RU2759806C1 - Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 - Google Patents
Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2759806C1 RU2759806C1 RU2021108155A RU2021108155A RU2759806C1 RU 2759806 C1 RU2759806 C1 RU 2759806C1 RU 2021108155 A RU2021108155 A RU 2021108155A RU 2021108155 A RU2021108155 A RU 2021108155A RU 2759806 C1 RU2759806 C1 RU 2759806C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- minutes
- exosomes
- lrnn3
- grap
- genes
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/21—Amaranthaceae (Amaranth family), e.g. pigweed, rockwort or globe amaranth
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области геронтологии, а именно к возможности влияния на профиль экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, ассоциированных с биологическим старением, в плазме крови человека посредством приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, что позволит использовать данную форму экстракта в качестве защитного средства от действия определенных генетических факторов, задействованных в процессах биологического старения организма, в плазме крови человека. 1 пр., 1 табл.
Description
Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5.
Изобретение относится к области геронтологии, а именно к возможности влияния на профиль экспрессии определенных генов, ассоциированных с биологическим старением, в плазме крови человека посредством приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, что позволит использовать данную форму экстракта в качестве защитного средства от действия определенных генетических факторов, задействованных в процессах биологического старения организма, в плазме крови человека.
Из уровня техники известен следующий метод применения экстракта амаранта «Применение активных ингредиентов амаранта (amaranthus hypochondriacus) для приготовления средства для защиты митохондрий» [WO2008145850 А2, 27.04.2007, Франция], предполагающий использование активного ингредиента, полученного из амаранта, в составе косметической или фармацевтической субстанции как защитного фактора от механизмов старения посредством обеспечения защиты митохондрий и активации аконитазы для поверхностного использования в области кожи.
Недостатками данного метода являются форма доставки, не предполагающая высокое сродство доставляемой молекулярной субстанции к клеткам реципиента, и отсутствие эффекта на уровень экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, ассоциированных со старением организма.
Техническим результатом заявленного способа является возможность снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, уровни экспрессии которых возрастают с увеличением биологического возраста организма, с помощью аутологичных экзосом, загруженных экстрактом амаранта.
Вышеприведенный технический результат достигается благодаря тому, что способ включает последовательное выполнение следующих стадий: получение аутологичных экзосом; получение экстракта амаранта (или берется покупной экстракт амаранта); загрузка полученного экстракта амаранта в аутологичные экзосомы; прием полученных загруженных экзосом per os, разведенных 1:10 физиологическим раствором, из расчета 15 мл на 10 кг веса.
Аутологичные экзосомы получают из периферической венозной крови реципиента, которую забирают в пробирку с антикоагулянтом в объеме 40 мл, после чего подвергают центрифугированию в течение 20 мин при 3000 g, далее забирают супернатант и проводят центрифугирование при 100000 g в течение 90 минут. По окончании ультрацентрифугирования забирают сформировавшийся осадок, содержащий экзосомы.
Экстракт амаранта получают из зерен растения семейства амарантовых методом водной или спиртовой экстракции или используют покупной (эксперименты показали, что при использовании покупного экстракта также достигается вышеприведенный технический результат - особой разницы нет) и загружают в полученные аутогенные экзосомы методом ультразвуковой порации.
Загруженные экстрактом амаранта аутогенные экзосомы разводят 1:10 в физиологическом растворен назначают реципиенту per os в объеме 10 мл / на 10 кг.
Заявляемый способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.
Пример. «Ингибирование экспрессии генов, определяемых в крови человека, уровень экспрессии которых увеличивается с возрастанием биологического возраста, при приеме per os аутологичных экзосом, загруженных экстрактом амаранта».
Мужчина 55 лет 82 кг и женщина 43 лет и 75 кг получали аутологичные экзосомы, загруженные экстрактом амаранта, разведенные в физиологическом растворе 1:10 в объеме 82 мл и 75 мл соответственно каждый день в течение 28 дней. Уровень экспрессии генов, уровень экспрессии которых возрастает с увеличением биологического возраста организма, определяли на 1-й и на 28-й день приема аутогенных экзосом, загруженных экстрактом амаранта.
Экстракт амаранта был получен из семян растения рода амарант методом этанольной экстр акции с последующим вакуумным высушиванием. В результате из 100 г измельченных семян было получено 8 г экстракта, который затем растворили в 80 мл физиологического раствора.
Аутологичные экзосомы из 40 мл периферической венозной крови были получены следующим образом: полученную кровь подвергали центрифугированию при 3000 g в течение 20 минут с последующим забором супернатанта; затем проводили центрифугирование в режиме 2000 g в течение 20 минут при комнатной температуре с последующим забором супернатанта; далее проводили центрифугирование в режиме 10000 g в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим забором супернатанта. Последним этапом проводили ультрацентрифугирование (центрифуга Avanti 301, ротор JA-30.50) в режиме 100000 g в течение 90 минут при +4°С с последующим забором осадка. Полученный осадок растворяли в 2 мл натрий-фосфатного буфера.
8 г экстракта амаранта, растворенные в 80 мл натрий-фосфатного буфера, были загружены в полученные экзосомы методом ультразвуковой порации (сонопоратор QsonicaSonicatorQ700 (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA)) в следующем режиме: 500 V, 2 kHz, 20% power, 6 циклов 4 с пульс / 2 с пауза, затем охлаждение на льду в течение 2 минут и повторение цикла.
Для оценки уровня экспрессии генов, уровень экспрессии которых повышается при увеличении биологического возраста, проводили выделение тотальной РНК из клеток периферической венозной крови (5 мл крови, собрана в вакуумную пробирку с антикоагулянтом) на наборах RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия) с последующей очисткой мРНК на наборах Oligotex mRNA Mini Kit (Qiagen, Германия), кДНК синтезировалась с помощью набора QuantiTect Reverse Transcription Kit (Qiagen, Германия). Далее проводили постановку ПЦР в реальном времени со специфическими праймерами для генов LRNN3, GRAP, VAMP5, уровень экспрессии которых возрастает при увеличении биологического возраста. Для оценки изменения уровней экспрессии генов использовали гены домашнего хозяйства TUBA 1А, А СРВ, GAPDH, В2М, уровень экспрессии которых в различных клетках относительно стабилен в течение времени.
Полученные изменения уровней экспрессии генов, повышение уровня экспрессии которых ассоциировано с увеличением биологического возраста, на фоне приема экстракта амаранта в аутологичных экзосомах отражены в таблице.
На фоне приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, снизился уровень экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, экспрессия которых повышается с увеличением биологического возраста, снизилась у мужчины и женщины для гена LRNN3 с 23,1 до 20, 1 и с 20,6 до 18,0 соответственно; для гена GRAP с 13,3 до 10,9 и с 17,2 до 14,7; для гена VAMP5 с 4,9 до 3,2 и с 5,8 до 4,1.
Claims (1)
- Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, при котором получают аутологичные экзосомы из периферической венозной крови реципиента, а именно 40 мл периферической венозной крови центрифугируют при комнатной температуре в режиме 3000g в течение 20 минут, далее отобранный супернатант центрифугируют при комнатной температуре в режиме 2000g в течение 20 минут, затем отобранный супернатант центрифугируют при комнатной температуре в режиме 10000g в течение 30 минут, после чего проводят ультрацентрифугирование в режиме 100000g в течение 90 минут при +4°С с последующим забором осадка, который растворяют в 2 мл натрий-фосфатного буфера, далее 8 г экстракта амаранта растворяют в 80 мл натрий-фосфатного буфера и загружают в полученные экзосомы методом ультразвуковой порации с помощью сонопоратора Q700 в следующем режиме: 500 V, 2 kHz, 20% power, 6 циклов 4 с пульс/2 с пауза, затем охлаждение на льду в течение 2 минут и повторение цикла, затем полученные аутологичные экзосомы, загруженные экстрактом амаранта, разводят в физиологическом растворе 1:10 и вводят в реципиента per os в количестве 15 мл на 10 кг его веса раз в день в течение 28 дней.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021108155A RU2759806C1 (ru) | 2021-03-26 | 2021-03-26 | Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 |
PCT/RU2022/000080 WO2022203543A1 (ru) | 2021-03-26 | 2022-03-15 | Способ снижения уровней экспрессии генов lrnn3, grap, vamp5 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021108155A RU2759806C1 (ru) | 2021-03-26 | 2021-03-26 | Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2759806C1 true RU2759806C1 (ru) | 2021-11-18 |
Family
ID=78607436
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021108155A RU2759806C1 (ru) | 2021-03-26 | 2021-03-26 | Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2759806C1 (ru) |
WO (1) | WO2022203543A1 (ru) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2915377B1 (fr) * | 2007-04-27 | 2009-08-21 | Vincience Sa | Utilisation d'un principe actif issu de l'amarante (amaranthus) pour preparer une composition destinee a proteger les mitochondries |
-
2021
- 2021-03-26 RU RU2021108155A patent/RU2759806C1/ru active
-
2022
- 2022-03-15 WO PCT/RU2022/000080 patent/WO2022203543A1/ru active Application Filing
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
AL-ONAZI A.S. et al., Ruboxistaurin attenuates diabetic nephropathy via modulation of TGF-β1/Smad and GRAP pathways, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2016, Vol.68, N2, pp.219-232. * |
HASAN N. et al., Fusogenic Pairings of Vesicle-Associated Membrane Proteins (VAMPs) and Plasma Membrane t-SNAREs - VAMP5 as the Exception, PLOS ONE, 2010, Vol.12, N5, e14238. * |
HOLLY A.C. et al., Towards a gene expression biomarker set for human biological age, Aging Cell, 2013, Vol.12, N2, pp.324-326. * |
HOLLY A.C. et al., Towards a gene expression biomarker set for human biological age, Aging Cell, 2013, Vol.12, N2, pp.324-326. AL-ONAZI A.S. et al., Ruboxistaurin attenuates diabetic nephropathy via modulation of TGF-β1/Smad and GRAP pathways, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2016, Vol.68, N2, pp.219-232. HASAN N. et al., Fusogenic Pairings of Vesicle-Associated Membrane Proteins (VAMPs) and Plasma Membrane t-SNAREs - VAMP5 as the Exception, PLOS ONE, 2010, Vol.12, N5, e14238. QI ZENG et al., A Novel Synaptobrevin/VAMP Homologous Protein (VAMP5) Is Increased during In Vitro Myogenesis and Present in the Plasma Membrane, Molecular Biology of the Cell, 2017, Vol.9, N9, pp. 2423-2437. БУТОВ А.А. и др., Вопросы применения методов анализа экспрессии генов при изучении процессов старения, Успехи геронтологии, 2003, н.11, стр.54-66. * |
QI ZENG et al., A Novel Synaptobrevin/VAMP Homologous Protein (VAMP5) Is Increased during In Vitro Myogenesis and Present in the Plasma Membrane, Molecular Biology of the Cell, 2017, Vol.9, N9, pp. 2423-2437. * |
БУТОВ А.А. и др., Вопросы применения методов анализа экспрессии генов при изучении процессов старения, Успехи геронтологии, 2003, н.11, стр.54-66. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2022203543A1 (ru) | 2022-09-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Vànky et al. | Cellular immunity against tumor‐associated antigens in humans: lymphocyte stimulation and skin reaction | |
JP2005526107A (ja) | 慢性拒絶反応を予防および/または処置するための医薬 | |
US11154571B2 (en) | Exosomes sourced from granulocytic myeloid-derived suppressor cells and application thereof | |
Wu et al. | IgA nephropathy benefits from compound K treatment by inhibiting NF-κB/NLRP3 inflammasome and enhancing autophagy and SIRT1 | |
Yoshida et al. | CD39 deficiency in murine liver allografts promotes inflammatory injury and immune-mediated rejection | |
RU2759806C1 (ru) | Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5 | |
Zhang et al. | Small extracellular vesicles derived from MSCs have immunomodulatory effects to enhance delivery of ASO-210 for psoriasis treatment | |
Lu et al. | Tanshinol suppresses cardiac allograft rejection in a murine model | |
Liz et al. | The anti‐inflammatory modulatory role of Solidago chilensis Meyen in the murine model of the air pouch | |
WO2017004460A1 (en) | Compositions and methods for flowable allograft tissue | |
JP6517175B2 (ja) | B7−1−pe40kdel外毒素融合遺伝子に基づくdnaワクチンおよびその使用 | |
WO2015136718A1 (en) | Agent for sedating response to external stimulation in skin and method for sedating that response technical field | |
CN111184750B (zh) | 云南松松塔在制备治疗急性肺损伤药物中的用途 | |
RU2752166C1 (ru) | Способ ингибирования экспрессии атерогенных микроРНК-24, микроРНК - 125 и индуцирования экспрессии антиатерогенных микроРНК-126, микроРНК -222, микроРНК -let7b в плазме крови человека | |
JP2020533981A (ja) | Cxcr5を過剰発現する間葉系幹細胞、その製造方法及び使用 | |
KR100840558B1 (ko) | 항염증 및 면역조절 활성을 가지는 케나프 추출물 | |
Schurfeld et al. | Photopheresis after cardiac transplantation induces apoptosis | |
JP2004099613A (ja) | 自己免疫疾患治療用ガノデルマルシダム胞子 | |
JP2002053488A5 (ru) | ||
Donadei et al. | An intriguing link between human leukocyte antigen G, T-regulatory cells and neutrophil gelatinase-associated lipocalin in immune tolerance induction | |
EP2813232B1 (en) | Process of Production of Allogenic Growth Factor Extract | |
CN114258910B (zh) | 一种可输注细胞冻存液及其应用 | |
Del Buono et al. | Action of Low Molecular Weight Glucan on Trascriptome of Neoplastic Cell Lines | |
CN115645450B (zh) | 红景天或红景天苷在制备保护和/或调节细胞外泌体的制剂中的应用 | |
Mehrzad et al. | Vitamin E pretreatment of mesenchymal stem cells: the interplay of oxidative stress and inflammation |