RU2755690C1 - Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков - Google Patents
Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков Download PDFInfo
- Publication number
- RU2755690C1 RU2755690C1 RU2021100562A RU2021100562A RU2755690C1 RU 2755690 C1 RU2755690 C1 RU 2755690C1 RU 2021100562 A RU2021100562 A RU 2021100562A RU 2021100562 A RU2021100562 A RU 2021100562A RU 2755690 C1 RU2755690 C1 RU 2755690C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mecc
- meca
- methicillin
- staphylococci
- methicillin resistance
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, клинической микробиологии, и может быть использовано для диагностики внутрибольничных инфекций, вызванных микроорганизмами рода Staphylococcus, имеющими гены резистентности к метициллину mecA и mecC. Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков включает стадии: a. выделение ДНК микроорганизмов из чистой культуры стафилококка, выращенной на плотной питательной среде, b. амплификации двух фрагментов генома метициллин-резистеных стафилококков mecA и mecC с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), формирование контрольных тестов одновременно с амплификацией; d. детекции продуктов ампдификации методом электрофореза в агарозном геле, e. анализа амплифицированного продукта ПЦР. Заявленный способ использует набор AmpliTaq Gold PCR Master Mix (Applied Biosy stems) и две пары праймеров. Способ позволяет повысить скорость и информативность экспресс-диагностики метициллин-резистентности стафилококков с определением двух генов mecA и mecC, кодирующих изменения таргета бета-лактамов - пенициллин-связывающих белков. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, клинической микробиологии, и может быть использовано для диагностики внутрибольничных инфекций, вызванных микроорганизмами рода Staphylococcus, имеющем гены резистентности к метициллину mecA и mecC.
Известна автоматическая система тестирования GeneXpert, производимая компанией Sepheid (Sunnyvale, USA) [Becker K., Denis О., Roisin S., Mellmann A., Idelevich E.A., Knaack D., van Alen S., Kriegeskorte A., Köck R., Schaumburg R, Peters G., Ballhausen В., Burnham C.-A.D. Detection of mecA- and mecC-Positive Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Isolates by the New Xpert MRSA Gen 3 PCR Assay // Journal of Clinical Microbiology. - 2015. - Vol. 54, Issue 1. - C. 180-184 DOI: 10.1128/JCM.02081-15].
Недостатками этого способа являются высокая стоимость исследования, а также закрытый формат тест системы не позволяющий подтвердить присутствие генов резистентности, а именно, провести секвенирование амплифицированного фрагмента.
Известен способ выявления метициллинрезистентности стафилококков «АмплиСенс MRSA-скрин-титр-FL», разработанный компанией Итерлабсервис (Россия), который дает возможность выявления принадлежности исследуемого микроорганизма в коагулазо-негативным стафилококкам либо к золотистому стафилококку, однако в современных условиях данное исследование не является необходимым в связи с развитием технологий быстрого валидного точного и дешевого определения стафилококков, до вида (способ MALDI-TOF масс-спектрометрия). Определение же метициллин-резистентности стафилококков при использовании данного способа ограничено только геном mecA, соответственно, определение гена mecC данным способом невозможно. Также, этот способ является закрытым, то есть не известны используемые праймеры и регионы ДНК, амплифицируемые в ходе ПЦР реакции. Поэтому применение этого способа не позволяет верифицировать обнаружение гена метициллин-резистентности, что можно осуществить при применении секвенирования по Сенгеру.
Известен также способ выделения гена mecA, предназначенный для исследовательских проектов и не являющийся готовой тест-системой. [Cikman A., Aydin М., Gulhan В., Karakecili R, Kurtoglu М.G., Yuksekkaya S., Parlak M., Gultepe В.S., Cicek A.C., Bilman F.В., Ciftci I.H., Kara M., Atmaca S., Ozekinci T. Absence of the mecC gene in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from various clinical samples: The first multi-centered study in Turkey. // Journal of Infection and Public Health. - 2019. - Vol. 12, Issue 4. - P. 528-533, https://doi.Org/10.1016/i.jiph.2019.01.063.]
Известен способ определения генотипов золотистого стафилококка (Пат. РФ №2526497, опубл. 10.05.2014 г.), включающий получение чистой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде, выделение и амплификацию ДНК возбудителя с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей детекцией результате в методом электрофореза в агарозном геле, при этом используют мультиплексную ПЦР с четырьмя парами праймеров:
nucl 5'-GCGATTGATGGTGATACGGT-3',
nuc 2 5'-AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC-3,
luk-PV-1 5'-ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA-3',
luk-PV-2 5'-GCATCAAGTGTATTGGATAGCAAAAGC-3',
mecA - 1 5'-ACTGCTATCCACCCTCAAAC-3',
mecA - 2 5'-CTGGTGAAGTTGTAATCTGG-3'
tsstl f - 5'-ACCACCCGTTTTATCGCTTGAACG-3'
tsstlr - 5'-AGCCCTTTGTTGCTTGCGACA-3',
комплементарных к участкам гена внеклеточной термонуклеазы (nuc), гена лейкоцидина Пантона-Валлентайна (pvl), гена белка токсического шока (tst) и гена устойчивости к метициллину (mecA), и генетические группы (генотипы) золотистого стафилококка определяют по наличию или отсутствию генов вирулентности pvl и tst и гена устойчивости к метициллину mecA или их сочетаний.
Однако недостатком известного способа является определение видовой принадлежности только одного вида стафилококков - золотистого стафилококка, что не является необходимым в современных условиях применения метода MALDI-TOF масс-спектрометрии, факторов его вирулентности, что не имеет определяющего значения в клинической практике и в эпидемиологических исследованиях, как правило, основанных на типировании стафилококков методом мультилокусного сиквенс-типирования, а также возможность определения одного, а не двух генов резистентности к метициллину стафилококков.
Технический результат, достигаемый изобретением, заключается в повышении скорости и информативности экспресс-диагностики метициллин-резистентности стафилококков с определением двух генов mecA и mecC, способных кодировать изменения таргета бета-лактамов - пенициллин-связывающих белков.
Заявленный технический результат, достигается за счет того, что в способе детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков выполняют: выделение ДНК микроорганизмов из чистой культуры стафилококка, выращенной на плотной питательной среде, амплификацию двух фрагментов генома метициллин-резистеных стафилококков mecA и mecC с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), формирование контрольных тестов одновременно с амплификацией, детекцию продуктов ампдификации методом электрофореза в агарозном геле с последующим анализом амплифицированного продукта ПЦР, который проводят с амплификацией фрагментов генов устойчивости к стафилококкам, с использованием праймеров следующего состава:
mecA-F 5' - AACAGGAGAATTATTAGCACTTGTAAG - 3'
mecA-R 5' - CCACTTCATATCTTGTAACG - 3'
mecC-F 5' - GAAAAAAAGGCTTAGAACGCCTC - 3'
mecC-R 5' - GAAGATCTTTTCCGTTTTCAGC - 3',
с последующим выявлением генов устойчивости mecA и mecC по наличию амплификатов с размерами соответственно 287 и 138 п.н.
Такая конструкция праймеров позволяет использовать их одновременно в одной реакции, проводимой в формате ПЦР.
Кроме того, предлагаемый способ позволяет выявлять наличие двух генов метициллин-резистентности у стафилококков независимо от их видов и определять их чувствительность к бета-лактамам без проведения культуральных исследований. Важно отметить, что исследование имеет низкую стоимость, а также более высокую скорость, по сравнению с классическими методами определения чувствительности к метициллину у стафилококков. Следует подчеркнуть, что в качестве двух контрольных штаммов (положительный и отрицательный контроль) применяются собственные изоляты.
Способ осуществляют следующим образом.
Для исследования используют колонию чистой культуры стафилококка, выращенную на плотной питательной среде.
1. В микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл добавляют 100 мкл лизирующего буфера PrepMan Ultra Sample Preparation Reagent.
2. Одиночную колонию диаметром 2 мм помещают в лизирующий буфер.
3. Инкубируют пробирку при 98°C в термостате течение 10 мин.
4. Пробирку помещают в микроцентрифугу, соблюдая принцип равновесия, и центрифугируют при 14000 об/мин в течение 2 мин.
5. Полученый супернатант используют для получения рабочего раствора ДНК (ДНК-матрицы) исследуемых образцов, для чего его разводят деионизированной водой в 100 раз.
Постановка амплификации.
Амплификация проводится двух фрагментов генома метициллин-резистеных стафилококков, а именно генов mecA и mecC, что снижает вероятность ложноотрицательные результаты при выявлении метициллин-резистентности стафилококка: исследование охватывает две мутации мишеней действия бета-лактамов.
Для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) используют набор AmpliTaq Gold PCR Master Mix (Applied Biosystems) и две пары праймеров:
mecA-F 5' - AACAGGAGAATTATTAGCACTTGTAAG - 3'
mecA-R 5' - CCACTTCATATCTTGTAACG - 3'
mecC-F 5' - GAAAAAAAGGCTTAGAACGCCTC - 3'
mecC-R 5' - GAAGATCTTTTCCGTTTTCAGC - 3'
1. Для приготовления смеси для ПЦР реакции общим объемом 10 мкл в пробирку объемом 0,2 мл вносят следующие компоненты:
| AmpliTaq Gold Master mix (2x) | 5 мкл |
| Смесь праймеров (концентрация каждого по 5 пикоМ/мкл) | 1 мкл |
| ДНК-матрица | 4 мкл |
Необходимо при каждой постановке амплификации формировать контрольные тесты. Для этого в 3 пробирки вносят контроли (два положительных и отрицательный), по одному контролю в каждую пробирку. Контроли вносятся в пробирки, содержащие 2 компонента ПЦР-реакции:
| AmpliTaq Gold Master mix (2x) | 5 мкл |
| Смесь праймеров (концентрация каждого по 5 пикоМ/мкл) | 1 мкл |
(вместо ДНК-матрицы). Включение двух контрольных штаммов, несущих гены резистентности mecA и mecC соответственно, позволяет с высокой точностью оценить присутствие конкретной мутации в исследуемом микроорганизме.
2. Содержимое пробирок тщательно перемешивают в микроцентрифуге "вортекс".
3. Далее пробирки помещают в программируемый термоциклер (амплификатор) и проводят 30 циклов амплификации нуклеиновой кислоты (ПЦР) по следующей программе, предусматривающей следующие стадии: с начальной температурой 95°C стадия денатурации, с последующим понижением температуры до 56°C на стадии отжиг и повышения температуры до 72°C на стадии элонгации на цикл ПЦР для 30 циклов.
Детекция продуктов амплификации
Детекцию продуктов амплификации проводят методом электрофореза в агарозном геле с использованием 1,8%-ного агарозного геля.
Электрофорез проводится в течение 30 минут при напряжении 100 вольт. Проводят анализ результата электрофоретического разделения ПЦР-продуктов с помощью прибора Gel Doc XR по наличию светящихся полос и их местоположению по отношению к маркеру длин фрагментов ДНК (таблица 1) с учетом результатов тестирования двух положительных и отрицательного контроля.
Учет и интерпретация результатов.
Учет результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной ДНК.
В качестве отрицательного контроля в тест-системе применяется ДНК, выделенная из штамма S. aureus АС 167, чувствительного к метициллину
В качестве положительного контроля наличия гена метициллин-резистентности mecA применяется ДНК, выделенная из штамма S. aureus АС488, имеющего ген резистентности к метициллину mecA.
В качестве положительного контроля наличия гена метициллин-резистентности mecC применяется ДНК, выделенная из штамма S. aureus АТСС ВАА-2312, имеющего ген резистентности к метициллину mecC.
Технология проведения исследования в предлагаемом способе по многим параметрам отличается от известных агалогов: применением иных праймеров и условий проведения реакции, а также методом детекции продуктов амплификации - электрофорезом в агарозном геле определенного состава.
Способ был применен для выявления генов метициллин - резистентности стафилококков у пациентов многопрофильного стационара (ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» МЗ РФ), страдающих различными вариантами внутрибольничных инфекций, вызванных метициллин-резистентными стафилококками, что было подтверждено в ходе исследования чувствительности изолятов к оксациллину и цефокситину.
Общее количество исследованных с помощью предложенной тест-системы штаммов метициллин-резистентного и метициллин-чувствительного стафилококка за время наблюдения составило 125 изолятов из клинических биосубстратов пациентов различных профилей с инфекционными нозокомиальными поражениями различных локализаций и объектов больничной среды.
Примеры реализации способа
Пример 1. Пациент И. Возраст 58 лет. Поступил в Центр им. В.А. Алмазова на хирургическое отделение. Пациенту была выполнена плановая операция. В послеоперационном периоде у пациента развился сепсис. При обследовании у пациента выделили из крови золотистый стафилококк в парных пробах, что свидетельствовало о наличии у пациента бактериемии. Клинические проявления позволяли классифицировать инфекцию как сепсис. Выделенный от пациента штамм золотистого стафилококка был исследован двумя методами; молекулярно-генетическим с применением предлагаемого способа и классическим бактериологическим диско-диффузионным методом с применением диска цефокситина и оценкой диаметра зоны задержки роста по критериям EUCAST. Оба метода подтвердили метициллин-резистентность исследованного штамма. С помощью предлагаемого способа был определен ген метициллин-резистентности mecA.
Пример 2. Пациент М. Возраст 48 лет. Поступил в Центр им. В.А. Алмазова с онкогематологгическим заболеванием. Пациенту была проведена высокодозная химиотерапия, у него развилась постцитостатическая цитопения. На фоне постцитостатической цитопении у пациента развился сепсис, из крови был выделен S. hominis. Для определения чувствительности изолята к метициллину было выполнено два теста: классический бактериологический диско-диффузионный метод и предложенный молекулярно-генетический способ определения генов метициллин-резистентности. Оба метода подтвердили резистентность исследуемого штамма к метициллину, нашим способом было выявлено присутствие гена mecA, кодирующего характерное изменение мишени действия бета-лактамов с образованием пенициллин-связывающего белка 2а.
Пример 3. Пациент Б. Возраст 22 года. Поступил в Центр им. В.А. Алмазова с неврологическим заболеванием. В связи с наличием иммунодефицитного состояния у пациента развился сепсис. При бактериологическом исследовании крови был выделен возбудитель - S. haemolyticus. Для определения чувствительности изолята к метициллину было выполнено два теста: классический бактериологический диско-диффузионный метод и предложенный молекулярно-генетический способ определения генов метициллин-резистентности. Оба метода подтвердили резистентность исследуемого штамма к метициллину, нашим способом было выявлено присутствие гена mecA, кодирующего образование пенициллин-связывающего белка 2а.
Таким образом, предлагаемый способ подтверждает достижение технического результата, заключающегося в повышении скорости и информативности экспресс-диагностики метициллин-резистентности стафилококков с определением двух генов mecA и mecC, кодирующих изменения таргета бета-лактамов - пенициллин-связывающих белков, промышленно применим.
Claims (11)
1. Способ детекции генов метициллин-резистентности mесА и mесС у стафилококков, включающий получение чистой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде, выделение и амплификацию ДНК возбудителя с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей детекцией результатов методом электрофореза в агарозном геле, отличающийся тем, что используют праймеры в следующем составе:
mecA-F 5' - AACAGGAGAATTATTAGCACTTGTAAG - 3'
mecA-R 5' - CCACTTCATATCTTGTAACG - 3'
mecC-F 5' - GAAAAAAAGGCTTAGAACGCCTC - 3'
mecC-R 5' - GAAGATCTTTTCCGTTTTCAGC - 3',
с последующим выявлением генов устойчивости mecA и mecC по наличию ампликонов с размерами соответственно 287 и 138 п.н.
2. Способ по п. 1, где в качестве лизирующего буфера при выделении ДНК используют реагент PrepMan Ultra Sample Preparation Reagent.
3. Способ по п. 1, где амплификацию ДНК достигают посредством условий проведения циклов ПЦР, предусматривающих следующие стадии: с начальной температурой 95°С - стадия денатурации, с последующим понижением температуры до 56°С - на стадии отжига и повышения температуры до 72°С - на стадии элонгации на цикл ПЦР для 30 циклов.
4. Способ по п. 1, где контрольные тесты содержат следующие компоненты:
5. Способ по п. 1, где в качестве отрицательного тест-контроля применяют ДНК, выделенную из штамма S. aureus АС167, чувствительного к метициллину, в качестве положительного тест-контроля наличия гена метициллин-резистентности mесА применяют ДНК, выделенную из штамма S. aureus АС488, имеющего ген резистентности к метициллину mесА, в качестве положительного контроля наличия гена метициллин-резистентности mесС применяют ДНК, выделенную из штамма S. aureus АТСС ВАА-2312, имеющего ген резистентности к метициллину mесС.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021100562A RU2755690C1 (ru) | 2021-01-13 | 2021-01-13 | Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021100562A RU2755690C1 (ru) | 2021-01-13 | 2021-01-13 | Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2755690C1 true RU2755690C1 (ru) | 2021-09-20 |
Family
ID=77745857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021100562A RU2755690C1 (ru) | 2021-01-13 | 2021-01-13 | Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2755690C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526497C2 (ru) * | 2012-10-31 | 2014-08-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова" Министерства здравоохарнения и социального развития Российской Федерации | Способ определения генотипов золотистого стафилококка |
-
2021
- 2021-01-13 RU RU2021100562A patent/RU2755690C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526497C2 (ru) * | 2012-10-31 | 2014-08-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова" Министерства здравоохарнения и социального развития Российской Федерации | Способ определения генотипов золотистого стафилококка |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BECKER K., et al, Detection of mecA- and mecC-Positive Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Isolates by the New Xpert MRSA Gen 3 PCR Assay // Journal of Clinical Microbiology. - 2015. - Vol. 54, Issue 1. - C. 180-184 DOI: 10.1128/JCM.02081-15. * |
| BECKER K., et al, Detection of mecA- and mecC-Positive Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Isolates by the New Xpert MRSA Gen 3 PCR Assay // Journal of Clinical Microbiology. - 2015. - Vol. 54, Issue 1. - C. 180-184 DOI: 10.1128/JCM.02081-15. CIKMAN A., et al, Absence of the mecC gene in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from various clinical samples: The first multi-centered study in Turkey. // Journal of Infection and Public Health. - 2019. - Vol. 12, Issue 4. - P. 528-533, https://doi.Org/10.1016/i.jiph.2019.01.063. * |
| CIKMAN A., et al, Absence of the mecC gene in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from various clinical samples: The first multi-centered study in Turkey. // Journal of Infection and Public Health. - 2019. - Vol. 12, Issue 4. - P. 528-533, https://doi.Org/10.1016/i.jiph.2019.01.063. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Costa et al. | Rapid detection of mecA and nuc genes in staphylococci by real-time multiplex polymerase chain reaction | |
| Chen et al. | Identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) using simultaneous detection of mecA, nuc, and femB by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) | |
| US20180195111A1 (en) | 16s ribosomal rna universal primers and use thereof in microbiological analysis and diagnostics | |
| Kim et al. | Differential diagnosis of Brucella abortus by real-time PCR based on a single-nucleotide polymorphisms | |
| US7381547B2 (en) | Methods and compositions to detect bacteria using multiplex PCR | |
| US20110200984A1 (en) | Using nucleic acids for clinical microbiology testing | |
| RU2612137C1 (ru) | Способ идентификации подвидов возбудителя туляремии Francisella tularensis subsp. tularensis, Francisella tularensis subsp. mediasiatica и Francisella tularensis subsp. holarctica | |
| CN110656188A (zh) | 检测引发血流感染的杆菌的引物和/或探针组合物及其应用 | |
| US20150031038A1 (en) | Sample preparation methods | |
| Lu et al. | Detecting Mycobacterium tuberculosis complex and rifampicin resistance via a new rapid multienzyme isothermal point mutation assay | |
| Tabibnejad et al. | The optimization of molecular detection of clinical isolates of Brucella in blood cultures by eryD transcriptase gene for confirmation of culture-negative samples | |
| RU2715333C1 (ru) | Набор реагентов для выявления и идентификации днк возбудителей бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции в реальном времени "ом-скрин-бруцеллез-рв" | |
| Shigemura et al. | Rapid detection and differentiation of Gram-negative and Gram-positive pathogenic bacteria in urine using TaqMan probe | |
| RU2621864C1 (ru) | Способ определения видовой принадлежности возбудителя бруцеллеза методом пцр с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени | |
| RU2435853C1 (ru) | ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ Streptococcus agalactiae В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ | |
| RU2755690C1 (ru) | Способ детекции генов метициллин-резистентности mecA и mecC у стафилококков | |
| JP4899009B2 (ja) | ＬＡＭＰ法を用いたクロストリディウム・ディフィシルｔｏｘｉｎＢ遺伝子検出方法およびこの方法に用いるプライマーセット | |
| CN112063734A (zh) | 一种采用实时荧光定量pcr技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法 | |
| RU2787181C1 (ru) | Мультиплексная ПЦР-смесь для определения серотипов 12FAB, 15BC, 22FA, 8 Streptococcus pneumoniae и способ ее применения | |
| Kawai et al. | Development and evaluation of a loop-mediated isothermal amplification method for the rapid detection of Chlamydophila pneumoniae | |
| RU2730868C1 (ru) | Набор реагентов для генетического типирования штаммов возбудителя сибирской язвы методом фрагментного анализа "ом-сибирская язва-генотип" | |
| RU2732448C1 (ru) | Способ идентификации штаммов VIBRIO CHLERAE O1, определения их токсигенности и биовара с дифференциацией биовара ЭльТор на типичные и генетически измененные варианты методом мультиплексной полимеразной цепной реакции и тест-система для его осуществления с учетом результатов в режиме "реального времени" | |
| RU2525059C2 (ru) | Набор для выявления возбудителя ку-лихорадки в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (пцр-рв) | |
| Tahmasebi et al. | Comparing direct PCR and PCR with DNA extraction kits in identifying TST and mecA in Staphylococcus aureus | |
| RU2435852C1 (ru) | ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК Mycobacterium paratuberculosis - ВОЗБУДИТЕЛЯ ПАРАТУБЕРКУЛЕЗА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР) |