RU2780475C1 - Method for preserving the amniotic membrane - Google Patents
Method for preserving the amniotic membrane Download PDFInfo
- Publication number
- RU2780475C1 RU2780475C1 RU2021123452A RU2021123452A RU2780475C1 RU 2780475 C1 RU2780475 C1 RU 2780475C1 RU 2021123452 A RU2021123452 A RU 2021123452A RU 2021123452 A RU2021123452 A RU 2021123452A RU 2780475 C1 RU2780475 C1 RU 2780475C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amniotic membrane
- solution
- membrane
- ringer
- solution containing
- Prior art date
Links
- 210000001691 Amnion Anatomy 0.000 title claims abstract description 61
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 55
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 15
- 108060008443 TPPP Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 claims abstract description 12
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N BRL-49594 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims abstract description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229960003942 amphotericin B Drugs 0.000 claims abstract description 8
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N Ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 210000002826 Placenta Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N (6R,7R)-7-[(2Z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(methoxyimino)acetamido]-3-{[(2-methyl-5,6-dioxo-1,2,5,6-tetrahydro-1,2,4-triazin-3-yl)sulfanyl]methyl}-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960004755 Ceftriaxone Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960003260 Chlorhexidine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Exidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229940009444 Amphotericin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 8
- MOSCXNXKSOHVSQ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-hydroxybutanoate Chemical compound [Na+].CCC(O)C([O-])=O MOSCXNXKSOHVSQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 abstract description 18
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000123 paper Substances 0.000 abstract description 8
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 abstract description 5
- 239000011088 parchment paper Substances 0.000 abstract description 5
- XYGBKMMCQDZQOZ-UHFFFAOYSA-M sodium;4-hydroxybutanoate Chemical compound [Na+].OCCCC([O-])=O XYGBKMMCQDZQOZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 6
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 4
- 210000001136 Chorion Anatomy 0.000 description 4
- 210000004087 Cornea Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 208000002672 Hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 208000006379 Syphilis Diseases 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000003169 placental Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 2
- 231100000803 sterility Toxicity 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000000795 Conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 206010011013 Corneal erosion Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000002977 Intracellular Fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036650 Metabolic stability Effects 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229940049954 Penicillin Drugs 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal Effects 0.000 description 1
- 230000000141 anti-hypoxic Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 1
- 229960000626 benzylpenicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001082 cryoprotectant Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 201000008325 diseases of cellular proliferation Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 201000002154 pterygium Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для консервации донорской амниотической мембраны, предназначенной для трансплантации при выполнении офтальмохирургических вмешательств.The invention relates to medicine, in particular to ophthalmology, and can be used to preserve a donor amniotic membrane intended for transplantation when performing ophthalmic surgery.
Известен способ консервации донорской амниотической оболочки, полученной после освобождения ткани от сгустков крови и хориона, включающий разделение ее на сегменты 28-30 мм, замораживание при температуре минус 40°С, лиофилизацию до остаточной влажности 2-5%, дальнейшую стерилизацию (γ-излучение в дозе 25 кГр) и упаковывание [Федорова Е.А., Слонимский А.Ю., Батманов Ю.Е. Способ консервации амниотической мембраны // Патент RU 2267922 от 20.01.2006]. Заявленный срок хранения трансплантата 1,5 года. Перед употреблением законсервированную таким образом амниотическую мембрану регидратируют в стерильном физрастворе или растворе антибиотика в течение 40-60 мин. Лиофильная (сублимационная) сушка является одним из методов сохранения нативных свойств биологических материалов. Однако существует мнение, что замораживание биотканей, в частности амниотической мембраны, не желательно. С тем, чтобы избежать заморозки амниона применяют его высушивание над силикагелем. Кроме этого для проведения лиофилизации требуется специальное и дорогостоящее оборудование, а для достаточно продолжительной (40-60 мин) регидратации материала перед его применением используется физраствор, тогда как более физиологичным аналогом последнего является, например, раствор Рингера.A known method of preserving the donor amniotic membrane obtained after the release of tissue from blood clots and chorion, including dividing it into segments of 28-30 mm, freezing at minus 40°C, lyophilization to a residual moisture content of 2-5%, further sterilization (γ-radiation at a dose of 25 kGy) and packaging [Fedorova E.A., Slonimsky A.Yu., Batmanov Yu.E. The method of preservation of the amniotic membrane // Patent RU 2267922 dated 20.01.2006]. The declared shelf life of the transplant is 1.5 years. Before use, the thus preserved amniotic membrane is rehydrated in sterile saline or antibiotic solution for 40-60 minutes. Lyophilic (sublimation) drying is one of the methods for preserving the native properties of biological materials. However, there is an opinion that freezing of biological tissues, in particular the amniotic membrane, is not desirable. In order to avoid freezing of the amnion, it is dried over silica gel. In addition, special and expensive equipment is required for lyophilization, and for a sufficiently long (40-60 min) rehydration of the material before its use, saline is used, while a more physiological analogue of the latter is, for example, Ringer's solution.
Известен метод консервации, включающий очистку плаценты от кровяных сгустков в 0,9% растворе натрия хлорида, отделение амниона от хориона, обработку выделенной амниотической оболочки 0,02% раствором хлоргексидина в течение 10 минут, раствором гентамицина (40 мг/мл) и амфотерицина В (2,5 мг/мл) продолжительностью 10 минут. Трансплантат погружают на 20 мин в глицерол, фиксируют на металлической рамке и сушат над силикагелем в течение 18-24 часов. Хранится такая мембрана в стерильной упаковке при комнатных условиях до 1,5 лет [Милюдин Е.С., Золотарев А.В., Волова Л.Т. Способ консервации амниотической мембраны // Патент RU 2214091 от 20.10.2003]. Данный способ заготовки материала не предполагает его дополнительную стерилизацию, выполнение которой желательно, особенно для предложенных авторами комнатных температурных условий хранения. Кроме этого данный способ консервации биоматериала может быть сопряжен с существенным снижением сохранности клеток амниотической мембраны [Меликова Т.П. Амниотическая мембрана и ее применение в офтальмологии // Oftalmologiya. 2010; 3:115-122].A known conservation method includes cleaning the placenta from blood clots in a 0.9% sodium chloride solution, separating the amnion from the chorion, treating the isolated amniotic membrane with a 0.02% chlorhexidine solution for 10 minutes, a solution of gentamicin (40 mg / ml) and amphotericin B (2.5 mg/ml) for 10 minutes. The graft is immersed in glycerol for 20 minutes, fixed on a metal frame and dried over silica gel for 18-24 hours. Such a membrane is stored in sterile packaging at room conditions for up to 1.5 years [Milyudin E.S., Zolotarev A.V., Volova L.T. The method of preservation of the amniotic membrane // Patent RU 2214091 dated 20.10.2003]. This method of harvesting the material does not imply its additional sterilization, the implementation of which is desirable, especially for the room temperature storage conditions proposed by the authors. In addition, this method of biomaterial conservation can be associated with a significant decrease in the safety of amniotic membrane cells [Melikova T.P. Amniotic membrane and its application in ophthalmology // Oftalmologiya. 2010; 3:115-122].
Наиболее близким аналогом изобретения является метод консервации J. Kim и S. Tseng, при котором плацента очищается, промывается стерильным физраствором, затем в растворе антибиотиков: 100 мг/мл неомицина, 50 мг/мл пенициллина, 50 мг/мл стрептомицина и 2,5 мг/мл амфотерицина. Амнион укладывается на нитроцеллюлозную бумагу, которую разрезают на диски удобного размера. Хранят в среде Игла и глицерина (1:1) при температуре минус 70°С. Срок хранения 2 года [Kim J., Tseng S. Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severly damaged rabbit corneas // Cornea. 1995; 14:473-484]. Низкие температуры являются хорошим вариантом сохранения нативных свойств амниотической мембраны, однако следует отметить, что в данном случае хранение биоткани будет осуществляться в водном растворе, состоящем на 50% из среды Игла и на 50% из глицерина. Температура замерзания такого раствора глицерина составит минус 23°С [Справочник химика 21, https://chem21.info/index/]. При этом амниотическая мембрана, как и водный раствор для ее хранения будут находиться в замороженном состоянии. В последующем перед началом работы с биоматериалом потребуется нежелательный этап его разморозки, что может привести к утрате ряда нативных свойств амниона.The closest analogue of the invention is the preservation method of J. Kim and S. Tseng, in which the placenta is cleaned, washed with sterile saline, then in an antibiotic solution: 100 mg/ml neomycin, 50 mg/ml penicillin, 50 mg/ml streptomycin and 2.5 mg/ml amphotericin. Amnion is placed on nitrocellulose paper, which is cut into discs of a convenient size. Store in Eagle's medium and glycerol (1:1) at minus 70°C. Shelf life 2 years [Kim J., Tseng S. Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severly damaged rabbit corneas // Cornea. 1995; 14:473-484]. Low temperatures are a good option for preserving the native properties of the amniotic membrane, however, it should be noted that in this case, the biological tissue will be stored in an aqueous solution consisting of 50% Eagle's medium and 50% glycerol. The freezing point of such a solution of glycerin will be minus 23°C [Chemist's Handbook 21, https://chem21.info/index/]. In this case, the amniotic membrane, as well as the aqueous solution for its storage, will be in a frozen state. Subsequently, before starting work with the biomaterial, an undesirable stage of its defrosting will be required, which can lead to the loss of a number of native properties of the amnion.
Задачей изобретения является повышение эффективности консервации амниотической мембраны.The objective of the invention is to increase the efficiency of the preservation of the amniotic membrane.
Технический результат - улучшение функционального качества биоматериала за счет сохранения его нативных свойств.EFFECT: improved functional quality of the biomaterial due to preservation of its native properties.
Предлагаемый способ консервации донорской амниотической мембраны выполняют следующим образом. Производят забор фрагмента плаценты в роддоме в стерильных условиях после кесарева сечения у беременных женщин, обследованных на гепатит В и С, ВИЧ и сифилис. Обработку донорской ткани осуществляют в условиях стерильного бокса под ламинарным потоком. В период не более 3-х часов после забора плацентарную ткань отмывают раствором Рингера, производят отделение амниона от хориона. Выделенную амниотическую мембрану отмывают от следов крови раствором Рингера, погружают в раствор Рингера, содержащий натрия оксибутирата 100 мг/мл на 10 минут. Затем помещают на 10 минут в 0,01% раствор хлоргексидина в физрастворе, после на 30 минут в раствор антибиотиков в физрастворе, содержащий 0,25 мг/мл амфотерицина В, 0,1 мг/мл ципрофлоксацина и 0,25 мг/мл цефтриаксона. Далее амниотическую мембрану помещают на 30 мин в стерильный раствор, содержащий глицерин и диметилсульфоксид (ДМСО) в соотношении 4:1, а также натрия оксибутирата 10 мг/мл. После этого мембрану размещают (расправляют) на простерилизованной бумаге для выпекания и после удаления излишков раствора глицерина разрезают вместе с бумагой на диски требуемого размера (например, 20×20 мм). После отделения от бумаги амниотическую мембрану упаковывают во флаконы с раствором, содержащим глицерин с диметилсульфоксид в соотношении 4:1, а также 10 мг/мл натрия оксибутирата. Флаконы с мембраной стерилизуют ионизирующим излучением дозой 1,5 Мрад на установке Со. Выполняют микробиологические исследования готовых образцов материала. Хранение амниотической мембраны осуществляется при температуре минус 12-18°С. Срок хранения консервированной ткани составляет 2 года.The proposed method of preservation of the donor amniotic membrane is performed as follows. A fragment of the placenta is taken in the maternity hospital under sterile conditions after caesarean section in pregnant women examined for hepatitis B and C, HIV and syphilis. The processing of donor tissue is carried out in a sterile box under laminar flow. Within a period of not more than 3 hours after collection, the placental tissue is washed with Ringer's solution, and the amnion is separated from the chorion. The isolated amniotic membrane is washed from traces of blood with Ringer's solution, immersed in Ringer's solution containing sodium hydroxybutyrate 100 mg/ml for 10 minutes. Then placed for 10 minutes in a 0.01% solution of chlorhexidine in saline, then for 30 minutes in a solution of antibiotics in saline containing 0.25 mg/ml amphotericin B, 0.1 mg/ml ciprofloxacin and 0.25 mg/ml ceftriaxone . Next, the amniotic membrane is placed for 30 minutes in a sterile solution containing glycerol and dimethyl sulfoxide (DMSO) in a ratio of 4:1, as well as sodium hydroxybutyrate 10 mg/ml. After that, the membrane is placed (flattened) on sterilized baking paper and, after removing excess glycerol solution, cut together with the paper into disks of the required size (for example, 20×20 mm). After separation from the paper, the amniotic membrane is packaged in vials with a solution containing glycerol with dimethyl sulfoxide in a ratio of 4:1, as well as 10 mg/ml sodium hydroxybutyrate. Vials with a membrane are sterilized with ionizing radiation at a dose of 1.5 Mrad in a Co installation. Perform microbiological studies of finished material samples. Storage of the amniotic membrane is carried out at a temperature of minus 12-18°C. The shelf life of preserved tissue is 2 years.
Существенными отличительными признаками способа являются:The essential distinguishing features of the method are:
- Для отмывания амниотической мембраны используется более физиологичный раствор Рингера, который способен эффективно возмещать потери экстрацеллюлярной, внутриклеточной жидкости и основных электролитов натрия, калия, кальция, хлоридов, в частности в изолированных тканях.- To wash the amniotic membrane, a more physiological Ringer's solution is used, which is able to effectively compensate for the loss of extracellular, intracellular fluid and the main electrolytes of sodium, potassium, calcium, chlorides, in particular in isolated tissues.
- Натрия оксибутират вводится в состав раствора для повышения антигипоксической сопротивляемости и метаболической устойчивости трансплантата. Показано, что сохранение кислорода в донорских тканях является важным аспектом обеспечения их жизнестойкости [Подопригора Р.Н. Методы консервации донорского материала // Вестник ОГУ. дек. 2004; 100-103].- Sodium oxybutyrate is introduced into the solution to increase the antihypoxic resistance and metabolic stability of the graft. It has been shown that the preservation of oxygen in donor tissues is an important aspect of ensuring their viability [Podoprigora R.N. Methods of conservation of donor material // Bulletin of the OSU. dec. 2004; 100-103].
Для обработки материала используют концентрацию хлоргексидина 0,01%; препарат разводится физраствором. При этом удаляются следы кальция нежелательные при дальнейшем использовании цефтриаксона.To process the material, a concentration of chlorhexidine of 0.01% is used; the drug is diluted with saline. This removes traces of calcium that are undesirable with further use of ceftriaxone.
- Используют раствор антибиотиков содержащий 0,25 мг/мл амфотерицина В, 0,1 мг/мл ципрофлоксацина и 0,25 мг/мл цефтриаксона, разведенный физраствором, воздействующий на грамположительную, грамотрицательную, анаэробную патогенную флору, оказывающий фунгицидное действие.- Use an antibiotic solution containing 0.25 mg/ml amphotericin B, 0.1 mg/ml ciprofloxacin and 0.25 mg/ml ceftriaxone, diluted with saline, affecting gram-positive, gram-negative, anaerobic pathogenic flora, having a fungicidal effect.
- Раствор амфотерицина В имеет ярко выраженный желто-оранжевый цвет. Предлагаемая доза (0,25 мг/мл) препарата позволяет сохранить его противогрибковую эффективность и исключить цитотоксическое действие на амнион; при этом достигается полное растворение антибиотика. После завершения обработки последний легко удаляется с поверхности амниотической мембраны, не окрашивая ее в бледно-желтый цвет. Тогда как в более высоких концентрациях растворимость амфотерицина В снижается, вместе с этим препарат заметно окрашивает амниотическую мембрану, придавая ей желтоватый оттенок.- Amphotericin B solution has a pronounced yellow-orange color. The proposed dose (0.25 mg / ml) of the drug allows you to maintain its antifungal efficacy and eliminate the cytotoxic effect on the amnion; in this case, complete dissolution of the antibiotic is achieved. After processing is completed, the latter is easily removed from the surface of the amniotic membrane without staining it in a pale yellow color. While the solubility of amphotericin B decreases at higher concentrations, the drug visibly stains the amniotic membrane, giving it a yellowish tint.
- ДМСО вносится в состав раствора с глицерином в качестве криопротектора для обеспечения жизнеспособности клеток и биоткани. При этом образующийся раствор 75% глицерина имеет температуру замерзания минус 29,8°С, что не приводит к замораживанию, как раствора глицерина, так и биоматериала, который хранится при минус 12 - 18°С.- DMSO is added to the composition of the solution with glycerol as a cryoprotectant to ensure the viability of cells and biological tissue. In this case, the resulting solution of 75% glycerol has a freezing point of minus 29.8°C, which does not lead to freezing of both the glycerol solution and the biomaterial, which is stored at minus 12 - 18°C.
- Нарезка деликатной невысушенной амниотической мембраны имеет определенные сложности: ее необходимо фиксировать на рабочей поверхности, при контакте с которой возможны гибель клеток и вероятность биологического загрязнения биоткани. Для нарезки невысушенной тонкой амниотической мембраны используется простерилизованная бумага для выпекания, в отличие от известного применения нитроцеллюлозной бумаги, работа с которой часто затрудняет отделение трансплантата от ее поверхности. При необходимости (в случае применения другой технологии обработки материала) амнион можно сушить над силикагелем с использованием бумаги для выпекания, избегая способа сушки на металлической рамке.- Cutting a delicate non-dried amniotic membrane has certain difficulties: it must be fixed on a working surface, upon contact with which cell death and the likelihood of biological contamination of biological tissue are possible. To cut the undried thin amniotic membrane, sterilized baking paper is used, in contrast to the known use of nitrocellulose paper, which often makes it difficult to separate the graft from its surface. If necessary (in the case of a different material processing technology), the amnion can be dried over silica gel using baking paper, avoiding the drying method on a metal frame.
Пример 1Example 1
Амниотическая мембрана была законсервирована по предлагаемому способу. Произведен забор фрагмента плаценты в роддоме в стерильных условиях операционной после кесарева сечения у беременной женщины, предварительно обследованной на ВИЧ, гепатит В и С, сифилис. Материал помещали в стерильный контейнер и термосумку, где поддерживалась температура +8+10°С. Через 2 часа после забора в условиях стерильного бокса под ламинарным потоком осуществлена обработка донорской ткани. Плацентарную ткань отмывали раствором Рингера, произвели отделение амниона от хориона. Выделенную амниотическую мембрану отмывали от следов крови раствором Рингера, помещали на 10 минут в оксибутират натрия 100 мг/мл, разведенный раствором Рингера. Затем биоткань переносили на 10 минут в 0,01% хлоргексидин в физрастворе, после на 30 минут в раствор антибиотиков, содержащий 0,25 мг/мл амфотерицина В, 0,1 мг/мл ципрофлоксацина и 0,25 мг/мл цефтриаксона, растворенных в физрастворе. Далее амниотическую мембрану помещали на 30 минут в стерильный раствор, содержащий глицерин и диметилсульфоксид в соотношении 4:1, а также 10 мг/мл натрия оксибутирата. Затем мембрану расправляли на простерилизованной бумаге для выпекания и после удаления излишков раствора глицерина разрезали вместе с бумагой на диски (размером 20×20 мм). После отделения от бумаги амниотическую мембрану упаковывали во флаконы с раствором глицерина с диметилсульфоксид в соотношении 4:1 и 10 мг/мл натрия оксибутирата. Флаконы с амниотической мембраной стерилизовали ионизирующим излучением дозой 1,5 Мрад на установке Со60. Готовые образцы материала (4 флакона) переданы на бактериологический анализ. Получен протокол лабораторных испытаний амниотической мембраны № ПР1030 с результатами микробиологических исследований, подтверждающими ее стерильность.The amniotic membrane was preserved according to the proposed method. A fragment of the placenta was taken in the maternity hospital under sterile operating conditions after a caesarean section in a pregnant woman who had previously been examined for HIV, hepatitis B and C, and syphilis. The material was placed in a sterile container and a thermal bag, where the temperature was maintained at +8+10°C. Donor tissue was treated in a sterile box under laminar flow 2 hours after sampling. The placental tissue was washed with Ringer's solution, the amnion was separated from the chorion. The isolated amniotic membrane was washed from traces of blood with Ringer's solution, placed for 10 minutes in sodium oxybutyrate 100 mg/ml, diluted with Ringer's solution. Then the biological tissue was transferred for 10 minutes to 0.01% chlorhexidine in saline, then for 30 minutes to an antibiotic solution containing 0.25 mg/ml amphotericin B, 0.1 mg/ml ciprofloxacin and 0.25 mg/ml ceftriaxone, dissolved in saline. Next, the amniotic membrane was placed for 30 minutes in a sterile solution containing glycerol and dimethyl sulfoxide in a ratio of 4:1, as well as 10 mg/ml sodium oxybutyrate. Then the membrane was spread on sterilized baking paper and, after removing excess glycerol solution, cut together with the paper into disks (20×20 mm in size). After separation from the paper, the amniotic membrane was packed into vials with a solution of glycerol with dimethyl sulfoxide in a ratio of 4:1 and 10 mg/ml sodium hydroxybutyrate. Vials with an amniotic membrane were sterilized with ionizing radiation at a dose of 1.5 Mrad on a Co 60 unit. Ready material samples (4 vials) were submitted for bacteriological analysis. A protocol for laboratory tests of the amniotic membrane No. PR1030 was received with the results of microbiological studies confirming its sterility.
Законсервированная по предлагаемому способу амниотическая мембрана хранилась в течение 3 недель при температуре минус 18°С. Амниотическая мембрана отмывалась от глицерина раствором Рингера и выдерживалась 5 мин в растворе антибиотика (ципрофлоксацин 0,3%). Больной С, 42 года, диагноз: внутренний птеригиум III степени правого глаза. Острота зрения перед хирургическим вмешательством: 0,6. После удаления новообразования роговой оболочки и конъюнктивы правого глаза была проведена трансплантация амниотической мембраны размером 6×6 мм. Эпителизация амниотической мембраны завершилась на 4 сутки после хирургического вмешательства. Послеоперационный период протекал без осложнений. На 4-й день острота зрения - 0,8 без коррекции. Достигнут хороший косметический результат.Preserved according to the proposed method, the amniotic membrane was stored for 3 weeks at a temperature of minus 18°C. The amniotic membrane was washed from glycerol with Ringer's solution and kept for 5 min in an antibiotic solution (ciprofloxacin 0.3%). Patient C, aged 42, diagnosis: internal pterygium III degree of the right eye. Visual acuity before surgery: 0.6. After removal of the neoplasm of the cornea and conjunctiva of the right eye, a 6×6 mm amniotic membrane was transplanted. Epithelialization of the amniotic membrane was completed on the 4th day after surgery. The postoperative period proceeded without complications. On the 4th day visual acuity - 0.8 without correction. A good cosmetic result was achieved.
Пример 2Example 2
Использовали амниотическую мембрану, законсервированную предлагаемым способом. Амниотическая мембрана хранилась в течение 20 месяцев при температуре минус 18°С. Получен протокол микробиологических исследований (№ ПР574), подтверждающий его стерильность. Амниотическая мембрана отмывалась от глицерина раствором Рингера и выдерживалась в течение 5 мин в растворе антибиотика (ципрофлоксацин 0,3%). Больной Т., 49 лет, поступил с диагнозом: эрозия роговицы левого глаза. Острота зрения: 0,01. Было проведено «биопокрытие» раневого участка амниотической мембраной, размером 11×11 мм, которую укладывали на роговицу и фиксировали непрерывным швом 10.0. Послеоперационный период протекал без каких-либо осложнений. На 6-й день после операции острота зрения составила 0,3. Достигнут удовлетворительный косметический и лечебный результат.Used amniotic membrane preserved by the proposed method. The amniotic membrane was stored for 20 months at minus 18°C. A protocol for microbiological studies (No. PR574) was obtained, confirming its sterility. The amniotic membrane was washed from glycerol with Ringer's solution and kept for 5 min in an antibiotic solution (ciprofloxacin 0.3%). Patient T., aged 49, was admitted with a diagnosis of corneal erosion of the left eye. Visual acuity: 0.01. The wound area was “bio-covered” with an amniotic membrane, 11×11 mm in size, which was placed on the cornea and fixed with a continuous suture 10.0. The postoperative period proceeded without any complications. On the 6th day after surgery, visual acuity was 0.3. A satisfactory cosmetic and therapeutic result was achieved.
Таким образом, применение амниотической мембраны, полученной по предлагаемому способу, позволяет использовать ее в отдаленные сроки после консервации, обеспечивает проведение эффективных хирургических вмешательств с хорошими функциональными результатами за счет сохранения ее нативных свойств.Thus, the use of the amniotic membrane obtained by the proposed method allows its use in the long term after conservation, provides effective surgical interventions with good functional results due to the preservation of its native properties.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2780475C1 true RU2780475C1 (en) | 2022-09-23 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6326019B1 (en) * | 1997-02-28 | 2001-12-04 | Scheffer C. G. Tseng | Grafts made from amniotic membrane; methods of separating, preserving, and using such grafts in surgeries |
| RU2214091C1 (en) * | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Милюдин Евгений Сергеевич | Method for preserving amniotic membrane |
| RU2267922C2 (en) * | 2004-03-17 | 2006-01-20 | Российский государственный медицинский университет | Method for preserving amnion |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6326019B1 (en) * | 1997-02-28 | 2001-12-04 | Scheffer C. G. Tseng | Grafts made from amniotic membrane; methods of separating, preserving, and using such grafts in surgeries |
| RU2214091C1 (en) * | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Милюдин Евгений Сергеевич | Method for preserving amniotic membrane |
| RU2267922C2 (en) * | 2004-03-17 | 2006-01-20 | Российский государственный медицинский университет | Method for preserving amnion |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KIM J., TSENG S. "Transplantation of preserved human amniotic membrane for surface reconstruction in severly damaged rabbit corneas", Cornea, 1995, sept., 14(5), p. 473-484. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3349813B1 (en) | Compositions derived from placenta and methods of producing the same | |
| Kearney | Guidelines on processing and clinical use of skin allografts | |
| US11116871B2 (en) | Compositions derived from placenta and methods of producing the same | |
| RU2524619C2 (en) | Method for making dermal matrix | |
| US11738115B2 (en) | Translucent, dehydrated placental tissue and methods of producing and using the same | |
| EP3003416B1 (en) | Amniotic membrane | |
| JP2017502750A (en) | Cell-free collagen tissue and method for treating artificial valve membrane including cell-free collagen tissue | |
| US20230191001A1 (en) | Amnion tissue grafts and methods of preparing and using same | |
| RU2780475C1 (en) | Method for preserving the amniotic membrane | |
| von Versen-Höynck et al. | Application of sterilised human amnion for reconstruction of the ocular surface | |
| King Jr | The use of preserved ocular tissues for transplantation | |
| US20170224870A1 (en) | Method of packaging amniotic membrane | |
| WO2020097710A1 (en) | Method for obtaining freeze-dried animal skin, freeze-dried animal skin, use thereof and kit | |
| Sataloff et al. | Preservation of otologic homografts | |
| SU125522A1 (en) | Method for restoring a male urethra | |
| RU2267922C2 (en) | Method for preserving amnion | |
| SU1367931A1 (en) | Method of preserving tooth rudiment | |
| WO2024006353A1 (en) | Sterile human placental allografts and methods of making thereof | |
| Withavatpongtorn | Biomechanical and biological properties of cryopreserved canine amniotic membrane | |
| WO2022075477A1 (en) | Method for producing dry decellularized tissue, method for storage pretreatment of decellularized tissue, and dry decellularized tissue | |
| RU2411923C1 (en) | Method of making alloimplant on basis of cartilaginous tissue | |
| RU2045182C1 (en) | Iris preservation method | |
| BR102019023961A2 (en) | process for obtaining lyophilized animal skin, lyophilized animal skin, its use and kit | |
| Marchand | A report on the management of a blood-vessel bank | |
| PL236127B1 (en) | Method of producing medical dressing using pig skin and medical application thereof |