926

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2927

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2927

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2928

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2928

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2929

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2929

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2930

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2930

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2931

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2931

cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55

<210> 2932

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2932

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2933

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2933

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2934

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2934

cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55

<210> 2935

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2935

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2936

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2936

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2937

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2937

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2938

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2938

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2939

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2939

cctgtgggca gtgccagatg aacttcccca ttgggggaca ttcttatttt tatcgagcac 60

a 61

<210> 2940

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2940

cctgtgggca gtgccagatg aacttccttg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2941

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2941

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2942

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2942

cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55

<210> 2943

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2943

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2944

<211> 59

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2944

cctgtgggca gtgccagatg aacttccatt gggggacatt cttattttta tcgagcaca 59

<210> 2945

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2945

cctgtgggca gtgccagatg aacattgggg gacattctta tttttatcga gcaca 55

<210> 2946

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2946

cctgtgggca gtgccagatg aacttcattg ggggacattc ttatttttat cgagcaca 58

<210> 2947

<211> 95

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2947

gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacgg 60

aaacaatgca atggcagcct ctgcttagaa aaagc 95

<210> 2948

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2948

gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49

<210> 2949

<211> 89

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2949

gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacaa 60

tgcaatggca gcctctgctt agaaaaagc 89

<210> 2950

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2950

gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49

<210> 2951

<211> 89

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2951

gggcagtgcc agatgaactt cccattgggg gacattctta tttttatcga gcacaaacaa 60

tgcaatggca gcctctgctt agaaaaagc 89

<210> 2952

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2952

gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49

<210> 2953

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2953

gggcagtgcc agatgaactt ccaatggcag cctctgctta gaaaaagc 48

<210> 2954

<211> 49

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2954

gggcagtgcc agatgaactt cccaatggca gcctctgctt agaaaaagc 49

<210> 2955

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2955

gggcagtgcc agatgaactt ccaatggcag cctctgctta gaaaaagc 48

<210> 2956

<211> 90

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2956

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60

tagggtgggg gcgtgggtgg ggtagaagag 90

<210> 2957

<211> 89

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2957

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60

taggtggggg cgtgggtggg gtagaagag 89

<210> 2958

<211> 81

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2958

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctggg 60

ggcgtgggtg gggtagaaga g 81

<210> 2959

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2959

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60

gggtagaaga g 71

<210> 2960

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2960

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60

gggtagaaga g 71

<210> 2961

<211> 89

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2961

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcctctgat 60

taggtggggg cgtgggtggg gtagaagag 89

<210> 2962

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2962

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggcgt gggtggggta 60

gaagag 66

<210> 2963

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2963

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60

gggtagaaga g 71

<210> 2964

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2964

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggtgggggcg 60

tgggtggggt agaagag 77

<210> 2965

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2965

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggggcgtgg 60

gtggggtaga agag 74

<210> 2966

<211> 71

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2966

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt ggcgtgggtg 60

gggtagaaga g 71

<210> 2967

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2967

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggcgtgggt 60

ggggtagaag ag 72

<210> 2968

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 2968

gtctagtgca agctaacagt tgcttttatc acaggctcca ggaagggttt gggtggggta 60

gaagag 66

<210> 2969

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

6xHis tag"

<400> 2969

His His His His His His

1 5

<210> 2970

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

8xHis tag"

<400> 2970

His His His His His His His His

1 5

<210> 2971

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

peptide"

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(10)

<223> /note="This Последовательность may encompass 3-10 residues"

<400> 2971

His His His His His His His His His His

1 5 10

<210> 2972

<400> 2972

000

<210> 2973

<400> 2973

000

<210> 2974

<400> 2974

000

<210> 2975

<400> 2975

000

<210> 2976

<400> 2976

000

<210> 2977

<400> 2977

000

<210> 2978

<400> 2978

000

<210> 2979

<400> 2979

000

<210> 2980

<400> 2980

000

<210> 2981

<400> 2981

000

<210> 2982

<400> 2982

000

<210> 2983

<400> 2983

000

<210> 2984

<400> 2984

000

<210> 2985

<400> 2985

000

<210> 2986

<400> 2986

000

<210> 2987

<400> 2987

000

<210> 2988

<400> 2988

000

<210> 2989

<400> 2989

000

<210> 2990

<400> 2990

000

<210> 2991

<400> 2991

000

<210> 2992

<400> 2992

000

<210> 2993

<400> 2993

000

<210> 2994

<400> 2994

000

<210> 2995

<400> 2995

000

<210> 2996

<400> 2996

000

<210> 2997

<400> 2997

000

<210> 2998

<400> 2998

000

<210> 2999

<400> 2999

000

<210> 3000

<400> 3000

000

<210> 3001

<400> 3001

000

<210> 3002

<400> 3002

000

<210> 3003

<400> 3003

000

<210> 3004

<400> 3004

000

<210> 3005

<400> 3005

000

<210> 3006

<400> 3006

000

<210> 3007

<400> 3007

000

<210> 3008

<400> 3008

000

<210> 3009

<400> 3009

000

<210> 3010

<400> 3010

000

<210> 3011

<400> 3011

000

<210> 3012

<400> 3012

000

<210> 3013

<400> 3013

000

<210> 3014

<400> 3014

000

<210> 3015

<400> 3015

000

<210> 3016

<400> 3016

000

<210> 3017

<400> 3017

000

<210> 3018

<400> 3018

000

<210> 3019

<400> 3019

000

<210> 3020

<400> 3020

000

<210> 3021

<400> 3021

000

<210> 3022

<400> 3022

000

<210> 3023

<400> 3023

000

<210> 3024

<400> 3024

000

<210> 3025

<400> 3025

000

<210> 3026

<400> 3026

000

<210> 3027

<400> 3027

000

<210> 3028

<400> 3028

000

<210> 3029

<400> 3029

000

<210> 3030

<400> 3030

000

<210> 3031

<400> 3031

000

<210> 3032

<400> 3032

000

<210> 3033

<400> 3033

000

<210> 3034

<400> 3034

000

<210> 3035

<400> 3035

000

<210> 3036

<400> 3036

000

<210> 3037

<400> 3037

000

<210> 3038

<400> 3038

000

<210> 3039

<400> 3039

000

<210> 3040

<400> 3040

000

<210> 3041

<400> 3041

000

<210> 3042

<400> 3042

000

<210> 3043

<400> 3043

000

<210> 3044

<400> 3044

000

<210> 3045

<400> 3045

000

<210> 3046

<400> 3046

000

<210> 3047

<400> 3047

000

<210> 3048

<400> 3048

000

<210> 3049

<400> 3049

000

<210> 3050

<400> 3050

000

<210> 3051

<400> 3051

000

<210> 3052

<400> 3052

000

<210> 3053

<400> 3053

000

<210> 3054

<400> 3054

000

<210> 3055

<400> 3055

000

<210> 3056

<400> 3056

000

<210> 3057

<400> 3057

000

<210> 3058

<400> 3058

000

<210> 3059

<400> 3059

000

<210> 3060

<400> 3060

000

<210> 3061

<400> 3061

000

<210> 3062

<400> 3062

000

<210> 3063

<400> 3063

000

<210> 3064

<400> 3064

000

<210> 3065

<400> 3065

000

<210> 3066

<400> 3066

000

<210> 3067

<400> 3067

000

<210> 3068

<400> 3068

000

<210> 3069

<400> 3069

000

<210> 3070

<400> 3070

000

<210> 3071

<400> 3071

000

<210> 3072

<400> 3072

000

<210> 3073

<400> 3073

000

<210> 3074

<400> 3074

000

<210> 3075

<400> 3075

000

<210> 3076

<400> 3076

000

<210> 3077

<400> 3077

000

<210> 3078

<400> 3078

000

<210> 3079

<400> 3079

000

<210> 3080

<400> 3080

000

<210> 3081

<400> 3081

000

<210> 3082

<400> 3082

000

<210> 3083

<400> 3083

000

<210> 3084

<400> 3084

000

<210> 3085

<400> 3085

000

<210> 3086

<400> 3086

000

<210> 3087

<400> 3087

000

<210> 3088

<400> 3088

000

<210> 3089

<400> 3089

000

<210> 3090

<400> 3090

000

<210> 3091

<400> 3091

000

<210> 3092

<400> 3092

000

<210> 3093

<400> 3093

000

<210> 3094

<400> 3094

000

<210> 3095

<400> 3095

000

<210> 3096

<400> 3096

000

<210> 3097

<400> 3097

000

<210> 3098

<400> 3098

000

<210> 3099

<400> 3099

000

<210> 3100

<400> 3100

000

<210> 3101

<400> 3101

000

<210> 3102

<400> 3102

000

<210> 3103

<400> 3103

000

<210> 3104

<400> 3104

000

<210> 3105

<400> 3105

000

<210> 3106

<400> 3106

000

<210> 3107

<400> 3107

000

<210> 3108

<400> 3108

000

<210> 3109

<400> 3109

000

<210> 3110

<400> 3110

000

<210> 3111

<400> 3111

000

<210> 3112

<400> 3112

000

<210> 3113

<400> 3113

000

<210> 3114

<400> 3114

000

<210> 3115

<400> 3115

000

<210> 3116

<400> 3116

000

<210> 3117

<400> 3117

000

<210> 3118

<400> 3118

000

<210> 3119

<400> 3119

000

<210> 3120

<400> 3120

000

<210> 3121

<400> 3121

000

<210> 3122

<400> 3122

000

<210> 3123

<400> 3123

000

<210> 3124

<400> 3124

000

<210> 3125

<400> 3125

000

<210> 3126

<400> 3126

000

<210> 3127

<400> 3127

000

<210> 3128

<400> 3128

000

<210> 3129

<400> 3129

000

<210> 3130

<400> 3130

000

<210> 3131

<400> 3131

000

<210> 3132

<400> 3132

000

<210> 3133

<400> 3133

000

<210> 3134

<400> 3134

000

<210> 3135

<400> 3135

000

<210> 3136

<400> 3136

000

<210> 3137

<400> 3137

000

<210> 3138

<400> 3138

000

<210> 3139

<400> 3139

000

<210> 3140

<400> 3140

000

<210> 3141

<400> 3141

000

<210> 3142

<400> 3142

000

<210> 3143

<400> 3143

000

<210> 3144

<400> 3144

000

<210> 3145

<400> 3145

000

<210> 3146

<400> 3146

000

<210> 3147

<400> 3147

000

<210> 3148

<400> 3148

000

<210> 3149

<400> 3149

000

<210> 3150

<400> 3150

000

<210> 3151

<400> 3151

000

<210> 3152

<400> 3152

000

<210> 3153

<400> 3153

000

<210> 3154

<400> 3154

000

<210> 3155

<400> 3155

000

<210> 3156

<400> 3156

000

<210> 3157

<400> 3157

000

<210> 3158

<400> 3158

000

<210> 3159

<400> 3159

000

<210> 3160

<400> 3160

000

<210> 3161

<400> 3161

000

<210> 3162

<400> 3162

000

<210> 3163

<400> 3163

000

<210> 3164

<400> 3164

000

<210> 3165

<400> 3165

000

<210> 3166

<400> 3166

000

<210> 3167

<400> 3167

000

<210> 3168

<400> 3168

000

<210> 3169

<400> 3169

000

<210> 3170

<400> 3170

000

<210> 3171

<400> 3171

000

<210> 3172

<400> 3172

000

<210> 3173

<400> 3173

000

<210> 3174

<400> 3174

000

<210> 3175

<400> 3175

000

<210> 3176

<400> 3176

000

<210> 3177

<400> 3177

000

<210> 3178

<400> 3178

000

<210> 3179

<400> 3179

000

<210> 3180

<400> 3180

000

<210> 3181

<400> 3181

000

<210> 3182

<400> 3182

000

<210> 3183

<400> 3183

000

<210> 3184

<400> 3184

000

<210> 3185

<400> 3185

000

<210> 3186

<400> 3186

000

<210> 3187

<400> 3187

000

<210> 3188

<400> 3188

000

<210> 3189

<400> 3189

000

<210> 3190

<400> 3190

000

<210> 3191

<400> 3191

000

<210> 3192

<400> 3192

000

<210> 3193

<400> 3193

000

<210> 3194

<400> 3194

000

<210> 3195

<400> 3195

000

<210> 3196

<400> 3196

000

<210> 3197

<400> 3197

000

<210> 3198

<400> 3198

000

<210> 3199

<400> 3199

000

<210> 3200

<400> 3200

000

<210> 3201

<400> 3201

000

<210> 3202

<400> 3202

000

<210> 3203

<400> 3203

000

<210> 3204

<400> 3204

000

<210> 3205

<400> 3205

000

<210> 3206

<400> 3206

000

<210> 3207

<400> 3207

000

<210> 3208

<400> 3208

000

<210> 3209

<400> 3209

000

<210> 3210

<400> 3210

000

<210> 3211

<400> 3211

000

<210> 3212

<400> 3212

000

<210> 3213

<400> 3213

000

<210> 3214

<400> 3214

000

<210> 3215

<400> 3215

000

<210> 3216

<400> 3216

000

<210> 3217

<400> 3217

000

<210> 3218

<400> 3218

000

<210> 3219

<400> 3219

000

<210> 3220

<400> 3220

000

<210> 3221

<400> 3221

000

<210> 3222

<400> 3222

000

<210> 3223

<400> 3223

000

<210> 3224

<400> 3224

000

<210> 3225

<400> 3225

000

<210> 3226

<400> 3226

000

<210> 3227

<400> 3227

000

<210> 3228

<400> 3228

000

<210> 3229

<400> 3229

000

<210> 3230

<400> 3230

000

<210> 3231

<400> 3231

000

<210> 3232

<400> 3232

000

<210> 3233

<400> 3233

000

<210> 3234

<400> 3234

000

<210> 3235

<400> 3235

000

<210> 3236

<400> 3236

000

<210> 3237

<400> 3237

000

<210> 3238

<400> 3238

000

<210> 3239

<400> 3239

000

<210> 3240

<400> 3240

000

<210> 3241

<400> 3241

000

<210> 3242

<400> 3242

000

<210> 3243

<400> 3243

000

<210> 3244

<400> 3244

000

<210> 3245

<400> 3245

000

<210> 3246

<400> 3246

000

<210> 3247

<400> 3247

000

<210> 3248

<400> 3248

000

<210> 3249

<400> 3249

000

<210> 3250

<400> 3250

000

<210> 3251

<400> 3251

000

<210> 3252

<400> 3252

000

<210> 3253

<400> 3253

000

<210> 3254

<400> 3254

000

<210> 3255

<400> 3255

000

<210> 3256

<400> 3256

000

<210> 3257

<400> 3257

000

<210> 3258

<400> 3258

000

<210> 3259

<400> 3259

000

<210> 3260

<400> 3260

000

<210> 3261

<400> 3261

000

<210> 3262

<400> 3262

000

<210> 3263

<400> 3263

000

<210> 3264

<400> 3264

000

<210> 3265

<400> 3265

000

<210> 3266

<400> 3266

000

<210> 3267

<400> 3267

000

<210> 3268

<400> 3268

000

<210> 3269

<400> 3269

000

<210> 3270

<400> 3270

000

<210> 3271

<400> 3271

000

<210> 3272

<400> 3272

000

<210> 3273

<400> 3273

000

<210> 3274

<400> 3274

000

<210> 3275

<400> 3275

000

<210> 3276

<400> 3276

000

<210> 3277

<400> 3277

000

<210> 3278

<400> 3278

000

<210> 3279

<400> 3279

000

<210> 3280

<400> 3280

000

<210> 3281

<400> 3281

000

<210> 3282

<400> 3282

000

<210> 3283

<400> 3283

000

<210> 3284

<400> 3284

000

<210> 3285

<400> 3285

000

<210> 3286

<400> 3286

000

<210> 3287

<400> 3287

000

<210> 3288

<400> 3288

000

<210> 3289

<400> 3289

000

<210> 3290

<400> 3290

000

<210> 3291

<400> 3291

000

<210> 3292

<400> 3292

000

<210> 3293

<400> 3293

000

<210> 3294

<400> 3294

000

<210> 3295

<400> 3295

000

<210> 3296

<400> 3296

000

<210> 3297

<400> 3297

000

<210> 3298

<400> 3298

000

<210> 3299

<400> 3299

000

<210> 3300

<400> 3300

000

<210> 3301

<400> 3301

000

<210> 3302

<400> 3302

000

<210> 3303

<400> 3303

000

<210> 3304

<400> 3304

000

<210> 3305

<400> 3305

000

<210> 3306

<400> 3306

000

<210> 3307

<400> 3307

000

<210> 3308

<400> 3308

000

<210> 3309

<400> 3309

000

<210> 3310

<400> 3310

000

<210> 3311

<400> 3311

000

<210> 3312

<400> 3312

000

<210> 3313

<400> 3313

000

<210> 3314

<400> 3314

000

<210> 3315

<400> 3315

000

<210> 3316

<400> 3316

000

<210> 3317

<400> 3317

000

<210> 3318

<400> 3318

000

<210> 3319

<400> 3319

000

<210> 3320

<400> 3320

000

<210> 3321

<400> 3321

000

<210> 3322

<400> 3322

000

<210> 3323

<400> 3323

000

<210> 3324

<400> 3324

000

<210> 3325

<400> 3325

000

<210> 3326

<400> 3326

000

<210> 3327

<400> 3327

000

<210> 3328

<400> 3328

000

<210> 3329

<400> 3329

000

<210> 3330

<400> 3330

000

<210> 3331

<400> 3331

000

<210> 3332

<400> 3332

000

<210> 3333

<400> 3333

000

<210> 3334

<400> 3334

000

<210> 3335

<400> 3335

000

<210> 3336

<400> 3336

000

<210> 3337

<400> 3337

000

<210> 3338

<400> 3338

000

<210> 3339

<400> 3339

000

<210> 3340

<400> 3340

000

<210> 3341

<400> 3341

000

<210> 3342

<400> 3342

000

<210> 3343

<400> 3343

000

<210> 3344

<400> 3344

000

<210> 3345

<400> 3345

000

<210> 3346

<400> 3346

000

<210> 3347

<400> 3347

000

<210> 3348

<400> 3348

000

<210> 3349

<400> 3349

000

<210> 3350

<400> 3350

000

<210> 3351

<400> 3351

000

<210> 3352

<400> 3352

000

<210> 3353

<400> 3353

000

<210> 3354

<400> 3354

000

<210> 3355

<400> 3355

000

<210> 3356

<400> 3356

000

<210> 3357

<400> 3357

000

<210> 3358

<400> 3358

000

<210> 3359

<400> 3359

000

<210> 3360

<400> 3360

000

<210> 3361

<400> 3361

000

<210> 3362

<400> 3362

000

<210> 3363

<400> 3363

000

<210> 3364

<400> 3364

000

<210> 3365

<400> 3365

000

<210> 3366

<400> 3366

000

<210> 3367

<400> 3367

000

<210> 3368

<400> 3368

000

<210> 3369

<400> 3369

000

<210> 3370

<400> 3370

000

<210> 3371

<400> 3371

000

<210> 3372

<400> 3372

000

<210> 3373

<400> 3373

000

<210> 3374

<400> 3374

000

<210> 3375

<400> 3375

000

<210> 3376

<400> 3376

000

<210> 3377

<400> 3377

000

<210> 3378

<400> 3378

000

<210> 3379

<400> 3379

000

<210> 3380

<400> 3380

000

<210> 3381

<400> 3381

000

<210> 3382

<400> 3382

000

<210> 3383

<400> 3383

000

<210> 3384

<400> 3384

000

<210> 3385

<400> 3385

000

<210> 3386

<400> 3386

000

<210> 3387

<400> 3387

000

<210> 3388

<400> 3388

000

<210> 3389

<400> 3389

000

<210> 3390

<400> 3390

000

<210> 3391

<400> 3391

000

<210> 3392

<400> 3392

000

<210> 3393

<400> 3393

000

<210> 3394

<400> 3394

000

<210> 3395

<400> 3395

000

<210> 3396

<400> 3396

000

<210> 3397

<400> 3397

000

<210> 3398

<400> 3398

000

<210> 3399

<400> 3399

000

<210> 3400

<400> 3400

000

<210> 3401

<400> 3401

000

<210> 3402

<400> 3402

000

<210> 3403

<400> 3403

000

<210> 3404

<400> 3404

000

<210> 3405

<400> 3405

000

<210> 3406

<400> 3406

000

<210> 3407

<400> 3407

000

<210> 3408

<400> 3408

000

<210> 3409

<400> 3409

000

<210> 3410

<400> 3410

000

<210> 3411

<400> 3411

000

<210> 3412

<400> 3412

000

<210> 3413

<400> 3413

000

<210> 3414

<400> 3414

000

<210> 3415

<400> 3415

000

<210> 3416

<400> 3416

000

<210> 3417

<400> 3417

000

<210> 3418

<400> 3418

000

<210> 3419

<400> 3419

000

<210> 3420

<400> 3420

000

<210> 3421

<400> 3421

000

<210> 3422

<400> 3422

000

<210> 3423

<400> 3423

000

<210> 3424

<400> 3424

000

<210> 3425

<400> 3425

000

<210> 3426

<400> 3426

000

<210> 3427

<400> 3427

000

<210> 3428

<400> 3428

000

<210> 3429

<400> 3429

000

<210> 3430

<400> 3430

000

<210> 3431

<400> 3431

000

<210> 3432

<400> 3432

000

<210> 3433

<400> 3433

000

<210> 3434

<400> 3434

000

<210> 3435

<400> 3435

000

<210> 3436

<400> 3436

000

<210> 3437

<400> 3437

000

<210> 3438

<400> 3438

000

<210> 3439

<400> 3439

000

<210> 3440

<400> 3440

000

<210> 3441

<400> 3441

000

<210> 3442

<400> 3442

000

<210> 3443

<400> 3443

000

<210> 3444

<400> 3444

000

<210> 3445

<400> 3445

000

<210> 3446

<400> 3446

000

<210> 3447

<400> 3447

000

<210> 3448

<400> 3448

000

<210> 3449

<400> 3449

000

<210> 3450

<400> 3450

000

<210> 3451

<400> 3451

000

<210> 3452

<400> 3452

000

<210> 3453

<400> 3453

000

<210> 3454

<400> 3454

000

<210> 3455

<400> 3455

000

<210> 3456

<400> 3456

000

<210> 3457

<400> 3457

000

<210> 3458

<400> 3458

000

<210> 3459

<400> 3459

000

<210> 3460

<400> 3460

000

<210> 3461

<400> 3461

000

<210> 3462

<400> 3462

000

<210> 3463

<400> 3463

000

<210> 3464

<400> 3464

000

<210> 3465

<400> 3465

000

<210> 3466

<400> 3466

000

<210> 3467

<400> 3467

000

<210> 3468

<400> 3468

000

<210> 3469

<400> 3469

000

<210> 3470

<400> 3470

000

<210> 3471

<400> 3471

000

<210> 3472

<400> 3472

000

<210> 3473

<400> 3473

000

<210> 3474

<400> 3474

000

<210> 3475

<400> 3475

000

<210> 3476

<400> 3476

000

<210> 3477

<400> 3477

000

<210> 3478

<400> 3478

000

<210> 3479

<400> 3479

000

<210> 3480

<400> 3480

000

<210> 3481

<400> 3481

000

<210> 3482

<400> 3482

000

<210> 3483

<400> 3483

000

<210> 3484

<400> 3484

000

<210> 3485

<400> 3485

000

<210> 3486

<400> 3486

000

<210> 3487

<400> 3487

000

<210> 3488

<400> 3488

000

<210> 3489

<400> 3489

000

<210> 3490

<400> 3490

000

<210> 3491

<400> 3491

000

<210> 3492

<400> 3492

000

<210> 3493

<400> 3493

000

<210> 3494

<400> 3494

000

<210> 3495

<400> 3495

000

<210> 3496

<400> 3496

000

<210> 3497

<400> 3497

000

<210> 3498

<400> 3498

000

<210> 3499

<400> 3499

000

<210> 3500

<400> 3500

000

<210> 3501

<400> 3501

000

<210> 3502

<400> 3502

000

<210> 3503

<400> 3503

000

<210> 3504

<400> 3504

000

<210> 3505

<400> 3505

000

<210> 3506

<400> 3506

000

<210> 3507

<400> 3507

000

<210> 3508

<400> 3508

000

<210> 3509

<400> 3509

000

<210> 3510

<400> 3510

000

<210> 3511

<400> 3511

000

<210> 3512

<400> 3512

000

<210> 3513

<400> 3513

000

<210> 3514

<400> 3514

000

<210> 3515

<400> 3515

000

<210> 3516

<400> 3516

000

<210> 3517

<400> 3517

000

<210> 3518

<400> 3518

000

<210> 3519

<400> 3519

000

<210> 3520

<400> 3520

000

<210> 3521

<400> 3521

000

<210> 3522

<400> 3522

000

<210> 3523

<400> 3523

000

<210> 3524

<400> 3524

000

<210> 3525

<400> 3525

000

<210> 3526

<400> 3526

000

<210> 3527

<400> 3527

000

<210> 3528

<400> 3528

000

<210> 3529

<400> 3529

000

<210> 3530

<400> 3530

000

<210> 3531

<400> 3531

000

<210> 3532

<400> 3532

000

<210> 3533

<400> 3533

000

<210> 3534

<400> 3534

000

<210> 3535

<400> 3535

000

<210> 3536

<400> 3536

000

<210> 3537

<400> 3537

000

<210> 3538

<400> 3538

000

<210> 3539

<400> 3539

000

<210> 3540

<400> 3540

000

<210> 3541

<400> 3541

000

<210> 3542

<400> 3542

000

<210> 3543

<400> 3543

000

<210> 3544

<400> 3544

000

<210> 3545

<400> 3545

000

<210> 3546

<400> 3546

000

<210> 3547

<400> 3547

000

<210> 3548

<400> 3548

000

<210> 3549

<400> 3549

000

<210> 3550

<400> 3550

000

<210> 3551

<400> 3551

000

<210> 3552

<400> 3552

000

<210> 3553

<400> 3553

000

<210> 3554

<400> 3554

000

<210> 3555

<400> 3555

000

<210> 3556

<400> 3556

000

<210> 3557

<400> 3557

000

<210> 3558

<400> 3558

000

<210> 3559

<400> 3559

000

<210> 3560

<400> 3560

000

<210> 3561

<400> 3561

000

<210> 3562

<400> 3562

000

<210> 3563

<400> 3563

000

<210> 3564

<400> 3564

000

<210> 3565

<400> 3565

000

<210> 3566

<400> 3566

000

<210> 3567

<400> 3567

000

<210> 3568

<400> 3568

000

<210> 3569

<400> 3569

000

<210> 3570

<400> 3570

000

<210> 3571

<400> 3571

000

<210> 3572

<400> 3572

000

<210> 3573

<400> 3573

000

<210> 3574

<400> 3574

000

<210> 3575

<400> 3575

000

<210> 3576

<400> 3576

000

<210> 3577

<400> 3577

000

<210> 3578

<400> 3578

000

<210> 3579

<400> 3579

000

<210> 3580

<400> 3580

000

<210> 3581

<400> 3581

000

<210> 3582

<400> 3582

000

<210> 3583

<400> 3583

000

<210> 3584

<400> 3584

000

<210> 3585

<400> 3585

000

<210> 3586

<400> 3586

000

<210> 3587

<400> 3587

000

<210> 3588

<400> 3588

000

<210> 3589

<400> 3589

000

<210> 3590

<400> 3590

000

<210> 3591

<400> 3591

000

<210> 3592

<400> 3592

000

<210> 3593

<400> 3593

000

<210> 3594

<400> 3594

000

<210> 3595

<400> 3595

000

<210> 3596

<400> 3596

000

<210> 3597

<400> 3597

000

<210> 3598

<400> 3598

000

<210> 3599

<400> 3599

000

<210> 3600

<400> 3600

000

<210> 3601

<400> 3601

000

<210> 3602

<400> 3602

000

<210> 3603

<400> 3603

000

<210> 3604

<400> 3604

000

<210> 3605

<400> 3605

000

<210> 3606

<400> 3606

000

<210> 3607

<400> 3607

000

<210> 3608

<400> 3608

000

<210> 3609

<400> 3609

000

<210> 3610

<400> 3610

000

<210> 3611

<400> 3611

000

<210> 3612

<400> 3612

000

<210> 3613

<400> 3613

000

<210> 3614

<400> 3614

000

<210> 3615

<400> 3615

000

<210> 3616

<400> 3616

000

<210> 3617

<400> 3617

000

<210> 3618

<400> 3618

000

<210> 3619

<400> 3619

000

<210> 3620

<400> 3620

000

<210> 3621

<400> 3621

000

<210> 3622

<400> 3622

000

<210> 3623

<400> 3623

000

<210> 3624

<400> 3624

000

<210> 3625

<400> 3625

000

<210> 3626

<400> 3626

000

<210> 3627

<400> 3627

000

<210> 3628

<400> 3628

000

<210> 3629

<400> 3629

000

<210> 3630

<400> 3630

000

<210> 3631

<400> 3631

000

<210> 3632

<400> 3632

000

<210> 3633

<400> 3633

000

<210> 3634

<400> 3634

000

<210> 3635

<400> 3635

000

<210> 3636

<400> 3636

000

<210> 3637

<400> 3637

000

<210> 3638

<400> 3638

000

<210> 3639

<400> 3639

000

<210> 3640

<400> 3640

000

<210> 3641

<400> 3641

000

<210> 3642

<400> 3642

000

<210> 3643

<400> 3643

000

<210> 3644

<400> 3644

000

<210> 3645

<400> 3645

000

<210> 3646

<400> 3646

000

<210> 3647

<400> 3647

000

<210> 3648

<400> 3648

000

<210> 3649

<400> 3649

000

<210> 3650

<400> 3650

000

<210> 3651

<400> 3651

000

<210> 3652

<400> 3652

000

<210> 3653

<400> 3653

000

<210> 3654

<400> 3654

000

<210> 3655

<400> 3655

000

<210> 3656

<400> 3656

000

<210> 3657

<400> 3657

000

<210> 3658

<400> 3658

000

<210> 3659

<400> 3659

000

<210> 3660

<400> 3660

000

<210> 3661

<400> 3661

000

<210> 3662

<400> 3662

000

<210> 3663

<400> 3663

000

<210> 3664

<400> 3664

000

<210> 3665

<400> 3665

000

<210> 3666

<400> 3666

000

<210> 3667

<400> 3667

000

<210> 3668

<400> 3668

000

<210> 3669

<400> 3669

000

<210> 3670

<400> 3670

000

<210> 3671

<400> 3671

000

<210> 3672

<400> 3672

000

<210> 3673

<400> 3673

000

<210> 3674

<400> 3674

000

<210> 3675

<400> 3675

000

<210> 3676

<400> 3676

000

<210> 3677

<400> 3677

000

<210> 3678

<400> 3678

000

<210> 3679

<400> 3679

000

<210> 3680

<400> 3680

000

<210> 3681

<400> 3681

000

<210> 3682

<400> 3682

000

<210> 3683

<400> 3683

000

<210> 3684

<400> 3684

000

<210> 3685

<400> 3685

000

<210> 3686

<400> 3686

000

<210> 3687

<400> 3687

000

<210> 3688

<400> 3688

000

<210> 3689

<400> 3689

000

<210> 3690

<400> 3690

000

<210> 3691

<400> 3691

000

<210> 3692

<400> 3692

000

<210> 3693

<400> 3693

000

<210> 3694

<400> 3694

000

<210> 3695

<400> 3695

000

<210> 3696

<400> 3696

000

<210> 3697

<400> 3697

000

<210> 3698

<400> 3698

000

<210> 3699

<400> 3699

000

<210> 3700

<400> 3700

000

<210> 3701

<400> 3701

000

<210> 3702

<400> 3702

000

<210> 3703

<400> 3703

000

<210> 3704

<400> 3704

000

<210> 3705

<400> 3705

000

<210> 3706

<400> 3706

000

<210> 3707

<400> 3707

000

<210> 3708

<400> 3708

000

<210> 3709

<400> 3709

000

<210> 3710

<400> 3710

000

<210> 3711

<400> 3711

000

<210> 3712

<400> 3712

000

<210> 3713

<400> 3713

000

<210> 3714

<400> 3714

000

<210> 3715

<400> 3715

000

<210> 3716

<400> 3716

000

<210> 3717

<400> 3717

000

<210> 3718

<400> 3718

000

<210> 3719

<400> 3719

000

<210> 3720

<400> 3720

000

<210> 3721

<400> 3721

000

<210> 3722

<400> 3722

000

<210> 3723

<400> 3723

000

<210> 3724

<400> 3724

000

<210> 3725

<400> 3725

000

<210> 3726

<400> 3726

000

<210> 3727

<400> 3727

000

<210> 3728

<400> 3728

000

<210> 3729

<400> 3729

000

<210> 3730

<400> 3730

000

<210> 3731

<400> 3731

000

<210> 3732

<400> 3732

000

<210> 3733

<400> 3733

000

<210> 3734

<400> 3734

000

<210> 3735

<400> 3735

000

<210> 3736

<400> 3736

000

<210> 3737

<400> 3737

000

<210> 3738

<400> 3738

000

<210> 3739

<400> 3739

000

<210> 3740

<400> 3740

000

<210> 3741

<400> 3741

000

<210> 3742

<400> 3742

000

<210> 3743

<400> 3743

000

<210> 3744

<400> 3744

000

<210> 3745

<400> 3745

000

<210> 3746

<400> 3746

000

<210> 3747

<400> 3747

000

<210> 3748

<400> 3748

000

<210> 3749

<400> 3749

000

<210> 3750

<400> 3750

000

<210> 3751

<400> 3751

000

<210> 3752

<400> 3752

000

<210> 3753

<400> 3753

000

<210> 3754

<400> 3754

000

<210> 3755

<400> 3755

000

<210> 3756

<400> 3756

000

<210> 3757

<400> 3757

000

<210> 3758

<400> 3758

000

<210> 3759

<400> 3759

000

<210> 3760

<400> 3760

000

<210> 3761

<400> 3761

000

<210> 3762

<400> 3762

000

<210> 3763

<400> 3763

000

<210> 3764

<400> 3764

000

<210> 3765

<400> 3765

000

<210> 3766

<400> 3766

000

<210> 3767

<400> 3767

000

<210> 3768

<400> 3768

000

<210> 3769

<400> 3769

000

<210> 3770

<400> 3770

000

<210> 3771

<400> 3771

000

<210> 3772

<400> 3772

000

<210> 3773

<400> 3773

000

<210> 3774

<400> 3774

000

<210> 3775

<400> 3775

000

<210> 3776

<400> 3776

000

<210> 3777

<400> 3777

000

<210> 3778

<400> 3778

000

<210> 3779

<400> 3779

000

<210> 3780

<400> 3780

000

<210> 3781

<400> 3781

000

<210> 3782

<400> 3782

000

<210> 3783

<400> 3783

000

<210> 3784

<400> 3784

000

<210> 3785

<400> 3785

000

<210> 3786

<400> 3786

000

<210> 3787

<400> 3787

000

<210> 3788

<400> 3788

000

<210> 3789

<400> 3789

000

<210> 3790

<400> 3790

000

<210> 3791

<400> 3791

000

<210> 3792

<400> 3792

000

<210> 3793

<400> 3793

000

<210> 3794

<400> 3794

000

<210> 3795

<400> 3795

000

<210> 3796

<400> 3796

000

<210> 3797

<400> 3797

000

<210> 3798

<400> 3798

000

<210> 3799

<400> 3799

000

<210> 3800

<400> 3800

000

<210> 3801

<400> 3801

000

<210> 3802

<400> 3802

000

<210> 3803

<400> 3803

000

<210> 3804

<400> 3804

000

<210> 3805

<400> 3805

000

<210> 3806

<400> 3806

000

<210> 3807

<400> 3807

000

<210> 3808

<400> 3808

000

<210> 3809

<400> 3809

000

<210> 3810

<400> 3810

000

<210> 3811

<400> 3811

000

<210> 3812

<400> 3812

000

<210> 3813

<400> 3813

000

<210> 3814

<400> 3814

000

<210> 3815

<400> 3815

000

<210> 3816

<400> 3816

000

<210> 3817

<400> 3817

000

<210> 3818

<400> 3818

000

<210> 3819

<400> 3819

000

<210> 3820

<400> 3820

000

<210> 3821

<400> 3821

000

<210> 3822

<400> 3822

000

<210> 3823

<400> 3823

000

<210> 3824

<400> 3824

000

<210> 3825

<400> 3825

000

<210> 3826

<400> 3826

000

<210> 3827

<400> 3827

000

<210> 3828

<400> 3828

000

<210> 3829

<400> 3829

000

<210> 3830

<400> 3830

000

<210> 3831

<400> 3831

000

<210> 3832

<400> 3832

000

<210> 3833

<400> 3833

000

<210> 3834

<400> 3834

000

<210> 3835

<400> 3835

000

<210> 3836

<400> 3836

000

<210> 3837

<400> 3837

000

<210> 3838

<400> 3838

000

<210> 3839

<400> 3839

000

<210> 3840

<400> 3840

000

<210> 3841

<400> 3841

000

<210> 3842

<400> 3842

000

<210> 3843

<400> 3843

000

<210> 3844

<400> 3844

000

<210> 3845

<400> 3845

000

<210> 3846

<400> 3846

000

<210> 3847

<400> 3847

000

<210> 3848

<400> 3848

000

<210> 3849

<400> 3849

000

<210> 3850

<400> 3850

000

<210> 3851

<400> 3851

000

<210> 3852

<400> 3852

000

<210> 3853

<400> 3853

000

<210> 3854

<400> 3854

000

<210> 3855

<400> 3855

000

<210> 3856

<400> 3856

000

<210> 3857

<400> 3857

000

<210> 3858

<400> 3858

000

<210> 3859

<400> 3859

000

<210> 3860

<400> 3860

000

<210> 3861

<400> 3861

000

<210> 3862

<400> 3862

000

<210> 3863

<400> 3863

000

<210> 3864

<400> 3864

000

<210> 3865

<400> 3865

000

<210> 3866

<400> 3866

000

<210> 3867

<400> 3867

000

<210> 3868

<400> 3868

000

<210> 3869

<400> 3869

000

<210> 3870

<400> 3870

000

<210> 3871

<400> 3871

000

<210> 3872

<400> 3872

000

<210> 3873

<400> 3873

000

<210> 3874

<400> 3874

000

<210> 3875

<400> 3875

000

<210> 3876

<400> 3876

000

<210> 3877

<400> 3877

000

<210> 3878

<400> 3878

000

<210> 3879

<400> 3879

000

<210> 3880

<400> 3880

000

<210> 3881

<400> 3881

000

<210> 3882

<400> 3882

000

<210> 3883

<400> 3883

000

<210> 3884

<400> 3884

000

<210> 3885

<400> 3885

000

<210> 3886

<400> 3886

000

<210> 3887

<400> 3887

000

<210> 3888

<400> 3888

000

<210> 3889

<400> 3889

000

<210> 3890

<400> 3890

000

<210> 3891

<400> 3891

000

<210> 3892

<400> 3892

000

<210> 3893

<400> 3893

000

<210> 3894

<400> 3894

000

<210> 3895

<400> 3895

000

<210> 3896

<400> 3896

000

<210> 3897

<400> 3897

000

<210> 3898

<400> 3898

000

<210> 3899

<400> 3899

000

<210> 3900

<400> 3900

000

<210> 3901

<400> 3901

000

<210> 3902

<400> 3902

000

<210> 3903

<400> 3903

000

<210> 3904

<400> 3904

000

<210> 3905

<400> 3905

000

<210> 3906

<400> 3906

000

<210> 3907

<400> 3907

000

<210> 3908

<400> 3908

000

<210> 3909

<400> 3909

000

<210> 3910

<400> 3910

000

<210> 3911

<400> 3911

000

<210> 3912

<400> 3912

000

<210> 3913

<400> 3913

000

<210> 3914

<400> 3914

000

<210> 3915

<400> 3915

000

<210> 3916

<400> 3916

000

<210> 3917

<400> 3917

000

<210> 3918

<400> 3918

000

<210> 3919

<400> 3919

000

<210> 3920

<400> 3920

000

<210> 3921

<400> 3921

000

<210> 3922

<400> 3922

000

<210> 3923

<400> 3923

000

<210> 3924

<400> 3924

000

<210> 3925

<400> 3925

000

<210> 3926

<400> 3926

000

<210> 3927

<400> 3927

000

<210> 3928

<400> 3928

000

<210> 3929

<400> 3929

000

<210> 3930

<400> 3930

000

<210> 3931

<400> 3931

000

<210> 3932

<400> 3932

000

<210> 3933

<400> 3933

000

<210> 3934

<400> 3934

000

<210> 3935

<400> 3935

000

<210> 3936

<400> 3936

000

<210> 3937

<400> 3937

000

<210> 3938

<400> 3938

000

<210> 3939

<400> 3939

000

<210> 3940

<400> 3940

000

<210> 3941

<400> 3941

000

<210> 3942

<400> 3942

000

<210> 3943

<400> 3943

000

<210> 3944

<400> 3944

000

<210> 3945

<400> 3945

000

<210> 3946

<400> 3946

000

<210> 3947

<400> 3947

000

<210> 3948

<400> 3948

000

<210> 3949

<400> 3949

000

<210> 3950

<400> 3950

000

<210> 3951

<400> 3951

000

<210> 3952

<400> 3952

000

<210> 3953

<400> 3953

000

<210> 3954

<400> 3954

000

<210> 3955

<400> 3955

000

<210> 3956

<400> 3956

000

<210> 3957

<400> 3957

000

<210> 3958

<400> 3958

000

<210> 3959

<400> 3959

000

<210> 3960

<400> 3960

000

<210> 3961

<400> 3961

000

<210> 3962

<400> 3962

000

<210> 3963

<400> 3963

000

<210> 3964

<400> 3964

000

<210> 3965

<400> 3965

000

<210> 3966

<400> 3966

000

<210> 3967

<400> 3967

000

<210> 3968

<400> 3968

000

<210> 3969

<400> 3969

000

<210> 3970

<400> 3970

000

<210> 3971

<400> 3971

000

<210> 3972

<400> 3972

000

<210> 3973

<400> 3973

000

<210> 3974

<400> 3974

000

<210> 3975

<400> 3975

000

<210> 3976

<400> 3976

000

<210> 3977

<400> 3977

000

<210> 3978

<400> 3978

000

<210> 3979

<400> 3979

000

<210> 3980

<400> 3980

000

<210> 3981

<400> 3981

000

<210> 3982

<400> 3982

000

<210> 3983

<400> 3983

000

<210> 3984

<400> 3984

000

<210> 3985

<400> 3985

000

<210> 3986

<400> 3986

000

<210> 3987

<400> 3987

000

<210> 3988

<400> 3988

000

<210> 3989

<400> 3989

000

<210> 3990

<400> 3990

000

<210> 3991

<400> 3991

000

<210> 3992

<400> 3992

000

<210> 3993

<400> 3993

000

<210> 3994

<400> 3994

000

<210> 3995

<400> 3995

000

<210> 3996

<400> 3996

000

<210> 3997

<400> 3997

000

<210> 3998

<400> 3998

000

<210> 3999

<400> 3999

000

<210> 4000

<400> 4000

000

<210> 4001

<400> 4001

000

<210> 4002

<400> 4002

000

<210> 4003

<400> 4003

000

<210> 4004

<400> 4004

000

<210> 4005

<400> 4005

000

<210> 4006

<400> 4006

000

<210> 4007

<400> 4007

000

<210> 4008

<400> 4008

000

<210> 4009

<400> 4009

000

<210> 4010

<400> 4010

000

<210> 4011

<400> 4011

000

<210> 4012

<400> 4012

000

<210> 4013

<400> 4013

000

<210> 4014

<400> 4014

000

<210> 4015

<400> 4015

000

<210> 4016

<400> 4016

000

<210> 4017

<400> 4017

000

<210> 4018

<400> 4018

000

<210> 4019

<400> 4019

000

<210> 4020

<400> 4020

000

<210> 4021

<400> 4021

000

<210> 4022

<400> 4022

000

<210> 4023

<400> 4023

000

<210> 4024

<400> 4024

000

<210> 4025

<400> 4025

000

<210> 4026

<400> 4026

000

<210> 4027

<400> 4027

000

<210> 4028

<400> 4028

000

<210> 4029

<400> 4029

000

<210> 4030

<400> 4030

000

<210> 4031

<400> 4031

000

<210> 4032

<400> 4032

000

<210> 4033

<400> 4033

000

<210> 4034

<400> 4034

000

<210> 4035

<400> 4035

000

<210> 4036

<400> 4036

000

<210> 4037

<400> 4037

000

<210> 4038

<400> 4038

000

<210> 4039

<400> 4039

000

<210> 4040

<400> 4040

000

<210> 4041

<400> 4041

000

<210> 4042

<400> 4042

000

<210> 4043

<400> 4043

000

<210> 4044

<400> 4044

000

<210> 4045

<400> 4045

000

<210> 4046

<400> 4046

000

<210> 4047

<400> 4047

000

<210> 4048

<400> 4048

000

<210> 4049

<400> 4049

000

<210> 4050

<400> 4050

000

<210> 4051

<400> 4051

000

<210> 4052

<400> 4052

000

<210> 4053

<400> 4053

000

<210> 4054

<400> 4054

000

<210> 4055

<400> 4055

000

<210> 4056

<400> 4056

000

<210> 4057

<400> 4057

000

<210> 4058

<400> 4058

000

<210> 4059

<400> 4059

000

<210> 4060

<400> 4060

000

<210> 4061

<400> 4061

000

<210> 4062

<400> 4062

000

<210> 4063

<400> 4063

000

<210> 4064

<400> 4064

000

<210> 4065

<400> 4065

000

<210> 4066

<400> 4066

000

<210> 4067

<400> 4067

000

<210> 4068

<400> 4068

000

<210> 4069

<400> 4069

000

<210> 4070

<400> 4070

000

<210> 4071

<400> 4071

000

<210> 4072

<400> 4072

000

<210> 4073

<400> 4073

000

<210> 4074

<400> 4074

000

<210> 4075

<400> 4075

000

<210> 4076

<400> 4076

000

<210> 4077

<400> 4077

000

<210> 4078

<400> 4078

000

<210> 4079

<400> 4079

000

<210> 4080

<400> 4080

000

<210> 4081

<400> 4081

000

<210> 4082

<400> 4082

000

<210> 4083

<400> 4083

000

<210> 4084

<400> 4084

000

<210> 4085

<400> 4085

000

<210> 4086

<400> 4086

000

<210> 4087

<400> 4087

000

<210> 4088

<400> 4088

000

<210> 4089

<400> 4089

000

<210> 4090

<400> 4090

000

<210> 4091

<400> 4091

000

<210> 4092

<400> 4092

000

<210> 4093

<400> 4093

000

<210> 4094

<400> 4094

000

<210> 4095

<400> 4095

000

<210> 4096

<400> 4096

000

<210> 4097

<400> 4097

000

<210> 4098

<400> 4098

000

<210> 4099

<400> 4099

000

<210> 4100

<400> 4100

000

<210> 4101

<400> 4101

000

<210> 4102

<400> 4102

000

<210> 4103

<400> 4103

000

<210> 4104

<400> 4104

000

<210> 4105

<400> 4105

000

<210> 4106

<400> 4106

000

<210> 4107

<400> 4107

000

<210> 4108

<400> 4108

000

<210> 4109

<400> 4109

000

<210> 4110

<400> 4110

000

<210> 4111

<400> 4111

000

<210> 4112

<400> 4112

000

<210> 4113

<400> 4113

000

<210> 4114

<400> 4114

000

<210> 4115

<400> 4115

000

<210> 4116

<400> 4116

000

<210> 4117

<400> 4117

000

<210> 4118

<400> 4118

000

<210> 4119

<400> 4119

000

<210> 4120

<400> 4120

000

<210> 4121

<400> 4121

000

<210> 4122

<400> 4122

000

<210> 4123

<400> 4123

000

<210> 4124

<400> 4124

000

<210> 4125

<400> 4125

000

<210> 4126

<400> 4126

000

<210> 4127

<400> 4127

000

<210> 4128

<400> 4128

000

<210> 4129

<400> 4129

000

<210> 4130

<400> 4130

000

<210> 4131

<400> 4131

000

<210> 4132

<400> 4132

000

<210> 4133

<400> 4133

000

<210> 4134

<400> 4134

000

<210> 4135

<400> 4135

000

<210> 4136

<400> 4136

000

<210> 4137

<400> 4137

000

<210> 4138

<400> 4138

000

<210> 4139

<400> 4139

000

<210> 4140

<400> 4140

000

<210> 4141

<400> 4141

000

<210> 4142

<400> 4142

000

<210> 4143

<400> 4143

000

<210> 4144

<400> 4144

000

<210> 4145

<400> 4145

000

<210> 4146

<400> 4146

000

<210> 4147

<400> 4147

000

<210> 4148

<400> 4148

000

<210> 4149

<400> 4149

000

<210> 4150

<400> 4150

000

<210> 4151

<400> 4151

000

<210> 4152

<400> 4152

000

<210> 4153

<400> 4153

000

<210> 4154

<400> 4154

000

<210> 4155

<400> 4155

000

<210> 4156

<400> 4156

000

<210> 4157

<400> 4157

000

<210> 4158

<400> 4158

000

<210> 4159

<400> 4159

000

<210> 4160

<400> 4160

000

<210> 4161

<400> 4161

000

<210> 4162

<400> 4162

000

<210> 4163

<400> 4163

000

<210> 4164

<400> 4164

000

<210> 4165

<400> 4165

000

<210> 4166

<400> 4166

000

<210> 4167

<400> 4167

000

<210> 4168

<400> 4168

000

<210> 4169

<400> 4169

000

<210> 4170

<400> 4170

000

<210> 4171

<400> 4171

000

<210> 4172

<400> 4172

000

<210> 4173

<400> 4173

000

<210> 4174

<400> 4174

000

<210> 4175

<400> 4175

000

<210> 4176

<400> 4176

000

<210> 4177

<400> 4177

000

<210> 4178

<400> 4178

000

<210> 4179

<400> 4179

000

<210> 4180

<400> 4180

000

<210> 4181

<400> 4181

000

<210> 4182

<400> 4182

000

<210> 4183

<400> 4183

000

<210> 4184

<400> 4184

000

<210> 4185

<400> 4185

000

<210> 4186

<400> 4186

000

<210> 4187

<400> 4187

000

<210> 4188

<400> 4188

000

<210> 4189

<400> 4189

000

<210> 4190

<400> 4190

000

<210> 4191

<400> 4191

000

<210> 4192

<400> 4192

000

<210> 4193

<400> 4193

000

<210> 4194

<400> 4194

000

<210> 4195

<400> 4195

000

<210> 4196

<400> 4196

000

<210> 4197

<400> 4197

000

<210> 4198

<400> 4198

000

<210> 4199

<400> 4199

000

<210> 4200

<400> 4200

000

<210> 4201

<400> 4201

000

<210> 4202

<400> 4202

000

<210> 4203

<400> 4203

000

<210> 4204

<400> 4204

000

<210> 4205

<400> 4205

000

<210> 4206

<400> 4206

000

<210> 4207

<400> 4207

000

<210> 4208

<400> 4208

000

<210> 4209

<400> 4209

000

<210> 4210

<400> 4210

000

<210> 4211

<400> 4211

000

<210> 4212

<400> 4212

000

<210> 4213

<400> 4213

000

<210> 4214

<400> 4214

000

<210> 4215

<400> 4215

000

<210> 4216

<400> 4216

000

<210> 4217

<400> 4217

000

<210> 4218

<400> 4218

000

<210> 4219

<400> 4219

000

<210> 4220

<400> 4220

000

<210> 4221

<400> 4221

000

<210> 4222

<400> 4222

000

<210> 4223

<400> 4223

000

<210> 4224

<400> 4224

000

<210> 4225

<400> 4225

000

<210> 4226

<400> 4226

000

<210> 4227

<400> 4227

000

<210> 4228

<400> 4228

000

<210> 4229

<400> 4229

000

<210> 4230

<400> 4230

000

<210> 4231

<400> 4231

000

<210> 4232

<400> 4232

000

<210> 4233

<400> 4233

000

<210> 4234

<400> 4234

000

<210> 4235

<400> 4235

000

<210> 4236

<400> 4236

000

<210> 4237

<400> 4237

000

<210> 4238

<400> 4238

000

<210> 4239

<400> 4239

000

<210> 4240

<400> 4240

000

<210> 4241

<400> 4241

000

<210> 4242

<400> 4242

000

<210> 4243

<400> 4243

000

<210> 4244

<400> 4244

000

<210> 4245

<400> 4245

000

<210> 4246

<400> 4246

000

<210> 4247

<400> 4247

000

<210> 4248

<400> 4248

000

<210> 4249

<400> 4249

000

<210> 4250

<400> 4250

000

<210> 4251

<400> 4251

000

<210> 4252

<400> 4252

000

<210> 4253

<400> 4253

000

<210> 4254

<400> 4254

000

<210> 4255

<400> 4255

000

<210> 4256

<400> 4256

000

<210> 4257

<400> 4257

000

<210> 4258

<400> 4258

000

<210> 4259

<400> 4259

000

<210> 4260

<400> 4260

000

<210> 4261

<400> 4261

000

<210> 4262

<400> 4262

000

<210> 4263

<400> 4263

000

<210> 4264

<400> 4264

000

<210> 4265

<400> 4265

000

<210> 4266

<400> 4266

000

<210> 4267

<400> 4267

000

<210> 4268

<400> 4268

000

<210> 4269

<400> 4269

000

<210> 4270

<400> 4270

000

<210> 4271

<400> 4271

000

<210> 4272

<400> 4272

000

<210> 4273

<400> 4273

000

<210> 4274

<400> 4274

000

<210> 4275

<400> 4275

000

<210> 4276

<400> 4276

000

<210> 4277

<400> 4277

000

<210> 4278

<400> 4278

000

<210> 4279

<400> 4279

000

<210> 4280

<400> 4280

000

<210> 4281

<400> 4281

000

<210> 4282

<400> 4282

000

<210> 4283

<400> 4283

000

<210> 4284

<400> 4284

000

<210> 4285

<400> 4285

000

<210> 4286

<400> 4286

000

<210> 4287

<400> 4287

000

<210> 4288

<400> 4288

000

<210> 4289

<400> 4289

000

<210> 4290

<400> 4290

000

<210> 4291

<400> 4291

000

<210> 4292

<400> 4292

000

<210> 4293

<400> 4293

000

<210> 4294

<400> 4294

000

<210> 4295

<400> 4295

000

<210> 4296

<400> 4296

000

<210> 4297

<400> 4297

000

<210> 4298

<400> 4298

000

<210> 4299

<400> 4299

000

<210> 4300

<400> 4300

000

<210> 4301

<400> 4301

000

<210> 4302

<400> 4302

000

<210> 4303

<400> 4303

000

<210> 4304

<400> 4304

000

<210> 4305

<400> 4305

000

<210> 4306

<400> 4306

000

<210> 4307

<400> 4307

000

<210> 4308

<400> 4308

000

<210> 4309

<400> 4309

000

<210> 4310

<400> 4310

000

<210> 4311

<400> 4311

000

<210> 4312

<400> 4312

000

<210> 4313

<400> 4313

000

<210> 4314

<400> 4314

000

<210> 4315

<400> 4315

000

<210> 4316

<400> 4316

000

<210> 4317

<400> 4317

000

<210> 4318

<400> 4318

000

<210> 4319

<400> 4319

000

<210> 4320

<400> 4320

000

<210> 4321

<400> 4321

000

<210> 4322

<400> 4322

000

<210> 4323

<400> 4323

000

<210> 4324

<400> 4324

000

<210> 4325

<400> 4325

000

<210> 4326

<400> 4326

000

<210> 4327

<400> 4327

000

<210> 4328

<400> 4328

000

<210> 4329

<400> 4329

000

<210> 4330

<400> 4330

000

<210> 4331

<400> 4331

000

<210> 4332

<400> 4332

000

<210> 4333

<400> 4333

000

<210> 4334

<400> 4334

000

<210> 4335

<400> 4335

000

<210> 4336

<400> 4336

000

<210> 4337

<400> 4337

000

<210> 4338

<400> 4338

000

<210> 4339

<400> 4339

000

<210> 4340

<400> 4340

000

<210> 4341

<400> 4341

000

<210> 4342

<400> 4342

000

<210> 4343

<400> 4343

000

<210> 4344

<400> 4344

000

<210> 4345

<400> 4345

000

<210> 4346

<400> 4346

000

<210> 4347

<400> 4347

000

<210> 4348

<400> 4348

000

<210> 4349

<400> 4349

000

<210> 4350

<400> 4350

000

<210> 4351

<400> 4351

000

<210> 4352

<400> 4352

000

<210> 4353

<400> 4353

000

<210> 4354

<400> 4354

000

<210> 4355

<400> 4355

000

<210> 4356

<400> 4356

000

<210> 4357

<400> 4357

000

<210> 4358

<400> 4358

000

<210> 4359

<400> 4359

000

<210> 4360

<400> 4360

000

<210> 4361

<400> 4361

000

<210> 4362

<400> 4362

000

<210> 4363

<400> 4363

000

<210> 4364

<400> 4364

000

<210> 4365

<400> 4365

000

<210> 4366

<400> 4366

000

<210> 4367

<400> 4367

000

<210> 4368

<400> 4368

000

<210> 4369

<400> 4369

000

<210> 4370

<400> 4370

000

<210> 4371

<400> 4371

000

<210> 4372

<400> 4372

000

<210> 4373

<400> 4373

000

<210> 4374

<400> 4374

000

<210> 4375

<400> 4375

000

<210> 4376

<400> 4376

000

<210> 4377

<400> 4377

000

<210> 4378

<400> 4378

000

<210> 4379

<400> 4379

000

<210> 4380

<400> 4380

000

<210> 4381

<400> 4381

000

<210> 4382

<400> 4382

000

<210> 4383

<400> 4383

000

<210> 4384

<400> 4384

000

<210> 4385

<400> 4385

000

<210> 4386

<400> 4386

000

<210> 4387

<400> 4387

000

<210> 4388

<400> 4388

000

<210> 4389

<400> 4389

000

<210> 4390

<400> 4390

000

<210> 4391

<400> 4391

000

<210> 4392

<400> 4392

000

<210> 4393

<400> 4393

000

<210> 4394

<400> 4394

000

<210> 4395

<400> 4395

000

<210> 4396

<400> 4396

000

<210> 4397

<400> 4397

000

<210> 4398

<400> 4398

000

<210> 4399

<400> 4399

000

<210> 4400

<400> 4400

000

<210> 4401

<400> 4401

000

<210> 4402

<400> 4402

000

<210> 4403

<400> 4403

000

<210> 4404

<400> 4404

000

<210> 4405

<400> 4405

000

<210> 4406

<400> 4406

000

<210> 4407

<400> 4407

000

<210> 4408

<400> 4408

000

<210> 4409

<400> 4409

000

<210> 4410

<400> 4410

000

<210> 4411

<400> 4411

000

<210> 4412

<400> 4412

000

<210> 4413

<400> 4413

000

<210> 4414

<400> 4414

000

<210> 4415

<400> 4415

000

<210> 4416

<400> 4416

000

<210> 4417

<400> 4417

000

<210> 4418

<400> 4418

000

<210> 4419

<400> 4419

000

<210> 4420

<400> 4420

000

<210> 4421

<400> 4421

000

<210> 4422

<400> 4422

000

<210> 4423

<400> 4423

000

<210> 4424

<400> 4424

000

<210> 4425

<400> 4425

000

<210> 4426

<400> 4426

000

<210> 4427

<400> 4427

000

<210> 4428

<400> 4428

000

<210> 4429

<400> 4429

000

<210> 4430

<400> 4430

000

<210> 4431

<400> 4431

000

<210> 4432

<400> 4432

000

<210> 4433

<400> 4433

000

<210> 4434

<400> 4434

000

<210> 4435

<400> 4435

000

<210> 4436

<400> 4436

000

<210> 4437

<400> 4437

000

<210> 4438

<400> 4438

000

<210> 4439

<400> 4439

000

<210> 4440

<400> 4440

000

<210> 4441

<400> 4441

000

<210> 4442

<400> 4442

000

<210> 4443

<400> 4443

000

<210> 4444

<400> 4444

000

<210> 4445

<400> 4445

000

<210> 4446

<400> 4446

000

<210> 4447

<400> 4447

000

<210> 4448

<400> 4448

000

<210> 4449

<400> 4449

000

<210> 4450

<400> 4450

000

<210> 4451

<400> 4451

000

<210> 4452

<400> 4452

000

<210> 4453

<400> 4453

000

<210> 4454

<400> 4454

000

<210> 4455

<400> 4455

000

<210> 4456

<400> 4456

000

<210> 4457

<400> 4457

000

<210> 4458

<400> 4458

000

<210> 4459

<400> 4459

000

<210> 4460

<400> 4460

000

<210> 4461

<400> 4461

000

<210> 4462

<400> 4462

000

<210> 4463

<400> 4463

000

<210> 4464

<400> 4464

000

<210> 4465

<400> 4465

000

<210> 4466

<400> 4466

000

<210> 4467

<400> 4467

000

<210> 4468

<400> 4468

000

<210> 4469

<400> 4469

000

<210> 4470

<400> 4470

000

<210> 4471

<400> 4471

000

<210> 4472

<400> 4472

000

<210> 4473

<400> 4473

000

<210> 4474

<400> 4474

000

<210> 4475

<400> 4475

000

<210> 4476

<400> 4476

000

<210> 4477

<400> 4477

000

<210> 4478

<400> 4478

000

<210> 4479

<400> 4479

000

<210> 4480

<400> 4480

000

<210> 4481

<400> 4481

000

<210> 4482

<400> 4482

000

<210> 4483

<400> 4483

000

<210> 4484

<400> 4484

000

<210> 4485

<400> 4485

000

<210> 4486

<400> 4486

000

<210> 4487

<400> 4487

000

<210> 4488

<400> 4488

000

<210> 4489

<400> 4489

000

<210> 4490

<400> 4490

000

<210> 4491

<400> 4491

000

<210> 4492

<400> 4492

000

<210> 4493

<400> 4493

000

<210> 4494

<400> 4494

000

<210> 4495

<400> 4495

000

<210> 4496

<400> 4496

000

<210> 4497

<400> 4497

000

<210> 4498

<400> 4498

000

<210> 4499

<400> 4499

000

<210> 4500

<400> 4500

000

<210> 4501

<400> 4501

000

<210> 4502

<400> 4502

000

<210> 4503

<400> 4503

000

<210> 4504

<400> 4504

000

<210> 4505

<400> 4505

000

<210> 4506

<400> 4506

000

<210> 4507

<400> 4507

000

<210> 4508

<400> 4508

000

<210> 4509

<400> 4509

000

<210> 4510

<400> 4510

000

<210> 4511

<400> 4511

000

<210> 4512

<400> 4512

000

<210> 4513

<400> 4513

000

<210> 4514

<400> 4514

000

<210> 4515

<400> 4515

000

<210> 4516

<400> 4516

000

<210> 4517

<400> 4517

000

<210> 4518

<400> 4518

000

<210> 4519

<400> 4519

000

<210> 4520

<400> 4520

000

<210> 4521

<400> 4521

000

<210> 4522

<400> 4522

000

<210> 4523

<400> 4523

000

<210> 4524

<400> 4524

000

<210> 4525

<400> 4525

000

<210> 4526

<400> 4526

000

<210> 4527

<400> 4527

000

<210> 4528

<400> 4528

000

<210> 4529

<400> 4529

000

<210> 4530

<400> 4530

000

<210> 4531

<400> 4531

000

<210> 4532

<400> 4532

000

<210> 4533

<400> 4533

000

<210> 4534

<400> 4534

000

<210> 4535

<400> 4535

000

<210> 4536

<400> 4536

000

<210> 4537

<400> 4537

000

<210> 4538

<400> 4538

000

<210> 4539

<400> 4539

000

<210> 4540

<400> 4540

000

<210> 4541

<400> 4541

000

<210> 4542

<400> 4542

000

<210> 4543

<400> 4543

000

<210> 4544

<400> 4544

000

<210> 4545

<400> 4545

000

<210> 4546

<400> 4546

000

<210> 4547

<400> 4547

000

<210> 4548

<400> 4548

000

<210> 4549

<400> 4549

000

<210> 4550

<400> 4550

000

<210> 4551

<400> 4551

000

<210> 4552

<400> 4552

000

<210> 4553

<400> 4553

000

<210> 4554

<400> 4554

000

<210> 4555

<400> 4555

000

<210> 4556

<400> 4556

000

<210> 4557

<400> 4557

000

<210> 4558

<400> 4558

000

<210> 4559

<400> 4559

000

<210> 4560

<400> 4560

000

<210> 4561

<400> 4561

000

<210> 4562

<400> 4562

000

<210> 4563

<400> 4563

000

<210> 4564

<400> 4564

000

<210> 4565

<400> 4565

000

<210> 4566

<400> 4566

000

<210> 4567

<400> 4567

000

<210> 4568

<400> 4568

000

<210> 4569

<400> 4569

000

<210> 4570

<400> 4570

000

<210> 4571

<400> 4571

000

<210> 4572

<400> 4572

000

<210> 4573

<400> 4573

000

<210> 4574

<400> 4574

000

<210> 4575

<400> 4575

000

<210> 4576

<400> 4576

000

<210> 4577

<400> 4577

000

<210> 4578

<400> 4578

000

<210> 4579

<400> 4579

000

<210> 4580

<400> 4580

000

<210> 4581

<400> 4581

000

<210> 4582

<400> 4582

000

<210> 4583

<400> 4583

000

<210> 4584

<400> 4584

000

<210> 4585

<400> 4585

000

<210> 4586

<400> 4586

000

<210> 4587

<400> 4587

000

<210> 4588

<400> 4588

000

<210> 4589

<400> 4589

000

<210> 4590

<400> 4590

000

<210> 4591

<400> 4591

000

<210> 4592

<400> 4592

000

<210> 4593

<400> 4593

000

<210> 4594

<400> 4594

000

<210> 4595

<400> 4595

000

<210> 4596

<400> 4596

000

<210> 4597

<400> 4597

000

<210> 4598

<400> 4598

000

<210> 4599

<400> 4599

000

<210> 4600

<400> 4600

000

<210> 4601

<400> 4601

000

<210> 4602

<400> 4602

000

<210> 4603

<400> 4603

000

<210> 4604

<400> 4604

000

<210> 4605

<400> 4605

000

<210> 4606

<400> 4606

000

<210> 4607

<400> 4607

000

<210> 4608

<400> 4608

000

<210> 4609

<400> 4609

000

<210> 4610

<400> 4610

000

<210> 4611

<400> 4611

000

<210> 4612

<400> 4612

000

<210> 4613

<400> 4613

000

<210> 4614

<400> 4614

000

<210> 4615

<400> 4615

000

<210> 4616

<400> 4616

000

<210> 4617

<400> 4617

000

<210> 4618

<400> 4618

000

<210> 4619

<400> 4619

000

<210> 4620

<400> 4620

000

<210> 4621

<400> 4621

000

<210> 4622

<400> 4622

000

<210> 4623

<400> 4623

000

<210> 4624

<400> 4624

000

<210> 4625

<400> 4625

000

<210> 4626

<400> 4626

000

<210> 4627

<400> 4627

000

<210> 4628

<400> 4628

000

<210> 4629

<400> 4629

000

<210> 4630

<400> 4630

000

<210> 4631

<400> 4631

000

<210> 4632

<400> 4632

000

<210> 4633

<400> 4633

000

<210> 4634

<400> 4634

000

<210> 4635

<400> 4635

000

<210> 4636

<400> 4636

000

<210> 4637

<400> 4637

000

<210> 4638

<400> 4638

000

<210> 4639

<400> 4639

000

<210> 4640

<400> 4640

000

<210> 4641

<400> 4641

000

<210> 4642

<400> 4642

000

<210> 4643

<400> 4643

000

<210> 4644

<400> 4644

000

<210> 4645

<400> 4645

000

<210> 4646

<400> 4646

000

<210> 4647

<400> 4647

000

<210> 4648

<400> 4648

000

<210> 4649

<400> 4649

000

<210> 4650

<400> 4650

000

<210> 4651

<400> 4651

000

<210> 4652

<400> 4652

000

<210> 4653

<400> 4653

000

<210> 4654

<400> 4654

000

<210> 4655

<400> 4655

000

<210> 4656

<400> 4656

000

<210> 4657

<400> 4657

000

<210> 4658

<400> 4658

000

<210> 4659

<400> 4659

000

<210> 4660

<400> 4660

000

<210> 4661

<400> 4661

000

<210> 4662

<400> 4662

000

<210> 4663

<400> 4663

000

<210> 4664

<400> 4664

000

<210> 4665

<400> 4665

000

<210> 4666

<400> 4666

000

<210> 4667

<400> 4667

000

<210> 4668

<400> 4668

000

<210> 4669

<400> 4669

000

<210> 4670

<400> 4670

000

<210> 4671

<400> 4671

000

<210> 4672

<400> 4672

000

<210> 4673

<400> 4673

000

<210> 4674

<400> 4674

000

<210> 4675

<400> 4675

000

<210> 4676

<400> 4676

000

<210> 4677

<400> 4677

000

<210> 4678

<400> 4678

000

<210> 4679

<400> 4679

000

<210> 4680

<400> 4680

000

<210> 4681

<400> 4681

000

<210> 4682

<400> 4682

000

<210> 4683

<400> 4683

000

<210> 4684

<400> 4684

000

<210> 4685

<400> 4685

000

<210> 4686

<400> 4686

000

<210> 4687

<400> 4687

000

<210> 4688

<400> 4688

000

<210> 4689

<400> 4689

000

<210> 4690

<400> 4690

000

<210> 4691

<400> 4691

000

<210> 4692

<400> 4692

000

<210> 4693

<400> 4693

000

<210> 4694

<400> 4694

000

<210> 4695

<400> 4695

000

<210> 4696

<400> 4696

000

<210> 4697

<400> 4697

000

<210> 4698

<400> 4698

000

<210> 4699

<400> 4699

000

<210> 4700

<400> 4700

000

<210> 4701

<400> 4701

000

<210> 4702

<400> 4702

000

<210> 4703

<400> 4703

000

<210> 4704

<400> 4704

000

<210> 4705

<400> 4705

000

<210> 4706

<400> 4706

000

<210> 4707

<400> 4707

000

<210> 4708

<400> 4708

000

<210> 4709

<400> 4709

000

<210> 4710

<400> 4710

000

<210> 4711

<400> 4711

000

<210> 4712

<400> 4712

000

<210> 4713

<400> 4713

000

<210> 4714

<400> 4714

000

<210> 4715

<400> 4715

000

<210> 4716

<400> 4716

000

<210> 4717

<400> 4717

000

<210> 4718

<400> 4718

000

<210> 4719

<400> 4719

000

<210> 4720

<400> 4720

000

<210> 4721

<400> 4721

000

<210> 4722

<400> 4722

000

<210> 4723

<400> 4723

000

<210> 4724

<400> 4724

000

<210> 4725

<400> 4725

000

<210> 4726

<400> 4726

000

<210> 4727

<400> 4727

000

<210> 4728

<400> 4728

000

<210> 4729

<400> 4729

000

<210> 4730

<400> 4730

000

<210> 4731

<400> 4731

000

<210> 4732

<400> 4732

000

<210> 4733

<400> 4733

000

<210> 4734

<400> 4734

000

<210> 4735

<400> 4735

000

<210> 4736

<400> 4736

000

<210> 4737

<400> 4737

000

<210> 4738

<400> 4738

000

<210> 4739

<400> 4739

000

<210> 4740

<400> 4740

000

<210> 4741

<400> 4741

000

<210> 4742

<400> 4742

000

<210> 4743

<400> 4743

000

<210> 4744

<400> 4744

000

<210> 4745

<400> 4745

000

<210> 4746

<400> 4746

000

<210> 4747

<400> 4747

000

<210> 4748

<400> 4748

000

<210> 4749

<400> 4749

000

<210> 4750

<400> 4750

000

<210> 4751

<400> 4751

000

<210> 4752

<400> 4752

000

<210> 4753

<400> 4753

000

<210> 4754

<400> 4754

000

<210> 4755

<400> 4755

000

<210> 4756

<400> 4756

000

<210> 4757

<400> 4757

000

<210> 4758

<400> 4758

000

<210> 4759

<400> 4759

000

<210> 4760

<400> 4760

000

<210> 4761

<400> 4761

000

<210> 4762

<400> 4762

000

<210> 4763

<400> 4763

000

<210> 4764

<400> 4764

000

<210> 4765

<400> 4765

000

<210> 4766

<400> 4766

000

<210> 4767

<400> 4767

000

<210> 4768

<400> 4768

000

<210> 4769

<400> 4769

000

<210> 4770

<400> 4770

000

<210> 4771

<400> 4771

000

<210> 4772

<400> 4772

000

<210> 4773

<400> 4773

000

<210> 4774

<400> 4774

000

<210> 4775

<400> 4775

000

<210> 4776

<400> 4776

000

<210> 4777

<400> 4777

000

<210> 4778

<400> 4778

000

<210> 4779

<400> 4779

000

<210> 4780

<400> 4780

000

<210> 4781

<400> 4781

000

<210> 4782

<400> 4782

000

<210> 4783

<400> 4783

000

<210> 4784

<400> 4784

000

<210> 4785

<400> 4785

000

<210> 4786

<400> 4786

000

<210> 4787

<400> 4787

000

<210> 4788

<400> 4788

000

<210> 4789

<400> 4789

000

<210> 4790

<400> 4790

000

<210> 4791

<400> 4791

000

<210> 4792

<400> 4792

000

<210> 4793

<400> 4793

000

<210> 4794

<400> 4794

000

<210> 4795

<400> 4795

000

<210> 4796

<400> 4796

000

<210> 4797

<400> 4797

000

<210> 4798

<400> 4798

000

<210> 4799

<400> 4799

000

<210> 4800

<400> 4800

000

<210> 4801

<400> 4801

000

<210> 4802

<400> 4802

000

<210> 4803

<400> 4803

000

<210> 4804

<400> 4804

000

<210> 4805

<400> 4805

000

<210> 4806

<400> 4806

000

<210> 4807

<400> 4807

000

<210> 4808

<400> 4808

000

<210> 4809

<400> 4809

000

<210> 4810

<400> 4810

000

<210> 4811

<400> 4811

000

<210> 4812

<400> 4812

000

<210> 4813

<400> 4813

000

<210> 4814

<400> 4814

000

<210> 4815

<400> 4815

000

<210> 4816

<400> 4816

000

<210> 4817

<400> 4817

000

<210> 4818

<400> 4818

000

<210> 4819

<400> 4819

000

<210> 4820

<400> 4820

000

<210> 4821

<400> 4821

000

<210> 4822

<400> 4822

000

<210> 4823

<400> 4823

000

<210> 4824

<400> 4824

000

<210> 4825

<400> 4825

000

<210> 4826

<400> 4826

000

<210> 4827

<400> 4827

000

<210> 4828

<400> 4828

000

<210> 4829

<400> 4829

000

<210> 4830

<400> 4830

000

<210> 4831

<400> 4831

000

<210> 4832

<400> 4832

000

<210> 4833

<400> 4833

000

<210> 4834

<400> 4834

000

<210> 4835

<400> 4835

000

<210> 4836

<400> 4836

000

<210> 4837

<400> 4837

000

<210> 4838

<400> 4838

000

<210> 4839

<400> 4839

000

<210> 4840

<400> 4840

000

<210> 4841

<400> 4841

000

<210> 4842

<400> 4842

000

<210> 4843

<400> 4843

000

<210> 4844

<400> 4844

000

<210> 4845

<400> 4845

000

<210> 4846

<400> 4846

000

<210> 4847

<400> 4847

000

<210> 4848

<400> 4848

000

<210> 4849

<400> 4849

000

<210> 4850

<400> 4850

000

<210> 4851

<400> 4851

000

<210> 4852

<400> 4852

000

<210> 4853

<400> 4853

000

<210> 4854

<400> 4854

000

<210> 4855

<400> 4855

000

<210> 4856

<400> 4856

000

<210> 4857

<400> 4857

000

<210> 4858

<400> 4858

000

<210> 4859

<400> 4859

000

<210> 4860

<400> 4860

000

<210> 4861

<400> 4861

000

<210> 4862

<400> 4862

000

<210> 4863

<400> 4863

000

<210> 4864

<400> 4864

000

<210> 4865

<400> 4865

000

<210> 4866

<400> 4866

000

<210> 4867

<400> 4867

000

<210> 4868

<400> 4868

000

<210> 4869

<400> 4869

000

<210> 4870

<400> 4870

000

<210> 4871

<400> 4871

000

<210> 4872

<400> 4872

000

<210> 4873

<400> 4873

000

<210> 4874

<400> 4874

000

<210> 4875

<400> 4875

000

<210> 4876

<400> 4876

000

<210> 4877

<400> 4877

000

<210> 4878

<400> 4878

000

<210> 4879

<400> 4879

000

<210> 4880

<400> 4880

000

<210> 4881

<400> 4881

000

<210> 4882

<400> 4882

000

<210> 4883

<400> 4883

000

<210> 4884

<400> 4884

000

<210> 4885

<400> 4885

000

<210> 4886

<400> 4886

000

<210> 4887

<400> 4887

000

<210> 4888

<400> 4888

000

<210> 4889

<400> 4889

000

<210> 4890

<400> 4890

000

<210> 4891

<400> 4891

000

<210> 4892

<400> 4892

000

<210> 4893

<400> 4893

000

<210> 4894

<400> 4894

000

<210> 4895

<400> 4895

000

<210> 4896

<400> 4896

000

<210> 4897

<400> 4897

000

<210> 4898

<400> 4898

000

<210> 4899

<400> 4899

000

<210> 4900

<400> 4900

000

<210> 4901

<400> 4901

000

<210> 4902

<400> 4902

000

<210> 4903

<400> 4903

000

<210> 4904

<400> 4904

000

<210> 4905

<400> 4905

000

<210> 4906

<400> 4906

000

<210> 4907

<400> 4907

000

<210> 4908

<400> 4908

000

<210> 4909

<400> 4909

000

<210> 4910

<400> 4910

000

<210> 4911

<400> 4911

000

<210> 4912

<400> 4912

000

<210> 4913

<400> 4913

000

<210> 4914

<400> 4914

000

<210> 4915

<400> 4915

000

<210> 4916

<400> 4916

000

<210> 4917

<400> 4917

000

<210> 4918

<400> 4918

000

<210> 4919

<400> 4919

000

<210> 4920

<400> 4920

000

<210> 4921

<400> 4921

000

<210> 4922

<400> 4922

000

<210> 4923

<400> 4923

000

<210> 4924

<400> 4924

000

<210> 4925

<400> 4925

000

<210> 4926

<400> 4926

000

<210> 4927

<400> 4927

000

<210> 4928

<400> 4928

000

<210> 4929

<400> 4929

000

<210> 4930

<400> 4930

000

<210> 4931

<400> 4931

000

<210> 4932

<400> 4932

000

<210> 4933

<400> 4933

000

<210> 4934

<400> 4934

000

<210> 4935

<400> 4935

000

<210> 4936

<400> 4936

000

<210> 4937

<400> 4937

000

<210> 4938

<400> 4938

000

<210> 4939

<400> 4939

000

<210> 4940

<400> 4940

000

<210> 4941

<400> 4941

000

<210> 4942

<400> 4942

000

<210> 4943

<400> 4943

000

<210> 4944

<400> 4944

000

<210> 4945

<400> 4945

000

<210> 4946

<400> 4946

000

<210> 4947

<400> 4947

000

<210> 4948

<400> 4948

000

<210> 4949

<400> 4949

000

<210> 4950

<400> 4950

000

<210> 4951

<400> 4951

000

<210> 4952

<400> 4952

000

<210> 4953

<400> 4953

000

<210> 4954

<400> 4954

000

<210> 4955

<400> 4955

000

<210> 4956

<400> 4956

000

<210> 4957

<400> 4957

000

<210> 4958

<400> 4958

000

<210> 4959

<400> 4959

000

<210> 4960

<400> 4960

000

<210> 4961

<400> 4961

000

<210> 4962

<400> 4962

000

<210> 4963

<400> 4963

000

<210> 4964

<400> 4964

000

<210> 4965

<400> 4965

000

<210> 4966

<400> 4966

000

<210> 4967

<400> 4967

000

<210> 4968

<400> 4968

000

<210> 4969

<400> 4969

000

<210> 4970

<400> 4970

000

<210> 4971

<400> 4971

000

<210> 4972

<400> 4972

000

<210> 4973

<400> 4973

000

<210> 4974

<400> 4974

000

<210> 4975

<400> 4975

000

<210> 4976

<400> 4976

000

<210> 4977

<400> 4977

000

<210> 4978

<400> 4978

000

<210> 4979

<400> 4979

000

<210> 4980

<400> 4980

000

<210> 4981

<400> 4981

000

<210> 4982

<400> 4982

000

<210> 4983

<400> 4983

000

<210> 4984

<400> 4984

000

<210> 4985

<400> 4985

000

<210> 4986

<400> 4986

000

<210> 4987

<400> 4987

000

<210> 4988

<400> 4988

000

<210> 4989

<400> 4989

000

<210> 4990

<400> 4990

000

<210> 4991

<400> 4991

000

<210> 4992

<400> 4992

000

<210> 4993

<400> 4993

000

<210> 4994

<400> 4994

000

<210> 4995

<400> 4995

000

<210> 4996

<400> 4996

000

<210> 4997

<400> 4997

000

<210> 4998

<400> 4998

000

<210> 4999

<400> 4999

000

<210> 5000

<400> 5000

000

<210> 5001

<400> 5001

000

<210> 5002

<400> 5002

000

<210> 5003

<400> 5003

000

<210> 5004

<400> 5004

000

<210> 5005

<400> 5005

000

<210> 5006

<400> 5006

000

<210> 5007

<400> 5007

000

<210> 5008

<400> 5008

000

<210> 5009

<400> 5009

000

<210> 5010

<400> 5010

000

<210> 5011

<400> 5011

000

<210> 5012

<400> 5012

000

<210> 5013

<400> 5013

000

<210> 5014

<400> 5014

000

<210> 5015

<400> 5015

000

<210> 5016

<400> 5016

000

<210> 5017

<400> 5017

000

<210> 5018

<400> 5018

000

<210> 5019

<400> 5019

000

<210> 5020

<400> 5020

000

<210> 5021

<400> 5021

000

<210> 5022

<400> 5022

000

<210> 5023

<400> 5023

000

<210> 5024

<400> 5024

000

<210> 5025

<400> 5025

000

<210> 5026

<400> 5026

000

<210> 5027

<400> 5027

000

<210> 5028

<400> 5028

000

<210> 5029

<400> 5029

000

<210> 5030

<400> 5030

000

<210> 5031

<400> 5031

000

<210> 5032

<400> 5032

000

<210> 5033

<400> 5033

000

<210> 5034

<400> 5034

000

<210> 5035

<400> 5035

000

<210> 5036

<400> 5036

000

<210> 5037

<400> 5037

000

<210> 5038

<400> 5038

000

<210> 5039

<400> 5039

000

<210> 5040

<400> 5040

000

<210> 5041

<400> 5041

000

<210> 5042

<400> 5042

000

<210> 5043

<400> 5043

000

<210> 5044

<400> 5044

000

<210> 5045

<400> 5045

000

<210> 5046

<400> 5046

000

<210> 5047

<400> 5047

000

<210> 5048

<400> 5048

000

<210> 5049

<400> 5049

000

<210> 5050

<400> 5050

000

<210> 5051

<400> 5051

000

<210> 5052

<400> 5052

000

<210> 5053

<400> 5053

000

<210> 5054

<400> 5054

000

<210> 5055

<400> 5055

000

<210> 5056

<400> 5056

000

<210> 5057

<400> 5057

000

<210> 5058

<400> 5058

000

<210> 5059

<400> 5059

000

<210> 5060

<400> 5060

000

<210> 5061

<400> 5061

000

<210> 5062

<400> 5062

000

<210> 5063

<400> 5063

000

<210> 5064

<400> 5064

000

<210> 5065

<400> 5065

000

<210> 5066

<400> 5066

000

<210> 5067

<400> 5067

000

<210> 5068

<400> 5068

000

<210> 5069

<400> 5069

000

<210> 5070

<400> 5070

000

<210> 5071

<400> 5071

000

<210> 5072

<400> 5072

000

<210> 5073

<400> 5073

000

<210> 5074

<400> 5074

000

<210> 5075

<400> 5075

000

<210> 5076

<400> 5076

000

<210> 5077

<400> 5077

000

<210> 5078

<400> 5078

000

<210> 5079

<400> 5079

000

<210> 5080

<400> 5080

000

<210> 5081

<400> 5081

000

<210> 5082

<400> 5082

000

<210> 5083

<400> 5083

000

<210> 5084

<400> 5084

000

<210> 5085

<400> 5085

000

<210> 5086

<400> 5086

000

<210> 5087

<400> 5087

000

<210> 5088

<400> 5088

000

<210> 5089

<400> 5089

000

<210> 5090

<400> 5090

000

<210> 5091

<400> 5091

000

<210> 5092

<400> 5092

000

<210> 5093

<400> 5093

000

<210> 5094

<400> 5094

000

<210> 5095

<400> 5095

000

<210> 5096

<400> 5096

000

<210> 5097

<400> 5097

000

<210> 5098

<400> 5098

000

<210> 5099

<400> 5099

000

<210> 5100

<400> 5100

000

<210> 5101

<400> 5101

000

<210> 5102

<400> 5102

000

<210> 5103

<400> 5103

000

<210> 5104

<400> 5104

000

<210> 5105

<400> 5105

000

<210> 5106

<400> 5106

000

<210> 5107

<400> 5107

000

<210> 5108

<400> 5108

000

<210> 5109

<400> 5109

000

<210> 5110

<400> 5110

000

<210> 5111

<400> 5111

000

<210> 5112

<400> 5112

000

<210> 5113

<400> 5113

000

<210> 5114

<400> 5114

000

<210> 5115

<400> 5115

000

<210> 5116

<400> 5116

000

<210> 5117

<400> 5117

000

<210> 5118

<400> 5118

000

<210> 5119

<400> 5119

000

<210> 5120

<400> 5120

000

<210> 5121

<400> 5121

000

<210> 5122

<400> 5122

000

<210> 5123

<400> 5123

000

<210> 5124

<400> 5124

000

<210> 5125

<400> 5125

000

<210> 5126

<400> 5126

000

<210> 5127

<400> 5127

000

<210> 5128

<400> 5128

000

<210> 5129

<400> 5129

000

<210> 5130

<400> 5130

000

<210> 5131

<400> 5131

000

<210> 5132

<400> 5132

000

<210> 5133

<400> 5133

000

<210> 5134

<400> 5134

000

<210> 5135

<400> 5135

000

<210> 5136

<400> 5136

000

<210> 5137

<400> 5137

000

<210> 5138

<400> 5138

000

<210> 5139

<400> 5139

000

<210> 5140

<400> 5140

000

<210> 5141

<400> 5141

000

<210> 5142

<400> 5142

000

<210> 5143

<400> 5143

000

<210> 5144

<400> 5144

000

<210> 5145

<400> 5145

000

<210> 5146

<400> 5146

000

<210> 5147

<400> 5147

000

<210> 5148

<400> 5148

000

<210> 5149

<400> 5149

000

<210> 5150

<400> 5150

000

<210> 5151

<400> 5151

000

<210> 5152

<400> 5152

000

<210> 5153

<400> 5153

000

<210> 5154

<400> 5154

000

<210> 5155

<400> 5155

000

<210> 5156

<400> 5156

000

<210> 5157

<400> 5157

000

<210> 5158

<400> 5158

000

<210> 5159

<400> 5159

000

<210> 5160

<400> 5160

000

<210> 5161

<400> 5161

000

<210> 5162

<400> 5162

000

<210> 5163

<400> 5163

000

<210> 5164

<400> 5164

000

<210> 5165

<400> 5165

000

<210> 5166

<400> 5166

000

<210> 5167

<400> 5167

000

<210> 5168

<400> 5168

000

<210> 5169

<400> 5169

000

<210> 5170

<400> 5170

000

<210> 5171

<400> 5171

000

<210> 5172

<400> 5172

000

<210> 5173

<400> 5173

000

<210> 5174

<400> 5174

000

<210> 5175

<400> 5175

000

<210> 5176

<400> 5176

000

<210> 5177

<400> 5177

000

<210> 5178

<400> 5178

000

<210> 5179

<400> 5179

000

<210> 5180

<400> 5180

000

<210> 5181

<400> 5181

000

<210> 5182

<400> 5182

000

<210> 5183

<400> 5183

000

<210> 5184

<400> 5184

000

<210> 5185

<400> 5185

000

<210> 5186

<400> 5186

000

<210> 5187

<400> 5187

000

<210> 5188

<400> 5188

000

<210> 5189

<400> 5189

000

<210> 5190

<400> 5190

000

<210> 5191

<400> 5191

000

<210> 5192

<400> 5192

000

<210> 5193

<400> 5193

000

<210> 5194

<400> 5194

000

<210> 5195

<400> 5195

000

<210> 5196

<400> 5196

000

<210> 5197

<400> 5197

000

<210> 5198

<400> 5198

000

<210> 5199

<400> 5199

000

<210> 5200

<400> 5200

000

<210> 5201

<400> 5201

000

<210> 5202

<400> 5202

000

<210> 5203

<400> 5203

000

<210> 5204

<400> 5204

000

<210> 5205

<400> 5205

000

<210> 5206

<400> 5206

000

<210> 5207

<400> 5207

000

<210> 5208

<400> 5208

000

<210> 5209

<400> 5209

000

<210> 5210

<400> 5210

000

<210> 5211

<400> 5211

000

<210> 5212

<400> 5212

000

<210> 5213

<400> 5213

000

<210> 5214

<400> 5214

000

<210> 5215

<400> 5215

000

<210> 5216

<400> 5216

000

<210> 5217

<400> 5217

000

<210> 5218

<400> 5218

000

<210> 5219

<400> 5219

000

<210> 5220

<400> 5220

000

<210> 5221

<400> 5221

000

<210> 5222

<400> 5222

000

<210> 5223

<400> 5223

000

<210> 5224

<400> 5224

000

<210> 5225

<400> 5225

000

<210> 5226

<400> 5226

000

<210> 5227

<400> 5227

000

<210> 5228

<400> 5228

000

<210> 5229

<400> 5229

000

<210> 5230

<400> 5230

000

<210> 5231

<400> 5231

000

<210> 5232

<400> 5232

000

<210> 5233

<400> 5233

000

<210> 5234

<400> 5234

000

<210> 5235

<400> 5235

000

<210> 5236

<400> 5236

000

<210> 5237

<400> 5237

000

<210> 5238

<400> 5238

000

<210> 5239

<400> 5239

000

<210> 5240

<400> 5240

000

<210> 5241

<400> 5241

000

<210> 5242

<400> 5242

000

<210> 5243

<400> 5243

000

<210> 5244

<400> 5244

000

<210> 5245

<400> 5245

000

<210> 5246

<400> 5246

000

<210> 5247

<400> 5247

000

<210> 5248

<400> 5248

000

<210> 5249

<400> 5249

000

<210> 5250

<400> 5250

000

<210> 5251

<400> 5251

000

<210> 5252

<400> 5252

000

<210> 5253

<400> 5253

000

<210> 5254

<400> 5254

000

<210> 5255

<400> 5255

000

<210> 5256

<400> 5256

000

<210> 5257

<400> 5257

000

<210> 5258

<400> 5258

000

<210> 5259

<400> 5259

000

<210> 5260

<400> 5260

000

<210> 5261

<400> 5261

000

<210> 5262

<400> 5262

000

<210> 5263

<400> 5263

000

<210> 5264

<400> 5264

000

<210> 5265

<400> 5265

000

<210> 5266

<400> 5266

000

<210> 5267

<400> 5267

000

<210> 5268

<400> 5268

000

<210> 5269

<400> 5269

000

<210> 5270

<400> 5270

000

<210> 5271

<400> 5271

000

<210> 5272

<400> 5272

000

<210> 5273

<400> 5273

000

<210> 5274

<400> 5274

000

<210> 5275

<400> 5275

000

<210> 5276

<400> 5276

000

<210> 5277

<400> 5277

000

<210> 5278

<400> 5278

000

<210> 5279

<400> 5279

000

<210> 5280

<400> 5280

000

<210> 5281

<400> 5281

000

<210> 5282

<400> 5282

000

<210> 5283

<400> 5283

000

<210> 5284

<400> 5284

000

<210> 5285

<400> 5285

000

<210> 5286

<400> 5286

000

<210> 5287

<400> 5287

000

<210> 5288

<400> 5288

000

<210> 5289

<400> 5289

000

<210> 5290

<400> 5290

000

<210> 5291

<400> 5291

000

<210> 5292

<400> 5292

000

<210> 5293

<400> 5293

000

<210> 5294

<400> 5294

000

<210> 5295

<400> 5295

000

<210> 5296

<400> 5296

000

<210> 5297

<400> 5297

000

<210> 5298

<400> 5298

000

<210> 5299

<400> 5299

000

<210> 5300

<400> 5300

000

<210> 5301

<400> 5301

000

<210> 5302

<400> 5302

000

<210> 5303

<400> 5303

000

<210> 5304

<400> 5304

000

<210> 5305

<400> 5305

000

<210> 5306

<400> 5306

000

<210> 5307

<400> 5307

000

<210> 5308

<400> 5308

000

<210> 5309

<400> 5309

000

<210> 5310

<400> 5310

000

<210> 5311

<400> 5311

000

<210> 5312

<400> 5312

000

<210> 5313

<400> 5313

000

<210> 5314

<400> 5314

000

<210> 5315

<400> 5315

000

<210> 5316

<400> 5316

000

<210> 5317

<400> 5317

000

<210> 5318

<400> 5318

000

<210> 5319

<400> 5319

000

<210> 5320

<400> 5320

000

<210> 5321

<400> 5321

000

<210> 5322

<400> 5322

000

<210> 5323

<400> 5323

000

<210> 5324

<400> 5324

000

<210> 5325

<400> 5325

000

<210> 5326

<400> 5326

000

<210> 5327

<400> 5327

000

<210> 5328

<400> 5328

000

<210> 5329

<400> 5329

000

<210> 5330

<400> 5330

000

<210> 5331

<400> 5331

000

<210> 5332

<400> 5332

000

<210> 5333

<400> 5333

000

<210> 5334

<400> 5334

000

<210> 5335

<400> 5335

000

<210> 5336

<400> 5336

000

<210> 5337

<400> 5337

000

<210> 5338

<400> 5338

000

<210> 5339

<400> 5339

000

<210> 5340

<400> 5340

000

<210> 5341

<400> 5341

000

<210> 5342

<400> 5342

000

<210> 5343

<400> 5343

000

<210> 5344

<400> 5344

000

<210> 5345

<400> 5345

000

<210> 5346

<400> 5346

000

<210> 5347

<400> 5347

000

<210> 5348

<400> 5348

000

<210> 5349

<400> 5349

000

<210> 5350

<400> 5350

000

<210> 5351

<400> 5351

000

<210> 5352

<400> 5352

000

<210> 5353

<400> 5353

000

<210> 5354

<400> 5354

000

<210> 5355

<400> 5355

000

<210> 5356

<400> 5356

000

<210> 5357

<400> 5357

000

<210> 5358

<400> 5358

000

<210> 5359

<400> 5359

000

<210> 5360

<400> 5360

000

<210> 5361

<400> 5361

000

<210> 5362

<400> 5362

000

<210> 5363

<400> 5363

000

<210> 5364

<400> 5364

000

<210> 5365

<400> 5365

000

<210> 5366

<400> 5366

000

<210> 5367

<400> 5367

000

<210> 5368

<400> 5368

000

<210> 5369

<400> 5369

000

<210> 5370

<400> 5370

000

<210> 5371

<400> 5371

000

<210> 5372

<400> 5372

000

<210> 5373

<400> 5373

000

<210> 5374

<400> 5374

000

<210> 5375

<400> 5375

000

<210> 5376

<400> 5376

000

<210> 5377

<400> 5377

000

<210> 5378

<400> 5378

000

<210> 5379

<400> 5379

000

<210> 5380

<400> 5380

000

<210> 5381

<400> 5381

000

<210> 5382

<400> 5382

000

<210> 5383

<400> 5383

000

<210> 5384

<400> 5384

000

<210> 5385

<400> 5385

000

<210> 5386

<400> 5386

000

<210> 5387

<400> 5387

000

<210> 5388

<400> 5388

000

<210> 5389

<400> 5389

000

<210> 5390

<400> 5390

000

<210> 5391

<400> 5391

000

<210> 5392

<400> 5392

000

<210> 5393

<400> 5393

000

<210> 5394

<400> 5394

000

<210> 5395

<400> 5395

000

<210> 5396

<400> 5396

000

<210> 5397

<400> 5397

000

<210> 5398

<400> 5398

000

<210> 5399

<400> 5399

000

<210> 5400

<400> 5400

000

<210> 5401

<400> 5401

000

<210> 5402

<400> 5402

000

<210> 5403

<400> 5403

000

<210> 5404

<400> 5404

000

<210> 5405

<400> 5405

000

<210> 5406

<400> 5406

000

<210> 5407

<400> 5407

000

<210> 5408

<400> 5408

000

<210> 5409

<400> 5409

000

<210> 5410

<400> 5410

000

<210> 5411

<400> 5411

000

<210> 5412

<400> 5412

000

<210> 5413

<400> 5413

000

<210> 5414

<400> 5414

000

<210> 5415

<400> 5415

000

<210> 5416

<400> 5416

000

<210> 5417

<400> 5417

000

<210> 5418

<400> 5418

000

<210> 5419

<400> 5419

000

<210> 5420

<400> 5420

000

<210> 5421

<400> 5421

000

<210> 5422

<400> 5422

000

<210> 5423

<400> 5423

000

<210> 5424

<400> 5424

000

<210> 5425

<400> 5425

000

<210> 5426

<400> 5426

000

<210> 5427

<400> 5427

000

<210> 5428

<400> 5428

000

<210> 5429

<400> 5429

000

<210> 5430

<400> 5430

000

<210> 5431

<400> 5431

000

<210> 5432

<400> 5432

000

<210> 5433

<400> 5433

000

<210> 5434

<400> 5434

000

<210> 5435

<400> 5435

000

<210> 5436

<400> 5436

000

<210> 5437

<400> 5437

000

<210> 5438

<400> 5438

000

<210> 5439

<400> 5439

000

<210> 5440

<400> 5440

000

<210> 5441

<400> 5441

000

<210> 5442

<400> 5442

000

<210> 5443

<400> 5443

000

<210> 5444

<400> 5444

000

<210> 5445

<400> 5445

000

<210> 5446

<400> 5446

000

<210> 5447

<400> 5447

000

<210> 5448

<400> 5448

000

<210> 5449

<400> 5449

000

<210> 5450

<400> 5450

000

<210> 5451

<400> 5451

000

<210> 5452

<400> 5452

000

<210> 5453

<400> 5453

000

<210> 5454

<400> 5454

000

<210> 5455

<400> 5455

000

<210> 5456

<400> 5456

000

<210> 5457

<400> 5457

000

<210> 5458

<400> 5458

000

<210> 5459

<400> 5459

000

<210> 5460

<400> 5460

000

<210> 5461

<400> 5461

000

<210> 5462

<400> 5462

000

<210> 5463

<400> 5463

000

<210> 5464

<400> 5464

000

<210> 5465

<400> 5465

000

<210> 5466

<400> 5466

000

<210> 5467

<400> 5467

000

<210> 5468

<400> 5468

000

<210> 5469

<400> 5469

000

<210> 5470

<400> 5470

000

<210> 5471

<400> 5471

000

<210> 5472

<400> 5472

000

<210> 5473

<400> 5473

000

<210> 5474

<400> 5474

000

<210> 5475

<400> 5475

000

<210> 5476

<400> 5476

000

<210> 5477

<400> 5477

000

<210> 5478

<400> 5478

000

<210> 5479

<400> 5479

000

<210> 5480

<400> 5480

000

<210> 5481

<400> 5481

000

<210> 5482

<400> 5482

000

<210> 5483

<400> 5483

000

<210> 5484

<400> 5484

000

<210> 5485

<400> 5485

000

<210> 5486

<400> 5486

000

<210> 5487

<400> 5487

000

<210> 5488

<400> 5488

000

<210> 5489

<400> 5489

000

<210> 5490

<400> 5490

000

<210> 5491

<400> 5491

000

<210> 5492

<400> 5492

000

<210> 5493

<400> 5493

000

<210> 5494

<400> 5494

000

<210> 5495

<400> 5495

000

<210> 5496

<400> 5496

000

<210> 5497

<400> 5497

000

<210> 5498

<400> 5498

000

<210> 5499

<400> 5499

000

<210> 5500

<400> 5500

000

<210> 5501

<400> 5501

000

<210> 5502

<400> 5502

000

<210> 5503

<400> 5503

000

<210> 5504

<400> 5504

000

<210> 5505

<400> 5505

000

<210> 5506

<400> 5506

000

<210> 5507

<400> 5507

000

<210> 5508

<400> 5508

000

<210> 5509

<400> 5509

000

<210> 5510

<400> 5510

000

<210> 5511

<400> 5511

000

<210> 5512

<400> 5512

000

<210> 5513

<400> 5513

000

<210> 5514

<400> 5514

000

<210> 5515

<400> 5515

000

<210> 5516

<400> 5516

000

<210> 5517

<400> 5517

000

<210> 5518

<400> 5518

000

<210> 5519

<400> 5519

000

<210> 5520

<400> 5520

000

<210> 5521

<400> 5521

000

<210> 5522

<400> 5522

000

<210> 5523

<400> 5523

000

<210> 5524

<400> 5524

000

<210> 5525

<400> 5525

000

<210> 5526

<400> 5526

000

<210> 5527

<400> 5527

000

<210> 5528

<400> 5528

000

<210> 5529

<400> 5529

000

<210> 5530

<400> 5530

000

<210> 5531

<400> 5531

000

<210> 5532

<400> 5532

000

<210> 5533

<400> 5533

000

<210> 5534

<400> 5534

000

<210> 5535

<400> 5535

000

<210> 5536

<400> 5536

000

<210> 5537

<400> 5537

000

<210> 5538

<400> 5538

000

<210> 5539

<400> 5539

000

<210> 5540

<400> 5540

000

<210> 5541

<400> 5541

000

<210> 5542

<400> 5542

000

<210> 5543

<400> 5543

000

<210> 5544

<400> 5544

000

<210> 5545

<400> 5545

000

<210> 5546

<400> 5546

000

<210> 5547

<400> 5547

000

<210> 5548

<400> 5548

000

<210> 5549

<400> 5549

000

<210> 5550

<400> 5550

000

<210> 5551

<400> 5551

000

<210> 5552

<400> 5552

000

<210> 5553

<400> 5553

000

<210> 5554

<400> 5554

000

<210> 5555

<400> 5555

000

<210> 5556

<400> 5556

000

<210> 5557

<400> 5557

000

<210> 5558

<400> 5558

000

<210> 5559

<400> 5559

000

<210> 5560

<400> 5560

000

<210> 5561

<400> 5561

000

<210> 5562

<400> 5562

000

<210> 5563

<400> 5563

000

<210> 5564

<400> 5564

000

<210> 5565

<400> 5565

000

<210> 5566

<400> 5566

000

<210> 5567

<400> 5567

000

<210> 5568

<400> 5568

000

<210> 5569

<400> 5569

000

<210> 5570

<400> 5570

000

<210> 5571

<400> 5571

000

<210> 5572

<400> 5572

000

<210> 5573

<400> 5573

000

<210> 5574

<400> 5574

000

<210> 5575

<400> 5575

000

<210> 5576

<400> 5576

000

<210> 5577

<400> 5577

000

<210> 5578

<400> 5578

000

<210> 5579

<400> 5579

000

<210> 5580

<400> 5580

000

<210> 5581

<400> 5581

000

<210> 5582

<400> 5582

000

<210> 5583

<400> 5583

000

<210> 5584

<400> 5584

000

<210> 5585

<400> 5585

000

<210> 5586

<400> 5586

000

<210> 5587

<400> 5587

000

<210> 5588

<400> 5588

000

<210> 5589

<400> 5589

000

<210> 5590

<400> 5590

000

<210> 5591

<400> 5591

000

<210> 5592

<400> 5592

000

<210> 5593

<400> 5593

000

<210> 5594

<400> 5594

000

<210> 5595

<400> 5595

000

<210> 5596

<400> 5596

000

<210> 5597

<400> 5597

000

<210> 5598

<400> 5598

000

<210> 5599

<400> 5599

000

<210> 5600

<400> 5600

000

<210> 5601

<400> 5601

000

<210> 5602

<400> 5602

000

<210> 5603

<400> 5603

000

<210> 5604

<400> 5604

000

<210> 5605

<400> 5605

000

<210> 5606

<400> 5606

000

<210> 5607

<400> 5607

000

<210> 5608

<400> 5608

000

<210> 5609

<400> 5609

000

<210> 5610

<400> 5610

000

<210> 5611

<400> 5611

000

<210> 5612

<400> 5612

000

<210> 5613

<400> 5613

000

<210> 5614

<400> 5614

000

<210> 5615

<400> 5615

000

<210> 5616

<400> 5616

000

<210> 5617

<400> 5617

000

<210> 5618

<400> 5618

000

<210> 5619

<400> 5619

000

<210> 5620

<400> 5620

000

<210> 5621

<400> 5621

000

<210> 5622

<400> 5622

000

<210> 5623

<400> 5623

000

<210> 5624

<400> 5624

000

<210> 5625

<400> 5625

000

<210> 5626

<400> 5626

000

<210> 5627

<400> 5627

000

<210> 5628

<400> 5628

000

<210> 5629

<400> 5629

000

<210> 5630

<400> 5630

000

<210> 5631

<400> 5631

000

<210> 5632

<400> 5632

000

<210> 5633

<400> 5633

000

<210> 5634

<400> 5634

000

<210> 5635

<400> 5635

000

<210> 5636

<400> 5636

000

<210> 5637

<400> 5637

000

<210> 5638

<400> 5638

000

<210> 5639

<400> 5639

000

<210> 5640

<400> 5640

000

<210> 5641

<400> 5641

000

<210> 5642

<400> 5642

000

<210> 5643

<400> 5643

000

<210> 5644

<400> 5644

000

<210> 5645

<400> 5645

000

<210> 5646

<400> 5646

000

<210> 5647

<400> 5647

000

<210> 5648

<400> 5648

000

<210> 5649

<400> 5649

000

<210> 5650

<400> 5650

000

<210> 5651

<400> 5651

000

<210> 5652

<400> 5652

000

<210> 5653

<400> 5653

000

<210> 5654

<400> 5654

000

<210> 5655

<400> 5655

000

<210> 5656

<400> 5656

000

<210> 5657

<400> 5657

000

<210> 5658

<400> 5658

000

<210> 5659

<400> 5659

000

<210> 5660

<400> 5660

000

<210> 5661

<400> 5661

000

<210> 5662

<400> 5662

000

<210> 5663

<400> 5663

000

<210> 5664

<400> 5664

000

<210> 5665

<400> 5665

000

<210> 5666

<400> 5666

000

<210> 5667

<400> 5667

000

<210> 5668

<400> 5668

000

<210> 5669

<400> 5669

000

<210> 5670

<400> 5670

000

<210> 5671

<400> 5671

000

<210> 5672

<400> 5672

000

<210> 5673

<400> 5673

000

<210> 5674

<400> 5674

000

<210> 5675

<400> 5675

000

<210> 5676

<400> 5676

000

<210> 5677

<400> 5677

000

<210> 5678

<400> 5678

000

<210> 5679

<400> 5679

000

<210> 5680

<400> 5680

000

<210> 5681

<400> 5681

000

<210> 5682

<400> 5682

000

<210> 5683

<400> 5683

000

<210> 5684

<400> 5684

000

<210> 5685

<400> 5685

000

<210> 5686

<400> 5686

000

<210> 5687

<400> 5687

000

<210> 5688

<400> 5688

000

<210> 5689

<400> 5689

000

<210> 5690

<400> 5690

000

<210> 5691

<400> 5691

000

<210> 5692

<400> 5692

000

<210> 5693

<400> 5693

000

<210> 5694

<400> 5694

000

<210> 5695

<400> 5695

000

<210> 5696

<400> 5696

000

<210> 5697

<400> 5697

000

<210> 5698

<400> 5698

000

<210> 5699

<400> 5699

000

<210> 5700

<400> 5700

000

<210> 5701

<400> 5701

000

<210> 5702

<400> 5702

000

<210> 5703

<400> 5703

000

<210> 5704

<400> 5704

000

<210> 5705

<400> 5705

000

<210> 5706

<400> 5706

000

<210> 5707

<400> 5707

000

<210> 5708

<400> 5708

000

<210> 5709

<400> 5709

000

<210> 5710

<400> 5710

000

<210> 5711

<400> 5711

000

<210> 5712

<400> 5712

000

<210> 5713

<400> 5713

000

<210> 5714

<400> 5714

000

<210> 5715

<400> 5715

000

<210> 5716

<400> 5716

000

<210> 5717

<400> 5717

000

<210> 5718

<400> 5718

000

<210> 5719

<400> 5719

000

<210> 5720

<400> 5720

000

<210> 5721

<400> 5721

000

<210> 5722

<400> 5722

000

<210> 5723

<400> 5723

000

<210> 5724

<400> 5724

000

<210> 5725

<400> 5725

000

<210> 5726

<400> 5726

000

<210> 5727

<400> 5727

000

<210> 5728

<400> 5728

000

<210> 5729

<400> 5729

000

<210> 5730

<400> 5730

000

<210> 5731

<400> 5731

000

<210> 5732

<400> 5732

000

<210> 5733

<400> 5733

000

<210> 5734

<400> 5734

000

<210> 5735

<400> 5735

000

<210> 5736

<400> 5736

000

<210> 5737

<400> 5737

000

<210> 5738

<400> 5738

000

<210> 5739

<400> 5739

000

<210> 5740

<400> 5740

000

<210> 5741

<400> 5741

000

<210> 5742

<400> 5742

000

<210> 5743

<400> 5743

000

<210> 5744

<400> 5744

000

<210> 5745

<400> 5745

000

<210> 5746

<400> 5746

000

<210> 5747

<400> 5747

000

<210> 5748

<400> 5748

000

<210> 5749

<400> 5749

000

<210> 5750

<400> 5750

000

<210> 5751

<400> 5751

000

<210> 5752

<400> 5752

000

<210> 5753

<400> 5753

000

<210> 5754

<400> 5754

000

<210> 5755

<400> 5755

000

<210> 5756

<400> 5756

000

<210> 5757

<400> 5757

000

<210> 5758

<400> 5758

000

<210> 5759

<400> 5759

000

<210> 5760

<400> 5760

000

<210> 5761

<400> 5761

000

<210> 5762

<400> 5762

000

<210> 5763

<400> 5763

000

<210> 5764

<400> 5764

000

<210> 5765

<400> 5765

000

<210> 5766

<400> 5766

000

<210> 5767

<400> 5767

000

<210> 5768

<400> 5768

000

<210> 5769

<400> 5769

000

<210> 5770

<400> 5770

000

<210> 5771

<400> 5771

000

<210> 5772

<400> 5772

000

<210> 5773

<400> 5773

000

<210> 5774

<400> 5774

000

<210> 5775

<400> 5775

000

<210> 5776

<400> 5776

000

<210> 5777

<400> 5777

000

<210> 5778

<400> 5778

000

<210> 5779

<400> 5779

000

<210> 5780

<400> 5780

000

<210> 5781

<400> 5781

000

<210> 5782

<400> 5782

000

<210> 5783

<400> 5783

000

<210> 5784

<400> 5784

000

<210> 5785

<400> 5785

000

<210> 5786

<400> 5786

000

<210> 5787

<400> 5787

000

<210> 5788

<400> 5788

000

<210> 5789

<400> 5789

000

<210> 5790

<400> 5790

000

<210> 5791

<400> 5791

000

<210> 5792

<400> 5792

000

<210> 5793

<400> 5793

000

<210> 5794

<400> 5794

000

<210> 5795

<400> 5795

000

<210> 5796

<400> 5796

000

<210> 5797

<400> 5797

000

<210> 5798

<400> 5798

000

<210> 5799

<400> 5799

000

<210> 5800

<400> 5800

000

<210> 5801

<400> 5801

000

<210> 5802

<400> 5802

000

<210> 5803

<400> 5803

000

<210> 5804

<400> 5804

000

<210> 5805

<400> 5805

000

<210> 5806

<400> 5806

000

<210> 5807

<400> 5807

000

<210> 5808

<400> 5808

000

<210> 5809

<400> 5809

000

<210> 5810

<400> 5810

000

<210> 5811

<400> 5811

000

<210> 5812

<400> 5812

000

<210> 5813

<400> 5813

000

<210> 5814

<400> 5814

000

<210> 5815

<400> 5815

000

<210> 5816

<400> 5816

000

<210> 5817

<400> 5817

000

<210> 5818

<400> 5818

000

<210> 5819

<400> 5819

000

<210> 5820

<400> 5820

000

<210> 5821

<400> 5821

000

<210> 5822

<400> 5822

000

<210> 5823

<400> 5823

000

<210> 5824

<400> 5824

000

<210> 5825

<400> 5825

000

<210> 5826

<400> 5826

000

<210> 5827

<400> 5827

000

<210> 5828

<400> 5828

000

<210> 5829

<400> 5829

000

<210> 5830

<400> 5830

000

<210> 5831

<400> 5831

000

<210> 5832

<400> 5832

000

<210> 5833

<400> 5833

000

<210> 5834

<400> 5834

000

<210> 5835

<400> 5835

000

<210> 5836

<400> 5836

000

<210> 5837

<400> 5837

000

<210> 5838

<400> 5838

000

<210> 5839

<400> 5839

000

<210> 5840

<400> 5840

000

<210> 5841

<400> 5841

000

<210> 5842

<400> 5842

000

<210> 5843

<400> 5843

000

<210> 5844

<400> 5844

000

<210> 5845

<400> 5845

000

<210> 5846

<400> 5846

000

<210> 5847

<400> 5847

000

<210> 5848

<400> 5848

000

<210> 5849

<400> 5849

000

<210> 5850

<400> 5850

000

<210> 5851

<400> 5851

000

<210> 5852

<400> 5852

000

<210> 5853

<400> 5853

000

<210> 5854

<400> 5854

000

<210> 5855

<400> 5855

000

<210> 5856

<400> 5856

000

<210> 5857

<400> 5857

000

<210> 5858

<400> 5858

000

<210> 5859

<400> 5859

000

<210> 5860

<400> 5860

000

<210> 5861

<400> 5861

000

<210> 5862

<400> 5862

000

<210> 5863

<400> 5863

000

<210> 5864

<400> 5864

000

<210> 5865

<400> 5865

000

<210> 5866

<400> 5866

000

<210> 5867

<400> 5867

000

<210> 5868

<400> 5868

000

<210> 5869

<400> 5869

000

<210> 5870

<400> 5870

000

<210> 5871

<400> 5871

000

<210> 5872

<400> 5872

000

<210> 5873

<400> 5873

000

<210> 5874

<400> 5874

000

<210> 5875

<400> 5875

000

<210> 5876

<400> 5876

000

<210> 5877

<400> 5877

000

<210> 5878

<400> 5878

000

<210> 5879

<400> 5879

000

<210> 5880

<400> 5880

000

<210> 5881

<400> 5881

000

<210> 5882

<400> 5882

000

<210> 5883

<400> 5883

000

<210> 5884

<400> 5884

000

<210> 5885

<400> 5885

000

<210> 5886

<400> 5886

000

<210> 5887

<400> 5887

000

<210> 5888

<400> 5888

000

<210> 5889

<400> 5889

000

<210> 5890

<400> 5890

000

<210> 5891

<400> 5891

000

<210> 5892

<400> 5892

000

<210> 5893

<400> 5893

000

<210> 5894

<400> 5894

000

<210> 5895

<400> 5895

000

<210> 5896

<400> 5896

000

<210> 5897

<400> 5897

000

<210> 5898

<400> 5898

000

<210> 5899

<400> 5899

000

<210> 5900

<400> 5900

000

<210> 5901

<400> 5901

000

<210> 5902

<400> 5902

000

<210> 5903

<400> 5903

000

<210> 5904

<400> 5904

000

<210> 5905

<400> 5905

000

<210> 5906

<400> 5906

000

<210> 5907

<400> 5907

000

<210> 5908

<400> 5908

000

<210> 5909

<400> 5909

000

<210> 5910

<400> 5910

000

<210> 5911

<400> 5911

000

<210> 5912

<400> 5912

000

<210> 5913

<400> 5913

000

<210> 5914

<400> 5914

000

<210> 5915

<400> 5915

000

<210> 5916

<400> 5916

000

<210> 5917

<400> 5917

000

<210> 5918

<400> 5918

000

<210> 5919

<400> 5919

000

<210> 5920

<400> 5920

000

<210> 5921

<400> 5921

000

<210> 5922

<400> 5922

000

<210> 5923

<400> 5923

000

<210> 5924

<400> 5924

000

<210> 5925

<400> 5925

000

<210> 5926

<400> 5926

000

<210> 5927

<400> 5927

000

<210> 5928

<400> 5928

000

<210> 5929

<400> 5929

000

<210> 5930

<400> 5930

000

<210> 5931

<400> 5931

000

<210> 5932

<400> 5932

000

<210> 5933

<400> 5933

000

<210> 5934

<400> 5934

000

<210> 5935

<400> 5935

000

<210> 5936

<400> 5936

000

<210> 5937

<400> 5937

000

<210> 5938

<400> 5938

000

<210> 5939

<400> 5939

000

<210> 5940

<400> 5940

000

<210> 5941

<400> 5941

000

<210> 5942

<400> 5942

000

<210> 5943

<400> 5943

000

<210> 5944

<400> 5944

000

<210> 5945

<400> 5945

000

<210> 5946

<400> 5946

000

<210> 5947

<400> 5947

000

<210> 5948

<400> 5948

000

<210> 5949

<400> 5949

000

<210> 5950

<400> 5950

000

<210> 5951

<400> 5951

000

<210> 5952

<400> 5952

000

<210> 5953

<400> 5953

000

<210> 5954

<400> 5954

000

<210> 5955

<400> 5955

000

<210> 5956

<400> 5956

000

<210> 5957

<400> 5957

000

<210> 5958

<400> 5958

000

<210> 5959

<400> 5959

000

<210> 5960

<400> 5960

000

<210> 5961

<400> 5961

000

<210> 5962

<400> 5962

000

<210> 5963

<400> 5963

000

<210> 5964

<400> 5964

000

<210> 5965

<400> 5965

000

<210> 5966

<400> 5966

000

<210> 5967

<400> 5967

000

<210> 5968

<400> 5968

000

<210> 5969

<400> 5969

000

<210> 5970

<400> 5970

000

<210> 5971

<400> 5971

000

<210> 5972

<400> 5972

000

<210> 5973

<400> 5973

000

<210> 5974

<400> 5974

000

<210> 5975

<400> 5975

000

<210> 5976

<400> 5976

000

<210> 5977

<400> 5977

000

<210> 5978

<400> 5978

000

<210> 5979

<400> 5979

000

<210> 5980

<400> 5980

000

<210> 5981

<400> 5981

000

<210> 5982

<400> 5982

000

<210> 5983

<400> 5983

000

<210> 5984

<400> 5984

000

<210> 5985

<400> 5985

000

<210> 5986

<400> 5986

000

<210> 5987

<400> 5987

000

<210> 5988

<400> 5988

000

<210> 5989

<400> 5989

000

<210> 5990

<400> 5990

000

<210> 5991

<400> 5991

000

<210> 5992

<400> 5992

000

<210> 5993

<400> 5993

000

<210> 5994

<400> 5994

000

<210> 5995

<400> 5995

000

<210> 5996

<400> 5996

000

<210> 5997

<400> 5997

000

<210> 5998

<400> 5998

000

<210> 5999

<400> 5999

000

<210> 6000

<400> 6000

000

<210> 6001

<400> 6001

000

<210> 6002

<400> 6002

000

<210> 6003

<400> 6003

000

<210> 6004

<400> 6004

000

<210> 6005

<400> 6005

000

<210> 6006

<400> 6006

000

<210> 6007

<400> 6007

000

<210> 6008

<400> 6008

000

<210> 6009

<400> 6009

000

<210> 6010

<400> 6010

000

<210> 6011

<400> 6011

000

<210> 6012

<400> 6012

000

<210> 6013

<400> 6013

000

<210> 6014

<400> 6014

000

<210> 6015

<400> 6015

000

<210> 6016

<400> 6016

000

<210> 6017

<400> 6017

000

<210> 6018

<400> 6018

000

<210> 6019

<400> 6019

000

<210> 6020

<400> 6020

000

<210> 6021

<400> 6021

000

<210> 6022

<400> 6022

000

<210> 6023

<400> 6023

000

<210> 6024

<400> 6024

000

<210> 6025

<400> 6025

000

<210> 6026

<400> 6026

000

<210> 6027

<400> 6027

000

<210> 6028

<400> 6028

000

<210> 6029

<400> 6029

000

<210> 6030

<400> 6030

000

<210> 6031

<400> 6031

000

<210> 6032

<400> 6032

000

<210> 6033

<400> 6033

000

<210> 6034

<400> 6034

000

<210> 6035

<400> 6035

000

<210> 6036

<400> 6036

000

<210> 6037

<400> 6037

000

<210> 6038

<400> 6038

000

<210> 6039

<400> 6039

000

<210> 6040

<400> 6040

000

<210> 6041

<400> 6041

000

<210> 6042

<400> 6042

000

<210> 6043

<400> 6043

000

<210> 6044

<400> 6044

000

<210> 6045

<400> 6045

000

<210> 6046

<400> 6046

000

<210> 6047

<400> 6047

000

<210> 6048

<400> 6048

000

<210> 6049

<400> 6049

000

<210> 6050

<400> 6050

000

<210> 6051

<400> 6051

000

<210> 6052

<400> 6052

000

<210> 6053

<400> 6053

000

<210> 6054

<400> 6054

000

<210> 6055

<400> 6055

000

<210> 6056

<400> 6056

000

<210> 6057

<400> 6057

000

<210> 6058

<400> 6058

000

<210> 6059

<400> 6059

000

<210> 6060

<400> 6060

000

<210> 6061

<400> 6061

000

<210> 6062

<400> 6062

000

<210> 6063

<400> 6063

000

<210> 6064

<400> 6064

000

<210> 6065

<400> 6065

000

<210> 6066

<400> 6066

000

<210> 6067

<400> 6067

000

<210> 6068

<400> 6068

000

<210> 6069

<400> 6069

000

<210> 6070

<400> 6070

000

<210> 6071

<400> 6071

000

<210> 6072

<400> 6072

000

<210> 6073

<400> 6073

000

<210> 6074

<400> 6074

000

<210> 6075

<400> 6075

000

<210> 6076

<400> 6076

000

<210> 6077

<400> 6077

000

<210> 6078

<400> 6078

000

<210> 6079

<400> 6079

000

<210> 6080

<400> 6080

000

<210> 6081

<400> 6081

000

<210> 6082

<400> 6082

000

<210> 6083

<400> 6083

000

<210> 6084

<400> 6084

000

<210> 6085

<400> 6085

000

<210> 6086

<400> 6086

000

<210> 6087

<400> 6087

000

<210> 6088

<400> 6088

000

<210> 6089

<400> 6089

000

<210> 6090

<400> 6090

000

<210> 6091

<400> 6091

000

<210> 6092

<400> 6092

000

<210> 6093

<400> 6093

000

<210> 6094

<400> 6094

000

<210> 6095

<400> 6095

000

<210> 6096

<400> 6096

000

<210> 6097

<400> 6097

000

<210> 6098

<400> 6098

000

<210> 6099

<400> 6099

000

<210> 6100

<400> 6100

000

<210> 6101

<400> 6101

000

<210> 6102

<400> 6102

000

<210> 6103

<400> 6103

000

<210> 6104

<400> 6104

000

<210> 6105

<400> 6105

000

<210> 6106

<400> 6106

000

<210> 6107

<400> 6107

000

<210> 6108

<400> 6108

000

<210> 6109

<400> 6109

000

<210> 6110

<400> 6110

000

<210> 6111

<400> 6111

000

<210> 6112

<400> 6112

000

<210> 6113

<400> 6113

000

<210> 6114

<400> 6114

000

<210> 6115

<400> 6115

000

<210> 6116

<400> 6116

000

<210> 6117

<400> 6117

000

<210> 6118

<400> 6118

000

<210> 6119

<400> 6119

000

<210> 6120

<400> 6120

000

<210> 6121

<400> 6121

000

<210> 6122

<400> 6122

000

<210> 6123

<400> 6123

000

<210> 6124

<400> 6124

000

<210> 6125

<400> 6125

000

<210> 6126

<400> 6126

000

<210> 6127

<400> 6127

000

<210> 6128

<400> 6128

000

<210> 6129

<400> 6129

000

<210> 6130

<400> 6130

000

<210> 6131

<400> 6131

000

<210> 6132

<400> 6132

000

<210> 6133

<400> 6133

000

<210> 6134

<400> 6134

000

<210> 6135

<400> 6135

000

<210> 6136

<400> 6136

000

<210> 6137

<400> 6137

000

<210> 6138

<400> 6138

000

<210> 6139

<400> 6139

000

<210> 6140

<400> 6140

000

<210> 6141

<400> 6141

000

<210> 6142

<400> 6142

000

<210> 6143

<400> 6143

000

<210> 6144

<400> 6144

000

<210> 6145

<400> 6145

000

<210> 6146

<400> 6146

000

<210> 6147

<400> 6147

000

<210> 6148

<400> 6148

000

<210> 6149

<400> 6149

000

<210> 6150

<400> 6150

000

<210> 6151

<400> 6151

000

<210> 6152

<400> 6152

000

<210> 6153

<400> 6153

000

<210> 6154

<400> 6154

000

<210> 6155

<400> 6155

000

<210> 6156

<400> 6156

000

<210> 6157

<400> 6157

000

<210> 6158

<400> 6158

000

<210> 6159

<400> 6159

000

<210> 6160

<400> 6160

000

<210> 6161

<400> 6161

000

<210> 6162

<400> 6162

000

<210> 6163

<400> 6163

000

<210> 6164

<400> 6164

000

<210> 6165

<400> 6165

000

<210> 6166

<400> 6166

000

<210> 6167

<400> 6167

000

<210> 6168

<400> 6168

000

<210> 6169

<400> 6169

000

<210> 6170

<400> 6170

000

<210> 6171

<400> 6171

000

<210> 6172

<400> 6172

000

<210> 6173

<400> 6173

000

<210> 6174

<400> 6174

000

<210> 6175

<400> 6175

000

<210> 6176

<400> 6176

000

<210> 6177

<400> 6177

000

<210> 6178

<400> 6178

000

<210> 6179

<400> 6179

000

<210> 6180

<400> 6180

000

<210> 6181

<400> 6181

000

<210> 6182

<400> 6182

000

<210> 6183

<400> 6183

000

<210> 6184

<400> 6184

000

<210> 6185

<400> 6185

000

<210> 6186

<400> 6186

000

<210> 6187

<400> 6187

000

<210> 6188

<400> 6188

000

<210> 6189

<400> 6189

000

<210> 6190

<400> 6190

000

<210> 6191

<400> 6191

000

<210> 6192

<400> 6192

000

<210> 6193

<400> 6193

000

<210> 6194

<400> 6194

000

<210> 6195

<400> 6195

000

<210> 6196

<400> 6196

000

<210> 6197

<400> 6197

000

<210> 6198

<400> 6198

000

<210> 6199

<400> 6199

000

<210> 6200

<400> 6200

000

<210> 6201

<400> 6201

000

<210> 6202

<400> 6202

000

<210> 6203

<400> 6203

000

<210> 6204

<400> 6204

000

<210> 6205

<400> 6205

000

<210> 6206

<400> 6206

000

<210> 6207

<400> 6207

000

<210> 6208

<400> 6208

000

<210> 6209

<400> 6209

000

<210> 6210

<400> 6210

000

<210> 6211

<400> 6211

000

<210> 6212

<400> 6212

000

<210> 6213

<400> 6213

000

<210> 6214

<400> 6214

000

<210> 6215

<400> 6215

000

<210> 6216

<400> 6216

000

<210> 6217

<400> 6217

000

<210> 6218

<400> 6218

000

<210> 6219

<400> 6219

000

<210> 6220

<400> 6220

000

<210> 6221

<400> 6221

000

<210> 6222

<400> 6222

000

<210> 6223

<400> 6223

000

<210> 6224

<400> 6224

000

<210> 6225

<400> 6225

000

<210> 6226

<400> 6226

000

<210> 6227

<400> 6227

000

<210> 6228

<400> 6228

000

<210> 6229

<400> 6229

000

<210> 6230

<400> 6230

000

<210> 6231

<400> 6231

000

<210> 6232

<400> 6232

000

<210> 6233

<400> 6233

000

<210> 6234

<400> 6234

000

<210> 6235

<400> 6235

000

<210> 6236

<400> 6236

000

<210> 6237

<400> 6237

000

<210> 6238

<400> 6238

000

<210> 6239

<400> 6239

000

<210> 6240

<400> 6240

000

<210> 6241

<400> 6241

000

<210> 6242

<400> 6242

000

<210> 6243

<400> 6243

000

<210> 6244

<400> 6244

000

<210> 6245

<400> 6245

000

<210> 6246

<400> 6246

000

<210> 6247

<400> 6247

000

<210> 6248

<400> 6248

000

<210> 6249

<400> 6249

000

<210> 6250

<400> 6250

000

<210> 6251

<400> 6251

000

<210> 6252

<400> 6252

000

<210> 6253

<400> 6253

000

<210> 6254

<400> 6254

000

<210> 6255

<400> 6255

000

<210> 6256

<400> 6256

000

<210> 6257

<400> 6257

000

<210> 6258

<400> 6258

000

<210> 6259

<400> 6259

000

<210> 6260

<400> 6260

000

<210> 6261

<400> 6261

000

<210> 6262

<400> 6262

000

<210> 6263

<400> 6263

000

<210> 6264

<400> 6264

000

<210> 6265

<400> 6265

000

<210> 6266

<400> 6266

000

<210> 6267

<400> 6267

000

<210> 6268

<400> 6268

000

<210> 6269

<400> 6269

000

<210> 6270

<400> 6270

000

<210> 6271

<400> 6271

000

<210> 6272

<400> 6272

000

<210> 6273

<400> 6273

000

<210> 6274

<400> 6274

000

<210> 6275

<400> 6275

000

<210> 6276

<400> 6276

000

<210> 6277

<400> 6277

000

<210> 6278

<400> 6278

000

<210> 6279

<400> 6279

000

<210> 6280

<400> 6280

000

<210> 6281

<400> 6281

000

<210> 6282

<400> 6282

000

<210> 6283

<400> 6283

000

<210> 6284

<400> 6284

000

<210> 6285

<400> 6285

000

<210> 6286

<400> 6286

000

<210> 6287

<400> 6287

000

<210> 6288

<400> 6288

000

<210> 6289

<400> 6289

000

<210> 6290

<400> 6290

000

<210> 6291

<400> 6291

000

<210> 6292

<400> 6292

000

<210> 6293

<400> 6293

000

<210> 6294

<400> 6294

000

<210> 6295

<400> 6295

000

<210> 6296

<400> 6296

000

<210> 6297

<400> 6297

000

<210> 6298

<400> 6298

000

<210> 6299

<400> 6299

000

<210> 6300

<400> 6300

000

<210> 6301

<400> 6301

000

<210> 6302

<400> 6302

000

<210> 6303

<400> 6303

000

<210> 6304

<400> 6304

000

<210> 6305

<400> 6305

000

<210> 6306

<400> 6306

000

<210> 6307

<400> 6307

000

<210> 6308

<400> 6308

000

<210> 6309

<400> 6309

000

<210> 6310

<400> 6310

000

<210> 6311

<400> 6311

000

<210> 6312

<400> 6312

000

<210> 6313

<400> 6313

000

<210> 6314

<400> 6314

000

<210> 6315

<400> 6315

000

<210> 6316

<400> 6316

000

<210> 6317

<400> 6317

000

<210> 6318

<400> 6318

000

<210> 6319

<400> 6319

000

<210> 6320

<400> 6320

000

<210> 6321

<400> 6321

000

<210> 6322

<400> 6322

000

<210> 6323

<400> 6323

000

<210> 6324

<400> 6324

000

<210> 6325

<400> 6325

000

<210> 6326

<400> 6326

000

<210> 6327

<400> 6327

000

<210> 6328

<400> 6328

000

<210> 6329

<400> 6329

000

<210> 6330

<400> 6330

000

<210> 6331

<400> 6331

000

<210> 6332

<400> 6332

000

<210> 6333

<400> 6333

000

<210> 6334

<400> 6334

000

<210> 6335

<400> 6335

000

<210> 6336

<400> 6336

000

<210> 6337

<400> 6337

000

<210> 6338

<400> 6338

000

<210> 6339

<400> 6339

000

<210> 6340

<400> 6340

000

<210> 6341

<400> 6341

000

<210> 6342

<400> 6342

000

<210> 6343

<400> 6343

000

<210> 6344

<400> 6344

000

<210> 6345

<400> 6345

000

<210> 6346

<400> 6346

000

<210> 6347

<400> 6347

000

<210> 6348

<400> 6348

000

<210> 6349

<400> 6349

000

<210> 6350

<400> 6350

000

<210> 6351

<400> 6351

000

<210> 6352

<400> 6352

000

<210> 6353

<400> 6353

000

<210> 6354

<400> 6354

000

<210> 6355

<400> 6355

000

<210> 6356

<400> 6356

000

<210> 6357

<400> 6357

000

<210> 6358

<400> 6358

000

<210> 6359

<400> 6359

000

<210> 6360

<400> 6360

000

<210> 6361

<400> 6361

000

<210> 6362

<400> 6362

000

<210> 6363

<400> 6363

000

<210> 6364

<400> 6364

000

<210> 6365

<400> 6365

000

<210> 6366

<400> 6366

000

<210> 6367

<400> 6367

000

<210> 6368

<400> 6368

000

<210> 6369

<400> 6369

000

<210> 6370

<400> 6370

000

<210> 6371

<400> 6371

000

<210> 6372

<400> 6372

000

<210> 6373

<400> 6373

000

<210> 6374

<400> 6374

000

<210> 6375

<400> 6375

000

<210> 6376

<400> 6376

000

<210> 6377

<400> 6377

000

<210> 6378

<400> 6378

000

<210> 6379

<400> 6379

000

<210> 6380

<400> 6380

000

<210> 6381

<400> 6381

000

<210> 6382

<400> 6382

000

<210> 6383

<400> 6383

000

<210> 6384

<400> 6384

000

<210> 6385

<400> 6385

000

<210> 6386

<400> 6386

000

<210> 6387

<400> 6387

000

<210> 6388

<400> 6388

000

<210> 6389

<400> 6389

000

<210> 6390

<400> 6390

000

<210> 6391

<400> 6391

000

<210> 6392

<400> 6392

000

<210> 6393

<400> 6393

000

<210> 6394

<400> 6394

000

<210> 6395

<400> 6395

000

<210> 6396

<400> 6396

000

<210> 6397

<400> 6397

000

<210> 6398

<400> 6398

000

<210> 6399

<400> 6399

000

<210> 6400

<400> 6400

000

<210> 6401

<400> 6401

000

<210> 6402

<400> 6402

000

<210> 6403

<400> 6403

000

<210> 6404

<400> 6404

000

<210> 6405

<400> 6405

000

<210> 6406

<400> 6406

000

<210> 6407

<400> 6407

000

<210> 6408

<400> 6408

000

<210> 6409

<400> 6409

000

<210> 6410

<400> 6410

000

<210> 6411

<400> 6411

000

<210> 6412

<400> 6412

000

<210> 6413

<400> 6413

000

<210> 6414

<400> 6414

000

<210> 6415

<400> 6415

000

<210> 6416

<400> 6416

000

<210> 6417

<400> 6417

000

<210> 6418

<400> 6418

000

<210> 6419

<400> 6419

000

<210> 6420

<400> 6420

000

<210> 6421

<400> 6421

000

<210> 6422

<400> 6422

000

<210> 6423

<400> 6423

000

<210> 6424

<400> 6424

000

<210> 6425

<400> 6425

000

<210> 6426

<400> 6426

000

<210> 6427

<400> 6427

000

<210> 6428

<400> 6428

000

<210> 6429

<400> 6429

000

<210> 6430

<400> 6430

000

<210> 6431

<400> 6431

000

<210> 6432

<400> 6432

000

<210> 6433

<400> 6433

000

<210> 6434

<400> 6434

000

<210> 6435

<400> 6435

000

<210> 6436

<400> 6436

000

<210> 6437

<400> 6437

000

<210> 6438

<400> 6438

000

<210> 6439

<400> 6439

000

<210> 6440

<400> 6440

000

<210> 6441

<400> 6441

000

<210> 6442

<400> 6442

000

<210> 6443

<400> 6443

000

<210> 6444

<400> 6444

000

<210> 6445

<400> 6445

000

<210> 6446

<400> 6446

000

<210> 6447

<400> 6447

000

<210> 6448

<400> 6448

000

<210> 6449

<400> 6449

000

<210> 6450

<400> 6450

000

<210> 6451

<400> 6451

000

<210> 6452

<400> 6452

000

<210> 6453

<400> 6453

000

<210> 6454

<400> 6454

000

<210> 6455

<400> 6455

000

<210> 6456

<400> 6456

000

<210> 6457

<400> 6457

000

<210> 6458

<400> 6458

000

<210> 6459

<400> 6459

000

<210> 6460

<400> 6460

000

<210> 6461

<400> 6461

000

<210> 6462

<400> 6462

000

<210> 6463

<400> 6463

000

<210> 6464

<400> 6464

000

<210> 6465

<400> 6465

000

<210> 6466

<400> 6466

000

<210> 6467

<400> 6467

000

<210> 6468

<400> 6468

000

<210> 6469

<400> 6469

000

<210> 6470

<400> 6470

000

<210> 6471

<400> 6471

000

<210> 6472

<400> 6472

000

<210> 6473

<400> 6473

000

<210> 6474

<400> 6474

000

<210> 6475

<400> 6475

000

<210> 6476

<400> 6476

000

<210> 6477

<400> 6477

000

<210> 6478

<400> 6478

000

<210> 6479

<400> 6479

000

<210> 6480

<400> 6480

000

<210> 6481

<400> 6481

000

<210> 6482

<400> 6482

000

<210> 6483

<400> 6483

000

<210> 6484

<400> 6484

000

<210> 6485

<400> 6485

000

<210> 6486

<400> 6486

000

<210> 6487

<400> 6487

000

<210> 6488

<400> 6488

000

<210> 6489

<400> 6489

000

<210> 6490

<400> 6490

000

<210> 6491

<400> 6491

000

<210> 6492

<400> 6492

000

<210> 6493

<400> 6493

000

<210> 6494

<400> 6494

000

<210> 6495

<400> 6495

000

<210> 6496

<400> 6496

000

<210> 6497

<400> 6497

000

<210> 6498

<400> 6498

000

<210> 6499

<400> 6499

000

<210> 6500

<400> 6500

000

<210> 6501

<400> 6501

000

<210> 6502

<400> 6502

000

<210> 6503

<400> 6503

000

<210> 6504

<400> 6504

000

<210> 6505

<400> 6505

000

<210> 6506

<400> 6506

000

<210> 6507

<400> 6507

000

<210> 6508

<400> 6508

000

<210> 6509

<400> 6509

000

<210> 6510

<400> 6510

000

<210> 6511

<400> 6511

000

<210> 6512

<400> 6512

000

<210> 6513

<400> 6513

000

<210> 6514

<400> 6514

000

<210> 6515

<400> 6515

000

<210> 6516

<400> 6516

000

<210> 6517

<400> 6517

000

<210> 6518

<400> 6518

000

<210> 6519

<400> 6519

000

<210> 6520

<400> 6520

000

<210> 6521

<400> 6521

000

<210> 6522

<400> 6522

000

<210> 6523

<400> 6523

000

<210> 6524

<400> 6524

000

<210> 6525

<400> 6525

000

<210> 6526

<400> 6526

000

<210> 6527

<400> 6527

000

<210> 6528

<400> 6528

000

<210> 6529

<400> 6529

000

<210> 6530

<400> 6530

000

<210> 6531

<400> 6531

000

<210> 6532

<400> 6532

000

<210> 6533

<400> 6533

000

<210> 6534

<400> 6534

000

<210> 6535

<400> 6535

000

<210> 6536

<400> 6536

000

<210> 6537

<400> 6537

000

<210> 6538

<400> 6538

000

<210> 6539

<400> 6539

000

<210> 6540

<400> 6540

000

<210> 6541

<400> 6541

000

<210> 6542

<400> 6542

000

<210> 6543

<400> 6543

000

<210> 6544

<400> 6544

000

<210> 6545

<400> 6545

000

<210> 6546

<400> 6546

000

<210> 6547

<400> 6547

000

<210> 6548

<400> 6548

000

<210> 6549

<400> 6549

000

<210> 6550

<400> 6550

000

<210> 6551

<400> 6551

000

<210> 6552

<400> 6552

000

<210> 6553

<400> 6553

000

<210> 6554

<400> 6554

000

<210> 6555

<400> 6555

000

<210> 6556

<400> 6556

000

<210> 6557

<400> 6557

000

<210> 6558

<400> 6558

000

<210> 6559

<400> 6559

000

<210> 6560

<400> 6560

000

<210> 6561

<400> 6561

000

<210> 6562

<400> 6562

000

<210> 6563

<400> 6563

000

<210> 6564

<400> 6564

000

<210> 6565

<400> 6565

000

<210> 6566

<400> 6566

000

<210> 6567

<400> 6567

000

<210> 6568

<400> 6568

000

<210> 6569

<400> 6569

000

<210> 6570

<400> 6570

000

<210> 6571

<400> 6571

000

<210> 6572

<400> 6572

000

<210> 6573

<400> 6573

000

<210> 6574

<400> 6574

000

<210> 6575

<400> 6575

000

<210> 6576

<400> 6576

000

<210> 6577

<400> 6577

000

<210> 6578

<400> 6578

000

<210> 6579

<400> 6579

000

<210> 6580

<400> 6580

000

<210> 6581

<400> 6581

000

<210> 6582

<400> 6582

000

<210> 6583

<400> 6583

000

<210> 6584

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6584

guuuuagagc ua 12

<210> 6585

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6585

guuuaagagc ua 12

<210> 6586

<211> 5

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6586

ugcug 5

<210> 6587

<211> 5

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6587

uuuug 5

<210> 6588

<211> 4

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6588

gaaa 4

<210> 6589

<211> 60

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6589

uagcaaguua aaauaaggcu aguccguuau caacuugaaa aaguggcacc gagucggugc 60

<210> 6590

<211> 60

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6590

uagcaaguuu aaauaaggcu aguccguuau caacuugaaa aaguggcacc gagucggugc 60

<210> 6591

<211> 5

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6591

cagca 5

<210> 6592

<400> 6592

000

<210> 6593

<400> 6593

000

<210> 6594

<400> 6594

000

<210> 6595

<400> 6595

000

<210> 6596

<211> 5000

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(5000)

<223> /note="This Последовательность may encompass 50-5000 nucleotides"

<400> 6596

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2160

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2220

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2340

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2460

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2520

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2580

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2640

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2700

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2760

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2820

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2880

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2940

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3000

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3060

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3120

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3240

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3300

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3420

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3480

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3660

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3900

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3960

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4020

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4140

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4320

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4380

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4500

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4560

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4680

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4800

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4920

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5000

<210> 6597

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6597

uagcaaguua aaa 13

<210> 6598

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6598

uagcaaguuu aaa 13

<210> 6599

<211> 47

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6599

uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag ucggugc 47

<210> 6600

<211> 51

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6600

uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag ucggugcuuu u 51

<210> 6601

<211> 76

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6601

guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60

ggcaccgagu cggugc 76

<210> 6602

<211> 76

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6602

guuuaagagc uagaaauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60

ggcaccgagu cggugc 76

<210> 6603

<211> 86

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6603

guuuuagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60

uugaaaaagu ggcaccgagu cggugc 86

<210> 6604

<211> 86

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6604

guuuaagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60

uugaaaaagu ggcaccgagu cggugc 86

<210> 6605

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6605

guuuuagagc uaugcug 17

<210> 6606

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6606

guuuaagagc uaugcug 17

<210> 6607

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6607

guuuuagagc uaugcuguuu ug 22

<210> 6608

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6608

guuuaagagc uaugcuguuu ug 22

<210> 6609

<211> 65

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6609

cagcauagca aguuaaaaua aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc 60

ggugc 65

<210> 6610

<211> 65

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6610

cagcauagca aguuuaaaua aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc 60

ggugc 65

<210> 6611

<211> 1368

<212> БЕЛОК

<213> Streptococcus pyogenes

<400> 6611

Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val

1 5 10 15

Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe

20 25 30

Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile

35 40 45

Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu

50 55 60

Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser

85 90 95

Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys

100 105 110

His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr

115 120 125

His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp

130 135 140

Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His

145 150 155 160

Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro

165 170 175

Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr

180 185 190

Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala

195 200 205

Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn

210 215 220

Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn

225 230 235 240

Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe

245 250 255

Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp

260 265 270

Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp

275 280 285

Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp

290 295 300

Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser

305 310 315 320

Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys

325 330 335

Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe

340 345 350

Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser

355 360 365

Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp

370 375 380

Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg

385 390 395 400

Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu

405 410 415

Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe

420 425 430

Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile

435 440 445

Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp

450 455 460

Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu

465 470 475 480

Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr

485 490 495

Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser

500 505 510

Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys

515 520 525

Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln

530 535 540

Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr

545 550 555 560

Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp

565 570 575

Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly

580 585 590

Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp

595 600 605

Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr

610 615 620

Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala

625 630 635 640

His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr

645 650 655

Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp

660 665 670

Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe

675 680 685

Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe

690 695 700

Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu

705 710 715 720

His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly

725 730 735

Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly

740 745 750

Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln

755 760 765

Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile

770 775 780

Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro

785 790 795 800

Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu

805 810 815

Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg

820 825 830

Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys

835 840 845

Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg

850 855 860

Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys

865 870 875 880

Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys

885 890 895

Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp

900 905 910

Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr

915 920 925

Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp

930 935 940

Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser

945 950 955 960

Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg

965 970 975

Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val

980 985 990

Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe

995 1000 1005

Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala

1010 1015 1020

Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe

1025 1030 1035

Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala

1040 1045 1050

Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu

1055 1060 1065

Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val

1070 1075 1080

Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr

1085 1090 1095

Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys

1100 1105 1110

Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro

1115 1120 1125

Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val

1130 1135 1140

Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys

1145 1150 1155

Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser

1160 1165 1170

Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys

1175 1180 1185

Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu

1190 1195 1200

Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly

1205 1210 1215

Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val

1220 1225 1230

Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser

1235 1240 1245

Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys

1250 1255 1260

His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys

1265 1270 1275

Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala

1280 1285 1290

Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn

1295 1300 1305

Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala

1310 1315 1320

Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser

1325 1330 1335

Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr

1340 1345 1350

Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp

1355 1360 1365

<210> 6612

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> SV40 вирус

<400> 6612

Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

1 5

<210> 6613

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

Последовательность двойного NLS-сигнала нуклеоплазмина"

<400> 6613

Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys Lys Lys

1 5 10 15

<210> 6614

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

C-myc NLS Последовательность"

<400> 6614

Pro Ala Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp

1 5

<210> 6615

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

C-myc NLS Последовательность"

<400> 6615

Arg Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Pro

1 5 10

<210> 6616

<211> 38

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 6616

Asn Gln Ser Ser Asn Phe Gly Pro Met Lys Gly Gly Asn Phe Gly Gly

1 5 10 15

Arg Ser Ser Gly Pro Tyr Gly Gly Gly Gly Gln Tyr Phe Ala Lys Pro

20 25 30

Arg Asn Gln Gly Gly Tyr

35

<210> 6617

<211> 42

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

Последовательность IBB домена импортина-альфа"

<400> 6617

Arg Met Arg Ile Glx Phe Lys Asn Lys Gly Lys Asp Thr Ala Glu Leu

1 5 10 15

Arg Arg Arg Arg Val Glu Val Ser Val Glu Leu Arg Lys Ala Lys Lys

20 25 30

Asp Glu Gln Ile Leu Lys Arg Arg Asn Val

35 40

<210> 6618

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

Myoma T белковая Последовательность"

<400> 6618

Val Ser Arg Lys Arg Pro Arg Pro

1 5

<210> 6619

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> неизвестно

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание неизвестного:

Myoma T белковая Последовательность"

<400> 6619

Pro Pro Lys Lys Ala Arg Glu Asp

1 5

<210> 6620

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 6620

Pro Gln Pro Lys Lys Lys Pro Leu

1 5

<210> 6621

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 6621

Ser Ala Leu Ile Lys Lys Lys Lys Lys Met Ala Pro

1 5 10

<210> 6622

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Вирус гриппа

<400> 6622

Asp Arg Leu Arg Arg

1 5

<210> 6623

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Вирус гриппа

<400> 6623

Pro Lys Gln Lys Lys Arg Lys

1 5

<210> 6624

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Вирус гепатита дельта

<400> 6624

Arg Lys Leu Lys Lys Lys Ile Lys Lys Leu

1 5 10

<210> 6625

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 6625

Arg Glu Lys Lys Lys Phe Leu Lys Arg Arg

1 5 10

<210> 6626

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 6626

Lys Arg Lys Gly Asp Glu Val Asp Gly Val Asp Glu Val Ala Lys Lys

1 5 10 15

Lys Ser Lys Lys

20

<210> 6627

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 6627

Arg Lys Cys Leu Gln Ala Gly Met Asn Leu Glu Ala Arg Lys Thr Lys

1 5 10 15

Lys

<210> 6628

<211> 4107

<212> ДНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

polynucleotide"

<400> 6628

atggataaaa agtacagcat cgggctggac atcggtacaa actcagtggg gtgggccgtg 60

attacggacg agtacaaggt accctccaaa aaatttaaag tgctgggtaa cacggacaga 120

cactctataa agaaaaatct tattggagcc ttgctgttcg actcaggcga gacagccgaa 180

gccacaaggt tgaagcggac cgccaggagg cggtatacca ggagaaagaa ccgcatatgc 240

tacctgcaag aaatcttcag taacgagatg gcaaaggttg acgatagctt tttccatcgc 300

ctggaagaat cctttcttgt tgaggaagac aagaagcacg aacggcaccc catctttggc 360

aatattgtcg acgaagtggc atatcacgaa aagtacccga ctatctacca cctcaggaag 420

aagctggtgg actctaccga taaggcggac ctcagactta tttatttggc actcgcccac 480

atgattaaat ttagaggaca tttcttgatc gagggcgacc tgaacccgga caacagtgac 540

gtcgataagc tgttcatcca acttgtgcag acctacaatc aactgttcga agaaaaccct 600

ataaatgctt caggagtcga cgctaaagca atcctgtccg cgcgcctctc aaaatctaga 660

agacttgaga atctgattgc tcagttgccc ggggaaaaga aaaatggatt gtttggcaac 720

ctgatcgccc tcagtctcgg actgacccca aatttcaaaa gtaacttcga cctggccgaa 780

gacgctaagc tccagctgtc caaggacaca tacgatgacg acctcgacaa tctgctggcc 840

cagattgggg atcagtacgc cgatctcttt ttggcagcaa agaacctgtc cgacgccatc 900

ctgttgagcg atatcttgag agtgaacacc gaaattacta aagcacccct tagcgcatct 960

atgatcaagc ggtacgacga gcatcatcag gatctgaccc tgctgaaggc tcttgtgagg 1020

caacagctcc ccgaaaaata caaggaaatc ttctttgacc agagcaaaaa cggctacgct 1080

ggctatatag atggtggggc cagtcaggag gaattctata aattcatcaa gcccattctc 1140

gagaaaatgg acggcacaga ggagttgctg gtcaaactta acagggagga cctgctgcgg 1200

aagcagcgga cctttgacaa cgggtctatc ccccaccaga ttcatctggg cgaactgcac 1260

gcaatcctga ggaggcagga ggatttttat ccttttctta aagataaccg cgagaaaata 1320

gaaaagattc ttacattcag gatcccgtac tacgtgggac ctctcgcccg gggcaattca 1380

cggtttgcct ggatgacaag gaagtcagag gagactatta caccttggaa cttcgaagaa 1440

gtggtggaca agggtgcatc tgcccagtct ttcatcgagc ggatgacaaa ttttgacaag 1500

aacctcccta atgagaaggt gctgcccaaa cattctctgc tctacgagta ctttaccgtc 1560

tacaatgaac tgactaaagt caagtacgtc accgagggaa tgaggaagcc ggcattcctt 1620

agtggagaac agaagaaggc gattgtagac ctgttgttca agaccaacag gaaggtgact 1680

gtgaagcaac ttaaagaaga ctactttaag aagatcgaat gttttgacag tgtggaaatt 1740

tcaggggttg aagaccgctt caatgcgtca ttggggactt accatgatct tctcaagatc 1800

ataaaggaca aagacttcct ggacaacgaa gaaaatgagg atattctcga agacatcgtc 1860

ctcaccctga ccctgttcga agacagggaa atgatagaag agcgcttgaa aacctatgcc 1920

cacctcttcg acgataaagt tatgaagcag ctgaagcgca ggagatacac aggatgggga 1980

agattgtcaa ggaagctgat caatggaatt agggataaac agagtggcaa gaccatactg 2040

gatttcctca aatctgatgg cttcgccaat aggaacttca tgcaactgat tcacgatgac 2100

tctcttacct tcaaggagga cattcaaaag gctcaggtga gcgggcaggg agactccctt 2160

catgaacaca tcgcgaattt ggcaggttcc cccgctatta aaaagggcat ccttcaaact 2220

gtcaaggtgg tggatgaatt ggtcaaggta atgggcagac ataagccaga aaatattgtg 2280

atcgagatgg cccgcgaaaa ccagaccaca cagaagggcc agaaaaatag tagagagcgg 2340

atgaagagga tcgaggaggg catcaaagag ctgggatctc agattctcaa agaacacccc 2400

gtagaaaaca cacagctgca gaacgaaaaa ttgtacttgt actatctgca gaacggcaga 2460

gacatgtacg tcgaccaaga acttgatatt aatagactgt ccgactatga cgtagaccat 2520

atcgtgcccc agtccttcct gaaggacgac tccattgata acaaagtctt gacaagaagc 2580

gacaagaaca ggggtaaaag tgataatgtg cctagcgagg aggtggtgaa aaaaatgaag 2640

aactactggc gacagctgct taatgcaaag ctcattacac aacggaagtt cgataatctg 2700

acgaaagcag agagaggtgg cttgtctgag ttggacaagg cagggtttat taagcggcag 2760

ctggtggaaa ctaggcagat cacaaagcac gtggcgcaga ttttggacag ccggatgaac 2820

acaaaatacg acgaaaatga taaactgata cgagaggtca aagttatcac gctgaaaagc 2880

aagctggtgt ccgattttcg gaaagacttc cagttctaca aagttcgcga gattaataac 2940

taccatcatg ctcacgatgc gtacctgaac gctgttgtcg ggaccgcctt gataaagaag 3000

tacccaaagc tggaatccga gttcgtatac ggggattaca aagtgtacga tgtgaggaaa 3060

atgatagcca agtccgagca ggagattgga aaggccacag ctaagtactt cttttattct 3120

aacatcatga atttttttaa gacggaaatt accctggcca acggagagat cagaaagcgg 3180

ccccttatag agacaaatgg tgaaacaggt gaaatcgtct gggataaggg cagggatttc 3240

gctactgtga ggaaggtgct gagtatgcca caggtaaata tcgtgaaaaa aaccgaagta 3300

cagaccggag gattttccaa ggaaagcatt ttgcctaaaa gaaactcaga caagctcatc 3360

gcccgcaaga aagattggga ccctaagaaa tacgggggat ttgactcacc caccgtagcc 3420

tattctgtgc tggtggtagc taaggtggaa aaaggaaagt ctaagaagct gaagtccgtg 3480

aaggaactct tgggaatcac tatcatggaa agatcatcct ttgaaaagaa ccctatcgat 3540

ttcctggagg ctaagggtta caaggaggtc aagaaagacc tcatcattaa actgccaaaa 3600

tactctctct tcgagctgga aaatggcagg aagagaatgt tggccagcgc cggagagctg 3660

caaaagggaa acgagcttgc tctgccctcc aaatatgtta attttctcta tctcgcttcc 3720

cactatgaaa agctgaaagg gtctcccgaa gataacgagc agaagcagct gttcgtcgaa 3780

cagcacaagc actatctgga tgaaataatc gaacaaataa gcgagttcag caaaagggtt 3840

atcctggcgg atgctaattt ggacaaagta ctgtctgctt ataacaagca ccgggataag 3900

cctattaggg aacaagccga gaatataatt cacctcttta cactcacgaa tctcggagcc 3960

cccgccgcct tcaaatactt tgatacgact atcgaccgga aacggtatac cagtaccaaa 4020

gaggtcctcg atgccaccct catccaccag tcaattactg gcctgtacga aacacggatc 4080

gacctctctc aactgggcgg cgactag 4107

<210> 6629

<400> 6629

000

<210> 6630

<400> 6630

000

<210> 6631

<400> 6631

000

<210> 6632

<400> 6632

000

<210> 6633

<400> 6633

000

<210> 6634

<400> 6634

000

<210> 6635

<400> 6635

000

<210> 6636

<400> 6636

000

<210> 6637

<400> 6637

000

<210> 6638

<400> 6638

000

<210> 6639

<400> 6639

000

<210> 6640

<400> 6640

000

<210> 6641

<400> 6641

000

<210> 6642

<400> 6642

000

<210> 6643

<400> 6643

000

<210> 6644

<400> 6644

000

<210> 6645

<400> 6645

000

<210> 6646

<400> 6646

000

<210> 6647

<400> 6647

000

<210> 6648

<400> 6648

000

<210> 6649

<400> 6649

000

<210> 6650

<400> 6650

000

<210> 6651

<400> 6651

000

<210> 6652

<400> 6652

000

<210> 6653

<400> 6653

000

<210> 6654

<400> 6654

000

<210> 6655

<400> 6655

000

<210> 6656

<400> 6656

000

<210> 6657

<400> 6657

000

<210> 6658

<400> 6658

000

<210> 6659

<400> 6659

000

<210> 6660

<211> 74

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6660

aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60

ucggugcuuu uuuu 74

<210> 6661

<211> 74

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 6661

aacagcauag caaguuuaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60

ucggugcuuu uuuu 74

<210> 6662

<400> 6662

000

<210> 6663

<400> 6663

000

<210> 6664

<400> 6664

000

<210> 6665

<400> 6665

000

<210> 6666

<400> 6666

000

<210> 6667

<400> 6667

000

<210> 6668

<400> 6668

000

<210> 6669

<400> 6669

000

<210> 6670

<400> 6670

000

<210> 6671

<400> 6671

000

<210> 6672

<400> 6672

000

<210> 6673

<400> 6673

000

<210> 6674

<400> 6674

000

<210> 6675

<400> 6675

000

<210> 6676

<400> 6676

000

<210> 6677

<400> 6677

000

<210> 6678

<400> 6678

000

<210> 6679

<400> 6679

000

<210> 6680

<400> 6680

000

<210> 6681

<400> 6681

000

<210> 6682

<400> 6682

000

<210> 6683

<400> 6683

000

<210> 6684

<400> 6684

000

<210> 6685

<400> 6685

000

<210> 6686

<400> 6686

000

<210> 6687

<400> 6687

000

<210> 6688

<400> 6688

000

<210> 6689

<400> 6689

000

<210> 6690

<400> 6690

000

<210> 6691

<400> 6691

000

<210> 6692

<400> 6692

000

<210> 6693

<400> 6693

000

<210> 6694

<400> 6694

000

<210> 6695

<400> 6695

000

<210> 6696

<400> 6696

000

<210> 6697

<400> 6697

000

<210> 6698

<400> 6698

000

<210> 6699

<400> 6699

000

<210> 6700

<400> 6700

000

<210> 6701

<400> 6701

000

<210> 6702

<400> 6702

000

<210> 6703

<400> 6703

000

<210> 6704

<400> 6704

000

<210> 6705

<400> 6705

000

<210> 6706

<400> 6706

000

<210> 6707

<400> 6707

000

<210> 6708

<400> 6708

000

<210> 6709

<400> 6709

000

<210> 6710

<400> 6710

000

<210> 6711

<400> 6711

000

<210> 6712

<400> 6712

000

<210> 6713

<400> 6713

000

<210> 6714

<400> 6714

000

<210> 6715

<400> 6715

000

<210> 6716

<400> 6716

000

<210> 6717

<400> 6717

000

<210> 6718

<400> 6718

000

<210> 6719

<400> 6719

000

<210> 6720

<400> 6720

000

<210> 6721

<400> 6721

000

<210> 6722

<400> 6722

000

<210> 6723

<400> 6723

000

<210> 6724

<400> 6724

000

<210> 6725

<400> 6725

000

<210> 6726

<400> 6726

000

<210> 6727

<400> 6727

000

<210> 6728

<400> 6728

000

<210> 6729

<400> 6729

000

<210> 6730

<400> 6730

000

<210> 6731

<400> 6731

000

<210> 6732

<400> 6732

000

<210> 6733

<400> 6733

000

<210> 6734

<400> 6734

000

<210> 6735

<400> 6735

000

<210> 6736

<400> 6736

000

<210> 6737

<400> 6737

000

<210> 6738

<400> 6738

000

<210> 6739

<400> 6739

000

<210> 6740

<400> 6740

000

<210> 6741

<400> 6741

000

<210> 6742

<400> 6742

000

<210> 6743

<400> 6743

000

<210> 6744

<400> 6744

000

<210> 6745

<400> 6745

000

<210> 6746

<400> 6746

000

<210> 6747

<400> 6747

000

<210> 6748

<400> 6748

000

<210> 6749

<400> 6749

000

<210> 6750

<400> 6750

000

<210> 6751

<400> 6751

000

<210> 6752

<400> 6752

000

<210> 6753

<400> 6753

000

<210> 6754

<400> 6754

000

<210> 6755

<400> 6755

000

<210> 6756

<400> 6756

000

<210> 6757

<400> 6757

000

<210> 6758

<400> 6758

000

<210> 6759

<400> 6759

000

<210> 6760

<400> 6760

000

<210> 6761

<400> 6761

000

<210> 6762

<400> 6762

000

<210> 6763

<400> 6763

000

<210> 6764

<400> 6764

000

<210> 6765

<400> 6765

000

<210> 6766

<400> 6766

000

<210> 6767

<400> 6767

000

<210> 6768

<400> 6768

000

<210> 6769

<400> 6769

000

<210> 6770

<400> 6770

000

<210> 6771

<400> 6771

000

<210> 6772

<400> 6772

000

<210> 6773

<400> 6773

000

<210> 6774

<400> 6774

000

<210> 6775

<400> 6775

000

<210> 6776

<400> 6776

000

<210> 6777

<400> 6777

000

<210> 6778

<400> 6778

000

<210> 6779

<400> 6779

000

<210> 6780

<400> 6780

000

<210> 6781

<400> 6781

000

<210> 6782

<400> 6782

000

<210> 6783

<400> 6783

000

<210> 6784

<400> 6784

000

<210> 6785

<400> 6785

000

<210> 6786

<400> 6786

000

<210> 6787

<400> 6787

000

<210> 6788

<400> 6788

000

<210> 6789

<400> 6789

000

<210> 6790

<400> 6790

000

<210> 6791

<400> 6791

000

<210> 6792

<400> 6792

000

<210> 6793

<400> 6793

000

<210> 6794

<400> 6794

000

<210> 6795

<400> 6795

000

<210> 6796

<400> 6796

000

<210> 6797

<400> 6797

000

<210> 6798

<400> 6798

000

<210> 6799

<400> 6799

000

<210> 6800

<400> 6800

000

<210> 6801

<400> 6801

000

<210> 6802

<400> 6802

000

<210> 6803

<400> 6803

000

<210> 6804

<400> 6804

000

<210> 6805

<400> 6805

000

<210> 6806

<400> 6806

000

<210> 6807

<400> 6807

000

<210> 6808

<400> 6808

000

<210> 6809

<400> 6809

000

<210> 6810

<400> 6810

000

<210> 6811

<400> 6811

000

<210> 6812

<400> 6812

000

<210> 6813

<400> 6813

000

<210> 6814

<400> 6814

000

<210> 6815

<400> 6815

000

<210> 6816

<400> 6816

000

<210> 6817

<400> 6817

000

<210> 6818

<400> 6818

000

<210> 6819

<400> 6819

000

<210> 6820

<400> 6820

000

<210> 6821

<400> 6821

000

<210> 6822

<400> 6822

000

<210> 6823

<400> 6823

000

<210> 6824

<400> 6824

000

<210> 6825

<400> 6825

000

<210> 6826

<400> 6826

000

<210> 6827

<400> 6827

000

<210> 6828

<400> 6828

000

<210> 6829

<400> 6829

000

<210> 6830

<400> 6830

000

<210> 6831

<400> 6831

000

<210> 6832

<400> 6832

000

<210> 6833

<400> 6833

000

<210> 6834

<400> 6834

000

<210> 6835

<400> 6835

000

<210> 6836

<400> 6836

000

<210> 6837

<400> 6837

000

<210> 6838

<400> 6838

000

<210> 6839

<400> 6839

000

<210> 6840

<400> 6840

000

<210> 6841

<400> 6841

000

<210> 6842

<400> 6842

000

<210> 6843

<400> 6843

000

<210> 6844

<400> 6844

000

<210> 6845

<400> 6845

000

<210> 6846

<400> 6846

000

<210> 6847

<400> 6847

000

<210> 6848

<400> 6848

000

<210> 6849

<400> 6849

000

<210> 6850

<400> 6850

000

<210> 6851

<400> 6851

000

<210> 6852

<400> 6852

000

<210> 6853

<400> 6853

000

<210> 6854

<400> 6854

000

<210> 6855

<400> 6855

000

<210> 6856

<400> 6856

000

<210> 6857

<400> 6857

000

<210> 6858

<400> 6858

000

<210> 6859

<400> 6859

000

<210> 6860

<400> 6860

000

<210> 6861

<400> 6861

000

<210> 6862

<400> 6862

000

<210> 6863

<400> 6863

000

<210> 6864

<400> 6864

000

<210> 6865

<400> 6865

000

<210> 6866

<400> 6866

000

<210> 6867

<400> 6867

000

<210> 6868

<400> 6868

000

<210> 6869

<400> 6869

000

<210> 6870

<400> 6870

000

<210> 6871

<400> 6871

000

<210> 6872

<400> 6872

000

<210> 6873

<400> 6873

000

<210> 6874

<400> 6874

000

<210> 6875

<400> 6875

000

<210> 6876

<400> 6876

000

<210> 6877

<400> 6877

000

<210> 6878

<400> 6878

000

<210> 6879

<400> 6879

000

<210> 6880

<400> 6880

000

<210> 6881

<400> 6881

000

<210> 6882

<400> 6882

000

<210> 6883

<400> 6883

000

<210> 6884

<400> 6884

000

<210> 6885

<400> 6885

000

<210> 6886

<400> 6886

000

<210> 6887

<400> 6887

000

<210> 6888

<400> 6888

000

<210> 6889

<400> 6889

000

<210> 6890

<400> 6890

000

<210> 6891

<400> 6891

000

<210> 6892

<400> 6892

000

<210> 6893

<400> 6893

000

<210> 6894

<400> 6894

000

<210> 6895

<400> 6895

000

<210> 6896

<400> 6896

000

<210> 6897

<400> 6897

000

<210> 6898

<400> 6898

000

<210> 6899

<400> 6899

000

<210> 6900

<400> 6900

000

<210> 6901

<400> 6901

000

<210> 6902

<400> 6902

000

<210> 6903

<400> 6903

000

<210> 6904

<400> 6904

000

<210> 6905

<400> 6905

000

<210> 6906

<400> 6906

000

<210> 6907

<400> 6907

000

<210> 6908

<400> 6908

000

<210> 6909

<400> 6909

000

<210> 6910

<400> 6910

000

<210> 6911

<400> 6911

000

<210> 6912

<400> 6912

000

<210> 6913

<400> 6913

000

<210> 6914

<400> 6914

000

<210> 6915

<400> 6915

000

<210> 6916

<400> 6916

000

<210> 6917

<400> 6917

000

<210> 6918

<400> 6918

000

<210> 6919

<400> 6919

000

<210> 6920

<400> 6920

000

<210> 6921

<400> 6921

000

<210> 6922

<400> 6922

000

<210> 6923

<400> 6923

000

<210> 6924

<400> 6924

000

<210> 6925

<400> 6925

000

<210> 6926

<400> 6926

000

<210> 6927

<400> 6927

000

<210> 6928

<400> 6928

000

<210> 6929

<400> 6929

000

<210> 6930

<400> 6930

000

<210> 6931

<400> 6931

000

<210> 6932

<400> 6932

000

<210> 6933

<400> 6933

000

<210> 6934

<400> 6934

000

<210> 6935

<400> 6935

000

<210> 6936

<400> 6936

000

<210> 6937

<400> 6937

000

<210> 6938

<400> 6938

000

<210> 6939

<400> 6939

000

<210> 6940

<400> 6940

000

<210> 6941

<400> 6941

000

<210> 6942

<400> 6942

000

<210> 6943

<400> 6943

000

<210> 6944

<400> 6944

000

<210> 6945

<400> 6945

000

<210> 6946

<400> 6946

000

<210> 6947

<400> 6947

000

<210> 6948

<400> 6948

000

<210> 6949

<400> 6949

000

<210> 6950

<400> 6950

000

<210> 6951

<400> 6951

000

<210> 6952

<400> 6952

000

<210> 6953

<400> 6953

000

<210> 6954

<400> 6954

000

<210> 6955

<400> 6955

000

<210> 6956

<400> 6956

000

<210> 6957

<400> 6957

000

<210> 6958

<400> 6958

000

<210> 6959

<400> 6959

000

<210> 6960

<400> 6960

000

<210> 6961

<400> 6961

000

<210> 6962

<400> 6962

000

<210> 6963

<400> 6963

000

<210> 6964

<400> 6964

000

<210> 6965

<400> 6965

000

<210> 6966

<400> 6966

000

<210> 6967

<400> 6967

000

<210> 6968

<400> 6968

000

<210> 6969

<400> 6969

000

<210> 6970

<400> 6970

000

<210> 6971

<400> 6971

000

<210> 6972

<400> 6972

000

<210> 6973

<400> 6973

000

<210> 6974

<400> 6974

000

<210> 6975

<400> 6975

000

<210> 6976

<400> 6976

000

<210> 6977

<400> 6977

000

<210> 6978

<400> 6978

000

<210> 6979

<400> 6979

000

<210> 6980

<400> 6980

000

<210> 6981

<400> 6981

000

<210> 6982

<400> 6982

000

<210> 6983

<400> 6983

000

<210> 6984

<400> 6984

000

<210> 6985

<400> 6985

000

<210> 6986

<400> 6986

000

<210> 6987

<400> 6987

000

<210> 6988

<400> 6988

000

<210> 6989

<400> 6989

000

<210> 6990

<400> 6990

000

<210> 6991

<400> 6991

000

<210> 6992

<400> 6992

000

<210> 6993

<400> 6993

000

<210> 6994

<400> 6994

000

<210> 6995

<400> 6995

000

<210> 6996

<400> 6996

000

<210> 6997

<400> 6997

000

<210> 6998

<400> 6998

000

<210> 6999

<400> 6999

000

<210> 7000

<400> 7000

000

<210> 7001

<400> 7001

000

<210> 7002

<400> 7002

000

<210> 7003

<400> 7003

000

<210> 7004

<400> 7004

000

<210> 7005

<400> 7005

000

<210> 7006

<400> 7006

000

<210> 7007

<400> 7007

000

<210> 7008

<400> 7008

000

<210> 7009

<400> 7009

000

<210> 7010

<400> 7010

000

<210> 7011

<400> 7011

000

<210> 7012

<400> 7012

000

<210> 7013

<400> 7013

000

<210> 7014

<400> 7014

000

<210> 7015

<400> 7015

000

<210> 7016

<400> 7016

000

<210> 7017

<400> 7017

000

<210> 7018

<400> 7018

000

<210> 7019

<400> 7019

000

<210> 7020

<400> 7020

000

<210> 7021

<400> 7021

000

<210> 7022

<400> 7022

000

<210> 7023

<400> 7023

000

<210> 7024

<400> 7024

000

<210> 7025

<400> 7025

000

<210> 7026

<400> 7026

000

<210> 7027

<400> 7027

000

<210> 7028

<400> 7028

000

<210> 7029

<400> 7029

000

<210> 7030

<400> 7030

000

<210> 7031

<400> 7031

000

<210> 7032

<400> 7032

000

<210> 7033

<400> 7033

000

<210> 7034

<400> 7034

000

<210> 7035

<400> 7035

000

<210> 7036

<400> 7036

000

<210> 7037

<400> 7037

000

<210> 7038

<400> 7038

000

<210> 7039

<400> 7039

000

<210> 7040

<400> 7040

000

<210> 7041

<400> 7041

000

<210> 7042

<400> 7042

000

<210> 7043

<400> 7043

000

<210> 7044

<400> 7044

000

<210> 7045

<400> 7045

000

<210> 7046

<400> 7046

000

<210> 7047

<400> 7047

000

<210> 7048

<400> 7048

000

<210> 7049

<400> 7049

000

<210> 7050

<400> 7050

000

<210> 7051

<400> 7051

000

<210> 7052

<400> 7052

000

<210> 7053

<400> 7053

000

<210> 7054

<400> 7054

000

<210> 7055

<400> 7055

000

<210> 7056

<400> 7056

000

<210> 7057

<400> 7057

000

<210> 7058

<400> 7058

000

<210> 7059

<400> 7059

000

<210> 7060

<400> 7060

000

<210> 7061

<400> 7061

000

<210> 7062

<400> 7062

000

<210> 7063

<400> 7063

000

<210> 7064

<400> 7064

000

<210> 7065

<400> 7065

000

<210> 7066

<400> 7066

000

<210> 7067

<400> 7067

000

<210> 7068

<400> 7068

000

<210> 7069

<400> 7069

000

<210> 7070

<400> 7070

000

<210> 7071

<400> 7071

000

<210> 7072

<400> 7072

000

<210> 7073

<400> 7073

000

<210> 7074

<400> 7074

000

<210> 7075

<400> 7075

000

<210> 7076

<400> 7076

000

<210> 7077

<400> 7077

000

<210> 7078

<400> 7078

000

<210> 7079

<400> 7079

000

<210> 7080

<400> 7080

000

<210> 7081

<400> 7081

000

<210> 7082

<400> 7082

000

<210> 7083

<400> 7083

000

<210> 7084

<400> 7084

000

<210> 7085

<400> 7085

000

<210> 7086

<400> 7086

000

<210> 7087

<400> 7087

000

<210> 7088

<400> 7088

000

<210> 7089

<400> 7089

000

<210> 7090

<400> 7090

000

<210> 7091

<400> 7091

000

<210> 7092

<400> 7092

000

<210> 7093

<400> 7093

000

<210> 7094

<400> 7094

000

<210> 7095

<400> 7095

000

<210> 7096

<400> 7096

000

<210> 7097

<400> 7097

000

<210> 7098

<400> 7098

000

<210> 7099

<400> 7099

000

<210> 7100

<400> 7100

000

<210> 7101

<400> 7101

000

<210> 7102

<400> 7102

000

<210> 7103

<400> 7103

000

<210> 7104

<400> 7104

000

<210> 7105

<400> 7105

000

<210> 7106

<400> 7106

000

<210> 7107

<400> 7107

000

<210> 7108

<400> 7108

000

<210> 7109

<400> 7109

000

<210> 7110

<400> 7110

000

<210> 7111

<400> 7111

000

<210> 7112

<400> 7112

000

<210> 7113

<400> 7113

000

<210> 7114

<400> 7114

000

<210> 7115

<400> 7115

000

<210> 7116

<400> 7116

000

<210> 7117

<400> 7117

000

<210> 7118

<400> 7118

000

<210> 7119

<400> 7119

000

<210> 7120

<400> 7120

000

<210> 7121

<400> 7121

000

<210> 7122

<400> 7122

000

<210> 7123

<400> 7123

000

<210> 7124

<400> 7124

000

<210> 7125

<400> 7125

000

<210> 7126

<400> 7126

000

<210> 7127

<400> 7127

000

<210> 7128

<400> 7128

000

<210> 7129

<400> 7129

000

<210> 7130

<400> 7130

000

<210> 7131

<400> 7131

000

<210> 7132

<400> 7132

000

<210> 7133

<400> 7133

000

<210> 7134

<400> 7134

000

<210> 7135

<400> 7135

000

<210> 7136

<400> 7136

000

<210> 7137

<400> 7137

000

<210> 7138

<400> 7138

000

<210> 7139

<400> 7139

000

<210> 7140

<400> 7140

000

<210> 7141

<400> 7141

000

<210> 7142

<400> 7142

000

<210> 7143

<400> 7143

000

<210> 7144

<400> 7144

000

<210> 7145

<400> 7145

000

<210> 7146

<400> 7146

000

<210> 7147

<400> 7147

000

<210> 7148

<400> 7148

000

<210> 7149

<400> 7149

000

<210> 7150

<400> 7150

000

<210> 7151

<400> 7151

000

<210> 7152

<400> 7152

000

<210> 7153

<400> 7153

000

<210> 7154

<400> 7154

000

<210> 7155

<400> 7155

000

<210> 7156

<400> 7156

000

<210> 7157

<400> 7157

000

<210> 7158

<400> 7158

000

<210> 7159

<400> 7159

000

<210> 7160

<400> 7160

000

<210> 7161

<400> 7161

000

<210> 7162

<400> 7162

000

<210> 7163

<400> 7163

000

<210> 7164

<400> 7164

000

<210> 7165

<400> 7165

000

<210> 7166

<400> 7166

000

<210> 7167

<400> 7167

000

<210> 7168

<400> 7168

000

<210> 7169

<400> 7169

000

<210> 7170

<400> 7170

000

<210> 7171

<400> 7171

000

<210> 7172

<400> 7172

000

<210> 7173

<400> 7173

000

<210> 7174

<400> 7174

000

<210> 7175

<400> 7175

000

<210> 7176

<400> 7176

000

<210> 7177

<400> 7177

000

<210> 7178

<400> 7178

000

<210> 7179

<400> 7179

000

<210> 7180

<400> 7180

000

<210> 7181

<400> 7181

000

<210> 7182

<400> 7182

000

<210> 7183

<400> 7183

000

<210> 7184

<400> 7184

000

<210> 7185

<400> 7185

000

<210> 7186

<400> 7186

000

<210> 7187

<400> 7187

000

<210> 7188

<400> 7188

000

<210> 7189

<400> 7189

000

<210> 7190

<400> 7190

000

<210> 7191

<400> 7191

000

<210> 7192

<400> 7192

000

<210> 7193

<400> 7193

000

<210> 7194

<400> 7194

000

<210> 7195

<400> 7195

000

<210> 7196

<400> 7196

000

<210> 7197

<400> 7197

000

<210> 7198

<400> 7198

000

<210> 7199

<400> 7199

000

<210> 7200

<400> 7200

000

<210> 7201

<400> 7201

000

<210> 7202

<400> 7202

000

<210> 7203

<400> 7203

000

<210> 7204

<400> 7204

000

<210> 7205

<400> 7205

000

<210> 7206

<400> 7206

000

<210> 7207

<400> 7207

000

<210> 7208

<400> 7208

000

<210> 7209

<400> 7209

000

<210> 7210

<400> 7210

000

<210> 7211

<400> 7211

000

<210> 7212

<400> 7212

000

<210> 7213

<400> 7213

000

<210> 7214

<400> 7214

000

<210> 7215

<400> 7215

000

<210> 7216

<400> 7216

000

<210> 7217

<400> 7217

000

<210> 7218

<400> 7218

000

<210> 7219

<400> 7219

000

<210> 7220

<400> 7220

000

<210> 7221

<400> 7221

000

<210> 7222

<400> 7222

000

<210> 7223

<400> 7223

000

<210> 7224

<400> 7224

000

<210> 7225

<400> 7225

000

<210> 7226

<400> 7226

000

<210> 7227

<400> 7227

000

<210> 7228

<400> 7228

000

<210> 7229

<400> 7229

000

<210> 7230

<400> 7230

000

<210> 7231

<400> 7231

000

<210> 7232

<400> 7232

000

<210> 7233

<400> 7233

000

<210> 7234

<400> 7234

000

<210> 7235

<400> 7235

000

<210> 7236

<400> 7236

000

<210> 7237

<400> 7237

000

<210> 7238

<400> 7238

000

<210> 7239

<400> 7239

000

<210> 7240

<400> 7240

000

<210> 7241

<400> 7241

000

<210> 7242

<400> 7242

000

<210> 7243

<400> 7243

000

<210> 7244

<400> 7244

000

<210> 7245

<400> 7245

000

<210> 7246

<400> 7246

000

<210> 7247

<400> 7247

000

<210> 7248

<400> 7248

000

<210> 7249

<400> 7249

000

<210> 7250

<400> 7250

000

<210> 7251

<400> 7251

000

<210> 7252

<400> 7252

000

<210> 7253

<400> 7253

000

<210> 7254

<400> 7254

000

<210> 7255

<400> 7255

000

<210> 7256

<400> 7256

000

<210> 7257

<400> 7257

000

<210> 7258

<400> 7258

000

<210> 7259

<400> 7259

000

<210> 7260

<400> 7260

000

<210> 7261

<400> 7261

000

<210> 7262

<400> 7262

000

<210> 7263

<400> 7263

000

<210> 7264

<400> 7264

000

<210> 7265

<400> 7265

000

<210> 7266

<400> 7266

000

<210> 7267

<400> 7267

000

<210> 7268

<400> 7268

000

<210> 7269

<400> 7269

000

<210> 7270

<400> 7270

000

<210> 7271

<400> 7271

000

<210> 7272

<400> 7272

000

<210> 7273

<400> 7273

000

<210> 7274

<400> 7274

000

<210> 7275

<400> 7275

000

<210> 7276

<400> 7276

000

<210> 7277

<400> 7277

000

<210> 7278

<400> 7278

000

<210> 7279

<400> 7279

000

<210> 7280

<400> 7280

000

<210> 7281

<400> 7281

000

<210> 7282

<400> 7282

000

<210> 7283

<400> 7283

000

<210> 7284

<400> 7284

000

<210> 7285

<400> 7285

000

<210> 7286

<400> 7286

000

<210> 7287

<400> 7287

000

<210> 7288

<400> 7288

000

<210> 7289

<400> 7289

000

<210> 7290

<400> 7290

000

<210> 7291

<400> 7291

000

<210> 7292

<400> 7292

000

<210> 7293

<400> 7293

000

<210> 7294

<400> 7294

000

<210> 7295

<400> 7295

000

<210> 7296

<400> 7296

000

<210> 7297

<400> 7297

000

<210> 7298

<400> 7298

000

<210> 7299

<400> 7299

000

<210> 7300

<400> 7300

000

<210> 7301

<400> 7301

000

<210> 7302

<400> 7302

000

<210> 7303

<400> 7303

000

<210> 7304

<400> 7304

000

<210> 7305

<400> 7305

000

<210> 7306

<400> 7306

000

<210> 7307

<400> 7307

000

<210> 7308

<400> 7308

000

<210> 7309

<400> 7309

000

<210> 7310

<400> 7310

000

<210> 7311

<400> 7311

000

<210> 7312

<400> 7312

000

<210> 7313

<400> 7313

000

<210> 7314

<400> 7314

000

<210> 7315

<400> 7315

000

<210> 7316

<400> 7316

000

<210> 7317

<400> 7317

000

<210> 7318

<400> 7318

000

<210> 7319

<400> 7319

000

<210> 7320

<400> 7320

000

<210> 7321

<400> 7321

000

<210> 7322

<400> 7322

000

<210> 7323

<400> 7323

000

<210> 7324

<400> 7324

000

<210> 7325

<400> 7325

000

<210> 7326

<400> 7326

000

<210> 7327

<400> 7327

000

<210> 7328

<400> 7328

000

<210> 7329

<400> 7329

000

<210> 7330

<400> 7330

000

<210> 7331

<400> 7331

000

<210> 7332

<400> 7332

000

<210> 7333

<400> 7333

000

<210> 7334

<400> 7334

000

<210> 7335

<400> 7335

000

<210> 7336

<400> 7336

000

<210> 7337

<400> 7337

000

<210> 7338

<400> 7338

000

<210> 7339

<400> 7339

000

<210> 7340

<400> 7340

000

<210> 7341

<400> 7341

000

<210> 7342

<400> 7342

000

<210> 7343

<400> 7343

000

<210> 7344

<400> 7344

000

<210> 7345

<400> 7345

000

<210> 7346

<400> 7346

000

<210> 7347

<400> 7347

000

<210> 7348

<400> 7348

000

<210> 7349

<400> 7349

000

<210> 7350

<400> 7350

000

<210> 7351

<400> 7351

000

<210> 7352

<400> 7352

000

<210> 7353

<400> 7353

000

<210> 7354

<400> 7354

000

<210> 7355

<400> 7355

000

<210> 7356

<400> 7356

000

<210> 7357

<400> 7357

000

<210> 7358

<400> 7358

000

<210> 7359

<400> 7359

000

<210> 7360

<400> 7360

000

<210> 7361

<400> 7361

000

<210> 7362

<400> 7362

000

<210> 7363

<400> 7363

000

<210> 7364

<400> 7364

000

<210> 7365

<400> 7365

000

<210> 7366

<400> 7366

000

<210> 7367

<400> 7367

000

<210> 7368

<400> 7368

000

<210> 7369

<400> 7369

000

<210> 7370

<400> 7370

000

<210> 7371

<400> 7371

000

<210> 7372

<400> 7372

000

<210> 7373

<400> 7373

000

<210> 7374

<400> 7374

000

<210> 7375

<400> 7375

000

<210> 7376

<400> 7376

000

<210> 7377

<400> 7377

000

<210> 7378

<400> 7378

000

<210> 7379

<400> 7379

000

<210> 7380

<400> 7380

000

<210> 7381

<400> 7381

000

<210> 7382

<400> 7382

000

<210> 7383

<400> 7383

000

<210> 7384

<400> 7384

000

<210> 7385

<400> 7385

000

<210> 7386

<400> 7386

000

<210> 7387

<400> 7387

000

<210> 7388

<400> 7388

000

<210> 7389

<400> 7389

000

<210> 7390

<400> 7390

000

<210> 7391

<400> 7391

000

<210> 7392

<400> 7392

000

<210> 7393

<400> 7393

000

<210> 7394

<400> 7394

000

<210> 7395

<400> 7395

000

<210> 7396

<400> 7396

000

<210> 7397

<400> 7397

000

<210> 7398

<400> 7398

000

<210> 7399

<400> 7399

000

<210> 7400

<400> 7400

000

<210> 7401

<400> 7401

000

<210> 7402

<400> 7402

000

<210> 7403

<400> 7403

000

<210> 7404

<400> 7404

000

<210> 7405

<400> 7405

000

<210> 7406

<400> 7406

000

<210> 7407

<400> 7407

000

<210> 7408

<400> 7408

000

<210> 7409

<400> 7409

000

<210> 7410

<400> 7410

000

<210> 7411

<400> 7411

000

<210> 7412

<400> 7412

000

<210> 7413

<400> 7413

000

<210> 7414

<400> 7414

000

<210> 7415

<400> 7415

000

<210> 7416

<400> 7416

000

<210> 7417

<400> 7417

000

<210> 7418

<400> 7418

000

<210> 7419

<400> 7419

000

<210> 7420

<400> 7420

000

<210> 7421

<400> 7421

000

<210> 7422

<400> 7422

000

<210> 7423

<400> 7423

000

<210> 7424

<400> 7424

000

<210> 7425

<400> 7425

000

<210> 7426

<400> 7426

000

<210> 7427

<400> 7427

000

<210> 7428

<400> 7428

000

<210> 7429

<400> 7429

000

<210> 7430

<400> 7430

000

<210> 7431

<400> 7431

000

<210> 7432

<400> 7432

000

<210> 7433

<400> 7433

000

<210> 7434

<400> 7434

000

<210> 7435

<400> 7435

000

<210> 7436

<400> 7436

000

<210> 7437

<400> 7437

000

<210> 7438

<400> 7438

000

<210> 7439

<400> 7439

000

<210> 7440

<400> 7440

000

<210> 7441

<400> 7441

000

<210> 7442

<400> 7442

000

<210> 7443

<400> 7443

000

<210> 7444

<400> 7444

000

<210> 7445

<400> 7445

000

<210> 7446

<400> 7446

000

<210> 7447

<400> 7447

000

<210> 7448

<400> 7448

000

<210> 7449

<400> 7449

000

<210> 7450

<400> 7450

000

<210> 7451

<400> 7451

000

<210> 7452

<400> 7452

000

<210> 7453

<400> 7453

000

<210> 7454

<400> 7454

000

<210> 7455

<400> 7455

000

<210> 7456

<400> 7456

000

<210> 7457

<400> 7457

000

<210> 7458

<400> 7458

000

<210> 7459

<400> 7459

000

<210> 7460

<400> 7460

000

<210> 7461

<400> 7461

000

<210> 7462

<400> 7462

000

<210> 7463

<400> 7463

000

<210> 7464

<400> 7464

000

<210> 7465

<400> 7465

000

<210> 7466

<400> 7466

000

<210> 7467

<400> 7467

000

<210> 7468

<400> 7468

000

<210> 7469

<400> 7469

000

<210> 7470

<400> 7470

000

<210> 7471

<400> 7471

000

<210> 7472

<400> 7472

000

<210> 7473

<400> 7473

000

<210> 7474

<400> 7474

000

<210> 7475

<400> 7475

000

<210> 7476

<400> 7476

000

<210> 7477

<400> 7477

000

<210> 7478

<400> 7478

000

<210> 7479

<400> 7479

000

<210> 7480

<400> 7480

000

<210> 7481

<400> 7481

000

<210> 7482

<400> 7482

000

<210> 7483

<400> 7483

000

<210> 7484

<400> 7484

000

<210> 7485

<400> 7485

000

<210> 7486

<400> 7486

000

<210> 7487

<400> 7487

000

<210> 7488

<400> 7488

000

<210> 7489

<400> 7489

000

<210> 7490

<400> 7490

000

<210> 7491

<400> 7491

000

<210> 7492

<400> 7492

000

<210> 7493

<400> 7493

000

<210> 7494

<400> 7494

000

<210> 7495

<400> 7495

000

<210> 7496

<400> 7496

000

<210> 7497

<400> 7497

000

<210> 7498

<400> 7498

000

<210> 7499

<400> 7499

000

<210> 7500

<400> 7500

000

<210> 7501

<400> 7501

000

<210> 7502

<400> 7502

000

<210> 7503

<400> 7503

000

<210> 7504

<400> 7504

000

<210> 7505

<400> 7505

000

<210> 7506

<400> 7506

000

<210> 7507

<400> 7507

000

<210> 7508

<400> 7508

000

<210> 7509

<400> 7509

000

<210> 7510

<400> 7510

000

<210> 7511

<400> 7511

000

<210> 7512

<400> 7512

000

<210> 7513

<400> 7513

000

<210> 7514

<400> 7514

000

<210> 7515

<400> 7515

000

<210> 7516

<400> 7516

000

<210> 7517

<400> 7517

000

<210> 7518

<400> 7518

000

<210> 7519

<400> 7519

000

<210> 7520

<400> 7520

000

<210> 7521

<400> 7521

000

<210> 7522

<400> 7522

000

<210> 7523

<400> 7523

000

<210> 7524

<400> 7524

000

<210> 7525

<400> 7525

000

<210> 7526

<400> 7526

000

<210> 7527

<400> 7527

000

<210> 7528

<400> 7528

000

<210> 7529

<400> 7529

000

<210> 7530

<400> 7530

000

<210> 7531

<400> 7531

000

<210> 7532

<400> 7532

000

<210> 7533

<400> 7533

000

<210> 7534

<400> 7534

000

<210> 7535

<400> 7535

000

<210> 7536

<400> 7536

000

<210> 7537

<400> 7537

000

<210> 7538

<400> 7538

000

<210> 7539

<400> 7539

000

<210> 7540

<400> 7540

000

<210> 7541

<400> 7541

000

<210> 7542

<400> 7542

000

<210> 7543

<400> 7543

000

<210> 7544

<400> 7544

000

<210> 7545

<400> 7545

000

<210> 7546

<400> 7546

000

<210> 7547

<400> 7547

000

<210> 7548

<400> 7548

000

<210> 7549

<400> 7549

000

<210> 7550

<400> 7550

000

<210> 7551

<400> 7551

000

<210> 7552

<400> 7552

000

<210> 7553

<400> 7553

000

<210> 7554

<400> 7554

000

<210> 7555

<400> 7555

000

<210> 7556

<400> 7556

000

<210> 7557

<400> 7557

000

<210> 7558

<400> 7558

000

<210> 7559

<400> 7559

000

<210> 7560

<400> 7560

000

<210> 7561

<400> 7561

000

<210> 7562

<400> 7562

000

<210> 7563

<400> 7563

000

<210> 7564

<400> 7564

000

<210> 7565

<400> 7565

000

<210> 7566

<400> 7566

000

<210> 7567

<400> 7567

000

<210> 7568

<400> 7568

000

<210> 7569

<400> 7569

000

<210> 7570

<400> 7570

000

<210> 7571

<400> 7571

000

<210> 7572

<400> 7572

000

<210> 7573

<400> 7573

000

<210> 7574

<400> 7574

000

<210> 7575

<400> 7575

000

<210> 7576

<400> 7576

000

<210> 7577

<400> 7577

000

<210> 7578

<400> 7578

000

<210> 7579

<400> 7579

000

<210> 7580

<400> 7580

000

<210> 7581

<400> 7581

000

<210> 7582

<400> 7582

000

<210> 7583

<400> 7583

000

<210> 7584

<400> 7584

000

<210> 7585

<400> 7585

000

<210> 7586

<400> 7586

000

<210> 7587

<400> 7587

000

<210> 7588

<400> 7588

000

<210> 7589

<400> 7589

000

<210> 7590

<400> 7590

000

<210> 7591

<400> 7591

000

<210> 7592

<400> 7592

000

<210> 7593

<400> 7593

000

<210> 7594

<400> 7594

000

<210> 7595

<400> 7595

000

<210> 7596

<400> 7596

000

<210> 7597

<400> 7597

000

<210> 7598

<400> 7598

000

<210> 7599

<400> 7599

000

<210> 7600

<400> 7600

000

<210> 7601

<400> 7601

000

<210> 7602

<400> 7602

000

<210> 7603

<400> 7603

000

<210> 7604

<400> 7604

000

<210> 7605

<400> 7605

000

<210> 7606

<400> 7606

000

<210> 7607

<400> 7607

000

<210> 7608

<400> 7608

000

<210> 7609

<400> 7609

000

<210> 7610

<400> 7610

000

<210> 7611

<400> 7611

000

<210> 7612

<400> 7612

000

<210> 7613

<400> 7613

000

<210> 7614

<400> 7614

000

<210> 7615

<400> 7615

000

<210> 7616

<400> 7616

000

<210> 7617

<400> 7617

000

<210> 7618

<400> 7618

000

<210> 7619

<400> 7619

000

<210> 7620

<400> 7620

000

<210> 7621

<400> 7621

000

<210> 7622

<400> 7622

000

<210> 7623

<400> 7623

000

<210> 7624

<400> 7624

000

<210> 7625

<400> 7625

000

<210> 7626

<400> 7626

000

<210> 7627

<400> 7627

000

<210> 7628

<400> 7628

000

<210> 7629

<400> 7629

000

<210> 7630

<400> 7630

000

<210> 7631

<400> 7631

000

<210> 7632

<400> 7632

000

<210> 7633

<400> 7633

000

<210> 7634

<400> 7634

000

<210> 7635

<400> 7635

000

<210> 7636

<400> 7636

000

<210> 7637

<400> 7637

000

<210> 7638

<400> 7638

000

<210> 7639

<400> 7639

000

<210> 7640

<400> 7640

000

<210> 7641

<400> 7641

000

<210> 7642

<400> 7642

000

<210> 7643

<400> 7643

000

<210> 7644

<400> 7644

000

<210> 7645

<400> 7645

000

<210> 7646

<400> 7646

000

<210> 7647

<400> 7647

000

<210> 7648

<400> 7648

000

<210> 7649

<400> 7649

000

<210> 7650

<400> 7650

000

<210> 7651

<400> 7651

000

<210> 7652

<400> 7652

000

<210> 7653

<400> 7653

000

<210> 7654

<400> 7654

000

<210> 7655

<400> 7655

000

<210> 7656

<400> 7656

000

<210> 7657

<400> 7657

000

<210> 7658

<400> 7658

000

<210> 7659

<400> 7659

000

<210> 7660

<400> 7660

000

<210> 7661

<400> 7661

000

<210> 7662

<400> 7662

000

<210> 7663

<400> 7663

000

<210> 7664

<400> 7664

000

<210> 7665

<400> 7665

000

<210> 7666

<400> 7666

000

<210> 7667

<400> 7667

000

<210> 7668

<400> 7668

000

<210> 7669

<400> 7669

000

<210> 7670

<400> 7670

000

<210> 7671

<400> 7671

000

<210> 7672

<400> 7672

000

<210> 7673

<400> 7673

000

<210> 7674

<400> 7674

000

<210> 7675

<400> 7675

000

<210> 7676

<400> 7676

000

<210> 7677

<400> 7677

000

<210> 7678

<400> 7678

000

<210> 7679

<400> 7679

000

<210> 7680

<400> 7680

000

<210> 7681

<400> 7681

000

<210> 7682

<400> 7682

000

<210> 7683

<400> 7683

000

<210> 7684

<400> 7684

000

<210> 7685

<400> 7685

000

<210> 7686

<400> 7686

000

<210> 7687

<400> 7687

000

<210> 7688

<400> 7688

000

<210> 7689

<400> 7689

000

<210> 7690

<400> 7690

000

<210> 7691

<400> 7691

000

<210> 7692

<400> 7692

000

<210> 7693

<400> 7693

000

<210> 7694

<400> 7694

000

<210> 7695

<400> 7695

000

<210> 7696

<400> 7696

000

<210> 7697

<400> 7697

000

<210> 7698

<400> 7698

000

<210> 7699

<400> 7699

000

<210> 7700

<400> 7700

000

<210> 7701

<400> 7701

000

<210> 7702

<400> 7702

000

<210> 7703

<400> 7703

000

<210> 7704

<400> 7704

000

<210> 7705

<400> 7705

000

<210> 7706

<400> 7706

000

<210> 7707

<400> 7707

000

<210> 7708

<400> 7708

000

<210> 7709

<400> 7709

000

<210> 7710

<400> 7710

000

<210> 7711

<400> 7711

000

<210> 7712

<400> 7712

000

<210> 7713

<400> 7713

000

<210> 7714

<400> 7714

000

<210> 7715

<400> 7715

000

<210> 7716

<400> 7716

000

<210> 7717

<400> 7717

000

<210> 7718

<400> 7718

000

<210> 7719

<400> 7719

000

<210> 7720

<400> 7720

000

<210> 7721

<400> 7721

000

<210> 7722

<400> 7722

000

<210> 7723

<400> 7723

000

<210> 7724

<400> 7724

000

<210> 7725

<400> 7725

000

<210> 7726

<400> 7726

000

<210> 7727

<400> 7727

000

<210> 7728

<400> 7728

000

<210> 7729

<400> 7729

000

<210> 7730

<400> 7730

000

<210> 7731

<400> 7731

000

<210> 7732

<400> 7732

000

<210> 7733

<400> 7733

000

<210> 7734

<400> 7734

000

<210> 7735

<400> 7735

000

<210> 7736

<400> 7736

000

<210> 7737

<400> 7737

000

<210> 7738

<400> 7738

000

<210> 7739

<400> 7739

000

<210> 7740

<400> 7740

000

<210> 7741

<400> 7741

000

<210> 7742

<400> 7742

000

<210> 7743

<400> 7743

000

<210> 7744

<400> 7744

000

<210> 7745

<400> 7745

000

<210> 7746

<400> 7746

000

<210> 7747

<400> 7747

000

<210> 7748

<400> 7748

000

<210> 7749

<400> 7749

000

<210> 7750

<400> 7750

000

<210> 7751

<400> 7751

000

<210> 7752

<400> 7752

000

<210> 7753

<400> 7753

000

<210> 7754

<400> 7754

000

<210> 7755

<400> 7755

000

<210> 7756

<400> 7756

000

<210> 7757

<400> 7757

000

<210> 7758

<400> 7758

000

<210> 7759

<400> 7759

000

<210> 7760

<400> 7760

000

<210> 7761

<400> 7761

000

<210> 7762

<400> 7762

000

<210> 7763

<400> 7763

000

<210> 7764

<400> 7764

000

<210> 7765

<400> 7765

000

<210> 7766

<400> 7766

000

<210> 7767

<400> 7767

000

<210> 7768

<400> 7768

000

<210> 7769

<400> 7769

000

<210> 7770

<400> 7770

000

<210> 7771

<400> 7771

000

<210> 7772

<400> 7772

000

<210> 7773

<400> 7773

000

<210> 7774

<400> 7774

000

<210> 7775

<400> 7775

000

<210> 7776

<400> 7776

000

<210> 7777

<400> 7777

000

<210> 7778

<400> 7778

000

<210> 7779

<400> 7779

000

<210> 7780

<400> 7780

000

<210> 7781

<400> 7781

000

<210> 7782

<400> 7782

000

<210> 7783

<400> 7783

000

<210> 7784

<400> 7784

000

<210> 7785

<400> 7785

000

<210> 7786

<400> 7786

000

<210> 7787

<400> 7787

000

<210> 7788

<400> 7788

000

<210> 7789

<400> 7789

000

<210> 7790

<400> 7790

000

<210> 7791

<400> 7791

000

<210> 7792

<400> 7792

000

<210> 7793

<400> 7793

000

<210> 7794

<400> 7794

000

<210> 7795

<400> 7795

000

<210> 7796

<400> 7796

000

<210> 7797

<400> 7797

000

<210> 7798

<400> 7798

000

<210> 7799

<400> 7799

000

<210> 7800

<400> 7800

000

<210> 7801

<400> 7801

000

<210> 7802

<400> 7802

000

<210> 7803

<400> 7803

000

<210> 7804

<400> 7804

000

<210> 7805

<400> 7805

000

<210> 7806

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7806

guuuuagagc uaugcu 16

<210> 7807

<211> 90

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7807

guuuaagagc uaugcuggaa acagcauagc aaguuuaaau aaggcuaguc cguuaucaac 60

uugaaaaagu ggcaccgagu cggugcuuuu 90

<210> 7808

<211> 67

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7808

agcauagcaa guuaaaauaa ggcuaguccg uuaucaacuu gaaaaagugg caccgagucg 60

gugcuuu 67

<210> 7809

<211> 85

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7809

guuggaacca uucaaaacag cauagcaagu uaaaauaagg cuaguccguu aucaacuuga 60

aaaaguggca ccgagucggu gcuuu 85

<210> 7810

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Tobacco etch virus

<400> 7810

Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly

1 5

<210> 7811

<211> 80

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7811

guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc cguuaucaac uugaaaaagu 60

ggcaccgagu cggugcuuuu 80

<210> 7812

<211> 67

<212> РНК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

олигонуклеотид"

<400> 7812

aacagcauag caaguuaaaa uaaggcuagu ccguuaucaa cuugaaaaag uggcaccgag 60

ucggugc 67

<210> 7813

<400> 7813

000

<210> 7814

<400> 7814

000

<210> 7815

<400> 7815

000

<210> 7816

<400> 7816

000

<210> 7817

<400> 7817

000

<210> 7818

<400> 7818

000

<210> 7819

<400> 7819

000

<210> 7820

<400> 7820

000

<210> 7821

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7821

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<210> 7822

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7822

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Leu Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Glu Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<210> 7823

<211> 1399

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7823

Met Gly Ser Ser His His His His His His His His Glu Asn Leu Tyr

1 5 10 15

Phe Gln Gly Ser Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly

20 25 30

Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro

35 40 45

Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys

50 55 60

Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu

65 70 75 80

Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys

85 90 95

Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys

100 105 110

Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu

115 120 125

Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp

130 135 140

Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys

145 150 155 160

Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu

165 170 175

Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly

180 185 190

Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu

195 200 205

Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser

210 215 220

Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg

225 230 235 240

Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly

245 250 255

Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe

260 265 270

Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys

275 280 285

Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp

290 295 300

Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile

305 310 315 320

Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro

325 330 335

Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu

340 345 350

Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys

355 360 365

Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp

370 375 380

Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu

385 390 395 400

Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu

405 410 415

Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His

420 425 430

Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp

435 440 445

Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu

450 455 460

Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser

465 470 475 480

Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp

485 490 495

Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile

500 505 510

Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu

515 520 525

Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu

530 535 540

Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu

545 550 555 560

Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn

565 570 575

Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile

580 585 590

Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn

595 600 605

Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys

610 615 620

Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val

625 630 635 640

Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu

645 650 655

Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys

660 665 670

Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn

675 680 685

Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys

690 695 700

Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp

705 710 715 720

Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln

725 730 735

Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala

740 745 750

Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val

755 760 765

Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala

770 775 780

Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg

785 790 795 800

Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu

805 810 815

Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr

820 825 830

Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu

835 840 845

Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln

850 855 860

Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser

865 870 875 880

Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val

885 890 895

Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile

900 905 910

Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu

915 920 925

Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr

930 935 940

Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn

945 950 955 960

Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile

965 970 975

Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe

980 985 990

Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr

995 1000 1005

Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys

1010 1015 1020

Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val

1025 1030 1035

Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr

1040 1045 1050

Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr

1055 1060 1065

Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile

1070 1075 1080

Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg

1085 1090 1095

Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn

1100 1105 1110

Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu

1115 1120 1125

Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys

1130 1135 1140

Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr

1145 1150 1155

Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys

1160 1165 1170

Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile

1175 1180 1185

Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu

1190 1195 1200

Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu

1205 1210 1215

Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met

1220 1225 1230

Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu

1235 1240 1245

Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu

1250 1255 1260

Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe

1265 1270 1275

Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile

1280 1285 1290

Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp

1295 1300 1305

Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg

1310 1315 1320

Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu

1325 1330 1335

Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg

1340 1345 1350

Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile

1355 1360 1365

His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser

1370 1375 1380

Gln Leu Gly Gly Asp Gly Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg Lys

1385 1390 1395

Val

<210> 7824

<211> 1396

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7824

Met Ala His His His His His His Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg

1 5 10 15

Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser

20 25 30

Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys

35 40 45

Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu

50 55 60

Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg

65 70 75 80

Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile

85 90 95

Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp

100 105 110

Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys

115 120 125

Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala

130 135 140

Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val

145 150 155 160

Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala

165 170 175

His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn

180 185 190

Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr

195 200 205

Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp

210 215 220

Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu

225 230 235 240

Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly

245 250 255

Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn

260 265 270

Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr

275 280 285

Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala

290 295 300

Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser

305 310 315 320

Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala

325 330 335

Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu

340 345 350

Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe

355 360 365

Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala

370 375 380

Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met

385 390 395 400

Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu

405 410 415

Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His

420 425 430

Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro

435 440 445

Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg

450 455 460

Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala

465 470 475 480

Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu

485 490 495

Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met

500 505 510

Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His

515 520 525

Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val

530 535 540

Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu

545 550 555 560

Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val

565 570 575

Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe

580 585 590

Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu

595 600 605

Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu

610 615 620

Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu

625 630 635 640

Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr

645 650 655

Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg

660 665 670

Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg

675 680 685

Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly

690 695 700

Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr

705 710 715 720

Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser

725 730 735

Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys

740 745 750

Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met

755 760 765

Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn

770 775 780

Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg

785 790 795 800

Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His

805 810 815

Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr

820 825 830

Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn

835 840 845

Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu

850 855 860

Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn

865 870 875 880

Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met

885 890 895

Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg

900 905 910

Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu

915 920 925

Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile

930 935 940

Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr

945 950 955 960

Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys

965 970 975

Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val

980 985 990

Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala

995 1000 1005

Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser

1010 1015 1020

Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met

1025 1030 1035

Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr

1040 1045 1050

Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr

1055 1060 1065

Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn

1070 1075 1080

Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala

1085 1090 1095

Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys

1100 1105 1110

Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu

1115 1120 1125

Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp

1130 1135 1140

Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr

1145 1150 1155

Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys

1160 1165 1170

Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg

1175 1180 1185

Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly

1190 1195 1200

Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr

1205 1210 1215

Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser

1220 1225 1230

Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys

1235 1240 1245

Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys

1250 1255 1260

Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln

1265 1270 1275

His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe

1280 1285 1290

Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu

1295 1300 1305

Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala

1310 1315 1320

Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro

1325 1330 1335

Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr

1340 1345 1350

Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser

1355 1360 1365

Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly

1370 1375 1380

Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

1385 1390 1395

<210> 7825

<211> 1386

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7825

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp His His His

1370 1375 1380

His His His

1385

<210> 7826

<211> 1389

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7826

Met Ala His His His His His His Gly Gly Ser Asp Lys Lys Tyr Ser

1 5 10 15

Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr

20 25 30

Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr

35 40 45

Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp

50 55 60

Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg

65 70 75 80

Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe

85 90 95

Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu

100 105 110

Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile

115 120 125

Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr

130 135 140

Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp

145 150 155 160

Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly

165 170 175

His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp

180 185 190

Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu

195 200 205

Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala

210 215 220

Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro

225 230 235 240

Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu

245 250 255

Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala

260 265 270

Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu

275 280 285

Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys

290 295 300

Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr

305 310 315 320

Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp

325 330 335

Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln

340 345 350

Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly

355 360 365

Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys

370 375 380

Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu

385 390 395 400

Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp

405 410 415

Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile

420 425 430

Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu

435 440 445

Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro

450 455 460

Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu

465 470 475 480

Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala

485 490 495

Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu

500 505 510

Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe

515 520 525

Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met

530 535 540

Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp

545 550 555 560

Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu

565 570 575

Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly

580 585 590

Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu

595 600 605

Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp

610 615 620

Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu

625 630 635 640

Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys

645 650 655

Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu

660 665 670

Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr

675 680 685

Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met

690 695 700

Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys

705 710 715 720

Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn

725 730 735

Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys

740 745 750

Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn

755 760 765

Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln

770 775 780

Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu

785 790 795 800

Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu

805 810 815

Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met

820 825 830

Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val

835 840 845

Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn

850 855 860

Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val

865 870 875 880

Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu

885 890 895

Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys

900 905 910

Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys

915 920 925

Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile

930 935 940

Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile

945 950 955 960

Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe

965 970 975

Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His

980 985 990

His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile

995 1000 1005

Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr

1010 1015 1020

Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu

1025 1030 1035

Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met

1040 1045 1050

Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg

1055 1060 1065

Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val

1070 1075 1080

Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser

1085 1090 1095

Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly

1100 1105 1110

Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys

1115 1120 1125

Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly

1130 1135 1140

Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys

1145 1150 1155

Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu

1160 1165 1170

Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro

1175 1180 1185

Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp

1190 1195 1200

Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn

1205 1210 1215

Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly

1220 1225 1230

Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu

1235 1240 1245

Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu

1250 1255 1260

Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu

1265 1270 1275

Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala

1280 1285 1290

Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg

1295 1300 1305

Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe

1310 1315 1320

Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp

1325 1330 1335

Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu

1340 1345 1350

Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr

1355 1360 1365

Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro

1370 1375 1380

Lys Lys Lys Arg Lys Val

1385

<210> 7827

<211> 1399

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7827

Met Gly Ser Ser His His His His His His His His Glu Asn Leu Tyr

1 5 10 15

Phe Gln Gly Ser Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly

20 25 30

Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro

35 40 45

Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys

50 55 60

Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu

65 70 75 80

Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys

85 90 95

Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys

100 105 110

Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu

115 120 125

Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp

130 135 140

Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys

145 150 155 160

Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu

165 170 175

Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly

180 185 190

Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu

195 200 205

Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser

210 215 220

Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg

225 230 235 240

Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly

245 250 255

Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe

260 265 270

Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys

275 280 285

Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp

290 295 300

Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile

305 310 315 320

Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro

325 330 335

Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu

340 345 350

Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys

355 360 365

Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp

370 375 380

Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu

385 390 395 400

Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu

405 410 415

Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His

420 425 430

Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp

435 440 445

Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu

450 455 460

Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser

465 470 475 480

Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp

485 490 495

Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile

500 505 510

Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu

515 520 525

Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu

530 535 540

Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu

545 550 555 560

Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn

565 570 575

Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile

580 585 590

Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn

595 600 605

Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys

610 615 620

Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val

625 630 635 640

Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu

645 650 655

Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys

660 665 670

Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn

675 680 685

Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys

690 695 700

Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp

705 710 715 720

Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln

725 730 735

Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala

740 745 750

Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val

755 760 765

Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala

770 775 780

Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg

785 790 795 800

Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu

805 810 815

Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr

820 825 830

Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu

835 840 845

Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln

850 855 860

Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser

865 870 875 880

Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val

885 890 895

Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile

900 905 910

Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu

915 920 925

Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr

930 935 940

Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn

945 950 955 960

Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile

965 970 975

Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe

980 985 990

Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr

995 1000 1005

Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys

1010 1015 1020

Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val

1025 1030 1035

Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr

1040 1045 1050

Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr

1055 1060 1065

Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile

1070 1075 1080

Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg

1085 1090 1095

Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn

1100 1105 1110

Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu

1115 1120 1125

Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys

1130 1135 1140

Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr

1145 1150 1155

Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys

1160 1165 1170

Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile

1175 1180 1185

Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu

1190 1195 1200

Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu

1205 1210 1215

Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met

1220 1225 1230

Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu

1235 1240 1245

Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu

1250 1255 1260

Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe

1265 1270 1275

Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile

1280 1285 1290

Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp

1295 1300 1305

Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg

1310 1315 1320

Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu

1325 1330 1335

Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg

1340 1345 1350

Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile

1355 1360 1365

His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser

1370 1375 1380

Gln Leu Gly Gly Asp Gly Gly Gly Ser Pro Lys Lys Lys Arg Lys

1385 1390 1395

Val

<210> 7828

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7828

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Ala Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<210> 7829

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7829

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Ala Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Ala Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Ala

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<210> 7830

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7830

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Ala Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Ala Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Ala

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<210> 7831

<211> 1393

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<221> исходная

<223> /примечание="Описание Искусственной Последовательности: Синтетический

полипептид"

<400> 7831

Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu

20 25 30

Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg

35 40 45

His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr

65 70 75 80

Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn

85 90 95

Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser

100 105 110

Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr

130 135 140

His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe

165 170 175

Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu

180 185 190

Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro

195 200 205

Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu

210 215 220

Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu

245 250 255

Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu

260 265 270

Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala

275 280 285

Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu

290 295 300

Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile

305 310 315 320

Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His

325 330 335

His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro

340 345 350

Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala

355 360 365

Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile

370 375 380

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys

385 390 395 400

Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly

405 410 415

Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg

420 425 430

Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile

435 440 445

Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala

485 490 495

Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Ala Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn

500 505 510

Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val

515 520 525

Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys

530 535 540

Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu

545 550 555 560

Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr

565 570 575

Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu

580 585 590

Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile

595 600 605

Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu

610 615 620

Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile

625 630 635 640

Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met

645 650 655

Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr Gly Trp Gly Ala Leu Ser Arg

660 665 670

Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu

675 680 685

Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala Asn Arg Asn Phe Met Ala Leu

690 695 700

Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln

705 710 715 720

Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala

725 730 735

Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val

740 745 750

Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val

755 760 765

Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn

770 775 780

Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly

785 790 795 800

Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn

805 810 815

Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val

820 825 830

Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His

835 840 845

Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val

850 855 860

Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser

865 870 875 880

Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn

885 890 895

Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu

900 905 910

Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln

915 920 925

Leu Val Glu Thr Arg Ala Ile Thr Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp

930 935 940

Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu

945 950 955 960

Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys

965 970 975

Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala

980 985 990

His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys

995 1000 1005

Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val

1010 1015 1020

Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys Ser Glu Gln Glu Ile Gly

1025 1030 1035

Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Phe

1040 1045 1050

Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu Ile Arg Lys Arg

1055 1060 1065

Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile Val Trp Asp

1070 1075 1080

Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser Met Pro

1085 1090 1095

Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly Phe

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1115 1120 1125

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu

1145 1150 1155

Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Leu Gly

1160 1165 1170

Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Ile Asp

1175 1180 1185

Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile

1190 1195 1200

Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg

1205 1210 1215

Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu

1220 1225 1230

Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser

1235 1240 1245

His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys

1250 1255 1260

Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His Tyr Leu Asp Glu Ile Ile

1265 1270 1275

Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val Ile Leu Ala Asp Ala

1280 1285 1290

Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys His Arg Asp Lys

1295 1300 1305

Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu Phe Thr Leu

1310 1315 1320

Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp Thr Thr

1325 1330 1335

Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp Ala

1340 1345 1350

Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1355 1360 1365

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Arg Ala Asp Pro Lys Lys

1370 1375 1380

Lys Arg Lys Val His His His His His His

1385 1390

<---

Claims (102)

1. Нацеливающая молекула РНК (gРНК) для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая tracr и crРНК, где crРНК содержит целевой домен, содержащий SEQ ID NO: 253.

2. Молекула gРНК по п.1, содержащая от 5' до 3': [целевой домен]-SEQ ID NO: 7811.

3. Молекула gРНК по п.1 или 2, где одна или более одной молекул нуклеиновой кислоты, составляющих молекулу gРНК, содержат:

(a) одну или несколько модификаций фосфоротиоата на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;

(b) одну или несколько модификаций фосфоротиоата на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;

(c) одну или несколько 2'-О-метил-модификаций на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;

(d) одну или несколько 2'-O-метил-модификаций на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;

(e) 2'-O-метильную модификацию на каждом из 4-ого от конца, 3-ого от конца и 2-ого от конца 3'- остатков указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;

(f) 2'-метильную модификацию на каждом из: 4-ого от конца, 3-ого от конца и 2-ого от конца 5'-остатков указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты; или

(g) любую их комбинацию.

4. Нацеливающая молекула РНК (gРНК) для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая от 5'до 3': [целевой домен]-SEQ ID NO: 7811, где указанный целевой домен содержит последовательность SEQ ID NO: 253, и где указанная последовательность SEQ ID NO: 7811 расположена непосредственно на 3'-конце указанного целевого домена.

5. Композиция для редактирования области энхансера BCL11a, включающая:

a) молекулу gРНК по любому из пп.1-4 и молекулу Cas9;

b) молекулу gРНК по любому из пп.1-4 и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу Cas9;

c) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и молекулу Cas9;

d) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9;

e) любой из вышеперечисленных a)-d), и матричную нуклеиновую кислоту; или

f) любой из вышеперечисленных a)-d), и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую матричную нуклеиновую кислоту.

6. Композиция по п.5, где молекула Cas9 содержит SEQ ID NO: 6611 или последовательность, гомологичную ей по меньшей мере на 95%.

7. Композиция по п.5, в которой молекула Cas9 содержит:

(a) SEQ ID NO: 7821;

(b) SEQ ID NO: 7822;

(c) SEQ ID NO: 7823;

(d) SEQ ID NO: 7824;

(e) SEQ ID NO: 7825;

(f) SEQ ID NO: 7825, далее содержащую лейцин в позиции 88 (C88L) в последовательности SEQ ID NO: 7825, и содержащую глутаминовую кислоту в позиции 582 (C582E) в последовательности SEQ ID NO: 7825;

(g) SEQ ID NO: 7826;

(h) SEQ ID NO: 7827;

(i) SEQ ID NO: 7828;

(j) SEQ ID NO: 7829;

(k) SEQ ID NO: 7830; или

(l) SEQ ID NO: 7831.

8. Композиция по любому из пп.5-7, в которой молекула gРНК и молекула Cas9 присутствуют в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).

9. Композиция по любому из пп.5-8, составленная в среде, пригодной для электропорации.

10. Композиция по любому из пп.5-9, где молекула gРНК находится в RNP с молекулой Cas9, и где RNP находится в концентрации менее чем примерно 10 мкМ.

11. Нуклеиновая кислота, которая кодирует молекулу gРНК по любому из пп.1-4.

12. Экспрессионный вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует молекулу gРНК по любому из пп. 1-4.

13. Способ изменения последовательности-мишени в CD34+ клетке, включающий введение в указанную клетку:

(a) молекулы gРНК по любому из пп.1-4 и молекулы Cas9;

(b) молекулы gРНК по любому из пп.1-4 и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9;

(c) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и молекулы Cas9;

(d) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу Cas9;

(e) любого из вышеперечисленных (a)-(b) и матричной нуклеиновой кислоты;

(f) любого из вышеперечисленных (a)-(b) и последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей матричную нуклеиновую кислоту;

(g) композиции по любому из пп.5-10; или

(h) вектора по п.12,

где последовательность-мишень представляет собой энхансер BCL11A.

14. Способ по п.13, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, примата или человека.

15. Способ по п.13 или 14, в котором клетка является гематопоэтической стволовой клеткой или клеткой-предшественником (HSPC).

16. Способ по любому из пп.13-15, в котором клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку.

17. Способ по любому из пп.13-16, в котором клетка находится в композиции, содержащей популяцию клеток, которая была обогащена CD34+ клетками.

18. Способ по любому из пп.13-17, в котором клетка была выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.

19. Способ по любому из пп.13-18, где изменение приводит к инделу в клетке внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК.

20. Способ по любому из пп.13-19, в котором способ приводит к популяции клеток, где по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95%, по меньшей мере около 96%, по меньшей мере около 97%, по меньшей мере около 98% или по меньшей мере около 99% клеток популяции изменены.

21. Способ по любому из пп.13-20, в котором изменение приводит к популяции клеток, которая способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток эритроидной линии, где указанная популяция дифференцированных клеток проявляет повышенный уровень фетального гемоглобина по сравнению с популяцией неизмененных клеток.

22. Способ по п.21, где указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную фракцию F клеток по сравнению с популяцией неизмененных клеток.

23. Способ по п.21 или 22, в котором популяция дифференцированных клеток продуцирует в среднем по меньшей мере примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм, или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.

24. CD34+ клетка для применения при лечении гемоглобинопатии, где клетка содержит индел внутри или вблизи целевой последовательности, комплементарной целевому домену молекулы gРНК по любому из пп.1-4.

25. CD34+ клетка для применения при лечении гемоглобинопатии, содержащая молекулу gРНК по любому из пп.1-4, композицию по любому из пп.5-10, нуклеиновую кислоту по п.11 или вектор по п.12.

26. Клетка по п.25, где экспрессия фетального гемоглобина увеличивается в указанной клетке или ее потомстве по сравнению с клеткой того же типа клеток или потомством такой клетки, которая не содержит молекулу gРНК или композицию, или нуклеиновую кислоту, или вектор.

27. Клетка по п.26, где клетка или ее потомство продуцирует, по меньшей мере, примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина.

28. Клетка по любому из пп.25-27, находившаяся в контакте с соединением, способствующим экспансии стволовых клеток.

29. Клетка по п.28, где соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой (1r,4r)-N¹-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин, метил 4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-7-карбоксилат, 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9H-пурин-6-иламино)этил)фенол или (S)-2-(6-(2-(1H-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9H-пурин-9-ил)пропан-1-ол или их комбинацию.

30. Клетка по любому из пп.24-29, где клетка представляет собой клетку млекопитающего, примата или человека.

31. Клетка по любому из пп.24-30, в котором клетка является гематопоэтической стволовой клеткой или клеткой-предшественником (HSPC).

32. Клетка по любому из пп.24-31, в котором клетка представляет собой CD34+CD90+ клетку.

33. Клетка по любому из пп.24-32, в котором клетка была выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.

34. Популяция CD34+ клеток для применения при лечении гемоглобинопатии, содержащая клетку по любому из пп.24-33.

35. Популяция клеток по п.34, где по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере, примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98% или, по меньшей мере примерно 99% клеток популяции являются клеткой по любому из пп.24-33.

36. Популяция клеток по п.34 или 35, где популяция клеток способна дифференцироваться в популяцию дифференцированных клеток, где указанная популяция дифференцированных клеток имеет увеличенную фракцию F клеток по сравнению с популяцией немодифицированных клеток того же типа.

37. Популяция клеток по п.36, где F клетки популяции дифференцированных клеток продуцируют в среднем по меньшей мере примерно 6 пикограмм, по меньшей мере примерно 7 пикограмм, по меньшей мере примерно 8 пикограмм, по меньшей мере примерно 9 пикограмм, по меньшей мере примерно 10 пикограмм, от примерно 8 до примерно 9 пикограмм или от примерно 9 до примерно 10 пикограмм фетального гемоглобина на клетку.

38. Популяция клеток по любому из пп.34-37, включающая:

(a) по меньшей мере 1e⁶ CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки;

(b) по меньшей мере 2e⁶ CD34+ клеток/кг массы тела пациенту, которому необходимо ввести клетки;

(c) по крайней мере 3e⁶ CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки;

(d) по меньшей мере 4e⁶ CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки; или

(e) от 2e⁶ до 10e⁶ CD34+ клеток/кг массы тела пациента, которому необходимо ввести клетки.

39. Популяция клеток по любому из пп.34-38, где по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 30% клеток популяции являются CD34+CD90+ клетками.

40. Популяция клеток по любому из пп.34-39, где популяция клеток выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.

41. Популяция клеток по любому из пп.34-40, где популяция клеток выделена из пациента, страдающего гемоглобинопатией.

42. Композиция для редактирования области энхансера BCL11a, содержащая популяцию клеток по любому из пп.34-41 и фармацевтически приемлемую среду.

43. Способ лечения гемоглобинопатии, включающий введение пациенту, в этом нуждающемуся, терапевтически эффективного количества клеток по любому из пп.24-33, популяции клеток по любому из пп.34-41 или композиции по п.42.

44. Способ по п.43, где гемоглобинопатия представляет собой бета-талассемию или серповидно-клеточную болезнь.

45. Способ получения популяции CD34+ клеток, включающий:

(a) предоставление популяции CD34+ клеток;

(b) культивирование указанной популяции CD34+ клеток ex vivo в среде для культивирования клеток, содержащей соединение, способствующее экспансии стволовых клеток; и

(c) введение в клетки указанной популяции CD34+ клеток молекулы gРНК по любому из пп.1-4, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу gРНК по любому из пп.1-4, композиции по любому из пп.5-10, нуклеиновой кислоты по п.11 или вектора по п.12.

46. Способ по п.45, где соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, представляет собой (1r,4r)-N¹-(2-бензил-7-(2-метил-2H-тетразол-5-ил)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-4-ил)циклогексан-1,4-диамин, метил 4-(3-пиперидин-1-илпропиламино)-9H-пиримидо[4,5-b]индол-7-карбоксилат, 4-(2-(2-(бензо[b]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9H-пурин-6-иламино)этил)фенол или (S)-2-(6-(2-(1H-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9H-пурин-9-ил) пропан-1-ол или их комбинацию.

47. Способ по п. 45 или 46, в котором среда для культивирования клеток содержит соединение, способствующее экспансии стволовых клеток, в концентрации от примерно 1 нМ до примерно 1 мМ.

48. Способ по любому из пп. 45-47, в котором культивирование на стадии (b) включает период культивирования перед осуществлением стадии (с).

49. Способ по п.48, в котором период культивирования перед осуществлением стадии (с) составляет по меньшей мере 12 часов, является периодом примерно от 1 дня до примерно 3 дней, является периодом примерно от 1 дня до 2 дней, является периодом примерно 2 дня.

50. Способ по любому из пп.45-49, в котором культивирование на стадии (b) включает период культивирования после осуществления стадии (с).

51. Способ по п.50, в котором период культивирования после осуществления стадии (с) составляет по меньшей мере 12 часов, является периодом от примерно 1 дня до примерно 10 дней, является периодом от примерно 1 дня до примерно 5 дней, является периодом от примерно 2 дней до примерно 4 дней, является периодом примерно 2 дня, является периодом примерно 3 дня, или является периодом примерно 4 дня.

52. Способ по любому из пп.45-51, в котором популяция клеток увеличивает численность по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз по сравнению с популяцией клеток, которая не была культивирована в соответствии со стадией (b).

53. Способ по любому из пп.45-52, в котором осуществление стадии (с) содержит электропорацию.

54. Способ по любому из пп.45-53, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), представляет собой популяцию клеток человека.

55. Способ по п.54, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), выделена из костного мозга, мобилизованной периферической крови или пуповинной крови.

56. Способ по п.54, в котором популяция клеток, предоставленная на стадии (а), выделена из пациента, страдающего гемоглобинопатией.

57. Способ по любому из пп.45-56, в котором после осуществления стадии (с) популяция клеток подвергается криоконсервации.

58. Способ по любому из пп.45-57, в котором, после осуществления стадии (с), по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90% по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98% или по меньшей мере примерно 99% клеток популяции содержат индел внутри или вблизи последовательности геномной ДНК, комплементарной целевому домену молекулы gРНК.

59. Молекула gРНК по любому из пп.1-4, композиция по любому из пп.5-10 или 42, нуклеиновая кислота по п.11, вектор по п.12, клетка по любому из пп.24-33 или популяция клеток по любому из пп. 34-41 для применения в качестве лекарственного средства.

60. Молекула gРНК по любому из пп.1-4, композиция по любому из пп.5-10 или 42, нуклеиновая кислота по п.11, вектор по п.12, клетка по любому из пп.24-33 или популяция клеток по любому из пп.34-41 для применения при изготовлении лекарственного средства.

Images