RU2678586C1 - Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием - Google Patents

Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием Download PDF

Info

Publication number
RU2678586C1
RU2678586C1 RU2018126258A RU2018126258A RU2678586C1 RU 2678586 C1 RU2678586 C1 RU 2678586C1 RU 2018126258 A RU2018126258 A RU 2018126258A RU 2018126258 A RU2018126258 A RU 2018126258A RU 2678586 C1 RU2678586 C1 RU 2678586C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ethanol
water
hydrodistillation
minutes
anxiolytic
Prior art date
Application number
RU2018126258A
Other languages
English (en)
Inventor
Даниил Николаевич Оленников
Янина Геннадьевна Разуваева
Анюта Алексеевна Торопова
Дмитрий Викторович Харжеев
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук" filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority to RU2018126258A priority Critical patent/RU2678586C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2678586C1 publication Critical patent/RU2678586C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства из растительного сырья, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием. Способ получения средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, из травы котовника многонадрезанного путем экстрагирования растительного материала, при этом измельченный растительный материал подвергают гидродистилляции для получения эфирного масла в соотношении сырье:вода 1:(8-10) при нагревании в течение 30-40 мин и кипении в течение 60-80 мин, смесь растительного сырья и воды фильтруют и промывают на фильтре дополнительным объемом воды, составляющим 10-12% от взятого на гидродистилляцию, далее остаток растительного материала после гидродистилляции смешивают с 90% этанолом в соотношении сырье: экстрагент 1:(10-12), подвергают смесь ультразвуковой обработке частотой 50 кГц при 70°С в течение 45-60 мин, смесь фильтруют и промывают на фильтре дополнительным объемом 60% этанола, составляющим 20-25% от взятого на этанольную экстракцию, водное и спиртовое извлечения концентрируют в вакууме до 1/4-1/6 от первоначального объема, сконцентрированные этанольное и водное извлечения объединяют, высушивают, измельчают, добавляют эфирное масло, полученное при гидродистилляции, и перемешивают. Вышеописанный способ способствует получению средства из травы котовника многонадрезанного, обладающего повышенным антиоксилитическим и антидепрессивным действием. 7 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.
Биологически активные соединения растительных видов семейства Lamiaceae обладают широким спектром биологической активности, включая действие на нервную систему (анксиолитическое, антиноцицептивное, антиконвульсантное) [1]. Химической особенностью видов рода Котовник, входящего в данное семейство, является их способность к накоплению отдельных соединений, обладающих анксиолитическим и антидепрессивным действием, в том числе производных лютеолина [2], розмариновой кислоты [3] и пулегона [4]. На территории Восточной Сибири широко распространен котовник многонадрезанный (Nepeta multifida L., синоним Schizonepeta multifida (L.) Briq.), в составе которого присутствуют указанные соединения. К настоящему времени не существует экстракционных препаратов из котовника многонадрезанного, обладающих анксиолитическим и антидепрессивным действием. Данный растительный вид входит в состав 10-компонентного средства «Таблетки для ума» в виде травы (необработанного сырья), что указывает на обедненный состав готового продукта [5]. Также известен способ получения 21-компонентного средства, содержащего котовник многонадрезанный, в виде жидкого экстракта на 20% этаноле, полученного в результате настаивания при комнатной температуре [6]. Использованный способ неинтенсивной экстракции растительного сырья и низкое содержание котовника многонадрезанного в общей растительной смеси свидетельствует о невысоком содержании действующих веществ в готовом продукте.
Задачей изобретения является создание суммарного растительного препарата, содержащего фенольные соединения и монотерпены, а также повышение анксиолитического и антидепрессивного действия средства за счет более высокого содержания действующих веществ.
Техническим результатом изобретения является повышенное анксиолитическое и антидепрессивное действие средства из надземной части котовника многонадрезанного, полученного заявленным способом.
Для достижения указанного технического результата измельченный растительный материал (траву котовника многонадрезанного) помещают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции, приливают воду в соотношении сырье : вода 1:(8-10) и нагревают до кипения в течение 30-40 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 60-80 мин. После этого смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре дополнительным объемом воды (10-12% от взятого на гидродистилляцию). Далее растительное сырье заливают 90% этанолом в соотношении сырье : экстрагент 1:(10-12) и подвергают смесь ультразвуковой обработке частотой 50 кГц при 70°С в течение 45-60 мин. Извлечение фильтруют в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре дополнительным объемом 60% этанола (20-25% от взятого на этанольную экстракцию). Водное и спиртовое извлечения концентрируют в вакууме до 1/4-1/6 от первоначального объема. Сгущенные экстракты, полученные от водной и этанольной экстракций, объединяют, высушивают в вакуум-сушильном шкафу и измельчают на мельнице пропеллерного типа. После этого к измельченному сухому экстракту добавляют эфирное масло, полученное в результате гидродистилляции, и перемешивают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта (сухого экстракта) составляет 34.9-36.2% от массы растительного сырья.
Выявленные отличительные признаки позволяют сделать вывод о соответствии предлагаемого технологического решения критерию “новизна”.
Предложенный способ позволяет получить сухой экстракт (далее - средство) в виде рассыпчатого негигроскопичного порошка темно-коричневого цвета с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании - 3-5%.
Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.
Пример 1. 39.59 кг цветков котовника многонадрезанного с влажностью 3.1% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 39 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 450 л, приливают 312 л воды и нагревают до кипения в течение 30 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 60 мин. Получают 1.25 кг эфирного масла (3.2% от массы растительного сырья) с плотностью 1.100 г/см3. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 31 л воды. В результате получено 232 л водного экстракта с плотностью 0.992 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 46.4 л (плотность концентрата 1.128 г/см3). Отгон воды объемом 181 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 468 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 60 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 94 л 60% этанола. В результате получено 554 л этанольного экстракта с плотностью 0.899 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 92 л (плотность концентрата 1.034 г/см3). Отгон этанола объемом 462 л (плотность 0.850 г/см3) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 135 л, плотность 1.067 г/см3), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 12.81 кг полупродукта, что составляет 32.8% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 1.25 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 14.06 кг готового продукта (средства), что составляет 36.0% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.1%. Шрот растительного сырья массой 142 кг и влажностью 82.4% далее не используют и направляют в отвал.
Пример 2. 45.72 кг листьев котовника многонадрезанного с влажностью 4.6% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 45 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 600 л, приливают 450 л воды и нагревают до кипения в течение 40 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 80 мин. Получают 0.32 кг эфирного масла (0.71% от массы растительного сырья) с плотностью 1.114 г/см3. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 54 л воды. В результате получено 274 л водного экстракта с плотностью 0.998 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 68.5 л (плотность концентрата 1.122 г/см3). Отгон воды объемом 195 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 450 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 45 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 112 л 60% этанола. В результате получено 562 л этанольного экстракта с плотностью 0.871 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 94 л (плотность концентрата 1.039 г/см3). Отгон этанола объемом 465 л (плотность 0.852 г/см3) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 162.5 л, плотность 1.091 г/см3), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 15.98 кг полупродукта, что составляет 35.5% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 0.32 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 16.30 кг готового продукта (средства), что составляет 36.2% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.6%. Шрот растительного сырья массой 158 кг и влажностью 81.8% далее не используют и направляют в отвал.
Пример 3. 40.6 кг травы котовника многонадрезанного с влажностью 4.3% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 40 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 600 л, приливают 360 л воды и нагревают до кипения в течение 35 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 70 мин. Получают 0.74 кг эфирного масла (1.84% от массы растительного сырья) с плотностью 1.102 г/см3. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 40 л воды. В результате получено 220 л водного экстракта с плотностью 0.995 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 45 л (плотность концентрата 1.125 г/см3). Отгон воды объемом 172 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 440 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 50 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 97 л 60% этанола. В результате получено 532 л этанольного экстракта с плотностью 0.882 г/см3, который концентрируют в вакууме до объема 89 л (плотность концентрата 1.035 г/см3). Отгон этанола объемом 441 л (плотность 0.851 г/см3) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 134 л, плотность 1.065 г/см3), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 13.20 кг полупродукта, что составляет 35.5% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 0.74 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 13.94 кг готового продукта (средства), что составляет 34.9% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.8%. Шрот растительного сырья массой 134 кг и влажностью 80.6% далее не используют и направляют в отвал.
Химический состав средства
На предварительно этапе исследования нами был изучен химический состав средства с применением метода ВЭЖХ-УФ [7]. Идентификацию соединений проводили по данным хроматографической подвижности, спектров поглощения, спектральных отношений и метода добавок. В результате в трех образцах средства, полученных из цветков, листьев и травы котовника многонадрезанного, было установлено присутствие шести флавоноидов - лютеолин-7-О-рутинозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, лютеолин-7-О-глюкозида, апигенин-7-О-рутинозида, апигенин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, и четырех фенилпропаноидов - 3-О-кофеилхинной кислоты, розмариновой кислоты, сальвианоловых кислот А и В. Также в сухом экстракте было выявлено присутствие пулегона - основного компонента эфирного масла. Все упомянутые соединения были ранее обнаружены в растительных видах рода Котовник [8].
Таблица 1
Химический состав средства, мг/г
Соединение Тип растительного сырья
цветки листья трава
лютеолин-7-О-глюкуронид 35.70 ± 0.90 40.17 ± 0.92 38.11 ± 0.92
розмариновая кислота 54.21 ± 1.24 57.98 ± 1.38 55.63 ± 1.29
пулегон 62.23 ± 1.49 19.63 ±0.47 37.14 ± 0.96
С использованием метода количественной ВЭЖХ-УФ было показано, что лютеолин-7-О-глюкуронид, розмариновая кислота и пулегон являются доминирующими компонентами, содержание которых в сухих экстрактах составило 35.70-40.17, 54.21-57.98 и 19.63-62.23 мг/г соответственно (таблица 1).
Количественный анализ и показатели качества средства
Для осуществления химической стандартизации средства разработаны методика количественного анализа лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона в средстве методом ВЭЖХ-УФ.
Методика количественного анализа лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона в средстве методом ВЭЖХ. Испытуемый раствор. 20 мг средства помещают в пластиковую пробирку типа Эппендорф вместимостью 2 мл, прибавляют 1 мл 70% этанола и растворяют в ультразвуковой ванне при 30°С в течение 15 мин. Охлаждают и центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0.45 мкм.
Раствор сравнения. 1 мг лютеолин-7-О-глюкуронида, 1 мг розмариновой кислоты и 1 мг пулегона растворяют в метаноле и доводят до объема 5 мл этим же растворителем.
Условия хроматографирования:
- колонка длиной 75 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм;
- температура: 35°С;
- подвижная фаза:
-- подвижная фаза А: 21 г/л лития перхлората раствор в 1 г/л кислоте перхлорной;
-- подвижная фаза В: ацетонитрил;
- спектрофотометрический детектор, длина волны 210 нм;
- время уравновешивания системы: 3 мин перед каждым вводом (5% В);
- объем вводимой пробы: 1 мкл.
- программа градиентного режима элюирования представлена в таблице 2.
Таблица 2
Программа градиентного режима элюирования
Время (мин) Подвижная фаза А (%, об/об) Подвижная фаза В (%, об/об) Скорость подвижной фазы (мкл/мин)
0 - 15 80 → 50 20 → 50 150
Результаты: на хроматограмме должно быть три основных пика, совпадающих по подвижности с веществами в растворе сравнения (лютеолин-7-О-глюкуронид, розмариновая кислота, пулегон).
Порядок выхода пиков раствора сравнения: лютеолин-7-О-глюкуронид → розмариновая кислота → пулегон.
Пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия: разрешение между пиками лютеолин-7-О-глюкуронида и розмариновой кислоты не менее 2.
Расчет: содержание соединения в средстве в процентах (X) вычисляют по формуле:
Figure 00000001
,
где S - площадь пика соединения в исследуемом растворе; m - масса навески средства, г; SS - площадь пика соединения в растворе сравнения; mS - масса навески соединения, г.
Метрологический анализ разработанных методик показал, что относительная ошибка определения лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона методом ВЭЖХ не превышает 2% (таблица 3). Полученные результаты свидетельствуют об удовлетворительных валидационных параметрах методик, что указывает на возможность их использования в практике фармакопейного анализа для определения показателей качества разработанного средства.
Таблица 3
Метрологические характеристики методик количественного анализа
Figure 00000002
, мг/г		 S2 Sx ±Δ
Figure 00000003
, %		 E, %
Лютеолин-7-О-глюкуронид. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78)
38.11 0.32 0.25 0.70 1.84
Розмариновая кислота. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78)
55.63 0.46 0.30 0.85 1.52
Пулегон. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78)
37.14 0.35 0.26 0.73 1.97
По данным проведенных исследований определены общие показатели качества средства, обобщенные в таблице 4. Для стандартизации средства было предложено определение внешнего вида, подлинности (присутствие изопулегона), потери в массе при высушивании, золы сульфатной, тяжелых металлов, количественное определение лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона (ВЭЖХ) и микробиологической чистоты.
Таблица 4
Показатели качества средства
Показатель Метод Норма
Описание, внешние признаки Визуальный,
органолептический		 Рассыпчатый негигроскопичный порошок, цвет от коричневого до темно-коричневого, запах выраженный специфический, вкус 0.01% водного раствора - выраженный, горький.
Подлинность:
- изопулегон.		 ВЭЖХ На хроматограмме должен присутствовать пик, совпадающий по подвижности с таковым изопулегона.
Потеря в массе при высушивании Гравиметрический Не более 5%
Зола сульфатная Гравиметрический Не более 0.1%
Тяжелые металлы Спектро-фотометрический Не более 0.01%
Количественное
определение:
- лютеолин-7-О-глюкуронид;
- розмариновая кислота;
- пулегон.		 ВЭЖХ
ВЭЖХ
ВЭЖХ		 Не менее 3%
Не менее 5%
Не менее 1.5%
Микробиологическая чистота Бактериологический Категория 3Б
Хранение В защищенном от света месте при температуре 12-15°С
Срок годности 5 лет
Предлагаемый способ, по сравнению с известным, позволяет получить препарат постоянного состава с более выраженной активностью за счет более высокого содержания действующих веществ (фенольных соединений и монотерпеноидов).
Рассчитать экономическую целесообразность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и определяют перспективность внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.
Фармакотерапевтические свойства средства.
Исследования выполнены на белых крысах линии Wistar с исходной массой 180-200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Средство в дозах 50, 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт (препарат сравнения; Дальхимфарм) в дозе 120 мг/кг, вводили животным внутрижелудочно в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг один раз в сутки в течение в течение 7 дней, последний раз за 30 мин до тестирования. Анксиолитическое действие средства исследовали согласно методическим указаниям [9] в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт», «светлая/темная камера», «конфликтная ситуация в варианте Vogel», антидепрессивное действие - в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ «Biostat-2006» с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считали статистически значимыми при р ≤ 0.05.
Анксиолитическое действие средства в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Для проведения исследований животных помещали на центральную площадку приподнятого крестообразного лабиринта и в течение 5 мин регистрировали следующие показатели: время пребывания животных в открытых и закрытых рукавах, а также на центральной площадке, количество заходов в открытые и закрытые рукава, число свещиваний и вертикальных стоек, а также количество актов дефекации. Результаты тестирования животных в приподнятом крестообразном лабиринте показали, что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в закрытых рукавах, чем открытых (таблица 5). Курсовое введение животным средства в дозах 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракта в дозе 120 мг/кг подавляло у крыс чувство страха открытого пространства, в результате чего количество заходов в открытые рукава установки в данных группах увеличилось в 6.0, 8.0, 4.0 и 7.0 раза, а время, проведенное в них в 7.2, 13.3, 1.9 и 12.3 раза, соответственно по сравнению с показателями контрольных животных. У животных данных опытных групп отмечалось статистически значимое увеличение времени нахождения на центральной площадке лабиринта по сравнению с контролем.
Таблица 5
Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»
Показатели Контрольная (Н2О), n=18 Опытная 1 (средство, 50 мг/кг), n=20 Опытная 2 (средство, 100 мг/кг), n=18 Опытная 3 (средство, 200 мг/кг), n=22 Опытная 4 (средство, 300 мг/кг), n=20 Опытная 5 (валерианы экстракт, 120 мг/кг), n=15
Количество заходов
закрытый рукав 1.2±0.1 1.2±0.1 1.8±0.2* 1.9±0.2* 1.6±0.3 1.7±0.2*
открытый рукав 0.1±0.0 0.1±0.0 0.6±0.1* 0.8±0.2* 0.4±0.2 0.7±0.2*
Время пребывания
закрытый рукав 291.4±2.1 290.1±2.7 273.6±6.3* 256.7±10.7* 277.9±8.7 256.2±8.5*
открытый рукав 1.9±1.0 2.4±1.2 13.7±3.7 25.2±8.1* 4.5±2.2 23.3±7.5*
центральная площадка 6.7±1.5 7.6±2.0 12.8±2.4 18.1±3.4* 17.6±6.4 20.5±2.6*
Количество
свешиваний 0 0.1±0.0 0.2±0.0 0.3±0.1 0 0.3±0.1
вертикальных стоек 2.4±0.4 2.5±0.4 3.9±0.6 4.5±0.9 3.9±0.5 4.7±1.1
актов дефекации 1.9±0.1 0.8±0.3 1.2±0.3 0.7±0.2* 0.5±0.2* 0.5±0.2
Примечание: * - различия статистически значимы при р≤0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.
Применение испытуемого средства в дозе 50 мг/кг не вызывало значимых изменений количества заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта, при этом у животных первой опытной группы отмечалась тенденция к увеличению времени проведения в открытых рукавах установки. Проведенные исследования показали, что использование средства и валерианы экстракта вызывает увеличение общей двигательной активности животных в данном тесте (таблица 5). Так у животных, получавших средство в дозах 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт в дозе 120 мг/кг, количество заходов в закрытые рукава лабиринта увеличилось на 50, 58, 33 и 42% по сравнению с показателем контрольных животных.
Вертикальная активность у животных на фоне введения средства в дозах 100 и 300 мг/кг повысилась в 1.6 раза, при применении испытуемого средства в дозе 200 мг/кг и валерианы экстракта - в 1.9 раза по отношению к контролю. В опытных групп отмечались свешивания животных с установки, тогда как в контрольной группе ни одно животное не выполняло данное действие. Увеличение исследовательской активности и понижение чувства страха и тревоги у животных опытных групп можно объяснить снижением у них уровня эмоциональности (таблица 5). Так, у животных опытных групп количество актов дефекаций было ниже такового показателя контрольных животных в среднем в 1.6 раза. Таким образом, средство в диапазоне доз 100-300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество заходов и время пребывания животных в открытых рукавах приподнятого крестообразного лабиринта. Данный эффект сопоставим с таковым у препарата сравнения - валерианы экстрактом.
Анксиолитическое действие средства в тесте «светлая/темная камера». Результаты тестирования животных в тесте «светлая/темная камера» показали, что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в темном отсеке установки (таблица 6). Курсовое введение животным средства в дозах 50, 100 и 200 мг/кг угнетало чувство страха и тревоги, о чем свидетельствовало увеличение количества переходов между камерами на 69, 54 и 62% и времени пребывания животных в светлом отсеке установки на 56, 58 и 88% соответственно по сравнению с таковыми показателями животных контрольной группы (таблица 6). Таким образом, средство в диапазоне доз 50-200 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество переходов и время пребывания в светлом отсеке «светлой/темной» камеры. Данный эффект сопоставим с таковым у препарата сравнения - валерианы экстрактом.
Таблица 6
Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «светлая/темная камера»
Группы животных Показатели
Количество переходов Время пребывания в светлом отсеке, сек
Контрольная (Н2О), n=13 1.3 ± 0.1 39.5 ± 8.7
Опытная 1 (средство, 50 мг/кг), n=12 2.2 ± 0.5 61.5 ± 17.2
Опытная 2 (средство, 100 мг/кг), n=13 2.0 ± 0.3 62.4 ± 17.4
Опытная 3 (средство, 200 мг/кг), n=12 2.1 ± 0.3* 74.1 ± 16.1
Опытная 4 (валерианы экстракт, 120 мг/кг), n=11 2.2 ± 0.6 69.5 ± 13.5
Примечание: * - различия статистически значимы при р≤0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.
Анксиолитическое действие средства в тесте «конфликтная ситуация по Vogel». Конфликтную ситуацию создавали, сталкивая питьевую и оборонительную мотивации, путем подавления болевым электрическим раздражителем питьевого рефлекса при потреблении крысами воды из чашки. Об анксиолитическом влиянии средства судили по числу наказуемых взятий воды животным за 3 мин нахождения в камере. Установлено, что курсовое введение животным средства в диапазоне доз 100-300 мг/кг устраняло чувство тревоги и страха, увеличивая число наказуемых взятий воды в среднем в 3.3 раза по сравнению с таковым показателем у контрольных животных (таблица 7).
Таблица 7
Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «конфликтная ситуация по Vogel» (А) и тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту» (Б)
Группы животных А: Количество взятий воды Б: Время иммобильности, сек
Контрольная (Н2О), n=12 0.7 ± 0.2 94.9 ± 5.8
Опытная 1 (средство, 50 мг/кг), n=14 1.3 ± 0.2 78.3 ± 3.1
Опытная 2 (средство, 100 мг/кг), n=14 2.4 ± 0.2* 62.7 ± 4.3*
Опытная 3 (средство, 200 мг/кг), n=14 2.2 ± 0.1* 71.4 ± 3.8*
Опытная 4 (средство, 300 мг/кг), n=14 2.0 ± 0.2* -
Опытная 5 (валерианы экстракт, 120 мг/кг), n=14 1.4 ± 0.1 98.1 ± 6.9
Примечание: * - различия статистически значимы при р ≤ 0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.
У животных, получавших средство в дозе 50 мг/кг и препарат сравнения валерианы экстракт, данный показатель повысился по отношению к контролю в 2.0 раза. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что введение животным средства в диапазоне доз 50-300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях наказуемого поведения, достоверно увеличивая количество взятий воды в методике «конфликтная ситуация по Vogel». При этом средство в дозах 100-300 мг/кг по эффективности превосходит валерианы экстракт.
Антидепрессивное действие средства в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Антидепрессивное действие средства исследовали в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Определяли время иммобилизации животных в течение 6 мин. Установлено, что введение крысам средства в дозах 50, 100 и 200 мг/кг снижает время иммобилизации животных в тесте «поведенческого отчаяния» на 17, 34 и 25% соответственно по сравнению с аналогичным показателем животных контрольной группы (таблица 7). Использование валерианы экстракта не оказывало влияние на поведение животных в данном тесте. Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что средство во всех исследуемых дозах оказывает антидепрессивное действие, превосходящее таковое препарата сравнения.
Источники информации
1. Carović-Stanko K., Petek M., Grdiša M., Šatović Z. Medicinal plants of the family Lamiaceae as functional foods // Czech Journal of Food Sciences. - 2016. - Vol. 34. - P. 377-390. doi: 10.17221/504/2015-CJFS.
2. Trivellini A., Lucchesini M., Maggini R., Mosadegh H., Salomè T. Lamiaceae phenols as multifaceted compounds: bioactivity, industrial prospects and role of “positive-stress” // Industrial Crops and Products. - 2016. - Vol. 83. - P. 241-254. doi: 10.1016/j.indcrop.2015.12.039.
3. Takeda H., Tsuji M., Inazu M., Matsumiya T. Rosmarinic acid and caffeic acid produce antidepressive-like effect in forced swimming test in mice // European Journal of Pharmacology. - 2002. - Vol. 449. - P. 261-267. doi: 10.1016/S0014-2999(02)02037-X.
4. de Sousa D.P., Nóbrega F.F., de Lima M.R., de Almeida R.N. Pharmacological activity of (R)-(+)-pulegone, a chemical constituent of essential oils // Zeitschrift für Naturforschung C. - 2011. - Vol. 66. - P. 353-359. PMID: 21950159.
5. Патент на изобретение RU(11)2429001(13)C1. Средство «Таблетки для ума». Опубликовано: 20.09.2011. Бюл. № 26. - прототип.
6. Патент на изобретение RU(11)2199334(13)C1. Средство "Прасковья". Опубликовано: 27.02.2003. Бюл. № 6. - прототип.
7. Olennikov D.N., Kashchenko N.I., Chirikova N.K. A novel HPLC-assisted method for investigation of the Fe2+-chelating activity of flavonoids and plant extracts // Molecules. - 2014. - Vol. 19. - P. 18296-18316. doi: 10.3390/molecules191118296.
8. Süntar I., Nabavi S.M., Barreca D., Fischer N., Efferth T. Pharmacological and chemical features of Nepeta L. genus: Its importance as a therapeutic agent // Phytotherapy Research. - 2018. - Vol. 32. - P. 185-198. doi: 10.1002/ptr.5946.
9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

Claims (1)

  1. Способ получения средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, из травы котовника многонадрезанного путем экстрагирования растительного материала, отличающийся тем, что измельченный растительный материал подвергают гидродистилляции для получения эфирного масла в соотношении сырье:вода 1:(8-10) при нагревании в течение 30-40 мин и кипении в течение 60-80 мин, смесь растительного сырья и воды фильтруют и промывают на фильтре дополнительным объемом воды, составляющим 10-12% от взятого на гидродистилляцию, далее остаток растительного материала после гидродистилляции смешивают с 90% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:(10-12), подвергают смесь ультразвуковой обработке частотой 50 кГц при 70°С в течение 45-60 мин, смесь фильтруют и промывают на фильтре дополнительным объемом 60% этанола, составляющим 20-25% от взятого на этанольную экстракцию, водное и спиртовое извлечения концентрируют в вакууме до 1/4-1/6 от первоначального объема, сконцентрированные этанольное и водное извлечения объединяют, высушивают, измельчают, добавляют эфирное масло, полученное при гидродистилляции, и перемешивают.
RU2018126258A 2018-07-16 2018-07-16 Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием RU2678586C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018126258A RU2678586C1 (ru) 2018-07-16 2018-07-16 Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018126258A RU2678586C1 (ru) 2018-07-16 2018-07-16 Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2678586C1 true RU2678586C1 (ru) 2019-01-30

Family

ID=65273695

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018126258A RU2678586C1 (ru) 2018-07-16 2018-07-16 Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2678586C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2199309C1 (ru) * 2001-12-29 2003-02-27 Закрытое акционерное общество "Брынцалов-А" Лекарственное средство нобрассит седативного и анксиолитического действия
RU2582292C1 (ru) * 2015-05-07 2016-04-20 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) Способ выделения эфирного масла из лекарственного растительного сырья

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2199309C1 (ru) * 2001-12-29 2003-02-27 Закрытое акционерное общество "Брынцалов-А" Лекарственное средство нобрассит седативного и анксиолитического действия
RU2582292C1 (ru) * 2015-05-07 2016-04-20 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) Способ выделения эфирного масла из лекарственного растительного сырья

Similar Documents

Publication Publication Date Title
He et al. Phenolic compounds and antioxidant activities of edible flowers of Pyrus pashia
Bafor et al. The leaves of Ficus exasperata Vahl (Moraceae) generates uterine active chemical constituents
Kang et al. Evaluation of the total oxy-radical scavenging capacity of catechins isolated from green tea
Ujah et al. Phytochemicals of neem plant (Azadirachta indica) explains its use in traditional medicine and pest control
Taniguchi et al. Structural elucidation of humulone autoxidation products and analysis of their occurrence in stored hops
Mousouri et al. Isolation of megaritolactones and other bioactive metabolites from ‘megaritiki’table olives and debittering water
Lakshmi et al. Phytochemical analysis of Annona squamosa seed extracts
Pathak¹ et al. Pharmacognostical study of Anethum sowa (dill) seed
RU2678586C1 (ru) Способ получения растительного средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием
Okoye et al. Anti-inflammatory and membrane-stabilizing stigmastane steroids from Alchornea floribunda leaves
Molina et al. Isolation of a natural product with anti-mitotic activity from a toxic Canadian prairie plant
Wijetunge et al. Preparation of liquid medicinal soap products using Adhatoda vasica (Adhatoda) leaf extracts
Goto et al. 1H‐NMR Analysis of Terpene Trilactones (TTLs) in Ginkgo biloba: Green Female Leaves Contain the Most TTLs
CN102151306B (zh) 一种从荔枝果肉中提取的活性组合物及其制备方法和应用
CN106924117B (zh) 用提取青蒿素后剩余的黄花蒿残渣制备的洗护用品组合物
Kumar et al. Investigation of phytoconstituents of Cardiospermum halicacabum and its efficacy as a potential anti-cancer drug candidate
JP6273614B2 (ja) 遺伝子修復の活性化作用を呈するヘスペレチン誘導体及びその製造方法
Calvo et al. Controlling concentration of bioactive components in cat's claw based products with a hybrid separation process
JP2920151B2 (ja) 抗アレルギー剤
RU2460534C1 (ru) Способ получения средства, обладающего анксиолитической активностью
RU2805653C1 (ru) Способ получения растительного средства, обладающего нейропротективным действием
RU2740997C1 (ru) Способ выделения полифенолов из корневищ имбиря
Soumahoro et al. Identification of compounds by HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS analysis of the dichloromethane fraction from the hydroalcoholic extract of Hyptis suaveolens leaves before extraction of the essential oil
Pellati et al. Isolation, structure elucidation, synthesis, and cytotoxic activity of polyacetylenes and polyenes from echinacea pallida
Alaspure et al. Isolation of Active Constituent of Acorus calamus Rhizomes Extract and Evaluation of its Anti-cancer Activity

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200717