RU2753412C1 - Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis - Google Patents

Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis Download PDF

Info

Publication number
RU2753412C1
RU2753412C1 RU2020139896A RU2020139896A RU2753412C1 RU 2753412 C1 RU2753412 C1 RU 2753412C1 RU 2020139896 A RU2020139896 A RU 2020139896A RU 2020139896 A RU2020139896 A RU 2020139896A RU 2753412 C1 RU2753412 C1 RU 2753412C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
resistance
salmonella enterica
salmonellosis
diagnosis
Prior art date
Application number
RU2020139896A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Олег Дмитриевич Скляров
Ольга Владимировна Прасолова
Александра Никитична Богомазова
Илья Владимирович Сазонкин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ") filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")
Priority to RU2020139896A priority Critical patent/RU2753412C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2753412C1 publication Critical patent/RU2753412C1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology and microbiology.
SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and microbiology. A strain of Salmonella enterica bacteria with multiple resistance to antimicrobial drugs, with identified genetic determinants of resistance, is deposited in the “All-Russian collection of strains of microorganisms used in veterinary Medicine and animal husbandry”, under the number VKSHM-B-850M.
EFFECT: invention provides for the diagnosis of salmonellosis of strains containing pESI-like conjugative plasmid, with multiple resistance to antimicrobial agents: amino- and carbosi penicillins, cephalosporins, fluoroquinolones, tetracyclines, aminoglycosides, phenicols, trimethoprim.
1 cl, 1 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к микробиологии (бактериологии), а именно к разделу определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам и молекулярной детекции механизмов резистентности и может быть использовано в качестве контрольного штамма для контроля качества при диагностике сальмонеллеза на этапах фенотипических исследований (определение чувствительности к антибиотикам: выявление устойчивости к амино- и карбосипенициллинам, цефалоспоринам, фторхинолонам, тетрациклинам, аминогликозидам, фениколам, триметоприму) и молекулярных исследований направленных на создание штамма сальмонелл, характеризующегося множественной резистентностью ассоциированной с шестью генами устойчивости к антимикробным препаратам, ассоциированных с pESI-подобной плазмидой (aadA1, blaCTX-M-14, dfrAl4, sull, tetA/tetR, tetM). Помимо плазмидных генов устойчивости к противомикробным препаратам, штамм несет мутацию в хромосомном гене gyrA (p.S83Y или p.D87Y), которая связана с устойчивостью к фторхинолонам.The invention relates to microbiology (bacteriology), namely to the section for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial drugs and molecular detection of resistance mechanisms and can be used as a control strain for quality control in the diagnosis of salmonellosis at the stages of phenotypic studies (determination of sensitivity to antibiotics: detection of resistance to amino- and carbosipenicillins, cephalosporins, fluoroquinolones, tetracyclines, aminoglycosides, fenicols, trimethoprim) and molecular studies aimed at creating a Salmonella strain characterized by multiple resistance associated with six antimicrobial resistance genes bla-a-associated with pES M-14 , dfrAl4, sull, tetA / tetR, tetM). In addition to plasmid genes for antimicrobial resistance, the strain carries a mutation in the chromosomal gyrA gene (p.S83Y or p.D87Y), which is associated with resistance to fluoroquinolones.

В настоящее время описано более 1500 сероваров Salmonella enterica (Grimont and Weill, 2007). Однако только 10-15 сероваров ответственны за большинство случаев сальмонеллеза в мире (отчет ВОЗ, 2019). К таким сероварам относятся S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Infantis, S. Heidelberg, S. Derby, S. Newport, S. Panama, S. London, S. Anatum (*Mollbak et al., 2006; Freitas Neto et al., 2010; NARMS report, 2015; EFSA and ECDC report, 2018a, 2018b). В последнее время наиболее распространенными нетифозными сальмонеллами сероваров, выделенных от человека в России, были те же, что и выделенные из пищи: S. Typhymuriurn, S. Enteritidis и S. Infantis. В 2017 году самым распространенным сероваром, выделенным из пищи в России, был S. Infantis (отчет Роспотребнадзора, 2018).More than 1,500 Salmonella enterica serovars have now been described (Grimont and Weill, 2007). However, only 10-15 serovars are responsible for most cases of salmonellosis in the world (WHO report, 2019). Such serovars include S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Infantis, S. Heidelberg, S. Derby, S. Newport, S. Panama, S. London, S. Anatum (* Mollbak et al., 2006; Freitas Neto et al., 2010; NARMS report, 2015; EFSA and ECDC report, 2018a, 2018b). Recently, the most common nontyphoid salmonella serovars isolated from humans in Russia were the same as those isolated from food: S. Typhymuriurn, S. Enteritidis, and S. Infantis. In 2017, the most common serovar isolated from food in Russia was S. infantis (Rospotrebnadzor report, 2018).

Геномный анализ плазмидных последовательностей показал, что S. Infantis ВКШМ-Б-850М имеет π лазмиду, очень похожую на pESI-подобные мега-плазмиды, о которых ранее сообщали Aviv et al. (2014), Franco et al. (2015) и Tate et al. (2017), не идентифицируемые ранее в РФ.Genomic analysis of the plasmid sequences showed that S. infantis VKSM-B-850M has a π lasmid, very similar to the pESI-like mega-plasmids previously reported by Aviv et al. (2014), Franco et al. (2015) and Tate et al. (2017), not previously identified in the Russian Federation.

Наиболее близким по сущности к заявляемому изобретению является штамм бактерий S. Infantis идентифицированный в Италии Franco et al. (2015), содержащий 4 плазмиды, характеризующийся устойчивостью к цефалоспоринам, но имеющий несколько генов устойчивости, поэтому невозможно его использование в качестве контрольного. Предлагаемый штамм в качестве изобретения проявляет стабильное соответствие ненетичеких маркеров и микробиологического профиля AMP. Так же известен штамм бактерий SALMONELLA ENTERICA SUBSP. ENTERICA SEROVAR TYPHI в качестве контрольного для фенотипических и молекулярных исследований при диагностике брюшного тифа, однако он характеризуется устойчивостью высокого уровня только к фторхинолонам, обусловленной двумя мутациями в хромосомном гена gyrA вида. Предлагаемый в качестве изобретения штамм имеет стабильные параметры множественной резистентности, что позволяет его более широкое использование. Плазмида pVGNKI-13 несет ген blaCTX-М-14, который располагается в генетическом контексте, состоящем из ISEcplΔ-IS10R-ΔISEcp1-blaCTX-M-14-IS903B (рис. 1С). Тот же генетический фон для гена blaCTX-М-14 был сообщен несколько раз ранее (Но et al., 2013; Riccobono et al, 2014; Hayashi et al., 2018; Di Pilato et al., 2019). Геном изолята ВКШМ-Б-850М содержит ген tetM, который находится в 4-килобайтном контиге, ограниченном инсерционными последовательностями IS26 (рис. 1). Таким образом, приобретенные гены AMR существуют в мобильных модулях, встроенных в pESI-подобные плазмиды.The closest in essence to the claimed invention is the S. Infantis bacterial strain identified in Italy by Franco et al. (2015), containing 4 plasmids, characterized by resistance to cephalosporins, but having several resistance genes, therefore, it cannot be used as a control. The proposed strain as an invention exhibits a stable correspondence of non-natural markers and the microbiological profile of AMP. The bacterial strain SALMONELLA ENTERICA SUBSP is also known. ENTERICA SEROVAR TYPHI as a control for phenotypic and molecular studies in the diagnosis of typhoid fever, however, it is characterized by a high level of resistance only to fluoroquinolones, caused by two mutations in the chromosomal gyrA gene of the species. The strain proposed as the invention has stable parameters of multiple resistance, which allows its wider use. Plasmid pVGNKI-13 carries the blaCTX-M-14 gene, which is located in the genetic context consisting of ISEcplΔ-IS10R-ΔISEcp1-blaCTX-M-14-IS903B (Fig. 1C). The same genetic background for the blaCTX-M-14 gene was reported several times earlier (Ho et al., 2013; Riccobono et al., 2014; Hayashi et al., 2018; Di Pilato et al., 2019). The genome of the VKShM-B-850M isolate contains the tetM gene, which is located in a 4-kilobyte contig bounded by the IS26 insertion sequences (Fig. 1). Thus, acquired AMR genes exist in mobile modules inserted into pESI-like plasmids.

Уникальной особенностью pESI-подобной плазмиды является последовательность 173 КБ, которая несет два оперона вирулентности и три системы токсин/антитоксин. Наличие этой последовательности способствует глобальному распространению pESI-подобных плазмид.A unique feature of the pESI-like plasmid is the 173 kb sequence, which carries two virulence operons and three toxin / antitoxin systems. The presence of this sequence contributes to the global spread of pESI-like plasmids.

Штамм депонирован во «Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве» под номером ВКШМ-Б-850М.The strain was deposited in the "All-Russian state collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry" under the number VKShM-B-850M.

Штамм бактерий Salmonella enterica ВКШМ-Б-850М в качестве контрольного штамма для молекулярных исследований при идентификации конъюгативной плазмиды pESI-like, обеспечивающей мультирезистентные свойства в диагностике сальмонеллеза.The bacterial strain Salmonella enterica VKShM-B-850M as a control strain for molecular studies in the identification of the pESI-like conjugative plasmid, which provides multi-resistant properties in the diagnosis of salmonellosis.

Изобретение обеспечивает выполнение диагностики штаммов содержащих конъюгативную плазмиду pESI-like.The invention provides for the implementation of diagnostics of strains containing the conjugative plasmid pESI-like.

Таксономия и описание штамма: семейство Enterobacteriaceae род Salmonella вид Salmonella enterica серовар Infantis.Taxonomy and description of the strain: family Enterobacteriaceae genus Salmonella species Salmonella enterica serovar Infantis.

Штамм сальмонелл Salmonella enterica ВКШМ-Б-850М природный, выделен из биологического материала.Salmonella strain Salmonella enterica VKShM-B-850M natural, isolated from biological material.

Изобретение направлено на разработку контрольного штамма Salmonella enterica ВКШМ-Б-850М, необходимого для обеспечения достоверной диагностики сальмонеллеза, ассоциированного с AMP.The invention is directed to the development of a control strain of Salmonella enterica VKShM-B-850M, which is necessary to ensure reliable diagnosis of salmonellosis associated with AMP.

Задача настоящего изобретения - референтный штамм, стабильно сохраняющий фенотипические свойства, содержащие гены, нуклеотидная последовательность которых специфична для вида, подвида, биовара, и создание на их основе комплекта контрольных препаратов ДНК для генно-диагностических исследований.The objective of the present invention is a reference strain that stably retains phenotypic properties, containing genes, the nucleotide sequence of which is specific for a species, subspecies, biovar, and the creation on their basis of a set of control DNA preparations for genetic diagnostic studies.

Характеристика штамма Salmonella enterica ВКШМ-Б-850МCharacteristics of the strain Salmonella enterica VKShM-B-850M

Культурально-морфологические свойства штамма - грамотрицательные подвижные палочки без спор и капсул.Cultural and morphological properties of the strain - gram-negative mobile rods without spores and capsules.

Патогенные свойства: штамм патогенный для человека, 4 группа патогенности согласно СП 1.2.036-95 и СП 1.3.2322-08.Pathogenic properties: the strain is pathogenic for humans, 4 pathogenicity group according to SP 1.2.036-95 and SP 1.3.2322-08.

Культуральные свойства:Cultural properties:

Через 18-24 час культивирования при температуре (37±1)°С штамм формирует:After 18-24 hours of cultivation at a temperature of (37 ± 1) ° C, the strain forms:

- на среде Эндо бледно-розовые, прозрачные, круглые, плоские, с ровными краями колонии, диаметром 2-3 мм;- on Endo medium pale pink, transparent, round, flat, with smooth edges of the colony, 2-3 mm in diameter;

- на висмут-сульфит-агаре - круглые, плоские с ровными краями, черные с металлическим блеском и почернением среды под колонией, диаметром 1,5-2 мм;- on bismuth-sulfite-agar - round, flat with smooth edges, black with a metallic luster and blackening of the medium under the colony, 1.5-2 mm in diameter;

- на XLD-агаре - круглые, плоские, с ровными краями, бесцветные (в цвет ага-ра) с черным центром колонии, диаметром 2-3 мм;- on XLD-agar - round, flat, with smooth edges, colorless (in the color of agar) with a black center of the colony, 2-3 mm in diameter;

- на хромогенном агаре образуют сиреневые, характерные для сальмонелл колонии, диаметром 2-3 мм;- on chromogenic agar, lilac colonies, characteristic of Salmonella, with a diameter of 2-3 mm are formed;

- на жидких питательных средах и полужидком ΜΠΑ (0,3%) наблюдается диффузное помутнение среды.- on liquid nutrient media and semi-liquid ΜΠΑ (0.3%), there is a diffuse turbidity of the medium.

Особенности штамма: gyrA-p.D87Y, parC-p.T57S, aadA1, dfrA14, sull, tetA, tetR, aac6-Iaa.Features of the strain: gyrA-p.D87Y, parC-p.T57S, aadA1, dfrA14, sull, tetA, tetR, aac6-Iaa.

Для поиска генов антибиотикорезистентности в бактериальном геноме использовали сервис ResFinder и базы данных Antibiotic Resistance Gene-ANNOTation, The Comprehensive Antibiotic Resistance Database и NCBI Bacterial Antimicrobial Resistance Reference Gene Database. Подтверждено наличие генетических факторов резистентности gyrA-p.D87Y, aadA1, dfrA14, sul-1, tetA/tetR.The ResFinder service and the Antibiotic Resistance Gene-ANNOTation, The Comprehensive Antibiotic Resistance Database, and NCBI Bacterial Antimicrobial Resistance Reference Gene Database were used to search for antibiotic resistance genes in the bacterial genome. The presence of genetic resistance factors gyrA-p. D87Y, aadA1, dfrA14, sul-1, tetA / tetR was confirmed.

Figure 00000001
Figure 00000001

Данные, полученные при помощи NGS на Miseq, и данные функциональных микробиологических тестов хорошо согласуются между собой.The data obtained with the NGS at Miseq and the data of functional microbiological tests are in good agreement with each other.

Молекулярный механизм устойчивости - шесть генов устойчивости к антимикробным препаратам, ассоциированных с pESI-подобными плазмидами (aadA1, bla СТХ-М-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM), а так же мутация в хромосомном гене gyrA (p.S83Y или p.D87Y), которая связана с устойчивостью к фторхинолонам.Molecular mechanism of resistance - six antimicrobial resistance genes associated with pESI-like plasmids (aadA1, bla CTX-M-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM), as well as a mutation in the chromosomal gyrA gene (p.S83Y or p.D87Y), which is associated with resistance to fluoroquinolones.

Стабильность наличия мутаций в геноме контрольного штамма Salmonella enterica ВКШМ-Б-850М подтверждалась повторным секвенированием ДНК штамма и анализом нуклеотидной последовательности после хранения штамма в течение 6 месяцев в лиофилизированном виде в ампулах под вакуумом при температуре 2-8°СThe stability of the presence of mutations in the genome of the control strain Salmonella enterica VKShM-B-850M was confirmed by repeated DNA sequencing of the strain and analysis of the nucleotide sequence after storing the strain for 6 months in lyophilized form in ampoules under vacuum at a temperature of 2-8 ° C

Изобретение реализуется следующим образом.The invention is implemented as follows.

Пример 1Example 1

Контроль качества определения механизма устойчивости к антимикробным препаратам, ассоциированных с pESI-подобными плазмидами (aadA1, bla СТХ-М-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM), а так же мутация в хромосомном гене gyrA (p.S83Y или p.D87Y), которая связана с устойчивостью к фторхинолонам по данным полногеномного секвенирования.Quality control of the determination of the mechanism of resistance to antimicrobial drugs associated with pESI-like plasmids (aadA1, bla CTX-M-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM), as well as a mutation in the chromosomal gyrA gene (p.S83Y or p .D87Y), which is associated with fluoroquinolone resistance as measured by whole genome sequencing.

Выделение геномной ДНК из жидкой суточной бактериальной культуры Salmonella enterica проводили методом сорбции на силикагеле с использованием набора АмплиПрайм ДНК-сорб-В (ФБУН ЦНИИЭ) в соответствии с инструкцией производителя. Концентрацию ДНК измеряли на флуориметре QuantiFluor® ONE dsDNA System (Promega Corporation, США).Isolation of genomic DNA from a daily liquid bacterial culture of Salmonella enterica was carried out by sorption on silica gel using the AmpliPrime DNA-sorb-V kit (FBUN TsNIIE) in accordance with the manufacturer's instructions. The DNA concentration was measured on a QuantiFluor® ONE dsDNA System fluorometer (Promega Corporation, USA).

Подготовку библиотек проводили с использованием набора для NGS Nextera XT DNA Sample Preparation Kit, набора индексов Nextera XT Index Kit, магнитных шарики для очистки ампликонов (Agencourt AMPure ХР, Beckman Coulter, США), набор реагентов для секвенирования MiSeq® Reagent Kit v2/v3 согласно стандартному протоколу производителя. Секвенирование геномов исследуемых штаммов и контрольного штамма проводили на приборе MiSeq с использованием наборов реагентов MiSeq® Reagent Kit v2/v3 (США).The libraries were prepared using the NGS Nextera XT DNA Sample Preparation Kit, Nextera XT Index Kit, magnetic beads for purifying amplicons (Agencourt AMPure XP, Beckman Coulter, USA), MiSeq® Reagent Kit v2 / v3 according to manufacturer's standard protocol. Genome sequencing of the studied strains and the control strain was performed on a MiSeq device using MiSeq® Reagent Kit v2 / v3 (USA).

Поиск генетических факторов, обеспечивающих резистентность к антибиотикам, вели при помощи нескольких ресурсов: онлайн-ресурс ResFinder, находящегося на сервере Центра геномной эпидемиологии Датского технического университета [2]; база данных Antibiotic Resistance Gene-ANNOTation, база данных The Comprehensive Antibiotic Resistance Database. Аннотация геномов была выполнена с помощью сервера RAST на открытой платформе для сравнительного анализа геномов SEED.The search for genetic factors providing antibiotic resistance was carried out using several resources: the online resource ResFinder, located on the server of the Center for Genomic Epidemiology of the Danish Technical University [2]; Antibiotic Resistance Gene-ANNOTation database, The Comprehensive Antibiotic Resistance Database. Genome annotation was performed using the RAST server on an open platform for comparative analysis of genomes SEED.

Контрольный штамм Salmonella enterica ВКШМ-Б-850М проявлял заявленные свойства: стабильно обнаруживались шесть генов устойчивости к антимикробным препаратам, ассоциированных с pESI-подобными плазмидами (aadA1, bla СТХ-М-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM), а так же мутация в хромосомном гене gyrA (p.S83Y или p.D87Y), которая связана с устойчивостью к фторхинолонам.The control strain Salmonella enterica VKShM-B-850M showed the declared properties: six antimicrobial resistance genes associated with pESI-like plasmids (aadA1, bla CTX-M-14, dfrA14, sull, tetA / tetR, tetM) were stably detected, and also a mutation in the chromosomal gene gyrA (p.S83Y or p.D87Y), which is associated with resistance to fluoroquinolones.

Пример 2Example 2

При использовании метода серийных разведений руководствовались следующими методическими рекомендациями: МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам»; VET01-А4 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals, Approved Standard - Fourth Edition.When using the method of serial dilutions, the following guidelines were followed: MUK 4.2.1890-04 "Determination of the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs"; VET01-A4 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals, Approved Standard - Fourth Edition.

Использовали микрометод серийных разведений, т.е. с использованием стерильных 96-ти луночных планшетов и величине конечного объема 100 мкл.The serial dilution micromethod was used, i. E. using sterile 96 well plates and a final volume of 100 μl.

В качестве питательной среды использовали бульон Мюллера-Хинтона с добавлением ионов кальция и магния. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 24 часов. Учет результатов проводили визуально, сравнивая рост микроорганизма в присутствии АБП с ростом культуры в ячейке без АБП. За минимальную подавляющую концентрацию принимали концентрацию, обеспечивающую полное подавление видимого роста исследуемого штамма.Mueller-Hinton broth with the addition of calcium and magnesium ions was used as a nutrient medium. The plates were incubated at 37 ° C for 24 hours. The results were recorded visually, comparing the growth of a microorganism in the presence of ABP with the growth of a culture in a cell without ABP. The minimum inhibitory concentration was taken to be the concentration that completely suppresses the visible growth of the strain under study.

Контрольный штамм относился к категории «Устойчивый» к фторхинолонам, амино- и карбосипенициллинам, цефалоспоринам, фторхинолонам, тетрациклинам, аминогликозидам, фениколам, триметоприму уровень устойчивости расценивался как высокий.The control strain belonged to the category "Resistant" to fluoroquinolones, amino- and carbosipenicillins, cephalosporins, fluoroquinolones, tetracyclines, aminoglycosides, fenikols, trimethoprim, the level of resistance was regarded as high.

Для обеспечения достоверной диагностики сальмонеллеза, ассоциированного с AMP, необходимо проводить контроль качества на каждом этапе исследования материала. Предлагаемый штамм обладает стабильными свойствами, позволяющими контролировать этап определения механизма устойчивости фенотипическими и молекулярными методами.To ensure a reliable diagnosis of salmonellosis associated with AMP, it is necessary to carry out quality control at each stage of the study of the material. The proposed strain has stable properties that allow you to control the stage of determining the mechanism of resistance by phenotypic and molecular methods.

Литературные источникиLiterary sources

1. Gunell Μ. et al. Mechanisms of resistance in nontyphoidal Salmonella enterica strains exhibiting a nonclassical quinolone resistance phenotype // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2009. - N53(9). - P. 3832-3836.1. Gunell Μ. et al. Mechanisms of resistance in nontyphoidal Salmonella enterica strains exhibiting a nonclassical quinolone resistance phenotype // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2009. - N53 (9). - P. 3832-3836.

2. Сидоренко С. В. и соавт.Молекулярные механизмы устойчивости грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae к цефалоспориновым антибиотикам. Антибиотики и химиотерапия 2011; 9(3):6-16.2. Sidorenko SV et al. Molecular mechanisms of resistance of gram-negative bacteria of the Enterobacteriaceae family to cephalosporin antibiotics. Antibiotics and Chemotherapy 2011; 9 (3): 6-16.

3. Но P-L etal. Plasmid-mediated OqxAB is an important mechanism for nitrofurantoin resistance in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother 60:537-543. doi:10.1128/AAC.02156-15.3. But P-L etal. Plasmid-mediated OqxAB is an important mechanism for nitrofurantoin resistance in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother 60: 537-543. doi: 10.1128 / AAC.02156-15.

Claims (1)

Штамм бактерий Salmonella enterica, депонированный во «Всероссийской коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве», под номером ВКШМ-Б-850М, обладающий множественной резистентностью к антимикробным препаратам, с выявленными генетическими детерминантами устойчивости для фенотипических и молекулярных исследований при идентификации конъюгативной плазмиды pESI-like в диагностике сальмонеллеза.The bacterial strain Salmonella enterica, deposited in the "All-Russian collection of strains of microorganisms used in veterinary medicine and animal husbandry", under the number VKShM-B-850M, possessing multiple resistance to antimicrobial drugs, with identified genetic determinants of resistance for phenotypic and molecular studies in the identification of the conjugative plasmid pESI -like in the diagnosis of salmonellosis.
RU2020139896A 2020-12-04 2020-12-04 Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis RU2753412C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020139896A RU2753412C1 (en) 2020-12-04 2020-12-04 Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020139896A RU2753412C1 (en) 2020-12-04 2020-12-04 Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2753412C1 true RU2753412C1 (en) 2021-08-16

Family

ID=77349455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020139896A RU2753412C1 (en) 2020-12-04 2020-12-04 Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2753412C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2218177C2 (en) * 2002-01-18 2003-12-10 Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина Strain of bacterium salmonella enteritidis = 22 used for preparing vaccine and diagnostic preparation
RU2707925C1 (en) * 2019-01-24 2019-12-02 Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) Strain of bacteria salmonella enterica subspecies enterica serovar typhi as a control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosing typhoid fever

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2218177C2 (en) * 2002-01-18 2003-12-10 Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина Strain of bacterium salmonella enteritidis = 22 used for preparing vaccine and diagnostic preparation
RU2707925C1 (en) * 2019-01-24 2019-12-02 Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) Strain of bacteria salmonella enterica subspecies enterica serovar typhi as a control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosing typhoid fever

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КАФТЫРЕВА Л.А. и др. "Многообразие механизмов антибиотикорезистентности сальмонелл".//Инфекция и иммунитет. 2011, т.1, N 4, с. 303-310. *
СОЛОВЬЕВА А.С. и др. "Антибиотикорезистентность штаммов Salmonella enteritidis, выделенных в дальневосточном и сибирском федеральном округах".//Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017, т. 5, N 7, с.15-21. *
СОЛОВЬЕВА А.С. и др. "Антибиотикорезистентность штаммов Salmonella enteritidis, выделенных в дальневосточном и сибирском федеральном округах".//Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017, т. 5, N 7, с.15-21. КАФТЫРЕВА Л.А. и др. "Многообразие механизмов антибиотикорезистентности сальмонелл".//Инфекция и иммунитет. 2011, т.1, N 4, с. 303-310. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yahara et al. Genome‐wide association of functional traits linked with C ampylobacter jejuni survival from farm to fork
Gebhardt et al. Joint transcriptional control of virulence and resistance to antibiotic and environmental stress in Acinetobacter baumannii
Capuano et al. Characterization of drug resistance and virulotypes of Salmonella strains isolated from food and humans
Graziani et al. Virulotyping of Salmonella enterica serovar Napoli strains isolated in Italy from human and nonhuman sources
Ed-Dra et al. Antimicrobial resistance, virulence genes, and genetic diversity of Salmonella enterica isolated from sausages
Zhou et al. Incidence and characterization of Salmonella isolates from raw meat products sold at small markets in Hubei province, China
CA2990894A1 (en) Genetic testing for predicting resistance of salmonella species against antimicrobial agents
Samad et al. Multiplex polymerase chain reaction detection of Shiga toxin genes and antibiotic sensitivity of Escherichia coli O157: H7 isolated from beef meat in Quetta, Pakistan
Chen et al. Quantitative microbial risk assessment for Salmonella: Inclusion of whole genome sequencing and genomic epidemiological studies, and advances in the bioinformatics pipeline
Tasmin et al. Detection of virulence plasmid–encoded genes in Salmonella Typhimurium and Salmonella Kentucky isolates recovered from commercially processed chicken carcasses
Murugaiyan et al. Assessment of species and antimicrobial resistance among Enterobacteriaceae isolated from mallard duck faeces
Dubey et al. Characterization of virulence and antimicrobial resistance genes of Aeromonas media strain SD/21–15 from marine sediments in comparison with other Aeromonas spp.
Wang et al. Isolation and characterization of Escherichia albertii originated from the broiler farms in Mississippi and Alabama
Abdallah et al. Detection of Some Virulence and Antibiotic Resistance Genes in Campylobacter jejuni isolated from Poultry and Human
Zhao et al. Epidemiological investigation on drug resistance of Salmonella isolates from duck breeding farms in Shandong Province and surrounding areas, China
Fatima et al. Whole-genome sequencing of multidrug resistance Salmonella Typhi clinical strains isolated from Balochistan, Pakistan
Shalaby et al. Isolation, identification, and genetic characterization of antibiotic resistance of Salmonella species isolated from chicken farms
Salam et al. Physiological characteristics and virulence gene composition of selected serovars of seafood-borne Salmonella enterica
Burgueño-Roman et al. Pathogenic potential of non-typhoidal Salmonella serovars isolated from aquatic environments in Mexico
RU2753412C1 (en) Strain of salmonella enterica bacteria as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis
Ammari et al. Characterization of Salmonella Enteritidis isolated from foods and patients in northern Morocco
Jacob et al. Genomic analysis of human invasive Salmonella enterica serovar Typhimurium ST313 isolate B3589 from India
RU2744203C1 (en) Strain of bacteria salmonella enterica sbsp_ enterica serovar kentucky b-9045 of the international multiresistant clone of salmonella kentucky st198 used as a control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosing salmonellosis
Wei et al. Genetic diversity of extended-spectrum cephalosporin resistance in Salmonella enterica and E. coli isolates in a single broiler chicken
RU2752895C1 (en) Salmonella enterica bacterial strain vgnki-11 (vkshm-b-848m) as control strain for phenotypic and molecular studies in diagnosis of salmonellosis