RU2777536C2 - Производные кобаламина и их применение для лечения заболеваний, вызванных отсутствием поступления витамина b12 - Google Patents
Производные кобаламина и их применение для лечения заболеваний, вызванных отсутствием поступления витамина b12 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2777536C2 RU2777536C2 RU2019141483A RU2019141483A RU2777536C2 RU 2777536 C2 RU2777536 C2 RU 2777536C2 RU 2019141483 A RU2019141483 A RU 2019141483A RU 2019141483 A RU2019141483 A RU 2019141483A RU 2777536 C2 RU2777536 C2 RU 2777536C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cobalamin
- cbl
- cblc
- derivatives
- vitamin
- Prior art date
Links
- 150000001867 cobalamins Chemical class 0.000 title claims abstract description 82
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 title 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 title 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 title 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 title 1
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 title 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 58
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 44
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102100005476 MMACHC Human genes 0.000 claims description 78
- 108060004995 MMACHC Proteins 0.000 claims description 78
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2R,3S,4R,5S)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2R)-1-[3-[(1R,2R,3R,4Z,7S,9Z,12S,13S,14Z,17S,18S,19R)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 31
- DQOCFCZRZOAIBN-WZHZPDAFSA-L Hydroxycobalamin Chemical compound O.[Co+2].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O DQOCFCZRZOAIBN-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 11
- 206010001897 Alzheimer's disease Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003340 mental Effects 0.000 claims description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 4
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 claims description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 27
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 abstract description 11
- 230000002829 reduced Effects 0.000 abstract description 8
- 125000003346 cobalamin group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002068 genetic Effects 0.000 abstract description 4
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 abstract 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 abstract 1
- 229940010007 Cobalamins Drugs 0.000 description 38
- RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M cyanocobalamin Chemical compound N#C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 31
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- RMRCNWBMXRMIRW-WYVZQNDMSA-L Vitamin B12 Chemical compound N([C@@H]([C@@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@H](CCC(N)=O)\C(N1[Co+]C#N)=C(/C)\C1=N\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NCC(C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO RMRCNWBMXRMIRW-WYVZQNDMSA-L 0.000 description 26
- 239000011585 methylcobalamin Substances 0.000 description 26
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 22
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 20
- JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M methylcobalamin Chemical compound C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 19
- 235000007672 methylcobalamin Nutrition 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 239000011666 cyanocobalamin Substances 0.000 description 16
- 235000000639 cyanocobalamin Nutrition 0.000 description 16
- 229960002104 cyanocobalamin Drugs 0.000 description 16
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 15
- ZIYVHBGGAOATLY-UHFFFAOYSA-N Methylmalonic acid Chemical compound OC(=O)C(C)C(O)=O ZIYVHBGGAOATLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000004429 atoms Chemical group 0.000 description 14
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 13
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 13
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N Glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 12
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 12
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 12
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 11
- 240000007582 Corylus avellana Species 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 229960003180 Glutathione Drugs 0.000 description 11
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 11
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011789 cobamamide Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- ITFLMCXLENHUAD-WZHZPDAFSA-M oxidanium;cobalt;[(2R,3S,4R,5S)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2R)-1-[3-[(1R,2R,3R,4Z,7S,9Z,12S,13S,14Z,17S,18S,19R)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octame Chemical compound [OH3+].[Co].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O ITFLMCXLENHUAD-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 10
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N Cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940119025 Cysteamine Drugs 0.000 description 9
- 229960003151 Mercaptamine Drugs 0.000 description 9
- 230000036740 Metabolism Effects 0.000 description 9
- ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M cobamamide Chemical compound C1(/[C@](C)(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC2[C@H]([C@H](O[C@@H]2CO)N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O)[C@@H](CC(N)=O)[C@]2(N1[Co+]C[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O1)N1C3=NC=NC(N)=C3N=C1)O)[H])=C(C)\C([C@H](C/1(C)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C/C([C@H]([C@@]\1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C(C)\C1=N[C@]2(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]1CCC(N)=O ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M 0.000 description 9
- 235000006279 cobamamide Nutrition 0.000 description 9
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 9
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 9
- 230000035786 metabolism Effects 0.000 description 9
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N Tiopronin Chemical compound CC(S)C(=O)NCC(O)=O YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010058907 Tiopronin Proteins 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 7
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 7
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 7
- YOZNUFWCRFCGIH-BYFNXCQMSA-L hydroxocobalamin Natural products O[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O YOZNUFWCRFCGIH-BYFNXCQMSA-L 0.000 description 7
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000001603 reducing Effects 0.000 description 7
- 229960004402 tiopronin Drugs 0.000 description 7
- 102000019010 EC 5.4.99.2 Human genes 0.000 description 6
- 108010051862 EC 5.4.99.2 Proteins 0.000 description 6
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 102200030825 MMACHC R161G Human genes 0.000 description 6
- 229910052803 cobalt Inorganic materials 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108010075604 5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 102000011848 5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase Human genes 0.000 description 5
- 230000000378 dietary Effects 0.000 description 5
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 5
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 5
- LJUQGASMPRMWIW-UHFFFAOYSA-N Dimethylbenzimidazole Chemical compound C1=C(C)C(C)=CC2=C1NC=N2 LJUQGASMPRMWIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001103 Hydroxocobalamin Drugs 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 239000011704 hydroxocobalamin Substances 0.000 description 4
- 235000004867 hydroxocobalamin Nutrition 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 125000004433 nitrogen atoms Chemical group N* 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 3
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 3
- 101000508125 CBLC Proteins 0.000 description 3
- 102100019285 CD320 Human genes 0.000 description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 3
- 206010020365 Homocystinuria Diseases 0.000 description 3
- 206010059521 Methylmalonic aciduria Diseases 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 3
- 102100018687 TCN1 Human genes 0.000 description 3
- 101710024751 TCN1 Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- JWMLCCRPDOIBAV-UHFFFAOYSA-N chloro(methylsulfanyl)methane Chemical compound CSCCl JWMLCCRPDOIBAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 3
- 238000006900 dealkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 102000024351 human CBLC protein Human genes 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 3
- 201000003694 methylmalonic acidemia Diseases 0.000 description 3
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 3
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- MYFKLQFBFSHBPA-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-methylsulfanylethane Chemical compound CSCCCl MYFKLQFBFSHBPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010057668 Cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N Imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007906 Intestinal Disease Diseases 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102100001875 MTRR Human genes 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000008466 Metabolic Disease Diseases 0.000 description 2
- MZFOKIKEPGUZEN-FBMOWMAESA-N Methylmalonyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C(C(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MZFOKIKEPGUZEN-FBMOWMAESA-N 0.000 description 2
- 208000008425 Protein Deficiency Diseases 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- MSTNYGQPCMXVAQ-KIYNQFGBSA-N Tetrahydrofolic acid Chemical compound N1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 MSTNYGQPCMXVAQ-KIYNQFGBSA-N 0.000 description 2
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000005365 aminothiol group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000037348 biosynthesis Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- WUPRCGRRQUZFAB-DEGKJRJSSA-N corrin Chemical group N1C2CC\C1=C\C(CC/1)=N\C\1=C/C(CC\1)=N/C/1=C\C1=NC2CC1 WUPRCGRRQUZFAB-DEGKJRJSSA-N 0.000 description 2
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 108010087911 flavodoxin NADPH oxidoreductase Proteins 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 201000002406 genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile Effects 0.000 description 2
- 108010028485 methionine synthase reductase Proteins 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial Effects 0.000 description 2
- 235000013919 monopotassium glutamate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000750 progressive Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000575 proteomic Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000005460 tetrahydrofolate Substances 0.000 description 2
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- DFDCDQDATCDZSO-OUCXYWSSSA-L (2R,3R,4S,5R)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-methanidyloxolane-3,4-diol;cobalt;[(2R,3S,4R,5S)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2R)-1-[3-[(1R,2R,3R,4Z,7S,9Z,12S,13S,14Z,17S,18S,19R)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12, Chemical compound [Co].O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H]([CH2-])O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1.[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O DFDCDQDATCDZSO-OUCXYWSSSA-L 0.000 description 1
- OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N (2S)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2S)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2S,3S)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical class CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N 0.000 description 1
- FSCGLKWYHHSLST-UHFFFAOYSA-N 2-(3-sulfanylpropanoylamino)acetic acid Chemical group OC(=O)CNC(=O)CCS FSCGLKWYHHSLST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZRCMFDUKLMQKD-UHFFFAOYSA-K 2-[(4-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-(carboxymethylamino)-3-oxopropane-1-thiolate;cobalt(3+);[5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] 1-[3-[2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,1 Chemical compound [Co+3].OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C[S-])C(=O)NCC(O)=O.OCC1OC(N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)C(O)C1OP([O-])(=O)OC(C)CNC(=O)CCC1(C)C(CC(N)=O)C2[N-]\C1=C(C)/C(C(C\1(C)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C\C(C(C/1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C(C)/C1=NC2(C)C(C)(CC(N)=O)C1CCC(N)=O NZRCMFDUKLMQKD-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 289-95-2 Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036912 Bioavailability Effects 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101700052751 CBLB Proteins 0.000 description 1
- 229940113118 Carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 Colon Anatomy 0.000 description 1
- 206010010947 Coordination abnormal Diseases 0.000 description 1
- 206010011401 Crohn's disease Diseases 0.000 description 1
- 240000005497 Cyamopsis tetragonoloba Species 0.000 description 1
- 206010011777 Cystinosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000172 Cytosol Anatomy 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000000325 Deficiency Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003722 Extracellular Fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 Fetus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003953 Foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 210000004211 Gastric Acid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000036499 Half live Effects 0.000 description 1
- 206010061205 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 1
- 229940029329 Intrinsic factor Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 210000000350 MC(T) Anatomy 0.000 description 1
- 102100005472 MMADHC Human genes 0.000 description 1
- 101710030901 MMADHC Proteins 0.000 description 1
- 210000003470 Mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 229940052665 NADH Drugs 0.000 description 1
- 208000008457 Neurologic Manifestations Diseases 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N Nicotinamide adenine dinucleotide Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 108009000578 Oxidative Stress Proteins 0.000 description 1
- 206010033775 Paraesthesia Diseases 0.000 description 1
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N Propanamide Chemical class CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 1
- VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N Succinyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CCC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 102100018686 TCN2 Human genes 0.000 description 1
- 101710024741 TCN2 Proteins 0.000 description 1
- 206010044697 Tropical sprue Diseases 0.000 description 1
- 208000002670 Vitamin B 12 Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000003869 acetamides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000035514 bioavailability Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atoms Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture media Substances 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- -1 corrine macrocycle Chemical class 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000005712 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cells Anatomy 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001809 detectable Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000018823 dietary intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidates Drugs 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structures Anatomy 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 1
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000009114 investigational therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000001948 isotopic labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N levomefolic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 1
- 235000007635 levomefolic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011578 levomefolic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cells Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 230000037345 metabolism of vitamins Effects 0.000 description 1
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N methyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002745 methylcobalamins Chemical class 0.000 description 1
- 238000001768 microscale thermophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000926 neurological Effects 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000001936 parietal Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000003334 potential Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrugs Drugs 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000006894 reductive elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018406 regulation of metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N sodium borohydride Substances [BH4-].[Na+] YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N sodium;boron(1-) Chemical compound [B-].[Na+] ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGPOMXSYOKFBHS-UHFFFAOYSA-M sodium;trifluoromethanesulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F XGPOMXSYOKFBHS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 150000007944 thiolates Chemical class 0.000 description 1
- 108010083125 transcobalamin receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000006168 universal buffer mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к производному кобаламина формулы (I), в которой X обозначает лиганд, имеющий формулу, выбранную из группы, состоящей из -(CH2)1-5-S-(CH2)0-3-CH3, -S-(CH2)1-5-NH2, 
, где R1 = H, метил или этил, R2 = 
и R3 = -H или 
. Также предложены фармацевтическая композиция, пищевая добавка, способ получения производного кобаламина и его применение. Предложенные производные кобаламина формулы (I) являются полезными для лечения связанных с витамином В12 нарушений, вызванных или уменьшенным поступлением витамина В12 из пищи в нуждающиеся в нем клетки, или генетическим дефектом, или другим препятствием на пути переноса и внутриклеточной переработки В12. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 15 ил., 6 табл., 16 пр.
Description
Млекопитающие используют В12 или производные кобаламина в качестве кофакторов для двух ферментов, а именно метионинсинтазы и метилмалонил-СоА-мутазы. Метионинсинтаза катализирует метилирование гомоцистеина с образованием аминокислоты-метионина и одновременно превращение 5-метилтетрагидрофолата в тетрагидрофолат. Протекание этой реакции сильно зависит от метилкобаламина (MeCbl). Тетрагидрофолат необходим для поддержания биосинтеза пуринов и пиримидинов и поэтому он является необходимым для пролиферации клеток и гомеостазиса. Метилмалонил-СоА-мутаза является очищающим веществом для метилмалонил-СоА, образовавшейся вследствие разложения холестерина, обладающих разветвленной цепью аминокислот и жирных кислот, содержащих в цепи нечетное количество атомов углерода, и обеспечивает превращение метилмалонил-СоА в сукцинил-СоА, что поддерживает энергетический метаболизм. Протекание реакции метилмалонил-СоА-мутазы сильно зависит от 5'-дезоксиаденозилкобаламина (AdoCbl). Поскольку млекопитающие лишены способности заново синтезировать кобаламины, они используют стратегии поглощения поступающего с пищей В12 в двух биологически активных формах кофакторов, MeCbl и AdoCbl.
Для достаточного обеспечения клеток млекопитающего кобаламином, во-первых, необходим перенос кобаламина из пищи в клетки организма и, во-вторых, необходимо, чтобы организм млекопитающего мог использовать кобаламин с помощью правильного пути переработки, который сильно зависит от активности фермента CblC (также известного, как ММАСНС, шаперона В12 и шаперона CblC). Всасывание В12 и его последующее распределение в организме опосредовано сложным набором белков-носителей, рецепторов и переносчиков и можно описать последовательный путь В12 из пищи в клетки организма. Перенос В12 во внеклеточную жидкость зависит от трех гомологичных белков-носителей, а именно, внутреннего фактора, транскобаламина (также известного, как транскобаламин II) и гаптокоррина (также известного, как белок R или транскобаламин I). Нарушение пути всасывания в желудочно-кишечном тракте является наиболее частой причиной заболеваний, связанных с недостаточностью В12, не вызванных с режимом питания (Nielsen et al., Nature Reviews (2012), 345-354).
Сообщали, что у пожилых людей скрытая недостаточность витамина В12 может быть связана с прогрессирующей атрофией головного мозга. Незначительно увеличенные концентрации гомоцистеина связывали с повышенным риском слабоумия, в частности, болезни Альцгеймера. Причины недостаточности витамина В12 могут быть разными. Одной причиной может являться недостаточное потребление витамина В12 с пищей, при этом группы повышенного риска включают вегетарианцев, строгих вегетарианцев и пожилых людей. Другой причиной может являться недостаточное всасывание витамина В12 вследствие отсутствия внутреннего фактора париетальных клеток, нарушенное всасывание витамина В12 из пищи вследствие недостатка кислоты желудочного сока или вследствие взаимодействия лекарственных средств. Другими причинами могут являться кишечные заболевания, такие как, например, резекция кишечника, тропическая спру или болезнь Крона.
Существуют нарушения, связанные с кобаламином, относящиеся к переработке витамина В12 в клетках, которые являются редкими и наследуются аутосомно-рецессивным образом. Нарушения, связанные с кобаламином, разделяют на несколько разных комплементационных групп. Мутации обычно вызывают нарушение в биохимическом пути, которое приводит к биосинтезу MeCbl и AdoCbl и заболевания проявляются в виде гомоцистинурии и метилмалоновой ацидурии. CblC перерабатывает кобаламины, попадающие в клетки, с образованием обычного промежуточного продукта, коб(II)аламина / коб(I)аламина. Мутации в CblC представляют собой наиболее частое врожденное нарушение метаболизма кобаламина (Gherasim et al., The Journal of Biological Chemistry, vol. 290 (2015) pp 11393-11402).
Задачей настоящего изобретения является получение серосодержащих производных кобаламина, которые являются полезными для лечения связанных с витамином В12 нарушений, вызванных или уменьшенным поступлением витамина В12 из пищи в нуждающиеся в нем клетки, или генетическим дефектом, или другим препятствием на пути переноса и внутриклеточной переработки В12. Такие производные кобаламина, в частности, обладают улучшенной биологической активностью.
Применение серосодержащих производных кобаламина, описанных в настоящем изобретении, связано с дефицитом витамина В12, который проявляется: 1) у пациентов, страдающих наследственными метаболическими заболеваниями, которые ухудшают перенос и переработку внутриклеточного кобаламина; 2) у индивидуумов, потребляющих малое количество витамина В12 (крайне нищих и не допускающих отклонений вегетарианцев / строгих вегетарианцев); 3) у пожилых людей. Для относящихся к этим категориям субъектов может быть благоприятным улучшение переработки внутриклеточного CblC-кобаламина и протекающих с его участием последующих ферментативных реакций.
У пациентов, страдающих генетическим нарушением метаболизма кобаламина, относящегося к группе CblC, наблюдаются нарушения в метионинсинтазе и метилмалонил-СоА-мутазе, которые находятся в соответствии с генным продуктом ММАСНС (метилмалоновая ацидурия типа С и гомоцистинурия). Предлагали переименовать этот белок в цианокобаламиндецианазу (Kim et al., PNAS (2008) pp 14551-14554). В публикации Hannibal et al. (Molecular Genetics and Metabolism (2009) pp 260-266) показано, что линии клеток, полученные от пациентов, имеющих мутированный белок CblC, не перерабатывают алкилкобаламин в такой же степени, как линии нормальных фибробластов кожи.
Соединения, описанные в настоящем изобретении, представляют собой серосодержащие кобаламины, содержащие аксиальные связи Co-S или Со-С, которые улучшают ферментативную активность нормального белка CblC, исправляют патогенный вариант белка CblC или заменяют отсутствующий белок CblC.
Производные витамина В12, также называющиеся кобаламинами, играют важную роль в ферментах В12. Структура кобаламина представляет собой координационный комплекс, содержащий 6 координационных центров, связывающих ион Со3+, который окружен находящимися в экваториальном 4-ом положении атомами азота тетрапиррольного корринового кольца и находящимися аксиальном положении лигандами в верхнем β-положении и в нижнем α-положении. Находящийся в α-положении лиганд координирован с Со с помощью атома азота нуклеотидного основания, 5,6-диметилбензимидазола (DMB), который связан с корриновым кольцом с помощью нуклеотидной структуры. Комплекс может существовать в трех состояниях окисления кобальта, а именно Со(III), Со(II) и Со(I). Кобаламин имеет формулу (I), которая представлена ниже.
В формуле (I) возможные лиганды, которые могут связываться в β-положении, обозначены с помощью "X". Важными находящимися в β-положении лигандами являются цианид (CN) в цианокобаламине (CNCbl(III)), вода (Н2О) в аква-кобаламине (H2OCbl(III)), алкильные группы, такие как СН3-, в метилкобаламине (MeCbl(III)) и 5-деоксиаденозил в аденозилкобаламине (AdoCbl(III)), которые являются кофакторами для зависимых от В12 ферментов человека.
Настоящее изобретение относится к серосодержащим производным кобаламина, которые имеют формулу витамина В12, однако где лиганд X имеет другое значение. Такие кобаламины являются полезными, поскольку они обладают улучшенной эффективностью при лечении разных дефицитов витамина В12. Настоящее изобретение относится к производному кобаламина формулы (I)
в которой X обозначает лиганд, имеющий формулу, выбранную из группы, состоящей из -(CH2)1-5-S-(CH2)0-3-CH3, -S-(CH2)1-5-NH2 или
В особенно предпочтительных вариантах осуществления кобаламин формулы (I) содержит лиганд X, который представляет собой -S-CH2-CH2-NH2,
Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения заболеваний, связанных с уменьшенным обеспечением витамина B12. Эти заболевания могут быть вызваны редкими генетическими дефектами гена CblC, которые проявляются в гомоцистинурии и метилмалоновой ацидурии или других нарушениях правильной переработки витамина B12 в клетках. Альтернативно, производные кобаламина можно применять для лечения пожилых пациентов, которые не обеспечены достаточным количеством витамина B12. У таких индивидуумов часто наблюдаются частые признаки снижения умственной деятельности, такие как слабоумие или болезнь Альцгеймера.
Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить в виде состава для перорального введения, при этом предпочтительно, если фармацевтические составы готовят таким образом, что высвобождение активного ингредиента происходит в тонком кишечнике и толстом кишечнике. Предпочтительными являются таблетки или капсулы, которые содержат устойчивое к воздействию кислоты покрытие. После того, как таблетка или капсула проходят через желудок, покрытие растворяется в кишечнике вследствие изменения значения рН, и активный ингредиент высвобождается в тонком кишечнике при высокой концентрации. Это можно осуществить путем нанесения покрытия, содержащего один или большее количество пленочных покрытий, растворимость которых зависит от значения рН. Предпочтительно, если такими покрытиями являются полимеры Eudragit®, которые устойчивы к воздействию кислоты и растворяются при значении рН примерно от 5,8 до 7,0.
Альтернативно, производное кобаламина можно вводить в виде состава для парентерального введения, такого как раствор для инъекции. Поскольку производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, могут легко разлагаться под воздействием света, предпочтительно готовить раствор для инъекции в лиофилизированной форме, которую можно восстановить путем добавления стерильной воды или буфера непосредственно перед введением. Контейнеры, содержащие лиофилизированное производное кобаламина, необходимо защищать от света.
В альтернативном варианте осуществления производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, могут быть приготовлены в виде пищевой добавки. Пищевая добавка может содержать кобаламины в форме частиц, которые также содержат добавки, такие как носители или матричные компоненты. Предпочтительными примерами являются крахмал, каррагенан, гуар или сахара, такие как лактоза, фруктоза или сахароза.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения производного кобаламина формулы (I)
в которой лиганд X представляет собой
-(CH2)1-5-S-(CH2)0-3-CH3, -S-(CH2)1-5-NH2 или
Предпочтительно, если в качестве исходного вещества используют имеющиеся в продаже кобаламины, такие как гидрохлорид гидроксикобаламина. Гидрохлорид гидроксикобаламина вводят в реакцию с лигандами, содержащими в своей структуре тиольную группу, такими например, как цистеамин или меркаптопропионилглицин, или реакционноспособную содержащую атом С группу, такую например, как хлорметилметилсульфид или 1-хлор-2-метилсульфанил. Предпочтительно, если все реакции синтеза проводят при условиях использования только красного света вследствие возможной чувствительности тиолятокобаламинов и алкилкобаламинов к воздействию света. Реакции синтеза обычно проводят при аэробных условиях.
Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют преимущество в том, что они обладают улучшенной биологической активностью. Поэтому производные кобаламина можно применять для лечения заболеваний, которые связаны с уменьшенным обеспечением или ухудшенной переработкой кобаламина на стадиях его переработки в клетках. Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения наследственных заболеваний, которые воздействуют на белок CblC. Заболевания также могут быть вызваны уменьшенным потреблением витамина В12.
В другом варианте осуществления производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения недостаточности витамина В12, которая выражается в целом ряде неврологических проявлений, таких как парестезия, онемение кожи, нарушения координации движений и уменьшенная скорость проводимости нерва. У пожилых людей скрытая недостаточность витамина В12 может быть связана с прогрессирующей атрофией головного мозга. Наблюдали, что повышенные концентрации гомоцистеина в плазме связаны с регионарной и полной атрофией головного мозга не только при болезни Альцгеймера, но и у здоровых пожилых людей.
При лечении нарушения познавательной способности важно сделать выбор между пероральным или парентеральным введением. Следует понимать, что пероральное введение витамина В12 является неэффективным, поскольку, в особенности у пожилых людей, важную роль играют недостаточное всасывание, часто наблюдающиеся кишечные заболевания или нарушения, влияющие на переработку витамина В12. Поэтому необходимым может являться парентеральное введение. Однако парентеральное введение является более затруднительным, чем пероральное введение, поскольку для этого необходимы люди с подготовкой в медицине, такие как врачи или медицинские сестры. Преимущество кобаламинов, предлагаемых в настоящем изобретении, а именно улучшенная биологическая активность и биологическая доступность, обеспечивает возможность введения производных кобаламина в виде составов для перорального введения.
Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для пожилых людей, страдающих ухудшением познавательной способности. Кроме того, их можно применять для лечения депрессии, которая у пожилых людей часто связана с низкой концентрацией витамина В12 и повышенными концентрациями гомоцистеина и метилмалоновой кислоты. Производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно применять для лечения или предотвращения возможности развития болезни Альцгеймера, поскольку повышенные концентрации гомоцистеина связаны с риском возникновения болезни Альцгеймера. Поэтому производные кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять не только для лечения, но и для профилактики слабоумия или болезни Альцгеймера.
Серосодержащие соединения кобаламина, предлагаемые в настоящем изобретении, относятся к кобаламинам содержащим связи Co-S и Со-С, обладающих приведенными ниже характеристиками, которые являются превосходными по сравнению с характеристиками имеющихся в настоящее время лекарственных форм, содержащих и гидроксикобаламин (HOCbl), и цианокобаламин (CNCbl), и метилкобаламин(MeCbl), использующихся в некоторых странах, таких как Япония, а именно:
• более высокое значение pKa перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной форме;
• более высокое значение окислительно-восстановительного потенциала для восстановления центрального атома кобальта, и
• более легкое удаление находящегося в β-положении аксиального лиганда.
Кроме того, соединения кобаламина, описанные в настоящей заявке, обладают следующими преимуществами, относящимися к тиолятокобаламину и глутатионилкобаламину (GSCbl):
• превосходное восстановление ферментативной активности патогенных вариантов белка CblC, перерабатывающих кобаламин,
• долгосрочное уменьшения количества токсичной ММА (метилмалоновая кислота) в CblC фибробластов человека.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В приведенном ниже описании использующиеся аббревиатуры имеют следующие значения:
Настоящее изобретение относится к синтезу новых серосодержащих производных кобаламина, характеризующихся аксиальной координацией Co-S или Co-Cn-S-R, обладающих: (а) увеличенным значением pKa перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной конфигурации, (b) более высоким значением среднеточечного потенциала, и (с) легким удалением находящегося в β-положении аксиального лиганда.
В настоящем изобретении проводили выбор и синтез некоторых находящихся в β-положении аксиальных лигандов и получали взаимодействия связей, которые компенсируют потерю функции аномального варианта белка CblC, возникающую вследствие естественных мутаций, которые приводят к заболеванию. Функциональные группы, содержащиеся в предпочтительных фрагментах цистеамина и меркаптопропионилглицина, обеспечивают возможность образования дополнительной водородной связи (в отличие от имеющихся в настоящее время лекарственных форм HOCbl или CNCbl) с аминокислотными остатками, находящимися на сайте связывания кобаламина белка CblC, что может являться критически важным для восстановления связывания и ферментативной активности патогенных вариантов CblC. Аналогичным образом, серосодержащие кобаламины, содержащие связь Со-С, предлагаемые в настоящем изобретении, являются аналогами природного кофактора метилкобаламина, для которого показано, что он является предпочтительным содержащим Со-С субстратом для фермента CblC, необходимого для переработки кобаламина.
Равновесие между координированной к центральному атому металла конфигурацией - протонированной конфигурацией
При значении рН, соответствующем физиологическому, все кобаламины находятся в координированной к центральному атому металла конфигурации, где находящийся в α-положении аксиальный лиганд, диметилбензимидазол, координирован к центральному атому кобальта посредством атома азота. Схема перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной конфигурации для кобаламинов представлена на Фиг. 1.
На Фиг. 1 представлена структура цианокобаламина (лекарственная форма, имеющаяся в продаже в виде добавки для перорального введения, а также в виде инъекций) в координированной к центральному атому металла и протонированной конфигурации. Значение pKa для этого перехода равно 0,10. Такое значение рН невозможно обеспечить при физиологических условиях.
Для этого перехода необходима чрезвычайно кислая среда, которую невозможно обеспечить в клеточной среде. В Таблице 1 приведены значения pKa для нескольких находящихся в β-положении лигандов.
Как можно видеть из Таблицы 1, природа находящегося в β-положении аксиального лиганда существенно влияет на pKa равновесия между координированной к центральному атому металла конфигурацией - протонированной конфигурацией. Эта характеристика является существенной для задач настоящего изобретения, поскольку новые производные кобаламина, характеризуются более высоким значением pKa перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной конфигурации и это повышает их биологическую активность. Эта повышенная биологическая активность означает улучшенную способность перерабатывающего фермента CblC дикого типа и патогенных вариантов CblC использовать новые кобаламины в качестве субстратов для образования активированных промежуточных продуктов, которые поступают к акцепторам - зависимым от кобаламина ферментам, метионинсинтазе и метилмалонил-СоА-мутазе.
Окислительно-восстановительный потенциал образования клеточного биологически активного коб(II)аламина и коб(I)аламина
Дополнительным аспектом химических характеристик Cbl, связанных с их поведением в биологических системах, является среднеточечный потенциал для восстановления центрального атома кобальта, которое является необходимым для последующей обработки (удаление находящегося в β-положении лиганда) по механизму восстановления, включающему нуклеофильную атаку восстановленным глутатионом (GSH). В Таблице 2 приведен перечень среднеточечных окислительно-восстановительных потенциалов для биологически активных Cbl.
Удаление находящегося в β-положении лиганда кобаламинов
Разрушение находящегося в β-положении лиганда (на Фиг. 2 обозначен как "X") поступающих с пищей кобаламинов является необходимый стадией переработки микроэлементов у людей. Эта стадия катализируется ферментом CblC. На Фиг. 2 представлена структура кобаламинов. Кобаламины представляют собой тетрапирролы, объединенные в корриновый макроцикл, содержащий кобальт в качестве центрального атома металла. Кобаламины содержат 7 боковых цепей, а именно, ацетамиды и пропионамиды. Пятое координационное положение (лиганд в α-положении) занято атомом азота, содержащимся в диметилбензимидазольном фрагменте. Шестое координационное положение (в настоящем изобретении обозначено, как "X"), известное как β-положение лиганда, может быть занято лигандами разных типов. Встречающиеся в природе лиганды включают метил (метилкобаламин), 5-дезоксиаденозин (аденозилкобаламин), гидрокси- или аква-(гидроксокобаламин, аква-кобаламин), цианогруппу (цианокобаламин), глутатионил (глутатионилкобаламин) и т.п.
Новые лиганды, раскрытые в настоящем изобретении, присоединены в положении X для того, чтобы сохранить структуру кобаламина для оптимального связывания и переноса с помощью транскобаламина. За исключением небольших заменимых лигандов, таких как, например сульфит, нитрит и имидазол, для содержащих связи Co-S и Со-С кобаламинов необходима ферментативная обработка внутри клеток, чтобы они стали биологически активными и подходящими для протекания ферментативных реакций получающих их ферментов, метионинсинтазы (MS) и метилмалонил-СоА-мутазы (МСМ). Белки CblC играют критически важную роль во внутриклеточной переработке всех поступающих с пищей кобаламинов: с помощью CblC образуется протонированная конфигурация кобаламинов, которая, в свою очередь, обеспечивает увеличение окислительно-восстановительного потенциала для восстановления центрального атома кобальта, тем самым облегчая удаление находящегося β-положении аксиального лиганда путем эффекта ослабления транс-связи (опосредуемого протонированной конфигурацией) и облегчая восстановительное элиминирование (опосредуемое увеличенным окислительно-восстановительным потенциалом). У пациентов, имеющих мутированный белок CblC, эти термодинамически и кинетически затрудненные реакции блокированы, что приводит к нарушению переработки кобаламина, которое приводит к увеличению концентрации гомоцистеина и метилмалоновой кислоты, субстратов для двух зависимых от В12 ферментов, MS и МСМ. Новые серосодержащие производные кобаламина, описанные в настоящем изобретении, являются химически "независимыми" и обладают своей собственной биологической активностью, поэтому они обходят критически важный белок CblC.
Производные кобаламина, описанные в настоящем изобретении, обладают своей собственной повышенной биологической активностью.
Производные витамина В12 нового поколения, описанные в настоящем изобретении, обладают характеристиками, которые являются благоприятными не только для лечения пациентов, страдающих нарушением CblC, но и для лечения или поддержки индивидуумов, страдающих другими генетическими нарушениями, связанных с витамином В12, такие как связанные с CblA, CblB, CblD, CblF, CblJ, CblX, mut, CblG. Это включает внутриутробное лечение эмбрионов и плодов матерей, у которых наблюдается мутация любого из генов, вовлеченных в метаболизм витамина В12, в качестве предупредительной меры во время эмбрионального развития и раннего развития. Новые биологически активные кобаламины также можно приспособить для поддержки или лечения пожилых людей (страдающих естественным возрастным плохим всасыванием витамина В12), пациентов, страдающих неврологическими заболеваниями, страдающих от связанной с возрастом или режимом питания плохой доступностью витамина В12, и вегетарианцев и строгих вегетарианцев, у которых количество поступающих с пищей микроэлементов может быть более низким, чем необходимое для оптимального состояния здоровья. Кроме того, благоприятное воздействие некоторых тиолятокобаламинов на выживаемость клеток при условиях окислительного стресса предполагает, что в дополнение к конкретным характеристикам, описанным в настоящем изобретении, новые разработанные соединения обладают дополнительными физиологическими преимуществами.
Пример 1: Лиганды, характеризующиеся образованием связи Co-S (тиолятокобаламины). Синтез производных тиолятокобаламина.
Новые тиолятокобаламины синтезировали по реакции аква-кобаламина (или гидроксокобаламина, оба представляют собой коб(III)аламин) с 1,3-1,9 экв. соответствующих лигандов по методике, аналогичной описанной для получения других тиолятокобаламинов.
Гидрохлорид гидроксикобаламина, который имеется в продаже, получали в виде водного раствора (обычно 10-15%). Раствор гидрохлорида гидроксикобаламина вводили в реакцию с лигандом, причем все реакции синтеза проводили при условиях использования только красного света вследствие чувствительности тиолятокобаламинов к воздействию света.
На Фиг. 3 представлены два типичных лиганда, цистеамин и меркаптопропионилглицин, имеющих структуру цистеамина (слева) и меркаптопропионилглицина (справа). Цистеамин является имеющимся в продаже аминотиолом, использующимся для лечения цистиноза. Меркаптопропионилглицин имеется в продаже. Эти аминотиолы вступают в реакцию с аква-кобаламином по реакции замещения лигандов, протекающей с образованием соответствующих тиолятокобаламинов.
Реакции проводили при комнатной температуре или на льду, при нормальных условиях, при защите от воздействия света. Тиолятокобаламины выделяли путем осаждения из холодного ацетона (-20°С), затем промывали холодным ацетоном, подвергали вакуумному фильтрованию и сушили при 60°С в течение ночи. Чистоту продуктов Cbl определяли с помощью 1H-ЯМР (ядерный магнитный резонанс), масс-спектрометрии и путем превращения дицианокобаламина с использованием стандартных для данной области техники методик. Новые синтезированные производные Cbl дополнительно очищали с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография). Образцы постоянно защищали от воздействия света, поскольку связь Co-S является фотолабильной.
Пример 2: Лиганды, характеризующиеся образованием связи Со-С (алкилкобаламины). Синтез содержащих метилсульфид аналогов метилкобаламина.
Хлорметилметилсульфид и хлорэтилметилсульфид, представленные на Фиг. 4, при анаэробных условиях, при тусклом красном свете вводили в реакцию с коб(I)аламином, предварительно восстановленным борогидридом натрия так, как это описано для получения других алкилкобаламинов. На Фиг. 4 представлена структура хлорметилсульфанилметана (слева) и 1-хлор-2-метилсульфанилэтана (справа). Эти два галогенированных серосодержащих углеводорода вводили в реакцию с чрезвычайно нуклеофильным коб(I)аламином с получением соответствующих производных алкилкобаламина. В этих реакциях галоген выполняет функцию отщепляющейся группы. Добавляли избыток лиганда и реакционной смеси давали реагировать при комнатной температуре в течение 10 мин. Продукты Cbl осаждали из холодного ацетона, промывали и сушили при 60°С в течение ночи. Чистоту продуктов Cbl определяли с помощью 1H-ЯМР, масс-спектрометрии и путем превращения дицианокобаламина с использованием стандартных для данной области техники методик. Если чистота составляла менее 95%, то новые синтезированные производные Cbl дополнительно очищали с помощью ВЭЖХ. Образцы постоянно защищали от воздействия света.
Пример 3: Спектроскопия в УФ (ультрафиолетовой) и видимой области.
Спектры в УФ и видимой области для новых синтезированных производных кобаламина снимали в буфере EPPS (40 мМ, рН 7,6, I=1,0 М с помощью трифлата натрия). За протеканием реакции аква-кобаламина с цистеамином и меркаптопропионилглицином следили с помощью исследования полученных с разрешением по времени спектров реакционных смесей, содержащих заданное количество аква-кобаламина (10-25 мкМ (микромоли)) и лиганд при разных концентрациях.
Меркаптопропионилглицин быстро вступает в реакцию с аква-кобаламином с образованием стабильного комплекса MPG-Cbl при значении рН равном 7,2. Наблюдающаяся скорость реакции (kнабл.) линейно зависит от концентрации лиганда, меркаптопропионилглицина.
Аква-кобаламин при заданной концентрации вводили в реакцию с лигандом MPG при разных концентрациях. За протеканием реакции следили с помощью спектроскопии в УФ и видимой области с разрешением по времени в течение всего 50 мин (Фиг. 5). Изменения в спектрах соответствовали превращению аква-кобаламина в MPG-Cbl (Фиг. 5а) по механизму, который не включает образование промежуточных продуктов реакции в поддающихся обнаружению количествах. Исходные и конечные спектры анализировали для подтверждения подлинности продукта-тиолятокобаламина (Фиг. 5б). Продолжительность действия определяли на основании максимальной интенсивности поглощения для каждого вещества (350 нм, H2OCbl+, и 372 нм, MPG-Cbl) (Фиг. 5в).
На Фиг. 6 представлена зависимость наблюдающейся скорости реакции (kнабл.) от концентрации лиганда-меркаптопропионилглицина при образовании MPG-Cbl в буфере EPPS (40 мМ, рН 7,2, I=1,0 М).
На Фиг. 7 представлена зависимость наблюдающейся скорости реакции (kнабл.) от концентрации лиганда-цистеамина при образовании Суа-Cbl в буфере EPPS (40 мМ, рН 7,2, I=1,0 М).
Цистеамин быстро вступает в реакцию с аква-кобаламином с образованием стабильного комплекса при значении рН равном 7,2. Наблюдающаяся скорость реакции (kнабл.) линейно зависит от концентрации лиганда, цистеамина.
Важно отметить, что зависимые от концентрации скорости реакций новых производных Cbl находятся в хорошем соответствии со скоростями реакций, описанными для других тиолятокобаламинов.
В Таблице 3 представлено сопоставление скоростей образования Суа-Cbl и MPG-Cbl (предлагаемых в настоящем изобретении) и других известных тиолятокобаламинов.
Пример 4: pKa перехода координированной к центральному атому металла конфигурации / к кпротонированной конфигурации для новых производных Cbl.
При переходе кобаламинов от координированной к центральному атому металла к протонированной конфигурации на спектре в УФ и видимой области наблюдается заметный сдвиг, который используют для определения значения pKa этого перехода. Спектры производных кобаламина в УФ и видимой области снимали при разных значениях рН с использованием универсальной буферной смеси. Для содержащих связь Co-S кобаламинов значение pKa перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной конфигурации определяли по методике остановленной струи с использованием белка CblC человека в качестве реагента, вызывающего переход, при разных значениях рН, находящихся в диапазоне соответствующих физиологическим значениям. Тиолятокобаламины подвергаются катализируемому протоном разложению (с потерей тиолятного лиганда) и поэтому значение их pKa невозможно определить с использованием стандартных методик.
Спектры в УФ и видимой области представлены на Фиг. 8. Новые синтезированные тиолятокобаламины обладают спектральными характеристиками, идентичными характеристикам ранее синтезированных содержащих связь Co-S веществ. Максимальная интенсивность поглощения для Суа-Cbl и MPG-Cbl наблюдается при 370 нм и 531 нм, что находится в соответствии с характеристиками ранее описанных кобаламинов, содержащих связь Co-S.
На Фиг. 8 представлены спектры в УФ и видимой области для MPG-Cbl и Суа-Cbl в 40 мМ растворе EPPS, рН 7,6. Максимальная интенсивность поглощения для каждого кобаламина находится в соответствии с данными для описанных ранее тиолятокобаламинов.
Коэффициенты поглощения представлены в Таблице 4. С помощью спектрофотометрических методик также определяли молярные коэффициенты поглощения. Значения приведены в Таблице 4. GSCbl использовали в качестве положительного контроля, он представляет собой известный и хорошо исследованный тиолятокобаламин.
Пример 5: Определение среднеточечного потенциала (окислительно-восстановительного потенциала) кобаламинов.
Среднеточечный потенциал новых синтезированных Cbl определяли с использованием спектрохимических и электрохимических методик. В качестве стандарта в этих исследованиях использовали окислительно-восстановительный потенциал MeCbl и CNCbl, хорошо изученных кобаламинов.
Пример 6: Кристаллизация содержащих связи Со-С и Co-S производных.
Для исследования структуры новых производных Cbl получали кристаллы, подходящие для рентгеноструктурного анализа. Производные Cbl (50-100 мг/мл) помещали в сосуды с диффузией паров ацетона с использованием разных значений рН, солей и температур так, как описано в литературе.
Кристаллы Суа-Cbl и MPG-Cbl успешно выращивали путем диффузии паров ацетона при 4°С в темноте (Фиг. 9). Добавление CsCbl облегчало образование кристаллов, обладающих размером, подходящим для рентгеноструктурного анализа. Кристаллы Суа-Cbl образовывались с использованием и без использования диффузии паров ацетона; однако кристаллы MPG-Cbl образовывались только при использовании диффузии паров ацетона. Возможность выделения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, в форме чистых кристаллов является преимуществом для последующих разработок терапевтических средств. Путем проведения анализа с помощью масс-спектрометрии получили следующие соответствующие молекулярные массы [М/2+1], m/z=765 для MPG-Cbl и m/z=722 для Суа-Cbl.
На Фиг. 9 представлены кристаллы Суа-Cbl и MPG-Cbl, выращенные при разных условиях проведения эксперимента. В действительности кристаллы обладают красным цветом.
Пример 7: Стабильность находящегося в β-положении аксиального лиганда в содержащих связь Со-С и Co-S производных в присутствии биологически важных обладающих низкой молекулярной массой тиолов.
Стабильность новых синтезированных производных СЫ в присутствии избытка GSH, Cys и Нсу исследовали с помощью спектроскопии в УФ и видимой области с разрешением по времени. Использовали соответствующие концентрации этих клеточных тиолов, такие например, как 1-10 Мм GSH (восстановленный глутатион).
Способность новых разработанных соединений, связанных связью Co-S или Со-С, вступать в реакцию с основным внутриклеточном обладающим низкой молекулярной массой тиолом, глутатионом, исследовали с помощью спектрофотометрического анализа. При значении рН равном 7,4 и при аэробных условиях реакция не протекала, это означает, что новые синтезированные кобаламины являются стабильными при условиях, близких к физиологическим.
Пример 8: Способность вступать в реакцию с биологически важными белками редуктазами.
Способность новых производных Cbl вступать в реакцию с невыделенными клеточными редуктазами исследовали с помощью спектрофотометрического анализа. Вкратце, методика заключалась в следующем: новые кобаламины инкубировали при анаэробных условиях с новой редуктазой 1 (NR1), метионинсинтазой-редуктазой (MSR) и флаводоксинредуктазой (FLDR), и соответствующими кофакторами (NADPH, NADH, FAD и т.п.). На превращение содержащих связь Co-S или Со-С кобаламинов в коб(II)аламин или коб(I)аламин указывало появление полос поглощения при 450 и 467 нм соответственно.
Пример 9: Связывание новых производных кобаламина с транскобаламином (ТС) и с CblC.
Поскольку для доставки витамин В12 в клетки необходимо связывание с транскобаламином и распознавание комплекса ТС-В12 рецептором транскобаламина, CD320, проводили исследование возможности связывания синтетических производных Cbl с бычьим рекомбинантным ТС и ТС человека. Исследования связывания и определение сродства проводили с помощью спектроскопии в УФ и видимой области и гель-фильтрации. Фракции, содержащие ТС, собирали и наличие связанного кобаламина определяли с помощью спектрофотометрического анализа. Все исследованные кобаламины стабильно связываются с ТС и клетки поглощали соответствующие комплексы ТС•Cbl со сравнимыми скоростями и в сравнимых количествах, как и в случае имеющихся в настоящее время лекарственных форм, HOCbl и CNCbl.
Важным аспектом биологической активности новых соединений является их способность связываться с перерабатывающим ферментом CblC и переходить в протонированную конфигурацию, которая увеличивает их реакционную способность. Это является критически важной стадией во внутриклеточных путях метаболизма витамина В12, которые вовлечены в патогенез и, безусловно, связаны с самим связанным с CblC заболеванием. Так, например, мутантные варианты белка CblC, для которых известно что они являются патогенными для человека, можно восстановить с помощью новых биологически активных кобаламинов, если их собственные химические характеристики превосходят характеристики поступающих с пищей изоформ MeCbl, AdoCbl и HOCbl. Исследования связывания проводили при рН 7,6 (буфер EPPS, 0,04 М) и анализ проводили с помощью спектрофотомерии в УФ и видимой области. Как можно видеть из Фиг. 10, связывание Суа-Cbl или MPG-Cbl с CblC дикого типа человека вызывает образование протонированной конфигурации. Это указывает на то, что выбранные находящиеся в β-положении лиганды не ухудшают способность белка стабильно связываться с новым кобаламином.
Фиг. 10. Связывание Суа-Cbl и MPG-Cbl с CblC дикого типа человека при рН 7,0. Связывание находящегося в координированной к центральному атому металла конфигурации Суа-Cbl или MPG-Cbl (тонкие черные линии) с CblC вызывает образование его протонированной конфигурации (жирные линии).
Пример 10: Связывание новых производных кобаламина с белком CblC дикого типа и мутантными вариантами CblC.
Связывание новых производных Cbl с CblC дикого типа и мутантным CblC исследовали с помощью спектроскопия в УФ и видимой области так, как это описано для встречающихся в природе изоформ Cbl. Сродство связывания определяли с помощью изотермической титрационной калориметрии (ИТК, Microcal) или микромасштабного термофореза (МСТ, Nanotemper).
Анализ полученных в УФ и видимой области спектров продукта MPG-Cbl, полученного после осаждения из ацетона и вакуумного фильтрования, указывает на то, что по меньшей мере часть этого производного Cbl может находиться в протонированной конфигурации даже при отсутствии белка CblC (Фиг. 11). На рисунке слева представлен полученный в УФ и видимой области спектр MPG-Cbl в воде, после осаждения из ацетона и вакуумного фильтрования. На рисунке справа представлен спектр аутентичного протонированного MPG-Cbl, когда он связан с белком CblC. Это указывает на то, что MPG-Cbl может являться самодостаточным для обеспечения его перехода от координированной к центральному атому металла к протонированной форме при отсутствии белка CblC, вследствие электронодонорного воздействия аксиального лиганда. Эта обнаруженная характеристика является особенно важной для пациентов, у которых полностью отсутствует ген CblC, которые, таким образом, страдают наиболее тяжелым фенотипом связанного с CblC заболевания.
Фиг. 11. Сходство спектров свежеочищенного MPG-Cbl, растворенного в воде, и находящегося в протонированной конфигурации MPG-Cbl, связанного с рекомбинантным белком CblC человека.
Пример 11: Исследование активности CblC.
Исследовали способность новых синтезированных производных Cbl выступать в роли субстратов для CblC (Фиг. 12). Активность CblC определяли с помощью спектроскопии в УФ и видимой области в соответствии с опубликованными методиками. Анализ продуктов реакции проводили с помощью масс-спектрометрии. Исследовали деалкилирование и детиолирование содержащих связи Со-С и Co-S производных Cbl соответственно, для того, чтобы с использованием белка CblC дикого типа и мутантного CblC определить, могут ли эти реакции обеспечить поддержку пациентов, у которых имеется аномальная изоформа CblC, обладающая низкой ферментативной активностью или не обладающая ферментативной активностью.
Фиг. 12. Изменения в спектрах, связанные с реакцией Суа-Cbl или MPG-Cbl, связанного с CblC человека, в присутствии GSH. Реакции завершались в течение менее 10 с. Исходные спектры представлены светло-серыми линиями. Продуктом реакции в обоих случаях являлся H2OCbl+, связанный с белком CblC человека.
Пример 12: Характеризация кандидатов в пролекарства в клетках.
Производные Cbl, обладающие перспективной биохимической активностью, исследовали в имеющемся в нашем распоряжении наборе культивированных контрольных и содержащих мутантный CblC фибробластах человека. К культивированным клеткам контрольных фибробластов (здоровых новорожденных субъектов) или фибробластов с нарушением CblC без добавления экзогенного Cbl (отрицательный контроль) добавляли имеющийся в продаже CNCbl (контроль с помощью использующегося в настоящее время лекарственного средства) или новые синтезированные кобаламины (исследуемая группа). Способность этих соединений поддерживать внутриклеточный метаболизм Cbl при отсутствии CblC исследовали путем слежения за концентрациями являющихся биомаркерами заболевания метаболитов Нсу и ММА в кондиционированной среде.
Ферментативную активность CblC в присутствии Суа-Cbl и MPG-Cbl, использующихся в качестве субстратов, исследовали при таких же условиях проведения эксперимента, как использованные для исследования деалкилирования MeCbl и AdoCbl. Примечательно, что детиолирование Суа-Cbl и MPG-Cbl протекает на порядки величины быстрее, чем в случае MeCbl и AdoCbl. Реакция завершалась в течение менее 10 с, это время являлось временем, необходимым для получения первого спектра после смешивания CblC, связанного с Суа-Cbl или MPG-Cbl, с 5 мМ GSH (Фиг. 12). Эти результаты указывают на то, что новые производные кобаламина обладают существенно увеличенной биологической активностью, выражающейся в ферментативной обработке белком CblC.
На Фиг. 12 представлено исследование биологической активности Суа-Cbl и MPG-Cbl - поддержки протекания ферментативной реакции рекомбинантного CblC человека.
Пример 13: Восстановление внутриклеточного метаболизма кобаламина с использованием радиоактивных производных новых лекарственных средств.
Содержащие (57Со) соединения синтезировали для использования в качестве источника Cbl для обеспечения внутриклеточного пути Cbl, т.е. превращения новых (57Со)-тиолято- или (57Со)-серосодержащих алкилкобаламинов в 57Со-AdoCbl 57Со-MeCbl, как это описано в предшествующей публикации Hannibal et al. (Mol. Genet. Metab. (2009) p. 260).
Пример 14: Исследование протеомы CblC после лечения новыми содержащими связь Co-S или Со-С кобаламинами и сопоставление с результатами исследования, полученными с использованием гидроксокобаламина, применяющегося в данной области техники.
В предшествующих, описанных в литературе протеомных исследованиях показано, что протеома фибробластов кожи, полученных от пациентов, страдающих связанным с CblC заболеванием, плохо реагирует на лечение с помощью CNCbl или HOCbl, использующихся в настоящее время лекарственных форм. Общее протеомное исследование по методике SILAC (мечение аминокислот стабильными изотопами в клеточной культуре) проводили для сопоставления способности использующихся в настоящее время лекарственных средств (гидроксокобаламин/цианокобаламин) и новых кандидатов в лекарственные средства восстанавливать протеому клеточного CblC с получением такого же характера экспрессирования, как наблюдающийся в здоровых клетках, полученных у здоровых новорожденных субъектов. В качестве меры успешного лечения ex vivo использовали обращение фенотипа CblC (или соответствующего другим метаболическим заболеваниям, в которые вовлечены нарушения перемещения или переработки кобаламина) на соответствующий здоровым субъектам.
Пример 15: Исследование биологической активности Суа-Cbl, MPG-Cbl и Ме-S-MeCbl и сопоставление с описанными ранее тиолятокобаламином GSCbl (модель связи Co-S) и природным кофактором метилкобаламином (модель связи Со-С).
Сначала исследовали способность новых кобаламинов, описанных в настоящем изобретении, выступать в роли субстрата для CblC дикого типа и восстанавливать утерянную активность патогенных вариантов, таких как мутантный Arg161Gly, который приводит к возникновению юношеской формы связанного с CblC заболевания. В Таблице 5 представлены результаты исследования ферментативной активности с использованием рекомбинантного CblC дикого типа человека и патогенного мутантного Arg161Gly.
Аббревиатуры: PrCbl: пропилкобаламин (структурный аналог Me-S-MeCbl); BuCbl: бутилкобаламин (структурный аналог Me-S-Et-Cbl); GSCbl: глутатионилкобаламин (аналог тиолятокобаламинов)
*Деалкилирование содержащих связь Со-С кобаламинов проводили с помощью комплексов CblC-алкил-Cbl (20 мкМ:10 мкМ) в буфере EPPS (40 мМ, рН 7,6) с добавлением 150 мМ NaCl и 10% глицерина при 25°С.Реакции начинали путем добавления 5 мМ GSH и за их протеканием следили в течение 60 мин.
Детиолирование содержащих связь Co-S кобаламинов проводили с помощью комплексов CblC-алкил-Cbl (20 мкМ:10 мкМ) в буфере EPPS (40 мМ, рН 7,6) с добавлением 150 мМ NaCl и 10% глицерина при 25°С. Реакции начинали путем добавления 50 мкМ GSH и за их протеканием следили в течение 60 мин. За протеканием реакций следили с помощью спектрофотометрии в УФ и видимой области (одно полное сканирование (от 300 до 700 нм) проводили каждые 2 мин).
Во-первых, результаты показывают, что серосодержащие алкилкобаламины, Me-S-MeCbl и Me-S-EtCbl, являются лучше чем природный кофактор MeCbl и их соответствующие не содержащие серу аналоги, пропилкобаламин и бутилкобаламин. В действительности, PrCbl и BuCbl не способны восстанавливать ферментативную активность патогенного варианта CblC, Arg161Gly, тогда как два новых кобаламина, описанные в настоящем изобретении, могут поддерживать протекание этой реакции с образованием в качестве продукта коб(II)аламина. Стабилизация коб(II)аламина посредством мутантного Arg161Gly в присутствии MeCbl и при высокой концентрации GSH описана ранее. В настоящем изобретении обнаружен сходный механизм, но с увеличенной биологической активностью, т.е. периоды полупревращения при протекании реакции сравнимы с соответствующими CblC дикого типа.
Во-вторых, результаты анализа тиолятокобаламинов показывают, что описанный ранее тиолятокобаламин, GSCbl, может поддерживать протекание реакции CblC дикого типа и патогенного варианта Arg161Gly, хотя в 4-5 раз менее эффективно, чем два производных тиолятокобаламина, описанные в настоящем изобретении, а именно MPG-Cbl и Суа-Cbl.
Пример 16: Исследование биологической активности Суа-Cbl и MPG-Cbl в культивированных клетках человека, полученных у здоровых субъектов или пациентов с нарушением CblC: анализ метилмалоновой кислоты, биомаркера недостаточности кобаламина.
Исследовали клеточный ответ на лечение новыми производными Суа-Cbl и MPG-Cbl и результаты сопоставляли с результатами для использующейся в настоящее время лекарственной формы CNCbl. Способность новых производных кобаламина Суа-Cbl и MPG-Cbl, обеспечивать регулирование метаболизма, т.е. уменьшение, например, продуцирования ММА содержащими CblC фибробластами в культуре, исследовали так, как описано в опубликованных ранее экспериментальных методиках. На Фиг. 13 приведено сопоставление эффекта CNCbl (0,001 мМ) и эффекта такой же дозы Суа-Cbl или MPG-Cbl, добавленной к культивированным фибробластам, полученным у здоровых субъектов (HFF (постнатальные фибробласты человека линии Foreskin), NHDF (нормальные фибробласты кожи человека), PCS (клетки-предшественники), фибробласты Wiesel, контроль) или пациентов с нарушением CblC (WG1801, WG2176, WG3354, GM10011, GM02345B, GM02452C). Как можно видеть из этих результатов, Суа-Cbl и MPG-Cbl намного лучше уменьшают концентрацию ММА до концентрации, наблюдающейся в фибробластах здоровых субъектов, чем CNCbl.
Также проводили дополнительное исследование с целью сопоставления эффекта тиолятокобаламинов Суа-Cbl и MPG-Cbl и серосодержащего алкилкобаламина Me-S-MeCbl и структурных аналогов, которые не используют для лечения. Результаты клеточного ответа (фибробласты здоровых людей, контроль и фибробласты пациентов с нарушением CblC) на лечение кобаламином, выраженные с помощью концентрации ММА, приведены в Таблице 6.
*Клетки сначала выращивали в присутствии определенных кобаламинов в течение периода времени, составляющего всего 7 дней, без замены культуральной среды. Затем культуральную среду удаляли и заменяли на чистую среду, не содержащую добавочный кобаламин (эксперимент с вымыванием). Клетки выращивали в течение еще 7 дней (эксперимент с вымыванием) и с целью сопоставления определяли концентрации ММА.
Контрольными здоровыми фибробластами, использующимися в настоящем изобретении, являлись HFF, NHDF и Wiezel. Линии клеток, обозначенные с помощью WG и GM, представляли собой фибробласты, полученные у пациентов, страдающих связанным с CblC заболеванием.
В Таблице 6 представлены результаты, полученные с использованием разных линий клеток, часть которых получена у пациентов, страдающих связанным с CblC заболеванием.
Совместно эти результаты являются доказательством следующего:
(a) Суа-Cbl и MPG-Cbl успешно переносятся в клетки с помощью традиционного переносчика ТС и его клеточного рецептора CD320.
(b) Суа-Cbl и MPG-Cbl не являются цитотоксическими при экспериментальных условиях, использованных в настоящем изобретении.
(c) Суа-Cbl и MPG-Cbl могут обеспечивать протекание реакции митохондриальной МСМ в большей степени, чем CNCbl, одна из использующихся в настоящее время лекарственных форм.
(d) Тот факт, что митохондриальный метаболизм витамина В12 можно восстановить путем лечения с помощью Суа-Cbl или MPG-Cbl, указывает на то, что новые производные являются биологически активными в цитозоле (где происходит переработка Cbl) а также в митохондрионе, где питательный микроэлемент необходим для реакции МСМ.
(e) Me-S-MeCbl, MPG-Cbl и Суа-Cbl поддерживают ферментативную активность патогенного варианта CblC, Arg161Gly (юношеская форма связанного с CblC заболевания), обеспечивая более эффективное удаление находящихся в бета-положении аксиальных лигандов по сравнению с их соответствующими аналогами, GSCbl (для тиолятокобаламинов) и MeCbl (для содержащих связь Со-С серосодержащих кобаламинов).
(f) Me-S-MeCbl уменьшает концентрацию ММА в большей степени, чем его структурный аналог MeCbl, это означает, что этот серосодержащий алкилкобаламин обладает превосходной активностью по отношению к восстановлению внутриклеточного метаболизма кобаламина. Этот серосодержащий алкилкобаламин уменьшает накопление ММА в клеточной среде аналогично MPG-Cbl.
(g) Хотя GSCbl является более эффективным для уменьшения концентрации ММА в содержащих CblC фибробластах, эксперимент с вымыванием показал, что регулирование метаболизма, обеспеченное с помощью MPG-Cbl и Суа-Cbl, продолжается дольше, чем в случае GSCbl, т.е. это предотвращает образование токсичной ММА после того как в клетки не поступает дополнительный кобаламин (Таблица 6). Полученные в настоящем изобретении результаты показывают, что MPG-Cbl и Суа-Cbl лучше поддерживают метаболизм кобаламина в течение длительного времени в содержащих CblC фибробластах, чем их структурный аналог GSCbl.
Claims (22)
1. Производное кобаламина формулы (I)
в которой X обозначает лиганд, имеющий формулу, выбранную из группы, состоящей из -(CH2)1-5-S-(CH2)0-3-CH3, -S-(CH2)1-5-NH2 или
2. Кобаламин формулы (I) по п. 1, в котором
X=-S-CH2-CH2-NH2,
3. Фармацевтическая композиция для лечения связанного с В12 заболевания, содержащая кобаламин по п. 1 или 2.
4. Фармацевтическая композиция по п. 3, которая представляет собой состав для перорального введения.
5. Фармацевтическая композиция по п. 3, которая представляет собой состав для парентерального введения.
6. Пищевая добавка для лечения связанного с В12 заболевания, содержащая производное кобаламина по п. 1 или 2 и подходящую добавку.
7. Способ получения производного кобаламина формулы (I) по п. 1
в котором гидрохлорид гидроксикобаламина вводят в реакцию с тиолом, имеющим формулу, выбранную из группы, состоящей из H-S-(CH2)1-5-NH2,
где Z обозначает отщепляющуюся группу, предпочтительно атом галогена,
и затем продукт формулы (I) выделяют и очищают.
8. Применение производного кобаламина по п. 1 или 2 для лечения связанного с В12 заболевания.
9. Применение по п. 8, где заболевание вызвано нарушением CblC.
10. Применение по п. 8, где заболеванием является связанная с возрастом психическая дегенерация.
11. Применение по п. 10, где связанной с возрастом психической дегенерацией является слабоумие.
12. Применение по п. 10, где связанной с возрастом психической дегенерацией является болезнь Альцгеймера.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17172613.6 | 2017-05-24 | ||
| EP17172613.6A EP3406622A1 (en) | 2017-05-24 | 2017-05-24 | Cobalamin derivatives and their use for the treatment of diseases caused by lack of vitamin b12 supply |
| PCT/EP2018/063597 WO2018215578A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-05-24 | Cobalamin derivatives and their use for the treatment of diseases caused by lack of vitamin b12 supply |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019141483A RU2019141483A (ru) | 2021-06-24 |
| RU2019141483A3 RU2019141483A3 (ru) | 2021-09-02 |
| RU2777536C2 true RU2777536C2 (ru) | 2022-08-08 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002087593A1 (en) * | 2001-04-25 | 2002-11-07 | Cobalz Limited | A method for treating or preventing a functional vitamin b12 deficiency in an individual and to medical compositions for use in said method |
| RU2576511C2 (ru) * | 2010-02-24 | 2016-03-10 | Эмисфире Текнолоджис, Инк. | Пероральная терапия недостаточности витамина в12 |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002087593A1 (en) * | 2001-04-25 | 2002-11-07 | Cobalz Limited | A method for treating or preventing a functional vitamin b12 deficiency in an individual and to medical compositions for use in said method |
| RU2576511C2 (ru) * | 2010-02-24 | 2016-03-10 | Эмисфире Текнолоджис, Инк. | Пероральная терапия недостаточности витамина в12 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MUKHERJEE R. et al., Synthesis, Synchrotron X-ray Diffraction, and Kinetic Studies on the Formation of a Novel Thiolatocobalamin of Captoprile: Evidence for cis-trans Isomerization in the β-Axial Ligand, Inorganic Chemistry, 2009, v. 48, no. 19, p. 9526-9534. SCHEURING E.M. et al., Sulfur-Containing Cobalamins: X-ray Absorption Spectroscopic Characterization, Biochemistry, 1994, v. 33, no. 20, p. 6310-6315. NOME F. et al., Interaction of Cysteine with Vitamin B12a: Kinetic and Thermodynamic Investigations, Journal of the Chemical Society, Dalton Transactions, 1976, v. 13, p. 1212-1219. DOLPHIN D. et al., 387. The properties of Cobalamines with Sulphur-containing Ligands, Journal of the Chemical Society, 1965, p. 2174-2181. GRATE J.H. et al., Synthesis and Reactions of Organocobalamins Relevant to the Mechanism of the Methylmalonyl-CoA-Succinyl-CoA Mutase Enzyme, Journal of the American Chemical Society, 1982, v. 104, p. 1588-1594. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rizzo et al. | A review of vitamin B12 | |
| Banerjee | B12 trafficking in mammals: a case for coenzyme escort service | |
| Plantone et al. | Riboflavin in neurological diseases: a narrative review | |
| Seshadri et al. | Homocysteine, B vitamins, and coronary artery disease | |
| Green et al. | Vitamin B12 | |
| E Trimmer | Methylenetetrahydrofolate reductase: biochemical characterization and medical significance | |
| Jakubowski | Pathophysiological consequences of homocysteine excess | |
| Spanaki et al. | The role of glutamate dehydrogenase in mammalian ammonia metabolism | |
| Schaffer et al. | Role of taurine in the pathologies of MELAS and MERRF | |
| Friederich et al. | Pathogenic variants in SQOR encoding sulfide: quinone oxidoreductase are a potentially treatable cause of Leigh disease | |
| Ebeling et al. | Improving retinal mitochondrial function as a treatment for age-related macular degeneration | |
| Guéant et al. | Causes and consequences of impaired methionine synthase activity in acquired and inherited disorders of vitamin B12 metabolism | |
| Hankard et al. | Oral glutamine slows down whole body protein breakdown in Duchenne muscular dystrophy | |
| Hannibal et al. | The X-ray crystal structure of glutathionylcobalamin revealed | |
| CA3101100A1 (en) | Products and methods for assessing and increasing klotho protein levels | |
| Kožich et al. | Lessons learned from inherited metabolic disorders of sulfur-containing amino acids metabolism | |
| RU2777536C2 (ru) | Производные кобаламина и их применение для лечения заболеваний, вызванных отсутствием поступления витамина b12 | |
| Tang et al. | MR1-dependence of unmetabolized folic acid side-effects | |
| US20170087180A1 (en) | Methods and compositions for treating nitric oxide deficiency disorders and related conditions | |
| CN110799518B (zh) | 钴胺素衍生物及其用于治疗因缺乏维生素b12供应引起的疾病的用途 | |
| Durin et al. | Efficacy of oral manganese and D-galactose therapy in a patient bearing a novel TMEM165 variant | |
| Zhu et al. | Collagen Peptides as a Hypoxia-Inducible Factor-2α-Stabilizing Prolyl Hydroxylase Inhibitor to Stimulate Intestinal Iron Absorption by Upregulating Iron Transport Proteins | |
| Seneff et al. | Sulfate’s Critical Role for Maintaining Exclusion Zone Water: Dietary Factors Leading to Deficiencies | |
| CA3061893A1 (en) | Selenium containing pharmaceutical agents, compositions, and methods relating thereto | |
| JP2021527127A (ja) | 中枢神経系内のグルコースレベルを増強する方法 |