RU2810220C2 - Инсектицидные белки - Google Patents
Инсектицидные белки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2810220C2 RU2810220C2 RU2020132969A RU2020132969A RU2810220C2 RU 2810220 C2 RU2810220 C2 RU 2810220C2 RU 2020132969 A RU2020132969 A RU 2020132969A RU 2020132969 A RU2020132969 A RU 2020132969A RU 2810220 C2 RU2810220 C2 RU 2810220C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ser
- gly
- ala
- val
- thr
- Prior art date
Links
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 149
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 256
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 215
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 264
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 157
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 51
- 241000489947 Diabrotica virgifera virgifera Species 0.000 claims abstract description 44
- 241000489972 Diabrotica barberi Species 0.000 claims abstract description 27
- 241000489976 Diabrotica undecimpunctata howardi Species 0.000 claims abstract description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 157
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 127
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 127
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 113
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 113
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 106
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 96
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 86
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 85
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 50
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 39
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 33
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 30
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 29
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 29
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 28
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 20
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 17
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 claims description 16
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 12
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 14
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 3
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 abstract description 36
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 14
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 11
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 211
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 88
- 241001495401 Nitrococcus mobilis Species 0.000 description 68
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 62
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 59
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 54
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 51
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 43
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 42
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 42
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 40
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 30
- PWRITNSESKQTPW-NRPADANISA-N Val-Gln-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PWRITNSESKQTPW-NRPADANISA-N 0.000 description 30
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 30
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 30
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 29
- GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N Ala-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 28
- ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 28
- LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N Ala-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 28
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 28
- JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N Ala-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 28
- ZPWMEWYQBWSGAO-ZJDVBMNYSA-N Arg-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZPWMEWYQBWSGAO-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 28
- VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N Asn-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 28
- MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N 0.000 description 28
- RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 28
- MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N Asp-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 28
- IULKWYSYZSURJK-AVGNSLFASA-N Gln-Leu-Lys Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IULKWYSYZSURJK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 28
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 28
- OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N Glu-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 28
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 28
- MHHUEAIBJZWDBH-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN MHHUEAIBJZWDBH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 28
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 28
- NTBOEZICHOSJEE-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NTBOEZICHOSJEE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 28
- FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FNXSYBOHALPRHV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 28
- GIRSNERMXCMDBO-GARJFASQSA-N His-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O GIRSNERMXCMDBO-GARJFASQSA-N 0.000 description 28
- QLBXWYXMLHAREM-PYJNHQTQSA-N His-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N QLBXWYXMLHAREM-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 28
- IGJWJGIHUFQANP-LAEOZQHASA-N Ile-Gly-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N IGJWJGIHUFQANP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 28
- DSDPLOODKXISDT-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DSDPLOODKXISDT-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 28
- YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N Ile-Val-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 28
- CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N Leu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 28
- BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N Lys-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 28
- LUAJJLPHUXPQLH-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N LUAJJLPHUXPQLH-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 28
- HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 28
- SLQDSYZHHOKQSR-QXEWZRGKSA-N Met-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCSC SLQDSYZHHOKQSR-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 28
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 28
- VADLTGVIOIOKGM-BZSNNMDCSA-N Phe-His-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CN=CN1 VADLTGVIOIOKGM-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 28
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 28
- SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 28
- VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 28
- DMNANGOFEUVBRV-GJZGRUSLSA-N Pro-Trp-Gly Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 DMNANGOFEUVBRV-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 28
- UIPXCLNLUUAMJU-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIPXCLNLUUAMJU-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 28
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 28
- BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N Ser-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 28
- YXEYTHXDRDAIOJ-CWRNSKLLSA-N Ser-Trp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O YXEYTHXDRDAIOJ-CWRNSKLLSA-N 0.000 description 28
- PCMZJFMUYWIERL-ZKWXMUAHSA-N Ser-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PCMZJFMUYWIERL-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 28
- DCCGCVLVVSAJFK-NUMRIWBASA-N Thr-Asp-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N)O DCCGCVLVVSAJFK-NUMRIWBASA-N 0.000 description 28
- XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N Thr-Gly-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 28
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 28
- KZURUCDWKDEAFZ-XVSYOHENSA-N Thr-Phe-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O KZURUCDWKDEAFZ-XVSYOHENSA-N 0.000 description 28
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 28
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 28
- WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N Thr-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 28
- QGVBFDIREUUSHX-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QGVBFDIREUUSHX-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 28
- IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N Tyr-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O IEWKKXZRJLTIOV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 28
- LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 28
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 28
- JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 28
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 28
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 28
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 28
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 28
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 28
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 28
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 28
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 28
- OBFTYSPXDRROQO-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OBFTYSPXDRROQO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 27
- KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 27
- ZNZPKVQURDQFFS-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZNZPKVQURDQFFS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 27
- KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N Glu-Phe-Val Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N 0.000 description 27
- DMYACXMQUABZIQ-NRPADANISA-N Glu-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DMYACXMQUABZIQ-NRPADANISA-N 0.000 description 27
- UWHCKWNPWKTMBM-WDCWCFNPSA-N Lys-Thr-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O UWHCKWNPWKTMBM-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 27
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 27
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 27
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 27
- SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N Ala-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 26
- SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N Ala-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)NCC(O)=O SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 26
- WYOSXGYAKZQPGF-SRVKXCTJSA-N Asp-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WYOSXGYAKZQPGF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 26
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 26
- WDOCBGZHAQQIBL-IHPCNDPISA-N Phe-Trp-Ser Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 WDOCBGZHAQQIBL-IHPCNDPISA-N 0.000 description 26
- CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CC=C(O)C=C1 CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 26
- DJQIUOKSNRBTSV-CYDGBPFRSA-N Val-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N DJQIUOKSNRBTSV-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 26
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 26
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 25
- NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 25
- NCXTYSVDWLAQGZ-ZKWXMUAHSA-N Asn-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O NCXTYSVDWLAQGZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 25
- VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 25
- LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 25
- BYKZWDGMJLNFJY-XKBZYTNZSA-N Gln-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O BYKZWDGMJLNFJY-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 25
- IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 25
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 25
- SCWYHUQOOFRVHP-MBLNEYKQSA-N Gly-Ile-Thr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SCWYHUQOOFRVHP-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 25
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 25
- JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N Lys-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 25
- IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N Pro-Ala-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 25
- JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 25
- QWZIOCFPXMAXET-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QWZIOCFPXMAXET-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 25
- BVWADTBVGZHSLW-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N BVWADTBVGZHSLW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 25
- SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 25
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 25
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 25
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 25
- BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 24
- LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N Ser-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- UAQSZXGJGLHMNV-XEGUGMAKSA-N Ile-Gly-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N UAQSZXGJGLHMNV-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N Ala-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 22
- RTFXPCYMDYBZNQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RTFXPCYMDYBZNQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 22
- IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N Glu-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N 0.000 description 22
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 22
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 18
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 17
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 17
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 17
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 17
- -1 NitromobCRW Proteins 0.000 description 16
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 16
- SLQVFYWBGNNOTK-BYULHYEWSA-N Ile-Gly-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SLQVFYWBGNNOTK-BYULHYEWSA-N 0.000 description 15
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 description 14
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 14
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 14
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 14
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 13
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 13
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 13
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 13
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 12
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 12
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 12
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 12
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 12
- 241000489975 Diabrotica Species 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 11
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 241000738498 Epitrix pubescens Species 0.000 description 10
- 241001477931 Mythimna unipuncta Species 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 9
- 241001136249 Agriotes lineatus Species 0.000 description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 7
- 241000381325 Diabrotica virgifera zeae Species 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 7
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 7
- 241001147398 Ostrinia nubilalis Species 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 7
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 7
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 7
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 6
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 6
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 6
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 6
- 241001439019 Phthorimaea operculella Species 0.000 description 6
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 6
- OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N bifenthrin Chemical compound C1=CC=C(C=2C=CC=CC=2)C(C)=C1COC(=O)[C@@H]1[C@H](\C=C(/Cl)C(F)(F)F)C1(C)C OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N 0.000 description 6
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N phorate Chemical compound CCOP(=S)(OCC)SCSCC BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- XLNZEKHULJKQBA-UHFFFAOYSA-N terbufos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)SCSC(C)(C)C XLNZEKHULJKQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005874 Bifenthrin Substances 0.000 description 5
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 description 5
- 241000122106 Diatraea saccharalis Species 0.000 description 5
- 241001517923 Douglasiidae Species 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000482313 Globodera ellingtonae Species 0.000 description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- 241000255990 Helicoverpa Species 0.000 description 5
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 description 5
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001414989 Thysanoptera Species 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N cypermethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OC(C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N imidacloprid Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C1/NCCN1CC1=CC=C(Cl)N=C1 YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N permethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZXQYGBMAQZUVMI-RDDWSQKMSA-N (1S)-cis-(alphaR)-cyhalothrin Chemical compound CC1(C)[C@H](\C=C(/Cl)C(F)(F)F)[C@@H]1C(=O)O[C@@H](C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 ZXQYGBMAQZUVMI-RDDWSQKMSA-N 0.000 description 4
- ZFHGXWPMULPQSE-SZGBIDFHSA-N (Z)-(1S)-cis-tefluthrin Chemical compound FC1=C(F)C(C)=C(F)C(F)=C1COC(=O)[C@@H]1C(C)(C)[C@@H]1\C=C(/Cl)C(F)(F)F ZFHGXWPMULPQSE-SZGBIDFHSA-N 0.000 description 4
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 4
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 4
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 4
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 4
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 4
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 4
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 4
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 4
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 4
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 4
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 4
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 4
- 239000005946 Cypermethrin Substances 0.000 description 4
- 241000289763 Dasygaster padockina Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 239000005906 Imidacloprid Substances 0.000 description 4
- 241000400431 Keiferia lycopersicella Species 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241000255908 Manduca sexta Species 0.000 description 4
- 241000721451 Pectinophora gossypiella Species 0.000 description 4
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 description 4
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 4
- 241000254154 Sitophilus zeamais Species 0.000 description 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 239000005939 Tefluthrin Substances 0.000 description 4
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 4
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- CVXBEEMKQHEXEN-UHFFFAOYSA-N carbaryl Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)NC)=CC=CC2=C1 CVXBEEMKQHEXEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DUEPRVBVGDRKAG-UHFFFAOYSA-N carbofuran Chemical compound CNC(=O)OC1=CC=CC2=C1OC(C)(C)C2 DUEPRVBVGDRKAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N chlorpyrifos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005424 cypermethrin Drugs 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 4
- MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N dimethoate Chemical compound CNC(=O)CSP(=S)(OC)OC MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 229940056881 imidacloprid Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000005910 lambda-Cyhalothrin Substances 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 229960000490 permethrin Drugs 0.000 description 4
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- PGOOBECODWQEAB-UHFFFAOYSA-N (E)-clothianidin Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C(/NC)NCC1=CN=C(Cl)S1 PGOOBECODWQEAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CFBILACNYSPRPM-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(CO)(CO)NCC(O)=O CFBILACNYSPRPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1-[2,6-dichloro-4-(trifluoromethyl)phenyl]-4-[(trifluoromethyl)sulfinyl]-1H-pyrazole-3-carbonitrile Chemical compound NC1=C(S(=O)C(F)(F)F)C(C#N)=NN1C1=C(Cl)C=C(C(F)(F)F)C=C1Cl ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 3
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 3
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 3
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 3
- 241000343781 Chaetocnema pulicaria Species 0.000 description 3
- 239000005944 Chlorpyrifos Substances 0.000 description 3
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 3
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 3
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 241001414892 Delia radicum Species 0.000 description 3
- 239000005892 Deltamethrin Substances 0.000 description 3
- 239000005947 Dimethoate Substances 0.000 description 3
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 3
- 241001183323 Epitrix cucumeris Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005899 Fipronil Substances 0.000 description 3
- 241001442497 Globodera rostochiensis Species 0.000 description 3
- JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 3
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 3
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 3
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 241001597962 Leptinotarsa juncta Species 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 3
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 3
- 239000005916 Methomyl Substances 0.000 description 3
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 3
- 241001477928 Mythimna Species 0.000 description 3
- 241000721621 Myzus persicae Species 0.000 description 3
- 241000615716 Nephotettix nigropictus Species 0.000 description 3
- 241000238814 Orthoptera Species 0.000 description 3
- 241000346285 Ostrinia furnacalis Species 0.000 description 3
- 241001148062 Photorhabdus Species 0.000 description 3
- 241001439020 Phthorimaea Species 0.000 description 3
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 3
- 241000193943 Pratylenchus Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000098281 Scirpophaga innotata Species 0.000 description 3
- 240000003829 Sorghum propinquum Species 0.000 description 3
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 3
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 3
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 3
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005941 Thiamethoxam Substances 0.000 description 3
- 241000339374 Thrips tabaci Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000078534 Vaccinium myrtillus Species 0.000 description 3
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 3
- 229960005286 carbaryl Drugs 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 3
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 3
- 229960001591 cyfluthrin Drugs 0.000 description 3
- QQODLKZGRKWIFG-QSFXBCCZSA-N cyfluthrin Chemical compound CC1(C)[C@@H](C=C(Cl)Cl)[C@H]1C(=O)O[C@@H](C#N)C1=CC=C(F)C(OC=2C=CC=CC=2)=C1 QQODLKZGRKWIFG-QSFXBCCZSA-N 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 229960002483 decamethrin Drugs 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- OWZREIFADZCYQD-NSHGMRRFSA-N deltamethrin Chemical compound CC1(C)[C@@H](C=C(Br)Br)[C@H]1C(=O)O[C@H](C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 OWZREIFADZCYQD-NSHGMRRFSA-N 0.000 description 3
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229940013764 fipronil Drugs 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- UHXUZOCRWCRNSJ-QPJJXVBHSA-N methomyl Chemical compound CNC(=O)O\N=C(/C)SC UHXUZOCRWCRNSJ-QPJJXVBHSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 3
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- NWWZPOKUUAIXIW-FLIBITNWSA-N thiamethoxam Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C/1N(C)COCN\1CC1=CN=C(Cl)S1 NWWZPOKUUAIXIW-FLIBITNWSA-N 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N (E)-acetamiprid Chemical compound N#C/N=C(\C)N(C)CC1=CC=C(Cl)N=C1 WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N 0.000 description 2
- HOKKPVIRMVDYPB-UVTDQMKNSA-N (Z)-thiacloprid Chemical compound C1=NC(Cl)=CC=C1CN1C(=N/C#N)/SCC1 HOKKPVIRMVDYPB-UVTDQMKNSA-N 0.000 description 2
- 239000005875 Acetamiprid Substances 0.000 description 2
- 241000238818 Acheta domesticus Species 0.000 description 2
- 241001014341 Acrosternum hilare Species 0.000 description 2
- 241000253994 Acyrthosiphon pisum Species 0.000 description 2
- 241000673185 Aeolus Species 0.000 description 2
- 241000673167 Agriotes mancus Species 0.000 description 2
- 241000218473 Agrotis Species 0.000 description 2
- 241000566547 Agrotis ipsilon Species 0.000 description 2
- AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 2
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 2
- 102220592171 Alpha-lactalbumin_I98L_mutation Human genes 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 2
- 244000099147 Ananas comosus Species 0.000 description 2
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 2
- 241000254177 Anthonomus Species 0.000 description 2
- 241000532810 Anthonomus eugenii Species 0.000 description 2
- 241000254175 Anthonomus grandis Species 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 2
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 2
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 2
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 244000003416 Asparagus officinalis Species 0.000 description 2
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 2
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 2
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 2
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 2
- 240000006432 Carica papaya Species 0.000 description 2
- 241000902406 Chaetocnema Species 0.000 description 2
- 241000604356 Chamaepsila rosae Species 0.000 description 2
- 241000694614 Chilo polychrysa Species 0.000 description 2
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 2
- 241001414720 Cicadellidae Species 0.000 description 2
- 240000006740 Cichorium endivia Species 0.000 description 2
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 description 2
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 2
- 241001672694 Citrus reticulata Species 0.000 description 2
- 239000005888 Clothianidin Substances 0.000 description 2
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- 240000007154 Coffea arabica Species 0.000 description 2
- 241001267662 Criconemoides Species 0.000 description 2
- 101150102464 Cry1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000258924 Ctenocephalides felis Species 0.000 description 2
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 2
- 241000219130 Cucurbita pepo subsp. pepo Species 0.000 description 2
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 description 2
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- 241000627010 Delia brassica Species 0.000 description 2
- 241001529600 Diabrotica balteata Species 0.000 description 2
- 241000916731 Diabrotica speciosa Species 0.000 description 2
- 241000489973 Diabrotica undecimpunctata Species 0.000 description 2
- 241000122105 Diatraea Species 0.000 description 2
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000399948 Ditylenchus destructor Species 0.000 description 2
- 241000399949 Ditylenchus dipsaci Species 0.000 description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 2
- 241000400699 Elasmopalpus Species 0.000 description 2
- 241000400698 Elasmopalpus lignosellus Species 0.000 description 2
- 241000995027 Empoasca fabae Species 0.000 description 2
- 241001481670 Epicauta Species 0.000 description 2
- 241001301805 Epilachna Species 0.000 description 2
- 241000462639 Epilachna varivestis Species 0.000 description 2
- 241000303278 Epitrix Species 0.000 description 2
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 2
- 241000189565 Frankliniella Species 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- FNAJNWPDTIXYJN-CIUDSAMLSA-N Gln-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FNAJNWPDTIXYJN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 241001502121 Glossina brevipalpis Species 0.000 description 2
- ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N Glu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N Glu-Ser-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N Gly-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)CNC(=O)C[NH3+] XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 2
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 description 2
- 241000578422 Graphosoma lineatum Species 0.000 description 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 2
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 2
- 241000256257 Heliothis Species 0.000 description 2
- 241000256244 Heliothis virescens Species 0.000 description 2
- 241000498254 Heterodera glycines Species 0.000 description 2
- 241000580313 Heterodera zeae Species 0.000 description 2
- ZUELLZFHJUPFEC-PMVMPFDFSA-N His-Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ZUELLZFHJUPFEC-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- LPXHYGGZJOCAFR-MNXVOIDGSA-N Ile-Glu-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N LPXHYGGZJOCAFR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 description 2
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 2
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000400434 Keiferia Species 0.000 description 2
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 2
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 2
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- 241000258915 Leptinotarsa Species 0.000 description 2
- ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- UCDHVOALNXENLC-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCDHVOALNXENLC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 2
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 2
- 241000594036 Liriomyza Species 0.000 description 2
- 241000594031 Liriomyza sativae Species 0.000 description 2
- 241000966204 Lissorhoptrus oryzophilus Species 0.000 description 2
- 241000254022 Locusta migratoria Species 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 241001414826 Lygus Species 0.000 description 2
- IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LMVOVCYVZBBWQB-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LMVOVCYVZBBWQB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000005949 Malathion Substances 0.000 description 2
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 2
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 2
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000256010 Manduca Species 0.000 description 2
- 241000369513 Manduca quinquemaculata Species 0.000 description 2
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 2
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 2
- 108091022912 Mannose-6-Phosphate Isomerase Proteins 0.000 description 2
- 241001415013 Melanoplus Species 0.000 description 2
- 241001415015 Melanoplus differentialis Species 0.000 description 2
- 241001478965 Melanoplus femurrubrum Species 0.000 description 2
- 241001062280 Melanotus <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 2
- 241001143352 Meloidogyne Species 0.000 description 2
- 241000254043 Melolonthinae Species 0.000 description 2
- VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QAHFGYLFLVGBNW-DCAQKATOSA-N Met-Ala-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QAHFGYLFLVGBNW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 2
- 241001671709 Nezara viridula Species 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 241001147397 Ostrinia Species 0.000 description 2
- 241001520808 Panicum virgatum Species 0.000 description 2
- 241001657689 Papaipema nebris Species 0.000 description 2
- 241001143330 Paratrichodorus minor Species 0.000 description 2
- 241000721452 Pectinophora Species 0.000 description 2
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 2
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 2
- 241001608567 Phaedon cochleariae Species 0.000 description 2
- 241000275067 Phyllotreta Species 0.000 description 2
- 241000275069 Phyllotreta cruciferae Species 0.000 description 2
- 241000255972 Pieris <butterfly> Species 0.000 description 2
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 2
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 2
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 2
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 2
- 241000500439 Plutella Species 0.000 description 2
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 2
- 241000254103 Popillia Species 0.000 description 2
- 241000254101 Popillia japonica Species 0.000 description 2
- VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N Pro-Thr-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 2
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 2
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 241000040495 Punctodera Species 0.000 description 2
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 2
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 2
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 2
- 241000201375 Radopholus similis Species 0.000 description 2
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 2
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000167882 Rhopalosiphum maidis Species 0.000 description 2
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 2
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000800294 Sarocladium oryzae Species 0.000 description 2
- 241001249129 Scirpophaga incertulas Species 0.000 description 2
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 2
- 241000931987 Sesamia Species 0.000 description 2
- 241000661452 Sesamia nonagrioides Species 0.000 description 2
- 241000254181 Sitophilus Species 0.000 description 2
- 241000254152 Sitophilus oryzae Species 0.000 description 2
- 108020004688 Small Nuclear RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 2
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 2
- 241000532885 Sphenophorus Species 0.000 description 2
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 2
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 2
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 2
- 241001521235 Spodoptera eridania Species 0.000 description 2
- 241000256247 Spodoptera exigua Species 0.000 description 2
- 241000142883 Spodoptera ornithogalli Species 0.000 description 2
- 241000931706 Spodoptera praefica Species 0.000 description 2
- 240000003949 Sporobolus virginicus Species 0.000 description 2
- 239000005940 Thiacloprid Substances 0.000 description 2
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N 0.000 description 2
- SLUWOCTZVGMURC-BFHQHQDPSA-N Thr-Gly-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SLUWOCTZVGMURC-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 2
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 2
- 240000006909 Tilia x europaea Species 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 241000018137 Trialeurodes vaporariorum Species 0.000 description 2
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 2
- 241001267621 Tylenchulus semipenetrans Species 0.000 description 2
- AGDDLOQMXUQPDY-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AGDDLOQMXUQPDY-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 2
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 2
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 235000021029 blackberry Nutrition 0.000 description 2
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 2
- 235000003733 chicria Nutrition 0.000 description 2
- XFDJMIHUAHSGKG-UHFFFAOYSA-N chlorethoxyfos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC(Cl)C(Cl)(Cl)Cl XFDJMIHUAHSGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-[(dimethoxyphosphorothioyl)thio]succinate Chemical compound CCOC(=O)CC(SP(=S)(OC)OC)C(=O)OCC JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- RDYMFSUJUZBWLH-SVWSLYAFSA-N endosulfan Chemical compound C([C@@H]12)OS(=O)OC[C@@H]1[C@]1(Cl)C(Cl)=C(Cl)[C@@]2(Cl)C1(Cl)Cl RDYMFSUJUZBWLH-SVWSLYAFSA-N 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 2
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 229960000453 malathion Drugs 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- DSOOGBGKEWZRIH-UHFFFAOYSA-N nereistoxin Chemical compound CN(C)C1CSSC1 DSOOGBGKEWZRIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N parathion-methyl Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- OTKXWJHPGBRXCR-UHFFFAOYSA-N (2-chloro-4-nitrophenoxy)-dimethoxy-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl OTKXWJHPGBRXCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 1-methoxypropan-2-ol Chemical compound COCC(C)O ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- SBASXUCJHJRPEV-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxyethoxy)ethanol Chemical compound COCCOCCO SBASXUCJHJRPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid;azane Chemical compound [NH4+].CP(O)(=O)CCC(N)C([O-])=O ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000009062 ADP Ribose Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108010049290 ADP Ribose Transferases Proteins 0.000 description 1
- 240000004507 Abelmoschus esculentus Species 0.000 description 1
- 241000199753 Acanthoscurria Species 0.000 description 1
- 241000238819 Acheta Species 0.000 description 1
- 241001014340 Acrosternum Species 0.000 description 1
- 235000009434 Actinidia chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000298697 Actinidia deliciosa Species 0.000 description 1
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000253988 Acyrthosiphon Species 0.000 description 1
- 241000131326 Adephaga Species 0.000 description 1
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 1
- 241000256118 Aedes aegypti Species 0.000 description 1
- 241000673184 Aeolus mellillus Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000993143 Agromyza Species 0.000 description 1
- 241001368895 Agrotis gladiaria Species 0.000 description 1
- 241000001996 Agrotis orthogonia Species 0.000 description 1
- 241000218475 Agrotis segetum Species 0.000 description 1
- ZBLQIYPCUWZSRZ-QEJZJMRPSA-N Ala-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 ZBLQIYPCUWZSRZ-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N Ala-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 235000005254 Allium ampeloprasum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006108 Allium ampeloprasum Species 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 241000238679 Amblyomma Species 0.000 description 1
- 241001480834 Amblyomma variegatum Species 0.000 description 1
- 241000318389 Anaphothrips Species 0.000 description 1
- 240000000662 Anethum graveolens Species 0.000 description 1
- 241000256186 Anopheles <genus> Species 0.000 description 1
- 241000256182 Anopheles gambiae Species 0.000 description 1
- 241000256019 Antheraea yamamai Species 0.000 description 1
- 241000625753 Anticarsia Species 0.000 description 1
- 241000625764 Anticarsia gemmatalis Species 0.000 description 1
- 241000256579 Anuraphis Species 0.000 description 1
- 241001584957 Apamea devastator Species 0.000 description 1
- 241000294569 Aphelenchoides Species 0.000 description 1
- 241001124076 Aphididae Species 0.000 description 1
- 241000372435 Aphidoletes aphidimyza Species 0.000 description 1
- 241001600407 Aphis <genus> Species 0.000 description 1
- 241001600408 Aphis gossypii Species 0.000 description 1
- 235000003276 Apios tuberosa Nutrition 0.000 description 1
- 241000256836 Apis Species 0.000 description 1
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000010744 Arachis villosulicarpa Nutrition 0.000 description 1
- 241001629188 Aradus parvicornis Species 0.000 description 1
- 241000196805 Araeolaimida Species 0.000 description 1
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 1
- 241000500980 Archostemata Species 0.000 description 1
- 235000005827 Arthrocnemum glaucum Nutrition 0.000 description 1
- 241000244176 Ascaridida Species 0.000 description 1
- OOXUBGLNDRGOKT-FXQIFTODSA-N Asn-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OOXUBGLNDRGOKT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N Asn-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589941 Azospirillum Species 0.000 description 1
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000865127 Belonolaimus gracilis Species 0.000 description 1
- 241000580218 Belonolaimus longicaudatus Species 0.000 description 1
- 241000254123 Bemisia Species 0.000 description 1
- 241001302798 Bemisia argentifolii Species 0.000 description 1
- 241001148506 Bitylenchus dubius Species 0.000 description 1
- 241000929635 Blissus Species 0.000 description 1
- 241001629132 Blissus leucopterus Species 0.000 description 1
- 241000255791 Bombyx Species 0.000 description 1
- 241000238678 Boophilus Species 0.000 description 1
- 235000003717 Boswellia sacra Nutrition 0.000 description 1
- 235000012035 Boswellia serrata Nutrition 0.000 description 1
- 240000007551 Boswellia serrata Species 0.000 description 1
- 235000005156 Brassica carinata Nutrition 0.000 description 1
- 244000257790 Brassica carinata Species 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 1
- 235000004221 Brassica oleracea var gemmifera Nutrition 0.000 description 1
- 244000308368 Brassica oleracea var. gemmifera Species 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 241000555281 Brevibacillus Species 0.000 description 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- 241000907223 Bruchinae Species 0.000 description 1
- 241000243770 Bursaphelenchus Species 0.000 description 1
- 241000243771 Bursaphelenchus xylophilus Species 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 101150078024 CRY2 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001343488 Camellia caudata Species 0.000 description 1
- 235000012766 Cannabis sativa ssp. sativa var. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000012765 Cannabis sativa ssp. sativa var. spontanea Nutrition 0.000 description 1
- 241000131321 Carabus <genus> Species 0.000 description 1
- 241000249823 Carabus granulatus Species 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001465828 Cecidomyiidae Species 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- 241001124145 Cerotoma Species 0.000 description 1
- 241000426499 Chilo Species 0.000 description 1
- 241000661304 Chilo auricilius Species 0.000 description 1
- 241000426497 Chilo suppressalis Species 0.000 description 1
- 241000256128 Chironomus <genus> Species 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 241000195597 Chlamydomonas reinhardtii Species 0.000 description 1
- 241001101641 Chlorochroa Species 0.000 description 1
- 241001101640 Chlorochroa sayi Species 0.000 description 1
- 241000088885 Chlorops Species 0.000 description 1
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000253343 Chromadorea Species 0.000 description 1
- 241001220310 Chromadorida Species 0.000 description 1
- 241000588881 Chromobacterium Species 0.000 description 1
- 241001334920 Chromobacterium piscinae Species 0.000 description 1
- 241001332334 Chromobacterium subtsugae Species 0.000 description 1
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 1
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 1
- 241001364932 Chrysodeixis Species 0.000 description 1
- 241001367803 Chrysodeixis includens Species 0.000 description 1
- 241000131044 Chrysomela Species 0.000 description 1
- 241001675086 Chrysomela schaefferi Species 0.000 description 1
- 241000902363 Chrysomela scripta Species 0.000 description 1
- 241000894429 Chrysomela tremula Species 0.000 description 1
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 description 1
- 241001327638 Cimex lectularius Species 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 244000241235 Citrullus lanatus Species 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 240000000560 Citrus x paradisi Species 0.000 description 1
- 241001498622 Cixius wagneri Species 0.000 description 1
- 241000186650 Clavibacter Species 0.000 description 1
- 240000002814 Clintonia borealis Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000098277 Cnaphalocrocis Species 0.000 description 1
- 241000098289 Cnaphalocrocis medinalis Species 0.000 description 1
- 241001362579 Cochylis Species 0.000 description 1
- 241000540393 Cochylis hospes Species 0.000 description 1
- 235000007460 Coffea arabica Nutrition 0.000 description 1
- 241001529598 Colaspis Species 0.000 description 1
- 241001529599 Colaspis brunnea Species 0.000 description 1
- 101800004637 Communis Proteins 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 241000683561 Conoderus Species 0.000 description 1
- 244000018436 Coriandrum sativum Species 0.000 description 1
- 241000258922 Ctenocephalides Species 0.000 description 1
- 235000009847 Cucumis melo var cantalupensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000015001 Cucumis melo var inodorus Nutrition 0.000 description 1
- 240000002495 Cucumis melo var. inodorus Species 0.000 description 1
- 241000721021 Curculio Species 0.000 description 1
- 241001503151 Curculio glandium Species 0.000 description 1
- 241001156075 Cyclocephala Species 0.000 description 1
- 244000019459 Cynara cardunculus Species 0.000 description 1
- 235000019106 Cynara scolymus Nutrition 0.000 description 1
- 241001414890 Delia Species 0.000 description 1
- 241001609607 Delia platura Species 0.000 description 1
- 241001392666 Dercetina trifasciata Species 0.000 description 1
- 241001265489 Desmodorida Species 0.000 description 1
- 241000139104 Desmoscolecida Species 0.000 description 1
- 241000916726 Diabrotica cristata Species 0.000 description 1
- 241000916725 Diabrotica lemniscata Species 0.000 description 1
- 241000435326 Diabrotica nummularis Species 0.000 description 1
- 241000435279 Diabrotica scutellata Species 0.000 description 1
- 241000301143 Diabrotica tibialis Species 0.000 description 1
- 241000489977 Diabrotica virgifera Species 0.000 description 1
- 241000916730 Diabrotica viridula Species 0.000 description 1
- 241000721035 Diaprepes Species 0.000 description 1
- 241000721027 Diaprepes abbreviatus Species 0.000 description 1
- 241000879145 Diatraea grandiosella Species 0.000 description 1
- 241000162400 Dicladispa armigera Species 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000011511 Diospyros Nutrition 0.000 description 1
- 244000236655 Diospyros kaki Species 0.000 description 1
- 241000502061 Diplogasterida Species 0.000 description 1
- 241000238792 Diploptera Species 0.000 description 1
- 241000399934 Ditylenchus Species 0.000 description 1
- 241000932610 Dolichodorus Species 0.000 description 1
- 241000201427 Dorylaimida Species 0.000 description 1
- 235000014466 Douglas bleu Nutrition 0.000 description 1
- 241001249517 Drosophila milleri Species 0.000 description 1
- 241000255313 Drosophila pseudoobscura Species 0.000 description 1
- 241000255345 Drosophila simulans Species 0.000 description 1
- 241000255334 Drosophila yakuba Species 0.000 description 1
- 240000008929 Dunbaria punctata Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000241133 Earias Species 0.000 description 1
- 241001572697 Earias vittella Species 0.000 description 1
- 241001183635 Echinocnemus Species 0.000 description 1
- 240000001680 Eleocharis parvula Species 0.000 description 1
- 101100001673 Emericella variicolor andH gene Proteins 0.000 description 1
- 241000995023 Empoasca Species 0.000 description 1
- 241000086608 Empoasca vitis Species 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000578375 Enoplida Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000701832 Enterobacteria phage T3 Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001183322 Epitrix hirtipennis Species 0.000 description 1
- 241001183280 Epitrix tuberis Species 0.000 description 1
- 241001226424 Erato <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 1
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 239000005961 Ethoprophos Substances 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 241001494663 Eucalyptus vittata Species 0.000 description 1
- 241000914492 Euphranta lemniscata Species 0.000 description 1
- 241000098297 Euschistus Species 0.000 description 1
- 241001665433 Euschistus conspersus Species 0.000 description 1
- 241000653072 Euthyrrhapha pacifica Species 0.000 description 1
- 241000417383 Felimida elegantula Species 0.000 description 1
- 241000233488 Feltia Species 0.000 description 1
- 241000233490 Feltia jaculifera Species 0.000 description 1
- 241001368779 Feltia subgothica Species 0.000 description 1
- 244000235816 Fimbristylis cinnamometorum Species 0.000 description 1
- 240000006927 Foeniculum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000004204 Foeniculum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 1
- 239000004863 Frankincense Substances 0.000 description 1
- 241000654868 Frankliniella fusca Species 0.000 description 1
- 241000927584 Frankliniella occidentalis Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000896533 Gliocladium Species 0.000 description 1
- SXGMGNZEHFORAV-IUCAKERBSA-N Gln-Lys-Gly Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N SXGMGNZEHFORAV-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241001442498 Globodera Species 0.000 description 1
- 241001489135 Globodera pallida Species 0.000 description 1
- 241000131723 Glossata Species 0.000 description 1
- 241000257324 Glossina <genus> Species 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QPTNELDXWKRIFX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O QPTNELDXWKRIFX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N Gly-Leu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 1
- 241001465807 Heliconius Species 0.000 description 1
- 241001466369 Heliconius erato Species 0.000 description 1
- 241001481375 Heliconius melpomene Species 0.000 description 1
- 241001148481 Helicotylenchus Species 0.000 description 1
- 241001148478 Hemicriconemoides Species 0.000 description 1
- 241001267658 Hemicycliophora Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000897710 Hesperiphona vespertina Species 0.000 description 1
- 241000131722 Heterobathmiina Species 0.000 description 1
- 241001480224 Heterodera Species 0.000 description 1
- 241001481225 Heterodera avenae Species 0.000 description 1
- 241000040388 Heterodera carotae Species 0.000 description 1
- 241000379510 Heterodera schachtii Species 0.000 description 1
- 241000040487 Heterodera trifolii Species 0.000 description 1
- 241000995626 Homalodisca Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000953492 Homo sapiens Inositol hexakisphosphate and diphosphoinositol-pentakisphosphate kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000953488 Homo sapiens Inositol hexakisphosphate and diphosphoinositol-pentakisphosphate kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 241001540513 Hoplolaimus Species 0.000 description 1
- 241001254664 Hoplolaimus columbus Species 0.000 description 1
- 241001540500 Hoplolaimus galeatus Species 0.000 description 1
- 241001032366 Hoplolaimus magnistylus Species 0.000 description 1
- 241001260426 Horistonotus Species 0.000 description 1
- 241000319560 Hydrellia Species 0.000 description 1
- 241001522650 Hydroporus memnonius Species 0.000 description 1
- 241001351188 Hylemya Species 0.000 description 1
- 241000370519 Hypena Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000577499 Hypothenemus Species 0.000 description 1
- 241000577496 Hypothenemus hampei Species 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 102100037739 Inositol hexakisphosphate and diphosphoinositol-pentakisphosphate kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037736 Inositol hexakisphosphate and diphosphoinositol-pentakisphosphate kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241001473007 Ips pini Species 0.000 description 1
- 241001536907 Isolaimida Species 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241001325860 Lacanobia oleracea Species 0.000 description 1
- 244000303847 Lagenaria vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000009797 Lagenaria vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241001470016 Laodelphax Species 0.000 description 1
- 241001470017 Laodelphax striatella Species 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241001142635 Lema Species 0.000 description 1
- 241001175702 Lema trilineata Species 0.000 description 1
- 241000314941 Leptinotarsa texana Species 0.000 description 1
- 241001198950 Leptosphaerulina trifolii Species 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241000683448 Limonius Species 0.000 description 1
- 235000006550 Liquidambar Nutrition 0.000 description 1
- 241000208682 Liquidambar Species 0.000 description 1
- 241000594033 Liriomyza bryoniae Species 0.000 description 1
- 241000594034 Liriomyza huidobrensis Species 0.000 description 1
- 241000396080 Lissorhoptrus Species 0.000 description 1
- 241000254023 Locusta Species 0.000 description 1
- 241001220360 Longidorus Species 0.000 description 1
- 241001242941 Longidorus breviannulatus Species 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 241001414823 Lygus hesperus Species 0.000 description 1
- 241000501345 Lygus lineolaris Species 0.000 description 1
- 241000568397 Lysinibacillus Species 0.000 description 1
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 1
- 241001544487 Macromiidae Species 0.000 description 1
- 241000721715 Macrosiphum Species 0.000 description 1
- 241000721714 Macrosiphum euphorbiae Species 0.000 description 1
- 241001330975 Magnaporthe oryzae Species 0.000 description 1
- 241000710118 Maize chlorotic mottle virus Species 0.000 description 1
- 244000081841 Malus domestica Species 0.000 description 1
- 240000006582 Malus fusca Species 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 102000048193 Mannose-6-phosphate isomerases Human genes 0.000 description 1
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 1
- 241001478935 Melanoplus bivittatus Species 0.000 description 1
- 241000922538 Melanoplus sanguinipes Species 0.000 description 1
- 241000243784 Meloidogyne arenaria Species 0.000 description 1
- 241000611260 Meloidogyne chitwoodi Species 0.000 description 1
- 241000243786 Meloidogyne incognita Species 0.000 description 1
- 241000243785 Meloidogyne javanica Species 0.000 description 1
- 241000604677 Melpomene <spider> Species 0.000 description 1
- 241001126261 Mermithida Species 0.000 description 1
- 241001540470 Mesocriconema Species 0.000 description 1
- 241001540472 Mesocriconema xenoplax Species 0.000 description 1
- 244000058667 Micropera callosa Species 0.000 description 1
- 241001220460 Monhysterida Species 0.000 description 1
- 241001220354 Mononchida Species 0.000 description 1
- 101150054907 Mrps12 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000111261 Mucuna pruriens Species 0.000 description 1
- 235000008540 Mucuna pruriens var utilis Nutrition 0.000 description 1
- 235000003805 Musa ABB Group Nutrition 0.000 description 1
- 241001370357 Muspiceida Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 241000910000 Myxophaga Species 0.000 description 1
- 241000721623 Myzus Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000201433 Nacobbus Species 0.000 description 1
- 241000201432 Nacobbus aberrans Species 0.000 description 1
- 241001575341 Neoscona punctigera Species 0.000 description 1
- 241000359016 Nephotettix Species 0.000 description 1
- 241000358422 Nephotettix cincticeps Species 0.000 description 1
- 241001671714 Nezara Species 0.000 description 1
- 241001556090 Nilaparvata Species 0.000 description 1
- 241001556089 Nilaparvata lugens Species 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000015729 Nyctiophylax armigera Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000874574 Oides decempunctatus Species 0.000 description 1
- 241000219830 Onobrychis Species 0.000 description 1
- 241000131062 Oulema Species 0.000 description 1
- 241001570894 Oulema oryzae Species 0.000 description 1
- 235000001591 Pachyrhizus erosus Nutrition 0.000 description 1
- 244000215747 Pachyrhizus erosus Species 0.000 description 1
- 235000018669 Pachyrhizus tuberosus Nutrition 0.000 description 1
- 241000179039 Paenibacillus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 244000133018 Panax trifolius Species 0.000 description 1
- 241000370704 Papaipema Species 0.000 description 1
- 241000193157 Paraclostridium bifermentans Species 0.000 description 1
- 241000820381 Paranapiacaba significata Species 0.000 description 1
- 241001220391 Paratrichodorus Species 0.000 description 1
- 241001516563 Paratrioza Species 0.000 description 1
- 241001622647 Parnara Species 0.000 description 1
- 241001622642 Parnara bada Species 0.000 description 1
- 101710091688 Patatin Proteins 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N Perchloroethylene Chemical group ClC(Cl)=C(Cl)Cl CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001013845 Peridroma Species 0.000 description 1
- 241001013804 Peridroma saucia Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 244000062780 Petroselinum sativum Species 0.000 description 1
- 241001608568 Phaedon Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- 108091000041 Phosphoenolpyruvate Carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241001148064 Photorhabdus luminescens Species 0.000 description 1
- 244000058811 Phreatia pusilla Species 0.000 description 1
- 241001640279 Phyllophaga Species 0.000 description 1
- 241000117407 Physochila griseola Species 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241001236219 Pinus echinata Species 0.000 description 1
- 235000005018 Pinus echinata Nutrition 0.000 description 1
- 235000017339 Pinus palustris Nutrition 0.000 description 1
- 241000218621 Pinus radiata Species 0.000 description 1
- 235000008577 Pinus radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003889 Piper guineense Species 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 description 1
- 244000207867 Pistia stratiotes Species 0.000 description 1
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 1
- 241000499610 Placogenys cockerelli Species 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241001499741 Plantago arenaria Species 0.000 description 1
- 235000015266 Plantago major Nutrition 0.000 description 1
- 241001235327 Platypleura hirtipennis Species 0.000 description 1
- 241001427555 Polyphaga <Blattaria> Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 241000193978 Pratylenchus brachyurus Species 0.000 description 1
- 241000193957 Pratylenchus crenatus Species 0.000 description 1
- 241000201396 Pratylenchus hexincisus Species 0.000 description 1
- 241000193960 Pratylenchus minyus Species 0.000 description 1
- 241000193940 Pratylenchus penetrans Species 0.000 description 1
- 241000193953 Pratylenchus scribneri Species 0.000 description 1
- 241000193955 Pratylenchus thornei Species 0.000 description 1
- 241000978522 Pratylenchus zeae Species 0.000 description 1
- 241000042115 Propylea Species 0.000 description 1
- 241000590524 Protaphis middletonii Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710197133 Protein TIC 100 Proteins 0.000 description 1
- 235000006029 Prunus persica var nucipersica Nutrition 0.000 description 1
- 244000017714 Prunus persica var. nucipersica Species 0.000 description 1
- 241000914629 Pseudatomoscelis Species 0.000 description 1
- 241000721694 Pseudatomoscelis seriatus Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 240000001416 Pseudotsuga menziesii Species 0.000 description 1
- 235000005386 Pseudotsuga menziesii var menziesii Nutrition 0.000 description 1
- 241001417949 Psychrolutidae Species 0.000 description 1
- 241001466030 Psylloidea Species 0.000 description 1
- 235000014360 Punica granatum Nutrition 0.000 description 1
- 244000294611 Punica granatum Species 0.000 description 1
- 241000228454 Pyrenophora graminea Species 0.000 description 1
- 241000327778 Quinisulcius Species 0.000 description 1
- 241000327774 Quinisulcius acutus Species 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 241000201377 Radopholus Species 0.000 description 1
- 241000238680 Rhipicephalus microplus Species 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000125162 Rhopalosiphum Species 0.000 description 1
- 241001540480 Rotylenchulus Species 0.000 description 1
- 241000702971 Rotylenchulus reniformis Species 0.000 description 1
- 241001132771 Rotylenchus buxophilus Species 0.000 description 1
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 235000003042 Salicornia europaea Nutrition 0.000 description 1
- 240000002625 Salsola soda Species 0.000 description 1
- 101100199945 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) rps1201 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000545593 Scolytinae Species 0.000 description 1
- 241001347878 Scrobipalpula Species 0.000 description 1
- 241000332476 Scutellonema Species 0.000 description 1
- HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N Ser-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N Ser-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000563489 Sesamia inferens Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000176085 Sogatella Species 0.000 description 1
- 241000176086 Sogatella furcifera Species 0.000 description 1
- 101100425597 Solanum lycopersicum Tm-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100425598 Solanum lycopersicum tm-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001492664 Solenopsis <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 241000958652 Solenopsis molesta Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 229920002334 Spandex Polymers 0.000 description 1
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 description 1
- 241000244042 Spirurida Species 0.000 description 1
- 241000931752 Spodoptera mauritia Species 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 241000116011 Stenocarpella macrospora Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000098287 Striacosta Species 0.000 description 1
- 241000098292 Striacosta albicosta Species 0.000 description 1
- 241000243788 Strongylida Species 0.000 description 1
- 241000196660 Subanguina Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 241000787015 Tetanops Species 0.000 description 1
- 241000787011 Tetanops myopaeformis Species 0.000 description 1
- 241000344246 Tetranychus cinnabarinus Species 0.000 description 1
- 241001454293 Tetranychus urticae Species 0.000 description 1
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 1
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 241000239292 Theraphosidae Species 0.000 description 1
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- VUVCRYXYUUPGSB-GLLZPBPUSA-N Thr-Gln-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O VUVCRYXYUUPGSB-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000189579 Thripidae Species 0.000 description 1
- 241000339373 Thrips palmi Species 0.000 description 1
- 241000896282 Thrips urticae Species 0.000 description 1
- 241001101718 Thyanta Species 0.000 description 1
- 241000341890 Thyanta accerra Species 0.000 description 1
- 241001101719 Thyanta pallidovirens Species 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 241000018135 Trialeurodes Species 0.000 description 1
- 241000254086 Tribolium <beetle> Species 0.000 description 1
- 241000254113 Tribolium castaneum Species 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241000255985 Trichoplusia Species 0.000 description 1
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 241001389006 Tuta absoluta Species 0.000 description 1
- 241000243782 Tylenchida Species 0.000 description 1
- 241000855019 Tylenchorhynchus Species 0.000 description 1
- 241001267618 Tylenchulus Species 0.000 description 1
- VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N Tyr-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 235000003095 Vaccinium corymbosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 1
- IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N Val-Asn-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- FTKXYXACXYOHND-XUXIUFHCSA-N Val-Ile-Leu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FTKXYXACXYOHND-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241001578847 Xanthodes Species 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 241000607757 Xenorhabdus Species 0.000 description 1
- 241000123579 Xenorhabdus bovienii Species 0.000 description 1
- 241000607735 Xenorhabdus nematophila Species 0.000 description 1
- 241000201423 Xiphinema Species 0.000 description 1
- 241000201421 Xiphinema index Species 0.000 description 1
- 241000019288 Xiphinema pachtaicum Species 0.000 description 1
- 241000290086 Yersinia entomophaga Species 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- 241000130671 Zeugloptera Species 0.000 description 1
- 241001520823 Zoysia Species 0.000 description 1
- 101150067314 aadA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 231100000460 acute oral toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N anhydrous amyl acetate Natural products CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 235000016520 artichoke thistle Nutrition 0.000 description 1
- 235000021405 artificial diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000000183 arugula Nutrition 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000892 attapulgite Drugs 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- YFXPPSKYMBTNAV-UHFFFAOYSA-N bensultap Chemical compound C=1C=CC=CC=1S(=O)(=O)SCC(N(C)C)CSS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 YFXPPSKYMBTNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021014 blueberries Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940043232 butyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009120 camo Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000005607 chanvre indien Nutrition 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052570 clay Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 235000020788 dietary exposure Nutrition 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000004879 dioscorea Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- VJYFKVYYMZPMAB-UHFFFAOYSA-N ethoprophos Chemical compound CCCSP(=O)(OCC)SCCC VJYFKVYYMZPMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093499 ethyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000011487 hemp Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012145 high-salt buffer Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 108010004855 juvenile hormone epoxide hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 235000021190 leftovers Nutrition 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000001069 nematicidal effect Effects 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229910052625 palygorskite Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NONJJLVGHLVQQM-JHXYUMNGSA-N phenethicillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C(C)OC1=CC=CC=C1 NONJJLVGHLVQQM-JHXYUMNGSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 231100000208 phytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000885 phytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010204 pine bark Nutrition 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 239000008262 pumice Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002728 pyrethroid Substances 0.000 description 1
- 229910052903 pyrophyllite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021013 raspberries Nutrition 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 101150015537 rps12 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150098466 rpsL gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000010845 search algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011122 softwood Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004759 spandex Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- AWYOMXWDGWUJHS-UHFFFAOYSA-N tebupirimfos Chemical compound CCOP(=S)(OC(C)C)OC1=CN=C(C(C)(C)C)N=C1 AWYOMXWDGWUJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229950011008 tetrachloroethylene Drugs 0.000 description 1
- 239000003860 topical agent Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000005029 transcription elongation Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- 101150019416 trpA gene Proteins 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 239000004562 water dispersible granule Substances 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве. Изобретение раскрывает новые инсектицидные белки, характеризующиеся токсичностью в отношении представителей отряда жесткокрылых, конкретно в отношении западного, северного и южного кукурузных корневых жуков. Изобретение может быть использовано, например, для получения трансгенных растений с целью обеспечения их защиты от вреда, наносимого указанными насекомыми. 12 н. и 3 з.п. ф-лы, 18 табл., 12 пр.
Description
[0001] Перечень последовательностей в текстовом формате ASCII, предоставленный в соответствии с 37 C.F.R. § 1.821, под названием "81547_ST25.txt", размером 305 килобайт, созданный 14 марта 2018 г. и поданный с помощью EFS-Web, представлен вместо бумажной копии. Данный перечень последовательностей тем самым включен посредством ссылки в описание данного документа для его раскрытия.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Настоящее изобретение относится к областям белковой инженерии, молекулярной биологии растений и контроля вредителей. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новому белку и его вариантам, характеризующимся инсектицидной активностью, нуклеиновым кислотам, экспрессия которых приводит к образованию инсектицидных белков, а также способам получения и способам применения инсектицидных белков и соответствующих нуклеиновых кислот для контроля насекомых.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Насекомые-вредители являются главной причиной потерь урожая. Только в США ежегодные потери, вызванные заражением различными видами насекомых, составляют миллиарды долларов. В дополнение к потерям урожая полевых культур, насекомые-вредители также являются отрицательным фактором для плантаторов, выращивающих овощи и фрукты, специалистов по выращиванию декоративных цветов, и они являются неприятностью для садоводов и домовладельцев.
[0004] Наиболее пагубными вредителями кукурузы считаются разные виды кукурузного корневого жука. В Соединенных Штатах тремя важными видами являются Diabrotica virgifera virgifera, западный кукурузный корневой жук, D. longicornis barberi, северный кукурузный корневой жук и D. undecimpunctata howardi, южный кукурузный корневой жук. Основными вредителями кукурузы в кукурузном поясе США считаются только западный и северный кукурузные корневые жуки. Дополнительно, важным коревым жуком-вредителем кукурузы в южных штатах США является мексиканский кукурузный корневой жук Diabrotica virgifera zeae. Наиболее существенный вред растению наносят личинки кукурузного корневого жука, поскольку они питаются фактически исключительно корнями кукурузы. Это поражение выражается в увеличении полегания растений, снижении урожая зерна и растительной массы, а также в изменении содержания питательных веществ в зерне. Поедание личинками также оказывает косвенные воздействия на кукурузу тем, что в его результате в корнях открываются ходы для заражений бактериями и грибами, что приводит к заболеваниям, выражающимся в гниении корня и стебля. Взрослые особи кукурузного корневого жука активны на кукурузных полях поздним летом, когда они питаются початками, кистями нитей рыльца и пыльцой, что препятствует нормальному опылению.
[0005] Кукурузных корневых жуков контролируют, главным образом, путем усиленного применения химических пестицидов, которые проявляют активность путем подавления роста насекомых, препятствования поеданию насекомыми или их размножению, или вызывая гибель. Таким путем может быть достигнут надлежащий контроль кукурузного корневого жука, однако иногда эти химические вещества также могут воздействовать и на другие, полезные организмы. Другой проблемой, возникающей в результате широкого применения химических пестицидов, является возникновение устойчивых видов насекомых. Еще одна проблема вызвана тем фактом, что личинки кукурузного корневого жука питаются под землей, что затрудняет нанесение "спасательных" обработок инсектицидами. Поэтому в большинстве случаев нанесения инсектицидов осуществляются профилактически, во время посева. Результатом такой практики является большая нагрузка на окружающую среду. Частично эту нагрузку ослабляют за счет применения различных способов ведения фермерского хозяйства, однако существует растущая потребность в альтернативных механизмах контроля вредителей.
[0006] Биологические средства для контроля вредителей, такие как штаммы Bacillus thuringiensis (Bt), экспрессирующие пестицидные токсины, как, например, δ-эндотоксины (дельта-эндотоксины; также называемые кристаллическими токсинами или белками Cry), были применены к сельскохозяйственным культурам с удовлетворительными результатами в отношении насекомых-вредителей. δ-эндотоксины представляют собой белки, содержащиеся в кристаллической матрице, которые, как известно, обладают инсектицидной активностью при поглощении некоторыми насекомыми. Несколько нативных белков Cry из Bacillus thuringiensis или сконструированных белков Cry были экспрессированы в трансгенных сельскохозяйственных культурах и использовались в коммерческих целях для контроля некоторых чешуекрылых и жесткокрылых насекомых-вредителей. Например, начиная с 2003 года в США коммерчески доступны трансгенные гибриды кукурузы, которые осуществляют контроль кукурузного корневого жука посредством экспрессии белка Cry3Bb1, Cry34Ab1/Cry35Ab1 или модифицированного белка Cry3A (mCry3A) или Cry3Ab (eCry3.1Ab).
[0007] Хотя было показано, что использование трансгенных растений, экспрессирующих белки Cry, является чрезвычайно эффективным, известны насекомые-вредители, которые теперь характеризуются устойчивостью к белкам Cry, экспрессируемым в некоторых трансгенных растениях. Следовательно, остается необходимость в идентификации новых и эффективных средств для контроля вредителей, которые обеспечивают экономическую выгоду фермерам и которые являются экологически приемлемыми. В особенности, необходимыми являются белки, которые токсичны по отношению к видам Diabrotica, главному вредителю кукурузы, способ действия которых отличается от существующих продуктов для контроля насекомых в качестве средства для ослабления развития устойчивости. Кроме того, необходима доставка средств для контроля насекомых с помощью продуктов, которые сводят к минимуму нагрузку на окружающую среду, как и с помощью трансгенных растений.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
[0008] Ввиду этих потребностей настоящее изобретение предусматривает новые инсектицидные белки, а именно NitromobCRW, а также белки, которые в значительной степени идентичны NitromobCRW и его вариантам. Белки по настоящему изобретению характеризуются токсичностью по отношению к кукурузному корневому жуку (Diabrotica spp). Белки по настоящему изобретению также могут характеризоваться токсичностью по отношению к другим жесткокрылым и/или чешуекрылым. Настоящее изобретение дополнительно относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые кодируют NitromobCRW или его варианты, комплементарным им
последовательностям, или которые в значительной степени идентичны NitromobCRW и его вариантам.
[0009] Настоящее изобретение также предусматривает векторы, содержащие такие рекомбинантные (или комплементарные им) нуклеиновые кислоты; растение или микроорганизм, которые содержат и обеспечивают экспрессию таких нуклеиновых кислот; растения, трансформированные такими нуклеиновыми кислотами, например трансгенные растения кукурузы; потомство таких растений, которое содержит нуклеиновые кислоты, стабильно встроенные и наследуемые по менделевскому принципу, и/или семена таких растений и такого потомства. Настоящее изобретение также предусматривает способы селекции для введения трансгена, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, в потомство растения и в различные зародышевые плазмы.
[0010] Настоящее изобретение также предусматривает композиции и составы, содержащие NitromobCRW или его варианты, которые способны к ингибированию способности насекомых-вредителей к выживанию, росту и/или размножению, или к ограничению связанного с насекомыми вреда или потери урожая сельскохозяйственных культур, например, при применении NitromobCRW или его вариантов в качестве части композиций или составов в отношении зараженных насекомыми зон или растений, или для профилактической обработки чувствительных к насекомым зон или растений для обеспечения защиты от насекомых-вредителей.
[0011] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу получения NitromobCRW или его вариантов и к способам применения нуклеиновых кислот, например, в микроорганизмах для контроля насекомых или в трансгенных растениях для обеспечения защиты от вреда, наносимого насекомыми.
[0012] Описанные в данном документе новые белки являются активными в отношении насекомых. Например, в вариантах осуществления белки по настоящему изобретению могут применяться для контроля экономически важных насекомых-вредителей, в том числе жесткокрылых насекомых, таких как западный кукурузный корневой жук (WCR), северный кукурузный корневой жук (NCR), южный кукурузный корневой жук (SCR) и/или мексиканский кукурузный корневой жук (D. virgifera zeae). Инсектицидные белки по настоящему изобретению могут применяться по отдельности или в комбинации с другими стратегиями для контроля насекомых, чтобы обеспечить повышенную эффективность контроля вредителей против тех же насекомых-вредителей и/или расширить спектр целевых насекомых с минимальным воздействием на окружающую среду.
[0013] Другие аспекты и преимущества по настоящему изобретению станут очевидными для специалистов в данной области в результате рассмотрения нижеследующего описания изобретения и неограничивающих примеров.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ В ПЕРЕЧНЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0014] Последовательности нуклеиновых кислот, перечисленные в сопутствующем перечне последовательностей, показаны с применением стандартных буквенных сокращений для нуклеотидных оснований, как определено в 37 C.F.R.§1.822. Перечисленные последовательности нуклеиновых кислот и аминокислотные последовательности определяют молекулы (т.е. полинуклеотиды и полипептиды, соответственно), содержащие нуклеотидные и аминокислотные мономеры, расположенные описанным образом. Каждая из перечисленных последовательностей нуклеиновых кислот и аминокислотных последовательностей также определяет тип полинуклеотидов или полипептидов, которые содержат нуклеотидные и аминокислотные мономеры, расположенные описанным образом. Ввиду избыточности генетического кода следует понимать, что нуклеотидная последовательность, содержащая кодирующую последовательность, также описывает тип полинуклеотидов, кодирующих тот же полипептид, как полинуклеотид, состоящий из эталонной последовательности. Дополнительно следует понимать, что аминокислотная последовательность описывает тип ORF полинуклеотида, кодирующего этот полипептид.
[0015] Показана только одна нить каждой последовательности нуклеиновой кислоты, но комплементарная нить подразумевается как включенная при любом упоминании показанной нити. Поскольку последовательности, комплементарные и обратно-комплементарные первичной последовательности нуклеиновой кислоты, обязательно раскрываются первичной последовательностью, комплементарная последовательность и обратно-комплементарная последовательность относятся к последовательность нуклеиновой кислоты, если явно не указано иное (или если иное ясно из контекста, в котором находится последовательность). Кроме того, как известно из уровня техники, нуклеотидная последовательность нити РНК определяется последовательностью ДНК, с которой она транскрибирована (кроме замены урациловых (U) нуклеиновых оснований на тимин (Т)), последовательность РНК включена при любом упоминании кодирующей ее последовательности ДНК. В сопутствующем перечне последовательностей:
SEQ ID NO: 1 представляет собой оптимизированную нуклеотидную последовательность NitromobCRW Е. coli.
SEQ ID NO: 2 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I98L.
SEQ ID NO: 3 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V99L.
SEQ ID NO: 4 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I175L.
SEQ ID NO: 5 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I208L.
SEQ ID NO: 6 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW 1215L.
SEQ ID NO: 7 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW 1215F.
SEQ ID NO: 8 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I215 Y.
SEQ ID NO: 9 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW Y213L/I215L.
SEQ ID NO: 10 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I245L.
SEQ ID NO: 11 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I255L.
SEQ ID NO: 12 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I265L.
SEQ ID NO: 13 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I257L.
SEQ ID NO: 14 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW G216A.
SEQ ID NO: 15 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW G216L.
SEQ ID NO: 16 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V122L.
SEQ ID NO: 17 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V167L.
SEQ ID NO: 18 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V220L.
SEQ ID NO: 19 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта вставки NitromobCRW L214-Leu-I215.
SEQ ID NO: 20 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта вставки NitromobCRW I215-Leu-G216.
SEQ ID NO: 21 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW Y213F/I215L.
SEQ ID NO: 22 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I175L/I215L.
SEQ ID NO: 23 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I208L/I215L.
SEQ ID NO: 24 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I215L/I255L.
SEQ ID NO: 25 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW I255L/I257L.
SEQ ID NO: 26 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW L214S/I215L.
SEQ ID NO: 27 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V203S/M204L.
SEQ ID NO: 28 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW T218L.
SEQ ID NO: 29 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW T218F.
SEQ ID NO: 30 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V185L.
SEQ ID NO: 31 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V193L/I215L.
SEQ ID NO: 32 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW E196L/I215L.
SEQ ID NO: 33 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW E186L/I215L.
SEQ ID NO: 34 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V177L/I215L.
SEQ ID NO: 35 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW Y213L.
SEQ ID NO: 36 представляет собой нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW V203S/M204L/I215L.
SEQ ID NO: 37 представляет собой нативную нуклеотидную последовательность NitromobCRW.
SEQ ID NO: 38 представляет собой кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность варианта NitromobCRW Y213L/I215L маиса.
SEQ ID NO: 39 представляет собой нативную аминокислотную последовательность NitromobCRW.
SEQ ID NO: 40 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I98L.
SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V99L.
SEQ ID NO: 42 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I175L.
SEQ ID NO: 43 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I208L.
SEQ ID NO: 44 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I215L.
SEQ ID NO: 45 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I215F.
SEQ ID NO: 46 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I215Y.
SEQ ID NO: 47 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW Y213L/I215L.
SEQ ID NO: 48 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I245L.
SEQ ID NO: 49 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I255L.
SEQ ID NO: 50 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I265L.
SEQ ID NO: 51 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I257L.
SEQ ID NO: 52 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW G216A.
SEQ ID NO: 53 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW G216L.
SEQ ID NO: 54 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V122L.
SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V167L.
SEQ ID NO: 56 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V220L.
SEQ ID NO: 57 представляет собой аминокислотную последовательность варианта вставки NitromobCRW L214-Leu-I215.
SEQ ID NO: 58 представляет собой аминокислотную последовательность варианта вставки NitromobCRW I215-Leu-G216.
SEQ ID NO: 59 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW Y213F/I215L.
SEQ ID NO: 60 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I175L/I215L.
SEQ ID NO: 61 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I208L/I215L.
SEQ ID NO: 62 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I215L/I255L.
SEQ ID NO: 63 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW I255L/I257L.
SEQ ID NO: 64 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW L214S/I215L.
SEQ ID NO: 65 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V203S/M204L.
SEQ ID NO: 66 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW T218L.
SEQ ID NO: 67 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW T218F.
SEQ ID NO: 68 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V185L.
SEQ ID NO: 69 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V193L/I215L.
SEQ ID NO: 70 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW E196L/I215L.
SEQ ID NO: 71 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW E186L/I215L.
SEQ ID NO: 72 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V177L/I215L.
SEQ ID NO: 73 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW Y213L.
SEQ ID NO: 74 представляет собой аминокислотную последовательность варианта NitromobCRW V203S/M204L/I215L.
SEQ ID NO: 75 представляет собой нуклеотидную последовательность NitromobCRW-Cterm-SUMO.
SEQ ID NO: 76 представляет собой аминокислотную последовательность удлиненного пептида NitromobCRW-Cterm-SUMO.
SEQ ID NO: 77 представляет собой аминокислотную последовательность NitromobCRW Y213L/I215L-Cterm-SUMO.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0016] Для ясности определенные термины, используемые в данном описании, определены и представлены как указано далее.
[0017] "Активность" инсектицидных белков по настоящему изобретению означает, что инсектицидные белки функционируют как активные при пероральном поглощении средства для контроля насекомых, характеризуются токсическим эффектом и/или способны нарушать или сдерживать поедание насекомыми, что может вызывать или не вызывать смерть насекомого. В случае если инсектицидный белок по настоящему изобретению доставляется в организм насекомого, то результатом обычно является гибель насекомого или же насекомое не поедает источник, который делает инсектицидный белок доступным для насекомого. "Пестицидной" называется токсическая биологическая активность, способная осуществлять контроль вредителя, такого как насекомое, нематода, гриб, бактерии или вирус, предпочтительно путем их уничтожения или разрушения. "Инсектицидной" называется токсическая биологическая активность, способная осуществлять контроль насекомых, предпочтительно путем их уничтожения. "Пестицидное средство" представляет собой средство, которое характеризуется пестицидной активностью. "Инсектицидное средство" представляет собой средство, которое характеризуется инсектицидной активностью.
[0018] Термин "ассоциированная с/функционально связанная" относится к двум нуклеиновым кислотам, которые связаны физически или функционально. Например, говорят, что промотор или регуляторная последовательность ДНК "ассоциированы с" последовательностью ДНК, которая кодирует РНК или белок, если эти две последовательности функционально связаны или расположены так, что регуляторная последовательность ДНК будет влиять на уровень экспрессии кодирующей или структурной последовательности ДНК.
[0019] "Кодирующая последовательность" представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, которая транскрибируется в РНК, такую как mRNA, rRNA, tRNA, snRNA, смысловая РНК или антисмысловая РНК. Предпочтительно, РНК затем транслируется в организме с продуцированием белка.
[0020] "Контролировать" насекомых означает подавлять посредством токсического эффекта способность насекомых-вредителей к выживанию, росту, поеданию и/или размножению или ограничивать связанные с насекомыми вред или потерю урожая сельскохозяйственных культур. "Контроль" насекомых может означать или может не означать уничтожение насекомых, хотя предпочтительно означает уничтожение насекомых.
[0021] "Доставлять" инсектицидный белок означает, что инсектицидный белок вступает в контакт с насекомым, что приводит к токсическому эффекту и контролю насекомого. Инсектицидный белок может быть доставлен многими известными путями, например, с помощью трансгенного растения, экспрессирующего инсектицидный белок, составленной(-ых) композиции(-й) с белком, распыляемой(-ых) композиции(-й) с белком, матрицы с приманкой или с помощью любой другой известной из уровня техники системы для доставки токсина.
[0022] "Эффективное для контроля насекомых количество" означает концентрацию инсектицидного белка, которая подавляет посредством токсического эффекта способность насекомых выживать, расти, поедать и/или размножаться или ограничивает связанные с насекомыми вред или потерю урожая сельскохозяйственных культур. "Эффективное для контроля насекомых количество" может означать или может не означать уничтожение насекомых, хотя предпочтительно оно означает уничтожение насекомых.
[0023] "Кассета экспрессии", используемая в данном документе, означает последовательность нуклеиновой кислоты, способную направлять экспрессию конкретной нуклеотидной последовательности в соответствующую клетку-хозяина, содержащую промотор, функционально связанный с представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, которая функционально связана с сигналами терминации. Она также обычно содержит последовательности, необходимые для правильной трансляции нуклеотидной последовательности. По меньшей мере один из компонентов кассеты экспрессии, содержащей представляющую интерес нуклеотидную последовательность, может быть гетерологичным по отношению к по меньшей мере одному из других ее компонентов. Кассета экспрессии может также представлять собой последовательность, которая встречается в природе, но была получена в рекомбинантной форме, применимой для гетерологичной экспрессии. Однако, как правило, кассета экспрессии является гетерологичной по отношению к хозяину, т.е. конкретная последовательность нуклеиновой кислоты в кассете экспрессии не встречается в клетке-хозяине в природе, и ее необходимо было ввести в клетку-хозяина или предка клетки-хозяина с помощью события трансформации. Экспрессия нуклеотидной последовательности в кассете экспрессии может находиться под контролем конститутивного промотора или индуцируемого промотора, который инициирует транскрипцию только тогда, когда клетка-хозяин подвергается воздействию некоторого определенного внешнего стимула. В случае многоклеточного организма, такого как растение, промотор также может быть специфичным по отношению к конкретной ткани, или органу, или стадии развития.
[0024] Кассета экспрессии, содержащая представляющую интерес нуклеотидную последовательность, может быть химерной, что означает, что по меньшей мере один из ее компонентов является гетерологичным по отношению к по меньшей мере одному из ее остальных компонентов. Кассета экспрессии также может представлять собой таковую, которая содержит нативный промотор, управляющий ее нативным геном, однако она была получена в рекомбинантной форме, применимой для гетерологичной экспрессии. Такое использование кассеты экспрессии обеспечивает то, что она является не встречающейся в природе в клетке, в которую была введена.
[0025] Кассета экспрессии также необязательно может содержать участок терминации транскрипции и/или трансляции (т.е. участок терминации), функционирующий в растениях. Разнообразные терминаторы транскрипции доступны для применения в кассетах экспрессии, и они отвечают за терминацию транскрипции за пределами представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательности и правильное полиаденилирование mRNA. Участок терминации может быть нативным по отношению к участку инициации транскрипции, может быть нативным по отношению к функционально связанной представляющей интерес нуклеотидной последовательности, может быть нативным по отношению к растению-хозяину или может быть получен из другого источника (т.е. быть чужеродным или гетерологичным по отношению к промотору, представляющей интерес нуклеотидной последовательности, растению-хозяину или любой их комбинации). Соответствующие терминаторы транскрипции включают без ограничения терминатор 35S CaMV, терминатор гена tm1, терминатор гена нопалинсинтазы и/или терминатор гена rbcs-E9 гороха. Они могут применяться как у однодольных, так и у двудольных растений. В дополнение, может применяться нативный терминатор транскрипции кодирующей последовательности. В контексте настоящего изобретения может применяться любой доступный терминатор, о котором известно, что он функционирует в растениях.
[0026] Термин "экспрессия" в случае использования со ссылкой на полинуклеотид, такой как ген, ORF или ее часть или трансген в растениях, относится к процессу преобразования генетической информации, кодируемой геном, в РНК (например, mRNA, rRNA, tRNA или snRNA) посредством "транскрипции" гена (т.е. за счет ферментативного действия РНК-полимеразы), и в белок, если это применимо (например, если ген кодирует белок), посредством "трансляции" mRNA. Экспрессия гена может регулироваться на многих стадиях в ходе этого процесса. Например, в случае антисмысловых конструкций или конструкций dsRNA соответственно, экспрессия может относиться к транскрипции только антисмысловой РНК или только dsRNA. В вариантах осуществления "экспрессия" относится к транскрипции и стабильному накоплению смысловой (mRNA) или функциональной РНК. "Экспрессия" может также относиться к продуцированию белка.
[0027] "Ген" представляет собой определенный участок, который расположен внутри генома и содержит кодирующую последовательность нуклеиновой кислоты и, как правило, также содержит другие, преимущественно регуляторные нуклеиновые кислоты, ответственные за контроль экспрессии, иными словами транскрипции и трансляции кодирующей части. Ген может также содержать другие 5'- и 3'-нетранслируемые последовательности и последовательности терминации. Дополнительными элементами, которые могут присутствовать, являются, например, интроны. Регуляторная последовательность нуклеиновой кислоты гена в норме может не быть функционально связанной с ассоциированной последовательностью нуклеиновой кислоты, как это встречается в природе, и в таком случае ген будет химерным геном.
[0028] "Представляющий интерес ген" относится к любой молекуле нуклеиновой кислоты, которая, в случае переноса в растение, придает растению требуемый признак, такой как устойчивость к антибиотикам, устойчивость к вирусам, устойчивость к насекомым, устойчивость к заболеваниям или устойчивость к другим вредителям, переносимость гербицидов, переносимость абиотического стресса, мужская стерильность, модифицированный метаболизм жирных кислот, модифицированный метаболизм углеводов, улучшенная пищевая ценность, улучшенные характеристики при промышленном способе или измененная репродуктивная способность. "Представляющий интерес ген" также может являться таким, который переносят в растения для получения коммерчески ценных ферментов или метаболитов в растении.
[0029] "Гетерологичная" последовательность нуклеиновой кислоты или молекула нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты или молекулу нуклеиновой кислоты, которая в природе не ассоциирована с клеткой-хозяином, в которую ее вводят, в том числе не встречающиеся в природе множественные копии встречающейся в природе последовательности нуклеиновой кислоты. Гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты или молекула нуклеиновой кислоты может содержать химерную последовательность, такую как химерная кассета экспрессии, где промотор и кодирующих участок получены из нескольких исходных организмов. Последовательность промотора может представлять собой последовательность конститутивного промотора, последовательность тканеспецифичного промотора, последовательность химически индуцируемого промотора, последовательность индуцируемого повреждением промотора, последовательность индуцируемого стрессом промотора или последовательность специфичного для стадии развития промотора.
[0030] "Гомологичная" последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, в природных условиях связанную с клеткой-хозяином, в которую ее вводят.
[0031] "Гомологичная рекомбинация" представляет собой взаимный обмен фрагментами нуклеиновой кислоты между гомологичными молекулами нуклеиновой кислоты.
[0032] "Идентичность" или "процентная идентичность" относится к степени сходства между двумя последовательностями нуклеиновых кислот или последовательностями белка. При сравнении последовательностей одна последовательность обычно выступает в качестве эталонной последовательности, с которой сравнивают тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тестируемую и эталонную последовательности вводят в компьютер, при необходимости задают координаты подпоследовательности, и задают программные параметры алгоритма сравнения последовательностей. Затем с помощью алгоритма сравнения последовательностей на основе заданных программных параметров вычисляют процентную идентичность последовательностей для тестируемой(-ых) последовательности(-ей) относительно эталонной последовательности. Фраза "в значительной степени идентичные" в контексте двух последовательностей нуклеиновых кислот или двух аминокислотных последовательностей относится к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые характеризуются по меньшей мере приблизительно 50% идентичностью по нуклеотидам или аминокислотным остаткам при сравнении и выравнивании для максимального соответствия, что определяют с применением одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем визуального осмотра. В определенных вариантах осуществления в значительной степени идентичные последовательности характеризуются по меньшей приблизительно 60%, или по меньшей мере приблизительно 70%, или по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85% или даже по меньшей мере приблизительно 90% или 95% идентичностью по нуклеотидам или аминокислотным остаткам. В определенных вариантах осуществления значительная степень идентичности существует на протяжении участка последовательностей, длина которого составляет по меньшей мере приблизительно 50 остатков, или на протяжении участка, состоящего из по меньшей мере приблизительно 100 остатков, или последовательности в значительной степени идентичны на протяжении по меньшей мере приблизительно 150 остатков. В дополнительных вариантах осуществления последовательности являются в значительной степени идентичными, когда они идентичны на протяжении всей длины кодирующих участков.
[0033] Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, с помощью алгоритма поиска локальной гомологии из Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2: 482 (1981), с помощью алгоритма выравнивания областей гомологии из Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443 (1970), с помощью способа поиска сходства из Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85: 2444 (1988), с помощью программной реализации данных алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA из Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Мадисон, Висконсин) или с помощью визуального осмотра (см. в общем Ausubel et al., ниже).
[0034] Одним примером алгоритма, который подходит для определения процента идентичности последовательностей и сходства последовательностей, является алгоритм BLAST, который описан в Altschul et al., J. Mol. Biol. 215. 403-410 (1990). Программное обеспечение для осуществления анализов BLAST находится в открытом доступе благодаря Национальному центру биотехнологической информации (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Данный алгоритм предусматривает вначале идентификацию пар последовательностей с высоким показателем сходства (HSP) путем идентификации коротких "слов" длиной W в запрашиваемой последовательности, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому положительному пороговому показателю Т при выравнивании со "словом" такой же длины в последовательности из базы данных. Т называется пороговым значением показателя соседнего "слова" (Altschul et al., 1990). Эти первоначальные совпадения соседних "слов" выступают в качестве затравки, чтобы инициировать поиски для обнаружения более длинных HSP, содержащих их. Совпадения "слов" затем продлеваются в обоих направлениях вдоль каждой последовательности до тех пор, пока может увеличиваться совокупный показатель выравнивания. В случае нуклеотидных последовательностей совокупные показатели рассчитывают с применением параметров М (балл-вознаграждение, начисляемый за пару совпадающих остатков; всегда >0) и N (штрафной балл, начисляемый за несовпадающие остатки; всегда <0). В случае аминокислотных последовательностей для расчета совокупного показателя применяют матрицу замен. Продление совпадений "слов" в каждом направлении прекращается, когда совокупный показатель выравнивания снижается на величину X от своего максимального достигнутого значения, при этом совокупный показатель падает до нуля или ниже вследствие накопления одного или нескольких выравниваний остатков с отрицательными показателями, или при достижении конца одной из последовательностей. Параметры W, Т и X алгоритма BLAST определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) по умолчанию используется длина "слова" (W), составляющая 11, ожидаемое значение (Е), составляющее 10, пороговое значение, составляющее 100, М=5, N= -4 и сравнение по обеим нитям. В случае аминокислотных последовательностей программа BLASTP использует по умолчанию длину "слова" (W), составляющую 3, ожидаемое значение (Е), составляющее 10, а также матрицу замен BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89: 10915 (1989)).
[0035] В дополнение к расчету процента идентичности последовательностей алгоритм BLAST также выполняет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90: 5873-5787 (1993)). Одной мерой сходства, предоставляемой алгоритмом BLAST, является наименьшая суммарная вероятность (P(N)), которая является показателем того, что совпадения между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями будут возникать случайным образом. Например, считается, что тестируемая последовательность нуклеиновой кислоты сходна с эталонной последовательностью, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестируемой последовательности нуклеиновой кислоты с эталонной последовательностью нуклеиновой кислоты составляет менее приблизительно 0,1, более предпочтительно менее приблизительно 0,01 и наиболее предпочтительно менее приблизительно 0,001.
[0036] Другой широко применяемой и признанной компьютерной программой для осуществления выравниваний последовательностей является CLUSTALW v1.6 (Thompson, et al. Nuc. Acids Res., 22: 4673-4680, 1994). Число совпадающих оснований или аминокислот делят на общее число оснований или аминокислот и умножают на 100 с получением процента идентичности. Например, если бы две последовательности из 580 пар оснований имели 145 совпавших оснований, то они были бы идентичны на 25 процентов. Если две сравниваемые последовательности имеют разную длину, то число совпадений делят на более короткую из двух длин. Например, если в белках из 200 и 400 аминокислот было 100 совпадавших аминокислот, то они идентичны на 50 процентов с учетом более короткой последовательности. Если длина более короткой последовательность составляет менее 150 оснований или 50 аминокислот, то число совпадений делят на 150 (в случае нуклеиновых оснований) или 50 (в случае аминокислот), и умножают на 100 с получением процента идентичности.
[0037] Другим показателем того, что две нуклеиновые кислоты являются в значительной степени идентичными, служит то, что эти две молекулы гибридизируются друг с другом в жестких условиях. Фраза "гибридизируется специфически с" относится к связыванию, образованию дуплекса или гибридизации молекулы только с определенной нуклеотидной последовательностью в жестких условиях, когда такая последовательность присутствует в сложной смеси (например, общих клеточных) ДНК или РНК. "В значительной степени связывается" относится к комплементарной гибридизации между нуклеиновой кислотой-зондом и целевой нуклеиновой кислотой и охватывает незначительные несовпадения, которые могут быть исправлены за счет снижения жесткости среды для гибридизации, чтобы добиться необходимого выявления целевой последовательности нуклеиновой кислоты.
[0038] "Жесткие условия гибридизации" и "жесткие условия отмывки при гибридизации" в контексте экспериментов с гибридизацией нуклеиновых кислот, таких как саузерн- и нозерн-гибридизации, зависят от последовательности и отличаются при разных параметрах окружающей среды. Более длинные последовательности специфично гибридизируются при более высоких температурах. Подробное руководство по гибридизации нуклеиновых кислот можно найти в Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes part I chapter 2 "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays" Elsevier, New York. Как правило, условия гибридизации и отмывки высокой жесткости выбирают так, чтобы температура была приблизительно на 5°С ниже точки плавления (Tm) для конкретной последовательности при определенных ионной силе и значении рН. Как правило, при "жестких условиях" зонд будет гибридизироваться со своей целевой последовательностью, но ни с какими другими последовательностями.
[0039] Значение Tm представляет собой температуру (при определенных ионной силе и значении рН), при которой 50% целевой последовательности гибридизируется с точно совпадающим зондом. Для очень жестких условий выбирают температуру, равную Tm для конкретного зонда. Примером жестких условий гибридизации для гибридизации комплементарных нуклеиновых кислот, которые имеют более чем 100 комплементарных остатков на фильтре в саузерн- или нозерн-блоте, является 50% формамид с 1 мг гепарина при 42°С, причем гибридизация проводится в течение ночи. Примером условий отмывки высокой жесткости является 0,15 М NaCl при 72°С в течение приблизительно 15 минут. Примером жестких условий отмывки является отмывка с помощью 0,2х SSC при 65°С в течение 15 минут (см. Sambrook, ниже, в отношении описания буфера SSC). Часто с целью избавления от фонового сигнала зонда отмывке в условиях высокой жесткости предшествует отмывка в условиях низкой жесткости. Примерными условиями отмывки средней жесткости для дуплекса, например с более чем 100 нуклеотидами, являются 1x SSC при 45°С в течение 15 минут. Примерными условиями отмывки низкой жесткости для дуплекса, например с более чем 100 нуклеотидами, являются 4-6х SSC при 40°С в течение 15 минут. Для коротких зондов (например, длиной от приблизительно 10 до 50 нуклеотидов) жесткие условия обычно предусматривают концентрации солей, составляющие менее чем приблизительно 1,0 М ионов Na, как правило концентрацию, составляющую приблизительно 0,01-1,0 М ионов Na (или других солей), при рН 7,0-8,3, а также температуру, как правило, составляющую по меньшей мере приблизительно 30°С. Жесткие условия также могут быть достигнуты с добавлением дестабилизирующих средств, таких как формамид. В целом, соотношение сигнал-шум, в 2 (или более) раза превышающее наблюдаемое для несвязанного зонда при конкретном гибридизационном анализе, указывает на выявление специфической гибридизации. Нуклеиновые кислоты, которые не гибридизируются друг с другом в жестких условиях, все еще являются в значительной степени идентичными, если белки, которые они кодируют, в значительной степени идентичны. Например, это происходит в том случае, когда копию нуклеиновой кислоты создают с применением максимальной вырожденности кодонов, допускаемой генетическим кодом.
[0040] Примеры наборов условий гибридизации/отмывки, которые можно применять для клонирования гомологичных нуклеотидных последовательностей, которые в значительной степени идентичны эталонным нуклеотидным последовательностям по настоящему изобретению, являются следующими: эталонная нуклеотидная последовательность предпочтительно гибридизируется с эталонной нуклеотидной последовательностью в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPO4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 2Х SSC, 0,1% SDS при 50°С, более желательно в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPO4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 1X SSC, 0,1% SDS при 50°С, еще более желательно в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPO4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 0,5Х SSC, 0,1% SDS при 50°С, предпочтительно в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPO4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 0,1X SSC, 0,1% SDS при 50°С, более предпочтительно в 7% додецилсульфате натрия (SDS), 0,5 М NaPO4, 1 мМ EDTA при 50°С с отмывкой в 0,1X SSC, 0,1% SDS при 65°С.
[0041] Дополнительным свидетельством того, что две нуклеиновые кислоты или два белка являются в значительной степени идентичными, является то, что белок, кодируемый первой нуклеиновой кислотой, является иммунологически перекрестно реактивным с белком, закодированным второй нуклеиновой кислотой, или специфически связывается с ним. Таким образом, как правило, белок является в значительной степени идентичным второму белку, например, если два белка отличаются только консервативными заменами.
[0042] Последовательность нуклеиновой кислоты является "изокодонной с" эталонной последовательностью нуклеиновой кислоты, когда последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, имеющий такую же аминокислотную последовательность, что и полипептид, кодируемый эталонной последовательностью нуклеиновой кислоты.
[0043] "Выделенная" молекула нуклеиновой кислоты или выделенный токсин, рукой человека, представляют собой молекулу нуклеиновой кислоты или токсин, которые существуют независимо от своей природной среды, а следовательно не является природным продуктом. Выделенные молекула нуклеиновой кислоты или токсин могут существовать в очищенной форме или могут существовать в неприродной среде, например, без ограничения, такой как рекомбинантная микробная клетка, растительная клетка, растительная ткань или растение.
[0044] "Молекула нуклеиновой кислоты" или "последовательность нуклеиновой кислоты" представляет собой сегмент одно- или двухнитевой ДНК или РНК, который может быть выделен из любого источника. В контексте настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты обычно представляет собой сегмент ДНК. В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению представляют собой выделенные молекулы нуклеиновой кислоты.
[0045] Термины "белок", "пептид" и "полипептид" используются в данном документе взаимозаменяемо.
[0046] Используемое в данном документе выражение "кодон-оптимизированная" последовательность означает нуклеотидную последовательность рекомбинантного, трансгенного или синтетического полинуклеотида, в котором кодоны выбраны так, чтобы отражать склонность к определенным кодонам, которая может наблюдаться в клетке-хозяине. Это выполняется таким образом, чтобы сохранить аминокислотную последовательность полипептида, кодируемого кодон-оптимизированным полинуклеотидом. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность рекомбинантной ДНК-конструкции содержит последовательность, которая была кодон-оптимизирована для клетки (например, клетки животного, растения или гриба), в которой конструкция будет экспрессироваться. Например, в конструкции, которая будет экспрессироваться в растительной клетке, могут быть кодон-оптимизированы для экспрессии в растении вся последовательность или ее части (например, первый элемент для супрессии гена или элемент для экспрессии гена). См., например, патент США №6121014, включенный в данный документ посредством ссылки.
[0047] "Растение" представляет собой любое растение на любой стадии развития, в частности семенное растение.
[0048] "Растительная клетка" представляет собой структурную и физиологическую единицу растения, содержащую протопласт и клеточную стенку. Растительная клетка может быть в виде выделенной одиночной клетки или культивируемой клетки или в качестве части более высокоорганизованной единицы, такой как, например, растительная ткань, орган растения или целое растение.
[0049] "Культура растительных клеток" означает культуры единиц растения, таких как, например, протопласты, клетки в клеточной культуре, клетки в растительных тканях, пыльца, пыльцевые трубки, семязачатки, зародышевые мешки, зиготы и зародыши на различных стадиях развития.
[0050] "Растительный материал" относится к листьям, стеблям, корням, цветкам или частям цветков, плодам, пыльце, яйцеклеткам, зиготам, семенам, черенкам, клеточным или тканевым культурам, или к любой другой части или продукту растения.
[0051] "Орган растения" представляет собой отдельную и визуально структурированную и дифференцированную часть растения, такую как корень, стебель, лист, цветочная почка или зародыш.
[0052] "Растительная ткань", применяемая в данном документе, означает группу растительных клеток, организованных в структурную и функциональную единицу. Включена любая ткань растения in planta или в культуре. Данный термин включает без ограничения целые растения, органы растений, семена растений, тканевую культуру и любые группы растительных клеток, организованных в структурные и/или функциональные единицы. Использование данного термина в сочетании с любым специфическим типом растительной ткани, приведенным выше или иным образом охваченным данным определением, или без такового, не предназначено для исключения любого другого типа растительной ткани.
[0053] "Промотор" представляет собой нетранслируемую последовательность ДНК выше кодирующей области, которая содержит сайт связывания для РНК-полимеразы и инициирует транскрипцию ДНК. Промоторный участок может также содержать другие элементы, которые выступают в качестве регуляторов экспрессии генов.
[0054] "Регуляторные элементы" относятся к последовательностям, вовлеченным в контроль экспрессии нуклеотидной последовательности. Регуляторные элементы предусматривают промотор, функционально связанный с представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, и сигналы терминации. Как правило, они охватывают также последовательности, необходимые для надлежащей трансляции нуклеотидной последовательности.
[0055] "Трансформация" представляет собой процесс введения гетерологичной нуклеиновой кислоты в клетку- или организм-хозяин. В конкретных вариантах осуществления "трансформация" означает стабильную интеграцию молекулы ДНК в геном (ядерный или пластидный) представляющего интерес организма.
[0056] "Трансформированный/трансгенный/рекомбинантный" относится к организму-хозяину, такому как бактерия или растение, в который была введена гетерологичная молекула нуклеиновой кислоты. Молекулу нуклеиновой кислоты можно стабильно интегрировать в геном хозяина, или же молекула нуклеиновой кислоты также может присутствовать в виде внехромосомной молекулы. Такая внехромосомная молекула может быть автореплицирующейся. Подразумевается, что трансформированные клетки, ткани или растения охватывают не только конечный продукт процесса трансформации, но также и их трансгенное потомство. "Нетрансформированный", "нетрансгенный" или "нерекомбинантный" хозяин относится к организму дикого типа, например бактерии или растению, которые не содержат гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты.
[0057] Нуклеотиды обозначены по их основаниям с помощью следующих стандартных сокращений: аденин (А), цитозин (С), тимин (Т) и гуанин (G). Аналогичным образом, аминокислоты обозначены с помощью следующих стандартных сокращений: аланин (Ala; А), аргинин (Arg; R), аспарагин (Asn; N), аспарагиновая кислота (Asp; D), цистеин (Cys; С), глутамин (Gin; Q), глутаминовая кислота (Glu; Е), глицин (Gly; G), гистидин (His; Н), изолейцин (Не; 1), лейцин (Leu; L), лизин (Lys; K), метионин (Met; М), фенилаланин (Phe; F), пролин (Pro; Р), серии (Ser; S), треонин (Thr; Т), триптофан (Тгр; W), тирозин (Туг; Y) и валин (Val; V).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0058] Настоящее изобретение относится к новым инсектицидным белкам, которые характеризуются активностью против жесткокрылых, например, Diabrotica virgifera virgifera (западного кукурузного корневого жука; WCR), Diabrotica barberi (северного кукурузного корневого жука; NCR) и/или Diabrotica undecimpunctata howardi (южного кукурузного корневого жука; SCR), и/или других видов Diabrotica, в том числе Diabrotica virgifera zeae (мексиканского кукурузного корневого жука) и/или других жесткокрылых насекомых-вредителей, таких как колорадский жук. В вариантах осуществления новый инсектицидный белок по настоящему изобретению может характеризоваться активностью против видов чешуекрылых. Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, экспрессия которых приводит к образованию инсектицидных белков по настоящему изобретению, а также к получению и применению инсектицидных белков для контроля насекомых-вредителей. В вариантах осуществления экспрессия нуклеиновых кислот приводит к образованию инсектицидных белков, которые можно применять для контроля жесткокрылых насекомых, таких как западный, северный и/или южный кукурузный корневой жук, в частности при экспрессии в трансгенном растении, таком как трансгенное растение кукурузы.
[0059] Настоящее изобретение дополнительно охватывает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует инсектицидный белок по настоящему изобретению. Нуклеотидная последовательность может быть оптимизирована для экспрессии в бактериях, таких как Escherichia coli, или для экспрессии в растении, таком как Zea mays. Нуклеотидная последовательность, оптимизированная для экспрессии в гетерологичном организме, таком как виды бактерий, отличные от тех, из которых она получена, или растение, не встречается в природе. В одном аспекте данного варианта осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность любой из SEQ ID NO: 1-38 или комплементарную ей последовательность. В частности, иллюстративные рекомендации в отношении способов получения молекул нуклеиновой кислоты, которые кодируют инсектицидные белки по настоящему изобретению, могут быть найдены в примерах данной заявки. Специалистам в данной области будет понятно, что в иллюстративных способах получения инсектицидных белков, охватываемых настоящим изобретением, могут быть сделаны модификации.
[0060] Специалисту в данной области техники будет понятно, что трансген для коммерческого применения, такой как молекула нуклеиновой кислоты, которая содержит любую из SEQ ID NO: 1-38 или комплементарную ей последовательность, может характеризоваться относительно незначительными модификациями по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты для соответствия требованиям государственных регулятивных норм. Такие модификации не будут влиять на функцию полученной молекулы, которая будет в значительной степени идентичной SEQ ID NO: 1-38. Специалисту в данной области будет понятно, что модифицированная молекула нуклеиновой кислоты будет фактически такой же, как и исходная молекула, и охвачена настоящим изобретением.
[0061] Настоящее изобретение также охватывает молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит (а) нуклеотидную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-38; (b) нуклеотидную последовательность, которая представляет собой последовательность на по меньшей мере 45% идентичную, по меньшей мере 50% идентичную, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентичную любой из нуклеотидных последовательностей под SEQ ID NO: 1-38; (с) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида содержит SEQ ID NO: 39-74 и характеризуется активностью в отношении контроля насекомых; (d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида на по меньшей мере 45% идентична, по меньшей мере 50% идентична, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична любой из аминокислотных последовательностей под SEQ ID NO: 39-74; или (е) нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности любой из (a)-(d), приведенных выше.
[0062] Настоящее изобретение дополнительно охватывает кассету экспрессии, содержащую промотор, функционально связанный с гетерологичной нуклеотидной последовательностью, которая содержит: (а) нуклеотидную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-38; (b) нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 45% идентична, по меньшей мере 50% идентична, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична нуклеотидной последовательности под любым из SEQ ID NO: 1-38; (с) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида содержит SEQ ID NO: 39-74 и характеризуется активностью в отношении контроля насекомых; (d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида на по меньшей мере 45% идентична, по меньшей мере 50% идентична, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности под любым из SEQ ID NO: 39-74; или (е) нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности любой из (a)-(d), приведенных выше. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает кассету экспрессии, содержащую гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида на по меньшей мере 93% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 39-74. Кассета экспрессии содержит промотор, функционально связанный с гетерологичной нуклеотидной последовательностью и не встречающийся в природе.
[0063] Настоящее изобретение также охватывает рекомбинантные векторы или конструкции, которые также могут называться векторами или конструкциями, содержащими кассеты экспрессии и/или молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. В таких векторах нуклеиновые кислоты предпочтительно находятся в кассетах экспрессии, содержащих регуляторные элементы для экспрессии нуклеотидных молекул в клетке-хозяине, способной экспрессировать нуклеотидные молекулы. Такие регуляторные элементы обычно содержат промотор и сигналы терминации и, предпочтительно, также содержат элементы, дающие возможность выполнять эффективную трансляцию полипептидов, кодируемых нуклеиновыми кислотами по настоящему изобретению. Векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, могут быть способны к репликации в конкретных клетках-хозяевах, предпочтительно как внехромосомные молекулы, и таким образом используются для амплификации нуклеиновых кислот по настоящему изобретению в клетках-хозяевах. Настоящее изобретение также охватывает клетку-хозяина, которая содержит кассету экспрессии или молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления клетками-хозяева для таких векторов являются микроорганизмы, такие как бактерии, в частности Bacillus thuringiensis или Е. coli, или такие как грибы, как, например, дрожжи. В другом варианте осуществления клетки-хозяева для таких рекомбинантных векторов представляют собой эндофиты или эпифиты. В еще одном варианте осуществления такие векторы являются вирусными векторами и применяются для репликации нуклеотидных последовательностей в конкретных клетках-хозяевах, например в клетках насекомых или растительных клетках. Рекомбинантные векторы также используются для трансформации нуклеотидных молекул по настоящему изобретению в клетки-хозяева, вследствие чего нуклеотидные молекулы стабильно интегрируются в ДНК трансгенного хозяина. В одном варианте осуществления трансгенным хозяином является растение, например однодольное растение, такое как растение кукурузы или растение пшеницы. В вариантах осуществления трансгенное растение-хозяин представляет собой двудольное растение, такое как растение сои или растение хлопка.
[0064] В другом варианте осуществления по меньшей мере одна из нуклеиновых кислот по настоящему изобретению вводится в соответствующую кассету экспрессии, содержащую промотор и сигнал терминации. Экспрессия нуклеиновой кислоты может быть конститутивной, или может применяться индуцибельный промотор, отвечающий на различные типы стимулов для инициации транскрипции. В другом варианте осуществления клетка, в которой экспрессируется инсектицидный белок по настоящему изобретению, представляет собой микроорганизм, такой как вирус, бактерии или гриб. Еще в одном варианте осуществления вирус, такой как бакуловирус, содержит в своем геноме нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению и экспрессирует большие количества соответствующего инсектицидного белка после заражения соответствующих эукариотических клеток, которые пригодны для репликации вируса и экспрессии нуклеиновой кислоты. Полученный таким образом инсектицидный белок применяется в качестве инсектицидного средства. В качестве альтернативы, бакуловирусы, сконструированные с возможностью содержания нуклеиновой кислоты, применяются для инфицирования насекомых in vivo, и они уничтожают их либо посредством экспрессии инсектицидного токсина, либо посредством комбинации вирусной инфекции и экспрессии инсектицидного токсина. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение также охватывает способ получения полипептид с инсектицидной активностью, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, при которых экспрессируется молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид.
[0065] Бактериальные клетки также являются клетками-хозяевами для экспрессии нуклеиновых кислот по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления применяются непатогенные симбиотические бактерии, способные жить и размножаться в растительных тканях, так называемые эндофиты, или непатогенные симбиотические бактерии, способные колонизировать филлосферу или ризосферу, так называемые эпифиты. Такие бактерии включают бактерий родов Agrobacterium, Alcaligenes, Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Clavibacter, Enterobacter, Erwinia, Flavobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Rhizobium, Serratia, Streptomyces и Xanthomonas. Симбиотические грибы, такие как Trichoderma и Gliocladium, также являются возможными хозяевами для экспрессии нуклеиновых кислот по настоящему изобретению для той же цели.
[0066] Методики для этих генетических манипуляций являются специальными для различных доступных хозяев и известны из уровня техники. Например, векторы экспрессии pKK223-3 и pKK223-2 могут использоваться для экспрессии гетерологичных генов в Е. coli либо в транскрипционном, либо трансляционном слиянии под действием промотора tac или trc. Для экспрессии оперонов, кодирующих несколько ORF, самой простой процедурой является введение оперона в вектор, такой как pKK223-3, в виде транскрипционного слияния, что дает возможность применять когнатный сайт связывания рибосом гетерологичных генов. Методики для сверхэкспрессии у грамположительных видов, таких как Bacillus, также известны из уровня техники и могут использоваться в контексте настоящего изобретения (Quax et al. в: Industrial Microorganisms: Basic and Applied Molecular Genetics, Eds. Baltz et al., American Society for Microbiology, Washington (1993)). Альтернативные системы сверхэкспрессии основаны, например, на дрожжевых векторах и включают использование Pichia, Saccharomyces и Kluyveromyces (Sreekrishna, в: Industrial microorganisms: basic and applied molecular genetics, Baltz, Hegeman, and Skatrud eds., American Society for Microbiology, Washington (1993); Dequin & Barre, Biotechnology L2:173-177(1994); van den Bergef a/, Biotechnology 8:135-139 (1990)).
[0067] Некоторые инсектицидные белки были экспрессированы в растениях, и семена таких растений ежегодно продаются фермерам для применения для контроля различных насекомых-вредителей. Такие самозащищенные инсектицидные продукты рассматриваются и регистрируются различными регулирующими органами, включая, например, Агентство по охране окружающей среды США (ЕРА).
[0068] Воздействие при поступлении с пищей является основным путем, за счет которого люди могут подвергаться воздействию инсектицидных белков, экспрессируемых трансгенными растениями. Острая пероральная токсичность для млекопитающих и перевариваемость белка являются конечными точками оценки риска для здоровья человека, определяемыми ЕРА. Дополнительным научным доказательством безопасности инсектицидных белков является то, что они, как было показано, быстро расщепляются in vitro под действием искусственного желудочного сока. Например, результаты семи анализов in vitro, проведенных с иллюстративными белками Cry1, Cry2 и Cry3, показали, что белки быстро расщепляются, как правило, в течение 30 секунд. Эти результаты подтверждают более широкий вывод о том, что представители этих групп белков Cry (которые обладают значительной идентичностью аминокислотных последовательностей), вероятно, быстро расщепляются после поедания человеком. Подобные тесты проводят для каждого трансгенного белка, экспрессируемого в растениях. Другая область рассмотрения охватывает определение того, способны ли инсектицидные белки вызывать аллергическую реакцию. Продемонстрированное быстрое расщепление трансгенного инсектицидного белка in vitro должно сводить к минимуму возможность такого явления. Для сравнения, пищевые аллергены обычно персистируют в in vitro модели желудочно-кишечного тракта, тогда как обычные белки пищи, для которых не показана аллергенность, быстро расщепляются в искусственном желудочном соке (Metcalfe et al., 1996).
[0069] С помощью анализа с применением искусственного желудочного сока (SGF) измеряют in vitro перевариваемость тестируемого белка в строго контролируемых условиях, характерных для верхних отделов пищеварительного тракта млекопитающих. Например, полученный с помощью бактерий тестируемый белок Cry (в концентрации 0,5-5 мг/мл) подвергали воздействию фермента пепсина (из слизистой оболочки желудка свиньи, растворенного в 2 мг/мл NaCl, рН 1,2) в соотношении 10 единиц активности пепсина/мкг тестируемого белка в течение периода времени, составляющего один час, при 37°С. Образцы отбирали в моменты времени 1, 2, 5, 10, 30 и 60 минут и немедленно блокировали посредством добавления предварительно нагретого (95°С - 2 минуты) стоп-буфера (65% 0,5 М бикарбоната натрия, рН 11, 35% трициновый загрузочный буфер) для немедленной инактивации пепсина, и снова нагревали в течение дополнительных 5 минут. После завершения анализа образцы, взятые в определенные моменты времени, и контроли (только тестируемый белок, только пепсин) исследовали с помощью SDS-PAGE в 10-20% трис-трициновом геле (при этом пептиды были визуально различимы вплоть до 1 кДа) для отслеживания кинетики и уровня переваривания, осуществляемого пепсином. Если тестируемый белок или значительный полипептидный фрагмент тестируемого белка является визуально различимым, например, в моменты времени 5 и/или 10 минут, то он является неперевариваемым или не полностью перевариваемым в анализе с применением SGF и может быть качественно оценен как "нет" или "неперевариваемый". Если тестируемый белок и любой значительный полипептидный фрагмент не является визуально различимым, например, в момент времени 5 минут, то он является перевариваемым в анализе с применением SGF и может быть качественно оценен как "да" или "перевариваемый".
[0070] Настоящее изобретение также охватывает полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 45% идентичную, по меньшей мере 50% идентичную, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% идентичную или на 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 39-74 и дополнительно содержащую введенный сайт расщепления протеазой. Введенный сайт расщепления протеазой не встречается в природе и вводится в полипептидную последовательность в результате мутации по типу замены или в результате мутации по типу вставки или делеции. Введенный сайт расщепления протеазой может быть введен посредством вставки по меньшей мере одного остатка лейцина в полипептидную последовательность, содержащую любую из SEQ ID NO: 39-74. Введенная мутация может дестабилизировать полипептид таким образом, что протеаза может получать доступ к сайту расщепления, к которому она ранее не имела доступ вследствие плотной и/или стабильной укладки белка или стерического несоответствия. Введенный сайт расщепления протеазой может представлять собой введенную мутацию в полипептидной последовательности, которая распознается протеазой, такой как химотрипсин, трипсин или пепсин, в качестве сайта протеолитического расщепления. В некоторых вариантах осуществления введенный сайт расщепления протеазой может изменять существующий сайт расщепления протеазой таким образом, что он распознается другой протеазой. Сайты расщепления протеазой для химотрипсина, трипсина и пепсина широко известны из уровня техники. Химотрипсин преимущественно расщепляет пептидные амидные связи, в которых с карбоксильной стороны от амидной связи (в положении Р1) расположена крупная гидрофобная аминокислота (тирозин, триптофан и фенилаланин). Трипсин расщепляет пептидные цепи главным образом с карбоксильной стороны аминокислот лизина или аргинина, за исключением случаев, когда после какой-либо из них расположен пролин. Пепсин является наиболее эффективным при расщеплении пептидных связей между гидрофобными и предпочтительно ароматическими аминокислотами, такими как фенилаланин, триптофан, тирозин и лейцин. Эти сайты расщепления являются преимущественными сайтами расщепления и не включают все сайты расщепления, распознаваемые химотрипсином, трипсином или пепсином и, кроме того, не включают все сайты расщепления для всех протеаз.
[0071] Примером полипептида, сконструированного таким образом, что он содержит введенный сайт расщепления протеазой, является вариант NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47). Эта мутация по типу замены изменяет мотив с "YNAYLIG" на "YNALLL". Этот введенный сайт расщепления протеазой может распознаваться пепсином и/или химотрипсином и отсутствует в последовательности белка NitromobCRW дикого типа. В некоторых вариантах осуществления введенный сайт расщепления протеазой может находиться в сайте мутации или рядом с ним, например, в остатках 190-230 полипептида. Вариант NitromobCRW Y213L/I215L может характеризоваться измененной или менее стабильной третичной структурой по сравнению с NitromobCRW дикого типа. В некоторых вариантах осуществления введенный сайт расщепления протеазой может быть расположен дистально относительно введенной мутации. Например, введенная мутация Y213 и/или I215 может "ослаблять" трехмерную укладку полипептида NitromobCRW, тем самым делая сайт расщепления протеазой, который ранее был недоступным (и, следовательно, не расщеплялся), доступным для протеазы. Это приводит к тому, что в результате введения мутации вводится сайт расщепления протеазой, который не существовал в неизмененном полипептиде. В некоторых вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 1-300 любой из SEQ ID NO: 39-74. В некоторых вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 97-300 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 97-266 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 175-266 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 185-250 любой из SEQ ID NO: 40-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная мутация и/или введенный сайт расщепления протеазой расположены в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 200-230 любой из SEQIDNO: 40-74.
[0072] Настоящее изобретение также охватывает полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 45% идентичную, по меньшей мере 50% идентичную, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% идентичную или на 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 39-74 и дополнительно содержащую введенную мутацию, которая улучшает перевариваемость в анализе с применением SGF по сравнению с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 39. Мутация может представлять собой мутацию по типу замены, вставку или делецию. Мутация может представлять собой вставку по меньшей мере одного остатка лейцина.
[0073] Настоящее изобретение также включает способ улучшения перевариваемости полипептида, на по меньшей мере 45% идентичного, по меньшей мере 50% идентичного, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% идентичного или на 100% идентичного любой из SEQ ID NO: 39-74, включающий введение по меньшей мере одной мутации в аминокислотную последовательность полипептида. В вариантах осуществления эта введенная мутация улучшает перевариваемость полипептида в анализе с применением SGF. Мутация может улучшать перевариваемость за счет введения сайта расщепления протеазой. В других вариантах осуществления мутация может улучшать перевариваемость за счет изменения специфичности протеазы в этом сайте. Например, таким образом то, что могло быть сайтом для химотрипсина или трипсина, подвергается мутации с образованием сайта для пепсина. В других вариантах осуществления мутация может дестабилизировать белок таким образом, что сайт становится доступным для расщепления протеазой. Сайт, становящийся доступным для протеазы, может располагаться дистально относительно введенной мутации. В предпочтительных вариантах осуществления мутация не изменяет или в значительной степени не изменяет активность или инсектицидную активность полипептида. В некоторых вариантах осуществления полипептид с введенной мутацией обладает по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от инсектицидной активности NitromobCRW. Данный способ пояснен в примерах в настоящем описании, где, например, было обнаружено, что вариант NitromobCRW Y213L/I215L характеризуется улучшенной перевариваемостью в анализе с применением SGF. Он также сохранял очень высокую инсектицидную активность.
[0074] В некоторых вариантах осуществления способа, описанного выше, введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположена(расположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 1-300 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположенафасположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 97-300 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположенафасположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 97-266 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположенафасположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 175-266 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположенафасположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 185-250 любой из SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления введенная(введенные) мутация(мутации) может(могут) быть
расположенафасположены) в участке, соответствующем аминокислотным остаткам 200-230 любой из SEQ ID NO: 39-74.
[0075] В других вариантах осуществления мутация может быть введена в Y213 и/или I215 SEQ ID NO: 39 или проксимально относительно них. В дополнительных вариантах осуществления мутация может представлять собой Y213L/I215L. В других вариантах осуществления мутация может представлять собой вставку или делецию аминокислотного остатка, такую как, например, вставка по меньшей мере одного остатка лейцина. Данный(данные) остаток(остатки) может(могут) быть прилегающим(прилегающими) к Y213 и/или I215 или соседним(соседними) по отношению к ним в SEQ ID NO: 39, например, как в вариантах NitromobCRW L214-Leu-I215 (SEQ ID NO: 57) или I215-Leu-G216 (SEQ ID NO: 58). Остатки лейцина также могут быть вставлены проксимально относительно Y213 и/или I215, где "проксимально" может означать на расстоянии по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 8, по меньшей мере 10 или по меньшей мере 20 аминокислот от Y213 и/или I215.
[0076] Инсектицидные белки по настоящему изобретению характеризуются активностью в отношении контроля насекомых при тестировании против насекомых-вредителей в биоанализах. В одном варианте осуществления инсектицидные белки по настоящему изобретению активны против жесткокрылых и/или чешуекрылых насекомых. Специалисту в данной области техники будет понятно, что белок по настоящему изобретению может характеризоваться другим диапазоном инсектицидной активности по сравнению с другими белками по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления мутантный вариант NitromobCRW может характеризоваться инсектицидной активностью в отношении более широкого диапазона насекомых-вредителей, как, например, в отношении большего количества видов жесткокрылых или чешуекрылых, по сравнению с другими вариантами NitromobCRW. В других вариантах осуществления вариант NitromobCRW может характеризоваться инсектицидной активностью в отношении видов чешуекрылых, но не в отношении видов жесткокрылых. В некоторых вариантах осуществления вариант NitromobCRW может характеризоваться более широким диапазоном инсектицидной активности в отношении видов жесткокрылых или чешуекрылых по сравнению с немодифицированным NitromobCRW (SEQ ID NO: 39).
[0077] Насекомые в отряде Lepidoptera включают без ограничения любое известное в настоящее время или идентифицированное позже насекомое, которое классифицируется как чешуекрылое, в том числе те виды насекомых, которые относятся к подотрядам Zeugloptera, Glossata и Heterobathmiina, а также любую их комбинацию. Иллюстративные чешуекрылые насекомые включают без ограничения Ostrinia spp., такой как О. nubilalis (огневка кукурузная); Plutella spp., такой как Р. xylostella (капустная моль); Spodoptera spp., такой как S. frugiperda (совка травяная), S. ornithogalli (желтополосая совка), S. praefica (западная желтополосая совка), S. eridania (южная совка) и S. exigua (совка малая); Agrotis spp., такой как A. ipsilon (совка-ипсилон), A. segetum (озимая совка обыкновенная), A. gladiaria (озимая совка рода Agrotis) и A. orthogonia (совка прямоугольная); Striacosta spp., такой как S. albicosta (западная бобовая совка); Helicoverpa spp., такой как//, zea (совка кукурузная), Н. punctigera (совка хлопковая австралийская), S. littoralis (совка хлопчатника египетского) иН. armigera (совка хлопковая); Heliothis spp., такой как Н. virescem (табачная листовертка); Diatraea spp., такой как, grandiosella (огневка кукурузная юго-западная) и D. saccharalis (точильщик стеблей сахарного тростника); Trichoplusia spp., такой как Т. ni (совка капустная); Sesamia spp., такой как S. nonagroides (мотылек кукурузный средиземноморский); Pectinophora spp., такой как P. gossypiella (розовый коробочный червь); Cochylis spp., такой как С. hospes (полосатая подсолнечная моль); Manduca spp., такой как М. sexta (табачный бражник) и М quinquemaculata (бражник пятиточечный); Elasmopalpus spp., такой как E. lignosellus (точильщик стеблей кукурузы малый); Pseudoplusia spp., такой как P. includens (соевая совка); Anticarsia spp., такой как A. gemmatalis (совка бархатных бобов); Plathypena spp., такой как Р. scabra (совка клеверная); Pieris spp., такой как P. brassicae (белянка капустная), Papaipema spp., такой как P. nebris (точильщик Papaipema nebris); Pseudaletia spp., такой как P. unipuncta (совка луговая обыкновенная); Peridroma spp., такой как P. saucia (совка маргаритковая); Keiferia spp., такой как K. lycopersicella (томатная острица); Artogeia spp., такой как A rapae (белянка репная); Phthorimaea spp., такой как P. operculella (картофельная моль); Crymodes spp., такой как С. devastator (стеклянница); Feltia spp., такой как F. ducens (гусеница совки Feltia subgothica); и любую комбинацию вышеуказанных. В одном аспекте данного варианта осуществления инсектицидные белки по настоящему изобретению активны против совки-ипсилон, огневки сахарного тростника и/или огневки кукурузной юго-западной.
[0078] Насекомые в отряде Coleoptera включают без ограничения любое жесткокрылое насекомое, известное в настоящее время или идентифицированное позже, в том числе насекомых из подотрядов Archostemata, Myxophaga, Adephaga и Polyphaga, а также любую их комбинацию.
[0079] В одном аспекте данного варианта осуществления инсектицидные белки по настоящему изобретению активны против Diabrotica spp. Diabrotica представляет собой род жуков отряда Coleoptera, обычно называемый "кукурузными корневыми жуками" или "огуречными жуками". Типичные виды Diabrotica включают без ограничения Diabrotica barberi (северного кукурузного корневого жука), D. virgifera virgifera (западного кукурузного корневого жука), D. undecimpunctata howardii (южного кукурузного корневого жука), D. balteata (жука-блошку окаймленного), D. undecimpunctata undecimpunctata (жука-блошку одиннадцатиточечную), D. significata (3-точечного листоеда), D. speciosa (диабротику особую), D. virgifera zeae (мексиканского кукурузного корневого жука), D. beniensis, D. cristata, D. curviplustalata, D. dissimilis, D. elegantula, D. emorsitans, D. graminea, D. hispanloe, D. lemniscata, D. linsleyi, D. milleri, D. nummularis, D. occlusal, D. porrecea, D. scutellata, D. tibialis, D. trifasciata и D. viridula и любую их комбинацию.
[0080] Другие неограничивающие примеры жесткокрылых насекомых-вредителей в соответствии с настоящим изобретением включают Leptinotarsa spp., такой как Р. decemlineata (колорадский жук); Chrysomela spp., такой как С. scripta (листоед тополевый); Hypothenemus spp., такой как Н. hampei (жук кофейный); Sitophilus spp., такой как S. zeamais (маисовый долгоносик); Epitrix spp., такой как P. hirtipennis (жук-блошка шершавая) и P. cucumeris (блошка картофельная); Phyllotreta spp., такой как Р. cruciferae (блошка крестоцветная) и P. pusilla (западная черная блошка); Anthonomus spp., такой как A. eugenii (перечный долгоносик); Hemicrepidus spp., такой как H. memnonius (проволочники); Melanotus spp., такой как М communis (проволочник); Ceutorhychus spp., такой как С. assimilis (рапсовый семенной скрытнохоботник); Phyllotreta spp., такой как P. cruciferae (блошка крестоцветная); Aeolus spp., такой как А. mellillus (проволочник); Aeolus spp., такой как A. mancus (пшеничный проволочник); Horistonotus spp., такой как H. uhlerii (песчаный проволочник); Sphenophorus spp., такой как S. maidis (долгоносик маисовый), S. zeae (долгоносик тимофеечный), S. parvulus (мятликовый долгоносик) и S. callosus (долгоносик клубеньковый эспарцетовый); Phyllophaga spp. (личинки хрущей); Chaetocnema spp., такой как С.pulicaria (блошка стеблевая хлебная); Popillia spp., такой как P. japonica (японский жук); Epilachna spp., такой как P. varivestis (мексиканский бобовый жук); Cerotoma spp., такой как С.trifurcate (жук-листоед); Epicauta spp., такой как P. pestifera и Е. lemniscata (шпанские мушки), и любую комбинацию вышеуказанных.
[0081] Инсектицидные белки по настоящему изобретению также могут быть активными против полужесткокрылых, двукрылых, Lygus spp. и/или других колющих и сосущих насекомых, например из отряда Orthoptera или Thysanoptera. Насекомые в отряде Diptera включают без ограничения любое двукрылое насекомое, известное в настоящее время или идентифицированное позже, в том числе без ограничения Liriomyza spp., такой как P. trifolii (листовой минер) и P. sativae (листовой минер овощей); Scrobipalpula spp., такой как S. absoluta (листовой минер томатов); Delia spp., такой как D. platura (личинка мухи ростковой), D. brassicae (личинка мухи капустной весенней) и P. radicum (муха капустная весенняя); Psilia spp., такой как P. rosae (муха морковная); Tetanops spp., такой как Т. myopaeformis (личинка тли свекловичной), и любую комбинацию вышеуказанных.
[0082] Насекомые в отряде Orthoptera включают без ограничения любое известное в настоящее время или идентифицированное позже прямокрылое насекомое, в том числе без ограничения Melanoplus spp., такой как М. differentialis (кобылка отличительная), М. femurrubrum (краснобедрая кобылка), М. bivittatus (кобылка двухполосая) и любую их комбинацию.
[0083] Насекомые в отряде Thysanoptera включают без ограничения любое известное в настоящее время или идентифицированное позже бахромчатокрылое насекомое, в том числе без ограничения Frankliniella spp., такой как P. occidentalis (западный цветочный трипе) и P. fusca (табачный трипе); и Thrips spp., такой как Т. tabaci (трипе луковый), Т. palmi (пальмовый трипе), и любую комбинацию вышеуказанных.
[0084] Инсектицидные белки по настоящему изобретению также могут быть активными против нематод. Используемый в данном документе термин "нематода" охватывает любой известный в настоящее время или идентифицированный позже организм, который классифицирован в царстве животных, тип нематоды, в том числе без ограничения нематоды в пределах класса Adenophorea (в том числе, например, отряды Enoplida, Isolaimida, Mononchida, Dorylaimida, Trichocephalida, Mermithida, Muspiceida, Araeolaimida, Chromadorida, Desmoscolecida, Desmodorida и Monhysterida) и/или класса Secementea (в том числе, например, отряды Rhabdita, Strongylida, Ascaridida, Spirurida, Camallanida, Diplogasterida, Tylenchida и Aphelenchida).
[0085] Нематоды включают без ограничения паразитические нематоды, такие как клубеньковые нематоды, цистообразующие нематоды и/или ранящие нематоды. Иллюстративный роды нематод в соответствии с настоящим изобретением включают без ограничения Meloidogyne (клубеньковые нематоды), Heterodera (цистообразующие нематоды), Globodera (цистообразующие нематоды), Radopholus (роющие нематоды), Rotylenchulus (почковидные нематоды), Pratylenchus (ранящие нематоды), Aphelenchoides (нематоды листовые), Helicotylenchus (нематоды спиральные), Hoplolaimus (ланцетообразные нематоды), Paratrichodorus (нематоды, вызывающие тупоконечность корней), Longidorus, Nacobbus (ложно-клубеньковые нематоды), Subanguina, Belonlaimus (жалящие нематоды), Criconemella, Criconemoides (кольцевые нематоды), Ditylenchus, Dolichodorus, Hemicriconemoides, Hemicycliophora, Hirschmaniella, Hypsoperine, Macroposthonia, Melinius, Punctodera, Quinisulcius, Scutellonema, Xiphinema (кинжальные нематоды), Tylenchorhynchus (карликовые нематоды), Tylenchulus, Bursaphelenchus (круглые кишечные черви) и любую их комбинацию.
[0086] Типичные паразитические нематоды растений в соответствии с настоящим изобретением включают без ограничения Belonolaimus gracilis, Belonolaimus longicaudatus, Bursaphelenchus xylophilus (нематоду древесины хвойных пород), Criconemoides ornata, Ditylenchus destructor (нематоду корней картофеля), Ditylenchus dipsaci (стеблевую и луковичную нематоду), Globodera pallida (картофельную цистообразующую нематоду), Globodera rostochiensis (золотистую картофельную нематоду), Heterodera glycines (соевую цистообразующую нематоду), Heterodera schachtii (цистообразующую нематоду сахарной свеклы); Heterodera zeae (кукурузную цистообразующую нематоду), Heterodera avenae (цистообразующую нематоду злаковых культур), Heterodera carotae, Heterodera trifolii, Hoplolaimus columbus, Hoplolaimus galeatus, Hoplolaimus magnistylus, Longidorus breviannulatus, Meloidogyne arenaria, Meloidogyne chitwoodi, Meloidogyne hapla, Meloidogyne incognita, Meloidogyne javanica, Mesocriconema xenoplax, Nacobbus aberrans, Naccobus dorsalis, Paratrichodorus christiei, Paratrichodorus minor, Pratylenchus brachyurus, Pratylenchus crenatus, Pratylenchus hexincisus, Pratylenchus neglectus, Pratylenchus penetrans, Pratylenchus projectus, Pratylenchus scribneri, Pratylenchus tenuicaudatus, Pratylenchus thornei, Pratylenchus zeae, Punctodera chaccoensis, Quinisulcius acutus, Radopholus similis, Rotylenchulus reniformis, Tylenchorhynchus dubius, Tylenchulus semipenetrans (цитрусовую нематоду), Siphinema americanum, X. Mediterraneum и любую комбинацию вышеуказанных.
[0087] В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ получения инсектицидного белка, который является активным против насекомых, включающий: (а) получение клетки-хозяина, содержащей ген, который сам содержит кассету экспрессии и/или молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению; и (b) выращивание трансгенной клетки-хозяина таким образом, чтобы экспрессировать инсектицидный белок, который является активным против насекомых.
[0088] В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретение охватывает способ осуществления контроля насекомых, включающий доставку насекомым эффективного для контроля насекомых количества инсектицидного белка по настоящему изобретению.
[0089] В одном варианте осуществления по меньшей мере один из инсектицидных белков по настоящему изобретению экспрессируется в высшем организме, таком как растение. В данном случае трансгенные растения экспрессируют эффективные для контроля насекомых количества инсектицидного белка для самозащиты от насекомых-вредителей. В случае если насекомое начинает поедать такое трансгенное растение, оно также поглощает экспрессированный инсектицидный белок. Это будет удерживать насекомое от дальнейшего вгрызания в растительную ткань и/или даже может причинять вред насекомому или уничтожать его. Нуклеиновая кислота по настоящему изобретению вводится в кассету экспрессии, которая затем может быть устойчиво интегрирована в геном растения. В другом варианте осуществления нуклеиновую кислоту включают в непатогенный самореплицирующийся вирус.Растения, трансформированные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть однодольными или двудольными растениями и включают без ограничения кукурузу, пшеницу, овес, газонные травы, пастбищные травы, лен, ячмень, рожь, сладкий картофель, фасоль, горох, цикорий, салат-латук, капусту, цветную капусту, брокколи, репу, редьку, шпинат, спаржу, лук, чеснок, перец, сельдерей, тыкву крупноплодную, тыкву, коноплю, цукини, яблоню, грушевое дерево, айву, дыню, сливовое дерево, вишню, персиковое дерево, нектарин, абрикосовое дерево, клубнику, виноград, малину, ежевику, ананас, авокадо, папайю, манго, банановое дерево, сою, томат, сорго, сахарный тростник, сахарную свеклу, подсолнечник, рапс, клевер, табак, морковь, хлопчатник, люцерну, рис, картофель, баклажан, огурец, арабидопсис и древесные растения, такие как хвойные и лиственные деревья.
[0090] В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ получения растения или части растения с повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, включающий: (а) введение молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей кассету экспрессии по настоящему изобретению; и (b) выращивание части растения с получением растения, которое экспрессирует гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты кассеты экспрессии и которое характеризуется повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, которые не были трансформированы молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей кассету экспрессии. В предпочтительном варианте осуществления кассета экспрессии может кодировать полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична или сходна с SEQ ID NO: 39-74. В предпочтительном варианте осуществления кассета экспрессии может кодировать полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична SEQ ID NO: 47. "Повышенная" устойчивость к насекомым может быть измерена как повышение инсектицидной активности. Повышенная устойчивость к насекомым может быть больше 0%, на по меньшей мере 1%, на по меньшей мере 2%, на по меньшей мере 3%, на по меньшей мере 4%, на по меньшей мере 5%, на по меньшей мере 10%, на по меньшей мере 15%, на по меньшей мере 20%, на по меньшей мере 25%, на по меньшей мере 30%, на по меньшей мере 40%, на по меньшей мере 50%, на по меньшей мере 60%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 80%, на по меньшей мере 90%, на по меньшей мере 100%, на по меньшей мере 125%, на по меньшей мере 150%, на по меньшей мере 200%, на по меньшей мере 300%, на по меньшей мере 400%, на по меньшей мере 500%, на по меньшей мере 600%, на по меньшей мере 700%, на по меньшей мере 800%, на по меньшей мере 900% или на по меньшей мере 1000% больше инсектицидной активности по сравнению с контрольным растением. Растение или часть растения, характеризующиеся повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, могут быть получены с помощью способов трансформации растения, культивирования растительной ткани или селекции. Растение или часть растения могут быть получены с помощью способов полового или бесполого размножения. Могут использоваться любые подходящие контрольные растение или часть растения, например растение с таким же или аналогичным генетическим фоном, выращенное в той же среде. В вариантах осуществления контрольные растение или часть растения имеют тот же генетический фон и растут в той же среде, что и описанное растение, однако они не содержат молекулу по настоящему изобретению, в то время как описанное растение содержит молекулу по настоящему изобретению.
[0091] В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ повышения устойчивости к насекомым у растения или части растения по сравнению с контрольным растением или частью растения, включающий обеспечение экспрессии в растении или части растения молекулы нуклеиновой кислоты или кассеты экспрессии по настоящему изобретению, где экспрессия гетерологичной нуклеиновой кислоты кассеты экспрессии приводит к повышенной устойчивости к насекомым у растения или части растения по сравнению с контрольным растением или частью растения. В вариантах осуществления кассета экспрессии или молекула нуклеиновой кислоты содержит промотор, функционально связанный с гетерологичной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, которая содержит: (а) нуклеотидную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-38; (b) нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична нуклеотидной последовательности под любым из SEQ ID NO: 1-38; (с) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида содержит SEQ ID NO: 39-74 и характеризуется активностью в отношении контроля насекомых; (d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 39-74; или (е) нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности любой из (a)-(d), приведенных выше. Молекула нуклеиновой кислоты или кассета экспрессии может быть введена в растение. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты или кассета экспрессии может быть введена в часть растения, и при этом растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты или кассету экспрессии, может быть получено из части растения.
[0092] В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ получения растения с повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением, включающий выявление в части растения гетерологичной нуклеиновой кислоты, предусматривающей молекулу нуклеиновой кислоты или кассету экспрессии по настоящему изобретению, и получение растения из части растения, за счет чего обеспечивается получение растения с повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ идентификации растения или части растения, характеризующегося повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением или частью растения, включающий выявление в растении или части растения молекулы нуклеиновой кислоты или кассеты экспрессии по настоящему изобретению, за счет чего обеспечивается идентификация растения или части растения с повышенной устойчивостью к насекомым. В дополнительном варианте осуществления кассету экспрессии или ее диагностический фрагмент выявляют в продукте амплификации из образца нуклеиновой кислоты из растения или части растения. Диагностический фрагмент может представлять собой молекулу нуклеиновой кислоты длиной по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов, которая является уникальной для кассеты экспрессии по настоящему изобретению.
[0093] В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает способ получения растения, характеризующегося повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольным растением или частью растения, включающий скрещивание первого родительского растения со вторым родительским растением, где по меньшей мере первое родительское растение содержит в своем геноме гетерологичную нуклеиновую кислоту, которая предусматривает молекулу нуклеиновой кислоты или кассету экспрессии по настоящему изобретению, и получение поколения потомства, где поколение потомства содержит по меньшей мере одно растение, которое содержит гетерологичную нуклеиновую кислоту в своем геноме и которое проявляет повышенную устойчивость к насекомым по сравнению с контрольным растением.
[0094] В предпочтительных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению придают повышенную устойчивость к насекомым растению или части растения против жесткокрылого и/или чешуекрылого насекомого-вредителя. Контроль насекомых, представляющих собой жесткокрылых насекомых-вредителей, продемонстрирован в примерах. В дополнительных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению придают повышенную устойчивость к насекомым растению или части растения против видов Diabrotica, в том числе Diabrotica virgifera virgifera, Diabrotica barberi, Diabrotica undecimpunctata howardi, Diabrotica virgifera zeae и/или Diabrotica speciosa, и/или родственных видов.
[0095] В предпочтительных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению придают повышенную устойчивость к насекомым однодольному растению.
[0096] Настоящее изобретение дополнительно охватывает трансгенное растение, содержащее гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты или кассету экспрессии по настоящему изобретению, которая при транскрипции и трансляции придает повышенную устойчивость к насекомым. В предпочтительных вариантах осуществления гетерологичная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность, на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-38 или комплементарную ей последовательность. В дополнительном варианте осуществления трансгенное растение содержит гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность, на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичную SEQ ID NO: 1-38 или комплементарную ей последовательность. В вариантах осуществления трансгенное растение представляет собой двудольное растение. В предпочтительных вариантах осуществления трансгенное растение представляет собой однодольное растение. В дополнительных вариантах осуществления трансгенное растение представляет собой люцерну, укроп, яблоню, абрикосовое дерево, артишок, рукколу, спаржу, авокадо, банановое дерево, бобовые, свеклу, ежевику, чернику, брокколи, брюссельскую капусту, кочанную капусту, канолу, мускусную дыню, морковь, кассаву, цветную капусту, сельдерей, вишню, кинзу, цитрусовое растение, клементин, кофейное дерево, кукурузу, хлопчатник, огурец, Дугласову пихту, баклажан, эндивий, салат эскариоль, эвкалипт, фенхель, разновидности фигового дерева, тыкву бутылочную, виноград, грейпфрут, дыню мускатную белую, хикаму, киви, салат-латук, разновидности лука порея, лимон, лайм, сосну ладанную, манговое дерево, дыню, гриб, орех, окру, лук, апельсин, декоративное растение, папайю, петрушку, горох, персиковое дерево, земляной орех, грушевое дерево, перец, хурму, сосну, ананас, плантайн, сливовое дерево, гранатовое дерево, тополь, картофель, тыкву, айву, сосну лучистую, радиккио, редис, малину, рис, рожь, сорго, южную сосну, сою, шпинат, тыкву большую столовую, клубнику, сахарную свеклу, подсолнечник, сладкий картофель, ликвидамбар, танжерин, чай, табак, томат, газонную траву, виноград культурный, арбуз, ямс или цуккини. В предпочтительных вариантах осуществления трансгенное растение представляет собой просо, просо прутьевидное, маис, сорго, пшеницу, овес, газонную траву, пастбищную траву, лен, рис, сахарный тростник, масличный рапс или ячмень.
[0097] В еще одном варианте осуществления трансгенное растение по настоящему изобретению содержит гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность промотора. В еще одном варианте осуществления трансгенное растение по настоящему изобретению может содержать гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует по меньшей мере один дополнительный требуемый признак. Дополнительный признак может быть закодирован в той же гетерологичной молекуле нуклеиновой кислоты, что и молекула по настоящему изобретению, или он может быть закодирован во второй гетерологичной молекуле нуклеиновой кислоты. Дополнительный требуемый признак может придавать устойчивость к насекомым ко второму насекомому-вредителю, устойчивость к насекомым к тому же насекомому-вредителю, переносимость абиотического стресса, мужскую стерильность, устойчивость к гербицидам, устойчивость к бактериальным заболеваниям, устойчивость к грибковым заболеваниям, устойчивость к вирусным заболеваниям, устойчивость к нематодам, модифицированный метаболизм жирных кислот, модифицированный метаболизм углеводов, улучшенную пищевую ценность, улучшенные характеристики при промышленном способе или измененную репродуктивную способность. Дополнительный требуемый признак также может стимулировать продуцирование в растении ценного с коммерческой точки зрения фермента или метаболита.
[0098] В вариантах осуществления требуемый дополнительный признак представляет собой второе пестицидное средство. Второе пестицидное средство может быть активным по отношению к любому вредителю растения, включающему насекомых, нематод, грибы, вирусы или бактерии. Примеры насекомых-вредителей растений включают, и не ограничиваются ими, Nilaparvata spp. (например, N. lugens (бурую рисовую цикадку)); Laodelphax spp. (например, L. striatellus (малую бурую рисовую цикадку)); Nephotettix spp. (например, N. virescens или N. cincticeps (зеленую цикадку) или N. nigropictus (рисовую цикадку)); Sogatella spp. (например, S. furcifera (цикадку белоспинную)); Blissus spp. (например,. В. leucopterus leucopterus (клопа постельного)); Scotinophora spp. (например, S. vermidulate (рисового долгоносика)); Acrosternum spp. (например,. A. hilare (зеленого жука-вонючку)); Parnara spp. (например,. P. guttata (рисовую толстоголовку)); Chilo spp. (например, С. suppressalis (рисового полосатого стеблееда), С. auricilius (золотистого стеблееда) или С. polychrysus (черноголового стеблееда)); Chilotraea spp. (например, С. polychrysa (рисового стеблееда)); Sesamia spp. (например, S. inferens (розового рисового точильщика)); Tryporyza spp. (например,. Т. innotata (белого рисового точильщика) или Т. incertulas (желтого рисового точильщика)); Cnaphalocrocis spp. (например, С. medinalis (листовертку рисовую)); Agromyza spp. (например, A. oryzae (листового минера), или A. parvicornis (кукурузного точкового листового минера)); Diatraea spp. (например, D. saccharalis (точильщика стеблей сахарного тростника) или D. grandiosella ((огневку кукурузную юго-западную)); Narnaga spp. (например, N. aenescens (зеленую рисовую гусеницу)); Xanthodes spp. (например, X transversa (зеленую гусеницу)); Spodoptera spp. (например, S. frugiperda (совку травяную), S. exigua (совку малую), S. littoralis (египетскую хлопковую совку) или S. praefwa (западную желтополосую совку)); Mythimna spp. (например, Mythmna (Pseudaletia) seperata (гусеницу)); Helicoverpa spp. (например, H. zea (совку кукурузную)); Colaspis spp. (например, С. brunnea (листоеда виноградного)); Lissorhoptrus spp. (например,. L. oryzophilus (долгоносика рисового водяного)); Echinocnemus spp. (например, Е. squamos (долгоносика растений риса)); Diclodispa spp. (например, D. armigera (рисовую шипоноску)); Oulema spp. (например, О. oryzae (листогрыза); Sitophilus spp. (например, S. oryzae (рисового долгоносика)); Pachydiplosis spp. (например,. P. oryzae (рисовую галлицу)); Hydrellia spp. (например, Н. griseola (малого рисового листового минера) или Н. sasakii (личинку, поедающую рисовые стебли)); Chlorops spp. (например,. С.o ryzae (личинку, поедающую стебли)); Diabrotica spp. (например, D. virgifera virgifera (западного кукурузного корневого жука), D. barberi (северного кукурузного корневого жука), D. undecimpunctata howardi (южного кукурузного корневого жука), D. virgifera zeae (мексиканского кукурузного корневого жука); D. balteata (жука-блошку окаймленную)); Ostrinia spp. (например,. О. nubilalis (огневку кукурузную)); Agrotis spp. (например,. A. ipsilon (совку-ипсилон)); Elasmopalpus spp. (например, Е. lignosellus (точильщика стеблей кукурузы малого)); Melanotus spp. (проволочников); Cyclocephala spp. (например, С.borealis (северного майского жука) или С. immaculata (южного майского жука)); Popillia spp. (например, Р. japonica (хрущика японского)); Chaetocnema spp. (например, С.pulicaria (кукурузного жука-блошку)); Sphenophorus spp. (например, S. maidis (долгоносика маисового)); Rhopalosiphum spp. (например,. R. maidis (тлю кукурузную листовую)); Anuraphis spp. (например, A maidiradicis (тлю кукурузную корневую)); Melanoplus spp. (например, М. femurrubrum (краснобедрую кобылку) М. differentialis (кобылку отличительную) или М. sanguinipes (мигрирующую кобылку)); Hylemya spp. (например,. Н. platura (личинку мухи ростковой)); Anaphothrips spp. (например, A. obscrurus (трипса злакового)); Solenopsis spp. (например, S. milesta (муравья-вора)); или spp. (например,. Т. urticae (обыкновенного паутинного клеща), Т. cinnabarinus (красного паутинного клеща); Helicoverpa spp. (например, Н. zea (совку кукурузную) или Н. armigera (совку хлопковую)); Pectinophora spp. (например,. P. gossypiella (розового коробочного червя)); Earias spp. (например, E. vittella (точечного коробочного червя хлопка)); Heliothis spp. (например, Н. virescens (табачную листовертку)); Anthonomus spp. (например, A grandis (долгоносика хлопкового)); Pseudatomoscelis spp. (например, Р. seriatus (марокканскую кобылку)); Trialeurodes spp. (например, Т. abutiloneus (белокрылку с полосами на крыльях) Т. vaporariorum (белокрылку тепличную)); Bemisia spp. (например,. В. argentifolii (белокрылку серебрянокрылую)); Aphis spp. (например, A gossypii (тлю хлопковую)); Lygus spp. (например, L. lineolaris (клопа полевого) или L. hesperus (западного клопа лугового)); Euschistus spp. (например, Е. conspersus (маскирующегося жука-вонючку)); Chlorochroa spp. (например, С. sayi (жука-вонючку Say)); Nezara spp. (например, N. viridula (южного зеленого жука-вонючку)); Thrips spp. (например, Т. tabaci (трипса лукового)); Frankliniella spp. (например,. F. fusca (трипса табачного) или F. occidentalis (западного трипса обыкновенного)); Leptinotarsa spp. (например, L. decemlineata (колорадского жука), L. juncta (ложного картофельного жука) или L. texana (техасского ложного картофельного жука)); Lema spp. (например, L. trilineata (картофельного жука с тремя полосками)); Epitrix spp. (например, Е. cucumeris (картофельного жука-блошку), Е. hirtipennis (жука-блошку) или E. tuberis (жука-блошку клубневого)); Epicauta spp. (например, Е. vittata (шпанку полосатую)); Phaedon spp. (например, P. cochleariae (горчичного листогрыза)); Epilachna spp. (например, Е. varivetis (мексиканского жука бобового)); Acheta spp. (например, A. domesticus (сверчка домового)); Empoasca spp. (например, Е. fabae (цикадку картофельную)); Myzus spp. (например, М. persicae (тлю персиковую зеленую)); Paratrioza spp. (например, P. cockerelli (листоблошку)); Conoderus spp. (например, С. falli (южного картофельного проволочника) или С. vespertinus (табачного проволочника)); Phthorimaea spp. (например, P. operculella (картофельную моль)); Macrosiphum spp. (например, М. euphorbiae (тлю картофельную обыкновенную)); Thyanta spp. (например, Т. pallidovirens (красноплечего жука-вонючку)); Phthorimaea spp. (например, P. operculella (картофельную моль)); Helicoverpa spp. (например, Н. zea (совку томатную); Keiferia spp. (например, K. lycopersicella (томатную острицу)); Limonius spp. (проволочников); Manduca spp. (например, М. sexta (табачного бражника) или М. quinquemaculata (бражника пятиточечного)); Liriomyza spp. (например, L. sativae, L. trifolli или L. huidobrensis (листового минера)); Drosophilla spp. (например, D. melanogaster, D. yakuba, D. pseudoobscura или D. simulans); Carabus spp. (например, С. granulatus); Chironomus spp. (например,. С. tentanus); Ctenocephalides spp. (например, С. felis (блоху кошачью)); Diaprepes spp. (например, D. abbreviatus (скосаря люцернового)); Ips spp. (например, I. pini (короеда соснового)); Tribolium spp. (например,. Т. castaneum (хрущака малого булавоусого)); Glossina spp. (например, G. morsitans (муху цеце)); Anopheles spp. (например, A. gambiae (комара малярийного)); Helicoverpa spp. (например, H. armigera (африканскую совку хлопковую)); Acyrthosiphon spp. (например, A. pisum (тлю гороховую)); Apis spp. (например,. А. melifera (медоносную пчелу)); Homalodisca spp. (например, Н. coagulate ((цикадку с зеркальными крыльями)); Aedes spp. (например, Ае. aegypti (желтолихорадочного комара)); Bombyx spp. (например, В. mori (шелковичного червя)); Locusta spp. (например, L. migratoria (мигрирующую саранчу)); Boophilus spp. (например, В. microplus (клеща кольчатого)); Acanthoscurria spp. (например, A gomesiana (рыжего шоколадного птицееда)); Diploptera spp. (например, D. punctata (тихоокеанского жука-таракана)); Heliconius spp. (например, Н. erato (красную бабочку-почтальона) или Н. melpomene (бабочку-почтальона)); Curculio spp. (например, С. glandium (плодожила дубового)); Plutella spp. (например, P. xylostella (капустную моль)); Amblyomma spp. (например, A. variegatum (клеща кольчатого)); Anteraea spp. (например, A. yamamai (шелкопряда)); nArmigeres spp. (например, A subalbatus).
[0099] Инсектицидные белки по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с другими пестицидными средствами (например, белками Cry Bt) с расширением целевого диапазона вредителей. Кроме того, применение инсектицидных белков по настоящему изобретению в комбинации с инсектицидным средством, которое характеризуется превосходным механизмом действия или целенаправленно воздействует на другой рецептор в кишечнике насекомого, характеризуется особой полезностью в отношении предупреждения появления устойчивости у насекомых и/или управления ею.
[00100] Второе пестицидное средство может представлять собой инсектицидный белок, полученный из Bacillus thuringiensis. Инсектицидный белок В. thuringiensis может представлять собой любой из нескольких инсектицидных белков, в том числе без ограничения белок Cry1, белок Cry3, белок Cry 6, белок Cry7, белок Cry8, белок Cry9, белок Cry11, белок Cry22, белок Cry 23, белок Cry 36, белок Cry37, белок Cry34 вместе с белком Cry35, бинарный инсектицидный белок СгуЕТ33 и CryET34, бинарный инсектицидный белок TIC100 и TIC101, бинарный инсектицидный белок PS149B1, VIP (вегетативный инсектицидный белок, раскрытый в патентах США 5849870 и 5877012, включенных в данный документе посредством ссылки), TIC900 или родственный белок, TIC901, TIC1201, TIC407, TIC417, модифицированный белок Cry3A или гибридные белки или химеры, полученные из любых вышеуказанных инсектицидных белков. В других вариантах осуществления инсектицидный белок В. thuringiensis выбран из группы, состоящей из Cry3Bb1, Cry34Ab1 вместе с Cry35Ab1, mCry3A (патент США №7276583, включенный в данный документ посредством ссылки), eCry3.1Ab (патент США №8309516, включенный в данный документ посредством ссылки) и белки Vip3A, в том числе Vip3Aa (патент США №6137033, включенный в данный документ посредством ссылки).
[00101] В других вариантах осуществления трансгенное растение по настоящему изобретению может содержать второе пестицидное средство, которое может быть получено из источников, отличных от В. thuringiensis. Второе инсектицидное средство может представлять собой средство, выбранное из группы, содержащей α-амилазу, пероксидазу, холестериноксидазу, пататин, протеазу, ингибитор протеазы, уреазу, ингибитор альфа-амилазы, порообразующий белок, хитиназу, лектин, сконструированное антитело или фрагмент антитела, инсектицидный белок Bacillus cereus, инсектицидный белок Xenorhabdus spp. (такого как Х. nematophila или Х. bovienii), инсектицидный белок Photorhabdus spp. (такого как P. luminescens или Р. asymobiotica), инсектицидный белок Brevibacillus spp. (такого как В. laterosporous), инсектицидный белок Lysinibacillus spp. (такого как L. sphearicus), инсектицидный белок Chromobacterium spp. (такого как С. subtsugae или С. piscinae), инсектицидный белок Yersinia spp. (такого как Y. entomophaga), инсектицидный белок Paenibacillus spp. (такого как P. propylaea), инсектицидный белок Clostridium spp. (такого как С. bifermentans), Pseudomonas spp. (такого как Р. fluorescens) и лигнин. В других вариантах осуществления второе средство может представлять собой по меньшей мере один инсектицидный белок, полученный из инсектицидного токсинового комплекса (Тс) из Photorhabdus, Xenorhabus, Serratia или Yersinia. В других вариантах осуществления инсектицидный белок может представлять собой ADP-рибозилтрансферазу, полученную из инсектицидных бактерий, таких как Photorhabdus ssp. В еще других вариантах осуществления инсектицидный белок может представлять собой Axmi205 или полученный из Axmi205 (патент США №8575425 и №9394345, каждый включен в данный документ посредством ссылки). В других вариантах осуществления инсектицидный белок может представлять собой VIP-белок, такой как VIP1 и/или VIP2, из В. cereus. В еще одних вариантах осуществления инсектицидный белок может представлять собой бинарный токсин, полученный из инсектицидных бактерий, такой как ISP1A и ISP2A из В. laterosporous или BinA и BinB из L. sphaericus. В других вариантах осуществления инсектицидный белок может представлять собой белок или вариант белка LachbCRW (заявка согласно РСТ № PCT/US 2017/045256), HmassCRW (заявка согласно РСТ № PCT/US 2017/058179) или WoodsCRW (заявка согласно РСТ № PCT/US 2018/012730). В еще одних вариантах осуществления инсектицидный белок может быть сконструированным, или может быть гибридным или химерой из любых предыдущих инсектицидных белков.
[00102] В некоторых вариантах осуществления трансгенное растение по настоящему изобретению может содержать и/или экспрессировать по меньшей мере второе пестицидное средство, которое отличается от молекул белковой природы. В некоторых вариантах осуществления второе пестицидное средство может присутствовать на поверхности растения, например, в качестве средства для местного применения. В предпочтительных вариантах осуществления второе пестицидное средство представляет собой молекулу интерферирующей РНК. Как правило, интерферирующая РНК содержит по меньшей мере фрагмент РНК, соответствующий целевому гену, спейсерную последовательность и второй фрагмент РНК, который комплементарен первому, за счет чего может образовываться двухнитевая структура РНК. РНК-интерференция (RNAi) происходит, когда организм распознает молекулы двухнитевой РНК (dsRNA) и гидролизует их. Полученные продукты гидролиза представляют собой небольшие фрагменты РНК длиной приблизительно 19-24 нуклеотидов, называемые малыми интерферирующими РНК (siRNA). Затем siRNA распространяются или разносятся по всему организму, в том числе через клеточные мембраны, где они гибридизируются с mRNA (или другими РНК) и вызывают гидролиз РНК. Интерферирующие РНК распознаются комплексом сайленсинга РНК-интерференции (RISC), в который вводится эффекторная нить (или "направляющая нить") РНК. Данная направляющая нить действует как матрица для распознавания и разрушения дуплексных последовательностей. Данный процесс повторяется каждый раз, когда siRNA гибридизируется с комплементарной ей целевой РНК, эффективно предотвращая трансляцию таких mRNA, и таким образом "сайленсингу" подвергается экспрессия специфических генов, с которых mRNA были транскрибированы. Интерферирующие РНК известны из уровня техники как применяемые для контроля насекомых (см., например, публикацию WO 2013/192256, включенную в данный документ посредством ссылки). Интерферирующая РНК, предназначенная для применения в контроле насекомых, обеспечивает получение не встречающейся в природе двухнитевой РНК, которая пользуется нативными путями RNAi у насекомого для запуска понижающей регуляции целевых генов, что может приводить к прекращению питания и/или роста и может приводить к гибели насекомого-вредителя. Молекула интерферирующей РНК может придавать устойчивость к насекомым против того же целевого вредителя, что и белок по настоящему изобретению, или может целенаправленно воздействовать на другого вредителя. Целевое насекомое-вредитель растения может питаться путем жевания, сосания или прокалывания. Интерферирующие РНК известны из уровня техники как применимые для контроля насекомых. В вариантах осуществления dsRNA, пригодная для контроля насекомых, описана в публикациях WO №№ WO2018/026770, WO 2018/026773 и WO 2018/026774, включенных в данный документ посредством ссылки. В вариантах осуществления dsRNA, пригодная для контроля насекомых, описана в патентах США №№92388223, 9340797 или 8946510, включенных в данный документ посредством ссылки. В вариантах осуществления dsRNA, пригодная для контроля насекомых, описана в заявках на патент США №№12/868994, 13/831230, 14/207313 или 14/207318, включенных в данный документ посредством ссылки. В других вариантах осуществления интерферирующая РНК может придавать устойчивость против вредителя растений, отличного от насекомого, такого как нематода-вредитель или вирус-вредитель.
[00103] Совместная экспрессия более чем одного пестицидного средства в одном трансгенном растении может быть достигнута путем получения одиночного рекомбинантного вектора, содержащего кодирующие последовательности более чем одного пестицидного средства в так называемом молекулярном стеке, и генетического конструирования растения, которое бы содержало и экспрессировало все эти пестицидные средства в трансгенном растении. Такие молекулярные стеки также могут быть получены с применением мини-хромосом, которые описаны например в патенте США 7235716. Как альтернатива, трансгенное растение, содержащее одну нуклеиновую кислоту, кодирующую первое пестицидное средство, может быть повторно трансформировано с помощью другой нуклеиновой кислоты, кодирующей второе пестицидное средство и т.д. Как альтернатива, растение, родитель 1, может быть получено с помощью способов генной инженерии для экспрессии генов по настоящему изобретению. Второе растение, родитель 2, может быть получено с помощью способов генной инженерии для экспрессии второго пестицидного средства. Путем скрещивания родителя 1 с родителем 2 получают растения-потомки, которые экспрессируют все гены, введенные в родителей 1 и 2.
[00104] Трансгенные растения или семена, содержащие и/или экспрессирующие инсектицидный белок по настоящему изобретению, также могут быть обработаны инсектицидом или инсектицидным покрытием для семян, которые описаны в патентах США №№5849320 и 5876739, включенных в данный документ посредством ссылки. В вариантах осуществления, в которых как инсектицид или инсектицидное покрытие для семян, так и трансгенное растение или семя по настоящему изобретению являются активными против одного и того же целевого насекомого, например, жесткокрылого вредителя или целевого вредителя Diabrotica, данная комбинация является применимой (i) в способе дополнительного усиления активности композиции по настоящему изобретению против целевого насекомого и/или (ii) в способе предупреждения развития устойчивости к композиции по настоящему изобретению посредством обеспечения еще одного механизма действия против целевого насекомого. Таким образом, в вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ усиления контроля популяции насекомых Diabrotica, включающий обеспечение трансгенного растения или семени по настоящему изобретению и применение по отношению к растению или семени инсектицида или инсектицидного покрытия для семян, предназначенного для трансгенного растения или семени по настоящему изобретению.
[00105] Даже в случае, если инсектицид или инсектицидное покрытие для семян являются активными против другого насекомого, инсектицид или инсектицидное покрытие для семян являются пригодными для расширения диапазона контроля насекомых, например, посредством добавления инсектицида или инсектицидного покрытия для семян, которые характеризуются активностью против чешуекрылых насекомых, к трансгенному семени по настоящему изобретению, которое в некоторых вариантах осуществления характеризуется активностью против жесткокрылых и некоторых чешуекрылых насекомых, при этом полученное покрытое трансгенное семя обеспечивает контроль как чешуекрылых, так и жесткокрылых насекомых-вредителей.
[00106] Примеры таких инсектицидов и/или инсектицидных покрытий для семян включают без ограничения карбамат, пиретроид, фосфорорганическое соединение, фрипрол, неоникотиноид, хлорорганическое соединение, нереистоксин или их комбинацию. В другом варианте осуществления инсектицид или инсектицидное покрытие для семян выбраны из группы, состоящей из карбофурана, карбарила, метомила, бифентрина, тефлутрина, перметрина, цифлутрина, лямбда-цигалотрина, циперметрина, дельтаметрина, хлорпирифоса, хлорэтоксифоса, диметоата, этопрофоса, малатиона, метил-паратиона, фората, тербуфоса, тебупиримифоса, фипронила, ацетамиприда, имидаклоприда, тиаклоприда, тиаметоксама, эндосульфана и их комбинации. Коммерческие продукты, содержащие такие инсектициды и инсектицидные покрытия для семян, включают без ограничения Furadan® (карбофуран), Lanate® (мезомил, метомил, месомил), Sevin® (карбарил), Talstar® (бифентрин), Force® (тефлутрин), Ammo® (киперметрин), Cymbush® (циперметрин), Delta Gold® (дельтаметрин), Karate® (лямбда-цигалотрин), Ambush® (перметрин), Pounce® (перметрин), Brigade® (бифентрин), Capture® (бифентрин), ProShield® (тефлутрин), Warrior® (лямбда-цигалотрин), Dursban® (хлорпирифос), Fortress® (хорэтоксифос), Мосар® (этопроп), Thimet® (форат), AAstar® (форат, флуцитинат), Rampart® (форат), Counter® (тербуфос), Cygon® (диметоат), Dicapthon, Regent® (фипронил), Cruiser® (тиаметоксам), Gaucho® (имидаклоприд), Prescribe® (имидаклоприд), Poncho® (клотианидин) и Aztec® (цифлутрин, тебупиримфос).
[00107] Настоящее изобретение также охватывает композицию, содержащую эффективное для контроля насекомых количество инсектицидного белка в соответствии с настоящим изобретением. В дополнительных вариантах осуществления композиция содержит подходящий сельскохозяйственный носитель и полипептид по настоящему изобретению с инсектицидной активностью. Сельскохозяйственный носитель может предусматривать вспомогательные вещества, вещества, облегающие смешивание, усиливающие средства и т.д., целесообразные для применения активного ингредиента, такого как полипептид по настоящему изобретению, в том числе полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 39-74. Подходящие носители не должны быть фитотоксичными по отношению к ценным культурам, в частности при концентрациях, используемых для применения композиций в присутствии культур, и не должны вступать в химическую реакцию с соединениями активного ингредиента, описанного в данном документе, а именно, полипептидом по настоящему изобретению или другими ингредиентами композиции. Такие смеси могут быть разработаны для непосредственного применения по отношению к культурам или могут представлять собой концентраты или составы, которые обычно разбавляют дополнительными носителями и вспомогательными средствами перед применением. Они могут включать инертные или активные компоненты и могут представлять собой твердые вещества, такие как, например, дусты, порошки, гранулы, диспергируемые в воде гранулы или смачиваемые порошки, или жидкостями, такими как, например, эмульгируемые концентраты, растворы, эмульсии или суспензии. Подходящие сельскохозяйственные носители могут включать жидкие носители, например, воду, толуол, ксилол, лигроин, растительное масло, ацетон, метилэтилкетон, циклогексанон, трихлорэтилен, перхлорэтилен, этилацетат, амилацетат, бутилацетат, монометиловый эфир пропиленгликоля и монометиловый эфир диэтиленгликоля, метанол, этанол, изопропанол, амиловый спирт, этиленгликоль, пропиленгликоль, глицерин и т.п. Как правило, лучшим выбором в отношении носителя для разбавления концентратов является вода. Подходящие твердые носители могут включать тальк, пирофиллитовую глину, кремнезем, аттапульгитовую глину, кизельгур, мел, диатомовую землю, известь, карбонат кальция, бентонитовую глину, фуллерову землю, шелуху семян хлопчатника, пшеничную муку, соевую муку, пемзу, древесную муку, муку из скорлупы грецкого ореха, лигнин и т.п.В другом варианте осуществления полипептид по настоящему изобретению может быть инкапсулирован в синтетической матрице, такой как полимер, и нанесен на поверхность хозяина, такого как растение. Поглощение насекомым клеток-хозяев обеспечивает доставку в насекомое средств для контроля насекомых и приводит к токсическому эффекту у насекомого-вредителя.
[00108] В дополнительных вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению может представлять собой порошок, дуст, пеллету, гранулу, жидкость для распыления, эмульсию, коллоидное вещество или раствор. Композицию по настоящему изобретению можно получать посредством обезвоживания, лиофилизации, гомогенизации, экстракции, фильтрации, центрифугирования, осаждения или концентрирования культуры бактериальных клеток. Композиция по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97% или по меньшей мере 99% по весу полипептида по настоящему изобретению.
[00109] В вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере второе пестицидное средство (например, которое может быть экспрессировано трансгенным путем в растении и/или включено в композицию), которое может являться инсектицидным, нематоцидным, фунгицидным или бактерицидным. По меньшей мере второе пестицидное средство может быть инсектицидным по отношению к тому же насекомому, что и полипептид по настоящему изобретению, или к другому насекомому. Второе пестицидное средство может представлять собой полипептид. Пестицидное средство может представлять собой интерферирующую РНК (например, dsRNA). Второе пестицидное средство может представлять собой микроорганизм, такой как бактерии, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пестицидное средство, и/или содержит пестицидное средство, такое как полипептид или интерферирующая РНК. Микроорганизм может быть аттенуированным, инактивированным нагреванием или лиофилизированным. Микроорганизм может быть мертвым или не способным к воспроизведению. Второе пестицидное средство может представлять собой инсектицид, например, карбофуран, карбарил, метомил, бифентрин, тефлутрин, перметрин, цифлутрин, лямбда-цигалотрин, циперметрин, дельтаметрин, хлорпирифос, хлорэтоксифос, клотианидин, диметоат, этопрофос, малатион, метилпаратион, форат, тербуфос, тебупиримифос, фипронил, ацетамиприд, имидаклоприд, тиаклоприд, тиаметоксам, эндосульфан, бенсултап или их комбинацию или коммерческий продукт, содержащий такие инсектициды и инсектицидные покрытия для семян, описанные выше.
[00110] Композиция по настоящему изобретению, например композиция, содержащая полипептид по настоящему изобретению и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, может применяться в традиционных агротехнических способах. Приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель представляет собой состав, применимый для нанесения на растение или семя композиции, содержащей полипептид по настоящему изобретению. Например, композиции по настоящему изобретению можно смешивать с водой и/или удобрениями и можно применять в отношении требуемого места произрастания/обитания до появления всходов и/или после появления всходов любым способом, как например, с помощью распылительных баков самолетов, оросительного оборудования, распылительного оборудования непосредственного впрыскивания, ранцевых распылительных баки, бочек для купания скота, фермерского оборудования, применяемого в наземном распылении (например, штанговые распылители, ручные распылители) и т.п. Требуемое место произрастания/обитания может представлять собой почву, растения и т.п.
[00111] Композицию по настоящему изобретению можно применять в отношении семени или части растения для вегетативного размножения в любом физиологическом состоянии, в любое время между сбором семян и посевом семян; во время или после посева и/или после прорастания. Предпочтительно, чтобы семя или часть растения для вегетативного размножения находились в достаточно устойчивом состоянии, чтобы в процессе обработки они не подвергались повреждению или подвергались минимальному повреждению, включая физическое повреждение или биологическое повреждение. Состав может применяться по отношению к семенам или частям растения для вегетативного размножения с применением традиционных методик и устройств для нанесения покрытия, таких как методики псевдоожиженного слоя, способ вальцовой мельницы, ротостатические протравливатели семян и барабаны для нанесения покрытий.
[00112] Настоящее изобретение также включает способ контроля популяции чешуекрылых и/или жесткокрылых вредителей, включающий приведение указанной популяции в контакт с эффективным для контроля насекомых количеством полипептида по настоящему изобретению с инсектицидной активностью, где полипептид на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентичен SEQ ID NO: 39-74. Приведение в контакт предусматривает представителей популяции вредителей, питающихся или поглощающих полипептид. Полипептид может быть введен в рацион насекомого или может экспрессироваться в растительной ткани, которую насекомое затем поглощает, или присутствовать на ней. В дополнительных вариантах осуществления осуществление контроля популяций чешуекрылых и/или жесткокрылых вредителей включает уничтожение насекомых путем приведения насекомых в контакт с эффективным для контроля насекомых количеством полипептида по настоящему изобретению.
[00113] Настоящее изобретение также предусматривает способ защиты растения от насекомого-вредителя, включающий экспрессирование в растении или растительной клетке нуклеотидной последовательности или кассеты экспрессии, которая кодирует инсектицидный полипептид по настоящему изобретению. В вариантах осуществления нуклеотидная последовательность на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична нуклеотидной последовательности под SEQ ID NO: 2-36 или кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 39-74. В дополнительных вариантах осуществления растение или растительная клетка продуцируют инсектицидный полипептид с инсектицидной активностью против чешуекрылого и/или жесткокрылого вредителя.
[00114] Настоящее изобретение также предусматривает способ повышения урожайности у растения, включающий выращивание в поле растения или его семени, содержащих стабильно встроенную в его геном молекулу нуклеиновой кислоты кассеты экспрессии по настоящему изобретению, и где указанное поле инфицировано вредителем, против которого указанный полипептид характеризуется инсектицидной активностью.
[00115] После того как требуемая нуклеиновая кислота трансформирована в конкретный вид растения, она может распространяться в этом виде или переходить в другие сорта этого же вида с помощью традиционных технологий разведения, в особенности включая коммерчески важные сорта.
[00116] В вариантах осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению экспрессируется в трансгенных растениях, обуславливая таким образом биосинтез соответствующего инсектицидного белка в трансгенных растениях. Таким путем создаются трансгенные растения с повышенной устойчивостью к насекомым, в частности кукурузному корневому жуку. Для их экспрессии в трансгенных растениях нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению необязательно могут быть модифицированы и оптимизированы. Хотя во многих случаях гены из микробных организмов могут экспрессироваться в растениях на высоких уровнях без модификации, в трансгенных растениях может происходить низкая экспрессия микробных нуклеиновых кислот, содержащих кодоны, которые не являются предпочтительными в растениях. Из уровня техники известно, что все организмы имеют специфические предпочтения в отношении использования кодонов, и при этом кодоны нуклеиновых кислот, описанных в настоящем изобретении, могут быть изменены в соответствии с характерными для растений предпочтениями, с сохранением в то же время кодируемых ими аминокислот. Кроме того, высокий уровень экспрессии в растениях лучше всего достигается в случае кодирующих последовательностей с содержанием GC, составляющим по меньшей мере приблизительно 35%, предпочтительно более чем приблизительно 45%, более предпочтительно более чем приблизительно 50% и наиболее предпочтительно более чем приблизительно 60%. Микробные нуклеиновые кислоты, которые характеризуются низкими содержаниями GC, могут экспрессироваться в растениях на недостаточном уровне вследствие наличия мотивов АТТТА, которые могут дестабилизировать транскрипты, и мотивов ААТААА, которые могут вызывать ненадлежащее полиаденилирование. В вариантах осуществления последовательности могут быть модифицированы, принимая во внимание конкретные предпочтения в отношении кодонов и предпочтения в отношении содержания GC однодольных или двудольных, поскольку было показано, что эти предпочтения отличаются (Murray et al. Nucl. Acids Res. 17:477-498 (1989)). Кроме того, осуществляется скрининг нуклеиновых кислот на наличие нестандартных сайтов сплайсинга, которые могут вызвать усечение транскрипта. Все изменения, которые требуется выполнить внутри нуклеиновых кислот, такие как описанные выше, могут быть выполнены с применением широко известных методик сайт-направленного мутагенеза, ПЦР и конструирования синтетических генов, например, с применением способов, описанных в опубликованных патентных заявках ЕР 0385962, ЕР 0359472 и WO 93/07278.
[00117] В одном варианте осуществления настоящего изобретения кодирующая последовательность инсектицидного белка по настоящему изобретению получена в соответствии с процедурой, раскрытой в патенте США 5625136, включенном в данный документ посредством ссылки. В этой процедуре применяют предпочтительные для маиса кодоны, т.е. один кодон, который чаще всего кодирует данную аминокислоту в маисе. Предпочтительный для маиса кодон для конкретной аминокислоты может быть получен, например, из известной генной последовательности маиса. Частота использования кодонов для маиса для 28 генов растений маиса встречается в Murray et al., Nucleic Acids Research 17:477-498 (1989), раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки.
[00118] Подобным образом нуклеотидные последовательности могут быть оптимизированы для экспрессии в любом растении. Понятно, что вся последовательность гена или любая ее часть могут быть оптимизированными или синтетическими. То есть также могут применяться синтетические или частично оптимизированные последовательности.
[00119] Для более эффективной инициации трансляции можно модифицировать последовательности, прилегающие к инициирующему метионину. Например, они могут быть модифицированы путем включения последовательностей, которые, как известно, являются эффективными в растениях. Joshi предложил подходящую консенсусную последовательность для растений (NAR 15:6643-6653 (1987)), a Clontech предлагает дополнительную консенсусную последовательность, являющуюся инициатором трансляции (каталог 1993/1994, стр. 210). Эти консенсусные последовательности пригодны для использования с нуклеиновыми кислотами по настоящему изобретению. В вариантах осуществления последовательности встроены в конструкции, содержащие нуклеиновые кислоты, вплоть до и включая ATG (оставляя при этом вторую аминокислоту немодифицированной) или в альтернативном варианте вплоть до и включая GTC, следующую за ATG (с возможностью модифицирования второй аминокислоты данного трансгена).
[00120] Экспрессия нуклеиновых кислот в трансгенных растениях управляется промоторами, которые функционируют в растениях. Выбор промотора будет изменяться в зависимости от временных и пространственных требований для экспрессии, а также в зависимости от целевого вида. Таким образом, предпочтительной является экспрессия нуклеиновых кислот по настоящему изобретению в листьях, стеблях или стволах, в початках, в соцветиях (например, в шипах, метелках, косточках и т.п.), в корнях и/или саженцах. Однако, во многих случаях требуется защита от более чем одного типа насекомого-вредителя, а следовательно желательной является экспрессия в нескольких тканях. Хотя, как было показано, многие промоторы из двудольных растений функционируют у однодольных, и наоборот, в идеальном случае для экспрессии в двудольных растениях выбирают промоторы двудольных, а для экспрессии в однодольных растениях выбирают промоторы однодольных. Однако не существует каких-либо ограничений относительно происхождения выбранных промоторов; достаточно, чтобы они эффективно управляли экспрессией нуклеиновых кислот в требуемой клетке.
[00121] В одном варианте осуществления применяются промоторы с конститутивной экспрессией, в том числе промоторы генов актина или убиквитина, или промоторы СМР, или промоторы CaMV 35S и 19S. Нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению также могут экспрессироваться под контролем промоторов, которые регулируются химическим путем. Предпочтительная технология для химической индукции экспрессии генов подробно изложена в опубликованной заявке ЕР 0332104 (Ciba-Geigy) и патенте США №5614395. Предпочтительным промотором для химической индукции является промотор табака PR-1а.
[00122] В другом варианте осуществления может применяться категория промоторов, индуцируемых повреждением. Были описаны многочисленные промоторы, которые экспрессируются в участках ранения, а также в участках инфицирования фитопатогеном. Оптимально, такой промотор должен быть активным только локально в местах инфекции, и таким образом инсектицидные белки по настоящему изобретению накапливаются исключительно в клетках, в которых необходимо синтезировать белки для уничтожения инвазивных насекомых-вредителей. Предпочтительные промоторы этого типа включают описанные Stanford et al. Mol. Gen. Genet. 215:200-208 (1989), Xu et al. Plant Molec. Biol. 22:573-588 (1993), Logemann et al. Plant Cell 1:151-158 (1989), Rohrmeier & Lehle, Plant Molec. Biol. 22:783-792 (1993), Firek etal. Plant Molec. Biol. 22:129-142 (1993) и Warner et al. Plant J. 3:191-201 (1993).
[00123] Тканеспецифичными или предпочтительными для ткани промоторами, применимыми для экспрессии генов, кодирующих инсектицидные белки по настоящему изобретению в растениях, в частности кукурузе, являются промоторы, которые управляют экспрессией в корне, сердцевине, листе или пыльце, в частности в корне. Такие промоторы, например выделенные из РЕРС или trpA, раскрыты в патенте США №5625136, или MTL, раскрытого в патенте США №5466785. Оба патента США включены в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме.
[00124] Кроме того, могут применяться промоторы, функционирующие в пластидах. Неограничивающие примеры таких промоторов включают промотор 5'-UTR гена 9 бактериофага Т3 и другие промоторы, раскрытые в патенте США №7579516. Другие промоторы, пригодные в соответствии с настоящим изобретением, включают без ограничения промотор малой субъединицы S-E9 RuBP-карбоксилазы и промотор гена ингибитора трипсина Кунитца (Kti3).
[00125] В дополнительных аспектах нуклеотидные последовательности по настоящему изобретению могут быть функционально связанны с промотором, индуцируемым нанесением повреждения или индуцируемым инфицированием вредителями или патогенами (например, насекомым- или нематодой-вредителем растения). Были описаны многочисленные промоторы, которые обеспечивают экспрессию в местах повреждения и/или в участках нападения вредителей (например, в местах питания насекомых/нематод) или фитопатогенной инфекции. Оптимально, такой промотор должен быть активным только локально в участках нападения или рядом с ними, и таким образом экспрессия нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению будет сосредоточена на клетках, которые подвергаются внедрению в них или поеданию их. Такие промоторы включают без ограничения таковые, описанные в Stanford et al., Mol. Gen. Genet. 215:200-208 (1989), Xu et al. Plant Molec. Biol. 22:573-588 (1993), Logemann et al. Plant Cell 1:151-158 (1989), Rohrmeier and Lehle, Plant Molec. Biol. 22:783-792 (1993), Firek et al. Plant Molec. Biol. 22:129-142 (1993), Warner et al. Plant J. 3:191-201 (1993), патенте США №5750386, патенте США №5955646, патенте США№6262344, патенте США №6395963, патенте США №6703541, патенте США№7078589, патенте США №7196247, патенте США №7223901 и публикации заявки на выдачу патента США 2010043102.
[00126] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения применяют "минимальный промотор" или "основной промотор". Минимальный промотор может привлекать и связывать комплекс РНК-полимеразы II и ее вспомогательных белков для обеспечения инициации транскрипции и элонгации. В некоторых вариантах осуществления минимальный промотор конструируют таким образом, что он содержит только нуклеотиды/нуклеотидные последовательности из выбранного промотора, которые требуются для связывания транскрипционных факторов и транскрипции представляющей интерес нуклеотидной последовательности, которая функционально связана с минимальным промотором, включая без ограничения последовательности ТАТА-бокса. В других вариантах осуществления в минимальном промоторе отсутствуют действующие в цис-положении последовательности, которые привлекают и связывают транскрипционные факторы, модулирующие транскрипцию (например, усиливают, подавляют, придают тканеспецифичность, придают способность к индуцированию или способность к подавлению). Как правило, минимальный промотор помещают выше (т.е. в направлении 5') нуклеотидной последовательности, подлежащей экспрессии. Следовательно, для применения в качестве минимального промотора могут быть выбраны нуклеотиды/нуклеотидные последовательности из любого промотора, применимого в соответствии с настоящим изобретением.
[00127] В описанные в настоящем изобретении кассеты экспрессии могут быть встроены многие другие последовательности. Они предусматривают последовательности, которые, как показано, усиливают экспрессию, как например, интронные последовательности (например, из Adhl и bronzel) и вирусные лидерные последовательности (например, из TMV, MCMV и AMV).
[00128] Может быть предпочтительным направлять экспрессию нуклеиновых кислот по настоящему изобретению в различные клеточные локализации в растении. В некоторых случаях может быть желательна локализация в цитозоле, тогда как в других случаях предпочтительной может быть локализация в определенной субклеточной органелле. Субклеточная локализация ферментов, кодируемых трансгеном, выполняется с помощью методик, хорошо известных из уровня техники. Как правило, ДНК, кодирующую целевой пептид из известного продукта гена, направленного на органеллу, обрабатывают и подвергают слиянию выше нуклеиновой кислоты. Большинство таких целевых последовательностей известны для хлоропласта, и было показано их функционирование в гетерологичных конструкциях. Экспрессия нуклеиновых кислот по настоящему изобретению также направлена в эндоплазматический ретикулум или в вакуоли клеток-хозяев. Методики для достижения этого хорошо известны из уровня техники.
[00129] Векторы, подходящие для трансформации растений, широко известны из уровня техники. Для опосредованной Agrobacterium трансформации пригодны бинарные векторы или векторы, несущие по меньшей мере одну Т-ДНК граничную последовательность, тогда как для прямого переноса генов пригоден любой вектор, и предпочтительной может быть линейная ДНК, содержащая только представляющую интерес конструкцию. В случае прямого переноса генов может применяться трансформация с помощью одного вида ДНК или совместная трансформация (Schocher et al. Biotechnology 4:1093-1096 (1986)). Как в случае прямого переноса генов, так и в случае опосредованного Agrobacterium переноса, трансформацию обычно (но не обязательно) осуществляют с селектируемым маркером, который может обеспечивать устойчивость к антибиотику (канамицину, гигромицину или метотрексату) или гербициду (баста). Векторы трансформации растений, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, могут также содержать гены (например, изомеразу фосфоманнозы; PMI), обеспечивающие положительную селекцию трансгенных растений, как описано в патентах США 5767378 и 5994629, включенных в данный документ посредством ссылки. Однако, выбор селективного маркера не является определяющим для настоящего изобретения.
[00130] В вариантах осуществления нуклеиновая кислота может быть трансформирована в ядерный геном. В другом варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению непосредственно трансформируется в геном пластид. Большим преимуществом трансформации пластид является то, что пластиды обычно способны к экспрессии бактериальных генов без существенной оптимизации кодонов, и при этом пластиды способны к экспрессии множественных открытых рамок считывания под контролем одного промотора. Технология трансформации пластид подробно описана в патентах США №№5451513, 5545817 и 5545818, в заявке согласно РСТ №WO 95/16783 и в McBride et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91, 7301-7305. Основная методика трансформации хлоропластов предусматривает введение участков клонированной пластидной ДНК, фланкирующих селектируемый маркер, вместе с представляющим интерес геном в подходящую целевую ткань, например, с применением биолистики или трансформации протопласта (например, трансформации, опосредованной хлоридом кальция или PEG). Фланкирующие участки размером 1-1,5 т.о., называемые нацеливающими последовательностями, содействуют гомологичной рекомбинации с геномом пластид и, таким образом, обеспечивают возможность замещения или модификации специфических участков пластома. Изначально в качестве селектируемых маркеров для трансформации используются точечные мутации в 16S rRNA и генах rps12 хлоропластов, придающие устойчивость к спектиномицину и/или стрептомицину (Svab, Z., Hajdukiewicz, P., and Maliga, P. (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87, 8526-8530; Staub, J. M., и Maliga, P. (1992) Plant Cell 4, 39-45). Это приводило к получению стабильных гомоплазмических трансформантов с частотой, составляющей приблизительно одна трансформация на 100 бомбардировок целевых листьев. Присутствие сайтов клонирования между данными маркерами обеспечило возможность создания нацеливающегося на пластиды вектора для введения чужеродных генов (Staub, J. М., and Maliga, P. (1993) EMBO J. 12, 601-606). Существенного повышения частоты трансформации достигали путем замещения рецессивных генов rRNA или r-белка, обеспечивающих устойчивость к антибиотикам, на доминантный селектируемый маркер, бактериальный ген aadA, кодирующий фермент аминогликозид-3'-аденилтрансферазу, обезвреживающий спектиномицин (Svab, Z., and Maliga, P. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 913-917). Ранее данный маркер успешно применялся для трансформации пластидного генома зеленой водоросли Chlamydomonas reinhardtii с высокой частотой (Goldschmidt-Clermont, М. (1991) Nucl. Acids Res. 19:4083-4089). Другие селектируемые маркеры, применимые для трансформации пластид, известны из уровня техники и включены в объем настоящего изобретения. Как правило, для достижения гомопластидного состояния требуется около 15-20 циклов клеточного деления после трансформации. Экспрессия в пластидах, при которой за счет гомологической рекомбинации гены встроены во все несколько тысяч копий кольцевого генома пластид, присутствующих в каждой растительной клетке, использует преимущество огромного числа копий в сравнении с генами, экспрессируемыми в ядре, с обеспечением уровней экспрессии, которые легко могут превышать 10% от общего количества растворимого растительного белка. В предпочтительном варианте осуществления нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению вводят в направленный на пластиды вектор, и при этом она трансформируется в геном пластид требуемого растения-хозяина. Получают растения, гомопластические в отношении геномов пластид, содержащие нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, и при этом они предпочтительно способны к высокой экспрессии нуклеиновой кислоты.
ПРИМЕРЫ
[00131] Настоящее изобретение далее будет описано посредством ссылки на следующие подробные примеры. Эти примеры предоставлены только для целей иллюстрации и не предназначены для ограничения, если не указано иное. Стандартные методики с использованием рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования, применяемые в данном документе, хорошо известны из уровня техники и описаны J. Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3d Ed., Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001); by T.J. Silhavy, M.L. Berman, and L.W. Enquist, Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1984) и Ausubel, F.M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, New York, John Wiley and Sons Inc., (1988), Reiter, et al., Methods in Arabidopsis Research, World Scientific Press (1992), и Schultz et al., Plant Molecular Biology Manual, Kluwer Academic Publishers (1998).
Пример 1. Идентификация белка с инсектицидной активностью против западного кукурузного корневого жука
[00132] Инсектицидный белок (SEQ ID NO: 39) идентифицировали из Nitrococcus mobilis. Синтезировали оптимизированный вариант этого гена Е. coli (SEQ ID NO: 1), и ген клонировали в вектор рЕТ29а с образованием конструкции p(Nitromob). Конструкцией p(Nitromob) трансформировали Е. coli BL21* (DE3), и экспрессию белка осуществляли в бульоне Лурия-Бертани с индукцией с помощью IPTG при 18°С в течение ночи. Растворимую фракцию лизатов получали из этих культур с применением пресса Френча с последующим центрифугированием лизатов целых клеток при 20000 х g в течение тридцати минут. Супернатант (растворимую фракцию) затем тестировали на биоактивность по отношению к западному кукурузному корневому жуку (WCR; Diabrotica virgifera).
[00133] Анализы биоактивности осуществляли с применением способа включения в рацион. Вкратце, лизаты Е. coli BL21*(DE3) смешивали с равным объемом нагретого искусственного рациона для насекомых (Bioserv, Inc., Френчтаун, Нью-Джерси) в центрифужных пробирках объемом 1,5 мл, а затем вносили в небольшие чашки Петри. После того как смесь образца и питательной среды охлаждали и обеспечивали возможность отвердевания, в каждый планшет добавляли 12 личинок WCR. Планшеты запечатывали и выдерживали в окружающих условиях лаборатории с учетом температуры, освещения и относительной влажности. Лизаты культур Е. coli BL21* (DE3), несущих пустой вектор рЕТ29а, применяли в качестве отрицательных контролей. Смертность оценивали на 4-й день и 7-й день или необязательно на 3-й день и 6-й день. В этой и всех последующих таблицах, в которых показана инсектицидная активность в отношении CRW, аббревиатуры в столбце "Примечания" расшифровываются следующим образом: s = небольшие личинки, sm = небольшие/средние личинки, m = средние личинки, mb = средние/большие личинки, b = большие личинки, vb = очень большие личинки. В этой и всех последующих таблицах показана инсектицидная активность NitromobCRW или его варианта, "SEQ ID NO." относится к аминокислотной последовательности белка. Как показано в таблице 1, лизат культуры, экспрессирующей p(Nitromob), демонстрировал сильную биоактивность против WCR. Белок N. mobilis был переименован в NitromobCRW.
Пример 2. Варианты NitromobCRW обладают инсектицидной активностью против WCR
[00134] В NitromobCRW вводили мутации и анализировали стабильность белка и инсектицидную активность бактериальных лизатов, содержащих мутантный вариант NitromobCRW. Мутации включают изменения различных аминокислотных остатков, а также вставку остатков лейцина. Эти мутации вводили для определения того, можно ли разработать мутантный вариант NitromobCRW, который сохранял бы инсектицидную активность, но был бы перевариваемым в анализе с применением искусственного желудочного сока (SGF). Такой вариант NitromobCRW может иметь коммерческое значение, например, для придания инсектицидных свойств растению посредством трансгенной экспрессии в растении.
[00135] Инсектицидную активность определяли с помощью анализов с включением в рацион, осуществляемых фактически как описано в примере 1, с применением 12 личинок WCR в каждом экспериментальном анализе. Результаты показаны в таблицах 2-6. SEQ ID NO соответствуют аминокислотной последовательности варианта. Обработки, показанные в таблицах 5 и 6, также указывают на разбавление применяемого бактериального лизата. Все мутантные варианты NitromobCRW демонстрируют инсектицидную активность к 6-му или 7-му дню.
Пример 3. Тестирование воздействия искусственного желудочного сока на препараты на основе лизатов Е. coli
[00136] В данном примере описывается анализ, осуществляемый для определения перевариваемости под действием SGF. Каждый вариант белка NitromobCRW получали в штамме BL21* (DE3) Е. coli. Уровень экспрессии варианта в бактериальном штамме и растворимость варианта указаны в таблице 7. Бактериальные лизаты в 50 мМ фосфата калия, рН 7,0, 50 мМ хлорида натрия разбавляли до 3 мг/мл (концентрации общего белка) для анализа перевариваемости. Реакцию переваривания инициировали посредством добавления 15 мкл лизата к 285 мкл искусственного желудочного сока [10 единиц пепсина/мкг белка или примерно 1579 единиц пепсина/мл в растворе G-Con (2 мг/мл хлорида натрия, рН 1,2)] при 37°С. Через 5 минут отбирали 100 мкл реакционной смеси лизат-SGF и посредством добавления ее к 100 мкл предварительно нагретого (95°С) останавливающего раствора, содержащего 65% трицинового загрузочного буфера (Bio-rad, 2х трициновый загрузочный буфер с 10% β-меркаптоэтанолом) и 35% 500 мМ бикарбоната натрия, рН 11,0, реакцию останавливали. Образец в нулевой момент времени (Т0) получали посредством добавления 5 мкл тестируемого лизата к 100 мкл предварительно нагретого (95°С) останавливающего раствора и 95 мкл искусственного желудочного сока. Все образцы нагревали при 95°С в течение 5 минут, а затем хранили на льду до проведения анализа с помощью SDS-PAGE. Тридцать микролитров каждой реакционной смеси загружали в 10-20% трис-трициновый гель для пептидов перед проведением стандартного гель-электрофореза белков. Трис-трициновый гель фиксировали в течение 20 минут с помощью смеси 40% метанола и 10% уксусной кислоты непосредственно после электрофореза. Гель затем окрашивали с помощью красителя для белков GelCode Blue в течение 1 часа при комнатной температуре. Через 1 час полиакриламидный гель обесцвечивали с помощью дистиллированной воды в течение по меньшей мере 12 часов. Результаты качественной оценки показаны в таблице 7. "Неудовлетворительный" в случае теста Т5 означает, что интактный или частично переваренный вариант белка NitromobCRW поддавался выявлению с помощью красителя для белков GelCode Blue после гель-электрофореза, что указывает на то, что белок не был полностью перевариваемым в анализе с применением SGF. "Удовлетворительный" в случае теста Т5 означает, что интактный вариант белка NitromobCRW не поддавался выявлению, что указывает на то, что вариант белка NitromobCRW был перевариваемым в анализе с применением SGF. Также указана инсектицидная активность ("активный") варианта белка NitromobCRW, причем "да" указывает на инсектицидную активность, как показано в предыдущих примерах.
[00137] Их всех полученных вариантов NitromobCRW только NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47) убедительно прошел тест Т5 с анализом с применением SGF. NitromobCRW I215L (SEQ ID NO: 44) продемонстрировал лучшую перевариваемость, чем белок дикого типа, но данный вариант не прошел тест Т5. Варианты NitromobCRW 214-Leu-215, 215-Leu-216, G216A, G216L и L214S/I215L были нерастворимыми, а вариант NitrobCRW I265L характеризовался низкой растворимостью. Эти данные позволяют предположить, что домен, мотив, или укладка в данном участке белка критичны для функционирования белка и/или стабильности белка.
Пример 4. Очищенный вариант NitromobCRW Y213L/I215L обладает инсектицидной активностью против WCR
[00138] Данный вариант дополнительно характеризовали в отношении его инсектицидных свойств. Два литра клеток Е. coli BL21* (DE3), несущих рЕТ-NitromobCRW Y213L/I215L, выращивали при 37°С в среде LB. IPTG (1 мМ) добавляли к культурам при достижении O.D., составляющей 0,8-1,0, и затем культуры перемещали на 18°С в течение 18 часов. Осадок клеток собирали и ресуспендировали в 20 мМ Трис, рН 8,5, с 10% глицерина. Клетки лизировали с применением пресса Френча; лизат затем центрифугировали при 100k х g в ультрацентрифуге. Супернатант собирали и затем фильтровали перед загрузкой в колонку для анионообменной хроматографии HiPrepQ, которую предварительно уравновешивали с помощью 20 мМ Трис, рН 8,5, с 10% глицерина. Колонка HiPrepQ связывала NitromobCRW Y213L/I215L эффективно; белок элюировали с колонки с применением линейного градиента NaCl. Буфер с высокой концентрацией соли состоял из 20 мМ Трис, рН 8,5, 0,5 М NaCl с 10% глицерина. Наиболее чистые фракции объединяли и затем концентрировали до примерно 2 мл. Белок загружали в колонку для гель-фильтрации Sephadex 200, которую предварительно уравновешивали с помощью IX PBS. Фракции с колонки Sephadex 200 анализировали в отношении чистоты с помощью SDS-PAGE (NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47) характеризуется прогнозируемым молекулярным весом 32,1 кДа). Наиболее чистые фракции объединяли и затем концентрировали до 7,2 мг/мл перед хранением при -80°С. Чистый белок затем тестировали против 12 личинок WCR в диапазоне концентраций в способе включения в рацион, фактически как описано в примере 1. Как показано в таблице 8, NitromobCRW Y213L/I215L является эффективным против WCR; NitromobCRW Y213L/I215L при 50 мкг/мл вызывал по меньшей мере 75% смертность на 6-й день.
Пример 5. NitromobCRWCRW Y213L/I215L обладает инсектицидной активностью против устойчивых к Cry разновидностей западного кукурузного корневого жука
[00139] Для определения того, проявляется ли токсичность NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47) посредством механизма действия, отличающегося от белков, родственных Cry3, лизат NitromobCRW Y213L/I215L очищали как в примере 4 и тестировали в отношении эффективности против разновидности WCR, которая устойчива к токсину eCry3.1Ab (eCry3.1 Ab-R; см. таблицу 9), разновидности WCR, которая устойчива к модифицированному токсину Cry3A (mCry3A) (mCry3A-R; см. таблицу 10), и разновидности WCR, которая устойчива к токсину Cry3Bb (Cry3Bb-R; см. таблицу 11). Анализы с включением в рацион осуществляли в диапазоне белка NitromobCRW Y213L/I215L фактически как описано в примере 4 и смертность оценивали либо на 3-й день и 6-й день (таблица 9), либо на 2-й день и 7-й день (таблица 10). NitrobmobCRW Y213L/I215L тестировали дважды при ряде концентраций (мкг/мл), как указано в таблицах 9, 10 и 11. Отрицательный контроль содержал только IX PBS. Каждый анализ осуществляли с 12 личинками WCR. Как показано в таблицах 9, 10 и 11, NitromobCRW Y213L/I215L демонстрирует инсектицидную активность против устойчивых к Cry разновидностей WCR.
Пример 6. NitromobCRW Y213L/I215L не обладает инсектицидной активностью против чешуекрылых
[00140] Лизаты бактериальных культур, экспрессирующих NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47), тестировали на биоактивность на панели чешуекрылых насекомых-вредителей с применением биоанализов с перекрыванием рационов. Каждого из огневки кукурузной (ЕСВ), совки-ипсилон (BCW), а также совки хлопковой (CEW) и совки травяной (FAW) тестировали в отношении инсектицидной активности NitromobCRW с помощью анализа с включением в рацион, аналогичного таковому из примера 1. В каждом эксперименте тестировали 12 личинок L1 с применением лизатов бактериальных культур В121* (DE3), несущих ген, кодирующий NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 9). Положительный контрольный образец BCW, CEW и FAW состоял из личинок, подвергнутых воздействию лизатов Е. coli BL21* (DE3), экспрессирующих белок Vip3. Только IX PBS и лизаты бактериальных культур BL21* (DE3), несущих пустой вектор рЕТ29, применяли в качестве отрицательных контролей. Смертность оценивали на 7-й день. В отношении личинок, которые достигали стадии L3, обработка не оказывала значительного воздействия. Если личинки достигали только стадии L2, то возможно, что обработка вызывала подавление роста. Если личинки оставались на стадии L1 на протяжении всей обработки, то происходило подавление роста. Это также может считаться "эффективной смертностью", так как личинки не будут развиваться после стадии L1, даже если они остаются живыми. В таблицах 11-14 L1=1-я личиночная стадия, L2=2-я личиночная стадия, L3=3-я личиночная стадия. NitromobCRW не являлся активным против тестируемых чешуекрылых насекомых-вредителей в данных экспериментальных условиях (таблицы 12-15).
Пример 7. NitromobCRW Y213L/I215L обладает инсектгщпдной активностью против северного кукурузного корневого жука
[00141] NitromobCRW Y213L/I215L очищали как в примере 1 и тестировали в отношении эффективности против 12 личинок северного кукурузного корневого жука (NCR) для каждой концентрации в анализе с включением в рацион, осуществляемом фактически как описано в примере 1. Отрицательный контроль содержал только 1X PBS.
Пример 8. NitromobCRW Y213L/I215L обладает инсектицидной активностью против южного кукурузного корневого жука
[00142] NitromobCRW Y213L/I215L очищали как в примере 1 и тестировали в отношении эффективности против 12 личинок южного кукурузного корневого жука (SCR) в анализе с включением в рацион, осуществляемом фактически как описано в примере 1. NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 47) тестировали в диапазоне концентраций 100-400 мкг/мл. Отрицательный контроль содержал только IX PBS. Как показано в таблице 16, NitromobCRW Y213L/I215L демонстрирует инсектицидную активность против SCR.
Пример 9. Трансформация маиса с помощью NitromobCRW Y213L/I215L
[00143] Получали бинарную векторную конструкцию, подходящую для опосредованной Agrobacterium трансформации с помощью NitromobCRW Y213L/I215L. Бинарный вектор содержит оптимизированную для маиса кодирующую последовательность NitromobCRW Y213L/I215L (SEQ ID NO: 38), функционально связанную на 5'-конце с промотором, подходящим для управления экспрессией в растениях, и функционально связанную на 3'-конце с терминаторной последовательностью. Оптимизацию кодонов для маиса осуществляют, например, с применением способов, описанных в патенте США №6320100 (включенном в данный документ посредством ссылки). Конструкцией трансформировали Agrobacterium tumefaciem с применением стандартных методик молекулярной биологии, известных специалистам в данной области техники. Для получения агробактерий для трансформации клетки культивировали в жидкой среде YPC при 28°С и 220 об/мин в течение ночи. Опосредованную Agrobacterium трансформацию незрелых зародышей маиса осуществляют фактически как описано в Negrotto et al., 2000, (Plant Cell Reports 19: 798-803). В случае данного примера все компоненты среды представляли собой компоненты, описываемые главным образом в Negrotto et al. выше. Однако они могут быть заменены различными компонентами среды, известными из уровня техники.
[00144] После трансформации, отбора и регенерации растения анализируют в отношении присутствия гена, кодирующего селектируемый маркер и кодон-оптимизированную для маиса кодирующую последовательность NitromobCRW Y213L/I215L, с применением анализа TaqMan®. Растения также тестировали в отношении присутствия остова вектора. Растения, отрицательные в отношении остова вектора и содержащие одну копию трансгена, переносили в теплицу и анализировали в отношении устойчивости к повреждениям, наносимым WCR.
Пример 10. Растения маиса, экспрессирующие NitromobCRW Y213L/I215L, характеризуются инсектицидной активностью против WCR
Присутствие NitromobCRW Y213L/I215L выявляли посредством ELISA в нг/мг общего растворимого белка (TSP) в ткани листа или корня от каждого трансформанта. Инсектицидную активность определяли с помощью биоанализа сегментов корней. Вкратце, образцы ткани корня маиса отбирали у каждого трансформанта, когда трансформанты маиса, экспрессирующие вариант NitromobCRW, достигали стадии V3-V4. Ткань корня маиса помещали в чашку Петри, а затем инфицировали с помощью 12 личинок WCR. Два образца ткани корня (повторность 1 и повторность 2) оценивали в отношении отверстий, образующихся при поедании (FH), и повреждений в виде рубцов на 3-й день. Ткань корня из нетрансформированного (нулевого) маиса служила в качестве отрицательного контроля. Оценку повреждений, наносимых насекомыми, проводят с применением следующего: ND = не выявлено; FH = отверстия, образующиеся при поедании; L = слабое рубцевание; М = среднее рубцевание; Н = сильное рубцевание; ++ = объект с превосходной эффективностью; + = объект с хорошей эффективностью; - = объект с низкой эффективностью
Пример 11: NitromobCRW Y213L/I215L в комбинации с интерферирующей РНК, характеризующейся инсектицидной активностью против WCR
[00145] NitromobCRW и/или вариант NitromobCRW очищают как бактериальные лизаты в примере 1 или очищают как белки аналогично примеру 4. Получали dsRNA против важной мишени и, как известно, характеризующуюся инсектицидной активностью. В неограничивающих примерах dsRNA может нацеливаться на ген, кодирующий вакуолярную АТФ-синтазу, бета-тубулин, белок р28, представляющий собой субъединицу протеасомы 26S, EF1α 48D, тропонин I, тетраспанин, гамма-коатомер, бета-коатомер и/или эпоксидгидролазу ювенильного гормона (публикации WO №№ WO 2018/026770, WO 2018/026773 и WO 2018/026774; патент США №7812219; каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки). dsRNA и очищенный белок NitromobCRW тестируют в отношении инсектицидной эффективности против WCR в анализе с включением в рацион, осуществляемом фактически как описано в примере 1, но с добавлением dsRNA в искусственный рацион.
[00146] Asdadasdas
Пример 12. NiromobCRW с С-концевым удлинением активен против CRW.
[00147] В данном примере описываются влияния присоединения С-концевого пептида к белку NitromobCRW. Конструкцию pET-NitromobCRW-Y213L/I215L с С-концевым удлинением, кодирующую SEQ ID NO: 77, клонировали в Е. coli. С-концевой удлиненный пептид содержит SEQ ID NO: 76 и представляет собой комбинацию линкерной последовательности (аминокислоты 1-35 SEQ ID NO: 76) и SUMO-метки (аминокислоты 36-133 SEQ ID NO: 76). SUMO представляет собой небольшой убиквитин-подобный модифицирующий белок, который при слиянии с представляющим интерес белком усиливает образование функционального белка в прокариотических и эукариотических системах экспрессии на основе в значительной степени улучшенной стабильности и растворимости белка. После экспрессии и очистки слитого белка SUMO-метку как правило отщепляют специфическими (SUMO) протеазами посредством их эндопептидазной активности in vitro для получения требуемого высвобожденного белка-партнера. В случае данного примера С-концевой удлиненный пептид (SEQ ID NO: 76) не отщепляли от белка NitromobCRW и интактный удлиненный белок (NitromobCRW-Cterm-SUMO; SEQ ID NO: 77) тестировали в отношении перевариваемости под действием SGF и инсектицидной активности против WCR.
[00148] Анализ NitromobCRW-Y213L-I215L-Cterm-SUMO с применением SGF был таким, как описано выше. Перевариваемость NitromobCRW-Y213L-I215L-Cterm-SUMO сравнивали с NitromobCRW-Y213L-I215L без С-концевого удлинения в качестве контроля. Белок NitromobCRW-Y213L-I215L-Cterm-SUMO также тестировали в отношении активности против WCR, как описано выше.
[00149] Результаты анализа перевариваемости с применением SGF продемонстрировали, что NitromobCRW-Y213L-1215L-Cterm-SUMO переваривается до 5-минутного момента времени. Следовательно, добавление метки Cterm SUMO не оказало влияния на перевариваемость белка NitromobCRW. SGF-гели в случае меченого и немеченого белка были почти идентичными (данные не показаны). Результаты биоанализа, показанные в таблице 18, демонстрируют, что белок NitromobCRW с С-концевым удлиненным пептидом является таким же активным, как и белок NitromobCRW без С-концевого удлиненного пептида.
[00150] Следует понимать, что примеры и варианты осуществления, описанные в данном документе, предназначены только для иллюстративных целей, и что различные модификации или изменения с учетом данного описания будут предполагаться специалистами в данной области техники и подлежат включению в сущность и содержание данной заявки, а также объем прилагаемой формулы изобретения.
[00151] Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании, показывают уровень компетентности специалистов в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Все публикации и патентные заявки включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была конкретно и отдельно включена посредством ссылки.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ЗИНГЕНТА ПАРТИСИПЕЙШНС АГ
<120> ИНСЕКТИЦИДНЫЕ БЕЛКИ
<130> 81547-US-L-ORG-NAT-1
<160> 7
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 1
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 2
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 2
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gttagttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 3
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 3
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattttaaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 4
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 4
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccctgacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 5
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 5
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tctgcggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 6
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 6
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 7
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 7
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc tttttggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 8
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 8
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc tttatggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 9
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 9
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgctttac ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 10
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 10
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggctgactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 11
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 11
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atctggaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 12
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 12
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aattagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 13
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 13
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaatt aggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 14
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 14
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttatagctaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 15
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 15
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttatattaaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 16
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 16
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcgttaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 17
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 17
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttgggggtt agggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 18
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 18
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgcttta 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 19
<211> 906
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 19
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgatagg taacaccgct 660
gtgaattaca acccaaccta taaggaccat catttctgga gccttggggt tgccggagtc 720
atggctaagg gtgggatcac taactccgta cagtcaactg aggatatcga aatcggctat 780
tactctaatt caaaaataga attgaaagac aaggctacag gcgcattaaa ggcggcgtat 840
aatatggccg acgccccagg gcagtcggca gctgagtcgc gtcaacctgc gctggacgaa 900
gcataa 906
<210> 20
<211> 906
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 20
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttatattagg taacaccgct 660
gtgaattaca acccaaccta taaggaccat catttctgga gccttggggt tgccggagtc 720
atggctaagg gtgggatcac taactccgta cagtcaactg aggatatcga aatcggctat 780
tactctaatt caaaaataga attgaaagac aaggctacag gcgcattaaa ggcggcgtat 840
aatatggccg acgccccagg gcagtcggca gctgagtcgc gtcaacctgc gctggacgaa 900
gcataa 906
<210> 21
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 21
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttttc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 22
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 22
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat cccttacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 23
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 23
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tctgcggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 24
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 24
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atctggaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 25
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 25
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atctggaact gggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 26
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 26
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttaca gtctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 27
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 27
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agagggagtc ttaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 28
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 28
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa cttagctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 29
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 29
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa ctttgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 30
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 30
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cgctggaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 31
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 31
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcttgc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 32
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 32
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccctgct tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 33
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 33
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtactttt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 34
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 34
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacact tggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 35
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 35
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agaggggtta tgaaagttcg tatacggtat aacgctttac ttataggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 36
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 36
atgggtatta gcataagtat agttgcaggc cacgataaat cggcgtctag tgtgaacgct 60
acagggactg ttcaacacgt tatcaccgat caggagcgca ctaccttcca cttgggtgat 120
aaacagttga aggacgccgt taaggcttat tttggaaagt ctcccaacga cgtgtatttg 180
cactctccga cgccctgggg tgacttgtac aaaaagtatt catggcccca agtccagatg 240
atactggtcg ttcagtcggc agaaatcctt ggtatcacta gcgagccggt gattgttaag 300
acccaggaat ttgtcaacaa ttcaagacaa aaggggacgt tcaatgtggc gataacagag 360
tcggtaaata atacgacgtc gtctaattgg agtacgggag ggacccttac gatcggccaa 420
aaattctctt acggggttaa gttcctggga gccggagcgg aaggagaaac ctcgttatcc 480
tacagccaaa gttggggggt ggggggacag gaatctaaat ccatcacagt cggctcatcc 540
agcggcgttt cggtagaatt agaccctggt gaaagcgttc ttgccgaact tagtgcctcg 600
agagggagtc ttaaagttcg tatacggtat aacgcttacc ttctgggtaa caccgctgtg 660
aattacaacc caacctataa ggaccatcat ttctggagcc ttggggttgc cggagtcatg 720
gctaagggtg ggatcactaa ctccgtacag tcaactgagg atatcgaaat cggctattac 780
tctaattcaa aaatagaatt gaaagacaag gctacaggcg cattaaaggc ggcgtataat 840
atggccgacg ccccagggca gtcggcagct gagtcgcgtc aacctgcgct ggacgaagca 900
taa 903
<210> 37
<211> 903
<212> ДНК
<213> Nitrococcus mobilis
<400> 37
atgggcatca gtatcagcat cgtcgccggt cacgacaaat ccgcatcaag cgtaaacgcc 60
accggaaccg tgcagcacgt cattacggat caggaacgga cgactttcca tcttggcgat 120
aagcaactca aggacgccgt caaggcgtat ttcgggaaaa gcccgaacga cgtgtacttg 180
catagcccga cgccgtgggg tgatctctac aagaagtaca gttggccgca ggtccaaatg 240
atcctggtcg tccagagcgc ggagattctc ggcatcacct cggagccggt gatcgtcaag 300
actcaggagt tcgtgaataa tagccgccag aaaggcacct ttaacgttgc catcacggag 360
tcggtgaaca acaccacgtc ctccaactgg agtaccggcg gcacgcttac gatcgggcag 420
aagttctcct acggtgtcaa gtttctcggt gccggggccg agggggagac ttcgctgtcg 480
tacagccagt cgtggggagt cggggggcag gagtcgaaat cgatcactgt aggttcatcg 540
tccggggtga gtgtagagct tgatcccggc gagtccgttc tcgccgagct ctctgccagt 600
cggggcgtga tgaaagtacg aattcgctat aacgcctacc tcatcggcaa tacagccgtg 660
aattacaacc ccacctataa ggaccatcat ttctggagct tgggtgtcgc gggtgtcatg 720
gcgaaaggcg gcattaccaa ttcggtgcaa tcgaccgaag acatcgagat cggttattac 780
tccaattcca agatcgagct caaagataag gcgacgggtg ccttgaaggc cgcctacaat 840
atggccgacg cgcccgggca atcggccgcg gagtctcgcc agcctgctct cgatgaggcc 900
tag 903
<210> 38
<211> 903
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 38
atgggcatca gtatcagcat cgtcgccggt cacgacaaat ccgcatcaag cgtaaacgcc 60
accggaaccg tgcagcacgt cattacggat caggaacgga cgactttcca tcttggcgat 120
aagcaactca aggacgccgt caaggcgtat ttcgggaaaa gcccgaacga cgtgtacttg 180
catagcccga cgccgtgggg tgatctctac aagaagtaca gttggccgca ggtccaaatg 240
atcctggtcg tccagagcgc ggagattctc ggcatcacct cggagccggt gatcgtcaag 300
actcaggagt tcgtgaataa tagccgccag aaaggcacct ttaacgttgc catcacggag 360
tcggtgaaca acaccacgtc ctccaactgg agtaccggcg gcacgcttac gatcgggcag 420
aagttctcct acggtgtcaa gtttctcggt gccggggccg agggggagac ttcgctgtcg 480
tacagccagt cgtggggagt cggggggcag gagtcgaaat cgatcactgt aggttcatcg 540
tccggggtga gtgtagagct tgatcccggc gagtccgttc tcgccgagct ctctgccagt 600
cggggcgtga tgaaagtacg aattcgctat aacgcctacc tcatcggcaa tacagccgtg 660
aattacaacc ccacctataa ggaccatcat ttctggagct tgggtgtcgc gggtgtcatg 720
gcgaaaggcg gcattaccaa ttcggtgcaa tcgaccgaag acatcgagat cggttattac 780
tccaattcca agatcgagct caaagataag gcgacgggtg ccttgaaggc cgcctacaat 840
atggccgacg cgcccgggca atcggccgcg gagtctcgcc agcctgctct cgatgaggcc 900
tag 903
<210> 39
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Nitrococcus mobilis
<400> 39
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 40
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 40
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Leu Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 41
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 41
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Leu Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 42
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 42
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Leu Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 43
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 43
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Leu
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 44
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 44
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 45
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 45
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Phe Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 46
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 46
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Tyr Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 47
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 47
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Leu Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 48
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 48
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Leu Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 49
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 49
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Leu Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 50
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 50
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Leu Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 51
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 51
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Leu Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 52
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 52
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Ala Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 53
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 53
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Leu Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 54
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 54
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Leu Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 55
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 55
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Leu Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 56
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 56
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Leu Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 57
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 57
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn
210 215 220
Pro Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val
225 230 235 240
Met Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile
245 250 255
Glu Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala
260 265 270
Thr Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln
275 280 285
Ser Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 58
<211> 301
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 58
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn
210 215 220
Pro Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val
225 230 235 240
Met Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile
245 250 255
Glu Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala
260 265 270
Thr Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln
275 280 285
Ser Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 59
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 59
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Phe Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 60
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 60
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Leu Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 61
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 61
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Leu
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 62
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 62
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Leu Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 63
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 63
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Leu Glu
245 250 255
Leu Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 64
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 64
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 65
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 65
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Ser Leu Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 66
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 66
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Leu Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 67
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 67
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Phe Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 68
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 68
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Leu Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 69
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 69
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Leu Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 70
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 70
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Leu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 71
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 71
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Leu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 72
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 72
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Leu Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 73
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 73
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Val Met Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Leu Leu Ile Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<210> 74
<211> 300
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> получен из Nitrococcus mobilis
<400> 74
Met Gly Ile Ser Ile Ser Ile Val Ala Gly His Asp Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ser Val Asn Ala Thr Gly Thr Val Gln His Val Ile Thr Asp Gln Glu
20 25 30
Arg Thr Thr Phe His Leu Gly Asp Lys Gln Leu Lys Asp Ala Val Lys
35 40 45
Ala Tyr Phe Gly Lys Ser Pro Asn Asp Val Tyr Leu His Ser Pro Thr
50 55 60
Pro Trp Gly Asp Leu Tyr Lys Lys Tyr Ser Trp Pro Gln Val Gln Met
65 70 75 80
Ile Leu Val Val Gln Ser Ala Glu Ile Leu Gly Ile Thr Ser Glu Pro
85 90 95
Val Ile Val Lys Thr Gln Glu Phe Val Asn Asn Ser Arg Gln Lys Gly
100 105 110
Thr Phe Asn Val Ala Ile Thr Glu Ser Val Asn Asn Thr Thr Ser Ser
115 120 125
Asn Trp Ser Thr Gly Gly Thr Leu Thr Ile Gly Gln Lys Phe Ser Tyr
130 135 140
Gly Val Lys Phe Leu Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Thr Ser Leu Ser
145 150 155 160
Tyr Ser Gln Ser Trp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ser Lys Ser Ile Thr
165 170 175
Val Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Val Glu Leu Asp Pro Gly Glu Ser
180 185 190
Val Leu Ala Glu Leu Ser Ala Ser Arg Gly Ser Leu Lys Val Arg Ile
195 200 205
Arg Tyr Asn Ala Tyr Leu Leu Gly Asn Thr Ala Val Asn Tyr Asn Pro
210 215 220
Thr Tyr Lys Asp His His Phe Trp Ser Leu Gly Val Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gly Ile Thr Asn Ser Val Gln Ser Thr Glu Asp Ile Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Lys Ile Glu Leu Lys Asp Lys Ala Thr
260 265 270
Gly Ala Leu Lys Ala Ala Tyr Asn Met Ala Asp Ala Pro Gly Gln Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Arg Gln Pro Ala Leu Asp Glu Ala
290 295 300
<---
Claims (24)
1. Кассета экспрессии, содержащая промотор, функционально связанный с гетерологичной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей:
(a) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида содержит SEQ ID NO: 39-74;
(b) нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, где аминокислотная последовательность полипептида по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 39-74;
(c) нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности любого из (а) или (b), приведенных выше.
2. Полипептид для обеспечения устойчивости к западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку, содержащий аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 40-74.
3. Экспрессионный вектор, содержащий кассету экспрессии по п. 1.
4. Клетка-хозяин для получения полипептида по п. 2, которая содержит кассету экспрессии по п. 1.
5. Способ получения растения или части растения, характеризующихся повышенной устойчивостью к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку по сравнению с контрольными растением или частью растения без устойчивости к насекомым, включающий:
(a) введение в часть растения молекулы нуклеиновой кислоты, содержащую кассету экспрессии по п. 1; и
(b) выращивание части растения с получением растения, которое экспрессирует молекулу нуклеиновой кислоты и которое характеризуется повышенной устойчивостью к насекомым по сравнению с контрольными растением или частью растения, которые не содержат молекулу нуклеиновой кислоты, содержащей кассету экспрессии по п. 1.
6. Способ идентификации растения или части растения, характеризующихся повышенной устойчивостью к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку по сравнению с контрольными растением или частью растения без устойчивости к насекомым, включающий выявление в растении или части растения нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по п. 2, за счет чего обеспечивается идентификация растения или части растения с повышенной устойчивостью к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку.
7. Способ по п. 6, где указанную нуклеиновую кислоту или ее диагностический фрагмент выявляют в продукте амплификации образца нуклеиновой кислоты из растения или части растения.
8. Способ получения растения с повышенной устойчивостью к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку по сравнению с контрольным растением или частью растения без устойчивости к насекомым-вредителям, включающий скрещивание первого родительского растения со вторым родительским растением, где по меньшей мере первое родительское растение содержит в своем геноме молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую кассету экспрессии по п. 1 и дает потомство, при этом потомство содержит по меньшей мере одно растение, которое содержит нуклеиновые кислоты в своем геноме и которое проявляет повышенную устойчивость к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку по сравнению с контрольным растением.
9. Трансгенное растение, с повышенной устойчивостью к насекомым: западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит кассету экспрессии по п. 1.
10. Композиция для обеспечения устойчивости к западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку, содержащая подходящий сельскохозяйственный носитель и полипептид с инсектицидной активностью, где полипептид выбран из группы, состоящей из:
a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39-74; а также
b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 39-74, где указанная аминокислотная последовательность обладает инсектицидной активностью.
11. Способ борьбы с популяцией западного кукурузного корневого жука, северного кукурузного корневого жука или южного кукурузного корневого жука, включающий приведение указанной популяции в контакт с эффективным для борьбы с насекомыми количеством полипептида с инсектицидной активностью, где полипептид выбран из группы, состоящей из:
a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39-74; и
b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 39-74.
12. Полипептид для обеспечения устойчивости к западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 39-74, и дополнительно содержащий введенный сайт расщепления протеазой.
13. Полипептид по п. 12, в котором введенный сайт расщепления протеазой расположен между аминокислотными остатками с 97 по 266 любой из SEQ ID NO: 39-74.
14. Полипептид по п. 12, в котором введенный сайт расщепления протеазой введен путем вставки остатка лейцина.
15. Полипептид для обеспечения устойчивости к западному кукурузному корневому жуку, северному кукурузному корневому жуку или южному кукурузному корневому жуку, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 40-74, содержащий мутацию, которая улучшает усвояемость в анализе SGF по сравнению с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862643275P | 2018-03-15 | 2018-03-15 | |
US62/643,275 | 2018-03-15 | ||
PCT/US2019/021093 WO2019177855A1 (en) | 2018-03-15 | 2019-03-07 | Insecticidal proteins |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020132969A RU2020132969A (ru) | 2022-04-15 |
RU2810220C2 true RU2810220C2 (ru) | 2023-12-25 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20160031949A1 (en) * | 2013-03-14 | 2016-02-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel insecticidal proteins and methods of use |
RU2015142582A (ru) * | 2013-03-07 | 2017-04-10 | Атеникс Корп. | Гены токсинов и способы их применения |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2015142582A (ru) * | 2013-03-07 | 2017-04-10 | Атеникс Корп. | Гены токсинов и способы их применения |
US20160031949A1 (en) * | 2013-03-14 | 2016-02-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel insecticidal proteins and methods of use |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GenBank: последовательность AP014836.1 - Сandidatus Nitrosoblobus terrae DNA, 26.04.2017. GenBank: последовательность CP003346.1 - Echinicola vietnamensis * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11661610B2 (en) | Insecticidal proteins | |
RU2765722C2 (ru) | Инсектицидные белки | |
US11180774B2 (en) | Insecticidal proteins | |
US20220007653A1 (en) | Insecticidal proteins | |
US20210251240A1 (en) | Insecticidal proteins | |
WO2020131413A1 (en) | Insecticidal proteins | |
RU2810220C2 (ru) | Инсектицидные белки | |
US20230091005A1 (en) | Insecticidal Proteins | |
US20230090217A1 (en) | Insecticidal Proteins | |
BR112019014369B1 (pt) | Cassete de expressão, polipeptídeo, vetor, célula hospedeira e método para controlar uma população de pragas de coleópteros |