RU2806593C1 - Method of cultivation of bradyrhizobium japonicum rz300 soybean nodulate bacteria - Google Patents
Method of cultivation of bradyrhizobium japonicum rz300 soybean nodulate bacteria Download PDFInfo
- Publication number
- RU2806593C1 RU2806593C1 RU2023117692A RU2023117692A RU2806593C1 RU 2806593 C1 RU2806593 C1 RU 2806593C1 RU 2023117692 A RU2023117692 A RU 2023117692A RU 2023117692 A RU2023117692 A RU 2023117692A RU 2806593 C1 RU2806593 C1 RU 2806593C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- culture
- volume
- nutrient medium
- amount
- bradyrhizobium japonicum
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Заявленное изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства, в частности относится к способу получения микробиологических препаратов путем культивирования осмотически устойчивого штамма клубеньковых бактерий сои с добавлением в культуру углеводных осмопротекторов и полимерных пленкообразователей для дополнительного повышения устойчивости клеток к высыханию и получения ризобиального инокулянта под сою, эффективного при заблаговременной обработке семян.The claimed invention relates to the field of biotechnology and agriculture, in particular relates to a method for producing microbiological preparations by cultivating an osmotically stable strain of soybean nodule bacteria with the addition of carbohydrate osmoprotectors and polymer film formers to the culture to further increase the resistance of cells to drying out and obtain a rhizobial inoculant for soybeans that is effective with advance seed treatment.
Инокуляция ризобиями способствует развитию сельскохозяйственного производства за счет улучшения роста растений, доступности и усвоения питательных веществ, а также урожайности за счет усиления биофиксации атмосферного азота и солюбилизации питательных веществ почвы. Кроме того, ризобиальные инокулянты обеспечивают биоконтроль болезней растений, обеспечивая устойчивость к вызывающим болезнь патогенам или подавляя болезни.Inoculation with rhizobia promotes agricultural production by improving plant growth, nutrient availability and uptake, and crop yields by enhancing biofixation of atmospheric nitrogen and solubilization of soil nutrients. In addition, rhizobial inoculants provide biocontrol of plant diseases by providing resistance to disease-causing pathogens or suppressing diseases.
В связи с чем появилась необходимость в получении микробиологического препарата для обработки семян сои, бактерии которого будут иметь большую жизнеспособность после их внесения на семенной материал.In connection with this, there is a need to obtain a microbiological preparation for treating soybean seeds, the bacteria of which will have greater viability after they are applied to the seed material.
Из уровня техники известна группа изобретений, которая относится к штаммам Bradyrhizobium japonicum для улучшения роста растения и композиции на основе данных штаммов и семени, покрытому указанной композицией. Для улучшения роста растений предложены штамм Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50608, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50609, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50610, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50611, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50612 (RU 2588483 C2, опубл. 27.06.2016). A group of inventions is known from the prior art, which relates to strains of Bradyrhizobium japonicum for improving plant growth and compositions based on these strains and seeds coated with said composition. To improve plant growth, the following strains have been proposed: Bradyrhizobium japonicum NRRL B-50608, Bradyrhizobium japonicum NRRL B-50609, Bradyrhizobium japonicum NRRL B-50610, Bradyrhizobium japonicum NRRL B-50611, Bradyrhizobium japonicum NRRL B-50612 (RU 2588483 C 2, published June 27, 2016 ).
Из документа RU 2428467 C2, опубл. 10.09.2021 известен способ получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий включает, который включает получение жидкого инокулянта бактерий, выращенных по существу до стационарной фазы, где бактерии представляют собой бактерии одного или нескольких родов из Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas и Serratia; и добавление в количестве, достаточном для частичного обезвоживания жидкого инокулянта бактерий, обезвоживающей добавки, включающей десикант, к жидкому инокулянту бактерий для получения препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий, где десикант представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из трегалозы, сахарозы, глицерина, триэтиленгликоля и маннита, в количестве от примерно 5% до примерно 50% (мас./об.) препарата частично обезвоженного жидкого инокулянта бактерий. Последующее нанесение полученного препарата, частично обезвоженного инокулянта бактерий на сухой носитель, позволит получить сухой сыпучий препарат инокулянта бактерий.From document RU 2428467 C2, publ. 09/10/2021 a known method of producing a preparation of a partially dehydrated liquid inoculant of bacteria includes, which includes obtaining a liquid inoculant of bacteria grown to substantially stationary phase, where the bacteria are bacteria of one or more genera of Rhizobium, Bradyrhizobium, Pseudomonas and Serratia; and adding, in an amount sufficient to partially dehydrate the liquid bacterial inoculant, a dehydrating additive comprising a desiccant to the liquid bacterial inoculant to form a partially dehydrated liquid bacterial inoculant preparation, wherein the desiccant is one or more compounds selected from trehalose, sucrose, glycerol, triethylene glycol and mannitol, in an amount of from about 5% to about 50% (w/v) of the partially dehydrated liquid bacterial inoculant preparation. Subsequent application of the resulting preparation, a partially dehydrated bacterial inoculant, onto a dry carrier will produce a dry bulk preparation of the bacterial inoculant.
В качестве аналога выбран способ инкрустации семян бобовых культур, который на первом этапе включает раздельное культивирование штаммов клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium leguminosarum bv. viciae или Mesorhizobium cicer и культивирование штамма-продуцента внеклеточных полисахаридов Paenibacillus mucilaginosus для накопления бактериальных экзополисахаридов (ЭПС); на втором этапе осуществляют стабилизацию клубеньковых бактерий с помощью раствора трегалозы, поливинилпирролидона и др, для чего в жидкую культуру Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium leguminosarum bv. viciae или Mesorhizobium ciceri вносят стерильный раствор, например, трегалозы, полученную суспензию выдерживают 1-3 ч при температуре 20-25°С, а затем охлаждают при 4°С; на третьем этапе проводят стерилизацию культуры штамма-продуцента внеклеточных полисахаридов класса Paenibacillus mucilaginosus путем автоклавирования; на четвертом этапе готовят жидкий биополимерный стабилизатор, для чего в стерильный 0,85% раствор хлористого натрия добавляют не менее 60% инактивированной культуральной жидкости Paenibacillus mucilaginosus и компоненты перемешивают; на пятом этапе получают стабилизированную форму биологического инкрустатора, для чего суспензию стабилизированной культуры клубеньковых бактерий, полученную на втором этапе, смешивают с биополимерным стабилизатором, полученным на четвертом этапе, и 10% раствором поливинилового спирта в соотношении 1:1:1, смесь выдерживают в течение 1 ч при температуре 20-25°С; на шестом этапе семена бобовых культур смешивают с готовым жидким биологическим инкрустатором в количестве 2-5% к массе семян, после чего обработанные семена покрывают антислеживающим агентом в количестве 2-5% к массе семян; на седьмом этапе осуществляют мягкую сушку инкрустированных семян при постоянном перемешивании при температуре 40-42°С в течение 120-180 мин до влажности 12-15% (RU 2784970 С1, 01.12.2022).As an analogue, the method of inlaying leguminous seeds was chosen, which at the first stage includes separate cultivation of strains of nodule bacteria Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium leguminosarum bv. viciae or Mesorhizobium cicer and cultivation of the extracellular polysaccharide-producing strain Paenibacillus mucilaginosus for the accumulation of bacterial exopolysaccharides (EPS); at the second stage, the nodule bacteria are stabilized using a solution of trehalose, polyvinylpyrrolidone, etc., for which a liquid culture of Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium leguminosarum bv. viciae or Mesorhizobium ciceri, a sterile solution, for example, trehalose, is added, the resulting suspension is kept for 1-3 hours at a temperature of 20-25°C, and then cooled at 4°C; at the third stage, the culture of the producer strain of extracellular polysaccharides of the class Paenibacillus mucilaginosus is sterilized by autoclaving; at the fourth stage, a liquid biopolymer stabilizer is prepared, for which at least 60% of the inactivated culture liquid of Paenibacillus mucilaginosus is added to a sterile 0.85% sodium chloride solution and the components are mixed; at the fifth stage, a stabilized form of the biological incrustator is obtained, for which a suspension of a stabilized culture of nodule bacteria obtained at the second stage is mixed with a biopolymer stabilizer obtained at the fourth stage and a 10% solution of polyvinyl alcohol in a ratio of 1:1:1, the mixture is kept for 1 hour at a temperature of 20-25°C; at the sixth stage, legume seeds are mixed with a ready-made liquid biological incrustator in an amount of 2-5% by weight of the seeds, after which the treated seeds are coated with an anti-caking agent in an amount of 2-5% by weight of the seeds; at the seventh stage, soft drying of the inlaid seeds is carried out with constant stirring at a temperature of 40-42°C for 120-180 minutes to a humidity of 12-15% (RU 2784970 C1, 12/01/2022).
Недостатком аналога RU 2784970 является сложный и многоступенчатый процесс приготовления стабилизирующих компонентов, который состоит из 5 этапов, каждый из которых требует большого количества специализированных ёмкостей и временных затрат. Данный способ не может быть использован в современном биотехнологическом производстве из-за сложности его реализации. Кроме того, в производственных условиях обрабатывать семена данным составом, затем покрывать их антислёживателем, а затем сушить - невыполнимая задача, особенно когда речь идёт о десятках или сотнях тонн семенного материала. The disadvantage of the analogue RU 2784970 is the complex and multi-stage process of preparing stabilizing components, which consists of 5 stages, each of which requires a large number of specialized containers and time. This method cannot be used in modern biotechnological production due to the complexity of its implementation. In addition, in production conditions, treating seeds with this composition, then covering them with an anti-caking agent, and then drying them is an impossible task, especially when we are talking about tens or hundreds of tons of seed material.
Технический результат заявленного способа заключается в высокой эффективности клубенькообразования с последующей их азотфиксирующей активностью, обеспеченных за счет симбиотической активности жизнеспособных бактерий, нанесенных в составе инокулянта на семена заблаговременно за несколько суток до посева.The technical result of the claimed method is the high efficiency of nodule formation with subsequent nitrogen-fixing activity, ensured by the symbiotic activity of viable bacteria applied as part of the inoculant to the seeds several days before sowing.
Технический результат заявленного способа достигается за счет использования осмотически устойчивого штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 и добавления углеводного осмопротектора на основе трегалозы и полимерного пленкообразователя на основе поливинилпирролидона в стационарную фазу роста бактерий при приготовлении препаративных форм, что позволяет дополнительно повысить осмоустойчивость бактерий на поверхности инокулированного семенного материала. The technical result of the claimed method is achieved through the use of an osmotically stable strain of Bradyrhizobium japonicum RZ300 and the addition of a carbohydrate osmoprotector based on trehalose and a polymer film former based on polyvinylpyrrolidone in the stationary phase of bacterial growth when preparing preparative forms, which makes it possible to further increase the osmostability of bacteria on the surface of the inoculated seed material.
Технический результат заявленного способа реализуется путем культивирования осмотически устойчивого штамма клубеньковых бактерий сои Bradyrhizobium japonicum RZ300 для получения жидкого ризобиального инокулянта под сою, включающий последовательные этапы: стерилизацию жидкой питательной среды следующего состава: маннит - 10,0 г/л; дрожжевой экстракт - 0,5 г/л; глутамат натрия - 0,1 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4 г/л; натрий хлористый - 0,2 г/л; магний сернокислый - 0,1 г/л; вода, асептическое внесение посевной культуры клубеньковых штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 в количестве 2% от объёма стерилизованной жидкой питательной среды, глубинное культивирование целевого микроорганизма в течение 7 сут. при температуре 28-30°С, механическом перемешивании со скоростью 100-150 об/мин, интенсивности аэрации от 0,7 до 1 литра воздуха/литр жидкой питательной среды в минуту, с асептическим внесением в культуру на 7 сут. выращивания стерилизованных растворов осмопротектора трегалозы в количестве 5-15% от объема культуры и полимерного пленкообразователя поливинилпирролидона в количестве 5-10% от объема культуры.The technical result of the claimed method is realized by cultivating an osmotically stable strain of soybean nodule bacteria Bradyrhizobium japonicum RZ300 to obtain a liquid rhizobial inoculant for soybeans, including successive stages: sterilization of a liquid nutrient medium of the following composition: mannitol - 10.0 g/l; yeast extract - 0.5 g/l; monosodium glutamate - 0.1 g/l; disubstituted potassium phosphate - 0.4 g/l; sodium chloride - 0.2 g/l; magnesium sulfate - 0.1 g/l; water, aseptic introduction of seed culture of nodule strain Bradyrhizobium japonicum RZ300 in an amount of 2% of the volume of sterilized liquid nutrient medium, deep cultivation of the target microorganism for 7 days. at a temperature of 28-30°C, mechanical stirring at a speed of 100-150 rpm, aeration intensity from 0.7 to 1 liter of air/liter of liquid nutrient medium per minute, with aseptic introduction into the culture for 7 days. growing sterilized solutions of the osmoprotector trehalose in an amount of 5-15% of the culture volume and the polymer film former polyvinylpyrrolidone in an amount of 5-10% of the culture volume.
Растворы осмопротектора трегалозы и пленкообразователя поливинилпирролидона стерилизуют острым паром при температуре 121°С в течение 40 минут или обеззараживают УФ-излучением в дозе не менее 30 мДж/см2 Solutions of the osmoprotector trehalose and the film former polyvinylpyrrolidone are sterilized with live steam at a temperature of 121°C for 40 minutes or disinfected with UV radiation at a dose of at least 30 mJ/ cm2
Углеводный осмопротектор и полимерный пленкообразователь на 7 сут. выращивания вводят в культуру дробно двукратно в равных долях с интервалом 8 ч между внесениями в общем количестве 5-15% от объема культуры осмопротектора трегалозы и 5-10% от объема культуры полимерного пленкообразователя поливинилпирролидона. Carbohydrate osmoprotector and polymer film former for 7 days. cultivation is introduced into the culture fractionally twice in equal shares with an interval of 8 hours between applications in a total amount of 5-15% of the volume of the culture of the osmoprotector trehalose and 5-10% of the volume of the culture of the polymer film-forming agent polyvinylpyrrolidone.
Добавление углеводного осмопротектора трегалозы и полимерного пленкообразователя на основе поливинилпирролидона в стационарную фазу роста бактерий при приготовлении препаративных форм клубеньковых бактерий позволяет повысить осмоустойчивость бактерий на поверхности семенного материала при инокуляции.The addition of the carbohydrate osmoprotector trehalose and a polymer film former based on polyvinylpyrrolidone into the stationary phase of bacterial growth when preparing preparative forms of nodule bacteria makes it possible to increase the osmoresistance of bacteria on the surface of the seed material during inoculation.
Питательная среда для выращивания штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 готовится посредством растворения компонентов (маннит - 10,0 г/л; дрожжевой экстракт - 0,5 г/л; глутамат натрия - 0,1 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4 г/л; натрий хлористый - 0,2 г/л, магний сернокислый - 0,1 г/л,) в воде с последующей стерилизацией раствора острым паром при 121°С в течение 40 минут.The nutrient medium for growing the Bradyrhizobium japonicum RZ300 strain is prepared by dissolving the components (mannitol - 10.0 g/l; yeast extract - 0.5 g/l; monosodium glutamate - 0.1 g/l; disubstituted potassium phosphate - 0.4 g /l; sodium chloride - 0.2 g/l, magnesium sulfate - 0.1 g/l) in water, followed by sterilization of the solution with live steam at 121°C for 40 minutes.
Затем в данную питательную среду асептически производится посев клубеньковых бактерий штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 посредством внесения инокулюма клеток с титром 1-3*109 КОЕ/мл в количестве 2% от объёма питательной среды. Then, nodule bacteria of the strain Bradyrhizobium japonicum RZ300 are aseptically inoculated into this nutrient medium by adding an inoculum of cells with a titer of 1-3*10 9 CFU/ml in an amount of 2% of the volume of the nutrient medium.
Культивируют клубеньковые бактерии штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 с определёнными режимами аэрации и температуры. Культивирование клеток осуществляется при температуре 28-30°С, механическом перемешивании со скоростью 100-150 об/мин, интенсивности аэрации от 0,7 до 1 литра воздуха/литр жидкой питательной среды в минуту в течение 7 сут.Nodule bacteria of the Bradyrhizobium japonicum RZ300 strain are cultivated under certain aeration and temperature regimes. Cell cultivation is carried out at a temperature of 28-30°C, mechanical stirring at a speed of 100-150 rpm, aeration intensity from 0.7 to 1 liter of air/liter of liquid nutrient medium per minute for 7 days.
На конечных стадиях культивирования, т.е. на 7 сут., когда бактерии выходят в стационарную фазу роста - асептически добавляется стерильный раствор углеводного осмопротектора трегалозы и полимерного пленкообразователя поливинилпирролидона для дополнительного повышения устойчивости клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum RZ300 к высыханию.At the final stages of cultivation, i.e. on the 7th day, when the bacteria enter the stationary growth phase, a sterile solution of the carbohydrate osmoprotector trehalose and the polymer film former polyvinylpyrrolidone is aseptically added to further increase the resistance of the nodule bacteria Bradyrhizobium japonicum RZ300 to drying out.
Из полученной культуральной жидкости готовят препаративную форму, путём ее асептического розлива по канистрам.A preparative form is prepared from the resulting culture liquid by aseptically filling it into canisters.
Пример 1: в качестве агрономически полезного микроорганизма взяли штамм клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum RZ300, который выращивали, на простерилизованной при 121°С в течение 40 минут, манитно-дрожжевой среде следующего состава: маннит - 10,0 г/л; дрожжевой экстракт - 0,5 г/л; глутамат натрия - 0,1 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4 г/л; натрий хлористый - 0,2 г/л; магний сернокислый - 0,1 г/л. Затем в данную питательную среду производится асептическое внесение бактериального посевного материала в количестве 2% от объёма питательной среды. Культивирование целевого микроорганизма производят глубинным способом в периодическом режиме в течение 7 сут. при перемешивании со скоростью 100-150 об/мин, интенсивности аэрации от 0,7 до 1 литра воздуха/литр питательной среды в минуту и температуре 28-30°С. В момент достижения клетками стационарной фазы роста в культуру аспептически вводится предварительно простерилизованный при 121°С в течение 40 минут 25% р-р трегалозы из расчета получения 5-15% ее концентрации в препарате. Дополнительно в препарат асептически вводится предварительно простерилизованный при 121°С в течение 40 минут 50% р-р поливинилпирролидона из расчета получения 10-20% его концентрации в препарате.Example 1: a strain of nodule bacteria Bradyrhizobium japonicum RZ300 was taken as an agronomically useful microorganism, which was grown in mannitol-yeast medium sterilized at 121°C for 40 minutes with the following composition: mannitol - 10.0 g/l; yeast extract - 0.5 g/l; monosodium glutamate - 0.1 g/l; disubstituted potassium phosphate - 0.4 g/l; sodium chloride - 0.2 g/l; magnesium sulfate - 0.1 g/l. Then, bacterial inoculum is aseptically added to this nutrient medium in an amount of 2% of the volume of the nutrient medium. Cultivation of the target microorganism is carried out by deep method in a periodic mode for 7 days. with stirring at a speed of 100-150 rpm, aeration intensity from 0.7 to 1 liter of air/liter of nutrient medium per minute and a temperature of 28-30°C. When the cells reach the stationary growth phase, a 25% trehalose solution, pre-sterilized at 121°C for 40 minutes, is aseptically introduced into the culture to obtain 5-15% of its concentration in the preparation. Additionally, a 50% solution of polyvinylpyrrolidone, previously sterilized at 121°C for 40 minutes, is aseptically introduced into the preparation to obtain 10-20% of its concentration in the preparation.
Пример 2: в качестве агрономически полезного микроорганизма взяли штамм клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum RZ300, который выращивали, на простерилизованной при 121°С в течение 40 минут, манитно-дрожжевой среде следующего состава: маннит - 10,0 г/л; дрожжевой экстракт - 0,5 г/л; глутамат натрия - 0,1 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4 г/л; натрий хлористый - 0,2 г/л, магний сернокислый - 0,1 г/л. Затем в данную питательную среду производится асептическое внесение бактериального посевного материала в количестве 2% от объёма питательной среды. Культивирование целевого микроорганизма производят глубинным способом в периодическом режиме в течение 7 сут. при перемешивании со скоростью 100-150 об/мин, интенсивности аэрации от 0,7 до 1 литра воздуха/литр питательной среды в минуту и температуре 28-30°С. В момент достижения клетками стационарной фазы роста в культуру аспептически дробно двукратно в равных долях с интервалом в 8 ч вводится предварительно обеззараженный УФ-излучением в дозе не менее 30 мДж/см2 25% р-р трегалозы из расчета получения 5-15% ее конечной концентрации в препарате. Дополнительно в препарат асептически вводится предварительно обеззараженный УФ-излучением в дозе не менее 30 мДж/см2 50% р-р поливинилпирролидона из расчета получения 10-20% его конечной концентрации в препарате.Example 2: a strain of nodule bacteria Bradyrhizobium japonicum RZ300 was taken as an agronomically useful microorganism, which was grown in mannitol-yeast medium sterilized at 121°C for 40 minutes with the following composition: mannitol - 10.0 g/l; yeast extract - 0.5 g/l; monosodium glutamate - 0.1 g/l; disubstituted potassium phosphate - 0.4 g/l; sodium chloride - 0.2 g/l, magnesium sulfate - 0.1 g/l. Then, bacterial inoculum is aseptically added to this nutrient medium in an amount of 2% of the volume of the nutrient medium. Cultivation of the target microorganism is carried out by deep method in a periodic mode for 7 days. with stirring at a speed of 100-150 rpm, aeration intensity from 0.7 to 1 liter of air/liter of nutrient medium per minute and a temperature of 28-30°C. When the cells reach the stationary phase of growth , a 25% solution of trehalose, previously disinfected with UV radiation at a dose of at least 30 mJ/cm2, is introduced into the culture aseptically, fractionally, twice in equal parts with an interval of 8 hours, to obtain 5-15% of its final concentrations in the drug. Additionally, a 50% solution of polyvinylpyrrolidone, previously disinfected with UV radiation at a dose of at least 30 mJ/ cm2, is aseptically introduced into the drug to obtain 10-20% of its final concentration in the drug.
Преимущество предложенного способа достигается за счёт использования осмотически устойчивого штамма, питательной среды специального состава и определенных технологических параметрах процесса культивирования, добавления в культуру осмопротектора трегалозы и полимерного пленкообразователя поливинилпирролидона, что обеспечивает повышенную устойчивость бактериальных клеток к высыханию на семенах и позволяет эффективно заблаговременно инокулировать семенной материал. The advantage of the proposed method is achieved through the use of an osmotically stable strain, a nutrient medium of a special composition and certain technological parameters of the cultivation process, the addition of the osmoprotector trehalose and the polymer film former polyvinylpyrrolidone to the culture, which ensures increased resistance of bacterial cells to drying out on the seeds and allows for effective inoculation of the seed material in advance.
Было показано, что бактерии осмотически устойчивого штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 в составе препарата, произведенного по предложенному способу, имеют большую жизнеспособность после их нанесения на семенной материал. Так, при нанесении инокулянта на основе штамма Bradyrhizobium japonicum RZ300 жизнеспособность клубеньковых бактерий на поверхности семенного материла через 1 сутки составляет 495 тыс. КОЕ на 1 семени, в отличие от 15 тыс. КОЕ при обработке инокулянтами на основе стандартных производственных штаммов (при равной биологической нагрузке в момент обработки семян). На 2 и 3 сутки численность стандартных штаммов практически равно 0, в то время как штамм Bradyrhizobium japonicum RZ300 сохраняется в количестве 250-300 тыс. КОЕ на 1 семени, чего вполне достаточно для эффективной инокуляции. It was shown that bacteria of the osmotically stable strain Bradyrhizobium japonicum RZ300 in the composition of the preparation produced according to the proposed method have greater viability after they are applied to the seed material. Thus, when applying an inoculant based on the Bradyrhizobium japonicum RZ300 strain, the viability of nodule bacteria on the surface of the seed material after 1 day is 495 thousand CFU per 1 seed, in contrast to 15 thousand CFU when treated with inoculants based on standard production strains (with equal biological load at the time of seed processing). On days 2 and 3, the number of standard strains is almost equal to 0, while the Bradyrhizobium japonicum RZ300 strain remains in the amount of 250-300 thousand CFU per 1 seed, which is quite enough for effective inoculation.
Работа поддержана грантом Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-15-2022-320 от 20 апреля 2022 г.) на создание и развитие Научного центра мирового уровня «Агротехнологии будущего».The work was supported by a grant from the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (agreement No. 075-15-2022-320 dated April 20, 2022) for the creation and development of the world-class Scientific Center “Agricultural Technologies of the Future.”
Claims (3)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2806593C1 true RU2806593C1 (en) | 2023-11-01 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5106648A (en) * | 1989-01-06 | 1992-04-21 | Agricultural Genetics Company Limited | Method of preparing coated seeds |
| RU2428467C2 (en) * | 2004-12-23 | 2011-09-10 | Бекер Андервуд Инк. | Liquid bacterial inoculants with extended useful life and enhanced stability on seeds |
| RU2784970C1 (en) * | 2021-08-27 | 2022-12-01 | Общество с ограниченной ответственностью «Новобиом» | Method for biological incrustation of legume seeds |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5106648A (en) * | 1989-01-06 | 1992-04-21 | Agricultural Genetics Company Limited | Method of preparing coated seeds |
| RU2428467C2 (en) * | 2004-12-23 | 2011-09-10 | Бекер Андервуд Инк. | Liquid bacterial inoculants with extended useful life and enhanced stability on seeds |
| RU2784970C1 (en) * | 2021-08-27 | 2022-12-01 | Общество с ограниченной ответственностью «Новобиом» | Method for biological incrustation of legume seeds |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101629793B1 (en) | A medium for production of morchella esculenta | |
| CN108949845A (en) | A kind of fermentation medium and the method that mupirocin is prepared by fermentation medium | |
| CN104705347B (en) | One cultivates peanut Slow_growing rhizobia agent, preparation method and use | |
| CN105439726A (en) | Bacillus megaterium bacterial fertilizer for onsite fermentation in farm and applications thereof | |
| CN109055274B (en) | Caragana rhizobium and fermentation culture method and application thereof | |
| CN107628894A (en) | Composite bacteria agent increase soil fertility and its preparation method and application | |
| Islam et al. | Isolation, Identification and Charact Cicer Arietinum | |
| RU2806593C1 (en) | Method of cultivation of bradyrhizobium japonicum rz300 soybean nodulate bacteria | |
| CN104087539B (en) | Streptomyces microflavus solid fermentation culture medium, preparation method and fermentation process thereof | |
| RU2487932C1 (en) | STRAIN OF NODULE BACTERIA Bradyrhizobium japonicum 859 FOR PRODUCTION OF FERTILISER FOR SOYA | |
| CN108947679A (en) | A kind of microbial organic fertilizer and preparation method thereof | |
| RU2237048C1 (en) | Method for cultivating nitrogen-fixing bacteria | |
| CN1107178A (en) | Bioligical fertilizer producing method and used microbe | |
| WO1996034840A1 (en) | Bacterial fertilizer and production process | |
| CN103849592A (en) | Production method for streptomycete spores | |
| CN112899188A (en) | Microbial agent for promoting crop root development and preparation and application thereof | |
| RU2675503C1 (en) | Method of obtaining biological preparation for stimulation of growth and protection of plants against diseases | |
| CN102405770A (en) | Method for promoting growth of pleurotus ostreatus by using bradyrhizobium ddjaponicum | |
| CN110923180A (en) | Bacillus megaterium liquid high-density fermentation medium and supplementary culture method thereof | |
| Mel'nikova et al. | Formation and function of the legume–rhizobium symbiosis of soybean plants while introducing bacterial strains from the genera Azotobacter and Bacillus | |
| CN115927083B (en) | Streptomyces viticola, microbial inoculum containing streptomyces viticola and application of microbial inoculum in low temperature resistance of crops | |
| CN103571758B (en) | Soil phosphorus-dissolvinfungi fungi inoculant, preparation method and application | |
| CN114009449B (en) | Method for increasing root nodule number with nitrogen fixation enzyme activity of root of leguminous crops and application of root nodule number with nitrogen fixation enzyme activity of root nodule number of leguminous crops in leguminous crops | |
| RU2776301C1 (en) | Method for producing a biological preparation for stimulating plant growth on a fructose medium | |
| Andreeva et al. | Optimization of natural communities of soil microorganisms as a way to create microbial fertilizers |