RU2807548C1 - Штамм бактерий Escherichia coli со сниженной способностью накапливать ацетат - продуцент гибридного полипептида, содержащего проинсулин гларгин - Google Patents
Штамм бактерий Escherichia coli со сниженной способностью накапливать ацетат - продуцент гибридного полипептида, содержащего проинсулин гларгин Download PDFInfo
- Publication number
- RU2807548C1 RU2807548C1 RU2023124743A RU2023124743A RU2807548C1 RU 2807548 C1 RU2807548 C1 RU 2807548C1 RU 2023124743 A RU2023124743 A RU 2023124743A RU 2023124743 A RU2023124743 A RU 2023124743A RU 2807548 C1 RU2807548 C1 RU 2807548C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- insulin
- strain
- escherichia coli
- glargine
- producer
- Prior art date
Links
- COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N Insulin glargine Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(=O)NCC(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 229960002869 insulin glargine Drugs 0.000 title claims abstract description 39
- 108010057186 Insulin Glargine Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims abstract description 24
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 title abstract description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 20
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 9
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract 1
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 22
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 22
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 11
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 8
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 7
- -1 insulin glargine Chemical class 0.000 description 7
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 7
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 7
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 7
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 101150068477 mlc gene Proteins 0.000 description 5
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 5
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 229940100228 acetyl coenzyme a Drugs 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 3
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010026951 Short-Acting Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229940123958 Short-acting insulin Drugs 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 101150006213 ackA gene Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 101150001544 crr gene Proteins 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 108010008221 formate C-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N humalog Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229960002068 insulin lispro Drugs 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 108010071189 phosphoenolpyruvate-glucose phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 101150108780 pta gene Proteins 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940072172 tetracycline antibiotic Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108010092060 Acetate kinase Proteins 0.000 description 1
- QTXZASLUYMRUAN-QLQASOTGSA-N Acetyl coenzyme A (Acetyl-CoA) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1.O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 QTXZASLUYMRUAN-QLQASOTGSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000322995 Escherichia coli KO11FL Species 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010073961 Insulin Aspart Proteins 0.000 description 1
- 108010081368 Isophane Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000005237 Isophane Insulin Human genes 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101100433987 Latilactobacillus sakei subsp. sakei (strain 23K) ackA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000256766 Lophodermium medium Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108700023175 Phosphate acetyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 101710155333 Site-specific recombinase Flp Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000009603 aerobic growth Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000009604 anaerobic growth Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- RCHHVVGSTHAVPF-ZPHPLDECSA-N apidra Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3N=CNC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CNC=N1 RCHHVVGSTHAVPF-ZPHPLDECSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 108091006374 cAMP receptor proteins Proteins 0.000 description 1
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 229940126904 hypoglycaemic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004717 insulin aspart Drugs 0.000 description 1
- 108700039926 insulin glulisine Proteins 0.000 description 1
- 229960000696 insulin glulisine Drugs 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003509 long acting drug Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N novorapid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 101150070013 pfl gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K phosphonatoenolpyruvate Chemical compound [O-]C(=O)C(=C)OP([O-])([O-])=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 101150109655 ptsG gene Proteins 0.000 description 1
- 101150045242 ptsH gene Proteins 0.000 description 1
- 101150118630 ptsI gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к штамму-продуценту проинсулина инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644 с низким содержанием ацетата при культивировании. Предложенный штамм может быть использован для получения фармацевтических композиций и готовых лекарственных препаратов с увеличенным содержанием действующего вещества. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к штамму-продуценту проинсулина инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644 с низким содержанием ацетата при культивировании.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Сахарный диабет - одна из самых распространенных хронических болезней. По прогнозам ВОЗ в 21 веке диабет приобретет эпидемический характер. К 2030 году прогнозируется рост их числа больных диабетом до 552 миллионов и выход диабета на седьмое место среди причин смертности в мире. Более 80% пациентов, умерших за год, от диабета и его осложнений происходят из стран с низким или средним уровнем благосостояния населения. При этом заболеваемость в развитых странах выше, чем в развивающихся.
По данным Всемирной Организации Здравоохранения Российская Федерация входит в десятку стран с наибольшим числом больных диабетом с тенденцией к увеличению этого числа. К 2025 году ВОЗ прогнозирует увеличение этого числа до 12,2 миллионов.
Сахарный диабет связан с колоссальными экономическими потерями практически во всех странах мира. В среднем, из всех мировых расходов на здравоохранение на диабет приходится около 12%. Экономические потери, связанные с диабетом, составляют в России около 3,12 млрд. долларов США в год. К 2030 году эта сумма может увеличиться до 3,35 млрд.
Главным направлением лечения больных с инсулинозависимым сахарным диабетом является заместительная инсулинотерапия. Инсулин является наиболее действенным гипогликемическим агентом, применяемым в настоящее время в клинике. За время своего существования препараты инсулина прошли эволюцию от природного инсулина, добываемого из поджелудочной железы домашних животных до рекомбинантных препаратов и аналогов человеческого инсулина, к которым относится инсулин гларгин.
Препараты животного происхождения к настоящему времени вышли из употребления. Основными препаратами инсулина на сегодняшний день являются рекомбинантные инсулины и аналоги (см., например, BOLLI G.B. et al., Insulin glargine, The Lancet, 2000, V.356, N.9228, p.443-445).
В норме пики выделения инсулина непосредственно связаны с приемом пищи. Между приемами пищи уровень эндогенного инсулина находится на базальном уровне. У здорового человека приблизительно 50% выделяемого за сутки инсулина является базальным (NAKASHIMA E. et al., Efficacy and safety of stepwise introduction of insulin lispro mix 50 in Japanese patients with type 2 diabetes inadequately controlled by oral therapy, Endocrine journal, 2013, V.60, N.6, p.763-772). Поэтому применение одного инсулина короткого действия недостаточно для воспроизведения физиологической гликемической кривой. Для этого используется инсулин короткого действия в сочетании с пролонгированным препаратом. Было показано, что применение аналогов человеческого инсулина длительного действия, например инсулина гларгин, позволяет в значительной степени воспроизвести естественную кривую активности базального инсулина, чего, обычно, не удается добиться с помощью инсулина НПХ (BOLLI G.B. et al., 2000).
Аминокислотная последовательность инсулина гларгин отличается от последовательности инсулина человека заменой остатка аспарагина в положении 21 А-цепи на глицин (GlyA21) и наличием двух дополнительных остатков аргинина в С-концевой части В-цепи (ArgB31, ArgB32) (LEVIEN T.L. et al., Insulin glargine: a new basal insulin, Annals of Pharmacotherapy, 2002, V. 36, N. 6, p.1019-1027).
Эти модификации, а также добавление в препарат небольшого количества ионов цинка, улучшают стабильность препарата и повышают изоэлектрическую точку аналога с 5,4 до 6,7, что приводит к уменьшению растворимости препарата в нейтральной среде подкожной клетчатки. Инсулин гларгин хорошо растворим при рН 4,0. Кислый раствор препарата нейтрализуется при подкожных инъекциях, и этот аналог инсулина, который ex vivo представляет собой прозрачный раствор, образует микропреципитаты, из которых происходит медленное высвобождение гексамеров инсулина и их диссоциация с образованием ди- и мономеров. Благодаря этим свойствам препарат медленно всасывается из подкожной ткани в кровоток, не обладает выраженным пиком действия и обеспечивает практически постоянную базальную концентрацию гормона в крови в течение суток. Добавление ионов цинка в препарат также замедляет процесс освобождения димеров и мономеров, что увеличивает время действия аналога (DUNN C.J. et al., Insulin glargine: an updated review of its use in the management of diabetes mellitus, Drugs, 2003, V.63, N.16, p.1743-1778).
После подкожного введения, как уже отмечалось ранее, начало действия инсулина гларгин наступает примерно через 1 час. Средняя продолжительность действия составляет 24 часа, а максимальная - 29 часов. При однократном ежедневном подкожном введении препарата устойчивая средняя концентрация этого аналога в крови достигается через 2-4 суток после введения первой дозы (BOLLI G.B. et al., 2000).
В настоящее время наиболее перспективной является технология получения инсулина и инсулиновых аналогов с использованием методологии экспрессии гена проинсулина человека в клетках Escherichia coli в составе гибридных белков в виде нерастворимых "телец включения" (БАИРАМАШВИЛИ Д. И., Генноинженерный инсулин человека: успехи и перспективы, Российский химический журнал, 2005, V.49, N.1, с.34).
Одним из факторов, лимитирующих накопление биомассы и гибридного белка, является накопления ацетата в культуральной жидкости (TAKAHASHI C.M. et al., Effects of acetate on the growth and fermentation performance of Escherichia coli KO11, Applied biochemistry and biotechnology, 1999, V.81, p.193-203).
В Escherichia coli ацетат является основным продуктом метаболизма как в аэробных, так и в анаэробных условиях роста. Ацетат может подавлять синтез ДНК, РНК, белков, липидов и пептидогликанов (KIM T.S. et al., Reduction of acetate and lactate contributed to enhancement of a recombinant protein production in E. coli BL21, Journal of Microbiology and Biotechnology, 2015, V.25, N.7, p.1093-1100).
В фазе экспоненциального роста, например, во время культивирования с глюкозой, ацетат преимущественно образуется из ацетил-коэнзима А (ацетил-КоА) с помощью ферментов фосфат-ацетилтрансферазы (продукта гена pta) и ацетат-киназы (продукта гена ackA) (SCHÜTZE A. et al., The impact of ackA, pta, and ackA-pta mutations on growth, gene expression and protein acetylation in Escherichia coli K-12, Frontiers in Microbiology, 2020, V.11, p.233). В результате этого метаболического пути из ацетил-КоА, АДФ и неорганического фосфата образуется ацетат и АТФ.
В анаэробных условиях ацетат представляет собой основной продукт смешанного кислотного брожения. Продукт гликолиза пируват превращается в ацетил-КоА и формата с помощью фермента пируватформатлиазы (продукта гена PFL) (SAWERS G. et al., Anaerobic regulation of pyruvate formate-lyase from Escherichia coli K-12, Journal of bacteriology, 1988, V. 170, N. 11, p.5330-5336). Ацетил-КоА, образующийся в результате этой реакции, может быть преобразован в либо ацетат по пути генерации АТФ, либо в этанол при потреблении NADH.
Одним из способов снижения накопления ацетата является повышение экспрессии гена E. coli Mlc, регулятора экспрессии генов транспорта и метаболизма глюкозы.
Ген Mlc (Made large colony) регулирует экспрессию оперона глюкозо-фосфотрансферазной системы (PTS), который производит ферменты для захвата глюкозы (PLUMBRIDGE J., Regulation of gene expression in the PTS in Escherichia coli: the role and interactions of Mlc, Current opinion in microbiology, 2002, V.5, N.2, p.187-193).
Центральными игроками в регуляции углеродного катаболита в E. coli являются транскрипционный активатор Crp (белок-рецептора цAMP); сигнальный метаболит cAMP, аденилатциклаза (Cya) и гены фосфотрансферазной системы (PTS), участвующие в транспорте и фосфорилировании углеводов. PTS в E. coli состоит из двух цитоплазматических белков, EI (фермент I, продукт гена ptsI) и HPr (гистидин-фосфорилируемый белок, продукт гена ptsH, а также углевод-специфических комплексов EII (фермент II).
Глюкозоспецифическая фосфотрансферазная система E. coli состоит из цитоплазматического белка EIIAGlc, кодируемого геном crr, и мембраносвязанного белка EIICBGlc, кодируемого ptsG, которые транспортируют и одновременно фосфорилируют глюкозу. Фосфорильные группы переносятся от фосфоенолпирувата (PEP) посредством каскадных реакций фосфорилирования на глюкозу.
Комплекс cAMP-Crp и репрессор Mlc участвуют в регуляции экспрессии гена ptsG и pts оперона. При отсутствии глюкозы Mlc связывается с операторными областями генов ptsG, mlc, manXYZ, malT, ptsHI и crr и предотвращает транскрипцию. Если глюкоза присутствует в среде, количество нефосфорилированного EIICBGlc увеличивается за счет переноса фосфатов на глюкозу. В этой ситуации Mlc связывается с EIICBGlc и, таким образом, операторные области генов фосфотрансферазной системы (PTS) освобождаются и, тем самым, активируется их транскрипция (SHIMIZU K., Metabolic regulation of a bacterial cell system with emphasis on Escherichia coli metabolism, International Scholarly Research Notices, 2013, V. 2013).
Увеличение уровня экспрессии гена Mlc потенциально может приводить к снижению транспорта глюкозы и, как следствие, снижению избыточного накопления ацетил-КоА, переводя его катаболизм преимущественно через цикл трикарбоновых кислот. В результате путь образования ацетата задействуется в меньшей степени.
Таким образом, для обеспечения доступной инсулинозаместительной терапии необходимы новые высокоэффективные штаммы-продуценты инсулина и его аналогов, в том числе гларгина, со сниженной способностью накапливать ацетат.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Все термины и сокращения, используемые в настоящей заявке, употребляются в том же значении, как это принято в данной области техники, и понятны специалистам.
Настоящее изобретение относится к штамму-продуценту проинсулина инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644, а также к способу получения инсулина гларгин, который может быть использован в качестве лекарственного средства.
Термины «белок», «пептид» и «полипептид» использованы взаимозаменяемо.
Термин «инсулин» для целей настоящего изобретения означает гормон инсулин человека. Инсулин человека содержит две полипептидные цепи: А-цепь и В-цепь. А-цепь представляет собой пептид из 21 аминокислоты (SEQ ID NO:1), а В-цепь - пептид из 30 аминокислот (SEQ ID NO:2), при этом две цепи соединены дисульфидными мостиками: первый мостик образован между цистеином в положении 7 в А-цепи и цистеином в положении 7 в В-цепи и второй мостик - между цистеином в положении 20 в А-цепи и цистеином в положении 19 в В-цепи. Третий мостик расположен между цистеинами в положениях 6 и 11 в А-цепи.
Термин «аналог инсулина» для целей настоящего изобретения означает модифицированный инсулин, в котором один или несколько аминокислотных остатков инсулина были заменены другими аминокислотными остатками, и/или в котором один или несколько аминокислотных остатков были удалены из инсулина, и/или в котором один или несколько аминокислотных остатков были добавлены и/или вставлены в инсулин. Примерами аналогов инсулина являются инсулин-аспарт (то есть инсулин человека AspB28) и инсулин-лизпро (то есть инсулин человека LysB28, РгоВ29), инсулин-глулизин (LysB3, GluB29 человеческий инсулин) и инсулин гларгин (Gly(A21), Arg(B31), Arg(B32)- инсулин) и другие.
Термины «инсулин» и «аналог инсулина» могут использоваться в настоящем изобретении взаимозаменяемо.
Термин «фармацевтическая композиция» относится к препарату, форма которого способствует эффективному проявлению биологической активности активного ингредиента, содержащегося в нем, и который не содержит никаких дополнительных компонентов, являющихся неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет введена данная композиция.
Использованный в данном описании термин «лечение» (а также «терапия») относится к клиническому воздействию в попытке изменить естественное течение болезни у подвергаемого лечению индивидуума, и оно может быть проведено либо с целью профилактики, либо в процессе курса лечения клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают, но не ограничиваются этим, предупреждение возникновения или рецидива заболевания, облегчение симптомов, сведение к минимуму любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, уменьшение скорости прогрессирования заболевания, уменьшение интенсивности симптомов или временное облегчение болезненного состояния и ремиссию или улучшенный прогноз.
ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к штамму-продуценту проинсулина инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644, а также к способу получения аналога инсулин гларгин, который может быть использован в качестве лекарственного средства для лечения диабета I типа и диабета II типа.
В одном из предпочтительных воплощений настоящего изобретения инсулин гларгин содержит A-цепь, которая имеет аминокислотную последовательность c SEQ ID NO:3, и B-цепь, которая имеет аминокислотную последовательность c SEQ ID NO:4.
В одном из предпочтительных воплощений настоящего изобретения проинсулин инсулина гларгин содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO:5.
Штамм-продуцент инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644 был депонирован в Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ, Российская Федеpация, 142290, Московская область, г. Пущино, пр-кт Науки, 5) под NO: VKM B-3695D 17.02.2023.
Настоящее изобретение также относится к способу получения инсулина гларгин, включающему культивирование штамма-продуцента Escherichia coli BL21-74/pF644 в подходящих для экспрессии проинсулина инсулина гларгин условиях.
В одном из вариантов осуществления изобретения способ получения инсулина-гларгин включает получение проинсулина в телах включения клеток штамма-продуцента.
В дальнейшем проинсулин подвергают концентрированию, например, с помощью тангенциальной проточной фильтрации или диафильтрации. Затем проинсулин ферментативно расщепляют протеазой.
В одном из вариантов осуществления изобретения пептидное расщепление осуществляется посредством ферментативного гидролиза с использованием трипсина.
В одном из вариантов осуществления изобретения проинсулин может быть слит с лидерным полипептидом, например, посредством пептидного линкера.
Состав и длину линкера можно определять с помощью методов, хорошо известных в данной области и можно оценивать их эффективность.
После расщепления трипсином полученный инсулин-гларгин может быть очищен хроматографическим способом.
В одном из вариантов настоящего изобретения способ получения инсулина-гларгин, может включать продолжительное культивирование бактериального продуцента белка-предшественника инсулина-гларгин, где культивирование продуцента проводят в биореакторе в режиме перфузии клеточной биомассы через половолоконные мембраны с непрерывным питанием питательными средами.
В одном из вариантов настоящего изобретения предложен способ получения фармацевтической композиции на водной основе для лечения диабета I типа и II типа у пациента, включающей в себя 300 Ед/мл инсулина-гларгин, включающий культивирование штамма-продуцента Escherichia coli BL21-74/pF644 в подходящих для экспрессии проинсулина инсулина гларгин условиях.
В одном из вариантов настоящего изобретения предложено применение штамма Escherichia coli BL21-74/pF644 по изобретению для получения фармацевтической композиции на водной основе для лечения диабета I типа и II типа у пациента, включающей в себя 300 Ед/мл инсулина-гларгин.
В одном из вариантов фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно включает одно или несколько вспомогательных веществ, выбранных из глицерина, оксида цинка, соляной кислоты, метакрезола или гидроксида натрия. В одном из вариантов способ по изобретению используют в промышленном масштабе получения фармацевтических композиций инсулина.
Фармацевтическая композиция может содержать вспомогательные вещества, в том числе, сурфактанты, например, неионные сурфактанты. Особенно предпочтительны фармацевтически общепринятые сурфактанты, такие как, например, частичные сложные эфиры и сложные эфиры жирных кислот, простые эфиры многоатомных спиртов, таких как глицерин, сорбит и др. Сурфактанты могут быть представлены в фармацевтической композиции в концентрации 5-200 мг/мл. В одном из вариантов осуществления изобретения, сурфактант представляет собой глицерин в концентрации от 10 до 30 мг/мл. В предпочтительном варианте осуществления изобретения глицерин представлен в фармацевтической композиции в концентрации 17 мг/мл.
Средство может дополнительно содержать консерванты (например, фенол, метакрезол, p-крезол, парабены), изотонические агенты (например, маннит, сорбит, лактоза, декстроза, трегалоза, хлорид натрия, глицерин), буферные вещества, соли, кислоты и щелочные металлы, а также другие эксципиенты. Указанные вещества могут быть представлены в каждом случае индивидуально или альтернативно в виде смесей.
В одном из вариантов осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит метакрезол в концентрации 1-20 мг/мл. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит метакрезол в концентрации 2,7 мг/мл.
В одном из вариантов осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит цинк. Концентрация цинка в фармацевтической композиции находится в диапазоне то 0 до 1 мг/мл. Цинк может быть представлен в форме хлорида цинка, но соль не ограничивается хлоридом цинка. В одном из вариантов осуществления изобретения концентрация хлорида цинка составляет от 0 до 2 мг/мл. В предпочтительном варианте осуществления изобретения концентрация хлорида цинка составляет 0,19 мг/мл.
В одном из вариантов осуществления изобретения, фармацевтическая композиция на водной основе может содержать 0,19/мл хлорида цинка, 2,7 мг/мл метакрезола и 17 мг/мл глицерина. Значение pH фармацевтической композиции на водной основе составляет от 3,4 до 4,6, предпочтительно 4.
В одном из вариантов осуществления изобретения значение pH фармацевтической композиции может регулироваться путем добавления соляной кислоты и/или гидроксида натрия. В одном из вариантов осуществления изобретения pH фармацевтической композиции может регулироваться путем добавления 2 M раствора соляной кислоты и/или 2 M раствора гидроксида натрия.
В том случае, когда в настоящем изобретении указывается диапазон содержания какого-либо компонента в композиции, это означает, что включено каждое конкретное значение, находящееся внутри указанного диапазона. Например, диапазон от 10 до 30 мг/мл включается каждое значение 10; 10,1; 10,2 и так далее вплоть до 29,9 и 30,00 мг/мл.
Полученный штамм-продуцент Escherichia coli BL21-74/pF644 характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки: Клетки мелкие, палочковидной формы, грамотрицательные, неспороносные, размером 1x3,5 мкм, подвижные, с хорошо различимыми тельцами включения после индукции синтеза гибридного белка.
Культуральные признаки: при росте на агаризованной среде LB колонии круглые, гладкие, полупрозрачные, блестящие, серые. Край ровный, диаметр колоний 1-3 мм, консистенция пастообразная. Рост в жидких средах (LB, минимальная среда с глюкозой) характеризуется ровным помутнением.
Физиолого-биохимические признаки: клетки растут при температуре 4-42°С, оптимум рН 6,8-7,6. В качестве источника азота используют как минеральные соли аммония, так и органические соединения: аминокислоты, пептон, триптон, дрожжевой экстракт. В качестве источника углерода при росте на минимальной среде используют глицерин, углеводы, аминокислоты.
Устойчивость к антибиотикам: клетки штамма-продуцента проявляют устойчивость к канамицину (до 100 мг/мл).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1. Динамика накопления ацетата в процессе ферментации штамма BL21-74/pF644 в сравнении с исходным штаммом BL21/pF644.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами, но не ограничивается ими.
Для получения штамма-продуцента гибридного полипептида с проинсулином гларгин электрокомпетентные клетки штамма реципиента Escherichia coli BL21-74, в котором нативный промотор гена mlc заменен на конституитивный Tac-промотор, с целью снижения накопления ацетата в процессе высокоплотной ферментации, трансформировали рекомбинантной плазмидной ДНК pF644 методом электропорации (см., например, LESSARD J.C., Transformation of E. coli via electroporation, Methods Enzymol, 2013, V.529, p.321-327) и высевали на LB-агар, содержащий 50 мкг/мл канамицина.
Пример 1. Получение штамма BL21-74/pF644 для производства гибридного белка, предшественника инсулина гларгин.
Модификация промотора гена mlc, в котором нативный промотор гена mlc заменен на конституитивный Tac-промотор, проводилась посредством Red рекомбинации с pRed/ET (Gene Bridges, Гейдельберг, Германия), где финальный ПЦР продукт, содержал фланкирующие области, гомологичные области mlc промотора геномной ДНК, ген устойчивости к антибиотику тетрациклин и FRT- сайты для сайт специфической рекомбинации, опосредованной Flp- рекомбиназой для элиминации гена устойчивости к антибиотику.
Колонии с требуемой геномной модификацией отбирались на среде с антибиотиком тетрациклин и проверялись с помощью ПЦР и секвенирования.
После этого, ген устойчивости к антибиотику тетрациклин был удален из хромосомы после трансформации клеток плазмидой для экспрессии сайт-специфичной рекомбиназы FLP. Клоны отбирались и перепечатывались на среды, содержащие и не содержащие антибиотик. Клоны, потерявшие селективный маркер, тестировались с помощью ПЦР и секвенинирования. Для дальнейшей работы был отобран клон BL21-74.
Для получения штамма-продуцента гибридного полипептида с проинсулином гларгин электрокомпетентные клетки штамма реципиента Escherichia coli BL21-74 трансформировали рекомбинантной плазмидной ДНК pF644 методом электропорации и высевали на LB-агар, содержащий 50 мкг/мл канамицина.
Полученные колонии трансформантов характеризовали по культурально-морфологическим признакам и оценивали продуктивность каждого клона по гибридному белку. Для оценки продуктивности проводили выращивание при температуре (37 ± 2)°С в жидкой питательной среде с канамицином в концентрации 50 мкг/мл в течение 2-3 часов до момента достижения оптической плотности OD600 0,5-1, после чего вносили индуктор экспрессии изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (ИПТГ) и вели культивирование ещё 4 часа. Продуктивность каждого клона оценивали с помощью капиллярного гель-электрофореза.
Критериями выбора первоначального клона предварительного клеточного банка (ПБК) являлись стабильность генетической конструкции, продуктивность штамма, стабильность штамма при многократных пересевах и культурально-морфологические свойства штамма.
Полученный в результате отбора штамм-продуцент инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644 был депонирован в Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ, Российская Федеpация, 142290, Московская область, г. Пущино, пр-кт Науки, 5) под NO: VKM B-3695D 17.02.2023.
Пример 2. Исследование количества ацетата в процессе ферментации штамма BL21-74/pF644 в сравнении с штаммом BL21/pF644.
Ферментации проводили в течение 6 часов после внесения индуктора. В ходе ферментации отбирали пробы на измерение содержания ацетата.
Культивирование штамма-продуцента проводили в биореакторах Infors (Швейцария) с рабочим объемом 0,5 л. Состав среды: пептон комплекс - 60 г/л, дрожжевой экстракт - 60 г/л, глюкоза - 4 г/л, Сульфат магния гептагидрат - 2,2 мМ, антибиотик канамицин - 50 мг/л. Стартовые условия перемешивания: 400 об/мин, аэрация - 3 л/мин. Значения PO2, температуры культивирования и рН устанавливали 30%, 37°С и 7,0 ед, соответственно. Ферментации проводили до истощения глюкозы в среде (начало роста значений рН) и затем подключали раствор 55% глюкозы в режиме рН-стат. В ходе ферментации отбирали пробы на измерение содержания ацетата. Результаты представлены на Фиг.1.
Пример 3. Определение продуктивности штамма-продуцента гибридного полипептида.
Индивидуальной колонией клеток штамма E. coli BL21, содержащей плазмиду pF644, инокулировали 2 мл LB среды, содержащей канамицин в концентрации 50 мкг/мл, растили в термошейкере при 37°С в течение 22 часов при перемешивании (170 об./мин). После измерения оптической плотности OD600 ночной культуры засевали 40 мл жидкой среды LB, содержащей 50 мкг/мл канамицина (ODстартовая600 = 0,1) и растили 1-2 часа при 37°С на шэйкере-инкубаторе при перемешивании (180 об/мин) до достижения оптической плотности OD600 = (0,8 ± 0,2). 20 мл культуры переносили в другую колбу (контроль без индукции), к оставшимся 20 мл добавляли 10 мкл 1М ИПТГ (конечная концентрация ИПТГ - 0,5 мМ). После 4 часов инкубирования на шэйкере-инкубаторе при перемешивании (180 об/мин) клеточные культуры центрифугировали (15 мин, 3000 об/мин), определяли массу влажного осадка клеток, замораживали. Содержание гибридного полипептида в % от массы влажного осадка измеряли методом капиллярного электрофореза. Оно составило не ниже 4,5%, а в индивидуальных экспериментах более 5% от массы влажного осадка клеточной биомассы.
Пример 4. Получение фармацевтической композиции инсулина гларгина 300 ед/мл.
Для получения фармацевтической композиции инсулина гларгина 300 ед/мл субстанцию, полученную в процессе культивирования клеток штамма Escherichia coli BL21-74/pF644, в количестве 3900 г заливают водой оставляют для набухания, затем подтитровывают до рН 3,0-3,5. К раствору инсулина-гларгина приливают 5525 г глицерина. 10,9 г оксида цинка растворяют в растворе соляной кислоты 10,0%. Готовят раствор для розлива: последовательно вносят навеску метакрезола в количестве 877, г, раствор оксида цинка, приливают раствор инсулина-гларгина с глицерином и добавляя раствор соляной кислоты 10,0% или 0,1 М раствор гидроксида натрия, доводя до рН от 3,5 до 4,5. Полученный раствор фильтруют через каскад фильтров с рейтингом от 0,45 до 0,22 мкм и разливают в картриджи с получением фармацевтической композиции инсулина гларгина 300 ед/мл. Приготовленного количества раствора достаточно для розлива 100000 картриджей вместимостью 3,0 мл или 200000 вместимостью 1,5 мл.
Claims (4)
1. Штамм-продуцент проинсулина инсулина гларгин Escherichia coli BL21-74/pF644, депонированный в Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ) под NO: VKM B-3695D.
2. Штамм-продуцент по п.1, где проинсулин содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 5.
3. Применение штамма-продуцента по п. 1 для получения фармацевтической композиции на водной основе для лечения диабета I типа и II типа у пациента, включающей в себя 300 Ед/мл инсулина гларгин.
4. Применение по п. 3, где композиция включает одно или несколько вспомогательных веществ, выбранных из глицерина, оксида цинка, соляной кислоты, метакрезола или гидроксида натрия.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2807548C1 true RU2807548C1 (ru) | 2023-11-16 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018029489A1 (en) * | 2016-08-12 | 2018-02-15 | Arecor Limited | Insulin glargine |
RU2729381C1 (ru) * | 2019-05-24 | 2020-08-06 | Закрытое акционерное общество "ФАРМ-ХОЛДИНГ" | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018029489A1 (en) * | 2016-08-12 | 2018-02-15 | Arecor Limited | Insulin glargine |
RU2729381C1 (ru) * | 2019-05-24 | 2020-08-06 | Закрытое акционерное общество "ФАРМ-ХОЛДИНГ" | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CHEN M., Effects of mlc Gene Modulation on Acetate Accumulation in Escherichia Coli Culture, Master's Theses, 2014, 4491, p.1-99, DOI: https://doi.org/10.31979/etd.2qv8-qcbe, найдено в интернет [18/10/2023] по адресу https://scholarworks.sjsu.edu/etd_theses/4491. Red/ET Recombination Cloning Without Restriction Enzymes, A Guide to Next Generation Cloning, найдено в интернет [18/10/2023] по адресу: http://dev.genebridges.com/files/Red_ET_by_Gene_Bridges.pdf, архивировано 09.01.2020 по данным сайта https://web.archive.org/web/20200201000000*/http://dev.genebridges.com/files/Red_ET_by_Gene_Bridges.pdf. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9644017B2 (en) | Insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile | |
AU2009203810B2 (en) | Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile | |
RU2529952C2 (ru) | Новые производные инсулина с сильно замедленным профилем время/действие | |
US8618048B2 (en) | Insulin analogues of prolonged activity | |
WO2022012020A1 (zh) | Glp-1类似物多肽的制备方法及在ⅱ型糖尿病中应用 | |
IE922570A1 (en) | Tissue-selective insulin analogs | |
CN113105536B (zh) | 一种新甘精胰岛素原及其制备甘精胰岛素的方法 | |
CN110498849A (zh) | 一种索玛鲁肽主肽链及其制备方法 | |
CN113265007B (zh) | 一种治疗代谢疾病的融合蛋白及其制备方法和应用 | |
CN101525387B (zh) | 重组长效胰高血糖素样肽类似物及其制备方法 | |
CN110357969B (zh) | 一种GLP1-EGFa异源二聚体蛋白、功能及方法 | |
CN112851791B (zh) | 一种新型抗代谢紊乱的fgf类似物及其应用 | |
CN111303275A (zh) | 一种重组人生长激素及其制备方法与药物应用 | |
RU2807548C1 (ru) | Штамм бактерий Escherichia coli со сниженной способностью накапливать ацетат - продуцент гибридного полипептида, содержащего проинсулин гларгин | |
CN102732549B (zh) | 一种重组胰岛素样生长因子-i的制备方法 | |
RU2729737C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF882, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ В30-ДЕЗТРЕОНИН-ИНСУЛИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО В30-ДЕЗТРЕОНИН-ИНСУЛИН | |
RU2729381C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF644, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ГЛАРГИН | |
RU2729353C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pF646, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН АСПАРТ, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН АСПАРТ | |
CN112391431B (zh) | 重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的发酵培养基及发酵方法 | |
RU2514578C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHIASP03, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК С ПРОИНСУЛИНОМ Aspart ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHIAsp03, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHIAsp03-ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА С ПРОИНСУЛИНОМ Aspart ЧЕЛОВЕКА | |
Datta | The Use of Escherichia coli for Recombinant Human Insulin Production |