RU2745114C1 - Means for organotypic preservation of donor cornea - Google Patents
Means for organotypic preservation of donor cornea Download PDFInfo
- Publication number
- RU2745114C1 RU2745114C1 RU2020126934A RU2020126934A RU2745114C1 RU 2745114 C1 RU2745114 C1 RU 2745114C1 RU 2020126934 A RU2020126934 A RU 2020126934A RU 2020126934 A RU2020126934 A RU 2020126934A RU 2745114 C1 RU2745114 C1 RU 2745114C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- dextran
- sulfate
- preservation
- donor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для вирусной деконтаминации трупных донорских роговиц на консервационном этапе и профилактики передачи герпетической инфекции от донора к реципиенту во время сквозной кератопластики.The invention relates to medicine, namely to ophthalmology, and can be used for viral decontamination of cadaveric donor corneas at the conservation stage and for the prevention of transmission of herpes infection from donor to recipient during penetrating keratoplasty.
Ближайшим аналогом является средство для консервации трупных донорских роговиц глаза (Патент РФ №2674585), содержащее: среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотеррицин В и среду Дюльбекко-Игла, и препарат Полудан (Р/У ЛРС-002205-101114) при следующем соотношении компонентов, на 100 мл: среда 199 25,0, среда Хэма F-10 25,0, хондроитин-сульфат А 0,5, декстран-40 5,0, гентамицин-сульфат 0,00014, амфотерицин В 0,00015, Полудан 1000 ЕД, среда Дюльбекко-Игла остальное.The closest analogue is an agent for the preservation of cadaveric donor corneas of the eye (RF Patent No. 2674585), containing: medium 199, Ham's medium F-10, chondroitin sulfate, dextran-40, gentamicin sulfate, amphoterricin B and Dulbecco-Eagle medium, and the drug Poludan (R / U LRS-002205-101114) with the following ratio of components, per 100 ml: medium 199 25.0, Ham's medium F-10 25.0, chondroitin sulfate A 0.5, dextran-40 5.0, gentamicin sulfate 0.00014, amphotericin B 0.00015, Poludan 1000 ED, Dulbecco-Eagle medium the rest.
Недостатком этой среды является то, что использованный препарат Полудан не относится к аномальным нуклеозидам и не способен встраиваться в вирусную ДНК.The disadvantage of this environment is that the used preparation Poludan does not belong to abnormal nucleosides and is not able to integrate into viral DNA.
Задачей изобретения является создание многокомпонентного средства для органотипической консервации донорской роговицы (при температуре 37°С), обладающего синергетическим противовирусным действием в отношении герпесвирусов, и способствующего выработке эндогенного интерферона для герпесвирусной деконтаминации.The objective of the invention is to create a multicomponent agent for organotypic preservation of the donor cornea (at a temperature of 37 ° C), which has a synergistic antiviral effect against herpes viruses, and promotes the production of endogenous interferon for herpes virus decontamination.
Техническим результатом является прекращение репликации герпесвирусов и обеспечение эффективной предоперационной профилактики передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту за счет синергетического противовирусного действия компонентов средства.The technical result is the termination of the replication of herpes viruses and the provision of effective preoperative prevention of the transmission of herpes virus infection from donor to recipient due to the synergistic antiviral action of the components of the agent.
Технический результат достигается тем, что средство для органотипической консервации донорской роговицы, содержащее среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран, гентамицин-сульфат, амфотерицин В и среду Дюльбекко-Игла, согласно изобретению, дополнительно содержит Циклоферон и Цимевен, а в качестве декстрана используют Декстран-Т500, при следующем соотношении компонентов, на 100 мл:The technical result is achieved in that the agent for organotypic preservation of the donor cornea, containing medium 199, Ham's F-10 medium, chondroitin sulfate, dextran, gentamicin sulfate, amphotericin B and Dulbecco-Eagle medium, according to the invention, additionally contains Cycloferon and Cymeven, and as dextran, Dextran-T500 is used, with the following ratio of components, per 100 ml:
При этом среда 199 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 25; Л-аргинина хлорид 70; аспарагиновая кислота 30; Л-цистеина хлорид - 0,0987; Л-цистина двунатриевая соль; Л-глютаминовая кислота 66,82; Л-глютамин 100; глютатион 0,05; глицин 50; Л-гистидина хлорид одноводный 21,88; Л-гидрооксипролин 10; Л-изолейцин 20; Л-лейцин 60; Л лизина хлорид 70; Л-метионин 15; Л-фенилаланин 25; Л-пролин 40; Л-серин 25; Л-треонин 30; Л-триптофан 10; Л-тирозина двунатриевая соль - 49,72; Л-валин 25; Л-аскорбиновая кислота 0,05; биотин 0,01; кальциферол 0,1; Д-кальция пантотенат 0,01; холина хлорид 0,5; фолиевая кислота - 0,01; и-инозитол 0,05; менафтона натрия бисульфат трехводный 0,019; никотиновая кислота 0,025; никотинамид 0,025; пара-амино-бензойная кислота 0,05; пиридоксальхлорид 0,025; пиридоксинхлорид 0,025; рибофлавин 0,01; тиамина хлорид 0,01; Д-Л-токоферола фосфата двунатриевая соль 0,01; витамина А-ацетат 0,1147; кальция хлорид двухводный 185,5; железа нитрат девятиводный 0,01; калия хлорид 400; калия дегидроортофосфат 60; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 8000; натрия гидроортофосфат 47,5; аденина сульфат 10; 5-АМФ 0,2; АТФ двунатриевая соль 10; холестерол 0,2; 2-дезоксирибоза 0,5; Д-глюкоза 1000; гуанина хлорид - 0,3; гипоксантин 0,3; Д-рибоза 0,5; натрия ацетата 36,71; натриевая соль фенола красного 17; тимин 0,3; твин 80-5; урацил 0,3; ксантин 0,3.The medium 199 has the following composition, mg / l: L-alanine 25; L-arginine chloride 70; aspartic acid 30; L-cysteine chloride - 0.0987; L-cystine disodium salt; L-glutamic acid 66.82; L-glutamine 100; glutathione 0.05; glycine 50; L-histidine chloride monohydrate, 21.88; L-hydroxyproline 10; L-isoleucine 20; L-leucine 60; L lysine chloride 70; L-methionine 15; L-phenylalanine 25; L-proline 40; L-serine 25; L-threonine 30; L-tryptophan 10; L-tyrosine disodium salt - 49.72; L-valine 25; L-ascorbic acid 0.05; biotin 0.01; calciferol 0.1; D-calcium pantothenate 0.01; choline chloride 0.5; folic acid - 0.01; i-inositol 0.05; sodium menaftone trihydrate bisulfate 0.019; nicotinic acid 0.025; nicotinamide 0.025; para-amino-benzoic acid 0.05; pyridoxal chloride 0.025; pyridoxine chloride 0.025; riboflavin 0.01; thiamine chloride 0.01; D-L-tocopherol phosphate disodium salt 0.01; vitamin A acetate 0.1147; calcium chloride dihydrate 185.5; iron nitrate nine-water 0.01; potassium chloride 400; potassium dehydrogen phosphate 60; magnesium sulfate seven-water 200; sodium chloride 8000; sodium hydrogen phosphate 47.5; adenine sulfate 10; 5-AMP 0.2; ATP disodium salt 10; cholesterol 0.2; 2-deoxyribose 0.5; D-glucose 1000; guanine chloride - 0.3; hypoxanthine 0.3; D-ribose 0.5; sodium acetate 36.71; sodium salt of phenol red 17; thymine 0.3; tween 80-5; uracil 0.3; xanthine 0.3.
Среда Хэма F-10 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 8,91; Л-аргинина хлорид 210,7; Л-аспарагин 1-водный - 15,01; Л-аспарагиновая кислота 13,31; Л-цистеина хлорид 31,53; Л-глютаминовая кислота 14,71; Л-глютамин 146,2; глицин 7,51; Л-гистидина хлорид одноводный 20,96; Л-изолейцин 2,62; Л-лейцин 13,12; Л-лизин 29,3; Л-метионин 4,48; Л-фенилаланин 4,96; Л-пролин 11,51; Л-серин 10,5; Л-треонин 3,57; Л-триптофан 0,61; Л-тирозина натриевая соль 2,25; Л-валин 3,51; биотин 0,024; Д-кальция пантотенат 0,715; хлорид холина 0,698; фолиевая кислота 1,32; и-инозитол 0,541; никотинамид 0,611; пиридоксин-хлорид 0,206; рибофлавин 0,376; тиамина хлорид 1,012; витамин В12 1,36; кальция хлорид двухводный 44,1; сульфат меди пятиводный 0,0025; сульфат железа семиводный 0,8346; хлорид калия - 285; калия дегидрофосфат 83; магния сульфат семиводный 152,7; натрия хлорид 7400; натрия гидроортофосфат 156,2; цинка сульфат семиводный 0,0288; Д-глюкоза 1100; гипоксантин 4,08; липоевая кислота 0,206; натриевая соль фенола красного 12; натрия пируват 110; тимидин 0,727.Ham's medium F-10 has the following composition, mg / l: L-alanine 8.91; L-arginine chloride 210.7; L-asparagine 1-water - 15.01; L-aspartic acid 13.31; L-cysteine chloride, 31.53; L-glutamic acid 14.71; L-glutamine 146.2; glycine 7.51; L-histidine chloride monohydrate 20.96; L-isoleucine 2.62; L-leucine 13.12; L-lysine 29.3; L-methionine 4.48; L-phenylalanine 4.96; L-proline 11.51; L-serine 10.5; L-threonine 3.57; L-tryptophan 0.61; L-tyrosine sodium salt, 2.25; L-valine 3.51; biotin 0.024; D-calcium pantothenate 0.715; choline chloride 0.698; folic acid 1.32; i-inositol 0.541; nicotinamide 0.611; pyridoxine chloride 0.206; riboflavin 0.376; thiamine chloride 1.012; vitamin B12 1.36; calcium chloride dihydrate 44.1; copper sulfate pentahydrate 0.0025; ferrous sulfate heptahydrate 0.8346; potassium chloride - 285; potassium dehydrogen phosphate 83; magnesium sulfate heptahydrate 152.7; sodium chloride 7400; sodium hydrogen phosphate 156.2; zinc sulfate heptahydrate 0.0288; D-glucose 1100; hypoxanthine 4.08; lipoic acid 0.206; sodium salt of phenol red 12; sodium pyruvate 110; thymidine 0.727.
Среда Дюльбекко-Игла имеет следующий состав, мг/л: Л-аргинин 84; Л-цистина двунатриевая соль 56,78; Л-глютамин 584; глицин 30; Л-гистидина хлорид одноводный 42; Л-изолейцин 104,8; Л-лейцин 104,8; Л-лизина хлорид 146,2; Л-метионин 30; Л-фенилаланин - 66; Л-серин 42; Л-треонин 95,2; Л-триптофан 16; Л-тирозина двунатриевая соль 89,5; Л-валин 93,6; Д-кальция пантотенат 4; холина хлорид 4; фолиевая кислота 4; и-инозитол 7; никотинамид 4; пиридоксаль-хлорид 4; рибофлавин 0,4; тиамина хлорид 4; кальция хлорид двухводный 264,9; нитрат железа девятиводный 0,1; калия хлорид 400; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 6400; натрия бикарбонат 3700; натрия дигидроортофосфат двухводный 141,3; Д-глюкоза 4500; натриевая соль фенола красного 15; натрия пируват 110.The Dulbecco-Eagle medium has the following composition, mg / l: L-arginine 84; L-cystine disodium salt 56.78; L-glutamine 584; glycine 30; L-histidine chloride monohydrate 42; L-isoleucine 104.8; L-leucine 104.8; L-lysine chloride 146.2; L-methionine 30; L-phenylalanine - 66; L-serine 42; L-threonine 95.2; L-tryptophan 16; L-tyrosine disodium salt 89.5; L-valine 93.6; D-calcium pantothenate 4; choline chloride 4; folic acid 4; i-inositol 7; nicotinamide 4; pyridoxal chloride 4; riboflavin 0.4; thiamine chloride 4; calcium chloride dihydrate 264.9; iron nitrate nine-water 0.1; potassium chloride 400; magnesium sulfate seven-water 200; sodium chloride 6400; sodium bicarbonate 3700; sodium dihydrogen phosphate dihydrate 141.3; D-glucose 4500; sodium salt of phenol red 15; sodium pyruvate 110.
Циклоферон (регистрационное удостоверение, номер: Ρ N001049/03), в ампулах, содержит действующее вещество - меглюмина акридонацетат 125,0 мг, вспомогательное вещество - вода для инъекций до 1,0 мл.Cycloferon (registration certificate, number: Ρ N001049 / 03), in ampoules, contains the active ingredient - meglumine acridone acetate 125.0 mg, auxiliary substance - water for injection up to 1.0 ml.
Цимевен (регистрационное удостоверение, номер: Π N011681/01), лиофилизированный порошок во флаконах, содержит ганцикловир 500 мг.Cymeven (registration certificate, number: Π N011681 / 01), lyophilized powder in vials, contains ganciclovir 500 mg.
Каждая в отдельности взятая среда, как-то: среда 199 как наиболее сложная по своему составу, среда Хэма F-10 и Среда Дюльбекко-Игла как наиболее универсальные, поддерживает высокую жизнеспособность чувствительных клеток перевиваемых линий. Однако для органных культур, которые в процессе культивирования остаются интактными и не относятся к перевиваемым линиям, требуется экспериментальный подбор соотношений нескольких сред, в зависимости от гистогенетической характеристики органной культуры. В этой связи для эндотелия трупной донорской роговицы, который относится к глиальной ткани, наиболее оптимальным является выбор трех сред - среда 199, среда Хэма F-10 и Среда Дюльбекко-Игла, в заявленных соотношениях, имитирующих аминокислотный и метаболический состав водянистой влаги передней камеры интактного глаза.Each medium taken separately, such as: medium 199 as the most complex in its composition, Ham's F-10 medium and Dulbecco-Eagle's medium as the most universal, maintains the high viability of sensitive cells of the transplanted lines. However, for organ cultures that remain intact during cultivation and do not belong to continuous lines, an experimental selection of the ratios of several media is required, depending on the histogenetic characteristics of the organ culture. In this regard, for the endothelium of the cadaveric donor cornea, which belongs to glial tissue, the most optimal choice is the choice of three media - medium 199, Ham's medium F-10 and Dulbecco-Eagle's medium, in the stated ratios that mimic the amino acid and metabolic composition of the aqueous humor of the anterior chamber of the intact eyes.
Хондроитин-сульфат А относится к цитопротекторам - вискоэлластикам, обладая соответствующим знаком и электронным зарядом, он образует поверхностную защитную пленку на клетках эндотелиального пласта роговицы. Тем самым предотвращается механическое повреждение и десквамация клеток эндотелия роговицы в процессе консервации донорского материала.Chondroitin sulfate A belongs to the cytoprotectors - viscoelastics, possessing the appropriate sign and electronic charge, it forms a surface protective film on the cells of the endothelial layer of the cornea. This prevents mechanical damage and desquamation of corneal endothelial cells during the preservation of donor material.
Декстран-Т500 имеет молекулярную массу 500000 D, относится к высокомолекулярным онкотическим компонентам среды и, таким образом, подобранный в заявленной концентрации, предотвращает процесс набухания клеток и коллоидного вещества стромы донорской роговой оболочки в процессе краткосрочной органотипической консервации.Dextran-T500 has a molecular weight of 500,000 D, refers to high molecular weight oncotic components of the medium and, thus, selected in the stated concentration, prevents the process of swelling of cells and colloidal substance of the stroma of the donor cornea during short-term organotypic preservation.
Для предотвращения роста патогенной микрофлоры добавлены: гентамицин-сульфат, оказывающий бактерицидное действие в отношении широкого спектра грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, и амфотерицин В, обладающий фунгицидным и фунгистатическим действиями.To prevent the growth of pathogenic microflora, added: gentamicin sulfate, which has a bactericidal effect against a wide range of gram-negative and gram-positive microorganisms, and amphotericin B, which has fungicidal and fungistatic effects.
Препарат Циклоферон представляет собой иммуностимулирующее средство - индуктор эндогенных интерферонов. Обладает противовирусной, в т.ч. противогерпетической активностью за счет активации врожденных биологических внутриклеточных механизмов противовирусной защиты. Усиливает действие аномальных нуклеозидов.The drug Cycloferon is an immunostimulating agent - an inducer of endogenous interferons. Possesses antiviral, incl. antiherpetic activity due to the activation of innate biological intracellular mechanisms of antiviral defense. Enhances the action of abnormal nucleosides.
Препарат Цимевен относится к фармакологической группе аномальных нуклеозидов и обладает противовирусной активностью в отношении герпесвирусов. Усиливает действие индукторов интерферонов.The drug Cymeven belongs to the pharmacological group of abnormal nucleosides and has antiviral activity against herpes viruses. Strengthens the action of interferon inducers.
Заявленное средство для органотипической консервации донорской роговицы благодаря входящим в его состав компонентам в обозначенных концентрациях приводит к синергетическому усилению противогерпетической активности.The claimed agent for organotypic preservation of the donor cornea, due to its constituent components in the indicated concentrations, leads to a synergistic increase in antiherpetic activity.
В результате этого создаются условия для наиболее эффективной элиминации вирусов группы герпеса из трупных донорских роговиц человека на этапе консервации при помощи современных фармакологических противовирусных препаратов, что способствует профилактике передачи герпесвирусной инфекции реципиентам во время кератопластики.As a result, conditions are created for the most effective elimination of viruses of the herpes group from cadaveric donor corneas at the stage of conservation with the help of modern pharmacological antiviral drugs, which helps to prevent the transmission of herpesvirus infection to recipients during keratoplasty.
Это подтверждают результаты исследования, в котором использовались образцы консервационных растворов для вирусной деконтаминации. Заявленное средство, полученное по указанной формуле, являлось опытным образцом. В качестве контрольного образца использовался ближайший аналог - средство для консервации роговицы, полученное по Патенту РФ №2674585.This is confirmed by the results of a study using samples of preservation solutions for viral decontamination. The claimed tool, obtained according to the specified formula, was a prototype. As a control sample, the closest analogue was used - a means for preserving the cornea, obtained according to RF Patent No. 2674585.
Для оценки противовирусной эффективности использовали экспериментальную модель герпесвирусной инфекции in vitro, заключающуюся в изучении коэффициента вирусного ингибирования данными средствами.To assess the antiviral efficacy, an experimental model of herpesvirus infection in vitro was used, which consists in studying the coefficient of viral inhibition by these agents.
В качестве инфекционного агента использовался вирус простого герпеса 1 типа, который добавлялся в культуру клеток VERO в виде вируссодержащей жидкости.Herpes simplex virus type 1 was used as an infectious agent, which was added to the VERO cell culture in the form of a vaccinated liquid.
По результатам проведенного исследования, коэффициент ингибирования опытного образца - заявленного средства составил 62,2%, в то время как коэффициент ингибирования контрольного образца составил 35,3% (р<0,05). Таким образом, было установлено, что заявленное средство обладает более выраженным противовирусным эффектом по сравнению с ближайшим аналогом.According to the results of the study, the inhibition coefficient of the experimental sample - the claimed agent was 62.2%, while the inhibition coefficient of the control sample was 35.3% (p <0.05). Thus, it was found that the claimed agent has a more pronounced antiviral effect in comparison with the closest analogue.
На следующем этапе оценивалось влияние опытного и контрольного средства на жизнеспособность и функции эндотелиального слоя роговицы. Для этого исследовались 12 роговиц, непригодных для трансплантации, полученных из Глазного тканевого банка ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Одна роговица от каждого донора входила в опытную группу, в то время как парная включалась в контрольную группу.At the next stage, the influence of the experimental and control agent on the viability and function of the endothelial layer of the cornea was assessed. For this, 12 corneas unsuitable for transplantation were examined, obtained from the Eye Tissue Bank of the Federal State Autonomous Institution "NMITs" MNTK "Eye Microsurgery" named after V.I. acad. S.N. Fedorov "of the Ministry of Health of Russia. One cornea from each donor was included in the experimental group, while the paired cornea was included in the control group.
По данным иммуноцитохимического анализа эндотелиальный пласт клеток всех опытных и контрольных роговиц оставался жизнеспособным в до 6-х суток консервации как в опытной, так и в контрольной группе. Потеря эндотелиальных клеток в обеих группах была незначительной и не превышала 1,5%. Анализ функциональной активности эндотелиального слоя двух групп проводился путем изучения экспрессии характерного маркера помпальной функции клеток - фермента Na+/K+-АТФазы. По результатам сравнительного анализа с использованием программного обеспечения не было установлено отличий между группами.According to the data of immunocytochemical analysis, the endothelial layer of cells of all experimental and control corneas remained viable for up to 6 days of conservation both in the experimental and control groups. The loss of endothelial cells in both groups was insignificant and did not exceed 1.5%. The analysis of the functional activity of the endothelial layer of the two groups was carried out by studying the expression of a characteristic marker of the pompous function of cells - the enzyme Na + / K + -ATPase. Comparative analysis using software did not show differences between groups.
Таким образом, установлено, что заявленное средство обладает выраженным противовирусным эффектом и превосходит по коэффициенту вирусного ингибирования ближайший аналог, при этом является безопасным для эндотелиальных клеток, не вызывает их повреждения, не нарушает их функциональную активность.Thus, it was found that the claimed agent has a pronounced antiviral effect and surpasses the closest analogue in terms of the coefficient of viral inhibition, while being safe for endothelial cells, does not cause damage to them, and does not disrupt their functional activity.
Средство для органотипической консервации донорской роговицы в количестве 100 мл получают следующим образом: в условиях ламинарной комнаты в химически чистую и стерильную мерную колбу сливают вместе две среды: 25 мл среды 199 и 25 мл среды Хэма F-10. Далее последовательно вносят 0,00014 г гентамицин-сульфата, 0,00015 амфотерицина В. Состав разделяют на две равные части по 25 мл и растворяют в первой части 5 г декстрана-Т500, а во второй части 0,5 г хондроитин-сульфата А путем медленного нанесения сухого вещества на поверхность жидкой смеси. После внесения указанных компонентов растворы оставляют до полного набухания на 80-120 минут, после чего полностью растворяют. Затем оба раствора сливают вновь вместе в мерную колбу, добавляют Циклоферон в количестве 1 мг, Цимевен в количестве 0,5 мг и добавляют среду Дюльбекко-Игла до метки 100 мл. Затем, после префильтрации через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм, полученные 100 мл средства для органотипической консервации донорской роговицы, разливают по 20 мл во флаконы, с одновременной «Глубинной стерилизацией» через систему миллипоровых фильтров с диаметром пор 0,22 мкм. Флаконы укупориваются стерильными крышками и помещаются в холодильник для хранения при температуре 4°С не более суток, либо используются сразу для вирусной деконтаминации при температуре 37°С.Means for organotypic preservation of the donor cornea in an amount of 100 ml are prepared as follows: in a laminar room, two media are poured into a chemically clean and sterile volumetric flask together: 25 ml of 199 medium and 25 ml of Ham's F-10 medium. Next, 0.00014 g of gentamicin sulfate, 0.00015 of amphotericin B are sequentially introduced. The composition is divided into two equal parts of 25 ml and dissolved in the first part 5 g of dextran-T500, and in the second part 0.5 g of chondroitin sulfate A by slowly applying dry matter to the surface of the liquid mixture. After adding these components, the solutions are left to swell completely for 80-120 minutes, after which they are completely dissolved. Then both solutions are poured again together into a volumetric flask, Cycloferon is added in an amount of 1 mg, Cymeven in an amount of 0.5 mg, and the Dulbecco-Eagle medium is added to the mark of 100 ml. Then, after prefiltration through a Millipore filter with a pore diameter of 0.45 microns, the obtained 100 ml of the agent for organotypic preservation of the donor cornea is poured into 20 ml vials, with simultaneous "Depth sterilization" through a system of millipore filters with a pore diameter of 0.22 microns. The vials are sealed with sterile lids and placed in a refrigerator for storage at a temperature of 4 ° C for no more than a day, or are used immediately for viral decontamination at a temperature of 37 ° C.
Средство используют следующим образом. В условиях стерильного бокса во флакон 20 мл с заявленным средством помещают роговично-склеральный диск, направленный для вирусной деконтаминации, плотно закрывают крышкой и консервируют при температуре 37-38°С в течение 24-х часов, после чего переносят в среду для консервации роговицы, полученную по Патенту РФ №2069951, в условия гипотермии (4-8°С) и хранят в ней.The tool is used as follows. Under the conditions of a sterile box, a corneal-scleral disc is placed in a 20 ml bottle with the claimed agent, directed for viral decontamination, tightly closed with a lid and preserved at a temperature of 37-38 ° C for 24 hours, after which it is transferred to a medium for corneal preservation, obtained by RF Patent No. 2069951, under hypothermia (4-8 ° C) and stored therein.
Использование предлагаемого средства для органотипической консервации донорской роговицы в Глазных тканевых банках России позволит обеспечить более эффективную предоперационную профилактику передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту во время сквозной кератопластики за счет синергетического действия входящих в состав противовирусных компонентов.The use of the proposed agent for organotypic preservation of the donor cornea in the Eye Tissue Banks of Russia will provide more effective preoperative prevention of the transmission of herpesvirus infection from the donor to the recipient during penetrating keratoplasty due to the synergistic action of the antiviral components included in the composition.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020126934A RU2745114C1 (en) | 2020-08-12 | 2020-08-12 | Means for organotypic preservation of donor cornea |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020126934A RU2745114C1 (en) | 2020-08-12 | 2020-08-12 | Means for organotypic preservation of donor cornea |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2745114C1 true RU2745114C1 (en) | 2021-03-22 |
Family
ID=75159068
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020126934A RU2745114C1 (en) | 2020-08-12 | 2020-08-12 | Means for organotypic preservation of donor cornea |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2745114C1 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2674585C1 (en) * | 2017-11-09 | 2018-12-11 | Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Agent for preservation of donor cornea |
-
2020
- 2020-08-12 RU RU2020126934A patent/RU2745114C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2674585C1 (en) * | 2017-11-09 | 2018-12-11 | Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Agent for preservation of donor cornea |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HALFORD W.P., et al, Mechanisms of herpes simplex virus type 1 reactivation, Journal of Virology, 1996, N70, p. 5051-5060. * |
| КЕРИМОВ Т.З., и др., Герпесвирусная инфекция трансплантата роговицы: подходы к вирусной деконтаминации на этапе консервации, Практическая медицина, 3 (114), апрель, 2018, с.89-92. * |
| КЕРИМОВ Т.З., и др., Герпесвирусная инфекция трансплантата роговицы: подходы к вирусной деконтаминации на этапе консервации, Практическая медицина, 3 (114), апрель, 2018, с.89-92. HALFORD W.P., et al, Mechanisms of herpes simplex virus type 1 reactivation, Journal of Virology, 1996, N70, p. 5051-5060. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7824847B2 (en) | Tissue preservation method with polyoxyethylene/polyoxypropylene copolymer | |
| US11497206B2 (en) | Cell cryopreservation protective composition and use thereof | |
| ES2217700T3 (en) | MEDICAL SOLUTION DEFINED FROM SERUM FOR OPHTHALMOLOGY. | |
| US5407669A (en) | Method and apparatus of a defined serumfree medical solution | |
| US5104787A (en) | Method for apparatus for a defined serumfree medical solution useful for corneal preservation | |
| US6743575B2 (en) | Compositions and methods for the preservation of living tissues | |
| AU2017377309B2 (en) | Mammalian cell cryopreservation liquid | |
| TR201816125T4 (en) | Composition and method for protecting, transporting and storing living biological materials. | |
| RU2674585C1 (en) | Agent for preservation of donor cornea | |
| RU2450515C1 (en) | Preserving agent for donor cornea | |
| RU2745114C1 (en) | Means for organotypic preservation of donor cornea | |
| KR101668743B1 (en) | A composition for preserving cells comprising plant-derived recombinant human serum albumin and plant peptide | |
| RU2710167C1 (en) | Universal remedy for hypothermic preservation of cornea graft | |
| RU2676311C1 (en) | Means for preservation of the posterior layer transplant of the donor cornea | |
| CN116473051A (en) | Serum-free non-program cell frozen stock solution and preparation method and application thereof | |
| RU2069951C1 (en) | Medium for eye cornea conservation | |
| US20240041023A1 (en) | Composition and method of preserving viability of cell in a low temperature | |
| CN107787960B (en) | Cryopreservation liquid for retinal pigment epithelial cells and application thereof | |
| Sperling et al. | Toxicity of dimethylsulfoxide (DMSO) to human corneal endothelium in vitro | |
| CN1255531C (en) | Method for configurating feeder-layer-free corneal eipithelium for frost self-corneal limbus stem cell | |
| RU2290433C2 (en) | Medium for conservation of langerhans islets | |
| WO2022251673A1 (en) | Methods for priming allogeneic cultured keratinocyte compositions for topical use | |
| Ewel et al. | Corneal limbal stem cell cryopreservation |