RU2771310C2 - Способ двойной конъюгации для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство - Google Patents
Способ двойной конъюгации для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2771310C2 RU2771310C2 RU2019142720A RU2019142720A RU2771310C2 RU 2771310 C2 RU2771310 C2 RU 2771310C2 RU 2019142720 A RU2019142720 A RU 2019142720A RU 2019142720 A RU2019142720 A RU 2019142720A RU 2771310 C2 RU2771310 C2 RU 2771310C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- engineered
- cysteine residues
- dar
- adc
- Prior art date
Links
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 title claims abstract description 106
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 title claims description 18
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims abstract description 76
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 29
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 36
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 13
- -1 CA242 Proteins 0.000 claims description 11
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 102100033579 Trophoblast glycoprotein Human genes 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 101000801433 Homo sapiens Trophoblast glycoprotein Proteins 0.000 claims description 5
- 102000017930 EDNRB Human genes 0.000 claims description 4
- 108010090557 Endothelin B Receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 4
- ZBMZOFSLQIPSPW-UHFFFAOYSA-N 3-bis(3-sulfophenyl)phosphanylbenzenesulfonic acid Chemical group OS(=O)(=O)C1=CC=CC(P(C=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)=C1 ZBMZOFSLQIPSPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000004145 Annexin A1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000663 Annexin A1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101100208111 Arabidopsis thaliana TRX5 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 102100031151 C-C chemokine receptor type 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710149815 C-C chemokine receptor type 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 claims description 2
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028668 C-type lectin domain family 4 member C Human genes 0.000 claims description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036369 Carbonic anhydrase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039496 Choline transporter-like protein 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028757 Chondroitin sulfate proteoglycan 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036466 Delta-like protein 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000012804 EPCAM Human genes 0.000 claims description 2
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710120217 Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035139 Folate receptor alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 claims description 2
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000714525 Homo sapiens Carbonic anhydrase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000910338 Homo sapiens Carbonic anhydrase 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000916489 Homo sapiens Chondroitin sulfate proteoglycan 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000928513 Homo sapiens Delta-like protein 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001023230 Homo sapiens Folate receptor alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000606465 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000897042 Homo sapiens Nucleotide pyrophosphatase Proteins 0.000 claims description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101100420560 Homo sapiens SLC39A6 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000658574 Homo sapiens Transmembrane 4 L6 family member 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000904724 Homo sapiens Transmembrane glycoprotein NMB Proteins 0.000 claims description 2
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000955999 Homo sapiens V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039813 Inactive tyrosine-protein kinase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101100369076 Mus musculus Tdgf1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035486 Nectin-4 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710043865 Nectin-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021969 Nucleotide pyrophosphatase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108091007561 SLC44A4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150057140 TACSTD1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101150117918 Tacstd2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034902 Transmembrane 4 L6 family member 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 claims description 2
- 101710190034 Trophoblast glycoprotein Proteins 0.000 claims description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027212 Tumor-associated calcium signal transducer 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023144 Zinc transporter ZIP6 Human genes 0.000 claims description 2
- MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N alpha-L-Fucp-(1->2)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](CO)OC(O)[C@@H]3O)O)O[C@@H]2CO)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O2)O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N 0.000 claims description 2
- CFDVGUXRLQWLJX-QGTNPELVSA-N beta-D-Galp-(1->3)-[alpha-L-Fucp-(1->4)]-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](NC(C)=O)C(O)O[C@@H]1CO CFDVGUXRLQWLJX-QGTNPELVSA-N 0.000 claims description 2
- SFZBBUSDVJSDGR-XWFYHZIMSA-N beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-beta-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]2O)O)[C@@H]1NC(C)=O SFZBBUSDVJSDGR-XWFYHZIMSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940127276 delta-like ligand 3 Drugs 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000052178 fibroblast growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 claims description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 claims 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- RFQYSAASDBNNDZ-UCGHAGIGSA-N [(1s)-1-(chloromethyl)-3-[6-[(4-hydroxybenzoyl)amino]imidazo[1,2-a]pyridine-2-carbonyl]-9-methyl-1,2-dihydrobenzo[e]indol-5-yl] n-[2-[[4-[[(2s)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2s)-2-[2-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethoxy]ethoxycarbonylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pe Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(=O)NC=1C=CC(COC(=O)N(C)CCN(CCOCCO)C(=O)OC=2C3=CC=CC(C)=C3C=3[C@H](CCl)CN(C=3C=2)C(=O)C=2N=C3C=CC(NC(=O)C=4C=CC(O)=CC=4)=CN3C=2)=CC=1)C(=O)OCCOCCN1C(=O)C=CC1=O RFQYSAASDBNNDZ-UCGHAGIGSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[2,3-i][1,2]benzodiazepine Chemical class C1=CN=NC2=C3C=CN=C3C=CC2=C1 YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N duocarmycin Chemical class COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 9
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 7
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 5
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- OMRPLUKQNWNZAV-CONSDPRKSA-N (6as)-3-[3-[[(6as)-2-methoxy-8-(4-methoxyphenyl)-11-oxo-6a,7-dihydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-3-yl]oxy]propoxy]-8-(4-aminophenyl)-2-methoxy-6a,7-dihydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-11-one Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=CN2C(=O)C3=CC(OC)=C(OCCCOC=4C(=CC=5C(=O)N6C=C(C[C@H]6C=NC=5C=4)C=4C=CC(N)=CC=4)OC)C=C3N=C[C@@H]2C1 OMRPLUKQNWNZAV-CONSDPRKSA-N 0.000 description 4
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000047934 Caspase-3/7 Human genes 0.000 description 4
- 108700037887 Caspase-3/7 Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- CIORWBWIBBPXCG-JZTFPUPKSA-N amanitin Chemical class O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H](C(C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1CS(=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-JZTFPUPKSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 4
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010093470 monomethyl auristatin E Proteins 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 3
- HXVJDHROZFWXHT-UHFFFAOYSA-N 2-diphenylphosphanylbenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HXVJDHROZFWXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010027164 Amanitins Proteins 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000000970 DNA cross-linking effect Effects 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 229960005558 mertansine Drugs 0.000 description 3
- 108010059074 monomethylauristatin F Proteins 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- HGWGEQXOJCXFBA-UHFFFAOYSA-N 2-dicyclohexylphosphanylbenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1P(C1CCCCC1)C1CCCCC1 HGWGEQXOJCXFBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YICAEXQYKBMDNH-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(3-hydroxypropyl)phosphanyl]propan-1-ol Chemical compound OCCCP(CCCO)CCCO YICAEXQYKBMDNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 2
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 2
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010084592 Saporins Proteins 0.000 description 2
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 2
- 102100030859 Tissue factor Human genes 0.000 description 2
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 2
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 2
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- XQRJFEVDQXEIAX-JFYQDRLCSA-M cobinamide Chemical class [Co]N([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@H](O)C)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O XQRJFEVDQXEIAX-JFYQDRLCSA-M 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 2
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- ANZJBCHSOXCCRQ-FKUXLPTCSA-N mertansine Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(=O)CCS)CC(=O)N1C)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 ANZJBCHSOXCCRQ-FKUXLPTCSA-N 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000030147 nuclear export Effects 0.000 description 2
- 125000002524 organometallic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 150000003003 phosphines Chemical class 0.000 description 2
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011946 reduction process Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- JFCFGYGEYRIEBE-YVLHJLIDSA-N wob38vs2ni Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(=O)CCC(C)(C)S)CC(=O)N1C)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 JFCFGYGEYRIEBE-YVLHJLIDSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YCGQPIRMLGEWMW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-butyl-4-(3-methoxyphenyl)-2-oxo-1,8-naphthyridin-3-yl]-3-[4-[(dimethylamino)methyl]-2,6-di(propan-2-yl)phenyl]urea;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)C=1C=C(CN(C)C)C=C(C(C)C)C=1NC(=O)NC=1C(=O)N(CCCC)C2=NC=CC=C2C=1C1=CC=CC(OC)=C1 YCGQPIRMLGEWMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZGSNQJCTOMELT-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylorsellinic acid Chemical compound CC1=C(C)C(C(O)=O)=C(O)C(C)=C1O NZGSNQJCTOMELT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITPOKAFWZBFZCV-UHFFFAOYSA-N 3-diphenylphosphanylbenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 ITPOKAFWZBFZCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALGIYXGLGIECNT-UHFFFAOYSA-N 3h-benzo[e]indole Chemical compound C1=CC=C2C(C=CN3)=C3C=CC2=C1 ALGIYXGLGIECNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPFKYAOGDKHTPZ-UHFFFAOYSA-N 4-diphenylphosphanylbenzenesulfonic acid Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VPFKYAOGDKHTPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DHBKYZYFEXXUAK-ONGXEEELSA-N Ala-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 DHBKYZYFEXXUAK-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 101100330725 Arabidopsis thaliana DAR4 gene Proteins 0.000 description 1
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- BVFQOPGFOQVZTE-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BVFQOPGFOQVZTE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229940126161 DNA alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 230000010777 Disulfide Reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- YXQCLIVLWCKCRS-RYUDHWBXSA-N Gln-Gly-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O YXQCLIVLWCKCRS-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ROHVCXBMIAAASL-HJGDQZAQSA-N Gln-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O ROHVCXBMIAAASL-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N Glu-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- HHRODZSXDXMUHS-LURJTMIESA-N Gly-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)C[NH3+])C(=O)NCC([O-])=O HHRODZSXDXMUHS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N Gly-Thr-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N Ile-Trp-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- ZGKVPOSSTGHJAF-HJPIBITLSA-N Ile-Tyr-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N ZGKVPOSSTGHJAF-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-O Imidazolium Chemical compound C1=C[NH+]=CN1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N Leu-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SIGZKCWZEBFNAK-QAETUUGQSA-N Leu-Ser-Ser-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SIGZKCWZEBFNAK-QAETUUGQSA-N 0.000 description 1
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N Met-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N Phe-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122277 RNA polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- WPDOZYZAJKUVRZ-NRYSMURASA-N S-[(2R,3S,4S,6S)-6-[[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-[(2S,4S,5S)-5-[acetyl(ethyl)amino]-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-6-[[(2S,5Z,9R)-9-hydroxy-12-(methoxycarbonylamino)-13-[2-(methyltrisulfanyl)ethylidene]-11-oxo-2-bicyclo[7.3.1]trideca-1(12),5-dien-3,7-diynyl]oxy]-2-methyloxan-3-yl]amino]oxy-4-hydroxy-2-methyloxan-3-yl] 4-[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-dihydroxy-4-methoxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-iodo-2,3-dimethoxy-6-methylbenzenecarbothioate Chemical compound CCN([C@H]1CO[C@H](C[C@@H]1OC)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](NO[C@H]2C[C@H](O)[C@H](SC(=O)c3c(C)c(I)c(O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)[C@H]4O)c(OC)c3OC)[C@@H](C)O2)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C#C\C=C/C#C[C@]2(O)CC(=O)C(NC(=O)OC)=C1C2=CCSSSC)C(C)=O WPDOZYZAJKUVRZ-NRYSMURASA-N 0.000 description 1
- 235000018734 Sambucus australis Nutrition 0.000 description 1
- 244000180577 Sambucus australis Species 0.000 description 1
- FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SQBLRDDJTUJDMV-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SQBLRDDJTUJDMV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- HBTCFCHYALPXME-HTFCKZLJSA-N Ser-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HBTCFCHYALPXME-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N Thr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 1
- BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N Thr-Val-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- 229940122429 Tubulin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- GAYLGYUVTDMLKC-UWJYBYFXSA-N Tyr-Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GAYLGYUVTDMLKC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N Tyr-Cys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- LMKKMCGTDANZTR-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Asp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LMKKMCGTDANZTR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UPODKYBYUBTWSV-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Cys Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 UPODKYBYUBTWSV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N Tyr-Tyr-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- CGGVNFJRZJUVAE-BYULHYEWSA-N Val-Asp-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CGGVNFJRZJUVAE-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N Val-His-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N Val-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- NLMBVBUNULOTNS-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2s)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2s)-2-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(3r,4s,5s)-1-[(2s)-2-[(1r,2r)-3-[[(1s,2r)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-o Chemical compound C1([C@H](O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H]2CCCN2C(=O)C[C@H]([C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCC=2C=CC(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN3C(C=CC3=O)=O)C(C)C)=CC=2)C(C)C)OC)=CC=CC=C1 NLMBVBUNULOTNS-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- JMXMXKRNIYCNRV-UHFFFAOYSA-N bis(hydroxymethyl)phosphanylmethanol Chemical compound OCP(CO)CO JMXMXKRNIYCNRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000005595 deprotonation Effects 0.000 description 1
- 238000010537 deprotonation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 125000005179 haloacetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000006138 lithiation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000008054 sulfonate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O triethanolammonium Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003744 tubulin modulator Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 description 1
- BNJNAEJASPUJTO-DUOHOMBCSA-N vadastuximab talirine Chemical compound COc1ccc(cc1)C2=CN3[C@@H](C2)C=Nc4cc(OCCCOc5cc6N=C[C@@H]7CC(=CN7C(=O)c6cc5OC)c8ccc(NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN9C(=O)C[C@@H](SC[C@H](N)C(=O)O)C9=O)C(C)C)cc8)c(OC)cc4C3=O BNJNAEJASPUJTO-DUOHOMBCSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
- A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6873—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an immunoglobulin; the antibody being an anti-idiotypic antibody
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу получения конъюгатов антитело–лекарственное средство и к конъюгатам антитело–лекарственное средство, где антитело содержит сконструированный остаток цистеина в положении 41 тяжелой цепи в соответствии с системой Kabat, где терапевтические группы конъюгированы с одним или более сконструированными остатками цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера. Способ позволяет регулировать DAR полученных конъюгатов антитело–лекарственное средство, получить продукт с незначительным количеством непрореагировавшего антитела. Конъюгат антитело–лекарственное средство имеет уменьшенную гидрофобность, благоприятным образом влияющую на фармакокинетические свойства конъюгата. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 1 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новому способу конъюгации терапевтических групп, посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера, с антителами. Кроме того, оно относится к новым конъюгатам антитело-лекарственное средство.
Уровень техники
Конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) представляют собой развивающийся класс направленных терапевтических средств, в которых объединены специфичность антител и активность цитотоксических молекул.
Сконструированные антитела с цистеиновыми заменами все больше используют для конъюгации терапевтической группы (например, лекарственного средства, токсина или хелатообразователя для радиоактивного изотопа), флуоресцентной метки или гидрофильного полимера. Введение остатка цистеина в подходящем положении антитела позволяет контроль участка конъюгации, и полученные сайт-специфические конъюгаты являются более гомогенными, чем конъюгаты, полученные посредством конъюгации дикого типа, т.е. конъюгации посредством восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи. Для сайт-специфически конъюгированных ADC, как правило, показывают по меньшей мере эквивалентную активность in vivo, улучшенную фармакокинетику (PK) и расширенное терапевтическое окно, по сравнению с конъюгатами дикого типа. Первый сайт-специфический ADC в клинических исследованиях, SGN-CD33A (Seattle Genetics), содержит расщепляемый дипептидный линкер (т.е., валин-аланин) и перекрестно сшивающий ДНК димер пирролобензодиазепина (PBD) в качестве лекарственного средства, которое связано с цистеином в положении тяжелой цепи S239C в части Fc mAb IgG1 h2H12, имея среднее отношение лекарственного средства к антителу (DAR) 1,9 (Sutherland et al., Blood, 2013, 122(8), 1455-1463). Эта низкая нагрузка лекарственного средства может не является подходящей для каждого связанного линкером лекарственного средства или для каждого типа злокачественной опухоли. Для менее активных токсинов или для типов злокачественных опухолей с более низкой экспрессией антигена-мишени, более высокое DAR может являться необходимым. Однако, это может становиться очевидным только на продвинутой стадии разработки, когда значительные время, усилия и ресурсы затрачены на разработку антитела с одним сконструированным остатком цистеина в тяжелой или легкой цепи. Кроме того, когда становится очевидным, что среднее DAR 1,9 является недостаточным, дополнительные остатки цистеина необходимо сконструировать в антителе, что требует разработки нового антитела, и таким образом, разработки новой линии клеток, что является длительным процессом. Кроме того, определение положения одного или более дополнительных остатков цистеина не является очень простой задачей, поскольку, например, не все положения позволяют конъюгацию, или некоторые положения могут приводить к ADC с неприемлемо высокими процентами высокомолекулярных агрегатов (HMW).
Таким образом, новые и более гибкие способы конъюгации, которые можно использовать для простой регулировки DAR полученных ADC, без необходимости предпринимать разработку полностью нового антитела, все еще являются желательными, так же как ADC, имеющие приемлемые свойства связывания антигена, фармакокинетику, эффективность in vivo, терапевтический индекс и/или стабильность.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к способу получения конъюгатов антитело-лекарственное средство и к конъюгатам антитело-лекарственное средство, в которых терапевтические группы конъюгированы с одним или более сконструированными остатками цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1. Профиль HIC vc-секо-DUBA ADC 1d, конъюгированного посредством только восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, DAR 2,5 (верхняя панель) и vc-секо-DUBA ADC 1c, конъюгированного посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, DAR 2,6 (нижняя панель).
Фигура 2. Профили HIC vc-MMAE ADC, конъюгированных посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, с увеличивающимся DAR, полученных с использованием способа по изобретению с увеличивающимися количествами TCEP.
Фигура 3. Анализ с использованием каспазы 3/7 анти-PSMA-vc-секо-DUBA ADC 3a-3d, конъюгированных посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, с увеличивающимся DAR, полученных с использованием способа по изобретению. Ритуксимаб-vc-секо-DUBA представляет собой несвязывающий контрольный ADC.
Фигура 4. Эффективность in vivo анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC 1b (, DAR 2,2) и 1c (, DAR 2,6), конъюгированных посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, ADC 1d, конъюгированного только посредством восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи (только случайно, , DAR 2,5) для ксенотрансплантата BT474 у мышей ces1ce KO nude.
Фигура 5. Полные PK кривые анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC 1c (DAR 2,6), конъюгированного посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, и анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC 1d (DAR 2,5) конъюгированного только посредством восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к способу получения конъюгатов антитело-лекарственное средство и к конъюгатам антитело-лекарственное средство, в которых терапевтически группы конъюгированы с одним или более сконструированными остатками цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера.
Термин «антитело», в рамках изобретения, относится к моноклональному антителу (mAb), содержащему две тяжелые цепи и две легкие цепи, или к его антигенсвязывающему фрагменту, в котором присутствует по меньшей мере одна межцепьевая дисульфидная связь, например, фрагменту Fab, Fab’ или F(ab’)2. Антитела по изобретению могут принадлежать любому изотипу, такому как антитела IgG, IgA или IgM. Предпочтительно, антитело представляет собой антитело IgG, более предпочтительно, антитело IgG1 или IgG2. Антитела могут являться химерными, гуманизированными или человеческими. Предпочтительно, антитела являются гуманизированными. Даже более предпочтительно, антитело представляет собой гуманизированное или человеческое антитело IgG, наиболее предпочтительно, гуманизированное или человеческое mAb IgG1. Антитело может иметь легкие цепи κ (каппа) или λ (лямбда), предпочтительно, легкие цепи κ (каппа), т.е., представлять собой гуманизированное или человеческое антитело IgG1-κ.
В гуманизированных антителах, антигенсвязывающие определяющие комплементарность области (CDR) в вариабельных областях HC и LC происходят из антител из не относящегося к человеку вида, обычно, мыши, крысы или кролика. Эти не относящиеся к человеку CDR могут быть помещены среди человеческих каркасных остатков (FR1, FR2, FR3 и FR4) из вариабельных областей HC и LC. Выбранные аминокислоты в человеческих FR можно заменять на соответствующие исходные аминокислоты из не относящегося к человеку вида для улучшения аффинности связывания, с сохранением в то же время низкой иммуногенности. Альтернативно, выбранные аминокислоты из исходных FR не относящегося к человеку вида заменяют на соответствующие им человеческие аминокислоты для уменьшения иммуногенности, в то же время сохраняя аффинность связывания антитела. Гуманизированные таким образом вариабельные области комбинируют с человеческими константными областями.
Термины «моноклональное антитело» и «mAb», в рамках изобретения, относятся к антителу, полученному из популяции по существу однородных антител, т.е., индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Антитела можно получать посредством иммунизации животных смесью пептидов, представляющих желательный антиген. B-лимфоциты выделяют и сливают с клетками миеломы, или отдельные B лимфоциты культивируют в течение нескольких суток в присутствии кондиционированной среды и фидерных клеток. Супернатанты миеломы или B-лимфоцитов, содержащие продуцированные антитела, тестируют для отбора подходящих B лимфоцитов или гибридом. Моноклональные антитела можно получать из подходящих гибридом способом гибридомы, впервые описанным в Köhler et al., Nature, 1975, 256, 495-497. Альтернативно, РНК из подходящих B-клеток или лимфомы можно лизировать, можно выделять РНК, подвергать обратной транскрипции и секвенировать. Антитела можно получать способом рекомбинантной ДНК в клетках бактерий, эукариотических животных или растений (см., например, Патент США No. 4816567). «Моноклональные антитела» можно выделять также из фаговых библиотек антител с использованием способов, описанных в данной области, например, в Clackson et al., Nature 199, 1352, 624-628 и Marks et al., J. Mol. Biol. 1991, 222, 581-597.
Термин «сконструированное антитело с цистеиновыми заменами», в рамках изобретения, относится к антителу, в котором один или более остатков цистеина введены посредством способов генной инженерии, либо посредством замены одного или более аминокислотных остатков антитела на цистеин, или посредством вставки одного или более остатков цистеина в первичную аминокислотную последовательность.
Термин «конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC)», в рамках изобретения, относится к антителу, как определено в настоящем описании выше, с которым одна или более терапевтических групп конъюгированы посредством линкера (связанные линкером лекарственные средства). Количество связанных линкером лекарственных средств, конъюгированных с антителом, обычно обозначают как отношение лекарственного средства к антителу (DAR). Способами конъюгации, как правило, получают гетерогенную смесь различных молекул ADC, т.е. различных вариантов DAR, имеющих различные отношения лекарственного средства к антителу. Таким образом, термин «ADC» относится также к таким смесям вариантов DAR. Термин «среднее DAR» относится к среднему DAR популяции таких вариантов DAR. Как хорошо известно в данной области, распределение DAR и нагрузки лекарственного средства можно определять, например, с использованием хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC) или обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-HPLC). HIC является особенно пригодной для определения среднего DAR.
Настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата антитело-лекарственное средство, включающему стадии:
a. избирательного восстановления сконструированного антитела с цистеиновыми заменами, включающего реакцию антитела, содержащего один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41 и 89 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, 152, 153, 155 и 171 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, 40 и 41 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, и 165 и 168 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, с соединением в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII)
или его солью;
b. дополнительного восстановления избирательно восстановленного антитела со стадии a. с использованием средства, восстанавливающего межцепьевые дисульфидные связи; и
c. конъюгации терапевтических групп с дополнительно восстановленным антителом со стадии b. посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкеров.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, соединение в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) присутствует в количестве по меньшей мере один молярный эквивалент на молярное количество сконструированного цистеина. Это означает, что для избирательного восстановления антитела, имеющего один сконструированный цистеин в легкой цепи или тяжелой цепи, т.е. два сконструированных остатка цистеина присутствуют в антителе, по меньшей мере два моль соединения используют на моль антитела.
Является предпочтительным способ, в котором используют количество от 2 до 16 молярных эквивалентов соединения в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) на молярное количество сконструированного цистеина. Если используют менее одного молярного эквивалента на молярное количество сконструированного цистеина, полного восстановления всех сконструированных остатков цистеина не достигают. Молярное отношение соединения к сконструированному цистеину влияет на скорость восстановления (снятия кэпа) сконструированных остатков цистеина, но не оказывает влияния на избирательность восстановления.
Предпочтительно, изобретение относится к способу, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41, 152 и 153 тяжелой цепи, и 40, 41 и 165 легкой цепи. Более предпочтительно, антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 41 тяжелой цепи, и 40 и 41 легкой цепи. Наиболее предпочтительно, антитело для использования в соответствии со способом по изобретению содержит сконструированный цистеин в 41 тяжелой цепи, т.е. HC41C.
В контексте настоящего изобретения, нумерацию Kabat используют для указания положений аминокислот сконструированных остатков цистеина в вариабельных областях тяжелой цепи (HC) и легкой цепи (LC), и нумерацию Eu используют для указания положений в константных областях тяжелой цепи и легкой цепи антитела. Выражение «нумерация Kabat» относится к системе нумерации, используемой для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи из компиляции антител, описанной в Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991).
Выражение «нумерация Eu» относится к индексу Eu, как в Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, NIH publication no. 91-3242, pp. 662, 680, 689 (1991).
В соответствии с настоящим изобретением, сконструированное антитело с цистеиновыми заменами можно получать с использованием общепринятых способов молекулярного клонирования, или собственно домен(ы) тяжелой цепи или легкой цепи антитела, несущие мутацию(мутации) цистеина, можно синтезировать с использованием известных оборудования и способов для синтеза (пептида или ДНК). Как правило, используют способы, сходные с описанными в WO2015/177360.
Соединение в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) избирательно восстанавливает сконструированные остатки цистеина антитела в способе по изобретению. Соединение в соответствии с формулой (I) представляет собой 2-(дифенилфосфино)бензолсульфоновую кислоту, и соединение в соответствии с формулой (II) представляет собой 2-(дициклогексилфосфино)-бензолсульфоновую кислоту. Фосфины (I) и (II) являются коммерчески доступными в форме, например, сульфоновой кислоты или сульфоната натрия, от различных поставщиков, например, Sigma-Aldrich. Соединение в соответствии с формулой (III), (IV), (V), (VI) или (VII) можно получать способами, известными в данной области (аналогичными способам, описанным, например, в M. Bornand et al., Organometallics, 2007, 26(14), 3585-3596 и T. Schultz et al., Synthesis, 2005, 6, 1005-1011). Соединения в соответствии с формулами (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) и (VII) легко подвергаются депротонированию в водном растворе и могут формировать соответствующие соли сульфонаты с катионами, присутствующими в растворе. Типичными катионами являются, например, аммоний, тетраметиламмоний, триэтаноламмоний, имидазолий, натрий и калий, т.е. катионы, присутствующие в общепринятых буферных растворах для получения ADC.
Предпочтительным по настоящему изобретению является способ, в котором сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I), (II), (III), (V), (VI) или (VII), или его солью. Более предпочтительным по настоящему изобретению является способ, в котором сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I), (II) или (III), или его солью. Даже более предпочтительным по настоящему изобретению является способ, в котором сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I) или (II), или его солью. Наиболее предпочтительным по настоящему изобретению является способ, в котором сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I) или его солью.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, среди прочего, что с использованием соединения в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII), кэпированные сконструированные остатки цистеина в специфических положениях в полости Fab, сформированной доменами CH1, VH, VL и CL антитела, подвергаются избирательному восстановлению, в то время как межцепьевые дисульфидные связи, сформированные нативными остатками цистеина антитела, т.е. остатками цистеина из межцепьевой связи, остаются интактными.
Средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, для использования в соответствии со способом по изобретению может представлять собой любое средство, пригодное для восстановления межцепьевых дисульфидных связей цистеина. Пригодные средства, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, хорошо известны специалисту в данной области, см., например, R.E. Hansen et al., Analytical Biochemistry, 2009, 394, 147-158. Как правило, они являются растворимыми в воде и имеют отрицательный окислительно-восстановительный потенциал при pH 7. Восстанавливающее средство может представлять собой тиол или фосфин. Пригодные тиолы включают 1,4-(дитиобутил)-2-амин (DTBA), глутатион, цистеин, 2-меркаптоэтанол, 2-меркаптоэтиламин, дитиоэритрит (DTE) или дитиотреитол (DTT). Пригодные фосфины включают трис(3-сульфофенил)фосфин, трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP), трис(3-гидроксипропил)фосфин (THPP) или трис(гидроксиметил)фосфин. Предпочтительными восстанавливающими средствами являются трис(3-сульфофенил)фосфин, TCEP и DTT. Наиболее предпочтительным средством, восстанавливающим межцепьевые дисульфидные связи, является TCEP.
Средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, для использования в способе по изобретению, предпочтительно, присутствует в количестве более, чем 0,1 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела. Более предпочтительно, средство для восстановления межцепьевой дисульфидной связи присутствует в количестве по меньшей мере 0,25 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела. Даже более предпочтительно, средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, присутствует в количестве от 0,25 до 3 или от 0,25 до 2 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела. Даже более предпочтительно, средство восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, присутствует в количестве от 0,5 до 2 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела, наиболее предпочтительно, от 0,5 до 1 молярного эквивалента на молярный эквивалент антитела.
Способ по настоящему изобретению осуществляют в мягких условиях, т.е. в условиях, в которых антитело является стабильным. Как правило, способ по настоящему изобретению осуществляют в забуференном водном растворе. Сконструированные антитела с цистеиновыми заменами, которые продуцируют в клетках-хозяевах (млекопитающих), и которые выделяют и очищают с использованием общепринятых оборудования и способов, могут нуждаться в замене буфера для получения оптимальных условий для процесса избирательного восстановления по настоящему изобретению. Пригодные забуференные растворы включают забуференные фосфатно-солевым буфером (PBS), цитратом, гистидином, ацетатом и сукцинатом водные растворы. Дополнительные соли и другие растворенные вещества (например, сахароза, трегалоза, ЭДТА) могут присутствовать в забуференном водном растворе. Для стадии избирательного восстановления забуференные растворы, предпочтительно, представляют собой растворы, забуференные ацетатом, гистидином или смесями ацетата и гистидина.
Температура реакции, как правило, лежит в диапазоне от 0°C до 40°C, pH, как правило, лежит в диапазоне от 4 до 8.
Для стадии избирательного восстановления a., pH в диапазоне от 4 до 7 является предпочтительным. Более предпочтительным для стадии избирательного восстановления является pH в диапазоне от 5 до 6.
Как правило, непрореагировавшее/избыточное соединение формулы (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) удаляют перед дополнительным восстановлением избирательно восстановленного антитела, как правило, посредством ультрафильтрации/диафильтрации (UF/DF), проточной фильтрации вдоль потока (TFF) или фильтрации через активированный уголь.
Вышеописанные условия реакции для стадии избирательного восстановления a. в основном влияют на скорость и степень завершения процесса избирательного восстановления и/или на стабильность антитела.
Стадию восстановления межцепьевой дисульфидной связи b. и последующую стадию конъюгации c. по настоящему изобретению можно проводить в забуференном водном растворе, например, забуференном цитратом, гистидином или сукцинатом водном растворе, при pH и температуре, при которых антитело, терапевтические группы, подлежащие конъюгации посредством расщепляемых или нерасщепляемых линкеров (связываемые линкером лекарственные средства), и полученный конъюгат антитела являются стабильными. Как правило, pH лежит в диапазоне от 5 до 8, и температура лежит в диапазоне от 0°C до 40°C.
Для восстановления межцепьевой дисульфидной связи и последующей стадии конъюгации, pH в диапазоне от 6 до 8 является предпочтительным, более предпочтительным является pH в диапазоне от 6,5 до 7,5, pH в диапазоне от 6,8 до 7,3 является наиболее предпочтительным. Предпочтительный забуференный водный раствор, в котором осуществляют стадию восстановления межцепьевой дисульфидной связи и последующую стадию конъюгации по настоящему изобретению, содержит гистидин.
Дополнительные соли и другие растворенные вещества (например, сахароза, трегалоза, ЭДТА) могут присутствовать в забуференном водном растворе. В случае, когда группа, подлежащая конъюгации с антителом, является плохо растворимой в воде, например, в случае гидрофобного связываемого линкером лекарственного средства, группу можно растворять в органическом, смешивающимся с водой растворителе. Пригодные растворители включают диметилсульфоксид (DMSO), диметилацетамид (DMA), пропиленгликоль и этиленгликоль.
Полученные ADC можно очищать с использованием стандартных способов, известных специалисту в данной области, например, фильтрации через активированный уголь, для удаления избытка связываемого линкером лекарственного средства и хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC), для удаления всего непрореагировавшего антитела.
ADC, полученные способом по настоящему изобретению, можно анализировать с использованием аналитических способов, известных в данной области, например, высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), экранированной гидрофобнофазовой HPLC (SHPC), хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC) и эксклюзионной хроматографии (SEC).
Как правило, антитело для использования по изобретению представляет собой моноспецифическое или биспецифическое антитело, или фрагмент антитела, содержащие по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и легкой цепи, связывающиеся с мишенью, выбранной из группы, состоящей из аннексина A1, B7H4, CA6, CA9, CA15-3, CA19-9, CA27-29, CA125, CA242, CCR2, CCR5, CD2, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD47, CD56, CD70, CD74, CD79, CD115, CD123, CD138, CD203c, CD303, CD333, CEA, CEACAM, CLCA-1, CLL-1, c MET, Cripto, DLL3, EGFL, EGFR, EPCAM, EPh (например, EphA2 или EPhB3), рецептора эндотелина B (ETBR), FAP, FcRL5 (CD307), FGFR (например, FGFR3), FOLR1, GCC, GPNMB, HER2, HMW-MAA, интегрина α (например, αvβ3 и αvβ5), IGF1R, TM4SF1 (или антигена L6), подобного антигену Льюиса A углевода, антигена Льюиса X, антигена Льюиса Y, LIV1, мезотелина, MUC1, MUC16, NaPi2b, нектина-4, PD-1, PD-L1, PSMA, PTK7, SLC44A4, STEAP-1, антигена 5T4 (или TPBG, гликопротеина трофобластов), TF (тканевого фактора), TF-Ag, Tag72, TNFR, TROP2, VEGFR и VLA.
Линкер для использования по настоящему изобретению должен содержать функциональную группу, которая может вступать в реакцию с тиольной группой некэпированного сконструированного или восстановленного межцепьевого цистеина, например, малеинимидной или галоацетильной группой. Линкер может являться расщепляемым, например, содержащим расщепляемый дипептид), или нерасщепляемым. Пригодные расщепляемые и нерасщепляемые линкеры известны в данной области. Например, расщепляемые линкеры могут содержать, например, группу валин-цитруллин (vc) или валин-аланин (va), и сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC) представляет собой пример нерасщепляемого линкера. Предпочтительно, используемый линкер представляет собой расщепляемый линкер.
Терапевтическая группа может представлять собой лекарственное средство, токсин или хелатообразователь для радиоактивного изотопа.
Предпочтительным по настоящему изобретению является способ получения ADC, где терапевтическая группа представляет собой лекарственное средство или токсин.
Пригодная терапевтическая группа включает ингибитор тубулина (например, производное майтанзиноида, ауристатина или тубулизина), инактивирующий рибосому белок (например, производное сапорина), связывающее малую бороздку ДНК средство (например, димер или производное дуокармицина или пирролобензодиазепина (PBD)), разрушающее ДНК средство (например, производное PBD), алкилирующее ДНК средство (например, производное дуокармицина), интеркалирующее в ДНК средство (например, производное калихеамицина), перекрестно сшивающее ДНК средство (например, производное димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1H-бензо[e]индола (CBI)), ингибитор РНК-полимеразы (например, производное аманитина), расщепляющее ДНК средство (например, производное калихеамицина) или средство, нарушающее синтез белка или функцию необходимых клеточных белков (например, ингибитор топоизомеразы I или II (например, производное камптотецина), ингибитор протеасомы, ингибитор деацетилазы гистонов, ингибитор ядерного экспорта, ингибитор киназы или ингибитор белка теплового шока 90).
Предпочтительно, терапевтическая группа представляет собой дуокармицин, димер CBI, калихеамицин, PBD, димер PBD, майтанзиноид, тубулизин, камптотецин, аманитин или производное ауристатина. Наиболее предпочтительно, терапевтическая группа представляет собой производное дуокармицина.
Примеры пригодных терапевтических групп включают дуокармицин секо-DUBA, калихеамицин диметилгидразид N-ацетил-гамма-калихеамицина (CalichDMH), димер PBD SGD-1882, майтанзиноиды DM1 и DM4, и ауристатины монометилауристатин E (MMAE) и монометилауристатин F (MMAF).
Примеры комбинаций линкера и терапевтических групп (связанных линкером лекарственных средств) для использования в способе по изобретению включают vc-секо-DUBA (SYD980), мертанзин, эмтанзин, равтанзин, mc-vc-PAB-MMAE (также сокращенно обозначенный как mc-vc-MMAE или vc-MMAE), mc-MMAF и mc-vc-MMAF. Эти сокращенные наименования хорошо известны специалисту в данной области (см. также WO2015/177360). Связанное линкером лекарственное средство vc-секо-DUBA описано в WO2011/133039 как соединение 18b на стр. 210, ll. 21-27. В конкретном варианте осуществления, способ по изобретению, включает стадию (стадию c.) конъюгации vc-секо-DUBA с дополнительно восстановленным антителом со стадии b., как определено в настоящем описании выше, в этом способе, предпочтительно, средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, на стадии b. присутствует в количестве от 0,5 до 1 молярного эквивалента на молярный эквивалент антитела.
Преимущественным образом, способом по изобретению получают продукт реакции, т.е. ADC, с незначительным количеством непрореагировавшего антитела (DAR0). А также, количество высокомолекулярных (HMW) молекул является низким по сравнению с конъюгированными только посредством цистеина из межцепьевой связи ADC, таким образом, среднее DAR можно легко регулировать посредством изменения количества средства, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи. Незначительное количество DAR0 облегчает процесс очистки. Кроме того, отсутствуют потери антитела, которое является наиболее дорогостоящей частью ADC. Способ по изобретению, таким образом, является более эффективным, чем способы конъюгации предшествующего уровня техники.
Изобретение также относится к ADC, который можно получать способом, описанным в настоящем описании выше.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к конъюгату антитело-лекарственное средство, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41 и 89 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, 152, 153, 155 и 171 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, 40 и 41 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, и 165 и 168 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Eu; где терапевтические группы являются конъюгированными посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера с одним или более сконструированными остатками цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи антитела; и где конъюгат антитело-лекарственное средство имеет среднее DAR по меньшей мере 2,0.
Предпочтительно, изобретение относится к ADC, как описано в настоящем описании выше, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41, 89, 152 и 153 тяжелой цепи; и 40, 41 и 165 легкой цепи. Более предпочтительно, изобретение относится к ADC, как описано в настоящем описании выше, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из тяжелая цепь 40 и 41, и 40 и 41 легкой цепи. Даже более предпочтительно, изобретение относится к ADC, как описано в настоящем описании выше, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 41 тяжелой цепи, и 40 и 41 легкой цепи. Наиболее предпочтительно, изобретение относится к ADC, как описано в настоящем описании выше, где антитело содержит сконструированный цистеин в положении HC41.
Предпочтительно, изобретение относится к ADC, как описано в настоящем описании выше, где терапевтические группы, конъюгированные посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера с одним или более сконструированных остатков цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи антитела, выбраны из группы, состоящей из ингибиторов тубулина (например, производных майтанзиноида, ауристатина или тубулизина), инактивирующих рибосому белков (например, производных сапорина), связывающих малую бороздку ДНК средств (например, димеров или производных дуокармицина или пирролобензодиазепина (PBD)), разрушающих ДНК средств (например, производных PBD), алкилирующих ДНК средств (например, производных дуокармицина), интеркалирующих в ДНК средств (например, производных калихеамицина), перекрестно сшивающих ДНК средств (например, производных димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1H-бензо[e]индола (CBI)), ингибиторов РНК-полимеразы (например, производных аманитина), расщепляющих ДНК средств (например, производных калихеамицина) или средств, нарушающих синтез белка или функцию необходимых клеточных белков (например, ингибиторов топоизомеразы I или II (например, производных камптотецина), ингибиторов протеасомы, ингибиторов деацетилазы гистонов, ингибиторов ядерного экспорта, ингибиторов киназы или ингибиторов белка теплового шока 90).
Более предпочтительным является ADC по изобретению, где терапевтические группы выбраны из группы, состоящей из дуокармицина, димера CBI, калихеамицина, PBD, димера PBD, майтанзиноида, тубулизина, камптотецина, аманитина и производных ауристатина. Наиболее предпочтительно, терапевтические группы выбраны из группы, состоящей из производных дуокармицина или производных ауристатина, таких как MMAE и MMAF.
Даже более предпочтительно, изобретение относится к ADC, где антитело содержит сконструированный цистеин в положении HC41, и где группы vc-секо-DUBA или группы vc-MMAE конъюгированы со сконструированными остатками цистеина и с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, и где ADC имеет среднее DAR по меньшей мере 2,0.
Оптимальное среднее DAR ADC зависит, среди прочего, от типа ассоциированного с опухолью антигена, типа антитела, типа терапевтической группы, типа линкера, и зависит от типа злокачественной опухоли. Свойства антигена, например, уровень экспрессии ассоциированного с опухолью антигена на поверхности клеток злокачественных опухолей, распределение ассоциированного с опухолью антигена в здоровой ткани по сравнению с пораженной заболеванием тканью, и скорость его интернализации, все влияют на оптимальное DAR ADC. Как правило, ADC по изобретению, содержащие гидрофобные терапевтические группы, имеют более низкое оптимальное DAR, чем ADC по изобретению, содержащие менее гидрофобные терапевтические группы, поскольку они формируют HMW молекулы более просто, чем ADC, содержащие менее гидрофобные терапевтические группы. ADC, содержащие менее активные терапевтические группы, могут требовать более высокого DAR, чтобы иметь желательную эффективность.
Специалист в данной области способен определять оптимальное DAR любого ADC для использования в лечении любого типа злокачественной опухоли с использованием общепринятых аналитических способов, таких как SEC и HIC, в сочетании с доклиническими тестами in vitro (например, по цитотоксичности против линий клеток злокачественных опухолей, с использованием анализов цитолиза или подтекания мембраны) и экспериментов in vivo (например, по эффективности в моделях ксенотрансплантатов на животных).
В одном предпочтительном варианте осуществления, ADC по изобретению имеет среднее DAR меньшей мере 2,2. Во втором предпочтительном варианте осуществления, ADC по изобретению имеет среднее DAR от 2,0 до 6,0, более предпочтительно, от 2,2 до 6,0.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к ADC, где антитело содержит сконструированный цистеин в положении 41 тяжелой цепи, и где группы vc-секо-DUBA конъюгированы со сконструированными остатками цистеина и с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, и где ADC имеет среднее DAR от 2,2 до 2,6.
Во втором варианте осуществления, изобретение относится к ADC, где антитело содержит сконструированный цистеин в положении 41 тяжелой цепи, и где группы vc-MMAE конъюгированы со сконструированными остатками цистеина и с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи, и где ADC имеет среднее DAR от 2,9 до 5,8.
Преимущественно, ADC по изобретению являются менее гидрофобными, чем аналоги с таким же DAR, конъюгированные только посредством остатков цистеина из межцепьевой связи. Эта уменьшенная гидрофобность влияет на фармакокинетические свойства ADC благоприятным образом, т.е. меньшую деконъюгацию и увеличенную эффективность наблюдали in vivo.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции, содержащей ADC, как описано в настоящем описании выше, и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов. Типичные фармацевтические составы терапевтических белков, таких как антитела, имеют форму лиофилизированных таблеток (лиофилизированных порошков), требующих растворения (в воде) (т.е., разведения) перед внутривенной инфузией, или замороженных (водных) растворов, требующих размораживания перед использованием.
Как правило, фармацевтическую композицию предоставляют в форме лиофилизированной таблетки. Пригодные фармацевтически приемлемые эксципиенты для включения в фармацевтическую композицию (перед сублимационной сушкой) по настоящему изобретению включают буферные растворы (например, содержащие соли цитрата, гистидина или сукцината в воде), лиопротекторы (например, сахарозу, трегалозу), модификаторы тоничности (например, хлорид натрия), поверхностно-активные вещества (например, полисорбат), и придающие объем средства (например, маннит, глицин). Эксципиенты, используемые для лиофилизированных составов белка, выбирают по их способности предотвращать денатурацию белка во время процесса сублимационной сушки, а также во время хранения.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к ADC или фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании выше, для использования в качестве лекарственного средства, в частности, для использования в лечении или предотвращении злокачественной опухоли, более конкретно для использования в лечении солидных опухолей и гематологических злокачественных образований.
Примеры
Материалы и способы
Антитело анти-5T4 HC41C, содержащее аминокислотную последовательность HCVR из SEQ ID NO:1, так же как аминокислотную последовательность LCVR из SEQ ID NO:2, получали с использованием способов, аналогичных способам, описанным в WO2015/177360, с использованием лидерных последовательностей HC и LC, в соответствии с SEQ ID NO:3 и 4.
Сконструированное антитело анти-PSMA с цистеиновой заменой HC41C получали с использованием метериалов и способов, описанных в WO2015/177360. Реагенты и буферы закупали у коммерческих поставщиков. Соединения в соответствии с формулой (I) (т.е., 2-(дифенилфосфино)бензолсульфоновую кислоту) и (II) (т.е., 2-(дициклогексилфосфино)бензолсульфоновую кислоту), 3-(дифенилфосфино)бензолсульфоновую кислоту, 4-(дифенилфосфино)бензолсульфоновую кислоту и трифенилфосфин-3,3',3’’-трисульфоновую кислоту закупали из Sigma-Aldrich. Соединения в соответствии с формулой (III), (IV), (V), (VI) и (VII) получали посредством литирования бензолсульфоновой кислоты, с последующей реакцией литированной бензолсульфоновой кислоты с подходящим диалкил-, диарил- или алкил/арил- (хлор-) фосфином с использованием способов, аналогичных способам, описанным в литературе, например, в M. Bornand et al., Organometallics, 2007, 26(14), 3585-3596 и T. Schultz et al., Synthesis, 2005, 6, 1005-1011. Связываемое линкером лекарственное средство vc-секо-DUBA (SYD980) синтезировали в соответствии со способами, как описано в WO2011/133039.
Способ двойного восстановления и конъюгации
К раствору антитела со сконструированным HC41C (10 мг/мл, 100 мМ гистидин, pH 5) добавляли 2-(дифенилфосфино)бензолсульфоновую кислоту (DPPBS, формула (I)) (32 молярных эквивалента на молярный эквивалент сконструированного антитела, 10 мМ в воде (MilliQ®)), и полученному раствору позволяли стоять в течение ночи при комнатной температуре. Раствор избирательно восстановленного антитела повторно забуферивали 4,2 мМ гистидином, 50 мМ трегалозой, pH 6 (~10 мг/мл) и обрабатывали ЭДТА (4% об./об., 25 мМ в воде (MilliQ®)), ТРИС (1% об./об., 1 M в воде (MilliQ®), pH 8) и TCEP (0,5-2 молярных эквивалентов (в зависимости от антитела и желательного DAR) на молярный эквивалент антитела, 3 мМ в воде (MilliQ®)). Полученный раствор инкубировали при комнатной температуре в течение 3,5 часов, после чего добавляли N, N-диметилацетамид (DMA) (конечная концентрация DMA 10% об./об.) и добавляли связываемое линкером лекарственное средство (SYD980 или vcMMAE, ~8 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела, 10 мМ в DMA). Полученную смесь перемешивали на вращающейся мешалке в течение 1 часа в отсутствие света, затем смеси позволяли стоять при комнатной температуре в течение ночи. Избыток связываемого линкером лекарственного средства удаляли посредством фильтрации через активированный уголь, и полученный прозрачный раствор повторно забуферивали 4,2 мМ гистидином, 50 мМ трегалозой, pH 6, с использованием фильтрации центрифугированием. Полученные ADC анализировали с использованием HIC/SEC.
Способ конъюгации связываемого линкером лекарственного средства только с цистеином из межцепьевой связи с использованием антитела со сконструированным 41C тяжелой цепи (с использованием кэпирования N-этилмалеинимидом сконструированных остатков цистеина (контроль с кэпированным NEM 41C тяжелой цепи))
Контрольные антитела HC41C с конъюгацией дикого типа синтезировали посредством добавления DPPBS (32 молярных эквивалента на молярный эквивалент антитела, 10 мМ в воде (MilliQ®)) к раствору антитела со сконструированным HC41C (10 мг/мл, 100 мМ гистидин, pH 5). Полученному раствору позволяли стоять в течение ночи при комнатной температуре. Раствор избирательно восстановленного антитела повторно забуферивали 4,2 мМ гистидином, 50 мМ трегалозой, pH 6 (~10 мг/мл) и обрабатывали ЭДТА (4% об./об., 25 мМ в воде (MilliQ®)), ТРИС (1% об./об., 1 M в воде (MilliQ®), pH 8), после чего DMA (конечная концентрация DMA составляла ~10%) и N-этилмалеинимид (NEM, 10 мМ в DMA, ~3,5 молярных эквивалентов на молярный эквивалент антитела) добавляли для кэпирования цистеина на HC41. Полученный раствор инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов, после чего смесь повторно забуферивали 4,2 мМ гистидином, 50 мМ трегалозой, pH 6.
Антитело с кэпированным NEM сконструированным HC41C обрабатывали ЭДТА (4% об./об., 25 мМ в воде (MilliQ®)), ТРИС (1% об./об., 1M в воде (MilliQ®), pH 8), после чего добавляли трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP, 2 мМ в воде (MilliQ®), 1,33 эквивалента). Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов, после чего добавляли DMA (конечная концентрация DMA составляла ~10%) и связываемое линкером лекарственное средство (SYD980 или vcMMAE) (10 мМ в DMA, ~7 молярных эквивалентов). Через 3 часа добавляли активированный уголь для удаления избытка связываемого линкером лекарственного средства и раствор фильтровали и повторно забуферивали 4,2 мМ гистидином, 50 мМ трегалозой, pH 6. Полученные ADC анализировали с использованием HIC/SEC.
HIC
Для аналитической HIC, 5-10 мкл образца (1 мг/мл) инъецировали в колонку TSKgel Butyl-NPR (4,6 мм ID x 3,5 см L, Tosoh Bioscience, кат. no. 14947). Способ элюции состоял из линейного градиента от 100% буфера A (25 мМ фосфат натрия, 1,5 M аммоний сульфат, pH 6,95) до 100% буфера B (25 мМ фосфат натрия, pH 6,95, 20% изопропанол) при 0,4 мл/мин в течение 20 минут. Температуру колонки поддерживали при 25°C. Использовали систему Waters Acquity H-Class UPLC, оборудованную детектором PDA, и программное обеспечение Empower. Оптическую плотность измеряли при 214 нм для количественного определения среднего DAR и % DAR0.
SEC
Способ A
5 мкл образца (1 мг/мл) инъецировали в колонку TSKgel G3000SWXL (5 мкм, 7,8 мм ID x 30 см L, Tosoh Bioscience, кат. no. 08541), оборудованную колонкой TSKgel SWXL Guard (7 мкм, 6,0 мм ID x 4,0 см L, Tosoh Bioscience, кат. no. 08543). Способ элюции состоял из элюции с использованием 100% 50 мМ фосфата натрия, 300 мМ NaCl, pH 7,5 при 0,6 мл/мин в течение 30 минут. Температуру колонки поддерживали при 25°C. Использовали систему Waters Acquity H-Class UPLC, оборудованную детектором PDA, и программное обеспечение Empower. Оптическую плотность измеряли при 214 нм для определения количества HMW молекул.
Способ B
2,5 мкл образца (1 мг/мл) инъецировали в колонку Acquity UPLC Protein BEH SEC (200Å, 1,7 мкм, 4,6 мм ID x 15 см L, Waters, кат. no. 186005225). Способ элюции состоял из элюции с использованием смеси 1:1 200 мМ фосфата натрия, pH 7,5, и 20% изопропанола в MilliQ® при 0,3 мл/мин в течение 10 минут. Температуру колонки поддерживали при 40°C. Использовали систему Waters Acquity H-Class UPLC, оборудованную детектором PDA, и программное обеспечение Empower. Оптическую плотность измеряли при 214 нм для определения количества HMW молекул.
Результаты
С различными антителами связываемые линкером лекарственные средства конъюгировали с использованием способа двойной конъюгации. Аналитические результаты обобщены в таблице 1. ADC, конъюгированные посредством как сконструированных остатков цистеина на HC41, так и остатков цистеина из межцепьевой связи, содержали незначительные количества молекул с DAR0, и для них показано меньше HMW молекул, чем для ADC, конъюгированных только посредством остатков цистеина из межцепьевой связи. Также, время удержания для пиков всех DAR уменьшилось, что является показателем менее гидрофобных вариантов DAR. На фигуре 1 показаны различия профиля HIC анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC, конъюгированного только посредством остатков цистеина из межцепьевой связи (верхняя панель), по сравнению с анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC, конъюгированным посредством как сконструированных остатков цистеина на HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи (нижняя панель). На нижней панели показана более гомогенная смесь ADC. На фигуре 2 показаны профили HIC анти-5T4-vc-MMAE ADC, конъюгированных посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи. Профили HIC показывают, что DAR ADC можно легко регулировать посредством изменения количества TCEP на стадии восстановления межцепьевой дисульфидной связи.
Таблица 1
ADC | экв. TCEP | Среднее DAR | %HMW | %DAR0 | RT DAR4 |
анти-5T4 (HC41C)-vc-секо-DUBA | |||||
1a | 0 | 1,9 | 1,3a | 0,4 | NA |
1b | 0,25 | 2,2 | 2,6a | 0,5 | 11,4 |
1c | 0,5 | 2,6 | 4,9a | 0,3 | 11,4 |
1d* контроль | 1,33 | 2,5 | 12,1a | 22,4 | 12,5 |
анти-5T4 (HC41C)-vc-MMAE | |||||
2a | 0,5 | 2,9 | 0,9b | 0,2 | 10,1 |
2b | 1,0 | 3,8 | 0,8b | 0,1 | 10,1 |
2c | 2,0 | 5,8 | 0,6b | c | 10,1 |
2d* контроль | 1,16 | 1,7 | 0,6b | 32,3 | 12,0 |
анти-PSMA (HC41C)-vc-секо-DUBA | |||||
3a | 0,25 | 2,0 | 2,7b | 1,9 | 11,3 |
3b | 0,5 | 2,3 | 3,1b | 2,3 | 11,3 |
3c | 0,75 | 2,8 | 3,2b | 1,5 | 11,3 |
3d | 1,0 | 3,2 | 3,2b | 0,6 | 11,3 |
3e контрольd | 1,24 | 1,8 | 4,8b | 38,7 | 12,2 |
NA=неприменимо
* контроль с кэпированным NEM HC41C
a SEC Способ A
b SEC Способ B
c количество ниже предела детекции
d wt-анти-PSMA-vc-секо-DUBA
Анализ апоптоза
Эксперимент
Клетки LNCaP-C4,2 (15000 клеток/лунку) в полной среде для роста (среде RPMI 1640 (Lonza; Walkersville, MD, USA), дополненной 10% об./масс. FBS, соответствующей квалификации (Gibco-Life Technologies)), рассевали в 96-луночные планшеты (90 мкл/лунку). После 4 часов инкубации при 37°C, 5% CO2, добавляли 10 мкл каждого анти-PSMA-vc-секо-DUBA ADC (3a, 3b, 3c и 3d). Серийные разведения каждого ADC получали в полной среде для роста. Апоптоз оценивали через 72 часа с использованием люминогенного субстрата каспазы-3/7 из набора для триплексного анализа ApoTox-Glo™ от Promega Corporation (Madison, WI, USA), в соответствии с инструкциями производителя.
Результаты
На фигуре 3 показано, что с увеличением DAR анти-PSMA-vc-секо-DUBA ADC, для ADC показывают увеличивающуюся активность каспазы-3/7. Более высокая активность каспазы-3/7 является показателем увеличения апоптоза. Апоптоз, таким образом, больше стимулируют анти-PSMA-vc-секо-DUBA ADC, имеющие более высокое DAR, как показано по более высокому сигналу люминесценцию.
Эффективность против опухолей in vivo
Опухоли индуцировали посредством подкожной инъекции двадцати миллионов (2×107) клеток BT-474 в 200 мкл среды RPMI 1640, содержащей матригель (50:50, об.:об., ref: 356237, BD Biosciences, France) в правый бок самок мышей ces1ce KO nude. Имплантацию клеток опухолей BT-474 проводили через 24-72 часа после облучения всего организма с использованием источника γ-лучей (2 Гр, 60Co, BioMep, Dijon, France).
Мышей случайным образом распределяли на группы обработки, когда опухоли достигали среднего объема 200-300 мм3, пока не достигали размера группы 7 животных. Статистический тест (дисперсионный анализ) проводили, чтобы удостовериться в гомогенности между группами. Затем мышам вводили однократную внутривенную (в хвостовую вену) дозу любого из носителя, 1 мг/кг анти-5T4 (HC41C)-vc-секо-DUBA (1b, DAR 2,2), 1 мг/кг анти-5T4 (HC41C)-vc-секо-DUBA (1c, DAR 2,6), 1 мг/кг анти-5T4 (HC41C)-vc-секо-DUBA (1d, конъюгация только посредством цистеина из межцепьевой связи, DAR 2,5). Пилотные исследования показали, что в этой модели доза 1 мг/кг анти-5T4 ADC не может приводить к полной ремиссии опухоли, позволяя оценку эффекта регулировки формата ADC. Сутки рандомизации и начала обработки обозначены как сутки 0 (D0).
Длину и ширину опухолей измеряли дважды в неделю с использованием штангенциркуля, и объем опухолей оценивали по формуле: объем опухоли=(ширина2 x длина)/2.
На фигуре 4 показана эффективность in vivo анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC 1b (, DAR 2,2) и 1c (, DAR 2,6), оба конъюгированы посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, и ADC 1d, конъюгированного только посредством восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи (только случайно, , DAR 2,5), в положительном по 5T4 ксенотрансплантате BT474 у мышей ces1ce KO. Непосредственно после дозирования для всех ADC показано замедление роста опухоли, и через десять суток объемы опухолей для анти-5T4-vc-секо-DUBA ADC 1b и 1c уменьшались (ремиссия). В отличие от этого, рост опухоли у мышей, обработанных только ADC 1d, замедлялся, но объемы опухолей не уменьшались (остановка развития опухоли). Через 30 суток, наблюдали повторный рост опухолей. Для ADC 1b и 1c явно показана улучшенная эффективность по сравнению с ADC 1d.
Исследования PK
Группы обработки в этом исследовании PK состояли из 9 самцов и 9 самок мышей ces1ce KO nude. Мышам вводили ADC 1c или 1d в форме однократной внутривенной дозы 3 мг/кг. Образцы крови отбирали во множестве временных точек через несколько часов после дозирования, охлаждали в ледяной воде и перерабатывали в плазму настолько быстро, насколько возможно. Образцы быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до анализа. Уровни ADC (конъюгированных Ab) и общие уровни антител (общее количество Ab) в плазме оценивали количественно с использованием способа на основе ELISA, как описано в Dokter et al., Mol. Cancer Ther., 2014, 13, 2618-2629.
На фигуре 5 показаны полные PK кривые для ADC 1c (DAR 2,6), конъюгированного посредством как сконструированных остатков цистеина в положении HC41, так и восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи, и для ADC 1d (DAR 2,5), конъюгированного посредством только его восстановленных остатков цистеина из межцепьевой связи. Для ADC 1c, уровни конъюгированного Ab и общее количество Ab постепенно уменьшается через 96 час, что является показателем стабильного ADC и небольшой деконъюгации. Однако, для ADC 1d уровень конъюгированного Ab уменьшается более скачкообразно, чем общий уровень Ab. Этот феномен является показателем деконъюгации. ADC 1c, таким образом, является менее чувствительным к деконъюгации, чем ADC 1d.
SEQ ID NO:1 (HCVR антитела анти-5T4 HC41C)
1 EVQLVESGGD LAQPGGSLRL SCAVSGIDLS SYGMGWVRQA CGKGLEWVSI
51 ISRNSVTYYA TWAKGRFTIS RDNSKNTVYL QMTSLRAEDT ALYFCARRAT
101 YSGALGYFDI WGQGTLVTVS S
SEQ ID NO:2 (LCVR антитела анти-5T4)
1 EIVMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASENIY STLAWYQQKP GKAPKLLIYD
51 AFDLASGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQQ GYSGTNVDNA
101 FGQGTKLEIK
SEQ ID NO:3 (лидерная последовательность HC кролика)
1 MGWTLVFLFL LSVTAGVHS
SEQ ID NO:4 (лидерная последовательность LC кролика)
1 MVSSAQFLGL LLLCFQGTRC
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Synthon Biopharmaceuticals B.V.
COUMANS Rudy Gerardus Elisabeth
<120> СПОСОБ ДВОЙНОЙ КОНЪЮГАЦИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТОВ
АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО
<130> P1716PC00
<160> 4
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCVR антитела анти-5T4 41C
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Ala Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Cys Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ile Ile Ser Arg Asn Ser Val Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Arg Ala Thr Tyr Ser Gly Ala Leu Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCVR антитела анти-5T4
<400> 2
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Thr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Gly Thr Asn
85 90 95
Val Asp Asn Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 3
<211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> лидерная последовательность HC кролика
<400> 3
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 4
<211> 20
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> лидерная последовательность LC кролика
<400> 4
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1 5 10 15
Gly Thr Arg Cys
20
<---
Claims (19)
1. Способ получения конъюгата антитело–лекарственное средство, включающий стадии:
a. избирательного восстановления сконструированного антитела с цистеиновыми заменами, включающего реакцию антитела, содержащего сконструированный остаток цистеина в положении 41 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, с соединением в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII)
или его солью;
b. дополнительного восстановления избирательно восстановленного антитела со стадии a. с использованием средства, восстанавливающего межцепьевые дисульфидные связи; и
c. конъюгации терапевтических групп с дополнительно восстановленным антителом со стадии b. посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкеров:
где указанные терапевтические группы конъюгированы посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера с одним или более сконструированных цистеинов и с одним или более восстановленных межцепьевых цистеинов указанного антитела.
2. Способ по п. 1, где соединение в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) присутствует в количестве по меньшей мере один молярный эквивалент на молярное количество сконструированного цистеина.
3. Способ по п. 1 или 2, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I), (II) или (III), или его солью.
4. Способ по п. 1 или 2, где средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, представляет собой трис(3–сульфофенил)фосфин, трис(2–карбоксиэтил)фосфин или дитиотреитол.
5. Способ по п. 1 или 2, где средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, присутствует в количестве более чем 0,1 молярного эквивалента на молярный эквивалент антитела.
6. Способ по п. 1 или 2, где антитело представляет собой моноспецифическое или биспецифическое антитело или фрагмент антитела, содержащие по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и легкой цепи, связывающиеся с мишенью, выбранной из группы, состоящей из аннексина A1, B7H4, CA6, CA9, CA15–3, CA19–9, CA27–29, CA125, CA242, CCR2, CCR5, CD2, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD47, CD56, CD70, CD74, CD79, CD115, CD123, CD138, CD203c, CD303, CD333, CEA, CEACAM, CLCA–1, CLL–1, c–MET, Cripto, DLL3, EGFL, EGFR, EPCAM, EPh (например, EphA2 или EPhB3), рецептора эндотелина B (ETBR), FAP, FcRL5 (CD307), FGFR (например, FGFR3), FOLR1, GCC, GPNMB, HER2, HMW–MAA, интегрина α (например, αvβ3 и αvβ5), IGF1R, TM4SF1 (или антигена L6), подобного антигену Льюиса A углевода, антигена Льюиса X, антигена Льюиса Y, LIV1, мезотелина, MUC1, MUC16, NaPi2b, нектина–4, PD–1, PD–L1, PSMA, PTK7, SLC44A4, STEAP–1, антигена 5T4 (или TPBG, гликопротеина трофобластов), TF (тканевого фактора), TF–Ag, Tag72, TNFR, TROP2, VEGFR и VLA.
7. Конъюгат антитело–лекарственное средство, где антитело содержит сконструированный остаток цистеина в положении 41 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat;
где терапевтические группы конъюгированы посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера с одним или более сконструированными остатками цистеина и с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи антитела; и
где конъюгат антитело–лекарственное средство имеет среднее отношение лекарственного средства к антителу (DAR) по меньшей мере 2,0.
8. Конъюгат антитело–лекарственное средство по п. 7, имеющий среднее DAR по меньшей мере 2,2.
9. Конъюгат антитело–лекарственное средство по п. 7, имеющий среднее DAR от 2,0 до 6,0.
10. Конъюгат антитело–лекарственное средство по п. 7 для применения в качестве лекарственного средства.
11. Фармацевтическая композиция для применения в лечении солидных опухолей и гематологических злокачественных образований, содержащая конъюгат антитело–лекарственное средство по любому из пп. 7-9 и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17172450 | 2017-05-23 | ||
EP17172449 | 2017-05-23 | ||
EP17172449.5 | 2017-05-23 | ||
EP17172450.3 | 2017-05-23 | ||
PCT/EP2018/063328 WO2018215427A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-05-22 | Dual conjugation process for preparing antibody-drug conjugates |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019142720A RU2019142720A (ru) | 2021-06-23 |
RU2019142720A3 RU2019142720A3 (ru) | 2021-08-05 |
RU2771310C2 true RU2771310C2 (ru) | 2022-04-29 |
Family
ID=62152578
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019142720A RU2771310C2 (ru) | 2017-05-23 | 2018-05-22 | Способ двойной конъюгации для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11696958B2 (ru) |
EP (1) | EP3630845A1 (ru) |
KR (1) | KR20200010491A (ru) |
CN (1) | CN110831976A (ru) |
RU (1) | RU2771310C2 (ru) |
WO (1) | WO2018215427A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130116404A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-09 | Case Western Reserve University | Targeted non-invasive imaging probes of egfr expressing cells |
EP3380122B1 (en) * | 2015-11-24 | 2021-06-02 | Byondis B.V. | Anti-5t4 antibodies and antibody-drug conjugates |
WO2019183633A1 (en) | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Case Western Reserve Univeristy | Psma targeted conjugate compounds and uses thereof |
US11478553B2 (en) | 2019-02-15 | 2022-10-25 | Wuxi Biologies Ireland Limited | Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity |
JP2023517477A (ja) | 2020-02-06 | 2023-04-26 | ビョンディス・ビー.ブイ. | デュオカルマイシン誘導体含有抗体薬物複合体及びチオ硫酸類を含む組合せ |
BR112023000174A2 (pt) | 2020-07-06 | 2023-01-31 | Byondis Bv | Composto ligante-fármaco, conjugado anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, e, uso de um composto |
EP4204013A1 (en) * | 2020-08-26 | 2023-07-05 | Angiex, Inc. | Antimitotic tetrapeptide-antibody conjugates and methods of using same |
WO2022214517A1 (en) | 2021-04-08 | 2022-10-13 | Byondis B.V. | Anti-c-met antibodies and antibody-drug conjugates |
WO2023275025A1 (en) | 2021-06-28 | 2023-01-05 | Byondis B.V. | Conjugates comprising phosphoantigens and their use in therapy |
WO2023086833A1 (en) | 2021-11-09 | 2023-05-19 | Case Western Reserve University | Psma targeted conjugate compounds and uses thereof |
AU2022425491A1 (en) | 2021-12-30 | 2024-07-04 | Byondis B.V. | Antifolate linker-drugs and antibody-drug conjugates |
WO2023222580A1 (en) | 2022-05-16 | 2023-11-23 | Byondis B.V. | Novel masked antibodies |
WO2024054673A1 (en) * | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Texas Tech University System | Listeria monocytogenes as a vector for tumor-specific delivery of chemotherapeutic agents |
WO2024133374A1 (en) | 2022-12-22 | 2024-06-27 | Byondis B.V. | Novel linker drugs comprising phosphoantigens, novel conjugates and their use in therapy |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006134174A2 (en) * | 2005-06-17 | 2006-12-21 | Novo Nordisk Health Care Ag | Dimeric and multimeric fviia compound |
WO2015123265A1 (en) * | 2014-02-11 | 2015-08-20 | Seattle Genetics, Inc. | Selective reduction of proteins |
WO2015177360A1 (en) * | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Site-specific conjugation of linker drugs to antibodies and resulting adcs |
RU2578719C2 (ru) * | 2010-04-21 | 2016-03-27 | Синтарга Б.В. | Новые конъюгаты аналогов сс-1065 и бифункциональные линкеры |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
CA2921707C (en) * | 2013-10-15 | 2023-03-28 | Seattle Genetics, Inc. | Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics |
EP3380122B1 (en) * | 2015-11-24 | 2021-06-02 | Byondis B.V. | Anti-5t4 antibodies and antibody-drug conjugates |
WO2017137628A1 (en) * | 2016-02-12 | 2017-08-17 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Selective reduction of cysteine-engineered antibodies |
-
2018
- 2018-05-22 EP EP18724280.5A patent/EP3630845A1/en active Pending
- 2018-05-22 CN CN201880033670.XA patent/CN110831976A/zh active Pending
- 2018-05-22 WO PCT/EP2018/063328 patent/WO2018215427A1/en active Application Filing
- 2018-05-22 RU RU2019142720A patent/RU2771310C2/ru active
- 2018-05-22 US US16/616,045 patent/US11696958B2/en active Active
- 2018-05-22 KR KR1020197038083A patent/KR20200010491A/ko not_active Application Discontinuation
-
2023
- 2023-05-24 US US18/323,013 patent/US20230338570A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006134174A2 (en) * | 2005-06-17 | 2006-12-21 | Novo Nordisk Health Care Ag | Dimeric and multimeric fviia compound |
RU2578719C2 (ru) * | 2010-04-21 | 2016-03-27 | Синтарга Б.В. | Новые конъюгаты аналогов сс-1065 и бифункциональные линкеры |
WO2015123265A1 (en) * | 2014-02-11 | 2015-08-20 | Seattle Genetics, Inc. | Selective reduction of proteins |
WO2015177360A1 (en) * | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Site-specific conjugation of linker drugs to antibodies and resulting adcs |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230338570A1 (en) | 2023-10-26 |
RU2019142720A3 (ru) | 2021-08-05 |
RU2019142720A (ru) | 2021-06-23 |
CN110831976A (zh) | 2020-02-21 |
US20200276331A1 (en) | 2020-09-03 |
US11696958B2 (en) | 2023-07-11 |
WO2018215427A1 (en) | 2018-11-29 |
EP3630845A1 (en) | 2020-04-08 |
KR20200010491A (ko) | 2020-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2771310C2 (ru) | Способ двойной конъюгации для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство | |
EP3151865B1 (en) | Site-specific conjugation of linker drugs to antibodies and resulting adcs | |
US8586049B2 (en) | Antibody-drug conjugates | |
JP5925684B2 (ja) | 抗gcc分子と関連組成物および方法 | |
ES2874306T3 (es) | Conjugados de anticuerpos y fármacos (CAF) que se unen a las proteínas 191P4D12 | |
EP3458100B1 (en) | Selective reduction of cysteine-engineered antibodies | |
EP3380122B1 (en) | Anti-5t4 antibodies and antibody-drug conjugates | |
EA036882B1 (ru) | Антитела против cd123 и конъюгаты указанных антител | |
RU2679657C2 (ru) | Конъюгаты антител с лекарственными средствами, связывающиеся с белками cd37 | |
JP2023036874A (ja) | イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化を防止する方法 | |
US20230025600A1 (en) | Treatment of cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins | |
KR20240004708A (ko) | 넥틴-4 (nectin-4)를 표적하는 항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate) 및 이의 제조 방법 및 용도 | |
WO2024051747A1 (en) | A pharmaceutical composition of anti-her2 antibody-immune agonist conjugate and applications thereof | |
JP2022191500A (ja) | フォレート受容体1抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用 | |
NZ615308B2 (en) | Antibody-drug conjugates |