RU2810183C1 - Molecular genetic marker of “black crystal” color variation in american mink and method of identifying individual mink that is carrier of allele that causes formation of desired color variation - Google Patents
Molecular genetic marker of “black crystal” color variation in american mink and method of identifying individual mink that is carrier of allele that causes formation of desired color variation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2810183C1 RU2810183C1 RU2022127441A RU2022127441A RU2810183C1 RU 2810183 C1 RU2810183 C1 RU 2810183C1 RU 2022127441 A RU2022127441 A RU 2022127441A RU 2022127441 A RU2022127441 A RU 2022127441A RU 2810183 C1 RU2810183 C1 RU 2810183C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- copa
- allele
- mink
- color
- fur
- Prior art date
Links
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 title claims abstract description 73
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 60
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 239000011011 black crystal Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims description 18
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 65
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 41
- 241000761389 Copa Species 0.000 claims abstract description 38
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 36
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241000282339 Mustela Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 101000770458 Homo sapiens Coatomer subunit alpha Proteins 0.000 claims description 39
- 102100029269 Coatomer subunit alpha Human genes 0.000 claims description 38
- 101150087901 copA gene Proteins 0.000 claims description 13
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 3
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 claims description 3
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 2
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 13
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 12
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 12
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 6
- 101001055386 Homo sapiens Melanophilin Proteins 0.000 description 5
- 102100026158 Melanophilin Human genes 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 5
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 108010092897 Coat Protein Complex I Proteins 0.000 description 3
- 102000016726 Coat Protein Complex I Human genes 0.000 description 3
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 102220393837 rs1553701477 Human genes 0.000 description 3
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical group NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102220060066 rs748840480 Human genes 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 206010001557 Albinism Diseases 0.000 description 1
- 208000025906 Aleutian Mink Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 208000031879 Chédiak-Higashi syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101150068332 KIT gene Proteins 0.000 description 1
- 101150055724 LYST gene Proteins 0.000 description 1
- 101710158003 Melanophilin Proteins 0.000 description 1
- 208000009795 Microphthalmos Diseases 0.000 description 1
- 241000282331 Mustelidae Species 0.000 description 1
- 241000428199 Mustelinae Species 0.000 description 1
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000036848 Porzana carolina Species 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150003475 TYRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000037308 hair color Effects 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 description 1
- 201000010478 microphthalmia Diseases 0.000 description 1
- 101150087532 mitF gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- VLCQZHSMCYCDJL-UHFFFAOYSA-N tribenuron methyl Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1S(=O)(=O)NC(=O)N(C)C1=NC(C)=NC(OC)=N1 VLCQZHSMCYCDJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетическим исследованиям в селекции и пушном звероводстве.The invention relates to the field of molecular biology and genetic research in breeding and fur farming.
Уровень техникиState of the art
Американская норка является основным объектом клеточного пушного звероводства. Более 50 млн шкур производится ежегодно, что составляет более 80% всей международной торговли необработанным мехом [Andersson, Nyman, Wallgren, 2017; Hansen, 2014]. Одной из причин подобной популярности является чрезвычайно высокое разнообразие окрасочных форм. За более чем вековую историю размножения, темно-коричневой в природных условиях американский норки, в пушных звероводческих хозяйствах возникли и были зафиксированы 35 мутаций доминантной, полудоминантной и рецессивной природы, затрагивающих окраску волосяного покрова, на основе которых селекционерами сформировано более 100 комбинативных окрасочных форм [Трапезов, Трапезова, 2009].American mink is the main object of caged fur farming. More than 50 million pelts are produced annually, representing more than 80% of all international trade in raw fur [Andersson, Nyman, Wallgren, 2017; Hansen, 2014]. One of the reasons for this popularity is the extremely high variety of color forms. Over more than a century-long breeding history of the naturally dark-brown American mink, 35 mutations of a dominant, semi-dominant and recessive nature, affecting hair color, arose and were recorded in fur-bearing farms, on the basis of which breeders formed more than 100 combinative color forms [Trapezov , Trapezova, 2009].
Окраска мехового покрова - один из важнейших признаков для промышленного разведения американской норки. В связи с этим целесообразным является отбор тех особей и популяций норки, которые будут размножаться и давать наибольшее число потомков с желаемой окраской мехового покрова. На практике, с использованием традиционных методов промышленного разведения (т.е. постановки случайных скрещиваний, анализа полученного потомства и составления родословных животных), получение потомков с желаемой окраской мехового покрова является трудоемким и дорогостоящим. Поэтому существует потребность в быстрых и менее трудоемких способах определения окраски меха норки на основании генотипа отдельных животных.Fur color is one of the most important characteristics for the commercial breeding of American mink. In this regard, it is advisable to select those individuals and mink populations that will reproduce and produce the largest number of offspring with the desired fur color. In practice, using traditional industrial breeding methods (i.e., random crosses, analysis of the resulting offspring, and compilation of animal pedigrees), producing offspring with the desired fur color is labor-intensive and expensive. Therefore, there is a need for quick and less labor-intensive methods for determining mink fur color based on the genotype of individual animals.
Одной из групп окрасок мехового покрова у американской норки являются белые окраски, которые востребованы на рынке, так как такой мех может быть покрашен [Anistoroaei и др., 2008]. На сегодняшний день описано по меньшей мере три типа белой окраски меха у американской норки:One of the groups of fur colors of the American mink are white colors, which are in demand on the market, since such fur can be dyed [Anistoroaei et al., 2008]. To date, at least three types of white fur color have been described in the American mink:
- Классическая альбино-окраска, также известная как королевская белая окраска. Данная окраска наследуется как моногенный аутосомно-рецессивный признак (обозначается как с/с) и, как было показано ранее, обуславливается мутацией в гене, кодирующем фермент тирозиназу (TTR) [Anistoroaei и др., 2008].- Classic albino pattern, also known as royal white pattern. This coloration is inherited as a monogenic autosomal recessive trait (denoted as s/s) and, as previously shown, is caused by a mutation in the gene encoding the enzyme tyrosinase (TTR) [Anistoroaei et al., 2008].
- Окраска белый Хедлюнд (h/h), которая отличается от альбино-формы окраской глаз, у белых Хедлюнд норок глаза темные, в то время как у альбиносов - красные. Данная окраска наследуется как моногенный кодоминантный признак - гомозиготы h/h имеют белую окраску и часто являются глухими, а гетерозиготы H/h - имеют пятнистую, пегую окраску и нормальный слух. Ранее было показано, что развитие этой окраски мехового покрова, обуславливается мутацией в гене, кодирующем ассоциированный с микрофтальмией транскрипционный фактор (MITF), а именно в его меланоцит-специфичной изоформе (MITF-M) [Manakhov и др., 2019].- Hedlund white coloration (h/h), which differs from the albino form in the color of the eyes; white Hedlund minks have dark eyes, while albinos have red ones. This color is inherited as a monogenic codominant trait - h/h homozygotes are white in color and are often deaf, and H/h heterozygotes have a spotted, piebald color and normal hearing. It was previously shown that the development of this fur color is caused by a mutation in the gene encoding the microphthalmia-associated transcription factor (MITF), namely in its melanocyte-specific isoform (MITF-M) [Manakhov et al., 2019].
- Окраска черный хрусталь, одна из недавно возникших форм, которая впервые выделена в ИЦиГ СО РАН в ходе проведения экспериментальной доместикации американской норки. Данная мутация наследуется как моногенный полудоминантный признак: гетерозиготные (С'/+) особи характеризуются наличием белых остевых волос, которые образуют «вуаль», покрывающую все тело, гомозиготные по мутации особи (С'/С') имеют единичные черные волоски на теле, которые могут полностью отсутствовать, в результате чего животные могут иметь абсолютно белую окраску, схожую с окраской белая Хедлюнд (h/h). Но в отличие от последней, животные с окраской хрусталь имеют нормальный слух [Trapezov, 1997].- Black crystal color, one of the recently emerged forms, which was first identified at the Institute of Cytology and Genetics SB RAS during the experimental domestication of the American mink. This mutation is inherited as a monogenic semi-dominant trait: heterozygous (C'/+) individuals are characterized by the presence of white guard hairs, which form a “veil” covering the entire body, individuals homozygous for the mutation (C'/C') have single black hairs on the body, which may be completely absent, as a result of which the animals may have a completely white coloration, similar to the coloration of Hedlund's white (h/h). But unlike the latter, animals with crystal coloring have normal hearing [Trapezov, 1997].
До настоящего времени из 35 мутаций, обуславливающих формирование цветных форм американкой норки, с молекулярно-генетической точки зрения было описано всего лишь 9. Это мутации, обуславливающие алеутскую (а/а), королевскую белую (с/с), гималайскую (ch/ch), белую Хедлюнд (h/h), паломино (k/k), мойл (m/m), камео (mc/mc), серебристо-голубую (р/р), и Шедоу (Sh+) окраски меха [Anistoroaei и др., 2008; Anistoroaei, Krogh, Christensen, 2013; Benkel и др., 2009; Cirera и др., 2016; Manakhov и др., 2019; Manakhov и др., 2020; Manakhov и др., 2022а].To date, out of 35 mutations that cause the formation of colored forms of the American mink, only 9 have been described from a molecular genetic point of view. These are mutations that cause the Aleutian (a/a), royal white (s/s), Himalayan (c h / c h ), white Hedlund (h/h), palomino (k/k), moyle (m/m), cameo (m c /m c ), silver blue (r/r), and Shadow (S h + ) fur color [Anistoroaei et al., 2008; Anistoroaei, Krogh, Christensen, 2013; Benkel et al., 2009; Cirera et al., 2016; Manakhov et al., 2019; Manakhov et al., 2020; Manakhov et al., 2022a].
В случае если генетические маркеры животных-носителей данных мутаций неизвестны, носительство определяют, используя генеалогический метод - это метод изучения родословных, с помощью которого прослеживается наследование признака в группе с указанием типа родственных связей между членами родословной [Инге-Вечтомов, 2010]. Молекулярно-генетический маркеры для животных, являющихся носителями признака черный хрусталь до настоящего времени не были известны и впервые предложены в заявленном изобретении.If the genetic markers of animals carrying these mutations are unknown, carriage is determined using the genealogical method - this is a method of studying pedigrees that traces the inheritance of a trait in a group, indicating the type of family ties between members of the pedigree [Inge-Vechtomov, 2010]. Molecular genetic markers for animals that are carriers of the black crystal trait have not been known until now and were first proposed in the claimed invention.
Ранее в патенте РФ №2722564 нами был предложен способ выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, включающий генотипирование животного по гену MLPH и MITF-M. Были раскрыты новые генетические маркеры, а именно специфические мутации: MLPH c.901+1G>A (р) в гене меланофилина (белок MLPH) и MITF-M с.33+1G>А (И) в гене транскрипционного фактора, ассоциированного с микрофтальмией/меланогенезом (белок MITF), а также способ идентификации генов, вовлеченных в регуляцию формирования окраски меха у американской норки. Авторы изобретения обнаружили, что их функционирование связано с развитием серебристо-голубой (р/р) и белой Хедлюнд (h/h) окрасок меха американской норки соответственно. Предложен также способ отбора животных, являющихся носителем какого-либо из указанных маркеров, и применение данного способа в звероводстве для отбора производителей, обладающих генетическими характеристиками, необходимыми для получения потомства желаемой цветовой окраски. Возможность определения наличия или отсутствия данных маркеров в образце ДНК животного методами молекулярной биологии показана на примере их выявления путем проведения ПЦР-анализа и последующего секвенирования биологических образцов американской норки. Раскрыта тест-система, включающая генотипирование животного для выявления у него маркерной полиморфной нуклеотидной вариации, ассоциированной с наличием у животного аллеля, проявляющегося в развитии определенной цветовой вариации. Предложенные в качестве маркеров нуклеотидные вариации в геноме ассоциированы с изменением физиологической активности белков MLPH и MITF-M. Для выявления данных вариаций проводят генотипирование полиморфных локусов в генах MLPH и MITF. В частности, в качестве маркера наличия в генотипе животного аллеля р используют однонуклеотидную замену MLRH c.901+1G>A, и в качестве маркера наличия аллеля h используют однонуклеотидную замену MITF-M с.33+1G>А.Previously, in RF patent No. 2722564, we proposed a method for identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation, including genotyping the animal for the MLPH and MITF-M genes. New genetic markers were discovered, namely specific mutations: MLPH c.901+1G>A (p) in the melanophilin gene (MLPH protein) and MITF-M c.33+1G>A (I) in the gene for the transcription factor associated with microphthalmia/melanogenesis (MITF protein), as well as a method for identifying genes involved in the regulation of fur color formation in American mink. The inventors discovered that their functioning is associated with the development of silver-blue (s/r) and Hedlund white (h/h) fur colors of the American mink, respectively. A method is also proposed for selecting animals that are carriers of any of these markers, and the use of this method in fur farming to select producers who have the genetic characteristics necessary to obtain offspring of the desired color. The possibility of determining the presence or absence of these markers in an animal's DNA sample using molecular biology methods is shown using the example of their detection by performing PCR analysis and subsequent sequencing of biological samples of American mink. A test system is disclosed that includes genotyping an animal to identify a marker polymorphic nucleotide variation associated with the presence of an allele in the animal that manifests itself in the development of a certain color variation. Nucleotide variations in the genome proposed as markers are associated with changes in the physiological activity of the MLPH and MITF-M proteins. To identify these variations, genotyping of polymorphic loci in the MLPH and MITF genes is carried out. In particular, the single-nucleotide substitution MLRH c.901+1G>A is used as a marker for the presence of allele p in the genotype of an animal, and the single-nucleotide substitution MITF-M c.33+1G>A is used as a marker for the presence of allele h.
Технической задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является решение как минимум одной из вышеуказанных в уровне техники проблем.The technical problem to which the present invention is aimed is to solve at least one of the problems mentioned above in the prior art.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Техническим решением является использование описанного признаками в пунктах формулы изобретения.The technical solution is to use the features described in the claims.
Одной из возможных технических задач, на решение которой может быть направлено настоящее изобретение, являлось создание способа отбора особей американской норки для получения желаемой окраски меха на основе определения генотипа отдельных особей норки.One of the possible technical problems that the present invention could be aimed at solving was the creation of a method for selecting American mink individuals to obtain the desired fur color based on determining the genotype of individual mink individuals.
Задача решена тем, что впервые выявлен новый генетический маркер, определяющий окраску меха норок. Было обнаружено, что однонуклеотидная замена в гене СОРА (СОРА с.478 ОТ), определяет окраску меха черный хрусталь: особи, гетерозиготные по данной замене (аллели С'/+) характеризуются наличием белых остевых волос, которые образуют «вуаль», покрывающую все тело, в то время как особи гомозиготные по данной замене (аллели С'/С') имеют единичные черные волоски на теле, которые могут полностью отсутствовать, в результате чего животные могут иметь абсолютно белую окраску.The problem was solved by identifying for the first time a new genetic marker that determines the color of mink fur. It was discovered that a single-nucleotide substitution in the COPA gene (COPA p.478 OT) determines the color of the black crystal fur: individuals heterozygous for this substitution (C'/+ alleles) are characterized by the presence of white guard hairs, which form a “veil” covering everything body, while individuals homozygous for this substitution (alleles C'/C') have single black hairs on the body, which may be completely absent, as a result of which the animals can have a completely white color.
Кроме того, было показано наличие взаимодействия между мутациями, обуславливающими формирование окрасок черный хрусталь и белый Хедлюнд (мутация MITF-M с.33+1G>A). Особи, гетерозиготные по обеим мутациям (C'/+, H/h) характеризуются преимущественно белой окраской мехового покрова и нормальным слухом. Фенотипически такие особи не отличаются от особей, гомозиготных по мутации, обуславливающей формирование окраски меха черный хрусталь (С'/С') [Manakhov и др., 2022b].In addition, it was shown that there is an interaction between the mutations that cause the formation of black crystal and white Hedlund colors (mutation MITF-M c.33+1G>A). Individuals heterozygous for both mutations (C'/+, H/h) are characterized by predominantly white fur and normal hearing. Phenotypically, such individuals do not differ from individuals homozygous for the mutation causing the formation of black crystal fur color (C'/C') [Manakhov et al., 2022b].
В одном из вариантов осуществления изобретения предложен способ выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, включающий генотипирование животного для выявления у него маркерных полиморфных нуклеотидных вариаций, ассоциированных с наличием у животного аллелей, проявляющихся в развитии определенной цветовой вариации, отличающийся тем, что в качестве маркеров используют однонуклеотидные замены СОРА с.478 ОТ и MITF-Mc.33+1 G>A.In one of the embodiments of the invention, a method is proposed for identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation, including genotyping the animal to identify marker polymorphic nucleotide variations associated with the presence of alleles in the animal that are manifested in the development of a certain color variation, characterized in that single nucleotide substitutions COPA p.478 OT and MITF-Mc.33+1 G>A are used as markers.
В одном из вариантов осуществления изобретения предложенный способ выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, включает в себя:In one embodiment of the invention, the proposed method for identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation includes:
а) определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК исследуемой особи американской норки, содержащих позиции генов СОРА с.478 и MITF-M с.33+1;a) determination of the nucleotide sequence of DNA fragments of the studied American mink individual, containing the positions of the COPA p.478 and MITF-M p.33+1 genes;
б) сравнение последовательности упомянутых фрагментов ДНК с референсными последовательностями генов СОРА (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) и MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107);b) comparison of the sequence of the mentioned DNA fragments with the reference sequences of the COPA (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) and MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107) genes;
в) выявление наличия и количества или отсутствия однонуклеотидной замены СОРА с.478 С>Т и MITF-M с.33+1 G>A в нуклеотидной последовательности упомянутых фрагментов ДНК;c) identifying the presence and quantity or absence of the single nucleotide substitution COPA c.478 C>T and MITF-M c.33+1 G>A in the nucleotide sequence of the mentioned DNA fragments;
г) определение генотипа исследуемой особи американской норки по мутациям, обуславливающим развитие окрасок меха черных хрусталь и белый Хедлюнд.d) determination of the genotype of the American mink under study based on mutations that determine the development of black crystal and white Hedlund fur colors.
В одном из вариантов осуществления изобретения фрагмент ДНК исследуемой особи американской норки, содержащий позицию гена СОРА с.478 получают путем амплификации ДНК с использованием праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.In one embodiment of the invention, a DNA fragment of the American mink under study containing the position of the COPA gene p.478 is obtained by DNA amplification using primers SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4.
В одном из вариантов осуществления изобретения желаемая цветовая вариация отличается от темно-коричневой.In one embodiment of the invention, the desired color variation is other than dark brown.
В одном из вариантов осуществления изобретения однонуклеотидная замена СОРА с.478 С>Т является маркером проявления окраски черной хрусталь у животного, гетерозиготного по аллелю С' и гомозиготного по аллелю Н (С' Н/Н) и преимущественно белой окраски меха у животного, гомозиготного по обоим аллелям (С'/С' Н/Н) и дигетерозиготного по обоим аллелям (С'/+Н/И).In one of the embodiments of the invention, the single nucleotide substitution COPA c.478 C>T is a marker for the manifestation of black crystal color in an animal heterozygous for the C' allele and homozygous for the H allele (C' H/H) and predominantly white fur color in an animal homozygous for both alleles (C'/C' N/H) and diheterozygous for both alleles (C'/+H/I).
В одном из вариантов осуществления изобретения определение нуклеотидной последовательности ДНК проводят секвенированием по методу Сенгера.In one embodiment of the invention, the determination of the nucleotide sequence of DNA is carried out by sequencing using the Sanger method.
В одном из вариантов осуществления изобретения определение нуклеотидной последовательности ДНК проводят секвенированием NGS.In one embodiment of the invention, the determination of the nucleotide sequence of DNA is carried out by NGS sequencing.
В других вариантах осуществления изобретения выявление наличия или отсутствия однонуклеотидной замены в последовательности ДНК проводят методом ПЦР-ПДРФ, ПНР в реальном времени с использованием флуоресцентных зондов типа TaqMan, аллель-специфической ПНР, гибридизации на чипах.In other embodiments of the invention, detection of the presence or absence of a single nucleotide substitution in the DNA sequence is carried out by PCR-RFLP, real-time PLR using fluorescent probes such as TaqMan, allele-specific PLR, hybridization on chips.
В одном из вариантов осуществления изобретения предлагается применение упомянутого способа выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, для отбора особей американской норки среди имеющегося поголовья фермерских норок.In one embodiment, the invention proposes the use of the above method of identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation, to select individuals of American mink from the existing stock of farmed minks.
В одном из вариантов осуществления изобретения предлагается упомянутое применение для отбора особей, где отобранных животных используют для получения от них потомства с желаемой окраской меха.In one embodiment of the invention, said use is provided for selection of individuals, where the selected animals are used to produce offspring with a desired fur color.
Детальное описание изобретенияDetailed description of the invention
Если не указано иначе, предполагается, что все термины, обозначения и другие научные термины, используемые в данной заявке, имеют значения, которые обычно понимают специалисты в области, к которой относится настоящее изобретение. В некоторых случаях определения терминов с общепринятыми значениями приведены в данной заявке для ясности и/или для быстрой справки и понимания, и включение таких определений в настоящее описание не должно истолковываться как наличие существенного отличия значения термина от обычно подразумеваемого в данной области.Unless otherwise indicated, all terms, designations and other scientific terms used in this application are intended to have the meanings commonly understood by those skilled in the art to which the present invention relates. In some cases, definitions of terms with generally accepted meanings are provided in this application for clarity and/or for quick reference and understanding, and the inclusion of such definitions in this specification should not be construed as substantially different in the meaning of the term from that generally understood in the art.
Кроме того, если по контексту не требуется иное, термины в единственном числе включают в себя термины во множественном числе, и термины во множественном числе включают в себя термины в единственном числе. Как правило, используемая классификация и методы молекулярной биологии, генетики, аналитической химии, а также гибридизации и химии белка и нуклеиновых кислот, описанные в настоящем документе, хорошо известны специалистам и широко применяются в данной области. Ферментативные реакции и способы очистки осуществляют в соответствии с инструкциями производителя, как это обычно осуществляется в данной области, или как описано в настоящем документе.In addition, unless the context otherwise requires, terms in the singular include plural terms, and plural terms include singular terms. In general, the classification and techniques of molecular biology, genetics, analytical chemistry, and hybridization and protein-nucleic acid chemistry described herein are well known to those skilled in the art and are widely used in the art. Enzymatic reactions and purification methods are carried out in accordance with the manufacturer's instructions, as is typically carried out in the art, or as described herein.
Изобретение раскрывает новый генетический маркер, а именно специфическую мутацию в гене, кодирующем α-субъединицу гептамерного белкового комплекса COPI - белок СОРА, - а также способ идентификации генов, вовлеченных в регуляцию формирования окраски меха у американской норки (Neogale vison, ранее известная как Neovison vison [Patterson и др., 2021]). Авторы изобретения обнаружили, что выявленный генетический маркер связан с развитием окраски меха черный хрусталь (С'/+ и С'/С') у американской норки. Предложен способ отбора животных, являющихся носителем указанного маркера, и применение данного способа в пушном звероводстве для отбора производителей, обладающих генетическими характеристиками, необходимыми для получения потомства желаемой цветовой окраски. Возможность определения наличия или отсутствия данных маркеров в образце ДНК животного методами молекулярной биологии показана на примере их выявления путем проведения ПЦР-анализа и последующего секвенирования биологических образцов американской норки. Раскрыт способ выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, включающий генотипирование животного для выявления у него маркерной полиморфной нуклеотидной вариации, ассоциированной с наличием у животного аллеля, проявляющегося в развитии определенной цветовой вариации. Предложена в качестве маркера нуклеотидная вариация в геноме, ассоциированная с изменением физиологической активности белка СОРА. Для выявления данной вариации проводят генотипирование полиморфного локуса в гене СОРА. В качестве маркера наличия в генотипе животного аллеля С используют вариант однонуклеотидной замены с.478 С>Т в гене СОРА.The invention discloses a new genetic marker, namely a specific mutation in the gene encoding the α-subunit of the heptameric protein complex COPI - the COPA protein - as well as a method for identifying genes involved in the regulation of fur coloration in the American mink (Neogale vison, formerly known as Neovison vison [Patterson et al., 2021]). The inventors found that the identified genetic marker is associated with the development of black crystal fur color (C'/+ and C'/C') in American mink. A method is proposed for selecting animals that are carriers of the specified marker, and the use of this method in fur farming to select producers who have the genetic characteristics necessary to obtain offspring of the desired color. The possibility of determining the presence or absence of these markers in an animal's DNA sample using molecular biology methods is shown using the example of their detection by performing PCR analysis and subsequent sequencing of biological samples of American mink. Disclosed is a method for identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of a desired color variation, including genotyping the animal to identify a marker polymorphic nucleotide variation associated with the presence of an allele in the animal that manifests itself in the development of a certain color variation. A nucleotide variation in the genome associated with changes in the physiological activity of the COPA protein has been proposed as a marker. To identify this variation, genotyping of the polymorphic locus in the COPA gene is performed. As a marker for the presence of allele C in the genotype of an animal, the single-nucleotide substitution variant c.478 C>T in the COPA gene is used.
Изобретение относится также к мутации СОРА с.478 С>Т в гене СОРА, которая приводит к несинонимичной замене 160 аргинина на цистеин в конце четвертого WD40 повтора в белке СОРА. Данный WD40 повтор является эволюционно консервативным и функционально значимым для связывания COPI комплекса с дилизиновыми мотивами (KKxx, KxKx) транспортируемых белков [Vece и др., 2016; Jackson и др., 2012]. Авторы изобретения показали, что ген СОРА у норки вовлечен в процессы определения окраски мехового покрова. В частности, авторы изобретения обнаружили, что однонуклеотидная замена в гене СОРА (СОРА с.478 С>Т), определяет окраску меха черный хрусталь: особи, гетерозиготные по данной замене (аллели С'/+) характеризуются наличием белых остевых волос, которые образуют «вуаль», покрывающую все тело, в то время как особи гомозиготные по данной замене (аллели С'/С') имеют единичные черные волоски на теле, которые могут полностью отсутствовать, в результате чего животные могут иметь абсолютно белую окраску. Авторы изобретения впервые показали ассоциацию физиологической активности белка СОРА с окраской мехового покрова американской норки, что и послужило основой создания нового способа отбора животных, являющих носителями аллелей, обеспечивающих определенную окраску, а также их число. Раскрыт новый генетический маркер СОРА с.478 С>Т, который может быть использован для генотипирования животных с целью выявления животных - носителей аллелей определенной цветовой вариации.The invention also relates to the COPA c.478 C>T mutation in the COPA gene, which leads to a nonsynonymous replacement of 160 arginine with cysteine at the end of the fourth WD40 repeat in the COPA protein. This WD40 repeat is evolutionarily conserved and functionally significant for the binding of the COPI complex to dilysine motifs (KKxx, KxKx) of transported proteins [Vece et al., 2016; Jackson et al., 2012]. The authors of the invention showed that the COPA gene in mink is involved in the processes of determining the color of the fur coat. In particular, the authors of the invention discovered that a single-nucleotide substitution in the COPA gene (COPA c.478 C>T) determines the fur color black crystal: individuals heterozygous for this substitution (C'/+ alleles) are characterized by the presence of white guard hairs that form a “veil” covering the entire body, while individuals homozygous for this substitution (alleles C'/C') have single black hairs on the body, which may be completely absent, as a result of which the animals may have a completely white color. The authors of the invention were the first to show the association of the physiological activity of the COPA protein with the color of the fur of the American mink, which served as the basis for the creation of a new method for selecting animals that are carriers of alleles that provide a certain color, as well as their number. A new genetic marker COPA c.478 C>T has been disclosed, which can be used for genotyping animals in order to identify animals that carry alleles of a certain color variation.
Кроме того, нами было показано наличие взаимодействия между мутациями, обуславливающими формирование окрасок черный хрусталь и белый Хедлюнд (мутация MITF-M с.33+1 G>A). Особи, гетерозиготные по обеим мутациям (С'/+H/h) характеризуются преимущественно белой окраской мехового покрова и нормальным слухом. Фенотипически такие особи не отличаются от особей, гомозиготных по мутации, обуславливающей формирование окраски меха черный хрусталь (С'/С') [Manakhov и др., 2022b]. Различение таких особей является актуальной задачей для промышленного разведения американской норки, так как знание о генотипе особей позволяет подбирать их в скрещивание таким образом, чтобы в потомстве получалась максимальная доля животных с окраской меха, необходимой звероводу.In addition, we have shown the presence of interaction between mutations that cause the formation of black crystal and white Hedlund colors (mutation MITF-M p.33+1 G>A). Individuals heterozygous for both mutations (C'/+H/h) are characterized by predominantly white fur and normal hearing. Phenotypically, such individuals do not differ from individuals homozygous for the mutation causing the formation of black crystal fur color (C'/C') [Manakhov et al., 2022b]. Distinguishing such individuals is an urgent task for the industrial breeding of American mink, since knowledge of the genotype of individuals allows them to be selected for crossing in such a way that the offspring will produce the maximum proportion of animals with the fur color required by the fur farmer.
Открытие однонуклеотидной замены в кодирующей области гена СОРА, а также наличия факта взаимодействия между генами СОРА и MITF в процессе формирования окраски мехового покрова, позволило авторам изобретения разработать способ, позволяющий предсказывать цвет норки и ее потомства на основе различения аллелей С' и + и определения генотипа отдельных особей американской норки по однонуклеотидной замене, обуславливающей развитие окраски меха черный хрусталь. В соответствии с настоящим изобретением предлагается способ отбора особей для получения желаемой окраски меха на основе определения генотипа отдельных особей норки.The discovery of a single-nucleotide substitution in the coding region of the COPA gene, as well as the presence of interaction between the COPA and MITF genes in the process of fur color formation, allowed the authors of the invention to develop a method that allows predicting the color of a mink and its offspring based on distinguishing the C' and + alleles and determining the genotype individual American mink by single-nucleotide substitution, which determines the development of black crystal fur color. The present invention provides a method for selecting individuals to obtain a desired fur color based on determining the genotype of individual mink individuals.
Эффективность производства меха заданной окраски и разведения соответствующих линий животных может быть повышена, при возможности определения до скрещивания, является ли животное носителем мутации, влияющей на окраску мехового покрова. Используя данную информацию, селекционер может планировать скрещивания животных, увеличивая, таким образом, долю потомства с интересующей его окраской мехового покрова, что в конечном итоге приведет к уменьшению расходов звероводческой организации. В качестве инструмента для отбора животных предложено использовать мутации в генах СОРА (СОРА с.478 ОТ) и MITF (MITF-M с.33+1 G>A), которые обуславливают развитие окраски меха черный хрусталь и Хедлюнд:The efficiency of producing fur of a given color and breeding appropriate lines of animals can be increased if it is possible to determine before crossing whether the animal is a carrier of a mutation that affects the color of the fur coat. Using this information, the breeder can plan crossbreeding of animals, thus increasing the proportion of offspring with the fur color he is interested in, which will ultimately lead to a reduction in the costs of the fur farming organization. As a tool for selecting animals, it is proposed to use mutations in the COPA (COPA p.478 OT) and MITF (MITF-M p.33+1 G>A) genes, which determine the development of black crystal and Hedlund fur color:
- особи, гетерозиготные по замене С' и гомозиготные по аллелю Н (С/+Н/Н), характеризуются наличием белых остевых волос, которые образуют «вуаль», покрывающую все тело;- individuals heterozygous for the C' substitution and homozygous for the H allele (C/+H/H) are characterized by the presence of white guard hairs, which form a “veil” covering the entire body;
- особи, гомозиготные по замене С' и гомозиготные или гетерозиготные по аллелю Н (С'/С' Н/Н; С'/С' H/h), характеризуются наличием единичных черных волосков на теле, которые могут полностью отсутствовать, в результате чего животные могут иметь абсолютно белую окраску;- individuals homozygous for the C' substitution and homozygous or heterozygous for the H allele (C'/C' H/H; C'/C' H/h), are characterized by the presence of single black hairs on the body, which may be completely absent, as a result why animals can have a completely white color;
- особи, дигетерозиготные по аллелям C' и h (С'/+H/h) характеризуются наличием единичных черных волосков на теле, которые могут полностью отсутствовать, в результате чего животные могут иметь абсолютно белую окраску;- individuals diheterozygous for alleles C' and h (C'/+H/h) are characterized by the presence of single black hairs on the body, which may be completely absent, as a result of which the animals may have a completely white color;
Изобретение раскрывает также применение заявленного способа для селекции и разведения фермерской американской норки по желательному признаку (для получения особей с заданной окраской мехового покрова). Применение включает в себя отбор особей, генетически соответствующих желательному признаку (заданной окраске меха) среди имеющегося поголовья фермерских норок для использования в направленных селекционных программах (получение потомства с заданной окраской меха). Применение заявленного способа для отбора норок для селекции также может быть использован для защиты от генетической кражи селекционных линий американских норок определенной окраски.The invention also discloses the use of the claimed method for the selection and breeding of American farm mink according to a desired trait (to obtain individuals with a given fur color). Application involves the selection of individuals genetically corresponding to a desired trait (a given fur color) from the existing stock of farmed minks for use in targeted breeding programs (producing offspring with a given fur color). The use of the claimed method for selecting minks for breeding can also be used to protect against genetic theft of breeding lines of American minks of a certain color.
Авторы изобретения провели полногеномное секвенирование и последующее сравнение геномов американских норок, характеризующихся различными типами окраски мехового покрова: стандартной темно-коричневой (дикий тип, +/+), серебристо-голубой (аллели р/р), белой Хедлюнд (аллели h/h), мойл (аллели m/m), виолет (аллели а/а m/m р/р), а также особи из линии, характеризующейся окраской меха черный хрусталь: абсолютно белого животного с темными глазами и нормальным слухом (аллели С'/С').The authors of the invention conducted whole-genome sequencing and subsequent comparison of the genomes of American minks, characterized by different types of fur color: standard dark brown (wild type, +/+), silver-blue (p/p alleles), white Hedlund (h/h alleles) , moyle (alleles m/m), violet (alleles a/a m/m r/p), as well as individuals from the line characterized by black crystal fur color: an absolutely white animal with dark eyes and normal hearing (alleles C'/C ').
У белого животного из линии черный хрусталь была обнаружена несинонимичная замена (СОРА p.Argl60Cys) в эволюционно консервативном и функционально значимом домене белок-кодирующего транскрипта гена СОРА (СОРА с.478 С>Т). Было показано, что выявленная мутация в гене СОРА (СОРА с.478 С>Т), в гетерозиготном состоянии обуславливает развитие окраски меха черный хрусталь (С/+), характеризующейся наличием белых остевых волос, которые образуют «вуаль», а в гомозиготном состоянии обуславливает развитие белой окраски мехового покрова. Кроме того, было показано, что особи, являющиеся двойными гетерозиготами по выявленной мутации в гене СОРА (СОРА с.478 С>Т) и описанной ранее для норок белой Хедлюнд окраски мутацией в гене MITF (MITF-M с.33+1 G>A), также характеризуются полностью белой окраской меха.In a white animal from the black crystal line, a nonsynonymous substitution (COPA p.Argl60Cys) was discovered in the evolutionarily conserved and functionally significant domain of the protein-coding transcript of the COPA gene (COPA p.478 C>T). It was shown that the identified mutation in the COPA gene (COPA p.478 C>T), in the heterozygous state, causes the development of black crystal fur color (C/+), characterized by the presence of white guard hairs that form a “veil”, and in the homozygous state causes the development of white fur coloration. In addition, it was shown that individuals who are double heterozygotes for the identified mutation in the COPA gene (COPA p.478 C>T) and the previously described mutation in the MITF gene (MITF-M p.33+1 G> A), are also characterized by completely white fur.
Таким образом, настоящее изобретение относится, прежде всего, к использованию обнаруженной мутации в генах СОРА в качестве маркера, позволяющего определить наличие или отсутствие у животного аллелей С, а также их числа. Изобретение относится к способу выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, включающий генотипирование животного по генам СОРА и MITF-M. Генотипирование по настоящему изобретению содержит следующие стадии:Thus, the present invention relates, first of all, to the use of a detected mutation in the COPA genes as a marker to determine the presence or absence of C alleles in an animal, as well as their number. The invention relates to a method for identifying an individual American mink that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation, including genotyping the animal for the COPA and MITF-M genes. Genotyping according to the present invention contains the following steps:
а) определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК исследуемой особи американской норки, содержащих позиции генов СОРА с.478 и MITF-M с.33+1;a) determination of the nucleotide sequence of DNA fragments of the studied American mink individual, containing the positions of the COPA p.478 and MITF-M p.33+1 genes;
б) сравнение последовательности упомянутых фрагментов ДНК с референсными последовательностями генов СОРА (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) и MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107);b) comparison of the sequence of the mentioned DNA fragments with the reference sequences of the COPA (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) and MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107) genes;
в) выявление наличия и количества или отсутствия однонуклеотидной замены СОРА с.478 С>Т и MITF-M с.33+1 G>A в нуклеотидной последовательности упомянутых фрагментов ДНК;c) identifying the presence and quantity or absence of the single nucleotide substitution COPA c.478 C>T and MITF-M c.33+1 G>A in the nucleotide sequence of the mentioned DNA fragments;
г) определение генотипа исследуемой особи американской норки по мутациям, обуславливающим развитие окрасок меха черных хрусталь и белый Хедлюнд.d) determination of the genotype of the American mink under study based on mutations that determine the development of black crystal and white Hedlund fur colors.
Фрагмент ДНК исследуемой особи получается любым известным из уровня техники способом взятия биологического материала, содержащего ДНК, в том числе, но не ограничиваясь, такими способами как взятие крови, мазка, биопсии и пр. способами. Такие способы известны специалисту в данной области.The DNA fragment of the individual under study is obtained by any method known from the state of the art for taking biological material containing DNA, including, but not limited to, methods such as taking blood, smears, biopsies, and other methods. Such methods are known to one skilled in the art.
Специалисту в данной области понятно, что для осуществления генотипирования по мутациям СОРА с.478 С>Т и MITF-M с.33+1 G>A может быть использован любой известный в настоящее время способ определения нуклеотидной последовательности ДНК и/или наличия определенной мутации (секвенирование по Сэнгеру, NGS, аллель-специфичная ПНР, ПЦР-ПДРФ, ПЦР в реальном времени с использованием флуоресцентных зондов типа TaqMan и др.).It is clear to a person skilled in the art that to carry out genotyping for the COPA c.478 C>T and MITF-M c.33+1 G>A mutations, any currently known method for determining the nucleotide sequence of DNA and/or the presence of a specific mutation can be used (Sanger sequencing, NGS, allele-specific PLR, PCR-RFLP, real-time PCR using fluorescent probes such as TaqMan, etc.).
В одном из вариантов осуществления изобретения генотипирование проводится с использованием фрагмента ДНК исследуемой особи американской норки, содержащего позицию гена СОРА с.478, полученного путем амплификации ДНК исследуемой особи американской норки с использованием праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4. В результате такой амплификации образуется фрагмент ДНК с последовательностью SEQ ID NO: 1 (аллель дикого типа) либо SEQ ID NO: 2 (аллель с однонуклеотидной заменой).In one embodiment of the invention, genotyping is carried out using a DNA fragment of an American mink specimen containing the position of the COPA gene c.478, obtained by amplifying the DNA of an American mink specimen using primers SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4. As a result, This amplification produces a DNA fragment with the sequence SEQ ID NO: 1 (wild type allele) or SEQ ID NO: 2 (allele with a single nucleotide substitution).
Изобретение также относится к применению упомянутого способа выявления особи американской норки, являющейся носителем по меньшей мере одного аллеля, обуславливающего формирование желаемой цветовой вариации, для отбора особей американской норки, пригодных в племенной работе для получения желаемой окраски меха, среди имеющегося поголовья фермерских норок.The invention also relates to the use of the above method for identifying an American mink individual that is a carrier of at least one allele that causes the formation of the desired color variation, for the selection of American mink individuals suitable for breeding to obtain the desired fur color from among the existing stock of farmed minks.
В одном из вариантов осуществления изобретения предлагается упомянутое применение для отбора особей, где отобранных животных используют для получения от них потомства с желаемой окраской меха.In one embodiment of the invention, said use is provided for selection of individuals, where the selected animals are used to produce offspring with a desired fur color.
В настоящее время аналогов представляемым маркерам и способу их использования для определения окраски меха черный хрусталь у американской норки не существует.Currently, there are no analogues to the presented markers and the method of using them to determine the black crystal fur color of the American mink.
Ниже представлены примеры проведения генотипирования животных по мутацям СОРА с.478 С>Т (С) и MITF-Mc.33+1 G>A (/г), а также применение заявленного способа в селекции.Below are examples of genotyping animals for the COPA c.478 C>T (C) and MITF-Mc.33+1 G>A (/g) mutations, as well as the use of the claimed method in breeding.
Пример 1. Генотипирование биологического образцаExample 1: Genotyping a biological sample
Пример 1.1. Получение ДНКExample 1.1. Obtaining DNA
ДНК может быть получена из любой ткани животного, содержащей клеточные ядра, например, из лейкоцитов, волосяных фолликулов, ткани уха и мышечной ткани, клеток буккального эпителия и др. Пригодная для проведения ПЦР ДНК может быть выделена из образца при помощи наборов QIAamp DNA Mini Kit компании Qiagen (http://www.qiagen.com/). Однако любой метод выделения ДНК должен быть в равной степени эффективным.DNA can be obtained from any animal tissue containing cell nuclei, for example, from white blood cells, hair follicles, ear and muscle tissue, buccal epithelial cells, etc. DNA suitable for PCR can be isolated from the sample using QIAamp DNA Mini Kits Qiagen (http://www.qiagen.com/). However, any DNA extraction method should be equally effective.
Пример 1.2. Амплификация участков генома американской норки, содержащих исследуемые однонуклеотидные заменыExample 1.2. Amplification of American mink genome regions containing the studied single nucleotide substitutions
Амплификацию полученного в Примере 1.1. образца ДНК проводили с помощью наборов GenPack PCR Core компании «Лаборатория Изоген» (Россия), на приборах GeneAmp PCR System 9700 Thermal Cycler компании «Applied Biosystems» (США) no следующей программе: 94°C - 5 мин; (94°C - 30 сек; 58°C - 30 сек; 72°C - 30 сек) * 35 циклов; 72°C - 10 мин. Реакционная смесь объемом 20 мкл содержала: 10 мкл PCR Diluent, по 0,5 пмоль прямого и обратного праймеров (Таблица 1), 10 нг геномной ДНК.Amplification of what was obtained in Example 1.1. DNA samples were carried out using GenPack PCR Core kits from Isogen Laboratory (Russia), on GeneAmp PCR System 9700 Thermal Cycler devices from Applied Biosystems (USA) in the following program: 94°C - 5 min; (94°C - 30 sec; 58°C - 30 sec; 72°C - 30 sec) * 35 cycles; 72°C - 10 min. A 20 μl reaction mixture contained: 10 μl of PCR Diluent, 0.5 pmol each of forward and reverse primers (Table 1), 10 ng of genomic DNA.
Пример 1.3. Секвенирование полученных ПЦР продуктовExample 1.3. Sequencing of the obtained PCR products
Полученные в результате ПЦР фрагменты очищали с использованием наборов Cleanup компании «Евроген» (Россия) в соответствии с инструкцией производителя.The fragments obtained as a result of PCR were purified using Cleanup kits from Evrogen (Russia) in accordance with the manufacturer’s instructions.
Пробоподготовку для секвенирования проводили с помощью набора реагентов BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit компании «Applied Biosystems» (США), реакционная смесь объемом 10 мкл содержала: 2 мкл BigDye™ Terminator v3.1 Ready Reaction Mix, 1 мкл BigDye™ Terminator v3.1 5X Sequencing Buffer, 0,1 пмоль прямого или обратного праймера (Таблица 1), и очищенный продукт ПЦР.Sample preparation for sequencing was carried out using the BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit from Applied Biosystems (USA), a 10 µl reaction mixture containing: 2 µl BigDye™ Terminator v3.1 Ready Reaction Mix, 1 µl BigDye™ Terminator v3.1 5X Sequencing Buffer, 0.1 pmol forward or reverse primer (Table 1), and purified PCR product.
Полученные продукты реакции очищали на колонках DyeEx 2.0 Spin Kit («Qiagen», Германия) и секвенировали на приборе ABI PSISN 3730x1 компании «Applied Biosystems» (США).The resulting reaction products were purified on DyeEx 2.0 Spin Kit columns (Qiagen, Germany) and sequenced on an ABI PSISN 3730x1 device from Applied Biosystems (USA).
Пример 1.4. Анализ полученных нуклеотидных последовательностейExample 1.4. Analysis of the obtained nucleotide sequences
Анализ проводили с использованием программ Chromas, GeneDoc и веб-сервиса Clustal Omega.The analysis was carried out using Chromas, GeneDoc programs and the Clustal Omega web service.
Проводили выравнивание и сравнение полученных нуклеотидных последовательностей исследуемых особей с референсными нуклеотидными последовательностями генов СОРА (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) и MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107) американской норки.The obtained nucleotide sequences of the studied individuals were aligned and compared with the reference nucleotide sequences of the COPA (ENSNVIT00000001038.1, Ensembl v107) and MITF-M (ENSNVIT00000002796.1, Ensembl v107) genes of the American mink.
Пример 2. Применение способа для отбора особей норки в селекционной работеExample 2. Application of the method for selecting mink individuals in breeding work
Условные обозначения:Legend:
- Аллель «+» - СОРА с.478 С- Allele “+” - COPA p.478 C
- Аллель С - СОРА с.478 Т- Allele C - SOPA p.478 T
- Аллель Н - MITF-Mc.33+1 G- Allele H - MITF-Mc.33+1 G
- Аллель h - MITF-Mc.33+1 А.- Allele h - MITF-Mc.33+1 A.
Предположим, имеется популяция норок с белой окраской мехового покрова и нормальным слухом. В результате проведенного генотипирования по мутации СОРА с.478 С>Т было выяснено, что 75% популяции гомозиготы по аллелю СОРА с.478 Т (С'/С'), а 25% популяции гетерозиготы по аллелю СОРА с.478 Т (С'/+). Предположительно, особи с нормальным слухом и белой окраской мехового покрова, оказавшиеся гетерозиготами по аллелю СОРА с.478 Т (С'/+) также являются гетерозиготами по аллелю MITF-M с.33+1 А (H/h) [Manakhov et al., 2022b] и целесообразным является проведение дополнительного генотипирования этих особей по мутации MITF-M с.33+1 G>A, обуславливающей развитие белой Хедлюнд окраски меха (патент РФ №2722564).Suppose there is a population of minks with white fur and normal hearing. As a result of genotyping for the COPA c.478 C>T mutation, it was found that 75% of the population is homozygous for the COPA c.478 T allele (C'/C'), and 25% of the population is heterozygous for the COPA c.478 T allele (C '/+). Presumably, individuals with normal hearing and white fur coloration, who turned out to be heterozygotes for the COPA allele c.478 T (C'/+), are also heterozygous for the MITF-M allele c.33+1 A (H/h) [Manakhov et al ., 2022b] and it is advisable to carry out additional genotyping of these individuals for the MITF-M c.33+1 G>A mutation, which causes the development of white Hedlund fur color (RF patent No. 2722564).
Предположим, что в результате проведенного дополнительно генотипирования всей популяции норок с белой окраской мехового покрова и нормальным слухом было показано, что 75% популяции гомозиготы по аллелям СОРА с.478 Т и MITF-M с.33+1 G (С'/С' Н/Н), а 25% популяции гетерозиготы по аллелям СОРА с.478 Т и MITF-Mc.33+1 А (Cr'/+ H/h).Let us assume that as a result of additional genotyping of the entire population of minks with white fur and normal hearing, it was shown that 75% of the population are homozygous for the alleles COPA c.478 T and MITF-M c.33+1 G (C'/C' N/H), and 25% of the population are heterozygous for the alleles COPA c.478 T and MITF-Mc.33+1 A (Cr'/ + H/h).
В случае случайного скрещивания в потомстве ожидается следующее распределение по окраскам и генотипам:In the case of random crossing, the following distribution of colors and genotypes is expected in the offspring:
- 87,11% белых животных с нормальным слухом (66,02% С'/С' Н/Н; 10,16% С'/С' H/h; 10,94% С'/+ Н/И)- 87.11% white animals with normal hearing (66.02% C'/C' N/H; 10.16% C'/C' H/h; 10.94% C'/+ N/I)
- 10,16% с окраской меха черный хрусталь, с характерной «вуалью» белых остевых волос (С'/+ Н/Н)- 10.16% with black crystal fur color, with a characteristic “veil” of white guard hairs (C'/+ N/N)
- 1,56% белых глухих животных (0,39% С'/С' h/h; 0,78% С/+h/h; 0,39%+/+h/h)- 1.56% white deaf animals (0.39% C'/C' h/h; 0.78% C/+h/h; 0.39%+/+h/h)
- 0,78% пегих животных со стандартной окраской меха (+/+H/h)- 0.78% piebald animals with standard fur color (+/+H/h)
- 0,38% животных со стандартной окраской мехового покрова (+/+Н/Н).- 0.38% of animals with standard fur color (+/+H/H).
В случае целенаправленного скрещивания животных с генотипом С/С Н/Н в потомстве от таких скрещиваний ожидается следующее распределение по окраскам и генотипам:In the case of purposeful crossing of animals with the C/C H/H genotype, the following distribution of colors and genotypes is expected in the offspring from such crosses:
- 100% белых животных с нормальным слухом (С/С Н/Н).- 100% white animals with normal hearing (S/S N/N).
В случае целенаправленного скрещивания животных с генотипом С'/+ H/h в потомстве от таких скрещиваний ожидается следующее распределение по окраскам и генотипам:In the case of targeted crossing of animals with the C'/+ H/h genotype, the following distribution of colors and genotypes is expected in the offspring from such crosses:
- 43,75% белых животных с нормальным слухом (6,25% С'/С' Н/Н; 12,50% С/С H/h; 25,00% С'/+ H/h)- 43.75% white animals with normal hearing (6.25% C'/C' N/H; 12.50% C/C H/h; 25.00% C'/+ H/h)
- 12,50% с окраской меха черный хрусталь, с характерной "вуалью" белых остевых волос (С'/+ Н/Н)- 12.50% with black crystal fur color, with a characteristic “veil” of white guard hairs (C'/+ N/N)
- 25,00% белых глухих животных (6,25% С/С h/h; 12,50% С/+h/h; 6,25%+/+h/h)- 25.00% white deaf animals (6.25% C/C h/h; 12.50% C/+h/h; 6.25%+/+h/h)
- 12,50% пегих животных со стандартной окраской меха (+/+H/h)- 12.50% piebald animals with standard fur color (+/+H/h)
- 6,25% животных со стандартной окраской мехового покрова (+/+Н/Н).- 6.25% of animals with standard fur color (+/+H/H).
Таким образом, применение предложенного способа определения окраски меха американской норки, с использованием молекулярных маркеров ДНК, может существенно увеличить долю животных с заданной окраской в потомстве. Способ позволяет определить генотип норок, который позволяет проводить скрещивание таким образом, чтобы получить максимальное количество животных заданной окраски, например, вплоть до 100% белых животных с нормальным слухом. В случае случайного скрещивания, их доля составит 66,02+10,16+10,94=87,11% (расчеты проводились на основании частот генотипов и в соответствии с законами расщепления Менделя).Thus, the use of the proposed method for determining the fur color of American mink, using molecular DNA markers, can significantly increase the proportion of animals with a given color in the offspring. The method allows you to determine the genotype of minks, which allows you to crossbreed in such a way as to obtain the maximum number of animals of a given color, for example, up to 100% white animals with normal hearing. In the case of random crossing, their share will be 66.02 + 10.16 + 10.94 = 87.11% (calculations were carried out based on genotype frequencies and in accordance with Mendel’s laws of segregation).
Все публикации, патенты и заявки на патенты включены в настоящий документ посредством ссылки. Хотя в вышеприведенном описании это изобретение было описано в отношении некоторых предпочтительных вариантов его осуществления, и многие детали были изложены в целях иллюстрации, для специалистов в данной области техники будет очевидно, что изобретение допускает дополнительные варианты осуществления и что некоторые детали, описанные в данном документе, могут значительно изменяться без отклонения от сущности изобретения.All publications, patents and patent applications are incorporated herein by reference. Although this invention has been described in the foregoing description with respect to certain preferred embodiments and many details have been set forth for purposes of illustration, it will be apparent to those skilled in the art that the invention is capable of additional embodiments and that certain details described herein may vary significantly without departing from the spirit of the invention.
Использование терминов в единственном числе в контексте описания изобретения должно толковаться как охватывающее как единственное, так и множественное число, если иное не указано в данном документе или явно не противоречит контексту. Термины «состоящий из», «имеющий», «включающий» и «содержащий» следует толковать как неограничивающие термины, т.е. означающие «включая, но не ограничиваясь», если не указано иное. Перечисление диапазонов значений в данном документе просто предназначено для использования в качестве сокращенного способа индивидуальной ссылки на каждое отдельное значение, попадающее в этот диапазон, если здесь не указано иное, и каждое отдельное значение включено в спецификацию, как если бы оно было отдельно изложено в данном документе. Все способы, описанные в данном документе, могут выполняться в любом подходящем порядке, если иное не указано в данном документе или иным образом явно не противоречит контексту. Использование любых и всех примеров или иллюстративного языка (например, «такой как»), представленных в данном документе, предназначено просто для лучшего описания изобретения и не налагает ограничения на объем изобретения, если иное не заявлено. Никакие формулировки в описании не следует истолковывать как указывающие на какой-либо не заявленный элемент как существенный для практического применения изобретения.The use of the singular terms in the context of the description of the invention should be construed to cover both the singular and plural unless otherwise specified herein or clearly inconsistent with the context. The terms “consisting of,” “having,” “including,” and “comprising” are to be construed as non-limiting terms, i.e. meaning "including but not limited to" unless otherwise noted. The listing of ranges of values in this document is simply intended to serve as a shorthand way of individually referring to each individual value falling within that range unless otherwise noted herein, and each individual value is included in the specification as if it were separately set forth herein . All methods described herein may be performed in any suitable order unless otherwise indicated herein or otherwise clearly inconsistent with the context. The use of any and all examples or illustrative language (eg, “such as”) presented herein is intended merely to better describe the invention and does not constitute a limitation on the scope of the invention unless otherwise stated. Nothing in the specification should be construed as indicating any element not claimed as essential to the practice of the invention.
Здесь описаны варианты осуществления этого изобретения, включая лучший из известных изобретателям способа осуществления изобретения. Разновидности этих вариантов осуществления могут стать очевидными для специалистов в данной области техники после прочтения предшествующего описания. Авторы ожидают, что квалифицированные специалисты будут использовать такие варианты в зависимости от обстоятельств, и авторы предполагают, что изобретение будет реализовано на практике иначе, чем конкретно описано в данном документе. Соответственно, это изобретение включает в себя все модификации и эквиваленты признаков, изложенных в прилагаемой формуле изобретения, как это разрешено действующим законодательством. Более того, любая комбинация вышеописанных признаков во всех их возможных вариациях охватывается изобретением, если иное не указано в данном документе или иным образом явно не противоречит контексту.Embodiments of this invention are described herein, including the best method known to the inventors for carrying out the invention. Variations of these embodiments may become apparent to those skilled in the art upon reading the foregoing description. The authors expect that those skilled in the art will use such variations as appropriate, and the authors expect that the invention will be practiced differently than specifically described herein. Accordingly, this invention includes all modifications and equivalents of the features set forth in the appended claims as permitted by applicable law. Moreover, any combination of the above-described features, in all their possible variations, is encompassed by the invention unless otherwise indicated herein or otherwise clearly inconsistent with the context.
Список литературыBibliography
1. Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции: учебник для студентов высших учебных заведений. 2-е издание, перераб. и доп. // СПб.: Изд-во Н.-Л., 2010. 720 с.1. Inge-Vechtomov S.G. Genetics with the basics of selection: a textbook for students of higher educational institutions. 2nd edition, revised. and additional // St. Petersburg: Publishing house N.-L., 2010. 720 p.
2. Трапезов О.В., Трапезова Л.И. Воспроизводящаяся коллекция окрасочных генотипов американской норки (Mustela vison Schreber, 1777) на экспериментальной звероферме Института цитологии и генетики СО РАН // Вестник ВОГиС.2009. Т. 13. №3. С. 554-570.2. Trapezov O.V., Trapezova L.I. Reproducing collection of color genotypes of the American mink (Mustela vison Schreber, 1777) on the experimental fur farm of the Institute of Cytology and Genetics SB RAS // Vestnik VOGiS.2009. T. 13. No. 3. pp. 554-570.
3. Andersson А.-М., Nyman А.-K., Wallgren P. A retrospective cohort study estimating the individual Aleutian disease progress in female mink using a VP2 ELISA and its association to reproductive performance//Preventive Veterinary Medicine. 2017. T. 140. C. 60-66.3. Andersson A.-M., Nyman A.-K., Wallgren P. A retrospective cohort study estimating the individual Aleutian disease progress in female mink using a VP2 ELISA and its association to reproductive performance // Preventive Veterinary Medicine. 2017. T. 140. pp. 60-66.
4. Anistoroaei R. и др. Albinism in the American mink (Neovison vison) is associated with a tyrosinase nonsense mutation // Animal Genetics. 2008. T. 39. №6. C. 645-648.4. Anistoroaei R. et al. Albinism in the American mink (Neovison vison) is associated with a tyrosinase nonsense mutation // Animal Genetics. 2008. T. 39. No. 6. pp. 645-648.
5. Anistoroaei R., Krogh A.K., Christensen K. A frameshift mutation in the LYST gene is responsible for the Aleutian color and the associated Chediak-Higashi syndrome in American mink // Animal Genetics. 2013. T. 44. №2. C. 178-183.5. Anistoroaei R., Krogh A.K., Christensen K. A frameshift mutation in the LYST gene is responsible for the Aleutian color and the associated Chediak-Higashi syndrome in American mink // Animal Genetics. 2013. T. 44. No. 2. pp. 178-183.
6. Benkel B.F. и др. Molecular characterization of the Himalayan mink // Mammalian Genome. 2009. T. 20. №4. C. 256-259.6. Benkel B.F. and others. Molecular characterization of the Himalayan mink // Mammalian Genome. 2009. T. 20. No. 4. pp. 256-259.
7. Cirera S. и др. A large insertion in intron 2 of the TYRP1 gene associated with American Palomino phenotype in American mink. // Mammalian genome: official journal of the International Mammalian Genome Society. 2016. T. 27. №3-4. C. 135-43.7. Cirera S. et al. A large insertion in intron 2 of the TYRP1 gene associated with American Palomino phenotype in American mink. // Mammalian genome: official journal of the International Mammalian Genome Society. 2016. T. 27. No. 3-4. pp. 135-43.
8. Hansen H.O. The Global Fur Industry: Trends, Globalization and Specialization // Journal of Agricultural Science and Technology. 2014. T. 4. C. 543-551.8. Hansen H.O. The Global Fur Industry: Trends, Globalization and Specialization // Journal of Agricultural Science and Technology. 2014. T. 4. pp. 543-551.
9. Jackson L.P. и др. Molecular basis for recognition of dilysine trafficking motifs by COPI. // Developmental cell. 2012. T. 23. №6. C. 1255-62.9. Jackson L.P. and others. Molecular basis for recognition of dilysine trafficking motifs by COPI. // Developmental cell. 2012. T. 23. No. 6. pp. 1255-62.
10. Manakhov A. D. и др. Genome analysis identifies the mutant genes for common industrial Silverblue and Hedlund white coat colours in American mink. // Scientific reports. 2019. T. 9. №1. C. 4581.10. Manakhov A. D. et al. Genome analysis identifies the mutant genes for common industrial Silverblue and Hedlund white coat colors in American mink. // Scientific reports. 2019. T. 9. No. 1. C. 4581.
11. Manakhov A.D. и др. Genome analysis of American minks reveals link of mutations in Ras-related protein-38 gene to Moyle brown coat phenotype. // Scientific reports. 2020. T. 10. №1. C. 15876.11. Manakhov A.D. and others. Genome analysis of American minks reveals link of mutations in Ras-related protein-38 gene to Moyle brown coat phenotype. // Scientific reports. 2020. T. 10. No. 1. C. 15876.
12. Manakhov A.D. и др. Shadow coat colour in American mink associated with a missense mutation in the KIT gene. // Animal genetics. 2022b. T. 53. №4. C. 522-525.12. Manakhov A.D. etc. Shadow coat color in American mink associated with a missense mutation in the KIT gene. //Animal genetics. 2022b. T. 53. No. 4. pp. 522-525.
13. Manakhov A.D. и др. Identification of mutant gene for Black crystal coat and nonallelic gene interactions in Neogale vison // Scientific Reports. 2022a. T. 12. №1. C. 10483.13. Manakhov A.D. et al. Identification of mutant gene for Black crystal coat and nonallelic gene interactions in Neogale vison // Scientific Reports. 2022a. T. 12. No. 1. C. 10483.
14. Patterson B.D. и др. On the nomenclature of the American clade of weasels (Carnivora: Mustelidae) // Journal of Animal Diversity. 2021. T. 3. №2. C. 1-8.14. Patterson B.D. and others. On the nomenclature of the American clade of weasels (Carnivora: Mustelidae) // Journal of Animal Diversity. 2021. T. 3. No. 2. pp. 1-8.
15. Trapezov О.V. Black crystal: a novel color mutant in the American mink (Mustek vision Schreber). // The Journal of heredity. 1997. T. 88. №2. C. 164-6.15. Trapezov O.V. Black crystal: a novel color mutant in the American mink (Mustek vision Schreber). // The Journal of heredity. 1997. T. 88. No. 2. pp. 164-6.
16. Vece T.J. и др. Сора Syndrome: a Novel Autosomal Dominant Immune Dysregulatory Disease // Journal of Clinical Immunology. 2016. T. 36. №4. C. 377-387.16. Vece T.J. et al. Sora Syndrome: a Novel Autosomal Dominant Immune Dysregulatory Disease // Journal of Clinical Immunology. 2016. T. 36. No. 4. pp. 377-387.
Claims (18)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2810183C1 true RU2810183C1 (en) | 2023-12-22 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2722564C1 (en) * | 2019-03-12 | 2020-06-01 | Евгений Иванович Рогаев | Molecular-genetic markers of colour variations of american mink and method of detecting individuals which are allele carriers, causing formation of desired colour variation |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2722564C1 (en) * | 2019-03-12 | 2020-06-01 | Евгений Иванович Рогаев | Molecular-genetic markers of colour variations of american mink and method of detecting individuals which are allele carriers, causing formation of desired colour variation |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Cirera S. et al. New insights into the melanophilin (MLPH) gene controlling coat color phenotypes in American mink //Gene. - 2013. - Т. 527. - No. 1. - С. 48-54. Trapezov O.V. Black crystal: a novel color mutant in the American mink (Mustela vison Schreber) //Journal of Heredity. - 1997. - Т. 88. - No. 2. - С. 164-167. Kulikov A.V. et al. Interplay between aggression, brain monoamines and fur color mutation in the American mink //Genes, Brain and Behavior. - 2016. - Т. 15. - No. 8. - С. 733-740. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3093265B2 (en) | Methods for comparing genotypes by comparing nucleotide sequences of members of a gene family and kits therefor | |
| JP5176248B2 (en) | Methods for detecting genetic mutations related to eggshell strength of chicken eggs | |
| JP2003529331A (en) | Modification of long QT syndrome genes KVLQT1 and SCN5A and method for detecting the same | |
| Salisu et al. | Molecular markers and their Potentials in Animal Breeding and Genetics | |
| AU2009275988B2 (en) | A genetic marker test for Brachyspina and fertility in cattle | |
| JP5717272B2 (en) | Vertin gene that controls the number of vertebrae in swine and use thereof | |
| AU2005202704A1 (en) | Identification of the gene and mutation for progressive rod-cone degeneration in dog and a method for testing same | |
| US20060166244A1 (en) | DNA markers for increased milk production in cattle | |
| JP2008526252A (en) | DNA markers for bovine growth | |
| KR101890350B1 (en) | SNP maker for predicting meat quality of pig and use thereof | |
| JPH1099085A (en) | Polymorphism of human mitochondrial dna | |
| KR102235340B1 (en) | SNP marker set for predicting growth traits of Korean native chicken and uses thereof | |
| RU2810183C1 (en) | Molecular genetic marker of “black crystal” color variation in american mink and method of identifying individual mink that is carrier of allele that causes formation of desired color variation | |
| JP2018529377A (en) | Method for identifying the presence of a foreign allele in a desired haplotype | |
| KR101823372B1 (en) | SNP Makers for Identification of WooriHeukDon Porcine and Method for Identifying WooriHeukDon Porcine using the same | |
| US6218106B1 (en) | Restriction fragment length polymorphism test for haplotyping domesticated fowl | |
| RU2722564C1 (en) | Molecular-genetic markers of colour variations of american mink and method of detecting individuals which are allele carriers, causing formation of desired colour variation | |
| US20060121472A1 (en) | Method for determining the allelic state of the 5'-end of the $g(a)s1- casein gene | |
| JP4776037B2 (en) | A method for assessing fat accumulation capacity in porcine muscle from genetic information | |
| Moradi et al. | Fine mapping of candidate regions associated with fat deposition in thin and fat tail sheep breeds suggests new insights into molecular aspects of fat tail selection | |
| EP3321374B1 (en) | Shar-pei auto inflammatory disease in shar-pei dogs | |
| KR101796160B1 (en) | SNP markers of DACT3 gene for prediction of pigs litter size and methods for selection of fecund pigs using the same | |
| KR101796167B1 (en) | SNP markers of MAP3K3 gene for prediction of pigs litter size and methods for selection of fecund pigs using the same | |
| Abdullah | Variants in the tyrosinase (TYR) gene are associated with coat color in the dromedary (Camelus dromedarius). | |
| AU2003226666B2 (en) | Method for identifying animals for milk production qualities by analyzing the polymorphism of the PIT-1 and kappa-casein genes |