RU2713805C1 - Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР - Google Patents
Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР Download PDFInfo
- Publication number
- RU2713805C1 RU2713805C1 RU2019119963A RU2019119963A RU2713805C1 RU 2713805 C1 RU2713805 C1 RU 2713805C1 RU 2019119963 A RU2019119963 A RU 2019119963A RU 2019119963 A RU2019119963 A RU 2019119963A RU 2713805 C1 RU2713805 C1 RU 2713805C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polyoxidonium
- oxidation
- alkylation
- ethylene
- bromide
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N24/00—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects
- G01N24/08—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects by using nuclear magnetic resonance
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- High Energy & Nuclear Physics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Использование: для одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида. Сущность изобретения заключается в том, что, используя метод 13С спектроскопии ЯМР, соотносят сигналы спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния, выявляют их характеристические сигналы и измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей характеристических сигналов одинакового числа метиленовых групп N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния. Технический результат: обеспечение возможности идентифицировать фармацевтическую субстанцию «Полиоксидоний» и лекарственных форм на ее основе, подтвердив наличие основных структурных фрагментов и определив их молярные доли - степени окисления и алкилирования. 2 з.п. ф-лы, 6 ил.
Description
Изобретение относится к области контроля качества лекарственных средств и может быть использовано для идентификации фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» (подтверждения наличия основных структурных фрагментов и определения их молярных долей - степеней окисления и алкилирования) и лекарственных форм на ее основе.
Полиоксидоний применяется как иммуномодулятор и детоксикант, а также как иммуностимулирующий и пролонгирующий носитель фармакологически активных соединений [1-8]. Фармацевтическая субстанция «Полиоксидоний» представляет собой смесь действующего вещества (азоксимера бромида) и вспомогательных веществ (маннитола и повидона К17). Лекарственные формы полиоксидония могут содержать дополнительные вспомогательные вещества, например, таблетки полиоксидония - лактозы моногидрат, крахмал картофельный, стеариновую кислоту; суппозитории вагинальные и ректальные - масло какао.
Азоксимера бромид по своему строению представляет собой сополимер N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиний бромида (Фиг. 1). Доли (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния (степень алкилирования, q) и N-оксида 1,4-этиленпиперазина (степень окисления, z) в сополимерной цепи азоксимера бромида являются структурными параметрами, характеризующими его состав, и определяют свойства препарата в целом (эффективность воздействия, токсичность и безопасность применения) [6, 7]. Интервал величин q и z в полиоксидоний составляет 0,2-0,4 и 0,4-0,8 соответственно [8].
Известны способы определения степени окисления азоксимера бромида методом хромометрического титрования и степени алкилирования азоксимера бромида методом инфракрасной спектроскопии (полоса 1735 см-1) [1]. Недостатками указанных способов является то, что:
- они применимы к изолированному азоксимера бромиду, а не к смеси азоксимера бромида с маннитолом и повидоном К17;
- они применимы к оценке только одного из двух структурных параметров (степени окисления или степени алкилирования);
- отсутствует описание методик определения степеней окисления и алкилирования в рамках этих способов в литературе.
Наиболее близким аналогом к заявляемому изобретению является способ определения степеней окисления и алкилирования методом 1Н спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) по отношению интегральных интенсивностей сигналов спектра азоксимера бромида в области 2,5-4,5 м.д. [1].
Недостатком данного способа является его неприменимость к смеси азоксимера бромида с маннитолом и повидоном К17, так как в спектре 1Н фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» перекрываются сигналы основного и вспомогательных веществ. Повидон К17 не отделяется от азоксимера бромида ни экстракцией с использованием различных растворителей, ни ультрафильтрацией. Кроме того, в литературе отсутствует описание методик определения степеней окисления и алкилирования методом 1Н спектроскопии ЯМР.
Техническим результатом изобретения является одновременное определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в присутствии маннитола и повидона К17 в фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» и лекарственных формах на ее основе без использования стандартных образцов.
Достижение технического результата обеспечивается благодаря такому техническому решению, как использование ядра 13С, что приводит к сужению областей перекрывания сигналов действующего и вспомогательного веществ полиоксидония и упрощению процедуры расшифровки спектральных данных.
Сущность заявляемого способа заключается в соотнесении сигналов спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина (А) и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния (В), выявлении характеристических сигналов А и В и измерении значений их нормированных интегральных интенсивностей. Значения величин z (степень окисления) и q (степень алкилирования) равны величинам нормированных интегральных интенсивностей сигналов одинакового числа метиленовых групп А и В. В качестве эталона для калибровки шкалы химических сдвигов используется сигнал метиленовой группы маннитола (δ=63,18 м.д.).
В заявляемом изобретении способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13С спектроскопии ЯМР реализуется следующим образом.
Пробоподготовка
Зависит от типа лекарственной формы исследуемого образца и заключается в получении раствора азоксимера бромида в дейтерированной воде. При этом вспомогательные вещества фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» (маннитол, повидон К17) также переходят в раствор.
Параметры эксперимента
Регистрация спектров проводится на спектрометре ЯМР Agilent DD2 NMR System 600 с 5-мм мультиядерным датчиком, оснащенным градиентной катушкой или на аналогичном спектрометре ЯМР с рабочей частотой по протонам не менее 500 МГц.
Температура - 27°С, ширина спектра - 200 м.д., угол поворота намагниченности - 45°, время релаксации - 1 с, количество накоплений сигнала свободной индукции - 10000, число точек аналого-цифрового преобразования - 64к, экспоненциальное умножение - 3,0 Гц, автоматическая коррекция базовой линии спектра, ручная настройка фазы.
Учет результатов
1) Фиксируют сигналы структурных компонентов основного и вспомогательных веществ:
N-оксид 1,4-этиленпиперазин (Фиг. 2):
l3C(D2O), δ, м.д.: 67,3-64,6 (1С, N+-CH2), 64,6-63,3 (1С, N+-CH2), 59,1-58,3 (1С, N+-CH2), 52,2-51,6 (1С, N-CH2), 49,9-48,9 (1С, N-CH2), 47,2-46,0 (1С, N-CH2).
(N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромид (Фиг. 2):
13C(D2O), δ, м.д.: 168,8-167,7 (1С, СО), 62,9-61,9 (1С, СН2-СО), 59,8-59,1 (2С, N+-CH2), 54,4-52,9 (1С, N+-CH2), 52,9-52,2 (1С, N-CH2), 51,6-50,5 (2С, N-CH2).
Маннитол (Фиг. 2):
13C(D2O), δ, м.д.: 70,77 (2С, 2СН), 69,19 (2С, 2СН), 63,18 (2С, 2СН2).
Повидон К17 (Фиг. 2):
13C(D2O), δ, м.д.: 178,2-176,9 (1С, СО), 46,0-44,0 (1С, N-CH2), 43,4-41,2 (1С, N-CH), 36,2-32,0 (1С, СН2 ацикл.), 31,9-30,5 (1С, O=С-СН2), 18,0-16,7 (1С, СН2 цикл.).
2) Выявляют характеристические сигналы азоксимера бромида: синглетные сигналы в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. (две метиленовые группы мономерного звена А) и синглетный сигнал в области 59,8-59,0 м.д. (две метиленовые группы пиперазинового цикла мономерного звена В) и измеряют значения их нормированных интегральных интенсивностей.
3) Величину степени окисления (z) приравнивают к измеренной сумме значений нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д.
4) Величину степени алкилирования (q) приравнивают к измеренному значению нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д.
Существенными отличительными признаками заявляемого изобретения являются:
1) Одновременное определение степеней окисления и алкилирования в азоксимера бромиде без его предварительного выделения из смеси с маннитолом и повидоном К17.
2) Возможность идентификации полиоксидония без использования стандартных образцов.
3) Повышение точности количественных измерений z и q за счет ликвидации неопределенности измерения, связанной с перекрыванием сигналов сополимерных звеньев и вспомогательных веществ.
4) Возможность определения степеней окисления и алкилирования в азоксимера бромиде во всех существующих лекарственных формах полиоксидония.
Краткое описание чертежей и иных материалов (Приложения 1-6):
Фиг. 1. Структурная формула азоксимера бромида.
Фиг. 2. 13C спектр субстанции-раствора «Полиоксидоний».
Фиг. 3. Фрагмент 13C спектра субстанции-раствора «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.
Фиг. 4. Фрагмент 13C спектра лиофилизата «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.
Фиг. 5. Фрагмент 13C спектра таблеток «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.
Фиг. 6. Фрагмент 13C спектра суппозиториев «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.
Пример 1. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в субстанции-растворе «Полиоксидоний».
Пробоподготовка
К 500 мкл субстанции добавляют 150 мкл дейтерированной воды (D2O). Раствор используют для получения спектра 13C.
Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения
Учет результатов
Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 3).
z=0,39+0,39=0,78
Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 3).
q=0,22
Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].
Пример 2. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в лиофилизате для приготовления лекарственных форм и вакцин «Полиоксидоний».
Пробоподготовка
25 мг испытуемого образца (точная навеска не обязательна) растворяют в 0,5 мл D2O. Раствор используют для получения спектра 13C.
Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения
Учет результатов
Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 4).
z=0,40+0,40=0,80
Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 4).
q=0,20
Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].
Пример 3. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в таблетках «Полиоксидоний».
Пробоподготовка
48 мг испытуемого образца (4 таблетки по 12 мг) растирают до порошкообразного состояния, добавляют 1,2 мл D2O и интенсивно встряхивают в течение 10 мин. Полученную суспензию фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Фильтрат используют для получения спектра 13C.
Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения
Учет результатов
Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 5).
z=0,40+0,40=0,80
Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 5).
q=0,20
Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].
Пример 4. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в суппозиториях вагинальных и ректальных «Полиоксидоний».
Пробоподготовка
Один суппозиторий помещают в коническую колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл воды, расплавляют на кипящей водяной бане в течение 5 мин при умеренном встряхивании. Смесь охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют при 3000 об/мин и температуре 7°С в течение 20 мин. Водный экстракт фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем лиофилизируют. Лиофилизаты от четырех суппозиториев объединяют и растворяют в 0,5 мл D2O. Раствор используют для получения спектра 13C.
Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения
Учет результатов
Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 6).
z=0,40+0,40=0,80
Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 6).
q=0,20
Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].
Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации.
Список литературы
1. Патент РФ 2073031 (1997).
2. Некрасов А.В., Пучкова Н.Г., Иванова А.С.Иммунология, 2000, 5; 19-23.
3. Dambaeva S.V., Mazurov D.V., Golubeva N.M. et al. Centr Eur J Immunol, 2003, 28(2), 127-33.
4. Dyakonova V.A., Dambaeva S.V., Pinegin B.V. et al. Intern Immunopharmacol, 2004, 4, 1623-1631.
5. Караулов A.B., Самойлова H.M., Кокушков Д.Б. Иммунология, 2007, №2, 93-95.
6. Булгакова В.А. Терапевтический архив, 2014, 12, 92-97.
7. Полиоксидоний в клинической практике. Под ред. А.В. Караулова. М: ГЭОТАР-Медиа, 2008; 135 с.
8. Патент РФ 2112542 (1998).
Claims (3)
1. Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13С спектроскопии ядерного магнитного резонанса в различных лекарственных формах полиоксидония, характеризующийся тем, что соотносят сигналы спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния, выявляют их характеристические сигналы и измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей характеристических сигналов одинакового числа метиленовых групп N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отсутствует предварительное выделение азоксимера бромида из смеси с маннитолом и повидоном К17.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что его применяют без использования стандартных образцов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019119963A RU2713805C1 (ru) | 2019-06-26 | 2019-06-26 | Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019119963A RU2713805C1 (ru) | 2019-06-26 | 2019-06-26 | Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2713805C1 true RU2713805C1 (ru) | 2020-02-07 |
Family
ID=69625519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019119963A RU2713805C1 (ru) | 2019-06-26 | 2019-06-26 | Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2713805C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2073031C1 (ru) * | 1990-08-06 | 1997-02-10 | Некрасов Аркадий Васильевич | Производные поли-1,4-этиленпиперазина, обладающие иммуномодулирующей, противовирусной и антибактериальной активностями |
| RU2155186C1 (ru) * | 1999-04-27 | 2000-08-27 | Иванова Елена Борисовна | Способ получения бромистого дидецилдиметиламмония |
| WO2006008212A1 (en) * | 2004-07-22 | 2006-01-26 | Basell Polyolefine Gmbh | Process for producing fractionable 1-butene polymers |
-
2019
- 2019-06-26 RU RU2019119963A patent/RU2713805C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2073031C1 (ru) * | 1990-08-06 | 1997-02-10 | Некрасов Аркадий Васильевич | Производные поли-1,4-этиленпиперазина, обладающие иммуномодулирующей, противовирусной и антибактериальной активностями |
| RU2155186C1 (ru) * | 1999-04-27 | 2000-08-27 | Иванова Елена Борисовна | Способ получения бромистого дидецилдиметиламмония |
| WO2006008212A1 (en) * | 2004-07-22 | 2006-01-26 | Basell Polyolefine Gmbh | Process for producing fractionable 1-butene polymers |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Holzgrabe et al. | Analytical challenges in drug counterfeiting and falsification—The NMR approach | |
| Cagide et al. | Discovery of two new classes of potent monoamine oxidase-B inhibitors by tricky chemistry | |
| KR20130016225A (ko) | 디아민 유도체의 결정 및 그 제조 방법 | |
| Salem et al. | Quantitative determinations of levofloxacin and rifampicin in pharmaceutical and urine samples using nuclear magnetic resonance spectroscopy | |
| Mamedov et al. | Synthesis of 3-Hydroxy-4-arylquinolin-2-ones Including Viridicatol via a Darzens Condensation/Friedel–Crafts Alkylation Strategy | |
| RU2713805C1 (ru) | Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13C спектроскопии ЯМР | |
| Hansen et al. | Deuterium isotope effects on 13C and 15N nuclear shielding in intramolecularly hydrogen-bonded compounds. Investigation of enamine derivatives | |
| EA021411B1 (ru) | Безводная форма производного пиридина | |
| Bhupatiraju et al. | A NOVEL RIVAROXABAN DEGRADATION IMPURITY DETECTION BY RP-HPLC, EXTRACTION BY PREPARATORY CHROMATOGRAPHY, AND CHARACTERIZATION BY LCMS, NMR, AND FT-IR: ANALYSIS OF NOVEL IMPURITY IN BATCH SAMPLES AND TABLETS OF RIVAROXABAN. | |
| Kumar et al. | Silver-catalyzed synthesis of pyrrolopiperazine fused with oxazine/imidazole via a domino approach: evaluation of anti-cancer activity | |
| Malz et al. | Purity assessment problem in quantitative NMR—impurity resonance overlaps with monitor signal multiplets from stereoisomers | |
| Li et al. | A screening method based on 1D CSSF-TOCSY for the identification and quantification of 11 illegal adulterants in herbal medicines | |
| US10353033B2 (en) | Method for quantitative analysis | |
| Gerth et al. | Screening and differential diagnosis of renal light chain-associated diseases | |
| Ziȩba et al. | 1H, 13C and 15N NMR spectra of ciprofloxacin | |
| Siudem et al. | Structural studies of two capsaicinoids: Dihydrocapsaicin and nonivamide. 13 C and 15 N MAS NMR supported by genetic algorithm and GIAO DFT calculations | |
| Cavalcante et al. | Quantitative 1H NMR spectroscopy (qNMR) in the early process development of a new quorum sensing inhibitor | |
| Osypchuk et al. | Validation of an HPLC-MS method for the determinatin of vardenafil in rat urine | |
| Zhu et al. | A novel method for artificial antigen synthesis and preparation of a polyclonal antibody for the sensitive determination of leucomalachite green in fish samples by enzyme-linked immunoassay | |
| Liu et al. | Development and validation of a reverse-phase HPLC with fluorescence detector method for simultaneous determination of CZ48 and its active metabolite camptothecin in mouse plasma | |
| CA3212256A1 (en) | Novel salts of heterocyclic compound as protein kinase inhibitor and uses thereof | |
| Ngurah | Synthetic C-methoxyphenyl calix [4] resorcinarene and its antioxidant activity | |
| Jaroszewski et al. | Determination of diethylcarbamazine, an antifilarial drug, in human urine by 1H-NMR spectroscopy | |
| RU2802028C2 (ru) | Способ идентификации и количественного определения эпимеров будесонида в его лекарственных формах | |
| CN114689767A (zh) | 一种阿立哌唑原料及其制剂有关物质的检测方法 |