RU2069951C1

RU2069951C1 - Medium for eye cornea conservation

Info

Publication number: RU2069951C1
Application number: RU93010287A
Authority: RU
Inventors: С.Н. Федоров; З.И. Мороз; С.А. Борзенок; Ю.А. Комах
Original assignee: Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза"
Priority date: 1993-02-26
Filing date: 1993-02-26
Publication date: 1996-12-10

Abstract

FIELD: medicine, ophthalmology. SUBSTANCE: the known medium containing medium-199 and dextran has additionally medium "Ф"-10, Dulbecko-Eagle medium, chondroitin sulfate, gentamycin sulfate, amphothericin B at the following ratio of components, wt.-%: medium M-199 25; medium "Ф"-10 25; chondroitin sulfate 2.7; dextran-40 2.0; gentamycin sulfate 0.00014; amphothericin B 0.00015, and medium Dulbecko-Eagle - the rest. EFFECT: improved transplantability and viability of endothelium.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для длительного сохранения жизнеспособного трансплантата для сквозной и послойной кератопластики. The invention relates to medicine, namely to ophthalmology, and can be used for long-term preservation of a viable transplant for through and layered keratoplasty.

Известна среда для консервации роговицы Мак-Кери-Кауфмана, содержащая среду 199, декстран, стрептомицина сульфат и пенициллин. (American journal of ophthalmology, vol. 79, N 1, 1975, с.115-120). Known environment for the conservation of the cornea McCary-Kaufman, containing medium 199, dextran, streptomycin sulfate and penicillin. (American journal of ophthalmology, vol. 79, N 1, 1975, pp. 115-120).

Недостатками известной среды являются: отек стромы за счет падения энергетического потенциала эндотелия, определяющего жизнеспособность и трансплантабельность (через 72 ч). Кроме того, антибиотики, входящие в среду, не обладают широким спектром действия на современную микрофлору, а также не имеют противогрибкового действия. The disadvantages of the known environment are: stromal edema due to a drop in the energy potential of the endothelium, which determines viability and transplantability (after 72 hours). In addition, the antibiotics included in the medium do not have a wide spectrum of action on the modern microflora, and also do not have an antifungal effect.

Задачей изобретения является создание многокомпонентного состава для консервации роговицы, сохраняющего жизнеспособность эндотелия и улучшающего трансплантабельность. The objective of the invention is the creation of a multicomponent composition for the preservation of the cornea, preserving the viability of the endothelium and improving transplantability.

Техническим результатом является снижение послеоперационного отека трансплантата роговицы, улучшение адаптации донорского материала, снижение риска возникновения послеоперационных инфекций различной этиологии, сохранение высокой плотности эндотелиальных клеток в отдаленные сроки после кератопластики. The technical result is to reduce postoperative corneal transplant edema, improve the adaptation of donor material, reduce the risk of postoperative infections of various etiologies, maintain a high density of endothelial cells in the long term after keratoplasty.

Технический результат достигается тем, что известная среда, включающая среду 199 и декстран, согласно изобретению, дополнительно содержит среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, гентамицина сульфат, амфотерицин Б при следующем соотношении компонентов, мас. The technical result is achieved by the fact that the known medium, including medium 199 and dextran, according to the invention, additionally contains medium F-10, medium Dulbecco-Igla, chondroitin sulfate, gentamicin sulfate, amphotericin B in the following ratio of components, wt.

среда М-199 25
среда Ф-10 25
хондроитин-сульфат 2,7
декстран-40 2,0
гентамицин-сульфат 0,00014
амфотерцин Б 0,00015
среда Дюльбекко-Игла остальное
При этом среда М-199 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 25; Л-аргинина хлорид 70; аспарагиновая кислота 30; Л-цистеина хлорид - 0,0987; Л-цистина двунатриевая соль; Л глютаминовая кислота 66,82; Л-глютамин 100; глютатион 0,05; глицин 50; Л гистидина хлорид одноводный 21,88; Л гидрооксипролин 10; Л-изолейцин 20; Л-лейцин 60; Л лизина хлорид 70; Л-метионин 15; Л-фенилаланин 25; Л-пролин 40; Л-серин 25; Л-треонин 30; Л-триптофан 10; Л-тирозина двунатриевая соль - 49,72; Л-валин 25; Л-аскорбиновая кислота 0,05; биотин 0,01; кальциферол 0,1; Д-кальция пантотенат 0,01; холина хлорид 0,5; фолиевая кислота - 0,01; и-инозитол 0,05; менафтона натрия бисульфат трехводный 0,019; никотиновая кислота 0,025; никотинамид 0,025; пара-амино-бензойная кислота 0,05; пиридоксальхлорид 0,025; пиридоксинхлорид 0,025; рибофлавин 0,01; тиамина хлорид 0,01; Д-Л-α-токоферола фосфата двунатриевая соль
0,01; витамина А-ацетат 0,1147; кальция хлорид двухводный 185,5; железа нитрат девятиводный 0,01; калия хлорид 400; калия дегидроортофосфат 60; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 8000; натрия гидроортофосфат 47,5; аденина сульфат 10; 5-АМФ 0,2; АТФ двунатриевая соль 10; холестерол 0,2; 2-дезоксирибоза 0,5; Д-глюкоза 1000; гуанина хлорид - 0,3; гипоксантин 0,3; Д-рибоза 0,5; натрия ацетата 36,71; натриевая соль фенола красного 17; тимин 0,3; твин 80-5; урацил 0,3; ксантин 0,3.Wednesday M-199 25
Wednesday F-10 25
chondroitin sulfate 2.7
dextran-40 2.0
gentamicin sulfate 0.00014
amphotercin B 0.00015
Wednesday Dyulbekko-Igla rest
Moreover, the medium M-199 has the following composition, mg / l: L-alanine 25; L-arginine chloride 70; aspartic acid 30; L-cysteine chloride - 0.0987; L-cystine disodium salt; L glutamic acid 66.82; L-Glutamine 100; glutathione 0.05; glycine 50; L histidine chloride monohydrate 21.88; L hydroxyproline 10; L-isoleucine 20; L-leucine 60; L lysine chloride 70; L-methionine 15; L-phenylalanine 25; L-proline 40; L-serine 25; L-threonine 30; L-tryptophan 10; L-tyrosine disodium salt - 49.72; L-valine 25; L-ascorbic acid 0.05; biotin 0.01; calciferol 0.1; D-calcium pantothenate 0.01; choline chloride 0.5; folic acid - 0.01; i-inositol 0.05; menaphthone sodium bisulfate three-water 0.019; nicotinic acid 0.025; nicotinamide 0.025; para-amino benzoic acid 0.05; pyridoxal chloride 0.025; pyridoxine chloride 0.025; riboflavin 0.01; thiamine chloride 0.01; D-L-α-tocopherol phosphate disodium salt
0.01; Vitamin A-acetate 0.1147; calcium chloride two-water 185.5; iron nitrate, nine-water 0.01; potassium chloride 400; potassium dehydroorthophosphate 60; magnesium sulfate seven-water 200; sodium chloride 8000; sodium hydroorthophosphate 47.5; adenine sulfate 10; 5-AMP 0.2; ATP disodium salt 10; cholesterol 0.2; 2-deoxyribose 0.5; D-glucose 1000; guanine chloride - 0.3; hypoxanthine 0.3; D-ribose 0.5; sodium acetate 36.71; phenol red sodium salt 17; thymine 0.3; twin 80-5; uracil 0.3; xanthine 0.3.

Среда Ф-10 имеет следующим состав, мг/л:
Л -аланин 8,91; Л -аргинина хлорид 210,7; Л -аспарагин 1-водный - 15,01; Л -аспарагиновая кислота 13,31; Л -цистеина хлорид 31,53; Л -глютаминовая кислота 14,71; Л -глютамин 146,2; глицин 7,51; Л -гистидина хлорид одноводный 20,96; Л -изолейцин 2,62; Л -лейцин 13,12; Л -лизин 29,3; Л -метионин 4,48; Л -фенилаланин 4,96; Л -пролин 11,51; Л -серин 10,5; Л -треонин 3,57; Л -триптофан 0,61; Л -тирозина натриевая соль 2,25; Л -валин 3,51; биотин 0,024; Д кальция пантотенат 0,715; хлорид холина 0,698; фолиевая кислота 1,32; и-инозитол 0,541; никотинамид 0,611; пиридоксин-хлорид 0,206; рибофлавин 0,376; тиамина хлорид 1,012; витамин В12 1,36; кальция хлорид двухводный 44,1; сульфат меди пятиводный 0,0025; сульфат железа семиводный 0,8346; хлорид калия - 285; калия дегидрофосфат 83; магния сульфат семиводный 152,7; натрия хлорид 7400; натрия гидроортофосфат 156,2; цинка сульфат семиводный 0,0288; Д-глюкоза 1100; гипоксантин 4,08; липоевая кислота 0,206; натриевая соль фенола красного 12; натрия пируват 110; тимидин 0,727.Wednesday F-10 has the following composition, mg / l:
L-alanine 8.91; L-arginine chloride 210.7; L-asparagine 1-aqueous - 15.01; L-aspartic acid 13.31; L-cysteine chloride 31.53; L-glutamic acid 14.71; L-glutamine 146.2; glycine 7.51; L-histidine chloride, single-water 20.96; L-isoleucine 2.62; L-leucine 13.12; L-lysine 29.3; L-methionine 4.48; L-phenylalanine 4.96; L-proline 11.51; L-serine 10.5; L-threonine 3.57; L-tryptophan 0.61; L-tyrosine sodium 2.25; L-valine 3.51; Biotin 0.024; D calcium pantothenate 0.715; choline chloride 0.698; folic acid 1.32; i-inositol 0.541; nicotinamide 0.611; pyridoxine chloride 0.206; riboflavin 0.376; thiamine chloride 1.012; Vitamin B12 1.36; calcium chloride two-water 44.1; copper sulfate pentahydrate 0.0025; ferrous sulfate, seven-water 0.8346; potassium chloride - 285; potassium dehydrogen phosphate 83; magnesium sulfate seven-water 152.7; sodium chloride 7400; sodium hydroorthophosphate 156.2; zinc sulfate seven-water 0.0288; D-glucose 1100; hypoxanthine 4.08; lipoic acid 0.206; phenol red sodium salt 12; sodium pyruvate 110; thymidine 0.727.

Среда Дюльбекко-Игла имеет следующим состав, мг/л:
Л -аргинин 84; Л -цистина двунатриевая соль 56,78; Л -глютамин 584; глицин 30; Л -гистидина хлорид одноводный 42; Л -изолейцин 104,8; Л -лейцин 104,8; Л -лизина хлорид 146,2; Л -метионин 30; Л -фенилаланин - 66; Л -серин 42; Л -треонин 95,2; Л -триптофан 16; Л -тирозина двунатриевая соль 89,5; Л -валин 93,6; Д кальция пантотенат 4; холина хлорид 4; фолиевая кислота 4; и-инозитол 7; никотинамид 4; пиридоксаль-хлорид 4; рибофлавин 0,4; тиамина хлорид 4; кальция хлорид двухводный 264,9; нитрат железа девятиводный 0,1; калия хлорид 400; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 6400; натрия бикарбонат 3700; натрия дигидроортофосфат двухводный 141,3; Д-глюкоза 4500; натриевая соль фенола красного 15; натрия пируват 110.Wednesday Dyulbekko-Needle has the following composition, mg / l:
L-arginine 84; L-cystine disodium salt 56.78; L-Glutamine 584; glycine 30; L-histidine chloride, single-water 42; L-isoleucine 104.8; L-leucine 104.8; L-lysine chloride 146.2; L-methionine 30; L-phenylalanine - 66; L-serine 42; L-threonine 95.2; L-tryptophan 16; L-tyrosine disodium salt 89.5; L-valine 93.6; D calcium pantothenate 4; choline chloride 4; folic acid 4; i-inositol 7; nicotinamide 4; pyridoxal chloride 4; riboflavin 0.4; thiamine chloride 4; calcium chloride two-water 264.9; ferrous nitrate 0.1; potassium chloride 400; magnesium sulfate seven-water 200; sodium chloride 6400; sodium bicarbonate 3700; sodium dihydroorthophosphate two-water 141.3; D-glucose 4500; phenol red sodium salt 15; sodium pyruvate 110.

За счет патофизиологически обоснованного подбора множества компонентов, составляющих среду, удалось сохранить исходную жизнедеятельность клеток эндотелия донорской роговицы, что позволило повысить эффективность результатов сквозной кератопластики. Due to the pathophysiologically justified selection of the many components that make up the environment, it was possible to maintain the initial vital activity of endothelial cells of the donor cornea, which made it possible to increase the effectiveness of the results of end-to-end keratoplasty.

Среду для консервации роговицы получают следующим образом: соединяют вместе две среды: 25 мл среды 199 (фирма "Флоу" (Англия) N 12-234) и 25 мл среды Ф-10 (фирма "Флоу" (Англия" N 12-414) в стерильной мерной аналитической колбе на 100 мл, в асептических условиях (стерильный бокс и ламинарный поток воздуха на рабочем столе). Вносят последовательно 0,00014 г гентамицина сульфата и 0,000;15 г амфотерцина Б. Смесь разделяют пополам, по 25 мл. Далее растворяют в первой стерильной емкости 2 г декстрана 40, а во второй 2,7 г хондроитин сульфата путем медленного насыпания сухого вещества на поверхность жидкой смеси. После насыпания всего количества составляют растворы в темноте до полного набухания и растворения (около 60-80 мин). Затем оба сливают раствора сливают в стерильную мерную аналитическую колбу и добавляют среду Дюльбекко-Игла (фирма "Флоу" (Англия" N 12-332) до метки колбы 100 мл. Производят префильтрацию среды через фильтр "Миллипор" с размером пор 0,45 мк. Затем среду разливают во флаконы (склянки Дротта) по 10 мл путем фильтрации через фильтр "Миллипор" с диаметром пор 0,22 мк. Склянки укупориваются стерильными силиконовыми пробками под жесткую обкатку. The corneal preservation medium is prepared as follows: two media are connected together: 25 ml of medium 199 (Flow company (England) N 12-234) and 25 ml of F-10 medium (Flow company (England) N 12-414) in a sterile 100 ml volumetric analytical flask, under aseptic conditions (sterile box and laminar air flow on the work table). 0.00014 g of gentamicin sulfate and 0.000; 15 g of amphotercin B are added successively. The mixture is divided in half, 25 ml each, then dissolved in the first sterile container 2 g of dextran 40, and in the second 2.7 g of chondroitin sulfate by slowly pouring dry ve After pouring the entire amount, make up the solutions in the dark until they completely swell and dissolve (about 60-80 minutes). Then, the solution is poured, poured into a sterile volumetric analytical flask and Dulbecco-Eagle medium (Flow company (England) is added. "N 12-332) to the label of the flask 100 ml. The medium is prefiltered through a Millipore filter with a pore size of 0.45 microns. Then the medium is poured into bottles (Drott flasks) of 10 ml by filtration through a Millipore filter with a pore diameter 0.22 microns. The bottles are sealed with sterile silicone plugs for hard run-in.

Среду используют следующим образом. В условиях стерильного бокса выкраивают роговицу с ободком склеры, строго определенного диаметра. Изолированный корнео-склеральный комплекс помещают во флакон с консервантом с плотно закрывающейся крышкой. Консервация производят в объеме 10 мл консерванта, в условиях глубокой гипотермии (4-8^oС) в сроки до 5 сут.The medium is used as follows. In a sterile box, a cornea with a rim of sclera, a strictly defined diameter, is cut out. An isolated corneo-scleral complex is placed in a preservative bottle with a tight-fitting lid. Preservation is carried out in a volume of 10 ml of preservative, in conditions of deep hypothermia (4-8 ^o C) in a period of up to 5 days.

Консервированная в данной среде роговицы сохраняют жизнеспособность клеток на весь срок консервации, что позволяет сохранить высокие оптически и трансплантационные свойства материала для целей сквозной и послойной кератопластики. Corneas preserved in this medium preserve cell viability for the entire preservation period, which allows one to maintain high optical and transplantation properties of the material for through and layered keratoplasty.

Использование данной среды позволило создать Глазной банк МНТК "Микрохирургия глаза". The use of this medium allowed the creation of the Eye Bank MNTK "Eye Microsurgery."

Использование консервированной в данной среде роговицы позволило проводить планово сквозные и послойные кератопластики после предварительного тестирования донорского материала на ВИЧ и вирус гепатита Б. The use of corneas preserved in this medium allowed for routine end-to-end and layered keratoplasty after preliminary testing of donor material for HIV and hepatitis B.

Claims

A medium for preserving the cornea of the eye, including M-199 and dexatran-40 medium, characterized in that it additionally contains F-10 medium, Dyulbekko-Igla medium, chondroitin sulfate, gentamicin sulfate, amphotericin B in the following ratio of components, wt.

Wednesday M-199 25
Wednesday F-10 25
Chondroitin Sulfate 2.7
Dextran-40 2
Gentamicin Sulfate 0.00014
Amphotericin B 0.00015
Wednesday Dyulbekko-Igla Else