RU2788088C1 - Антитело против ang2 и его применение - Google Patents
Антитело против ang2 и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2788088C1 RU2788088C1 RU2021127705A RU2021127705A RU2788088C1 RU 2788088 C1 RU2788088 C1 RU 2788088C1 RU 2021127705 A RU2021127705 A RU 2021127705A RU 2021127705 A RU2021127705 A RU 2021127705A RU 2788088 C1 RU2788088 C1 RU 2788088C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- heavy chain
- light chain
- antibody
- gly
- Prior art date
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims abstract description 229
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims abstract description 229
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 140
- 102100007747 ANGPT2 Human genes 0.000 claims abstract description 92
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 87
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 87
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 101710043855 ANGPT2 Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 101700025229 Ang2 Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 18
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 208000009745 Eye Disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004748 cultured cells Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000771 oncological Effects 0.000 abstract description 3
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 abstract 1
- 101700073818 CDR1 Proteins 0.000 description 40
- 102100002977 CDR1 Human genes 0.000 description 33
- HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CS HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 30
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 23
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 22
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 22
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 22
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 20
- 229950002697 Nesvacumab Drugs 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 18
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 16
- 101710037124 TEK Proteins 0.000 description 16
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 16
- 239000002609 media Substances 0.000 description 16
- 210000004204 Blood Vessels Anatomy 0.000 description 15
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 15
- JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N Methionyl-Asparagine Chemical compound CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 14
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 14
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 14
- WYVKPHCYMTWUCW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS WYVKPHCYMTWUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine zwitterion Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 13
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 12
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 12
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 12
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 12
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 12
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 11
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 11
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 11
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 11
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 11
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 10
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N L-tyrosyl-L-tyrosine Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 10
- 208000002780 Macular Degeneration Diseases 0.000 description 10
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfizole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 10
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 10
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 10
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- JQDFGZKKXBEANU-UHFFFAOYSA-N Alanyl-Cysteine Chemical compound CC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O JQDFGZKKXBEANU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 9
- 210000002889 Endothelial Cells Anatomy 0.000 description 9
- MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 9
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 9
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 9
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 9
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 9
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 9
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 9
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 9
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 9
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N (2S)-2-[[2-[(2-azaniumylacetyl)amino]acetyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Asparagine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004851 Immunoglobulin G Human genes 0.000 description 8
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 8
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 8
- 230000001603 reducing Effects 0.000 description 8
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 8
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 8
- 206010064930 Age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 7
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 7
- RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 7
- 102100009178 RUNX1T1 Human genes 0.000 description 7
- 101710034060 RUNX1T1 Proteins 0.000 description 7
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 7
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 7
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 7
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 7
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 6
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 6
- 101710040001 ANG Proteins 0.000 description 6
- 102100007742 ANGPT1 Human genes 0.000 description 6
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N Imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 6
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 6
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 6
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 6
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 6
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 6
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NIZKGBJVCMRDKO-KWQFWETISA-N (2S)-2-[[2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]acetyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NIZKGBJVCMRDKO-KWQFWETISA-N 0.000 description 5
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]acetate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 101710043860 ANGPT1 Proteins 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000035687 Dissociation Rate Constant Effects 0.000 description 5
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 5
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 5
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 5
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 5
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 5
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100015249 VEGFA Human genes 0.000 description 5
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 5
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 5
- 229940121369 angiogenesis inhibitors Drugs 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 5
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 5
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 5
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 5
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 5
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N (2S)-2-[[2-[(2-azaniumylacetyl)amino]acetyl]amino]propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 4
- 210000004087 Cornea Anatomy 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Lysine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 4
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 4
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 4
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 4
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 4
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 4
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 4
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 125000002306 tributylsilyl group Chemical group C(CCC)[Si](CCCC)(CCCC)* 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 4
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N (2S)-1-[(2S)-2-azaniumyl-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N Ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Calypsol Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Glutamine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- 102000033180 ERVK-6 Human genes 0.000 description 3
- 229940012356 Eye Drops Drugs 0.000 description 3
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 208000006550 Mydriasis Diseases 0.000 description 3
- 210000001747 Pupil Anatomy 0.000 description 3
- 108010070144 Single-Chain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 102000005632 Single-Chain Antibodies Human genes 0.000 description 3
- 108010090091 TIE-2 Receptor Proteins 0.000 description 3
- 102000012753 TIE-2 Receptor Human genes 0.000 description 3
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 3
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 3
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 3
- UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 3
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 3
- 108010076324 alanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 3
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 102000025417 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091000829 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 3
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 3
- 201000004569 blindness Diseases 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000000916 dilatatory Effects 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 3
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 3
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 3
- 102000028905 human C11orf2 protein Human genes 0.000 description 3
- 108091003257 human C11orf2 protein Proteins 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl β-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 3
- 108010034507 methionyltryptophan Proteins 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 3
- 230000002207 retinal Effects 0.000 description 3
- 235000020945 retinal Nutrition 0.000 description 3
- 239000011604 retinal Substances 0.000 description 3
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001052 transient Effects 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 208000009956 Adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 2
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Arginine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 description 2
- 101710038044 ERVK-6 Proteins 0.000 description 2
- 101710027967 ERVW-1 Proteins 0.000 description 2
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 2
- 208000005017 Glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 2
- HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 2
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- 102000012355 Integrin beta1 Human genes 0.000 description 2
- 108010022222 Integrin beta1 Proteins 0.000 description 2
- WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Aspartate Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(O)=O WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine zwitterion Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 2
- PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastasis Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091007229 NSP3 Papain-like protease domain Proteins 0.000 description 2
- 208000002154 Non-Small-Cell Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108009000071 Non-small cell lung cancer Proteins 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N PMSF Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 229960005190 Phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N Pro-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010039073 Rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 101710023234 Segment 5 Proteins 0.000 description 2
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229960002180 Tetracycline Drugs 0.000 description 2
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N Tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 2
- BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N Thr-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N Trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010046766 Uterine cancer Diseases 0.000 description 2
- 101700028070 VPX Proteins 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000003444 anaesthetic Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 201000009030 carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 2
- 230000002860 competitive Effects 0.000 description 2
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000002354 daily Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 2
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 108010010096 glycyl-glycyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N p-acetaminophenol Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 230000000865 phosphorylative Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 201000004681 psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 201000007737 retinal degeneration Diseases 0.000 description 2
- 230000004258 retinal degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 108010033670 threonyl-aspartyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2R,3R,4R,5R)-2-[(1S,2S,3R,4S,6R)-4,6-diamino-3-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2R,3R,4S,5R,6S)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2R,3R,4S,5R,6R)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N (2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KHTIUAKJRUIEMA-HOUAVDHOSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 KHTIUAKJRUIEMA-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- MLNSNVLOEIYJIU-ZUDIRPEPSA-N (2S)-5-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O MLNSNVLOEIYJIU-ZUDIRPEPSA-N 0.000 description 1
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N (2S)-5-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 1
- BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-sulfanylpropanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]acetic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710006746 7.5K Proteins 0.000 description 1
- 101700033661 ACTB Proteins 0.000 description 1
- 102100011550 ACTB Human genes 0.000 description 1
- 101710032514 ACTI Proteins 0.000 description 1
- 102100018024 ANG Human genes 0.000 description 1
- 101700029306 ANG1 Proteins 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000432074 Adeno-associated virus Species 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ALZVPLKYDKJKQU-XVKPBYJWSA-N Ala-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ALZVPLKYDKJKQU-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- 229940087458 Alcaine Drugs 0.000 description 1
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101000447227 Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010048154 Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Cysteine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 description 1
- 101710044578 At3g10140 Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 240000008371 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 229940075615 Bacillus subtilis Drugs 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 229940097012 Bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 241000452953 Bernardia myricifolia Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004155 Blood-Retinal Barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 Body Fluids Anatomy 0.000 description 1
- 210000001775 Bruch Membrane Anatomy 0.000 description 1
- JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N Calcium silicate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229960003669 Carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N Carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 208000008787 Cardiovascular Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005091 Chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N Chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 206010008943 Chronic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 1
- 229960003624 Creatine Drugs 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-K Disodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229920002024 GDNA Polymers 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229940014259 Gelatin Drugs 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione Transferase family Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione Transferase family Proteins 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000696272 Gull adenovirus Species 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 210000003128 Head Anatomy 0.000 description 1
- 108009000344 Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 Hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010041014 Integrin alpha5 Proteins 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N Kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 description 1
- 208000000429 Leukemia, Lymphocytic, Chronic, B-Cell Diseases 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 Lymphoid Tissue Anatomy 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Asparagine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N Met-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N Met-Pro Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N Methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108091005503 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 210000001328 Optic Nerve Anatomy 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010025310 Other lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108009000578 Oxidative Stress Proteins 0.000 description 1
- 208000008443 Pancreatic Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 210000001322 Periplasm Anatomy 0.000 description 1
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229940068977 Polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N Propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002307 Prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940055033 Proteus mirabilis Drugs 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- KCLANYCVBBTKTO-UHFFFAOYSA-N Proxymetacaine Chemical compound CCCOC1=CC=C(C(=O)OCCN(CC)CC)C=C1N KCLANYCVBBTKTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 229960003876 Ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- 108010062724 Ranibizumab Proteins 0.000 description 1
- 206010038038 Rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001525 Retina Anatomy 0.000 description 1
- 210000001210 Retinal Vessels Anatomy 0.000 description 1
- 206010038932 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229940069575 Rompun Drugs 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Cysteine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 208000000587 Small Cell Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 206010041823 Squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191965 Staphylococcus carnosus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 101710002875 TYRO3 Proteins 0.000 description 1
- KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N Thr-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N Tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 229940035275 Tobrex Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H Tricalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 206010071989 Vascular endothelial growth factor overexpression Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 1
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N Xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 108010045350 alanyl-tyrosyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 108010093001 anti-IgG Proteins 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000004378 blood-retinal barrier Effects 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 201000005216 brain cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine zwitterion Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004300 dark adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- -1 excipients Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N gln-tyr Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000864 loss of vision Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000028744 lysogeny Effects 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 108091022076 maltose binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 description 1
- 200000000023 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 1
- 201000002575 ocular melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000004380 optic nerve Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001402 polyadenylating Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002525 vasculotropin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложено антитело, специфически связывающееся с ангиопоэтином-2 (Ang2), или его антигенсвязывающий фрагмент. Также предложены кодирующая это антитело нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, клетка, трансформированная вектором, способ получения антитела. Кроме того, изобретение относится к вариантам композиции, включающей антитело по изобретению. Композиция может быть предназначена для профилактики или лечения заболевания, связанного с активацией и(или) избыточным производством Ang2, для диагностики указанного заболевания, для лечения заболеваний глаз, для профилактики или лечения онкологического заболевания, для объединения с другими терапевтическими препаратами. Изобретение обеспечивает ингибирование функции Ang2. 11 н. и 4 з.п. ф-лы, 12 ил., 14 табл., 13 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее раскрытие относится к антителу, ингибирующему функцию ангиопоэтина-2 (Ang-2) путем специфического связывания с Ang-2 и направлено на антитело анти-Ang2, кодирующую его нуклеиновую кислоту, вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, клетку, трансформированную вектором, способ его получения, содержащий его ингибитор ангиогенеза, композицию для лечения заболевания, связанного с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, композицию для диагностики заболевания, связанного с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, композицию для лечения заболевания глаз или композицию для профилактики или лечения рака, а также композицию для объединения связывающегося с Ang2 антитела с другим лекарством, отличающимся от связывающегося с Ang2 антитела.
Уровень техники
Ангиогенез означает механизм, включающий рост новых кровеносных сосудов из уже существующих, и известно, что он играет жизненно важную роль в образовании органов, нормальном биологическом росте, заживлении ран и тому подобное. Известно также, что он играет важную роль в росте опухолей и метастазов, и известно, что нарушения ангиогенеза играют критическую роль в таких заболеваниях, как рост опухолей и метастазов, возрастная дегенерация макулы, диабетическая ретинопатия, псориаз, ревматоидный артрит и хроническое воспаление.
Таким образом, вовлеченные в развитие ангиогенеза факторы стали важной мишенью для развития новых терапевтических агентов для лечения таких заболеваний, как рак, и, поскольку количество больных диабетом быстро растет по причине старения населения и вестернизированной диеты, количество больных с неоваскулярными заболеваниями глаз быстро увеличивается. Примеры серьезных заболеваний глаз включают возрастную дегенерацию макулы (AMD), диабетическую ретинопатию (DR) и диабетический макулярный отек (DME). В частности, дегенерация макулы и диабетическая ретинопатия являются основными причинами слепоты в мире.
С прогрессированием возрастной дегенерации макулы связано множество факторов, но известно, что она ассоциирована с окислительным стрессом, воспалительным ответом и ангиогенезом. Однако, широко распространено мнение, что доминирующим фактором является фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Делались попытки разработать в качестве терапевтического агента ингибитор VEGF с использованием моноклонального антитела, фрагмента антитела или химерного белка, в качестве примера лекарственных препаратов можно назвать афлиберцепт и ранибизумаб. Как известно, механизм действия этих лекарств заключается в индуцировании ингибирования ангиогенеза путем передачи сигнала VEGF. Однако, известно, что 10-15% пациентов, получающих эти препараты, не отвечают на существующие виды лечения. Это связано с тем, что, как известно, существующие виды анти-VEGF лечения подавляют только патологический ангиогенез, в то время как на прогрессирование заболевания влияют другие механизмы с участием ангиогенных факторов. Известно, что ангиопоэтин-2 (ANG2) является цитокином, связывающимся с рецептором Tie2, присутствующим в энтотелиальных клетках стенки сосуда и стимулирующим ангиогенез. Благодаря экспериментам на животных и клиническим исследованиям известно, что, подавляя ингибирование передачи сигнала ANG2, ингибируется образование кровеносных сосудов в опухолях, и, таким образом, достигается противораковый эффект. Более того, известно, что экспрессия ANG является высокой в водостойкой жидкости глазных яблок пациентов с возрастной дегенерацией макулы. Таким образом, ожидается, что разработка анти-ANG2 терапевтического агента, а также анти-VEGF терапевтического агента и комплексной терапии будет полезно при лечении дегенерации макулы. Соответственно, авторы настоящего раскрытия сосредоточили свое внимание на Ang-2 для разработки терапевтического агента для лечения возрастной дегенерации макулы и диабетической ретинопатии.
Ангиопоэтин-2 (Ang2) является антагонистическим лигандом рецептора Tie2, присутствующего в клетках эндотелия сосудов, и ингибирует передачу сигнала Tie2, конкурируя с ангиопоэтином-1 (Ang1), являющимся агонистом Tie2, за связывание Tie2, а Ang1, являющийся лигандом для активации рецептора Tie2, представляет собой ключевой регулятор стабилизации кровеносных сосудов путем поддержания барьерной функции эндотелиальных клеток сосудов. В состоянии избыточной экспрессии VEGF или воспаления эндотелиальные клетки сосудов активируются и увеличивается проницаемость сосудов.
В этом отношении Ang1 стимулирует целостность контакта между эндотелиальными клетками кровеносных сосудов, тем самым индуцируя стабилизацию эндотелиальных клеток кровеносных сосудов и снижая проницаемость сосудов; в то же время Ang2 в активированных эндотелиальных клетках кровеносных сосудов связывается с Tie-2, тем самым принимая участие в миграции эндотелиальных клеток кровеносных сосудов и образовании неровностей. После этого стимулируется образование новых кровеносных сосудов.
В случае диабетической ретинопатии обнаружено, что передача сигнала PDGF важна для образования и созревания гематоретинального барьера путем регулирования периферических клеток сосудов, и было показано, что потеря периферических клеток сосудов в сосудах сетчатки взрослого человека усиливает ответ эндотелиальных клеток кровеносных сосудов на VEGF-A, тем самым активируя петлю FOXO1-Ang2, что приводит к обострению диабетической ретинопатии. Иными словами, понятно, что, индуцируя блокировку Ang2 и активацию Tie2, можно разработать новые виды лечения диабетической ретинопатии.
Кроме того, Ang-2 также вносит вклад в образование новых кровеносных сосудов пораженной раком ткани. Для формирования новых кровеносных сосудов в пораженной раком ткани возникает своего рода кооптация, при которой раковые клетки выбирают существующие кровеносные сосуды. Затем начинается дегенерация последних, при которой с участием Ang-2 нарушается их функция. По причине дегенерации имеющихся кровеносных сосудов окружение в раковой ткани становится гипоксическим, создавая условия для образования новых кровеносных сосудов. В описанных выше условиях индуцируется избыточная экспрессия фактора роста клеток сосудов эндотелия (VEGF), и, как упоминалось выше, ангиогенез. По этой причине Ang-2 был основной мишенью при разработке противораковых лекарств, действующих посредством ингибирования ангиогенеза.
С учетом описанного выше уровня техники авторы настоящего раскрытия попытались разработать антитела анти-Ang2. В результате авторы разработали анти-Ang2 антитело, демонстрирующее желаемую активность связывания с Ang2, и подтвердили, что такое анти-Ang2 антитело может использоваться в качестве направленного иммунного противоракового агента или терапевтического агента для лечения офтальмологических заболеваний, и, тем самым, завершили раскрытие настоящего изобретения.
Раскрытие
Техническая проблема
Таким образом, настоящее раскрытие сделано ввиду описанных выше проблем, и задачей настоящего раскрытия является предоставление нового антитела против Ang2 или его антигенсвязывающего фрагмента.
Еще одной задачей настоящего раскрытия является предоставление нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление вектора, включающего нуклеиновую кислоту, клетки, трансформированной вектором, и способа их конструирования.
Еще одной дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление ингибитора ангиогенеза, включающего антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и композиции для лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2.
Еще одной дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление ингибитора ангиогенеза, включающего антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и композиции для диагностики заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2.
Еще одной дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление композиции для профилактики или лечения заболеваний глаз, включающей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Еще одной дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление композиции для профилактики или лечения опухолей или онкологических заболеваний, включающей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Еще одной дополнительной задачей настоящего раскрытия является предоставление композиции для совместного введения с анти-Ang2 антителом, включающей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Решение технической проблемы
В соответствии с аспектом настоящего раскрытия, описанные выше и другие задачи можно выполнить, получив антитело, связывающееся с ангиопоэтином-2 (Ang2), или его антигенсвязывающий фрагмент, включающие:
- вариабельный участок тяжелой цепи, включающий CDR1 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 7, 13, 19 и 25, CDR2 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 8, 14, 20 и 26, а также CDR3 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 9, 15, 21, 27, 51, 52 и 53; а также
- вариабельный участок легкой цепи, включающий CDR1 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 10, 16, 22 и 28, CDR2 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 11, 17, 23 и 29, а также CDR3 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 12, 18, 24 и 30.
В соответствии с другим аспектом настоящего раскрытия, предоставляется нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
В соответствии с дополнительным аспектом настоящего раскрытия, предоставляется вектор, включающий нуклеиновую кислоту.
В соответствии с дополнительным аспектом настоящего раскрытия, предоставляется клетка, трансформированная вектором.
В соответствии с дополнительным аспектом настоящего раскрытия, предоставляется способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий следующие процессы: (a) культивирование клеток и (b) восстановление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из культивируемых клеток.
Настоящее раскрытие также предоставляет ингибитор ангиогенеза, включающий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и композицию для лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. Настоящее раскрытие также предоставляет ингибитор ангиогенеза, включающий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и композицию для диагностики заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. Настоящее раскрытие также предоставляет композицию для профилактики или лечения опухолей или онкологических заболеваний, включающую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Настоящее раскрытие также предоставляет композицию для совместного введения с анти-Ang2 антителом, включающую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Описание чертежей
Описанные выше и другие задачи, особенности и прочие преимущества настоящего раскрытия будут понятнее из следующего далее подробного описания совместно с сопровождающими его фигурами, которые:
фиг. 1 - иллюстрирует результаты, подтверждающие, что выбранный моноклональный фаг scFv может ингибировать связывание Ang2/Tie2;
фиг. 2 - иллюстрирует результаты, полученные методом SDS-PAGE в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях для продуктов, полученных посредством временной экспрессии и очистки отобранных антител анти-Ang2;
фиг. 3 - иллюстрирует результаты, полученные методом ELISA при оценке связывания антител анти-Ang2 с Ang2 и Ang1 человека и мыши, полученных посредством временной экспрессии и очистки;
фиг. 4 - иллюстрирует результаты, демонстрирующие способность выбранных антител анти-Ang2 нейтрализовывать связывание Ang2/Tie2 человека и мыши;
фиг. 5 - иллюстрирует результаты, демонстрирующие способность выбранных антител анти-Ang2 нейтрализовывать связывание Ang2/интегрин;
фиг. 6 - иллюстрирует результаты, демонстрирующие, что выбранные антитела анти-Ang2 могут ингибировать передачу сигнала Ang2/Tie2;
фиг. 7 - иллюстрирует результаты, подтверждающие чистоту выбранного антитела анти-Ang2 scFv, экспрессируемого в E. coli после процесса очистки;
фиг. 8 - иллюстрирует результаты, полученные методом ELISA при оценке связывания антитела анти-Ang2 scFv, экспрессируемого в E. coli, с белком Ang2 человека;
фиг. 9 - 11 - иллюстрируют результаты, подтверждающие in vivo эффективность выбранного антитела анти-Ang2 scFv на мышиной модели CNV; и
фиг. 12 - иллюстрирует результаты, подтверждающие противоопухолевый эффект антитела анти-Ang2 на модели трижды негативного рака молочной железы человека.
Подробное описание и примеры воплощений
Будут сделаны подробные ссылки на предпочтительные воплощения настоящего раскрытия, примеры которых проиллюстрированы на сопровождающих фигурах. Где это возможно, такие же номера ссылок будут использоваться на фигурах для обозначения таких же или подобных частей.
Если не утверждается иное, значение всех используемых здесь технических и научных терминов соответствует обычно понимаемому специалистом в той области техники, к которой относится настоящее раскрытие. В общем случае, используемая здесь номенклатура и способы постановки экспериментов, описанные ниже, хорошо известны и обычно используются в уровне техники.
Воплощение настоящего раскрытия относится к антителу, связывающемуся с ангиопоэтином-2 (Ang2) или его антигенсвязывающему фрагменту, включающему:
- вариабельный участок тяжелой цепи, включающий CDR1 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 7, 13, 19 и 25, CDR2 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 8, 14, 20 и 26, а также CDR3 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 9, 15, 21, 27, 51, 52 и 53; а также
- вариабельный участок легкой цепи, включающий CDR1 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 10, 16, 22 и 28, CDR2 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 11, 17, 23 и 29, а также CDR3 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 12, 18, 24 и 30.
Здесь термин «антитело» означает анти-Ang2 антитело, специфически связывающееся с Ang2. В область действия настоящего раскрытия попадает не только полная форма антитела, специфически связывающаяся с Ang2, но также антигенсвязывающий фрагмент молекулы антитела.
Полное антитело представляет собой структуру, содержащую две легкие цепи полной длины и две тяжелые цепи полной длины, где каждая легкая цепь связывается с тяжелой цепью дисульфидными связями. Константная область тяжелой цепи может относиться к типам гамма (γ), мю (μ), альфа (α), дельта (δ) или эпсилон (ε), и эти типы далее делятся на категории гамма 1 (γ1), гамма 2 (γ2), гамма 3 (γ3), гамма 4 (γ4), альфа 1 (α1) или альфа 2 (α2). Константная область легкой цепи может относиться либо к типу каппа (κ), либо лямбда (λ)
Антигенсвязывающий фрагмент антитела, или фрагмент антитела, означает фрагмент с антигенсвязывающей функцией и включает Fab, Fab', F(ab')2 и Fv. Среди фрагментов антител Fab представляет собой структуру, содержащую вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи, константные области легкой цепи и первую константную область CH1 легкой цепи, и она содержит один антигенсвязывающий сайт. Fab' отличается от Fab тем, что Fab' содержит шарнирную область, включающую по меньшей мере один остаток цистеина у C-конца домена CH1 тяжелой цепи. Фрагмент F(ab')2 образуется, когда остатки цистеина Fab' соединяются дисульфидной связью в шарнирной области. Fv представляет собой минимальный фрагмент антитела, содержащий только вариабельные области тяжелой цепи и вариабельные области легкой цепи. Двухцепочечный Fv может иметь структуру, в которой вариабельные области тяжелой цепи связываются с вариабельными областями легкой цепи нековалентной связью, а одноцепочечный Fv (scFv) обычно имеет димерную структуру, как в случае двухцепочечного Fv, в котором вариабельные области тяжелой цепи ковалентно связаны с вариабельными областями легкой цепи посредством пептидного линкера, или вариабельные области тяжелой и легкой цепей непосредственно связаны друг с другом через свои С-концы. Антигенсвязывающий фрагмент можно получить с помощью протеазы (например, целое антитело подвергают рестриктазному расщеплению под действием папаина с получением Fab или расщеплению под действием пепсина с получением фрагмента F(ab')2) и можно приготовить методами генетической рекомбинации.
В соответствии с одним воплощением, антитело по настоящему раскрытию находится в форме Fv (например, scFv) или в форме полного антитела. Дополнительно, константная область тяжелой цепи может представлять любой изотип, выбранный из гамма (γ), мю (μ), альфа (α), дельта (δ), и эпсилон (ε). Например, константная область представляет собой гамма 1 (IgG1), гамма 3 (IgG3) или гамма 4 (IgG4). Константная область легкой цепи может быть каппа или дельта типа.
Используемый здесь термин «тяжелая цепь» включает тяжелые цепи полной длины, включающие вариабельную область VH, включая аминокислотные последовательности, содержащие последовательность вариабельной области, которая обеспечивает специфичность антигена, и три константных домена CH1, CH2 и CH3, а также их фрагменты. Используемый здесь термин «легкая цепь» включает легкие цепи полной длины, включающие вариабельную область VL, включая аминокислотные последовательности, содержащие последовательность вариабельной области, которая обеспечивает специфичность антигена, константную область CL и их фрагменты.
Антитело по настоящему раскрытию может представлять собой моноклональное антитело, биспецифическое антитело, антитело человека, гуманизированное антитело, химерное антитело, одноцепочечный фрагмент Fvs (scFV), одноцепочечное антитело, фрагмент Fab, фрагмент F(ab'), фрагмент дисульфидной связи Fvs (sdFV), антиидиотипное антитело (анти-Id) и связывающие эпитопы фрагменты этих антител, но настоящее раскрытие ими не ограничивается.
Моноклональное антитело означает антитело, полученное из фактически однородной популяции антител, то есть, идентичных антител, за исключением возможных природных мутаций, где индивидуальные антитела в популяции могут быть представлены в следовых количествах. Моноклональные антитела высокоспецифичны по отношению к одному антигенному сайту. В отличие от обычных (поликлональных) составов антител, включающих различные антитела для различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело индуцируется против одного эпитопа антигена.
«Эпитоп» означает белковую детерминанту, с которой может специфически связываться антитело. Эпитопы обычно состоят из группы химически активных молекул поверхности, например, боковых цепей аминокислот или сахаров, и обычно имеют специфические характеристики трехмерной структуры и специфические свойства в отношении зарядов. Конформационные и неконформационные эпитопы различаются тем, что связь с первым разрушается в присутствии денатурирующего растворителя, но это не касается второго.
Нечеловеческое (например, мышиное) антитело в «гуманизированной форме» представляет собой химерное антитело, содержащее минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. В большинстве случаев гуманизированное антитело представляет собой нечеловеческий вид (антитело донора), который сохраняет желаемую активность, сродство и свойства остатков гипервариабельной области реципиента, например, иммуноглобулин человека (рецепторное антитело), замещенное остатком гипервариабельной области мыши, крысы, кролика или иных видов, отличающихся от человека.
«Антитело человека» представляет собой молекулу, производную от иммуноглобулина человека, это означает, что все аминокислотные последовательности, составляющие антитело, включая области, определяющие комплементарность и каркасные области, состоят из последовательностей иммуноглобулина человека.
Антитело человека включает не только «химерные» антитела, в которых часть тяжелой и (или) легкой цепи имеет последовательность, идентичную или гомологичную соответствующей последовательности антитела, полученного из специфического вида или принадлежащему к специфическому классу или подклассу антитела, в то время как остальные цепи идентичны или гомологичны антителам, полученным из других видов или антител другого класса или подкласса, но также и их фрагменты, демонстрирующие требуемую биологическую активность.
«Вариабельный домен антитела» здесь означает часть легкой или тяжелой цепи молекулы антитела, включающую аминокислотные последовательности определяющих комплементарность участков (CDR; CDR1, CDR2 и CDR3) или каркасных областей (FR). VH означает вариабельный домен тяжелой цепи. VL означает вариабельный домен легкой цепи.
«Определяющие комплементарность участки» (CDR; CDR1, CDR2 и CDR3) означает аминокислотные остатки вариабельного домена антитела, которые необходимы для связывания антигена. Каждый вариабельный домен, как правило, содержит три области CDR, обозначаемые CDR1, CDR2 и CDR3. Настоящее раскрытие включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, включающую CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 2.
В настоящем раскрытии антитело, связывающееся с Ang2 или его антигенсвязывающий фрагмент, может включать:
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 1, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 3, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 4, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 5 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 6;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 7, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 8 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 9, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 10, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 11 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 12;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 15, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 19, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 22, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 23 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 24;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 25, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 26 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 27, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 28, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 29 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 30;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 51, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18;
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 52, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18; или
вариабельную область тяжелой цепи, включающую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 53, а также вариабельную область легкой цепи, включающую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18.
«Каркасная область (FR)» представляет собой остаток вариабельного домена, отличающийся от остатков CDR. Каждый вариабельный домен как правило содержит четыре FR, обозначаемых как FR1, FR2, FR3 и FR4.
Фрагмент «Fv» представляет собой фрагмент антитела, содержащий сайты распознавания и связывания полноразмерного антитела. Эта область состоит из димера одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи, связанных прочной ковалентной связью, например, scFv.
Фрагмент «Fab» содержит вариабельный и константный домены легкой цепи и вариабельный и первый константный (CH1) домены тяжелой цепи. Фрагмент антитела «F(ab')2» обычно включает пару фрагментов Fab, ковалентно связанных около своих карбоксильных концов шарнирными цистеинами.
Фрагменты антитела «одноцепочечный Fv» или «scFv» включает домены VH и VL антитела, присутствующие в одной полипептидной цепи. Полипептид Fv может дополнительно включать полипептидный линкер между доменами VH и VL, которые позволяют scFv сформировать желаемую структуру для связывания антигена.
Анти-Ang2 антитела могут включать одинарную или двойную цепь. Функционально, сродство связывания антител анти-Ang2 находится в диапазоне 10-5 M - 10-12 M. Например, сродство связывания антител анти-Ang2 находится в диапазоне 10-6 M - 10-12 M, 10-7 M - 10-12 M, 10-8 M - 10-12 M, 10-9 M - 10-12 M, 10-5 M - 10-11 M, 10-6 M - 10-11 M, 10-7 M - 10-11 M, 10-8 M - 10-11 M, 10-9 M - 10-11 M, 10-10 M - 10-11 M, 10-5 M - 10-10 M, 10-6 M - 10-10 M, 10-7 M - 10-10 M, 10-8 M - 10-10 M, 10-9 M - 10-10 M, 10-5 M - 10-9 M, 10-6 M - 10-9 M, 10-7 M - 10-9 M, 10-8 M - 10-9 M, 10-5 M - 10-8 M, 10-6 M - 10-8 M, 10-7 M - 10-8 M, 10-5 M - 10-7 M, 10-6 M - 10-7 M или 10-5 M - 10-6 M.
Антитело, связывающееся с Ang2, или его антигенсвязывающий фрагмент может включать вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 32, 36, 40, 44, 48, 55, 57, 59 и 61. Дополнительно, антитело, связывающееся с Ang2, или его антигенсвязывающий фрагмент может включать вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 34, 38, 42, 46 и 50.
В частности, для разработки эффективного и высококонцентрированного состава антител анти-Ang2 в каркасной части вариабельной области тяжелой цепи была сделана мутация с целью усиления эффективности и растворимости. Для получения мутанта 12-й аминокислотный остаток вариабельной области тяжелой цепи валин заменили на серин. Соответственно, в эксперименте использовали антитело, включающее вариабельную область SEQ ID NO: 61 тяжелой цепи. В результате улучшенная эффективность и растворимость была подтверждена.
В соответствии с конкретным воплощением настоящего раскрытия, антитело, связывающееся с Ang2, или его антигенсвязывающий фрагмент могут включать:
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 32 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 34;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 36 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 38;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 40 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 42;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 44 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 48 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 50;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 55 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 42;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 57 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 42;
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 59 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 42; или
вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 61 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 42;
«Фаговый дисплей» представляет собой метод представления варианта полипептида как белка слияния по меньшей мере с фрагментом белка оболочки на поверхности фага, например, нитчатых фаговых частиц. Полезность фагового дисплея связана с тем, что с его помощью можно получать большие библиотеки рандомизированных вариантов белка, а также быстро и эффективно классифицировать последовательности, связывающиеся с целевым антигеном с высоким сродством. Дисплей пептидных и белковых библиотек с использованием фагов использовалось для скрининга миллионов полипептидов с целью выявления полипептида со специфическими свойствами связывания.
Технология фагового дисплея оказалась мощным инструментом для создания и скрининга новых белков, связывающихся со специфическими лигандами (например, антигенами). С помощью технологии фагового дисплея можно создать большую библиотеку вариантов белков и быстро найти последовательности, связывающиеся с целевым антигеном с высоким сродством. Нуклеиновую кислоту, кодирующую вариант полипептида, объединяют с белком оболочки вируса, например, это может быть нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гена III или гена VIII. Была разработана одновалентная система фагового дисплея, при которой нуклеотидная последовательность, кодирующая белок или полипептид, объединяется с нуклеотидной последовательностью, кодирующей часть белка гена III. В одновалентной системе фагового дисплея химерный ген экспрессируется на низком уровне, и белок гена III дикого типа также экспрессируется, поддерживая инфицирующую способность частицы.
При разработке библиотек антител по технологии фагового дисплея важно показать экспрессию пептидов на поверхности нитчатого фага и экспрессию фрагментов функционального антитела в периплазме E. coli. Библиотеки антител или антигенсвязывающих полипептидов были разработаны различными способами, например, путем изменения отдельного гена введением в него случайной последовательность ДНК или клонированием родственного семейства генов. Можно провести скрининг библиотеки для определения экспрессии антител или антигенсвязывающих белков с требуемыми характеристиками.
При производстве антител с требуемыми характеристиками технология фазового дисплея характеризуется несколькими преимуществами перед традиционными гибридомными или рекомбинантными методами. Данная технология позволяет создавать за небольшой промежуток времени большие библиотеки антител с различными последовательностями, не используя животных. Получение гибридомных или гуманизированных антител может потребовать несколько месяцев. Дополнительно, так как иммунитет не требуется, библиотека фаговых антител позволяет создавать антитела против антигенов, характеризующихся токсичностью или низкой антигенностью. Библиотеки фаговых антител можно также использовать для создания и выявления новых терапевтических антител.
С помощью библиотек на основе фагового дисплея можно получить антитела человека от иммунизированных или неиммунизированных людей, из зародышевых последовательностей или из запасов иммуноглобулина несенситизированных В-клеток. Для подготовки несенситизированных или неиммунных антигенсвязывающих библиотек можно использовать различные лимфоидные ткани.
Для выделения новых терапевтических антител важны методы выявления и выделения высоко-аффинных антител из библиотек фагового дисплея. Выделение высоко-аффинных антител из библиотеки может зависеть от размера библиотеки, эффективности производства среди бактериальных клеток, а также от разнообразия библиотеки. Размер библиотеки уменьшается при неадекватном свертывании антитела или антигенсвязывающего белка и при неэффективном производстве по причине наличия стоп-кодонов. Экспрессия в бактериальных клетках может быть подавлена, если антитело или антигенсвязывающий домен свернут неправильно. Экспрессия может быть улучшена путем альтернативной мутации поверхности вариабельного/константного интерфейса или выбранных остатков CDR. Одним из элементов обеспечения правильного свертывания при создании фаговых библиотек антител в бактериальных клетках является последовательность каркасной области.
Для выделения высоко-аффинного антитела важно создавать различные библиотеки антител или антигенсвязывающих белков. Обнаружено, что области CDR3 часто участвуют в связывании антигенов. Области CDR3 тяжелой цепи значительно варьируют по размеру, последовательности и структурной конформации, и, таким образом, их можно использовать для получения различных библиотек.
Дополнительно, разнообразие можно повысить, рандомизируя области CDR вариабельных тяжелых и легких цепей, используя все 20 аминокислот в каждом положении. Использование всех 20 аминокислот может привести к получению большого разнообразия вариантов аминокислотных последовательностей антител и к повышению вероятности найти новые антитела.
Антитело или фрагмент антитела по настоящему раскрытию может включать описанную здесь последовательность анти-Ang2 антитела по настоящему раскрытию, а также ее биологические эквиваленты в диапазоне, когда они способны специфически распознавать Ang2. Например, в аминокислотную последовательность антитела могут быть внесены дополнительные изменения для улучшения сродства связывания и (или) других биологических свойств антитела. Такие изменения включают, например, делеции, вставки и (или) замены аминокислотных остатков антитела. Эти изменения в аминокислотах делают на основании относительного подобия боковых заместителей аминокислот, например, в отношении гидрофобности, гидрофильности, заряда, размера и т.д. Анализ размера, формы и типа боковых заместителей аминокислот показывает, что аргинин, лизин и гистидин являются положительно заряженными остатками, аланин, глицин и серин имеют похожие размеры, а фенилаланин, триптофан и тирозин похожую форму. Таким образом, на основании этих соображений, аргинин, лизин и гистидин; аланин, глицин и серин; а также фенилаланин, триптофан и тирозин можно считать биологическими функциональными эквивалентами.
С учетом описанных выше изменений в отношении биологически эквивалентной активности, антитела по настоящему раскрытию или кодирующие их молекулы нуклеиновых кислот интерпретируют так, чтобы они включали также последовательности, демонстрирующие значительную идентичность с последовательностями, охарактеризованными ID номерами. Значительная идентичность означает последовательность по меньшей мере с 90% гомологией и наиболее предпочтительно по меньшей мере с 95% гомологией, по меньшей мере с 96% гомологией, по меньшей мере с 97% гомологией, по меньшей мере с 98% гомологией, или по меньшей мере с 99% гомологией, когда описанную выше последовательность по настоящему раскрытию выравнивают с другой произвольной последовательностью для максимально возможного соответствия, и такие выровненные последовательности анализируют различными алгоритмами. Способы выравнивания последовательностей известны в уровне техники. В NCBI и подобных организациях можно получить инструмент Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), и его можно использовать совместно с доступными в интернете программами по анализу последовательностей, такими как blastp, blasm, blastx, tblastn и tblastx. Инструмент BLAST можно получить по адресу www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/. Информацию о том, как сравнивать гомологии последовательностей, используя эту программу, можно получить по адресу www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/blast_help.html.
На основании этой информации, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению может иметь гомологию 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более, в сравнении с последовательностью, указанной в описании. Эту гомологию можно определить сравнением и (или) выравниванием последовательностей способами, известными в уровне техники. Например, для определения процентной гомологии нуклеиновых кислот или белков по изобретению можно воспользоваться алгоритмами сравнения последовательностей (то есть, BLAST или BLAST 2.0), накладывать последовательности вручную или провести визуальное инспектирование.
Другое воплощение настоящего раскрытия относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно получить рекомбинантными способами, выделив нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему раскрытию. Нуклеиновую кислоту выделяют и вводят в реплицируемый вектор для дальнейшего клонирования (амплификации ДНК) или дальнейшей экспрессии. Таким образом, другое воплощение настоящего раскрытия относится к вектору, включающему нуклеиновую кислоту.
Термин «нуклеиновая кислота» в полном объеме включает молекулы ДНК (гДНК и кДНК) и РНК, а также нуклеотиды, являющиеся основными структурными единицами нуклеиновых кислот, включая не только природные нуклеотиды, но также сахара или их аналоги с модифицированными основаниями. Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельные области тяжелой и легкой цепи по настоящему раскрытию, может быть модифицирована. Такие модификации включают вставки, делеции, а также неконсервативные или консервативные замены нуклеотидов.
Согласно специфическому воплощению настоящего раскрытия нуклеиновая кислота может включать нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 31, 35, 39, 43, 47, 54, 56, 58 и 60. Дополнительно, нуклеиновая кислота может включать нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 33, 37, 41, 45 и 49.
Конкретно, нуклеиновая кислота может включать:
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 31, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 33, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 35, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 37, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 39, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 43, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 45, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 47, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 49, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 54, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 56, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, кодирующую вариабельную область легкой цепи;
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 58, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, кодирующую вариабельную область легкой цепи; или
нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 60, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, кодирующую вариабельную область легкой цепи.
Кодирующее антитело ДНК легко выделить и синтезировать с использованием традиционных процедур (например, с использованием олигонуклеотидного зонда, способного специфически связывать ДНК, кодирующую тяжелые и легкие цепи антитела). Доступно множество векторов. Компоненты вектора обычно включают, но не ограничиваются, один или более следующих элементов: сигнальные последовательности, точки начала репликации, один или более маркерных генов, энхансерные элементы, промоторы и последовательности терминации транскрипции.
Термин «вектор», означающий здесь средство для экспрессии целевого гена в клетке-хозяине, включает плазмидные векторы, космидные векторы, бактериофаговые векторы, аденовирусные векторы, ретровирусные векторы, аденоассоциированные вирус-векторы и подобные им. В составе вектора нуклеиновая кислота, кодирующая антитело, функционально связана с промотором.
«Функционально связанный» означает функциональную связь между последовательностью, регулирующей экспрессию нуклеотидов (например, промотор, одиночную последовательность или набор сайтов связывания регуляторов транскрипции), и другой нуклеотидной последовательностью, и, таким образом, последовательность, регулирующая экспрессию нуклеотидов может регулировать транскрипцию и (или) трансляцию других нуклеотидных последовательностей.
Если прокариотическая клетка используется в качестве клетки-хозяина, вектор обычно включает сильный промотор, способный инициировать транскрипцию (например, промотор tac, промотор lac, промотор lacUV5, промотор lpp, промотор pLλ, промотор pRλ, промотор rac5, промотор amp, промотор recA, промотор SP6, промотор trp или промотор T7), связывающий рибосому сайт для инициирования трансляции и последовательность остановки транскрипции/трансляции. Дополнительно, например, если эукариотическая клетка используется в качестве клетки-хозяина, вектор может включать промотор, полученный из генома млекопитающих (например, промотор металлотионеина, промотор β-актина, промотор гемоглобина человека и промотор креатина мышц) или промотор, полученный из вирусов млекопитающих (например, поздний аденовирусный промотор, промотор 7,5К на основе вируса осповакцины, промотор SV40, цитомегаловирусный (CMV) промотор, tk промотор HSV, промотор на основе вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), промотор HIV LTR, промотор на основе вируса Молони, промотор на основе вируса Эпштейна-Барра (EBV) и промотор на основе вируса саркомы Рауса (RSV)), и обычно содержит последовательность полиаденилирования в качестве последовательности терминации транскрипции.
Иногда вектор может быть соединен с другими последовательностями для облегчения очистки экспрессируемого с его помощью антитела. Последовательности для присоединения включают, например, глутатион-S-трансферазу (Pharmacia, США), мальтозасвязывающий белок (NEB, США), FLAG (IBI, США), и 6x His (гексагистидин; Qiagen, США).
Вектор включает ген устойчивости к антибиотикам, обычно используемый в уровне техники в качестве селекционного маркера выбора, например, ген устойчивости к ампициллину, гентамицину, карбенициллину, хлорамфениколу, стрептомицину, канамицину, генетицину, неомицину и тетрациклину.
Другое воплощение настоящего раскрытия относится к клетке, трансформированной указанным выше вектором. Клетки, используемые для продуцирования антитела по настоящему раскрытию, могут быть прокариотическими, дрожжевыми или высшими эукариотическими клетками, но не ограничены ими.
Могут быть использованы такие прокариотические клетки-хозяева, как Escherichia coli, штаммы рода Bacillus, такие как Bacillus subtilis и Bacillus thuringiensis, Streptomyces, Pseudomonas (например, Pseudomonas putida), Proteus mirabilis и Staphylococcus (например, Staphylococcus carnosus)
Однако, наибольшее внимание уделяется животным клеткам, и примеры полезных линий клеток-хозяев включают COS-7, BHK, CHO, CHOK1, DXB-11, DG-44, CHO/-DHFR, CV1, COS-7, HEK293, BHK, TM4, VERO, HELA, MDCK, BRL 3A, W138, Hep G2, SK-Hep, MMT, TRI, MRC 5, FS4, 3T3, RIN, A549, PC12, K562, PER.C6, SP2/0, NS-0, U20S и HT1080, но настоящее раскрытие ими не ограничивается.
Другое воплощение настоящего раскрытия относится к способу производства антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающему: (a) культивирование клеток; и (b) извлечение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из культивируемых клеток
Клетки можно культивировать в различных средах. Любая коммерчески доступная среда может использоваться в качестве культуральной среды без ограничений. Все другие важные добавки, известные обычному специалисту в данной области техники, также могут использоваться в подходящих концентрациях. Условия культивирования, такие как температура и pH, уже использовались с клетками-хозяевами, выбранными для экспрессии, что будет очевидно для обычного специалиста в данной области техники.
Извлечение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента можно осуществить, удаляя примеси, например, центрифугированием или ультрафильтрацией, и очищая полученный продукт, например, методом аффинной хроматографии или подобными. Дополнительно можно использовать другие технологии очистки, такие как анионо- или катионобменная хроматография, хроматография гидрофобного взаимодействия, хроматография с гидроксиапатитом и подобные им.
Другое воплощение настоящего раскрытия относится к композиции для профилактики или лечения опухолей, включающей антитело в качестве активного ингредиента. Антитело может представлять собой фрагмент, включающий IgG или вариабельную область, а именно ScFv или Fab. Дополнительно, вариабельная область тяжелой цепи может представлять собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
В настоящем раскрытии предлагается фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболеваний глаз, включающую (a) фармацевтически эффективное количество антитела против Ang2 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему раскрытию; и (b) фармацевтически приемлемый носитель. В настоящем раскрытии также предлагается способ профилактики или лечения заболеваний глаз, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту с опухолями. В настоящем раскрытии предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для ингибирования механизма Ang2 и для профилактики или лечения заболеваний глаз.
Что касается заболеваний глаз, роговица является лишенной сосудов тканью и должна всегда оставаться прозрачной, чтобы сохранять зрение. Однако, известно, что ангиогенез осуществляется также и в глазу, вызывая связанные с ангиогенезом заболевания глаза. Иными словами, образование новых кровеносных сосудов в роговице снижает прозрачность глаза, вызывая потерю зрения, и создание новых кровеносных сосудов в сетчатке приводит к образованию патологических кровеносных сосудов, вызывая экссудацию крови и затем индуцируя слепоту посредством дегенерации клеток сетчатки.
На основании этой информации настоящее раскрытие может быть использовано для профилактики или лечения заболеваний глаз, таких как незрелая ретинопатия, ангиогенез роговицы, диабетическая ретинопатия, хориоидальная неоваскулярная болезнь и дегенерация сетчатки (например, возрастная дегенерация сетчатки).
В настоящем раскрытии предлагается фармацевтическая композиция для профилактики или лечения опухолей, включающую (a) фармацевтически эффективное количество антитела против Ang2 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему раскрытию; и (b) фармацевтически приемлемый носитель. В настоящем раскрытии также предлагается способ профилактики или лечения опухолей, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту с опухолями. В настоящем раскрытии предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для ингибирования механизма Ang2 и его использования для профилактики или лечения опухолей.
Опухоли, к которым применимы композиция, как правило включают опухоли или раки, избыточно экспрессирующие Ang2, и опухоли или раки, не экспрессирующие избыточно Ang2. Неограничивающие примеры опухолей или раков, являющихся подходящими мишенями для лечения, включают меланому (например, метастатическую злокачественную меланому), рак почки (например, светлоклеточную карциному), рак простаты (например, гормонрефрактерную аденокарционму простаты), аденокарциному поджелудочной железы, рак молочной железы (например, трижды негативный рак молочной железы), рак толстой кишки, рак легкого (например, немелкоклеточный рак легкого), рак пищевода, карциному сквамозных клеток головы и шеи, рак печени, рак яичников, рак матки, рак щитовидной железы, глиобластому, глиому, лейкемию, лимфому и другие неопластические карциномы. Дополнительно, настоящее раскрытие включает рефрактерные или рецидивирующие раки, которые можно вылечить антителами по настоящему раскрытию.
Дополнительное воплощение настоящего раскрытия связано с фармацевтической композицией для ингибирования ангиогенеза, включающую анти-Ang2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в качестве активного ингредиента. В другом воплощении предлагается фармацевтическая композиция для профилактики и (или) лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, включающую анти-Ang2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в качестве активного ингредиента.
В настоящем раскрытии предлагается, например, способ ингибирования ангиогенеза, включающей введение терапевтически эффективного количества анти-Ang2 антитела или его антигенсвязывающий фрагмента пациенту, нуждающемуся в ингибировании ангиогенеза. Способ ингибирования ангиогенеза может дополнительно включать выявление пациента, нуждающегося в ингибировании, до введения. В другом воплощении предлагается способ профилактики и (или) лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, включая введение терапевтически эффективного количества анти-Ang2 антитела или его антигенсвязывающий фрагмента пациенту, нуждающемуся в профилактике и (или) лечении заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. Способ может дополнительно включать до введения выявление пациента, нуждающегося в профилактике и (или) лечении заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2.
Фармацевтическая композиция может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель, и носитель может быть одним из тех, которые обычно используются при составлении лекарств, и это может быть один или более носителей, выбранных из группы, состоящей из лактозы, декстрозы, сахарозы, сорбитола, маннитола, крахмала, гуммиарабика, кальция фосфата, альгината, желатина, кальция силиката, микрокристаллической целлюлозы, поливинилпирролидона, целлюлозы, воды, сиропа, метилцеллюлозы, метилгидроксибензоата, пропилгидроксибензоата, талька, магния стеарата и минерального масла, но настоящее раскрытие ими не ограничивается. Фармацевтическая композиция может дополнительно включать один или более объектов, выбранных из группы, состоящей из разбавителей, вспомогательных веществ, смазывающих компонентов, увлажняющих средств, подсластителей, вкусовых добавок, эмульсификаторов, суспендирующих агентов и консервантов, которые обычно используются при приготовлении фармацевтических композиций.
Эффективное количество фармацевтической композиции или антитела или его антигенсвязывающего фрагмента можно вводить перорально или парентерально. В случае парентерального введения могут использоваться внутривенная инъекция, подкожная инъекция, внутримышечная инъекция, внутрибрюшинная инъекция, эндотелиальное введение, топическое введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение, ректальное введение и подобные им. В случае перорального введения, поскольку белок или пептид подвергается расщеплению, можно готовить такие оральные композиции, когда действующие вещества покрыты оболочкой или приготовлены так, чтобы они были защищены от разложения в желудке. Дополнительно, композицию можно вводить с помощью любого устройства, которое позволяет доставить действующее вещество к целевой клетке.
Содержание анти-Ang2 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в фармацевтической композиции можно определить различными способами, в зависимости таких факторов, как способ получения композиции, способ введения, возраст, масса тела и пол пациента, заболевания, режим питания, время введения, интервал введения, путь введения, скорость выделения и чувствительность отклика. Например, суточная доза анти-Ang2 антитела или его антигенсвязывающий фрагмента может находиться в диапазоне от 0,001 мг/кг до 1000 мг/кг, предпочтительно от 0,01 мг/кг до 100 мг/кг, еще более предпочтительно от 0,1 мг/кг до 50 мг/кг, и еще более предпочтительно от 0,1 мг/кг до 20 мг/кг, но настоящее раскрытие ими не ограничивается. Суточная доза может быть получена как одноразовая лекарственная форма в порционной упаковке, или может быть смешана в различных соотношениях, или может быть при приготовлении включена в многодозовый контейнер.
Фармацевтическую композицию можно вводить совместно с другими лекарствами, такими как ингибиторы ангиогенеза или терапевтические агенты для лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, вводимое количество и способ введения композиции, а также типы других лекарств можно назначить, в зависимости от состояния пациента.
Фармацевтическую композицию можно смешать в форме раствора в масле или водной среде, в форме суспензии, сиропа, эмульсии, экстракта, порошка, гранул, таблеток, капсул и т.д., и она может дополнительно включать диспергирующее вещество или стабилизатор препарата.
В частности, так как фармацевтическая композиция, включающая анти-Ang2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включает антитело или антигенсвязывающий фрагмент, ее можно готовить в составе иммунной липосомы. Содержащие антитела липосомы можно готовить способами, хорошо известными в уровне техники. Иммунная липосома представляет собой липидную композицию, включающую фосфатидилхолин, холестерин и фосфатидилэтаноламин, дериватизированный полиэтиленгликолем, и ее можно приготовить методом обращенно-фазового испарения (патентная публикация №10-2015-0089329). Например, фрагмент Fab' антитела можно конъюгировать с липосомой при помощи реакции дисульфидного замещения.
Следует отметить, что, поскольку анти-Ang2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с ангиопоэтином-2, эту характеристику можно использовать для подтверждения того, происходит ли активация и (или) избыточное производство ангиопоэтина-2. Таким образом, в другом воплощении настоящего раскрытия предлагается фармацевтическая композиция, включающая анти-Ang2 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, для обнаружения активации и (или) избыточного производства ангиопоэтина-2 и (или) для диагностики заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. В другом воплощении предлагается способ диагностики или способ предоставления информации о диагнозе, включающий: обработку взятого у пациента биологического образца анти-Ang2 антителом или его антигенсвязывающим фрагментом; подтверждение, происходит ли реакция антиген-антитело; и определение того, что, если реакция антиген-антитело обнаружена, у пациента наблюдаются симптомы активации и (или) избыточного производства ангиопоэтина-2, или имеется заболевание, связанное с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. Биологический образец может быть выбран из группы, состоящей из клеток, тканей и жидкостей организма, взятых у пациента.
Подтверждение реакции антиген-антитело можно сделать различными способами, известными в уровне техники. Например, реакцию можно подтвердить обычной ферментативной реакцией, детектированием флуоресценции, люминесценции и (или) радиации, и, в частности, можно измерить способом, выбранным из группы, состоящей из иммунохроматографии, иммуногистохимии, твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), радиоиммуноанализа (RIA), ферментативного иммуноанализа (EIA), флуоресцентного иммуноанализа (FIA), люминесцентного иммуноанализа (LIA) и вестерн-блоттинга, но настоящее раскрытие этими способами не ограничивается.
Пациент, которому вводят или проводят диагностику фармацевтической композицией, может быть млекопитающим, включая приматов, включая человека, обезьяну и т.д., а также грызунов, включая мышь, крысу и т.д.
Заболеванием, связанным с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2, могут быть рак; метастатический рак; заболевания глаз, такие как ретинопатия недоношенных, ангиогенез роговицы, диабетическая ретинопатия, хориоидальная неоваскуляризация и макулярная дегенерация (например, возрастная макулярная дегенерация); астма, ревматоидный артрит, псориаз; воспалительные заболевания, такие как пневмония и хроническое воспаление; сердечно-сосудистые заболевания, такие как гипертензия или артериосклероз; или септицемия. При раке может иметь место избыточная экспрессия ангиопоэтина-2, это может быть солидная опухоль или рак крови, и это может быть без ограничений один или более раков, выбранных из группы, состоящей из сквамозной карциномы, мелкоклеточного рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, аденокарциномы легкого, плоскоклеточный рак легкого, перитониальный рак, рак кожи, меланома кожи или глаз, рак прямой кишки, рак анального канала, рак пищевода, рак тонкой кишки, эндокринная аденокарцинома, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркома мягких тканей, рак уретры, хронический или острый лейкоз, лимфоцитарная лимфома, гепатоцеллюлярная карцинома, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластома, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, опухоль печени, рак молочной железы (в некоторых случаях трижды отрицательный рак молочной железы), рак толстой кишки, рак толстой кишки, карцинома эндометрия или матки, рак слюнной железы, рак почки, рак печени, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, рак печени, рак головы и шеи, рак мозга и остеосаркома. Рак может быть первичным или метастатическим.
Примеры
Далее настоящее раскрытие будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Эти примеры предоставлены только для иллюстративных целей, и специалистам в данной области техники будет очевидно, что эти примеры не следует считать ограничивающими область настоящего раскрытия.
Пример 1. Выбор антител, связывающихся с Ang2
Для приготовления библиотек антител и библиотек для выбора антител, которые связываются с Ang2, используют библиотеку сенситизированных scFv человека (наивные ScFv человека), как в Корейской патентной заявке (патентная публикация №10-2008-0109417). 2 мкг/мл (100 мкл на лунку) антигена (hAng2-his: RND systems. Cat. No 623-AN/CF, hAng2-Fc: PharmAbcine) прибавляют в 96-луночный иммунопланшет и оставляют на ночь при 4°C. На следующий день покрытый антигеном планшет промывают 3 раза 5 мМ CaCl2 TBS, после чего прибавляют 200 мкл блокирующего буфера 2% BSA, после чего оставляют реакционную смесь при комнатной температуре на 2 часа. 50 мкл раствора банка XL1-Blue прибавляют к 2 мл среды роста 2x YT-TET (10 мкг/мл тетрациклиа), растят при 37°C и 200 об/мин около 2 часов, и затем прибавляют еще 13 мл смеси и культивируют банк клеток, пока ОП600 не достигнет 0,5. Через 2 часа блокирования промывают результат трижды 1X 5 мМ CaCl2 TBS. Группу фаговой библиотеки объединяют с каждой промытой лункой, после чего фаговую библиотеку и 4% BSA смешивают в одинаковых количествах, затем в каждую лунку прибавляют 200 мкл смеси, после чего покачивают при комнатной температуре в течение 30 минут и оставляют реакционную смесь на 2 часа. После завершения реакции фаговой библиотеки надосадочный раствор сливают, полученный раствор промывают 5 раз 0,1% TBST (5мМ CaCl2) и 5 раз TBS (5мМ CaCl2), затем в каждую лунку прибавляют 100 мкл 100 мМ триметиламина (TEA), после чего встряхивают при комнатной температуре 10 минут. Через 10 минут в каждую лунку прибавляют 50 мкл 1 M Tris (pH 7,5) и перемешивают. Надосадочный раствор прибавляют к 10 мл XL1-blue с ОП600 0,5 для инфицирования при 37°C и оставляют на 30 минут. После инфицирования в качестве титра на выходе используют 100 мкл, остаток центрифугируют при 6000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочный раствор сливают, а осадок распределяют по большой квадратной пластине (34 мкг/мл CM + 1% глюкоза), после чего инкубируют в течение ночи при 30°C. Оставшиеся в качестве титра на выходе 100 мкл разбавляют в отношении 1/10, 1/100, или 1/1000, распределяют по пластине CM и оставляют на ночь при 37°C. На следующий день выросшие на квадратной пластине колонии переносят в 50 мл среды 2x YT, соскребают петлей и центрифугируют 10 минут при 6000 об/мин, чтобы слить надосадочный раствор, из осадка готовят первичный банк для пэннинга, 100 мл среды роста 2x YT (34 мкг/мл CM + 1% глюкоза) переносят в колбу Эрленмейера вместимостью 500 мл, после чего прибавляют туда клетки, так что ОП600 станет равным 0,2, затем дают возможность расти при 200 об/мин и 37°C, пока ОП600 не станет равной 0,5. После этого хелперный фаг (мутант M13KO7) прибавляют в количестве, в 20 раз превышающем ОП600 клеток. После прибавления хелперного фага и по завершении инфицирования в течение 30 минут при 37°C проводят центрифугирование при 6000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочный раствор отбрасывают, и к клеткам прибавляют 100 мл среды 2xYT (34 мкг/мл CM + 70 мкг/мл Kan. + 1 мМ IPTG + 5 мМ MgCl2), затем их оставляют на ночь при 200 об/мин и 30°C. На следующий день выросшие клетки центрифугируют при 7000 об/мин в течение 10 минут, а потом еще раз тем же способом. Прибавляют 20% PEG/2,5 мМ NaCl к 1/5 (о/о) собранного надосадочного раствора и осаждают на льду 1 час. После осаждения проводят центрифугирование при 9000 об/мин в течение 1 часа. Надосадочный раствор сливают, а осадок взбалтывают в 3 мл TBS, фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм и хранят при 4°C для использования в последующем пэннинге. Эти процессы повторяют три или четыре раза, затем связавшиеся в антигеном антитела идентифицируют методом ELISA.
Пример 2. Скрининг моноклонального ScFv фага, который специфически связывается с Ang2 и нейтрализует связывание с Tie2 (ELISA связывания/конкурентный ELISA)
После завершения пэннига финальный круглый банк клеток разбавляют и высевают так, чтобы на агаровом планшете СМ сформировалось от 200 до 500 колоний, затем их оставляют на ночь при 37°C. На следующий день, когда колонии вырастут, в 96-луночный планшет вносят 200 мкл среды 2xYT (34 мкг/мл CM + 1% глюкоза), в каждую лунку по очереди прибавляют колонии и оставляют на ночь при 37°C и 3000 об/мин. На следующий день в новый 96-луночный планшет вносят 200 мкл среды 2xYT (34 мкг/мл CM + 1% глюкоза), и в каждую лунку прибавляют 20 мкл клеток, выращенных в предыдущий день, их выращивают при 37°C и 3000 об/мин в течение 1 часа и 10 минут. В каждую лунку добавляют 100 мкл 50% глицерина, оставшиеся клетки хранят при 70°C. Пока клетки растут, смешивают 1 мкл хэлперного фага и 19 мкл среды 2xYT, после чего в каждую лунку вносят по 20 мкл полученной смеси, затем инкубируют при 37°C в течение 30 минут. После завершения инкубации проводят центрифугирование при 3000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочный раствор сливают и прибавляют 200 мкл среды 2xYT (34 мкг/мл CM + Kan. 70 мкг/мл + 1 мМ IPTG + 5 мМ MgCl2), после чего оставляют на одну ночь в Megagrow при 30°C и 3000 об/мин.
Чтобы отобрать фаги, специфически связывающиеся с Ang2, 1 мкг/мл (100 мкл/лунка) Ag (hAng2-Fc, hAng1-his: RND systems. Cat. No 923-AN/CF или mAng1-Fc, PharmAbcine) прибавляют на 96-луночный иммунопланшет и оставляют на ночь при 4°C. На следующий день клетки, выросшие накануне, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут и хранят при 4°C. Ag промывают три раза средой 0,1% TBST (5 мМ CaCl2), затем прибавляют 200 мкл 2% блокирующего буфера BSA и инкубируют при 25°C в течение 2 часов. После завершения блокирования проводят промывание три раза 0,1% TBST (5 мМ CaCl2). 50 мкл 4% BSA и 50 мкл центрифугированного фага, сохранявшегося при 4°C, перемешивают в каждой лунке и встряхивают при комнатной температуре в течение 1 часа, чтобы началась реакция. После связывания фага трижды проводят промывание 0,1% TBST (5 мМ CaCl2), затем прибавляют 100 мкл конъюгированного с HRP мышиного анти-M13 Ab 1:3000 (Sino, 11973-MM05), и реакция продолжается 1 час при 25°C. После завершения реакции трижды проводят промывание 0,1% TBST (5 мМ CaCl2), прибавляют 100 мкл TMB (#BD TMB набор реактива субстрата 555214), что позволяет проявиться окрашиванию в течение 3-5 минут, затем в каждую лунку прибавляют 50 мкл стоп-раствора, после чего проводят анализ на считывающем устройстве ELISA.
Таблица 1. Результаты измерения специфического связывания моноклонального scFv фага с антигеном Ang2 методом ELISA |
|||
Клон | Оптическая плотность | ||
Антиген | hAng2-Fc | hAng1-his | mAng1-Fc |
No. 3 | 1,904 | 0,025 | - |
No. 4 | 0,835 | - | 0,093 |
No. 8 | 1,364 | - | 0,199 |
No. 41 | 0,825 | - | 0,111 |
No. 46 | 1,194 | - | 0,061 |
Основные последовательности отобранных антител показаны в таблица 2 и 3 ниже.
Таблица 2. Последовательности CDR антител, специфически связывающиеся с антигеном Ang2 |
|||
Наименование последовательности | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO: | |
Тяжелая цепь, CDR1 | GFSFDDYA | 1 | |
Тяжелая цепь, CDR2 | IKDDGSQT | 2 | |
No.3 | Тяжелая цепь, CDR3 | TTEGLMNGLHFDM | 3 |
Легкая цепь, CDR1 | SSNIGAGYD | 4 | |
Легкая цепь, CDR2 | GNN | 5 | |
Легкая цепь, CDR3 | QSYDSRLGVV | 6 | |
Тяжелая цепь, CDR1 | GYSFTSYW | 7 | |
Тяжелая цепь, CDR2 | IYPGNSDT | 8 | |
No.4 | Тяжелая цепь, CDR3 | TTEGLMNGLHFDM | 9 |
Легкая цепь, CDR1 | QSLLHSLGDNY | 10 | |
Легкая цепь, CDR2 | LGS | 11 | |
Легкая цепь, CDR3 | MQSLQTPPYT | 12 | |
Тяжелая цепь, CDR1 | GFTFSSYS | 13 | |
Тяжелая цепь, CDR2 | ISASDGAT | 14 | |
No.8 | Тяжелая цепь, CDR3 | AKILAGYSGPMGGMDV | 15 |
Легкая цепь, CDR1 | RDISNY | 16 | |
Легкая цепь, CDR2 | GAS | 17 | |
Легкая цепь, CDR3 | QQYYSYPLT | 18 | |
Тяжелая цепь, CDR1 | GFAFGRYE | 19 | |
Тяжелая цепь, CDR2 | IDTGGGAK | 20 | |
No.41 | Тяжелая цепь, CDR3 | TTEGLMNGLHFDM | 21 |
Легкая цепь, CDR1 | QAISTW | 22 | |
Легкая цепь, CDR2 | TAS | 23 | |
Легкая цепь, CDR3 | QQLNSYPYT | 24 | |
Тяжелая цепь, CDR1 | GFTFDDCA | 25 | |
Тяжелая цепь, CDR2 | ISGNSKNV | 26 | |
No.46 | Тяжелая цепь, CDR3 | ARDPAYSQFDY | 27 |
Легкая цепь, CDR1 | SSNVGGYP | 28 | |
Легкая цепь, CDR2 | TDY | 29 | |
Легкая цепь, CDR3 | ATWDDNLNGYV | 30 |
Чтобы выбрать фаги, которые нейтрализуют связывание Ang2/Tie2, методом конкурентного анализа ELISA, 1 мкг/мл (100 мкл на лунку) Ag (hTie2-Fc: PharmAbcine) прибавляют в 96-луночный иммунопланшет и оставляют на ночь при 4°C. Распределенный Ag дважды промывают 1X PBS, после чего прибавляют 200 мкл 3% блокирующего буфера BSA и инкубируют 2 часа при 25°C. После завершения блокировки дважды проводят промывание 0,1% PBST. В каждой лунке 20 мкл (5 мкг/мл) hAng2-his (RND, 623-AN/CF) смешивают с различными объемами (80 мкл, 40 мкл+1X PBS 40 мкл, 20 мкл+1X PBS 60 мкл) фага, который был охлажден и хранился при 4°C, и встряхивают при комнатной температуре в течение 1 часа, чтобы обеспечить протекание реакции. После связывания фага трижды проводят промывание 0,05% PBST, а затем реакцию при комнатной температуре в течение 1 часа с 0,5 мкг/мл мышиных антител анти-Ang2. После завершения связывания с антителами трижды проводят промывание 0,05% PBST, после чего прибавляют 100 мкл HRP-конъюгированного мышиного анти-IgG Ab 1:2000 (RND, HAF007) и продолжают реакцию при 25°C в течение 1 часа. После завершения трижды проводят промывание 0,05% PBST, после чего прибавляют 100 мкл TMB (#BD TMB набор реактива субстрата 555214)), что позволяет проявиться окрашиванию в течение 3-5 минут, затем в каждую лунку прибавляют 50 мкл стоп-раствора, после чего проводят анализ на считывающем устройстве ELISA. Результаты представлены на фиг. 1. Как видно из фиг. 1, способность выбранных фагов нейтрализовывать связывание Tie2/Ang2 была подтверждена.
Пример 3. Выбор антител с высоким сродством с Ang2 (скрининг скорости диссоциации)
Сродство связывания выбранных антител с антигеном измеряли с использованием Octet (Fortebio). С этой целью Ang2 иммобилизовали на биосенсоре, после чего прибавили кандидаты антител, экспрессированных в форме scFv, позволили им связаться, а затем провели измерение констант скорости диссоциации. Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4. Константы скорости диссоциации антител, специфически связанных с антигеном Ang2 |
|
Клон | Kдисс (1/s) |
No.3 | 6,42E-04 |
No.4 | 2,12E-04 |
No.8 | <1,0E-07 |
No.41 | 1,08E-05 |
No.46 | 6,14E-05 |
Пример 4. Экспрессия антитела анти-Ang2
Конверсию выбранных фагов scFv в форму IgG выполнили при помощи молекулярно-биологических технологий. Фагмиды экстрагировали из отобранных клонов E. coli, вариабельные области амплифицировали по технологии ПЦР. Амплифицированные вариабельные области тяжелой цепи ввели в вектор экспрессии (Invivogen, pfusess-hchg1), содержащий константные области тяжелой цепи, а амплифицированные вариабельные области легкой цепи ввели в вектор экспрессии (Invivogen, pfuse2ss-hclk), содержащий константные области легкой цепи, тем самым завершив клонирование ДНК IgG типа.
Временную экспрессию IgG выполнили с использованием системного набора для экспрессии Expi293F (Thermo Fisher Scientific, США). Включенные в набор клетки Expi293 суспендировали и инкубировали на орбитальном шейкере при 125 об/мин в условиях 37°C и 5% CO2, с использованием эксклюзивной среды. Каждые три дня клетки пересевали в концентрации 3×105 клеток/мл, и перед введением вектора экспрессии концентрацию клеток довели до 3×106 клеток/мл. Для введения гена использовали эксклюзивные реактив Expifectamine, получили комплекс липид-ДНК, содержащий 1 мкг вектора экспрессии ДНК и 2,7 мкл Expifectamine на 1 мл клеточной суспензии, его прибавили к клеточной суспензии и через 16-18 часов после введения прибавили энхансер 1/2, чтобы индуцировать экспрессию. Затем полученную суспензию культивировали 3-4 дня в тех же условиях, после чего центрифугировали, чтобы собрать содержащий IgG надосадочный раствор.
Пример 5. Очистка анти-Ang2 антитела
Собранный надосадочный раствор ввели в колонку с белком А (GE Healthcare) для очистки IgG методом аффинной хроматографии. Колонку уравновесили 20 мМ Tris-HCl, 50 мМ NaCl и 5 мМ EDTA (pH 7,0), после чего ввели надосадочный раствор, колонку промывали раствором 50 мМ Tris-HCl, 500 мМ NaCl, 5 мМ EDTA, 0,2% полисорбата 20 (pH 7,0), и после этого выполнили элюирование при помощи раствора 50 мМ NaCl, 0,1 M глицина-HCl (pH 3,5), а затем нейтрализацию 1 M Tris. Для элюирования белков растворитель заменили на PBS посредством диализа с использованием диализной мембраны MWCO 10000 spectra/por (Spectrum Labs, США). После этого белки сконцентрировали при помощи Vivaspin (Satorius, Германия) до требуемой концентрации, разлили и хранили при -80°C.
После очистки каждое антитело обработали в невосстанавливающем и восстанавливающем буфере для образца LDS (Thermo Fisher Scientific) и провели их электрофорез при помощи системы NuPAGE System (Thermo Fisher Scientific). В результате был получен IgG, включающий тяжелую цепь 50 кДа и легкую цепь 25 кДа с общей молекулярной массой около 150 кДа (фиг. 2).
Пример 6. Анализ специфичности связывания антитела Анти-Ang2
При выполнении анализа специфичности связывания измеряли константы связывания методом ELISA при помощи системы Biacore T200 (GE Healthcare Life Sciences).
1 мкг/мл (100 мкл на лунку) раствора меченого His Ang2 человека (R&D systems, 623-AN/CF) или мыши (sino, 50298-M07H) или меченого His Ang1 человека (R&D systems, 923-AN/CF) или мыши (sino, 50300-M07H) прибавили в 96-луночный иммунопланшет (Nunc, США) и оставили на одну ночь при 4°C для адсорбции. На следующий день раствор трижды промыли PBS, содержащим 0,05% Tween-20 (далее называется PBST), и в каждую лунку прибавили 200 мкл раствора 2% BSA/PBST, после чего оставили при комнатной температуре на 2 часа, чтобы осуществилась блокировка. После трехкратного промывания PBST по 100 мкл каждого испытуемого раствора антител добавили в каждую лунку в концентрации, вызывающей связывание при комнатной температуре в течение 1 часа, затем трижды выполнили промывание PBST, добавили 100 мкл HRP-конъюгированного античеловеческого IgG (каппа) козы (Bethyl lab #A80-115P), разбавленного в отношении 1:2000 и оставили реагировать при комнатной температуре на 1 час, тем самым индуцировав связывание, и после трехкратного промывания PBST провели окрашивание 100 мкл реактива субстрата TMB. Реакцию окрашивания остановили добавлением 50 мкл 2 н. H2SO4, и с помощью считывателя микропланшет Sunrise (TECAN, CH) определили специфическое оптическое поглощение ОП450-630 (фиг. 3). Как показано на фиг. 3, выбранные антитела специфически связываются с Ang2 человека и мыши и не связываются с Ang1 человека и мыши.
Для анализа сродства связывания выбранных антител анти-Ang2 выполнили анализ сродства Ang2 человека и мыши с использованием BIACORE® T200 (GE Healthcare). Использовали сенсорный чип на белок А, и эксперимент провели в соответствии с руководством производителя. Условия анализа следующие. Иммобилизовали 2000 единиц ответа (RU) белка А, для связывания использовали 25 RU предполагаемого антитела анти-Ang2, и для связывания использовали различные концентрации Ang2 человека и мыши. Исходная концентрация для анализа составляет 100 нМ и 150 нМ, соответственно. Анализ проходил при скорости потока 30 мкл/мин, связывание и время диссоциации Ang2 человека измеряли через 300 и 2000 секунд, соответственно, и связывание и время диссоциации Ang2 мыши измеряли через 300 и 1000 секунд, соответственно. В качестве аналитической модели использовали модель связывания 1:1. Результаты анализа представлены в таблице 5.
Таблица 5 | ||||||
Образец | SPR (Biacore T-200) | |||||
Ang2 человека | Ang2 мыши | |||||
ka (1/Мс) | kd(1/с) | KD (пМ) | ka (1/Мс) | kd(1/с) | KD (пМ) | |
№3 | 3,34E+05 | 4,22E-05 | 127 | 1,58E+05 | 8,53E-05 | 538 |
№4 | 2,73E+05 | 5,93E-05 | 217 | 1,57E+05 | 7,05E-05 | 450 |
№8 | 2,68E+05 | 4,37E-05 | 163 | 1,44E+05 | 6,69E-05 | 463 |
№41 | 3,20E+05 | 7,77E-05 | 243 | 2,89E+05 | 9,47E-05 | 328 |
№46 | 2,74E+05 | 8,62E-05 | 314 | 4,65E+05 | 8,94E-05 | 193 |
несвакумаб | 3,53E+05 | 9,30E-05 | 263 | 2,10E+05 | 5,51E-05 | 262 |
Пример 7. Подтверждение нейтрализующей способности антител Анти-Ang2 (Ang2/Tie2, Ang2/интегрин)
1 мкг/мл (100 мкл на лунку) раствора Ti32-Fc человека (R&D Systems, 313-TI) или мыши (R&D Systems, 762-T2-100), интегрина α3/β1 (R&D systems, 2840-A3-050) или интегрина α5/β1 (R&D systems, 3230-A5-050) внесли в 96-луночный иммунопланшет (Nunc, США), после чего оставили на ночь при 4°C для адсорбции. На следующий день раствор четыре раза промыли PBS, содержащим 0,05% Tween-20 (далее называется PBST), и в каждую лунку прибавили 200 мкл раствора 2% BSA/PBST, после чего оставили при комнатной температуре на 2 часа, чтобы осуществилась блокировка. Кандидаты антител анти-Ang2 последовательно разбавили в 4 раза с максимальной концентрацией 1000 нМ, биотинилированный белок Ang2 человека довели до конечной концентрации 100 нг/мл или 625 нг/мл с последующим связыванием при комнатной температуре в течение 1 часа, как описано ранее. Блокированный планшет четыре раза промыли PBST, после чего к планшету добавили образцы, в которых ранее была индуцирована реакция антиген-антитело, связывание проходило при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет трижды промыли PBST, прибавили 100 мкл HRP-конъюгированного стрептавидина (R&D Systems, DY998), разбавленного в отношении 1:200, затем реакция протекала при комнатной температуре 1 час, индуцируя при этом связывание, после чего планшет четыре раза промыли PBST, а затем осуществили окрашивание добавлением 100 мкл реактива субстрата TMB. Реакцию окрашивания остановили добавлением 50 мкл 2 н. H2SO4, и с помощью считывателя микропланшет Sunrise (TECAN, CH) определили специфическое оптическое поглощение ОП450-630 (фиг. 4 и 5). Как показано на фиг. 4, выбранные антитела нейтрализовывали Ang2/Tie2 человека и мыши. Эффективность нейтрализации оценили количественно, определив значения IC50, которые показаны в таблице 6. Дополнительно, как показано на фиг. 5, выбранные антитела также нейтрализовывали связывание интегрин/Ang2. Способность нейтрализовать integrin/Ang2 оценили количественно при помощи IC50, результаты показаны в таблице 7.
Таблица 6 | |||
№ | Образец | IC50 (конкурирование с Ang2 человека) (пМ) |
IC50 (конкурирование с Ang2 мыши) (пМ) |
1 | №3 | 491,4 | 5021 |
2 | №4 | 461,6 | 4544 |
3 | №8 | 495,5 | 4830 |
4 | №41 | 475,5 | 3985 |
5 | №46 | 336,6 | 5255 |
6 | Несвакумаб | 458,6 | 10445 |
Таблица 7 | |||
№ | Образец | IC50 (конкурирование с α5β1/hAng2 ) (пМ) |
IC50 (конкурирование с α3β1/hAng2) (пМ) |
1 | №3 | 1531 | 2495 |
2 | №4 | 1572 | 2425 |
3 | №8 | 1888 | 4682 |
4 | №41 | 1494 | 2432 |
5 | №46 | 1896 | 4389 |
6 | Несвакумаб | 2512 | 5251 |
Пример 8. Анализ влияния антител Анти-Ang2 на ингибирование передачи сигнала Ang2/Tie2 (анализ p-Tie2)
Клетки человека, избыточно экспрессирующие Tie2 (1×105) поместили в 96-луночный планшет и выращивали одну ночь при 37°C в инкубаторе с углекислым газом. Клетки выращивали одну ночь в бессывороточной среде, чтобы создать условия депривации сыворотки. Ang2 человека (5 мкг/мл) и анти-Ang2 человека в различных концентрациях взаимодействовали при комнатной температуре в течение 1 часа, как ранее описано, затем их поместили на содержащий клетки планшет, и реакция протекала 20 минут. В данном случае в планшете была предусмотрела лунка, не содержащая антитела и содержащая только белок Ang2, ее использовали для сравнения при анализе эффекта ингибирования передачи сигнала. Клетки лизировали лизирующим буфером и затем пересчитали. Для анализа реакции фосфорилирования использовали набор Human Phospho-Tie2 Duoset IC ELISA (R&D Systems, DYC2720-5), доступный в компании R&D Systems. В каждую лунку 96-луночного планшета прибавили 4 мкг/мл белка захвата Tie2 (Nunc, США) и оставили систему на ночь при 4°C для адсорбции. На следующий день в каждую лунку добавили по 200 мкл и оставили при комнатной температуре на 2 часа для блокировки. Добавили 50 мкг лизата клеток, и связывание протекало при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции антитела против фосфотирозина разбавили в отношении 2700:1, и связывание проходило при комнатной температуре в течение 2 часов. По завершении реакции провели окрашивание с помощью реактива субстрата TMB. Реакцию окрашивания остановили добавлением 50 мкл 2 н. H2SO4, и с помощью считывателя микропланшетов Sunrise (TECAN, CH) определили специфическое оптическое поглощение ОП450-630 (фиг. 6). Как показано на фиг. 6, можно подтвердить, что при повышении концентрации антитела фосфорилирование уменьшается. Количественно степень фосфорилирования оценили, определив IC50, результаты показаны в таблице 8.
Таблица 8 | |||
№ | Образец | Клон | IC50 (пМ) |
1 | №3 | 1D10 | 8528 |
2 | №4 | 2D8 | 12312 |
3 | №8 | 3A10 | 20169 |
4 | №41 | 2B2 | 10962 |
5 | №46 | 3C6 | 10122 |
6 | Несвакумаб | Несвакумаб | 5424 |
Пример 9. Конструирование и выбор вариантов для усиления сродства
Провели оптимизацию антител, чтобы усилить сродство антитела анти-Ang2, клон №8. Используя способ мягкой рандомизации для консервации и рандомизации 70% оригинальной последовательность ДНК №8, были приготовлены праймеры с рандомными мутациями в легкой цепи CDR3 и тяжелой цепи CDR3 этой последовательности. При помощи ПЦР с праймерами получили фрагменты ДНК, кодирующие затронутые мутацией вариабельные области легкой и тяжелой цепи. Фрагменты ДНК соответственно заместили на вариабельную область легкой цепи No. 8 scFv фагмида и вариабельную область тяжелой цепи No. 8 scFv фагмиды, тем самым завершив конструирование фаговой библиотеки ДНК scFv вариантов CDR3 легкой и тяжелой цепи.
Фаговую библиотеку ДНК scFv очистили системой фенол-хлороформ, после чего трансформировали в штамм E. coli XL-1 Blue методом электропорации. После подтверждения методом анализа эффективности трансформации и секвенирования ДНК того, что разнообразие достигнуто, 500 мл штамма культивировали, чтобы индуцировать экспрессию фага, и при помощи PEG-осаждения сконструировали фаговые библиотеки scFv вариантов CDR3 легкой и тяжелой цепи.
Биопэннинг провели способом, описанным в примере 1, с использованием всех мутантов фаговой библиотеки scFv. После этого в ходе скрининга измерили константу скорости диссоциации kdis как количественную оценку способности сохранять связывание. Далее показаны аминокислотные последовательности трех выбранных и оптимизированных клонов (таблица 9 и 10) и результаты измерения константы скорости диссоциации (таблица 11).
Таблица 9 | |||
Номер последовательности | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO: | |
No.O4 | CDR3 тяжелой цепи | AKTLAGYSGPMGGMDV | 51 |
No.O10 | CDR3 тяжелой цепи | AKILVGYSGPMGGMDV | 52 |
No.O12 | CDR3 тяжелой цепи | AKSLASYSGPMGGMDV | 53 |
Таблица 11 | |
Клон | Kdis (1/s) |
No.O4 | 9,01E-05 |
No.O10 | 3,92E-05 |
No.O12 | 1,70E-05 |
Пример 10. Производство оптимизированных антител ScFv Анти-Ang2
Оптимизированное антитело анти-Ang2 (No.O4) клонировали в вектор pET-22b (Novagen) для экспрессии в E. coli. Выделили колонии, полученные путем трансформации вектора в BL21 (De3), к среде LB (бульон Lysogeny) добавили 100 мкг/мл ампициллина, и 1% E. coli, предварительно выращиваемой в среде 37°C при 200 об/мин, инокулировали в среду LB, содержащую 100 мкг/мл ампициллина в качестве антибиотика. E. coli инкубировали при условиях 37°C и 200 об/мин, температуру инкубатора понизили до 20°C, после чего прибавили 0,5 мМ IPTG, а затем инкубировали в течение 16 часов.
Инкубированные E. coli собрали центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. После удаления среды провели ресуспендирование в 10 мл (на массу (г) клеток) лизирующего буфера, содержащего 50 мМ Tris-HCl pH 7,4, 150 мМ NaCl и 1 мМ фенилметилсульфонилфторида (PMSF). Клетки разрушили генератором ультразвука в следующих условиях: мощность 20 Вт, пауза 3 сек, работа 3 сек, время 5 мин. Разрушенные клетки центрифугировали при 11000 об/мин в течение 1 часа для разделения надосадочного раствора и осадка.
ScFv экспрессировали в нерастворимой форме и промыли осадок для ренатурации. После гомогенизации в гомогенизаторе с использованием буфера 50 мМ Tris-HCl pH 7,4, 150 мМ NaCl осадок дважды промыли центрифугированием при 11000 об/мин в течение 1 часа. Остававшиеся в осадке извлеченные из E. coli вещества удалили с помощью буфера 50 мМ Tris-HCl pH 7,4, 150 мМ NaCl, 2 M мочевины, 0,5% Triton X-100, и трижды промыли буфером 50 мМ Tris-HCl pH 7,4, 150 мМ NaCl. Затем осадок ресуспендировали с помощью буфера 50 мМ Tris-HCl pH 7,4, 150 мМ NaCl, 8 M мочевины, 10 мМ DTT, после чего реакцию продолжали около 30 минут до получения scFv в несвернутой форме, а затем провели центрифугирование при 11000 об/мин в течение 1 часа для отделения осадка.
scFv антитело подвергли ступенчатому диализу для удаления мочевины, тем самым индуцируя ренатурацию. Диализ проводили с помощью диализного буфера, в основном, содержащего 50 мМ Tris-HCl pH 7,4 и 150 мМ NaCl, уменьшая концентрацию мочевины в 2 раза. Ренатурацию проводили путем подавления агрегации добавлением 0,1 М L-аргинина к фракциям, содержащим мочевину в концентрации 4-2-1 M, в которых в основном происходит правильное свертывание белка. Ренатурированное scFv антитело выделили и очистили с использованием колонок с HisTrap и Capo L.
Разделение и очистку выполнили в следующем порядке. Очистку проводили с использованием AKTA Prime (GE Healthcare) System, использовали упакованную колонку HisTrap на 5 мл. Буфер 50 мМ натрия фосфата, 400 мМ NaCl, 10 мМ имидазола с pH 7,4 в количестве 10 объемов колонки пропустили через колонку HisTrap для уравновешивания, и образец антитела scFv пропустили в колонку HisTrap со скоростью потока 5 мл/мин, чтобы образец антитела смог связаться со смолой внутри колонки. Для удаления присутствующих в смоле неспецифически связывающихся веществ пропустили около 10 объемов колонки буфера 50 мМ натрия фосфата, 400 мМ NaCl, 10 мМ имидазола с pH 7,4, после чего через колонку пропускали буфер 50 мМ натрия фосфата, 400 мМ NaCl, 300 мМ имидазола с pH 7,4 с градиентами концентрации, так что антитело scFv элюировало. Образец элюировавшего антитела подвергли следующей очистке с помощью 5 мл колонки Capto L. Колонку Capto L уравновесили физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS) pH 7,4, затем образец пропустили через колонку Capto L со скоростью 5 мл/мин, чтобы удалить неспецифически связанные вещества. Пропустили 10 объемов колонки буфера 0,1 M лимонной кислоты, 0,2 M Na2HPO4 pH 2,6, так чтобы элюировало антитело scFv. На фиг. 7 представлены результаты SDS-PAGE для белка, полученного в итоге после очистки. Видно, что полученное антитело scFv продемонстрировало высокую чистоту.
Пример 11. Анализ специфичности связывания оптимизированного анти-Ang2 антитела ScFv
С целью анализа специфичности связывания константы связывания измеряли с использованием метода ELISA и системы Octet (Pall ForteBio LLC, США).
1 мкг/мл (100 мкл на лунку) раствора меченного His белка Ang2 человека (R&D systems, 623-AN/CF) добавили в 96-луночный иммунопланшет (Nunc, США) и оставили на ночь при 4°C для адсорбции. На следующий день раствор трижды промыли PBS, содержащим 0,05% Tween-20 (далее называется PBST), и в каждую лунку прибавили 200 мкл раствора 2% BSA/PBST, после чего оставили при комнатной температуре на 2 часа, чтобы осуществилась блокировка. После трехкратного промывания PBST, по 100 мкл каждого испытуемого раствора антител добавили в каждую лунку в концентрации, вызывающей связывание при комнатной температуре в течение 1 часа, затем трижды выполнили промывание PBST, добавили 100 мкл HRP-конъюгированного анти-His меченного моноклонального антитела (MAB050H, R&D Systems, США), разбавленного в отношении 1:1000 и оставили реагировать при комнатной температуре на 1 час, тем самым индуцировав связывание, и после трехкратного промывания PBST провели окрашивание 100 мкл реактива субстрата TMB. Реакцию окрашивания остановили добавлением 50 мкл 2 н. H2SO4, и с помощью считывателя микропланшет Sunrise (TECAN, CH) определили специфическое оптическое поглощение ОП450 (фиг. 8). Как показано на фиг. 8, очищенное антитело связывается с Ang2.
Сродство связывания очищенного антитела scFv с Ang2 человека измеряли с использованием системы Octet (ForteBio Inc., США). С этой целью анти-Ang2 антитело иммобилизовали на биосенсоре и измерили кинетику связывания Ang2 человека в зависимости от концентрации. Это позволило рассчитать константу скорости связывания (ka), константу скорости диссоциации (kdis), и константу связывания (KD) (таблица 12).
Таблица 12 | |||
Образец | ka (1/Ms) | kd(1/s) | KD (M) |
No.O4 scFv | 9,4E+04 | 2,54E-05 | 2,8E-10 |
Пример 12. Анализ in vivo эффективности выбранных антител Анти-Ang2 ScFv (модель CNV мыши)
Для подтверждения ингибирующего эффекта антитела анти-Ang2 scFv по отношению к ангиогенезу провели анализ эффективности препарата на модели индуцированной лазерным излучением хориоидальной неоваскуляризации мыши. При проверке эффективности в качестве контроля использовали афлиберцепт, являющийся коммерчески доступным лекарством. Мышам делали общую анестезию кетамином, после чего на глазные яблоки наносили анестезирующие глазные капли для дополнительной местной анестезии, затем на глаза наносили расширяющее зрачок лекарство, чтобы индуцировать мидриаз. Каждую мышь переносили на стенд и с помощью установки Micron-IV индуцировали лазерный ожог в условиях индукции CNV (длина волны 532 нм, диаметр 50 мкм, продолжительность 80 мс, уровень мощности 200 мВт), тем самым разрушая мембрану Бруха. Полученные в ходе индукции лазерного ожога поражения, при которых не наблюдались пузырьки, были классифицированы как неудачные лазерные ожоги и исключены из анализа результатов и статистической обработки на основании критерия исключения, полученного путем модификации критерия, предложенного Gong Y. и соавт.
Чтобы подтвердить ингибирующий ангиогенез эффект при индукции CNV и при действии лекарств, мышам сделали общую анестезию кетамином в день 10 после индукции CNV, после чего каждой мыши внутрибрюшинно ввели флуоресцентный контраст. Для дополнительной местной анестезии на глазные яблоки нанесли анестезирующие глазные капли, затем на глаза наносили расширяющее зрачок лекарство, чтобы индуцировать мидриаз. Каждую мышь переносили на стенд, выполняли настройку для визуализации глазного дна с использованием камеры от Micron-IV, после чего на соответствующий глаз наносили смазывающий гель и на роговицу глаза каждой мыши накладывали линзы оптической когерентной томографии (OCT). После получения FFA/OCT изображения на глаза мыши нанесли 1 каплю антибиотических глазных капель. Анализ изображений FFA и OCT провели с помощью программы Image-J. В этом отношении поражения CNV, соответствующие критерию исключения, предложенному Gong Y. и соавт., были исключены из итоговых результатов и статистического анализа.
Чтобы подтвердить восстанавливающий эффект на оптический нерв, выполнили испытание с помощью электроретинограммы (ERG). Перед оценкой ERG мышей оставили в темной комнате на 12 часов, чтобы индуцировать адаптацию к темноте. В день проведения оценки (день 11 после индукции CNV) мышам сделали общую анестезию реактивами Rompun® и Ketamine®, а затем на глаза нанесли Alcaine® для дополнительной местной анестезии, затем на глаза наносили расширяющее зрачок лекарство, чтобы индуцировать мидриаз. Каждую мышь поместили на стенд ERG и зонды ERG закрепили на хвосте, голове и роговице глаз, соответственно. ERG измерили как изменение потенциала сетчатки в ответ на стимул в виде одной вспышки (0,9 log cds/м2 (10 ответов/интенсивность)). После завершения оценки ERG на глаза мышей нанесли 1 каплю Tobrex. Анализ ERG выполнили с помощью программы LabScribeERG (iWorx Data Acquisition Software). В этом отношении глаза, соответствующие критерию исключения, предложенному Gong Y. и соавт., были исключены из итоговых результатов и статистического анализа.
Результаты, подтверждающие эффективность антитела анти-Ang2 scFv в отношении уменьшения ангиогенеза на мышиной модели CNV, показаны на фиг. 9. Статистически значимое уменьшение размера поражений CNV при FFA наблюдали в экспериментальной группе, которой вводили 10 мкг/мкл scFv (P<0,01), там наблюдался более мощный эффект, по сравнению с экспериментальной группой, которой давали афлиберцепт. Из фиг. 10 видно, что, даже при сравнении с контролем CNV при измерении OCT все экспериментальные группы, которым вводили scFv, демонстрировали зависящее от концентрации статистически значимое снижение объема поражения (P<0,01, P<0,0001, P<0,05, соответственно). Дополнительно, как показано на фиг. 11, когда потенциал сетчатки сравнили с контролем CNV методом скотопического ERG, наблюдали статистически значимое увеличение амплитуды В-волны (P<0,0001, соответственно).
Пример 13. Анализ противоопухолевой активности выбранного антитела Анти-Ang2 (модель TNBC)
Чтобы подтвердить наличие ингибирующего эффекта антитела анти-Ang2 против ангиогенеза, провели оценку противоопухолевой эффективности на модели трижды негативного рака молочной железы (TNBC) (MDA-MB-231). Чтобы определить противоопухолевую активность антитела анти-Ang2, оценили противораковую эффективность изотипического контроля, несвакумаба и антитела анти-Ang2 путем введения в хвостовую вену мыши NSG, которой была в левой бок трансплантирована линия клеток MDA-MB-231 рака молочной железы человека. Эксперимент провела компания Champions Oncology, Inc. (США)
Клеточную линию MDA-MB-231 рака молочной железы человека разморозили и культивировали в CO2-инкубаторе (Forma, США) при температуре 37°C и концентрации CO2 5%. В последний день культивирования все раковые клетки собрали и пересчитали, после чего довели концентрацию клеток до 1×108 клеток/мл при помощи бессывороточной среды. Такой скорректированный раствор культуры клеток ввели в левый бок каждой мыши в объеме 0,1 мл (1×107 клеток/мышь). Мышей случайным образом объединили в группы по 8 животных, пока объем опухолей не достигнет 100-150 мм3. Сразу после объединения начали введение лекарства. 10 мг/кг изотипического контроля в качестве отрицательного контроля, 3 мг/кг или 10 мг/кг антитела анти-Ang2 и 3 мг/кг или 10 мг/кг несвакумаба вводили мышам путем внутривенной инъекции дважды в неделю в течение 3 недель. После введения лекарства объем опухолей измеряли два раза в неделю в течение 20 дней. На протяжении времени измерения мыши не демонстрировали клинического токсического ответа. Группа, которой давали 10 мг/кг антитела анти-Ang2, продемонстрировала ингибирование роста опухоли приблизительно на 70%, что приблизительно в два раза превышает этот показатель для группы, получавшей 10 мг/кг несвакумаба. Объем опухоли рассчитали по следующему уравнению: Объем опухоли (TV) = ширина2 × длина × 0,52. Масса каждого животного одинаково увеличилась в среднем приблизительно на 5%, на основании чего подтвердили отсутствие особых токсических реакций (фиг. 12).
Таблица 13. Ингибирование роста опухоли в ответ на введение антитела анти-Ang2 (мм3) |
|||||||||||||
Средний объем опухоли | |||||||||||||
Воздействие | 0 | 3 | 6 | 10 | 13 | 17 | 20 | ||||||
01 Изотипический контроль | 157 | 199 | 216 | 237 | 250 | 290 | 323 | ||||||
02 анти-Anq2, 3 мг/кг | 157 | 179 | 187 | 179 | 188 | 205 | 212 | ||||||
03 анти-Anq2, 10 мг/кг | 157 | 184 | 188 | 171 | 178 | 193 | 207 | ||||||
04 Несвакумаб 3 мг/кг | 157 | 186 | 192 | 185 | 203 | 231 | 262 | ||||||
05 Несвакумаб 10 мг/кг | 157 | 186 | 197 | 210 | 221 | 243 | 278 | ||||||
Объем опухоли - SEM | |||||||||||||
Воздействие | 0 | 3 | 6 | 10 | 13 | 17 | 20 | ||||||
01Изотипический контроль | 7,254 | 12,682 | 18,216 | 25,044 | 34,67 | 47,517 | 61,862 | ||||||
02 анти-Anq2, 3 мг/кг | 6,777 | 9,424 | 12,741 | 14,444 | 20,313 | 23,01 | 25,324 | ||||||
03 анти-Anq2, 10 мг/кг | 6,625 | 10,606 | 10,416 | 13,104 | 12,733 | 12,434 | 15,184 | ||||||
04 Несвакумаб 3 мг/кг | 6,155 | 7,339 | 8,681 | 13,944 | 17,324 | 21,042 | 29,726 | ||||||
05 Несвакумаб 10 мг/кг | 6,009 | 12,15 | 12,827 | 18,151 | 19,917 | 25,11 | 31,335 | ||||||
Ингибирование роста опухоли (%) | |||||||||||||
Воздействие | 0 | 3 | 6 | 10 | 13 | 17 | 20 | ||||||
01 Изотипический контроль | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||||
02 анти-Anq2, 3 мг/кг | 0 | 47,62 | 49,15 | 72,5 | 66,67 | 63,91 | 66,87 | ||||||
03 анти-Anq2, 10 мг/кг | 0 | 35,71 | 47,46 | 82,5 | 77,42 | 72,93 | 69,88 | ||||||
04 Несвакумаб 3 мг/кг | 0 | 30,95 | 40,68 | 65 | 50,54 | 44,36 | 36,75 | ||||||
05 Несвакумаб 10 мг/кг | 0 | 30,95 | 32,2 | 33,75 | 31,18 | 35,34 | 27,11 | ||||||
Таблица 14. Изменение массы тела мышей (г) в зависимости от даты |
|||||||||||||
Масса тела - среднее значение | |||||||||||||
Воздействие | 0 | 3 | 6 | 10 | 13 | 17 | 20 | ||||||
01 Изотипический контроль | 23,281 | 23,707 | 23,736 | 23,825 | 24,259 | 24,478 | 24,489 | ||||||
02 анти-Anq2, 3 мг/кг | 23,356 | 23,701 | 24,449 | 24,444 | 25,19 | 25,23 | 25,201 | ||||||
03 анти-Anq2, 10 мг/кг | 24,046 | 24,482 | 24,899 | 24,423 | 25,161 | 25,355 | 25,433 | ||||||
04 Несвакумаб 3 мг/кг | 23,253 | 23,813 | 24,198 | 23,991 | 24,768 | 25,066 | 25,186 | ||||||
05 Несвакумаб 10 мг/кг | 22,648 | 23,531 | 23,96 | 23,53 | 24,159 | 24,674 | 24,346 | ||||||
Масса тела - SEM | |||||||||||||
Воздействие | 0 | 3 | 6 | 10 | 13 | 17 | 20 | ||||||
01 Изотипический контроль | 1,38 | 1,042 | 1,02 | 1,129 | 0,97 | 1,066 | 1,117 | ||||||
02 анти-Anq2, 3 мг/кг | 0,473 | 0,411 | 0,474 | 0,539 | 0,555 | 0,582 | 0,556 | ||||||
03 анти-Anq2, 10 мг/кг | 0,751 | 0,705 | 0,769 | 0,829 | 0,85 | 0,889 | 0,86 | ||||||
04 Несвакумаб 3 мг/кг | 0,772 | 0,658 | 0,771 | 0,807 | 0,788 | 0,659 | 0,918 | ||||||
05 Несвакумаб 10 мг/кг | 0,346 | 0,308 | 0,238 | 0,318 | 0,312 | 0,359 | 0,502 |
Промышленная применимость
Антитело анти-Ang2 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему раскрытию демонстрирует требуемую активность связывания с Ang2 и может эффективно использоваться в составе ингибиторов рака/опухоли или ангиогенеза и в ходе профилактики или лечения заболеваний, связанных с активацией и (или) избыточным производством ангиопоэтина-2. В соответствии с настоящим раскрытием, разработав терапевтические агенты, мишень которых отличается от мишеней существующих нацеленных на Ang2 терапевтических агентов, для лечения опухолей можно использовать как совместное лечение с существующими терапевтическими агентами, так и монотерапию.
Хотя специфические воплощения настоящего раскрытия были описаны подробно, специалисту в данной области техники будет очевидно, что эти подробные описания являются просто примерами и не ограничивают область настоящего раскрытия. Таким образом, основная область настоящего раскрытия будет определена в прилагаемой формуле изобретения и ее эквивалентах.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ФАРМАБЦИН ИНК.
<120> АНТИТЕЛО ПРОТИВ ANG2 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
<130> PP-B2372
<150> KR 19/021812
<151> 2019-02-25
<160> 61
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 1
Gly Phe Ser Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 2
Ile Lys Asp Asp Gly Ser Gln Thr
1 5
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 3
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met
1 5 10
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 4
Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp
1 5
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 5
Gly Asn Asn
1
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 6
Gln Ser Tyr Asp Ser Arg Leu Gly Val Val
1 5 10
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 7
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 8
Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr
1 5
<210> 9
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 9
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met
1 5 10
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 10
Gln Ser Leu Leu His Ser Leu Gly Asp Asn Tyr
1 5 10
<210> 11
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 11
Leu Gly Ser
1
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 12
Met Gln Ser Leu Gln Thr Pro Pro Tyr Thr
1 5 10
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 13
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 14
Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr
1 5
<210> 15
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 15
Ala Lys Ile Leu Ala Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 16
Arg Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 17
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 17
Gly Ala Ser
1
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 18
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 19
Gly Phe Ala Phe Gly Arg Tyr Glu
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 20
Ile Asp Thr Gly Gly Gly Ala Lys
1 5
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 21
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met
1 5 10
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 22
Gln Ala Ile Ser Thr Trp
1 5
<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 23
Thr Ala Ser
1
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 24
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 25
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Cys Ala
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 26
Ile Ser Gly Asn Ser Lys Asn Val
1 5
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 27
Ala Arg Asp Pro Ala Tyr Ser Gln Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 28
Ser Ser Asn Val Gly Gly Tyr Pro
1 5
<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 29
Thr Asp Tyr
1
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 30
Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu Asn Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 31
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 31
cagatgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctcaaactc 60
tcctgcgcag cctctggatt ctcctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtggccacc ataaaggacg atggaagtca gacatactat 180
gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagag ctcactgttt 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtac cacagaagga 300
ttaatgaatg gacttcattt tgatatgtgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcctca 360
360
<210> 32
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 32
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Lys Asp Asp Gly Ser Gln Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 33
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 33
cagctcgtgc tgactcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcaggg ggtcaccatc 60
tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120
tttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tctggtaaca ataatcggcc ctcagggctc 180
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactggactc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcaggct gggtgtggtc 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 34
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 34
Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gly
1 5 10 15
Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr
20 25 30
Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Ser Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Leu Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Arg Leu
85 90 95
Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 35
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 35
caggtgcagc tggtggagtc tggagcagag gtgaaaagac ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaaga cttctggata cagctttacc agctactgga tccactgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag aactggagtg gatggggagc atctatcctg ggaactctga taccagatac 180
agcccatcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagccgaca gctccagcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtac cacagaagga 300
ttaatgaatg gacttcattt tgatatgtgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcctca 360
360
<210> 36
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Glu Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Ser Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 37
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 37
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgta ggtcaagtca gagcctcctg catagtcttg gagacaatta tttggattgg 120
tatctacaga agccagggca gtctccgcaa ctcctgatct atttgggttc taagcgggcc 180
gccggggtcc ccgacaggtt cagtggcagt ggctcaggca cagactttac actcaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggagtt tattattgca tgcaatctct acaaactccc 300
ccgtacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaac gt 342
<210> 38
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Leu Gly Asp Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Lys Arg Ala Ala Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg
<210> 39
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 39
caggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtgcta gtgatggtgc cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggag cacactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaaattctc 300
gcgggatata gtggcccaat gggcggaatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 40
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Ala Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 41
<211> 324
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 41
Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Thr
20 25 30
Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala
50 55 60
Cys Thr Thr Gly Thr Cys Gly Gly Gly Cys Gly Ala Gly Thr Cys Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Ala Ala Cys Thr Ala Thr
85 90 95
Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys
100 105 110
Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Cys
115 120 125
Cys Cys Cys Thr Ala Ala Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
130 135 140
Thr Ala Thr Gly Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala Ala Thr Thr
145 150 155 160
Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Thr Cys
165 170 175
Ala Thr Cys Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys
180 185 190
Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly
195 200 205
Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr
210 215 220
Cys Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr
225 230 235 240
Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr
245 250 255
Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Thr Ala
260 265 270
Cys Thr Ala Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Gly Cys Thr Cys
275 280 285
Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ala
290 295 300
Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr Cys Ala Ala
305 310 315 320
Ala Cys Gly Thr
<210> 42
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Ser Ser Gln Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 43
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 43
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgaag cctctggatt cgccttcggt cgttatgaga tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gattgcatat attgatactg gtggtggtgc caaagtctat 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagacg acagcaaaaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtac cacagaagga 300
ttaatgaatg gacttcattt tgatatgtgg ggccaaggga caatgatcac cgtctcctca 360
360
<210> 44
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Ala Phe Gly Arg Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asp Thr Gly Gly Gly Ala Lys Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Leu Met Asn Gly Leu His Phe Asp Met Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Ile Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 45
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcgcc 60
atcacttgcc gggccagtca ggctattagt acctggttgg cctggtatca gcagaaacct 120
ggtaaagccc ctaaactcct gatctatacg gcgtctactt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt acccttacac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgt 324
<210> 46
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 47
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 47
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattgtgcca tgcactgggt ccgacaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagtggga atagtaaaaa cgtagcctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcagcatc tccagagacg acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatccg 300
gcatacagcc agtttgacta ctggggccag ggaaccctga tcaccgtctc ctca 354
<210> 48
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Cys
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Lys Asn Val Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Ala Tyr Ser Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Ile Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 49
cagtctgccc tgactcagcc tccctcactg tctgcgaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgctctg gaagcagctc caacgtcgga ggatatcctg tcaactggta ccagcaggtc 120
ccaggagcgg cccccaaact cctcatgtat actgattata agcggccctc aggtgtccct 180
gaccgattct ttggctccaa gtctggcact tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaagatg aggctgatta ttactgtgct acatgggacg acaacctgaa tggctatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 50
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Ala Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Thr Asp Tyr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Phe
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 51
Ala Lys Thr Leu Ala Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 52
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 52
Ala Lys Ile Leu Val Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 53
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 53
Ala Lys Ser Leu Ala Ser Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 54
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 54
caggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtgcta gtgatggtgc cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggag cacactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaaactctc 300
gcgggatata gtggcccaat gggtggcatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 55
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Thr Leu Ala Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 56
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 56
caggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtgcta gtgatggtgc cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggag cacactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaaatcctc 300
gtaggataca gtggcccaat gggcggaatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 57
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Val Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 58
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 58
caggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtgcta gtgatggtgc cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggag cacactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaaagcctt 300
gccagctata gtggcccaat gggcggcatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 59
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Leu Ala Ser Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 60
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 60
caggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ctgttcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtgcta gtgatggtgc cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggag cacactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaaactctc 300
gcgggatata gtggcccaat gggtggcatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 61
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Sequence
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ser Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ala Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Thr Leu Ala Gly Tyr Ser Gly Pro Met Gly Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<---
Claims (25)
1. Антитело, специфически связывающееся с ангиопоэтином-2 (Ang2), или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие:
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 1, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 3, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 4, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 5 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 6;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 7, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 8 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 9, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 10, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 11 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 12;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 15, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 19, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 22, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 23 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 24;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 25, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 26 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 27, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 28, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 29 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 30;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 51, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18;
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 52, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18; или
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 13, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 53, а также вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 16, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 17 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 18.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, 36, 40, 44, 48, 55, 57, 59 и 61.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34, 38, 42, 46 и 50.
4. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3.
5. Нуклеиновая кислота по п. 4, где нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 35, 39, 43, 47, 54, 56, 58 и 60, кодирующих вариабельную область тяжелой цепи.
6. Нуклеиновая кислота по п. 4, где нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33, 37, 41, 45 и 49, кодирующих вариабельную область легкой цепи.
7. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 4.
8. Клетка для продуцирования антитела по любому из пп. 1-3, трансформированная вектором экспрессии по п. 7.
9. Способ производства антитела, связывающегося с Ang2, или его антигенсвязывающего фрагмента, причем способ содержит следующие процессы:
(а) культивирование клеток по п. 8, и
(b) восстановление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из культивируемых клеток.
10. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 в качестве действующего вещества для профилактики или лечения заболевания, связанного с активацией и(или) избыточным производством ангиопоэтина-2.
11. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 в качестве действующего вещества для ингибирования ангиогенеза.
12. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 в качестве действующего вещества для диагностики заболевания, связанного с активацией и(или) избыточным производством ангиопоэтина-2.
13. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 в качестве действующего вещества для профилактики или лечения заболеваний глаз.
14. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 в качестве действующего вещества для профилактики или лечения опухоли или рака.
15. Композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-3 для объединения с другими терапевтическими препаратами.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2019-0021812 | 2019-02-25 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2788088C1 true RU2788088C1 (ru) | 2023-01-16 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013112438A1 (en) * | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized formulations containing anti-ang2 antibodies |
RU2509085C2 (ru) * | 2008-01-28 | 2014-03-10 | Медиммун Лимитед | Стабилизированные антитела против ангиопоэтина-2 и их применение |
WO2015171747A1 (en) * | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Medimmune, Llc | Methods of using anti-ang2 antibodies |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2509085C2 (ru) * | 2008-01-28 | 2014-03-10 | Медиммун Лимитед | Стабилизированные антитела против ангиопоэтина-2 и их применение |
WO2013112438A1 (en) * | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized formulations containing anti-ang2 antibodies |
WO2015171747A1 (en) * | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Medimmune, Llc | Methods of using anti-ang2 antibodies |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BROWN J.L. et al., A Human Monoclonal Anti-ANG2 Antibody Leads to Broad Antitumor Activity in Combination with VEGF Inhibitors and Chemotherapy Agents in Preclinical Models, Mol Cancer Ther, 2010, vol.9 (1), pp.145-156. RENNEL E.S. et al., A Human Neutralizing Antibody Specific to Ang-2 Inhibits Ocular Angiogenesis, Microcirculation, 2011, Volume 18, Issue 7, pp.598-607. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2022201737B2 (en) | Epitopes in Amyloid beta mid-region and conformationally-selective antibodies thereto | |
KR101815265B1 (ko) | FcRn 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물 | |
US10772969B2 (en) | N-terminal epitopes in amyloid beta and conformationally-selective antibodies thereto | |
JP7452829B2 (ja) | アミロイドベータのエピトープおよびそれに対する抗体 | |
US10035848B2 (en) | Antibody targeting cell surface deposited complement protein C3d and use thereof | |
CN112243443B (zh) | 抗trop-2抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
RU2725950C1 (ru) | Антитела против белка-1 запрограммированной клеточной смерти (pd-1) и их применение | |
CN113227148B (zh) | 抗gpc3抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
KR102527315B1 (ko) | 항-Ang2 항체 및 이의 용도 | |
RU2788088C1 (ru) | Антитело против ang2 и его применение | |
AU2017219386B2 (en) | Antibody against EGFRvIII and use thereof | |
CN113993897B (zh) | 抗tie2抗体及其用途 | |
RU2795455C2 (ru) | Антитело против tie-2 и его применение | |
EP4403577A1 (en) | Modified anti-vegfr2 (kdr) antibody and use thereof | |
US20230303675A1 (en) | Modified antibody and method for manufacturing same | |
KR101996627B1 (ko) | Vcam-1-d6에 결합하는 항체 및 그 용도 |