RU2777945C2 - Комбинированные препараты для лечения рака или инфекции - Google Patents
Комбинированные препараты для лечения рака или инфекции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2777945C2 RU2777945C2 RU2017127000A RU2017127000A RU2777945C2 RU 2777945 C2 RU2777945 C2 RU 2777945C2 RU 2017127000 A RU2017127000 A RU 2017127000A RU 2017127000 A RU2017127000 A RU 2017127000A RU 2777945 C2 RU2777945 C2 RU 2777945C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lag
- cancer
- cells
- protein
- derivative
- Prior art date
Links
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 18
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 title abstract description 10
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 title description 39
- 108060004270 LAG3 Proteins 0.000 claims abstract description 246
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims abstract description 173
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims abstract description 173
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 97
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 91
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 claims abstract description 67
- 108010080196 Programmed Cell Death 1 Receptor Proteins 0.000 claims abstract 12
- 102100017213 LAG3 Human genes 0.000 claims description 244
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 121
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 99
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 82
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 63
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 36
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 claims description 27
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 claims description 27
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 claims description 27
- 210000000612 Antigen-Presenting Cells Anatomy 0.000 claims description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 21
- 108010019706 Nivolumab Proteins 0.000 claims description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 11
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 claims description 11
- 108010026276 pembrolizumab Proteins 0.000 claims description 11
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 claims description 11
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 claims description 10
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 10
- 208000002154 Non-Small-Cell Lung Carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- 108010090685 BMS-936559 Proteins 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating Effects 0.000 claims description 8
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 210000001072 Colon Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 claims description 4
- 210000003238 Esophagus Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010017758 Gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010073071 Hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007766 Kaposi Sarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025310 Other lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 229950010773 Pidilizumab Drugs 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009030 carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001413 cellular Effects 0.000 claims description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 108010051812 pidilizumab Proteins 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010000565 Acquired immunodeficiency syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003950 B-Cell Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061590 Blood disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000988 Bone and Bones Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000481 Breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008743 Desmoplastic Small Round Cell Tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 206010064581 Desmoplastic small round cell tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000849 Developmental Bone Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010053717 Fibrous histiocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005017 Glioblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 claims description 2
- 206010024627 Liposarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027191 Meningioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002030 Merkel Cell Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010051747 Multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052399 Neuroendocrine tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000496 Pancreas Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000003925 Pancreatic islet cell tumors Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033963 Parathyroid tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 206010034590 Peripheral nerve sheath tumour malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010034800 Phaeochromocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008938 Rhabdoid Tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073334 Rhabdoid tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 206010072610 Skeletal dysplasia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041823 Squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010042863 Synovial sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008732 Thymoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003932 Urinary Bladder Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010046766 Uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009047 chordoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010240 chromophobe renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003364 extraskeletal myxoid chondrosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 2
- 201000005252 lipomatous cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003211 malignant Effects 0.000 claims description 2
- 201000009020 malignant peripheral nerve sheath tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009251 multiple myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003793 myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims description 2
- 201000005170 papillary thyroid carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002267 posterior uveal melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006402 rhabdoid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009377 thymus cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 102000000034 Programmed Cell Death 1 Receptor Human genes 0.000 claims 11
- 201000005244 lung non-small cell carcinoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000009956 Adenocarcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000001119 Benign Fibrous Histiocytoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000001843 Carotid Body Tumor Diseases 0.000 claims 1
- 206010007690 Carotid body tumour Diseases 0.000 claims 1
- 208000003884 Gestational Trophoblastic Disease Diseases 0.000 claims 1
- 210000002307 Prostate Anatomy 0.000 claims 1
- 210000003741 Urothelium Anatomy 0.000 claims 1
- 201000005216 brain cancer Diseases 0.000 claims 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 claims 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims 1
- 201000011096 spinal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 102100019764 PDCD1 Human genes 0.000 abstract description 139
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 63
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 37
- 230000002195 synergetic Effects 0.000 abstract description 13
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 101000100541 STK36 Proteins 0.000 abstract 1
- 102000027705 human STK36 protein Human genes 0.000 abstract 1
- 101700081293 LMX1A Proteins 0.000 description 136
- 102100016020 IFNG Human genes 0.000 description 76
- 101700086956 IFNG Proteins 0.000 description 76
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 73
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 65
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 45
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 44
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 44
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 44
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 44
- 102100005832 CD69 Human genes 0.000 description 36
- 101700080416 CD69 Proteins 0.000 description 36
- 102100006815 IL2RA Human genes 0.000 description 36
- 101700082799 IL2RA Proteins 0.000 description 36
- 101700015336 ISG20 Proteins 0.000 description 36
- 230000004044 response Effects 0.000 description 36
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 27
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 22
- 102000027675 major histocompatibility complex family Human genes 0.000 description 22
- 108091007937 major histocompatibility complex family Proteins 0.000 description 22
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 21
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 21
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 21
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 20
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 16
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 15
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 15
- 230000035492 administration Effects 0.000 description 15
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 13
- 210000001616 Monocytes Anatomy 0.000 description 13
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 12
- 210000003171 Lymphocytes, Tumor-Infiltrating Anatomy 0.000 description 11
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 238000011068 load Methods 0.000 description 10
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 10
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 10
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 230000002085 persistent Effects 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 9
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 8
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 8
- 102220387255 H4C7 R75A Human genes 0.000 description 8
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 8
- 108009000071 Non-small cell lung cancer Proteins 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 229940022039 Keytruda Drugs 0.000 description 7
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 7
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 7
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 7
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 7
- 229940027941 Immunoglobulin G Drugs 0.000 description 6
- 102000004851 Immunoglobulin G Human genes 0.000 description 6
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 6
- 229940098444 Opdivo Drugs 0.000 description 6
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 210000003162 effector T lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004443 Dendritic Cells Anatomy 0.000 description 5
- 240000003670 Sesamum indicum Species 0.000 description 5
- 230000000996 additive Effects 0.000 description 5
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 5
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 5
- 102100019451 CD80 Human genes 0.000 description 4
- 101700080477 CD80 Proteins 0.000 description 4
- 210000000822 Killer Cells, Natural Anatomy 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 4
- 230000001668 ameliorated Effects 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 4
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 4
- -1 2B4 Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 3
- 206010060945 Bacterial infection Diseases 0.000 description 3
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 3
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102100009534 TNF Human genes 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 3
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000003071 memory T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 3
- 229950002916 Avelumab Drugs 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- 230000036499 Half live Effects 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 2
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010037075 Protozoal infection Diseases 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091008153 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 108010010826 avelumab Proteins 0.000 description 2
- 201000009036 biliary tract cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 2
- 241000432074 Adeno-associated virus Species 0.000 description 1
- 241000505629 Amoebozoa Species 0.000 description 1
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000359271 Besnoitia Species 0.000 description 1
- 230000036868 Blood Concentration Effects 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100014174 CD160 Human genes 0.000 description 1
- 101710039069 CD160 Proteins 0.000 description 1
- 101700033362 CD28 Proteins 0.000 description 1
- 102100019461 CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-Positive T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 101700054183 CTLA4 Proteins 0.000 description 1
- 102100005310 CTLA4 Human genes 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 210000001011 Carotid Body Anatomy 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241001502567 Chikungunya virus Species 0.000 description 1
- 229940038705 Chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000577452 Dicrocoelium Species 0.000 description 1
- 229950009791 Durvalumab Drugs 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000710945 Eastern equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 206010014599 Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000224431 Entamoeba Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N Ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- 102000001398 Granzymes Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzymes Proteins 0.000 description 1
- 101710029866 HLA-DPA1 Proteins 0.000 description 1
- 102100005615 HLA-DQA1 Human genes 0.000 description 1
- 101710031487 HLA-DQA1 Proteins 0.000 description 1
- 101710031278 HLA-DRB3 Proteins 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 229940037467 Helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 208000006454 Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000228402 Histoplasma Species 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701041 Human betaherpesvirus 7 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000701027 Human herpesvirus 6 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000829111 Human polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 101700046422 IFNA Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101710002781 LILRB1 Proteins 0.000 description 1
- 102100004901 LILRB1 Human genes 0.000 description 1
- 101710002779 LILRB3 Proteins 0.000 description 1
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 Lymph Nodes Anatomy 0.000 description 1
- 101710026141 MIH1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 229920002521 Macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108009000215 Metastatic brain tumor Proteins 0.000 description 1
- 206010050513 Metastatic renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 229940010383 Mycobacterium tuberculosis Drugs 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 210000000066 Myeloid Cells Anatomy 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 description 1
- 241001263478 Norovirus Species 0.000 description 1
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 208000008443 Pancreatic Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229940071643 Prefilled Syringe Drugs 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 208000010362 Protozoan Infections Diseases 0.000 description 1
- 229940055023 Pseudomonas aeruginosa Drugs 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 208000006265 Renal Cell Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 241000713124 Rift Valley fever virus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 108060007796 SPATA2 Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039447 Salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 229940007046 Shigella dysenteriae Drugs 0.000 description 1
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 1
- 210000000278 Spinal Cord Anatomy 0.000 description 1
- 241001279361 Stachybotrys Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 240000005147 Syzygium aromaticum Species 0.000 description 1
- 210000001541 Thymus Gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 Thyroid Gland Anatomy 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 210000004291 Uterus Anatomy 0.000 description 1
- 241000726423 Variola major virus Species 0.000 description 1
- 241000519618 Variola minor virus Species 0.000 description 1
- 229940118696 Vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000710951 Western equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 108010072668 atezolizumab Proteins 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000023135 chemokine (C-C motif) ligand 4 production Effects 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic Effects 0.000 description 1
- 238000007822 cytometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000002354 daily Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 108010016436 durvalumab Proteins 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010228 ex vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003260 fluorescence intensity Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000284 histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004046 hyporesponsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 230000002147 killing Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000008443 lung non-squamous non-small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 200000000023 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 231100000812 repeated exposure Toxicity 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 231100000803 sterility Toxicity 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000003442 weekly Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Images
Abstract
Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен комбинированный препарат для лечения рака или улучшения состояния при раке, который содержит растворимый белок LAG-3 или производное белка LAG-3, которое содержит рекомбинантный растворимый человеческий LAG-3Ig слитый белок IMP321, и ингибитор пути белка запрограммированной смерти клетки-1 (PD-1), содержащий анти-PD-1 антитело или анти-PD-L1 антитело. Предложено применение комбинированного препарата для лечения рака или улучшения состояния при раке. Предложенная группа изобретений обеспечивает синергетическую активацию Т-клеток для предотвращения, лечения или улучшения рака. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 19 ил., 27 табл., 13 пр.
Description
Данное изобретение относится к комбинированным препаратам и фармацевтическим композициям, и их применению в качестве лекарственных средств, в частности для лечения рака или инфекции, и к способам лечения рака или инфекции.
После выхода из тимуса интактные Т-клетки распространяются в кровь через лимфатические узлы и отыскивают чужеродные («не свои») антигены, презентированные специфическими антиген-презентирующими клетками (APC), как правило, дендритными клетками. Т-клетки могут распознавать не только патоген-ассоциированные антигены, но также аномально экспрессируемые собственные белки - выделяющие мутированные или трансформированные туморогенные клетки - как «не свои». Если Т-клетки обнаруживают свой специфический антиген в контексте подходящих костимулирующих молекул, клетки активируются и повышающе регулируют активацию и молекулы хоминга. Эти Т-клетки, называемые эффекторные Т-клетки, способны попадать в воспаленные ткани в поисках зараженных или раковых клеток. Среди других функций, эффекторные Т-клетки могут продуцировать воспалительные цитокины и/или цитолитические гранулы, приводя к апоптозу или некрозу инфицированных или опухолевых клеток.
На протяжении всего иммунного ответа локальные и системные понижающе регулирующие силы минимизируют повреждение здоровых клеток и тканей. Они могут включать иммуносупрессивные цитокины, регуляторные Т-клетки (Treg) и передачу отрицательных сигналов из других клеток. Опухолевые антигенспецифические Т-клетки демонстрируют ослабленную эффекторную функцию и истощенный фенотип, характеризующийся сниженной выработкой провоспалительных цитокинов и гипореактивностью на антигенную рестимуляцию. Это опосредуется клеточными внешними механизмами, такими как регуляторные Т-клетки (Treg), и клеточными внутренними механизмами, такими как ингибирующие молекулы, которые повышающе регулируются в истощенных инфильтрирующих опухоль лимфоцитах (TIL).
Пути иммунных контрольных точек сильно понижающе регулируют активацию Т-клеток с целью удержания под контролем начинающейся Т-клеточной иммунной реакции и уменьшения вероятности иммунной атаки против нормальных тканей. Однако во время опухолеобразования раковые клетки могут задействовать эти коингибирующие пути, чтобы противостоять обнаружению или избежать элиминации адаптивной иммунной системой. Белок запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1) является важнейшей молекулой контрольной точки, которая экспрессируется Т-клетками при активации. Как полагают, путь контрольной точки PD-1 действует в первую очередь в периферических тканях для подавления происходящих иммунных ответов и/или предупреждения повреждения собственных тканей. Помимо Т-клеток, PD-1 экспрессируется В-клетками, клетками натуральными киллерами (NK), дендритными клетками и активированными моноцитами. Лиганды PD-1 - которые, среди других, включают PD-L1 и PD-L2 - экспрессируются макрофагами и моноцитами, и они могут быть индуцированы в ряде типов клеток в воспалительной среде.
Способность неиммунных клеток экспрессировать лиганды для PD-1, в первую очередь PD-L1, используется опухолями как один из способов избежать иммунной атаки. Опухолевые клетки также могут понижающе регулировать экспрессию антигена во избежание обнаружения. В дополнение, продукция иммуносупрессивных медиаторов и удерживание Treg и иммуносупрессивных клеток в микроокружении опухоли может подавлять противоопухолевые иммунные ответы.
Фигура 1 (взятая у Harvey, Clinical Pharmacology & Therapeutics, 2014, Vol. 96(2), pages 214-223) показывает роль пути PD-1 в ускользании от противоопухолевого иммунологического надзора и механизм действия блокады пути PD-1: (a) PD-1 при активации Т-клеток. Т-клетки активируются посредством (i) связывания MHC плюс пептид на APC с TCR и затем (ii) связывания CD80/86 APC с CD28 T-клеток. У больных раком опухолевые клетки также служат в качестве APC. При активации Т-клеток индуцируется экспрессия PD-1; (b) PD-1 при истощении T-клеток. В ситуациях хронической инфекции или постоянной стимуляции PD-L1 посылает сигналы через PD-1 T-клетки для «выключения» Т-клеток с целью минимизировать повреждение здоровой ткани (блокируется сигнальный путь активации). Опухолевые клетки могут повышающее регулировать PD-L1 с целью «выключения» Т-клеток, которые могут их разрушить. (c) Блокирование сигнального пути PD-1/PD-L1 позволяет Т-клеткам сохранять их эффекторные функции. У больных раком активированные опухолеспецифические Т-клетки могут убивать опухолевые клетки и секретировать цитокины, которые активируют /рекрутируют другие иммунные клетки для участия в противоопухолевом ответе.
Клонирование PD-1 описано у Ishida, et al. (The EMBO Journal (1992), vol.11(11), p.3887-3895). Последовательность кДНК человеческого PD-1 зарегистрирована под номером доступа GenBank NM_005018. Последовательность кДНК человеческого PD-L1 дана под номером доступа GenBank AF233516, а последовательность кДНК человеческого PD-L2 дана под номером доступа GenBank NM_025239.
В сентябре 2014 года Администрация США по пищевым продуктам и лекарственным веществам (FDA) выдала ускоренное одобрение для кейтруды (пембролизумаб) для лечения больных с прогрессирующей или нерезектабельной меланомой, которые больше не реагируют на другие лекарственные препараты. Кейтруда (Merck & Co.) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG4 против PD-1. Оно содержит последовательности вариабельного участка очень высокоаффинного мышиного антитела к PD-1 человека, привитого в человеческий иммуноглобулин IgG4, с изменениями для повышения стабильности. Кейтруда блокирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2.
В декабре 2014 года FDA США также дала ускоренное одобрение для Опдиво (ниволумаб), нового лечения больных с нерезектабельной или метастатической меланомой, которые больше не реагируют на другие лекарственные препараты. Опдиво (Bristol-Myers Squibb) представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело IgG4 к PD-1, которое блокирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2.
Ниволумаб подвергли самой глубокой клинической оценке при раке легкого среди ингибиторов пути PD-1. Очевидность действия как в виде монотерапии при плоскоклеточном и неплоскоклеточном немелкоклеточном раке легких (NSCLC), так и в комбинации с традиционной химиотерапией продемонстрирована у больных NSCLC. Пембролизумаб оценивали в продолжающихся клинических испытаниях у больных NSCLC (NCT01295827).
Ряд других перспективных агентов, нацеленных на путь PD-1 (ингибиторы пути PD-1) находятся в клинической разработке (см. таблицу 1.1 ниже):
Таблица 1.1. Ингибиторы пути PD-1 в клинической разработке, кроме пембролизумаба и ниволумаба (взято в таблице 1 Harvey, Clinical Pharmacology & Therapeutics, 2014, Vol. 96(2), pages 214-223)
Название соединения | Описание молекулы | Механизм действия | Компания |
AMP-224 | Рекомбинантный слитый белок: внеклеточный домен PD-L2 и Fc-область человеческого IgG | связывает PD-1; истощение высокоэкспрессирующих PD-1 Т-клеток (истощенные эффекторные клетки) | Amplimmune/ GlaxoSmithKline |
BMS-936559 | Высокоаффинное, полностью человеческое, PD-L1-специфичное, моноклональное антитело IgG4 | Блокирует связывание PD-L1 с PD-1 и CD80 | Bristol-Myers Squibb |
MEDI4736 | Полностью человеческое, высокоаффинное моноклональное антитело анти-PD-L1 | Блокирует связывание PD-L1 с PD-1 и CD80 | MedImmune |
MPDL3280A | Человеческое анти-PD-L1 моноклональное антитело, содержащее сконструированный Fc-домен IgG для предотвращения ADCC | Блокирует связывание PD-L1 с PD-1 и CD80 | Roche/Genentech |
Пидилизумаб | Гуманизированное анти-PD-1 моноклональное антитело IgG1 | Блокирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2 | CureTech/Teva |
ADCC, антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность; IgG, иммуноглобулин G; PD-1, запрограммированной смерти-1; PD-L1, лиганд 1 PD.
Дополнительным ингибитором пути PD-1 в клинической разработке является Авелумаб (также известный как MSB0010718C), полностью человеческое анти-PD-L1 моноклональное антитело IgG1, совместно разрабатываемый Merck KGaA и Pfizer.
Несмотря на недавнее одобрение FDA Кейтруды и Опдиво для лечения прогрессирующей меланомы и многообещающие результаты против NSCLC в клинических испытаниях от агентов, нацеленных на путь PD-1, остается потребность в предоставлении более эффективных видов лечения рака, в предоставлении видов лечения, эффективных для более широкого количества больных раком, в предоставлении эффективных видов лечения других видов рака и в предоставлении эффективных видов лечения рака с уменьшенными побочными эффектами.
Ген активации лимфоцитов 3 (LAG-3) представляет собой мембранный белок гомолога CD4 типа I с четырьмя внеклеточными доменами суперсемейства иммуноглобулинов. Подобно CD4, LAG-3 образует олигомеры на поверхностях Т-клеток и связывается с молекулами MHC класса II на антиген-презентирующих клетках (APC), но со значительно большей аффинностью, чем CD4. LAG-3 экспрессируется на активированных T-лимфоцитах CD4+ и CD8+, где он связывается с комплексом CD3/рецептор Т-клетки на поверхности клетки и понижающе регулирует передачу сигнала. Как следствие, он понижающе регулирует пролиферацию, функцию и гомеостаз T-клеток. LAG-3 повышающе регулируется на истощенных Т-клетках по сравнению с эффекторными или Т-клетками памяти. LAG-3 также повышающе регулируется на инфильтрирующих опухоли лимфоцитах (TIL), и блокада LAG-3 с применением анти-LAG-3 антител может усиливать противоопухолевые T-клеточные ответы.
Blackburn et al (Nat Immunol. 2009; 10(1): 29-37) описывают корегулирование истощения T-клеток CD8+ во время хронической вирусной инфекции многими ингибирующими рецепторами. Используя мышиную модель вируса хронического лимфоцитарного хориоменингита (LCMV), авторы продемонстрировали, что истощенные антигенспецифические Т-клетки CD8+ повышали экспрессию вплоть до семи ингибирующих рецепторов (PD-1, LAG3, 2B4, CD160, CTLA-4, PIR-B и GP49) по сравнению с клетками памяти или интактными Т-клетками CD8+. Коэкспрессия множественных отдельных ингибирующих рецепторов была связана с более значительным истощением T-клеток и более серьезной инфекцией. Блокада T-клеточных ингибирующих рецепторов PD-1 и LAG-3 (с применением анти-PD-L1 и анти-LAG-3 антител) улучшала Т-клеточные ответы и снижала вирусную нагрузку in vivo.
Woo et al (Cancer Research 2011; 72(4): 917-927) описывают коэкспрессию PD-1 и LAG-3 на инфильтрирующих опухоль Т-клетках CD4+ и CD8+ в трансплантируемых опухолях. Двойное лечение антителами анти-LAG-3/анти-PD-1 излечило большинство мышей с развившимися опухолями, которые были большей частью резистентны к лечению единственным антителом.
На основании иммуномодулирующей роли LAG-3 в функции T-клеток при хронических инфекциях и раке, прогнозируемый механизм действия для LAG-3-специфичных моноклональных антител состоит в ингибировании отрицательной регуляции опухолеспецифических эффекторных Т-клеток.
LAG-3 также кодирует альтернативный вариант сплайсинга, который транслируется в растворимую форму LAG-3 (sLAG-3). В виде растворимой молекулы, LAG-3 активирует антиген-презентирующие клетки (APC) посредством передачи сигналов MHC класса II, приводя к увеличенным ответам антигенспецифических T-клеток in vivo (Triebel, Trends Immunol., 2003, 24: 619-622).
Основной противоопухолевый иммунный ответ опосредован через активацию цитотоксических (Tc1) Т-клеток CD8 типа 1, NK-клеток и моноцитов/макрофагов. В кратковременных анализах ex vivo растворимая форма белка LAG-3 (IMP321) индуцирует соответствующий ответ цитотоксического типа в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC) (Brignone et al, Journal of Immunology, 2007, 179: 4202-4211). IMP321 связывается с меньшей частью клеток MHC класса II+ в PBMC, включая все миелоидные дендритные клетки, и с небольшой фракцией моноцитов. Через четыре часа после добавления IMP321 PBMC данные миелоидные клетки продуцируют TNF-α и CCL4. Через 18 часов 1% Т-клеток CD8+ и 3,7% NK-клеток продуцируют цитокины Tc1, такие как IFN-α и/или TNF-α. Ранняя активация APC посредством IMP321 необходима для данной активации Tc1-типа, поскольку чистые отсортированные Т-клетки CD8+ не могут быть активированы IMP321. Только «обученные» антигеном, полностью дифференцированные Т-клетки CD8 гранзим+ (эффекторные и эффекторные клетки памяти, но не интактные или центральные Т-клетки памяти) индуцируются IMP321 для полной активации Tc1.
В настоящее время установлено, что ингибитор пути PD-1 (антитело анти-PD-1 или антитело анти-PD-L1) и растворимое производное LAG-3 (IMP321), действующее как активатор APC, вместе синергетически активируют Т-клетки (в частности, Т-клетки CD8+) in vitro.
Данная синергетическая активация Т-клеткой является неожиданной. При двухкомпонентном лечении антителами анти-LAG-3/анти-PD-1, описанном Woo et al (supra), антитело анти-LAG-3, как ожидается, подавляет отрицательную регуляцию опухолеспецифических эффекторных Т-клеток посредством LAG-3, тогда как растворимое производное LAG-3 (IMP321), как ожидается, действует через иной механизм, такой как активатор APC.
Согласно изобретению, предоставлен комбинированный препарат, который содержит: (a) белок LAG-3 или его производное, которое способно связываться с молекулами MHC класса II; и (b) ингибитор пути PD-1.
Термин «комбинированный препарат», как используется в данной заявке, относится к «набору частей» в том смысле, что компоненты (a) и (b) комбинации, как определено выше, можно дозировать независимо или посредством использования различных комбинированных препаратов с различными количествами компонентов (a) и (b) комбинации. Компоненты можно вводить одновременно или друг за другом. Если компоненты вводят друг за другом, предпочтительно промежуток времени между введениями выбирают такой, чтобы терапевтический эффект комбинированного использования компонентов был больше, чем эффект, который мог бы быть получен посредством применения только какого-либо одного из компонентов (a) и (b) комбинации.
Компоненты комбинированного препарата могут присутствовать в одной комбинированной стандартной лекарственной форме, или в виде первой стандартной лекарственной формы компонента (a) и отдельной второй стандартной лекарственной формы компонента (b). Соотношение общих количеств компонента (a) комбинации и компонента (b) комбинации, подлежащих введению в комбинированном препарате, может варьировать, например, чтобы справиться с потребностями субпопуляции больных, подлежащих лечению, или с потребностями отдельного больного, которые могут быть обусловлены, например, конкретных заболеванием, возрастом, полом или массой тела больного.
Предпочтительно, существует по меньшей мере одно благотворное действие, например, улучшение действия ингибитора пути PD-1, или улучшение действия LAG-3 или его производного, или взаимное улучшение действия компонентов (a) и (b) комбинации, например, более чем аддитивное действие, дополнительные преимущественные действия, меньшие побочные эффекты, меньшая токсичность или комбинированный терапевтический эффект по сравнению с эффективной дозой одного или обоих компонентов (a) и (b) комбинации, и весьма предпочтительно, синергизм компонентов (a) и (b) комбинации.
Комбинированный препарат изобретения может быть предоставлен в виде фармацевтического комбинированного препарата для введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Вместе с фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем необязательно может быть предоставлен белок LAG-3 или его производное, и/или вместе с фармацевтически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем необязательно может быть предоставлен ингибитор пути PD-1.
LAG-3 или его производное может присутствовать в дозе, которая представляет собой молярный эквивалент, составляющий 0,25-30 мг, 1-30 мг или 6-30 мг производного LAG-3, LAG-3Ig слитого белка IMP321. Основываясь на результатах фармакокинетических данных, полученных у пациентов с метастатическим почечно-клеточным раком, было показано, что дозы 6-30 мг на подкожную (s.c.) инъекцию IMP321 являются безопасными и предоставляют приемлемое системное воздействие. Концентрация в крови IMP321, превышающая 1 нг/мл в течение по меньшей мере 24 часов после s.c. инъекции, получена у больных, которым инъецировали дозы IMP321 более 6 мг.
Комбинированный препарат изобретения может содержать множество доз белка LAG-3 или его производного.
Ингибитор пути PD-1 может представлять собой агент, который ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В частности, агент может ингибировать связывание человеческого PD-1 с человеческим PD-L1 и/или человеческим PD-L2. Агент может ингибировать связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2 по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80% или 90%. Приемлемые анализы для определения связывания PD-1 с PD-L1 или PD-L2, посредством анализа с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR) или анализ методом проточной цитометрии описаны у Ghiotto et al (Int. Immunol. Aug 2010; 22(8): 651-660). Агент может ингибировать связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2, например, посредством связывания с PD-1, с PD-L1 или с PD-L2. Агент может представлять собой антитело, подходящее моноклональное антитело, такое как человеческое или гуманизированное моноклональное антитело. Агент может представлять собой фрагмент или производное антитела, которое сохраняет способность ингибировать связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2.
Примеры антител анти-PD-1, пригодных для применения согласно изобретению, включают: пембролизумаб (MK-3475), гуманизированное моноклональное антитело IgG4; Ниволумаб, полностью человеческое моноклональное антитело IgG4; Пидилизумаб (CT-011), гуманизированное IgG1 моноклональное антитело. Примером ингибитора пути PD-1, который связывается с PD-1, но не является антителом, является AMP-224. AMP-224 представляет собой рекомбинантный слитый белок внеклеточного домена PD-L2 и Fc-участок человеческого IgG. AMP-224 вызывает истощение Т-клеток, высоко экспрессирующих PD-1. Примеры анти-PD-L1 антител, пригодных для применения согласно изобретению, включают: BMS-936559, полностью человеческое IgG4 моноклональное антитело; MEDI4736 (Durvalumab), полностью человеческое моноклональное антитело; MPDL3280A, человеческое моноклональное антитело, содержащее Fc-домен сконструированного IgG для предотвращения ADCC; Авелумаб (также известный как MSB0010718C), полностью человеческое анти-PD-L1 IgG1 моноклональное антитело.
Доза ингибитора пути PD-1 будет зависеть от конкретного используемого ингибитора пути PD-1. В целом, обычно назначаемая доза ингибитора пути PD-1 для больного человека может составлять от 0,1 до 10 мг/кг, например, от 0,1 до 1 мг/кг или от 1 до 10 мг/кг. Термин «обычно назначаемая доза» используется в данной заявке для включения дозы, которая является такой же, как доза или в пределах диапазона доз, которая является безопасной и терапевтически эффективной для введения субъекту (соответственно, субъекту человеку) в виде монотерапии, или которая одобрена соответствующим регулирующим органом для введения субъекту (соответственно, субъекту человеку) в виде монотерапии. Примеры обычно назначаемых человеку доз известных ингибиторов пути PD-1 при использовании в виде монотерапии включают:
Пембролизумаб (MK-3475): 2-10 мг/кг каждые две или три недели. Например, FDA США одобрила введение 2 мг/кг Кейтруды (пембролизумаб) в виде внутривенной инфузии в течение 30 минут каждые 3 недели;
Ниволумаб: 0,1-10 мг/кг каждые две недели. Например, FDA США одобрила введение 3 мг/кг Опдиво (ниволумаб) в виде внутривенной инфузии в течение 60 минут каждые 2 недели;
BMS-936559: 0,3-10 мг/кг каждые две недели.
Ингибитор пути PD-1 можно вводить любым пригодным путем, например, парентерально (включая подкожную, внутривенную или внутримышечную инъекцию). Ингибиторы пути PD-1, одобренные или находящиеся в разработке в настоящее время, вводят в виде внутривенной инфузии.
Комбинированный препарат изобретения может включать множество доз ингибитора пути PD-1.
Белок LAG-3 может представлять собой выделенный природный или рекомбинантный белок LAG-3. Белок LAG-3 может включать аминокислотную последовательность белка LAG-3 от любых пригодных видов, таких как белок LAG-3 мышей и приматов, но предпочтительно человеческий белок LAG-3. Аминокислотная последовательность человеческого и мышиного белка LAG-3 представлена на Фигуре 1 у Huard et al (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 11: 5744-5749, 1997). Последовательность человеческого белка LAG-3 повторена на Фигуре 15 ниже (SEQ ID NO: 1). Аминокислотные последовательности четырех внеклеточных доменов суперсемейства Ig (D1, D2, D3, и D4) человеческого LAG-3 также определены на Фигуре 1 у Huard et al., с аминокислотными остатками: 1-149 (D1); 150-239 (D2); 240-330 (D3); и 331-412 (D4).
Производные белка LAG-3 включают растворимые фрагменты, варианты или мутанты белка LAG-3, которые способны связываться с молекулами MHC класса II. Известно, что некоторые производные белка LAG-3 способны связываться с молекулами MHC класса II. Многие примеры таких производных описаны у Huard et al (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 11: 5744-5749, 1997). Данный документ описывает характеристики сайта связывания MHC класса II на белке LAG-3. Описаны способы получения мутантов LAG-3, а также количественный анализ клеточной адгезии для определения способности мутантов LAG-3 связывать позитивные клетки Дауди класса II. Было определено связывание некоторых различных мутантов LAG-3 с молекулами MHC класса II. Некоторые мутации были способны снижать связывание класса II, тогда как другие мутации повышали аффинность LAG-3 для молекул класса II. Многие из остатков, важных для связывания белков MHC класса II, собраны в основе большой внепетлевой структуры домена D1 LAG-3 из 30 аминокислот. Аминокислотная последовательность внепетлевой структуры домена D1 человеческого белка LAG-3 представляет собой GPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRY (SEQ ID NO: 2), подчеркнутая последовательность на Фигуре 15.
Производное белка LAG-3 может содержать внепетлевую последовательность из 30 аминокислот домена D1 человеческого LAG-3 или вариант такой последовательности с одной или более консервативными аминокислотными заменами. Вариант может содержать аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 70%, 80%, 90% или 95% идентичность аминокислот с 30 аминокислотами внепетлевой последовательности домена D1 человеческого LAG-3.
Производное белка LAG-3 может содержать аминокислотную последовательность домена D1, и необязательно домена D2, белка LAG-3, предпочтительно человеческого белка LAG-3.
Производное белка LAG-3 может содержать аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 70%, 80%, 90% или 95% идентичность аминокислот с доменом D1, или с доменом D1 и D2, белка LAG-3, предпочтительно человеческого белка LAG-3.
Производное белка LAG-3 может содержать аминокислотную последовательность доменов D1, D2, D3 и необязательно D4, белка LAG-3, предпочтительно человеческого белка LAG-3.
Производное белка LAG-3 может содержать аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 70%, 80%, 90% или 95% идентичность аминокислот с доменом D1, D2 и D3 или с доменом D1, D2, D3 и D4, белка LAG-3, предпочтительно человеческого LAG-3.
Идентичность последовательностей между аминокислотными последовательностями можно определить посредством сравнения выравнивания последовательностей. Когда эквивалентная позиция в сравниваемых последовательностях занята одной и той же аминокислотой, тогда молекулы в той позиции являются идентичными. Оценка выравнивания в процентах от идентичности является функцией количества идентичных аминокислот в позициях, общих для сравниваемых последовательностей. При сравнении последовательностей оптимальные выравнивания могут потребовать, чтобы гэпы, вводимые в одну или более последовательностей, учитывали возможные вставки и делеции в последовательностях. В способах сравнения последовательностей можно использовать штраф за гэпы, так что для одинакового числа идентичных молекул в сравниваемых последовательностях выравнивание последовательности с как можно меньшим числом пробелов, отражающее более высокую связанность между двумя сравниваемыми последовательностями, будет получать более высокую оценку, чем выравнивание с множеством гэпов. Вычисление максимального процента идентичности предполагает получение оптимального выравнивания с учетом штрафов за гэпы.
Пригодные компьютерные программы для проведения сравнения последовательностей широко доступны в коммерческом и государственном секторе. Примеры включают MatGat (Campanella et al., 2003, BMC Bioinformatics 4: 29; программу, доступную на http://bitincka.com/ledion/matgat), Gap (Needleman & Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453), FASTA (Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410; программу, доступную на http://www.ebi.ac.uk/fasta), Clustal W 2.0 и X 2.0 (Larkin et al., 2007, Bioinformatics 23: 2947-2948; программу, доступную на http://www.ebi.ac.uk/tools/clustalw2) и EMBOSS Pairwise Alignment Algorithms (Needleman & Wunsch, 1970, supra; Kruskal, 1983, В: Time warps, string edits и macromolecules: the theory и practice sequence comparison, Sankoff & Kruskal (eds), pp 1-44, Addison Wesley; программ, доступных на http://www.ebi.ac.uk/tools/emboss/align). Все программы можно запускать с использованием параметров по умолчанию.
Например, сравнение последовательностей может быть проведено с использованием метода «иглы» EMBOSS Pairwise Alignment Algorithms, который определяет оптимальное выравнивание (включая гэпы) двух последовательностей при рассмотрении по всей их длине и предоставляет процентную оценку идентичности. Параметры по умолчанию для сравнения последовательностей аминокислот (опция «Protein Molecule») могут представлять собой Штраф за продолжение гэпа: 0.5, Штраф за открытие гэпа: 10.0, Матрица: Blosum 62.
Сравнение последовательностей может выполняться по всей длине эталонной последовательности.
Производное белка LAG-3 может быть слито с аминокислотной последовательностью Fc иммуноглобулина, предпочтительно аминокислотной последовательностью Fc человеческого IgG1, необязательно посредством линкерной аминокислотной последовательности.
Способность производного белка LAG-3 связываться с молекулами MHC класса II можно определить с применением количественного анализа клеточной адгезии, как описано у Huard et al (supra). Аффинность производного белка LAG-3 для молекул MHC класса II может составлять по меньшей мере 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% аффинности человеческого белка LAG-3 для молекул класса II. Предпочтительно аффинность производного белка LAG-3 для молекул MHC класса II составляет по меньшей мере 50% аффинности человеческого белка LAG-3 для молекул класса II.
Примеры пригодных производных белка LAG-3, которые способны связываться с молекулами MHC класса II, включают производные, в том числе:
аминокислотные остатки с 23 по 448 последовательности человеческого LAG-3;
аминокислотную последовательность доменов D1 и D2 LAG-3;
аминокислотную последовательность доменов D1 и D2 LAG-3 с замещением аминокислот в одной или более из следующих позиций: позиция 73, где ARG замещен GLU; позиция 75, где ARG замещен ALA или GLU; позиция 76, где ARG замещен GLU; позиция 30, где ASP замещен ALA; позиция 56, где HIS замещен ALA; позиция 77, где TYR замещен PHE; позиция 88, где ARG замещен ALA; позиция 103, где ARG замещен ALA; позиция 109, где ASP замещен GLU; позиция 115, где ARG замещен ALA;
аминокислотную последовательность домена D1 LAG-3 с делецией аминокислотных остатков с 54 по 66;
рекомбинантный растворимый человеческий слитый белок LAG-3Ig (IMP321) -димер 200 кДа, продуцируемый в клетках яичников китайского хомячка, трансфицированных плазмидой, кодирующей внеклеточный домен hLAG-3, слитый с Fc человеческого IgG1. Последовательность IMP321 дана в SEQ ID NO: 17 US 2011/0008331.
Согласно изобретению, также предоставлена фармацевтическая композиция, которая содержит (a) белок LAG-3 или его производное, который способен связываться с молекулами MHC класса II; (b) ингибитор пути PD-1; и (c) фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.
Согласно изобретению, дополнительно предоставлен комбинированный препарат или фармацевтическая композиция изобретения для применения в качестве лекарственного средства.
Изобретение также предоставляет комбинированный препарат или фармацевтическую композицию изобретения для предотвращения, лечения или улучшения рака.
Дополнительно согласно изобретению предоставлено применение комбинированного препарата или фармацевтической композиции изобретения в производстве лекарственного средства для предотвращения, лечения или улучшения рака.
Также предоставлен согласно изобретению способ предотвращения, лечения или улучшения рака, который включает введение белка LAG-3 или его производного, который способен связываться с молекулами MHC класса II, и ингибитор пути PD-1, субъекту, нуждающемуся в таком предотвращении, лечении или улучшении.
Авторы изобретения принимают во внимание, что комбинированные препараты и композиции изобретения также можно применять для предотвращения, лечения или улучшения инфекции, в частности хронической или персистирующей инфекции.
При острой инфекции активированные патогенспецифические цитотоксические CD8 T-лимфоциты (CTL) пролиферируют и приобретают эффекторные функции, такие как продукция цитокинов и цитотоксические свойства, которые позволяют им эффективно устранять инфекцию. После устранения остается небольшой пул патогенспецифических Т-клеток памяти, которые обладают способностью очень быстро реактивироваться и приобретать их уничтожающие функции после повторного воздействия того же патогена. Однако, во время хронической инфекции этого не происходит, поскольку патогенспецифические CTL, как обнаружено, функционально неполноценны и не способны элиминировать инфекцию. Эти истощенные CTL определяют посредством их нарушенной пролиферативной активности, продукции цитокинов и потери цитотоксической способности (см. Фигуру 1(b) и обзор Hofmeyer et al., Journal of Biomedicine и Biotechnology, Volume 2011, Article ID 451694).
Данный феномен был первоначально определен с использованием общепринятой мышиной модели хронической вирусной инфекции у мышей, вируса лимфоцитарного хориоменингита (LCMV) (Zajac, et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 188, no. 12, pp. 2205-2213, 1998; Gallimore, et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 187, no. 9, pp. 1383-1393, 1998.). Штамм Armstrong LCMV вызывает острую инфекцию, которая устраняется иммунной системой, генерирующей стойкую память CTL. С другой стороны, штамм Клон 13 LCMV создает хроническую инфекцию у мышей, которая приводит CTL в состояние истощения и не способна устранять инфекцию. Дополнительно, по сравнению с нормальными Т-клетками, истощенные CTL имеют метаболический дефицит и измененную экспрессию генов, участвующих в хемотаксисе, адгезии и миграции (Wherry, et al., Immunity, vol. 27, no. 4, pp. 670-684, 2007).
В исследовании, проведенном с целью выявления механизмов, приводящих к истощению, генетический профиль истощенных CTL от хронической инфекции LMCV сравнивали с генетическим профилем функциональных CTL, реагирующих на острую инфекцию LCMV (Barber, et al., Nature, vol. 439, no. 7077, pp. 682-687, 2006). Было обнаружено, что истощенные CTL имеют значительную сверхэкспрессию PD-1, тогда как функциональные LCMV-специфичные CTL не имели ощутимой экспрессии PD-1. Было обнаружено, что экспрессия PD-1 коррелирует с определенным функциональным нарушением, наблюдаемым в истощенных Т-клетках и, в свою очередь, с более высокой вирусной нагрузкой. Блокирование пути PD-1/PD-L1 антитело анти-PD-L1м у хронически инфицированных мышей приводило к усиленному ответу CTL, который вызывает снижение вирусной нагрузки. Экспрессия PD-1 истощенными CTL зависит от персистирующей антигенспецифической стимуляции, поскольку потеря презентации специфического эпитопа при хронической инфекции приводит к функциональному восстановлению и снижению экспрессии PD-1 на эпитопспецифических CTL (Blattman, et al., Journal of Virology, vol. 83, no. 9, pp. 4386-4394, 2009). Персистирующая антигенная стимуляция при хронической вирусной инфекции имеет прогрессирующее влияние на потерю функции CTL и коррелированное увеличение экспрессии PD-1, что означает, что более истощенные CTL (PD-1hi) менее восприимчивы к функциональному спасению посредством блокады PD-1, нежели другие (PD-1int) (Blackburn, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, vol. 105, no. 39, pp. 15016-15021, 2008).
Согласно изобретению, дополнительно предоставлен комбинированный препарат или фармацевтическая композиция изобретения для применения при предотвращении, лечении или улучшении инфекции.
Также предоставлено согласно изобретению применение комбинированного препарата или фармацевтической композиции изобретения в производстве лекарственного средства для предотвращения, лечения или улучшения инфекции.
Также согласно изобретению предоставлен способ предотвращения, лечения или улучшения инфекции, который включает введение белка LAG-3 или его производного, которое способно связываться с молекулами MHC класса II, и ингибитор пути PD-1, субъекту, нуждающемуся в таком предотвращении, лечении или улучшении.
В конкретных вариантах осуществления инфекция представляет собой хроническую или персистирующую инфекцию. Термин «хроническая или персистирующая инфекция» используется в данной заявке для ссылки на инфицирование патогеном, который индуцирует классический ответ CTL у инфицированного субъекта, но инфекция не устраняется, приводя к присутствию истощенных PD-1-экспрессирующих, патогенспецифических CTL с нарушенной способностью к пролиферации, выработке цитокинов и потере цитотоксических свойств.
Примеры инфекций, которые можно лечить согласно изобретению, включают вирусные, бактериальные, грибковые или протозойные инфекции, особенно хронические или персистирующие вирусные, бактериальные, грибковые или протозойные инфекции.
Вирусная инфекция может быть вызвана, например, аденовирусом, аденоассоциированным вирусом, вирусом В (macacine herpesvirus I), вирусом ВК, буньявирусом, вирусом чикунгунья, вирусом Коксаки, коронавирусом, цитомегаловирусом, вирусом восточного лошадиного энцефалита, вирусом Эбола, энтеровирусом, вирусом Эпштейна-Барр, хантавирусом, вирусом гепатита А, вирусом гепатита В, вирусом гепатита С, вирусом гепатита D, вирусом гепатита Е, вирусом герпеса, вирусом простого герпеса 1, вирусом простого герпеса 2, пенящимся вирусом человека, вирусом герпеса человека 3, вирусом герпеса человека 5, вирусом герпеса человека 6, вирусом герпеса человека 7, вирусом иммунодефицита человека, папилломавирусом человека, β-лимфотропным вирусом человека, вирусом человеческого Т-клеточного лейкоза I, вирусом человеческого Т-клеточного лейкоза II, вирусом гриппа, вирусом Джона Каннингема, JEV, герпесвирусом, ассоциированным с саркомой Капоши, вирусом Ласса, вирусом лимфоцитарного хориоменингита, вирусом Марбурга, вирусом кори, вирусом эпидемического паротита, вирусом Нипах, норовирусом, вирусом Норфолк, ортореовирусом, вирусом парагриппа, парвовирусом, полиовирусом, вирусом бешенства, реовирусом, респираторно-синцитиальным вирусом, риновирусом, вирусом лихорадки Рифт-Валли, ротавирусом, вирусом краснухи, вирусом натуральной оспы, вирусом энцефалита Сент-Луис, вирусом variola major, вирусом variola minor, вирусом ветряной оспы, вирусом лихорадки западного Нила, вирусом западного энцефалита лошадей или вирусом желтой лихорадки).
В конкретных вариантах осуществления вирусная инфекция вызвана вирусом гепатита (например, вирусом гепатита В, вирусом гепатита С), лентивирусом (например, вирусом иммунодефицита человека) или вирусом герпеса (например, вирусом простого герпеса 1, вирусом простого герпеса 2).
Бактериальная инфекция может быть вызвана, например, Escherichia coli, Clostridium difficile, Salmonella thyphimurium, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio cholerae, Neisseria gonorrhoeae, Helicobacter pylori, Hemophilus influenzae, Shigella dysenteriae, Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumonia или Chlamydia trachomatis.
Грибковая инфекция может быть вызвана, например, Candida, Aspergillus, Cryptococcus, Coccidioides, Histoplasma, Pneumocystis или Stachybotrys.
Протозойная инфекция может быть вызвана, например, Amoebozoa, Excavata, Chromalveolata, Entamoeba, Plasmodium, Giardia, Trypanosoma, Coccidia, Besnoitia, Dicrocoelium или Leishmania.
Дополнительно согласно изобретению предоставлен комбинированный препарат или фармацевтическая композиция изобретения для применения при предотвращении, лечении или улучшении заболевания, расстройства или патологического состояния, которое можно лечить, предотвратить или улучшить посредством активации Т-клеток, в частности посредством активации CD8-положительных Т-клеток.
Также согласно изобретению предоставлено применение комбинированного препарата или фармацевтической композиции изобретения при производстве лекарственного средства для предотвращения, лечения или улучшения заболевания, расстройства или патологического состояния, которое можно лечить, предотвратить или улучшить посредством активации Т-клеток, в частности посредством активации CD8-положительных Т-клеток.
Также предоставлен согласно изобретению способ предотвращения, лечения или улучшения заболевания, расстройства или патологического состояния, которое можно лечить, предотвратить или улучшить посредством активации Т-клеток, в частности посредством активации CD8-положительных Т-клеток, который включает введение белка LAG-3 или его производного, который способен связываться с молекулами MHC класса II, и ингибитора пути PD-1, субъекту, нуждающемуся в таком предотвращении, лечении или улучшении.
В некоторых вариантах осуществления заболевание, расстройство или патологическое состояние, которое можно лечить, предотвратить или улучшить посредством активации Т-клеток, может не включать рак.
Также предоставлен согласно изобретению комбинированный препарат или фармацевтическая композиция изобретения для применения с целью улучшения иммунного ответа, опосредованного T-клетками, в частности иммунного ответа, опосредованного CD8-положительными T-клетками.
Изобретение также предоставляет применение комбинированного препарата или фармацевтической композиции изобретения в производстве лекарственного средства для улучшения иммунного ответа, опосредованного T-клетками, в частности иммунного ответа, опосредованного CD8-положительными T-клетками.
Согласно изобретению дополнительно предоставлен способ улучшения иммунного ответа, опосредованного T-клетками, в частности иммунного ответа, опосредованного CD8-положительными T-клетками, который включает введение белка LAG-3 или его производного, который способен связываться с молекулами MHC класса II, и ингибитор пути PD-1, субъекту, нуждающемуся в таком улучшенном иммунном ответе, опосредованном T-клетками.
В некоторых вариантах осуществления улучшение иммунного ответа, опосредованного T-клетками, или иммунного ответа, опосредованного CD8-положительными T-клетками, может не включать предотвращение, лечение или улучшение рака.
Белок LAG-3 или его производное и ингибитор пути PD-1 можно вводить субъекту последовательно, т.е. белок LAG-3 или его производное можно вводить перед, вместе или после ингибитора пути PD-1.
Белок LAG-3 или его производное и ингибитор пути PD-1 можно вводить субъекту в течение 96 часов, 72 часов, 48 часов, 24 часов или 12 часов друг от друга.
В качестве альтернативы, белок LAG-3 или его производное и ингибитор пути PD-1 можно совместно вводить субъекту, например, в виде композиции, содержащей белок LAG-3 или его производное и ингибитор пути PD-1, или посредством одновременного введения раздельных доз белка LAG-3 или его производного и ингибитора пути PD-1.
Согласно некоторым вариантам осуществления, субъекту вводят множество доз белка LAG-3 или его производного и/или множество доз ингибитора пути PD-1.
Согласно некоторым вариантам осуществления, дозу белка LAG-3 или его производного вводят перед, вместе или после каждого введения двух или более доз ингибитора пути PD-1.
Например, дозу белка LAG-3 или его производного можно вводить в течение 96 часов, 72 часов, 48 часов, 24 часов или 12 часов, после каждого введения двух или более доз ингибитора пути PD-1.
Выбор соответствующих дозировок компонентов, используемых в комбинированной терапии в соответствии с настоящим изобретением может быть определен и оптимизирован специалистом в данной области, например, посредством наблюдения за больным, включая общее состояние больного, и ответ на комбинированную терапию. Оптимизация, например, может быть необходима, если определили, что больной не демонстрирует желаемый терапевтический эффект или наоборот, если больной испытывает нежелательные или неблагоприятные побочные эффекты, которые слишком многочисленны или имеют опасную степень тяжести.
Дозы компонентов, используемые в комбинированной терапии согласно изобретению, могут быть выбраны для предоставления терапевтически эффективного количества компонентов в комбинации.
«Эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к уменьшению по меньшей мере одного патологического параметра, ассоциированного с раком. Например, в некоторых вариантах осуществления эффективное количество комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения уменьшения по меньшей мере приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% патологического параметра по сравнению с ожидаемым уменьшением параметра, ассоциированным с раком, без комбинированной терапии. Например, патологический параметр может представлять собой опухолевый рост или скорость опухолевого роста.
В качестве альтернативы, «эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к увеличению клинической пользы, связанной с лечением рака. Например, в некоторых вариантах осуществления «эффективное количество» комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения повышения по меньшей мере приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% клинической пользы по сравнению с ожидаемой клинической пользой без комбинированной терапии. Например, клиническая польза может представлять собой скорость ответа опухоли на лечение, выживаемость без прогрессирования заболевания, общую выживаемость или повышенную чувствительность к последующему лечению.
В качестве альтернативы, «эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к изменению по меньшей мере одного полезного параметра, связанного с лечением рака. Например, в некоторых вариантах осуществления «эффективное количество» комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения изменения параметра по меньшей мере приблизительно на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению с ожидаемым изменением параметра, связанного с лечением рака без комбинированной терапии. Например, параметром может быть увеличение числа циркулирующих опухолевых антигенспецифических Т-клеток CD8+, или уменьшение числа опухолевых антигенспецифических регуляторные Т-клеток, или увеличение числа активированных Т-клеток, в частности активированных CD8+ Т-клеток, уменьшение числа истощенных антигенспецифических Т-клеток CD8+, или увеличение числа циркулирующих функциональных (т.е. неистощенных) антигенспецифических Т-клеток CD8+.
В вариантах осуществления, связанных с лечением инфекции, «эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к уменьшению по меньшей мере одного патологического параметра, ассоциированного с инфекцией. Например, в некоторых вариантах осуществления эффективное количество комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения уменьшения по меньшей мере приблизительно 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% патологического параметра по сравнению с ожидаемым уменьшением параметра, ассоциированного с инфекцией без комбинированной терапии. Например, патологическим параметром может быть вирусная нагрузка (например, число вирусных частиц или количество вирусной ДНК на мл крови), бактериальная нагрузка (например, количество бактериальной ДНК на мл крови или число бактериальных колоний после 1-21 дня периода роста на различных агаровых пластинах).
Пригодные способы измерения вирусной и бактериальной нагрузки хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области. Например, способы измерения вирусной нагрузки посредством ELISA сравнил Goldschmidt et al. (Clinical и Diagnostic Laboratory Immunology, July 1998, p. 513-518). Способы измерения вирусной нагрузки с использованием различных имеющихся на рынке анализов для обнаружения вирусной нуклеиновой кислоты сравнили Holguin et al. (Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1999 Apr; 18(4):256-9) и Swenson et al. (J. Clin. Microbiol. 2014 Feb; 52(2): 517-523). Примером статьи, описывающей измерение бактериальной нагрузки посредством ПЦР в реальном времени, является Nadkarni et al. (Microbiology (2002), 148, 257-266). Данная статья ссылается на Bergeyʹs Manual of Determinative Bacteriology, в настоящее время замененной на Bergeyʹs Manual of Systematic Bacteriology, 2nd Edition. Молекулярный анализ бактериальной нагрузки описан Honeyborne et al. (J. Clin. Microbiol. 2011 49:3905-3911, и J. Clin. Microbiol. 2014 Aug;52(8):3064-7). Перечень одобренных FDA скрининговых исследований для измерения вирусной и бактериальной нагрузок можно найти на сайте FDA по адресу:
www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/BloodBloodProducts/ApprovedProducts/LicensedProductsBLAs/BloodDonorScreening/InfectiousDisease/ucm080466.htm.
В качестве альтернативы, «эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к увеличению клинической пользы, связанной с лечением инфекции. Например, в некоторых вариантах осуществления «эффективное количество» комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения увеличения клинической пользы по меньшей мере приблизительно на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению с ожидаемой клинической пользой без комбинированной терапии.
В качестве альтернативы, «эффективное количество» комбинированной терапии может представлять собой количество, которое приводит к изменению по меньшей мере одного полезного параметра, связанного с лечением инфекции. Например, в некоторых вариантах осуществления «эффективное количество» комбинированной терапии представляет собой количество, которое является эффективным для достижения изменения параметра по меньшей мере приблизительно на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% по сравнению по сравнению с ожидаемым изменением параметра, связанного с лечением без комбинированной терапии. Например, параметром может быть увеличение числа активированных Т-клеток, в частности активированных Т-клеток CD8+, увеличение числа циркулирующих функциональных (т.е. неистощенных) антигенспецифических Т-клеток CD8+, или уменьшение числа истощенных антигенспецифических Т-клеток CD8+, или уменьшение числа антигенспецифических регуляторных Т-клеток.
Согласно изобретению, комбинированное лечение можно использовать для повышения терапевтического эффекта ингибитора пути PD-1, или белка LAG-3 или его производного по сравнению с действием ингибитора пути PD-1, или белка LAG-3 или его производного в виде монотерапии, или для уменьшения доз отдельных компонентов полученных в итоге комбинаций наряду с предотвращением или дополнительным снижением риска нежелательных или вредных побочных действий отдельных компонентов.
В одном варианте осуществления белок LAG-3 или его производное, и ингибитор пути PD-1 каждый назначают в дозе, которая находится в пределах обычно назначаемого диапазона доз для каждого соединения в виде монотерапии. Соединения могут назначаться в виде отдельных дозировок или в виде дозировки комбинации. Такие комбинации обеспечивают повышенную эффективность по сравнению с действием одного из соединений в виде монотерапии.
В другом варианте осуществления белок LAG-3 или его производное, и ингибитор пути PD-1 каждый назначают в дозе, которая ниже обычной назначаемой дозы для каждого компонента в виде монотерапии, но в дозах, которые обладают терапевтической эффективностью в комбинации. Компоненты могут назначаться в виде отдельных дозировок или в виде дозировки комбинации. Дозировки компонентов в комбинации могут быть выбраны, чтобы обеспечить такой же уровень терапевтической эффективности, как у белка LAG-3 или его производного, или ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии, но с преимуществом в том, что более низкие дозы белка LAG-3 или его производного, и ингибитора пути PD-1 снижают риск неблагоприятных побочных действий по сравнению с назначаемыми дозировками каждого соединения в виде монотерапии.
В другом варианте осуществления назначаемая дозировка ингибитора пути PD-1 находится в пределах обычно назначаемого диапазона доз для монотерапии, и белок LAG-3 или его производное назначают в дозировке, которая ниже обычно назначаемой дозы для монотерапии.
В дополнительном варианте осуществления назначаемая дозировка ингибитора пути PD-1 ниже обычно назначаемой дозы для монотерапии, а белок LAG-3 или его производное назначают в дозировке, которая находится в пределах обычно назначаемого диапазона доз для монотерапии.
Предпочтительные дозировки ниже обычно назначаемой дозы для монотерапии представляют собой дозы, которые достигают 50% или 25% обычно назначаемой дозы. Например, дозировками ниже обычно назначаемой дозы для монотерапии могут быть дозы, которые составляют 1-50%, 1-25%, 1-10%, 2-50%, 2-25%, 2-10% обычно назначаемой дозы ингибитора пути PD-1 и/или белка LAG-3 или его производного.
Обычно назначаемая доза белка LAG-3 или его производного для монотерапии у субъекта человека может представлять собой дозу, которая является молярным эквивалентом, составляющим 0,25-30 мг, 1-30 мг или 6-30 мг производного LAG-3, LAG-3Ig слитого белка IMP321.
Обычно назначаемая доза ингибитора пути PD-1 для монотерапии у субъекта человека может составлять от 0,1 до 10 мг/кг, от 0,1 до 1 мг/кг или от 1 до 10 мг/кг. Например, обычно назначаемая доза пембролизумаба для монотерапии у субъекта человека может составлять 2-10 мг/кг, например, 2 мг/кг, обычно назначаемая доза ниволумаба для монотерапии у субъекта человека может составлять 0,1-10 мг/кг, например, 3 мг/кг, и обычно назначаемая доза BMS-936559 для монотерапии у субъекта человека может составлять 0,3-10 мг/кг.
В конкретных вариантах осуществления комбинированных препаратов или композиций изобретения назначаемая дозировка ингибитора пути PD-1 является ниже обычно назначаемой дозы для монотерапии, например, 1-50%, 1-25%, 1-20%, 1-10%, 2-50%, 2-25%, 2-20%, 2-10%, 0,1-50%, 0,1-25%, 0,1-20%, 0,1-10%, <20%, <10%, 0,1-<20%, 0,1-<10%, 0,01-<20% или 0,01-<10% обычно назначаемой дозы ингибитора пути PD-1.
Примеры пригодных доз ингибитора пути PD-1 и белка LAG-3 или его производного, согласно изобретению, приведены в Таблице 1.2 ниже:
Таблица 1.2. Примеры доз ингибитора пути PD-1 и белка LAG-3 или его производного, в соответствии с вариантами осуществления комбинированных препаратов или композиций изобретения
Тип ингибитора пути PD-1 | Доза ингибитора пути PD-1: мг/кг [мг дозы на 70 кг массы тела человека] |
Человеческая доза белка LAG-3 или его производного (дана в виде мг дозы IMP321 или ее молярного эквивалента) |
Антитело анти-PD-1 или антитело анти-PD-L1 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 0,25-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 0,25-30 мг | |
Антитело анти-PD-1 или антитело анти-PD-L1 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 1-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 1-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 1-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 1-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 1-30 мг | |
Антитело анти-PD-1 или антитело анти-PD-L1 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 6-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 6-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 6-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 6-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 6-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 6-30 мг | |
Пембролизумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 0,25-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 0,25-30 мг | |
Пембролизумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 1-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 1-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 1-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 1-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 1-30 мг | |
Пембролизумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 6-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 6-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 6-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 6-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 6-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 6-30 мг | |
Ниволумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 0,25-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 0,25-30 мг | |
Ниволумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 1-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 1-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 1-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 1-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 1-30 мг | |
Ниволумаб | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 6-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 6-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 6-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 6-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 6-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 6-30 мг | |
BMS-936559 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 0,25-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 0,25-30 мг | |
BMS-936559 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 1-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 1-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 1-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 1-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 1-30 мг | |
BMS-936559 | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 6-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 6-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 6-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 6-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 6-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 6-30 мг | |
MPDL3280A | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 0,25-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 0,25-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 0,25-30 мг | |
MPDL3280A | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 1-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 1-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 1-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 1-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 1-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 1-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 1-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 1-30 мг | |
MPDL3280A | 0,001-5 мг/кг [0,07-350 мг] | 6-30 мг |
0,001-2,5 мг/кг [0,07-175 мг] | 6-30 мг | |
0,001-1 мг/кг [0,07-70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-<1 мг/кг [0,07-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,5 мг/кг [0,07-35 мг] | 6-30 мг | |
0,001-0,1 мг/кг [0,07-7 мг] | 6-30 мг | |
0,002-5 мг/кг [0,14-350 мг] | 6-30 мг | |
0,002-2,5 мг/кг [0,14-175 мг] | 6-30 мг | |
0,002-1 мг/кг [0,14-70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-<1 мг/кг [0,14-<70 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,5 мг/кг [0,14-35 мг] | 6-30 мг | |
0,002-0,1 мг/кг [0,14-7 мг] | 6-30 мг |
Производным LAG-3 может быть любое из производных LAG-3, описанных выше или показанных на фигуре 7. В конкретных вариантах осуществления производным LAG-3 является IMP321.
При введении в отдельных дозировках белок LAG-3 или его производное, и ингибитор пути PD-1 можно вводить по существу одновременно (например, в течение приблизительно 60 минут, приблизительно 50 минут, приблизительно 40 минут, приблизительно 30 минут, приблизительно 20 минут, приблизительно 10 минут, приблизительно 5 минут или приблизительно 1 минуты друг от друга) или разделенными по времени приблизительно на 1 час, приблизительно на 2 часа, приблизительно на 4 часа, приблизительно на 6 часов, приблизительно на 10 часов, приблизительно на 12 часов, приблизительно на 24 часа, приблизительно на 36 часов, приблизительно на 72 часа или приблизительно на 96 часов или более.
Квалифицированный специалист будет способен определить и оптимизировать подходящий период времени для последовательного введения, в зависимости от конкретной комбинации белка LAG-3 или его производного, и ингибитора пути PD-1. Период времени предпочтительно выбран так, чтобы имелось по меньшей мере одно благотворное действие, например, улучшение действия белка LAG-3 или его производного, или ингибитора пути PD-1, или взаимное улучшение действия скомбинированных компонентов, например, более чем аддитивное действие, дополнительное преимущественное действие, меньшие побочные эффекты, меньшая токсичность или комбинированный терапевтический эффект по сравнению с неэффективной дозой одного или обоих скомбинированных компонентов, и весьма предпочтительно, синергизм скомбинированных компонентов.
Следует принимать во внимание, что оптимальный период времени будет зависеть от таких факторов, как время, взятое для пиковой концентрации в плазме соединения, которая должна быть достигнута после введения, и период полуэлиминации каждого соединения. Предпочтительно разница во времени является меньшей, чем время полужизни первого компонента, подлежащего введению.
Квалифицированный специалист также будет способен определить соответствующее время для введения. В определенных вариантах осуществления ингибитор пути PD-1 можно вводить утром, а белок LAG-3 или его производное вводят по меньшей мере однократно в тот же день. В других вариантах осуществления ингибитор пути PD-1 и белок LAG-3 или его производное можно вводить по существу в одно время.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути PD-1 может вводить субъекту, например, медицинский работник, а субъект может быть снабжен дозой белка LAG-3 или его производного, например, в предварительно заполненном шприце, чтобы ввести позднее (например, позднее в тот же день или на следующий день).
Ингибитор пути PD-1 и белок LAG-3 или его производное можно вводить ежедневно, еженедельно, каждые две недели, каждые три недели, ежемесячно, каждые 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет или более.
Субъект может получать дозы ингибитора пути PD-1 и белка LAG-3 или его производного, на протяжении периода, составляющего недели, месяцы или годы. Например, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяца, 6 месяца, 7 месяца, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет или более.
Субъект может являться субъектом млекопитающим, соответственно субъектом человеком.
Виды рака, которые можно лечить согласно изобретению, включают виды рака, при которых опухолевые клетки рака экспрессируют PD-L1 и/или PD-L2 (т.е. PD-L1- и/или PD-L2-положительные виды рака).
Экспрессию PD-L1 выявили в карциномах легкого, яичника, почки и ободочной кишки и в злокачественной меланоме, но не в нормальных тканях, включая легкие, матку, почки, ободочную кишку или кожу (Benson et al, Blood 116, 2286-2294 (2010); Blank et al, Int. J. Cancer 119, 317-327 (2006); Dong, et al, Nat. Med. 8, 793-800 (2002)). Экспрессия PD-L1 опухолевыми клетками связана с неблагоприятным прогнозом при раке груди, раке желудка, раке пищевода, гепатоцеллюлярной карциноме, злокачественной меланоме, раке яичников, раке поджелудочной железы, почечноклеточной карциноме и уротелиальном раке (Zou & Chen, Nat. Rev. Immunol. 8, 467-477 (2008)).
Также имеются доказательства, подтверждающие, что опухоли человека могут экспрессировать PD-L2 (Rozali, et al, Clin. Dev. Immunol. 2012, 656340 (2012); Karim, et al, Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009)). Фибробласты, ассоциированные с немелкоклеточным раком легкого (NSCLC-), конститутивно экспрессируют как PD-L1, так и PD-L2. Также у больных с PD-L2-положительным (по сравнению с PD-L2-отрицательным) раком пищевода, яичников или гепатоцеллюлярным раком описано снижение выживаемости.
Виды рака, которые можно лечить согласно изобретению, также включают виды рака, при которых инфильтрирующие опухоль лимфоциты (TIL), особенно TIL CD8+, экспрессируют PD-1, или виды рака, при которых TIL экспрессируют более высокие уровни PD-1, чем циркулирующие лимфоциты.
У больных как NSCLC, так и меланомой, на TIL наблюдали более высокие уровни PD-1, чем на циркулирующих лимфоцитах (Blank, et al, Int. J. Рак 119, 317-327 (2006); Zhang et al, Cell. Mol. Immunol. 7, 389-395 (2010)). В периферической крови вакцинированных больных меланомой экспрессируют PD-1 и специфические к антигену меланомы цитотоксические лимфоциты и Treg (Wang, et al, Int. Immunol. 21, 1065-1077 (2009)). Также имеется отрицательная корреляция между экспрессией опухоли PD-L2 и присутствием TIL CD8+ при раке пищевода (Rozali, et al, Clin. Dev. Immunol. 2012, 656340 (2012)).
TIL CD8+, выделенные из NSCLC, имеют повышенную экспрессию PD-1 и нарушенные функциональные ответы (пролиферация in vitro и продукция воспалительных цитокинов) по сравнению с циркулирующими Т-клетками CD8+ или Т-клетками CD8+ от здоровых добровольцев. Добавление анти-PD-L1 антител значительно улучшает способность TIL CD8+ к пролиферации и продукции интерферона-γ in vitro (Zhang, et al, Cell. Mol. Immunol. 7, 389-395 (2010)). В похожем исследовании с использованием культур опухолевых дендритных клеток и TIL у больных раком яичников добавление анти-PD-L1 антител значительно увеличивало выработку интерферона-γ TIL в ответ на опухолевые антигены. Когда эти TIL переносили иммунодефицитным мышам с опухолями яичников, наблюдали сниженный опухолевый рост по сравнению с опухолевым ростом у мышей контрольных групп (Curiel, et al, Nat. Med. 9, 562-567 (2003)).
Конкретно, виды рака, которые можно лечить согласно изобретению, включают рак кожи, легкого (особенно плоскоклеточный или неплоскоклеточный NSCLC), яичников, почек, ободочной кишки, колоректальный рак, молочной железы, желудка, пищевода, поджелудочной железы, мочевого пузыря, уротелиальный и печени.
Другие примеры видов рака, которые можно лечить согласно изобретению, включают меланому (например, метастатическую злокачественную меланому), рак простаты (например, гормонорезистентную аденокарциному простаты), рак головы и шеи (например, плоскоклеточную карциному головы и шеи), рак шейки матки, рак щитовидной железы, глиобластому, глиому, лейкоз, лимфому (например, В-клеточную лимфому), рак надпочечников, СПИД-ассоциированный рак, альвеолярную саркому мягких тканей, астроцитарную опухоль, рак костей, рак головного и спинного мозга, метастатическую опухоль головного мозга, опухоль каротидного тельца, хондросаркому, хордому, хромофобную почечноклеточную карциному, светлоклеточную карциному, доброкачественную фиброзную гистиоцитому кожи, десмопластическую мелкокруглоклеточную опухоль, эпендимому, саркому Юинга, внескелетную миксоидную хондросаркому, несовершенный костный фиброгенез, фиброзную дисплазию костей, рак желчного пузыря или желчных путей, гестационную трофобластическую болезнь, эмбрионально-клеточную опухоль, злокачественное заболевание системы крови, гепатоцеллюлярную карциному, опухоль островковых клеток поджелудочной железы, саркому Капоши, рак почек, липому/доброкачественную липоматозную опухоль, липосаркому/злокачественной липоматозную опухоль, медуллобластому, менингиому, карциному клеток Меркеля, множественные эндокринные неоплазии, множественную миелому, миелодиспластический синдром, нейробластому, нейроэндокринную опухоль, папиллярную карциному щитовидной железы, опухоль паращитовидных желез, рак у детей, злокачественную опухоль оболочек периферических нервов, феохромоцитому, опухоль гипофиза, рак простаты, увеальную меланому заднего отдела глаза, редкие гематологические расстройства, метастатический рак почки, рабдоидную опухоль, рабдомиосаркому, саркому, саркому мягких тканей, плоскоклеточный рак, рак желудка, синовиальную саркому, рак яичка, рак вилочковой железы, тимому, метастатический рак щитовидной железы или рак матки.
В целом, компоненты комбинации изобретения или композиции изобретения можно вводить с помощью известных средств, в любой подходящей готовой форме, посредством любого подходящего пути. В некоторых вариантах осуществления белок LAG-3 или его производное вводят парентерально (включая подкожную, внутривенную или внутримышечную инъекцию). В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути PD-1 вводят внутривенно. В конкретных вариантах осуществления белок LAG-3 или его производное вводят подкожно, а ингибитор пути PD-1 вводят внутривенно.
Пригодные фармацевтические композиции и лекарственные формы можно приготовить с использованием общепринятых способов, известных специалистам в области лекарственных форм и описанных в релевантных текстах и литературе, например, у Remington: The Science и Practice of Pharmacy (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995).
Особенно предпочтительным является составление комбинаций или композиций изобретения в стандартной лекарственной форме для легкости введения и равномерности дозировки. Термин «стандартная лекарственная форма», как используется в данной заявке, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве разовых дозировок для индивидов, подлежащих лечению. То есть композиции получают в виде дискретных единиц дозирования, каждая из которых содержит заранее установленное количество «разовой дозы» действующего вещества, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Спецификация стандартной лекарственной формы изобретения зависит от характерных особенностей действующего вещества, подлежащего доставке. Дозировки можно дополнительно определить посредством ссылки на обычную дозу и способ введения ингредиентов. Следует отметить, что в некоторых случаях две или более отдельных единиц дозирования в комбинации предоставляют терапевтически эффективное количество действующего вещества, например, две таблетки или капсулы, взятые вместе, могут обеспечить терапевтически эффективную дозу, так что разовая доза в каждой таблетке или капсуле составляет приблизительно 50% терапевтически эффективного количества.
Лекарственные средства согласно изобретению для парентерального введения включают стерильные водные и неводные растворы, суспензии и эмульсии. Инъекционные водные растворы содержат действующее вещество в водорастворимой форме. Примеры неводных растворителей или несущих растворов включают жирные кислоты, такие как оливковое масло и кукурузное масло, синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, низкомолекулярные спирты, такие как пропиленгликоль, синтетические гидрофильные полимеры, такие как полиэтиленгликоль, липосомы и подобные. Парентеральные лекарственные формы также могут содержать адъюванты, такие как солюбилизаторы, консерванты, увлажняющие агенты, эмульгаторы, диспергирующие агенты и стабилизаторы, и водные суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, сорбитол и декстран. Инъекционные лекарственные формы могут быть превращены в стерильные посредством включения стерилизующего агента, фильтрации через задерживающий бактерии фильтр, облучения или нагревания. Их также можно изготавливать с применением стерильной инъекционной среды. Действующее вещество также может быть в высушенной, напр., в лиофилизированной форме, которую можно регидратировать с помощью подходящей среды непосредственно перед введением посредством инъекции.
В дополнение к ранее описанным лекарственным формам, действующее вещество может быть получено в виде депо-препарата для регулируемого высвобождения действующего вещества, предпочтительно замедленного высвобождения в течение продолжительного периода времени. Эти лекарственные формы с замедленным высвобождением, как правило, вводят посредством имплантации (например, подкожно или внутримышечно или посредством внутримышечной инъекции).
Комбинированные препараты изобретения могут быть упакованы с инструкциями для введения компонентов комбинации. Инструкции могут быть записаны на подходящем носителе или основе для записи. Например, инструкции могут быть напечатаны на основе, такой как бумага или пластмасса. Инструкции могут присутствовать в виде листка-вкладыша, при маркировке контейнера или его компонентов (т.е., могут быть связаны с упаковкой или дополнительной упаковкой). В других вариантах осуществления инструкции присутствуют в виде файла для электронного хранения данных, имеющегося на пригодном машиночитаемом электронном носителе, например, CD-ROM, дискете. Некоторые или все компоненты комбинированного препарата могут быть упакованы в подходящую упаковку для сохранения стерильности.
Варианты осуществления изобретения описаны ниже, посредством только примера, со ссылкой на сопровождающие рисунки, на которых:
Фигура 1 показывает роль пути PD-1 в ускользании опухоли от иммунологического надзора и механизм действия блокирования пути PD-1 (APC, антиген-презентирующая клетка; IFN-γ, интерферон-γ; MHC, главный комплекс гистосовместимости; PD-1, запрограммированная смерть клетки-1; PD-L1, PD лиганд 1; TCR, T-клеточный рецептор);
Фигура 2 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD1 антитела на секрецию IFN-γ индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 3 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD1 антитела на секрецию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 4 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD1 антитела на секрецию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 5 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD1 антитела на секрецию TNFα, IL-6, RANTES, индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 6 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD1 антитела на экспрессию маркеров активации, индуцированную антигенной стимуляцией. Следует отметить, что состояние для итоговой колонки в каждой диаграмме Фигуры 6 составляет «1000 нг/мл анти-PD1+30 нг/мл LAG-3Ig», а не «30 нг/мл анти-PD1+1000 нг/мл LAG-3Igʺ как показано на Фигуре;
Фигура 7 демонстрирует иллюстрацию производных белка LAG-3, слитого с последовательностью Fc Иммуноглобулина (IgFc);
Фигура 8 демонстрирует связывание производных LAG-3 с MHC класса II-положительными клетками;
Фигура 9 демонстрирует подавление связывания производного LAG-3 с MHC класса II-положительными клетками антителами, которые блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II;
Фигура 10 демонстрирует активацию клеток THP-1 производными LAG-3, как определено посредством секреции CCL4;
Фигура 11 демонстрирует активацию клеток THP-1 производными LAG-3, как определено посредством секреции TNF-α;
Фигура 12 демонстрирует подавление активации моноцитов, индуцированной производными LAG, антителами, которые блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II;
Фигура 13 демонстрирует активацию антиген-презентирующих клеток (APC) производными LAG-3;
Фигура 14 демонстрирует активацию CD8-положительных Т-клеток производными LAG-3;
Фигура 15 демонстрирует аминокислотную последовательность зрелого человеческого белка LAG-3. Четыре внеклеточных домена суперсемейства Ig находятся в аминокислотных остатках: 1-149 (D1); 150-239 (D2); 240-330 (D3); и 331-412 (D4). Аминокислотная последовательность внепетлевой структуры домена D1 человеческого белок LAG-3 показана подчеркнутой жирным;
Фигура 16 демонстрирует действие LAG-3Ig и анти-PD-L1 антител на экспрессию маркеров активации, индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 17 демонстрирует действие LAG-3Ig и различных антител анти-PD-1 (Ab1 и Ab2) на секрецию IFN-γ и TNF-α, индуцированную антигенной стимуляцией;
Фигура 18 демонстрирует действие LAG-3Ig и различных анти-PD-L1 антител (Ab3, Ab4, Ab5, и Ab6) на секрецию IFN-γ и TNF-α, индуцированную антигенной стимуляцией; and
Фигура 19 демонстрирует действие различных производных LAG-3 (IMP321, IMP321 R75A, LAG3 D1D4-линкер2-Ig) и антител анти-PD-1 на секрецию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией.
В примерах, таблицах и фигурах ниже термин «анти-PD1 антитело» используется как синоним для «антитела анти-PD-1», а термин «анти-PDL1 антитело» используется как синоним для «антитела анти-PD-L1».
Пример 1
Действие LAG-3Ig и анти-PD1 антител на секрецию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig, также известного как IMP321) и анти-PD1 антитела на активацию Т-клеток in vitro с использованием анализа секреции IFN-γ. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) включают лимфоциты (Т-клетки, В-клетки и NK-клетки), моноциты и дендритные клетки. IFN-γ в основном секретируется активированными CD4+ и CD8+ памяти и эффекторными Т-клетками и NK-клетками при активации. После рестимуляции специфическим антигеном in vitro индуцируется секреция IFN-γ.
PBMC от трех здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунка, при 1×106M/мл в растворе Complete Roswell Park Memorial Institute (RPMI)+10% фетальной бычьей сыворотке (FBS)) инкубировали с пулом пептидов, охватывающих последовательность человеческого цитомегаловируса (CMV) pp65 в трех повторностях (PepTivator® CMV pp65 от Miltenyi Biotec, Cat. # 130-093-435), в присутствии или отсутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и указанных концентраций анти-PD1 mAb (клон EH12.1, BD biosciences, Cat. #562138). Пул пептидов состоял главным образом из 15-мерных последовательностей, с перекрытием из 11 аминокислот, охватывающим полную последовательность белка pp65 штамма AD169 человеческого CMV (Swiss-Prot Acc. No. P06725).
Т-клеточный ответ оценивали посредством измерения концентрации IFN-γ в клеточных супернатантах через два дня после стимуляции с применением BD Cytometric Bead Array.
Концентрации IFN-γ, присутствующие в объединенных повторениях для каждого донора, отмечены в Таблице 2 ниже. Фигура 2 демонстрирует концентрации IFN-γ, нанесенные в зависимости от концентрации анти-PD1 mAb для каждого донора.
Таблица 2. Секреция IFN-γ, индуцированная антигеном в присутствии анти-PD1 антител, с LAG-3Ig и без него
[IFN-γ] (пг/мл) | ||||||
Номер донора: | 1 | 2 | 3 | |||
Анти-PD1 антитело (нг/мл) | Число LAG-3Ig | 30 нг/мл LAG-3Ig | Число LAG-3Ig | 30 нг/мл LAG-3Ig | Число LAG-3Ig | 30 нг/мл LAG-3Ig |
0 | 345 | 409 | 1095 | 2269 | 85 | 122 |
3 | 510 | 2812 | 188 | |||
10 | 350 | 785 | 1292 | 3151 | 78 | 211 |
30 | 246 | 828 | 1491 | 3484 | 122 | 232 |
100 | 439 | 2467 | 149 | |||
300 | 657 | 3856 | ||||
1000 | 881 | 3970 | 216 |
Результаты показывают, что секреция IFN-γ значительно увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и меньших концентраций анти-PD1 антител по сравнению только с анти-PD1 антител. Например, для каждого донора увеличение концентрации IFN-γ выше исходного уровня (т.е. концентрации IFN-γ при отсутствии анти-PD1 и LAG-3Ig) в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 антител было больше, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии только 30 нг/мл LAG-3Ig и только 30 нг/мл анти-PD1 антитела, как показано в Таблице 3 ниже. Действие комбинации LAG-3Ig и анти-PD1 антител для каждого донора было, таким образом, синергетическим.
Таблица 3. Увеличение концентрации IFN-γ выше исходной, индуцированное антигеном в присутствии 30 нг/мл анти-PD1 антител и/или 30 нг/мл LAG-3Ig
Условия стимуляции | Номер донора. | ||
1 | 2 | 3 | |
30 нг/мл LAG-3Ig | 64 | 1174 | 37 |
30 нг/мл антитела анти-PD-1 | -99 | 396 | 37 |
30 нг/мл LAG-3Ig+30 нг/мл антитела анти-PD-1 | 483 | 2389 | 147 |
Результаты также показывают, что секреция IFN-γ, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией анти-PD1 антител (30 нг/мл), была эквивалентна секреции IFN-γ, индуцированной гораздо большей концентрацией (300 нг/мл-1000 нг/мл, от 10 до более 30 раз выше) только анти-PD1 антитела. Для доноров номер 1 и 3 сходные концентрации IFN-γ вырабатывались, когда PBMC инкубировали с 30 нг/мл анти-PD1 и 30 нг/мл LAG-3Ig по сравнению с 1000 нг/мл только анти-PD1 антитела. Для донора номер 2 сходные концентрации IFN-γ вырабатывались, когда PBMC инкубировали с 30 нг/мл анти-PD1 и 30 нг/мл LAG-3Ig по сравнению с 300 нг/мл и 1000 нг/мл только анти-PD1 антитела.
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством секреции IFN-γ), индуцированный относительно низкими дозами анти-PD1 антител, синергетически увеличивался (приблизительно в ~7,5, 1,5, и 2 раза для доноров номер 1, 2 и 3, соответственно) растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что эквивалентный Т-клеточный ответ in vitro получен с примененеием приблизительно в 10-30 раз меньше анти-PD1 антител, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3.
Пример 2
Действие LAG-3Ig и анти-PD1 антител на секрецию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig) и анти-PD1 антител на активацию Т-клеток in vitro с использованием анализа секреции IFN-γ.
PBMC от 10 здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунка, при 1×106M/мл in Complete RPMI+10%FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающих последовательность CMV pp65 в трех повторностях (PepTivator® CMV pp65 от Miltenyi Biotec, Cat. # 130-093-435), без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 1000 нг/мл анти-PD1 mAb (клон EH12.1, BD biosciences Cat. # 562138), с 30 нг/мл LAG-3Ig или с 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 mAb.
Т-клеточный ответ оценивали посредством измерения Концентрации IFN-γ в клеточных супернатантах через два дня после стимуляции с использованием BD Cytometric Bead Array.
Концентрации IFN-γ в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции, для каждого донора отмечены в Таблице 4 ниже. Среднее значение результатов, полученных от 10 доноров, показаны в Таблице 5. Результаты для каждого донора также нанесены на фигурах 3 и 4. Статистические различия (*p<0,05) показаны черным на фигуре 3.
Таблица 4. Секреция IFN-γ, индуцированная антигеном в присутствии анти-PD1 антител с LAG-3Ig и без него
Условия стимуляции | [IFN-γ] (пг/мл) | ||||||||||
Донор | |||||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
- | - | 345 | 1095 | 85 | 57 | 319 | 1583 | 1405 | 130 | 53 | 33 |
30 | - | 246 | 1491 | 122 | 63 | 378 | 1836 | 2355 | 204 | 97 | 31 |
- | 30 | 409 | 2269 | 122 | 51 | 350 | 1406 | 2511 | 150 | 142 | 79 |
30 | 30 | 828 | 3484 | 232 | 145 | 506 | 2510 | 4217 | 347 | 350 | 128 |
1000 | - | 881 | 3970 | 216 | 109 | 650 | 2765 | 3913 | 329 | 130 | 68 |
Таблица 5. Средняя концентрация IFN-γ для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Средняя [IFN-γ] (пг/мл) | Увеличение средней [IFN-γ] (пг/мл) выше среднего исходного уровня | |
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | ||
- | - | 510 | - |
30 | - | 682 | 172 |
- | 30 | 749 | 239 |
30 | 30 | 1275 | 765 |
1000 | - | 1303 | 793 |
Результаты показывают, что секреция IFN-γ была намного выше для каждого донора, когда PBMC инкубировали в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 антител по сравнению с 30 нг/мл LAG-3Ig или 30 нг/мл только анти-PD1 антител. Таблица 5 демонстрирует, что увеличение средней концентрации IFN-γ выше среднего исходного уровня (т.е. средней концентрации IFN-γ при отсутствии анти-PD1 и LAG-3Ig) в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 антител было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии 30 нг/мл только LAG-3Ig и 30 нг/мл только анти-PD1 антитела (т.е. 765 > 239+172). Действие комбинации LAG-3Ig и анти-PD1 антитела было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция IFN-γ, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией анти-PD1 антител (30 нг/мл) являлось эквивалентной секреции IFN-γ, индуцированной гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более 30 раз выше) только анти-PD1 антител.
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством секреция IFN-γ), индуцированный относительно низкими дозами анти-PD1 антител, синергетически увеличивался (в среднем приблизительно в 2 раза) растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что эквивалентный Т-клеточный ответ in vitro получен с использованием более чем в 30 раз меньше анти-PD1 антител, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3.
Пример 3
Действие LAG-3Ig и анти-PD1 антител на секрецию TNF-α, IL-6, RANTES, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig) и анти-PD1 антител на активацию Т-клеток in vitro посредством измерения секреции TNF-α, IL-6 и RANTES (CCL5).
PBMC от 10 здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунка, при 1×106M/мл в Complete RPMI+10%FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающим последовательность CMV pp65 в трех повторностях (PepTivator® CMV pp65 от Miltenyi Biotec, Cat. # 130-093-435), без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 1000 нг/мл анти-PD1 mAb (клон EH12.1, BD biosciences Cat. # 562138), с 30 нг/мл LAG-3Ig или с 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 mAb.
Т-клеточный ответ оценивали посредством измерения концентрации TNF-α, IL-6 и RANTES (CCL5) в клеточных супернатантах через 2 дня после стимуляции с использованием BD Cytometric Bead Array.
Концентрация цитокинов/хемокинов в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции, для каждого донора отмечены в Таблицах 6-8 ниже. Среднее значение результатов, полученных от 10 доноров, показаны в Таблице 9, и увеличение среднего значения выше среднего исходного уровня показано в Таблице 10. Результаты для каждого донора также нанесены на фигуре 5, и статистические различия (*p<0,05) показаны черным.
Таблица 6. Секреция TNF-α, индуцированная антигеном в присутствии анти-PD1 антител с LAG-3Ig и без него
Условия стимуляции | [TNF-α] (пг/мл) | ||||||||||
Донор | |||||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
- | - | 20 | 12 | 16 | 20 | 85 | 1 | 10 | 4 | 5 | |
30 | - | 31 | 15 | 29 | 23 | 116 | 1 | 7 | 4 | 90 | |
- | 30 | 67 | 36 | 97 | 100 | 645 | 15 | 123 | 34 | 72 | |
30 | 30 | 78 | 44 | 143 | 172 | 793 | 24 | 152 | 64 | 229 | |
1000 | - | 30 | 15 | 33 | 47 | 325 | 4 | 17 | 6 | 22 |
Таблица 7. Секреция IL-6, индуцированная антигеном в присутствии анти-PD1 антител с LAG-3Ig и без него
Условия стимуляции | [IL-6] (пг/мл) | ||||||||||
Донор | |||||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
- | - | 1000 | 401 | 71 | 255 | 150 | 1316 | 284 | 171 | 420 | 1661 |
30 | - | 1420 | 716 | 91 | 312 | 208 | 1523 | 303 | 168 | 278 | 8026 |
- | 30 | 1073 | 563 | 245 | 668 | 326 | 19703 | 466 | 432 | 568 | 11324 |
30 | 30 | 1254 | 671 | 223 | 815 | 546 | 24102 | 560 | 471 | 833 | 62195 |
1000 | - | 1130 | 690 | 231 | 210 | 323 | 3411 | 576 | 276 | 426 | 4858 |
Таблица 8. Секреция RANTES (CCL5), индуцированная антигеном в присутствии анти-PD1 антител с LAG-3Ig и без него
Условия стимуляции | [RANTES (CCL5)] (пг/мл) | ||||||||||
Донор | |||||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
- | - | 62 | 18 | 6 | 52 | 249 | 174 | 302 | 393 | 135 | 182 |
30 | - | 54 | 22 | 11 | 51 | 253 | 210 | 296 | 435 | 142 | 217 |
- | 30 | 93 | 46 | 14 | 142 | 392 | 689 | 341 | 785 | 146 | 385 |
30 | 30 | 100 | 61 | 13 | 148 | 497 | 785 | 319 | 712 | 180 | 430 |
1000 | - | 64 | 26 | 10 | 70 | 300 | 357 | 321 | 435 | 141 | 217 |
Таблица 9. Средняя концентрация TNF-α, IL-6 и RANTES (CCL5) для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Средняя [TNF-α] (пг/мл) | Средняя [IL-6] (пг/мл) | Средняя [CCL5] (пг/мл) | |
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | |||
- | - | 19 | 573 | 157 |
30 | - | 35 | 1305 | 169 |
- | 30 | 132 | 3537 | 303 |
30 | 30 | 189 | 9167 | 324 |
1000 | - | 55 | 1213 | 194 |
Таблица 10. Увеличение средней концентрации TNF-α, IL-6 и RANTES (CCL5) выше среднего исходного уровня для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Увеличение средней [TNF-α] (пг/мл) выше среднего исходного уровня | Увеличение средней [IL-6] (пг/мл) выше среднего исходного уровня | Увеличение средней [CCL5] (пг/мл) выше среднего исходного уровня | |
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | |||
30 | - | 16 | 732 | 12 |
- | 30 | 113 | 2964 | 146 |
30 | 30 | 170 | 8594 | 167 |
1000 | - | 36 | 640 | 37 |
Результаты показывают, что -6 была намного выше для каждого донора, когда PBMC инкубировали в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 антител, по сравнению с 30 нг/мл LAG-3Ig или 30 нг/мл только анти-PD1 антител. Таблица 10 демонстрирует, что увеличение средней концентрации IL-6 выше среднего исходного уровня (т.е. средней концентрации IL-6 при отсутствии анти-PD1 и LAG-3Ig) в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD1 антител было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии 30 нг/мл только LAG-3Ig и 30 нг/мл только анти-PD1 антител (т.е. 8594 > 732+2964). Действие комбинации LAG-3Ig и анти-PD1 антител было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция IL-6, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией анти-PD1 антител (30 нг/мл) была эквивалентна секреции IL-6, индуцированной гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более 30 раз выше) только анти-PD1 антител.
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством IL-6 секреции), индуцированный относительно низкими дозами анти-PD1 антител, синергетически увеличивался (в среднем более чем в 2,3 раза) растворимым производным LAG-3.
Пример 4
Действие LAG-3Ig и анти-PD1 антител на экспрессию маркеров активации, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig) и анти-PD1 антител на экспрессию маркеров активации Т-клеток.
PBMC от 7 здоровых доноров (0.2×106 клеток/лунка, at 1×106M/мл in Complete RPMI+10%FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающим последовательность CMV pp65 в трех повторностях (PepTivator® CMV pp65 от Miltenyi Biotec, Cat. # 130-093-435), без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 1000 нг/мл анти-PD1 mAb (клон EH12.1, BD biosciences Cat. # 562138), с 30 нг/мл LAG-3Ig, или с 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 или 1000 нг/мл анти-PD1 mAb.
Т-клеточный ответ оценивали посредством фенотипирования клеток на экспрессию трех маркеров активации (LAG-3, CD69 и CD25) через два дня после стимуляции посредством проточной цитометрии.
Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69 или CD25, по меньшей мере один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25), или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25) в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции отмечены в Таблицах 11-15 ниже. Среднее значение результатов полученных для 7 доноров показаны в Таблице 16, и увеличение среднего значения выше среднего исходного уровня показано в Таблице 17. Результаты для каждого донора также нанесены на фигуре 6, а статистические различия (*p<0,05) показаны черным.
Таблица 11. Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3 | |||||||
Донор | ||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
- | - | 0,39 | 0,33 | 0,36 | 0,89 | 0,45 | 1,13 | 1,09 |
30 | - | 0,29 | 0,28 | 0,56 | 1,40 | 0,49 | 1,38 | 2,03 |
1000 | - | 0,43 | 0,25 | 0,69 | 2,04 | 0,65 | 1,43 | 1,97 |
- | 30 | 0,57 | 0,36 | 0,98 | 1,36 | 1,28 | 1,00 | 2,65 |
30 | 30 | 0,80 | 0,54 | 1,68 | 2,66 | 1,97 | 1,83 | 3,29 |
1000 | 30 | 0,72 | 0,57 | 2,25 | 3,08 | 2,59 | 2,47 | 3,91 |
Таблица 12. Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD69, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD69 | |||||||
Донор | ||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
- | - | 3,67 | 4,57 | 8,44 | 14,28 | 5,29 | 4,59 | 7,93 |
30 | - | 3,73 | 6,03 | 12,26 | 17,65 | 6,44 | 6,23 | 11,62 |
1000 | - | 3,91 | 7,76 | 13,36 | 17,70 | 7,04 | 7,80 | 12,14 |
- | 30 | 5,91 | 6,49 | 8,59 | 13,42 | 15,95 | 7,92 | 11,41 |
30 | 30 | 8,23 | 5,62 | 14,30 | 19,12 | 17,69 | 12,30 | 13,39 |
1000 | 30 | 7,82 | 6,09 | 14,47 | 19,37 | 17,33 | 12,97 | 14,67 |
Таблица 13. Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD25, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD25 | |||||||
Донор | ||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
- | - | 1,27 | 0,51 | 1,53 | 2,67 | 1,41 | 0,07 | 0,41 |
30 | - | 1,21 | 0,78 | 1,87 | 3,13 | 1,79 | 0,14 | 1,32 |
1000 | - | 1,36 | 0,87 | 1,79 | 3,25 | 2,35 | 0,26 | 1,04 |
- | 30 | 0,99 | 0,76 | 3,56 | 3,52 | 6,13 | 0,08 | 1,06 |
30 | 30 | 1,84 | 0,73 | 5,59 | 4,67 | 7,80 | 0,39 | 1,36 |
1000 | 30 | 1,67 | 0,79 | 5,91 | 4,41 | 8,09 | 0,52 | 1,59 |
Таблица 14. Процент CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) | |||||||
Донор | ||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
- | - | 4,23 | 4,82 | 8,79 | 14,66 | 5,68 | 5,34 | 8,41 |
30 | - | 4,24 | 6,34 | 12,58 | 18,09 | 7,09 | 7,12 | 12,19 |
1000 | - | 4,51 | 8,07 | 13,77 | 18,25 | 7,76 | 8,65 | 12,68 |
- | 30 | 6,43 | 6,97 | 9,52 | 14,02 | 17,17 | 8,44 | 12,11 |
30 | 30 | 9,04 | 6,09 | 15,39 | 19,75 | 19,13 | 13,14 | 14,11 |
1000 | 30 | 8,54 | 6,49 | 15,70 | 20,05 | 19,05 | 14,11 | 15,68 |
Таблица 15. Процент CD8 клеток, экспрессирующих все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25) | |||||||
Донор | ||||||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
- | - | 0,25 | 0,15 | 0,19 | 0,51 | 0,27 | 0,02 | 0,20 |
30 | - | 0,14 | 0,14 | 0,36 | 0,75 | 0,30 | 0,06 | 0,65 |
1000 | - | 0,23 | 0,16 | 0,39 | 0,93 | 0,42 | 0,08 | 0,41 |
- | 30 | 0,20 | 0,13 | 0,61 | 0,80 | 0,87 | 0,02 | 0,54 |
30 | 30 | 0,35 | 0,22 | 1,29 | 1,56 | 1,40 | 0,19 | 0,66 |
1000 | 30 | 0,30 | 0,28 | 1,62 | 1,63 | 1,97 | 0,17 | 0,66 |
Таблица 16. Средний процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69, CD25, какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Средний процент CD8 клеток, экспрессирующих маркер (маркеры) активации | |||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | LAG-3 | CD69 | CD25 | Любой | Все три |
- | - | 0,66 | 6,97 | 1,12 | 7,42 | 0,23 |
30 | - | 0,92 | 9,14 | 1,46 | 9,66 | 0,34 |
1000 | - | 1,07 | 9,96 | 1,56 | 10,53 | 0,37 |
- | 30 | 1,17 | 9,96 | 2,30 | 10,66 | 0,45 |
30 | 30 | 1,83 | 12,95 | 3,20 | 13,81 | 0,81 |
1000 | 30 | 2,23 | 13,25 | 3,28 | 14,23 | 0,95 |
Таблица 17. Увеличение среднего процента CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69, CD25, какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25) выше среднего исходного уровня, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Средний процент CD8 клеток, экспрессирующих маркер (маркеры) активации | |||||
[Анти-PD1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | LAG-3 | CD69 | CD25 | Любой | Все три |
30 | - | 0,26 | 2,17 | 0,34 | 2,24 | 0,11 |
1000 | - | 0,41 | 2,99 | 0,44 | 3,11 | 0,14 |
- | 30 | 0,51 | 2,99 | 1,18 | 3,24 | 0,23 |
30 | 30 | 1,17 | 5,98 | 2,08 | 6,39 | 0,58 |
1000 | 30 | 1,57 | 6,28 | 2,16 | 6,81 | 0,72 |
Результаты показывают, что стимуляция 30 нг/мл антител анти-PD-1 и 30 нг/мл LAG-3Ig, или 1000 нг/мл антител анти-PD-1 и 30 нг/мл LAG-3Ig приводила к синергетическому увеличению среднего процента CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо или все три маркера активации.
Результаты также показывают, что стимуляция 30 нг/мл антител анти-PD-1 и 30 нг/мл LAG-3Ig приводила к значительно большему среднему проценту CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо или все три маркера активации, чем стимуляция 1000 нг/мл антител анти-PD-1.
На основании данных результатов пришли к выводу, что CD8+ Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством экспрессии маркеров активации Т-клеток), индуцированный относительно низкими дозами анти-PD1 антител, синергетически увеличивался растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что значительно улучшенный CD8+ Т-клеточный ответ in vitro получали с использованием более чем в 30 раз меньше анти-PD1 антител, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3.
Поскольку известно, что ингибиторы пути PD-1 (такие как Кейтруда и Опдиво) активируют CD8+ Т-клетки и данная активация связана с противораковым действием, результаты, представленные в примерах выше, предоставляют доказательство, что улучшенное противораковое действие может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 или его производным, который способен связываться с молекулами MHC класса II. В качестве альтернативы, аналогичное противораковое действие может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 (или его производным, которое способно связываться с молекулами MHC класса II) при более низких дозах (например, в дозах 10-30 раз ниже) ингибитора пути PD-1 по сравнению с введением ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии. Такое совместное введение, как ожидается, уменьшает побочные эффекты, вызванные ингибитором пути PD-1.
Аналогично, поскольку также известно, что активация CD8+ Т-клеток эффективна против инфекции, включая хроническую или персистирующую инфекцию, результаты, представленные в примерах выше, также предоставляют доказательство, что совместное введение ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 или его производным, который способен связываться с молекулами MHC класса II, можно применять для более эффективного предотвращения, лечения или улучшения инфекции. В качестве альтернативы, аналогичное действие против инфекции может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 (или его производным, которое способно связываться с молекулами MHC класса II) при более низких дозах (например, при дозах в 30-100 раз ниже) ингибитора пути PD-1 по сравнению с введением ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии. Такое совместное введение, как ожидается, уменьшает побочные эффекты, вызванные ингибитором пути PD-1.
Пример 5
Связывание производных LAG-3 с MHC класса II-положительными клетками
Несколько производных LAG-3 были протестированы на их способность связываться с MHC класса II-положительными клетками:
i) домены D1-D4 LAG-3, связанные с последовательностью Fc иммуноглобулина (Ig Fc) посредством первого линкера (LAG-3 D1D4-линкер1-Ig, sLAG-3 D1D4-Ig, LAG-3Ig или IMP321);
ii) домены D1-D4 LAG-3, связанные с последовательностью Fc иммуноглобулина вторым линкером (LAG-3 D1D4-линкер2-Ig, или sLAG-3 D1D4-линкерB-Ig);
iii) домены D1 и D2 of LAG-3, связанные с последовательностью Fc иммуноглобулина посредством второго линкера (LAG-3 D1D2-линкер2-Ig, или sLAG-3 D1D2-линкерB-Ig); и
iv) домены D1-D4 LAG-3, связанные с последовательностью Fc иммуноглобулина посредством первого линкера, но с мутацией в сайте связывания MHC класса II домена D1 LAG-3, в позиции R75 (R75A), которая улучшает связывание с молекулами MHC класса II в три раза или более (Huard et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94:5744) (IMP321 R75A).
Производные проиллюстрированы на фигуре 7.
MHC класса II+ клетки Раджи инкубировали в течение 45 минут при 4°C с различными концентрациями производных LAG-3 или с человеческим антителом IgG1 (hIgG1) в качестве отрицательного контроля. Молекулы LAG-3, связанные с поверхностью клеток, выявляли с помощью конъюгированных с FITC козьих антимышиных Ig (Coulter). Клетки подвергали анализу посредством проточной цитометрии. Результаты, выраженные в виде единиц интенсивности флуоресценции, показаны на фигуре 8. Результаты показывают, что все производные LAG-3 связаны с MHC класса II-положительными клетками.
Пример 6
Подавление связывания производного LAG-3 IMP321 с MHC класса II-положительными клетками антителами, которые блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II
17B4 и 11E3 представляют собой анти-LAG-3 моноклональные антитела, которые, как известно, блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II. Связывание конъюгата IMP321 (LAG-3Ig-Alexa 488) с MHC класса II-положительными В-клетками (клетки Раджи) определяли после предварительной инкубации конъюгата (4мкг/мл при 4°C) с блокирующим антителом 17B4 или 11E3, или с изотипически сходным моноклональным антителом (mIgG1) отрицательного контроля. Флуоресцентный анализ клеток выполняли с использованием сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS). Результаты показаны на фигуре 9.
Результаты показывают, что связывание IMP321 с клетками Раджи подавлялось LAG-3-специфичными моноклональными антителами, которые блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II.
Пример 7
Активация моноцитов производными LAG-3
Клетки THP-1 инкубировали в течение 4 часов при 4°C с производными LAG-3, проиллюстрированными на фигуре 5, или с человеческим IgG1 в качестве отрицательного контроля. Величину секреции клетками THP-1 хемокина CCL4 и цитокин Фактор некроза опухоли-α, TNF-α, определяли и использовали в качестве показателя активации моноцитов. Количественно определяли секрецию CCL4 и TNF-α в клеточном супернатанте с использованием Cytometric Beads Array. Результаты определения CCL4 показаны на фигуре 10, а результаты определения TNF-α показаны на фигуре 11.
Результаты показывают, что все производные LAG-3 были способны активировать моноциты THP-1.
Пример 8
Подавление индуцированной IMP321 активации моноцитов антителами, которые блокируют связывание LAG-3 с молекулами MHC класса II
IMP321 (20 нг/мл) предварительно инкубировали с антителом 17B4 или 11E3 (5 минут при 37°C) перед инкубацией смеси с клетками THP-1 в течение 4 часов при 37°C. Величину секреции CCL4 клетками THP-1 использовали для определения уровня активации моноцитов. Результаты двух экспериментов показаны на фигуре 12.
Результаты демонстрируют, что индуцированная IMP321 активация моноцитов подавляется блокированием анти-LAG-3 mAb 17B4 и 11E3. Это указывает на то, что способность IMP321 to активировать моноциты зависит от связывания IMP321 с молекулами MHC класса II.
Пример 9
Активации первичных антиген-презентирующих клеток (APC) производными LAG-3
Человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) инкубировали в течение 4 часов при 37°C с производными LAG-3, проиллюстрированными на фигуре 7, или с человеческим IgG1 в качестве отрицательного контроля, в присутствии брефелдина, ингибитора секреции. Цитокиновый ответ APC, присутствующих в PBMC, определяли посредством внутриклеточного окрашивания CCL4, хемокина, который как известно благоприятствует Th1 и CD8-положительному ответу, и TNF-α, многофункционального цитокина, который непосредственно подавляет опухолеобразование. Результаты анализировали посредством цитометрии. Результаты, представленные в виде процента клеток, экспрессирующих CCL4 и/или TNF-α в MHC класса II-положительных клетках, показаны на фигуре 13.
Результаты показывают, что все протестированные производные LAG-3 индуцируют продукцию CCL4 и TNF-α в первичных APC.
Пример 10
Активация CD8+ Т-клеток производными LAG-3
Человеческие PBMC инкубировали в течение 18 часов с производными LAG-3, проиллюстрированными на фигуре 7, или с человеческим IgG1 в качестве отрицательного контроля. Брефелдин присутствовал в течение последних 16 часов инкубации. Цитокиновый ответ CD8+ Т-клеток после 18 часового воздействия производными LAG-3 сопровождали внутриклеточным окрашиванием CCL4, IFN-γ и TNF-α и анализировали посредством цитометрии. Результаты, представленные в виде процента клеток, экспрессирующих CCL4, IFN-γ и/или TNF-α в CD3+ /CD8+ Т-клетках, показаны на фигуре 14.
Результаты показывают, что все протестированные производные LAG-3 индуцируют активацию типа 1 цитотоксических CD8-положительных Т-клеток (клетки Tc1). Можно заключить, что через связывание с молекулами MHC класса II, экспрессируемыми APC, производные LAG-3 индуцируют активацию клеток Tc1. Активация клеток Tc1 формирует основной противоопухолевый иммунный ответ.
Пример 11
Действие LAG-3Ig и анти-PD-L1 на экспрессию маркеров активации, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig) и анти-PD-L1 антител на экспрессию маркеров активации Т-клеток.
PBMC от 12 здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунка, при 1 M/мл в complete RPMI +10% FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающих последовательность CMV pp35 в трех повторностях, без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 3000 нг/мл анти-PD-L1 гуманизированных антител (BPS Bioscience, каталог # 71213), с 30 нг/мл LAG-3Ig или с 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD-L1 антител.
Т-клеточный ответ оценивали посредством фенотипирования клеток на экспрессию трех маркеров активации (LAG-3, CD69 и CD25) через три дня после стимуляции посредством проточной цитометрии.
Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69 или CD25, по меньшей мере один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25), в объединенных повторениях, для каждого состояния стимуляции, отмечены в Таблицах 18-22 ниже. Средние показатели результатов, полученных для 12 доноров, показаны в Таблице 23, а увеличение среднего значения выше среднего исходного уровня показано в Таблице 24. Результаты для каждого донора также нанесены на фигуре 16, и статистические различия (*p<0,05) показаны черным.
Таблица 18. Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3 | ||||||||||||
Донор | |||||||||||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
- | - | 1,33 | 0,65 | 1,07 | 0,86 | 1,11 | 1,21 | 2,08 | 0,83 | 0,45 | 0,67 | 1,52 | 0,90 |
30 | - | 1,54 | 0,81 | 0,63 | 1,39 | 1,18 | 1,36 | 2,70 | 1,11 | 0,66 | 0,76 | 1,22 | 1,02 |
- | 30 | 2,05 | 1,44 | 2,07 | 1,92 | 2,29 | 1,43 | 4,93 | 3,60 | 1,01 | 1,29 | 1,05 | 1,22 |
30 | 30 | 2,06 | 1,83 | 1,72 | 2,14 | 3,69 | 1,53 | 4,79 | 3,62 | 0,72 | 1,89 | 1,49 | 1,17 |
3000 | - | 1,43 | 1,16 | 0,95 | 1,36 | 1,50 | 1,79 | 1,84 | 1,13 | 0,55 | 0,87 | 1,92 | 1,37 |
Таблица 19. Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD69, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD69 | ||||||||||||
Донор | |||||||||||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
- | - | 10,33 | 2,91 | 14,62 | 4,70 | 5,49 | 3,44 | 9,91 | 1,46 | 3,11 | 3,93 | 4,09 | 2,99 |
30 | - | 6,19 | 4,32 | 18,07 | 8,70 | 5,21 | 5,58 | 8,79 | 1,40 | 2,69 | 3,43 | 3,54 | 3,28 |
- | 30 | 9,15 | 3,79 | 13,73 | 9,63 | 11,16 | 7,24 | 20,89 | 11,01 | 4,04 | 6,70 | 3,08 | 3,28 |
30 | 30 | 5,96 | 10,79 | 21,35 | 13,21 | 16,88 | 11,55 | 20,82 | 12,70 | 3,53 | 8,44 | 4,23 | 3,88 |
3000 | - | 6,62 | 7,79 | 21,20 | 7,31 | 8,61 | 7,19 | 12,14 | 1,93 | 3,20 | 4,27 | 3,21 | 3,17 |
Таблица 20. Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD25, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих CD25 | ||||||||||||
Донор | |||||||||||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
- | - | 1,78 | 0,63 | 2,14 | 1,45 | 1,59 | 1,89 | 1,59 | 0,65 | 0,64 | 0,61 | 1,74 | 1,36 |
30 | - | 1,54 | 0,62 | 2,57 | 3,47 | 2,16 | 3,02 | 1,71 | 0,76 | 0,71 | 0,62 | 1,60 | 1,74 |
- | 30 | 3,34 | 1,73 | 3,64 | 4,61 | 6,71 | 4,23 | 5,99 | 8,03 | 1,34 | 3,18 | 1,38 | 1,37 |
30 | 30 | 3,03 | 4,41 | 5,19 | 7,13 | 9,03 | 6,50 | 5,30 | 10,65 | 1,25 | 4,70 | 2,18 | 1,91 |
3000 | - | 2,06 | 2,42 | 3,00 | 3,72 | 3,00 | 4,24 | 1,95 | 1,18 | 0,43 | 1,57 | 1,64 | 1,65 |
Таблица 21. Процент CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) |
||||||||||||
Донор | |||||||||||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
- | - | 11,59 | 3,34 | 15,98 | 5,53 | 6,84 | 4,97 | 11,58 | 2,15 | 3,50 | 4,27 | 4,79 | 3,38 |
30 | - | 7,22 | 4,81 | 19,17 | 10,62 | 6,55 | 7,28 | 10,97 | 2,14 | 3,21 | 3,92 | 4,09 | 3,99 |
- | 30 | 10,52 | 4,66 | 15,20 | 10,75 | 13,22 | 8,79 | 24,48 | 13,28 | 4,47 | 7,26 | 3,47 | 3,88 |
30 | 30 | 7,42 | 11,95 | 22,97 | 15,16 | 18,99 | 13,42 | 24,43 | 15,94 | 3,98 | 9,11 | 4,62 | 4,40 |
3000 | - | 7,77 | 9,22 | 22,14 | 9,82 | 10,16 | 8,93 | 13,95 | 2,78 | 3,56 | 4,83 | 4,21 | 3,78 |
Таблица 22. Процент CD8 клеток, экспрессирующих все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Процент CD8 клеток, экспрессирующих все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25) | ||||||||||||
Донор | |||||||||||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
- | - | 0,38 | 0,32 | 0,45 | 0,28 | 0,28 | 0,30 | 0,51 | 0,23 | 0,11 | 0,25 | 0,88 | 0,67 |
30 | - | 0,53 | 0,29 | 0,19 | 0,55 | 0,39 | 0,34 | 0,59 | 0,37 | 0,19 | 0,21 | 0,80 | 0,77 |
- | 30 | 0,82 | 0,59 | 0,77 | 1,13 | 1,23 | 0,75 | 1,42 | 2,35 | 0,52 | 0,78 | 0,79 | 0,70 |
30 | 30 | 0,81 | 0,96 | 0,65 | 1,36 | 2,51 | 0,52 | 1,43 | 2,19 | 0,34 | 1,30 | 1,19 | 0,86 |
3000 | - | 0,57 | 0,40 | 0,29 | 0,58 | 0,49 | 0,52 | 0,50 | 0,39 | 0,18 | 0,39 | 0,92 | 0,95 |
Таблица 23. Средний процент CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69, CD25, какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25), для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Средний процент CD8 клеток, экспрессирующих маркер(маркеры) активации | |||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | LAG-3 | CD69 | CD25 | Any one | All three |
- | - | 1,06 | 5,58 | 1,34 | 6,49 | 0,39 |
30 | - | 1,20 | 5,93 | 1,71 | 7,00 | 0,43 |
- | 30 | 2,03 | 8,64 | 3,80 | 10,00 | 0,99 |
30 | 30 | 2,22 | 11,11 | 5,10 | 12,70 | 1,18 |
3000 | - | 1,32 | 7,22 | 2,24 | 8,43 | 0,51 |
Таблица 24. Увеличение среднего процента CD8 клеток, экспрессирующих LAG-3, CD69, CD25, какой-либо один из трех маркеров активации (LAG-3, CD69 или CD25) или все три маркера активации (LAG-3, CD69 и CD25) выше среднего исходного уровня, для каждого отдельного условия стимуляции
Условия стимуляции | Увеличение среднего процента CD8 клеток, экспрессирующих маркер(маркеры) активации | |||||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | LAG-3 | CD69 | CD25 | Any one | All three |
30 | - | 0,14 | 0,35 | 0,37 | 0,51 | 0,04 |
- | 30 | 0,97 | 3,06 | 2,46 | 3,51 | 0,60 |
30 | 30 | 1,16 | 5,53 | 3,76 | 6,21 | 0,79 |
3000 | - | 0,26 | 1,64 | 0,90 | 1,94 | 0,12 |
Результаты показывают, что стимуляция 30 нг/мл анти-PD-L1 антител и 30 нг/мл LAG-3Ig приводила к синергетическому увеличению среднего процента CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо или все три маркера активации.
Результаты также показывают, что стимуляция 30 нг/мл анти-PD-L1 антител и 30 нг/мл LAG-3Ig приводила к значительно большему среднему проценту CD8 клеток, экспрессирующих какой-либо или все три маркера активации, чем стимуляция 3000 нг/мл только анти-PD-L1 антител.
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro CD8+ (как измерено посредством экспрессии маркеров активации Т-клеток), индуцированный относительно низкими дозами анти-PD-L1 антител, синергетически увеличивался растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что значительно улучшенный CD8+ Т-клеточный ответ in vitro получен с использованием в 100 раз меньше анти-PD-L1 антител, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3.
Поскольку известно, что ингибиторы пути PD-1 (такие как Кейтруда и Опдиво) активируют CD8+ Т-клетки и эта активация связана с противораковым действием, результаты, представленные в примерах выше, предоставляют доказательство, что улучшенное противораковое действие может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 или его производным, который способен связываться с молекулами MHC класса II. В качестве альтернативы, аналогичное противораковое действие может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 (или его производным, которое способно связываться с молекулами MHC класса II) при более низких дозах (например, при дозах в 30-100 раз ниже) ингибитора пути PD-1 по сравнению с введение ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии. Такое совместное введение, как ожидается, уменьшает побочные эффекты, вызванные ингибитором пути PD-1.
Аналогично, поскольку известно, что активация Т-клеток CD8+ также эффективна против инфекции, включая хронические или персистирующие инфекции, результаты, представленные в примерах выше, также предоставляют доказательство, что совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 или его производным, который способен связываться с молекулами MHC класса II, можно применять для предотвращения, лечения или улучшения инфекция более эффективно. В качестве альтернативы, аналогичное действие против инфекции может быть получено посредством совместного введения ингибитора пути PD-1 с белком LAG-3 (или его производным, которое способно связываться с молекулами MHC класса II) в более низких дозах (например, в дозах в 30-100 раз ниже) ингибитора пути PD-1 по сравнению с введением ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии. Такое совместное введение, как ожидается, уменьшает побочные эффекты, вызванные ингибитором пути PD-1.
Пример 12
Действие LAG-3Ig и различных анти-PD-1 или анти-PD-L1 антител на продукцию IFN-γ и TNF-α, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие растворимого производного LAG-3 (LAG-3Ig) и множества различных анти-PD-1 или анти-PD-L1 антител на активацию Т-клеток in vitro с использованием анализов секреции IFN-γ и TNF-α.
PBMC от здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунка при 1 M/мл в полном RPMI +10% FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающих последовательность CMV pp35 в трех повторностях, без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 1000 нг/мл антител анти-PD-1 (Ab1 или Ab2) или анти-PD-L1 антител (Ab3, Ab4, Ab5 или Ab6), с 10 или 30 нг/мл LAG-3Ig или с 10 или 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD-1 или анти-PD-L1 антител.
Т-клеточный ответ оценивали посредством измерения концентрации IFN-γ и TNF в супернатанте клеточной культуры через три дня после стимуляции с использованием BD Cytometric Bead Array.
Анти-PD-1: Ab1 (клон MIH4 из BD Pharmingen, каталог #557823) и Ab2 (гуманизированное анти-PD-1 из BPS bioscience, каталог #71120);
Анти-PD-L1: Ab3 (клон MIH1 от eBioscience, каталог #16-5983-82), Ab4 (клон MIH5 от eBioscience каталог #16-5982-81), Ab5 (Клон 1-111A от eBioscience каталог #14-9971-81) и Ab6 (гуманизированное анти-PD-L1 от BPS bioscience, каталог #71213).
Концентрации IFN-γ и TNF-α в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции для антител анти-PD-1 отмечены в Таблице 25. Результаты нанесены на фигуре 17.
Таблица 25. Секреция IFN-γ и TNF-α, индуцированная антигеном в присутствии антител анти-PD-1 с LAG-3Ig и без него
Антитело анти-PD-1 | Условия стимуляции | Концентрация (пг/мл) | Увеличение концентрации (пг/мл) выше исходного уровня | |||
[Анти-PD-1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | IFNγ | TNF-α | IFNγ | TNF-α | |
Ab1 | - | - | 77,7 | 0,2 | - | - |
30 | - | 24,4 | 1,1 | -53,3 | 0,9 | |
- | 30 | 222,3 | 82,4 | 144,6 | 82,2 | |
30 | 30 | 312,8 | 118,9 | 235,1 | 118,7 | |
1000 | 185,4 | 1,8 | 107,7 | 1,6 | ||
Ab2 | - | - | 230,8 | 1,692 | - | - |
30 | - | 406,9 | 4,255 | 176,1 | 2,563 | |
10 | 249,0 | 11,55 | 18,2 | 9,858 | ||
30 | 10 | 504,6 | 14,47 | 273,8 | 12,778 | |
1000 | 258,1 | 4,186 | 27,3 | 2,494 |
Результаты показывают, что для каждого антитела анти-PD-1 секреция IFN-γ увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии LAG-3Ig и более низких концентраций антител анти-PD-1, по сравнению только с антителом анти-PD-1. Например, увеличение концентрации IFN-γ выше исходного уровня (т.е. концентрации IFN-γ при отсутствии анти-PD-1 и LAG-3Ig) в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab1 антител анти-PD-1, или 10 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab2 антител анти-PD-1 было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии только LAG-3Ig и 30 нг/мл только антител анти-PD-1 (т.е. для Ab1 235,1 > -53,3+144,6; для Ab2 273,8 > 176,1+18,2). Действие комбинации LAG-3Ig и каждого отдельного антитела анти-PD-1 было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция IFN-γ, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией антител анти-PD-1 (30 нг/мл), была намного выше, чем секреция IFN-γ, индуцированная гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более чем в 30 раз выше) только антител анти-PD-1 (т.е. для Ab1 235,1 > 107,7; для Ab2 273,8 > 27,3).
В отношении секреции TNF-α, только антитело анти-PD-1 (в относительно низкой или высокой концентрации) тоже не оказывало влияния на секрецию TNF-α. Однако, для каждого антитела анти-PD-1 секреция TNF-α увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии LAG-3Ig и более низких концентраций антитела анти-PD-1, по сравнению только с антителом анти-PD-1. Например, увеличение концентрации TNF-α выше исходного уровня (т.е. концентрации TNF-α при отсутствии анти-PD-1 и LAG-3Ig) в присутствии 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab1 антител анти-PD-1, или 10 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab2 антител было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии только LAG-3Ig и 30 нг/мл только антител анти-PD-1 (т.е. для Ab1 118,7 > 0,9+82,2; для Ab2 12,778 > 2,563+9,858). Действие комбинации LAG-3Ig и каждого отдельного антитела анти-PD-1 было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция TNF-α, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией антител анти-PD-1 (30 нг/мл) была значительно выше, чем секреция TNF-α, индуцированная гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более чем в 30 раз выше) только антител анти-PD-1 (т.е. для Ab1 118,7 > 1,6; for Ab2 12,778 > 2,494).
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством секреции IFN-γ и TNF-α), индуцированный относительно низкими дозами антител анти-PD-1, синергетически увеличивался растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что значительно больший Т-клеточный ответ in vitro получен с использованием более чем в 30 раз меньше антител анти-PD-1, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3. Эти эффекты наблюдали с различными антителами анти-PD-1.
Концентрации IFN-γ и TNF-α в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции для анти-PD-L1 антител отмечены в Таблице 26. Результаты показаны на фигуре 18.
Таблица 26. Секреция IFN-γ и TNF-α, индуцированная антигеном в присутствии анти-PD-L1 антител, с LAG-3Ig и без него
Антитело анти-PD-L1 | Условия стимуляции | Концентрация (пг/мл) | Увеличение концентрации (пг/мл) выше исходного уровня | |||
[Анти-PD-L1] (нг/мл) | [LAG-3Ig] (нг/мл) | IFNγ | TNF-α | IFNγ | TNF-α | |
Ab3 | - | - | 72,9 | 2,3 | - | - |
30 | - | 101,4 | 0,5 | 28,5 | -1,8 | |
- | 10 | 152,0 | 4,7 | 79,1 | 2,4 | |
30 | 10 | 299,4 | 11,3 | 226,5 | 9,0 | |
1000 | 128,4 | 2,9 | 55,5 | 0,6 | ||
Ab4 | - | - | 50,06 | 5,57 | - | - |
30 | - | 52,37 | 7,65 | 2,31 | 2,08 | |
10 | 58,06 | 64,28 | 8,00 | 58,71 | ||
30 | 10 | 176,09 | 85,91 | 126,03 | 80,34 | |
1000 | 39,40 | 8,07 | -10,66 | 2,50 | ||
Ab5 | - | - | 238,21 | 7,70 | - | - |
30 | - | 268,32 | 13,23 | 30,11 | 5,53 | |
- | 30 | 258,05 | 91,94 | 19,84 | 84,21 | |
30 | 30 | 418,55 | 145,54 | 180,34 | 137,84 | |
1000 | 249,10 | 11,70 | 10,89 | 4,00 | ||
Ab6 | - | - | 238,21 | 7,70 | - | - |
30 | - | 221,70 | 58,47 | -16,51 | 50,77 | |
30 | 258,05 | 91,94 | 19,84 | 84,24 | ||
30 | 30 | 333,35 | 108,69 | 95,14 | 100,99 | |
1000 | 188,60 | 55,51 | -49,61 | 47,81 |
Результаты показывают, что для каждого антитела анти-PD-L1 секреция IFN-γ увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии LAG-3Ig и более низких концентраций анти-PD-L1 антител по сравнению только с антителами анти-PD-L1. Например, увеличение концентрации IFN-γ выше исходного уровня (т.е. концентрации IFN-γ при отсутствии анти-PD-L1 и LAG-3Ig) в присутствии 10 или 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл анти-PD-L1 антител было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии 10 или 30 нг/мл только LAG-3Ig и 30 нг/мл только анти-PD-L1 антител (т.е. для Ab3 226,5 > 28,5+79,1; для Ab4 126,03 > 2,31+8,00; for Ab5 180,34 > 19,84+30,11; for Ab6 95,14 > -16,51+19,84). Действие комбинации LAG-3Ig и каждого отдельного антитела анти-PD-L1 было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция IFN-γ, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией анти-PD-L1 антител (30 нг/мл), была значительно выше, чем секреция IFN-γ, индуцированная гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более чем в 30 раз выше) только анти-PD-L1 антител (т.е. для Ab3 226,5 > 55,5; для Ab4 126,03 > -10,66; для Ab5 180,34 > 10,89; для Ab6 95,14 > -49,61).
В отношении секреции TNF-α, для анти-PD-L1 антител Ab3, Ab4 и Ab5, секреция TNF-α увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии LAG-3Ig и более низких концентраций анти-PD-L1 антител по сравнению только с антителами анти-PD-L1. Например, увеличение концентрации TNF-α выше исходного уровня (т.е. концентрации TNF-α при отсутствии анти-PD-L1 и LAG-3Ig) в присутствии 10 или 30 нг/мл LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab3, Ab4 или Ab5 анти-PD-L1 антител было более значительным, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии только LAG-3Ig и 30 нг/мл Ab3, Ab4 или Ab5 только анти-PD-L1 антител (т.е. для Ab3 9,0 > -1,8+2,4; для Ab4 80,34 > 2,08+58,71; для Ab5 137,84 > 5,53+84,21). Действие комбинации LAG-3Ig и этих различных анти-PD-L1 антител было, таким образом, синергетическим.
Хотя синергетическое действие на секрецию TNF-α для антитела анти-PD-L1 Ab6 в комбинации с LAG-3Ig не наблюдалось, это могло быть вследствие высокого уровня секреции TNF-α в присутствии только данного антитела. Тем не менее, уровень секреции TNF-α в присутствии комбинации Ab6 и LAG-3Ig был выше, чем в присутствии только антитела Ab6 (при 30 нг/мл и при 1000 нг/мл).
Результаты также показывают, что секреция TNF-α, индуцированная комбинацией LAG-3Ig и относительно низкой концентрацией антитела анти-PD-L1 (30 нг/мл) была значительно выше, чем секреция TNF, индуцированная гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более 30 раз выше) только антитела анти-PD-L1 (т.е. для Ab3 9,0 > 0,6; для Ab4 80,34 > 2,50; для Ab5 137,84 > 4,00; for Ab6 100,99 > 47,81).
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством секреции IFN-γ и TNF), индуцированный относительно низкими дозами антитела анти-PD-L1, синергетически увеличивался растворимым производным LAG-3. Также пришли к выводу, что значительно больший Т-клеточный ответ in vitro получен с использованием более чем в 30 раз меньше анти-PD-L1 антител, если их комбинировали с растворимым производным LAG-3. Данный эффект наблюдали с различными антителами анти-PD-L1.
Пример 13
Действие производных LAG-3 и антитела анти-PD-1 на продукцию IFN-γ, индуцированную антигенной стимуляцией
Этот пример демонстрирует действие множества различных растворимых производных LAG-3 (производных (i), (ii) и (iv) описаны в Примере 5 и проиллюстрированы на фигуре 7) и антитела анти-PD-1 на активацию Т-клеток in vitro с использованием анализа секреции IFN-γ.
PBMC от здоровых доноров (0,2×106 клеток/лунку при 1 M/мл в полном RPMI+10% FBS) инкубировали с пулом пептидов, охватывающих последовательность CMV pp35 в трех повторностях, без какой-либо добавки (среды), с 30 нг/мл или 1000 нг/мл антитела анти-PD-1 (клон EH12), с 30 нг/мл производное LAG-3 (IMP321, IMP321 R75A или LAG3 D1D4-линкер2-Ig) или с 30 нг/мл производного LAG-3 и 30 нг/мл анти-PD-1.
Т-клеточный ответ оценивали посредством измерения концентрации IFN-γ в супернатанте клеточной культуры через три дня после стимуляции с использованием BD Cytometric Bead Array.
Концентрация IFN-γ в объединенных повторениях для каждого состояния стимуляции отмечена в Таблице 27. Результаты показаны на фигуре 19.
Таблица 27. Секреция IFN-γ, индуцированная антигеном в присутствии антитела анти-PD-1 с различными производными LAG-3 и без них
Условия стимуляции | Концентрация IFN-γ (пг/мл) | Увеличение [IFNγ] (пг/мл) выше исходного уровня | |
[Анти-PD-1] (нг/мл) | Производное LAG-3 (30 нг/мл) | ||
- | - | 107,5 | - |
30 | - | 129,8 | 22,3 |
- | IMP321 | 357,2 | 249,7 |
30 | IMP321 | 679,8 | 572,3 |
- | IMP321 R75A | 424,8 | 317,3 |
30 | IMP321 R75A | 618,7 | 511,2 |
- | LAG3 D1D4-линкер2-Ig | 365,5 | 258,0 |
30 | LAG3 D1D4-линкер2-Ig | 628,2 | 520,7 |
1000 | - | 193,4 | 85,9 |
Результаты показывают, что для каждого производного LAG-3 секреция IFN-γ увеличивалась, когда PBMC инкубировали в присутствии 30 нг/мл производного LAG-3 и 30 нг/мл антитела анти-PD-1 по сравнению с 30 нг/мл производного LAG-3 или только 30 нг/мл антитела анти-PD-1. Например, увеличение концентрации IFN-γ выше исходного уровня (т.е. концентрации IFN-γ при отсутствии анти-PD-1 и производного LAG-3) в присутствии 30 нг/мл производного LAG-3 и 30 нг/мл антитела анти-PD-1 была значительнее, чем сумма соответствующего увеличения в присутствии 30 нг/мл производного LAG-3 alone и 30 нг/мл только антитела анти-PD-1 (т.е. для IMP321 572,3 > 249,7+22,3; для IMP321 R75A 511,2 > 317,3+22,3; для LAG3 D1D4-линкер2-Ig 520,7 > 258,0+22,3). Действие комбинации антитела анти-PD-1 и каждого отдельного производного LAG-3 было, таким образом, синергетическим.
Результаты также показывают, что секреция IFN-γ, индуцированная комбинацией каждого производного LAG-3 и относительно низкой концентрацией антитела анти-PD-1 (30 нг/мл), была значительно выше, чем секреция IFN-γ, индуцированная гораздо более высокой концентрацией (1000 нг/мл, более чем в 30 раз выше) только антитела анти-PD-1 (т.е. для IMP321 572,3 > 85,9; для IMP321 R75A, 511,2 > 85,9; для LAG3 D1D4-линкер2-Ig 520,7 > 85,9).
На основании данных результатов пришли к выводу, что Т-клеточный ответ in vitro (как измерено посредством секреции IFN-γ), индуцированный относительно низкими дозами антитела анти-PD-1, синергетически увеличивался множеством различных растворимых производных LAG-3, каждое из которых сохраняет способность связывать MHC класса II-положительные клетки. Также пришли к выводу, что значительно больший Т-клеточный ответ in vitro получен с использованием более чем в 30 раз меньше антитела анти-PD-1, если его комбинировали с любым из растворимых производных LAG-3.
Claims (16)
1. Комбинированный препарат для лечения рака или улучшения состояния при раке, который содержит:
(a) растворимый белок LAG-3 или производное белка LAG-3, которое способно связываться с молекулами MHC класса II, где производное белка LAG-3 содержит рекомбинантный растворимый человеческий LAG-3Ig слитый белок IMP321, и где растворимый белок LAG-3 или производное белка LAG-3 связывается с молекулами MHC класса II на антиген-презентирующих клетках (APC), таким образом активируя APC и также активируя Т-клетки; и
(b) ингибитор пути белка запрограммированной смерти клетки-1 (PD-1), где ингибитор пути PD-1 содержит анти-PD-1 антитело или анти-PD-L1 антитело.
2. Комбинированный препарат по п. 1 для совместного введения или последовательного введения белка LAG-3 или его производного и ингибитора пути PD-1.
3. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом белок LAG-3 или его производное присутствует в дозе, которая является молярным эквивалентом 0,25-30 мг LAG-3Ig слитого белка IMP321.
4. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, который содержит множество доз белка LAG-3 или его производного.
5. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, который содержит множество доз ингибитора пути PD-1.
6. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом ингибитор пути PD-1 содержит антитело анти-PD-1.
7. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом анти-PD-1 антитело представляет собой пембролизумаб, или ниволумаб, или пидилизумаб.
8. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом ингибитор пути PD-1 содержит антитело анти-PD-L1.
9. Комбинированный препарат по п. 8, при этом анти-PD-L1 антитело представляет собой BMS-936559, MEDI4736, MPDL3280A или MSB0010718C.
10. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом ингибитор пути PD-1 присутствует в дозе, составляющей вплоть до 50%, 1-50%, 1-25% или 1-10% обычно назначаемой дозы ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии.
11. Комбинированный препарат по п. 1 или 2, при этом ингибитор пути PD-1 присутствует в дозе, составляющей 0,1-50%, 0,1-25%, 0,1-20%, 0,1-10%, <20%, <10%, 0,1-<20%, 0,1-<10%, 0,01-<20% или 0,01-<10% обычно назначаемой дозы ингибитора пути PD-1 в виде монотерапии.
12. Применение комбинированного препарата по любому из пп.1-11 для лечения рака или улучшения состояния при раке.
13. Применение комбинированного препарата по п. 12, при этом рак представляет собой рак кожи, легкого, яичников, почек, ободочной кишки, колоректальный рак, молочной железы, желудка, пищевода, поджелудочной железы, мочевого пузыря, уротелия или печени или меланому, рак простаты, рак головы и шеи, рак шейки матки, рак щитовидной железы, глиобластому, глиому, лейкоз, лимфому, рак надпочечников, СПИД-ассоциированный рак, альвеолярную саркому мягких тканей, астроцитарную опухоль, рак костей, рак головного и спинного мозга, метастатическую опухоль головного мозга, опухоль каротидного тельца, хондросаркому, хордому, хромофобную почечноклеточную карциному, светлоклеточную карциному, доброкачественную фиброзную гистиоцитому кожи, десмопластическую мелкокруглоклеточную опухоль, эпендимому, саркому Юинга, внескелетную миксоидную хондросаркому, несовершенный костный фиброгенез, фиброзную дисплазию костей, рак желчного пузыря или желчных путей, гестационную трофобластическую болезнь, эмбрионально-клеточную опухоль, злокачественное заболевание системы крови, гепатоцеллюлярную карциному, опухоль островковых клеток поджелудочной железы, саркому Капоши, рак почек, липому/доброкачественную липоматозную опухоль, липосаркому/злокачественную липоматозную опухоль, медуллобластому, менингиому, карциному клеток Меркеля, множественные эндокринные неоплазии, множественную миелому, миелодиспластический синдром, нейробластому, нейроэндокринную опухоль, папиллярную карциному щитовидной железы, опухоль паращитовидных желез, рак у детей, злокачественную опухоль оболочек периферических нервов, феохромоцитому, опухоль гипофиза, рак простаты, увеальную меланому заднего отдела глаза, редкие гематологические расстройства, метастатический рак почки, рабдоидную опухоль, рабдомиосаркому, саркому, саркому мягких тканей, плоскоклеточный рак, рак желудка, синовиальную саркому, рак яичка, рак вилочковой железы, тимому, метастатический рак щитовидной железы или рак матки.
14. Применение комбинированного препарата по п. 13, где рак легкого представляет собой плоскоклеточную или неплоскоклеточную немелкоклеточную карциному легкого, NSCLC, меланома представляет собой метастатическую злокачественную меланому, рак простаты представляет собой гормонорезистентную аденокарциному простаты, рак головы и шеи представляет собой плоскоклеточную карциному головы и шеи, или лимфома представляет собой В-клеточную лимфому.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1500374.2 | 2015-01-09 | ||
GBGB1500374.2A GB201500374D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-01-09 | Combined preparations for the treatment of cancer |
PCT/EP2016/050321 WO2016110593A1 (en) | 2015-01-09 | 2016-01-08 | Combined preparations for the treatment of cancer or infection |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2022121403A Division RU2022121403A (ru) | 2015-01-09 | 2016-01-08 | Комбинированные препараты для лечения рака или инфекции |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017127000A RU2017127000A (ru) | 2019-02-11 |
RU2017127000A3 RU2017127000A3 (ru) | 2019-07-30 |
RU2777945C2 true RU2777945C2 (ru) | 2022-08-12 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA003740B1 (ru) * | 1997-07-25 | 2003-08-28 | Энститю Гюстав Русси | Применение лиганда мнс класса ii, представляющего собой lag-3 или производное, мутантную форму или растворимый фрагмент lag-3, для приготовления иммунотерапевтического лекарственного средства |
WO2008156712A1 (en) * | 2007-06-18 | 2008-12-24 | N. V. Organon | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
EP2044949A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Immutep | Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response |
WO2014194293A1 (en) * | 2013-05-30 | 2014-12-04 | Amplimmune, Inc. | Improved methods for the selection of patients for pd-1 or b7-h4 targeted therapies, and combination therapies thereof |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA003740B1 (ru) * | 1997-07-25 | 2003-08-28 | Энститю Гюстав Русси | Применение лиганда мнс класса ii, представляющего собой lag-3 или производное, мутантную форму или растворимый фрагмент lag-3, для приготовления иммунотерапевтического лекарственного средства |
WO2008156712A1 (en) * | 2007-06-18 | 2008-12-24 | N. V. Organon | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
EP2044949A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Immutep | Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response |
WO2014194293A1 (en) * | 2013-05-30 | 2014-12-04 | Amplimmune, Inc. | Improved methods for the selection of patients for pd-1 or b7-h4 targeted therapies, and combination therapies thereof |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЧИССОВ В.И. под ред. и др. Онкология. Национальное руководство. М., "ГЭОТАР-Медиа", 2008, c.323-327. WOO S.-R. et al. Immune Inhibitory Molecules LAG-3 and PD-1 Synergistically Regulate T-cell Function to Promote Tumoral Immune Escape. Cancer Res. 2012 Feb 15; 72(4): 917-927. HEMON P. et al. MHC Class II Engagement by Its Ligand LAG-3 (CD223) Contributes to Melanoma Resistance to Apoptosis. The Journal of Immunology. 2011 may 1; 186(9): 5173-5183. Proc Natl Acad Sci USA, 11: 5744-5749, 1997. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11684654B2 (en) | Combined preparations for the treatment of cancer or infection | |
Piconese et al. | OX40 triggering blocks suppression by regulatory T cells and facilitates tumor rejection | |
Snell et al. | T‐cell intrinsic effects of GITR and 4‐1BB during viral infection and cancer immunotherapy | |
US20230078665A1 (en) | Cell compositions and methods for cancer therapy | |
CN110799206A (zh) | 使用可溶性cd24治疗癌症疗法中免疫相关不良事件的方法 | |
KR20210093950A (ko) | Il-7 단백질 및 면역 관문 저해제의 조합으로 종양을 치료하는 방법 | |
Wong et al. | Future of immunotherapy in pancreas cancer and the trials, tribulations and successes thus far | |
RU2777945C2 (ru) | Комбинированные препараты для лечения рака или инфекции | |
MacKenzie | New therapeutics that treat rheumatoid arthritis by blocking T-cell activation | |
AU2024204196A1 (en) | Combined preparations for the treatment of cancer or infection | |
US20230023174A1 (en) | Cd80 extracellular domain fc fusion protein regimens | |
BARRERA et al. | Immunotherapy in Lung Cancer: Evolution and Future Perspectives | |
Vidric | The role of inducible costimulatory molecules in immune responses to infection | |
Genovese | and William H. Robinson |