RU2685428C1 - Средство, обладающее антиапоптотической активностью - Google Patents
Средство, обладающее антиапоптотической активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2685428C1 RU2685428C1 RU2018119958A RU2018119958A RU2685428C1 RU 2685428 C1 RU2685428 C1 RU 2685428C1 RU 2018119958 A RU2018119958 A RU 2018119958A RU 2018119958 A RU2018119958 A RU 2018119958A RU 2685428 C1 RU2685428 C1 RU 2685428C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- apoptosis
- apoptotic
- peptide
- group
- death
- Prior art date
Links
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 title description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 claims abstract description 4
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 claims abstract description 4
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 70
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 101001138459 Conus textile Conotoxin King-Kong 1 Proteins 0.000 description 37
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 230000009471 action Effects 0.000 description 12
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 11
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 11
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M CDP-choline(1-) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M 0.000 description 8
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 8
- 101150045355 akt1 gene Proteins 0.000 description 8
- 229960001284 citicoline Drugs 0.000 description 8
- 230000034994 death Effects 0.000 description 8
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 8
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 8
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 8
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 8
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 102000004091 Caspase-8 Human genes 0.000 description 7
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 7
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 6
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 5
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 5
- 102000013674 S-100 Human genes 0.000 description 5
- 108700021018 S100 Proteins 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 5
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 102000051485 Bcl-2 family Human genes 0.000 description 4
- 108700038897 Bcl-2 family Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000009916 joint effect Effects 0.000 description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- KGRJPLRFGLMQMV-UHFFFAOYSA-N 1-[(3,4-dichlorophenyl)methyl]indole-2,3-dione Chemical compound C1=C(Cl)C(Cl)=CC=C1CN1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=O KGRJPLRFGLMQMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010089941 Apoptosomes Proteins 0.000 description 3
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 3
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 3
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 3
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 3
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 3
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 3
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 3
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 3
- 150000007980 azole derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- -1 t-butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 102000007272 Apoptosis Inducing Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010033604 Apoptosis Inducing Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108700000712 BH3 Interacting Domain Death Agonist Proteins 0.000 description 2
- 102000055105 BH3 Interacting Domain Death Agonist Human genes 0.000 description 2
- 102000004039 Caspase-9 Human genes 0.000 description 2
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 2
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100021008 Endonuclease G, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700019404 Pro-Gly-Pro- ACTH (4-7) Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 108010047964 endonuclease G Proteins 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N semax Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CNC=N1 AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 101150013616 BHRF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 101150082208 DIABLO gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100028559 Death domain-associated protein 6 Human genes 0.000 description 1
- 101710091772 Death domain-associated protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 102100033189 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Human genes 0.000 description 1
- 101710101225 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Proteins 0.000 description 1
- 101100044298 Drosophila melanogaster fand gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000699762 Homo sapiens RNA 3'-terminal phosphate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100122503 Human herpesvirus 6A (strain Uganda-1102) gN gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 101100007739 Neosartorya fumigata (strain ATCC MYA-4609 / Af293 / CBS 101355 / FGSC A1100) crmA gene Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 101100335198 Pneumocystis carinii fol1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100029143 RNA 3'-terminal phosphate cyclase Human genes 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102100021117 Serine protease HTRA2, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101710146118 Serine protease HTRA2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- JLYXXMFPNIAWKQ-SHFUYGGZSA-N alpha-hexachlorocyclohexane Chemical compound Cl[C@H]1[C@H](Cl)[C@@H](Cl)[C@H](Cl)[C@H](Cl)[C@H]1Cl JLYXXMFPNIAWKQ-SHFUYGGZSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005775 apoptotic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000005735 apoptotic response Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 108010007734 bcl-Associated Death Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007348 bcl-Associated Death Protein Human genes 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 108010079785 calpain inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 1
- 230000006721 cell death pathway Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000007960 cellular response to stress Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001966 cerebroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000007278 cognition impairment Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000002852 cysteine proteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N ethyl (2s,5s)-5-methylpyrrolidine-2-carboxylate;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)[C@@H]1CC[C@H](C)N1 VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000034725 extrinsic apoptotic signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 108010052621 fas Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018823 fas Receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229940093334 flomax Drugs 0.000 description 1
- 238000005206 flow analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004536 heart mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000006667 mitochondrial pathway Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000006654 negative regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 230000009223 neuronal apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000041788 p53 family Human genes 0.000 description 1
- 108091075611 p53 family Proteins 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002695 phenobarbital Drugs 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- OLBCVFGFOZPWHH-UHFFFAOYSA-N propofol Chemical compound CC(C)C1=CC=CC(C(C)C)=C1O OLBCVFGFOZPWHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004134 propofol Drugs 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000021014 regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000019432 tissue death Effects 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000717 tumor promoter Substances 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000007473 univariate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Cardiology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к применению пептида общей формулы CHCO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NHдля профилактики апоптотической гибели нейронов, где пептид вводят до повреждения головного мозга в течение 5 суток. 7 ил., 4 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к биохимии, конкретнее к биологически активным пептидам, обладающим антиапоптотической активностью, которые могут найти применение в медицине и фармакологии для профилактики и/или лечения функциональных нарушений, возникающих при патологическом развитии процесса апоптоза.
Апоптоз представляет собой регулируемый способ программируемой гибели клеток, который происходит в нормальных физиологических условиях [R.S. Hotchkiss, A. Strasser, J.E. McDunn, Р.Е. Swanson, Cell death, N Engl J. Med. 361 (2009) 1570-1583; A.H. Wyllie, «Where, о death, is thy sting?» a brief review of apoptosis biology, Mol. Neurobiol. 42 (2010) 4-9; S. Fulda, A.M. Gorman, O. Hori, A. Samali, Cellular stress responses: cell survival and cell death, Int. J. Cell Biol. (2010) 214074]. Апоптоз крайне важен для выживания многоклеточных организмов, позволяя избавляться от поврежденных или инфицированных клеток, которые могут влиять на нормальное функционирование [A. Ben Younes, М.С. Maiuri, S. Lavandero, G. Kroemer, Senescence, apoptosis or autophagy? When a damaged cell must decide its path-a mini-review, Gerontology 54 (2008) 92-99; K. Labbe, M. Saleh, Cell death in the host response to infection, Cell Death Differ. 15 (2008) 1339-1349]. Апоптоз чаще всего участвует в процессах нормального возобновления клеток, тканевого гомеостаза, эмбриогенеза, развитии нервной системы и эндокринзависимой атрофии тканей. Клетки, подвергающиеся апоптозу, проявляют характерные морфологические и биохимические особенности. Эти особенности включают агрегацию хроматина, ядерную и цитоплазматическую конденсацию, разделение цитоплазмы и ядра связанные с мембраной пузырьки (апоптотические тела), которые содержат рибосомы, морфологически интактные митохондрии и ядерный материал. In vivo эти апоптотические тела быстро распознаются и фагоцитируются либо макрофагами, либо соседними эпителиальными клетками. Благодаря этому эффективному механизму удаления апоптотических клеток in vivo не возникает воспалительной реакции. In vitro апоптотические тела, а также оставшиеся фрагменты клеток в конечном итоге набухают и лизируются. Поддержание баланса между пролиферацией клеток и клеточной смертью имеет решающее значение для гомеостаза тканей и органов. В общих чертах сдвиг в сторону клеточной пролиферации приводит к новообразованиям, в то время как избыточная гибель клеток вызывает воспалительные реакции.
В настоящее время относительно хорошо изучены два пути развития апоптотического процесса: внешний и внутренний, они стимулируются внеклеточными и внутриклеточными сигналами соответственно [L. Duprez, Е. Wirawan, Т. Vanden Berghe, P. Vandenabeele, Major cell death pathways at a glance, Microbes Infect. 11 (2009) 1050-1062; M.R. Sprick, H. Walczak, The interplay between the Bcl-2 family and death receptor-mediated apoptosis, Biochim. Biophys. Acta 1644 (2004) 125-132]. Внешний путь опосредуется подгруппой рецепторов фактора некроза опухоли (TNFR) - надсемейством, которое включает TNFR, Fas и TRAIL. Активация этих так называемых «рецепторов смерти» приводит к рекрутированию и активации инициирующих каспаз, таких как каспазы 8 и 10. Процесс включает образование и активацию таких комплексов, как смерть индуцирующий сигнальный комплекс (DISC). Это приводит к активации эффекторной каспазы, как правило каспазы 3. Активированная каспаза 3 отвечает за расщепление ряда так называемых субстратов смерти, это приводит к появлению характерных маркеров апоптотической клетки, таких как фрагментация ДНК, ядерная фрагментация, мембранный блеббинг и другие морфологические и биохимические изменения. Недавние данные свидетельствуют о еще большей сложности и разнообразии внешних путей развития апоптоза, которые могут включать также перекрестную активацию других апоптотических путей, таких как внутренние пути апоптоза, а также некротические пути [R.S. Whelan, V. Kaplinskiy, R.N. Kitsis, Cell death in the pathogenesis of heart disease: mechanisms and significance, Annu. Rev. Physiol. 72 (2010) 19-44].
Автономный, или внутренний, путь в основном регулируется митохондриями [S. Gupta, G.E. Kass, Е. Szegezdi, В. Joseph, The mitochondrial death pathway: apromising therapeutic target in Diseases, J. Cell. Mol. Med. 13 (2009) 1004-1033; J.K. Brunelle, A. Letai, Control of mitochondrial apoptosis by the Bcl-2 family, J. Cell Sci. 122 (2009) 437-441; L. Galluzzi, E. Morselli, О. Kepp, I. Vitale, A. Rigoni, E. Vacchelli, M. Michaud, H. Zischka, M. Castedo, G. Kroemer, Mitochondrial gateways to cancer, Mol. Aspects Med. 31 (2010) 1-20]. Наиболее хорошо изученная форма внутреннего пути апоптоза инициируется стресс-опосредованным выделением цитохрома с из митохондрий, что приводит к формированию апоптосомы. Затем апоптосома активирует инициирующую каспазу, обычно каспазу 9, что приводит к активации каспазы 3. Это приводит к развитию того же типа апоптотического ответа, какой наблюдается при внешнем пути активации апоптоза. В ответ на апоптотические стимулы, проапоптотические члены семейства белков Вс1-2 (Вах и Bak) активируются и действуют на митохондрии, индуцируя выделение цитохрома С. Другие проапоптотические белки, также выделяемые митохондриями, такие как Smac/Diablo (второй митохондриальный активатор каспаз/прямой IAP-связывающий белок с низкой pi), сериновая протеаза Omi/HtrA2, эндонуклеаза G (EndoG) и апоптоз-индуцирующий фактор (AIF) [А.В. Gustafsson, R.A. Gottlieb, Heart mitochondria: gates of life and death, Cardiovasc. Res. 77 (2008) 334-343; D. Brenner, T.W. Mak, Mitochondrial cell death effectors, Curr. Opin. Cell Biol. 21 (2009) 871-877; C. Wang, R.J. Youle, The role of mitochondria in apoptosis, Annu. Rev. Genet. 43 (2009) 95-118]. Эти примеры демонстрируют центральную роль митохондрий в регулируемом и сложном процессе запрограммированной гибели клеток [L. Galluzzi, Е. Morselli, О. Керр, G. Kroemer, Targeting post-mitochondrial effectors of apoptosis for neuroprotection, Biochim. Biophys. Acta 1787 (2009) 402-413; W.C. Cheng, K.M. Leach, J.M. Hardwick, Mitochondrial death pathways in yeast and mammalian cells, Biochim. Biophys. Acta 1783 (2008) 1272-1279; P. Nagley, G.C. Higgins, J.D. Atkin, P.M. Beart, Multifaceted deaths orchestrated by mitochondria in neurones, Biochim. Biophys. Acta 1802 (2010) 167-185]. Как упоминалось выше, активация митохондриального пути может также возникать после активации внешнего пути апоптоза. Это происходит через опосредованное каспазой 8 расщепление члена проапоптотического семейства Вс1-2 - белка Bid -приводящее к его активированной форме tBid [J.K. Brunelle, A. Letai, Control of mitochondrial apoptosis by the Bcl-2 family, J. Cell Sci. 122 (2009) 437-441].
На апоптоз клетки может влиять широкий спектр регуляторных стимулов. Отклонения в способности клеток к выживанию способствуют патогенезу ряда заболеваний человека, включая рак, вирусные инфекции, аутоиммунные заболевания, нейродегенеративные расстройства и СПИД. Средства, специфически меняющие апоптотический порог, могут иметь важное значение для лечения некоторых из этих заболеваний [Thompson, С. Apoptosis in the Pathogenesis and Treatment of Disease. Science, 1995, 267(5203):1456-1462]. Такие заболевания, как, например, рак, характеризуются накоплением клеток из-за повышения их выживаемости, связанного с ингибированием апоптоза. Другие заболевания характеризуются увеличением уровня апоптотической гибели клеток, например, СПИД, нейродегенеративные расстройства, такие как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, или инфаркт миокарда и инсульт, а также токсин-индуцированные заболевания печени. Чрезмерная гибель клеток может быть вызвана действием приобретенных или генетических факторов, которые усиливают накопление сигналов, вызывающих апоптоз, или снижают пороговый уровень таких сигналов. Как в нормальном, так и в патологическом апоптозе участвуют одни и те же молекулярные механизмы, ведущие к дегенерации нейронов, однако основное различие заключается в недостаточном контроле над запуском апоптотических процессов в патологически измененной нервной ткани. Поэтому при неврологических заболеваниях важно снижать активность апоптотических процессов.
В настоящее время сигнальный путь активируемый протеинкиназой В (Akt/PKB) признан одним из наиболее важных путей регуляции выживаемости клеток. Активация этого пути позволяет клеткам противостоять апоптотическим стимулам [Yao R., Cooper G.M., Requirement for phosphatidylinositol-3 kinase in the prevention of apoptosis by nerve growth factor, 1995, Science, 267:2003-2006]. Akt/PKB, активированная Р13-киназой, является основным медиатором выживаемости клеток. Akt/PKB оказывает прямое влияние на сигнальные пути апоптоза, например, таргетирует проапоптотический белок семейства Bcl-2 - BAD. Она также изменяет транскрипционный ответ на апоптотические стимулы, например, воздействуя на факторы Forkhead и активность белков семейства р53.
Известно несколько типов ингибиторов апоптоза. Физиологические ингибиторы включают, например, факторы роста, внеклеточный матрикс, лиганд CD40, нейтральные аминокислоты, цинк, эстроген и андрогены. Известны такие вирусные гены, ингибирующие апоптоз, как аденовирусный Е1В, crmA вируса коровьей оспы, BHRF1 и LMP-1 вируса Эпштейна - Барр и герпесвирусный гамма(1)34.5. В качестве фармакологических агентов, которые ингибируют апоптоз, используют ингибиторы кальпаина, ингибиторы цистеиновой протеазы и опухолевые промоторы РМА, фенобарбитал и альфа-гексахлорциклогексан [Thompson, С. Apoptosis in the Pathogenesis and Treatment of Disease. Science, 1995, 267(5203):1456-1462]. Однако эти ингибиторы не подходят для лечения заболеваний, связанных с увеличением апоптоза, поскольку все они являются патогенными.
Из заявки US 2014323394 А1 (2014) известно использование трипептида (L-Lys)-(D-Pro)-(L-Thr) (KdPT) или его фармацевтически приемлемых солей для терапевтического, профилактического или косметического лечения заболевания с повышенным апоптозом, причем лечение имеет антиапоптотический эффект.
Из заявки JP 2002316929 А (2002) известны L-серин или глицин, способствующие экспрессии гена Bcl-w и используемые в качестве антиапоптотического агента и средства для ухода за кожей, а также препарат для наружного применения, состоящий из L-серина и/или глицина. Препарат может применяться для уменьшения симптомов старения кожи или слизистой оболочки или для заживления ран.
Из патента RU 2582247 (2016) известны биологически активные фрагменты из 17-24 последовательных аминокислот белка Daxx, включающих KKSRKEKKQTGSGPLG, а также их пептидомиметики и конъюгаты с проникающим в клетки пептидом. Упомянутые фрагменты позволяют эффективно ингибировать апоптоз клеток, в частности апоптоз клеток, опосредованный рецептором Fas, и могут быть использованы в медицине для лечения острого инфаркта миокарда, церебрального инфаркта, при трансплантации органов, операциях на сердце, острых нарушениях кровообращения, реперфузионных повреждениях и ишемии.
Из патента RU 2586772 (2014) известна фармацевтическая композиция для ингибирования апоптоза нейронов или нейродегенерации, включающая терапевтически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из замещенного производного азола, его фармацевтически приемлемых солей, изомеров замещенного производного азола, сольватов замещенного производного азола, и их сочетания; и фармацевтически приемлемый носитель. Композиция может быть использована для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения нейродегенеративных заболеваний
Из статьи: Бердалин А.Б., Гаврилова С.А., Голубева А.В., Буравков С.В., Кошелев В.Б. Влияние Семакса на апоптотическую гибель кардиомиоцитов крыс при необратимой ишемии и ишемии-реперфузии // Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. 2011;19(2):2-2 известно, что имеющийся на рынке пептидный препарат Семакс, представляющий собой модифицированный фрагмент АКТГ, способен снижать апоптотический индекс в областях, непосредственно не затронутых ишемией в двух моделях инфаркта миокарда: необратимой ишемии и ишемии-реперфузии.
Однако все описанные средства предназначены для введения пациенту в то время, когда процесс апоптоза уже запущен, и возможностей повлиять на процесс апоптотической гибели клеток гораздо меньше. Поэтому актуальным является поиск новых средств, предназначенных для предотвращения и профилактики апоптотической гибели клеток, повышения их устойчивости к патологическому процессу апоптоза, тесно связанному с нейродегенеративными заболеваниями.
Задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, было расширение ассортимента эффективных средств, обладающих антиапоптотической активностью, средств, которые могут быть использованы для профилактики развития патологического апоптоза.
Техническая задача была решена в ходе исследования пептидов, входящих в состав природных гормонов, регулирующих жизнедеятельность высших организмов. Поставленная задача решается тем, что предложен синтетический пептид КК-1, проявляющий антиапоптотическую активность и имеющий формулу CH3CO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NH2.
Сущность изобретения заключается в том, что экспериментальным путем было установлено, что указанный пептид обладает выраженными антиапоптотическими свойствами. Заявленный пептид способен снижать уровень маркеров цитолиза (NSE и S-100), рилизинг которых прямо коррелируют с объемом очага некротической гибели нейронов при ишемии головного мозга. Снижение уровня фрагментированной ДНК, которое наблюдается при курсовом введении заявленного пептида в течение 5 суток до реперфузионного повреждения головного мозга, указывает на его антиапоптическую активность при использовании в качестве профилактического средства. Установлено также, что антиапоптотическая активность КК-1 опосредована активацией в интактных клетках киназы Akt1, способствующей их выживанию через ингибирование ряда ключевых элементов активации апоптоза, в частности, фосфорилированных форм каспазы 8 и белков Bad и р53. Вполне вероятно, что пептид КК-1 является позитивным регулятором внутриклеточного сигнального пути PI3K/Akt/mTOR.
Изобретение иллюстрируется следующими графическими материалами
На Фиг. 1. представлен график изменения усредненного клеточного индекса клеток линии SH-SY5Y от времени инкубирования с 5 мкМ активатора апоптоза (нижний график) и при действии комплекса 5 мкМ активатора апоптоза и 1 мкМ пептида КК-1 (верхний график). Момент добавления веществ соответствует 22 часам.
На Фиг. 2. представлена ящичная диаграмма определения флуоресценции активной формы каспазы-8 в лизатах клеток SH-SY5Y через 24 часа после добавления активатора апоптоза, КК-1 и при их совместном действии.
На Фиг. 3. представлена ящичная диаграмма определения флуоресценции активной формы Akt1 в лизатах клеток SH-SY5Y при действии активатора апоптоза, КК-1 и при их совместном действии.
На Фиг. 4. представлена ящичная диаграмма определения флуоресценции активной формы Bad в лизатах клеток SH-SY5Y при действии активатора апоптоза, КК-1 и при их совместном действии.
На Фиг. 5. представлена ящичная диаграмма определения флуоресценции активной формы белка р53 в лизатах клеток SH-SY5Y при действии активатора апоптоза, КК-1 и при их совместном действии.
На Фиг. 6. представлена типичная гистограмма распределения уровня фрагментированной ДНК в ядрах нейронов коры головного мозга крысы из группы контрольной патологии. Фрагментация ДНК составила 17,94%.
На Фиг. 7. представлена типичная гистограмма распределения уровня фрагментированной ДНК в ядрах нейронов коры головного мозга крысы из группы, получавшей КК-1. Фрагментация ДНК составила 6,78%.
Сущность и промышленная применимость изобретения поясняются следующими примерами.
Пример 1. Синтез пептида.
Пептидный гомолог фрагмента АКТГ15-18 CH3CO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NH2 под шифром КК-1 синтезирован в ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» ФМБА России (Санкт-Петербург). Синтез пептида CH3CO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NH2 был проведен твердофазным методом с использованием Boc/Bzl стратегии на синтезаторе пептидов Coupler-250. Для временной защиты а-аминофункции использовали трет-бутилоксикарбонильную группу. Для блокирования боковых радикалов аргинина и лизина использовали мезитиленсульфонильную и 2-хлорбензилоксикарбонильную группировки соответственно.
В качестве нерастворимой матрицы был использован 4-метил-бензгидриламинополимер (m-BHA-resin) с начальной емкостью 1 мМ/г. 2,9 г ВНА-полимера поместили в реакционный сосуд синтезатора и проводили наращивание полипептидной цепи по следующей программе присоединения одного аминокислотного остатка (Таблица 1). Удаление временной защитной группы проводили трифторуксусной кислотой, нейтрализацию - 5% раствором диизопропилэтиламина в диметилформамиде. Конденсацию осуществляли методом активированных эфиров, используя трехкратный избыток соответствующего активированного компонента. Предварительное активирование карбоксильной компоненты проводили в течение 30 минут, используя оксибензотриазол и диизопропилкарбодиимид. Для контроля полноты протекания реакции конденсации использовали нингидриновый тест. После присоединения аминокислотных остатков, соответствующих последовательности синтезируемого пептида, проводили ацетилирование N-концевой аминогруппы, используя 40 эквивалентов уксусного ангидрида (5 мл) в 25 мл диметилформамида. Затем пептидил-полимер высушивали в эксикаторе до постоянного веса. Выход защищенного пептидил-полимера 96%. При такой обработке удалялись все боковые защитные группировки, и пептид отщеплялся от высокомолекулярной матрицы, время деблокирования составляло один час.
Удаление боковых защитных группировок и отщепление пептида от нерастворимой матрицы проводили под действием безводного жидкого фтористого водорода в присутствии скавенджеров. 3,5 г пептидил-полимера обрабатывали 27 мл фтористого водорода и 3 мл м-крезола при 0°С и перемешивании на магнитной мешалке в течение 1 часа. Затем фтористый водород упаривали и суспендировали остаток в 50 мл 50% раствора уксусной кислоты в воде. Раствор фильтровали и экстрагировали 3 раза по 10 мл эфиром. После лиофилизации водного раствора получено 1,4 г грубого продукта.
Синтезированный пептидный препарат был очищен с помощью препаративной обращенно-фазовой жидкостной хроматографии на колонке Prep-Nova-Pak HR С18, 6 мкм, 60 , (19×300 мм), Waters, США и охарактеризован данными аминокислотного анализа (аминокислотный анализатор Alpha Plus, LKB, Швеция) и масс-спектрометрии (масс-спектрометр Per Sepetive Biosystems «Voyager-DE Biospectrometry Workstation))). Аминокислотный состав конечного продукта соответствовал теоретическому. Чистота по данным аналитической ВЭЖХ составила не менее 98%. Выход конечного продукта - 50%.
Перевод пептида в ацетатную форму осуществляли по следующей процедуре: 450 мг полученного пептида в форме трифторацетатной соли растворили в 45 мл деионизованной воды, добавили смолу IRA-68 в ацетатной форме и перемешивали в течение 30 минут. Затем полимер отфильтровали, промыли водой, фильтрат и промывные воды объединили и лиофилизировали. Получено 350 мг КК-1 в ацетатной форме (74%).
Пример 2. Влияние КК-1 на уровень маркеров апоптоза.
Клетки нейробластомы человека линии SH-SY5Y (ATCC,CRL-2266) культивировали во флаконах в среде DMEM/F12 (Биолот, Санкт-Петербург) с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков стрептомицина-пенициллина при температуре 37°С в СО2-инкубаторе в атмосфере 5% CO2.
Для определения интегрального клеточного ответа с помощью оборудования xCelligence RTCA (AceaBioscience, США) 20 тыс.клеток вносили в лунку специализированного планшета, позволяющего определять клеточный индекс в режиме реального времени, и культивировали в полной среде DMEM/F12. На следующий день после пассажа к клеткам добавляли равный объем среды, содержащей 2-кратные концентрации активатора апоптоза 2 и КК-1. Мониторинг клеточного индекса проводили в течение 3 дней после добавления ксенобиотика.
Для определения содержания молекулярных маркеров апоптоза клетки культивировали в 24-луночных планшетах, промывали на следующий день после пассажа и добавляли среду, содержащую активатор апоптоза 2 и КК-1. После 24-часовой инкубации определяли маркеры апоптоза в клеточных лизатах с использованием многопараметрической иммунофлуоресцентной технологии Luminex хМАР.
Для получения клеточных лизатов в лунку 24-луночного планшета добавляли 200 мкл лизирующего буфера (Merck/Millipore) с добавлением набора ингибиторов протеаз (Complete, Roche, Швейцария), ингибиторов фосфатаз (Phosphatase Inhibitor Cocktail 2, Sigma, США) и 25 Е/мл фермента бензоназы (Sigma, США) на 10 мин.
Экстракт центрифугировали при 20000 g при 40°С в течение 20 мин. В супернатанте определяли концентрацию белка по методу Лоури с использованием микропланшетного спектрофотометра Epoch (Biotek, США). Для дальнейшего анализа концентрацию белка в экстракте доводили до 0,4 мг/мл.
Анализ активированных фосфорилированных или протеолитически фрагментированных белков - маркеров апоптоза проводили с помощью иммунофлуоресцентного метода по технологии Luminex хМАР. Для анализа использовали набор реактивов для определения ранних маркеров апоптоза (7-Р1ех MILLIPLEX MAP Early Apoptosis Magnetic Bead Kit, Кат. №48-669 MAG, Merck/Millipore, США), который позволяет определять активированные фосфорилированные формы следующих белков: Akt1 (Ser473), р 53 (Ser46), BAD (Ser112), Bcl-2 (Ser70), JNK (Thr183/Tyr185), а также активных форм каспазы 8, гидролизованной по Asp384, и каспазы 9, гидролизованной по Asp315.
В культуры клеток нейробластомы в логарифмической фазе роста добавляли активатор апоптоза 2 в диапазоне значений конечной концентрации 1-20 мкМ, пептид КК-1 в конечной концентрации 1 мкМ, а также активатор апоптоза 2 совместно с КК-1.
Данные, полученные в ходе экспериментальных исследований, были статистически обработаны в программе Bio-Plex Data Pro Plus. Оценку различий средних значений проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA).
Полученные результаты показали, что КК-1 проявляет цитопротекторный эффект на фоне действия активатора апоптоза 2 (1-[(3,4-дихлорфенил)метил]-1H-индол-2,3-диона), который активирует апоптоз с IC50 4-9 мкМ, обеспечивая цитохром С-зависимую олигомеризацию белка Apaf-1 в зрелую апоптосому.
На Фигуре 1 представлен график изменения клеточного индекса от времени при действии на клетки активатора апоптоза (нижний график) и при действии комплекса активатор апоптоза - КК-1 (верхний график).
Активатор апоптоза в концентрации 5 мкМ способствует накоплению активной формы протеазы каспазы-8 (Фигура 2). Добавление 1 мкМ пептида в культуральную среду снижало уровень активной формы фермента до контрольного уровня. В интактных клетках КК-1 проявляет выраженную тенденцию к снижению уровня активной формы каспазы-8.
КК-1 достоверно увеличивает уровень активной формы белка Akt1 в интактных клетках (Фигура 3). На фоне активатора апоптоза содержание активной формы Akt1 в лизатах клеток SH-SY5Y также достоверно выше контрольного уровня.
В то же время КК-1 достоверно снижает уровень активной формы белка Bad и р53 относительно контрольного уровня (Фигуры 4 и 5).
Таким образом, КК-1 в концентрации 1 мкМ проявляет цитопротекторные и антиапоптотические свойства в клетках нейробластомы человека линии SH-SY5Y при действии 5 мкМ активатора апоптоза 2. Уровень клеточного индекса при действии комплекса активатор апоптоза 2 - пептид выше, чем при действии только активатора апоптоза 2. КК-1 снижает уровень активной формы каспазы-8, накопленной при действии активатора апоптоза 2, в клеточных лизатах SH-SY5Y. Кроме того, пептид значительно усиливает накопление в интактных клетках активной формы белка Akt1, фосфорилированной по Ser473, и снижает уровни активных форм белков Bad, фосфорилированного по Ser112, и р53, фосфорилированного по Ser46. Можно предположить, что в основе нейропротекторного действия КК-1 лежит антиапоптотическая активность, опосредованная активацией киназы Akt1, которая вовлечена в регуляцию роста и выживаемости клеток. Это свидетельствует о том, что заявляемый пептид КК-1 может быть использован в качестве профилактического средства при нейродегенеративных заболеваниях, тесно связанных с развитием патологического апоптоза.
Пример 3. Моделирование острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК): экспериментальная модель ишемии-реперфузии.
Эксперименты проводили на белых беспородных самцах крысы массой 160-170 г. Экспериментальную модель ишемии-реперфузии (ИР) воспроизводили путем наложения клипс на обе общие сонные артерии продолжительностью 20 минут под пропофоловым наркозом (60 мг/кг в/б).
Пример 4. Влияние КК-1 на уровень нейрон-специфической энолазы NSE и белка S-100.
20 белых беспородных самцов крысы массой 160-170 граммов рандомизировали на 4 группы по 5 особей:
1 группа - ложнооперированные;
2 группа - контрольная патология (КП);
3 группа - животные, получавшие цитиколин (Ferrer International S.A., Испания) в дозе 250 мг/кг внутрибрюшинно;
4 группа - животные, получавшие КК-1 в дозе 0,02 мг/кг интраназально.
ОНМК моделировали, как описано в примере 3.
КК-1 и препарат сравнения вводили один раз в день в -5 ÷ -1 дни до ОНМК. Псевдооперированные крысы претерпевали все этапы оперативного вмешательства, кроме наложения клипс. Животным группы КП интраназально вводили физиологический раствор.
Активность NSE и содержание белка S-100 в сыворотке крови измеряли на 4 сутки ИР (острая фаза ишемического повреждения) при помощи метода твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов NSE ELISA KIT (DAI, США) и S 100 ELISA KIT (Fujirebio Diagnostics Inc., Швеция) на приборе компании «Hipson» (Чешская Республика).
Нейрон-специфическая энолаза (NSE) и белок S-100 являются специфическими маркерами нейродеструкции, возникающей на фоне ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга [Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон; пер. с англ. Е.Н. Живописцевой; под ред. проф. А.С. Батуева. - М.: Высшая школа, 1991.-399 с].
Влияние КК-1 на динамику экспрессии этих нейрональных маркеров позволяет оценить выраженность возникающего при ишемии некроза ГМ, степень глиоцитарного замещения мозговой ткани, а также эффективность церебропротекторной терапии.
Как следует из данных, приведенных в Таблица 2, на 4 сутки реперфузионного периода уровень NSE в сыворотке крови крыс контрольной группы возрастал на 139% по сравнению с уровнем NSE в сыворотке крови ложнооперированных животных (р<0,05).
ЛО - группа ложнооперированных животных (группа 1).
Статистически значимые различия (р≤0,05): * - с группой ложнооперированных животных, ^ - с группой цитиколина, ! - с группой модельной патологии.
В этих же условиях уровень другого маркера нейродеструкции - белка S-100 - повышался в 9,6 раза (р<0,05) (
Таблица 3). Это свидетельствует в пользу активно развивающейся очаговой гибели ткани головного мозга и превалировании некротического типа гибели нейронов над апоптотическим [Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон; пер. с англ. Е.Н. Живописцевой; под ред. проф. А.С. Батуева. - М.: Высшая школа, 1991.-399 с; Рациональная нейропротекция / И.Ф. Беленичев, В.И. Черний, Ю.М. Колесник и др. -Донецк: Издатель Заславский А.Ю., 2009 - 262 с; Manual of Stroke Models in Rats / Edited by Yanling Wang-Fisher. - London, New York: CRC Press, 2009. -332 p.].
JIO - группа ложнооперированных животных (группа 1).
Статистически значимые различия (р≤0,05): * - с группой ложнооперированных животных, ^ - с группой цитиколина, ! - с группой модельной патологии.
Установлено, что курсовое введение пептида до ОНМК препятствует резкому возрастанию уровней NSE и S-100. Так, уровень NSE возрастал всего на 19% по сравнению с показателем у условно интактных животных. Это в 7,3 и 2,4 раза меньше показателей у группы КП и группы, получавшей препарат сравнения цитиколин, соответственно (р<0,05). Также наблюдался гораздо менее выраженный рост уровня белка S-100 в сыворотке крови крыс с реперфузионным повреждением головного мозга. Он оказался на 168% выше уровня белка S-100 у ложнооперированных крыс и был в 5,1 и 2,4 раза меньшим от показателей у группы КП и группы, получавшей препарат сравнения цитиколин, соответственно (Р<0,05).
Снижение уровня маркеров нейродеструкции на фоне профилактического применения КК-1 свидетельствует об уменьшении очага некротической гибели нейронов в зоне ишемии, а также об угасании процесса глиоцитарного замещения погибших нейронов. Такое действие КК-1 объясняет его способность повышать выживаемость, снижать неврологический и когнитивный дефицит при ОНМК, оказывая, таким образом, интегральный защитный эффект при ишемии головного мозга.
Пример 5. Влияние КК-1 на уровень фрагментации ДНК. 20 белых беспородных самцов крысы массой 160-170 граммов рандомизировали на 4 группы по 5 особей:
1 группа - ложнооперированные;
2 группа - контрольная патология (КП);
3 группа - животные, получавшие цитиколин (Ferrer International S.A., Испания) в дозе 250 мг/кг внутрибрюшинно;
4 группа - животные, получавшие КК-1 в дозе 0,02 мг/кг интраназально.
ОНМК моделировали, как описано в примере 3.
КК-1 и препарат сравнения вводили один раз в день в -5 ÷ -1 дни до ОНМК. Псевдооперированные крысы претерпевали все этапы оперативного вмешательства, кроме наложения клипс. Животным группы КП интраназально вводили физиологический раствор.
После 72 часов реперфузионного периода крыс декапитировали и извлекали лобные части головного мозга (ГМ). Фрагментацию ДНК в ядрах нейронов лобной части ГМ крыс исследовали методом проточной цитометрии. Суспензию ядер получали путем добавления к ткани мозга специального раствора для исследования ядерной ДНК: CyStain DNA (Partec, Германия). Этот раствор позволяет одновременно экстрагировать ядра и метить ядерную ДНК диамидинофенилиндолом (DAPI). В процессе приготовления ядерных суспензий использовали специальные одноразовые фильтры CellTrics 50 мкм (Partec, Германия). Ядерные суспензии биоптата мозга готовили сразу после забора материала и промывки холодным, от +4° до +8°С, фосфатно-солевым буфером рН 7,4 (Sigma, США). Анализ проводили на многофункциональном научно-исследовательском проточном цитометре «Partec PAS» (Partec, Германия). Для возбуждения флуоресценции DAPI использовали ультрафиолетовую лампу. Из каждого образца ядерной суспензии проводили анализ 10 тыс.событий.
Распределение ДНК у разных животных оценивали на гистограммах с использованием линейной шкалы. Проточный анализ фрагментации ДНК выполняли с использованием программного обеспечения FloMax (Partec, Германия) путем выделения Sub-G1 участка на ДНК-гистограммах.
Экспериментальные данные, приведенные в Таблица 4, свидетельствуют о статистически достоверном возрастании уровня фрагментированной ДНК в группе контрольной патологии в 2,7 раза через 72 часа после моделирования ОНМК. Такая динамика указывает на формирование очага повреждения мозговой ткани, в котором превалирует апоптотическая гибель нейронов.
ЛО - группа ложнооперированных животных (группа 1).
Статистически значимые различия (р≤0,05): * - с группой ложнооперированных животных, ^ - с группой цитиколина, ! - с группой модельной патологии.
Типичные гистограммы распределения уровня фрагментированной ДНК в ядрах нейронов коры головного мозга крысы из группы контрольной патологии и группы, получавшей КК-1, приведены на Фигурах 6 и 7. КК-1 и препарат сравнения цитиколин при пятикратном ежедневном введении до нанесения травмы статистически достоверно уменьшали количество фрагментированной ДНК в нейронах коры лобной доли ГМ крыс с моделью ОНМК. На фоне их введения этот показатель снижался относительно группы КП в 1,7 и 1,3 раза соответственно (р<0,05).
Поскольку фрагментация ядерной ДНК служит маркером ранних стадий апоптоза, можно сделать вывод, что КК-1 реализует церебропротекторное действие за счет предотвращения апоптотической гибели нейронов. Антиапоптотическая активность пептида во многом объясняет его положительное влияние на гистологическую структуру коры ГМ при экспериментальном ОНМК.
Таким образом, заявленный пептид КК-1 - аналог фрагмента АКТГ15.18, имеющий формулу CH3CO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NH2, обладает выраженными апоптотическими свойствами при профилактическом использовании. Заявленный пептид достоверно снижает уровень маркеров цитолиза (NSE и S-100), рилизинг которых прямо коррелирует с объемом очага некротической гибели нейронов при ишемии головного мозга. Снижение уровня фрагментированной ДНК, которое наблюдается при профилактике реперфузионного повреждения головного мозга пептидом, указывает на его профилактическую антиапоптическую активность. Уменьшая зону некроза и препятствуя апоптической гибели нейронов в зоне пенумбры, КК-1 оказывает интегральное нейропротекторное действие.
Установлено, что профилактическая антиапоптотическая активность КК-1 опосредована активацией киназы Akt1, способствующей выживанию клеток через ингибирование ряда ключевых элементов активации апоптоза, в частности, фосфорилированных форм каспазы 8 и белков Bad и р53. Вполне вероятно, что пептид КК-1 является позитивным регулятором внутриклеточного сигнального пути PI3K/Akt/mTOR.
Заявитель просит рассмотреть представленные материалы заявки «Средство, обладающее антиапоптотическим действием» на предмет выдачи патента РФ на изобретение.
Claims (1)
- Применение пептида общей формулы CH3CO-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-NH2 для профилактики апоптотической гибели нейронов, где пептид вводят до повреждения головного мозга в течение 5 суток.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018119958A RU2685428C1 (ru) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | Средство, обладающее антиапоптотической активностью |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018119958A RU2685428C1 (ru) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | Средство, обладающее антиапоптотической активностью |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2685428C1 true RU2685428C1 (ru) | 2019-04-18 |
Family
ID=66168387
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018119958A RU2685428C1 (ru) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | Средство, обладающее антиапоптотической активностью |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2685428C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2763136C1 (ru) * | 2021-03-17 | 2021-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью «Научно-Производственная Фирма Верта» | Фармацевтически приемлемые соли пептида ацетил-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-амида |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2537560C2 (ru) * | 2013-04-25 | 2015-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма "ВЕРТА" | Тетрапептид и средство, обладающее церебропротекторной и антиамнестической активностями (варианты) |
-
2018
- 2018-05-30 RU RU2018119958A patent/RU2685428C1/ru active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2537560C2 (ru) * | 2013-04-25 | 2015-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма "ВЕРТА" | Тетрапептид и средство, обладающее церебропротекторной и антиамнестической активностями (варианты) |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Дейко Р.Д. и др. "Влияние потенциального нейропротектора Acetyl-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-Amide (КК-1) на нейродеструкцию и нейроапоптоз у крыс при остром нарушении мозгового кровообращения", Вестник фармации No1(71), 2016, стр. 96-102. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2763136C1 (ru) * | 2021-03-17 | 2021-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью «Научно-Производственная Фирма Верта» | Фармацевтически приемлемые соли пептида ацетил-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-амида |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Saile et al. | CD95/CD95L-mediated apoptosis of the hepatic stellate cell. A mechanism terminating uncontrolled hepatic stellate cell proliferation during hepatic tissue repair. | |
Philchenkov | Caspases as regulators of apoptosis and other cell functions | |
Kaiser et al. | The Drosophila inhibitor of apoptosis D-IAP1 suppresses cell death induced by the caspase drICE | |
Lazarowski et al. | Neuronal and glial expression of the multidrug resistance gene product in an experimental epilepsy model | |
KR20040074975A (ko) | 유전자 조절 펩티드 | |
JP6938154B2 (ja) | 未分化細胞が除去された分化誘導細胞集団、その利用及びその製造方法 | |
US20090227521A1 (en) | Use of compounds in the treatment of ischemia and neurodegeneration | |
DE69616829T2 (de) | Screeningsverfahrens zum nachweiss induzierfaktors und inhibitionfaktors von "programmed cell death" (apoptosis). | |
Donovan et al. | Decreased expression of pro-apoptotic Bcl-2 family members during retinal development and differential sensitivity to cell death | |
US20090042807A1 (en) | Oligopeptide treatment of ischemia reperfusion injury | |
Mohammad-Gharibani et al. | Mode of action of S-methyl-N, N-diethylthiocarbamate sulfoxide (DETC-MeSO) as a novel therapy for stroke in a rat model | |
RU2685428C1 (ru) | Средство, обладающее антиапоптотической активностью | |
Kumar et al. | Anti-apoptotic effect of buffalo milk casein derived bioactive peptide by directing Nrf2 regulation in starving fibroblasts | |
Oursler et al. | Native, not nitrated, cytochrome c and mitochondria-derived hydrogen peroxide drive osteoclast apoptosis | |
HU182087B (en) | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia | |
WO2008036717A2 (en) | Use of soluble galectin-3 (gal-3) for cancer treatment | |
KR20200049676A (ko) | 분리된 미토콘드리아를 포함하는 건병증 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
RU2482128C1 (ru) | Пептиды, обладающие цитопротекторной активностью | |
WO2003051377A1 (en) | Method for preparing fetuin and polypeptide to induce apoptosis | |
Knorr et al. | The cytokine receptor CRLF3 is a human neuroprotective EV-3 (Epo) receptor | |
RU2163129C1 (ru) | Способ получения из животного сырья комплекса биологически активных полипептидов, обладающих антиоксидантным и геропротекторным действием, фармакологическое средство и способ его применения | |
Kane et al. | Transcription factors as therapeutic targets in CNS disorders | |
Nyormoi et al. | Sequence-based discovery of a synthetic peptide inhibitor of caspase 6 | |
Ziori et al. | Apoptosis in heart failure | |
Hu et al. | Protein aggregation, unfolded protein response and delayed neuronal death after brain ischemia |