RU2681854C1 - Method for the treatment of nonscarring alopecia - Google Patents
Method for the treatment of nonscarring alopecia Download PDFInfo
- Publication number
- RU2681854C1 RU2681854C1 RU2018134610A RU2018134610A RU2681854C1 RU 2681854 C1 RU2681854 C1 RU 2681854C1 RU 2018134610 A RU2018134610 A RU 2018134610A RU 2018134610 A RU2018134610 A RU 2018134610A RU 2681854 C1 RU2681854 C1 RU 2681854C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- hair
- transferred
- treatment
- cellular material
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 22
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims abstract description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims abstract 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 claims description 7
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 abstract 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 5
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 4
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 4
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000000694 mesotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 1
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 201000002996 androgenic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000640 hair analysis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/01—Hydrocarbons
- A61K31/015—Hydrocarbons carbocyclic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к эстетической медицине и может быть использовано для лечения алопеций.The invention relates to aesthetic medicine and can be used to treat alopecia.
Известен способ лечения нарушения роста волос [RU 2381786, С2, А61К 8/37, 20.02.2010], включающий введение пациенту алкилового эфира никотиновой кислоты с алкильной группой с прямой цепью или разветвленной цепью, содержащей от приблизительно 6 до приблизительно 22 СН2 групп в количестве, достаточном для снижения или для прекращения выпадения волос у указанного субъекта.A known method of treating hair growth disorders [RU 2381786, C2, A61K 8/37, 02/20/2010], comprising administering to the patient an alkyl ester of nicotinic acid with a straight chain or branched chain alkyl group containing from about 6 to about 22 CH 2 groups per an amount sufficient to reduce or stop hair loss in the specified subject.
Недостатком способа является относительно низкая эффективность лечения.The disadvantage of this method is the relatively low treatment efficiency.
Известен также способ [RU 2295304, С2, А61В 17/00, 20.03.2007], основанный на том, что в затылочной области головы пациента вырезают кожную полоску с волосяными фолликулами, ушивают донорскую рану, из кожной полоски формируют фолликулярные объединения-графты, для пересадки заготовленных графтов в затылочной области головы и на макушке формируют микроотверстия, направления каналов которых соответствуют направлению роста волос, причем для формирования отверстий разрезы производят параллельно донорской ране.There is also known a method [RU 2295304, C2, A61B 17/00, 03/20/2007], based on the fact that a skin strip with hair follicles is cut out in the occipital region of the patient’s head, a donor wound is sutured, follicular grafts are formed from the skin strip, for transplants of harvested grafts in the occipital region of the head and on the top of the head form micro holes, the channel directions of which correspond to the direction of hair growth, and for forming holes, the cuts are made parallel to the donor wound.
Недостатком этого способа также является относительно низкая эффективность лечения.The disadvantage of this method is also the relatively low effectiveness of the treatment.
Кроме того, известен способ [RU 2550428, C1, А61В 17/00, 10.05.2015], включающий забор фрагмента кожного имплантата из волосистой области, наложение на образовавшийся дефект косметического шва, деление вырезанного фрагмента на фолликулярные графты, образование микронадрезов на реципиентной области и пересадку в них фолликулярных графтов, при этом перед забором фрагмента кожного имплантата с помощью компьютерной программы TrichoSciencePro v 1.1 рассчитывают площадь реципиентной области, проводят фототрихограмму, оценивая жизнеспособность волосяных фолликулов, на основании полученных данных определяют требуемое количество волосяных фолликулов, затем на реципиентную область наносят «шаблон», после чего на 30% реципиентной области формируют микронадрезы диаметром 1,0 мм для пересадки 2-х и 3-х жизнеспособных фолликулярных графтов и одиночных волосяных фолликулов, которые вводят с помощью одноразовых игл диаметром 0,8-1,0 мм.In addition, a method is known [RU 2550428, C1, A61B 17/00, 05/10/2015], which includes taking a fragment of a skin implant from the hairy region, applying a cosmetic suture to the defect that has formed, dividing the cut fragment into follicular grafts, forming micro-incisions in the recipient region and transplantation of follicular grafts into them; in this case, the area of the recipient area is calculated using the TrichoSciencePro v 1.1 computer program before taking a fragment of the skin implant, a phototrichogram is performed, assessing the viability of the hair follicle , on the basis of the data obtained, the required number of hair follicles is determined, then a “template” is applied to the recipient region, after which micronadres with a diameter of 1.0 mm are formed on 30% of the recipient region to transplant 2 and 3 viable follicular grafts and single hair follicles that are injected using disposable needles with a diameter of 0.8-1.0 mm
Недостатком этого технического решения является относительно низкая эффективность, обусловленная малой приживаемостью волос.The disadvantage of this technical solution is the relatively low efficiency due to the low survival rate of the hair.
Еще одним аналогом предложенного является способ [IBRAHIM ZA et al. Stem cell therapy as a novel therapeutic intervention for resistant cases of alopecia areata and androgenetic alopecia. J. Dermatolog Treat. 2016, Aug., 24:1-30; ZHAO J. et al. Treatment of alopecia by transplantation of hair follicle steam cells and dermal papilla cells encapsulated in algenate gels. Med. Hypotheses. 2008; 70(5): 1014-6], включающий использование мезенхимальных стволовых клеток, в том числе из волосяных фолликулов кожи, в т.ч. для интрадермального введения.Another analogue of the proposed is the method [IBRAHIM ZA et al. Stem cell therapy as a novel therapeutic intervention for resistant cases of alopecia areata and androgenetic alopecia. J. Dermatolog Treat. 2016, Aug., 24: 1-30; ZHAO J. et al. Treatment of alopecia by transplantation of hair follicle steam cells and dermal papilla cells encapsulated in algenate gels. Med. Hypotheses. 2008; 70 (5): 1014-6], including the use of mesenchymal stem cells, including from hair follicles of the skin, including for intradermal administration.
Недостатком указанных выше технических решений является относительно узкий арсенал способов лечения нерубцовой алопеции, что не всегда обеспечивает выбор эффективного способа.The disadvantage of the above technical solutions is the relatively narrow arsenal of methods for treating non-cicatricial alopecia, which does not always provide a choice of an effective method.
Наиболее близким по технической сущности к предложенному является способ лечения нерубцовой алопеции [RU 2631642, C1, А61М 5/00, А61K 35/28, А61Р 17/14, 25.09.2017], включающий введение в мезодермальный слой кожи мезенхимальных стволовых клеток, которые выделяют из биоптата кожи с волосистой части головы взрослого донора, при этом, дополнительно выделяют мезенхимальные стволовые клетки из плаценты, после чего указанные клетки смешивают в соотношении от 3:1 до 1:3, доводят объем смеси до 2-4 мл и вводят ее в мезодермальный слой кожи человека в зоне облысения на глубину 2-3 мм через каждые 2-3 мм при объеме каждой инъекции, равном 0,02 мл.The closest in technical essence to the proposed is a method for the treatment of non-cicatricial alopecia [RU 2631642, C1, A61M 5/00, A61K 35/28, A61P 17/14, 09/25/2017], which includes introducing mesenchymal stem cells into the mesoderm layer of the skin that secrete from a skin biopsy from the scalp of an adult donor, in addition, mesenchymal stem cells are isolated from the placenta, after which these cells are mixed in a ratio of 3: 1 to 1: 3, the mixture volume is adjusted to 2-4 ml and injected into the mesoderm layer of human skin in the bald zone in the depths Well, 2-3 mm every 2-3 mm with a volume of each injection equal to 0.02 ml.
Недостатком наиболее близкого технического решения является относительно низкая эффективность лечения.The disadvantage of the closest technical solution is the relatively low effectiveness of the treatment.
Задачей предложенного способа является расширение арсенала способов лечения нерубцовой алопеции и повышение эффективности лечения.The objective of the proposed method is to expand the arsenal of methods for treating non-cicatricial alopecia and increase the effectiveness of treatment.
Требуемый технический результат заключается в повышении эффективности лечения нерубцовой алопеции и расширение арсенала технических средств лечения алопеции.The required technical result is to increase the effectiveness of the treatment of non-cicatricial alopecia and the expansion of the arsenal of technical means of treating alopecia.
Поставленная задача решается, а требуемый технический результат достигается тем, что, в способе лечения нерубцовой алопеции, включающий введение в мезодермальный слой кожи в зоне облысения клеточного материала на глубину 2-3 мм, согласно изобретению, предварительно выдергивают волосы из волосистой части головы взрослого донора и помещают их в раствор Хенкса с антибиотиком и антимикотиком, отбирают волосы, находящиеся в стадии анагена и отсекают от них волосяные фолликулы, которые промывают раствором Хенкса с добавлением антибиотика и антимикотика и переносят в 0,1% раствор коллагеназы 1-го типа, где их и инкубируют в течением 1-2 ч при 37°С и переносят в культуральные флаконы с коллагеновым покрытием с DMEM:F12, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки в растворе гентамицин/стрептомицин/глутамина с равным их соотношением, а через 21 день клеточный материал диссоциируют из сфероидов, образованных в культуральных флаконах, и переносят в суспензию с использованием 0,25%-ного раствора трипсина с версеном (1:1), после чего клеточный материал промывают физиологически раствором путем двухкратного центрифугирования в по 5 минут при 300g с последующим переносом в стерильной среде в вакуумную пробирку с объемом 2-4 мл и содержанием при температуре +2 - +8°С для последующего введения через иглу в мезодермальный слой кожи в виде папул с размером от 2 до 4 мм при угле наклона иглы в 45°.The problem is solved, and the required technical result is achieved by the fact that, in the method of treating non-cicatricial alopecia, including introducing into the mesoderm layer of the skin in the area of baldness of cellular material to a depth of 2-3 mm, according to the invention, the hair is pulled out from the scalp of an adult donor and place them in a Hanks solution with an antibiotic and antimycotic, take the hair that is in the anagen stage and remove the hair follicles from them, which are washed with a Hanks solution with the addition of an antibiotic and timikotik and transferred to a 0.1% type 1 collagenase solution, where they are incubated for 1-2 hours at 37 ° C and transferred to collagen-coated culture bottles with DMEM: F12 containing 10% fetal calf serum in solution gentamicin / streptomycin / glutamine with their equal ratio, and after 21 days the cellular material is dissociated from spheroids formed in culture bottles and transferred to a suspension using a 0.25% trypsin solution with versene (1: 1), after which the cell the material is washed physiologically with a solution by two repeated centrifugation for 5 minutes at 300g, followed by transfer in a sterile medium into a vacuum tube with a volume of 2-4 ml and contents at a temperature of +2 - + 8 ° C for subsequent introduction through a needle into the mesodermal layer of the skin in the form of papules with a size of 2 up to 4 mm with a needle angle of 45 °.
На графических материалах представлены:The graphic materials presented:
на фиг. 1 - чашка Петри с волосами донора в растворе Хенкса с добавлением антибиотика и антимикотика;in FIG. 1 - Petri dish with donor hair in a Hanks solution with the addition of antibiotic and antimycotics;
на фиг. 2 - волосяной фолликул в стадии анагена;in FIG. 2 - hair follicle in the anagen stage;
на фиг. 3 - пример формирования сфероидов из клеток ростовых зон волосяного фолликула, где А - клетками дермальной папиллы, В - клетками зоны bulge.in FIG. 3 - an example of the formation of spheroids from cells of the growth zones of the hair follicle, where A is the cells of the dermal papilla, B is the cells of the bulge zone.
Предложенный способ лечения нерубцовой алопеции реализуется следующим образом.The proposed method for the treatment of non-cicatricial alopecia is implemented as follows.
Материально-техническое обеспечение.Logistics support.
1. Помещение для использования под лабораторию, отвечающее лицензионным требованиям.1. Room for use as a laboratory that meets licensing requirements.
2. Оборудование: центрифуга, СО2-инкубатор, ламинарный шкаф, инвертированный микроскоп, автоматическая пипетка, микропипетка, замораживатель, сосуд Дьюара, низкотемпературный холодильник, бытовой холодильник, камера Горяева, водяная баня, термос.2. Equipment: centrifuge, CO 2 incubator, laminar cabinet, inverted microscope, automatic pipette, micropipette, freezer, Dewar vessel, low-temperature refrigerator, household refrigerator, Goryaev’s chamber, water bath, thermos.
3. Реактивы: антибиотики, антимикотики, питательная среда ДМЕМ/Р12, фетальная телячья сыворотка, Версен, 0,25%-ный раствор трипсина, ДМСО, раствор Хенкса, физиологический раствор, коллагеназа 1-го типа, трипановый синий.3. Reagents: antibiotics, antimycotics, growth medium DMEM / P12, fetal calf serum, Versen, 0.25% trypsin solution, DMSO, Hanks solution, physiological solution, type 1 collagenase, trypan blue.
4. Расходные материалы: одноразовая культуральная пластиковая посуда (флаконы, пробирки, серологические пипетки, чашки Петри, наконечники для микропипеток, криопробирки); покровные стекла, набор медицинских инструментов (пинцет, хирургические ножницы, глазные ножницы, скальпель, шпатель, карцанг), вакутейнеры.4. Consumables: disposable cultural plastic dishes (bottles, tubes, serological pipettes, Petri dishes, micropipette tips, cryovials); coverslips, a set of medical instruments (tweezers, surgical scissors, eye scissors, a scalpel, putty knife, darts), wakutainers.
Получение аутологичных клеток из волосяных фолликулов кожи головы человека.Obtaining autologous cells from hair follicles of the human scalp.
Получение образцов волос.Obtaining hair samples.
А. Волосы выдергиваются с разных областей волосистой части головы взрослого донора при помощи пинцета и помещаются в раствор Хенкса с антибиотиком и антимикотиком (см. фиг. 1), где представлена чашка Петри с волосами пациента в растворе Хенкса.A. Hair is pulled out from different areas of the scalp of an adult donor using tweezers and placed in a Hanks solution with an antibiotic and antimycotic (see Fig. 1), which shows a Petri dish with the patient’s hair in a Hanks solution.
Б. При помощи микроскопа отбираются волосы, находящиеся в стадии анагена, у которых затем отсекаются волосяные фолликулы (см. фиг. 2).B. Using a microscope, hair is taken which is in the anagen stage, from which hair follicles are then cut off (see Fig. 2).
Выделение аутологичных клеток из волосяных фолликулов кожи человека и их культивирование.Isolation of autologous cells from hair follicles of human skin and their cultivation.
A. Все манипуляции по выделению и культивированию аутологичных клеток из волосяных фолликулов головы человека проводятся стерильно в условиях специально оборудованного культурального бокса.A. All procedures for the isolation and cultivation of autologous cells from the hair follicles of the human head are carried out sterile in a specially equipped culture box.
Б. Отсеченные волосяные фолликулы промываются раствором Хенкса (ПанЭко, РФ) с добавлением антибиотика/антимикотика («Gibco», США).B. The cut off hair follicles are washed with a Hanks solution (PanEco, RF) with the addition of an antibiotic / antimycotic (Gibco, USA).
B. Промытые луковицы переносятся в 0,1% раствор коллагеназы 1-го типа и инкубируются 1-2 ч при 37°С.B. The washed bulbs are transferred to a 0.1% type 1 collagenase solution and incubated for 1-2 hours at 37 ° C.
Г. После этого волосяные фолликулы переносятся в культуральные флаконы с коллагеновым покрытием с DMEM:F12, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки и р-р гентамицин/стрептомицин/глутамина (все - Gibco, США).D. After this, the hair follicles are transferred into collagen-coated culture bottles with DMEM: F12 containing 10% fetal calf serum and gentamicin / streptomycin / glutamine solution (all - Gibco, USA).
Д. Через две недели происходит образование сфероидов из клеток на поверхности волосяных фолликулов, в зоне дермальной папуллы и зоны bulge, (см. фиг.3), где иллюстрируется формирование сфероидов из клеток ростовых зон волосяного фолликула: А - клетками дермальной папиллы, В -клетками зоны bulge.D. Two weeks later, the formation of spheroids from cells on the surface of the hair follicles occurs, in the dermal papulla zone and the bulge zone (see Fig. 3), where the formation of spheroids from cells of the growth zones of the hair follicle is illustrated: A - dermal papilla cells, B - cells of the bulge zone.
Е. Спустя 21 день, когда происходит остановка роста сфероидов, клетки диссоциируют из сфероидов, и переводят в суспензию с использованием раствора 0,25%-го трипсина с версеном (1:1).E. After 21 days, when the growth of the spheroids is stopped, the cells dissociate from the spheroids and are transferred into suspension using a solution of 0.25% trypsin with versene (1: 1).
Приготовление клеточного материала для транспортировки и медицинского применения.Preparation of cellular material for transportation and medical use.
A. Полученная суспензия переносится в изопропиленовую пробирку объемом 50 мл, после чего осуществляется подсчет количества в ней клеток при помощи камеры Горяева.A. The resulting suspension is transferred to a 50 ml isopropylene tube, after which the number of cells in it is counted using a Goryaev camera.
Б. Далее суспензия промывается физиологическим раствором. Для этого клетки осаждаются центрифугированием (5 мин 300g), а осадок ресуспендируется в физиологическом растворе. Манипуляция повторяется дважды.B. Next, the suspension is washed with saline. For this, the cells are precipitated by centrifugation (5 min 300g), and the pellet is resuspended in physiological saline. Manipulation is repeated twice.
B. Полученный в п.Б осадок клеток, ресуспендируется в стерильной среде транспортировки, состоящей из физиологического раствора и разрешенного к применению лекарственного средства, обеспечивающего лучшую выживаемость клеток и улучшение лечебных характеристик технологии.B. The cell pellet obtained in p. B is resuspended in a sterile transport medium consisting of physiological saline and a medicinal product approved for use, which provides better cell survival and improved healing characteristics of the technology.
Г. Процент жизнеспособных клеток в препарате определяется с помощью окраски трипановым синим и подсчетом в камере Горяева. Для медицинского применения необходим уровень не ниже 80% жизнеспособных клеток в суспезии.G. The percentage of viable cells in the preparation is determined by trypan blue staining and counting in a Goryaev’s chamber. For medical use, a level of at least 80% of viable cells in suspension is required.
Д. Полученная в п.В суспензия (далее клеточный материал) переносится стерильно в вакуумную пробирку для забора крови (вакутейнер, Gibco, США).D. The suspension obtained in p. B (hereinafter cell material) is transferred sterile into a vacuum tube for blood sampling (vakuteyner, Gibco, USA).
Е. Смесь доводится до объема 2-4 мл. Объем зависит от площади очага облысения.E. The mixture is brought to a volume of 2-4 ml. The volume depends on the area of the focus of baldness.
Транспортировка и временное хранение клеточного материала.Transportation and temporary storage of cellular material.
A. Вакутейнер с готовым клеточным материалом помещается в термос со льдом и транспортируется к месту назначения.A. A vacutainer with ready-made cellular material is placed in an ice thermos and transported to its destination.
Б. Транспортировка и хранение клеточного материала осуществляется стерильно при температурном режиме +2 - +8°С.B. Transportation and storage of cellular material is sterile at a temperature of +2 - + 8 ° C.
B. Срок годности клеточного материала для медицинского применения не более 6 ч.B. Shelf life of cellular material for medical use no more than 6 hours
Введение клеточного материала.The introduction of cellular material.
Клеточный материал вводится в мезодермальный слой кожи в зоне облысения, как обычный мезотерапевтический коктейль. При введении используется папульная техника, при этом формируются папулы различного диаметра, что позволяет клеточному материалу действовать постепенно, поступая малыми порциями из депо, максимально пролонгируя свой регенеративный эффект .Рассасывание папул при процедуре происходит от нескольких часов до нескольких дней. Размер папул может колебаться от 2 до 4 мм, глубина введения клеточного материала 2-3 мм, угол наклона иглы составляет 45 градусов.Cellular material is introduced into the mesodermal layer of the skin in the bald area, like a regular mesotherapy cocktail. The introduction uses a papular technique, and papules of various diameters are formed, which allows the cellular material to act gradually, coming in small portions from the depot, maximally prolonging its regenerative effect. Resorption of papules during the procedure takes from several hours to several days. The size of the papules can vary from 2 to 4 mm, the depth of introduction of cellular material is 2-3 mm, the angle of the needle is 45 degrees.
Обзор результатов лечения нерубцовой алопеции предложенным способом.A review of the results of the treatment of non-cicatricial alopecia by the proposed method.
При данном способе лечения аутологичные клетки волосяного фолликула выделяются, культивируются и далее при минимальном масштабировании и без пассирования вводятся в очаг облысения пациента. Особенно важным является то, что клетки выращиваются в сфероидах. Многочисленные научные исследования продемонстрировали, что двухмерное культивирование в значительной мере снижает активность выделенных клеток волосяного фолликула, а также приводит к потере их регенеративных свойств, что ухудшает их терапевтические свойства. Этого не происходит при трехмерном культивировании в сфероидах, так как это естественная ориентация клеток, наиболее близко воспроизводящая их модель деления и существования in vivo. Клетки в условиях культуры, когда на них не оказывается воздействие организма в целом, значительно омолаживаются, становятся ювенильными. Возвращаясь в кожу, они не только сами оказывают омолаживающее воздействие, но и способны запустить обратные процессы у стареющих или поврежденных клеток кожи. Полученные и размноженные in vitro клетки дермальной папилы и зоны bulge встраиваются в поврежденные участки волосяного фолликула и способны собирать их de novo. Нерубцовая алопеция - самый распространенный вид облысения на сегодняшний день, который не всегда хорошо поддается лечению обычными методами трихологии, но при этом доставляет пациенту массу неудобств и проблем эстетического характера. Клеточная мезотерапия данного заболевания показала очень хороший результат и сегодня является альтернативой медикаментозному лечению нерубцовой алопеции.With this method of treatment, autologous cells of the hair follicle are secreted, cultivated, and then, with minimal scaling and without passaging, they are introduced into the focus of baldness of the patient. Particularly important is that cells are grown in spheroids. Numerous scientific studies have shown that two-dimensional cultivation significantly reduces the activity of the isolated hair follicle cells, and also leads to the loss of their regenerative properties, which impairs their therapeutic properties. This does not happen during three-dimensional cultivation in spheroids, since this is the natural orientation of cells, most closely reproducing their model of division and existence in vivo. Cells in culture, when they are not affected by the body as a whole, are significantly rejuvenated and become juvenile. Returning to the skin, they not only themselves have a rejuvenating effect, but are also able to trigger reverse processes in aging or damaged skin cells. The obtained and propagated in vitro cells of the dermal papilla and bulge zone are embedded in the damaged areas of the hair follicle and are able to collect them de novo. Non-cicatricial alopecia is the most common type of baldness today, which is not always well treated by conventional trichology methods, but at the same time gives the patient a lot of inconvenience and aesthetic problems. Cellular mesotherapy of this disease has shown a very good result and today is an alternative to medical treatment of non-cicatricial alopecia.
Суть самого способа подразумевает доставку клеточного материала непосредственно в мезодерму, что позволяет введенным аутологичным клеткам запустить регенеративные процессы в проблемной зоне. Результаты фототрихограммы пациентов, применивших данный способ лечения, показывают переход веллусных волос в терминальные, утолщение волос в зоне проведенной процедуры и остановка их потери, а также появление новых волос в зоне облысения.The essence of the method itself involves the delivery of cellular material directly to the mesoderm, which allows the introduced autologous cells to start regenerative processes in the problem area. The results of the phototrichogram of patients using this method of treatment show the transition of vellus hair to terminal, thickening of hair in the area of the procedure and stopping their loss, as well as the appearance of new hair in the baldness zone.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018134610A RU2681854C1 (en) | 2018-10-02 | 2018-10-02 | Method for the treatment of nonscarring alopecia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018134610A RU2681854C1 (en) | 2018-10-02 | 2018-10-02 | Method for the treatment of nonscarring alopecia |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2681854C1 true RU2681854C1 (en) | 2019-03-13 |
Family
ID=65805789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018134610A RU2681854C1 (en) | 2018-10-02 | 2018-10-02 | Method for the treatment of nonscarring alopecia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2681854C1 (en) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2271819C1 (en) * | 2004-08-18 | 2006-03-20 | ЗАО "РеМеТэкс" | Biotransplant, method for production thereof (variants), and method for alopecia treatment |
| RU2295304C2 (en) * | 2004-07-29 | 2007-03-20 | Тамаз Шотаевич Тамазашвили | Method for hair transplantation |
| RU2381786C2 (en) * | 2005-06-24 | 2010-02-20 | Аризона Борд Оф Риджентс Он Бихаф Оф Дзе Юниверсити Оф Аризона | Method of treating hair growth disorder, such as female pattern of hair loss, and compositions applied therein |
| RU2550428C1 (en) * | 2013-10-23 | 2015-05-10 | Елена Львовна Урюпина | Method for hair grafting |
| US9533012B2 (en) * | 2014-09-17 | 2017-01-03 | Gwo Xi Stem Cell Applied Technology Co., Ltd. | Method for enhancing therapeutic effect of stem cells |
| RU2631642C1 (en) * | 2016-11-29 | 2017-09-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Method for treating nonscarring alopecia |
-
2018
- 2018-10-02 RU RU2018134610A patent/RU2681854C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2295304C2 (en) * | 2004-07-29 | 2007-03-20 | Тамаз Шотаевич Тамазашвили | Method for hair transplantation |
| RU2271819C1 (en) * | 2004-08-18 | 2006-03-20 | ЗАО "РеМеТэкс" | Biotransplant, method for production thereof (variants), and method for alopecia treatment |
| RU2381786C2 (en) * | 2005-06-24 | 2010-02-20 | Аризона Борд Оф Риджентс Он Бихаф Оф Дзе Юниверсити Оф Аризона | Method of treating hair growth disorder, such as female pattern of hair loss, and compositions applied therein |
| RU2550428C1 (en) * | 2013-10-23 | 2015-05-10 | Елена Львовна Урюпина | Method for hair grafting |
| US9533012B2 (en) * | 2014-09-17 | 2017-01-03 | Gwo Xi Stem Cell Applied Technology Co., Ltd. | Method for enhancing therapeutic effect of stem cells |
| RU2631642C1 (en) * | 2016-11-29 | 2017-09-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Method for treating nonscarring alopecia |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20070253939A1 (en) | Cell delivery system | |
| CN106456676A (en) | Hair growth-promoting function of culture medium of stimulated stem cells and use thereof | |
| TW202305117A (en) | A method of isolating mesenchymal stem cells from the amniotic membrane of the umbilical cord, a mesenchymal stem cell population isolated from the amniotic membrane of the umbilical cord and a cell culture medium for isolating mesenchymal stem cells from the amniotic membrane of the umbilical cord | |
| JP2016522682A (en) | Method of skin substitute and hair follicle neoplasia | |
| CN104622771A (en) | Method for preparing biological beautifying facial mask containing adipose derived stem cells and product thereof | |
| BR112014023272B1 (en) | Method for preparing cells for cosmetic use in an epithelium-related procedure | |
| CN106434557A (en) | Method for preparing CD34 positive cells from umbilical cord mesenchymal stem cells | |
| CN107164310A (en) | Method for reconstructing hair follicle in vivo | |
| CN106635967A (en) | Hair follicle stem cell transplantation method | |
| JP5340564B2 (en) | Artificial skin and method for producing the same | |
| US20200149005A1 (en) | The method of autologous primary hair follicles preparation in 3d culture | |
| JP7526405B2 (en) | Method for isolating and mass-producing hair papilla cells derived from scalp tissue | |
| RU2631642C1 (en) | Method for treating nonscarring alopecia | |
| RU2681854C1 (en) | Method for the treatment of nonscarring alopecia | |
| JP4324988B2 (en) | Hair growth inducer and hair growth method | |
| CN115418341B (en) | Method for transdifferentiation of fibroblast to hair papilla cell and application thereof | |
| JP4454844B2 (en) | Gene therapy medium consisting of dermal sheath tissue | |
| RU2281776C1 (en) | Biotransplant and method for correction of soft tissue defect, method for preparing biotransplant | |
| CN104622772A (en) | Medical cosmetic product containing autologous peripheral blood vascular endothelial progenitor cells | |
| CN105154388B (en) | method for separating and culturing skin keratinocytes | |
| JP2001302520A (en) | Method for regenerating hair by cultured hair papilla cell | |
| CN105925524A (en) | Method for transforming human primary fibroblast into epidermic cell | |
| RU2695364C1 (en) | Method of treating non-scarring alopecia | |
| CN115651890A (en) | Method for transdifferentiation of fibroblasts into papilla-like cells and application of method | |
| RU2455357C1 (en) | Cell product for auto- and allografting prepared of human umbilical cord, and method for preparing thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201003 |