RU2691938C1 - Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека - Google Patents
Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2691938C1 RU2691938C1 RU2018121942A RU2018121942A RU2691938C1 RU 2691938 C1 RU2691938 C1 RU 2691938C1 RU 2018121942 A RU2018121942 A RU 2018121942A RU 2018121942 A RU2018121942 A RU 2018121942A RU 2691938 C1 RU2691938 C1 RU 2691938C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- alpha
- tnf
- nanoparticles
- tumor
- mannitol
- Prior art date
Links
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 73
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 title claims abstract description 21
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title abstract description 22
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims abstract description 112
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims abstract description 94
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 65
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 65
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 62
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 62
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 36
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 11
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical group [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 21
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 15
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 9
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 59
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 33
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 5
- -1 mannitol polysaccharide Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 62
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 32
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 21
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 20
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 10
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 9
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical group [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 6
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 6
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 5
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 3
- 230000000065 osmolyte Effects 0.000 description 3
- 229920002721 polycyanoacrylate Polymers 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 206010061523 Lip and/or oral cavity cancer Diseases 0.000 description 2
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 2
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 229950000038 interferon alfa Drugs 0.000 description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010016529 Bacillus amyloliquefaciens ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101710183938 Barstar Proteins 0.000 description 1
- 206010004173 Basophilia Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000037823 Cerebral ischemia/reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 206010009192 Circulatory collapse Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010020147 Protein Corona Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 231100000110 immunotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002625 immunotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000010954 inorganic particle Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 239000005543 nano-size silicon particle Substances 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003642 osteotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108700026457 poly(ethylene glycol)-b-(poly(ethylenediamine glutamate)-g-poly(lysine)) Proteins 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229910021426 porous silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000030788 protein refolding Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002900 solid radioactive waste Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000012906 subvisible particle Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 229910001428 transition metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
- B82B1/00—Nanostructures formed by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно к противоопухолевому средству на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, содержащему сферические наночастицы, имеющие размер порядка 50-70 нм, имеющие ядро, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae - индуктор интерфероногенеза, и покрытое слоем конъюгата спермидина с полиглюкином, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином, и рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, ковалентно связанный с активированным периодатом натрия полиглюкином, причем на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина, отличающемуся тем, что средство содержит полисахарид маннитол, молекулы которого расположены в лиофилизате между биодеградируемыми наночастицами, несущими ФНО-альфа с цитолитической активностью не менее 106 ME, при следующем количественном содержании компонентов в 1 дозе сухого противоопухолевого средства: маннитол 30,0-50,0 мг, лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие ФНО-альфа с цитолитической активностьюне менее 106 МЕ, 37,5-61,5 мг. Изобретение обеспечивает создание биодеградируемой противоопухолевой наноконструкции, содержащей ФНО-альфа человека, которая сохраняет свою структуру без агломерации наночастиц и сохраняет специфическую цитолитическую активность фактора некроза опухоли альфа в ее составе при введении в организм. 8 ил., 9 пр.
Description
Изобретение относится к противоопухолевым средствам и может быть использовано в области медицины и фармацевтики.
Поиск средств и способов лечения злокачественных новообразований продолжает оставаться актуальным направлением современной фармацевтики. Особым направлением в области совершенствования противоопухолевой терапии являются исследования, касающиеся применения иммунотерапевтических средств, в частности, цитокинотерапия.
Фактор некроза опухолей альфа (ФНО-альфа, TNF-α) в течение многих лет привлекает внимание исследователей, фармакологов и клиницистов как потенциальное противоопухолевое средство, что связано с его комплексным воздействием на опухоль: избирательной способностью тормозить рост и вызывать лизис злокачественных клеток, геморрагический некроз опухолей, активировать иммунный противоопухолевый ответ, оказывать повреждающее действие на сосуды [1].
Однако основной проблемой и камнем преткновения многочисленных попыток создания лекарственных препаратов ФНО-альфа для системного применения является его нестабильность в кровеносном русле, недостаточная селективность накопления в опухолевых клетках и как следствие, высокий уровень эффективных доз и широкий спектр побочных эффектов. Результаты доклинических и клинических исследований ФНО-альфа при системном введении показали наличие серьезных побочных эффектов, которые служат препятствием для широкого применения препаратов ФНО в онкологии, таких как: гипотензия, почечная недостаточность, повышение свертываемости крови, нарушения сосудистой системы внутренних органов, индукция коллапса сосудов, лихорадка, тахикардия, головная боль и т.д. [2, 3].
Среди разнообразных методических приемов, которые используются в настоящее время для решения данной проблемы, можно выделить разработку средств адресной доставки ФНО-альфа к клеткам-мишеням [4-6]. В литературных источниках есть сведения о создании транспортных форм ФНО-альфа на основе неорганических наночастиц, синтетических полимеров, липосом [7-12]. Использование этих систем позволяет повысить противоопухолевую активность, накопление белков в ткани опухоли, обеспечить их стабилизацию.
Так, Vander Veen А.Н. с соавт. [13] показали, что инкапсулирование ФНО-альфа в стерически стабилизированные липосомы приводило к увеличению накопления белка в опухоли и уменьшению общей токсичности. В ходе исследования ПЭГилированных липосом, содержащих ФНО-альфа совместно с липосомальным доксорубицином, на крысах с подкожной саркомой BN175, установлено, что введение липосомального ФНО-ПЭГ в дозе 15 мкг/кг существенно увеличивало противоопухолевую активность доксорубицина. Ранее было показано, что совместное использование высоких доз липосомального ФНО-альфа в комбинации с мелфаланом или доксорубицином оказывало синергичный ингибирующий эффект на рост экспериментальной опухоли [14-16].
Группой исследователей был создан удачный вариант наночастиц, содержащих ФНО-альфа [17, 18]. Проведенное ими инкапсулирование рекомбинантного ФНО-альфа человека в полицианоакрилатную наночастицу приводило к удлинению времени полужизни ФНО-альфа в 7 раз. Содержащие ФНО-альфа наночастицы накапливались преимущественно в опухолевых тканях и ингибировали рост опухоли на 78%, в то время как свободный ФНО-альфа в той же дозе тормозил опухолевый процесс лишь на 15%. Существенным достижением являлось то, что полученные частицы при хранении при температуре +2°÷+8°С были стабильны в течение 4 недель [19, 20].
Китайская компания BEIJING SHENGYIYAO SCIENCE & T запатентовала противоопухолевое средство, содержащее биодеградируемый носитель [21]. Липосомальные микросферы, содержащие ФНО-альфа или интерферон или другие цитокины, выполнены из полисахарида (натриевая соль гиалуроновой кислоты или желатина), который извлекается из водорослей, обеспечивает биоразлагаемость и биосовместимость с инкапсулированными веществами. Липосомы рекомендованы для лечения гепатокарциномы и рака шейки матки, а также для терапии на поздней стадии рецидивирующего рака печени, почек, рака мочевого пузыря и прямой кишки.
Было показано, что биосовместимые пористые кремниевые наночастицы могут служить безвредным для организма агентом для тераностики многих онкологических заболеваний. Они не только легко проникают в опухолевую клетку, но и при насыщении противоопухолевым средством способны дозированно высвобождать его в опухоли в процессе своего распада [22].
Messerschmidt S.K. с соавт.[8] были созданы кремниевые частицы, содержащие ФНО-альфа, с функциональными аминогруппами, названные наноцитами (TNF nanocytes®). Такие частицы способны активировать рецепторы TNFR1 и TNFR2, результатом чего является усиление процессов апоптоза. В ходе дальнейшего усовершенствования были получены модифицированные липид-покрытые частицы, состоящие из одной цепи белка ФНО (scTNF) с функциональными аминогруппами, окруженными липидным слоем с полиэтиленгликольными концами для стерической стабилизации и одноцепочечным фрагментом Fv (scFv) для целевой доставки [8]. Липидное покрытие уменьшало неспецифическое связывание частиц и медиируемую ФНО-альфа цитотоксичность в отношении FAP (fibroblast activation protein) - негативных клеток и увеличивало цитотоксичность в отношении FAP-позитивных клеток.
В экспериментах на животных была продемонстрирована возможность использования наночастиц коллоидного золота, покрытых полиэтиленгликолем, в качестве систем доставки ФНО-альфа для терапии опухолей. Наночастицы золота увеличивали противоопухолевый эффект и минимизировали системную токсичность ФНО. Было показано, что введение наночастиц данного типа мышам-опухоленосителям с трансплантированной карциномой толстой кишки МС-38 и последующим локальным нагреванием до температуры +42,5°С, приводило к существенному ослаблению кровоснабжения опухоли. Кроме того, было установлено, что коллоидное золото, связанное с ФНО, аккумулировалось преимущественно в опухоли [7, 23].
Израильская фирма БАР-ИЛАН ЮНИВЕРСИТИ (IL) и американская компания ГЕНРИ ФОРД ХОСПИТАЛ (US) разработали дизайн наночастицы для доставки лекарственного средства [24], состоящей из полимера, хелатирующего металл, покрытия из оксида магнитного металла и, по меньшей мере, одного активного агента, ковалентно связанного с полимером, где, по меньшей мере, один активный агент представляет собой родственный TNF-лиганд, индуцирующий апоптоз (TRAIL). Указанный полимер включает желатин, полиметиленимин, хитозан или полилизин, а указанный оксид магнитного металла представляет собой оксид железа или феррит, происходящий из оксида железа, где указанный оксид железа представляет собой магнетит, оксимагнетит или их смеси, и указанный феррит представляет собой оксид формулы (Fe,M)3O4, где М представляет собой ион переходного металла. TRAIL связан напрямую или опосредованно с оксидом магнитного металла. Наночастица содержит дополнительное средство, представляющее собой пептид или пептидомиметик cRGD. В экспериментах были продемонстрированы цитотоксические эффекты конъюгированных с TRAIL магнитных композитных наночастиц желатин/оксид железа (NP-TRAIL) на различные опухолевые клетки, отличные от клеток глиомы. Линии опухолевых клеток представляли собой клетки карциномы мочевого пузыря TSU-PR1 и клетки рака молочной железы MDA-MB, в качестве контроля использовали нормальные клетки молочной железы MCF10A. Кроме того, было изучено действие на эти клетки NP-TRAIL в комбинации с ингибитором протеасом (PS), мультикаталитического протеазного комплекса, ответственного за большую часть внутриклеточного разрушения белка.
Сотрудниками Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН создана самособирающаяся конструкция для диагностики и онкотерапии, содержащая, по меньшей мере, два модуля, где каждый из модулей независимо представляет собой ядро, несущее на поверхности молекулы белки барназу либо барстар [25]. Изобретение решает задачу получения структур, собранных из частиц разных размеров, опосредующих различные функции (магнитные частицы, флуоресцентные, обладающие поверхностным-плазмонным резонансом и др.), а также различной природы (неорганические кристаллы, ДНК, углеводы, бактерии, вирусы и др.), в которых обеспечено удерживание составных компонентов с повышенной силой и специфичностью. Такие структуры могут быть востребованы в качестве как диагностических, так и терапевтических агентов, а их многофункциональность позволит обеспечить возможность комбинированного воздействия на патологические ткани с помощью агентов различного механизма действия.
Однако при всех несомненных достоинствах и разнообразии данных подходов у каждого из них есть свои недостатки. К ним можно отнести: отсутствие в организме систем деградации компонентов транспортных систем и возможность их кумуляции (средства доставки на основе неорганических частиц либо полученные с использованием синтетических полимеров); быструю элиминацию из организма клетками-фагоцитами (липосомы), биологическую инертность, нестабильность.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека (патент РФ №2386447, МПК А61К 38/19, опубл. 20.04.2010 г.) [26], содержащее сферические наночастицы, имеющие размер порядка 50-70 нм, имеющее ядро, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae - индуктор интерфероногенеза, и покрытое слоем конъюгата спермидина с полиглюкином, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином и рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, ковалентно связанный с активированным периодатом натрия полиглюкином, причем, на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина. Данная конструкция разработана коллективом авторов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. Введение в ядро конструкции дсРНК, с одной стороны, позволило решить задачу самосборки частицы, а с другой, потенцировать активность белкового компонента за счет противоопухолевой и иммуномодулирующей активности полинуклеотидного комплекса. Достоинством конструкции является биодеградируемость и наличие биологической активности у всех ее компонентов (дсРНК, полиглюкин, спермидин). В экспериментах на интактных мышах и мышах-опухоленосителях показано, что ФНО-альфа в составе наночастицы является менее токсичным соединением, чем ФНО-альфа [26].
При изучении противоопухолевой активности ФНО-альфа, включенного в наночастицы, установлено, что торможение роста аденокарциномы Эрлиха при введении ФНО-альфа в составе наночастиц наблюдается в дозах в 10-100 раз более низких, чем после инъекций препарата сравнения [27]. Анализ динамики изменения содержания ФНО-альфа в крови мышей показал, что введение ФНО-альфа в составе наночастиц приводило к удлинению периода его циркуляции в кровеносном русле и более интенсивному накоплению в ткани опухоли, что, по-видимому, и обуславливает его повышенную противоопухолевую активность. Сравнительный анализ полученных данных позволил сделать заключение о том, что препарат ФНО-альфа в составе наночастицы отличается улучшенными терапевтическими свойствами по сравнению с ФНО-альфа.
Однако в ходе дальнейших исследований было обнаружено, что полученные в результате сборки конструкции наночастицы, содержащие ФНО-альфа, отличаются высокой агрегационной способностью (неопубликованные данные). Следствием этого является неоднородность белкового раствора и сложность его дозирования при получении лекарственной формы. Помимо этого, гетерогенность препаратов наночастиц может приводить к усилению их токсических свойств, в частности, развитию иммунотоксических реакций [28, 29].
Аналогичные данные о способности частиц, используемых в качестве средств доставки различных биологически активных веществ, к агрегации были получены и другими исследователями. Так, в обзоре Kim Y. с соавторами приводится описание значительного экспериментального материала, подтверждающего тот факт, что белки, сорбированные на поверхности наночастиц, преимущественно, неорганического происхождения играют ключевую роль в образовании кластеров [30]. Способность индуцировать кластерообразование в результате взаимодействия с другими белками и формирование центров агрегации продемонстрирована для амилоидогенных пептидов и лизоцима, сорбированных на наночастицах золота [31, 32].
В статье Ault А.Р. с соавторами содержатся сведения о том, что внесение в раствор, содержащий наночастицы серебра, белка пепсина приводит к образованию белковой «короны» за счет сорбции белка на поверхности частиц, способствует изменению их заряда и морфологии, вызывает агрегацию наночастиц [33-35]. Продемонстрирована возможность конформационных изменений вторичной структуры белков при их связывании с наночастицами [36, 37], нередко ассоциированных со снижением биологической активности [33]. При этом пептиды с частично разрушенной вторичной структурой (partially unfolded) на поверхности частиц превращались в центры дальнейшей агрегации [38].
Встречаются сведения и относительно возможности агрегации наноразмерных средств доставки органической природы. Так, авторами патента [39] для снижения агрегационных процессов при получении липидных микросфер на основе производных глицерина и жирных кислот предложено введение в состав композиций антикоагулянтов.
Агрегационные процессы могут быть следствием и замораживания/высушивания препаратов наночастиц в ходе лиофилизации [40], при этом механизмы этих процессов изучены пока слабо [41].
Поскольку процессы агрегации существенным образом отражаются на качестве лекарственных препаратов, действующим началом которых являются терапевтические белки в наноразмерных формах доставки, вопрос поиска способов ослабления агрегационной способности белок-содержащих конструкций весьма актуален.
Следует отметить, что сведений о способах снижения агрегационных свойств наночастиц, несущих белки и, в частности, ФНО-альфа, в доступных источниках не обнаружено. Немногочисленные данные касаются предотвращения разрушения структуры липосом и fusing-эффекта в результате кристаллизации воды и дегидратации с помощью дисахаридов [42]. В патенте РФ 2563997 С2 предложен способ стабилизации липосом, содержащих противоопухолевый агент оксицисплатин, где в качестве антиагрегантов использовались сахара: моно- (глюкоза, фруктоза), ди-(лактоза, сахароза, трегалоза, мальтоза) и полисахариды (маннитол, декстран) [39].
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание такой биодеградируемой противоопухолевой наноконструкции, содержащей ФНО-альфа человека, которая сохраняет свою структуру без агломерации наночастиц и сохраняет специфическую цитолитическую активность фактора некроза опухоли альфа в ее составе при введении в организм.
Указанный технический результат достигается тем, что в противоопухолевом средстве на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, содержащем сферические наночастицы размером порядка 50-70 нм, имеющие ядро, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae - индуктор интерфероногенеза, и покрытое слоем конъюгата спермидина с полиглюкином, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином и рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, ковалентно связанный с активированным периодатом натрия полиглюкином, причем, на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина, согласно изобретения, средство содержит полисахарид маннитол, молекулы которого расположены между биодеградируемыми наночастицами в лиофилизате, содержащими ФНО-альфа с активностью не менее 106 ME, при следующем количественном содержании компонентов в 1 дозе сухого противоопухолевого средства:
| Маннитол | 30,0-50,0 мг |
| Лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие | |
| ФНО-альфа с цитолитической активностью | |
| не менее 106 МЕ | 37,5-61,5 мг |
Маннитол (Д-маннит) - шестиатомный спирт C6H8(ОН)6. Применяется в медицине в инъекционной форме в качестве диуретика. Используется при производстве лекарственных препаратов в качестве наполнителя, стабилизатора и криоконсерванта, в том числе, в препаратах интерферона альфа [43-45]. Показано, что маннитол при определенных условиях лиофилизации образовывает только аморфную форму [46]. Использование маннитола в более высоких концентрациях приводило к его переходу в кристаллическую форму, что деструктивно воздействует на структуру белков и как следствие, ограничивает возможность его применения [47].
В результате экспериментальных исследований авторами установлено, что маннитол в концентрации 30-50 мг на дозу при лиофилизации образовывает только аморфную форму, что благоприятно влияет на указанный процесс сушки. Использование маннитола в более высоких концентрациях приводит к его переходу в кристаллическую форму, что деструктивно воздействует на структуру белков (ФНО-альфа). В концентрации менее 30 мг не обеспечивается существенная дезагрегация наночастиц.
Электронно-микроскопическое исследование показало, что введение в состав композиции маннитола приводило к стабилизации структуры наночастиц и снижению их агрегационной способности.
Добавление маннитола не оказывало влияния на цитолитическую активность рекомбинантного ФНО-альфа человека, определенную в культуре L929.
Изучение противоопухолевой активности препарата, содержащего в качестве вспомогательного вещества маннитол, на двух опухолевых моделях, мышиной опухоли меланомы B16-F10 и ксенографтах карциномы ротовой полости человека КВ-3.1, показало, что препарат обладал выраженной способностью ингибировать рост экспериментальных опухолей. Диапазон эффективных доз составлял 104-105 ME на мышь. Наиболее выраженный эффект препарата был отмечен на модели карциномы ротовой полости человека КВ-3.1 (ТРО 67%) при внутривенном введении в дозе 1×105 ME на мышь пятикратно с интервалом в одни сутки.
В культуре клеток меланомы мыши B16-F10 продемонстрированы цитолитическая и апоптогенная активность композиции, содержащей ФНО-альфа в средстве доставки и маннитол. На мышах с трансплантированной меланомой B16-F10 установлено, что композиционный препарат обладал способностью вызывать деструкцию сосудистой системы опухоли и усиливал активность клеток иммунной системы, участвующих в реализации противоопухолевого иммунного ответа. Эти данные в совокупности свидетельствуют о том, что противоопухолевые свойства композиционного препарата реализуются через механизмы, характерные для ФНО-альфа.
Обоснование критерия «изобретательский уровень».
Одним из способов решения проблемы агрегации наночастиц является введение в состав препаратов вспомогательных веществ, обеспечивающих сохранение структурной стабильности как наночастиц, так и белков в их составе, и препятствующих образованию комплексов.
Исходя из данных, приведенных выше, проблема ослабления агрегационных процессов имеет два аспекта: сохранение конформационных свойств и предотвращение агломерации белков в составе средств доставки при получении белковых растворов и предотвращение их агрегации в процессе лиофилизации.
Надо сказать, что нестабильность активных компонентов является существенной проблемой и при производстве белковых препаратов, не содержащих наноносители. Исследованию механизмов лабильности белковых растворов, поиску способов их эффективной стабилизации и веществ, способных ее обеспечить, посвящен ряд обзорных работ [48, 49]. Показано, что лимитирующим звеном в процессе необратимой инактивации и агрегации белков является изменение их нативной структуры [50]. В настоящее время известно, что для обеспечения конформационной стабильности белков могут быть использованы так называемые «сорастворители», к которым относят многоатомные спирты или полиолы (соединения, несущие множественные гидроксильные группы, сахара, осмолиты и т.д.). Так, сравнительно недавно установлено, что некоторые осмолиты органической природы способствуют правильному фолдингу неверно свернутых белковых молекул и, как следствие, препятствуют агрегации белков [51]. Среди сахаров с множественными гидроксильными группами, которые используют для предотвращения белковой агрегации, чаще всего применяют дисахариды (сахароза, трегалоза) и многоатомные сахара маннитол, сорбитол и т.д. Механизмы стабилизации белковых смесей с помощью полиолов (повышение поверхностного натяжения, упорядочение структуры воды, стерическое разобщение и др.) до сих пор неясны и являются предметом активного обсуждения [48].
Другим важным фактором, который существенным образом влияет на интактность структуры белков, приводя к их конформационным изменениям, нарушению фолдинга, агрегации, и как следствие, потере биологической активности, является процесс лиофилизации. Критическими факторами, вызывающими эти нарушения, являются дегидратация (феномен «blow-out») и кристаллизация воды [40, 52]. Веществами, которые, наряду с функцией наполнителя, используются для предотвращения этих негативных последствий, являются ди- и полисахариды (сахароза, трегалоза, маннитол и др.) [52]. Введение в состав композиций производных декстрана (полиглюкин, реополиглюкин) способствует созданию защитной матрицы, снижающей возможность контакта белка с поверхностью ледяных кристаллов. Эти полисахариды применяются при получении лекарственных препаратов цитокинов, например, лиофилизированной формы интерферона альфа [43]. Маннитол и сахароза, наряду с глицином, глицерином и хлористым натрием, используются в фармацевтических композициях как изотонические модификаторы [52].
На основании вышеизложенного можно заключить, что среди разных классов вспомогательных веществ особый интерес в качестве стабилизатора, наполнителя и криопротектора при лиофилизации белков представляет полисахарид маннитол (маннит).
Таким образом, создание биодеградируемой противоопухолевой наноконструкции, содержащей ФНО-альфа человека, которая сохраняет свою структуру без агломерации наночастиц и сохраняет специфическую цитолитическую активность фактора некроза опухоли альфа в ее составе при введении в организм является неочевидным для специалиста в области медицины и биотехнологии, поскольку потребовались продолжительные научные исследования для выбора из многообразия стабилизирующих добавок полисахарида маннитола, обладающего антикоагулянтными свойствами в отношении конкретной заявляемой наноконструкции. Неочевидным является и количественное содержание заявляемых компонентов, входящих в состав наночастиц.
Изобретение иллюстрируется следующими графическими материалами. На Фиг. 1 представлена схема внешнего вида наночастиц, несущих ФНО-альфа, между которыми расположены молекулы полисахарида маннитола. На Фиг. 2 представлена электрофореграмма препаратов ФНО-альфа в средстве доставки, содержащих в качестве вспомогательного вещества маннитол (образцы 1, 2). В качестве препарата сравнения (контроль) использован препарат исходной дсРНК (К, дорожка 2), в качестве маркера - препарат ДНК, 1Кb (М, дорожки 1, 5). Электрофорез в 1% агарозном геле, окрашивание этидиум бромидом. На Фиг. 3 представлены электронно-микроскопические фотографии препарата ФНО-альфа в средстве доставки без вспомогательного вещества (субстанция) либо содержащего маннитол (5%). Обозначения: А-субстанция (0,08 мг/мл); Б-ФНО-альфа в средстве доставки с маннитолом (0,03 мг/мл). Контрастирование 1% раствором уранилацетата.
На Фиг. 4 представлена динамика изменения объема опухоли меланомы B16-F10, привитой мышам линии С57В 1/6, на фоне внутривенного введения препарата ФНО-альфа в составе средства доставки, содержащего маннитол, в дозе 105 МЕ при разной кратности введения. Обозначения: белые столбики - введение трехкратно, с интервалом в сутки; столбики со штриховкой - пятикратно, с интервалом в сутки; темные столбики - введение физиологического раствора (контроль); * - различия с контролем в соответствующий срок достоверны, p≤0,05.
На Фиг. 5 приведены результаты измерения объема ксенографта карциномы ротовой полости человека КВ-3.1, привитой мышам линии SCID, на фоне внутривенного введения препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, при разной кратности введения. Обозначения: белые столбики - введение в дозе 5*104 ME трехкратно, с интервалом в сутки; столбики со штриховкой - пятикратно, с интервалом в сутки, в дозе 105 ME; темные столбики - введение физиологического раствора (контроль); * - различия с контролем в соответствующий срок достоверны, p≤0,05. На Фиг. 6 представлены результаты определения цитотоксической активности препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, в культуре клеток меланомы мыши B16-F10 после 72 часов культивирования. На Фиг. 7 приведены результаты исследования апоптогенной активности препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, в культуре клеток меланомы B16-F10. По оси ординат - количество опухолевых клеток в состоянии раннего, позднего апоптоза или некроза, %. Обозначения: темные столбики - физиологический раствор (контроль), столбики со штриховкой - препарат ФНО-альфа в средстве доставки, содержащий маннитол, в концентрации 0,46 мкг/мл. На Фиг. 8 приведены изображения гистологических срезов ткани меланомы B16-F10 через сутки после окончания трехкратного внутривенного введения препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, в дозе 1×105 МЕ/мышь. А - митозы в ткани опухоли (выделено кружками). Б - внеклеточные структуры, сходные с хромосомами, окрашенные базофильно (выделены кружками). В - кровеносные сосуды с поврежденными стенками, агрегацией и лизисом эритроцитов (стрелки) в окружении поврежденных клеток опухоли (зона деструкции). Г - коллагеновые волокна в опухоли (синего цвета), показан кровеносный сосуд с агрегировавшими эритроцитами (стрелка). Световая микроскопия, окраска гематоксилин-эозином (А-В) и Пикро-Маллори (Г).
Ниже приведены примеры 1-9 конкретного выполнения получения противоопухолевого средства в виде композиции, содержащей рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека в составе наночастицы, ядро которой образовано дрожжевой двуспиральной РНК, и вспомогательное вещество маннитола.
Пример 1. Получение противоопухолевого препарата ФНО-альфа в составе наночастиц
Препарат ФНО-альфа в составе наночастиц, являющихся средством доставки, получали согласно процедуре, описанной в патенте РФ №2386447 [26].
1.1. Описание конструкции наночастицы с ФНО-альфа
Каждая наночастица 1 (фиг. 1) содержит ядро 2, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК (дсРНК) - индуктор интерфероногенеза, покрытое слоем 3 конъюгата спермидин/полиглюкин и прикрепленных к нему молекул 4 рекомбинантного фактора некроза опухолей альфа человека (ФНО-альфа), удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином. В качестве двуспиральной РНК противоопухолевое средство содержит двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Наночастицы имеют сферическую форму размером порядка 50-70 нм, что позволяет избежать захвата их клетками ретикуло-эндотелиальной системы организма. Причем, на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина. В лиофилизате, между биодеградируемыми наночастицами 1, несущими ФНО-альфа с цитолитической активностью не менее 106 ME, расположены молекулы полисахарида маннитола 5.
1.2. Синтез конъюгата полиглюкин-спермидин-ФНО-альфа
Для синтеза конъюгата 60 мг (1,2 мкМ) полиглюкина с молекулярной массой 50000 Д растворяют в 0,5 мл 50 мМ раствора периодата натрия и инкубируют 50 мин при комнатной температуре. Активированный полисахарид отделяют от периодата натрия гель-фильтрацией на колонке с сефадексом G-50 (V=2 мл) в 50 мМ бикарбонатном буфере, рН 8,6 и добавляют раствор 50 мМ бикарбонатного буфера, рН 8,6 (4-6 мл), содержащий 17 мг рекомбинантного ФНО-альфа. После инкубации в течение 3 ч при 6°С в раствор вносят 0,05 мл раствора, содержащего 2,25 мг (15 мкМ) спермидина, тщательно перемешивают. Еще через 5 ч добавляют 0,1 мл свежеприготовленного 10 мМ раствора периодата натрия. После инкубации в течение часа при 6°С непрореагировавшие компоненты удаляют гель-фильтрацией на колонке с сефадексом G-50 (V=20 мл) в фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,15 М NaCl, рН 7,2. Затем дополнительно образец диализуют против двух смен того же буфера, по 200 мл каждая. Препарат стерилизуют фильтрованием (0,2 мкМ).
При анализе полученного конъюгата на электрофореграмме в 10% полиакриламидном геле наблюдалось «облако» с кажущейся молекулярной массой в районе 120 кДа. При гель-фильтрации на сефадексе G-50 конъюгат элюировался в районе молекулярных масс 40-45 кДа.
1.3. Сборка наночастиц с ФНО-альфа
Для получения наночастиц, содержащих дсРНК и ФНО-альфа, к раствору дрожжевой дсРНК добавляли раствор конъюгата полиглюкин/спермидин/ФНО-альфа в соотношении: 1 мг дсРНК- 2 мг (по белковой компоненте) конъюгата. Для формирования частиц раствор инкубировали при 4°С в течение 2 часов. Анализ полученных наночастиц проводили гель-фильтрацией на колонке с сефарозой CL-6B и электрофорезом в 1%-ном геле агарозы.
Количественный состав наночастиц, содержащих фактор некроза опухоли альфа и двуспиральные РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae (в центральной части): на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина.
Теоретическая схема молекулярной конструкции, несущей ФНО-альфа, представлена на Фиг. 1.
1.4. Получение противоопухолевого средства
1.4.1. Приготовление раствора лекарственного средства ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего 5% маннитола и 0,9% хлорида натрия
Навеску массой (3,1±0,1) г Д-маннитола (фирмы «Panreac», Испания, с содержанием основного вещества 95%) и навеску хлорида натрия массой (0,45±0,05) г взвешивали на весах и переносили количественно в стакан вместимостью 50 мл, содержащий (30±0,5) мл воды для инъекций. Раствор тщательно перемешивали на магнитной мешалке (250 об/мин., 20 мин.) до полного растворения, затем вносили раствор препарата ФНО-альфа в средстве доставки в объеме, содержащем белок с активностью не менее 5*107 ME, и объем раствора доводили до 50 мл водой для инъекций. Смесь перед лиофильной сушкой имела следующее количественное содержание в 1 мл раствора:
| Маннитол | 50 мг |
| Изотонический водный раствор, содержащий | |
| наночастицы, несущие ФНО-альфа с цитолитической | |
| активностью, не менее 106 ME | до 1 мл |
1.4.2. Приготовление раствора лекарственного средства ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего 3% маннитола и 0,9% хлорида натрия
Навеску массой (1,86±0,1) г Д-маннитола и навеску хлорида натрия массой (0,45±0,05) г взвешивали на весах и переносили количественно в стакан вместимостью 50 мл, содержащий (40±0,5) мл воды для инъекций. Раствор тщательно перемешивали на магнитной мешалке (250 об/мин., 20 мин.) до полного растворения, затем вносили раствор препарата ФНО-альфа в средстве доставки в объеме, содержащем белок с активностью не менее 5*107 ME, и объем раствора доводили до 50 мл водой для инъекций. Смесь перед лиофильной сушкой имела следующее количественное содержание в 1 мл раствора:
| Маннитол | 30 мг |
| Изотонический водный раствор, содержащий | |
| наночастицы, несущие ФНО-альфа с цитолитической | |
| активностью не менее 106 ME | до 1 мл |
Смесь тщательно перемешивали на магнитной мешалке (250 об/мин в течение 10 минут), стерильно фильтровали и лиофильно высушивали.
Растворы образцов композиций разного состава (п.п. 1.4.1 и 1.4.2.) лиофилизировали в камере лиофильной сушки «FreeZone» в автоматическом режиме с опцией пневматической укупорки. Композиционные препараты разливали по 1 мл во флаконы объемом 3 мл и лиофильно высушивали в течение 24 часов при температуре 22±2°С. Процесс лиофилизации вели в стандартных условиях: заморозка образцов до минус 73±2°С в течение 6 часов, лиофилизация образцов при плюс 22±2°С в течение остального времени. Лиофильно высушенная масса представляла собой таблетку белого цвета. Образцы лиофилизированных препаратов хранили до испытаний при температуре 2-8°С. Ниже приведены примеры 1-2 составов противоопухолевого средства в сухом виде.
1.5. Примеры составов противоопухолевого средства
Пример 1.
| Маннитол | 30,0 мг |
| Лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие | |
| ФНО-альфа с цитолитической активностью | |
| не менее 106 ME | 37,5 мг |
Пример 2.
| Маннитол | 50,0 мг |
| Лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие | |
| ФНО-альфа с цитолитической активностью | |
| не менее 106 МЕ | 61,5 мг |
Изучение свойств композиционных составов осуществляли в соответствии с требованиями, изложенными в ГФ XIII, том 2, с. 867 (ОФС. 1.8.1.0002.15 «Иммунобиологические лекарственные препараты»). Результаты контроля подлинности препаратов рекомбинантного фактора некроза опухолей альфа человека в средстве доставки исследуемых составов после сушки представлены на Фиг. 2. Согласно данным электрофоретического анализа, оба образца содержали L- и М-формы дсРНК с измененной подвижностью, что подтверждает наличие в образцах молекулярных конструкций.
Полученные данные подтвердили тот факт, что маннитол в качестве вспомогательного вещества обеспечивает сохранность наноконструкций.
Пример 2. Анализ образцов противоопухолевого препарата методом электронной микроскопии.
Образцы композиционных препаратов, содержащих в качестве вспомогательного вещества маннитол, были исследованы методом просвечивающей электронной микроскопии с использованием негативного контрастирования (1% водный раствор уранилацетата). Образцы изучали при ускоряющем напряжении 80 кВ. Анализ электронных снимков с определением размеров частиц осуществляли при помощи программного пакета iTEM (Olympus, Германия).
На электронно-микроскопической фотографии препарата ФНО-альфа в средстве доставки (субстанция) четко визуализируются наночастицы размером 50-70 нм, склонные к агломерации (Фиг. 3А). В образце композиционного препарата с маннитолом обнаружены частицы размером от 50 до 70 нм (хотя встречались и более мелкие), преимущественно, одиночно расположенные (Фиг. 3Б). Таким образом, использование маннитола в качестве вспомогательного компонента способствовало стабилизации растворов наночастиц, несущих ФНО-альфа, и препятствовало их агломерации.
Пример 3. Оценка специфической цитолитической активности противоопухолевого средства
Специфическую цитолитическую активность композиционных препаратов ФНО-альфа в средстве доставки, содержащих маннитол, определяли в культуре мышиных фибробластов L929 в присутствии актиномицина D методом, описанным в [26]. В качестве стандарта использовали Отраслевой стандартный образец активности рчФНО-альфа (ОСО 42-28-400-08), специфическая активность которого установлена относительно Международного стандартного образца рчФНО-альфа (rhTNF-альфа) фирмы "Селтех" (Англия, номер по каталогу 1740/58).
Анализ цитолитической активности композиционных препаратов показал, что наиболее высоким уровнем активности отличался образец, содержащий в качестве стабилизатора 5% маннитол (1,17×107 МЕ/мг).
Пример 4. Оценка противоопухолевой активности препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, на модели меланомы B16-F10
В экспериментах использовали мышей линии C57BL/6, самок, массой 20-23 г. Клетки меланомы B16-F10 трансплантировали мышам внутримышечно в дозе 1×106 клеток/мышь в объеме 0,1 мл. Композиционный препарат ФНО-альфа с маннитолом вводили мышам - опухоленосителям внутривенно в дозе 1×105 ME на мышь в объеме 0,5 мл пятикратно, через день. Инъекции препарата начинали с 11 суток после перевивки опухоли (стадия сформировавшегося опухолевого узла) и проводили на 11, 13, 15, 17 и 19 сутки после перевивки. Контрольным мышам в те же сроки вводили внутривенно физиологический раствор. На 11, 14, 17, 20 и 22 сутки после перевивки проводили замер линейных размеров опухоли, рассчитывали объем опухолевого узла и процент торможения роста опухоли (ТРО).
Объем опухоли вычисляли по формуле:
где a, b и c - длина, ширина и высота опухоли, соответственно, в мм.
Процент торможения роста опухоли вычисляли по формуле:
где Vк - средний показатель объема опухоли в контрольной группе;
Vo - средний показатель опытной группы.
Экспериментальные данные обрабатывали методами вариационной статистики с помощью пакета программ "Statgraphics, Vers. 5.0" (Statistical Graphics Corp., USA). Для оценки значимости отличий использовали t-критерий Стьюдента.
В результате проведенного исследования показано, что пятикратное, с интервалом в один день, внутривенное введение композиционного препарата ФНО-альфа в дозе 1×105 МЕ/мышь ингибировало рост опухоли (ТРО составлял 46-52%) (Фиг. 4). Эффект торможения был отмечен после второй инъекции препарата и сохранялся в течение всего периода лечения. Таким образом, препарат ФНО-альфа в средстве доставки, в который был введен в качестве стабилизатора маннитол, при пятикратном внутривенном введении в дозе 105 МЕ на мышь обладал выраженной способностью тормозить рост экспериментальной опухоли меланомы B16-F10.
Пример 5. Оценка противоопухолевой активности препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, на модели эпидермоидной карциномы ротовой полости человека КВ-3.1
В экспериментах использовали мышей иммунодефицитной линии SCID (Hairless Outbred SHO-Prkdcscid Hrhr Mouse), самок массой 23-25 г (Центр генетических ресурсов лабораторных животных ИЦиГ СО РАН, г. Новосибирск). Клетки карциномы КВ-3.1 перевивали мышам подкожно в дозе 8×106 клеток/мышь в объеме 0,1 мл.
Препарат вводили внутривенно пятикратно, с интервалом в один день, в дозе 1×105 МЕ/мышь, начиная инъекции на 10 сутки после перевивки. Контрольным мышам в те же сроки вводили внутривенно физиологический раствор. На 10, 13, 15, 17, 20, 22 и 24 сутки после перевивки проводили замер линейных размеров опухоли (перед введением препарата), рассчитывали объем опухолевого узла и процент торможения роста опухоли по формулам, приведенным выше.
Внутривенное введение композиционного препарата ФНО-альфа животным экспериментальных групп приводило к ингибированию развития опухолевых ксенографтов. Величина ТРО при пятикратном введении препарата ФНО-альфа в дозе 1×105 ME составляла 67% (на вторые сутки после окончания курса введений) (Фиг. 5).
Полученные данные подтверждают способность препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, тормозить рост ксенографтов карциномы человека КВ-3.1 при его пятикратном внутривенном введении в дозе 105 ME.
Пример 6. Оценка цитотоксического действия препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол
Анализ цитотоксического действия композиционного препарата ФНО-альфа проводили с помощью МТТ-теста, который позволяет оценивать уровень жизнеспособности клеток по их метаболической активности, способности к восстановлению 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5 - дифенилбромидтетразолиевого (МТТ) [53]. Для определения цитотоксической активности тестируемый препарат в концентрациях от 30,5 до 6*10-7 мкг/мл вносили в лунки плоскодонного микропланшета, содержащего клетки меланомы B16-F10 (104/лунку), и инкубировали в CO2-инкубаторе при температуре 37°С в атмосфере с 5% CO2 в течение 72 часов. Число живых клеток определяли после инкубации с красителем 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолиум бромидом, измеряя оптическую плотность растворенного в диметилсульфоксиде МТТ-формазана. На основании средних значений оптической плотности в контрольных лунках и лунках с исследуемым препаратом рассчитывали процент живых клеток (индекс МТТ).
Исследование показало, что до 70% популяции клеток меланомы В16-F10 оказались чувствительными к действию композиционного препарата ФНО-альфа (Фиг. 6). Процент гибели клеток зависел от концентрации препарата. Достоверные различия индекса МТТ опухолевых клеток, инкубированных с препаратом ФНО-альфа, и контрольных клеток наблюдались в интервале концентраций от 30 до 0,002 мкг белка/мл. Полученные данные подтверждают наличие у препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего в качестве вспомогательного вещества маннитол, выраженной цитотоксической активности, характерной для препарата ФНО-альфа.
Пример 7. Оценка апоптогенного действия препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол
Оценку механизмов гибели клеток под действием композиционного препарата ФНО-альфа проводили с помощью диагностического набора для цитофлуорометрической оценки апоптоза FITC Annexin V Detection Kit 1 (BD Pharmingen, США). Для определения апоптогенной активности тестируемый препарат в концентрациях 0,46 и 0,046 мкг/мл вносили в лунки плоскодонного микропланшета, содержащего клетки меланомы B16-F10 (106/лунку), и инкубировали в СО2-инкубаторе при температуре 37°С в атмосфере с 5% СО2 в течение 72 часов. Через 24, 48 и 72 часа от начала инкубации клетки снимали с подложки смесью трипсин-версен (1:1), промывали культуральной средой DMEM и концентрировали. В каждую пробирку с клетками вносили по 5 мкл аннексина V, коньюгированного с флуорохромом FITC, и 5 мкл красителя йодид пропидия (PI). По окончании окрашивания проводили анализ на цитофлуориметре BD FACS Aria (BD Pharmingen, США), определяя соотношение интактных клеток (отрицательные по аннексину V и PI); клеток, находящихся на стадии «раннего» апоптоза (положительные по аннексину V, отрицательные по PI); клеток, находящиеся в «позднем» апоптозе (положительные по аннексину V и PI) или в процессе некроза (положительные по PI). Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета статистических программ "Statgraphics, Vers. 5.0" (Statistical Graphic Corp., USA) способом, описанным выше.
Было показано, что клеточная линия мышиной меланомы при контакте с исследуемым препаратом уже через 24 часа вступала в апоптоз, и в дальнейшем наблюдалось развитие этого процесса. Дозовой зависимости апоптогенного эффекта не обнаружено. Соотношение клеток, находящихся на разных стадиях апоптоза или некроза после инкубации с препаратом в течение 72 часов, представлено на Фиг. 7. Видно, что к третьим суткам от начала инкубации клеток с препаратом ФНО-альфа до 70% клеточной популяции погибало через механизм апоптоза. Воздействие препаратом приводило и к увеличению количества клеток в состоянии некроза, однако число таких клеток в популяции было несравнимо более низким по сравнению с клеточной популяцией в апоптозе (5,4-5,9% и 62,3-70,2%, соответственно, после культивирования с препаратом в дозе 0,046 и 0,46 мкг/мл, 72 ч). Полученные данные свидетельствуют о том, что основным механизмом индуцируемой гибели опухолевых клеток под действием препарата ФНО-альфа в средстве доставки с маннитолом является апоптоз, и, следовательно, композиционный препарат сохраняет присущую ФНО-альфа апоптогенную активность.
Пример 8. Оценка влияния препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол, на сосудистую систему опухоли
Опухоль меланомы мыши В16 клон F10 трансплантировали мышам линии C57BL/6, самцам и самкам, массой 20-23 г., способом, описанным выше. Препарат ФНО-альфа вводили мышам-опухоленосителям внутривенно в дозе 1×105 ME на мышь в объеме 0,5 мл трехкратно через день, начиная инъекции с 11 дня после перевивки. Эвтаназию животных и взятие образцов опухоли на гистологическое исследование проводили через сутки и 7 суток после окончания курса инъекций. Обработку образцов и изготовление гистологических срезов осуществляли стандартными методами. Полученные образцы исследовали с помощью светового микроскопа Leica DM 2500 при 10-, 20-, 40-, и 100-кратном увеличении объектива, фотосъемку проводили с помощью цифровой камеры Leica DFC420 С.
Изучение гистологических срезов опухолевых узлов меланомы B16-F10 через сутки после последнего введения препарата ФНО-альфа (1×105 МЕ/мышь) показало наличие участков некроза и зон деструкции, которые занимали около 80-90% площади среза опухоли. Наблюдали детрит, измененные клетки меланомы, поврежденные сосуды и отек ткани. В ткани опухоли нередко встречались опухолевые клетки в состоянии митоза (Фиг. 8А). Между опухолевыми клетками, в участках некроза или зонах деструкции обнаружены структуры, по морфологии и размеру сходные с метафазными хромосомами опухолевых клеток, окрашенными базофильно при окраске срезов гематоксилин-эозином (Фиг. 8Б). По-видимому, введение препарата оказывало деструктивное действие на делящиеся клетки меланомы, в результате разрушения которых метафазные хромосомы оказывались в межклеточном пространстве. В опухолевом узле отмечено повреждение около 70% всех кровеносных сосудов, преимущественно, в участках некроза и зонах деструкции опухолевой ткани (Фиг. 8В). У 20% (одна из 5-ти) мышей повреждены все кровеносные сосуды опухоли. В ткани опухоли отмечали увеличение частоты встречаемости коллагеновых волокон по сравнению с другими анализируемыми группами (Фиг. 8Г). У 2-х из 5-ти мышей обнаружено замещение участка некроза соединительной тканью на площади около 5-7% от площади среза опухоли. По-видимому, разрушение опухолевых клеток приводило к «оголению» соединительно-тканной стромы.
Таким образом, гистологический анализ образцов опухоли меланомы B16-F10, взятой у мышей-опухоленосителей после воздействия композиционным препаратом ФНО-альфа, подтвердил наличие у препарата ФНО-альфа в средстве доставки с маннитолом выраженного деструктивного воздействия на опухоль. Эффект препарата затрагивал не только опухолевые клетки, но и кровеносные сосуды опухоли, что свидетельствует о сохранении сосудистых эффектов ФНО-альфа в составе композиции.
Пример 9. Оценка иммуномодулирующего действия препарата ФНО-альфа в средстве доставки, содержащего маннитол
Трансплантацию опухолевых клеток меланомы B16-F10 мышам линии C57BL/6 проводили методами, описанными выше. Препарат ФНО-альфа вводили мышам - опухоленосителям внутривенно в дозе 5×104 ME на мышь трехкратно, через день, начиная с 12 суток после перевивки. На 10, 13 и 15 сутки после перевивки (через сутки после каждой инъекции препарата) животных подвергали эвтаназии мгновенной дислокацией шейных позвонков, извлекали и взвешивали лимфоидные органы (тимус, селезенка), забирали на исследование периферическую кровь, селезенку и перитонеальный экссудат. Спонтанную пролиферативную активность спленоцитов оценивали по уровню восстановления клетками 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенил тетразолиум бромида (МТТ-тест) [53]. Функцию макрофагов исследовали в краткосрочной культуре клеток по уровню восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [54]. Оценку активности фагоцитов проводили в спонтанном тесте, либо в тесте с активатором метаболического дыхания макрофагов зимозаном (Zymosan А, «Sigma»), который добавляли на сформированный клеточный монослой в концентрации 3 мг/мл. Экспериментальные данные обрабатывали методами вариационной статистики с помощью пакета программ "Statgraphics, Vers. 5.0" (Statistical Graphics Corp., USA). Для оценки значимости отличий использовали t-критерий Стьюдента.
Оценка морфо-физиологических параметров иммунокомпетентных органов и их клеток у мышей с трансплантированной меланомой B16-F10 показала, что развитие опухолевого процесса приводило к увеличению массы селезенки и тимуса животных контрольной и опытной групп, по сравнению с показателями интактных мышей. При этом введение композиционного препарата ФНО-альфа вызывало более значительное, по сравнению с контрольным, повышение весового индекса селезенки (на 25%, 15 сутки после перевивки опухоли) у мышей опытной группы (62,6±2,65 и 78,5±4,24 мг/10 г, соответственно). Повышение весового индекса селезенки мышей опытной группы сопровождалось увеличением спонтанной пролиферативной активности спленоцитов этих животных (0,675±0,015 о.е.) по сравнению с показателями интактных мышей и контрольных мышей-опухоленосителей (0,459±0,057 и 0,544±0,022 о.е., соответственно).
Препарат ФНО-альфа в средстве доставки, содержащий маннитол, повышал активность перитонеальных клеток, по сравнению с показателями интактных (11, 13 и 15 сутки после перевивки) и контрольных животных (13 и 15 сутки после перевивки). Уровень НСТ, восстановленного зимозан-индуцированными макрофагами мышей опытной группы, по окончании курса инъекций препарата в 1,6 раза превышал контрольный показатель и показатель мышей интактной группы (19,9±2,6; 14,5±1,4 и 12,0±0,8 о.е. * 100, соответственно).
Таким образом, композиционный препарат ФНО-альфа вызывал повышение спонтанной пролиферативной активности спленоцитов и зимозан-индуцированной фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, что свидетельствует об активации системного иммунного ответа, то есть, реализации механизма противоопухолевого действия, характерного для ФНО-альфа.
Примеры 1-9, приведенные выше, подтверждают достижение заявляемого технического результата, а именно: создано противоопухолевое средство в виде конструкции, содержащей рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека в составе наночастицы, ядро которой образовано дрожжевой двуспиральной РНК, и в качестве вспомогательного вещества - маннитол, препятствующий агломерации, обеспечивающий сохранение структуры конструкции и специфической цитолитической активности фактора некроза опухоли альфа в ее составе. Композиция обладает высокой противоопухолевой активностью, подтвержденной на экспериментальных опухолевых моделях и наиболее выраженной при пятикратном, с интервалом в сутки, внутривенном введении в дозе 105 МЕ, причем, противоопухолевый эффект заявляемого препарата реализуется через механизмы, характерные для фактора некроза опухоли альфа.
Список использованных источников научно-технической и патентной информации
1. Чубенко В.А. Иммунотерапия на основе цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ТНФ, КСФ, Интерфероны) // Практич. Онкология. 2016. Т. 17, №2. С. 99-109.
2. Podleska L.E., Schwindenhammer В., Grabellus F., Bauer S., Steinau H.U., Taeger G. Isolated limb perfusion for liposarcoma: Histopathological response and subgroup analysis after TNF melphalan-based ILP // Chirurg. 2017. Jan 12. doi: 10.1007/s00104-016-0362-3.
3. Lienard D., Ewalenko P., Delmotte J.J., Renard N., Lejeune F.J. High-dose recombinant tumor necrosis factor alpha in combination with interferon gamma and melphalan in isolation perfusion of the limbs for melanoma and sarcoma // J. Clin. Oncol. 1992. Vol. 10, No 1. P. 52-60.
4. Gong J., Tan G., Sheng N., You W., Wang Z. Targeted treatment of liver metastasis from gastric cancer using specific binding peptide // Am. J. Transl. Res. 2016. Vol. 8, N. 5. P. 1945-56. eCollection 2016.
5. Lebedev L.R., Danilenko E.D., Telegina Yu.V., Zaitsev B.N. An Antitumor Osteotropic Agent Based On Tumor Necrosis Factor // Biochemistry (Moscow) Suppl. Ser. B: Biomed. Chemistry. 2016. Vol. 10, N. 3. P. 287-291.
6. Xu G., Gu H., Hu В., Tong F., Liu D., Yu X., Zheng Y., Gu J. PEG-b-(PELG-g-PLL) nanoparticles as TNF-α nanocarriers: potential cerebral ischemia/reperfusion injury therapeutic applications // Int. J. Nanomedicine. 2017. Vol. 12. P. 2243-2254. doi: 10.2147/IJN.S130842. eCollection 2017.
7. Farma J.M., Puhlmann M., Soriano P.A., Cox D., Paciotti G.F., Tamarkin L., Alexander H.R. Direct evidence for rapid and selective induction of tumor neovascular permeability by tumor necrosis factor and a novel derivative, colloidal gold bound tumor necrosis factor // Int. J. Cancer. 2007. Vol. 120, N. 11. P. 2474-2480.
8. Messerschmidt S.K., Musyanovych A., Altvater M., Scheurich P., Pfizenmaier K., Landfester K., Kontermann R.E. Targeted lipid-coated nanoparticles: delivery of tumor necrosis factor-functionalized particles to tumor cells // J. Control. Release. 2009. Vol. 137, N 1. P. 69-77.
9. Международная заявка WO 2005117963, опубл. 20.07.2008 г.
10. Заявка США 2008019991, опубл. 24.01.2008 г.
11. Заявка Китая 102228437, опубл. 02.11.2011 г.
12. Заявка США 2009155344, опубл. 19.06.2009 г.
13. Van der Veen А.Н., Eggermont A.M., Seynhaeve A.L., van Tiel, ten Hagen T.L. Biodistribution and tumor localization of stealth liposomal tumor necrosis factor-alpha in soft tissue sarcoma bearing rats // Int. J. Cancer. 1998. Vol. 77, N. 6. P. 901-906.
14. Ten Hagen T.L., Seynhaeve A.L., van Tiel S.T., Ruiter D.J., Eggermont A.M. Pegylated liposomal tumor necrosis factor-alpha results in reduced toxicity and synergistic antitumor activity after systemic administration in combination with liposomal doxorubicin (Doxil) in soft tissue sarcoma-bearing rats // Int. J. Cancer. 2002. Vol. 97, N. 1. P. 115-120.
15. Ten Hagen T.L., Van Der Veen A.H., Nooijen P.T, Van Tiel S.T., Seynhaeve A.L. Eggermont A.M. Low-dose tumor necrosis factor-alpha augments antitumor activity of stealth liposomal doxorubicin (DOXIL) in soft tissue sarcoma-bearing rats // Int. J. Cancer. 2000. Vol. 87, N. 6. P. 829-837.
16. Li Y.P., Pei Y.Y., Zhou Z.H., Zhang X.Y., Gu Z.H., Ding J., Gao X.J., Zhu J.H. PEGylated recombinant human tumor necrosis factor alpha: pharmacokinetics and anti-tumor effects // Biol. Pharm. Bull. 2001. Vol. 24, N. 6. P. 666-670.
17. Li Y.P., Pei Y.Y., Zhou Z.H., Zhang X.Y., Gu Z.H., Ding J., Zhou J.J., Gao X.J., Zhu J.H. Stealth polycyanoacrylate nanoparticles as tumor necrosis factor-alfa carriers: pharmacokinetics and anti-tumor effects // Biol. Pharm. Bull. 2001. Vol. 24, N 6. P. 662-665.
18. Li Y.P., Pei Y.Y., Zhou Z.H., Zhang X.Y., Gu Z.H., Ding J., Zhou J.J., Gao X.J. PEGylated polycyanoacrylate nanoparticles as tumor necrosis factor-alpha carriers // J. Control. Release. 2001. Vol. 71, N. 3. P. 287-296.
19. Fang C, Shi В., Pei Y.Y. Effect of MePEG molecular weight and particle size on in vitro release of tumor necrosis factor-alpha-loaded nanoparticles // Acta Pharmacol. Sin. 2005. Vol. 26, N. 2. P. 242-249.
20. Fang C, Shi В., Pei Y.Y., Hong M.H., Wu J., Chen H.Z. In vivo tumor targeting of tumor necrosis factor-alpha-loaded stealth nanoparticles: effect of MePEG molecular weight and particle size // Eur. J. Pharm. Sci. 2006. Vol. 27, N. 1. P. 27-36.
21. Заявка США 2009155344, опубл. 19.06.2009 г.
22. Патент РФ 2504403, опубл. 20.01.2014 г.
23. Visaria R.K., Griffin R.J., Williams B.W., Ebbini E.S., Paciotti G.F., Song C.W., Bischof J.C. Enhancement of tumor thermal therapy using gold nanoparticle-assisted tumor necrosis factor-alpha delivery // Mol. Cancer Ther. 2006. Vol. 5, N. 4. P. 1014-1020.
24. Патент РФ 2472530, опубл. 20.01.2013 г.
25. Патент РФ 2480524, опубл. 27.04.2013 г.
26. Патент РФ 2386447, опубл. 20.04.2010 г, (прототип).
27. Гамалей С.Г., Батенева А.В., Сысоева Г.М., Даниленко Е.Д., Лебедев Л.Р., Масычева В.И. Фармакокинетика и противоопухолевые свойства препарата, содержащего ФНО-α в составе наночастицы // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2010. Т. 149, №3. С. 296-299.
28. Rosenberg A.S. Effects of protein aggregates: an immunologic perspective // AAPS Journal. 2006. Vol. 8, No. 3. P. E501-507.
29. Carpenter J.F., Randolph T.W., Jiskoot W., Crommelin D.J.A., Middaugh C.R., Winter G. et al. Overlooking subvisible particles in therapeutic protein products: gaps that may compromise product quality // J. Pharm. Sci. 2009. Vol. 98, No. 4. P. 1201-1205.
30. Kim Y., Ko S.M., Nam J-M. Protein nanoparticle interaction-induced changes in protein structure and aggregation // Chem. Asian. 2016. Vol. 11. P. 1869-1877.
31. Ma Q., Wei G., Yang X. Influence of Au nanoparticles on the aggregation of amyloid-β-(25-35) peptides // Nanoscale. 2013. Vol. 5. P. 10397-10403.
32. Zhang D., Neumann O., Wang H., Yuwono V.M., Barhoumi A., Perham M., Hartgerink J.D., Wittung-Stafshede P., Halas N.J. // Nano Lett. 2009. Vol. 9. P. 666-671.
33. Ault A.P., Stark D.I., Axson J.L., Keeney J.N., Maynard A.D., Bergin I.L., Philbert M.A. Protein corona-induced modification of silver nanoparticle aggregation in stimulated gastric fluid // Environ Sci. Nano. 2016. Vol. 3, No. 6. P. 1510-1520.
34. Rogers K.R., Bradham K., Tolaymat Т., Thomas D.J., Hartmann Т., Ma L., Williams A. Alterations in physical state of silver nanoparticles exposed to synthetic human stomach fluid // Sci. Total Envirom. 2012. Vol. 420. P. 334-339.
35. Walczak A.P., Fokkink R., Peters R., Tromp P., Herrera Rivera Z.E., Rietjens I.M., Hendriksen P.J., Bouwmeester H. Behaviour of silver nanoparticles and silver ions in an in vitro human gastrointestinal digestion model // Nanotoxicology. 2013. Vol. 7. P. 1198-1210.
36. Kakinen A., Ding F., Chen P., Mortimer M., Kahru A., Ke P.C. Interaction of firefly luciferase and silver nanoparticles and its impact on enzyme activity // Nanotechnology. 2013. Vol. 24, No. 34. P. 345101.
37. Wang Y., Ni Y. New insight into protein-nanomaterial interactions with UV-visible spectroscopy and chemometrics: human serum albumin and silver nanoparticles // Analyst. 2014. Vol. 139. P. 416-424.
38. Yokoyama K., Welchons D. The conjugation of amyloid beta protein on the gold colloidal nanoparticles' surfaces // Nanotechnology. 2007. Vol. 18, N. 10. P. 105101
39. Патент РФ 2563997, опубл. 27.10.2013 г.
40. Hauptmann A., Podgorsek K., Kuzman D., Srcic S., Hoelzl G., Loerting T. Impact of buffer, protein concentration an sucrose addition on the aggregation and particle formation durin freezing and thawing // Pharm. Res. 2018. Vol. 35. P. 101. http:/doi.org/10.1007/s11095-018-2378-5
41. Roessl U., Hurni S., Leitgeb S., Nidetzky B. Design of experiments reveals critical parameters for pilot-scale freeze-and thaw processing of L-lactic dehydrogenase // Biotechnol. J. 2015. Vol. 10, No. 9. P. 1390-1399.
42. Crowe J.N., Crowe L.N., Carpenter J.F. Preserving dry bomaterials: the water replacement hypothesis // Bioparm. 1993. Vol. 6, No. 1. P. 28.
43. Патент РФ 2236866, опубл. 27.09.2004 г.
44. Маннитол PEARLITOL® - основа для создания фармацевтических препаратов высокого качества // Фармацевтическая отрасль. 2016. №1 (54). С. 66-70).
45. Березин И.В., Клячко Н.Л., Левашов А.В. и др., Иммобилизованные ферменты // Биотехнология. Уч. Пособие. Кн. 7. М.: Высшая школа. 1987. С. 159
46. Williams N.A., Dean Т. Vial breakage by frozen mannitol solutions: Correlation with thermal characteristics and effect of stersoisomerism, additives and vial configuration // J. Parenteral Science and Technology. 1991. Vol. 45. P. 94-100
47. Kett W.L., Fitzpatrick S., Cooper В., Craig D.Q.M. An investigation into the subambient behaviour of aqueous mannitol solutions using differential scanning colorimetry, cold stage microscopy and X ray diffraction // J. Pharm. Sci. 2003 Vol. 92, N. 9. P. 1919-1929.
48. Kumar V., Singh S.N., Kalonia D.S. Mechanism of stabilization of proteins by poly-hydroxy co-solvents: concepts and implications in formulation development / American Pharmaceutical Review. 2012. https://www.americanpharmaceuticalreview.com
49. Heljo P. Comparison of disaccharides and polyalcohols as stabilizers in freeze-dried protein formulations // Acadimic dissertation. Helsinki. 2013.
50. Prestrelski S.J., Pikal M.A., Arakawa T. Optimization of lyophilization conditions for recombinant human interleukin-2 by dried-state conformational analysis using Fourier-transform infrared spectroscopy // Pharm. Res. 1995. Vol. 12. P. 1250-1259
51. Шарма Г.С., Сингх Л.Р. По сравнению с осмолитами других классов, многоатомные спирты обладают уникальной способностью содействовать рефолдингу белков // Биохимия. 2017. №4. С. 634-643.
52. Bedu-Adda K.F. Understanding lyophilization formulation development // Pharmaceutical Technology Lyophilization. 2004. P. 10-18. www.pharmatech.com
53. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunol. Meth. 1983. Vol. 65, N. (1-2). P. 55-63.
54. Rook G.A.W., Steel J., Umar S., Dockrell H.M. A simple method for the solubilisation of reduced NBT, and its use as a colorimetric assay for activation of human macrophages by gamma-interferon // J. Immunol. Meth. 1985. Vol. 82, №1. P. 161-167.
Claims (2)
- Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, содержащее сферические наночастицы, имеющие размер порядка 50-70 нм, имеющие ядро, состоящее из полинуклеотидного комплекса, представляющего собой двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae - индуктор интерфероногенеза, и покрытое слоем конъюгата спермидина с полиглюкином, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным полинуклеотидным комплексом и положительно заряженным спермидином, и рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека, ковалентно связанный с активированным периодатом натрия полиглюкином, причем на одну молекулу двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae приходится 60-80 молекул рекомбинантного человеческого ФНО-альфа с цитолитической активностью не ниже 106 МЕ/мг белка, 60-80 молекул полиглюкина и 1000-1300 молекул спермидина, отличающееся тем, что средство содержит полисахарид маннитол, молекулы которого расположены в лиофилизате между биодеградируемыми наночастицами, несущими ФНО-альфа с цитолитической активностью не менее 106 ME, при следующем количественном содержании компонентов в 1 дозе сухого противоопухолевого средства:
-
Маннитол 30,0-50,0 мг Лиофилизат, содержащий наночастицы, несущие ФНО-альфа с цитолитической активностью не менее 106 МЕ 37,5-61,5 мг
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018121942A RU2691938C1 (ru) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018121942A RU2691938C1 (ru) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2691938C1 true RU2691938C1 (ru) | 2019-06-19 |
Family
ID=66947646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018121942A RU2691938C1 (ru) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | Противоопухолевое средство на основе биодеградируемых наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2691938C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2822629C1 (ru) * | 2023-04-12 | 2024-07-10 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого" (ФГАОУ ВО "СПбПУ") | Способ получения фармацевтически подходящих лекарственных форм и их применение в комбинированной химиотерапии и фотодинамической терапии злокачественных новообразований |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7368295B2 (en) * | 2001-08-31 | 2008-05-06 | Fraunhofer-Gesellschaft Zur Foderung Der Angewandten Forschung E.V. | Nanoparticles comprising biologically active TNF which is immobilized on the same |
| RU2386447C1 (ru) * | 2008-10-13 | 2010-04-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Противоопухолевое средство на основе наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека |
-
2018
- 2018-06-15 RU RU2018121942A patent/RU2691938C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7368295B2 (en) * | 2001-08-31 | 2008-05-06 | Fraunhofer-Gesellschaft Zur Foderung Der Angewandten Forschung E.V. | Nanoparticles comprising biologically active TNF which is immobilized on the same |
| RU2386447C1 (ru) * | 2008-10-13 | 2010-04-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Противоопухолевое средство на основе наночастиц, несущих рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FANG С. et al. In vivo tumor targeting of tumor necrosis factor-alpha-loaded stealth nanoparticles: effect of MePEG molecular weight and particle size, Eur. J. Pharm. Sci., 2006 Jan., v.27 (1), pp.27-36. * |
| Li YP. et al. PEGylated polycyanacrylate nanoparticles as a tumor necrosis-alpha carriers, J. Control Release, 2001 Apr., 28, v.71 (3), pp.287-296. * |
| Li YP. et al. PEGylated polycyanacrylate nanoparticles as a tumor necrosis-alpha carriers, J. Control Release, 2001 Apr., 28, v.71 (3), pp.287-296. Li YP. et al. Stealth polycyanoacrylate nanoparticles as a tumor necrosis factor-alpha carriers: pharmacokinetics and anti-tumor effects, Biol. Pharm. Bull., 2001 Jun, v.24 (6), pp.662-665. FANG С. et al. In vivo tumor targeting of tumor necrosis factor-alpha-loaded stealth nanoparticles: effect of MePEG molecular weight and particle size, Eur. J. Pharm. Sci., 2006 Jan., v.27 (1), pp.27-36. * |
| Li YP. et al. Stealth polycyanoacrylate nanoparticles as a tumor necrosis factor-alpha carriers: pharmacokinetics and anti-tumor effects, Biol. Pharm. Bull., 2001 Jun, v.24 (6), pp.662-665. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2822629C1 (ru) * | 2023-04-12 | 2024-07-10 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого" (ФГАОУ ВО "СПбПУ") | Способ получения фармацевтически подходящих лекарственных форм и их применение в комбинированной химиотерапии и фотодинамической терапии злокачественных новообразований |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | In situ activation of STING pathway with polymeric SN38 for cancer chemoimmunotherapy | |
| Zhang et al. | Fabrication of a triptolide-loaded and poly-γ-glutamic acid-based amphiphilic nanoparticle for the treatment of rheumatoid arthritis | |
| Yu et al. | Mild hyperthermia promotes immune checkpoint blockade-based immunotherapy against metastatic pancreatic cancer using size-adjustable nanoparticles | |
| Hao et al. | Neutrophils, as “Trojan horses”, participate in the delivery of therapeutical PLGA nanoparticles into a tumor based on the chemotactic effect | |
| Cinar et al. | Local delivery of doxorubicin through supramolecular peptide amphiphile nanofiber gels | |
| Xu et al. | Prevention of colorectal cancer liver metastasis by exploiting liver immunity via chitosan-TPP/nanoparticles formulated with IL-12 | |
| Wei et al. | Multifunctional polymeric micelle-based chemo-immunotherapy with immune checkpoint blockade for efficient treatment of orthotopic and metastatic breast cancer | |
| EP4233843A2 (en) | Antibody compositions | |
| Lu et al. | Phenylboronic acid modified nanoparticles simultaneously target pancreatic cancer and its metastasis and alleviate immunosuppression | |
| Li et al. | Reduction breakable cholesteryl pullulan nanoparticles for targeted hepatocellular carcinoma chemotherapy | |
| CN101351219A (zh) | 包含增效比例的干扰素γ和α的稳定的制剂 | |
| Wu et al. | Immunostimulatory cytokine and doxorubicin co-loaded nanovesicles for cancer immunochemotherapy | |
| CN102670522B (zh) | 含有重组人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子融合蛋白的药物制剂及其制备 | |
| Yang et al. | A new concept of enhancing immuno-chemotherapeutic effects against B16F10 tumor via systemic administration by taking advantages of the limitation of EPR effect | |
| Jiao et al. | Tumor cell-derived extracellular vesicles for breast cancer specific delivery of therapeutic P53 | |
| CN113368053B (zh) | 一种装载溶瘤肽的聚合物囊泡及其与囊泡免疫佐剂、pd-1单抗的联合用药 | |
| Li et al. | Inhalable functional mixed-polymer microspheres to enhance doxorubicin release behavior for lung cancer treatment | |
| Xiao et al. | Improving cancer immunotherapy via co-delivering checkpoint blockade and thrombospondin-1 downregulator | |
| Yang et al. | Injectable shear-thinning polylysine hydrogels for localized immunotherapy of gastric cancer through repolarization of tumor-associated macrophages | |
| Huang et al. | A self-sustained nanoplatform reverses TRAIL-resistance of pancreatic cancer through coactivating of exogenous and endogenous apoptotic pathway | |
| Fu et al. | Combination of oxaliplatin and POM-1 by nanoliposomes to reprogram the tumor immune microenvironment | |
| Bakrania et al. | DEAE-Dextran coated paclitaxel nanoparticles act as multifunctional nano system for intranuclear delivery to triple negative breast cancer through VEGF and NOTCH1 inhibition | |
| Wang et al. | Dual-ligand-modified liposomes co-loaded with anti-angiogenic and chemotherapeutic drugs for inhibiting tumor angiogenesis and metastasis | |
| Shetab Boushehri et al. | Challenges of using lipopolysaccharides for cancer immunotherapy and potential delivery-based solutions thereto | |
| Huang et al. | Co-administration of a branched arginine-rich polymer enhances the anti-cancer efficacy of doxorubicin |