RU2807471C1 - Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии - Google Patents
Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2807471C1 RU2807471C1 RU2022114008A RU2022114008A RU2807471C1 RU 2807471 C1 RU2807471 C1 RU 2807471C1 RU 2022114008 A RU2022114008 A RU 2022114008A RU 2022114008 A RU2022114008 A RU 2022114008A RU 2807471 C1 RU2807471 C1 RU 2807471C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- spp
- embryos
- pro
- echo
- good quality
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 title claims abstract description 40
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000379991 Anaerococcus Species 0.000 claims description 4
- 241000193818 Atopobium Species 0.000 claims description 4
- 241001148536 Bacteroides sp. Species 0.000 claims description 4
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 claims description 4
- 241001535083 Dialister Species 0.000 claims description 4
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 4
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 claims description 4
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 claims description 4
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 claims description 4
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 4
- 241000604449 Megasphaera Species 0.000 claims description 4
- 241000122116 Parvimonas Species 0.000 claims description 4
- 241000191992 Peptostreptococcus Species 0.000 claims description 4
- 241000605894 Porphyromonas Species 0.000 claims description 4
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 claims description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 4
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 claims description 4
- 241000424747 Sneathia Species 0.000 claims description 4
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 4
- 241000935255 Ureaplasma parvum Species 0.000 claims description 4
- 241000202921 Ureaplasma urealyticum Species 0.000 claims description 4
- 241001148134 Veillonella Species 0.000 claims description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 4
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 claims description 2
- 241000587112 Enterobacteriaceae sp. Species 0.000 claims description 2
- 241001453171 Leptotrichia Species 0.000 claims description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 abstract description 13
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 abstract description 13
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 13
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 7
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 5
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 101001039035 Homo sapiens Lutropin-choriogonadotropic hormone receptor Proteins 0.000 description 4
- 102100040788 Lutropin-choriogonadotropic hormone receptor Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 238000013277 forecasting method Methods 0.000 description 2
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 2
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 2
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 102100025511 Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100284398 Bos taurus BoLA-DQB gene Proteins 0.000 description 1
- 102100029951 Estrogen receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 102100027627 Follicle-stimulating hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000693801 Homo sapiens Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001010910 Homo sapiens Estrogen receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000862396 Homo sapiens Follicle-stimulating hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 108700005092 MHC Class II Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 1
- 208000035010 Term birth Diseases 0.000 description 1
- 208000020990 adrenal cortex carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000007486 appendectomy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 229940121381 gonadotrophin releasing hormone (gnrh) antagonists Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 108010067479 inhibin B Proteins 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002705 metabolomic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001431 metabolomic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 102200006400 rs199907548 Human genes 0.000 description 1
- 102200120544 rs2293275 Human genes 0.000 description 1
- 102220005654 rs6166 Human genes 0.000 description 1
- 102220058436 rs730882146 Human genes 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к репродуктологии. На основе сведений о показателях микробного состава эякулята, определяемых в lg ГЭ/мл, тест «Андрофлор», рассчитывают прогностический индекс - ЭХО-Про-N по оригинальной формуле. И если значение ЭХО-Про-N>0 - вероятность получения более 40% эмбрионов отличного и хорошего качества низкая, если ЭХО-Про-N≤0 - высокая. Способ обеспечивает быстрое получение результатов прогнозирования, не требует дополнительных инвазивных вмешательств, легкодоступен, применим перед проведением начала лечения бесплодия методом ВРТ. 2 пр., 2 табл., 4 ил.
Description
Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии.
Изобретение относится к медицине, а именно к области клинико-лабораторной диагностики, репродуктологии и эмбриологии и может быть использовано для прогнозирования уровня бластуляции получаемых эмбрионов и оптимизации проводимого лечения бесплодия у пациенток методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).
Необходимость в применении вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) непрерывно растает, однако по данным Национального регистра Российской Ассоциации Репродукции Человека, эффективность программы ЭКО составляет не более 38,5% в расчете на перенос эмбриона [1]. Одним из ключевых факторов наступления беременности при использовании ВРТ является получение достаточного количества эмбрионов хорошего качества [2]. Способность прогнозировать количество получаемых эмбрионов хорошего качества позволит оптимизировать подготовку пациентов к проведению ВРТ и выбрать наиболее эффективный вариант ведения эмбриологического этапа.
В настоящее время ведется поиск и апробация маркеров имплантационного потенциала эмбрионов, которые позволяют анализировать метаболомный, протеомный, транскриптомный статусы фолликулярной жидкости и культуральных сред, в которых культивируются эмбрионы [3,4,5,6]. Ранее было предложено использовать для прогнозирования качества получаемых эмбрионов показатели концентрации ингибина В и лактоферрина в фолликулярной жидкости, уровня лептина в периферической крови[4,5].
Однако методы прогнозирования качества эмбрионов с учетом состава фолликулярной жидкости или культуральной среды, в которой находились эмбрионы, могут быть использованы только в момент проведения программы ВРТ, когда невозможно скорректировать тактику проводимого протокола лечения. По этой причине перечисленные способы прогнозирования качества эмбрионов пока не нашли широкого применения в клинической практике.
Поиск дополнительных маркеров, позволяющих повысить эффективность проводимого лечения у конкретной пары, остается важнейшей задачей репродуктологии.
С точки зрения этапности подготовки пары к ВРТ представляется перспективным поиск взаимосвязи между микробиологическими показателями эякулята и эффективностью эмбриологического этапа. Наличие бактерий в эякуляте может являться причиной контаминации эмбриологических сред, а также пагубно влиять на развивающиеся эмбрионы. Однако в литературе можно найти единичные упоминания о влиянии микробного состава эякулята на качество эмбрионов в программах ВРТ [7,8].
Аналогами прогнозирования уровня бластуляции эмбрионов с учетом микробного состава эякулята явились:
1. Способ прогнозирования качества эмбриона при проведении ЭКО у женщин с бесплодием (пат. РФ 2441243, 2010) [11]. При превышении содержания HLA-DR+ моноцитов более 68% в периферической венозной крови женщин с бесплодием прогнозируют получение эмбриона высокого качества.
Недостатки метода. При использовании метода не оцениваются анамнестические данные мужчины за исключением параметров спермограммы. При использовании метода не указаны условия проведения эмбриологического этапа ВРТ, которые могут влиять на качество эмбриона.
2. Способ прогнозирования качества эмбрионов в программе экстракорпорального оплодотворения (пат. РФ 2474823, 2011) [12]. При выявлении носительства аллелей DQBl*06 и/или DRBl*13 генов HLA II класса прогнозируют получение эмбрионов высокого качества, при отсутствии аллелей DQB1*06 и DRBl*13 прогнозируют низкое качество эмбрионов.
Недостатки метода. При использовании метода не учитываются анамнестические данные мужчины. Метод прогнозирует качество эмбрионов только для группы женщин с трубно-перитонеальным бесплодием.
3. Способ прогнозирования качества эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с учетом генотипа пациенток (пат. РФ 2577729, 2016) [13]. Женщине, планирующей проведение ВРТ, проводят генотипирование полиморфных локусов АМН 146 G>T(Ile49Ser), FSHR 2039 G>A (Ser680Asn), LHCGR 935 A>G (Asn312Ser), LHCGR 872 A>G (Asn291Ser) и по формуле рассчитывают вероятность получения эмбрионов низкого качества.
Недостатки метода. При описании метода не учитываются данные о микробиологическом исследовании эякулята, используемого для оплодотворения.
4. Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-технологических маркеров (пат. РФ 2577712, 2016) [14]. При выявлении в периферической крови пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия полиморфных локусов AMHR2 (-482 A>G), LHCGR (Ser312Asn), ESR2 G>A, LHCGR (Asn291Ser) прогнозируют получение незрелых ооцитов в программах ВРТ с вероятностью 92,5%.
Недостатки метода. Метод не учитывает вклад мужского фактора в результативность программ ЭКО, не оценивает дальнейшее развитие эмбрионов. Метод учитывает только группы цациенток с трубно-перинеальным фактором бесплодия.
Таким образом перед авторами была поставлена задача разработать эффективный способ прогнозирования получения эмбрионов хорошего и отличного качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии.
Поставленная задача достигается путем комплексного исследования эякулята на этапе предгравидарной подготовки, включающее оценку параметров спермограммы по стандарту ВОЗ, и определение микробного состава эякулята с помощью количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью тест-системы Андрофлор (ООО «ДНК-Технология ТС», Москва).
Материал для исследования (нативный эякулят) собирали в день оплодотворения яйцеклеток в пробирку Эппендорф, содержащую 0,5 мл физиологического раствора. ДНК выделяли с использованием комплекта реагентов ПРОБА-ГС (ООО «ДНК-Технология ТС», Москва). ПЦР-РВ проводили согласно инструкции производителя (https://www.dna-technology.ru/equipmentpr/nabory-reagentov-dlya-pcr-nabory-reagentov-dlya-vydeleniya-nukleinovyh-kislot-i-3).
Проводилось определение 24 показателей: общей бактериальной массы (ОБМ) образца и 23 групп микроорганизмов, из них 4 определяли качественно, остальные - количественно. На Фиг. 1. представлен Образец заключения. Анализ «Андрофлор».
Для обработки и анализа полученных данных использовалась компьютерная программа StatPlus:mac 8.0.3 (AnalystSoft, США).
В предлагаемом способе прогнозирования получения эмбрионов хорошего и отличного качества впервые в репродуктологии предложена уникальная формула для определения вероятности получения не менее 40% эмбрионов хорошего и отличного качества до начала программы ВРТ. Наличие не менее 40% бластоцист (эмбрионов 5 дня развития) хорошего и отличного качества является одним из индикаторов успешности проведения эмбриологического этапа [9].
Для исследования, мужчины, проходящие лечение методом ВРТ, собирали эякулят в стерильный контейнер в соответствии с рекомендациями ВОЗ по сбору эякулята для микробиологических исследований (пункт 2.2.4 Руководства ВОЗ) [10]. Анализ концентрации и подвижности сперматозоидов проводили с использованием анализатора Биола АФС-500 (НПФ «Биола», Москва). Морфологию сперматозоидов оценивали в окрашенных препаратах при 1000х увеличении микроскопа с использованием иммерсионного объектива. Для подсчета пероксидазо-положительных лейкоцитов использовали тест Лейкоскрин.
Способ позволяет рассчитывать прогноз для случаев нормозооспермии. Критериям нормозооспермии соответствовали пробы с объемом эякулята не менее 1,5 мл, концентрацией сперматозоидов не менее 15 млн/мл, общей подвижностью не менее 40% или прогрессивной подвижностью не менее 32%, нормальной морфологией сперматозоидов не менее 4%, рН 7,2, количеством лейкоцитов не более 1 млн/мл, отсутствием эритроцитов, выраженной агглютинации и агрегации сперматозоидов, отсутствием повышенной вязкости.
В исследование было включено 111 пациентов из супружеских пар, страдающих бесплодием и планирующих реализовать репродуктивную функцию с помощью экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). В зависимости от количества сформировавшихся бластоцист хорошего и отличного качества на эмбриологическом этапе культивирования пациенты были разделены на 2 группы. В первую группу включено 49 пациентов, у которых были получены не менее 40% бластоцист хорошего и отличного качества. Во вторую группу включено 62 пациента, у которых сформировалось менее 40% бластоцист хорошего и отличного качества.
Для удобства оценки вероятности получения не менее 40% эмбрионов хорошего и отличного качества для пар, в которых параметры спермограммы у мужчины соответствовали критериям нормозоосперии, нами был разработан способ прогнозирования с расчетом прогностического индекса ЭХО-Про-N (Эмбрионы Хорошего и Отличного качества Прогноз Нормозооспермия). Для разработки прогностического индекса в полученных матрицах клинико-лабораторных показателей проведен дискриминантный анализ переменных в исследуемых группах.
Для определения относительного вклада каждого отдельного микроорганизма в формирование вероятности получения более 40% бластоцист хорошего и отличного качества и разработки прогностического индекса проведено ранжирование признаков с помощью расчета канонических коэффициентов дискриминантной функции (ККДФ).
Наиболее значимыми микроорганизмами, необходимыми для расчета вероятности получения эмбрионов отличного и хорошего качества являлись следующие группы микроорганизмов: Staphylococcus spp., Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp., Enter obacteriaceae/Enterococcus spp., Gardnerella vaginalis, Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrihia spp./Fusobacterium spp., Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Bacteroides spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp., Anaerococcus spp., Peptostreptococcus spp./Parvimonas spp., Atopobium cluster, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Lactobacillus spp. Также учитывалась общая бактериальная масса (ОБМ). Данные были определены в формате Lg ГЭ/мл (геномэквивалентов в мл).
Индекс ЭХО-Про-N рассчитывается по формуле:
где X1 - ОБМ - общая бактериальная масса,
Х2 - Lactobacillus spp.,
Х3 - Staphylococcus spp.,
Х4 - Gardnerella vaginalis,
X5 - Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp.,
X6 - Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacterium spp.,
X7 - Ureaplasma urealyticum,
X8 - Ureaplasma parvum,
X9 - Atopobium cluster,
X10 - Bacteroides spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp.,
X11 - Anaerococcus spp.,
X12 - Peptostreptococcus spp./Parvimonas spp.,
X13 - Eubacterium spp.,
X14 - Haemophilus spp.,
X15 - Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp.,
X16 - Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp.
Если значение прогностического индекса ЭХО-Про-NX) - прогнозируют, что вероятность получения более 40% бластоцист хорошего и отличного качества низкая, если ЭХО-Про-N≤0 - высокая.
Среднее значение ЭХО-Про-N в группах 1 и 2 составило соответственно - 0,25 (-0,93-0,3) и 0,34 (0-0,74). Различия статистически значимы (р<0,001). На Фиг. 2 графически представлены значения индекса ЭХО-Про-N в группах 1 и 2.
Для оценки эффективности предлагаемого способа прогнозирования был проведен ROC-анализ. На Фиг. 3 представлена ROC-кривая для индекса ЭХО-Про-N. Площадь под кривой (areaundercurve - AUC) составила 0,752 (ДИ 95% 0,66-0,84), что соответствует хорошему качеству модели прогнозирования.
Для определения чувствительности и специфичности представленного способа прогнозирования использовалась экзаменационная выборка.
Показатели чувствительности и специфичности составили соответственно 73,47% и 72,58%, эффективность способа - 72,97%) (таблица 2).
Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании показателей микробного состава и параметров спермограммы эякулята проводится высокоэффективное прогнозирование получения достаточного количества эмбрионов отличного и хорошего качества.
Отличительные признаки способа: с помощью теста «Андрофлор» получают данные о микробном составе эякулята у пациентов с нормозооспермией и на основании полученных данных рассчитывают вероятность получения не менее 40% бластоцист отличного и хорошего качества.
Примеры практического использования заявляемого способа.
Пример 1. Супруги В. обратились для проведения программы ЭКО по поводу первичного трубного бесплодия в течение 6 лет. Пациент В., 37 лет, параметры спермограммы соответствуют нормозооспермии. Пациентка В., 35 лет, из анамнеза: 6 лет назад проведена лапароскопия и аднексэктомия справа по поводу осложнения после аппендэктомии. Через 4 года проведена гистеросальпингография (ГСГ) - левая маточная труба проходима, еще через 3 года проведена гистероскопия, в результате которой проведена полипэктомия, удалены железисто-фиброзные полипы. Через 2 года предпринята первая попытка ЭКО: проведена стимуляция суперовуляции по короткому протоколу с антагонистами ГнРГ, в день аспирации получено 4 ооцит-кумулюсных комплекса (ОКК), получено 2 эмбриона, беременность не наступила.
Данная попытка ЭКО вторая. Согласно, заявляемого способа, взят образец нативного эякулята в день аспирации ооцитов. Проведен тест «Андрофлор». Заключение по результатам теста: Структура бактериального микробиома соответствует норме. ДНК патогенных микроорганизмов не выявлена. Candida spp.ниже порогового уровня.
На Фиг. 1 представлены результаты теста «Андрофлор» пациента В. Определены значения степени количества микроорганизмов в lg ГЭ/мл.: X1-3,5; Х2, Х3, Х4, Х5, Х6, Х7, Х8, Х9, Х, 10, Х11, Х12, Х14, Х15, Х16-0; Х13-3,1.
Используя результаты теста рассчитываем индекс ЭХО-Про-N:
Значение полученного индекса показывает, что прогноз получения эмбрионов отличного и хорошего качества высокий. В результате траснвагинальной пункции аспирировано 4 ОКК, 3 из них - зрелые яйцеклетки. В результате оплодотворения методом ЭКО получены 2 нормальные зиготы, на 5 день из них выросли 2 бластоцисты, одна из которых - отличного качества, что составило 50%. В результате переноса 2 эмбрионов наступила беременность.
Пример 2. Супруги К., обратились для проведения программы ЭКО по поводу вторичного бесплодия в течение 7 лет, причина бесплодия - отсутствие овуляции. Пациент К, 33 лет, параметры спермограммы соответствуют норме. Пациентка К., 33 лет, в анамнезе - 1 беременность в возрасте 20 лет, наступила спонтанно, завершилась срочными родами.
Данная попытка ЭКО первая. Взят образец нативного эякулята в день аспирации ооцитов. Заключение по результатам теста «Андрофлор»: ДНК патогенных микроорганизмов не выявлена. Candida spp. - ниже порогового уровня. Структура бактериального микробиома изменена: присутствуют условно-патогенные микроорганизмы.
На Фиг. 4 представлены результаты теста «Андрофлор» пациента К. Определены значения степени количества микроорганизмов в lg ГЭ/мл: X1-4,4; Х-3,9; Х3-0; Х4-4,0; Х5-4,0; Х6-0; Х7-2,3; Х8-2,2; Х9-3,1; Х10-3,4; X11-0; Х12-0; Х13-3,7; Х14-0; Х15-0; Х16-0; Рассчитываем индекс ЭХО-Про-N.
Полученный результат прогноза - вероятность получения эмбрионов отличного и хорошего качества низкая. В результате траснвагинальной пункции аспирировано 17 ооцитов, 8 из них - зрелые. В результате оплодотворения методом ЭКО получены 8 нормальных зигот, на 5 день из них выросли 3 бластоцисты, две из которых - хорошего и отличного качества, что составило 25%. В результате переноса 2 эмбрионов беременность не наступила.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать эффективность эмбриологического этапа ВРТ у пар, планирующих процедуру ЭКО, при показателях эякулята, соответствующих критериям нормозооспермии.
Данный способ может быть использован на этапе предварительного обследования мужчин из пар, планирующих проведение ВРТ. В случае выявления отклонений в микробном составе эякулята по результатам теста «Андрофлор» врач-андролог предлагает провести корректирующую терапию до начала программы ВРТ и подобрать оптимальную тактику ведения эмбриологического этапа программы ВРТ. В случае если прогноз получения достаточного количества эмбрионов низкий, рекомендуется проведение оплодотворения методом интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ), а также применение более тщательного этапа «отмывки» сперматозоидов, используемых для оплодотворения.
Способ удобен в применении, так как не требует дополнительных инвазивных вмешательств, легкодоступен, обеспечивает быстрое получение необходимой информации, применим перед проведением начала лечения бесплодия методом ВРТ. Оценка микробиоты эякулята методом ПЦР-РВ может быть выполнена одновременно со спермограммой из одного образца.
Список литературы.
1. Национальный регистр РАРЧ // Российская ассоциация репродукции человека: ежегодн. отчет. 2019. URL: https://rahr.ru/d_registr_otchet/RegistrART2019.pdf (Дата обращения: 01.02.2022).
2. Ильина А.А., Калинина И.И., Трошина Т.Г., Ильин К.А., Болтовская М.Н., Степанова И.И., Аншина М.Б. Фолликулярная жидкость как среда, определяющая качество ооцита и исход программ ВРТ (обзор литературы) // Проблемы репродукции. - 2008. - №4. - С. 27-38.
3. Валиахметова Э.З. и др. Неинвазивное тестирование преимплантационных эмбрионов человека in vitro как способ прогнозирования исходов программ экстракорпорального оплодотворения //Акушерство и гинекология. - 2021. - №. 5. - С. 5-16.
4. Yanaihara A., MitsukawaK., Iwasaki S., Otsuki K., Kawamura Т., Okai Т. High concentrations of lactoferrin in the follicular fluid correlate with embryo quality during in vitro fertilization cycles // Fertil. Steril - 2007. - Vol. 87. - N.2. - P.279-282
5. Chang C.L., Wang T.H., Horng S.G., Wu H.M., Wang H.S., Soong Y.K. The concentration of inhibinBin follicular fluid: relation to oocyte maturation and embryo development // Hum.Reprod. - 2002. - Vol. 17. - N.7. - P. 1724-1728.
6. Georgios A., Eleni K., Ioannis S., Vassilios L., Constantinos L., ThemisM., Nikolaos V. Serum and follicular fluid leptin levels are correlated with human embryo quality // Reproduction. - 2005. Vol. 130 - P. 917-921.
7. Stsepetova J. et al. The complex microbiome from native semen to embryo culture environment in human in vitro fertilization procedure //Reproductive Biology and Endocrinology. - 2020. - T. 18. - №. 1. - C. 1-13.
8. Zeyad A. et al. Relationships between bacteriospermia, DNA integrity, nuclear protamine alteration, sperm quality and ICSI outcome // Reproductive biology. - 2018. - Т. 18. - №. 1. - C. 115-121.
9. The Vienna consensus: report of an expert meeting on the development of ART laboratory performance indicators // Reproductive BioMedicine Online. - 2017. - T. 35. - №. 5. - C. 494-510.
10. Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, пятое издание // Москва, 2012.
11. Патент на изобретение РФ №2441243 от 27.01.2012 «Способ прогнозирования качества эмбриона при проведении ЭКО у женщин с бесплодием» / Сотникова Н.А., Речистова И.В., Посисеева Л.В. и др.
12. Патент на изобретение РФ №2474823 от 10.02.2013 «Способ прогнозирования качества эмбрионов в программе экстракорпорального оплодотворения» / Малышкина А.И., Липин М.А., Фетисова И.Н. и др.
13. Патент на изобретение РФ №2577729 от 20.03.2016 «Способ прогнозирования качества эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с учетом генотипа пациентов» / Донников А.Е., Калинина Е.А., Владимирова И.В. и др.
14. Патент на изобретение РФ №2577712 от 20.03.2016 «Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-технологических» / Калинина Е.А., Донников А.Е., Владимирова И.В. и др.
Claims (19)
- Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии, характеризирующийся тем, что проводят тест «Андрофлор» в эякуляте, выделяют значение общей бактериальной массы и значения показателей микроорганизмов, в lg ГЭ/мл: Staphylococcus spp., Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp., Enterobacteriaceae/Enterococcus spp., Gardnerella vaginalis, Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrihia spp./Fusobacterium spp., Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Bacteroides spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp., Anaerococcus spp., Peptostreptococcus spp./Parvimonas spp., Atopobium cluster, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Lactobacillus spp. и рассчитывают прогностический индекс ЭХО-Про-N по формуле:
-
- где X1 - ОБМ - общая бактериальная масса,
- Х2 - Lactobacillus spp.,
- Х3 - Staphylococcus spp.,
- Х4 - Gardnerella vaginalis,
- X5 - Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp.,
- X6 - Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacterium spp.,
- X7 - Ureaplasma urealyticum,
- X8 - Ureaplasma parvum,
- X9 - Atopobium cluster,
- X10 - Bacteroides spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp.,
- X11 - Anaerococcus spp.,
- X12 - Peptostreptococcus spp./Parvimonas spp.,
- X13 - Eubacterium spp.,
- X14 - Haemophilus spp.,
- X15 - Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp.,
- X16 - Enter ohacteriaceae spp./Enterococcus spp.,
- и если значение прогностического индекса ЭХО-Про-N≤0 - вероятность получения более 40% эмбрионов отличного и хорошего качества высокая, а если ЭХО-Про-N>0 - низкая.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2807471C1 true RU2807471C1 (ru) | 2023-11-15 |
Family
ID=
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2666604C1 (ru) * | 2017-12-19 | 2018-09-11 | Владислав Геннадьевич Ившин | Способ оценки кислотно-щелочного состояния женских половых органов (варианты) |
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2666604C1 (ru) * | 2017-12-19 | 2018-09-11 | Владислав Геннадьевич Ившин | Способ оценки кислотно-щелочного состояния женских половых органов (варианты) |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Pagliuca C. et al. Microbiological evaluation and sperm DNA fragmentationin semen samples of patients undergoing fertility investigation.Genes. 2021; 12 (5): 654. * |
Ворошилина Е. С., Зорников Д. Л., Иванов А. В., Почерников Д. Г., Паначева Е. А. Микробиота эякулята: кластерный анализ результатов, полученных при исследовании методом ПЦРРВ. Вестник Российского государственного медицинского университета. 2020; (5): 66-73. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Yang et al. | The effect of sperm DNA fragmentation index on assisted reproductive technology outcomes and its relationship with semen parameters and lifestyle | |
Feijó et al. | Diagnostic accuracy of sperm chromatin dispersion test to evaluate sperm deoxyribonucleic acid damage in men with unexplained infertility | |
Nagy et al. | Metabolomic assessment of oocyte viability | |
CA2585784A1 (en) | Methods of determining human egg competency | |
Burnik Papler et al. | No specific gene expression signature in human granulosa and cumulus cells for prediction of oocyte fertilisation and embryo implantation | |
CN102459635A (zh) | 用于选择对于妊娠结果具有高潜能的感受态卵母细胞和感受态胚胎的方法 | |
Rocafort et al. | Euploid embryos selected by an automated time-lapse system have superior SET outcomes than selected solely by conventional morphology assessment | |
ESHRE Add-ons working group et al. | Good practice recommendations on add-ons in reproductive medicine | |
Katz‐Jaffe et al. | DNA identification of fetal cells isolated from cervical mucus: potential for early non‐invasive prenatal diagnosis | |
Henkel et al. | Predictive value of seminal oxidation-reduction potential analysis for reproductive outcomes of ICSI | |
Cai et al. | Evaluation of preimplantation genetic testing based on next-generation sequencing for balanced reciprocal translocation carriers | |
Bibi et al. | Protamines and DNA integrity as a biomarkers of sperm quality and assisted conception outcome | |
Bar-Yoseph et al. | Morphological embryo assessment: reevaluation | |
Mandelbaum et al. | Developmental potential of immature human oocytes aspirated after controlled ovarian stimulation | |
RU2550965C1 (ru) | Способ прогнозирования наступления беременности в программе экстракорпорального оплодотворения при селективном переносе эмбрионов путем оценки молекулярно-генетического профиля гамет с помощью пцр-рв | |
RU2807471C1 (ru) | Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормозооспермии | |
Younes et al. | When to do intracytoplasmic sperm injection: a prospective comparison | |
Lee et al. | Associations between the artificial intelligence scoring system and live birth outcomes in preimplantation genetic testing for aneuploidy cycles | |
Tabibnejad et al. | Assessing ICSI outcome by combining non‐invasive indicators: early time‐lapse morphokinetics and apoptosis in associated cumulus cells among women with the polycystic ovarian syndrome | |
RU2804586C1 (ru) | Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при астенозооспермии | |
Capper et al. | Low oocyte maturity ratio is associated with a reduced in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection live birth rate | |
Liu et al. | Array comparative genomic hybridization screening in IVF significantly reduces number of embryos available for cryopreservation | |
Logsdon et al. | Maternal physiology and blastocyst morphology are correlated with an inherent difference in peri-implantation human embryo development | |
Khalid et al. | Pregnancy rate improves in couples with unexplained infertilifty following intrauterine insemination (IUI) with magnetically selected non-apoptotic sperms | |
RU2646822C1 (ru) | Способ прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения |