RU2675940C1 - Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов - Google Patents
Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2675940C1 RU2675940C1 RU2017139337A RU2017139337A RU2675940C1 RU 2675940 C1 RU2675940 C1 RU 2675940C1 RU 2017139337 A RU2017139337 A RU 2017139337A RU 2017139337 A RU2017139337 A RU 2017139337A RU 2675940 C1 RU2675940 C1 RU 2675940C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- vkm
- strain
- bacillus
- products
- Prior art date
Links
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title description 5
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 title description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 20
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 66
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 11
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 10
- 239000003502 gasoline Substances 0.000 description 10
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 10
- 239000010705 motor oil Substances 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 239000010720 hydraulic oil Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 7
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241001249119 Bacillus vallismortis Species 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- 241000168225 Pseudomonas alcaligenes Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4a,5,5,6,6,7,7,8,8,8a-octadecafluoronaphthalene;1-[1,2,2,3,3,4,5,5,6,6-decafluoro-4-(trifluoromethyl)cyclohexyl]-2,2,3,3,4,4,5,5,6,6-decafluoropiperidine Chemical compound FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C21F.FC1(F)C(F)(F)C(C(F)(F)F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)N1C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)F IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000186650 Clavibacter Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191953 Kocuria varians Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000191936 Micrococcus sp. Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001135514 Paraburkholderia caryophylli Species 0.000 description 1
- 231100000674 Phytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000607694 Serratia odorifera Species 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- 240000002913 Trifolium pratense Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PRWXGRGLHYDWPS-UHFFFAOYSA-L sodium malonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC([O-])=O PRWXGRGLHYDWPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии. Штамм бактерий Bacillus sp. LER-1, обладающий способностью утилизировать нефть и нефтепродукты в широком диапазоне температур, депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ В-2815D. Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D может быть использован для очистки почв и воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами при широком диапазоне температур от +10 до +37°С. Изобретение позволяет повысить степень очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов. 3 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый бактериальный штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).
Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +10 до +37°С.
Уровень техники.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis Zb52 (1. Патент KZ №27045. Штамм бактерий Bacillus subtilis Zb52, предназначенный для биоочистки сточных вод. А4, C12N 1/20, C12N 9/56, C12R 1/125. Заявка: 2012/1351.1. Опубликовано: 14.06.2013, бюл. №6. Авторы: Сармурзина З.С.; Ануарбекова С.С; Кулмамбетова Г.Н.; Алмагамбетов К.Х. Патентообладатель: Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения "Республиканская коллекция микроорганизмов" Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан), предназначенный для биоочистки сточных вод.
Штамм активно расщепляет животные жиры, однако не обладает окисляющей активности по отношению к нефти и нефтепродуктам, что не позволяет оценить его деструктирующую способность по отношению к нефтяным углеводородам.
Известны штаммы: Pseudomonas putida 36 (2. Авторское свидетельство СССР N1076446, Штамм Pseudomonas putida 36, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. A1, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101:32, C12N 1/20, C12R 1:40. Заявка: 3474745, 22.07.1982. Опубликовано: 28.02.1984. Заявитель: Западно-Сибирский научно-исследовательский геологоразведочный нефтяной институт. Авторы: Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Морозова Т.Н.); Acinetronacter sp. НВ-1 (3. Патент RU N2077579. Штамм бактерий Acinetobacter species, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1: 01, C12N 1/20, В09С 101:00. Заявка: 94043331/13, 06.12.1994. Опубликовано: 20.04.1997. Заявитель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии. Авторы: Жиркова Н.А., Кобелев B.C., Холоденко В.П. Патентообладатель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии); Pseudomonas alcaligenes Е7 (4. Патент RU N2134723. Штамм бактерий Pseudomonas alcaligenes Е7, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20, C12R 1:38. Заявка: 98105707/13, 25.03.1998. Опубликовано: 20.08.1999. Заявитель: Государственный научный центр прикладной микробилогии. Авторы: Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Чугунов В.А. Патентообладатель: Государственный научный центр прикладной микробилогии).
Недостатком штаммов является то, что они утилизируют нефть при сравнительно высоких температурах.
Известен консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 мас. % каждого микроорганизма, при этом совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м3 (5. Патент RU 2191643. Способ очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. C1, В09С 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1:01. Заявка: 2001119562/13, 09.07.2001. Опубликовано: 27.10.2002. Заявитель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ". Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И. Патентообладатель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ").
Недостатком является то, что при приготовлении рабочей суспензии микроорганизмов температура поддерживается на уровне +18+22°С, т.е. микроорганизмы, входящие в состав консорциума, не способны к деградации нефтепродуктов при пониженных положительных температурах (+10°С).
Известен нефтедеструктор, включающий культуру бактерий и микробное удобрение, содержащее нативные микроорганизмы: Clavibacter michiganese, Bacillus amyloliguefaciens, Micrococcus varians (6. Архипченко И.А., Загвоздкин В.К. Очистка нефтезагрязненных почв с помощью препаратов на основе микробных удобрений // Экология и промышленность России. Спецвапуск. 2004. С. 16-18).
Недостатком является то, что нефтедеструктирующая активность клеток микроорганизмов не достаточна для проведения нефтеочистки почвы в районах с коротким тепловым периодом.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis Колыма 7/2 (7. Патент RU №2446900. Способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими бактериями Bacillus subtilis. C2. B09C 1/10 (2006.01). Заявка: 2010129158/13, 13.07.2010. Опубликовано: 10.04.2012. Авторы: Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Неустроев М.М., Сазонов Н.Н., Парникова С.И., Степанова A.M. Патентообладатель: Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии), обладающий способностью снижать концентрацию нефти в почве до 0,48% в течение 3 месяцев летнего периода.
Однако штамм осуществляет деградацию только нефти и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в том числе в условиях широкого диапазона температур от +10 до +37°С.
В качестве прототипа служат штаммы: Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 (8. Патент RU 2482179. Штамм бактерий Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 - деструктор нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/26, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/57. Заявка №2012114907/10 от 04.2012 г. Опубликовано 20.05.2013 г. Бюллетень №14. Автор: Ерофеевская Л.А. Патентообладатель: ИПНГ СО РАН) и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 (9. Патент РФ №2525930. Штамм бактерий Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017-деструктор нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/07. Заявка: 2013113813/10, 27.03.2013. Дата начала отсчета срока действия патента 27.03.2013. Дата подачи заявки: 27.03.2013. Опубликовано: 20.04.14 г. Бюл. №11. Автор: Ерофеевская Л.А. Патентообладатель: ИПНГ СО РАН), обладающие высокой утилизирующей эффективностью по отношению к нефти и нефтепродуктам.
Недостатком известных штаммов является то, что для наращивания биомассы из клеток штаммов Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 требуется специальная среда с добавлением перфторуглеродов в виде дефицитного и дорогостоящего препарата «Перфторан», что не экономично и усложняет процедуру накопления клеточной биомассы штаммов, используемых для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов, кроме того, не известна их способность утилизировать бензин и керосин авиационный.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению, как к нефти, так и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в относительно короткие сроки, в широком диапазоне температур от +10 до +37°С, которые могут быть использованы для очистки воды и почвы, как от нефти, так и от нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).
Поставленная задача решена тем, что получен новый бактериальный штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).
Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +10 до +37°С, в относительно короткие сроки (7-60 суток).
Заявляемый штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D (авторский номер LER-1) выделен из мерзлотного нефтезагрязненного почво-грунта, трассы магистрального нефтепровода «Восточная Сибирь-Тихий Океан» 1351,5 км, Ленский район, Республика Саха (Якутия).
Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ) Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) под регистрационным номером ВКМ B-2815D.
Полученный штамм Bacillus sp. ВКМ B-2815D характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки.
Грамположительные палочки с центрально-расположенными овальными спорами.
Культуральные характеристики.
На мясопептонном агаре (МПА) (масс. %: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2) и ГРМ агаре (на основе гидролизата рыбной муки), масс. %: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; рН 7,1-7,5, формирует суховатые, матовые, крупные, непрозрачные, сероватые колонии с неровной шероховатой поверхностью и неровными краями, диаметром до 5 и более мм.
На среде Сабуро (состав, г/л: пептон - 10,0 мальтоза - 40,0; агар - 12,0±2,0; вода очищенная до 1 л), формирует матовые, крупные, непрозрачные, сероватые колонии с неровной шероховатой поверхностью и неровными краями, диаметром до 5 и более мм. Консистенция суховатая.
На агаризованной среде Мюнца (10. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки - Микробиология, 1963, №5 - С. 1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, бензин, керосин авиационный) следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; К2 НРО4 - 0,14; КН2 PO4 - 0,06; агар - 2,0; нефть или нефтепродукты - 1,0; вода дистиллированная - остальное, рН - 7,2, растет в виде серых суховатых колоний диаметром 1-3 мм.
В мясо-пептонном бульоне промышленного производства образует суховатую пленку поверх бульона.
Растет при рН 6,5-8,0 при температуре от +10 до +37±1°С.
Отношение к кислороду: облигатные аэробы.
В анаэробных условиях штамм сразу не погибает, но развивается медленнее.
Используемые источники углерода: сорбит.
Проверенные не используемые источники углерода: лактоза, глюкоза, цитрат натрия, малонат натрия.
Другие проверенные тесты: оксидаза-отрицательный, каталаза-положительный, не декарбоксилирует лизин и орнитин, не способен расщеплять фенилаланин, индол-отрицательный, сероводород не продуцирует, активен в отношении инозита, уреаза-отрицательный, тест с β-галактозидазой - отрицательный.
Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).
Штамм не патогенен для растений (проверка на фитотоксичность проведена на семенах овса посевного (
sativa) сорт «Скакун», пшеницы (Triticum) сорт «Приленская-19» и клевера лугового (Trifolium pretense).
Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном МПА или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре +4°С.
Штамм может быть получен в лаборатории №2 Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук (ИПНГ СО РАН), по адресу: 677980, Республика Саха (Якутия), г. Якутск, ул. Октябрьская, 1.
Изобретение поясняется следующими примерами.
Пример 1. Выделение и культивирование штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D
Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D выделен из мерзлотного нефтезагрязненного почво-грунта методом накопительных культур на минеральной среде с нефтью с последующим пересевом на МПА.
Для этого, соблюдая правила асептики, 1 г почвы, предварительно просеянной и освобожденной от корней и других посторонних включений, растирают в ступке и вносят в колбы емкостью 250 мл, с содержанием 100 мл, заранее подготовленной минеральной средой следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное, рН 7,2.
В качестве единственного источника углерода и энергии используют нефть, которую вносят в среду Мюнца в количестве 1000 мг на 1,0 дм3 среды.
Инкубация проводится в качалочных условиях на установке «УВМТ-12-250» при 200 об/мин и температуре +20±1°С.
Рост бактерий наблюдают через 7 суток инкубации по образованию мутной эмульсии и дезинтеграции слоя нефти.
Чистая культура бактерий получена путем культивирования при вышеперечисленных условиях и многократных пересевов (более 10) накопительной культуры на чашки Петри с МПА (масс. %): ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2.
Далее посевы инкубировали в стационарных условиях при различных температурах (+10, +20, +30 и +37 (±1)°С).
Через 72 ч при культивировании штамма при температурах от +10 до +37°С на поверхности МПА наблюдали появление суховатых, матовых, непрозрачных серых колонии с неровной шероховатой поверхностью и неровными краями, диаметром до 5 и более мм., которые по культурально-морфологическим и биохимическим признакам, а также по результатам проведенного анализа нуклеотидных последовательностей гена 16SpPHK и ключевых фенотипических признаков, согласно таксономическим описаниям, приведенным в Определителе Берги (11. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact; July 1985, p. 408.). идентифицированы, как штамм Bacillus sp.
При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:
Результаты определения родовой принадлежности штаммов и процента сходства с ближайшими известными видами, представлены в таблице №1.
Пример 2. Приготовление бактериального препарата на основе клеток штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D
Изолированные колонии, полученные по примеру 1, пересевают на скошенный МПА и инкубируют 48-72 часов при температуре +20±1°С. Клетки смывают 0,9% раствором NaCl и готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята с титром 1×109 микробных клеток/см3 по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.
Для получения препарата готовят жидкую минеральную среду с нефтью (нефтепродуктами) следующего состава (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; К2НРО4 - 0,14; КН2РО4 - 0,06; нефть (нефтепродукты) - 1,0; вода дистиллированная -остальное; рН среды - 7,2 и культивируют в колбах в качалочных условиях в течение 48-72 часов, при температуре плюс 20±1°С, при 200 об/мин.
Получают жидкую мутноватую смесь клеток штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D с титром 1-5×109 клеток/см3, которую можно использовать в качестве препарата для обработки почвы или воды, загрязненной нефтью и нефтепродуктами.
Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D
Клетки штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D смывают 0,9% раствором NaCl со скошенного МПА (по примеру 2), готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята, объемом 25 см3, с концентрацией 1×109 микробных клеток/см3 по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.
Полученный бактериальный изолят штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D культивируют в водной среде с минеральным составом (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное; рН среды - 7,2.
В колбочки объемом 200,0 см3 вносят по 100,0 см3 готовой минеральной среды и 1000 мг нефти (нефтепродуктов).
Колбы засевают клетками штамма до концентрации 1×109 клеток/см3.
В качестве контроля ставят такую же колбу со средой, нефтью и без бактерий для определения общих (естественных) потерь.
Опыт проводят в трех повторностях.
Колбы культивируют при температурах +10°С; +20°С; +30°С; +37°С в течение 7 суток.
Биодеградацию нефти и нефтепродуктов определяют спектрометрическим методом, с использованием концентратомера «ИКН-0,25» (12. ФР. 1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методка выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-0,25»).
Данные эксперимента показывают, что в водной среде с минеральными компонентами предлагаемый штамм Bacillus sp. ВКМ B-2815D на 7-е сутки культивирования в условиях постоянной аэрации утилизирует от 3,4 до 4,8% - нефти и нефтепродуктов при температуре +10°С; от 43,37 до 47,78% - при температуре +20°С; от 53,7 до 56,97%) - при температуре +30°С; от 63,4 до 65,0% - при температуре +37°С (таблица 2).
Пример 4. Очистка воды от нефти с помощью клеток штамма Bacillus sp. ВКМ В-2815D
В эксикатор объемом 5,0 дм3 вносят 3,0 дм3 водопроводной воды, отстоявшейся в течение суток при комнатной температуре.
В воду добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти (нефтепродукта) и 30,0 см3 бактериального изолята штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D, приготовленного по примеру 2, содержащего 1,0-109 клеток/см3 суспензии.
В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дм с добавлением 30000 мг нефти (нефтепродукта) и без внесения микробной суспензии бактериального изолята.
Эксперимент проводят в течение 60 суток, поддерживая температуру воды в интервале +15+20°С.
Полученные результаты (таблица 3) показали, что в воде, деструкция нефти под влиянием штамма Bacillus sp. ВКМ B-2815D за 60 суток составила 67,55% для нефти и 67,58% для дизельного топлива.
Деструкция в контрольной емкости существенно не изменилась (таблица 3).
Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма является то, что он обладает высокой утилизирующей способностью по отношению как к нефти, так и к нефтепродуктам в относительно короткие сроки (от 7 до 60 суток), в широком диапазоне температур от +10 до +37°С, который может быть использован для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, керосин авиационный, бензин).
Claims (1)
- Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ B-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139337A RU2675940C1 (ru) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139337A RU2675940C1 (ru) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2675940C1 true RU2675940C1 (ru) | 2018-12-25 |
Family
ID=64753855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017139337A RU2675940C1 (ru) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2675940C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113652368A (zh) * | 2021-08-01 | 2021-11-16 | 重庆工商大学 | 一种耐重金属降解废机油的热带芽孢杆菌 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141523C1 (ru) * | 1998-07-14 | 1999-11-20 | Тульский артиллерийский инженерный институт | Штамм бактерий bacillus sp. продуцент биоцида тропических микромицетов - деструкторов технических масел |
| RU2204597C2 (ru) * | 2001-03-05 | 2003-05-20 | Филенков Владимир Михайлович | Штамм архебактерий bacillus sp. вкпм в-5061 - деструктор нефтепродуктов и фосфатов, используемый при очистке почвы и сточных вод |
| RU2525930C1 (ru) * | 2013-04-23 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Способ очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов спорообразующими бактериями bacillus vallismortis |
-
2017
- 2017-11-13 RU RU2017139337A patent/RU2675940C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141523C1 (ru) * | 1998-07-14 | 1999-11-20 | Тульский артиллерийский инженерный институт | Штамм бактерий bacillus sp. продуцент биоцида тропических микромицетов - деструкторов технических масел |
| RU2204597C2 (ru) * | 2001-03-05 | 2003-05-20 | Филенков Владимир Михайлович | Штамм архебактерий bacillus sp. вкпм в-5061 - деструктор нефтепродуктов и фосфатов, используемый при очистке почвы и сточных вод |
| RU2525930C1 (ru) * | 2013-04-23 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Способ очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов спорообразующими бактериями bacillus vallismortis |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ПЛЕШАКОВА Е.В. Интродукция нефтеокисляющих микроорганизмов в загрязненную почву: Проблемы и перспективы, Известия Саратовского Университета, 2011, т.11. Серия Химия. Биология. Экология, вып.2, с.102-111. * |
| ПЛЕШАКОВА Е.В. Экологические аспекты кислотоустойчивости нефтеокисляющих микроорганизмов в ходе биоремедиации загрязненных почв., Поволжский экологический журнал, 2010, N 4, с. 374-382. * |
| ПЛЕШАКОВА Е.В. Экологические аспекты кислотоустойчивости нефтеокисляющих микроорганизмов в ходе биоремедиации загрязненных почв., Поволжский экологический журнал, 2010, N 4, с. 374-382. ПЛЕШАКОВА Е.В. Интродукция нефтеокисляющих микроорганизмов в загрязненную почву: Проблемы и перспективы, Известия Саратовского Университета, 2011, т.11. Серия Химия. Биология. Экология, вып.2, с.102-111. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113652368A (zh) * | 2021-08-01 | 2021-11-16 | 重庆工商大学 | 一种耐重金属降解废机油的热带芽孢杆菌 |
| CN113652368B (zh) * | 2021-08-01 | 2023-06-13 | 重庆工商大学 | 一种耐重金属降解废机油的热带芽孢杆菌 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2523584C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Exiguobacterium mexicanum - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
| CN102994428B (zh) | 一株海洋产表面活性剂菌株lhod-1及其应用 | |
| RU2482179C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
| Stancu | Response mechanisms in Serratia marcescens IBB Po15 during organic solvents exposure | |
| RU2509150C2 (ru) | Ассоциация штаммов бактерий-нефтедеструкторов и способ ремедиации нефтезагрязненных объектов | |
| RU2675940C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2513702C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus vallismortis - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2687155C1 (ru) | Штамм бактерий microbacterium paraoxydans bkm ac-2619d - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2705290C1 (ru) | Микробный препарат для биоремедиации почвы, загрязненной нефтью и нефтепродуктами | |
| RU2300561C1 (ru) | Штамм rhodococcus globerulus h-42 для разложения нефти и нефтепродуктов | |
| RU2687131C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ MICROCOCCUS LUTEUS VKM Aс-2627D - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
| Zobaer et al. | Isolation of biosurfactant producing bacteria from oil-spilled soil and characterization of their secreted biosurfactants in pathogen-inhibition and oil-emulsification | |
| RU2560272C1 (ru) | Штамм бактерий serratia plymuthica -деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| KR101475589B1 (ko) | 연안 갯벌에서 분리 동정한 균주 및 이를 이용한 갯벌 유기물 정화제 | |
| RU2675941C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus simplex ВКМ В-2817D - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2615464C1 (ru) | Препарат для очистки почв и водных объектов от нефти и нефтепродуктов | |
| RU2675938C1 (ru) | Штамм бактерий Lisinibacillus fusiformis ВКМ В-2816D - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2687130C1 (ru) | Штамм бактерий microbacterium sp. bkm ac-2625d - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2228952C2 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas stutzeri mev-s1, используемый для очистки почв, грунтовых и поверхностных вод от нефти и продуктов ее переработки | |
| RU2558299C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
| RU2676850C1 (ru) | Штамм бактерий Lisinibacillus sp. ВКМ В-2814D - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2564105C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Exiguobacterium sp. -ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
| RU2617950C1 (ru) | Штамм бактерий Stenotrophomonas maltophilia - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2687154C1 (ru) | Штамм бактерий stenotrophomonas sp. вкм в-2818d - деструктор нефти и нефтепродуктов | |
| RU2687127C1 (ru) | Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20191203 |