RU2695706C1

RU2695706C1 - Method of treating trophic ulcers in diabetic foot syndrome

Info

Publication number: RU2695706C1
Application number: RU2018108248A
Authority: RU
Inventors: Людмила Михайловна Иванова; Александр Юрьевич Михайлов; Вячеслав Викторович Проничев; Александр Александрович Соловьев; Татьяна Семеновна Баранова
Priority date: 2018-03-06
Filing date: 2018-03-06
Publication date: 2019-07-25

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to surgery and endocrinology, and concerns treating trophic ulcers of lower extremities accompanying diabetic foot syndrome. That is ensured by applying a thrombocyte concentrate on wound for 5–7 procedures every 3 days. To obtain a platelet concentrate, blood is sampled from the peripheral vein in amount of 15–20 ml, followed by centrifugation in three stages. At the first stage centrifugation is performed during 5 minutes per 1,000 rpm. At the second stage, the upper thrombocyte-poor plasma layer is removed and Ringer's solution is added to the remaining plasma at ratio of 2:1 and centrifugation is performed for 3 minutes at 2,700 rpm. At the third stage, the upper plasma layer is removed again and insulin is added to the thrombocyte-rich plasma up to 2–3 ml, re-centrifuged for 5 minutes at 1,000 rpm.EFFECT: method provides effective epithelialization of wounds due to high level of thrombocytes, growth factors and insulin in thrombocyte concentrate.1 cl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и может быть применено для лечения трофических язв нижних конечностей при синдроме диабетической стопы.The invention relates to medicine, namely to surgery and can be used to treat trophic ulcers of the lower extremities in diabetic foot syndrome.

Сахарный диабет во всем мире признан одним из наиболее значимых неинфекционных заболеваний. По данным экспертов ВОЗ, число больных в 2010 году составило 239,4 млн человек, а к 2025 году увеличится до 380 млн человек. Среди больных, более чем у 70% развивается СДС, а в 40-85% случаев он сопровождается язвами стоп различной тяжести, и является их наиболее частым проявлением. Продолжительность лечения таких пациентов составляет от 4 недель до 2-3 месяцев и часто растягивается на годы, кроме того, у данной категории в 60-80% возникает необходимость в хирургических вмешательствах. После ампутации конечности через два года умирает от 30% до 50% пациентов, а продолжительность жизни пациентов снижается на 12,5%. (Бахарев И.В. 2003; Галстян Г.Р., 1998; Покровский А.В и соавт., 1998.).Diabetes mellitus is recognized worldwide as one of the most significant noncommunicable diseases. According to WHO experts, the number of patients in 2010 amounted to 239.4 million people, and by 2025 it will increase to 380 million people. Among patients, more than 70% develop SDS, and in 40-85% of cases it is accompanied by foot ulcers of varying severity, and is their most common manifestation. The duration of treatment of such patients is from 4 weeks to 2-3 months and often stretches over years, in addition, in this category of 60-80% there is a need for surgical interventions. After limb amputation, two years later, 30% to 50% of patients die, and the life expectancy of patients decreases by 12.5%. (Bakharev I.V. 2003; Galstyan G.R., 1998; Pokrovsky A.V. et al., 1998.).

В настоящее время в лечении больных с трофическими язвами применяют препараты, содержащие клеточные факторы роста, цитокины, биотехнологические материалы, Однако, несмотря на большое количество предложенных вариантов, результаты местного лечения трофических язв при синдроме диабетической стопы остаются неудовлетворительными. Поэтому, проблема лечения пациентов с синдромом диабетической стопы нуждается в исследованиях, поисках эффективного решения.Currently, in the treatment of patients with trophic ulcers, drugs containing cellular growth factors, cytokines, biotechnological materials are used.However, despite the large number of proposed options, the results of local treatment of trophic ulcers in diabetic foot syndrome remain unsatisfactory. Therefore, the problem of treating patients with diabetic foot syndrome needs research, the search for an effective solution.

Известен способ лечения, предложенный Липовой Е.В., Покровским К.А., Грязевой Н.В. «Способ лечения эрозивно-язвенных поражений кожи», заключающийся в том, что из периферической вены забирают кровь, смешивают ее с антикоагулянтом, центрифугируют в течении 5 минут со скоростью вращения центрифуги 800 оборотов в минуту. Извлеченный верхний слой богатой тромбоцитами аутологичной плазмы в отдельной пробирке активирует глюконатом кальция из расчета 50 мкл на 1 мл плазмы. Готовую к применению плазму используют в течении 5-10 минут, при этом не менее трети полученной в жидкой форме плазмы набирают в инсулиновые шприцы объемом по 1 мл и обкалывают язвенно-эрозивный дефект по периферии внутридермально из расчета по 0,1-0,5 мл на каждый вкол. Оставшуюся плазму помещают в стеклянную чашку Петри и ставят в термостат на 20 минут при температуре 37 градусов до образования прозрачной тонкой пленки бледно-желтого цвета, которую накладывают на язвенный дефект в виде аппликации, закрывают сухой салфеткой и бинтуют на 24 часа. Процедуру проводят 1 раз в неделю до полного заживления.A known treatment method proposed by Lipova E.V., Pokrovsky K.A., Gryazevoy N.V. "A method of treating erosive and ulcerative skin lesions", which consists in collecting blood from a peripheral vein, mixing it with an anticoagulant, centrifuging for 5 minutes at a centrifuge speed of 800 rpm. The extracted top layer of platelet-rich autologous plasma in a separate tube activates calcium gluconate at a rate of 50 μl per 1 ml of plasma. Ready-to-use plasma is used for 5-10 minutes, while at least a third of the plasma obtained in liquid form is collected in 1 ml insulin syringes and an ulcer-erosive defect is punctured around the periphery intradermally at the rate of 0.1-0.5 ml for each injection. The remaining plasma is placed in a glass Petri dish and placed in a thermostat for 20 minutes at a temperature of 37 degrees until a transparent thin film of pale yellow is formed, which is applied to the ulcer defect in the form of an application, covered with a dry cloth and bandaged for 24 hours. The procedure is carried out 1 time per week until complete healing.

Недостатком известного способа является его недостаточная эффективность из-за короткого времени центрифугирования, которое не всегда может приводить к разрушению тромбоцитов и высвобождению факторов роста. Кроме того, инъекции являются не самым лучшим способом местного введения тромбоцитарного концентрата (ТК), так как появляется высокая вероятность дополнительного инфицирования. А проведение процедуры 1 раз в неделю не обеспечивает необходимой концентрации факторов роста в месте наложения.The disadvantage of this method is its lack of effectiveness due to the short time of centrifugation, which can not always lead to the destruction of platelets and the release of growth factors. In addition, injections are not the best way for local administration of platelet concentrate (TK), since there is a high probability of additional infection. And the procedure 1 time per week does not provide the necessary concentration of growth factors at the site of application.

Известен способ лечения больных эрозивно-язвенными поражениями кожи: Autologus Platelet Rich Plasma in Chronic Venous Ulcers: Study of 17 Cases // J. Cutan Aesthet Surg. 2013; 6 (2), взятый в качестве прототипа, в котором повышение эффективности лечении достигается за счет применения факторов роста в комплексе сопроводительной терапии. Способ заключается в том, что из периферической вены пациента производят забор 20 мл крови в пробирки, содержащие лимонную кислоту, цитрат натрия и декстрозу в соотношении 9:1 (кровь: антикоагулянт). Центрифугирование производят со скоростью 5000 оборотов в минуту, чтобы отделить эритроциты от плазмы с тромбоцитами. Плазму с тромбоцитами центрифугируют еще раз со скоростью 2000 оборотов в минуту 5-10 минут. Затем берут нижний слой полученной плазмы (примерно 1,5 мл) и добавляют 10% хлорид кальция в соотношении 0,3 мл на 1 мл плазмы. На предварительно санированную рану накладывают покрытие, пропитанное аутологичной богатой тромбоцитами плазмой. Перевязку делают 1 раз в неделю до полной эпитализации.A known method of treating patients with erosive and ulcerative skin lesions: Autologus Platelet Rich Plasma in Chronic Venous Ulcers: Study of 17 Cases // J. Cutan Aesthet Surg. 2013; 6 (2), taken as a prototype, in which increasing the effectiveness of treatment is achieved through the use of growth factors in the complex of accompanying therapy. The method consists in collecting 20 ml of blood from a patient’s peripheral vein into tubes containing citric acid, sodium citrate and dextrose in a ratio of 9: 1 (blood: anticoagulant). Centrifugation is carried out at a speed of 5000 rpm to separate red blood cells from plasma with platelets. The plasma with platelets is centrifuged again at a speed of 2000 rpm for 5-10 minutes. Then take the lower layer of the obtained plasma (approximately 1.5 ml) and add 10% calcium chloride in the ratio of 0.3 ml per 1 ml of plasma. A pre-sanitized wound is coated with an autologous platelet-rich plasma. Dressing is done 1 time per week until complete epithelization.

Недостатками известного способа является его недостаточная эффективность из-за добавления большого количества «посторонних» компонентов и недостаточного количества ростовых факторов в наносимой на рану плазмы (так как высокая скорость и длительность центрифугирования, приводят не к высвобождению ростовых факторов, а их разрушению за счет химического и механического воздействия).The disadvantages of this method is its lack of effectiveness due to the addition of a large number of "extraneous" components and an insufficient number of growth factors in the plasma applied to the wound (since the high speed and duration of centrifugation do not lead to the release of growth factors, but to their destruction due to chemical and mechanical impact).

Задачей заявленного изобретения является повышение эффективности способа.The objective of the claimed invention is to increase the efficiency of the method.

Поставленная задача решается тем, что согласно способу лечения трофических язв при синдроме диабетической стопы, включающему забор у пациента крови из периферической вены в объеме 15-20 мл, ее центрифугирование и последующее нанесение полученного аутоплазменного тромбоцитарного концентрата на предварительно санированную рану и укрытие ее асептической повязкой, центрифугирование производят в три этапа общая длительность которых не превышает 30 минут, причем на первом этапе центрифугирование производят в течение 5 минут на 1000 оборотов в минуту, на втором этапе верхний бедный тромбоцитами слой плазмы удаляют и в оставшуюся плазму добавляют раствор Рингера в соотношении 2:1 и производят центрифугирование в течение 3 минут на 2700 оборотах в минуту, на третьем этапе вновь удаляют верхний слой плазмы и в богатую тромбоцитами плазму объемом до 2-3 мл. добавляют инсулин короткого действия «Биосулин Р» из расчета 1,0-1,5 единицы на 1 мл. плазмы и производят центрифугирование в течение 5 минут на 1000 оборотов в минуту, полученный аутоплазменный тромбоцитарный концентрат наносят на рану не позднее 10 минут после его получения, процедуру повторяют 5-7 раз с интервалов в 3 дня.The problem is solved in that according to the method of treating trophic ulcers in diabetic foot syndrome, comprising collecting a patient’s blood from a peripheral vein in a volume of 15-20 ml, centrifuging it, and then applying the resulting autoplasmic platelet concentrate to a previously sanitized wound and covering it with an aseptic dressing, centrifugation is carried out in three stages, the total duration of which does not exceed 30 minutes, and in the first stage, centrifugation is carried out for 5 minutes per 1000 rpm inut, in the second stage, the upper platelet-poor plasma layer is removed and Ringer's solution is added to the remaining plasma in a 2: 1 ratio and centrifuged for 3 minutes at 2700 rpm; in the third stage, the upper plasma layer and platelet-rich plasma with volume up to 2-3 ml. add short-acting insulin "Biosulin R" at the rate of 1.0-1.5 units per 1 ml. plasma and centrifuged for 5 minutes at 1000 rpm, the resulting autoplasmic platelet concentrate is applied to the wound no later than 10 minutes after receiving it, the procedure is repeated 5-7 times at intervals of 3 days.

Заявленный способ обладает высокой эффективностью. Его применение позволяет значительно уменьшить размеры язвенных дефектов, а в большинстве случаев - достичь полной эпитализации. Биологически активный препарат, получаемый при реализации заявленного способа, включает ростовые факторы (содержащиеся в тромбоцитах: PDGF-AB (тромбоцитарный фактор роста АВ), TGFβ-1 (трансформирующий фактор роста β-1) и VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), способные активировать процессы эпитализации и ангиогенеза, и инсулиноподобные факторы (ИФР 1 и ИФР 2, обладающие сродством на 64%), содержащиеся в инсулин), имеющие способность к контролю пролиферации, дифференцировки и направленного движения клеток.The claimed method has high efficiency. Its use can significantly reduce the size of ulcerative defects, and in most cases - achieve complete epithelialization. The biologically active drug obtained by the implementation of the claimed method includes growth factors (contained in platelets: PDGF-AB (platelet growth factor AB), TGFβ-1 (transforming growth factor β-1) and VEGF (vascular endothelial growth factor), capable of activating processes of epithelization and angiogenesis, and insulin-like factors (IGF 1 and IGF 2, which have an affinity of 64%) contained in insulin), which have the ability to control cell proliferation, differentiation and directional movement.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь у больных забирается из кубитальной вены в три стерильные пробирки, с добавлением антикоагулянта, общим объемом 15,0-20,0 мл. Далее выполняется трехкратное центрифугирование крови на центрифуге ЦЛМН Р10-01 в срок, максимально приближенный ко времени забора крови. Время, затрачиваемое на приготовление тромбоцитарного концентрата не должно превышать 30 минут. На первом этапе центрифугирование выполняется в «мягком» режиме (1 оборот в минуту в течение 5-ти минут), с целью разделения крови на три слоя: эритроциты, бесклеточная плазма (бедная тромбоцитами плазма-верхний слой) и средний слой, в котором концентрируются тромбоциты, так называемый «buffy-coat» (ВС-слой). На втором этапе для получения промежуточного продукта в пробирку переносят всю бесклеточную плазму, ВС-слой и раствор Рингера в соотношении 2:1 (на 1 мл плазмы, 0,5 мл раствора) и производят центрифугирование в «жестком» режиме (2700 оборотов в минуту, в течение 3-х минут). Раствор Рингера вносят для облегчения физико-химического фракционирования плазмы крови при дальнейшем центрифугировании. На третьем этапе для получения окончательного комплексного продукта в пробирку переносят небольшое количество (2-3 мл.) бесклеточной плазмы и ВС-слой, добавляют инсулин короткого действия «Биосулин Р» из расчета 1,0-1,5 единицы на 1 мл. плазмы и вновь центрифугируют в «мягком» режиме. Проведение последовательного трехкратногоThe method is as follows. Blood from patients is drawn from the cubital vein into three sterile tubes, with the addition of an anticoagulant, with a total volume of 15.0-20.0 ml. Next, triple centrifugation of blood is performed on a centrifuge TsLMN P10-01 at a time as close as possible to the time of blood sampling. The time taken to prepare platelet concentrate should not exceed 30 minutes. At the first stage, centrifugation is performed in the “soft” mode (1 revolution per minute for 5 minutes), in order to separate the blood into three layers: red blood cells, acellular plasma (platelet-poor plasma-upper layer) and the middle layer, in which they are concentrated platelets, the so-called "buffy-coat" (BC-layer). At the second stage, in order to obtain an intermediate product, the entire acellular plasma, the BC layer and Ringer's solution are transferred to the tube in a ratio of 2: 1 (per 1 ml of plasma, 0.5 ml of solution) and centrifuged in a “hard” mode (2700 rpm , within 3 minutes). Ringer's solution is introduced to facilitate physico-chemical fractionation of blood plasma during further centrifugation. At the third stage, to obtain the final complex product, a small amount (2-3 ml.) Of acellular plasma and the BC layer are transferred to the test tube, short-acting insulin “Biosulin R” is added at the rate of 1.0-1.5 units per 1 ml. plasma and again centrifuged in the "soft" mode. Consecutive triple

центрифугированная, с поэтапным отделением промежуточного продукта позволяет получить препарат с уровнем тромбоцитов в 7,5±0,5 раз больше, чем в плазме крови.centrifuged, with a gradual separation of the intermediate product allows you to get a drug with a platelet level of 7.5 ± 0.5 times more than in blood plasma.

Полученный объем ТК наносят на язвенную поверхность в условиях перевязочной с соблюдением принципов асептики и антисептики. Перед нанесением окончательного продукта, проводят предварительную обработку изотоническим раствором натрия хлорида и удаление некротизированных тканей. Перевязки производят через 3 суток (ввиду продолжительности эффектов от факторов роста в течение нескольких суток). Общая продолжительность лечения до 5-7 перевязок.The obtained volume of TC is applied to the ulcer surface under dressing conditions in compliance with the principles of asepsis and antiseptics. Before applying the final product, pretreatment with an isotonic sodium chloride solution and removal of necrotic tissue is performed. Dressings are performed after 3 days (due to the duration of the effects of growth factors for several days). The total duration of treatment is up to 5-7 dressings.

Пример 1. Больная М., 1954 года рождения, история болезни №-402321.Example 1. Patient M., born in 1954, medical history No. 402321.

Диагноз: Сахарный диабет II типа. Синдром диабетической стопы. Трофическая язва левой стопы.Diagnosis: Type II diabetes mellitus. Diabetic foot syndrome. Trophic ulcer of the left foot.

Количество тромбоцитов в полном анализе крови: 195×10⁹, окончательный продукт содержит 153 8×10⁹ тромбоцитов.Platelet count in a complete blood count: 195 × 10 ⁹ , the final product contains 153 8 × 10 ⁹ platelets.

Получала лечение по предложенному способу, всего выполнено 6 перевязок, уменьшение размеров язвы до 95%, активная краевая эпителизация.I received treatment according to the proposed method, a total of 6 dressings were performed, the size of the ulcer was reduced to 95%, active marginal epithelization.

Пример 2. Больной Д., 1955 года рождения, история болезни №-402368.Example 2. Patient D., born in 1955, medical history No. 402368.

Диагноз: Сахарный диабет II типа. Синдром диабетической стопы. Трофическая язва правой стопы.Diagnosis: Type II diabetes mellitus. Diabetic foot syndrome. Trophic ulcer of the right foot.

Количество тромбоцитов в полном анализе крови 214×10⁹, окончательный продукт содержит 1638×10⁹ тромбоцитов. При лечении, выполнено 5 перевязок. В результате получена полная эпителизация язвы.The platelet count in the complete blood count is 214 × 10 ⁹ , the final product contains 1638 × 10 ⁹ platelets. During treatment, 5 dressings were performed. The result is a complete epithelialization of the ulcer.

Пример 3. Больной М., 1959 года рождения, история болезни №402933.Example 3. Patient M., born in 1959, medical history No. 402933.

Диагноз: Сахарный диабет II типа. Синдром диабетической стопы. Трофическая язва левой стопы. Получал лечение по предложенному способу, всего выполнено 6 перевязок, уменьшение размеров язв до 15%.Diagnosis: Type II diabetes mellitus. Diabetic foot syndrome. Trophic ulcer of the left foot. He received treatment according to the proposed method, a total of 6 dressings were performed, the size of ulcers was reduced to 15%.

Заявленный способ высокоэффективен, легок в исполнении и может применяться в хирургических отделениях городских и сельских больниц.The claimed method is highly effective, easy to implement and can be used in surgical departments of urban and rural hospitals.

Claims

A method for treating trophic ulcers in diabetic foot syndrome, comprising collecting a patient’s blood from a peripheral vein in a volume of 15-20 ml, centrifuging it and then applying the obtained autoplasmic platelet concentrate to a previously sanitized wound and covering it with an aseptic dressing, characterized in that the centrifugation is performed in three stages, the total duration of which does not exceed 30 minutes, and in the first stage centrifugation is carried out for 5 minutes at 1000 rpm, in the second stage the upper layer is the snakes are removed, Ringer's solution is added in the ratio 2: 1 to the remaining plasma and centrifuged for 3 minutes at 2700 rpm, at the third stage the upper plasma layer is again removed, short-acting insulin is added to the plasma rich in platelets up to 2-3 ml at the rate of 1.0-1.5 units per 1 ml of plasma and centrifuged for 5 minutes at 1000 rpm, the autoplasmic platelet concentrate obtained is applied to the wound no later than 10 minutes after receiving it, the procedure is repeated 5-7 times at intervals in 3 days.