RU2782129C1 - Method for surgical treatment of corneal defects of various origins - Google Patents
Method for surgical treatment of corneal defects of various origins Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782129C1 RU2782129C1 RU2022108665A RU2022108665A RU2782129C1 RU 2782129 C1 RU2782129 C1 RU 2782129C1 RU 2022108665 A RU2022108665 A RU 2022108665A RU 2022108665 A RU2022108665 A RU 2022108665A RU 2782129 C1 RU2782129 C1 RU 2782129C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amniotic membrane
- prp
- corneal
- lysate
- cornea
- Prior art date
Links
- 206010051559 Corneal defect Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 210000001691 Amnion Anatomy 0.000 claims abstract description 43
- 210000004623 Platelet-Rich Plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 41
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 32
- 210000004087 Cornea Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000004453 corneal transparency Effects 0.000 abstract 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 13
- 206010068760 Ulcers Diseases 0.000 description 9
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 9
- 210000000795 Conjunctiva Anatomy 0.000 description 6
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 5
- 210000001772 Blood Platelets Anatomy 0.000 description 4
- 210000000981 Epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 206010064996 Ulcerative keratitis Diseases 0.000 description 4
- 201000007717 corneal ulcer Diseases 0.000 description 4
- 230000002497 edematous Effects 0.000 description 4
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 4
- 230000000544 hyperemic Effects 0.000 description 4
- 206010005159 Blepharospasm Diseases 0.000 description 3
- 206010011013 Corneal erosion Diseases 0.000 description 3
- 210000000744 Eyelids Anatomy 0.000 description 3
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 3
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 3
- 210000001138 Tears Anatomy 0.000 description 3
- 230000000744 blepharospasm Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 2
- 208000004587 Corneal Disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 description 2
- 235000015450 Tilia cordata Nutrition 0.000 description 2
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 2
- 201000004569 blindness Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000003628 erosive Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 2
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 2
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N Acridine orange Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002159 Anterior Chamber Anatomy 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 208000009043 Chemical Burns Diseases 0.000 description 1
- 206010008424 Chemical injury Diseases 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N Chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 206010009802 Coagulopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 description 1
- 206010011024 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 208000009745 Eye Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010167 Eye Injury Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000554 Iris Anatomy 0.000 description 1
- 206010061255 Ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010023644 Lacrimation increased Diseases 0.000 description 1
- 208000010415 Low Vision Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000001747 Pupil Anatomy 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010044546 Traumatic ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010047531 Visual acuity reduced Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 231100000269 corneal opacity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004452 decreased vision Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals Protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005338 frosted glass Substances 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000004317 lacrimation Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 1
- 230000004303 low vision Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 201000002002 recurrent corneal erosion Diseases 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 230000001228 trophic Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и предназначено для лечения дефектов роговицы различной этиологии.The present invention relates to ophthalmology and is intended for the treatment of corneal defects of various etiologies.
Согласно данным ВОЗ на долю заболеваний роговицы приходится около четверти всех глазных болезней, а слепота, вызванная повреждениями роговицы, составляет от 4 до 5% во всем мире. В Российской Федерации проблема стоит еще более остро. Причиной роговичной слепоты выступают язвенные поражения роговицы, которые относятся к числу тяжелой патологии, трудно поддающейся лечению.According to the WHO, corneal diseases account for about a quarter of all eye diseases, and blindness caused by corneal damage is 4 to 5% worldwide. In the Russian Federation, the problem is even more acute. The cause of corneal blindness is ulcerative lesions of the cornea, which are among the severe pathologies that are difficult to treat.
Для лечения персистирующих дефектов роговицы в качестве консервативного лечения применяется интенсивная терапия с использованием антибиотиков, противовирусных, противовоспалительных, десенсебилизирующих препаратов, ингибиторов протеаз, средств улучшающих трофику и регенерацию, а также слезозаменителей [Ченцова Е.В. Система патогенетически обоснованного лечения ожоговой травмы глаз: Экспериментально-клиническое исследование / Моск. НИИ глазных болезней. - Москва, 1996. - 40 с. Майчук Д.Ю. Рецидивирующие эрозии роговицы: особенности возникновения и лечения // Новое в офтальмологии. 2014. №3. С. 72.]. Однако при использовании консервативной терапии часто не удается достигнуть восстановления ткани роговицы.For the treatment of persistent corneal defects, intensive therapy is used as a conservative treatment using antibiotics, antiviral, anti-inflammatory, desensitizing drugs, protease inhibitors, agents that improve trophism and regeneration, as well as tear substitutes [Chentsova E.V. The system of pathogenetically substantiated treatment of burn eye injury: Experimental clinical study / Mosk. Research Institute of Eye Diseases. - Moscow, 1996. - 40 p. Maychuk D.Yu. Recurrent corneal erosions: features of occurrence and treatment // New in ophthalmology. 2014. №3. S. 72.]. However, when using conservative therapy, it is often not possible to achieve restoration of the corneal tissue.
Основным способом лечения дефектов роговицы. остается хирургическое вмешательство на роговице.The main method of treatment of corneal defects. remains surgical intervention on the cornea.
Известен способ лечения эпителиальных дефектов роговицы путем фиксации амниотической мембраной аутологичного тромбофибринового сгустка [Alio J.L., Arnalich-Montiel F, Rodriguez AE. The role of "eye platelet rich plasma" (E-PRP) for wound healing in ophthalmology. // Curr Pharm Biotechnol. 2012 Jun; 13(7): 1257-65]. Для получения сгустка у пациента производят забор 40-60 мл венозной крови непосредственно перед операцией, после одноступенчатого центрифугирования отбирали плазму, ближайшую к эритроцитам, избегая слоя лимфоцитов. Концентрация тромбоцитов в БоТП в 2-3 раза выше, чем в цельной крови. Один миллилитр полученной БоТП помещали в каждую лунку 4-луночного планшета с плоским дном и добавляли 50 мкл 10% хлорида кальция для активации, затем инкубировали при t 37°C в течение 30 минут. Через 30 минут формировался сгусток БоТП, готовый к наложению на дефект поверхности роговицы с фиксацией его под амниотической мембраной.A known method for the treatment of epithelial defects of the cornea by fixing the amniotic membrane autologous thrombofibrin clot [Alio J.L., Arnalich-Montiel F, Rodriguez AE. The role of "eye platelet rich plasma" (E-PRP) for wound healing in ophthalmology. // Curr Pharm Biotechnol. Jun 2012; 13(7): 1257-65]. To obtain a clot from a patient, 40-60 ml of venous blood is taken immediately before the operation; after one-stage centrifugation, the plasma closest to the erythrocytes was taken, avoiding the layer of lymphocytes. The concentration of platelets in PRP is 2-3 times higher than in whole blood. One milliliter of the obtained PRP was placed in each well of a 4-well flat bottom plate and 50 μl of 10% calcium chloride was added for activation, then incubated at t 37°C for 30 minutes. After 30 minutes, a PRP clot was formed, ready to be applied to the corneal surface defect with its fixation under the amniotic membrane.
Применение этого способа не всегда приводит к эпителизации роговицы. Вероятно, это вызвано особенностями сгустка БоТП, во время изготовления которого используется активатор свертывания в виде хлорида кальция, и 30 минутная инкубация при t 37°C, что может повышать риск контаминации патогенной микрофлорой. Также у способа есть ряд недостатков: возможная дислокация сгустка, сгусток препятствует благотворному воздействию амниотической мембраны на поврежденную поверхность роговицы, невозможность стандартизировать величину сгустка и количеству функционирующих тромбоцитов, что может приводить к недостаточной отдаче факторов роста.The use of this method does not always lead to epithelialization of the cornea. This is probably due to the peculiarities of the PRP clot, during the manufacture of which a clotting activator in the form of calcium chloride is used, and a 30-minute incubation at t 37°C, which may increase the risk of contamination by pathogenic microflora. The method also has a number of disadvantages: possible dislocation of the clot, the clot prevents the beneficial effects of the amniotic membrane on the damaged surface of the cornea, the inability to standardize the size of the clot and the number of functioning platelets, which can lead to insufficient return of growth factors.
Известен способ того же назначения, включающий применение амниотической мембраны для лечения язв роговицы, при котором покрывают язву роговицы амниотической мембраной и фиксируют с помощью непрерывного П-образного шва, устанавливают мягкую контактную линзу на роговицу и проводят латеральную блефарорафию (патент RU 2607163 С1, 23.12.2016). В способе применяют консервированный силиковысушенный амнион. Однако такой способ консервации, при хорошей сохранности структуры и клеточного состава амниона, характеризуется нежизнеспособностью клеток и уменьшением их количества, что снижает концентрацию факторов роста - важнейшей составляющей успешного заживления дефектов эпителия. Данный способ принят за ближайший аналог.A method of the same purpose is known, including the use of an amniotic membrane for the treatment of corneal ulcers, in which the corneal ulcer is covered with an amniotic membrane and fixed with a continuous U-shaped suture, a soft contact lens is placed on the cornea and lateral blepharophage is performed (patent RU 2607163 C1, 23.12. 2016). The method uses canned silicon-dried amnion. However, this method of preservation, with a good preservation of the structure and cellular composition of the amnion, is characterized by the non-viability of cells and a decrease in their number, which reduces the concentration of growth factors - the most important component of successful healing of epithelial defects. This method is taken as the closest analogue.
Известен способ лечения эрозий роговицы с помощью инсталляций лизата БоТП на фоне стандартной антибактериальной, противовоспалительной, репаративной терапии, показавший большую эффективность в сравнении со стандартной схемой лечения. Однако при инсталляции лизат БоТП быстро вымывается из конъюнктивальных сводов слезой, сокращая время воздействия ростовых факторов на поврежденную роговицу (Н.В. Боровкова, И.А. Филатова, Е.В. Ченцова, Е.В. Федосеева, Ю.А. Павленко, С.А. Шеметов, А.О. Петрова, И.Н. Пономарев. Эффективность применения лизата богатой тромбоцитами плазмы БоТП у пациентов с эрозией роговицы или посттравматическим рубцеванием тканей век. Российский офтальмологический журнал, 2020; 13(3):8-14).A known method for the treatment of corneal erosions using PRP lysate installations against the background of standard antibacterial, anti-inflammatory, reparative therapy, which showed greater efficiency in comparison with the standard treatment regimen. However, during installation, PRP lysate is quickly washed out of the conjunctival fornix with a tear, reducing the time of exposure of growth factors to the damaged cornea (N.V. Borovkova, I.A. Filatova, E.V. Chentsova, E.V. Fedoseeva, Yu.A. Pavlenko , S. A. Shemetov, A. O. Petrova, I. N. Ponomarev, Efficacy of using PRP lysate in patients with corneal erosion or post-traumatic scarring of eyelid tissues, Russian Ophthalmological Journal, 2020;13(3):8- fourteen).
Задачей изобретения является создание комбинированного способа лечения дефектов роговицы с помощью биоконструкции.The objective of the invention is to create a combined method for the treatment of corneal defects using a bioconstruct.
Техническим результатом предлагаемого способа является полноценная эпителизация дефектов роговицы с сокращением сроков реабилитации и сохранением прозрачности роговицы.The technical result of the proposed method is a complete epithelialization of corneal defects with a reduction in rehabilitation time and maintaining the transparency of the cornea.
Технический результат достигается за счет совместного синергического действия амниотической мембраны и аутологичного лизата БоТП.The technical result is achieved due to the joint synergistic action of the amniotic membrane and autologous PRP lysate.
Амниотическая мембрана выступает как биологическая повязка, имеет низкую иммуногенность и отсутствие реакций отторжения, ускоряет эпителизацию, угнетает ангиогенез, воспаление, фиброз, обладает анальгезирующим и антимикробным эффектом против ряда микроорганизмов. Хотя силиковысушенная амниотическая мембрана имеет преимущества перед другими методами консервации в простоте изготовления, удобстве хранения и в хорошей сохранности структуры, но отличается нежизнеспособностью клеток и уменьшением их количества. Аутологичный лизат БоТП насыщает амниотическую мембрану широким набором цитокинов и факторов роста, которые постепенно выходят из амниотической мембраны по мере ее деградации и под воздействием слезы, что еще больше усиливает анаболические и регенеративные процессы в роговице, при этом амниотическая мембрана и контактная линза удерживают лизат БоТП от вымывания.The amniotic membrane acts as a biological bandage, has low immunogenicity and no rejection reactions, accelerates epithelialization, inhibits angiogenesis, inflammation, fibrosis, has analgesic and antimicrobial effects against a number of microorganisms. Although the silico-dried amniotic membrane has advantages over other preservation methods in terms of ease of manufacture, ease of storage, and good structure preservation, it is distinguished by the non-viability of cells and a decrease in their number. Autologous PRP lysate saturates the amniotic membrane with a wide range of cytokines and growth factors, which are gradually released from the amniotic membrane as it degrades and under the influence of tears, which further enhances anabolic and regenerative processes in the cornea, while the amniotic membrane and contact lens keep PRP lysate from washout.
Нами было проведено исследование по оценке биосовместимости и рост-стимулирующего эффекта биоконструкции на основе амниона, обогащенного аутолизатом БоТП in vitro. В работе использовали культуру буккального эпителия человека 5 пассажа. Образцы амниотической мембраны площадью 0,5 мм помещали на дно опытных лунок до посева клеток. В контрольные и опытные лунки вносили по 10 тыс. клеток буккального эпителия. В опытах с лизатом БоТП объем используемого лизата определяли, исходя из оптимального содержания тромбоцитарного фактора роста в исходной БоТП. Объем лизата составил 25 мкл. Общее время культивирования составляло 3 суток. По завершении эксперимента производили подсчет клеток в тысячах. Результаты показали биосовместимость и взаимное потенцирование рост-стимулирующего эффекта биоконструкции на основе амниона и лизата БоТП по сравнению с контрольными группами.We have conducted a study to assess the biocompatibility and growth-stimulating effect of a bioconstruct based on amnion enriched with PRP autolysate in vitro. We used a culture of human buccal epithelium of the 5th passage. Samples of the amniotic membrane with an area of 0.5 mm were placed on the bottom of the experimental wells before seeding the cells. 10,000 cells of buccal epithelium were added to the control and experimental wells. In experiments with PRP lysate, the volume of lysate used was determined based on the optimal content of platelet growth factor in the original PRP. The volume of the lysate was 25 μl. The total cultivation time was 3 days. At the end of the experiment, cells were counted in thousands. The results showed biocompatibility and mutual potentiation of the growth-stimulating effect of the bioconstruct based on amnion and PRP lysate compared to the control groups.
Были проведены дополнительные эксперименты по определению необходимой длительности обработки амниона лизатом БоТП для полного пропитывания амниона. Для этого были взяты кусочки амниотической мембраны 5×10 мм2 на бумажном носителе, и произведено их взвешивание. Далее кусочки помещали в чашку Петри с лизатом БоТП. Через 1, 3, 5, 10, 15 и 20 минут их вынимали из лизата и взвешивали повторно. Также в эксперименте использовали амнион, отделенный от подложки для подсчета того, сколько лизата БоТП на единицу площади будет доставлено на роговицу после наложения. Дельта межу весом до пропитывания и после свидетельствует о количестве лизата БоТП в амнионе. Результаты показали, что оптимальная длительность пропитывания силиковысушенной амниотической мембраны составляет 5 минут.Additional experiments were carried out to determine the necessary duration of treatment of the amnion with PRP lysate to completely impregnate the amnion. For this, pieces of the amniotic membrane 5×10 mm 2 on paper were taken and weighed. Next, the pieces were placed in a Petri dish with PRP lysate. After 1, 3, 5, 10, 15 and 20 minutes, they were removed from the lysate and weighed again. Also in the experiment, an amnion separated from the substrate was used to calculate how much PRP lysate per unit area would be delivered to the cornea after application. The delta between the weight before and after impregnation indicates the amount of PRP lysate in the amnion. The results showed that the optimal duration of impregnation of the silica-dried amniotic membrane is 5 minutes.
БоТП изготавливается по патенту RU 2681753 С1, 23.03.2020 из стабилизированной венозной крови пациента. Процесс получения состоит из взятия 20 мл венозной крови, взятой из кубитальной вены, центрифугирования ее в течение пяти мнут при 300g. Богатая тромбоцитами плазма забирается из верхней части пробирки так, чтобы над клеточным осадком осталось не меньше 1 мм плазмы. Далее проводят центрифугирование в течение 17 минут при 700g. Повторно отбирают верхнюю часть плазмы так, чтобы ее над осадком осталось 3,1 мл. Далее проводят количественный анализ функциональных тромбоцитов путем витального окрашивания флуорохромными красителями трипафлавином и акридиновым оранжевым с помощью флуоресцентного микроскопа. Для получения лизата пробирку с БоТП замораживают до температур - 80°С, с последующей разморозкой при температуре 2-6°С и центрифугированием 20 минут при 3000g. Вся надосадочная часть - это лизат БоТП, который отбирается и помещается в пробирку. Из 20 мл крови получается около 2 мл лизата БоТП. На дно стерильного контейнера для сбора биоматериала (100 мл) выливают 2 мл лизата БоТП, туда же пинцетом помещают фрагмент силиковысушенной амниотической мембраны эпителием вниз. 2 мл - это объем, достаточный для полного погружения амниотической мембраны и гарантированно достаточный для полного пропитывания мембраны любого требуемого для нас размера.PRP is manufactured according to patent RU 2681753 C1, 03/23/2020 from the patient's stabilized venous blood. The process of obtaining consists of taking 20 ml of venous blood taken from the cubital vein, centrifuging it for five minutes at 300g. Platelet-rich plasma is taken from the top of the tube so that at least 1 mm of plasma remains above the cell sediment. Next, centrifugation is carried out for 17 minutes at 700g. The upper part of the plasma is re-selected so that 3.1 ml of it remains above the sediment. Further, a quantitative analysis of functional platelets is carried out by vital staining with fluorochrome dyes tripaflavin and acridine orange using a fluorescent microscope. To obtain a lysate, a test tube with PRP is frozen to temperatures of -80°C, followed by defrosting at a temperature of 2-6°C and centrifugation for 20 minutes at 3000g. The entire supernatant is PRP lysate, which is taken and placed in a test tube. About 2 ml of PRP lysate is obtained from 20 ml of blood. Pour 2 ml of PRP lysate into the bottom of a sterile container for collecting biomaterial (100 ml), and place a fragment of the silicified amniotic membrane with the epithelium downwards using tweezers. 2 ml is a volume sufficient to completely submerge the amniotic membrane and guaranteed to be sufficient to completely soak the membrane of whatever size we require.
Способ применили у 10 пациентов с язвами различной этиологии: ожоговой, трофической, вирусной. Результаты применения показали положительную динамику во всех случаях. В 2-х случаях было достаточно одного применения. В 7-ми потребовалось повторное покрытие амниотической мембраной, пропитанной аутологичным лизатом БоТП. В одном случае с тяжелым ожогом для полной эпителизации потребовалось 3 покрытия амниотической мембраной, пропитанной лизатом БоТП.The method was applied in 10 patients with ulcers of various etiologies: burn, trophic, viral. The results of the application showed a positive trend in all cases. In 2 cases, one application was enough. In 7 patients, recoating with amniotic membrane impregnated with autologous PRP lysate was required. In one severe burn case, complete epithelialization required 3 coats of amniotic membrane impregnated with PRP lysate.
Способ осуществляют следующим образомThe method is carried out as follows
Насыщают силиковысушенную амниотическую мембрану лизатом аутологичной богатой тромбоцитами плазмы (БоТП) в объеме 2 мл в течение 5 минут. Осуществляют покрытие деэпителизированной поверхности роговицы амниотической мембраной, пропитанной лизатом БоТП. Дополнительно фиксируют мягкой контактной линзой. Проводят временную латеральную блефарорафию. Через 5-7 дней швы снимают, амниотическую мембрану удаляют. При отсутствии полной эпителизации процедуру повторяют.The silicified amniotic membrane is saturated with autologous platelet-rich plasma (PRP) lysate in a volume of 2 ml for 5 minutes. The de-epithelialized surface of the cornea is coated with an amniotic membrane impregnated with PRP lysate. Additionally fixed with a soft contact lens. Spend a temporary lateral blepharorrhaphy. After 5-7 days, the sutures are removed, the amniotic membrane is removed. In the absence of complete epithelialization, the procedure is repeated.
Клинический пример 1.Clinical example 1.
Пациент Р., 32 Года. Диагноз: Химический (щелочной) ожог роговицы и конъюнктивы 2-3 ст. правого глазаPatient R., 32 years old. Diagnosis: Chemical (alkaline) burn of the cornea and conjunctiva 2-3 tbsp. right eye
Со слов пациента два месяца назад в правый глаз попал растворитель из краскопульта, появилась боль, зрение резко снизилось, глаз покраснел. В тот же день по скорой помощи был доставлен в больницу по месту жительства, где был выставлен диагноз: Химический ожог роговицы и конъюнктивы правого глаза. Было назначено консервативное лечение: Окомистин, Левомицетин, Флоксал мазь, Ибупрофен в таблетках. Почувствовал некоторое улучшение зрения и уменьшение боли через 3 недели и самостоятельно прекратил лечение. Через неделю обратился в кабинет неотложной помощи НМИЦ имени Гельмгольца, откуда был госпитализирована по неотложным показаниям с диагнозом язва роговицы, ожоговая болезнь правого глаза.According to the patient two months ago, a solvent from an airbrush got into the right eye, pain appeared, vision decreased sharply, the eye turned red. On the same day, by ambulance, he was taken to the hospital at the place of residence, where he was diagnosed with a chemical burn of the cornea and conjunctiva of the right eye. Conservative treatment was prescribed: Okomistin, Levomycetin, Floksal ointment, Ibuprofen tablets. Felt some improvement in vision and reduction in pain after 3 weeks and stopped the treatment on his own. A week later, he went to the emergency room of the Helmholtz National Medical Research Center, from where he was hospitalized for urgent reasons with a diagnosis of corneal ulcer, burn disease of the right eye.
При поступлении предъявлял жалобы на резкое снижение зрения, боли в глазу, светобоязнь, выраженный блефароспазм. Острота зрения правого глаза - 0,1. Конъюнктива гиперемирована, роговица отечная, в верхненаружном квадранте язва с подрытыми краями, 3.0×4.0 мм. Было проведено покрытие силиковысушенной амниотической мембраной, обогащенной лизатом БоТП (в течение 5 минут в объеме 2 мл), фиксированного к лимбальной зоне непрерывным кисетным швом 10-0, надета мягкая контактная линза и проведена временная латеральная блефарорафия. Через 7 дней после снятия швов с века и удаления МКЛ роговица была прозрачная, не окрашивалась флуоресцеином. Острота зрения правого глаза 0,4, блефароспазм уменьшился. В связи с успешным заживлением язвы больной выписан под наблюдение офтальмолога по месту жительства. Таким образом удалось добиться эпителизации дефекта роговицы в кратчайшие сроки.Upon admission, he complained of a sharp decrease in vision, pain in the eye, photophobia, severe blepharospasm. Visual acuity of the right eye - 0.1. The conjunctiva is hyperemic, the cornea is edematous, in the upper outer quadrant there is an ulcer with undermined edges, 3.0 × 4.0 mm. Coating was carried out with a silica-dried amniotic membrane enriched with PRP lysate (for 5 minutes in a volume of 2 ml), fixed to the limbal zone with a continuous 10-0 purse-string suture, a soft contact lens was put on, and temporary lateral blepharorrhaphy was performed. 7 days after removal of the sutures from the eyelid and removal of the SCL, the cornea was transparent and did not stain with fluorescein. Visual acuity of the right eye 0.4, blepharospasm decreased. In connection with the successful healing of the ulcer, the patient was discharged under the supervision of an ophthalmologist at the place of residence. Thus, it was possible to achieve epithelialization of the corneal defect in the shortest possible time.
Клинический пример 2.Clinical example 2.
Пациент Б. 55 лет. Диагноз травматическая язва роговицы левого глаза.Patient B. 55 years old. The diagnosis was a traumatic ulcer of the cornea of the left eye.
Со слов пациента 13 дней назад в левый глаз попала металическая стружка. Обратился в поликлинику по месту жительства, где после удаления инородного тела проходил консервативное амбулаторное лечение безрезультатно. Был направлен в НМИЦ имени Гельмгольца для госпитализации в стационар.According to the patient 13 days ago, metal shavings got into the left eye. He turned to the clinic at the place of residence, where, after removal of the foreign body, he underwent conservative outpatient treatment to no avail. He was sent to the Helmholtz National Medical Research Center for hospitalization.
При поступлении жалобы на боль, светобоязнь и снижение зрение левого глаза. Острота зрения 0,1 н.к.Upon receipt of a complaint of pain, photophobia and decreased vision in the left eye. Visual acuity 0.1 n.c.
Конъюнктива гиперемирована, роговица отечная с язвой 2×3 мм в центральной зоне, глубжележащие структуры соответствуют норме. Нами было проведено покрытие амниотической мембраной, обогащенной лизатом БоТП, согласно нашему методу. Спустя 6 дней были сняты швы, мягкая контактная линза и амниотическая мембрана. На роговице осталась эрозия эпителия роговицы 2×2 мм, роговичный синдром купировался, острота зрения 0,3. Через 4 дня консервативного лечения эпителизация была завершена. Острота зрения составляла 0,6. За 2 месяца наблюдения динамика была положительная, рецидивов не было, острота зрения повысилась до 0,8. Таким образом, удалось избежать осложнений и повысить остроту зрения, а также добиться быстрого заживления роговичного дефекта.The conjunctiva is hyperemic, the cornea is edematous with a 2×3 mm ulcer in the central zone, the underlying structures are normal. We carried out coating with an amniotic membrane enriched with PRP lysate according to our method. After 6 days, the sutures, soft contact lens and amniotic membrane were removed. On the cornea remained erosion of the epithelium of the cornea 2×2 mm, corneal syndrome stopped, visual acuity of 0.3. After 4 days of conservative treatment epithelialization was completed. Visual acuity was 0.6. For 2 months of observation, the dynamics was positive, there were no relapses, visual acuity increased to 0.8. Thus, it was possible to avoid complications and increase visual acuity, as well as to achieve rapid healing of the corneal defect.
Клинический пример 3.Clinical example 3.
Пациентка М., 43 года. Диагноз: ожог роговицы и конъюнктивы известью 2-3 ст. правого глаза.Patient M., 43 years old. Diagnosis: burn of the cornea and conjunctiva with lime 2-3 tbsp. right eye.
Со слов пациентки две недели назад в правый глаз попала известь. Больная в течение 2-х недель проходила стационарное терапевтическое лечение по месту жительства, которое имело слабоположительную динамику. Лечащим врачом было принято решение направить пациентку в НМИЦ имени Гельмгольца.According to the patient two weeks ago, lime got into her right eye. The patient underwent inpatient therapeutic treatment at the place of residence for 2 weeks, which had a weakly positive trend. The attending physician decided to refer the patient to the Helmholtz National Medical Research Center.
При поступлении предъявляла жалобы на боли в глазу, светобоязнь, слезотечение - выраженный роговичный синдром, блефароспазм. Острота зрения - движение руки у лица. Конъюнктива гиперемирована, участки ишемии по конъюнктивальным сводам, роговица полупрозрачная (матовое стекло), отечная, шероховатая, субтотальная эрозия роговицы на 18-й день после травмы. Проведено покрытие силиковысушенной амниотической мембраной, обогащенной лизатом БоТП, фиксированного к лимбальной зоне непрерывным кисетным швом 10-0, надета мягкая контактная линза и проведена временная латеральная блефарорафия. Через 5 дней проведено снятие швов с века и удаление МКЛ. На роговице осталась только эрозия 3×3 мм, роговичный синдром купировался, острота зрения 0,02. В связи с сохранившемся дефектом было принято решение о повторном наложении амниотической мембраны, обогащенной лизатом БоТП. Через 7 дней было произведено снятие швов и удаление МКЛ, под которой была полностью эпителизорованная роговица, а острота зрения составляла 0,2. Таким образом, удалось избежать осложнений и повысить остроту зрения, а также добиться быстрого заживления роговичного дефекта.Upon admission, she complained of pain in the eye, photophobia, lacrimation - severe corneal syndrome, blepharospasm. Visual acuity is the movement of the hand near the face. The conjunctiva is hyperemic, there are areas of ischemia along the conjunctival arches, the cornea is translucent (frosted glass), edematous, rough, subtotal corneal erosion on the 18th day after injury. Coating with a silica-dried amniotic membrane enriched with PRP lysate, fixed to the limbal zone with a continuous 10-0 purse-string suture, a soft contact lens was put on, and temporary lateral blepharorrhaphy was performed. After 5 days, the sutures were removed from the eyelid and the LCL was removed. Only 3×3 mm erosion remained on the cornea, the corneal syndrome was stopped, visual acuity was 0.02. Due to the preserved defect, it was decided to reapply the amniotic membrane enriched with PRP lysate. After 7 days, the sutures were removed and the LCL was removed, under which there was a completely epithelized cornea, and visual acuity was 0.2. Thus, it was possible to avoid complications and increase visual acuity, as well as to achieve rapid healing of the corneal defect.
Клинический пример 4.Clinical example 4.
Пациента Ю., 41 год. Диагноз: Язва послойного кератотрансплантата правого глаза.Patient Yu., 41 years old. Diagnosis: Ulcer of layered keratograft of the right eye.
Со слов пациента травмировал роговицу правого глаза веткой. По м/ж проходил стационарное консервативное лечение язвы роговицы в течение 2-х недель безрезультатно. Был направлен в НМИЦ им. Гельмгольца, где проходил стационарное лечение в отделе вирусных и инфекционных заболеваний. Из-за отсутствия эффекта от консервативного лечения и образования десцеметоцеле было принято решение о проведении субтотальной неавтоматизированной передней послойной кератопластики с наложением обычной амниотической мембраны. Спустя 3 месяца пациент поступил с жалобами на низкое зрение, боль, дискомфорт в правом глазу. Острота зрения - движение руки у лица. Глаз гиперемирован, центральная язва 6×5 мм полупрозрачного отечного послойного кератотрансплантата, швы чистые, провисшие, передняя камера средней глубины, влага прозрачная, радужка структурная, зрачок круглый, в центре, глубжележащие структуры не просматривались из-за помутнения роговицы.According to the patient, he injured the cornea of the right eye with a branch. The m/f underwent inpatient conservative treatment of corneal ulcers for 2 weeks to no avail. Was sent to the NMIC them. Helmholtz, where he underwent inpatient treatment in the Department of Viral and Infectious Diseases. Due to the lack of effect of conservative treatment and the formation of descemetocele, it was decided to perform subtotal non-automated anterior layered keratoplasty with the application of a conventional amniotic membrane. Three months later, the patient was admitted with complaints of low vision, pain, and discomfort in the right eye. Visual acuity is the movement of the hand near the face. The eye is hyperemic, the central ulcer is 6×5 mm of a translucent edematous layered keratograft, the sutures are clean, sagging, the anterior chamber is of medium depth, the moisture is transparent, the iris is structural, the pupil is round, in the center, the underlying structures were not visible due to corneal opacity.
Проведено удаление провисших роговичных швов и покрытие силиковысушенной амниотической мембраной, обогащенной лизатом БоТП, фиксированной к лимбальной зоне непрерывным кисетным швом 10-0, надета мягкая контактная линза и проведена временная латеральная блефарорафия. Через 6 дней удалили швы и мембрану, сохранялась язва 1×2 мм с каймой эпителиопатии. В связи с сохранившемся дефектом было принято решение о повторном наложении амниотической мембраны, обогащенной лизатом БоТП. Через неделю язвы не наблюдалось, была полная эпителизация, сохранилось легкое помутнение в оптической зоне, а острота зрения составляла 0,1. При наблюдении в течение 70 дней рецидива язвы не было, сохранялась полная эпителизация.Sagging corneal sutures were removed and covered with a silicone-dried amniotic membrane enriched with PRP lysate, fixed to the limbal zone with a continuous 10-0 purse-string suture, a soft contact lens was put on, and temporary lateral blepharorrhaphy was performed. After 6 days, the sutures and the membrane were removed, a 1×2 mm ulcer with a border of epitheliopathy remained. Due to the preserved defect, it was decided to reapply the amniotic membrane enriched with PRP lysate. A week later, no ulcer was observed, there was complete epithelialization, slight clouding in the optical zone remained, and visual acuity was 0.1. When observed for 70 days, there was no recurrence of the ulcer, and complete epithelialization remained.
Claims (2)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2782129C1 true RU2782129C1 (en) | 2022-10-21 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2801489C1 (en) * | 2022-11-10 | 2023-08-09 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of treatment of corneal graft defects with delayed epithelialization using scleral contact lenses |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2607163C1 (en) * | 2015-12-15 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of surgical management of corneal defects of various geneses |
| RU2699206C1 (en) * | 2019-02-27 | 2019-09-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) | Method of treating corneal defects via an autologous thrombofibrin clot |
| RU2735465C1 (en) * | 2020-06-29 | 2020-11-02 | Андрей Викторович Миронов | Method of treating macular retina fractures without vitreal cavity tamponage |
| RU2765601C1 (en) * | 2021-08-17 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) | Method for differentiated treatment of corneal erosions and ulcers |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2607163C1 (en) * | 2015-12-15 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of surgical management of corneal defects of various geneses |
| RU2699206C1 (en) * | 2019-02-27 | 2019-09-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) | Method of treating corneal defects via an autologous thrombofibrin clot |
| RU2735465C1 (en) * | 2020-06-29 | 2020-11-02 | Андрей Викторович Миронов | Method of treating macular retina fractures without vitreal cavity tamponage |
| RU2765601C1 (en) * | 2021-08-17 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) | Method for differentiated treatment of corneal erosions and ulcers |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ченцова Е.В. и др. Использование лизата богатой тромбоцитами плазмы при неэффективности стандартной терапии у пациентов с эрозиями роговицы. Современные технологии в офтальмологии. 2020. 4 (35). С. 45-46. Ahmed A.Abdelghany et al. Combined Platelet Rich Plasma and Amniotic membrane in the treatment of Perforated Corneal Ulcers. European Journal of Ophthalmology. October 2021. 32(4). * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2801489C1 (en) * | 2022-11-10 | 2023-08-09 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of treatment of corneal graft defects with delayed epithelialization using scleral contact lenses |
| RU2807860C1 (en) * | 2023-10-04 | 2023-11-21 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Method of combined fixation of amniotic membrane for treatment of chronic corneaal erosions |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sharma et al. | Treatment of acute ocular chemical burns | |
| Ronci et al. | Platelet-rich plasma as treatment for persistent ocular epithelial defects | |
| US7871646B2 (en) | Use of a human amniotic membrane composition for prophylaxis and treatment of diseases and conditions of the eye and skin | |
| RU2711330C2 (en) | Serum fraction of thrombocyte-enriched fibrin | |
| Baradaran-Rafii et al. | The role of amniotic membrane extract eye drop (AMEED) in in vivo cultivation of limbal stem cells | |
| JP2006511586A (en) | Method for detecting inhibition of fibrocyte formation, and method and compound for enhancing fibrocyte formation | |
| Wróbel-Dudzińska et al. | Clinical efficacy of platelet-rich plasma in the treatment of neurotrophic corneal ulcer | |
| Bahn et al. | Penetrating keratoplasty in the cat: a clinically applicable model | |
| Prabhasawat et al. | Application of preserved human amniotic membrane for corneal surface reconstruction | |
| Kim et al. | Clinical uses of human amniotic membrane for ocular surface diseases | |
| EA002986B1 (en) | Use of nerve growth factor for the storage, production or treatment of cornea and conjunctive | |
| JPH02212433A (en) | Eye drop for treating wound in epitherlium anterius corneae | |
| RU2782129C1 (en) | Method for surgical treatment of corneal defects of various origins | |
| Wylegala et al. | Amniotic membrane transplantation with cauterization for keratoconus complicated by persistent hydrops in mentally retarded patients | |
| Pakarinen et al. | Tarsorraphy in the treatment of persistent corneal lesions | |
| Mccluskey et al. | Topical fibronectin therapy in persistent corneal ulceration | |
| RU2324488C1 (en) | Method of treatment of corneal ulcers | |
| RU2699206C1 (en) | Method of treating corneal defects via an autologous thrombofibrin clot | |
| Yang et al. | Case report: subconjunctival injection with autologous platelet-rich plasma for refractory corneal ulcers in a dog | |
| RU2440801C1 (en) | Method of treating deep stromal keratites | |
| KR20150108351A (en) | Protein slurp-1 for use in the treatment of ocular diseases | |
| RU2809012C1 (en) | Method of treating corneal defects of various etiologies | |
| BARADARAN et al. | Corneal graft rejection: Incidence and risk factors | |
| RU2607163C1 (en) | Method of surgical management of corneal defects of various geneses | |
| RU2793525C1 (en) | Method for surgical treatment of corneal defects in limbal cell insufficiency |