RU2808002C2 - Химерный белок l1 папилломавируса - Google Patents

Химерный белок l1 папилломавируса Download PDF

Info

Publication number
RU2808002C2
RU2808002C2 RU2022102875A RU2022102875A RU2808002C2 RU 2808002 C2 RU2808002 C2 RU 2808002C2 RU 2022102875 A RU2022102875 A RU 2022102875A RU 2022102875 A RU2022102875 A RU 2022102875A RU 2808002 C2 RU2808002 C2 RU 2808002C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
protein
ser
pro
leu
thr
Prior art date
Application number
RU2022102875A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2022102875A (ru
Inventor
Лианзы ШИЕ
Чанксиа ЛУО
Вэй Чжан
Ксяойэн СУО
Лин ПАНГ
Пинг ХУ
Original Assignee
Синоселлтех Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Синоселлтех Лтд. filed Critical Синоселлтех Лтд.
Publication of RU2022102875A publication Critical patent/RU2022102875A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2808002C2 publication Critical patent/RU2808002C2/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая химерный белок L1 папилломавируса в качестве компонента вакцины против папилломавируса, вирусоподобную частицу папилломавируса для получения иммуногенной композиции, иммуногенную композицию для предотвращения заболеваний или инфекций, связанных с папилломавирусом, выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса, вектор, используемый для получения вирусоподобной частицы папилломавируса или иммуногенной композиции на базе нуклеиновой кислоты, бакуловирус, используемый для получения вирусоподобной частицы папилломавируса или иммуногенной композиции на базе нуклеиновой кислоты, клетку-хозяин для получения химерного белка L1 папилломавируса и вирусоподобной частицы папилломавируса и способ получения вирусоподобной частицы папилломавируса. Изобретение расширяет арсенал средств-компонентов вакцины против папилломавируса. 8 н. и 15 з.п. ф-лы, 25 ил., 28 табл., 62 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001] Настоящее изобретение относится к белку L1 папилломавируса (ПВЧ) и к кодирующему его полинуклеотиду, а также к вирусоподобным частицам ПВЧ и способу их получения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ OF НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Папилломавирус (PV) принадлежит к семейству Papillomaviridae и вызывает папилломы у человека, крупного рогатого скота, собак и кроликов. Один из его представителей, папилломавирус человека (ПВЧ), представляет собой безоболочечный ДНК-вирус.Геном этого вируса представляет собой двухцепочечную замкнутую кольцевую ДНК размером примерно 7,2-8 т.п.н. с 8 открытыми рамками считывания, которые можно разделить на три области в зависимости от их функций: (1) начальная область (Е), примерно 4,5 т.п.н., кодирующая белки E1, Е2, Е4-Е7, всего 6 неструктурных белков, связанных с репликацией, транскрипцией и трансформацией вируса; (2) конечная область (L), примерно 2,5 т.п.н., кодирующая основной капсидный белок L1 и минорный капсидный белок L2; (3) длинная регуляторная область (LCR), расположенная между концом L-области и началом Е-области, имеет длину примерно 800-900 п. н. и не кодирует какие-либо белки, выполняя функции регуляции репликации ДНК и экспрессии элементов.
[0003] Белки L1 и белки L2 синтезируются в конце инфекционного цикла ПВЧ. Белок L1 является основным белком капсида и имеет молекулярную массу 55-60 кДа. Белок L2 является минорным капсидным белком. 72 пентамера белка L1 образуют внешнюю оболочку икосаэдрической частицы ПВЧ (диаметром 45-55 нм), которая заключает в себе замкнутую кольцевую двухцепочечную ДНК. Белок L2 расположен на внутренней стороне белка LI (Structure of Small Virus-like Particles Assembled from the LI Protein of Human Papillomavirus 16, Chen, X.S., R. L.Garcea, Mol.Cell. 5(3):557-567, 2000).
[0004] ORF белка LI, наиболее консервативного гена в геноме ПВ, может использоваться для идентификации новых типов ПВ. Новый тип ПВ идентифицируют, если его полный геном клонирован и его последовательность ДНК ORF L1 отличается от ближайшего известного типа ПВ более чем на 10%. Гомологии с различиями от 2% до 10% определяются как разные подтипы, а различия менее 2% определяются как разные варианты одного и того же подтипа (Е.-М. de Villiers и др. / Virology 324 (2004) 17-27).
[0005] На поздних стадиях инфекции ПВЧ вновь синтезированные белки L1 в цитоплазме транспортируются в ядро терминально дифференцированного кератина, где вместе с белками L2 упаковывают реплицированную геномную ДНК ПВЧ с образованием инфекционных вирусов (Nelson, L.M, и др. 2002. Nuclear import strategies of high risk HPV16 LI major capsid protein. J. Biol. Chem. 277: 23958-23964). Это свидетельствует о том, что ядерный импорт белка L1 играет очень важную роль в инфицировании и продукции ПВЧ. Способность вируса проникать в ядро определяется сигналом ядерной локализации (СЯЛ) на С-конце белка ПВЧ L1, который характеризуется обилием в нем основных аминокислот (Garcia-Bustos, J., и др. 1991. Nuclear protein localization. Biochimica et Biophysica Acta 1071: 83-101).
[0006] 15 типов ПВЧ высокого риска (BP) могут приводить к раку шейки матки, ануса, полового члена, влагалища, вульвы и ротоглотки, среди которых ПВЧ-16 и ПВЧ-18 являются на сегодняшний день наиболее частыми причинами рака, составляя примерно 70% рака шейки матки, а остальные типы ВР-ПВЧ (типы 31,33, 35, 39,45, 51,52,56,58, 59, 68, 73 и 82) вызывают остальные заболевания. На ПВЧ-16 приходится примерно 95% случаев ПВЧ-положительного рака ротоглотки (РРГ). Персистирующие генотипы низкого риска ПВЧ-6 и ПВЧ-11 вызывают большинство аногенитальных бородавок и респираторных папиллом, но редко связаны с раком (Human papillomavirus in Cervical Cancer and Oropharyngeal Cancer: One Cause, Two Diseases Тага A. Bermanand John T. Schiller, PhD2 Cancer 2017;123:2219-29).
[0007] Белок LI может быть рекомбинантно экспрессирован поксвирусными, бакуловирусными или дрожжевыми системами, а затем он самостоятельно собирается с образованием вирусоподобных частиц (VLP), содержащих примерно 72 белка L1, подобных капсиду вируса. VLP не имеют обозначения. VLP индуцирует нейтрализующие антитела у привитых животных и защищает экспериментальных животных от последующего заражения инфекционными вирусами. Соответственно, VLP представляется отличным кандидатом для вакцин против папилломавируса (Structure of Small Virus-like Particles Assembled from the LI Protein of Human Papillomavirus 16 Chen, X.S., R. L. Garcea, Mol. Cell. 5(3):557-567, 2000).
[0008] CERVARIX® компании Glaxo, бивалентная рекомбинантная вакцина против ПВЧ, содержит рекомбинантный белок L1 ПВЧ тип 16 и рекомбинантный белок L1 ПВЧ тип 18. Белок L1 получают путем экспрессии векторной системы экспрессии рекомбинантного бакуловируса в клетках насекомых ночной бабочки (Trichoplusia ni). Белок L1 самостоятельно собирается в вирусоподобные частицы для профилактики рака шейки матки, цервикальной интраэпителиальной неоплазии 2 или 3 степени и аденокарциномы in situ, вызванной ПВЧ 16 и 18 типов, и цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 степени (онкогенной) у женщин в возрасте 9-25 лет (https://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/UCM18 6981.pdf).
[0009] GARDASIL® представляет собой четырехвалентную рекомбинантную вакцину против папилломавируса человека (типы 6, 11, 16и18)от Merck для профилактики рака шейки матки, остроконечных кондилом (condyloma acuminata) и предраковых или пролиферативных аномальных поражений, вызванных ПВЧ типов 6, 11, 16и 18у девочек и женщины в возрасте 9-26 лет; и для профилактики рака анального канала, остроконечных кондилом (condyloma acuminatum) и предраковых или аномалий развития, вызванных ПВЧ типов 6, 11, 16 и 18 у мальчиков и мужчин 9-26 лет (https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/vaccines/gardasil).
[0010] GARDASIL®9 представляет собой девятивалентную рекомбинантную вакцину против папилломавируса человека от Merck, которая содержит вирусоподобные частицы белка L1 ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 52 и 58, указанный белок L1 получают ферментацией Saccharomyces cerevisiae и он самостоятельно собирается в VLP. Ее применяют у девочек и женщин в возрасте 9-45 лет для профилактики рака шейки матки, рака вульвы, рака влагалища и рака анального канала, вызванных ПВЧ типов 16, 18, 31, 33, 45, 52 и 58, генитальных бородавок (остроконечных кондилом), вызванных ПВЧ типов 6 и 11, и предраковых или пролиферативных нарушений, вызванных ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 52 и 58; и у мальчиков и мужчин в возрасте 9-45 лет для профилактики рака анального канала, вызванного ПВЧ типов 16, 18, 31, 33, 45, 52 и 58, генитальных бородавок (остроконечных кондилом), вызванных ПВЧ типов 6 и 11 и предраковых состояний или аномалий развития, вызванных ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 52 и 58 (https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/vaccines/gardasil-9).
[0011] В инструкции для GARDASIL®9 отмечается, что ПВЧ типов 16 и 18 являются причиной примерно 70% случаев рака шейки матки, а остальные 20% случаев относятся к типам 31, 33, 45, 52 и 58, поэтому GARDASIL®9 предотвращает 90% рака шейки матки (https://www.fda.gov/ BiologicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm426445.htm).
[0012] Промышленное производство вирусоподобных частиц имеет решающее значение для разработки вакцины против ПВЧ. Общие системы для получения вирусоподобных частиц в основном подразделяются на эукариотические системы экспрессии и прокариотические системы экспрессии.
[0013] Обычно используемые эукариотические системы экспрессии включают системы экспрессии поксвирусов, системы экспрессии бакуловирусов насекомых и системы экспрессии дрожжей. Белок L1 ПВЧ, экспрессируемый в эукариотических экспрессионных системах, может спонтанно собираться в вирусоподобные частицы, так как его естественная конформация менее нарушена, но его выход невелик. Белок L1 ПВЧ, экспрессируемый в прокариотических системах экспрессии, в основном в системах экспрессии Е. coli, имеет высокие выходы, но в основном в форме телец включения, эта форма белка не может быть легко очищена, что усложняет производственный процесс.
[0014] Таким образом, по-прежнему существует потребность в получении высоких выходов вирусоподобных частиц ПВЧ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0015] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает химерный белок L1 папилломавируса, содержащий, в направлении от его N-конца к С-концу, а). N-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса первого типа, где указанный N-концевой фрагмент сохраняет иммуногенность белка L1 соответствующего типа папилломавируса человека; и б). С-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса второго типа, где указанный белок L1 папилломавируса второго типа имеет лучший уровень экспрессии и растворимость по сравнению с белками L1 других типов; при этом указанный химерный белок L1 папилломавируса имеет иммуногенность белка L1 папилломавируса первого типа.
[0016] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает вирусоподобную частицу папилломавируса, содержащую химерный белок L1 папилломавируса.
[0017] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает иммуногенную композицию для предотвращения заболеваний или инфекций, связанных с папилломавирусом, содержащую вирусоподобные частицы папилломавирусов, описанные ранее, и адъюванты.
[0018] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса.
[0019] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса.
[0020] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает бакуловирус, содержащий полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса.
[0021] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает клетку-хозяина, содержащую указанные полинуклеотиды, указанные векторы или указанные бакуловирусы, описанные ранее.
[0022] В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ получения вирусоподобных частиц папилломавируса, включающий выращивание клеток-хозяев, описанных ранее для экспрессии указанного химерного белка L1 папилломавируса и и сборки в вирусоподобные частицы; и очистку указанных вирусоподобных частиц папилломавируса.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0023] На Фиг. 1А показана экспрессия белка L1 ПВЧ 6 LI:33С.М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0024] На Фиг. 1В показана экспрессия белка L1 ПВЧ 11 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0025] На Фиг. 1С показана экспрессия белка L1 ПВЧ 16 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0026] На Фиг. 1D показана экспрессия белка L1 ПВЧ 18 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0027] На Фиг. 1Е показана экспрессия белка L1 ПВЧ 31 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0028] На Фиг. 1F показана экспрессия белка L1 ПВЧ 35 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0029] На Фиг. 1G показана экспрессия белка L1 ПВЧ 39 LI: 59С.М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0030] На Фиг. Ш показана экспрессия белка L1 ПВЧ 45 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0031] На Фиг. II показана экспрессия белка L1 ПВЧ 51 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток;
E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0032] На Фиг. 1J показана экспрессия белка L1 ПВЧ 52 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0033] На Фиг. 1К показана экспрессия белка L1 ПВЧ 56 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0034] На Фиг. 1L показана экспрессия белка L1 ПВЧ 58 L1:33C. М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
[0035] На Фиг. 2А показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 6 L1:33C.
[0036] На Фиг. 2В показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 11 L1:33С.
[0037] На Фиг. 2С показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 16 L1:33С.
[0038] На Фиг. 2D показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 18 L1:33С.
[0039] На Фиг. 2Е показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 31 L1:33С.
[0040] На Фиг. 2F показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ35L1:33С.
[0041] На Фиг. 2G показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 39 LI: 59С.
[0042] На Фиг. 2Н показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 45L1:33C.
[0043] На Фиг. 2I показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 51 L1:33C.
[0044] На Фиг. 2J показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 52L1:33С.
[0045] На Фиг. 2К показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ56L1:33С.
[0046] На Фиг. 2L показана трансмиссионная электронная микроскопия вирусоподобных частиц ПВЧ 58 L1:33C.
[0047] На Фиг. 3 показана экспрессия укороченного с С-конца ПВЧ 16L1 (1-474). М: маркер; L: лизат клеток; E-S: супернатант, собранный после центрифугирования лизата.
КОНКРЕТНЫЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0048] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает химерный белок L1 папилломавируса, содержащий, в направлении от его N-конца к С-концу: а). N-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса человека первого типа, где указанный N-концевой фрагмент сохраняет иммуногенность белка L1 соответствующего типа ПВЧ; и б). С-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса второго типа, где указанный белок L1 папилломавируса второго типа имеет лучший уровень экспрессии и растворимость по сравнению с белками L1 других типов; при этом указанный химерный белок L1 папилломавируса имеет иммуногенность белка L1 папилломавируса первого типа
[0049] В одном варианте реализации указанный N-концевой фрагмент представляет собой фрагмент, полученный посредством укорочения С-конца природной последовательности указанного белка L1 папилломавируса первого типа в положении любой аминокислоты внутри его участка α5, и фрагмент, имеющий по меньшей мере 98% идентичность с ним; указанный С-концевой фрагмент представляет собой фрагмент, полученный посредством укорочения N-конца природной последовательности белка L1 папилломавируса второго типа в положении любой аминокислоты внутри его участка α5 и функциональные варианты полученные в результате дальнейших мутаций, делеций и/или добавлений к фрагменту.
[0050] В другом варианте реализации указанный N-концевой фрагмент имеет по меньшей мере 98,5%, 99%, 99,5% или 100% идентичность с фрагментом, полученным посредством укорочения С-конца природной последовательности указанного белка L1 папилломавируса первого типа в положении любой аминокислоты внутри его участка α5.
[0051] В одном варианте реализации указанный С-концевой фрагмент включает одну или множество последовательностей ядерной локализации.
[0052] В одном варианте реализации said белок L1 папилломавируса представляет собой белок L1 ПВЧ.
[0053] В одном варианте реализации указанный белок L1 папилломавируса второго типа выбран из белков L1 ПВЧ типов 1, 2, 3, 4, 6, 7, 10, 11, 13, 16, 18, 22, 26, 28, 31, 32, 33, 35, 39, 42, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 60, 63, 66, 68, 73 или 82.
[0054] Предпочтительно, указанный белок L1 папилломавируса второго типа выбран из белков L1 ПВЧ типов 16, 28, 33, 59 или 68.
[0055] Более предпочтительно, указанный белок L1 папилломавируса второго типа выбран из белка L1 ПВЧ типа 33 или ПВЧ типа 59.
[0056] В одном варианте реализации указанный белок L1 папилломавируса второго типа представляет собой белок L1 ПВЧ типа 33, где указанный С-концевой фрагмент представлят собой SEQ ID No: 2; или фрагмент, имеющий длину ml аминокислот, предпочтительно фрагмент, включающий аминокислоты в положениях 1-ml последовательности SEQ ID No: 2; при этом ml представляет собой целое число в диапазоне 8-26; или указанный С-концевой фрагмент представляет собой SEQ ID No: 132; или фрагмент, имеющий длину т2 аминокислот, предпочтительно фрагмент, включающий аминокислоты в положениях 1-т2 последовательности SEQ ID No: 132; при этом т2 представляет собой целое число в диапазоне 13-31.
[0057] В одном варианте реализации указанный С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 33 содержит последовательность ядерной локализации. В другом варианте реализации указанный С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 33 содержит две последовательности ядерной локализации. В некоторых вариантах реализации химерный белок L1 папилломавируса включает один или множество С-концевых фрагментов белка L1 ПВЧ типа 33. Указанное множество С-концевых фрагментов белка L1 ПВЧ типа 33 могут быть одинаковыми или различгыми. В одном варианте реализации указанная последовательность аминокислот с аминокислотами No: 7-8 (KR) и указанная последовательность аминокислот с аминокислотами No: 20-23 (KRKK) последовательности SEQ ID No: 2 являются последовательностями ядерной локализации указанных С-концевых фрагментов белка L1 ПВЧ типа 33.
[0058] В другом варианте реализации указанный белок L1 папилломавируса второго типа представляет собой белок L1 ПВЧ типа 59, указанный С-концевой фрагмент представляет собой SEQ ID No: 13; или фрагмент, имеющий длину п аминокислот, предпочтительно включающий аминокислоты в положениях 1 -п последовательности SEQ ID No: 13; при этом п представляет собой целое число в диапазоне 16-38.
[0059] В одном варианте реализации указанный С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 59 содержит последовательность ядерной локализации. В другом варианте реализации указанный С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 59 содержит две последовательности ядерной локализации. В некоторых вариантах реализации химерный белок L1 папилломавируса включает один или множество С-концевых фрагментов белка L1 ПВЧ типа 59. Указанное множество С-концевых фрагментов белка L1 ПВЧ типа 59 могут быт одинаковыми или различными.
[0060] В одном варианте реализации указанный белок L1 папилломавируса первого типа выбран из белков L1 ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 35, 39,45, 51, 52, 56 или 58.
[0061] В одном варианте реализации С-конец указанного N-концевого фрагмента соединен с N-концом указанного С-концевого фрагмента напрямую или посредством линкера.
[0062] Указанный линкер не влияет на иммуногенность указанного N-концевого фрагмента и не влияет на уровень экспрессии или растворимость белка. В одном варианте реализации указанный N-концевой фрагмент и указанный С-концевой фрагмент соединены посредством линкера, содержащего 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот. В одном варианте реализации указаный линкер представляет собой искусственную последовательность. В другом варианте реализации указанный линкер представляет собой последовательность белка L1 ПВЧ, встречающуюся в природе. В другом варианте реализации указанный линкер может представлять собой часть последовательности белка L1 ПВЧ типа 33. В другом варианте реализации указанный линкер может представлять собой часть последовательности белка L1 ПВЧ типа 59.
[0063] В одном варианте реализации в положениях плюс или минус 4 аминокислота от точки соединения, когда С-конец указанного N-концевого фрагмент соединен с N-концом указанного С-концевого фрагмента, присутствует следующая постоянная последовательность аминокислот: RKFL; предпочтительно, в положениях плюс или минус 6 аминокислот от точки соединения, присутствует следующая постоянная последовательность аминокислот: LGRKFL.
[0064] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает вирусоподобные частицы папилломавируса, содержащие химерный белок L1 папилломавируса, описанный ранее. В одном варианте реализации указанные вирусоподобные частицы папилломавируса представляют собой вирусоподобные частицы ПВЧ, и в одном варианте реализации указанные вирусоподобные частицы ПВЧ представляют собой икосаэдр, содержащий 72 пентамера указанного химерного белка L1 ПВЧ. В одном варианте реализации указанная вирусоподобная частица ПВЧ содержит правильно образованные дисульфидные связи и, таким образом, имеет хорошую природную конформацию. В одном варианте реализации указанные ПВЧ вирусоподобные частицы собираются сами в системе экспрессии in vivo.
[0065] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает иммуногенную композицию для предотвращения заболевания или инфекции, связанной с папилломавирусом, содержащую вирусоподобные частицы папилломавируса, описанные ранее, и адъюванты. Упомянутое предотвращение может рассматриваться как лечение и указанные термины могут использоваться взаимозаменяемо.
[0066] В одном аспекте вышеописанную иммуногенную композицию вводят субъекту. В одном варианте реализации указанный субъект представляет собой человека. В одном варианте реализации указанный субъект представляет собой кролика. В одном варианте реализации указанный представляет собой собаку.
[0067] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса, описанный ранее. В одном варианте реализации полинуклеотид представляет собой полинуклеотид с кодонами, оптимизированными для различных систем экспрессии. В одном варианте реализации полинуклеотид представляет собой полинуклеотид с кодонами, оптимизированными для экспрессии в бакуловирусной системе насекомых.
[0068] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает вектор, содержащий полинуклеотид описанный ранее. В одном варианте реализации указанный вектор представляет собой бакуловирусный вектор. В одном варианте реализации указанны вектор может представлять собой вектор переноса для бакуловирусной системы экспрессии. В другом варианте реализации указанным вектором может быть вектор экспрессии для бакуловирусной системы экспрессии. В другом варианте реализации указанный вектор может представлять собой рекомбинантный вектор для бакуловирусной системы экспрессии.
[0069] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает бакуловирус, содержащий полинуклеотид, описанный ранее.
[0070] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает клетку-хозяина, содержащую полинуклеотид, вектор или бакуловирус, описанные ранее. В одном варианте реализации указанная клетка-хозяин представляет собой клетку насекомого, предпочтительно, указанная клетка насекомого выбрана из клеток Sf9, клеток Sf21, клеток Hi5 и клеток S2.
[0071] В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ получения вирусоподобных частиц папилломавируса, описанных ранее, включающий: выращивание клеток-хозяев, описанных ранее, для экспрессии указанного химерного белка L1 папилломавируса, который собирается в вирусоподобные частицы; и очистку указанных вирусоподобные частицы папилломавируса.
[0072] В одном варианте реализации указанные клетки-хозяева представляют собой клетки насекомого. В одном варианте реализации указаные клетки-хозяева представляют собой клетки Hi5. В одном варианте реализации химерные белки L1 папилломавируса представляют собой химерные белки L1 ПВЧ, которые сами собираются в вирусоподобные частицы ПВЧ в клетках-хозяевах. В одном варианте реализации указанные химерные белки L1 ПВЧ сами собираются в вирусоподобные частицы ПВЧ в клетках-хозяевах, имеющие форму икосаэдра, содержащенр 72 пентамера указанного химерного белка L1 ПВЧ. В одном варианте реализации вирусоподобные частицы ПВЧ содержат правильно образованные дисульфидные связи и, таким образом, имеют хорошую природную конформацию.
[0073] В одном варианте реализации очистку осуществляют с использованием катионообменной хроматографии. В одном варианте реализации очистку осуществляют с использованием сильной катионообменной хроматографии. В другом варианте реализации очистку осуществляют с использованием слабой катионообменной хроматографии. В одном варианте реализации очистку осуществляют с использованием комбинации нескольких катионообменных хроматографии. В одном варианте реализации очистку осуществляют с использованием сильной HS катионообменной хроматографии. В другом варианте реализации очистку осуществляют с использованием ММА ионообменной хроматографии. В другом варианте реализации очистку осуществляют с использованием HS-MMA двухстадийной хроматографии.
[0074] Белки L1 папилломавируса, экспрессированные в эукариотических системах экспрессии, могут сами собираться в вирусоподобные частицы, но низкий уровень их экспрессии делает их неподходящими для массового производства.
[0075] Указанные последовательности белков L1 каждого типа ПВЧ могут быть легко получены из https://www.uniprot.org. Для перечисленных типов ПВЧ, белок L1 может быть получен из различных штаммов, таким образом указанная последовательность аминокислот может быть представлена в множестве вариантов, любой вариант природной последовательности может применяться в настоящем изобретении. Вполне возможно, что указанная последовательность белка L1 ПВЧ конкретного типа, использованная в рамках концепции и дизайна настоящего изобретения, может отличаться от последовательности, использованной в последующих примерах, но такие различия не влияют на решения и выводы авторов настоящего изобретения.
[0076] Специалистами в данной области техники общепринято, что С-конец белка L1 не содержит основной нейтрализующий антигенный эпитоп и поэтому попытки, осуществленные для повышения экспрессии посредством укорочения С-конца белка L1 ПВЧ, например, в патенте США US 6361778 B1 компании Glaxo, в котором С-конец белка L1 ПВЧ16 укорочен на 1-34 аминокислот, предпочтительно 26 аминокислот, подтверждают, что выход VLP увеличивается в несколько раз, предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, и, в частности, от примерно 10 до 100 раз. Вдохновленные этим, авторы настоящего изобретения попытались укоротить С-конец белка L1 ПВЧ 16 на 31 аминокислоту и назвали укороченный белок L1 как белок L1 ПВЧ 16 (1-474). Указанный белок имеет высокий уровень экспрессии, но плохую растворимость, его трудно экстрагировать и очищать (см. Сравнительный Пример).
[0077] Плохая растворимость белка из-за этого укорочения может быть связана с делецией последовательности ядерной локализации, расположенной в С-конце, но настоящее изобретение не имеет отношения к этому предположению. В ходе исследований и производства авторы настоящего изобретения обнаружили, что белок L1 ПВЧ типа 16, белок L1 ПВЧ типа 28, белок L1 ПВЧ типа 33, белок L1 ПВЧ типа 59 и белок L1 ПВЧ типа 68 имели лучший уровень экспрессии и лучшие растворимости, чем белки L1 ПВЧ других типов. Вдохновленные этим открытием, авторы настоящего изобретения заменили С-конец белка L1 ПВЧ определенных типов, которые менее экстрагируемы или менее растворимы, на С-конец белка L1 определенных типов ПВЧ, имеющих лучший уровень экспрессии и лучшую растворимость. Таким образом авторы настоящего изобретения сконструировали химерный белок: содержащий, в направлении с N-конца к С-концу, N-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса первого типа (например, белок L1 ПВЧ), который обеспечивает иммуногенность папилломавируса первого типа (например, ПВЧ), и С-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса второго типа (например, белок L1 ПВЧ), который обеспечивает признаки лучшего уровня экспрессии и лучшей растворимости. Эти два фрагмента могут быть соединены напрямую или посредством линкера.
[0078] Длина N-концевого фрагмента белка L1 ПВЧ такова, что сохраняется иммуногенность белка L1 ПВЧ первого типа и обеспечивается образование VLP, как это происходит с природым белком. Следующие сообщения относятся к изучению эпитопов распространенных типов ПВЧ.
[0079] Sunanda Baidya и др. сообщили, что следующие эпитопы белка L1 48EEYDLQFIFQLCKJTLTА65, 45RHGEEYDLQFIFQLCKITLTA65, 63LPDPNKF69, 79PETQRLVWAC88, 36PVPGQYDA43, 77YNPETQRLVWAC88, 188DTGYGAMD195, 36PVPGQYDATK45, 45KQDIPKVSAYQYRVFRV61, 130RDNVSVDYKQTQLCI144 и 49YSRHVEEYDLQFIF62 могут применяться в качестве инструмента для конструирования вакцин ПВЧ 16 и 18 (см. Epitope design of protein LI for vaccine production against human papillomavirus types 16 and 18, Bioinformation 13(3): 86-93 March 2017, целиком включена в настоящее описание посредством ссылки).
[0080] Katharina Slupetzky и др. сообщили, что участки рядом с аа 282-286 и 351-355 ПВЧ-16 имеют отношение к нейтрализующим эпитопам и что последний является иммунодоминантным сайтом (см. Himeric viral-like particles of papillomaviruses expressing a foreign epitope on capsid surface loops, Journal of General Virology (2001), 82, 2799-2804, целиком включена в настоящее описание посредством ссылки).
[0081] Brooke Bishop и др. сконструировали три варианта белка L1 ПВЧ 11, 16, 18 и 35: делеция 9 аминокислот в N-конце, делеция α4 (соответствует остаткам аминокислот 404-436 ПВЧ 16) и делеция 31 аминокислот в С-конце, соответственно, и сообщили, что первые два не могли собираться в VLP, но это явление не наблюдалось в последнем варианте (Crystal Structures of Four Types of Human Papillomavirus LI Capsid Proteins. UNDERSTANDING THE SPECIFICITY OF NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODIES, The Journal of Biological Chemistry, 282, 31803-31811. целиком включена в настоящее описание посредством ссылки). Каждый из участков α-спирали, β-складчатого слоя и петли каждого типа белка L1 ПВЧ может быть довольно просто определен с помощью программного обеспечения для анализа последовательностей, обычно используемого в данной области техники. При этом, участки а-спирали содержат участок α1, участок α2, участок α3, участок α4 и участок α5.
[0082] Авторы настоящего изобретения осуществили выравнивания последовательностей белков L1 ПВЧ 14 типов (типы 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59), а затем выполнили предсказание вторичной структуры в соответствии с литературными данными, процитированными выше (Crystal Structures of Four Types of Human Papillomavirus LI Capsid Proteins. UNDERSTANDING THE SPECIFICITY OF NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODIES, The Journal of Biological Chemistry, 282,31803-31811), результаты которого показаны ниже, где часть между стрелками, указывающими вниз, соответствует областям, которые были удалены для получения вариантов, описанных в этой литературе.
[0083] В дополнение к способам, использованным авторами настоящего изобретения для выравнивания последовательностей, для предсказания может применяться программное обеспечение предсказания вторичной структуры белка, которое включает, но не ограничивается, следующим:
[0084] 1. JPred: http://www.compbio.dundee.ac.uk/jpred/index.html
[0085] 2. ProtPredicct: http://predictprotein.org
[0086] 3. PsiPred: http://bioinf.cs.ucl.ac.uk/psipred
[0087] 4. SCRATCH-ID: http://download.igb.uci.edu
[0088] 5. Nnpredict: http://www.cmpharm.ucsf.edu/~nomi/nnpredict
[0089] 6. Predictprotein: http://www.embl-heidelberg.de/predictprotein/SOPMA
http://www.ibcp.fr/predict.html
[0090] 7. SSPRED: http://www.embl-heidelberg.de/sspred/ssprd_info.html.
[0091] В одном варианте реализации настоящего изобретения, авторы настоящего изобретения определили длину N-концевого фрагмента белка L1 ПВЧ, полученного из белка первого типа, следующим образом: природную последовательность белка L1 укорачивали внутри его участка а5 и соседних с ним участках, при этом указанную последовательность от его N-конца до нового созданного С-конца внутри участка а5 сохраняли. Такая укороченная последовательность гарантирует, что она обладает иммуногенностью белка первого типа и способна образовывать VLP.
[0092] Указанный N-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ, полученный из белка первого типа, может быть модифицирован далее при условии, что он сохраняет иммуногенность белка первого типа и способен образовывать VLP.
[0093] Длину указанного С-концевого фрагмента белка L1 ПВЧ, полученного из белка второго типа, определяли следующим образом: природную последовательность белка L1 укорачивали внутри его участка об и соседних с ним участках, а указанную последовательность от нового созданного N-конца внутри его участка а5 до С-конца сохраняли. Такая укороченная последовательность не имеет основного нейтрализующего антигенного эпитопа, что не влияет на иммуногенность полученного химерного белка.
[0094] Указанный С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ, полученного из белка второго типа, далее может содержать мутации, делеции и/или добавки, предпочтительно сохраняя по меньшей мере одну из его последовательностей ядерной локализации. Yang и др. предсказали последовательности ядерной локализации ПВЧ 107 подтипов (Yang и др. Predicting the nuclear localization signals of 107 types of HPV Protein L1 by bioinformatic analysis. Geno. Prot. Bioinfo. Vol. 4 No. 1 2006, целиком включена в настоящее описание посредством ссылки). Последовательности ядерной локализации каждого типа белка L1 ПВЧ могут быть легко определены с помощью программного обеспечения для анализа последовательностей, обычно используемого в данной области техники.
[0095] Вышеописанное соединение N-концевого фрагмента с указанным С-концевым фрагментом расположено между новым созданным С-концом первого и новым созданным N-концом последнего. Это может быть непосредственное соединение или соединение посредством линкера. Место, где происходит соединение, определяется как точка начала координат, N-концевая сторона от начала координат считается минусовой, а указанная С-концевая сторона - плюсовой.
[0096] Далее показаны последовательности аминокислот 453-469 белка L1 ПВЧ6 и соответствующие последовательности белков L1 ПВЧ других типов. Эти последовательности перекрываются в их областях α5, соответственно. Можно видеть, что эти последовательности очень похожи. Цифры в скобках указывают на положение последних остатков аминокислот в перечисленных последовательностях, где для ПВЧ типа 45 дополнительно присутствуют 26 аминокислот на N-конце белка L1 некоторых штаммов ПВЧ типа 45, в то время как на N-конце белка L1 других штаммов ПВЧ типа 45 указанные дополнительные 26 аминокислот отсутствуют, поэтому номер указан как (478)+26.
[0097] ПВЧ6 ELDQYPLGRKFLLQSGY(469)
[0098] ПВЧ11 ELDQFPLGRKFLLQSGY(470)
[0099[ПВЧ16 DLDQFPLGRKFLLQAGL(474)
[00100] ПВЧ18 DLDQYPLGRKFLVQAGL(475)
[00101] ПВЧ31 DLDQFPLGRKFLLQAGY(475)
[00102] ПВЧ35 DLDQFPLGRKFLLQAGL(472)
[001031 ПВЧ39 ELDQFPLGRKFLLQARV (474)
[00104] ПВЧ45 DLDQYPLGRKFLVQAGL(478)+26
[00105] ПВЧ51 DLDQFALGRKFLLQVGV(474)
[00106] ПВЧ52 DLDQFPLGRKFLLQAGL(478)
[00107] ПВЧ56 DLDQFPLGRKFLMQLGTRS(474)
[00108] ПВЧ58 DLDQFPLGRKFLLQSGL(473)
[00109] ПВЧ33 DLDQFPLGRKFLLQAGL(473) KAKPKLKRAAPTSTRTSSAKRKKVKK, при этом KR в положениях 480-481 и KRKK положениях 493-496 представляют собой последовательности ядерной локализации.
[00110] ПВЧ59 DLDQFPLGRKFLLQLGA(475) RPKPTIGPRKRAAPAPTSTPSPKRVKRRKSSRK, при этом RKR в положениях 484-486 и KRVKRRK в положениях 498-504 представляют собой последовательности ядерной локализации.
[00111] В одном варианте реализации настоящего изобретения, авторы настоящего изобретения осуществили замены С-концов белков L1 между различными типами ПВЧ, воспользовавших преимуществом сходства последовательностей участка а5 и соседних участков между различными типами ПВЧ.
[00112] В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, авторы настоящего изобретения обнаружили, что белок L1 ПВЧ каждого типа содержит тетрапептид RKFL или, более предпочтительно, гексапептид LGRKFL, в похожих положениях. Авторы настоящего изобретения умело использовали эту высококонсервативную последовательность, чтобы найти точку соединения химерного белка в положении любой аминокислоты внутри этого олигопептида. С одной стороны, указанная последовательность, начиная с N-конца химерного белка, RKFL или LGRKFL идентична указанной последовательности N-концевого фрагмента, полученного из белка L1 ПВЧ первого типа, в то время как с другой стороны, указанная последовательность, начиная с RKFL или LGRKFL до С-конца химерного белка, идентична указанной последовательности указанного С-концевого фрагмента, полученного из белка L1 второго типа.
[00113[Полученный таким образом химерный белок сохраняет высокую степень сходства с природным белком L1 ПВЧ, и можно ожидать его хорошие характеристики при производстве и даже в последующих медицинских или профилактических процедурах.
[00114] Специалистам в данной области техники будет понятно, что существуют разные штаммы с разными природными последовательностями данного типа ПВЧ, а химерные белки, сконструированные с использованием разных штаммов, также подпадают под объем настоящего изобретения.
[00115] Для специалистов в данной области техники будет понятно, что из-за высокой степени сходства между белками L1 ПВЧ разных типов, если при конструировании химерного белка, N-концевой фрагмент, полученный из белка L1 первого типа ПВЧ удлиняется за счет большего количества отатков аминокислот в сторону С-конца, или указанный С-концевой фрагмент, полученный из белка L1 второго типа ПВЧ удлиняется за счет большего количества остатков аминокислот в сторону N-конца, также возможно образование химерных белков, которые структурно идентичны белкам согласно настоящему изобретению благодаря идентичным или сходным аминокислотам в соответствующих сайтах. Полученные таким образом химерные белки также входят в объем настоящего изобретения.
[00116] Специалистам в данной области техники будет понятно, что на основе химерных белков из вышеописанных вариантов осуществления путем мутаций, делеций и/или добавлений остатков аминокислот могут быть образованы варианты таких химерных белков. Такие варианты с большой вероятностью обладают иммуногенностью белка L1 ПВЧ первого типа, могут образовывать VLP и имеют высокий выход и растворимость. Полученные таким образом химерные белки также входят в объем настоящего изобретения.
[00117] Благоприятный эффект настоящего изобретения
[00118] Системы экспрессии, обычно используемые для получения вирусоподобных частиц, классифицируют на эукариотические системы экспрессии и прокариотические системы экспрессии. Белки L папилломавируса, экспрессированные в эукариотических системах экспрессии, могут самостоятельно собираться в вирусоподобные частицы, но имеют недостаток, прявляющийся в низком уровне экспрессии, который не подходит для массового производства. Белок L папилломавируса, экспрессированный в прокариотической системе экспрессии, требует осуществления процесса in vitro, в результате чего зачастую получают вирусоподобные частицы с нарушенной природной конформацией, а сампроцесс имеет низкий выход, что создает трудности для использования в промышленном масштабе.
[00119] В настоящем изобретении модифицирован С-конец белка L папилломавируса (например, папилломавируса человека), например, посредством его замены С-концевым фрагментом белка L1 ПВЧ типа 16, белка L1 ПВЧ типа 28, белка L1 ПВЧ типа 33, белка L1 ПВЧ типа 59 или белка L1 ПВЧ типа 68 так, что он может применяться в системах экспрессии (например, клетках-хозяевах, например, клетках насекомого) для улучшения уровня экспрессии и повышения растворимости белка L папилломавируса в системах экспрессии (например, клетках-хозяевах, например, клетках насекомого). Он может применяться для массового производства вакцин, таких как вакциниы против ПВЧ.
[00120] Авторы настоящего изобретения обнаружили, что белок L1 ПВЧ типа 16, белок L1 ПВЧ типа 28, белок L1 ПВЧ типа 33, белок L1 ПВЧ типа 59 и белок L1 ПВЧ типа 68 имеют повышенный уровень экспрессии и повышенную растворимость по сравнению с белками L1 ПВЧ других типов, и что повышенный уровень экспрессии и повышенная растворимость зависят от С-концевой последователльности белка L1 ПВЧ. Среди белков L1 ПВЧ 107 типов, большинство содержит последовательности ядерной локализации на их С-конце, и указанные С-концевые последовательности имеют определенное сходство.
[00121] Для белков L папилломавируса, которые в настоящее врем не экспрессируются, имеют очень низкий уровень экспрессии или нерастворимы после экспрессии, замена их С-концевого фрагмента С-концевым фрагментом белка L1 ПВЧ типа 16, белка L1 ПВЧ типа 28, белка L1 ПВЧ типа 33, белка L1 ПВЧ типа 59 или белка L1 ПВЧ типа 68 приводит к возможности высокой экспрессии, хорошей растворимости и последующей очистке. Эта стратегия может применяться для массового производства поливалентных вакцин (например, вакцин против ПВЧ), что позволяет обеспечить более комплексную защиту от широкого спектра папилломавирусных инфекций, особенно от ПВЧ.
[00122] Необходимо повысить уровень экспрессии и растворимость белка L1 ПВЧ в клетках насекомого для целей массового производства. Кроме того, вирусоподобные частицы, собранные из белка L ПВЧ, не обладают хорошей конформацией при получении в дрожжевых клетках вследствие невозможности образования правильных дисульфидных связей.
[00123] Для белков L1 ПВЧ, которые плохо экспрессируются и являются нерастворимыми при получении в клетках насекомого, значительное повышение уровня экспрессии и растворимости может быть получено после модификации его С-концевого фрагмента в С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 33 или 59, что позволяет использовать их для массового производства вакцин против ПВЧ.
[00124] Для белков L1 ПВЧ, которые лучше экспрессируются и лучше растворимы при получении в клетках насекомого по сравнению с белками L1 ПВЧ других типов, таких как белок L1 ПВЧ типа 16, белок L1 ПВЧ типа 28, белок L1 ПВЧ типа 68 и т.д., необходимо дальнейшее улучшение уровня экспрессии и растворимости для достижения характеристик для массового производства вакцин. В настоящем изобретении, например, после модификации С-концевого фрагмента белка L1 ПВЧ типа 16 в С-концевой фрагмент белка L1 ПВЧ типа 33 улучшаются уровень экспрессии и растворимость модифицированного химического белка L1 ПВЧ типа 16, что способствует массовому производству вакцин против ПВЧ.
[00125] Подводя итог, можно сказать, что химерный белок L1 ПВЧ показал гораздо более высокий уровень экспрессии и растворимости при получении в клетках насекомого по сравнению с немодифицированным белком L1 ПВЧ. Он может применяться в массовом производстве вакцин ПВЧ. Кроме того, химерный белок L1 ПВЧ может правильно образовывать дисульфидные связи, таким образом, собираясь в ПВЧ вирусоподобные частицы с хорошими конформациями в клетках насекомого. Это повышает иммуногенность вирусоподобных частиц ПВЧ и вызвает лучшие иммунные ответы.
[00126] Определения
[00127] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют значения, обычно понятные специалистам в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Для удобства понимания настоящего изобретения следующие термины цитируются ниже в их обычном значении.
[00128] Используемые здесь и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа, «другой» и «указанный» также включают обозначения объектов во множественном числе, если контекст явно не указывает иное. Если прямо не указано иное, термины «включают/содержат/имеют», «например» и т.д. предназначены для передачи включения, а не ограничения.
[00129] Термин «иммуногенность» относится к способности вещества, например, белка или пептида, вызывать иммунный ответ, т.е., способности запускать выработку антител, в частности, к способности запускать гуморально- или клеточно-опосредованный ответ.
[00130] Термин «антитело» относится к молекуле иммуноглобулина, которая связывает антиген. Антитела могут быть поликлональными смесями или моноклональными. Антитела могут представлять собой интактные иммуноглобулины природного происхождения или рекомбинантного происхождения или могут представлять собой иммунореактивные участки интактных иммуноглобулинов. Антитела может присутствовать в различных формах, включая: например, Fv, Fab', F(ab')2 и единичные цепи.
[00131] Термин «антигенность» относится к способности вещества, например, белка или пептида, запускать выработку антител, которые специфически связываются с ним.
[00132] Термин «эпитоп» включает любой кластер белковых детерминант, который специфически связывается с антителом или Т-клеточным рецептором. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп (например, боковых цепей аминокислот или Сахаров или их комбинаций) молекулы и обычно имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда.
[00133] Термины «подтип» или «тип» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения генетического варианта вируса, который позволяет иммунной системе распознавать его как антиген, отличающийся от типа к типу. Например, ПВЧ 16 иммунологически отличим от ПВЧ 33.
[00134] В настоящем тексте термин «белок L1 ПВЧ», термин «ПВЧ» и «папилломавирус человека» относятся к безоболочечным двухцепочечным ДНК-вирусам семейства папилломавирусов. Их геномы имеют кольцевую форму и имеют размер примерно 8 тысяч пар оснований. Большинство ПВЧ кодируют восемь мажорных белков, шесть в «ранней» области (Е1-Е2) и два в «поздней» области (L1 (мажорный капсидный белок) и L2 (минорный капсидный белок)). Выявлено более 120 типов ПВЧ и они пронумерованы (например, ПВЧ-16, ПВЧ-18 и т.д.).
[00135] Термин «ПВЧ» или «ПВЧ вирус» относится к папилломавирусам семейства Papillomaviridae, которые представляют собой ДНК-вирусы без оболочки с двухцепочечным замкнутым кольцевым геномом ДНК размером примерно 8 т.п.н., который обычно подразделяют на три области: (i) раннюю область (Е), которая содержит шесть открытых рамок считывания E1, Е2, Е4-Е7, кодирующие неструктурные белки, связанные с репликацией, транскрипцией и трансформацией вируса, а также открытые рамки считывания Е3 и Е8; (ii) поздняя область (L), содержащая рамки считывания, кодирующие основной капсидный белок L1 и минорный капсидный белок L2; и (iii) длинная регуляторная область (LCR), которая не кодирует никаких белков, но имеет точку начала репликации и множественные сайты связывания факторов транскрипции.
[00136] Термины «белок L1 ПВЧ» и «белок L2 ПВЧ» относятся к белкам, кодируемым поздней областью (L) гена ПВЧ и синтезируемым в конце инфекционного цикла ПВЧ. Белок L2 является минорным капсидным белком. 72 пентамера L1 образуют внешнюю оболочку икосаэдрических частиц ПВЧ, в которую заключена замкнутая кольцевая двухцепочечная микрохромосома ДНК.
[00137] Термин «вирусоподобная частица» относится к полой частице, содержащей один или множество структурных белков вируса, без вирусных нуклеиновых кислот.
[00138] «Псевдовирус ПВЧ» представляет собой идеальную модель для нейтрализации ПВЧ in vitro, за счет преимущества свойства инкапсуляции неспецифической нуклеиновой кислоты VLP ПВЧ, псевдовирус ПВЧ образуется путем сборки без ДНК или упаковки с введением в VLP экзогенной плазмиды, содержащей внутриклеточно экспрессируемые L1 и L2 ПВЧ.
[00139] «Анализ нейтрализации псевдовирусов» представляет собой способ оценки нейтрализующей активности антител. После инкубации сыворотки иммунизированных животных с определенным количеством псевдовируса и последующего инфицирования клеток количество клеток уменьшается, а количество нейтрализующих антител в сыворотке увеличивается, демонстрируя линейную отрицательную корреляцию в определенном диапазоне. Таким образом, нейтрализующую активность антител в сыворотке можно оценить путем измерения изменения количества клеток.
[00140] Термин «его фрагмент» или «его вариант» относится к делеции, вставке и/или замене нуклеотидов или аминокислотной последовательности настоящего изобретения. В измененной модификации фрагмент или вариант полипептида согласно настоящему изобретению способен вызывать гуморальный и/или клеточный иммунный ответ у животных или человека.
[00141] Термин «химерное» означает, что последовательность полипептидов или нуклеотидов, полученных из разных исходных молекул, соединены вместе -CO-NH- или 3', 5'-фосфодиэфирными связями, соответственно. В предпочтительном варианте они не отделены дополнительной линкерной последовательностью, а непосредственно примыкают друг к другу.
[00142] Термин «укорочение» относится к удалению одной или нескольких аминокислот с N- и/или С-конца полипептида или к удалению одной или нескольких аминокислот из внутренней части полипептида.
[00143] Термин «последовательность ядерной локализации» относится к последовательности аминокислот, которая направляет белок в ядро. В некоторых белках L1 ПВЧ два плотных кластера основных остатков (т.е., последовательности ядерной локализации) (например, один представляет собой KRKR, KRKK, KRKRK, KRKKRK, KRVKRRK и т.д., а другой представляет собой KR, RKR, KRK и т.д.) имют спейсерный участок из 10-14 аминокислот между ними. Вышеупомянутые кластеры основных остатков принадлежат к последовательности ядерной изоляции. В некоторых других белках L1 ПВЧ последовательность ядерной локализации представляет собой плотный кластер основных остатков, образованных аргининами и/или лизинами. Последовательности ядерной локализации включают примеры кластеров основных остатков, как описано выше, но не ограничиваются ими. Смотри Jun Yang и др., Predicting the Nuclear Localization Signals of 107 Types of HPV LI Proteins by Bioinformatic Analysis, Genomics, Proteomics & Bioinformatics, Volume 4, Issue 1, 2006, Pages 34-41, целиком включенную в настоящее описание посредством ссылки.
[00144] Термин «функциональный вариант» относится к варианту полипептида или белка, который сохраняет желаемую активность или характеристики после укорочения, мутации, делеций и/или добавления.
[00145] «Идентичность последовательностей» между двумя последовательностями полипептидов или нуклеиновых кислот указывает количество идентичных остатков между указанными последовательностями в процентах от общего числа остатков и рассчитывается на основе размера меньшей из сравниваемых молекул. При вычислении значения процента идентичности сравниваемые результаты последовательности сопоставляются таким образом, чтобы получить максимальное совпадение между указанными последовательностями, при этом вакантные позиции (если они есть) в совпадении разрешаются с помощью определенного алгоритма. Предпочтительные методы компьютерных программ для определения идентичности между двумя последовательностями включают пакеты программного обеспечения GCG, включая GAP, BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul и др., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410), но не ограничиваются ими. Вышеуказанные программы находятся в открытом доступе на National Center of Biotechnology Information (NCBI) и на других ресурсах. Широко известный алгоритм Смита-Уотермана также может быть использован для определения значения идентичности.
[00146] Некритические аминокислоты могут быть консервативно заменены, не влияя на нормальную функцию белка. Консервативная замена означает замену аминокислот химически или функционально сходными аминокислотами. Таблицы для консервативных замен, которые содержат аналогичные аминокислоты, хорошо известны в данной области техники. Например, в некоторых вариантах реализации группы аминокислот, представленные в Таблицах 1-3, считаются консервативными заменами друг друга.
[00150] Термин «аминокислоты» относится к двадцати наиболее часто встречающимся в природе аминокислотам. Встречающиеся в природе аминокислот включают аланин (Ala; А), аргинин (Arg; R), аспарагин (Asn; N), аспарагиновую кислоту (Asp; D), цистеин (Cys; С), глутаминовую кислоту (Glu; Е), глутамин (Gin; Q), глицин (Gly; г), гистидин (His; Н), изолейцин (lie; I), лейцин (Leu; L), лизин (Lys; К), метионин (Met; М), фенилаланин (Phe; F), пролин (Pro; Р), серии (Ser; S), треонин (Thr; Т), триптофан (Trp; W), тирозин (Туr; Y) и валин (Val; V).
[00151] Термин «адъювант» относится к соединению или смеси, которые усиливают иммунные ответы. В частности, вакцина может включать адъювант.Адъюванты для применения в настоящем изобретении могут включатьодну или множество следующих композиций: минералосодержащие адъювантные композиции, масляно-эмульсионные адъюванты, сапониновые адъювантные композиции, производные бактерий или микробов, но не ограничиваются ими.
[00152] Термин «вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной к пролиферации другой связанной с ней нуклеиновой кислоты. Термин включает векторы как самовоспроизводящиеся структуры нуклеиновой кислоты и как векторы, интегрированные в геном клеток-хозяев, в которые был введен указанный вектор. Определенные векторы способны направлять экспрессию нуклеиновых кислот, с которыми такие векторы оперативно связаны.
[00153] Термин «клетка-хозяин» относится к клетке, в которую введена экзогенная нуклеиновая кислота, а также к потомству такой клетки. Клетки-хозяева включают «трансформанты» (или «трансформированные клетки»), «трансфектанты» (или «трансфицированные клетки») или «инфектанты» (или «инфицированные клетки»), каждый из которых включает первично трансформированные, трансфицированные или инфицированные клетки и потомство, производное от них. Такое потомство может не быть идентичным родительским клеткам с точки зрения содержания нуклеиновой кислоты и возможных мутаций.
[00154] Вводимое количество представляет собой «профилактически эффективное количество» (здесь профилактика может рассматриваться как лечение и два этих понятия могут рассматриваться как взаимозаменяемые), которое является достаточным для проявления пользы для индивидуума.
[00155] Примеры
[00156] Пример 1. Конструирование химерных генов
[00157] Пример 1.1: Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ6, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00158] 1.1.1 Конструирование pFB-ПВЧ6 L1 в качестве матрицы
[00159] Ген L1 ПВЧ6 с сайтами расщепления КрnI и XbaI на двух концах синтезированной последовательности синтезировали с помощью Thermo Fisher [ранее Invitrogen (Shanghai) Trading Co.], его последовательность показана в SEQ ID NO: 5. Плазмиду pcDNA3-nB46-L1, содержащую указанную последовательность нуклеотидов, кодирующую аминокислоты 1-500 L1 ПВЧ6 получали посредством лигирования фрагмента синтезированного гена в вектор pcDNA3 (поставщик: Thermo Fisher) по сайтам расщепления KpnII и XbaI.
[00160] Полученную плазмиду pcDNA3-nB46-L1 подвергали двойному ферментативному расщеплению с помощью КрnI и XbaI, в результате чего получали фрагмент гена L1 ПВЧ6 (1-500). Затем указанный фрагмент лигировали с расщепленным двумя рестриктазами KpnI / XbaI вектором pFastBac™1 (поставщик: Thermo Fisher), в результате чего получали линейный вектор, содержащий фрагмент гена ПВЧ6 L1 (1-500), названный pFB-ПВЧ6 L1.
[00161] 1.1.2 Конструирование pFB-ПВЧ33 L1 в качестве матрицы
[00162] Ген L1 ПВЧ33 с сайтами расщепления KpnII и XbaI на двух концах синтезированной последовательности синтезировали с помощью Thermo Fisher [ранее Invitrogen (Shanghai) Trading Co.), его последовательность показана в SEQ ID NO: 6. Плазмиду pcDNA3-ПВЧ33-L1, содержащую указанную последовательность нуклеотидов, кодирующую аминокислоты 1-499 L1 ПВЧ33 получали посредством лигирования фрагмента синтезированного гена в вектор pcDNA3 (поставщик: Thermo Fisher) по сайтам расщепления KpnI и XbaI.
[00163] Плазмиду pcDNA3-nB433-L1 подвергали двойному ферментативному расщеплению с помощью KpnIl и XbaI, в результате чего получали фрагмент гена L1 ПВЧ33 (1-499). Затем указанный фрагмент лигировали в расщепленный двумя рестриктазами KpnI и XbaI вектор pFastBac™1 (поставщик: Thermo Fisher), в результате чего получали линейный вектор, содержащий фрагмент гена L1 ПВЧ33 (1-499), названный pFB-ПВЧ33 L1.
[00164] 1.1.3 Конструирование pFB-ПВЧ6 LL33C
[00165] Химерный ген L1 ПВЧ6 с С-концом, замещенным С-концом ПВЧ33 L1: сконструированную рекомбинантную плазмиду pFB-ПВЧ6 L1 использовали в качестве матрицы для амплификации фрагмента гена длиной 1426 п. о. с использованием праймеров F1 и R1, последовательность праймера F1 показана в SEQ ID No: 7, a R1 - в SEQ ID No: 8.
[00166] Этот фрагмент гена содержит фрагмент, кодирующий аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ6, 10 п. о. перекрывающихся с фрагментом гена, кодирующим аминокислоты 474-499 L1 ПВЧ33, и фрагмент сайта расщепления KpnI (GGTACAC), амплифицированная последовательность показана в SEQ ID No: 9.
[00167] Параметры ПЦР-амплификации: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин.; денатурация при 98°С в течение 10 s, отжиг при 69°С в течение 15 с, 1 КБ/1 мин при 72°С, в течение 30 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин; окончание при 16°С.
[00168] Рекомбинантную плазмиду pFB-ПВЧ33 L1 использовали в качестве матрицы для амплификации фрагмента гена длиной 101 п. о. с использованием праймеров F2 и R2, последовательность праймера F2 показана в SEQ ID No: 10, а последовательность праймера R2 показана в SEQ ID No: 11.
[00169] Этот фрагмент гена содержит фрагмент гена, кодирующий 26 С-концевых аминокислот (474-499) L1 ПВЧ33, 10 п. о., перекрывающихся с фрагментом гена, кодирующим С-концевые аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ6, и сайт расщепления XbaI (TACTAGA), амплифицированная последовательность показана в SEQ ID No: 12.
[00170] Параметры ПЦР-амплификации: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин.; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 69°С в течение 15 с, 1 КБ/1 мин при 72°С, в течение 30 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин.; окончание при 16°С.
[00171] Последовательности, лигированные ПЦР:
[00172] Лигирующими праймерами были F1 и R2, и фрагменты, амплифицированные с использованием указанных выше праймеров (фрагменты, амплифицированные с использованием F1 и R1, фрагменты, амплифицированные с использованием F2 и R2), использовали в качестве матриц.
[00173] Параметры ПЦР-лигирования: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 52°С в течение 15 с, 72°С в течение 1 КБ/1 мин, в течение 5 циклов; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 68°С в течение 15 с, 72°С в течение 1 КБ/1 мин, в течение 25 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин; окончание при 16°С.
[00174] Результатом была SEQ ID NO: 4, последовательность нуклеотидов, кодирующая аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ6 и 26 С-концевых аминокислот L1 ПВЧ33 (аа 474-499), ссайтами расщепления KpnI и ХbаI на двух концах (в дальнейшем упоминается как последовательность для лигирования).
[00175] Рекомбинантную плазмиду pFB-ПВЧ6 L1:33C получали двойным расщеплением вектора pFastBac™1 и фрагмента последовательности для лигирования с помощью ферментов KpnIl+XbaI и клонировали последовательность для лигирования в вектор pFastBac™1, в результате чего получали плазмиду pFB-ПВЧ6 L1:33С, которая представляет собой химерное gene с С-концом L1 ПВЧ6, замененным С-концом L1 ПВЧ33.
[00176] Пример 1.2. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ11, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00177] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 2 для соответствующих последовательностей.
[00178] Пример 1.3 Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ16, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00179] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 3 для соответствующих последовательностей.
[00180] Пример 1.4 Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ18, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00181] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 4 для соответствующих последовательностей.
[00182] Пример 1.5 Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ31, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00183] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 5 для соответствующих последовательностей.
[00184] Пример 1.6 Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ35, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00185] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 6 для соответствующих последовательностей.
[00186] Пример 1.7. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ39, замененным С-концом L1 ПВЧ59
[00187] 1.7.1 Конструирование pFB-nB439 L1, использованной в качестве матрицы
[00188] Ген L1 ПВЧ39 с сайтами расщепления KpnI и XbaI на двух концах синтезированной последовательности синтезировали с помощью Thermo Fisher [ранее Invitrogen (Shanghai) Trading Co.), его последовательность показана в SEQ ID NO: 83. Плазмиду pcDNA3-nB439-L1, содержаще, последовательность нуклеотидов, кодирующе. аминокислоте 1-505 L1 ПВЧ39 получали посредством лигирования фрагмента синтезированного гена в вектор pcDNA3 (поставщик: Thermo Fisher) по сайтам расщепления KpnIl и XbaI.
[00189] Плазмиду pcDNA3-nB439-L1 подвергали двойному расщеплению с помощью KpnIl и XbaI, в результате чего получали фрагмент гена L1 ПВЧ39 (1-505). Затем указанный фрагмент лигировали в вектор pFastBac™1, расщепленный двумя рестриктазами KpnI и XbaI, (поставщик: Thermo Fisher) в результате чего получали линейный вектор, содержащий фрагмент гена L1 ПВЧ39 (1-505), названный pFB-nB439 L1.
[00190] 1.7.2 Конструирование pFB-nB459L1 в качестве матрицы
[00191] Ген L1 ПВЧ59 синтезировали с помощью Thermo Fisher [ранее Invitrogen (Shanghai) Trading Co.), в результате чего получали плазмиду pcDNA3-ITB459-L1, содержащую указанная последовательность нуклеотидов, кодирующий аминокислоты 1-508 L1 ПВЧ59.
[00192] Плазмиду pcDNA3-nB459-L1 расщелпяли двумя рестриктазами KpnIl и XbaI, в результате чего получали фрагмент гена L1 ПВЧ59 (1-508). Затем указанный фрагмент лигировали в вектор pFastBac™1, расщепленный двумя рестриктазами KpnIl I XbaI, (поставщик: Thermo Fisher), в результате чего получали линейный вектор, содержащий фрагмент гена L1 ПВЧ59 (1-508), названный pFB-nB459L1.
[00193] 1.7.3. Конструирование pFB-nB439 L1:59C
[00194] Химерный ген с С-концом L1 ПВЧ39, замещенный С-концом L1 ПВЧ59: сконструированную рекомбинантную плазмиду pFB-TIB439 L1 использовали в качестве матрицы для амплификации фрагмента гена длиной 1428 п. о., используя прайм еры F1 и R1, последовательность праймера F1 показана в SEQ ID No: 85, а последовательность праймера R1 показана в SEQ ID No: 86.
[00195] Этот фрагмент содержит фрагмент, кодирующий аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ39, 12 п. о., перекрывающихся с фрагментом, кодирующим аминокислоты 471-508 L1 ГГВЧ59, и сегмент сайта расщепления KpnIl (GGTACAC), амплифицированная последовательность показана в SEQ ID No: 87.
[00196] Параметры ПЦР-амплификации: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин.; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 69°С в течение 15 с, 1 КБ/1 мин при 72°С, в течение 30 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин.; окончание при 16°С.
[00197] Рекомбинантную плазмиду pFB-nB459L1 использовали в качестве матрицы для амплификации фрагмента гена длиной 139 п. о., используя праймеры F2 и R2. Последовательность праймера F2 показана в SEQ ID No: 88, а последовательность праймера R2 показана в SEQ ID No: 89.
[00198] Этот фрагмент гена содержит фрагмент гена, кодирующий 38 С-концевых аминокислот (471-508) L1 ПВЧ59, 12 п. о., перекрывающихся с фрагментом гена, кодирующим аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ39, и сайт расщепления XbaI (TACTAGA), а амплифицированная последовательность показана в SEQ ID No: 90.
[00199] Параметры ПЦР-амплификации: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин.; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 69°С в течение 15 с, 1 КБ/1 мин при 72°С в течение 30 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин.; окончание при 16°С.[00200] Последовательность для лигирования ПЦР
[00201] Праймерами для лигирования были Fin R2, и фрагменты, амплифицированные с помощью указанных выше праймеров, (фрагменты, амплифицированные с помощью F1 и R1, и фрагменты, амплифицированные с помощью F2 и R2) использовали в качестве матриц.
[00202] Параметры ПЦР-лигирования: предварительная денатурация при 94°С в течение 5 мин; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 52°С в течение 15 с, 72°С в течение 1 КБ/1 мин, в течение 5 циклов; денатурация при 98°С в течение 10 с, отжиг при 68°С в течение 15 с, 72°С в течение 1 КБ/1 мин, в течение 25 циклов; удлинение при 72°С в течение 5 мин; окончание при 16°С.
[00203] Конечным результатом была последовательность SEQ ID NO: 82, последовательность нуклеотидов, кодирующая аминокислоты 1-469 L1 ПВЧ39 и 38 С-концевых аминокислот L1 ПВЧ59 (471-508) с сайтами расщепления рестриктаз KpnI и ХbaI на двух концах (в дальнейшем упоминается как последовательность для лигирования).
[00204] Рекомбинантную плазмиду pFB-IIB439 L1:59C получали двойным расщеплением вектора pFastBac™1 и фрагмента последовательности для лигирования с помощью ферментов KpnI+XbaI, и последовательность для лигирования клонировали в вектор pFastBac™1 с получением pFB-nB439 L1:59C, который представляет собой химерный ген с С-концом L1 ПВЧ39, замененным С-концом L1 ПВЧ59.
[00205] Пример 1.8. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ45, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00206] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 8 для соответствующих последовательностей.
[00207] Пример 1.9. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ51, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00208] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 9 для соответствующих последовательностей.
[00209] Пример 1.10. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ52, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00210] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 10 для соответствующих последовательностей.
[00211] Пример 1.11. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ56, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00212] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 11 для соответствующих последовательностей.
[00213] Пример 1.12. Конструирование химерного гена с С-концом L1 ПВЧ58, замененным С-концом L1 ПВЧ33
[00214] Экспреиментальные методы и процедуры были теми же самыми, что и в Примере 1.1, см. Приложение 12 для соответствующих последовательностей.
[00215] Пример 2. Упаковка рекомбинантного бакуловируса
[00216] Пример 2.1: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ6 L1:33С
[00217] Рекомбинантную плазмиду pFB-ПВЧ6 L1:33С, сконструированную в Примере 1, идентифицировали и секвенировали для проверки последовательности, и трансформировали в компетентные клетки бактерий DHlOBac (набор Bac-to-Bac®, приобретенный у Thermo Fisher), инкубировали при 37°С для пролиферации и выращивали на плоской чашке в виде културы, посеянной штрихом. Собирали белые колонии, выращивали в течение ночи. Бактериальную культуру собирали и рекомбинантную ДНК бакуловируса экстрагировали с помощью метода щелочного лизиса.
[00218] Рекомбинантную ДНК бакуловируса трансфицировали в клетки насекомого SF9 с использованием катионного реагента для трансфекции (приобретенный у Sino Biological) для упаковки в рекомбинантные вирулентные штаммы бакуловируса. Процедура была следующей:
[00219] а), клетки SF9 в логарифмической фазе роста инкубировали на чашках при плотности 0,6×106 клеток на чашку. Чашку с клетками SF9 оставляли выращиваться при комнатной температуре в течение 2 часов для прилипания клеток к стенкам чашки.
[00220] б). 20 мкл экстрагированонй ДНК Bacmid добавляли к 200 мкл среды Грейса (без сыворотки, без добавок, приобретенная у Gibico), смешивали и переворачивали 5 раз.
[00221] в). 25 мкл 0,2х TF1 (реагент для трансфекции, приобретенный у Sino Biological) добавляли по каплям к 200 мкл среды Грейса и аккуратно перемешивали.
[00222] г). Смешивали б) и в). Инкубировали при комнатной температуре в течение 15-45 мин.
[00223] д). В ходе инкубации ДНК с селлфектином (приобретенным у Sino Biological), клеточный супернатант удаляли и добавляли в чашку 0,8 мл среды Грейса (без сыворотки и без добавок).
[00224] е). Инкубированную смесь ДНК и реагента для трансфекции из г) добавляли в чашку по каплям.
[00225] ж). Инкубировали при 27°С в течение 2 часов.
[00226] з). Среду для выращивания клеток удаляли и добавляли 2,5 мл полной среды для выращивания на чашку (SCD6 SF+10% ФБС) (SCD6 SF приобретали у Sino Biological, ФБС приобретали у Gibico).
[00227] и). Выращивание осуществляли при 27°С в течение 7 дней и наблюдали, произошло ли инфицирование вирусом.
[00228] Супернатант вируса собирали после обнаружения видимых повреждений в трансфицированных клетках, обычно после 7-11 суток выращивания. Супернатант вируса, т.е., поколение Р1 штамма вируса ПВЧ6 L1:33С, асептически отбирали пипеткой. Клетки SF9 при плотности 2 × 106 клеток/мл инфицировали, используя поклоение Р1 штамма вируса ПВЧ6 L1:33C в соотношении 1:50 (об./об.), выращивали при 27°С в течение 3 суток и центрифугировали при 1000g±200g в течение 10 мин при комнатной температуре. Собранный супернатант вируса был поколением Р2 вируса и мог быть использован для инфицирования клеток-хозяев и продукции.
[00229] Пример 2.2: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ11 L1:33С
[00230] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00231] Пример 2.3: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ 16L1:33С
[00232] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00233] Пример 2.4: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ18 L1:33С
[00234] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00235] Пример 2.5: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ31 L1:33C
[00236] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00237] Пример 2.6: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ35 L1:33С
[00238] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00239] Пример 2.7: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ39 L1:59С
[00240] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00241] Пример 2.8: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ45 L1:33С
[00242] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00243] Пример 2.9: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВ451 L1:33C
[00244] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00245] Пример 2.10: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ52 L1:33С
[00246] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00247] Пример 2.11: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ56 L1:33C
[00248] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00249] Пример 2.12: Упаковка рекомбинантного бакуловируса ПВЧ58 L1:33C
[00250] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 2.1.
[00251] Пример 3. Экспрессия химерных белков
[00252] В Примере 3.1 показана экспрессия ПВЧ6 L1:33С
[00253] Клетки High Five инфицировали бакуловирусом, содержащим рекомбинантный ген ПВЧ6 L1:33С, полученный в Примере 2 в соотношении 1:200 (об./об.), и осадок клеток собирали центрифугированием при 1000g±100g при комнатной температуре. Клетки разрушали ультразвуком при низкой температуре в течение 3 мин, центрифугировали при >10,000g в течение 10 мин и супернатант собирали для ДСН-ПААГ. Дорожка 1: маркер (маркер представляет собой смесь 7 очищенных белков с молекулярными весами в диапазоне от 14,4 кДа до 116 кДа, полученных от Thermo Scientific); дорожка 2: лизат клеток; дорожка 3: супернатант лизата, собранный центрифугированием.
[00254] Результат показана на Фиг. 1А. Белок L1 ПВЧ6 L1:33С, полученный этим методом, имеет выход >100 мг/л, а размер белка составляет примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00255] В Примере 3.2 показана экспрессия и получение ПВЧ11 L1:33С
[00256] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00257] Результаты показаны на Фиг. 1 В. Белок L1 ПВЧ11 L1:33C, полученный этим способом, имел выход>100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00258] В Примере 3.3 показана экспрессия и получение ПВЧ 16L1:33C
[00259] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00260] Результаты показаны на Фиг. 1С. Белок L1ПВЧ 16L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00261] В Примере 3.4 показана экспрессия и получение ПВЧ18 L1:33С
[00262] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00263] Результаты показаны на Фиг. 1D. Белок L1 ПВЧ18 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00264] В Примере 3.5 показана экспрессия и получение ПВЧ31 L1:33C
[00265] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00266] Результаты показаны на Фиг. 1Е. Белок L1 ПВЧ31 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00267] В Примере 3.6 показана экспрессия и получение ПВЧ35 L1:33C
[00268] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00269] Результаты показаны на Фиг. 1F. Белок L1 ПВЧ35 L1:33С, полученный этим способом, имел выход>100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00270] В Примере 3.7 показана экспрессия и получение ПВЧ39 L1:59С
[00271] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00272] Результаты показаны на Фиг. 1G. Белок L1 ПВЧ39 L1:59C, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00273] В Примере 3.8 показана экспрессия и получение ПВЧ45 L1:33С
[00274] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00275] Результаты показаны на Фиг. 1Н. Белок L1 ПВЧ45 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00276] В Примере 3.9 показана экспрессия и получение ПВЧ51 L1:33С
[00277] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00278] Результаты показаны на Фиг. 1I. Белок L1 ПВЧ51 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00279] В Примере 3.10 показана экспрессия и получение ПВЧ52 L1:33С
[00280] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00281] Результаты показаны на Фиг. 1J. Белок L1 ПВЧ52 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00282] В Примере 3.11 показана экспрессия и получение ПВЧ56 L1:33С
[00283] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00284] Результаты показаны на Фиг. 1K. Белок L1 ПВЧ56 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00285] В Примере 3.12 показана экспрессия и получение ПВЧ58 L1:33С
[00286] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 3.1.
[00287] Результаты показаны на Фиг. 1L. Белок L1 ПВЧ58 L1:33С, полученный этим способом, имел выход >100 мг/л, а размер белка составлял примерно 56 кДа, и он может применяться для массового производства.
[00288] Пример 4. Получение очищенных вирусоподобных частиц
[00289] Пример 4.1: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ6 L1:33С
[00290] Вирусоподобные частицы ПВЧ6 L1:33С очищали двухстадийным хроматографическим методом, т.е., методом HS-MMA, супернатант, собранный в Примере, 3 очищали, и в конце концов получали вирусоподобные частицы высококй чистоты.
[00291] Первая стадия хроматографии:
[00292] Носитель: использовали сильный катионообменный носитель POROS® 50 HS, полученный от Thermo Fisher.
[00293] Объем носителя: объем носителя 150 мл, динейная скорость потока 30 мл/мин.
[00294] Условия хроматографии: уравновешивающий буфер (рН 6,2, концентрация солей -50 мМ фосфат, 0,5 MNaCl); промывочный буфер (концентрация солей - 50 мМ фосфат, 0,75 М NaCl, рН 6,2).
[00295] Хроматографическую колонку сначала уравновешивали 5 объемами колонки уравновешивающего буфера, а затем загружали образец. После загрузки колонку элюировали 5 объемами колонки уравновешивающего буфера и буфера для промывки, соответственно, для удаления примесей белка.
[00296] Условия элюции: использовали 50 мМ фосфатный буфер, содержащий 50 мМ аргинина гидрохлорид рН 6,2, концентрация элюирующей соли составляла 1,25 MNaCl.
[00297] Вторая стадия хроматографии.
[00298] Носитель: использовали ионообменный носитель ММА, произведенный Bestchrom (Shanghai) Biosciences Co., Ltd.
[00299] Объем носителья: объем носителя составлял 150 мл, линейная скорость потока составляла 30 мл/мин.
[00300] Условия хроматографии: уравновешивающий буфер: 50 мМ РВ, 1,25 М NaCl, рН 6,2. Хроматографическую колонку сначала уравновешивали 4 объемами колонки уравновешивающего буфера, а затем загружали образец. После загрузки примеси белка смывали 5 объемами колонки уравновешивающего буфера, а затем целевой белок элюировали буфером для элюции и собирали.
[00301] Условия элюции: 100 мМ NaAC, 150 мМ NaCl, 0,01% Твин 80, рН 4,5.
[00302] Пример 4.2: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ11 L1:33С
[00303] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00304] Пример 4.3: Очистка и получение вирусоподобных частиц ПВЧ 16L1:33С
[00305] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00306] Пример 4.4: Очистка и получение вирусоподобных частиц ПВЧ18 L1:33С
[00307] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00308] Пример 4.5: Очистка и получение вирусоподобных частиц ПВЧ31 L1:33C
[00309] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00310] Пример 4.6: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ35 L1:33С
[00311] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00312] Пример 4.7: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ39 L1:59С
[00313] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00314] Пример 4.8: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ45 L1:33С
[00315] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00316] Пример 4.9: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ51 L1:33С
[00317] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00318] Пример 4.10: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ52 L1:33C
[00319] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00320] Пример 4.11: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ56 L1:33C
[00321] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00322] Пример 4.12: Получение очищенных вирусоподобных частиц ПВЧ58 L1:33С
[00323] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 4.1.
[00324] Пример 5. Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц
[00325] Пример 5.1: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ6 L1:33С
[00326] 10 мкл образца брали для трансмиссионной электронной микроскопии. Образец фиксировали на медной сетке, покрытой углеродом, в течение 2 мин, остаток жидкости промакивали фильтровальной бумагой, а затем дважды красили фосфорно-вольфрамовой кислотой (Beijing Electron Microscopy China Technology Co., Ltd., концентрация 2%, pH 6,5) в течение 30 секунд каждый раз, остаток красящего раствора промакивали фильтровальной бумагой, оставляли образец сущиться, а затем проводили наблюдение с помощью трансмиссионной электронной микроскопии. Трансмиссионный электронный микроскоп (Brand: Hitachi, Model No.: H-7650) был 80KV с увеличением 80,000х.
[00327] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2А. Как можно увидеть на Фиг. 2А, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ6 LL33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00328] Пример 5.2: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ11 L1.33C
[00329] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00330] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2В. Как можно увидеть на Фиг. 2 В, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ11 L1:33С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера, со средним диаметром примерно 60 нм.
[00331] Пример 5.3: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ 16L1:33С
[00332] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00333] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2С. Как можно увидеть на Фиг. 2С, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ 16L1:33С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00334] Пример 5.4: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ18 L1:33С
[00335] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00336] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2D. Как можно увидеть на Фиг. 2D, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ18 L1:33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00337] Пример 5.5: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ31 L1:33С
[00338] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00339] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2Е. Как можно увидеть на Фиг. 2Е, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ31 L1:33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00340] Пример 5.6: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ35 L1:33C
[00341] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00342] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2F. Как можно увидеть на Фиг. 2F, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ35 L1:33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00343] Пример 5.7: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ39 L1:59С
[00344] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00345] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2G. Как можно увидеть на Фиг. 2G, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ39 L1:59С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00346] Пример 5.8: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ45 L1:33С
[00347] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00348] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2Н. Как можно увидеть на Фиг. 2Н, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ45 L1:33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00349] Пример 5.9: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ51 L1:33C
[00350] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00351] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 21. Как можно увидеть на Фиг. 21, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ51 L1:33C может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00352] Пример 5.10: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ52 L1:33C
[00353] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00354] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2J. Как можно увидеть на Фиг. 2J, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ52 L1:33С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00355] Пример 5.11: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ56 L1:33С
[00356] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00357] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2K. Как можно увидеть на Фиг. 2K, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ56 L1:33С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00358] Пример 5.12: Наблюдение морфологии вирусоподобных частиц ПВЧ58 L1:33С
[00359] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 5.1.
[00360] Изображение, полученное с помощью электронного микроскопа, показано на Фиг. 2L. Как можно увидеть на Фиг. 2L, указанный С-концевой модифицированный ПВЧ58 L1:33С может образовывать вирусоподобные частицы одного размера со средним диаметром примерно 60 нм.
[00361] Пример 6. Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц в животных
[00362] Пример 6.1: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ6 L1:33C в животных
[00363] 6.1.1 Моделирование клеток, нейтрализующих псевдовирус
[00364] Поскольку ПВЧ трудно культивировать in vitro и ПВЧ обладает сильной специфичностью к хозяину и его трудно репродуцировать в организмах, отличных от человека, подходящих моделей на животных нет.Поэтому существует необходимость в разработке подходящей и эффективной экспериментальной модели нейтрализации in vitro для оценки иммунной защиты вакцины.
[00365] Псевдовирус ПВЧ представляет собой идеальную модель ПВЧ по оценке нейтрализации in vitro: благодаря способности вирусоподобных частиц ПВЧ неспецифически инкапсулировать нуклеиновые кислоты, псевдовирус ПВЧ может быть образован из VLP, состоящих из L1 и L2 ПВЧ, экспрессированных в клетках, не одержащих ДНК или содержащих экзогенную плазмиду.
[00366] Иммуногенность образцов сыворотки иммунизированных животных анализировали с помощью теста по нейтрализации псевдовируса. Животные, иммунизированные вирусоподобными частицами ПВЧ6, могут производить нейтрализующие антитела против ПВЧ6, котрые могут нейтрализовать псевдовирус ПВЧ6. Когда сыворотку иммунизированных животных инкубируют с определенным количеством псевдовируса, а затем с инфицированными клетками, количество клеток, способных экспрессировать GFP и флюоресцировать снижается при повышении количества нейтрализующих антител в сыворотке, показывая линейную обратную корреляцию в определенном диапазоне, так что нейтрализующая активность антител в сыворотке может быть оценена путем измерения изменени количества клеток, экспрессирующих GFP.
[00367] Способ конструирования псевдовируса: плазмиду с последовательностью ПВЧ6 рСМУ3-3-ПВЧ6 L1+L2 (последовательность L1 была из Uniprot Р69898, последовательность L2 была из Uniprot Q84297) (приобретена у Sino Biological) и флуоресцентную плазмиду (PSEU-GFP Spark, приобретена у Sino Biological) одновременно трансфицировали в 293FT прилипшие клетки (приобретены у Thermo Fisher). Конкретные методы относятся к опубликованной литературе (Pastrana D V, Buck С В, Pang Y S, Thompson С D, Castle Р Е, FitzGerald Р С, Kjaer S К, Lowy D R, Schiller J Т. Reactivity of human sera in a sensitive, high-throughput pseudovirus-based papillomavirus neutralization assay for HPV16 and HPVI8. [J] Virology 2004,321:205-216.). Супернатант псевдовируса собирали, готовили аликвоты и хранили в морозильнике при -80°С.
[00368] 6.1.2 Оценка иммунопротекторных способностей вирусоподобных частиц ПВЧ6 L1:33С в животных
[00369] Процедуры иммунизации в мышах:
[00370] Вирусоподобные частицы ПВЧ6 L1:33C адсорбировали на адъювант фосфата алюминия, смешивали и использовали для иммунизации мышей в дозировке 0,15 мкг/200 мкл на мышь, в общем 10 мышей. Мышей иммунизировали разбавленными образцами на 0,7 и 21 сутки, контрольных мышей иммунизировали чистой сывороткой. Кровь собирали из глаза мышей на 28-е сутки и выделяли сыворотки для теста определения титров нейтрализации псевдовируса.
[00371] Тест по опрделению ЕС50 в мышах:
[00372] Сыворотку мышей инактивировали при 56°С в течение 30 минут, центрифугировали при 6000g 5 минут и собирали супернатант для теста. За 4-8 ч перед тестом инокулировали клетки 293FT при плотности 15,000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты и инкубировали при 37°С в СО2 инкубаторе с 5% СО2. Сыворотки мышей после иммунизации и контрольные сыворотки серийно разводили нейтрализующей средой, соответственно, затем смешивали с псевдовирусом ПВЧ6, полученным в Примере 6.1 в объемном соотношении 1:1, инкубировали при 2-8°С в течение 1 часа, затем добавляли 100 мкл на лунку смеси клеток 293FT, котрые заранее были инокулированы в течение 4-8 часов. Каждый образец имел повтор, использовали контрольную группу с чистой сывороткой, группу положительного контроля псевдовируса и группу отрицательного контроля псевдовируса. Клетки, инфицированные псевдовирусом, инкубировали при 37°С в СО2 инкубаторе 5% СО2 в течение 62-96 часов, флуоресценцию фотографировали и ее уровень обсчитывали с помощью анализатора ELISPOT (модель № S6 Universal-V Analyzer, Manufacturer: CTL). На основании ингибирования нейтрализации каждого образца сыворотки мыши рассчитывали максимальное разведение сыворотки при 50% ингибировании нейтрализации для каждого образца сыворотки мыши в соответствии с методом Рида-Мюнча, т.е., половину эффективности разведения ЕС50.
[00373] Результаты теста титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ6 в сыворотке показаны в Таблице 4.
[00375] Замечания:
[00376] 1. колчество животных, N=10.
[00377] 2. GMT (Среднее геометрическое титра): среднее геометрическое титра.
[00378] 3. SEM (среднеквадратическая ошибка среднего): стандартная ошибка.
[00379] Указанные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ6 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, обладают хорошей иммуногенностью, могут вызывать образование нейтрализующих антител с высокими тирами в животных и могут может применяться для производства вакцин для предотвращения инфекций ПВЧ.
[00380] Пример 6.2: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ11 L1:33С в животных
[00381] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р04012, а последовательность L2 была из Uniprot Р04013.
[00382] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ11 в сыворотке приведены в Таблице 5.
[00385] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ11 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00386] Пример 6.3: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ 16L1:33C в животных
[00387] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot РО3101, а последовательность L2 была из Uniprot РО3107.
[00388] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ16 в сыворотке приведены в Таблице 6.
[00391] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ 16L1:33C, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность и могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00392] Пример 6.4: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ18 L1:33С в животных
[00393] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Q80B70, а последовательность L2 была из Uniprot Р06793.
[00394] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ18 в сыворотке приведены в Таблице 7.
[00397] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ18 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00398] Пример 6.5: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ31 L1:33C в животных
[00399] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot PI7388, а последовательность L2 была из Uniprot Р17389.
[00400] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ31 в сыворотке приведены в Таблице 8.
[00403] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ31 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00404] Пример 6.6: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ35 L1:33С в животных
[00405] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р27232, а последовательность L2 была из Uniprot Р27234.
[00406] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ35 в сыворотке приведены в Таблице 9.
[00409] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ35 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00410] Пример 6.7: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ39 L1:59С в животных
[00411] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р24838, а последовательность L2 была из Uniprot Р24839.
[00412] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ39 в сыворотке приведены в Таблице 10.
[00415] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ39 LI: 59С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00416] Пример 6.8: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ45 L1:33С в животных
[00417] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р36741, а последовательность L2 была из Uniprot Р36761.
[00418] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ45 в сыворотке приведены в Таблице 11.
[00421] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ45 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00422] Пример 6.9: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ51 L1:33С в животных
[00423] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р26536, а последовательность L2 была из Uniprot Р26539.
[00424] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ51 в сыворотке приведены в Таблице 12.
[00427] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ51 L1:33C, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00428] Пример 6.10: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ52 L1:33C в животных
[00429] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Q05138, а последовательность L2 была из Uniprot F8S4U2.
[00430] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ52 в сыворотке приведены в Таблице 13.
[00433] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ52 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00434] Пример 6.11: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ56 L1:33С в животных
[00435] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р36743, а последовательность L2 была из Uniprot Р36765.
[00436] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ56 в сыворотке приведены в Таблице 14.
[00439] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ56 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00440] Пример 6.12: Оценка иммуногенности вирусоподобных частиц ПВЧ58 L1:33С в животных
[00441] Экспериментальные методы и процедуры были такими же, как и в Примере 6.1. Последовательность L1 была из Uniprot Р26535, а последовательность L2 была из Uniprot B6ZB12.
[00442] Результаты анализа титра нейтрализации псевдовируса ПВЧ58 в сыворотке приведены в Таблице 15.
[00445] Приведенные выше результаты оценки показывают, что вирусоподобные частицы ПВЧ58 L1:33С, полученные в рамках настоящего изобретения, имеют хорошую иммуногенность, могут приводить к образованию высоких титров нейтрализующих антител в животных, и могут применяться в вакцинах для предотвращения инфекции ПВЧ.
[00446] Сравнительный Пример 1. Показана экспрессия укороченного с С-конца L1 ПВЧ16 (аа 1-474)
[00447] Авторы настоящего изобретения попытались укоротить С-конец L1 ПВЧ16 на 31 аминокислоту и назвали его L1 ПВЧ16 (1-474) (SEQ ID NO: 27). Однако, в ходе исследования было обнаружено, что указанный укороченный белок L1 ПВЧ16 (1-474) облдал высокой экспрессией, но имел очень плохую растворимость, и его было очень трудно экстрагировать и очистить, подробные результатыэкспрессии и экстракции показаны на Фиг. 3.
[00448] Несмотря на то, что настоящее изобретение было подробно описано в виде иллюстраций и вариантов осуществления выше, оно предназначено для облегчения понимания. Для специалистов в данной области техники очевидно, что различные модификации и улучшения технических решений настоящего изобретения возможны для специалистов с обычными навыками в области данной техники без отклонения от сути или объема настоящего изобретения, охарактеризованного прилагаемой формулой изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
110 SinoCellTech Ltd.
120 ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК L1 ПАПИЛЛОМАВИРУСА
130 CIE200063PCT
160 156
170 BiSSAP 1.3.6
210 1
211 469
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 0601 Последовательность аминокислот aa 1-469 белка L1 ПВЧ типа 6
400 1
Met Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Val Pro Pro Pro Asn Pro
1 5 10 15
Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ala Tyr Val Thr Arg Thr Asn Ile
20 25 30
Phe Tyr His Ala Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro Tyr
35 40 45
Phe Ser Ile Lys Arg Ala Asn Lys Thr Val Val Pro Lys Val Ser Gly
50 55 60
Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Lys Val Val Leu Pro Asp Pro Asn Lys Phe
65 70 75 80
Ala Leu Pro Asp Ser Ser Leu Phe Asp Pro Thr Thr Gln Arg Leu Val
85 90 95
Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu Gly Val
100 105 110
Gly Val Ser Gly His Pro Phe Leu Asn Lys Tyr Asp Asp Val Glu Asn
115 120 125
Ser Gly Ser Gly Gly Asn Pro Gly Gln Asp Asn Arg Val Asn Val Gly
130 135 140
Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Met Val Gly Cys Ala Pro Pro
145 150 155 160
Leu Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Lys Gln Cys Thr Asn Thr Pro Val
165 170 175
Gln Ala Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Thr Ser Val Ile Gln
180 185 190
Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asn Phe Ala Asp
195 200 205
Leu Gln Thr Asn Lys Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile Cys Gly Thr Thr
210 215 220
Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ala Ala Asp Pro Tyr Gly Asp
225 230 235 240
Arg Leu Phe Phe Phe Leu Arg Lys Glu Gln Met Phe Ala Arg His Phe
245 250 255
Phe Asn Arg Ala Gly Glu Val Gly Glu Pro Val Pro Asp Thr Leu Ile
260 265 270
Ile Lys Gly Ser Gly Asn Arg Thr Ser Val Gly Ser Ser Ile Tyr Val
275 280 285
Asn Thr Pro Ser Gly Ser Leu Val Ser Ser Glu Ala Gln Leu Phe Asn
290 295 300
Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Lys Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys
305 310 315 320
Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr
325 330 335
Asn Met Thr Leu Cys Ala Ser Val Thr Thr Ser Ser Thr Tyr Thr Asn
340 345 350
Ser Asp Tyr Lys Glu Tyr Met Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln
355 360 365
Phe Ile Phe Gln Leu Cys Ser Ile Thr Leu Ser Ala Glu Val Met Ala
370 375 380
Tyr Ile His Thr Met Asn Pro Ser Val Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly
385 390 395 400
Leu Ser Pro Pro Pro Asn Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Tyr Val
405 410 415
Gln Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Pro Thr Pro Glu Lys Glu Lys
420 425 430
Pro Asp Pro Tyr Lys Asn Leu Ser Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu
435 440 445
Lys Phe Ser Ser Glu Leu Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Gln Ser Gly Tyr
465
210 2
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 0602 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 2
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 3
211 495
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 0603 Последовательность аминокислот химерного белка L1 HPV типа 6
400 3
Met Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Val Pro Pro Pro Asn Pro
1 5 10 15
Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ala Tyr Val Thr Arg Thr Asn Ile
20 25 30
Phe Tyr His Ala Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro Tyr
35 40 45
Phe Ser Ile Lys Arg Ala Asn Lys Thr Val Val Pro Lys Val Ser Gly
50 55 60
Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Lys Val Val Leu Pro Asp Pro Asn Lys Phe
65 70 75 80
Ala Leu Pro Asp Ser Ser Leu Phe Asp Pro Thr Thr Gln Arg Leu Val
85 90 95
Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu Gly Val
100 105 110
Gly Val Ser Gly His Pro Phe Leu Asn Lys Tyr Asp Asp Val Glu Asn
115 120 125
Ser Gly Ser Gly Gly Asn Pro Gly Gln Asp Asn Arg Val Asn Val Gly
130 135 140
Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Met Val Gly Cys Ala Pro Pro
145 150 155 160
Leu Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Lys Gln Cys Thr Asn Thr Pro Val
165 170 175
Gln Ala Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Thr Ser Val Ile Gln
180 185 190
Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asn Phe Ala Asp
195 200 205
Leu Gln Thr Asn Lys Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile Cys Gly Thr Thr
210 215 220
Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ala Ala Asp Pro Tyr Gly Asp
225 230 235 240
Arg Leu Phe Phe Phe Leu Arg Lys Glu Gln Met Phe Ala Arg His Phe
245 250 255
Phe Asn Arg Ala Gly Glu Val Gly Glu Pro Val Pro Asp Thr Leu Ile
260 265 270
Ile Lys Gly Ser Gly Asn Arg Thr Ser Val Gly Ser Ser Ile Tyr Val
275 280 285
Asn Thr Pro Ser Gly Ser Leu Val Ser Ser Glu Ala Gln Leu Phe Asn
290 295 300
Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Lys Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys
305 310 315 320
Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr
325 330 335
Asn Met Thr Leu Cys Ala Ser Val Thr Thr Ser Ser Thr Tyr Thr Asn
340 345 350
Ser Asp Tyr Lys Glu Tyr Met Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln
355 360 365
Phe Ile Phe Gln Leu Cys Ser Ile Thr Leu Ser Ala Glu Val Met Ala
370 375 380
Tyr Ile His Thr Met Asn Pro Ser Val Leu Glu Asp Trp Asn Phe Gly
385 390 395 400
Leu Ser Pro Pro Pro Asn Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Tyr Val
405 410 415
Gln Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Pro Thr Pro Glu Lys Glu Lys
420 425 430
Pro Asp Pro Tyr Lys Asn Leu Ser Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu
435 440 445
Lys Phe Ser Ser Glu Leu Asp Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Gln Ser Gly Tyr Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro
465 470 475 480
Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
485 490 495
210 4
211 1488
212 DNA
213 Искусственная последовательность
220
223 0604 Последовательность нуклеотидов химерного белка L1 ПВЧ типа 6
400 4
atgtggagac catctgacag cacagtctat gtgcctcctc caaaccctgt gagcaaggtg
60
gtggctacag atgcctatgt gaccaggacc aacatcttct accatgcctc ctccagcaga
120
ctgctggctg tgggacaccc atacttcagc atcaagaggg ctaacaagac agtggtgcca
180
aaggtgtctg gctaccaata cagggtgttc aaggtggtgc tgcctgaccc aaacaagttt
240
gccctgcctg actcctccct gtttgaccca accacccaga gactggtgtg ggcttgtact
300
ggattggagg tgggcagggg acaaccactg ggagtgggag tgtctggaca cccattcctg
360
aacaaatatg atgatgtgga gaactctggc tctggaggca accctggaca agacaacagg
420
gtgaatgtgg ggatggacta caagcagacc caactttgta tggtgggctg tgcccctcca
480
ctgggagaac actggggcaa gggcaagcag tgtaccaaca cacctgtcca ggctggagac
540
tgtcctccat tggaactgat tacctctgtg attcaggatg gagatatggt ggacacaggc
600
tttggagcta tgaactttgc tgacctccaa accaacaagt ctgatgtgcc aattgacatc
660
tgtggcacca cttgtaaata ccctgactac ctccaaatgg ctgctgaccc atatggagac
720
agactgttct tcttcctgag gaaggaacag atgtttgcca gacacttctt caacagggct
780
ggagaggtgg gagaacctgt gcctgacacc ctgattatca agggctctgg caacaggacc
840
tctgtgggct ccagcatcta tgtgaacaca ccatctggct ccctggtgtc ctctgaggct
900
caacttttca acaagccata ctggctccaa aaggctcaag gacacaacaa tggcatctgt
960
tggggcaacc aactttttgt gacagtggtg gacaccacca ggagcaccaa tatgaccctg
1020
tgtgcctctg tgaccacctc cagcacctac accaactctg actacaagga atatatgagg
1080
catgtggagg aatatgacct ccaattcatc ttccaacttt gtagcatcac cctgtctgct
1140
gaggtgatgg cttacatcca cacaatgaac ccatctgtgt tggaggactg gaactttgga
1200
ctgagccctc ctccaaatgg caccttggag gacacctaca gatatgtcca gagccaggct
1260
atcacttgtc agaagccaac acctgagaag gagaagcctg acccatacaa gaacctgtcc
1320
ttctgggagg tgaacctgaa agagaagttc tcctctgaac tggaccaata cccactgggc
1380
aggaagttcc tgctccaatc tggctacaaa gccaagccaa aactgaaaag ggctgcccca
1440
accagcacca ggacctcctc tgccaagagg aagaaggtga agaagtaa
1488
210 5
211 1522
212 DNA
213 Искусственная последовательность
220
223 0605 Синтетический ген L1 ПВЧ6
400 5
ctgggtacca tgtggagacc atctgacagc acagtctatg tgcctcctcc aaaccctgtg
60
agcaaggtgg tggctacaga tgcctatgtg accaggacca acatcttcta ccatgcctcc
120
tccagcagac tgctggctgt gggacaccca tacttcagca tcaagagggc taacaagaca
180
gtggtgccaa aggtgtctgg ctaccaatac agggtgttca aggtggtgct gcctgaccca
240
aacaagtttg ccctgcctga ctcctccctg tttgacccaa ccacccagag actggtgtgg
300
gcttgtactg gattggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggagt gtctggacac
360
ccattcctga acaaatatga tgatgtggag aactctggct ctggaggcaa ccctggacaa
420
gacaacaggg tgaatgtggg gatggactac aagcagaccc aactttgtat ggtgggctgt
480
gcccctccac tgggagaaca ctggggcaag ggcaagcagt gtaccaacac acctgtccag
540
gctggagact gtcctccatt ggaactgatt acctctgtga ttcaggatgg agatatggtg
600
gacacaggct ttggagctat gaactttgct gacctccaaa ccaacaagtc tgatgtgcca
660
attgacatct gtggcaccac ttgtaaatac cctgactacc tccaaatggc tgctgaccca
720
tatggagaca gactgttctt cttcctgagg aaggaacaga tgtttgccag acacttcttc
780
aacagggctg gagaggtggg agaacctgtg cctgacaccc tgattatcaa gggctctggc
840
aacaggacct ctgtgggctc cagcatctat gtgaacacac catctggctc cctggtgtcc
900
tctgaggctc aacttttcaa caagccatac tggctccaaa aggctcaagg acacaacaat
960
ggcatctgtt ggggcaacca actttttgtg acagtggtgg acaccaccag gagcaccaat
1020
atgaccctgt gtgcctctgt gaccacctcc agcacctaca ccaactctga ctacaaggaa
1080
tatatgaggc atgtggagga atatgacctc caattcatct tccaactttg tagcatcacc
1140
ctgtctgctg aggtgatggc ttacatccac acaatgaacc catctgtgtt ggaggactgg
1200
aactttggac tgagccctcc tccaaatggc accttggagg acacctacag atatgtccag
1260
agccaggcta tcacttgtca gaagccaaca cctgagaagg agaagcctga cccatacaag
1320
aacctgtcct tctgggaggt gaacctgaaa gagaagttct cctctgaact ggaccaatac
1380
ccactgggca ggaagttcct gctccaatct ggctacaggg gcaggtccag catcaggaca
1440
ggagtgaaga gacctgctgt gagcaaggca tctgctgccc caaagaggaa gagggctaag
1500
accaagaggt aaactcgagc tc
1522
210 6
211 1519
212 DNA
213 Искусственная последовательность
220
223 0606 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 6
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 7
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0607 ПВЧ6L1 F1
400 7
cttggtacca tgtggagacc atctgacagc acagt
35
210 8
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0608 ПВЧ6L1 R1
400 8
gcttggcttt gtagccagat tggagcagga acttcc
36
210 9
211 1426
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0609 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ6L1
400 9
cttggtacca tgtggagacc atctgacagc acagtctatg tgcctcctcc aaaccctgtg
60
agcaaggtgg tggctacaga tgcctatgtg accaggacca acatcttcta ccatgcctcc
120
tccagcagac tgctggctgt gggacaccca tacttcagca tcaagagggc taacaagaca
180
gtggtgccaa aggtgtctgg ctaccaatac agggtgttca aggtggtgct gcctgaccca
240
aacaagtttg ccctgcctga ctcctccctg tttgacccaa ccacccagag actggtgtgg
300
gcttgtactg gattggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggagt gtctggacac
360
ccattcctga acaaatatga tgatgtggag aactctggct ctggaggcaa ccctggacaa
420
gacaacaggg tgaatgtggg gatggactac aagcagaccc aactttgtat ggtgggctgt
480
gcccctccac tgggagaaca ctggggcaag ggcaagcagt gtaccaacac acctgtccag
540
gctggagact gtcctccatt ggaactgatt acctctgtga ttcaggatgg agatatggtg
600
gacacaggct ttggagctat gaactttgct gacctccaaa ccaacaagtc tgatgtgcca
660
attgacatct gtggcaccac ttgtaaatac cctgactacc tccaaatggc tgctgaccca
720
tatggagaca gactgttctt cttcctgagg aaggaacaga tgtttgccag acacttcttc
780
aacagggctg gagaggtggg agaacctgtg cctgacaccc tgattatcaa gggctctggc
840
aacaggacct ctgtgggctc cagcatctat gtgaacacac catctggctc cctggtgtcc
900
tctgaggctc aacttttcaa caagccatac tggctccaaa aggctcaagg acacaacaat
960
ggcatctgtt ggggcaacca actttttgtg acagtggtgg acaccaccag gagcaccaat
1020
atgaccctgt gtgcctctgt gaccacctcc agcacctaca ccaactctga ctacaaggaa
1080
tatatgaggc atgtggagga atatgacctc caattcatct tccaactttg tagcatcacc
1140
ctgtctgctg aggtgatggc ttacatccac acaatgaacc catctgtgtt ggaggactgg
1200
aactttggac tgagccctcc tccaaatggc accttggagg acacctacag atatgtccag
1260
agccaggcta tcacttgtca gaagccaaca cctgagaagg agaagcctga cccatacaag
1320
aacctgtcct tctgggaggt gaacctgaaa gagaagttct cctctgaact ggaccaatac
1380
ccactgggca ggaagttcct gctccaatct ggctacaaag ccaagc
1426
210 10
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0610 ПВЧ6L1 F2
400 10
atctggctac aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 11
211 37
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0611 ПВЧ6L1 R2
400 11
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttggc
37
210 12
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 0612 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ6L1
400 12
atctggctac aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 13
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 0613 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 13
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 14
211 470
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1101 Последовательность аминокислот aa 1-470 белка L1 ПВЧ типа 11
400 14
Met Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Val Pro Pro Pro Asn Pro
1 5 10 15
Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ala Tyr Val Lys Arg Thr Asn Ile
20 25 30
Phe Tyr His Ala Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro Tyr
35 40 45
Tyr Ser Ile Lys Lys Val Asn Lys Thr Val Val Pro Lys Val Ser Gly
50 55 60
Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Lys Val Val Leu Pro Asp Pro Asn Lys Phe
65 70 75 80
Ala Leu Pro Asp Ser Ser Leu Phe Asp Pro Thr Thr Gln Arg Leu Val
85 90 95
Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu Gly Val
100 105 110
Gly Val Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Tyr Asp Asp Val Glu Asn
115 120 125
Ser Gly Gly Tyr Gly Gly Asn Pro Gly Gln Asp Asn Arg Val Asn Val
130 135 140
Gly Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Met Val Gly Cys Ala Pro
145 150 155 160
Pro Leu Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr Gln Cys Ser Asn Thr Ser
165 170 175
Val Gln Asn Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Thr Ser Val Ile
180 185 190
Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asn Phe Ala
195 200 205
Asp Leu Gln Thr Asn Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile Cys Gly Thr
210 215 220
Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ala Ala Asp Pro Tyr Gly
225 230 235 240
Asp Arg Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Lys Glu Gln Met Phe Ala Arg His
245 250 255
Phe Phe Asn Arg Ala Gly Thr Val Gly Glu Pro Val Pro Asp Asp Leu
260 265 270
Leu Val Lys Gly Gly Asn Asn Arg Ser Ser Val Ala Ser Ser Ile Tyr
275 280 285
Val His Thr Pro Ser Gly Ser Leu Val Ser Ser Glu Ala Gln Leu Phe
290 295 300
Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Lys Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile
305 310 315 320
Cys Trp Gly Asn His Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser
325 330 335
Thr Asn Met Thr Leu Cys Ala Ser Val Ser Lys Ser Ala Thr Tyr Thr
340 345 350
Asn Ser Asp Tyr Lys Glu Tyr Met Arg His Val Glu Glu Phe Asp Leu
355 360 365
Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Ser Ile Thr Leu Ser Ala Glu Val Met
370 375 380
Ala Tyr Ile His Thr Met Asn Pro Ser Val Leu Glu Asp Trp Asn Phe
385 390 395 400
Gly Leu Ser Pro Pro Pro Asn Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Tyr
405 410 415
Val Gln Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Pro Thr Pro Glu Lys Glu
420 425 430
Lys Gln Asp Pro Tyr Lys Asp Met Ser Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys
435 440 445
Glu Lys Phe Ser Ser Glu Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe
450 455 460
Leu Leu Gln Ser Gly Tyr
465 470
210 15
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1102 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 15
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 16
211 496
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 1103 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
11
400 16
Met Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Val Pro Pro Pro Asn Pro
1 5 10 15
Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ala Tyr Val Lys Arg Thr Asn Ile
20 25 30
Phe Tyr His Ala Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro Tyr
35 40 45
Tyr Ser Ile Lys Lys Val Asn Lys Thr Val Val Pro Lys Val Ser Gly
50 55 60
Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Lys Val Val Leu Pro Asp Pro Asn Lys Phe
65 70 75 80
Ala Leu Pro Asp Ser Ser Leu Phe Asp Pro Thr Thr Gln Arg Leu Val
85 90 95
Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu Gly Val
100 105 110
Gly Val Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Tyr Asp Asp Val Glu Asn
115 120 125
Ser Gly Gly Tyr Gly Gly Asn Pro Gly Gln Asp Asn Arg Val Asn Val
130 135 140
Gly Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Met Val Gly Cys Ala Pro
145 150 155 160
Pro Leu Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr Gln Cys Ser Asn Thr Ser
165 170 175
Val Gln Asn Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Thr Ser Val Ile
180 185 190
Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asn Phe Ala
195 200 205
Asp Leu Gln Thr Asn Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile Cys Gly Thr
210 215 220
Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ala Ala Asp Pro Tyr Gly
225 230 235 240
Asp Arg Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Lys Glu Gln Met Phe Ala Arg His
245 250 255
Phe Phe Asn Arg Ala Gly Thr Val Gly Glu Pro Val Pro Asp Asp Leu
260 265 270
Leu Val Lys Gly Gly Asn Asn Arg Ser Ser Val Ala Ser Ser Ile Tyr
275 280 285
Val His Thr Pro Ser Gly Ser Leu Val Ser Ser Glu Ala Gln Leu Phe
290 295 300
Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Lys Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile
305 310 315 320
Cys Trp Gly Asn His Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser
325 330 335
Thr Asn Met Thr Leu Cys Ala Ser Val Ser Lys Ser Ala Thr Tyr Thr
340 345 350
Asn Ser Asp Tyr Lys Glu Tyr Met Arg His Val Glu Glu Phe Asp Leu
355 360 365
Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Ser Ile Thr Leu Ser Ala Glu Val Met
370 375 380
Ala Tyr Ile His Thr Met Asn Pro Ser Val Leu Glu Asp Trp Asn Phe
385 390 395 400
Gly Leu Ser Pro Pro Pro Asn Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Tyr
405 410 415
Val Gln Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Pro Thr Pro Glu Lys Glu
420 425 430
Lys Gln Asp Pro Tyr Lys Asp Met Ser Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys
435 440 445
Glu Lys Phe Ser Ser Glu Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe
450 455 460
Leu Leu Gln Ser Gly Tyr Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala
465 470 475 480
Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
485 490 495
210 17
211 1492
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1104 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 11
400 17
atgtggagac catctgacag cacagtctat gtgcctcctc caaaccctgt gagcaaggtg
60
gtggctacag atgcctatgt gaagaggacc aacatcttct accatgcctc ctccagcaga
120
ctgctggctg tgggacaccc atactacagc atcaagaagg tgaacaagac agtggtgcca
180
aaggtgtctg gctaccaata cagggtgttc aaggtggtgc tgcctgaccc aaacaagttt
240
gccctgcctg actcctccct gtttgaccca accacccaga gactggtgtg ggcttgtact
300
ggattggagg tgggcagggg acaaccactg ggagtgggag tgtctggaca cccactgctg
360
aacaaatatg atgatgtgga gaactctgga ggctatggag gcaaccctgg acaagacaac
420
agggtgaatg tggggatgga ctacaagcag acccaacttt gtatggtggg ctgtgcccct
480
ccactgggag aacactgggg caagggcacc cagtgtagca acacctctgt ccagaatgga
540
gactgtcctc cattggaact gattacctct gtgattcagg atggagatat ggtggacaca
600
ggctttggag ctatgaactt tgctgacctc caaaccaaca agtctgatgt gccactggac
660
atctgtggca cagtgtgtaa ataccctgac tacctccaaa tggctgctga cccatatgga
720
gacagactgt tcttctacct gaggaaggaa cagatgtttg ccagacactt cttcaacagg
780
gctggcacag tgggagaacc tgtgcctgat gacctgctgg tgaagggagg caacaacagg
840
tcctctgtgg catccagcat ctatgtgcat acaccatctg gctccctggt gtcctctgag
900
gctcaacttt tcaacaagcc atactggctc caaaaggctc aaggacacaa caatggcatc
960
tgttggggca accacctgtt tgtgacagtg gtggacacca ccaggagcac caatatgacc
1020
ctgtgtgcct ctgtgagcaa gtctgccacc tacaccaact ctgactacaa ggaatatatg
1080
aggcatgtgg aggagtttga cctccaattc atcttccaac tttgtagcat caccctgtct
1140
gctgaggtga tggcttacat ccacacaatg aacccatctg tgttggagga ctggaacttt
1200
ggactgagcc ctcctccaaa tggcaccttg gaggacacct acagatatgt ccagagccag
1260
gctatcactt gtcagaagcc aacacctgag aaggagaagc aggacccata caaggatatg
1320
agtttctggg aggtgaacct gaaagagaag ttctcctctg aactggacca gtttccactg
1380
ggcaggaagt tcctgctcca atctggctac aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc
1440
ccaaccagca ccaggacctc ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aa
1492
210 18
211 1525
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1105 Синтетический ген L1 ПВЧ11
400 18
ctgggtacca tgtggagacc atctgacagc acagtctatg tgcctcctcc aaaccctgtg
60
agcaaggtgg tggctacaga tgcctatgtg aagaggacca acatcttcta ccatgcctcc
120
tccagcagac tgctggctgt gggacaccca tactacagca tcaagaaggt gaacaagaca
180
gtggtgccaa aggtgtctgg ctaccaatac agggtgttca aggtggtgct gcctgaccca
240
aacaagtttg ccctgcctga ctcctccctg tttgacccaa ccacccagag actggtgtgg
300
gcttgtactg gattggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggagt gtctggacac
360
ccactgctga acaaatatga tgatgtggag aactctggag gctatggagg caaccctgga
420
caagacaaca gggtgaatgt ggggatggac tacaagcaga cccaactttg tatggtgggc
480
tgtgcccctc cactgggaga acactggggc aagggcaccc agtgtagcaa cacctctgtc
540
cagaatggag actgtcctcc attggaactg attacctctg tgattcagga tggagatatg
600
gtggacacag gctttggagc tatgaacttt gctgacctcc aaaccaacaa gtctgatgtg
660
ccactggaca tctgtggcac agtgtgtaaa taccctgact acctccaaat ggctgctgac
720
ccatatggag acagactgtt cttctacctg aggaaggaac agatgtttgc cagacacttc
780
ttcaacaggg ctggcacagt gggagaacct gtgcctgatg acctgctggt gaagggaggc
840
aacaacaggt cctctgtggc atccagcatc tatgtgcata caccatctgg ctccctggtg
900
tcctctgagg ctcaactttt caacaagcca tactggctcc aaaaggctca aggacacaac
960
aatggcatct gttggggcaa ccacctgttt gtgacagtgg tggacaccac caggagcacc
1020
aatatgaccc tgtgtgcctc tgtgagcaag tctgccacct acaccaactc tgactacaag
1080
gaatatatga ggcatgtgga ggagtttgac ctccaattca tcttccaact ttgtagcatc
1140
accctgtctg ctgaggtgat ggcttacatc cacacaatga acccatctgt gttggaggac
1200
tggaactttg gactgagccc tcctccaaat ggcaccttgg aggacaccta cagatatgtc
1260
cagagccagg ctatcacttg tcagaagcca acacctgaga aggagaagca ggacccatac
1320
aaggatatga gtttctggga ggtgaacctg aaagagaagt tctcctctga actggaccag
1380
tttccactgg gcaggaagtt cctgctccaa tctggctaca ggggcaggac ctctgccagg
1440
acaggcatca agagacctgc tgtgagcaag ccaagcacag ccccaaagag gaagaggacc
1500
aagaccaaga agtaaactcg agctc
1525
210 19
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1106 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 19
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 20
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1107 ПВЧ11L1 F1
400 20
cttggtacca tgtggagacc atctgacagc acagt
35
210 21
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1108 ПВЧ11L1 R1
400 21
gcttggcttt gtagccagat tggagcagga acttcc
36
210 22
211 1429
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1109 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ11L1
400 22
cttggtacca tgtggagacc atctgacagc acagtctatg tgcctcctcc aaaccctgtg
60
agcaaggtgg tggctacaga tgcctatgtg aagaggacca acatcttcta ccatgcctcc
120
tccagcagac tgctggctgt gggacaccca tactacagca tcaagaaggt gaacaagaca
180
gtggtgccaa aggtgtctgg ctaccaatac agggtgttca aggtggtgct gcctgaccca
240
aacaagtttg ccctgcctga ctcctccctg tttgacccaa ccacccagag actggtgtgg
300
gcttgtactg gattggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggagt gtctggacac
360
ccactgctga acaaatatga tgatgtggag aactctggag gctatggagg caaccctgga
420
caagacaaca gggtgaatgt ggggatggac tacaagcaga cccaactttg tatggtgggc
480
tgtgcccctc cactgggaga acactggggc aagggcaccc agtgtagcaa cacctctgtc
540
cagaatggag actgtcctcc attggaactg attacctctg tgattcagga tggagatatg
600
gtggacacag gctttggagc tatgaacttt gctgacctcc aaaccaacaa gtctgatgtg
660
ccactggaca tctgtggcac agtgtgtaaa taccctgact acctccaaat ggctgctgac
720
ccatatggag acagactgtt cttctacctg aggaaggaac agatgtttgc cagacacttc
780
ttcaacaggg ctggcacagt gggagaacct gtgcctgatg acctgctggt gaagggaggc
840
aacaacaggt cctctgtggc atccagcatc tatgtgcata caccatctgg ctccctggtg
900
tcctctgagg ctcaactttt caacaagcca tactggctcc aaaaggctca aggacacaac
960
aatggcatct gttggggcaa ccacctgttt gtgacagtgg tggacaccac caggagcacc
1020
aatatgaccc tgtgtgcctc tgtgagcaag tctgccacct acaccaactc tgactacaag
1080
gaatatatga ggcatgtgga ggagtttgac ctccaattca tcttccaact ttgtagcatc
1140
accctgtctg ctgaggtgat ggcttacatc cacacaatga acccatctgt gttggaggac
1200
tggaactttg gactgagccc tcctccaaat ggcaccttgg aggacaccta cagatatgtc
1260
cagagccagg ctatcacttg tcagaagcca acacctgaga aggagaagca ggacccatac
1320
aaggatatga gtttctggga ggtgaacctg aaagagaagt tctcctctga actggaccag
1380
tttccactgg gcaggaagtt cctgctccaa tctggctaca aagccaagc
1429
210 23
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1110 ПВЧ11L1 F2
400 23
atctggctac aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 24
211 37
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1111 ПВЧ11L1 R2
400 24
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttggc
37
210 25
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1112 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ11L1
400 25
atctggctac aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 26
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1113 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 26
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 27
211 474
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1601 Последовательность аминокислот aa 1-474 белка L1 ПВЧ типа 16
400 27
Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys
50 55 60
Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Asn Ala Gly Val Asp Asn Arg
130 135 140
Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly
145 150 155 160
Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys Thr
165 170 175
Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Asn
180 185 190
Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys Met Val Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly Glu Asn Val Pro
260 265 270
Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala Asn Leu Ala Ser
275 280 285
Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ala
290 295 300
Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile Ser Thr Ser Glu
340 345 350
Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly Glu
355 360 365
Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr
370 375 380
Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Thr Ile Leu Glu
385 390 395 400
Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly Thr Leu Glu Asp
405 410 415
Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys Gln Lys His Thr
420 425 430
Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr Thr Phe Trp Glu
435 440 445
Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu
465 470
210 28
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1602 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 28
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 29
211 500
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 1603 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
16
400 29
Met Ser Leu Trp Leu Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ala Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Thr Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Pro Ile Lys Lys Pro Asn Asn Asn Lys Ile Leu Val Pro Lys
50 55 60
Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile His Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ala Ser Ala Tyr Ala Ala Asn Ala Gly Val Asp Asn Arg
130 135 140
Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly
145 150 155 160
Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys Thr
165 170 175
Asn Val Ala Val Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Ile Asn
180 185 190
Thr Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Thr Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Ile Lys Met Val Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Ala Val Gly Glu Asn Val Pro
260 265 270
Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala Asn Leu Ala Ser
275 280 285
Ser Asn Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ala
290 295 300
Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Leu Cys Ala Ala Ile Ser Thr Ser Glu
340 345 350
Thr Thr Tyr Lys Asn Thr Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly Glu
355 360 365
Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr
370 375 380
Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Thr Ile Leu Glu
385 390 395 400
Asp Trp Asn Phe Gly Leu Gln Pro Pro Pro Gly Gly Thr Leu Glu Asp
405 410 415
Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Ala Cys Gln Lys His Thr
420 425 430
Pro Pro Ala Pro Lys Glu Asp Pro Leu Lys Lys Tyr Thr Phe Trp Glu
435 440 445
Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu
465 470 475 480
Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys
485 490 495
Lys Val Lys Lys
500
210 30
211 1504
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1604 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1ПВЧ
типа 16
400 30
atgagtctgt ggctgccatc tgaggctaca gtctacctgc ctcctgtgcc tgtgagcaag
60
gtggtgagca cagatgaata tgtggcaagg accaacatct actaccatgc tggcaccagc
120
agactgctgg ctgtgggaca cccatacttt ccaatcaaga agccaaacaa caacaagatt
180
ctggtgccaa aggtgtctgg actccaatac agggtgttca ggattcacct gcctgaccca
240
aacaagtttg gctttcctga cacctccttc tacaaccctg acacccagag actggtgtgg
300
gcttgtgtgg gagtggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggcat ctctggacac
360
ccactgctga acaaactgga tgacacagag aatgcctctg cctatgctgc caatgctgga
420
gtggacaaca gggagtgtat cagtatggac tacaagcaga cccaactttg tctgattggc
480
tgtaagcctc caattggaga acactggggc aagggcagcc catgtaccaa tgtggctgtg
540
aaccctggag actgtcctcc attggaactg ataaacacag tgattcagga tggagatatg
600
gtggacacag gctttggagc tatggacttc accaccctcc aagccaacaa gtctgaggtg
660
ccactggaca tctgtaccag catctgtaaa taccctgact acatcaagat ggtgtctgaa
720
ccatatggag actccctgtt cttctacctg aggagggaac agatgtttgt gagacacctg
780
ttcaacaggg ctggagcagt gggagagaat gtgcctgatg acctctacat caagggctct
840
ggcagcacag ccaacctggc atccagcaac tactttccaa caccatctgg cagtatggtg
900
acctctgatg cccagatttt caacaagcca tactggctcc aaagggctca aggacacaac
960
aatggcatct gttggggcaa ccaacttttt gtgacagtgg tggacaccac caggagcacc
1020
aatatgagtc tgtgtgctgc catcagcacc tctgagacca cctacaagaa caccaacttc
1080
aaggaatacc tgagacatgg agaggaatat gacctccaat tcatcttcca actttgtaag
1140
attaccctga cagcagatgt gatgacctac atccacagta tgaacagcac catcttggag
1200
gactggaact ttggactcca acctcctcct ggaggcacct tggaggacac ctacaggttt
1260
gtgaccagcc aggctattgc ctgtcagaaa cacacacctc ctgccccaaa ggaggaccca
1320
ctgaaaaaat acaccttctg ggaggtgaac ctgaaagaga agttctctgc tgacctggac
1380
cagtttccac tgggcaggaa gttcctgctc caagcaggac tgaaagccaa gccaaaactg
1440
aaaagggctg ccccaaccag caccaggacc tcctctgcca agaggaagaa ggtgaagaag
1500
taaa
1504
210 31
211 1537
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1605 Синтетический ген L1 ПВЧ16
400 31
ctgggtacca tgagtctgtg gctgccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtggcaagga ccaacatcta ctaccatgct
120
ggcaccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactttc caatcaagaa gccaaacaac
180
aacaagattc tggtgccaaa ggtgtctgga ctccaataca gggtgttcag gattcacctg
240
cctgacccaa acaagtttgg ctttcctgac acctccttct acaaccctga cacccagaga
300
ctggtgtggg cttgtgtggg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactgctgaa caaactggat gacacagaga atgcctctgc ctatgctgcc
420
aatgctggag tggacaacag ggagtgtatc agtatggact acaagcagac ccaactttgt
480
ctgattggct gtaagcctcc aattggagaa cactggggca agggcagccc atgtaccaat
540
gtggctgtga accctggaga ctgtcctcca ttggaactga taaacacagt gattcaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggagct atggacttca ccaccctcca agccaacaag
660
tctgaggtgc cactggacat ctgtaccagc atctgtaaat accctgacta catcaagatg
720
gtgtctgaac catatggaga ctccctgttc ttctacctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacctgt tcaacagggc tggagcagtg ggagagaatg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcagcacagc caacctggca tccagcaact actttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgatgc ccagattttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caactttttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgagtct gtgtgctgcc atcagcacct ctgagaccac ctacaagaac
1080
accaacttca aggaatacct gagacatgga gaggaatatg acctccaatt catcttccaa
1140
ctttgtaaga ttaccctgac agcagatgtg atgacctaca tccacagtat gaacagcacc
1200
atcttggagg actggaactt tggactccaa cctcctcctg gaggcacctt ggaggacacc
1260
tacaggtttg tgaccagcca ggctattgcc tgtcagaaac acacacctcc tgccccaaag
1320
gaggacccac tgaaaaaata caccttctgg gaggtgaacc tgaaagagaa gttctctgct
1380
gacctggacc agtttccact gggcaggaag ttcctgctcc aagcaggact gaaagccaag
1440
ccaaagttca ccctgggcaa gaggaaggct acaccaacca cctccagcac cagcaccaca
1500
gccaagagga agaagaggaa actgtaaact cgagctc
1537
210 32
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1606 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 32
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 33
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1607 ПВЧ16L1 F1
400 33
cttggtacca tgagtctgtg gctgccatct gagg
34
210 34
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1608 ПВЧ16L1 R1
400 34
gcttggcttt cagtcctgct tggagcagga acttcc
36
210 35
211 1441
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1609 ПВЧ16L1 амплифицированная последовательность 1
400 35
cttggtacca tgagtctgtg gctgccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtggcaagga ccaacatcta ctaccatgct
120
ggcaccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactttc caatcaagaa gccaaacaac
180
aacaagattc tggtgccaaa ggtgtctgga ctccaataca gggtgttcag gattcacctg
240
cctgacccaa acaagtttgg ctttcctgac acctccttct acaaccctga cacccagaga
300
ctggtgtggg cttgtgtggg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactgctgaa caaactggat gacacagaga atgcctctgc ctatgctgcc
420
aatgctggag tggacaacag ggagtgtatc agtatggact acaagcagac ccaactttgt
480
ctgattggct gtaagcctcc aattggagaa cactggggca agggcagccc atgtaccaat
540
gtggctgtga accctggaga ctgtcctcca ttggaactga taaacacagt gattcaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggagct atggacttca ccaccctcca agccaacaag
660
tctgaggtgc cactggacat ctgtaccagc atctgtaaat accctgacta catcaagatg
720
gtgtctgaac catatggaga ctccctgttc ttctacctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacctgt tcaacagggc tggagcagtg ggagagaatg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcagcacagc caacctggca tccagcaact actttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgatgc ccagattttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caactttttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgagtct gtgtgctgcc atcagcacct ctgagaccac ctacaagaac
1080
accaacttca aggaatacct gagacatgga gaggaatatg acctccaatt catcttccaa
1140
ctttgtaaga ttaccctgac agcagatgtg atgacctaca tccacagtat gaacagcacc
1200
atcttggagg actggaactt tggactccaa cctcctcctg gaggcacctt ggaggacacc
1260
tacaggtttg tgaccagcca ggctattgcc tgtcagaaac acacacctcc tgccccaaag
1320
gaggacccac tgaaaaaata caccttctgg gaggtgaacc tgaaagagaa gttctctgct
1380
gacctggacc agtttccact gggcaggaag ttcctgctcc aagcaggact gaaagccaag
1440
c
1441
210 36
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1610 ПВЧ16L1 F2
400 36
agcaggactg aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 37
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1611 ПВЧ16L1 R2
400 37
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 38
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1612 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ16L1
400 38
agcaggactg aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 39
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1613 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 39
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 40
211 470
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1801 Последовательность аминокислот aa 1-470 белка L1 ПВЧ типа 18
400 40
Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys
50 55 60
Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Thr Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Ala Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Asn Val Ser Glu Asp Val Arg
130 135 140
Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu Gly
145 150 155 160
Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Ala Cys Lys
165 170 175
Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys Asn
180 185 190
Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe
245 250 255
Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly Asp Thr Val Pro
260 265 270
Gln Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala Ser Pro Gly Ser
275 280 285
Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Asp Ser
290 295 300
Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr Gln Ser Pro Val
340 345 350
Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr Ser Arg His Val
355 360 365
Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Ile Thr Leu
370 375 380
Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Ser Ile Leu
385 390 395 400
Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Leu Val
405 410 415
Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp
420 425 430
Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys Leu Lys Phe Trp
435 440 445
Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu Asp Gln Tyr Pro
450 455 460
Leu Gly Arg Lys Phe Leu
465 470
210 41
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1802 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 41
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 42
211 496
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 1803 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
18
400 42
Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Asn Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Arg Val Pro Ala Gly Gly Gly Asn Lys Gln Asp Ile Pro Lys
50 55 60
Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Thr Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Ala Gly Val Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Ser Ser His Ala Ala Thr Ser Asn Val Ser Glu Asp Val Arg
130 135 140
Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu Gly
145 150 155 160
Cys Ala Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Ala Cys Lys
165 170 175
Ser Arg Pro Leu Ser Gln Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys Asn
180 185 190
Thr Val Leu Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe
245 250 255
Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Thr Met Gly Asp Thr Val Pro
260 265 270
Gln Ser Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Gly Met Arg Ala Ser Pro Gly Ser
275 280 285
Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Asp Ser
290 295 300
Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Val Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Ser Thr Gln Ser Pro Val
340 345 350
Pro Gly Gln Tyr Asp Ala Thr Lys Phe Lys Gln Tyr Ser Arg His Val
355 360 365
Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Ile Thr Leu
370 375 380
Thr Ala Asp Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser Ser Ile Leu
385 390 395 400
Glu Asp Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Leu Val
405 410 415
Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp
420 425 430
Ala Ala Pro Ala Glu Asn Lys Asp Pro Tyr Asp Lys Leu Lys Phe Trp
435 440 445
Asn Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Leu Asp Leu Asp Gln Tyr Pro
450 455 460
Leu Gly Arg Lys Phe Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala
465 470 475 480
Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
485 490 495
210 43
211 1492
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1804 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 18
400 43
atggccctct ggagaccatc cgataacaca gtgtacttgc ccccacccag cgtcgcccgg
60
gtggtgaaca cagacgacta cgtcaccaga acctcaatct tctaccacgc cgggtccagc
120
cggctgctga ccgtgggcaa cccctacttc cgcgtgcccg ccggcggcgg aaacaaacaa
180
gacatcccca aagtcagcgc ctatcagtac cgggtgttcc gcgtccaact gcccgatccc
240
aacaagttcg gcctgcccga cacctccatc tacaaccccg agacccagag gctggtctgg
300
gcttgcgccg gcgtcgagat cgggaggggc caacccctgg gcgtggggtt gtccggccac
360
cccttctaca acaagctgga cgataccgag tccagccacg cagcaaccag caacgtctcc
420
gaagatgtgc gcgataacgt cagcgtggac tacaaacaaa cccaactgtg catcctggga
480
tgcgcacccg ccatcggcga gcattgggcc aaggggaccg cctgcaagag caggcccctg
540
agccaagggg actgtccacc cctggagttg aagaataccg tgctcgagga cggcgacatg
600
gtggacaccg gctacggcgc tatggatttc tccaccctcc aggacaccaa gtgcgaagtg
660
cccctcgaca tctgccaaag catctgcaag taccccgact acctccagat gagcgccgac
720
ccctacggcg acagcatgtt cttctgtctc agaagggaac aattgttcgc ccgccacttc
780
tggaaccggg ccggcacaat gggagataca gtcccccaga gcctgtacat caaggggacc
840
ggaatgaggg ccagccccgg gtcctgcgtc tacagcccaa gcccctccgg gagcatcgtc
900
acaagcgata gccaactctt caacaagccc tactggctcc acaaagccca aggccacaat
960
aacggggtgt gttggcacaa ccagctgttc gtgaccgtcg tggacacaac caggtccaca
1020
aacctgacca tctgcgccag cacccaaagc cccgtgcccg gccagtacga cgccacaaag
1080
ttcaaacaat actctcggca cgtggaagag tacgacctcc aattcatctt ccaactctgc
1140
accatcaccc tcaccgccga cgtgatgagc tacatccact ccatgaactc ctccatcctg
1200
gaagactgga atttcggcgt gccaccaccc cctaccacct ccctcgtcga cacctacaga
1260
ttcgtgcaga gcgtggccat cacatgccag aaagacgccg cccccgccga gaacaaagac
1320
ccatacgaca aactgaaatt ctggaacgtc gacctgaaag agaaattcag cctggatctg
1380
gaccagtacc cattgggcag gaagttcctc aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc
1440
ccaaccagca ccaggacctc ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aa
1492
210 44
211 1543
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1805 Синтетический ген L1 ПВЧ18
400 44
ctgggtacca tggccctctg gagaccatcc gataacacag tgtacttgcc cccacccagc
60
gtcgcccggg tggtgaacac agacgactac gtcaccagaa cctcaatctt ctaccacgcc
120
gggtccagcc ggctgctgac cgtgggcaac ccctacttcc gcgtgcccgc cggcggcgga
180
aacaaacaag acatccccaa agtcagcgcc tatcagtacc gggtgttccg cgtccaactg
240
cccgatccca acaagttcgg cctgcccgac acctccatct acaaccccga gacccagagg
300
ctggtctggg cttgcgccgg cgtcgagatc gggaggggcc aacccctggg cgtggggttg
360
tccggccacc ccttctacaa caagctggac gataccgagt ccagccacgc agcaaccagc
420
aacgtctccg aagatgtgcg cgataacgtc agcgtggact acaaacaaac ccaactgtgc
480
atcctgggat gcgcacccgc catcggcgag cattgggcca aggggaccgc ctgcaagagc
540
aggcccctga gccaagggga ctgtccaccc ctggagttga agaataccgt gctcgaggac
600
ggcgacatgg tggacaccgg ctacggcgct atggatttct ccaccctcca ggacaccaag
660
tgcgaagtgc ccctcgacat ctgccaaagc atctgcaagt accccgacta cctccagatg
720
agcgccgacc cctacggcga cagcatgttc ttctgtctca gaagggaaca attgttcgcc
780
cgccacttct ggaaccgggc cggcacaatg ggagatacag tcccccagag cctgtacatc
840
aaggggaccg gaatgagggc cagccccggg tcctgcgtct acagcccaag cccctccggg
900
agcatcgtca caagcgatag ccaactcttc aacaagccct actggctcca caaagcccaa
960
ggccacaata acggggtgtg ttggcacaac cagctgttcg tgaccgtcgt ggacacaacc
1020
aggtccacaa acctgaccat ctgcgccagc acccaaagcc ccgtgcccgg ccagtacgac
1080
gccacaaagt tcaaacaata ctctcggcac gtggaagagt acgacctcca attcatcttc
1140
caactctgca ccatcaccct caccgccgac gtgatgagct acatccactc catgaactcc
1200
tccatcctgg aagactggaa tttcggcgtg ccaccacccc ctaccacctc cctcgtcgac
1260
acctacagat tcgtgcagag cgtggccatc acatgccaga aagacgccgc ccccgccgag
1320
aacaaagacc catacgacaa actgaaattc tggaacgtcg acctgaaaga gaaattcagc
1380
ctggatctgg accagtaccc attgggcagg aagttcctcg tgcaagccgg cctcaggaga
1440
aaaccaacaa tcgggcccag gaagaggagc gcccccagcg caaccaccag cagcaagccc
1500
gcaaaaaggg tcagagtgag ggcacgcaaa taaactcgag ctc
1543
210 45
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1806 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 45
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 46
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1807 ПВЧ18L1 F1
400 46
cttggtacca tggccctctg gagaccatcc gata
34
210 47
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1808 ПВЧ18L1 R1
400 47
gcttggcttt gaggaacttc ctgcccaatg ggtac
35
210 48
211 1429
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1809 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ18L1
400 48
cttggtacca tggccctctg gagaccatcc gataacacag tgtacttgcc cccacccagc
60
gtcgcccggg tggtgaacac agacgactac gtcaccagaa cctcaatctt ctaccacgcc
120
gggtccagcc ggctgctgac cgtgggcaac ccctacttcc gcgtgcccgc cggcggcgga
180
aacaaacaag acatccccaa agtcagcgcc tatcagtacc gggtgttccg cgtccaactg
240
cccgatccca acaagttcgg cctgcccgac acctccatct acaaccccga gacccagagg
300
ctggtctggg cttgcgccgg cgtcgagatc gggaggggcc aacccctggg cgtggggttg
360
tccggccacc ccttctacaa caagctggac gataccgagt ccagccacgc agcaaccagc
420
aacgtctccg aagatgtgcg cgataacgtc agcgtggact acaaacaaac ccaactgtgc
480
atcctgggat gcgcacccgc catcggcgag cattgggcca aggggaccgc ctgcaagagc
540
aggcccctga gccaagggga ctgtccaccc ctggagttga agaataccgt gctcgaggac
600
ggcgacatgg tggacaccgg ctacggcgct atggatttct ccaccctcca ggacaccaag
660
tgcgaagtgc ccctcgacat ctgccaaagc atctgcaagt accccgacta cctccagatg
720
agcgccgacc cctacggcga cagcatgttc ttctgtctca gaagggaaca attgttcgcc
780
cgccacttct ggaaccgggc cggcacaatg ggagatacag tcccccagag cctgtacatc
840
aaggggaccg gaatgagggc cagccccggg tcctgcgtct acagcccaag cccctccggg
900
agcatcgtca caagcgatag ccaactcttc aacaagccct actggctcca caaagcccaa
960
ggccacaata acggggtgtg ttggcacaac cagctgttcg tgaccgtcgt ggacacaacc
1020
aggtccacaa acctgaccat ctgcgccagc acccaaagcc ccgtgcccgg ccagtacgac
1080
gccacaaagt tcaaacaata ctctcggcac gtggaagagt acgacctcca attcatcttc
1140
caactctgca ccatcaccct caccgccgac gtgatgagct acatccactc catgaactcc
1200
tccatcctgg aagactggaa tttcggcgtg ccaccacccc ctaccacctc cctcgtcgac
1260
acctacagat tcgtgcagag cgtggccatc acatgccaga aagacgccgc ccccgccgag
1320
aacaaagacc catacgacaa actgaaattc tggaacgtcg acctgaaaga gaaattcagc
1380
ctggatctgg accagtaccc attgggcagg aagttcctca aagccaagc
1429
210 49
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1810 ПВЧ18L1 F2
400 49
gaagttcctc aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 50
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1811 ПВЧ18L1 R2
400 50
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 51
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 1812 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ18L1
400 51
gaagttcctc aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 52
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 1813 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 52
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 53
211 475
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3101 Последовательность аминокислот aa 1-475 белка L1 ПВЧ типа 31
400 53
Met Ser Leu Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Thr Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Ser Ala Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ser Ile Pro Lys Ser Asp Asn Pro Lys Lys Ile Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Glu Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Phe Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Asn Ser Asn Arg Tyr Ala Gly Gly Pro Gly Thr Asp Asn
130 135 140
Arg Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Leu
145 150 155 160
Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys
165 170 175
Ser Asn Asn Ala Ile Thr Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys
180 185 190
Asn Ser Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala
195 200 205
Met Asp Phe Thr Ala Leu Gln Asp Thr Lys Ser Asn Val Pro Leu Asp
210 215 220
Ile Cys Asn Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Val Ala
225 230 235 240
Glu Pro Tyr Gly Asp Thr Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met
245 250 255
Phe Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ser Gly Thr Val Gly Glu Ser Val
260 265 270
Pro Thr Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Ala
275 280 285
Asn Ser Thr Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp
290 295 300
Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Met Gln Arg Ala Gln Gly His
305 310 315 320
Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp
325 330 335
Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Val Cys Ala Ala Ile Ala Asn Ser
340 345 350
Asp Thr Thr Phe Lys Ser Ser Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly
355 360 365
Glu Glu Phe Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu
370 375 380
Ser Ala Asp Ile Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Pro Ala Ile Leu
385 390 395 400
Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Thr Thr Pro Pro Ser Gly Ser Leu Glu
405 410 415
Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Ser
420 425 430
Ala Pro Gln Lys Pro Lys Glu Asp Pro Phe Lys Asp Tyr Val Phe Trp
435 440 445
Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro
450 455 460
Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Tyr
465 470 475
210 54
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3102 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 54
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 55
211 501
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 3103 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
31
400 55
Met Ser Leu Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Thr Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Ser Ala Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ser Ile Pro Lys Ser Asp Asn Pro Lys Lys Ile Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Glu Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Phe Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Asn Ser Asn Arg Tyr Ala Gly Gly Pro Gly Thr Asp Asn
130 135 140
Arg Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Leu
145 150 155 160
Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Ser Pro Cys
165 170 175
Ser Asn Asn Ala Ile Thr Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys
180 185 190
Asn Ser Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala
195 200 205
Met Asp Phe Thr Ala Leu Gln Asp Thr Lys Ser Asn Val Pro Leu Asp
210 215 220
Ile Cys Asn Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Val Ala
225 230 235 240
Glu Pro Tyr Gly Asp Thr Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met
245 250 255
Phe Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ser Gly Thr Val Gly Glu Ser Val
260 265 270
Pro Thr Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Ala
275 280 285
Asn Ser Thr Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp
290 295 300
Ala Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Met Gln Arg Ala Gln Gly His
305 310 315 320
Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp
325 330 335
Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Ser Val Cys Ala Ala Ile Ala Asn Ser
340 345 350
Asp Thr Thr Phe Lys Ser Ser Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly
355 360 365
Glu Glu Phe Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu
370 375 380
Ser Ala Asp Ile Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Pro Ala Ile Leu
385 390 395 400
Glu Asp Trp Asn Phe Gly Leu Thr Thr Pro Pro Ser Gly Ser Leu Glu
405 410 415
Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Ser
420 425 430
Ala Pro Gln Lys Pro Lys Glu Asp Pro Phe Lys Asp Tyr Val Phe Trp
435 440 445
Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro
450 455 460
Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Tyr Lys Ala Lys Pro Lys
465 470 475 480
Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg
485 490 495
Lys Lys Val Lys Lys
500
210 56
211 1507
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3104 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 31
400 56
atgagcctgt ggaggcccag cgaggccacc gtgtacctgc cccccgtgcc cgtgagcaag
60
gtggtgagca ccgacgagta cgtgaccagg accaacatct actaccacgc cggcagcgcc
120
aggctgctga ccgtgggcca cccctactac agcatcccca agagcgacaa ccccaagaag
180
atcgtggtgc ccaaggtgag cggcctgcag tacagggtgt tcagggtgag gctgcccgac
240
cccaacaagt tcggcttccc cgacaccagc ttctacaacc ccgagaccca gaggctggtg
300
tgggcctgcg tgggcctgga ggtgggcagg ggccagcccc tgggcgtggg catcagcggc
360
caccccctgc tgaacaagtt cgacgacacc gagaacagca acaggtacgc cggcggcccc
420
ggcaccgaca acagggagtg catcagcatg gactacaagc agacccagct gtgcctgctg
480
ggctgcaagc cccccatcgg cgagcactgg ggcaagggca gcccctgcag caacaacgcc
540
atcacccccg gcgactgccc ccccctggag ctgaagaaca gcgtgatcca ggacggcgac
600
atggtggaca ccggcttcgg cgccatggac ttcaccgccc tgcaggacac caagagcaac
660
gtgcccctgg acatctgcaa cagcatctgc aagtaccccg actacctgaa gatggtggcc
720
gagccctacg gcgacaccct gttcttctac ctgaggaggg agcagatgtt cgtgaggcac
780
ttcttcaaca ggagcggcac cgtgggcgag agcgtgccca ccgacctgta catcaagggc
840
agcggcagca ccgccaccct ggccaacagc acctacttcc ccacccccag cggcagcatg
900
gtgaccagcg acgcccagat cttcaacaag ccctactgga tgcagagggc ccagggccac
960
aacaacggca tctgctgggg caaccagctg ttcgtgaccg tggtggacac caccaggagc
1020
accaacatga gcgtgtgcgc cgccatcgcc aacagcgaca ccaccttcaa gagcagcaac
1080
ttcaaggagt acctgaggca cggcgaggag ttcgacctgc agttcatctt ccagctgtgc
1140
aagatcaccc tgagcgccga catcatgacc tacatccaca gcatgaaccc cgccatcctg
1200
gaggactgga acttcggcct gaccaccccc cccagcggca gcctggagga cacctacagg
1260
ttcgtgacca gccaggccat cacctgccag aagtccgccc cccagaagcc caaggaggac
1320
cccttcaagg actacgtgtt ctgggaggtg aacctgaagg agaagttcag cgccgacctg
1380
gaccagttcc ccctgggcag gaagttcctg ctgcaggccg gctacaaagc caagccaaaa
1440
ctgaaaaggg ctgccccaac cagcaccagg acctcctctg ccaagaggaa gaaggtgaag
1500
aagtaaa
1507
210 57
211 1534
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3105 Синтетический ген L1 ПВЧ31
400 57
ctgggtacca tgagcctgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgaccagga ccaacatcta ctaccacgcc
120
ggcagcgcca ggctgctgac cgtgggccac ccctactaca gcatccccaa gagcgacaac
180
cccaagaaga tcgtggtgcc caaggtgagc ggcctgcagt acagggtgtt cagggtgagg
240
ctgcccgacc ccaacaagtt cggcttcccc gacaccagct tctacaaccc cgagacccag
300
aggctggtgt gggcctgcgt gggcctggag gtgggcaggg gccagcccct gggcgtgggc
360
atcagcggcc accccctgct gaacaagttc gacgacaccg agaacagcaa caggtacgcc
420
ggcggccccg gcaccgacaa cagggagtgc atcagcatgg actacaagca gacccagctg
480
tgcctgctgg gctgcaagcc ccccatcggc gagcactggg gcaagggcag cccctgcagc
540
aacaacgcca tcacccccgg cgactgcccc cccctggagc tgaagaacag cgtgatccag
600
gacggcgaca tggtggacac cggcttcggc gccatggact tcaccgccct gcaggacacc
660
aagagcaacg tgcccctgga catctgcaac agcatctgca agtaccccga ctacctgaag
720
atggtggccg agccctacgg cgacaccctg ttcttctacc tgaggaggga gcagatgttc
780
gtgaggcact tcttcaacag gagcggcacc gtgggcgaga gcgtgcccac cgacctgtac
840
atcaagggca gcggcagcac cgccaccctg gccaacagca cctacttccc cacccccagc
900
ggcagcatgg tgaccagcga cgcccagatc ttcaacaagc cctactggat gcagagggcc
960
cagggccaca acaacggcat ctgctggggc aaccagctgt tcgtgaccgt ggtggacacc
1020
accaggagca ccaacatgag cgtgtgcgcc gccatcgcca acagcgacac caccttcaag
1080
agcagcaact tcaaggagta cctgaggcac ggcgaggagt tcgacctgca gttcatcttc
1140
cagctgtgca agatcaccct gagcgccgac atcatgacct acatccacag catgaacccc
1200
gccatcctgg aggactggaa cttcggcctg accacccccc ccagcggcag cctggaggac
1260
acctacaggt tcgtgaccag ccaggccatc acctgccaga agtccgcccc ccagaagccc
1320
aaggaggacc ccttcaagga ctacgtgttc tgggaggtga acctgaagga gaagttcagc
1380
gccgacctgg accagttccc cctgggcagg aagttcctgc tgcaggccgg ctacagggcc
1440
aggcccaagt tcaaggccgg caagaggagc gcccccagcg ccagcaccac cacccccgcc
1500
aagaggaaga agaccaagaa gtaaactcga gctc
1534
210 58
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3106 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 58
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 59
211 33
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3107 ПВЧ31L1 F1
400 59
cttggtacca tgagcctgtg gaggcccagc gag
33
210 60
211 38
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3108 ПВЧ31L1 R1
400 60
gcttggcttt gtagccggcc tgcagcagga acttcctg
38
210 61
211 1444
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3109 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ31L1
400 61
cttggtacca tgagcctgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgaccagga ccaacatcta ctaccacgcc
120
ggcagcgcca ggctgctgac cgtgggccac ccctactaca gcatccccaa gagcgacaac
180
cccaagaaga tcgtggtgcc caaggtgagc ggcctgcagt acagggtgtt cagggtgagg
240
ctgcccgacc ccaacaagtt cggcttcccc gacaccagct tctacaaccc cgagacccag
300
aggctggtgt gggcctgcgt gggcctggag gtgggcaggg gccagcccct gggcgtgggc
360
atcagcggcc accccctgct gaacaagttc gacgacaccg agaacagcaa caggtacgcc
420
ggcggccccg gcaccgacaa cagggagtgc atcagcatgg actacaagca gacccagctg
480
tgcctgctgg gctgcaagcc ccccatcggc gagcactggg gcaagggcag cccctgcagc
540
aacaacgcca tcacccccgg cgactgcccc cccctggagc tgaagaacag cgtgatccag
600
gacggcgaca tggtggacac cggcttcggc gccatggact tcaccgccct gcaggacacc
660
aagagcaacg tgcccctgga catctgcaac agcatctgca agtaccccga ctacctgaag
720
atggtggccg agccctacgg cgacaccctg ttcttctacc tgaggaggga gcagatgttc
780
gtgaggcact tcttcaacag gagcggcacc gtgggcgaga gcgtgcccac cgacctgtac
840
atcaagggca gcggcagcac cgccaccctg gccaacagca cctacttccc cacccccagc
900
ggcagcatgg tgaccagcga cgcccagatc ttcaacaagc cctactggat gcagagggcc
960
cagggccaca acaacggcat ctgctggggc aaccagctgt tcgtgaccgt ggtggacacc
1020
accaggagca ccaacatgag cgtgtgcgcc gccatcgcca acagcgacac caccttcaag
1080
agcagcaact tcaaggagta cctgaggcac ggcgaggagt tcgacctgca gttcatcttc
1140
cagctgtgca agatcaccct gagcgccgac atcatgacct acatccacag catgaacccc
1200
gccatcctgg aggactggaa cttcggcctg accacccccc ccagcggcag cctggaggac
1260
acctacaggt tcgtgaccag ccaggccatc acctgccaga agtccgcccc ccagaagccc
1320
aaggaggacc ccttcaagga ctacgtgttc tgggaggtga acctgaagga gaagttcagc
1380
gccgacctgg accagttccc cctgggcagg aagttcctgc tgcaggccgg ctacaaagcc
1440
aagc
1444
210 62
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3110 ПВЧ31L1 F2
400 62
ggccggctac aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 63
211 41
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3111 ПВЧ31L1 R2
400 63
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttggcaga g
41
210 64
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3112 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ31L1
400 64
ggccggctac aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 65
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3113 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 65
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 66
211 472
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3501 Последовательность аминокислот ПВЧ типа 35 белка L1 aa 1-472
400 66
Met Ser Leu Trp Arg Ser Asn Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Ser Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Thr Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ile Lys Lys Gln Asp Ser Asn Lys Ile Ala Val Pro Lys
50 55 60
Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Lys Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asp Pro Ala Ser Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Thr Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ser Asn Lys Tyr Val Gly Asn Ser Gly Thr Asp Asn Arg
130 135 140
Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly
145 150 155 160
Cys Arg Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr Pro Cys Asn
165 170 175
Ala Asn Gln Val Lys Ala Gly Glu Cys Pro Pro Leu Glu Leu Leu Asn
180 185 190
Thr Val Leu Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Ser Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Val Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Met Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Thr Val Gly Glu Thr Val Pro
260 265 270
Ala Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Thr Gly Thr Leu Pro Ser Thr Ser
275 280 285
Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ala Gln Ile
290 295 300
Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn Asn Gly
305 310 315 320
Ile Cys Trp Ser Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg
325 330 335
Ser Thr Asn Met Ser Val Cys Ser Ala Val Ser Ser Ser Asp Ser Thr
340 345 350
Tyr Lys Asn Asp Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly Glu Glu Tyr
355 360 365
Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr Ala Asp
370 375 380
Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Pro Ser Ile Leu Glu Asp Trp
385 390 395 400
Asn Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr
405 410 415
Arg Tyr Val Thr Ser Gln Ala Val Thr Cys Gln Lys Pro Ser Ala Pro
420 425 430
Lys Pro Lys Asp Asp Pro Leu Lys Asn Tyr Thr Phe Trp Glu Val Asp
435 440 445
Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg
450 455 460
Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu
465 470
210 67
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3502 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 67
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 68
211 498
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 3503 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
35
400 68
Met Ser Leu Trp Arg Ser Asn Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Ser Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Thr Arg Thr Asn
20 25 30
Ile Tyr Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ile Lys Lys Gln Asp Ser Asn Lys Ile Ala Val Pro Lys
50 55 60
Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Lys Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asp Pro Ala Ser Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Thr Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys Leu Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ser Asn Lys Tyr Val Gly Asn Ser Gly Thr Asp Asn Arg
130 135 140
Glu Cys Ile Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly
145 150 155 160
Cys Arg Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr Pro Cys Asn
165 170 175
Ala Asn Gln Val Lys Ala Gly Glu Cys Pro Pro Leu Glu Leu Leu Asn
180 185 190
Thr Val Leu Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met
195 200 205
Asp Phe Thr Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile
210 215 220
Cys Ser Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Val Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Met Leu Phe Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Leu Phe Asn Arg Ala Gly Thr Val Gly Glu Thr Val Pro
260 265 270
Ala Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Thr Gly Thr Leu Pro Ser Thr Ser
275 280 285
Tyr Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ala Gln Ile
290 295 300
Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn Asn Gly
305 310 315 320
Ile Cys Trp Ser Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg
325 330 335
Ser Thr Asn Met Ser Val Cys Ser Ala Val Ser Ser Ser Asp Ser Thr
340 345 350
Tyr Lys Asn Asp Asn Phe Lys Glu Tyr Leu Arg His Gly Glu Glu Tyr
355 360 365
Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr Ala Asp
370 375 380
Val Met Thr Tyr Ile His Ser Met Asn Pro Ser Ile Leu Glu Asp Trp
385 390 395 400
Asn Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Gly Thr Leu Glu Asp Thr Tyr
405 410 415
Arg Tyr Val Thr Ser Gln Ala Val Thr Cys Gln Lys Pro Ser Ala Pro
420 425 430
Lys Pro Lys Asp Asp Pro Leu Lys Asn Tyr Thr Phe Trp Glu Val Asp
435 440 445
Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg
450 455 460
Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg
465 470 475 480
Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val
485 490 495
Lys Lys
210 69
211 1498
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3504 Последовательность нуклеотидов химерного белка L1 ПВЧ типа
35
400 69
atgagtctgt ggaggagcaa tgaggctaca gtctacctgc ctcctgtgtc tgtgagcaag
60
gtggtgagca cagatgaata tgtgaccagg accaacatct actaccatgc tggctccagc
120
agactgctgg ctgtgggaca cccatactat gccatcaaga agcaggacag caacaagatt
180
gctgtgccaa aggtgtctgg actccaatac agggtgttca gggtgaaact gcctgaccca
240
aacaagtttg gctttcctga cacctccttc tatgaccctg ccagccagag actggtgtgg
300
gcttgtactg gagtggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggcat ctctggacac
360
ccactgctga acaaactgga tgacacagag aacagcaaca aatatgtggg caactctggc
420
acagacaaca gggagtgtat cagtatggac tacaagcaga cccaactttg tctgattggc
480
tgtagacctc caattggaga acactggggc aagggcacac catgtaatgc caaccaggtg
540
aaggctggag agtgtcctcc attggaactg ctgaacacag tgctccaaga tggagatatg
600
gtggacacag gctttggagc tatggacttc accaccctcc aagccaacaa gtctgatgtg
660
ccactggaca tctgttccag catctgtaaa taccctgact acctgaaaat ggtgtctgaa
720
ccatatggag atatgctgtt cttctacctg aggagggaac agatgtttgt gagacacctg
780
ttcaacaggg ctggcacagt gggagagaca gtgcctgctg acctctacat caagggcacc
840
acaggcaccc tgccaagcac ctcctacttt ccaacaccat ctggcagtat ggtgacctct
900
gatgcccaga ttttcaacaa gccatactgg ctccaaaggg ctcaaggaca caacaatggc
960
atctgttgga gcaaccaact ttttgtgaca gtggtggaca ccaccaggag caccaatatg
1020
agtgtgtgtt ctgctgtgtc ctcctctgac agcacctaca agaatgacaa cttcaaggaa
1080
tacctgagac atggagagga atatgacctc caattcatct tccaactttg taagattacc
1140
ctgacagcag atgtgatgac ctacatccac agtatgaacc caagcatctt ggaggactgg
1200
aactttggac tgacacctcc tccatctggc accttggagg acacctacag atatgtgacc
1260
agccaggctg tgacttgtca gaagccatct gccccaaagc caaaggatga cccactgaaa
1320
aactacacct tctgggaggt ggacctgaaa gagaagttct ctgctgacct ggaccagttt
1380
ccactgggca ggaagttcct gctccaagca ggactgaaag ccaagccaaa actgaaaagg
1440
gctgccccaa ccagcaccag gacctcctct gccaagagga agaaggtgaa gaagtaaa
1498
210 70
211 1528
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3505 Синтетический ген L1 ПВЧ35
400 70
ctgggtacca tgagtctgtg gaggagcaat gaggctacag tctacctgcc tcctgtgtct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgaccagga ccaacatcta ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactatg ccatcaagaa gcaggacagc
180
aacaagattg ctgtgccaaa ggtgtctgga ctccaataca gggtgttcag ggtgaaactg
240
cctgacccaa acaagtttgg ctttcctgac acctccttct atgaccctgc cagccagaga
300
ctggtgtggg cttgtactgg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactgctgaa caaactggat gacacagaga acagcaacaa atatgtgggc
420
aactctggca cagacaacag ggagtgtatc agtatggact acaagcagac ccaactttgt
480
ctgattggct gtagacctcc aattggagaa cactggggca agggcacacc atgtaatgcc
540
aaccaggtga aggctggaga gtgtcctcca ttggaactgc tgaacacagt gctccaagat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggagct atggacttca ccaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc cactggacat ctgttccagc atctgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
gtgtctgaac catatggaga tatgctgttc ttctacctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacctgt tcaacagggc tggcacagtg ggagagacag tgcctgctga cctctacatc
840
aagggcacca caggcaccct gccaagcacc tcctactttc caacaccatc tggcagtatg
900
gtgacctctg atgcccagat tttcaacaag ccatactggc tccaaagggc tcaaggacac
960
aacaatggca tctgttggag caaccaactt tttgtgacag tggtggacac caccaggagc
1020
accaatatga gtgtgtgttc tgctgtgtcc tcctctgaca gcacctacaa gaatgacaac
1080
ttcaaggaat acctgagaca tggagaggaa tatgacctcc aattcatctt ccaactttgt
1140
aagattaccc tgacagcaga tgtgatgacc tacatccaca gtatgaaccc aagcatcttg
1200
gaggactgga actttggact gacacctcct ccatctggca ccttggagga cacctacaga
1260
tatgtgacca gccaggctgt gacttgtcag aagccatctg ccccaaagcc aaaggatgac
1320
ccactgaaaa actacacctt ctgggaggtg gacctgaaag agaagttctc tgctgacctg
1380
gaccagtttc cactgggcag gaagttcctg ctccaagcag gactgaaagc cagaccaaac
1440
ttcagactgg gcaagagggc tgcccctgcc agcaccagca agaagtccag caccaagagg
1500
aggaaggtga agagctaaac tcgagctc
1528
210 71
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3506 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 71
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 72
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3507 ПВЧ35L1 F1
400 72
cttggtacca tgagtctgtg gaggagcaat gagg
34
210 73
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3508 ПВЧ35L1 R1
400 73
gcttggcttt cagtcctgct tggagcagga acttcc
36
210 74
211 1435
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3509 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ35L1
400 74
cttggtacca tgagtctgtg gaggagcaat gaggctacag tctacctgcc tcctgtgtct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgaccagga ccaacatcta ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactatg ccatcaagaa gcaggacagc
180
aacaagattg ctgtgccaaa ggtgtctgga ctccaataca gggtgttcag ggtgaaactg
240
cctgacccaa acaagtttgg ctttcctgac acctccttct atgaccctgc cagccagaga
300
ctggtgtggg cttgtactgg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactgctgaa caaactggat gacacagaga acagcaacaa atatgtgggc
420
aactctggca cagacaacag ggagtgtatc agtatggact acaagcagac ccaactttgt
480
ctgattggct gtagacctcc aattggagaa cactggggca agggcacacc atgtaatgcc
540
aaccaggtga aggctggaga gtgtcctcca ttggaactgc tgaacacagt gctccaagat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggagct atggacttca ccaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc cactggacat ctgttccagc atctgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
gtgtctgaac catatggaga tatgctgttc ttctacctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacctgt tcaacagggc tggcacagtg ggagagacag tgcctgctga cctctacatc
840
aagggcacca caggcaccct gccaagcacc tcctactttc caacaccatc tggcagtatg
900
gtgacctctg atgcccagat tttcaacaag ccatactggc tccaaagggc tcaaggacac
960
aacaatggca tctgttggag caaccaactt tttgtgacag tggtggacac caccaggagc
1020
accaatatga gtgtgtgttc tgctgtgtcc tcctctgaca gcacctacaa gaatgacaac
1080
ttcaaggaat acctgagaca tggagaggaa tatgacctcc aattcatctt ccaactttgt
1140
aagattaccc tgacagcaga tgtgatgacc tacatccaca gtatgaaccc aagcatcttg
1200
gaggactgga actttggact gacacctcct ccatctggca ccttggagga cacctacaga
1260
tatgtgacca gccaggctgt gacttgtcag aagccatctg ccccaaagcc aaaggatgac
1320
ccactgaaaa actacacctt ctgggaggtg gacctgaaag agaagttctc tgctgacctg
1380
gaccagtttc cactgggcag gaagttcctg ctccaagcag gactgaaagc caagc
1435
210 75
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3510 ПВЧ35L1 F2
400 75
agcaggactg aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 76
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3511 ПВЧ35L1 R2
400 76
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 77
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 351 амплифицированная последовательность 22 ПВЧ35L1
400 77
agcaggactg aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 78
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3513 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 78
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 79
211 469
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3901 Последовательность аминокислот aa 1-469 белка L1 ПВЧ типа 39
400 79
Met Ala Met Trp Arg Ser Ser Asp Ser Met Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Lys Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Lys Val Gly Met Asn Gly Gly Arg Lys Gln Asp Ile Pro Lys
50 55 60
Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Thr Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Ser Ile Pro Asp Ala Ser Leu Tyr Asn Pro Glu Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Tyr Asn Arg Gln Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ser Pro Phe Ser Ser Thr Thr Asn Lys Asp Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Ile Gly Cys
145 150 155 160
Val Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Lys Ala Cys Lys Pro
165 170 175
Asn Asn Val Ser Thr Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Val Asn Thr
180 185 190
Pro Ile Glu Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Gly Ala Leu Gln Glu Thr Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile Cys
210 215 220
Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp Val
225 230 235 240
Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe Ala
245 250 255
Arg His Phe Trp Asn Arg Gly Gly Met Val Gly Asp Ala Ile Pro Ala
260 265 270
Gln Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Asp Ile Arg Ala Asn Pro Gly Ser Ser
275 280 285
Val Tyr Cys Pro Ser Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ser Gln
290 295 300
Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn Asn
305 310 315 320
Gly Ile Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Leu Thr Val Val Asp Thr Thr
325 330 335
Arg Ser Thr Asn Phe Thr Leu Ser Thr Ser Ile Glu Ser Ser Ile Pro
340 345 350
Ser Thr Tyr Asp Pro Ser Lys Phe Lys Glu Tyr Thr Arg His Val Glu
355 360 365
Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Val Thr Leu Thr
370 375 380
Thr Asp Val Met Ser Tyr Ile His Thr Met Asn Ser Ser Ile Leu Asp
385 390 395 400
Asn Trp Asn Phe Ala Val Ala Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Val Asp
405 410 415
Thr Tyr Arg Tyr Leu Gln Ser Ala Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp Ala
420 425 430
Pro Ala Pro Glu Lys Lys Asp Pro Tyr Asp Gly Leu Lys Phe Trp Asn
435 440 445
Val Asp Leu Arg Glu Lys Phe Ser Leu Glu Leu Asp Gln Phe Pro Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu
465
210 80
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3902 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 80
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 81
211 507
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 3903 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
39
400 81
Met Ala Met Trp Arg Ser Ser Asp Ser Met Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Lys Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Thr Arg Thr Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Lys Val Gly Met Asn Gly Gly Arg Lys Gln Asp Ile Pro Lys
50 55 60
Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Thr Leu Pro Asp Pro
65 70 75 80
Asn Lys Phe Ser Ile Pro Asp Ala Ser Leu Tyr Asn Pro Glu Thr Gln
85 90 95
Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro
100 105 110
Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Tyr Asn Arg Gln Asp Asp
115 120 125
Thr Glu Asn Ser Pro Phe Ser Ser Thr Thr Asn Lys Asp Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Ile Gly Cys
145 150 155 160
Val Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Lys Ala Cys Lys Pro
165 170 175
Asn Asn Val Ser Thr Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Val Asn Thr
180 185 190
Pro Ile Glu Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Tyr Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Gly Ala Leu Gln Glu Thr Lys Ser Glu Val Pro Leu Asp Ile Cys
210 215 220
Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala Asp Val
225 230 235 240
Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe Ala
245 250 255
Arg His Phe Trp Asn Arg Gly Gly Met Val Gly Asp Ala Ile Pro Ala
260 265 270
Gln Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Asp Ile Arg Ala Asn Pro Gly Ser Ser
275 280 285
Val Tyr Cys Pro Ser Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Asp Ser Gln
290 295 300
Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln Gly His Asn Asn
305 310 315 320
Gly Ile Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Leu Thr Val Val Asp Thr Thr
325 330 335
Arg Ser Thr Asn Phe Thr Leu Ser Thr Ser Ile Glu Ser Ser Ile Pro
340 345 350
Ser Thr Tyr Asp Pro Ser Lys Phe Lys Glu Tyr Thr Arg His Val Glu
355 360 365
Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr Val Thr Leu Thr
370 375 380
Thr Asp Val Met Ser Tyr Ile His Thr Met Asn Ser Ser Ile Leu Asp
385 390 395 400
Asn Trp Asn Phe Ala Val Ala Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Val Asp
405 410 415
Thr Tyr Arg Tyr Leu Gln Ser Ala Ala Ile Thr Cys Gln Lys Asp Ala
420 425 430
Pro Ala Pro Glu Lys Lys Asp Pro Tyr Asp Gly Leu Lys Phe Trp Asn
435 440 445
Val Asp Leu Arg Glu Lys Phe Ser Leu Glu Leu Asp Gln Phe Pro Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile
465 470 475 480
Gly Pro Arg Lys Arg Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro
485 490 495
Lys Arg Val Lys Arg Arg Lys Ser Ser Arg Lys
500 505
210 82
211 1525
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3904 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 39
400 82
atggctatgt ggaggtcctc tgacagtatg gtctacctgc ctcctccatc tgtggctaag
60
gtggtgaaca cagatgacta tgtgaccagg acaggcatct actactatgc tggctccagc
120
agactgctga cagtgggaca cccatacttc aaggtgggga tgaatggagg caggaagcag
180
gacatcccaa aggtgtctgc ctaccaatac agggtgttca gggtgaccct gcctgaccca
240
aacaagttca gcatccctga tgcctccctc tacaaccctg agacccagag actggtgtgg
300
gcttgtgtgg gagtggaggt gggcagggga caaccactgg gagtgggcat ctctggacac
360
ccactctaca acagacagga tgacacagag aacagcccat tctccagcac caccaacaag
420
gacagcaggg acaatgtgtc tgtggactac aagcagaccc aactttgtat cattggctgt
480
gtgcctgcca ttggagaaca ctggggcaag ggcaaggctt gtaagccaaa caatgtgagc
540
acaggagact gtcctccatt ggaactggtg aacacaccaa ttgaggatgg agatatgatt
600
gacacaggct atggagctat ggactttgga gccctccaag agaccaagtc tgaggtgcca
660
ctggacatct gtcagagcat ctgtaaatac cctgactacc tccaaatgag tgctgatgtc
720
tatggagaca gtatgttctt ctgtctgagg agggaacaac tttttgccag acacttctgg
780
aacaggggag ggatggtggg agatgccatc cctgcccaac tctacatcaa gggcacagac
840
atcagggcta accctggctc ctctgtctac tgtccaagcc catctggcag tatggtgacc
900
tctgacagcc aacttttcaa caagccatac tggctgcaca aggctcaagg acacaacaat
960
ggcatctgtt ggcacaacca acttttcctg acagtggtgg acaccaccag gagcaccaac
1020
ttcaccctga gcaccagcat tgagtccagc atcccaagca cctatgaccc aagcaagttc
1080
aaggaataca ccaggcatgt ggaggaatat gacctccaat tcatcttcca actttgtact
1140
gtgaccctga ccacagatgt gatgagttac atccacacaa tgaactccag catcctggac
1200
aactggaact ttgctgtggc tcctcctcca tctgcctccc tggtggacac ctacagatac
1260
ctccaatctg ctgccatcac ttgtcagaag gatgcccctg cccctgagaa gaaggaccca
1320
tatgatggac tgaagttctg gaatgtggac ctgagggaga agttctcctt ggaactggac
1380
cagtttccac tgggcaggaa gttcctgctc caacttggag ccagaccaaa gccaaccatt
1440
ggaccaagga agagggctgc ccctgcccca accagcacac caagcccaaa gagggtgaag
1500
aggaggaagt ccagcaggaa gtaaa
1525
210 83
211 1537
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3905 Синтетический ген L1 ПВЧ39
400 83
ctgggtacca tggctatgtg gaggtcctct gacagtatgg tctacctgcc tcctccatct
60
gtggctaagg tggtgaacac agatgactat gtgaccagga caggcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctgac agtgggacac ccatacttca aggtggggat gaatggaggc
180
aggaagcagg acatcccaaa ggtgtctgcc taccaataca gggtgttcag ggtgaccctg
240
cctgacccaa acaagttcag catccctgat gcctccctct acaaccctga gacccagaga
300
ctggtgtggg cttgtgtggg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactctacaa cagacaggat gacacagaga acagcccatt ctccagcacc
420
accaacaagg acagcaggga caatgtgtct gtggactaca agcagaccca actttgtatc
480
attggctgtg tgcctgccat tggagaacac tggggcaagg gcaaggcttg taagccaaac
540
aatgtgagca caggagactg tcctccattg gaactggtga acacaccaat tgaggatgga
600
gatatgattg acacaggcta tggagctatg gactttggag ccctccaaga gaccaagtct
660
gaggtgccac tggacatctg tcagagcatc tgtaaatacc ctgactacct ccaaatgagt
720
gctgatgtct atggagacag tatgttcttc tgtctgagga gggaacaact ttttgccaga
780
cacttctgga acaggggagg gatggtggga gatgccatcc ctgcccaact ctacatcaag
840
ggcacagaca tcagggctaa ccctggctcc tctgtctact gtccaagccc atctggcagt
900
atggtgacct ctgacagcca acttttcaac aagccatact ggctgcacaa ggctcaagga
960
cacaacaatg gcatctgttg gcacaaccaa cttttcctga cagtggtgga caccaccagg
1020
agcaccaact tcaccctgag caccagcatt gagtccagca tcccaagcac ctatgaccca
1080
agcaagttca aggaatacac caggcatgtg gaggaatatg acctccaatt catcttccaa
1140
ctttgtactg tgaccctgac cacagatgtg atgagttaca tccacacaat gaactccagc
1200
atcctggaca actggaactt tgctgtggct cctcctccat ctgcctccct ggtggacacc
1260
tacagatacc tccaatctgc tgccatcact tgtcagaagg atgcccctgc ccctgagaag
1320
aaggacccat atgatggact gaagttctgg aatgtggacc tgagggagaa gttctccttg
1380
gaactggacc agtttccact gggcaggaag ttcctgctcc aagccagggt gaggaggaga
1440
ccaaccattg gaccaaggaa gagacctgct gccagcacct cctcctcctc tgccaccaaa
1500
cacaagagga agagggtgag caagtaaact cgagctc
1537
210 84
211 1546
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3906 Синтетический ген L1 ПВЧ59
400 84
ctgggtacca tggctctgtg gaggtcctct gacaacaagg tctacctgcc tcctccatct
60
gtggctaagg tggtgagcac agatgaatat gtgaccagga ccagcatctt ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctgac agtgggacac ccatacttca aggtgccaaa gggaggcaat
180
ggcagacagg atgtgccaaa ggtgtctgcc taccaataca gggtgttcag ggtgaaactg
240
cctgacccaa acaagtttgg actgcctgac aacacagtct atgacccaaa cagccagaga
300
ctggtgtggg cttgtgtggg agtggagatt ggcaggggac aaccactggg agtgggactg
360
tctggacacc cactctacaa caaactggat gacacagaga actctcatgt ggcatctgct
420
gtggacacca aggacaccag ggacaatgtg tctgtggact acaagcagac ccaactttgt
480
atcattggct gtgtgcctgc cattggagaa cactggacca agggcacagc ctgtaagcca
540
accacagtgg tccagggaga ctgtcctcca ttggaactga taaacacacc aattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctatggagct atggacttca aactgctcca agacaacaag
660
tctgaggtgc cactggacat ctgtcagagc atctgtaaat accctgacta cctccaaatg
720
agtgctgatg cctatggaga cagtatgttc ttctgtctga ggagggaaca ggtgtttgcc
780
agacacttct ggaacaggtc tggcacaatg ggagaccaac ttcctgagtc cctctacatc
840
aagggcacag acatcagggc taaccctggc tcctacctct acagcccaag cccatctggc
900
tctgtggtga cctctgacag ccaacttttc aacaagccat actggctgca caaggctcaa
960
ggactgaaca atggcatctg ttggcacaac caacttttcc tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca acctgtctgt gtgtgccagc accacctcca gcatcccaaa tgtctacaca
1080
ccaacctcct tcaaggaata tgccaggcat gtggaggagt ttgacctcca attcatcttc
1140
caactttgta agattaccct gaccacagag gtgatgagtt acatccacaa tatgaacacc
1200
accatcttgg aggactggaa ctttggagtg acacctcctc caacagcctc cctggtggac
1260
acctacaggt ttgtccagtc tgctgctgtg acttgtcaga aggacacagc ccctcctgtg
1320
aagcaggacc catatgacaa actgaagttc tggcctgtgg acctgaaaga gaggttctct
1380
gctgacctgg accagtttcc actgggcagg aagttcctgc tccaacttgg agccagacca
1440
aagccaacca ttggaccaag gaagagggct gcccctgccc caaccagcac accaagccca
1500
aagagggtga agaggaggaa gtccagcagg aagtaaactc gagctc
1546
210 85
211 38
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3907 ПВЧ39L1 F1
400 85
cttggtacca tggctatgtg gaggtcctct gacagtat
38
210 86
211 38
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3908 ПВЧ39L1 R1
400 86
tccaagttgg agcaggaact tcctgcccag tggaaact
38
210 87
211 1428
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3909 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ39L1
400 87
cttggtacca tggctatgtg gaggtcctct gacagtatgg tctacctgcc tcctccatct
60
gtggctaagg tggtgaacac agatgactat gtgaccagga caggcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctgac agtgggacac ccatacttca aggtggggat gaatggaggc
180
aggaagcagg acatcccaaa ggtgtctgcc taccaataca gggtgttcag ggtgaccctg
240
cctgacccaa acaagttcag catccctgat gcctccctct acaaccctga gacccagaga
300
ctggtgtggg cttgtgtggg agtggaggtg ggcaggggac aaccactggg agtgggcatc
360
tctggacacc cactctacaa cagacaggat gacacagaga acagcccatt ctccagcacc
420
accaacaagg acagcaggga caatgtgtct gtggactaca agcagaccca actttgtatc
480
attggctgtg tgcctgccat tggagaacac tggggcaagg gcaaggcttg taagccaaac
540
aatgtgagca caggagactg tcctccattg gaactggtga acacaccaat tgaggatgga
600
gatatgattg acacaggcta tggagctatg gactttggag ccctccaaga gaccaagtct
660
gaggtgccac tggacatctg tcagagcatc tgtaaatacc ctgactacct ccaaatgagt
720
gctgatgtct atggagacag tatgttcttc tgtctgagga gggaacaact ttttgccaga
780
cacttctgga acaggggagg gatggtggga gatgccatcc ctgcccaact ctacatcaag
840
ggcacagaca tcagggctaa ccctggctcc tctgtctact gtccaagccc atctggcagt
900
atggtgacct ctgacagcca acttttcaac aagccatact ggctgcacaa ggctcaagga
960
cacaacaatg gcatctgttg gcacaaccaa cttttcctga cagtggtgga caccaccagg
1020
agcaccaact tcaccctgag caccagcatt gagtccagca tcccaagcac ctatgaccca
1080
agcaagttca aggaatacac caggcatgtg gaggaatatg acctccaatt catcttccaa
1140
ctttgtactg tgaccctgac cacagatgtg atgagttaca tccacacaat gaactccagc
1200
atcctggaca actggaactt tgctgtggct cctcctccat ctgcctccct ggtggacacc
1260
tacagatacc tccaatctgc tgccatcact tgtcagaagg atgcccctgc ccctgagaag
1320
aaggacccat atgatggact gaagttctgg aatgtggacc tgagggagaa gttctccttg
1380
gaactggacc agtttccact gggcaggaag ttcctgctcc aacttgga
1428
210 88
211 37
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3910 ПВЧ39L1 F2
400 88
aggaagttcc tgctccaact tggagccaga ccaaagc
37
210 89
211 40
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3911 ПВЧ39L1 R2
400 89
ctgtctagat ttacttcctg ctggacttcc tcctcttcac
40
210 90
211 139
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 3912 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ39L1
400 90
aggaagttcc tgctccaact tggagccaga ccaaagccaa ccattggacc aaggaagagg
60
gctgcccctg ccccaaccag cacaccaagc ccaaagaggg tgaagaggag gaagtccagc
120
aggaagtaaa tctagacag
139
210 91
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 3913 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 91
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 92
211 478
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 4501 Последовательность аминокислот aa 1-478 белка L1 ПВЧ типа 45
400 92
Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Ala Gly Asn Lys Gln Ala Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Ala Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Ser Thr Ile Tyr Asn Pro Glu Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Met Glu Ile Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Ile Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Ser Ala His Ala Ala Thr Ala Val Ile Thr Gln Asp Val
130 135 140
Arg Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu
145 150 155 160
Gly Cys Val Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Leu Cys
165 170 175
Lys Pro Ala Gln Leu Gln Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys
180 185 190
Asn Thr Ile Ile Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala
195 200 205
Met Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp
210 215 220
Ile Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala
225 230 235 240
Asp Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu
245 250 255
Phe Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Val Met Gly Asp Thr Val
260 265 270
Pro Thr Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Ser Ala Asn Met Arg Glu Thr
275 280 285
Pro Gly Ser Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Thr Thr
290 295 300
Ser Asp Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln
305 310 315 320
Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val
325 330 335
Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Leu Cys Ala Ser Thr Gln
340 345 350
Asn Pro Val Pro Asn Thr Tyr Asp Pro Thr Lys Phe Lys His Tyr Ser
355 360 365
Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr
370 375 380
Ile Thr Leu Thr Ala Glu Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser
385 390 395 400
Ser Ile Leu Glu Asn Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr
405 410 415
Ser Leu Val Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Val Thr Cys
420 425 430
Gln Lys Asp Thr Thr Pro Pro Glu Lys Gln Asp Pro Tyr Asp Lys Leu
435 440 445
Lys Phe Trp Thr Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ser Asp Leu Asp
450 455 460
Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln Ala Gly Leu
465 470 475
210 93
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 4502 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 93
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 94
211 504
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 4503 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
45
400 94
Met Ala Leu Trp Arg Pro Ser Asp Ser Thr Val Tyr Leu Pro Pro Pro
1 5 10 15
Ser Val Ala Arg Val Val Asn Thr Asp Asp Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Ala Gly Asn Lys Gln Ala Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Ala Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Leu Pro Asp Ser Thr Ile Tyr Asn Pro Glu Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Met Glu Ile Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Ile Gly Leu Ser Gly His Pro Phe Tyr Asn Lys Leu Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Ser Ala His Ala Ala Thr Ala Val Ile Thr Gln Asp Val
130 135 140
Arg Asp Asn Val Ser Val Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Leu
145 150 155 160
Gly Cys Val Pro Ala Ile Gly Glu His Trp Ala Lys Gly Thr Leu Cys
165 170 175
Lys Pro Ala Gln Leu Gln Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Lys
180 185 190
Asn Thr Ile Ile Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Tyr Gly Ala
195 200 205
Met Asp Phe Ser Thr Leu Gln Asp Thr Lys Cys Glu Val Pro Leu Asp
210 215 220
Ile Cys Gln Ser Ile Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met Ser Ala
225 230 235 240
Asp Pro Tyr Gly Asp Ser Met Phe Phe Cys Leu Arg Arg Glu Gln Leu
245 250 255
Phe Ala Arg His Phe Trp Asn Arg Ala Gly Val Met Gly Asp Thr Val
260 265 270
Pro Thr Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Thr Ser Ala Asn Met Arg Glu Thr
275 280 285
Pro Gly Ser Cys Val Tyr Ser Pro Ser Pro Ser Gly Ser Ile Thr Thr
290 295 300
Ser Asp Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Lys Ala Gln
305 310 315 320
Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp His Asn Gln Leu Phe Val Thr Val
325 330 335
Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Leu Cys Ala Ser Thr Gln
340 345 350
Asn Pro Val Pro Asn Thr Tyr Asp Pro Thr Lys Phe Lys His Tyr Ser
355 360 365
Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Thr
370 375 380
Ile Thr Leu Thr Ala Glu Val Met Ser Tyr Ile His Ser Met Asn Ser
385 390 395 400
Ser Ile Leu Glu Asn Trp Asn Phe Gly Val Pro Pro Pro Pro Thr Thr
405 410 415
Ser Leu Val Asp Thr Tyr Arg Phe Val Gln Ser Val Ala Val Thr Cys
420 425 430
Gln Lys Asp Thr Thr Pro Pro Glu Lys Gln Asp Pro Tyr Asp Lys Leu
435 440 445
Lys Phe Trp Thr Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ser Asp Leu Asp
450 455 460
Gln Tyr Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Val Gln Ala Gly Leu Lys Ala
465 470 475 480
Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser
485 490 495
Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
500
210 95
211 1516
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4504 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 45
400 95
atggctctgt ggagaccatc tgacagcaca gtctacctgc ctcctccatc tgtggcaagg
60
gtggtgaaca cagatgacta tgtgagcagg accagcatct tctaccatgc tggctccagc
120
agactgctga cagtgggcaa cccatacttc agggtggtgc caagtggagc aggcaacaag
180
caggctgtgc caaaggtgtc tgcctaccaa tacagggtgt tcagggtggc tctgcctgac
240
ccaaacaagt ttggactgcc tgacagcacc atctacaacc ctgagaccca gagactggtg
300
tgggcttgtg tggggatgga gattggcagg ggacaaccac tgggcattgg actgtctgga
360
cacccattct acaacaaact ggatgacaca gagtctgccc atgctgccac agcagtgatt
420
acccaggatg tgagggacaa tgtgtctgtg gactacaagc agacccaact ttgtatcctg
480
ggctgtgtgc ctgccattgg agaacactgg gctaagggca ccctgtgtaa gcctgcccaa
540
ctccaacctg gagactgtcc tccattggaa ctgaaaaaca ccatcattga ggatggagat
600
atggtggaca caggctatgg agctatggac ttcagcaccc tccaagacac caagtgtgag
660
gtgccactgg acatctgtca gagcatctgt aaataccctg actacctcca aatgagtgct
720
gacccatatg gagacagtat gttcttctgt ctgaggaggg aacaactttt tgccagacac
780
ttctggaaca gggctggagt gatgggagac acagtgccaa cagacctcta catcaagggc
840
acctctgcca atatgaggga gacacctggc tcctgtgtct acagcccaag cccatctggc
900
agcatcacca cctctgacag ccaacttttc aacaagccat actggctgca caaggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggcacaac caactttttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca acctgaccct gtgtgccagc acccagaacc ctgtgccaaa cacctatgac
1080
ccaaccaagt tcaagcacta cagcaggcat gtggaggaat atgacctcca attcatcttc
1140
caactttgta ccatcaccct gacagcagag gtgatgagtt acatccacag tatgaactcc
1200
agcatcttgg agaactggaa ctttggagtg cctcctcctc caaccacctc cctggtggac
1260
acctacaggt ttgtccagtc tgtggctgtg acttgtcaga aggacaccac acctcctgag
1320
aagcaggacc catatgacaa actgaagttc tggacagtgg acctgaaaga gaagttctcc
1380
tctgacctgg accaataccc actgggcagg aagttcctgg tccaggctgg actgaaagcc
1440
aagccaaaac tgaaaagggc tgccccaacc agcaccagga cctcctctgc caagaggaag
1500
aaggtgaaga agtaaa
1516
210 96
211 1552
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4505 Синтетический ген L1 ПВЧ45
400 96
ctgggtacca tggctctgtg gagaccatct gacagcacag tctacctgcc tcctccatct
60
gtggcaaggg tggtgaacac agatgactat gtgagcagga ccagcatctt ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctgac agtgggcaac ccatacttca gggtggtgcc aagtggagca
180
ggcaacaagc aggctgtgcc aaaggtgtct gcctaccaat acagggtgtt cagggtggct
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggactgcct gacagcacca tctacaaccc tgagacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt ggggatggag attggcaggg gacaaccact gggcattgga
360
ctgtctggac acccattcta caacaaactg gatgacacag agtctgccca tgctgccaca
420
gcagtgatta cccaggatgt gagggacaat gtgtctgtgg actacaagca gacccaactt
480
tgtatcctgg gctgtgtgcc tgccattgga gaacactggg ctaagggcac cctgtgtaag
540
cctgcccaac tccaacctgg agactgtcct ccattggaac tgaaaaacac catcattgag
600
gatggagata tggtggacac aggctatgga gctatggact tcagcaccct ccaagacacc
660
aagtgtgagg tgccactgga catctgtcag agcatctgta aataccctga ctacctccaa
720
atgagtgctg acccatatgg agacagtatg ttcttctgtc tgaggaggga acaacttttt
780
gccagacact tctggaacag ggctggagtg atgggagaca cagtgccaac agacctctac
840
atcaagggca cctctgccaa tatgagggag acacctggct cctgtgtcta cagcccaagc
900
ccatctggca gcatcaccac ctctgacagc caacttttca acaagccata ctggctgcac
960
aaggctcaag gacacaacaa tggcatctgt tggcacaacc aactttttgt gacagtggtg
1020
gacaccacca ggagcaccaa cctgaccctg tgtgccagca cccagaaccc tgtgccaaac
1080
acctatgacc caaccaagtt caagcactac agcaggcatg tggaggaata tgacctccaa
1140
ttcatcttcc aactttgtac catcaccctg acagcagagg tgatgagtta catccacagt
1200
atgaactcca gcatcttgga gaactggaac tttggagtgc ctcctcctcc aaccacctcc
1260
ctggtggaca cctacaggtt tgtccagtct gtggctgtga cttgtcagaa ggacaccaca
1320
cctcctgaga agcaggaccc atatgacaaa ctgaagttct ggacagtgga cctgaaagag
1380
aagttctcct ctgacctgga ccaataccca ctgggcagga agttcctggt ccaggctgga
1440
ctgaggagga gaccaaccat tggaccaagg aagagacctg ctgccagcac cagcacagcc
1500
agcagacctg ccaagagggt gaggattagg agcaagaagt aaactcgagc tc
1552
210 97
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4506 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 97
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 98
211 33
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4507 ПВЧ45L1 F1
400 98
cttggtacca tggctctgtg gagaccatct gac
33
210 99
211 32
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4508 ПВЧ45L1 R1
400 99
gcttggcttt cagtccagcc tggaccagga ac
32
210 100
211 1453
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4509 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ45L1
400 100
cttggtacca tggctctgtg gagaccatct gacagcacag tctacctgcc tcctccatct
60
gtggcaaggg tggtgaacac agatgactat gtgagcagga ccagcatctt ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctgac agtgggcaac ccatacttca gggtggtgcc aagtggagca
180
ggcaacaagc aggctgtgcc aaaggtgtct gcctaccaat acagggtgtt cagggtggct
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggactgcct gacagcacca tctacaaccc tgagacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt ggggatggag attggcaggg gacaaccact gggcattgga
360
ctgtctggac acccattcta caacaaactg gatgacacag agtctgccca tgctgccaca
420
gcagtgatta cccaggatgt gagggacaat gtgtctgtgg actacaagca gacccaactt
480
tgtatcctgg gctgtgtgcc tgccattgga gaacactggg ctaagggcac cctgtgtaag
540
cctgcccaac tccaacctgg agactgtcct ccattggaac tgaaaaacac catcattgag
600
gatggagata tggtggacac aggctatgga gctatggact tcagcaccct ccaagacacc
660
aagtgtgagg tgccactgga catctgtcag agcatctgta aataccctga ctacctccaa
720
atgagtgctg acccatatgg agacagtatg ttcttctgtc tgaggaggga acaacttttt
780
gccagacact tctggaacag ggctggagtg atgggagaca cagtgccaac agacctctac
840
atcaagggca cctctgccaa tatgagggag acacctggct cctgtgtcta cagcccaagc
900
ccatctggca gcatcaccac ctctgacagc caacttttca acaagccata ctggctgcac
960
aaggctcaag gacacaacaa tggcatctgt tggcacaacc aactttttgt gacagtggtg
1020
gacaccacca ggagcaccaa cctgaccctg tgtgccagca cccagaaccc tgtgccaaac
1080
acctatgacc caaccaagtt caagcactac agcaggcatg tggaggaata tgacctccaa
1140
ttcatcttcc aactttgtac catcaccctg acagcagagg tgatgagtta catccacagt
1200
atgaactcca gcatcttgga gaactggaac tttggagtgc ctcctcctcc aaccacctcc
1260
ctggtggaca cctacaggtt tgtccagtct gtggctgtga cttgtcagaa ggacaccaca
1320
cctcctgaga agcaggaccc atatgacaaa ctgaagttct ggacagtgga cctgaaagag
1380
aagttctcct ctgacctgga ccaataccca ctgggcagga agttcctggt ccaggctgga
1440
ctgaaagcca agc
1453
210 101
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4510 ПВЧ45L1 F2
400 101
ggctggactg aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 102
211 37
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4511 ПВЧ45L1 R2
400 102
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttggc
37
210 103
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 4512 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ45L1
400 103
ggctggactg aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 104
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 4513 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 104
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 105
211 474
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5101 Последовательность аминокислот aa 1-474 белка L1 ПВЧ типа 51
400 105
Met Ala Leu Trp Arg Thr Asn Asp Ser Lys Val Tyr Leu Pro Pro Ala
1 5 10 15
Pro Val Ser Arg Ile Val Asn Thr Glu Glu Tyr Ile Thr Arg Thr Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Ile Thr Leu Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Pro Ile Pro Lys Thr Ser Thr Arg Ala Ala Ile Pro Lys Val
50 55 60
Ser Ala Phe Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro Asn
65 70 75 80
Lys Phe Gly Leu Pro Asp Pro Asn Leu Tyr Asn Pro Asp Thr Asp Arg
85 90 95
Leu Val Trp Gly Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu
100 105 110
Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Leu Phe Asn Lys Tyr Asp Asp Thr
115 120 125
Glu Asn Ser Arg Ile Ala Asn Gly Asn Ala Gln Gln Asp Val Arg Asp
130 135 140
Asn Thr Ser Val Asp Asn Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Ile Gly Cys
145 150 155 160
Ala Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Ile Gly Thr Thr Cys Lys Asn
165 170 175
Thr Pro Val Pro Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Val Ser Ser
180 185 190
Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Ala Ala Leu Gln Ala Thr Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile Ser
210 215 220
Gln Ser Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ser Ala Asp Thr
225 230 235 240
Tyr Gly Asn Ser Met Phe Phe His Leu Arg Arg Glu Gln Ile Phe Ala
245 250 255
Arg His Tyr Tyr Asn Lys Leu Val Gly Val Gly Glu Asp Ile Pro Asn
260 265 270
Asp Tyr Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Asn Gly Arg Asp Pro Ile Glu Ser
275 280 285
Tyr Ile Tyr Ser Ala Thr Pro Ser Gly Ser Met Ile Thr Ser Asp Ser
290 295 300
Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Asn Asn Gln Leu Phe Ile Thr Cys Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Ser Thr Ala Thr Ala Ala Val Ser
340 345 350
Pro Thr Phe Thr Pro Ser Asn Phe Lys Gln Tyr Ile Arg His Gly Glu
355 360 365
Glu Tyr Glu Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr
370 375 380
Thr Glu Val Met Ala Tyr Leu His Thr Met Asp Pro Thr Ile Leu Glu
385 390 395 400
Gln Trp Asn Phe Gly Leu Thr Leu Pro Pro Ser Ala Ser Leu Glu Asp
405 410 415
Ala Tyr Arg Phe Val Arg Asn Ala Ala Thr Ser Cys Gln Lys Asp Thr
420 425 430
Pro Pro Gln Ala Lys Pro Asp Pro Leu Ala Lys Tyr Lys Phe Trp Asp
435 440 445
Val Asp Leu Lys Glu Arg Phe Ser Leu Asp Leu Asp Gln Phe Ala Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Val Gly Val
465 470
210 106
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5102 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 106
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 107
211 500
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 5103 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
51
400 107
Met Ala Leu Trp Arg Thr Asn Asp Ser Lys Val Tyr Leu Pro Pro Ala
1 5 10 15
Pro Val Ser Arg Ile Val Asn Thr Glu Glu Tyr Ile Thr Arg Thr Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Ile Thr Leu Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Pro Ile Pro Lys Thr Ser Thr Arg Ala Ala Ile Pro Lys Val
50 55 60
Ser Ala Phe Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Gln Leu Pro Asp Pro Asn
65 70 75 80
Lys Phe Gly Leu Pro Asp Pro Asn Leu Tyr Asn Pro Asp Thr Asp Arg
85 90 95
Leu Val Trp Gly Cys Val Gly Val Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu
100 105 110
Gly Val Gly Leu Ser Gly His Pro Leu Phe Asn Lys Tyr Asp Asp Thr
115 120 125
Glu Asn Ser Arg Ile Ala Asn Gly Asn Ala Gln Gln Asp Val Arg Asp
130 135 140
Asn Thr Ser Val Asp Asn Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Ile Gly Cys
145 150 155 160
Ala Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Ile Gly Thr Thr Cys Lys Asn
165 170 175
Thr Pro Val Pro Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Val Ser Ser
180 185 190
Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Ala Ala Leu Gln Ala Thr Lys Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile Ser
210 215 220
Gln Ser Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ser Ala Asp Thr
225 230 235 240
Tyr Gly Asn Ser Met Phe Phe His Leu Arg Arg Glu Gln Ile Phe Ala
245 250 255
Arg His Tyr Tyr Asn Lys Leu Val Gly Val Gly Glu Asp Ile Pro Asn
260 265 270
Asp Tyr Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Asn Gly Arg Asp Pro Ile Glu Ser
275 280 285
Tyr Ile Tyr Ser Ala Thr Pro Ser Gly Ser Met Ile Thr Ser Asp Ser
290 295 300
Gln Ile Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu His Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Asn Asn Gln Leu Phe Ile Thr Cys Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Leu Thr Ile Ser Thr Ala Thr Ala Ala Val Ser
340 345 350
Pro Thr Phe Thr Pro Ser Asn Phe Lys Gln Tyr Ile Arg His Gly Glu
355 360 365
Glu Tyr Glu Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr
370 375 380
Thr Glu Val Met Ala Tyr Leu His Thr Met Asp Pro Thr Ile Leu Glu
385 390 395 400
Gln Trp Asn Phe Gly Leu Thr Leu Pro Pro Ser Ala Ser Leu Glu Asp
405 410 415
Ala Tyr Arg Phe Val Arg Asn Ala Ala Thr Ser Cys Gln Lys Asp Thr
420 425 430
Pro Pro Gln Ala Lys Pro Asp Pro Leu Ala Lys Tyr Lys Phe Trp Asp
435 440 445
Val Asp Leu Lys Glu Arg Phe Ser Leu Asp Leu Asp Gln Phe Ala Leu
450 455 460
Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Val Gly Val Lys Ala Lys Pro Lys Leu
465 470 475 480
Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys
485 490 495
Lys Val Lys Lys
500
210 108
211 1504
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5104 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 51
400 108
atggctctgt ggaggaccaa tgacagcaag gtctacctgc ctcctgcccc tgtgagcagg
60
attgtgaaca cagaggaata catcaccagg acaggcatct actactatgc tggctccagc
120
agactgatta ccctgggaca cccatacttt ccaatcccaa agaccagcac cagggctgcc
180
atcccaaagg tgtctgcctt ccaatacagg gtgttcaggg tccaacttcc tgacccaaac
240
aagtttggac tgcctgaccc aaacctctac aaccctgaca cagacagact ggtgtggggc
300
tgtgtgggag tggaggtggg caggggacaa ccactgggag tgggactgtc tggacaccca
360
ctgttcaaca aatatgatga cacagagaac agcaggattg ccaatggcaa tgcccaacag
420
gatgtgaggg acaacacctc tgtggacaac aagcagaccc aactttgtat cattggctgt
480
gcccctccaa ttggagaaca ctggggcatt ggcaccactt gtaagaacac acctgtgcct
540
cctggagact gtcctccatt ggaactggtg tcctctgtga ttcaggatgg agatatgatt
600
gacacaggct ttggagctat ggactttgct gccctccaag ccaccaagtc tgatgtgcca
660
ctggacatca gccagtctgt gtgtaaatac cctgactacc tgaaaatgag tgctgacacc
720
tatggcaaca gtatgttctt ccacctgagg agggaacaga tttttgccag acactactac
780
aacaaactgg tgggagtggg agaggacatc ccaaatgact actacatcaa gggctctggc
840
aatggcaggg acccaattga gtcctacatc tactctgcca caccatctgg cagtatgatt
900
acctctgaca gccagatttt caacaagcca tactggctgc acagggctca aggacacaac
960
aatggcatct gttggaacaa ccaacttttc atcacttgtg tggacaccac caggagcacc
1020
aacctgacca tcagcacagc cacagcagca gtgagcccaa ccttcacacc aagcaacttc
1080
aagcaataca tcagacatgg agaggaatat gaactccaat tcatcttcca actttgtaag
1140
attaccctga ccacagaggt gatggcttac ctgcacacaa tggacccaac catcttggaa
1200
cagtggaact ttggactgac cctgcctcca tctgcctcct tggaggatgc ctacaggttt
1260
gtgaggaatg ctgccacctc ctgtcagaag gacacacctc cacaggctaa gcctgaccca
1320
ctggctaaat acaagttctg ggatgtggac ctgaaagaga ggttctccct ggacctggac
1380
cagtttgccc tgggcaggaa gttcctgctc caagtgggag tcaaagccaa gccaaaactg
1440
aaaagggctg ccccaaccag caccaggacc tcctctgcca agaggaagaa ggtgaagaag
1500
taaa
1504
210 109
211 1534
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5105 Синтетический ген L1 ПВЧ51
400 109
ctgggtacca tggctctgtg gaggaccaat gacagcaagg tctacctgcc tcctgcccct
60
gtgagcagga ttgtgaacac agaggaatac atcaccagga caggcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgattac cctgggacac ccatactttc caatcccaaa gaccagcacc
180
agggctgcca tcccaaaggt gtctgccttc caatacaggg tgttcagggt ccaacttcct
240
gacccaaaca agtttggact gcctgaccca aacctctaca accctgacac agacagactg
300
gtgtggggct gtgtgggagt ggaggtgggc aggggacaac cactgggagt gggactgtct
360
ggacacccac tgttcaacaa atatgatgac acagagaaca gcaggattgc caatggcaat
420
gcccaacagg atgtgaggga caacacctct gtggacaaca agcagaccca actttgtatc
480
attggctgtg cccctccaat tggagaacac tggggcattg gcaccacttg taagaacaca
540
cctgtgcctc ctggagactg tcctccattg gaactggtgt cctctgtgat tcaggatgga
600
gatatgattg acacaggctt tggagctatg gactttgctg ccctccaagc caccaagtct
660
gatgtgccac tggacatcag ccagtctgtg tgtaaatacc ctgactacct gaaaatgagt
720
gctgacacct atggcaacag tatgttcttc cacctgagga gggaacagat ttttgccaga
780
cactactaca acaaactggt gggagtggga gaggacatcc caaatgacta ctacatcaag
840
ggctctggca atggcaggga cccaattgag tcctacatct actctgccac accatctggc
900
agtatgatta cctctgacag ccagattttc aacaagccat actggctgca cagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggaacaac caacttttca tcacttgtgt ggacaccacc
1020
aggagcacca acctgaccat cagcacagcc acagcagcag tgagcccaac cttcacacca
1080
agcaacttca agcaatacat cagacatgga gaggaatatg aactccaatt catcttccaa
1140
ctttgtaaga ttaccctgac cacagaggtg atggcttacc tgcacacaat ggacccaacc
1200
atcttggaac agtggaactt tggactgacc ctgcctccat ctgcctcctt ggaggatgcc
1260
tacaggtttg tgaggaatgc tgccacctcc tgtcagaagg acacacctcc acaggctaag
1320
cctgacccac tggctaaata caagttctgg gatgtggacc tgaaagagag gttctccctg
1380
gacctggacc agtttgccct gggcaggaag ttcctgctcc aagtgggagt ccagaggaag
1440
ccaagacctg gactgaaaag acctgcctcc tctgcctcct cctcctcctc ctcctctgcc
1500
aagaggaaga gggtgaagaa gtaaactcga gctc
1534
210 110
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5106 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 110
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 111
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5107 ПВЧ51L1 F1
400 111
cttggtacca tggctctgtg gaggaccaat gaca
34
210 112
211 32
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5108 ПВЧ51L1 R1
400 112
gcttggcttt gactcccact tggagcagga ac
32
210 113
211 1441
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5109 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ51L1
400 113
cttggtacca tggctctgtg gaggaccaat gacagcaagg tctacctgcc tcctgcccct
60
gtgagcagga ttgtgaacac agaggaatac atcaccagga caggcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgattac cctgggacac ccatactttc caatcccaaa gaccagcacc
180
agggctgcca tcccaaaggt gtctgccttc caatacaggg tgttcagggt ccaacttcct
240
gacccaaaca agtttggact gcctgaccca aacctctaca accctgacac agacagactg
300
gtgtggggct gtgtgggagt ggaggtgggc aggggacaac cactgggagt gggactgtct
360
ggacacccac tgttcaacaa atatgatgac acagagaaca gcaggattgc caatggcaat
420
gcccaacagg atgtgaggga caacacctct gtggacaaca agcagaccca actttgtatc
480
attggctgtg cccctccaat tggagaacac tggggcattg gcaccacttg taagaacaca
540
cctgtgcctc ctggagactg tcctccattg gaactggtgt cctctgtgat tcaggatgga
600
gatatgattg acacaggctt tggagctatg gactttgctg ccctccaagc caccaagtct
660
gatgtgccac tggacatcag ccagtctgtg tgtaaatacc ctgactacct gaaaatgagt
720
gctgacacct atggcaacag tatgttcttc cacctgagga gggaacagat ttttgccaga
780
cactactaca acaaactggt gggagtggga gaggacatcc caaatgacta ctacatcaag
840
ggctctggca atggcaggga cccaattgag tcctacatct actctgccac accatctggc
900
agtatgatta cctctgacag ccagattttc aacaagccat actggctgca cagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggaacaac caacttttca tcacttgtgt ggacaccacc
1020
aggagcacca acctgaccat cagcacagcc acagcagcag tgagcccaac cttcacacca
1080
agcaacttca agcaatacat cagacatgga gaggaatatg aactccaatt catcttccaa
1140
ctttgtaaga ttaccctgac cacagaggtg atggcttacc tgcacacaat ggacccaacc
1200
atcttggaac agtggaactt tggactgacc ctgcctccat ctgcctcctt ggaggatgcc
1260
tacaggtttg tgaggaatgc tgccacctcc tgtcagaagg acacacctcc acaggctaag
1320
cctgacccac tggctaaata caagttctgg gatgtggacc tgaaagagag gttctccctg
1380
gacctggacc agtttgccct gggcaggaag ttcctgctcc aagtgggagt caaagccaag
1440
c
1441
210 114
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5110 ПВЧ51L1 F2
400 114
agtgggagtc aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 115
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5111 ПВЧ51L1 R2
400 115
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 116
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5112 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ51L1
400 116
agtgggagtc aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 117
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5113 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 117
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 118
211 478
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5201 Последовательность аминокислот aa 1-478 белка L1 ПВЧ типа 52
400 118
Met Ser Val Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Ser Ile Lys Asn Thr Ser Ser Gly Asn Gly Lys Lys Val Leu
50 55 60
Val Pro Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile Lys Leu
65 70 75 80
Pro Asp Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro
85 90 95
Glu Thr Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Ile Gly Arg
100 105 110
Gly Gln Pro Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys
115 120 125
Phe Asp Asp Thr Glu Thr Ser Asn Lys Tyr Ala Gly Lys Pro Gly Ile
130 135 140
Asp Asn Arg Glu Cys Leu Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys
145 150 155 160
Ile Leu Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr
165 170 175
Pro Cys Asn Asn Asn Ser Gly Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Gln
180 185 190
Leu Ile Asn Ser Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe
195 200 205
Gly Cys Met Asp Phe Asn Thr Leu Gln Ala Ser Lys Ser Asp Val Pro
210 215 220
Ile Asp Ile Cys Ser Ser Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met
225 230 235 240
Ala Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu
245 250 255
Gln Met Phe Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ala Gly Thr Leu Gly Asp
260 265 270
Pro Val Pro Gly Asp Leu Tyr Ile Gln Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr
275 280 285
Ala Thr Val Gln Ser Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met
290 295 300
Val Thr Ser Glu Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg
305 310 315 320
Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val
325 330 335
Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Thr Leu Cys Ala Glu
340 345 350
Val Lys Lys Glu Ser Thr Tyr Lys Asn Glu Asn Phe Lys Glu Tyr Leu
355 360 365
Arg His Gly Glu Glu Phe Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys
370 375 380
Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Lys Met Asp Ala
385 390 395 400
Thr Ile Leu Glu Asp Trp Gln Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Ala
405 410 415
Ser Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Thr Ala Ile Thr Cys
420 425 430
Gln Lys Asn Thr Pro Pro Lys Gly Lys Glu Asp Pro Leu Lys Asp Tyr
435 440 445
Met Phe Trp Glu Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp
450 455 460
Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu
465 470 475
210 119
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5202 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 119
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 120
211 504
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 5203 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
52
400 120
Met Ser Val Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Thr Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Phe Ser Ile Lys Asn Thr Ser Ser Gly Asn Gly Lys Lys Val Leu
50 55 60
Val Pro Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Ile Lys Leu
65 70 75 80
Pro Asp Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro
85 90 95
Glu Thr Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Thr Gly Leu Glu Ile Gly Arg
100 105 110
Gly Gln Pro Leu Gly Val Gly Ile Ser Gly His Pro Leu Leu Asn Lys
115 120 125
Phe Asp Asp Thr Glu Thr Ser Asn Lys Tyr Ala Gly Lys Pro Gly Ile
130 135 140
Asp Asn Arg Glu Cys Leu Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys
145 150 155 160
Ile Leu Gly Cys Lys Pro Pro Ile Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Thr
165 170 175
Pro Cys Asn Asn Asn Ser Gly Asn Pro Gly Asp Cys Pro Pro Leu Gln
180 185 190
Leu Ile Asn Ser Val Ile Gln Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe
195 200 205
Gly Cys Met Asp Phe Asn Thr Leu Gln Ala Ser Lys Ser Asp Val Pro
210 215 220
Ile Asp Ile Cys Ser Ser Val Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Gln Met
225 230 235 240
Ala Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu
245 250 255
Gln Met Phe Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ala Gly Thr Leu Gly Asp
260 265 270
Pro Val Pro Gly Asp Leu Tyr Ile Gln Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr
275 280 285
Ala Thr Val Gln Ser Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met
290 295 300
Val Thr Ser Glu Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg
305 310 315 320
Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val
325 330 335
Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Thr Leu Cys Ala Glu
340 345 350
Val Lys Lys Glu Ser Thr Tyr Lys Asn Glu Asn Phe Lys Glu Tyr Leu
355 360 365
Arg His Gly Glu Glu Phe Asp Leu Gln Phe Ile Phe Gln Leu Cys Lys
370 375 380
Ile Thr Leu Thr Ala Asp Val Met Thr Tyr Ile His Lys Met Asp Ala
385 390 395 400
Thr Ile Leu Glu Asp Trp Gln Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Ala
405 410 415
Ser Leu Glu Asp Thr Tyr Arg Phe Val Thr Ser Thr Ala Ile Thr Cys
420 425 430
Gln Lys Asn Thr Pro Pro Lys Gly Lys Glu Asp Pro Leu Lys Asp Tyr
435 440 445
Met Phe Trp Glu Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp
450 455 460
Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala
465 470 475 480
Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser
485 490 495
Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
500
210 121
211 1516
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5204 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 52
400 121
atgagcgtgt ggaggcccag cgaggccacc gtgtacctgc cccccgtgcc cgtgagcaag
60
gtggtgagca ccgacgagta cgtgagcagg accagcatct actactacgc cggcagcagc
120
aggctgctga ccgtgggcca cccctacttc agcatcaaga acaccagcag cggcaacggc
180
aagaaggtgc tggtgcccaa ggtgagcggc ctgcagtaca gggtgttcag gatcaagctg
240
cccgacccca acaagttcgg cttccccgac accagcttct acaaccccga gacccagagg
300
ctggtgtggg cctgcaccgg cctggagatc ggcaggggcc agcccctggg cgtgggcatc
360
agcggccacc ccctgctgaa caagttcgac gacaccgaga ccagcaacaa gtacgccggc
420
aagcccggca tcgacaacag ggagtgcctg agcatggact acaagcagac ccagctgtgc
480
atcctgggct gcaagccccc catcggcgag cactggggca agggcacccc ctgcaacaac
540
aacagcggca accccggcga ctgccccccc ctgcagctga tcaacagcgt gatccaggac
600
ggcgacatgg tggacaccgg cttcggctgc atggacttca acaccctgca ggccagcaag
660
agcgacgtgc ccatcgacat ctgcagcagc gtgtgcaagt accccgacta cctgcagatg
720
gccagcgagc cctacggcga cagcctgttc ttcttcctga ggagggagca gatgttcgtg
780
aggcacttct tcaacagggc cggcaccctg ggcgaccccg tgcccggcga cctgtacatc
840
cagggcagca acagcggcaa caccgccacc gtgcagagca gcgccttctt ccccaccccc
900
agcggcagca tggtgaccag cgagagccag ctgttcaaca agccctactg gctgcagagg
960
gcccagggcc acaacaacgg catctgctgg ggcaaccagc tgttcgtgac cgtggtggac
1020
accaccagga gcaccaacat gaccctgtgc gccgaggtga agaaggagag cacctacaag
1080
aacgagaact tcaaggagta cctgaggcac ggcgaggagt tcgacctgca gttcatcttc
1140
cagctgtgca agatcaccct gaccgccgac gtgatgacct acatccacaa gatggacgcc
1200
accatcctgg aggactggca gttcggcctg accccccccc ccagcgccag cctggaggac
1260
acctacaggt tcgtgaccag caccgccatc acctgccaga agaacacccc ccccaagggc
1320
aaggaggacc ccctgaagga ctacatgttc tgggaggtgg acctgaagga gaagttcagc
1380
gccgacctgg accagttccc cctgggcagg aagttcctgc tgcaggccgg cctgaaagcc
1440
aagccaaaac tgaaaagggc tgccccaacc agcaccagga cctcctctgc caagaggaag
1500
aaggtgaaga agtaaa
1516
210 122
211 1531
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5205 Синтетический ген L1 ПВЧ52
400 122
ctgggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgagcagga ccagcatcta ctactacgcc
120
ggcagcagca ggctgctgac cgtgggccac ccctacttca gcatcaagaa caccagcagc
180
ggcaacggca agaaggtgct ggtgcccaag gtgagcggcc tgcagtacag ggtgttcagg
240
atcaagctgc ccgaccccaa caagttcggc ttccccgaca ccagcttcta caaccccgag
300
acccagaggc tggtgtgggc ctgcaccggc ctggagatcg gcaggggcca gcccctgggc
360
gtgggcatca gcggccaccc cctgctgaac aagttcgacg acaccgagac cagcaacaag
420
tacgccggca agcccggcat cgacaacagg gagtgcctga gcatggacta caagcagacc
480
cagctgtgca tcctgggctg caagcccccc atcggcgagc actggggcaa gggcaccccc
540
tgcaacaaca acagcggcaa ccccggcgac tgcccccccc tgcagctgat caacagcgtg
600
atccaggacg gcgacatggt ggacaccggc ttcggctgca tggacttcaa caccctgcag
660
gccagcaaga gcgacgtgcc catcgacatc tgcagcagcg tgtgcaagta ccccgactac
720
ctgcagatgg ccagcgagcc ctacggcgac agcctgttct tcttcctgag gagggagcag
780
atgttcgtga ggcacttctt caacagggcc ggcaccctgg gcgaccccgt gcccggcgac
840
ctgtacatcc agggcagcaa cagcggcaac accgccaccg tgcagagcag cgccttcttc
900
cccaccccca gcggcagcat ggtgaccagc gagagccagc tgttcaacaa gccctactgg
960
ctgcagaggg cccagggcca caacaacggc atctgctggg gcaaccagct gttcgtgacc
1020
gtggtggaca ccaccaggag caccaacatg accctgtgcg ccgaggtgaa gaaggagagc
1080
acctacaaga acgagaactt caaggagtac ctgaggcacg gcgaggagtt cgacctgcag
1140
ttcatcttcc agctgtgcaa gatcaccctg accgccgacg tgatgaccta catccacaag
1200
atggacgcca ccatcctgga ggactggcag ttcggcctga cccccccccc cagcgccagc
1260
ctggaggaca cctacaggtt cgtgaccagc accgccatca cctgccagaa gaacaccccc
1320
cccaagggca aggaggaccc cctgaaggac tacatgttct gggaggtgga cctgaaggag
1380
aagttcagcg ccgacctgga ccagttcccc ctgggcagga agttcctgct gcaggccggc
1440
ctgcaggcca ggcccaagct gaagaggccc gccagcagcg cccccaggac cagcaccaag
1500
aagaagaagg tgaagaggta aactcgagct c
1531
210 123
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5206 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 123
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 124
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5207 ПВЧ52L1 F1
400 124
cttggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gagg
34
210 125
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5208 ПВЧ52L1 R1
400 125
gcttggcttt caggccggcc tgcagcagga acttc
35
210 126
211 1453
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5209 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ52L1
400 126
cttggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgagcagga ccagcatcta ctactacgcc
120
ggcagcagca ggctgctgac cgtgggccac ccctacttca gcatcaagaa caccagcagc
180
ggcaacggca agaaggtgct ggtgcccaag gtgagcggcc tgcagtacag ggtgttcagg
240
atcaagctgc ccgaccccaa caagttcggc ttccccgaca ccagcttcta caaccccgag
300
acccagaggc tggtgtgggc ctgcaccggc ctggagatcg gcaggggcca gcccctgggc
360
gtgggcatca gcggccaccc cctgctgaac aagttcgacg acaccgagac cagcaacaag
420
tacgccggca agcccggcat cgacaacagg gagtgcctga gcatggacta caagcagacc
480
cagctgtgca tcctgggctg caagcccccc atcggcgagc actggggcaa gggcaccccc
540
tgcaacaaca acagcggcaa ccccggcgac tgcccccccc tgcagctgat caacagcgtg
600
atccaggacg gcgacatggt ggacaccggc ttcggctgca tggacttcaa caccctgcag
660
gccagcaaga gcgacgtgcc catcgacatc tgcagcagcg tgtgcaagta ccccgactac
720
ctgcagatgg ccagcgagcc ctacggcgac agcctgttct tcttcctgag gagggagcag
780
atgttcgtga ggcacttctt caacagggcc ggcaccctgg gcgaccccgt gcccggcgac
840
ctgtacatcc agggcagcaa cagcggcaac accgccaccg tgcagagcag cgccttcttc
900
cccaccccca gcggcagcat ggtgaccagc gagagccagc tgttcaacaa gccctactgg
960
ctgcagaggg cccagggcca caacaacggc atctgctggg gcaaccagct gttcgtgacc
1020
gtggtggaca ccaccaggag caccaacatg accctgtgcg ccgaggtgaa gaaggagagc
1080
acctacaaga acgagaactt caaggagtac ctgaggcacg gcgaggagtt cgacctgcag
1140
ttcatcttcc agctgtgcaa gatcaccctg accgccgacg tgatgaccta catccacaag
1200
atggacgcca ccatcctgga ggactggcag ttcggcctga cccccccccc cagcgccagc
1260
ctggaggaca cctacaggtt cgtgaccagc accgccatca cctgccagaa gaacaccccc
1320
cccaagggca aggaggaccc cctgaaggac tacatgttct gggaggtgga cctgaaggag
1380
aagttcagcg ccgacctgga ccagttcccc ctgggcagga agttcctgct gcaggccggc
1440
ctgaaagcca agc
1453
210 127
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5210 ПВЧ52L1 F2
400 127
ggccggcctg aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 128
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5211 ПВЧ52L1 R2
400 128
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 129
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5212 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ52L1
400 129
ggccggcctg aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 130
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5213 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 130
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 131
211 467
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5601 Последовательность аминокислот aa 1-467 белка L1 ПВЧ типа 56
400 131
Met Ala Thr Trp Arg Pro Ser Glu Asn Lys Val Tyr Leu Pro Pro Thr
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ser Tyr Val Lys Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ser Val Thr Lys Asp Asn Thr Lys Thr Asn Ile Pro Lys Val
50 55 60
Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp Pro Asn
65 70 75 80
Lys Phe Gly Leu Pro Asp Thr Asn Ile Tyr Asn Pro Asp Gln Glu Arg
85 90 95
Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu
100 105 110
Gly Ala Gly Leu Ser Gly His Pro Leu Phe Asn Arg Leu Asp Asp Thr
115 120 125
Glu Ser Ser Asn Leu Ala Asn Asn Asn Val Ile Glu Asp Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Ile Ser Val Asp Gly Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Val Gly Cys
145 150 155 160
Thr Pro Ala Met Gly Glu His Trp Thr Lys Gly Ala Val Cys Lys Ser
165 170 175
Thr Gln Val Thr Thr Gly Asp Cys Pro Pro Leu Ala Leu Ile Asn Thr
180 185 190
Pro Ile Glu Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Lys Val Leu Gln Glu Ser Lys Ala Glu Val Pro Leu Asp Ile Val
210 215 220
Gln Ser Thr Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ser Ala Asp Ala
225 230 235 240
Tyr Gly Asp Ser Met Trp Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe Ala
245 250 255
Arg His Tyr Phe Asn Arg Ala Gly Lys Val Gly Glu Thr Ile Pro Ala
260 265 270
Glu Leu Tyr Leu Lys Gly Ser Asn Gly Arg Glu Pro Pro Pro Ser Ser
275 280 285
Val Tyr Val Ala Thr Pro Ser Gly Ser Met Ile Thr Ser Glu Ala Gln
290 295 300
Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn Asn
305 310 315 320
Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr
325 330 335
Arg Ser Thr Asn Met Thr Ile Ser Thr Ala Thr Glu Gln Leu Ser Lys
340 345 350
Tyr Asp Ala Arg Lys Ile Asn Gln Tyr Leu Arg His Val Glu Glu Tyr
355 360 365
Glu Leu Gln Phe Val Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Ser Ala Glu
370 375 380
Val Met Ala Tyr Leu His Asn Met Asn Ala Asn Leu Leu Glu Asp Trp
385 390 395 400
Asn Ile Gly Leu Ser Pro Pro Val Ala Thr Ser Leu Glu Asp Lys Tyr
405 410 415
Arg Tyr Val Arg Ser Thr Ala Ile Thr Cys Gln Arg Glu Gln Pro Pro
420 425 430
Thr Glu Lys Gln Asp Pro Leu Ala Lys Tyr Lys Phe Trp Asp Val Asn
435 440 445
Leu Gln Asp Ser Phe Ser Thr Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg
450 455 460
Lys Phe Leu
465
210 132
211 31
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5602 Последовательность аминокислот aa 469-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 132
Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25 30
210 133
211 498
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 5603 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
56
400 133
Met Ala Thr Trp Arg Pro Ser Glu Asn Lys Val Tyr Leu Pro Pro Thr
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ala Thr Asp Ser Tyr Val Lys Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Phe Tyr His Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly His Pro
35 40 45
Tyr Tyr Ser Val Thr Lys Asp Asn Thr Lys Thr Asn Ile Pro Lys Val
50 55 60
Ser Ala Tyr Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp Pro Asn
65 70 75 80
Lys Phe Gly Leu Pro Asp Thr Asn Ile Tyr Asn Pro Asp Gln Glu Arg
85 90 95
Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Val Gly Arg Gly Gln Pro Leu
100 105 110
Gly Ala Gly Leu Ser Gly His Pro Leu Phe Asn Arg Leu Asp Asp Thr
115 120 125
Glu Ser Ser Asn Leu Ala Asn Asn Asn Val Ile Glu Asp Ser Arg Asp
130 135 140
Asn Ile Ser Val Asp Gly Lys Gln Thr Gln Leu Cys Ile Val Gly Cys
145 150 155 160
Thr Pro Ala Met Gly Glu His Trp Thr Lys Gly Ala Val Cys Lys Ser
165 170 175
Thr Gln Val Thr Thr Gly Asp Cys Pro Pro Leu Ala Leu Ile Asn Thr
180 185 190
Pro Ile Glu Asp Gly Asp Met Ile Asp Thr Gly Phe Gly Ala Met Asp
195 200 205
Phe Lys Val Leu Gln Glu Ser Lys Ala Glu Val Pro Leu Asp Ile Val
210 215 220
Gln Ser Thr Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ser Ala Asp Ala
225 230 235 240
Tyr Gly Asp Ser Met Trp Phe Tyr Leu Arg Arg Glu Gln Leu Phe Ala
245 250 255
Arg His Tyr Phe Asn Arg Ala Gly Lys Val Gly Glu Thr Ile Pro Ala
260 265 270
Glu Leu Tyr Leu Lys Gly Ser Asn Gly Arg Glu Pro Pro Pro Ser Ser
275 280 285
Val Tyr Val Ala Thr Pro Ser Gly Ser Met Ile Thr Ser Glu Ala Gln
290 295 300
Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn Asn
305 310 315 320
Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr
325 330 335
Arg Ser Thr Asn Met Thr Ile Ser Thr Ala Thr Glu Gln Leu Ser Lys
340 345 350
Tyr Asp Ala Arg Lys Ile Asn Gln Tyr Leu Arg His Val Glu Glu Tyr
355 360 365
Glu Leu Gln Phe Val Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Ser Ala Glu
370 375 380
Val Met Ala Tyr Leu His Asn Met Asn Ala Asn Leu Leu Glu Asp Trp
385 390 395 400
Asn Ile Gly Leu Ser Pro Pro Val Ala Thr Ser Leu Glu Asp Lys Tyr
405 410 415
Arg Tyr Val Arg Ser Thr Ala Ile Thr Cys Gln Arg Glu Gln Pro Pro
420 425 430
Thr Glu Lys Gln Asp Pro Leu Ala Lys Tyr Lys Phe Trp Asp Val Asn
435 440 445
Leu Gln Asp Ser Phe Ser Thr Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg
450 455 460
Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg
465 470 475 480
Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val
485 490 495
Lys Lys
210 134
211 1498
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5604 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 56
400 134
atggctacct ggagaccatc tgagaacaag gtctacctgc ctccaacacc tgtgagcaag
60
gtggtggcta cagactccta tgtgaagagg accagcatct tctaccatgc tggctccagc
120
agactgctgg ctgtgggaca cccatactac tctgtgacca aggacaacac caagaccaac
180
atcccaaagg tgtctgccta ccaatacagg gtgttcaggg tgagactgcc tgacccaaac
240
aagtttggac tgcctgacac caacatctac aaccctgacc aggagagact ggtgtgggct
300
tgtgtgggat tggaggtggg caggggacaa ccactgggag caggactgtc tggacaccca
360
ctgttcaaca gactggatga cacagagtcc agcaacctgg ctaacaacaa tgtgattgag
420
gacagcaggg acaacatctc tgtggatggc aagcagaccc aactttgtat tgtgggctgt
480
actcctgcta tgggagaaca ctggaccaag ggagcagtgt gtaagagcac ccaggtgacc
540
acaggagact gtcctccact ggctctgata aacacaccaa ttgaggatgg agatatgatt
600
gacacaggct ttggagctat ggacttcaag gtgctccaag agagcaaggc tgaggtgcca
660
ctggacattg tccagagcac ttgtaaatac cctgactacc tgaaaatgag tgctgatgcc
720
tatggagaca gtatgtggtt ctacctgagg agggaacaac tttttgccag acactacttc
780
aacagggctg gcaaggtggg agagaccatc cctgctgaac tctacctgaa aggcagcaat
840
ggcagggaac ctcctccatc ctctgtctat gtggctacac catctggcag tatgattacc
900
tctgaggctc aacttttcaa caagccatac tggctccaaa gggctcaagg acacaacaat
960
ggcatctgtt ggggcaacca actttttgtg acagtggtgg acaccaccag gagcaccaat
1020
atgaccatca gcacagccac agaacaactt agcaaatatg atgccaggaa gataaaccaa
1080
tacctgaggc atgtggagga atatgaactc caatttgtgt tccaactttg taagattacc
1140
ctgtctgctg aggtgatggc ttacctgcac aatatgaatg ccaacctgtt ggaggactgg
1200
aacattggac tgagccctcc tgtggctacc tccttggagg acaaatacag atatgtgagg
1260
agcacagcca tcacttgtca gagggaacaa cctccaacag agaagcagga cccactggct
1320
aaatacaagt tctgggatgt gaacctccaa gactccttca gcacagacct ggaccagttt
1380
ccactgggca ggaagttcct gctccaagca ggactgaaag ccaagccaaa actgaaaagg
1440
gctgccccaa ccagcaccag gacctcctct gccaagagga agaaggtgaa gaagtaaa
1498
210 135
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5605 Синтетический ген L1 ПВЧ56
400 135
ctgggtacca tggctacctg gagaccatct gagaacaagg tctacctgcc tccaacacct
60
gtgagcaagg tggtggctac agactcctat gtgaagagga ccagcatctt ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactact ctgtgaccaa ggacaacacc
180
aagaccaaca tcccaaaggt gtctgcctac caatacaggg tgttcagggt gagactgcct
240
gacccaaaca agtttggact gcctgacacc aacatctaca accctgacca ggagagactg
300
gtgtgggctt gtgtgggatt ggaggtgggc aggggacaac cactgggagc aggactgtct
360
ggacacccac tgttcaacag actggatgac acagagtcca gcaacctggc taacaacaat
420
gtgattgagg acagcaggga caacatctct gtggatggca agcagaccca actttgtatt
480
gtgggctgta ctcctgctat gggagaacac tggaccaagg gagcagtgtg taagagcacc
540
caggtgacca caggagactg tcctccactg gctctgataa acacaccaat tgaggatgga
600
gatatgattg acacaggctt tggagctatg gacttcaagg tgctccaaga gagcaaggct
660
gaggtgccac tggacattgt ccagagcact tgtaaatacc ctgactacct gaaaatgagt
720
gctgatgcct atggagacag tatgtggttc tacctgagga gggaacaact ttttgccaga
780
cactacttca acagggctgg caaggtggga gagaccatcc ctgctgaact ctacctgaaa
840
ggcagcaatg gcagggaacc tcctccatcc tctgtctatg tggctacacc atctggcagt
900
atgattacct ctgaggctca acttttcaac aagccatact ggctccaaag ggctcaagga
960
cacaacaatg gcatctgttg gggcaaccaa ctttttgtga cagtggtgga caccaccagg
1020
agcaccaata tgaccatcag cacagccaca gaacaactta gcaaatatga tgccaggaag
1080
ataaaccaat acctgaggca tgtggaggaa tatgaactcc aatttgtgtt ccaactttgt
1140
aagattaccc tgtctgctga ggtgatggct tacctgcaca atatgaatgc caacctgttg
1200
gaggactgga acattggact gagccctcct gtggctacct ccttggagga caaatacaga
1260
tatgtgagga gcacagccat cacttgtcag agggaacaac ctccaacaga gaagcaggac
1320
ccactggcta aatacaagtt ctgggatgtg aacctccaag actccttcag cacagacctg
1380
gaccagtttc cactgggcag gaagttcctg atgcaacttg gcaccaggag caagcctgct
1440
gtggctacca gcaagaagag gtctgcccca accagcacca gcacacctgc caagaggaag
1500
aggaggtaaa ctcgagctc
1519
210 136
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5606 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 136
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 137
211 33
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5607 ПВЧ56L1 F1
400 137
cttggtacca tggctacctg gagaccatct gag
33
210 138
211 31
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5608 ПВЧ56L1 R1
400 138
ctgcttggag caggaacttc ctgcccagtg g
31
210 139
211 1420
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5609 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ56L1
400 139
cttggtacca tggctacctg gagaccatct gagaacaagg tctacctgcc tccaacacct
60
gtgagcaagg tggtggctac agactcctat gtgaagagga ccagcatctt ctaccatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatactact ctgtgaccaa ggacaacacc
180
aagaccaaca tcccaaaggt gtctgcctac caatacaggg tgttcagggt gagactgcct
240
gacccaaaca agtttggact gcctgacacc aacatctaca accctgacca ggagagactg
300
gtgtgggctt gtgtgggatt ggaggtgggc aggggacaac cactgggagc aggactgtct
360
ggacacccac tgttcaacag actggatgac acagagtcca gcaacctggc taacaacaat
420
gtgattgagg acagcaggga caacatctct gtggatggca agcagaccca actttgtatt
480
gtgggctgta ctcctgctat gggagaacac tggaccaagg gagcagtgtg taagagcacc
540
caggtgacca caggagactg tcctccactg gctctgataa acacaccaat tgaggatgga
600
gatatgattg acacaggctt tggagctatg gacttcaagg tgctccaaga gagcaaggct
660
gaggtgccac tggacattgt ccagagcact tgtaaatacc ctgactacct gaaaatgagt
720
gctgatgcct atggagacag tatgtggttc tacctgagga gggaacaact ttttgccaga
780
cactacttca acagggctgg caaggtggga gagaccatcc ctgctgaact ctacctgaaa
840
ggcagcaatg gcagggaacc tcctccatcc tctgtctatg tggctacacc atctggcagt
900
atgattacct ctgaggctca acttttcaac aagccatact ggctccaaag ggctcaagga
960
cacaacaatg gcatctgttg gggcaaccaa ctttttgtga cagtggtgga caccaccagg
1020
agcaccaata tgaccatcag cacagccaca gaacaactta gcaaatatga tgccaggaag
1080
ataaaccaat acctgaggca tgtggaggaa tatgaactcc aatttgtgtt ccaactttgt
1140
aagattaccc tgtctgctga ggtgatggct tacctgcaca atatgaatgc caacctgttg
1200
gaggactgga acattggact gagccctcct gtggctacct ccttggagga caaatacaga
1260
tatgtgagga gcacagccat cacttgtcag agggaacaac ctccaacaga gaagcaggac
1320
ccactggcta aatacaagtt ctgggatgtg aacctccaag actccttcag cacagacctg
1380
gaccagtttc cactgggcag gaagttcctg ctccaagcag
1420
210 140
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5610 ПВЧ56L1 F2
400 140
gaagttcctg ctccaagcag gactgaaagc caagcc
36
210 141
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5611 ПВЧ56L1 R2
400 141
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 142
211 116
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5612 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ56L1
400 142
gaagttcctg ctccaagcag gactgaaagc caagccaaaa ctgaaaaggg ctgccccaac
60
cagcaccagg acctcctctg ccaagaggaa gaaggtgaag aagtaaatct agacag
116
210 143
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5613 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 143
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
210 144
211 473
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5801 Последовательность аминокислот aa 1-473 белка L1 ПВЧ типа 58
400 144
Met Ser Val Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Ser Ile Lys Ser Pro Asn Asn Asn Lys Lys Val Leu Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Ile Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Val Gly Val Ser Gly His Pro Tyr Leu Asn Lys Phe Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Thr Ser Asn Arg Tyr Pro Ala Gln Pro Gly Ser Asp Asn
130 135 140
Arg Glu Cys Leu Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile
145 150 155 160
Gly Cys Lys Pro Pro Thr Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Val Ala Cys
165 170 175
Asn Asn Asn Ala Ala Ala Thr Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Phe Asn
180 185 190
Ser Ile Ile Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Cys Met
195 200 205
Asp Phe Gly Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile
210 215 220
Cys Asn Ser Thr Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ala Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ala Gly Lys Leu Gly Glu Ala Val Pro
260 265 270
Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Asn Thr Ala Val Ile Gln Ser
275 280 285
Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Glu Ser
290 295 300
Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Met Thr Leu Cys Thr Glu Val Thr Lys Glu Gly
340 345 350
Thr Tyr Lys Asn Asp Asn Phe Lys Glu Tyr Val Arg His Val Glu Glu
355 360 365
Tyr Asp Leu Gln Phe Val Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr Ala
370 375 380
Glu Ile Met Thr Tyr Ile His Thr Met Asp Ser Asn Ile Leu Glu Asp
385 390 395 400
Trp Gln Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Gln Asp Thr
405 410 415
Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Thr Ala Pro
420 425 430
Pro Lys Glu Lys Glu Asp Pro Leu Asn Lys Tyr Thr Phe Trp Glu Val
435 440 445
Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly
450 455 460
Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ser Gly Leu
465 470
210 145
211 26
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5802 Последовательность аминокислот aa 474-499 белка L1 ПВЧ типа
33
400 145
Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys
20 25
210 146
211 499
212 PRT
213 Искусственная последовательность
220
223 5803 Последовательность аминокислот химерного белка L1 ПВЧ типа
58
400 146
Met Ser Val Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val
1 5 10 15
Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ser Arg Thr Ser
20 25 30
Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly Asn Pro
35 40 45
Tyr Phe Ser Ile Lys Ser Pro Asn Asn Asn Lys Lys Val Leu Val Pro
50 55 60
Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp
65 70 75 80
Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr
85 90 95
Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Ile Gly Arg Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Gly Val Gly Val Ser Gly His Pro Tyr Leu Asn Lys Phe Asp
115 120 125
Asp Thr Glu Thr Ser Asn Arg Tyr Pro Ala Gln Pro Gly Ser Asp Asn
130 135 140
Arg Glu Cys Leu Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile
145 150 155 160
Gly Cys Lys Pro Pro Thr Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Val Ala Cys
165 170 175
Asn Asn Asn Ala Ala Ala Thr Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Phe Asn
180 185 190
Ser Ile Ile Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Cys Met
195 200 205
Asp Phe Gly Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile
210 215 220
Cys Asn Ser Thr Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ala Ser Glu
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe
245 250 255
Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ala Gly Lys Leu Gly Glu Ala Val Pro
260 265 270
Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Asn Thr Ala Val Ile Gln Ser
275 280 285
Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Ile Val Thr Ser Glu Ser
290 295 300
Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn
305 310 315 320
Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr
325 330 335
Thr Arg Ser Thr Asn Met Thr Leu Cys Thr Glu Val Thr Lys Glu Gly
340 345 350
Thr Tyr Lys Asn Asp Asn Phe Lys Glu Tyr Val Arg His Val Glu Glu
355 360 365
Tyr Asp Leu Gln Phe Val Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr Ala
370 375 380
Glu Ile Met Thr Tyr Ile His Thr Met Asp Ser Asn Ile Leu Glu Asp
385 390 395 400
Trp Gln Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Gln Asp Thr
405 410 415
Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Thr Ala Pro
420 425 430
Pro Lys Glu Lys Glu Asp Pro Leu Asn Lys Tyr Thr Phe Trp Glu Val
435 440 445
Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly
450 455 460
Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ser Gly Leu Lys Ala Lys Pro Lys Leu Lys
465 470 475 480
Arg Ala Ala Pro Thr Ser Thr Arg Thr Ser Ser Ala Lys Arg Lys Lys
485 490 495
Val Lys Lys
210 147
211 1501
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5804 Последовательность нуклеотидов гена химерного белка L1 ПВЧ
типа 58
400 147
atgagcgtgt ggaggcccag cgaggccacc gtgtacctgc cccccgtgcc cgtgagcaag
60
gtggtgagca ccgacgagta cgtgagcagg accagcatct actactacgc cggcagcagc
120
aggctgctgg ccgtgggcaa cccctacttc agcatcaaga gccccaacaa caacaagaag
180
gtgctggtgc ccaaggtgag cggcctgcag tacagggtgt tcagggtgag gctgcccgac
240
cccaacaagt tcggcttccc cgacaccagc ttctacaacc ccgacaccca gaggctggtg
300
tgggcctgcg tgggcctgga gatcggcagg ggccagcccc tgggcgtggg cgtgagcggc
360
cacccctacc tgaacaagtt cgacgacacc gagaccagca acaggtaccc cgcccagccc
420
ggcagcgaca acagggagtg cctgagcatg gactacaagc agacccagct gtgcctgatc
480
ggctgcaagc cccccaccgg cgagcactgg ggcaagggcg tggcctgcaa caacaacgcc
540
gccgccaccg actgcccccc cctggagctg ttcaacagca tcatcgagga cggcgacatg
600
gtggacaccg gcttcggctg catggacttc ggcaccctgc aggccaacaa gagcgacgtg
660
cccatcgaca tctgcaacag cacctgcaag taccccgact acctgaagat ggccagcgag
720
ccctacggcg acagcctgtt cttcttcctg aggagggagc agatgttcgt gaggcacttc
780
ttcaacaggg ccggcaagct gggcgaggcc gtgcccgacg acctgtacat caagggcagc
840
ggcaacaccg ccgtgatcca gagcagcgcc ttcttcccca cccccagcgg cagcatcgtg
900
accagcgaga gccagctgtt caacaagccc tactggctgc agagggccca gggccacaac
960
aacggcatct gctggggcaa ccagctgttc gtgaccgtgg tggacaccac caggagcacc
1020
aacatgaccc tgtgcaccga ggtgaccaag gagggcacct acaagaacga caacttcaag
1080
gagtacgtga ggcacgtgga ggagtacgac ctgcagttcg tgttccagct gtgcaagatc
1140
accctgaccg ccgagatcat gacctacatc cacaccatgg acagcaacat cctggaggac
1200
tggcagttcg gcctgacccc cccccccagc gccagcctgc aggacaccta caggttcgtg
1260
accagccagg ccatcacctg ccagaagacc gcccccccca aggagaagga ggaccccctg
1320
aacaagtaca ccttctggga ggtgaacctg aaggagaagt tcagcgccga cctggaccag
1380
ttccccctgg gcaggaagtt cctgctgcag agcggcctga aagccaagcc aaaactgaaa
1440
agggctgccc caaccagcac caggacctcc tctgccaaga ggaagaaggt gaagaagtaa
1500
a
1501
210 148
211 1516
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5805 Синтетический ген L1 ПВЧ58
400 148
ctgggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgagcagga ccagcatcta ctactacgcc
120
ggcagcagca ggctgctggc cgtgggcaac ccctacttca gcatcaagag ccccaacaac
180
aacaagaagg tgctggtgcc caaggtgagc ggcctgcagt acagggtgtt cagggtgagg
240
ctgcccgacc ccaacaagtt cggcttcccc gacaccagct tctacaaccc cgacacccag
300
aggctggtgt gggcctgcgt gggcctggag atcggcaggg gccagcccct gggcgtgggc
360
gtgagcggcc acccctacct gaacaagttc gacgacaccg agaccagcaa caggtacccc
420
gcccagcccg gcagcgacaa cagggagtgc ctgagcatgg actacaagca gacccagctg
480
tgcctgatcg gctgcaagcc ccccaccggc gagcactggg gcaagggcgt ggcctgcaac
540
aacaacgccg ccgccaccga ctgccccccc ctggagctgt tcaacagcat catcgaggac
600
ggcgacatgg tggacaccgg cttcggctgc atggacttcg gcaccctgca ggccaacaag
660
agcgacgtgc ccatcgacat ctgcaacagc acctgcaagt accccgacta cctgaagatg
720
gccagcgagc cctacggcga cagcctgttc ttcttcctga ggagggagca gatgttcgtg
780
aggcacttct tcaacagggc cggcaagctg ggcgaggccg tgcccgacga cctgtacatc
840
aagggcagcg gcaacaccgc cgtgatccag agcagcgcct tcttccccac ccccagcggc
900
agcatcgtga ccagcgagag ccagctgttc aacaagccct actggctgca gagggcccag
960
ggccacaaca acggcatctg ctggggcaac cagctgttcg tgaccgtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca acatgaccct gtgcaccgag gtgaccaagg agggcaccta caagaacgac
1080
aacttcaagg agtacgtgag gcacgtggag gagtacgacc tgcagttcgt gttccagctg
1140
tgcaagatca ccctgaccgc cgagatcatg acctacatcc acaccatgga cagcaacatc
1200
ctggaggact ggcagttcgg cctgaccccc ccccccagcg ccagcctgca ggacacctac
1260
aggttcgtga ccagccaggc catcacctgc cagaagaccg ccccccccaa ggagaaggag
1320
gaccccctga acaagtacac cttctgggag gtgaacctga aggagaagtt cagcgccgac
1380
ctggaccagt tccccctggg caggaagttc ctgctgcaga gcggcctgaa ggccaagccc
1440
aggctgaaga ggagcgcccc caccaccagg gcccccagca ccaagaggaa gaaggtgaag
1500
aagtaaactc gagctc
1516
210 149
211 1519
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5806 Синтетический ген L1 ПВЧ33
400 149
ctgggtacca tgagtgtgtg gagaccatct gaggctacag tctacctgcc tcctgtgcct
60
gtgagcaagg tggtgagcac agatgaatat gtgagcagga ccagcatcta ctactatgct
120
ggctccagca gactgctggc tgtgggacac ccatacttca gcatcaagaa cccaaccaat
180
gccaagaaac tgctggtgcc aaaggtgtct ggactccaat acagggtgtt cagggtgaga
240
ctgcctgacc caaacaagtt tggctttcct gacacctcct tctacaaccc tgacacccag
300
agactggtgt gggcttgtgt gggattggag attggcaggg gacaaccact gggagtgggc
360
atctctggac acccactgct gaacaagttt gatgacacag agacaggcaa caaataccct
420
ggacaacctg gagcagacaa cagggagtgt ctgagtatgg actacaagca gacccaactt
480
tgtctgctgg gctgtaagcc tccaacagga gaacactggg gcaagggagt ggcttgtacc
540
aatgctgccc ctgccaatga ctgtcctcca ttggaactga taaacaccat cattgaggat
600
ggagatatgg tggacacagg ctttggctgt atggacttca agaccctcca agccaacaag
660
tctgatgtgc caattgacat ctgtggcagc acttgtaaat accctgacta cctgaaaatg
720
acctctgaac catatggaga ctccctgttc ttcttcctga ggagggaaca gatgtttgtg
780
agacacttct tcaacagggc tggcaccctg ggagaggctg tgcctgatga cctctacatc
840
aagggctctg gcaccacagc cagcatccag tcctctgcct tctttccaac accatctggc
900
agtatggtga cctctgagag ccaacttttc aacaagccat actggctcca aagggctcaa
960
ggacacaaca atggcatctg ttggggcaac caggtgtttg tgacagtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca atatgaccct gtgtacccag gtgacctctg acagcaccta caagaatgag
1080
aacttcaagg aatacatcag gcatgtggag gaatatgacc tccaatttgt gttccaactt
1140
tgtaaggtga ccctgacagc agaggtgatg acctacatcc atgctatgaa ccctgacatc
1200
ttggaggact ggcagtttgg actgacacct cctccatctg cctccctcca agacacctac
1260
aggtttgtga ccagccaggc tatcacttgt cagaagacag tgcctccaaa ggagaaggag
1320
gacccactgg gcaaatacac cttctgggag gtggacctga aagagaagtt ctctgctgac
1380
ctggaccagt ttccactggg caggaagttc ctgctccaag caggactgaa agccaagcca
1440
aaactgaaaa gggctgcccc aaccagcacc aggacctcct ctgccaagag gaagaaggtg
1500
aagaagtaaa ctcgagctc
1519
210 150
211 34
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5807 ПВЧ58L1 F1
400 150
cttggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gagg
34
210 151
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5808 ПВЧ58L1 R1
400 151
gcttggcttt caggccgctc tgcagcagga acttcc
36
210 152
211 1438
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5809 амплифицированная последовательность 1 ПВЧ58L1
400 152
cttggtacca tgagcgtgtg gaggcccagc gaggccaccg tgtacctgcc ccccgtgccc
60
gtgagcaagg tggtgagcac cgacgagtac gtgagcagga ccagcatcta ctactacgcc
120
ggcagcagca ggctgctggc cgtgggcaac ccctacttca gcatcaagag ccccaacaac
180
aacaagaagg tgctggtgcc caaggtgagc ggcctgcagt acagggtgtt cagggtgagg
240
ctgcccgacc ccaacaagtt cggcttcccc gacaccagct tctacaaccc cgacacccag
300
aggctggtgt gggcctgcgt gggcctggag atcggcaggg gccagcccct gggcgtgggc
360
gtgagcggcc acccctacct gaacaagttc gacgacaccg agaccagcaa caggtacccc
420
gcccagcccg gcagcgacaa cagggagtgc ctgagcatgg actacaagca gacccagctg
480
tgcctgatcg gctgcaagcc ccccaccggc gagcactggg gcaagggcgt ggcctgcaac
540
aacaacgccg ccgccaccga ctgccccccc ctggagctgt tcaacagcat catcgaggac
600
ggcgacatgg tggacaccgg cttcggctgc atggacttcg gcaccctgca ggccaacaag
660
agcgacgtgc ccatcgacat ctgcaacagc acctgcaagt accccgacta cctgaagatg
720
gccagcgagc cctacggcga cagcctgttc ttcttcctga ggagggagca gatgttcgtg
780
aggcacttct tcaacagggc cggcaagctg ggcgaggccg tgcccgacga cctgtacatc
840
aagggcagcg gcaacaccgc cgtgatccag agcagcgcct tcttccccac ccccagcggc
900
agcatcgtga ccagcgagag ccagctgttc aacaagccct actggctgca gagggcccag
960
ggccacaaca acggcatctg ctggggcaac cagctgttcg tgaccgtggt ggacaccacc
1020
aggagcacca acatgaccct gtgcaccgag gtgaccaagg agggcaccta caagaacgac
1080
aacttcaagg agtacgtgag gcacgtggag gagtacgacc tgcagttcgt gttccagctg
1140
tgcaagatca ccctgaccgc cgagatcatg acctacatcc acaccatgga cagcaacatc
1200
ctggaggact ggcagttcgg cctgaccccc ccccccagcg ccagcctgca ggacacctac
1260
aggttcgtga ccagccaggc catcacctgc cagaagaccg ccccccccaa ggagaaggag
1320
gaccccctga acaagtacac cttctgggag gtgaacctga aggagaagtt cagcgccgac
1380
ctggaccagt tccccctggg caggaagttc ctgctgcaga gcggcctgaa agccaagc
1438
210 153
211 35
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5810 ПВЧ58L1 F2
400 153
gagcggcctg aaagccaagc caaaactgaa aaggg
35
210 154
211 36
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5811 ПВЧ58L1 R2
400 154
ctgtctagat ttacttcttc accttcttcc tcttgg
36
210 155
211 101
212 ДНК
213 Искусственная последовательность
220
223 5812 амплифицированная последовательность 2 ПВЧ58L1
400 155
gagcggcctg aaagccaagc caaaactgaa aagggctgcc ccaaccagca ccaggacctc
60
ctctgccaag aggaagaagg tgaagaagta aatctagaca g
101
210 156
211 38
212 PRT
213 Homo sapiens
220
223 5813 Последовательность аминокислот aa 471-508 белка L1 ПВЧ типа
59
400 156
Leu Gln Leu Gly Ala Arg Pro Lys Pro Thr Ile Gly Pro Arg Lys Arg
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ala Pro Thr Ser Thr Pro Ser Pro Lys Arg Val Lys Arg
20 25 30
Arg Lys Ser Ser Arg Lys
35
<---

Claims (67)

1. Химерный белок L1 папилломавируса в качестве компонента вакцины против папилломавируса, содержащий, в направлении от его N-конца к С-концу,
а) N-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса первого типа посредством укорочения С-конца природной последовательности указанного белка L1 папилломавируса первого типа в положении любой аминокислоты внутри его участка α5 или соседнем с ним участке, или фрагмент, имеющий по меньшей мере 98% идентичность с ним, где указанный N-концевой фрагмент сохраняет иммуногенность белка L1 папилломавируса первого типа; и
б) С-концевой фрагмент, полученный из белка L1 папилломавируса второго типа посредством укорочения N-конца природной последовательности указанного белка L1 папилломавируса второго типа в положении любой аминокислоты внутри его участка α5 или соседнем с ним участке, или его функциональный вариант, полученный в результате дальнейших мутаций, делеций и/или добавлений к указанному фрагменту, где указанный белок L1 папилломавируса второго типа имеет лучший уровень экспрессии и лучшую растворимость по сравнению с белками L1 других типов;
при этом указанный химерный белок L1 папилломавируса имеет иммуногенность белка L1 папилломавируса первого типа.
2. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 1, отличающийся тем, что указанный N-концевой фрагмент имеет по меньшей мере 98,5%, 99%, 99,5% или 100% идентичность с фрагментом, полученным укорочением С-конца природной последовательности указанного белка L1 папилломавируса первого типа в любом положении аминокилот в его участке α5 или соседнем с ним участке.
3. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 1, отличающийся тем, что указанный C-концевой фрагмент содержит одну или множество последовательностей ядерной локализации.
4. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 1, отличающийся тем, что указанный белок L1 папилломавируса представляет собой белок L1 ПВЧ.
5. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 1, отличающийся тем, что указанный белок L1 папилломавируса второго типа выбран из белков L1 ПВЧ типов 16, 28, 33, 59, или 68;
предпочтительно указанный белок L1 папилломавируса второго типа выбран из белков L1 ПВЧ типа 33 или ПВЧ типа 59.
6. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 5, отличающийся тем, что указанный C-концевой фрагмент представляет собой SEQ ID No: 2; или фрагмент, имеющий длину m1 аминокислот, предпочтительно фрагмент, включающий аминокислоты в положениях 1-m1 последовательности SEQ ID No: 2; при этом ml представляет собой целое число в диапазоне 8-26; или указанный С-концевой фрагмент представляет собой SEQ ID No: 132; или фрагмент, имеющий длину m2 аминокислот, предпочтительно включающий аминокислоты в положениях 1-m2 последовательности SEQ ID No: 132; при этом m2 представляет собой целое число в диапазоне 13-31.
7. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 6, отличающийся тем, что указанный C-концевой фрагмент представляет собой SEQ ID No: 13; или его фрагмент, имеющий n аминокислот в длину, предпочтительно фрагмент, включающий аминокислоты l-n последовательности SEQ ID No: 13; при этом n представляет собой целое число в диапазоне 16-38.
8. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 1, отличающийся тем, что указанный белок L1 папилломавируса первого типа выбран из белков L1 ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 35, 39, 45, 51, 52, 56 или 58,
предпочтительно выбран из
белка L1 ПВЧ типа 6, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 5,
белка L1 ПВЧ типа 11, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 18,
белка L1 ПВЧ типа 16, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 31,
белка L1 ПВЧ типа 18, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 44,
белка L1 ПВЧ типа 31, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 57,
белка L1 ПВЧ типа 35, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 70,
белка L1 ПВЧ типа 39, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 83,
белка L1 ПВЧ типа 45, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 96,
белка L1 ПВЧ типа 51, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 109,
белка L1 ПВЧ типа 52, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 122,
белка L1 ПВЧ типа 56, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 135, или
белка L1 ПВЧ типа 58, кодируемого его геном, показанным в SEQ ID No: 148.
9. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 8, отличающийся тем, что указанный белок L1 папилломавируса первого типа выбран из
белка L1 ПВЧ типа 6, показанного в SEQ ID No: 1,
белка L1 ПВЧ типа 11, показанного в SEQ ID No: 14,
белка L1 ПВЧ типа 16, показанного в SEQ ID No: 27,
белка L1 ПВЧ типа 18, показанного в SEQ ID No: 40,
белка L1 ПВЧ типа 31, показанного в SEQ ID No: 53,
белка L1 ПВЧ типа 35, показанного в SEQ ID No: 66
белка L1 ПВЧ типа 39, показанного в SEQ ID No: 79,
белка L1 ПВЧ типа 45, показанного в SEQ ID No: 92,
белка L1 ПВЧ типа 51, показанного в SEQ ID No: 105,
белка L1 ПВЧ типа 52, показанного в SEQ ID No: 118,
белка L1 ПВЧ типа 56, показанного в SEQ ID No: 131,
или белка L1 ПВЧ типа 58, показанного в SEQ ID No: 144.
10. Химерный белок L1 папилломавируса по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что С-конец указанного N-концевого фрагмента соединен с N-концом указанного C-концевого фрагмента напрямую или посредством линкера.
11. Химерный белок L1 папилломавируса по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что, когда С-конец указанного N-концевого фрагмента соединен с N-концом указанного C-концевого фрагмента, постоянная последовательность аминокислот RKFL присутствует в положениях плюс или минус 4 аминокислоты от точки соединения,
предпочтительно постоянная последовательность аминокислот LGRKFL присутствует в положениях плюс или минус 6 аминокислот от точки соединения.
12. Химерный белок L1 папилломавируса по п. 11, отличающийся тем, что указанный химерный белок L1 ПВЧ типов 6, 11, 16, 18, 31, 35, 39, 45, 51, 52, 56 и 58 имеет 98%, 98,5%, 99%, 99,5% или 100% идентичность с SEQ ID No: 3, SEQ ID No: 16, SEQ ID No: 29, SEQ ID No: 42, SEQ ID No: 55, SEQ ID No: 68, SEQ Ю No: 81, SEQ ID No: 94, SEQ ID No: 107, SEQ ID No: 120, SEQ ID No: 133 и SEQ ID No: 146 соответственно.
13. Вирусоподобная частица папилломавируса для получения иммуногенной композиции, используемой для предотвращения заболеваний или инфекций, ассоциированных с папилломавирусом, содержащая химерный белок L1 папилломавируса по любому из пп. 1-12.
14. Иммуногенная композиция для предотвращения заболеваний или инфекций, связанных с папилломавирусом, содержащая вирусоподобные частицы папилломавируса по п. 13 и адъюванты.
15. Выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный белок L1 папилломавируса по любому из пп. 1-12.
16. Полинуклеотид по п. 15, выбранный из
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 6, показанной в SEQ ID No: 4,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 11, показанной в SEQ ID No: 17,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 16, показанной в SEQ ID No: 30,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 18, показанной в SEQ ID No: 43,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 31, показанной в SEQ ID No: 56,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 35, показанной в SEQ ID No: 69,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 39, показанной в SEQ ID No: 82,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 45, показанной в SEQ ID No: 95,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 51, показанной в SEQ ID No: 108,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 52, показанной в SEQ ID No: 121,
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 56, показанной в SEQ ID No: 134, или
последовательности нуклеотидов, кодирующей химерный белок L1 ПВЧ типа 58, показанной в SEQ ID No: 147.
17. Вектор, используемый для получения вирусоподобной частицы папилломавируса по п. 13 или иммуногенной композиции на базе нуклеиновой кислоты, содержащий полинуклеотид по п. 15 или 16.
18. Вектор по п. 17, отличающийся тем, что указанный вектор представляет собой бакуловирусный вектор.
19. Бакуловирус, используемый для получения вирусоподобной частицы папилломавируса по п. 13 или иммуногенной композиции на базе нуклеиновой кислоты, содержащий полинуклеотид по п. 15 или 16.
20. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п. 15 или 16, вектор по п. 17 или 18 или бакуловирус по п. 19 для получения химерного белка L1 папилломавируса по любому из пп. 1-12 и вирусоподобной частицы папилломавируса по п. 13.
21. Клетка-хозяин по п. 20, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку насекомого, предпочтительно выбранную из клеток Sf9, клеток Sf21, клеток Hi5 и клеток S2.
22. Способ получения вирусоподобной частицы папилломавируса по п. 13, включающий
выращивание клетки-хозяина по любому из пп. 20, 21 для экспрессии химерного белка L1 папилломавируса и сборки его в вирусоподобную частицу; и
очистку указанной вирусоподобной частицы папилломавируса.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанную очистку осуществляют с использованием катионообменной хроматографии, предпочтительно катионообменной хроматографии, представляющей собой двухстадийную хроматографию HS-MMA.
RU2022102875A 2019-07-19 2020-07-17 Химерный белок l1 папилломавируса RU2808002C2 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910656278.7 2019-07-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2022102875A RU2022102875A (ru) 2023-08-21
RU2808002C2 true RU2808002C2 (ru) 2023-11-21

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2173170C2 (ru) * 1994-06-30 2001-09-10 Мерк Энд Ко., Инк. Полинуклеотидная вакцина для вируса папилломы
RU2206608C2 (ru) * 1994-05-16 2003-06-20 Мерк Энд Ко., Инк. Папилломавирусные вакцины
WO2017157173A1 (zh) * 2016-03-15 2017-09-21 中国医学科学院基础医学研究所 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2206608C2 (ru) * 1994-05-16 2003-06-20 Мерк Энд Ко., Инк. Папилломавирусные вакцины
RU2173170C2 (ru) * 1994-06-30 2001-09-10 Мерк Энд Ко., Инк. Полинуклеотидная вакцина для вируса папилломы
WO2017157173A1 (zh) * 2016-03-15 2017-09-21 中国医学科学院基础医学研究所 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102640490B1 (ko) 키메라 유두종바이러스 l1 단백질
CN114127098B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒51型l1蛋白
CN114127100B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒39型l1蛋白
WO2021013078A1 (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒52型l1蛋白
AU2020317321B2 (en) Polyvalent immunogenicity composition for human papillomavirus
RU2808002C2 (ru) Химерный белок l1 папилломавируса
CN114127096B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒31型l1蛋白
RU2806424C2 (ru) Поливалентная иммуногенная композиция против папилломавируса человека
CN114127095B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒11型l1蛋白
CN114127127B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒35型l1蛋白
CN114174320B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒18型l1蛋白
CN114127093B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒45型l1蛋白
CN114127295B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒16型l1蛋白
CN114127094B (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒58型l1蛋白
WO2021013067A1 (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒6型l1蛋白
CN114127097A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒56型l1蛋白
TW202214671A (zh) 人乳頭瘤病毒多價免疫原性組合物