RU2673737C2

RU2673737C2 - Композиции летучих органических веществ, обладающие антимикробной активностью

Info

Publication number: RU2673737C2
Application number: RU2016103137A
Authority: RU
Inventors: Гари А. СТРОБЕЛ; Брайан БЛАТТ
Original assignee: ЭКОПЛЭНЕТ ЭНВАЙРОНМЕНТАЛ, ЭлЭлСи
Priority date: 2013-07-02
Filing date: 2014-07-02
Publication date: 2018-11-29
Also published as: EP3017054B1; CN106414752A; MX2016000116A; RU2018139976A; CA2917149C; ES2769893T3; NZ754916A; NZ715859A; RU2016103137A; US20190269634A1; AU2014284267A1; AU2019229354A1; AU2018214127A2; EP3017054A4; AU2018214127A1; US20160250167A1; AU2019229354B2; BR112015032961B1; US11285120B2; AU2014284267B2

Abstract

Изобретение относится к композиции, обладающей антимикробной активностью. Химическая композиция включает антимикробный компонент, содержащий пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат, и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аминокислоты, глюкозы, хлорида натрия, хлорида калия и ацетата магния. Изобретение позволяет повысить активность композиции. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 12 табл., 17 пр., 28 ил.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США №61/842362, поданной 2 июля 2013 года, и предварительной заявке США №61/948902, поданной 6 марта 2014 года, каждая из заявок включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Важность безопасной утилизации миллиардов фунтов человеческих и животных экскрементов каждый день таким образом, чтобы избежать множества проблем со здоровьем, связанных с такими отходами, не может быть переоценена. В действительности, только часть огромного объема экскрементов безопасно утилизируется, тогда как остальная часть необработанных отходов и представляет угрозу для здоровья людей и животных. Например, хорошо известно, что комплекс бактериальных и других агентов, вызывающих желудочно-кишечные заболевания, является основной причиной смертности в мире. Кроме того, хорошо известно, что эти виды заболеваний воздействуют преимущественно на новорожденных и детей, а также скот. Подсчитано, что в течение ближайших десяти лет по меньшей мере двадцать миллионов человек погибнет в результате загрязненности и не соответствия условий санитарных нормам.

Одна из причин этого заключается в том, что около 2,4 млрд. человек живут в районах, где нет надлежащих санитарных условий. Почти 4000 детей умирают каждый день от таких заболеваний, как диарея. Кроме того, люди, которые страдают заболеваниями, передающимися через воду, занимают около половины больничных коек в мире. В нескольких азиатских странах от болезней, связанных с диареей, умирает в два раза больше людей, чем от СПИДа. По сути, не соответствие условий санитарным нормам, связанное с невозможностью в домах, общинах и, в некоторых случаях, в целых странах, адекватной обработки и утилизации экскрементов человека и животных, стимулирующих рост и развитие болезнетворных микроорганизмов.

Без сомнения, нежелательные последствия микроорганизмов в промышленном применении многочисленны. Например, необходимы более безопасные и более эффективные средства для очистки поверхностей, зараженных микроорганизмами, в медицинских учреждениях. Необходимы более безопасные и более эффективные средства для обработки сельскохозяйственных культур против нежелательного роста микроорганизмов. Далее, остро необходимо средство для ослабления нежелательных запахов, образуемых при расщеплении экскрементов в промышленной фермерской деятельности.

Существует насущная необходимость замены антибиотиков другими типами соединений, которые также обладают противомикробной активностью. Продолжение использования наиболее часто используемых антибиотиков в животноводстве и сельском хозяйстве привело к приобретенной устойчивости в микробных популяциях, особенно микробов, которые могут быть патогенными. Каждый год по меньшей мере 23000 человек в США умирают из-за инфекций, вызванных лекарственно-устойчивыми бактериями, и их число растет.

Таким образом, существует необходимость в данной области техники в противомикробных композициях пригодных для сокращения численности микроорганизмов и снижения влияния микробных продуктов в широком диапазоне в промышленном применении, а также для препаратов и способов обработки экскрементов человека и животных. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к химической композиции, обладающей противомикробной активностью, содержащей пропановую кислоту, изомасляную кислота и по меньшей мере один сложный эфир. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый гексаноат. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере один носитель, который выбран из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый гексаноат составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения, соотношение пропановая кислота, изомасляная кислота и изоамиловый гексаноат составляет около 7 частей двух кислот и 2 части изоамилового бутирата. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере один эндофит. В другом варианте реализации изобретения эндофит принадлежит к роду Fusarium.

В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к химической композиции, содержащей преимущественно пропановую кислоту, изомасляную кислоту, изоамиловый гексоноат и носитель, выбранный из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита.

В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к химической композиции, содержащей пропановую кислоту и по меньшей мере сложный эфир, содержащий кислотный остаток с 6-12 атомами углерода, причем химическая композиция имеет соотношение пропановая кислота: сложный эфир приблизительно 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый бутират. В другом варианте реализации изобретения композиция, дополнительно содержит по меньшей мере одну пищевую добавку и по меньшей мере одну соль. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, сывороточный белок, хлорид калия, сульфат магния и хлорид натрия. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия и ацетат магния. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия, ацетат магния, и дигидрофосфат калия. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере один носитель. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит преимущественно пропановую кислоту и изоамиловый гексоноат в соотношении пропановая кислота: изоамиловый гексоноат около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит по меньшей мере один эндофит. В другом варианте реализации изобретения эндофит принадлежит к роду Fusarium.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения животного, имеющего заболевание или расстройство, связанное с микробной инфекцией, который включает введение животному эффективного количества композиции, содержащей по меньшей мере одну органическую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к композиции, которая содержит пропановую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир, содержащий кислотный остаток с 6-12 атомами углерода, причем химическая композиция имеет соотношение пропановая кислота: сложный эфир около 7:2 объем/объем.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Следующее подробное описание вариантов реализации изобретения будут лучше поняты при прочтении в сочетании с прилагаемыми графическими материалами. С целью иллюстрирования настоящего изобретения, которое проиллюстрировано на графических материалах вариантов реализации изобретения, которые в настоящее время являются предпочтительными. Следует понимать, однако, что настоящее изобретение не ограничивается точными компоновками и средствами в вариантах реализации изобретения, показанных в графических материалах.

Фиг. 1 иллюстрирует чашку Петри для биотестирования с целью определения биоактивности различных сложных эфиров в сочетании 1:1 смеси двух органических кислот согласно таблице 2. Тест - организмы были следующими - Cercospora (темно - внизу слева снизу) затем по часовой стрелке - Phytophthora, Verticillium, Sclerotinia, Pythium, Fusarium, Trichoderma, Rhizoctonia, и Aspergillus. Штрихи - Saccharomyces (крайний справа внизу) затем Candida, E coli и Bacillus (слева внизу). А=контрольная чашка Петри и B=чашка Петри с Системой 1 после инкубации в течение 30 час.

Фиг. 2 иллюстрирует влияние Системы 1 на рост бактерий на человеческих экскрементах. 5 мг свежих человеческих экскрементов распределяли по поверхности чашки Петри с картофельно-декстрозным агаром. Затем пробки удалили из центра, и бентонит помещали в лунки около по 0,5 г. Бентонит в центральной лунке не содержал ингредиенты Системы 1, но в лунке справа от центра была Система 1 в объеме 1 мл Системы 1 на 10 г бентонита. Чашки Петри инкубировали в течение 48 ч при 22°С и затем фотографировали. Бактериальный рост в чашке Петри, обработанной Системой 1, не был обнаружен, но в контрольной чашке Петри было достаточно бактериальных колоний.

Фиг. 3 иллюстрирует влияние Системы 2 на бактериальный рост на экскрементах человека. 5 мг свежих человеческих экскрементов распределяли по поверхности чашки Петри с картофельным декстрозным агаром. Затем пробки удалили из центра и бентонит поместили в лунки около по 0,5 г. Бентонит в центральной лунке не содержал ингредиенты Системы 1, но в лунке справа от центра была Система 1 в объеме 1 мл Системы 1 на 10 г бентонита. Чашки Петри инкубировали в течение 48 ч при 22 С и затем фотографировали. Бактериальный рост в чашках Петри, обработанных Системой 2, не был обнаружен.

Фиг. 4 иллюстрирует два кошачьих туалета с кошачьими фекалиями в каждой от 5 разных кошек около 140 гр. Контейнер справа был обработан Системой 1 на бентоните (0,5 мл / 100 г бентонита). После 5 дней замеры аммиака показали 14 мд в контрольном контейнере (слева) и 0 мд в обработанном контейнере. В целом запах был значительно ослаблен в обработанном контейнере.

Фиг. 5 иллюстрирует обработку около 140 г экскрементов человека с уриной с Fusarium subglutinans 06-1 в присутствии Системы 2 (1 мл на 10 г цеолита). После 3 недель отмечен существенный рост Fusarium subglutinans (белый мицелий в правом контейнере). Уровень аммиака составил 71,4 в контрольном контейнере слева и 12.1 в обработанном контейнере справа. Никакого грибкового роста и никакой деградации экскрементов в контрольном варианте опыта не произошло (слева).

Фиг. 6 иллюстрирует прогрессивный рост Fusarium spp на маленьких кусочках человеческих экскрементов массой около 100 мг (сырая масса) на протяжении многих дней. Изолированы и охарактеризованы вновь растущие Fusarium spp.отличные от Р2-24 (Fusarium culmorum). Новые Fusarium spp.особенно E06-1 и E06-5 растут быстрее на человеческих экскрементах. Рост измеряли радиусом удаления мицелия от агарового блока, размещенного на кусочке экскрементов человека.

Фиг. 7 иллюстрирует шестидневную культуру гриба Fusarium subglutinans E06-1 (вверху), который предпочтительно применяют для обработки экскрементов человека и животных в сочетании с Системой 2. Световая микроскопия спор и гифов F. subglutinans (снизу). Споры слегка изогнуты и имеют 9.8 - 12×2.5 мкм.

Фиг. 8 иллюстрирует интенсивный рост Fusarium subglutinans (E06-8) на человеческих экскрементах (центр) в присутствии Системы 2 с бентонитом в качестве носителя. Обратите внимание на ингибирование бактериального роста слева и в центре культуральной чашки, которые подвергаются влиянию испарений из Системы 2, исходящих от частиц бентонита на левой стороне чашки, что обеспечивает рост гриба. Там было добавлено 0,5 г обработанного бентонита, около 100 мг экскрементов человека, чашки Петри инкубировали в течение 12 дней. См. фиг. 6 со сравнительными измерениями роста.

Фиг. 9 иллюстрирует биологическую активность различных тестовых смесей на фоне тестовых микроорганизмов. Небольшой фрагмент каждого организма был помещен в периферии КДА в чашке Петри. В центральную лунку помещали исследуемый раствор в пластиковом подстаканнике. Контрольная чашка (А) была устроена также. После 30 ч роста тест-организмов по сравнению с контролем рассчитывали % ингибирования. Чашка Петри (Б), содержала исследуемую смесь. Через 30 ч после того как была установлена чашка Петри выполняли измерения.

Фиг. 10 иллюстрирует уменьшение микробного загрязнения дробленого зерна через 1 ч после обработки при различных концентрациях раствора С-3. Концентрации выше 0.5% полностью вывели бактериальное загрязнение, как это видно из-за отсутствия бактериальных колоний при 0.5% и 1.0% обработке (см. выше). Какие-то минимальные грибные загрязнения наблюдали в последнем варианте - обратите внимание на две грибные колонии на каждой из чашек справа. Инкубировали в течение двух дней при комнатной температуре, а затем фотографировали.

Фиг. 11 иллюстрирует использование бентонита с различными композициями для предобработки (C) в течение 3-х дней для уничтожения E.coli в экскрементах человека (полоса в середине чашки) и в то же время обеспечивает рост фузариума (верх чашки), которые в противном случае не позволяют потреблять твердые вещества в человеческих экскрементах.

Фиг. 12 иллюстрирует эффективность препарата С-3 в обработке фекалии кур: вначале путем нанесения суспензии на пластины КДА, а затем добавлением 0,5 г цеолита, обработанного 3 мл С-3 на фунт (453 г) носителя. Фотография была сделана после 3 дней инкубации при комнатной температуре. Видно, что чашка Петри, содержащая С-3 цеолит, была практически свободна от бактериального загрязнения.

Фиг. 13 иллюстрирует 1 фут-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху, наполненные обработанным пометом с добавлением необработанного бентонита в пропорции, указанной в инструкции на упаковке, для сравнения эффективности композиции.

Фиг. 14 иллюстрирует средний уровень содержания аммиака, получаемый в 5 минутный интервал каждые 24 часа (А). Пик уровня аммиака отображает аналогичную тенденцию с обработанным С-1 пометом, показывает значительное сокращение уровня аммиака (Б). Фиг. 14 Б иллюстрирует пиковый уровень аммиака, взятого из исследуемого 5-минутного интервала каждые 24 часа.

Фиг. 15 иллюстрирует микробиологическую активность С-1 по сравнению с контрольным образцом. Фигуры 15А и 15Б показывают, что бентонит в контроле (15А) имел огромное количество бактериальных колоний, вырастающих в чашке, в том числе в тех районах, близких к лунке, содержащей помет. Напротив, обработка С-1 (4 мл С-3 в расчете на фунт (453 г) носителя, 15Б) была практически свободна от бактериальных колоний вокруг лунки в чашке Петри.

Фиг. 16 иллюстрирует 1 фут-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху, заполненные сосновыми стружками и подстилкой рекомендуемо обработанной в пропорции указанной в инструкции на упаковке. Для этих испытаний были протестированы варианты с применением С-1 из расчета 15 мл на фунт (453 г) цеолита и контрольный вариант с необработанным цеолитом.

Фиг. 17А иллюстрирует средний уровень содержания аммиака, получаемый в 5 минутный интервал каждые 24 часа. Пик уровня аммиака отображает аналогичную тенденцию с Barnyard Bedding, показывая самые низкие уровни по производству аммиака (фиг. 17Б). Фиг. 17Б иллюстрирует пиковый уровень аммиака, взятого из исследуемого 5-минутного интервала каждые 24 часа.

Фиг. 18 иллюстрирует 1 фут-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху, наполненные сосновыми стружками (часто используемый подстилочный материал для крупных животных) и подстилкой обработанной в рекомендуемой пропорции указанной в инструкции на упаковке. Для этих испытаний были протестированы контрольный вариант с необработанным цеолитом и вариант с обработанным С-1.

Фиг. 19 иллюстрирует средний уровень содержания аммиака, получаемый в 5 минутный интервал каждые 24 часа (19А). Пик уровня аммиака отображает аналогичную тенденцию с обработанной С-1 подстилкой, показывая самые низкие уровни по производству аммиака (19Б). Фиг. 19Б иллюстрирует пиковый уровень аммиака, взятого из исследуемого 5-минутного интервала каждые 24 часа.

Фиг. 20 иллюстрирует диарею у теленка до обработки раствором С-Х (фиг. 20А), и после двух курсов лечения С-Х раствором (фиг. 20Б).

Фиг. 21 иллюстрирует диарею у теленка до лечения раствором С-Х (фиг. 21А), и через 24 часа после лечения раствором С-Х (фиг. 21Б).

Фиг. 22 иллюстрирует состояние коров молочных пород в коровнике 1.

Фиг. 23 иллюстрирует типичную кремово-желтую диарею, наблюдаемую у теленка 919 (Фиг. 23А), и теленок 919 полностью выздоровел после лечения С-Х раствором (фиг. 23Б).

Фиг. 24 иллюстрирует теленка 166 на ранчо 9, страдающего диареей зимой 2014 года (Фиг. 24А), и после одного дня обработки С-Х раствором (фиг. 24Б), где животное выздоровело, и желтая диарея поутихла.

Фиг. 25 иллюстрирует овец, больных маститом (фиг. 25А) и введение С-3 композиции животному с использованием шприца (фиг. 25Б).

Фиг. 26 иллюстрирует малину, обрабатываемую бентонитом (контроль) в центральной лунке (фиг. 26А) и ту, которую обрабатывали смесью С-3 1:10 (фиг. 26Б), и хранили в течение 1 недели при комнатной температуре. Ягоды, обработанные С-3, оставались съедобными и не гнили.

Фиг. 27, включает фигуры 27А-27Б, иллюстрирует почву, обработанную P. ultimatum или С-3. Фиг. 27А представляет собой фотографию обработанной P. ultimatum почвы с семенами красной свеклы. Наблюдали прорастание только одного или двух семян. Фиг. 27Б представляет собой фотографию обработанной С-3 на бентоните почвы в присутствии P. ultimatum и семян красной свеклы. Наблюдали прорастание многих семян.

Фиг. 28, включает фигуры 28А-28Г, иллюстрирует изображения водного раствора агар-агара в чашках Петри для испытаний С-3 с семенами красной свеклы. Фигура 28А-изображение чашка Петри со средой и семенами красной свеклы, бентонитом, С-3 (1 часть к 10 г бентонита), и P. ultimum. Было установлено влияние С-3 на рост клеток P. ultimum. Фиг. 28Б изображает чашку Петри со средой и семенами красной свеклы и P. ultimum. Фиг. 28 В представляет собой изображение чашка Петри со средой и с семенами красной свеклы. Фиг. 28 Г представляет собой изображение чашки Петри со средой, демонстрируя, что С-3 была не вредна для семян красной свеклы.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следует понимать, что фигуры и описания настоящего изобретения были упрощены для иллюстрации элементов, которые являются релевантными для ясного понимания настоящего изобретения, устраняя, в целях ясности, многие другие элементы, найденные в типичных противомикробных составах. Специалисты в данной области техники могут признать, что другие элементы и/или шаги желательны и/или необходимы для осуществления настоящего изобретения. Однако, поскольку такие элементы и шаги хорошо известны в данной области техники, и потому, что они не способствуют лучшему пониманию настоящего изобретения, обсуждение таких элементов и шагов в данном документе не приведено. Настоящее описание в данном документе, направлено на все подобные вариации и модификации, как элементы и способы, известные специалистам в данной области техники.

Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, как обычно их понимает любой специалист в данной области техники, к которой данное изобретение принадлежит. Хотя любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут быть использованы в практике или тестировании настоящего изобретения, предпочтительные способы и материалы описаны.

Используемый в настоящем документе каждый из следующих терминов имеет значение, связанное с ним в этом разделе.

Артикли “A” и “an” используются в настоящем документе для ссылки к одному или более чем одному (т.е. по меньшей мере одного) грамматическому объекту статьи. Например, “элемент” означает один элемент или более чем один элемент.

“Около”, используемый в настоящем документе при упоминании измеримых величин, таких как количество, временной период, и тому подобное, предназначается, чтобы охватить вариации ±20%, ±10%, ±5%, ±1%, и ±0.1% от заданного значения, так как такие вариации подходят.

“С-1”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем составам Системы 1.

“С-2”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем композициям Системы 2.

“С-3”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем композициям Системы 3.

“С-4”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем композициям Системы 4.

“С-5”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем композициям Системы 5.

“С-Х”, используемый в настоящем документе, относится к любому и всем композициям Системы Х, которая может содержать одну или более из систем 1-5.

Используемый в настоящем документе, термин «CLOE» означает композицию, содержащую C-1 или C-5.

Используемый в настоящем документе термин «Barnyard Bedding» означает композицию, содержащую С-1 или С-5.

Используемый в настоящем документе термин “фармацевтическая композиция” относится к смеси по меньшей мере одной композиции в соответствии с настоящим изобретением с другими химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или вспомогательные вещества. Фармацевтическая композиция облегчает введение композиции в организм. Несколько способов введения композиции существует в данной области техники в том числе, но, не ограничиваясь, внутривенное, пероральное, аэрозольное, парентеральное, глазное, легочное и местное введение.

Используемый в настоящем документе термин “фармацевтически приемлемый” относится к веществу, такому как носитель или разбавитель, который не аннулирует биологическую активность или свойства композиции, и относительно нетоксичен, т.е., вещество может вводиться индивидууму без возникновения нежелательных биологических эффектов или взаимодействия вредным образом с любым из компонентов композиции, в которых он содержится.

Используемый в настоящем документе термин “фармацевтически приемлемый носитель” обозначает фармацевтически приемлемое вещество, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, стабилизатор, диспергирующий агент, суспендирующий агент, разбавитель, наполнитель, загуститель, растворитель или инкапсулирующее вещество, участвующее в переносе или транспортировке композиции целесообразно в рамках настоящего изобретении или пациенту, так что он может выполнять свои функции, Как правило, такие конструкции производятся или транспортируются из одного органа или части тела к другому органу или части тела. Каждый носитель должен быть “приемлемым” в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции, включая полезность композиции в данном изобретении, и безвредность для пациента. Некоторые примеры веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей содержат: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлоза; порошкообразный трагакант; солод; желатин; тальк; наполнители, такие как какао-масло и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этил олеат и этиллаурат; агар; буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; поверхностно-активные агенты; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатные буферные растворы; и другие нетоксичные совместимые вещества, занятых в фармацевтической рецептуры. Используемый в данном документе “фармацевтически приемлемый носитель” содержит любые, антибактериальные и противогрибковые вещества, агенты задерживающие всасывание, и тому подобное, которые совместимы с активностью композиции, используемой в данном изобретении, и физиологически приемлемы для пациента. Составы могут содержать дополнительные активные композиции. “Фармацевтически приемлемый носитель” может дополнительно содержать фармацевтически приемлемую соль в соответствии с настоящей композицией, полезной в рамках данного изобретения. Другие дополнительные ингредиенты, которые могут содержаться в фармацевтической композиции, используемые в практике данного изобретения, известны в данной области техники, и описаны, например, в «Remington Pharmaceutical Sciences» (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA), которая включена в настоящий документ посредством ссылки.

В данном описании, различные аспекты настоящего изобретения могут быть представлены в формате диапазона. Следует понимать, что описание в формате диапазона всего лишь для удобства и краткости изложения и не должно рассматриваться как неизменное ограничение на объем данного изобретения.

Соответственно, описание диапазона следует рассматривать, а именно, раскрывать все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в пределах этого диапазона. Например, в описании диапазона, от 1 до 6 должны считать имеющим описанные поддиапазоны, а именно, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 6 и т.д., а также отдельные номера в пределах этого диапазона, например, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5.3, 6 в любом целом или дробном шаге между ними. Это применимо независимо от широты диапазона.

Настоящее изобретение относится к открытию эффективных и полезных химических композиций, отдельных, либо в сочетании с некоторыми эндофитными грибами, такими как Fusarium spp, которые имеют сильную антимикробную активность и могут быть использованы для различных целей, таких как: снижение микробного роста на поверхностях медицинского оборудования или инструментах, снижение микробного роста на сельскохозяйственных растениях, или обеззараживания, деградации и дезодорирования экскрементов человека и животных. Например, композиции настоящего изобретения пригодны для обработки отходов в любом месте, например в уборных, кошачьих туалетах, зоомагазинах, амбарах, курятниках, свинарниках, домашних хозяйствах, зоопарках и множестве других мест.

В предпочтительном варианте реализации изобретения соответствующая комбинация безвредных композиций, содержащих ингредиенты, которые входят в перечень веществ, признанных полностью безвредными Управлением по контролю качества пищевых и лекарственных средств (США) и соответственно эндофитные грибы Fusarium spp, такие, как F. subglutinans, размещенные вместе в контейнере, например, в биоразлагаемом пластиковом пакете. Кроме того, в контейнере содержится необходимое количество полимера, поглощающего урину, и совместимого с эндофитом F. subglutinans. Эта комбинация активных веществ представляет собой безопасный, быстрый и современный способ переработки веществ, обнаруживаемых в экскрементах человека и животных. Наличие этих двух ингредиентов в пакете эффективно убивает многие вредные бактерии в человеческих экскрементах и в то же время начинают процесс переработки составляющих органических отходов в безвредные добавки к грунту.

Настоящее изобретение может применяться в связи с национальными чрезвычайными ситуациями, военными маневрами, морской деятельностью, стихийными бедствиями, занятиями спортом на открытом воздухе (кемпинг, пешие прогулки, каноэ, охота, езда на велосипеде и др.) и другими мероприятиями, в которых экскременты человека должны быть надлежащим и безопасным образом утилизированы. Это также касается разработки более безопасных средств для всех видов сельскохозяйственных животных и домашних питомцев.

В качестве примера, недавно было отмечено, что правильное и безопасное удаление человеческих экскрементов представляет собой важную проблему в бережном управлении неосвоенных районов земного шара. Эстетика, а также проблемы здравоохранения, основные вопросы, стоящие перед руководителями этих территорий. Соответственно, настоящее изобретение может подходить для человеческих и животных покровов, покровов растений, промышленных поверхностей, станков и для множества других целей.

В одном варианте реализации изобретения композиции Системы 1 (С-1), Системы 2 (С-2), Системы 3 (С-3), Системы 4 (С-4) и/или Системы 5 (С-5), и возможное использование бентонита, цеолита или перлита в качестве носителя (в зависимости от области применения) комбинируются вместе в контейнере и процессы гибели бактерий и/или деградация отходов начинается немедленно. В другом варианте реализации настоящее изобретение может быть использовано в подстилках для животных и обработке стойла, причем химическая смесь (с носителем) может быть использована непосредственно в месте обитания животных, что приводит почти к немедленной гибели бактерий, которые являются причиной появления вредных запахов, таких как аммиак. В другом варианте реализации настоящее изобретение может быть применено к поверхностям, таким как покровы сельскохозяйственных растений, поверхности медицинского оборудования, медицинского или промышленного инструмента, или тому подобных, чтобы устранить или в противном случае снизить количество микроорганизмов на обрабатываемой поверхности.

Антибиотики представляют собой вещества, которые убивают или подавляют рост бактерий. Частым заблуждением является то, что антибиотики эффективны против других микроорганизмов, таких как грибы и вирусы, когда на самом деле для таких целей необходимы противогрибковые и противовирусные соединения. Антибиотики работают, вмешиваясь в ключевые этапы метаболизма и размножения бактерий, и могут быть сгруппированы в две основные категории: бактерицидные и бактериостатические, в зависимости от того, убивают ли они бактерии или просто подавляют их рост, соответственно. Антибиотики обычно безопасны для использования людьми, потому что они действуют целенаправленно либо являются уникальными для определенных типов бактерий или эффективны против бактерий в очень низких концентрациях, которые считаются безопасными для человека. Другие классы химических веществ, таких как определенные спирты, кислоты и пероксиды могут обладать широкой ингибирующей и/или поражающей способностью, поскольку они затрагивают основополагающие элементы биохимии общие для многих форм жизни. Эти виды соединений классифицируются как антисептики, стерилизующие, обеззараживающие и дезинфицирующие средства, консерванты и зависимости от специфики их воздействия на жизнь микроорганизмов, режимов эффективного применения и токсичности для человека. Системы в соответствии с настоящим изобретением, такие как С-1, представляют собой смеси, состоящие преимущественно из короткоцепочечных органических кислот и сложных эфиров, в частности, пропановой кислоты и изоамилового гексаноата. Ни одна из этих молекул не классифицируется как антибиотик, но обе обладают антимикробными свойствами и могут быть либо бактерицидным, либо бактериостатическим в зависимости от концентрации и продолжительности применения.

Системы в соответствии с настоящим изобретением не работают по тем же механизмам, что и антибиотики. А антибиотики нацелены на совершенно конкретные шаги, часто путем узнавания очень конкретных структурных фрагментов, системы в соответствии с настоящим изобретением убивают бактерии и подавляют их рост с помощью воздействия на фундаментальные биохимические свойства, необходимые для поддержания жизни. Кроме того, компоненты системы в соответствии с настоящим изобретением действуют синергично так, что эффект от общей смеси больше, чем от суммы его частей. Механизм возникновения синергетического эффекта наблюдаемого с этими системами не понятен, но другие смеси кислот/сложных эфиров показывают такой же немного увеличенный комбинированный эффект.

Одним из основных компонентов систем по настоящему изобретению является пропановая кислота, короткоцепочечная органическая кислота, укрепившаяся в использовании в качестве консерванта в пищевой и сельскохозяйственной отраслях промышленности. Большинство организмов, включая человека и многие виды бактерий, имеют метаболические пути, которые облегчают использование пропановой кислоты в качестве питательного вещества, и в самом деле, одна группа бактерий может продуцировать эти молекулы. Таким образом, низкие концентрации пропановой кислоты, по сути, безвредны почти для всех организмов, но в больших концентрациях она не может быстро деградировать и начинает накапливаться внутри клетки. С увеличением ее концентрации внутри клетки, увеличивается и кислотность внутри клеток. Когда кислотность внутри клетки слишком высока, ферменты не могут функционировать должным образом, ДНК и другие биологические молекулы разрушаются, и клетки отмирают. Последние исследования показывают, что хотя влияние на внутриклеточную кислотность является основным антимикробным механизмом слабых органических кислот, но ни в коем случае не единственным механизмом. Когда кислоты диссоциируют и высвобождают протоны внутри клетки, то они становятся отрицательно заряженными. Высокая концентрация отрицательно заряженных молекул внутри клетки влечет за собой множество вредных эффектов связанных с осмотическим давлением, хранением питательных веществ, и метаболизмом.

При более низких концентрациях кислоты могут оказывать ингибирующее влияние, но не быть смертельными. Увеличение кислотности возникает, когда кислота диссоциирует и высвобождает протон. Когда кислотность внутри клетки значительно повышается, клетка может транспортировать протоны наружу в попытке поддерживать нормальный уровень рН. Несмотря на свою эффективность, данная стратегия требует расхода большого количества энергии и не приводит к летальному исходу только при низких концентрациях кислоты. Поскольку мелкие организмы более чувствительны к меньшим количествам пропановой кислоты, концентрации, которые безвредны для человека, могут быть смертельным или ингибирующим для бактерий. Пропановая кислота не представляет собой единственную органическую кислоту в С-1, но и другие схожие по размеру органические кислоты обладают противомикробным действием, предположительно возникающим, по сути, по тем же самым механизмам.

Противомикробный механизм эфиров остается в значительной степени неизвестным. Не желая быть связанными какой-либо теорией, одним из возможных ключей к разгадке исходит из того, что для данного набора сложных эфиров, те, которые способны более эффективно встраиваться в бактериальную клеточную мембрану, как правило, обладают усиленным антимикробными эффектом. Включение любой молекулы в клеточную мембрану изменяет химические и физические свойства мембраны, что приводит к изменениям в поглощении питательных веществ, экскреция, генерация энергии, и другие жизненно важные клеточные процессы. Не желая быть связанным какой-либо теорией, это наблюдение привело к предположению, что включение определенных сложных эфиров в клеточную мембрану меняет химические и физические свойства таким образом, что отрицательно сказывается на организме. Изменение клеточной мембраны также является механизмом, посредством которого, как полагают, влияют органические кислоты с более длинными цепями.

Как только антибиотики стали применять в массовом масштабе в течение 20-го века, проблема устойчивости к антибиотикам стала серьезной клинической проблемой. В 21-м веке, как только последствия антибиотикорезистентности стали более заметными и широко распространенными, данное понятие вошло в общественное сознание и было окончательно признано серьезной проблемой. В бактериальной популяции, которая подвергается воздействию антибиотиков, резистентность либо существует у очень небольшого числа особей или изначально возникает из-за естественной мутации и впоследствии выживают, поскольку устойчивые к антибиотику имеют преимущество в плане выживания по сравнению с неустойчивыми особями. Устойчивость к антибиотикам распространяется как по вертикальному пути: от резистентных клеток к своему потомству, так и по горизонтальному пути (прямой перенос генов устойчивости с устойчивых клеток к нерезистентным клеткам). Таким образом, резистентность быстро распространяется и увеличивает использование антибиотиков, которое оказывают выборочное давление, увеличивающее преимущество в выживании устойчивости к антибиотикам.

Бактерии могут приобрести устойчивость к данному антибиотику посредством четырех основных механизмов: совершенствуют ферменты, которые инактивируют антибиотик, изменяют структуру цели, так что антибиотик не может больше связываться с мишенью, изменяют метаболические пути, нивелируя ингибирующее влияние антибиотика, и развивают эффлюксный насос, который откачивает антибиотик во вне клетки. Каждый механизм имеет генетическую основу и может таким образом передаваться от клетки, которая изначально развила устойчивость к нерезистентным клеткам. В некоторых случаях бактериальные клетки могут приобрести устойчивость к различным видам антибиотиков. Это так называемые “супербактерии”, которые возникают, поскольку использование антибиотиков возрастает в сельском хозяйстве, ветеринарной и медицинской промышленности, поэтому будет увеличиваться распространение полирезистентных бактериальных штаммов. Кроме того, было выявлено, комбинации малых органических молекул, таких как кислоты и сложные эфиры, которые действуют синергетическим образом, имеют практически тот же противомикробный эффект, что и антибиотики. Органические молекулы, которые обладают этими свойствами, упоминают как “синергистов”.

Рассмотренные механизмы действия антибиотиков, а также резистентность к ним, могут быть обобщены одним словом - специфика. Антибиотики работают путем ориентации на конкретные структурные особенности, ферменты и макромолекулы. Кроме того, устойчивость к антибиотикам возникает, когда бактерии развивают эффлюксный насос специфичный для данного антибиотика или изменяют конкретные структурные особенности, ферменты или макромолекулы. Если антибиотики специфичны, компоненты систем настоящего изобретения являются общими. Органические кислоты и сложные эфиры не имеют конкретных мишеней, вместо этого они проявляют свое антимикробное воздействие путем изменения биохимической среды бактериальной клетки. Они эффективны против гораздо более широкого круга организмов и они вмешиваются в множество клеточных процессов.

Органические кислоты широко распространены в природе. Любая бактериальная клетка неизменно подвергается воздействию органических кислот в какой-то момент в своей жизни и в результате многие виды бактерий обладают врожденными генетическими механизмами, которые по индукции помогают им справиться со стрессами, вызванными воздействием естественной органической кислоты. Возможно, наиболее изучена толерантность сальмонеллы к воздействию кислоты. По сути, когда клетка сальмонеллы подвергается воздействию высокой, но сублетальной, концентрацией кислоты, она индуцирует экспрессию ряда генов, таких, что в следующий раз, когда она подвергается воздействию кислой среды, ее шансы на выживание гораздо выше. Это было продемонстрировано экспериментальным путем: посевом на кислую среду ранее обработанных и необработанных кислотой клеток сальмонеллы. Почти в каждом случае, ранее обработанные клетки, демонстрировали гораздо более высокую устойчивость к кислоте. E.coli также тщательно изучена толерантность к кислоте и вполне вероятно, что данный механизм присутствует у многих других видов бактерий. В случае патогенных видов микроорганизмов, подобных кишечной палочке и сальмонелле, существуют большие опасения относительно того, что индукция кислотоустойчивости при воздействии сублетальных концентраций органических кислот пищевых консервантов может увеличить бактериальную вирулентность, потому как бактерии имеют больше шансов на выживание под воздействием кислой желудочной жидкости в процессе пищеварения.

Тем не менее, существует важное различие между резистентностью к антибиотикам и устойчивостью к органическим кислотам. Многие гены, отвечающие за устойчивость к антибиотикам, расположены на мобильных генетических элементах, известных как плазмиды, которые легко передаются между клетками бактерий и видами бактерий. Таким образом, приобретение устойчивости к многочисленным антибиотикам представляет собой относительно простой процесс для любой бактериальной клетки. Механизм кислотоустойчивости, такой как толерантность к кислоте, с другой стороны, кодируются на хромосомной ДНК. Эта генетическая информация может передаваться только потомкам клетки и, таким образом, неожиданное появление “супербактерий”, которое наблюдается при множественной лекарственной устойчивости бактериальных штаммов, не наблюдается в данном случае. Более того, не желая быть связанным какой-либо теорией, не исключено, что синергический эффект наблюдается при использовании органической кислоты в сочетании с органическими эфирами может свести на нет некоторые механизмы кислотоустойчивости.

В одном варианте реализации изобретения для идентификации микроорганизма, которые могут расти на экскрементах человека или животных и в результате разрушают их, необходимо разработать новую антибактериальную смесь, чтобы убить содержащиеся в отходах микроорганизмы, которые обычно расщепляют мочевину до аммиака и мочевой кислоты. Аммиак смертелен для большинства грибов, которые в противном случае приводят к деградации твердых составляющих отходов. Основой этого открытия является известный факт, что пропановая кислота имеет антибактериальные свойства, но только до уровня ингибирования, и то же самое верно для изомасляной кислоты. Таким образом, эти два соединения были исходными ингредиентами для новых и эффективных антибактериальных смесей. Требовался дополнительный ингредиент в смесь, оказывающий летальное воздействие на микроорганизмы. Затем, совершенно неожиданным образом стало известно, что добавление определенных сложных эфиров к этим маленьким органическим кислотам, придает им значительное улучшение антимикробной активности.

Микроорганизмы, обитающие в тропических лесах мира, чтобы выжить, должны постоянно развивать биохимические механизмы, чтобы справиться с потенциальными конкурентами. В этой связи, они развили возможность продуцировать противомикробные молекулы и соединения, которые подавляют и уничтожают другие микроорганизмы. Поскольку новые антибиотики востребованы человечеством, исследователи посетят тропические леса в поисках новых микроорганизмов и веществ, которые они производят для подавления и уничтожения других микробных конкурентов. Некоторые микроорганизмы тропического леса указали на важные химические ключи, которые позволили выбрать соединения для систем 1-4.

Композиции

Частично, настоящее изобретение включает химическую композицию, содержащую по меньшей мере одну органическую кислоту, такую как пропановая кислота, изомасляная кислота или масляная кислота. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция обладает антибактериальной активностью при применении к экскрементам человека или животных. В некоторых вариантах реализации изобретения, используемые органические кислоты могут содержать от 2 до 5 атомов углерода, и содержание каждой кислоты может варьироваться от 0% до 80% биоактивной смеси. В предпочтительном варианте реализации изобретения органическая кислота представляет собой пропановую кислоту. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение включает химическую композицию, состоящую преимущественно из органических кислот, таких как пропановая кислота, изомасляная кислота или масляная кислота. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит преимущественно пропановую кислоту. В некоторых вариантах реализации изобретения химическая композиция содержит две органические кислоты. В одном варианте реализации изобретения две органические кислоты представляют собой пропановую и изомасляную кислоты. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит комбинацию из двух органических кислот и по меньшей мере один сложный эфир. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую и изомасляную кислоты и по меньшей мере один сложный эфир. В другом варианте реализации изобретения две органические кислоты представляют собой пропановую и изомасляную кислоты и по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамиловый бутират. В другом варианте реализации изобретения две органические кислоты представляют собой пропановую и изомасляную кислоты и по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамиловый гексаноат. В другом варианте реализации изобретения две органические кислоты представляют собой пропановую и изомасляную кислоты и по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамилацетат.

Как предусмотрено в настоящем документе, химическая композиция может дополнительно содержать по меньшей мере один сложный эфир. В соответствии с этим положением, что по меньшей мере один сложный эфир может быть любым эфиром, перечисленным в таблице 1 или в другом месте в данном документе. В некоторых вариантах реализации изобретения сложный эфир может иметь от 3 до 10 атомов углерода и любые сложные эфиры или их комбинации могут составлять по меньшей мере 20% смеси. В одном варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой сложный изоамиловый эфир. Как предусмотрено в настоящем документе, варианты реализации настоящего изобретения могут быть альтернативно разработаны с использованием целой семьи изоамиловых эфиров различных кислот, начиная от C-6 (гексаноат) и заканчивая C-12 (лаурат), а также различные сложные эфиры изоамилового спирта с остатками ароматических кислот, таких как эфиры коричной кислоты, бензоат и фенилацетат. В одном варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой изоамиловый гексаноат. Используемый в настоящем документе термин “гексаноат” может означать гексаноат одного типа или может содержать смесь кислой формы гексаноата, включая разветвленные формы. В другом варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой изоамилформиат. В другом варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой изоамиловый бутират. В другом варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой изоамилацетат. В одном варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой изоамилацетат. В одном варианте осуществления сложный эфир выбран из группы, состоящей из аллил ацетата, n-децил ацетата, изоамилацетата, фенетил ацетата. В одном варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой клубничный альдегид (этил-3-метил-3-фенил-этиленоксид-2-карбоксилат и органический сложный эфир). В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир может быть любым сложным эфиром, содержащим кислотный остаток с одним углеродом. В одном варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый формиат. В некоторых вариантах реализации изобретения другие соединения могут быть добавлены в композицию в качестве сложного эфира. Например, сложный эфир октановой кислоты и изоамилового спирта является таким же активным, как и сложный эфир лауриновой кислоты. Соответственно, композиции настоящего изобретения могут содержать весь спектр сложных изоамиловых эфиров, содержащих кислотные остатки с 6-12 углеродами. В одном варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой эфир октановой кислоты изоамилового спирта. В другом варианте реализации изобретения сложный эфир представляет собой эфир лауриновой кислоты и изоамилового спирта. В некоторых вариантах реализации изобретения могут быть использованы такие компоненты бензола, как сложный эфир бензойной кислоты, сложный эфир коричной кислоты и сложный эфир салициловой кислоты. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир, содержащий кислотный остаток с 6-12 атомами углерода.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции могут содержать смеси по меньшей мере одной органической кислоты и по меньшей мере одного сложного эфира в любых пропорциях. В одном варианте реализации изобретения соотношение по меньшей мере одной органической кислоты и по меньшей мере одного сложного эфира составляет около 6-7 к 2-3. В предпочтительных вариантах реализации изобретения соотношение по меньшей мере одной органической кислоты и по меньшей мере одного сложного эфира составляет около 7:2. В других вариантах реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением могут содержать смеси двух органических кислот и по меньшей мере одного сложного эфира в любых пропорциях. В одном варианте реализации изобретения соотношение первой органической кислоты: второй органической кислоты: по меньшей мере одного сложного эфира составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения смесь первой органической кислоты: второй органической кислоты: по меньшей мере одного сложного эфира составляет около 7 частей двух кислот и 2 частей выбранного сложного эфира. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир, содержащий кислотный остаток с 6-12 атомами углерода, причем химическая композиция имеет соотношение пропановая кислота: сложный эфир около 7:2 объем/объем.

Как предусмотрено в настоящем документе, настоящее изобретение может включать в себя любые химические композиции с добавлением по меньшей мере одного эндофитного гриба. Настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным грибом, однако эндофитный гриб является предпочтительным, и грибы из рода Fusarium является более предпочтительными. Наиболее предпочтительным эндофитным грибом является Fusarium subglutinans. В другом варианте реализации изобретения эндофитный гриб принадлежит роду Gloeosporium. Как предусмотрено в настоящем документе, гриб может содержаться в любой композиции посредством добавления инокулированного ячменя, или любым другим подходящим носителем для гриба, очевидным специалистами в данной области техники.

В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит органические кислоты и по меньшей мере один сложный эфир и по меньшей мере один гриб, при том что две органические кислоты и по меньшей мере один сложный эфир убивают или снижают рост бактерий в экскрементах человека и животных, и по меньшей мере один гриб увеличивает скорость разложения экскрементов человека и животных. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту, изомасляную кислоту по меньшей мере одного сложный эфир и по меньшей мере один гриб. В некоторых вариантах реализации изобретения композиции могут дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнитель или другой компонент необходимый для создания композиции, имеющей желаемые характеристики.

В некоторых вариантах реализации изобретения дополняя культуру гриба дополнительным соединениями можно увеличить ингибирующие свойства гриба в большей степени, чем какие-либо вещества, вырабатываемые грибом или соединением отдельно. Подобная активность признается синергизмом. Таким образом, настоящее изобретение также обеспечивает химические композиции, которые содержать по меньшей мере один гриб и по меньшей мере один синергист. Используемый в настоящем документе термин “синергист” относится к любому химическому соединению, которое, при введении в композицию с другим соединением, показывает более высокую ингибирующую активность по отношению к бактериям, чем активность, наблюдаемая для каждого компонента вводимого в композицию по отдельности. Не ограничиваясь примером, когда синергист сочетается с культурой гриба, показывает увеличение антимикробной активности по сравнению с газовой фазой гриба или синергиста по отдельности.

В некоторых вариантах реализации изобретения химические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться в комбинации с носителями, такими как цеолит или бентонит в качестве наполнителя для обработки кошачьего туалета, конюшни, хлева, овчарни, или обработки подстилок для мелких животных. В таких вариантах реализации изобретения настоящее изобретение подавляет микроорганизмы, которые населяют фекалии, такие как E.coli, и расщепляют мочевину в моче до аммиака. В другом варианте реализации изобретения в химические композиции настоящего изобретения может быть добавлен носитель, без ограничения, такой как бентонит, цеолит, перлит или другие носители на основе кремнезема, в количествах, которые эффективны в уничтожении бактерий и ослаблении вредных и ядовитых запахов.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции в настоящем изобретении могут быть смешаны с мылом или другими диспергирующими растворами и могут быть использованы в качестве противомикробного спрея или для обработки поверхностей, которые загрязнены бактериями или другими микробами, например, для обработки поверхностей в больницах, в домах, в зонах хранения и приготовления пищи, в том числе на предприятиях пищевой промышленности, где фрукты, мясо, и другое, подвержено бактериальному загрязнению и представляет собой обычную проблему.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция в соответствии с настоящим содержит по меньшей мере один химический состав или препарат настоящего изобретения. В одном варианте реализации изобретения композиции по изобретению изготавливают с использованием одного или более фармацевтически приемлемых наполнителей или носителей. В одном варианте реализации изобретения фармацевтические композиции по изобретению содержат терапевтически эффективное количество препарата по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Примеры фармацевтически приемлемых носителей содержат кремофор, или любое другое биологически поверхносто-активное вещество, что очевидно специалистам в данной области техники. В одном варианте реализации изобретения фармацевтически приемлемый носитель представляет собой кремофор.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции настоящего изобретения и предпочтительно С-3, может быть использована с носителем (цеолитом или бентонитом или тальком) для обработки почвенных зон, которые собираются использовать для получения семян или для пересадок молодых саженцев, с целью уменьшения или устранения инфекции.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции настоящего изобретения могут быть смешаны с детергентами для очистки ковровых поверхностей и бактериальной деконтаминации экскрементов человека и животных или других биологических загрязнений ковровых поверхностей.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции настоящего изобретения могут использоваться в виде аэрозоля для очистки фруктов, овощей, зерна и других сельскохозяйственных продуктов во время посадки, роста, сбора урожая и/или во время транспортировки.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения может быть применена или использована, встроена или иначе интегрирована в детские подгузники, бинты или другие устройства, в которых бактериальная деконтаминация желательна.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения может дополнительно содержать детергент, с целью использования в качестве мыла для обеззараживания кожи человека и животных.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиции настоящего изобретения могут быть дополнительно приготовлены, встроены или иначе интегрированы в воск свечи для деконтаминации зоны посредством испарения во время горения.

В частности, химические композиции в соответствии с настоящим изобретением проявляют высокую антибиотическую активность в отношений бактерий, связанных с экскрементами человека и животных. Эти смеси могут быть доставлены специально в соответствующий целевой участок через инертные носители, без ограничения, такие как бентонит, цеолит, перлит или другие носители на основе кремнезема. В данном случае, в конкретном месте для использования носителя и антибиотической комбинации, например, содержащихся, без ограничений, в подстилке домашних животных и животных из зоопарка. Смесь можно применять в хлевах, подстилках и в местах обитания животных с целью снижения бактериальной нагрузки и влияния вредных газов.

Следует отметить, что композиции настоящего изобретения могут содержать любые дополнительные соли, наполнители, пищевые добавки или примеси и тому подобное, так, что конечная композиция пригодна для наружного применения, приема внутрь, вдыхания или любой другой формы желаемого введения.

Система 1

Как описано в данном документе, химическая композиция может состоять из двух органических кислот и по меньшей мере одного сложного эфира. Например, в одном варианте реализации изобретения в состав входит пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый бутират. В одном варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый бутират составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения смесь пропановой кислоты: изомасляной кислоты: изоамилового бутирата составляет около 7 частей двух кислот и 2 частей выбранного сложного эфира. Следует отметить, что химическая композиция системы 1 не ограничивается каким-либо конкретным соотношением таких химических компонентов. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция системы 1 содержит только две органические кислоты и один сложный эфир. В таком варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту: изомасляную кислоту: изоамиловый бутират в пропорциях указанных выше. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция может дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнители или другие компоненты необходимые для получения композиции, имеющей желаемые характеристики.

В другом варианте реализации изобретения к химической композиции системы 1 может быть добавлен носитель, без ограничения, такой как бентонит, цеолит, перлит или другие носители на основе кремнезема, в количествах, которые эффективны в уничтожении бактерий и уменьшают вредные и ядовитые запахи. Это соотношение обычно равно 1 мл системы 1 к 224 г носителя (объем/масса) или другие соответствующие соотношения, без ограничений, которые являются эффективными.

Система 2

Как предусмотрено в настоящем документе, настоящее изобретение может включать в себя любые химические композиции системы 1 с добавлением по меньшей мере одного эндофитного гриба. Как продемонстрировано в настоящем документе, эндофитные грибы из группы, F. subglutinans и другие, наиболее пригодны для выращивания на экскрементах человека и их деградации. Кроме того, гриб может расти на комбинированных жидких и твердых отходах при применении антимикробной смеси системы 1, в то время как погибают бактерии и другие микробы, такая смесь обеспечивает максимальный рост плесневых грибов. В одном варианте реализации изобретения гриб представляет собой Fusarium subglutinans. В одном варианте реализации изобретения гриб содержится в системе 2 посредством добавления инокулированного ячменя. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция может дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнители или другие компоненты необходимые для получения композиции, имеющей желаемые характеристики.

В одном варианте реализации изобретения система 2 содержит химическую композицию системы 1, например, пропановую кислоту: изомасляную кислоту: изоамиловый бутират в соотношении 3.5:3.5:2 объем/объем/объем, или 7 частей двух кислот и 2 части сложного эфира, который затем добавляют из расчета 1/10 объем/масса (сухая масса) в смесь носителя носителя вещества, такого как бентонит, перлит или цеолит и т.д. Следует отметить, что химическая композиция системы 2 не ограничивается каким-либо конкретным соотношением таких химических компонентов. Ячмень засевают Fusarium subglutinans и тоже добавляют в композицию. Затем по 10 г этой смеси добавляют в каждый контейнер, например полиэтиленовый пакет, и используют для обработки и утилизации экскрементов человека. Это обеспечивает быстрый рост Fusarium subglutinans в противоположность системы 1, не обеспечивающей такого роста. Другие элементы также могут быть добавлены в контейнер: в том числе, жидкие поглощающие полимеры в соответствующих количествах, что должно быть понятно специалистам в данной области,

Система 3

Как предусмотрено в настоящем документе, химическая композиция настоящего изобретения может содержать по меньшей мере одну органическую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир. В предпочтительном варианте реализации изобретения по меньшей мере одна органическая кислота представляет собой пропановую кислоту. В одном варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамиловый гексаноат или смесь изоамилового гексаноата. В предпочтительном варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамиловый гексаноат. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция может дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнители или другие компоненты необходимые для получения композиции, имеющей желаемые характеристики.

В одном варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изоамиловый гексаноат составляет около 7:2 объем/объем. Следует отметить, что химическая композиция системы 3 не ограничивается каким-либо конкретным соотношением таких химических компонентов. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция системы 3 содержит компонент являющийся одной органической кислотой и компонент являющийся одним сложным эфиром. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция системы 3 содержит компонент являющийся одной органической кислотой и смесь изоамилового гексаноата. В таком варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту: изоамиловый гексаноат в пропорциях указанных выше. В другом варианте реализации эксперимента, химическая композиция преимущественно содержит пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат в соотношении пропановая кислота: изоамиловый гексаноат около 7:2 объем/объем.

В другом варианте реализации изобретения в химическую композицию системы 3 может быть добавлен носитель, без ограничения, такой как бентонит, цеолит, перлит или другие носители на основе кремнезема, в количествах, которые эффективны в уничтожении бактерий и ослаблении вредных и ядовитых запахов.

Это соотношение обычно составляет от 1,0 до 1,5 мл системы 3 на 224 г носителя (объем/масса) или в другие соответствующие соотношения, без ограничений, которые являются эффективными, такие как от 0,1 до 5 мл системы 3 на 224 г носителя (объем/масса), или от 0,5 до 2 мл системы 3 на 224 г носителя (объем/масса).

Система 4

Как предусмотрено в настоящем документе, химическая композиция настоящего изобретения может содержать по меньшей мере одну органическую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир. В предпочтительном варианте реализации изобретения по меньшей мере одна кислота представляет собой пропановую кислоту. В одном варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир, представляет собой изоамиловый формиат. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир может быть сложным эфиром, содержащим кислотный остаток с одним атомом углерода. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую кислоту и изоамилформиат. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция может дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнители или другие компоненты необходимые для получения композиции, имеющей желаемые характеристики.

В одном варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изоамиловый формиат составляет около 7:2 (объем/объем). Следует отметить, что химическая композиция системы 4 не ограничивается каким-либо конкретным соотношением таких химических компонентов. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция системы 4 содержит компонент, являющийся одной органической кислотой и компонент являющийся одним сложным эфиром. В таком варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту: изоамиловый формиат в пропорциях, указанных выше. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит пропановую кислоту и изоамилформиат в соотношении пропановая кислота: изоамилформиат около 7:2 объем/объем.

Как предусмотрено в настоящем документе, настоящее изобретение может включать любые химические композиции системы 4 с добавлением по меньшей мере одного эндофитного гриба. Как продемонстрировано в настоящем документе, эндофитные грибы из группы, F. subglutinans и другие, наиболее пригодны для выращивания на экскрементах человека и их деградации. Кроме того, гриб может расти на комбинированных жидких и твердых отходах при применении антимикробной смеси системы 4, в то время как погибают бактерии и другие микробы, такая смесь обеспечивает максимальный рост плесневых грибов. В одном варианте реализации изобретения гриб представляет собой Fusarium subglutinans. В еще одном варианте реализации изобретения настоящее изобретение включает химическую композицию, содержащую смесь пропановой кислоты и изоамилформиата в соотношении 7 к 2, и при необходимости с добавлением Fusarium subglutinans. В этом варианте реализации изобретения смесь пропановой кислоты и изоамилформиата подходит для уничтожения выбранных микроорганизмов, при этом не убивает Fusarium spp., который способствуют дальнейшему ускорению утилизации отходов, к которым и применяется композиция. В одном варианте реализации изобретения гриб содержится в системе 4 посредством добавления инокулированного ячменя.

В одном варианте реализации изобретения система 4 содержит пропановую кислоту: изоамилформиат в соотношении 7 к 2 объем/объем, которая затем добавляется к носителю такому как бентонит, перлит или цеолит и т.д., в соотношении 1/10 объем/масса (сухая масса). Ячмень засевают Fusarium subglutinans и тоже добавляют в композицию. Затем эту смесь добавляют в каждый контейнер, например полиэтиленовый пакет, и используют для обработки и утилизации экскрементов человека. Это обеспечивает быстрый рост Fusarium subglutinans. Другие элементы также могут быть добавлены в контейнер, в том числе, жидкие поглощающие полимеры в соответствующих количествах, что должно быть понятно специалистам в данной области,

Система 5

Как описано в данном документе, химическая композиция может содержать две органические кислоты и по меньшей мере один сложный эфир. Например, в одном варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту: изомасляную кислоту: изоамиловый гексаноат. В одном варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый гексаноат составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения смесь пропановой кислоты: изомасляной кислоты: изоамилового бутирата составляет около 7 частей двух кислот и 2 частей выбранного сложного эфира. Следует отметить, что химическая композиция системы 5 не ограничивается каким-либо конкретным соотношением таких химических компонентов. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция системы 5 содержит две органические кислоты и один сложный эфир. В таком варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту: изомасляную кислоту: изоамиловый гексаноат в пропорциях указанных выше. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция может дополнительно содержать цинеол, валенсен, соли или любые другие добавки, наполнители или другие компоненты необходимые для получения композиции, имеющей желаемые характеристики.

В другом варианте реализации изобретения в химическую композицию системы 5 может быть добавлен носитель, такой как, без ограничения, бентонит, цеолит, перлит или другие носители на основе кремнезема, в количествах, которые эффективны в уничтожении бактерий и ослаблении вредных и ядовитых запахов.

Система Х

Как предусмотрено в настоящем документе, настоящее изобретение может включать в себя любые химические композиции систем 1-5 в комбинации с по меньшей мере одной солью, наполнителем, пищевой добавкой или примесью. В предпочтительном варианте реализации изобретения химическая композиция представляет собой систему 3. Как продемонстрировано в настоящем документе, химический композиция, содержащая систему 3 и по меньшей мере одну пищевую добавку, и по меньшей мере одну соль используется для лечения болезней и расстройств, связанных с микробной инфекцией. Примеры питательных добавок включают, но не ограничиваются ими, сахара, такие как глюкоза, сахароза или фруктоза; аминокислоты, такие как глицин, и источники белка, таких как сывороточный протеин. Любой источник белка может быть использован, как это понятно специалистам в данной области техники. Не ограничивающие примеры солей включают хлорид калия, хлорид натрия, сульфат магния, калий монофосфат, сульфат калия и ацетата магния. Соли могут быть использованы в композициях в соответствии с настоящим изобретением, так как они усиливают электролитный баланс у субъекта. Любое количество соли может использоваться в композициях настоящего изобретения. В предпочтительном варианте количество соли превышает 0%. Система 3 ингибирует и убивает болезнетворные бактерии. В одном варианте реализации изобретения система Х содержит химическую композицию системы 3, глюкозу, сывороточный протеин, хлорид калия, сульфат магния, и хлорид натрия. В другом варианте реализации изобретения система Х содержит химическую композицию системы 3, глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия и ацетат магния. В другом варианте реализации изобретения система Х содержит химическую композицию системы 3, глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия, ацетат магния и калий монофосфат. Следует отметить, что химическая композиция системы Х не ограничена каким-либо определенным соотношением таких химических компонентов. В одном варианте реализации изобретения количество органических кислот составляет около 100% и количество сложных эфиров составляет 0%. В другом варианте количество органических кислот - около 99%, а количество сложных эфиров составляет около 1%. В другом варианте количество органических кислот составляет около 1%, а количество сложных эфиров составляет около 99%.

В некоторых вариантах реализации изобретения система Х разработана с использованием одного или более фармацевтически приемлемых наполнителей или носителей. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают кремофор, или любые другие биологические поверхносто-активные вещества как это понятно специалистам в данной области техники. В одном варианте реализации изобретения фармацевтически приемлемый носитель представляет собой кремофор. В одном варианте реализации изобретения система Х содержит химическую композицию системы 3 и кремофор.

В некоторых вариантах реализации изобретения системы 2 и 4 могут быть использованы с носителем или без него для обработки отходов животноводства (в том числе экскрементов человека) в присутствии Fusarium subglutinans. В таких вариантах реализации изобретения настоящее изобретение подавляет и убивает бактерии, одновременно обеспечивая рост Fusarium subglutinans, что в конечном итоге приводит к расщеплению или вызывает распад твердого материала в экскрементах человека.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения используются для фумигации семян, загрязненных микроорганизмами.

В некоторых вариантах реализации изобретения композицию настоящего изобретения вводят в газообразном виде без воды или каких-либо дополнительных носителей.

Способы

Обеззараживание экскрементов человека представляет собой только одну проблему, связанную с процессом переработки отходов. Дополнительная проблема, рассматриваемая в рамках настоящего изобретения, заключается в необходимости немедленной деградации органического вещества в твердых и жидких отходах. Биология и биохимия имеют место быть, когда твердые и жидкие отходы образуют комплекс. Оказывается мочевина в моче немедленно подвергается воздействию фермента уреазы, обнаруженного у большинства бактерий, связанных с твердыми отходами, что сопровождается продуцированием газообразного аммиака. Газ вреден сам по себе и имеет ужасный запах. Также он смертелен для большинства грибов, так как вызывает повышение рН. Таким образом, если кто-то хочет индуцировать деградацию отходов, необходимо прекратить продуцирование аммиака, что желательно для роста грибов и ремедиации аммиака в окружающей среде. Каждая из систем 1-4 угнетает рост бактерий и выработку ими аммиака, вызывает гибель бактерий, а в дальнейшем системы 2 и 4 обеспечивают рост Fusarium subglutinans, который затем разлагает отходы. Таким образом, системы 1 и 3 наиболее подходят для обработки подстилок животных, отходов и т.д., уменьшая количество аммиака.

Обнаружение подходящего микроорганизма, который приводит к быстрому разложению экскрементов человека и животных, начали с бактерий, живущих внутри растений (а именно, эндофитов) - что представляет собой подходящее место для поиска. Эндофиты представляют собой микроорганизмы, которые первыми участвуют в разложении растения, когда оно умирает либо естественной смертью либо погибает по внешним причинам. Они имеют набор ферментов, который расщепляет целлюлозу, лигнин и гемицеллюлозы обнаруживаемые в растительном сырье. Это такие же сложные органические вещества, обнаруживаемые в человеческих твердых отходах; поэтому, для решения проблемы, которой касается настоящая заявка, а именно, деградации экскрементов человека и животных, были обнаружен ряд эндофитных микроорганизмов и исследован на способность микроорганизмов расти как на твердых так жидких экскрементах человека. Для того, чтобы микроорганизм мог разлагать отходы, он должен либо быть нечувствительным к аммиаку, либо аммиак должен быть исключен из уравнения. Таким образом, с помощью систем 2 и/или 4, которые обеспечивают рост Fusarium spp. и элиминируют продуцирование аммиака, возможно разработать полезный и логический способ обработки жидких и твердых отходов.

В одном аспекте, настоящее изобретение включает способ обработки экскрементов человека и животных. В одном варианте реализации изобретения способ предусматривает взаимодействие экскрементов человека и животных с композицией в соответствии с настоящим изобретением, отличающийся тем, что композиция убивает или снижает рост бактерий в экскрементах человека или животных. В одном варианте реализации изобретения композиция содержит химических состав в соответствии с настоящим изобретением. В одном варианте реализации изобретения химическая композиция содержит дополнительно по меньшей мере один гриб. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один гриб увеличивает скорость разложения экскрементов человека и животных.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ устранения или уменьшения роста микроорганизмов на месте обработки. В одном варианте реализации изобретения способ включает взаимодействие композиции по настоящему изобретению с местом обработки, отличающаяся тем, что композиция убивает или снижает рост бактерий экскрементов человека и животных. В одном варианте реализации изобретения композиция содержит химический состав настоящего изобретения. В одном варианте реализации изобретения химический состав дополнительно содержит по меньшей мере один гриб.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ устранения или уменьшения образования запаха в месте обработки. В одном варианте реализации изобретения способ включает взаимодействие композиции в соответствии с настоящим изобретением с местом обработки, причем композиция устраняет или уменьшает образование запаха в экскрементах человека или животных.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ устранения или уменьшения количества аммиака в месте обработки. В одном варианте реализации изобретения способ включает взаимодействия композиции в соответствии с настоящим изобретением с местом обработки, причем композиция устраняет или уменьшает количество аммиака в экскрементах человека или животных.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ фумигации семян, загрязненных микроорганизмами. В одном варианте реализации изобретения способ включает взаимодействие семян с композицией настоящего изобретения, в котором композиция уменьшает или исключает рост микроорганизмов на семенах, и в некоторых вариантах реализации изобретения, уменьшает или исключает рост микроорганизмов на семенах без существенного прерывания прорастания.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения может быть использована в больницах для обработки экскрементов человека в сочетании с носителем, помещаемым в медицинское судно, чтобы остановить загрязнение территории фекальными бактериями. В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения может быть использована в качестве антисептика для обработки порезов и ран, поверхностных инфекций у животных и людей. Например, настоящее изобретение может быть использовано для лечения бактериальных и вирусных кишечных инфекций у людей и животных. Следует отметить, что все ингредиенты системы 1-4 относятся к перечню веществ признанных полностью безвредными, и таким образом безопасны. В частности, 10 мл С-3 было употреблено человеком без побочных эффектов. Композиции и составы в соответствии с настоящим изобретением могут также быть использованы для обработки или дезинфекции поверхностей неодушевленных или неживых объектов, или опрыскивания, или наружного применения для всех типов растений, таких как сельскохозяйственные фрукты, овощи, злаки и тому подобное, или могут применяться наружным, энтеральным или ингаляционным способом любым типом животных, такими как домашний скот, или людьми.

В одном аспекте, настоящее изобретение включает способ сохранения фруктов. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение в плод эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением. В одном варианте изобретения плоды представляют собой малину или виноград.

В некоторых вариантах реализации изобретения композиция настоящего изобретения, предпочтительно С-3, может быть использована для дезенфекции кукурузы, используемой для сбраживания в спирт.

Мастит представляет собой инфекцию тканей коровьего вымени. Почти любой бактериальный или грибной организм, который может вторгнуться в ткань и стать причиной инфекции, может стать причиной мастита. Он представляет собой одну из наиболее важных проблем в молочном производстве. Большинство случаев заражения маститом вызвано различными видами стрептококков, стафилококков, и грамотрицательных палочек, особенно лактозосбраживающие организмы кишечного происхождения, обычно называемых бактериями кишечной группы, и они включают такие организмы, как кишечная палочка и золотистый стафилококк. С эпидемиологической точки зрения, источник инфекции может рассматриваться как заразный или экзогенный и коровы находятся в постоянной опасности быть зараженным этим агентами.

Кроме Mycoplasma spp, которые могут передаваться от коровы к корове воздушно-капельным путем и вторгаясь в вымя, вызывать бактериемию, инфекционные патогены распространяются во время доения руками доярки или линией доильного аппарата. Основные виды бактерий, которые используют этот способ передачи включают Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae и Corynebacterium bovis. Большинство других видов условно-патогенные для коров в окружающей среде, хотя некоторые другие стрептококки и стафилококки также могут иметь инфекционную составляющую.

Интрамаммарные инфекции часто называют субклиническим или клиническим маститом. Субклинический мастит - это наличие инфекции без видимых признаков местного воспаления или системного вовлечения. Хотя преходящие эпизоды анормального молока или воспаление вымени, могут проявляться, эти инфекции чаще всего протекает бессимптомно и, если инфекция сохраняется в течение как минимум 2 месяцев, то называется хронической. После того как они будут установлены, многие из этих инфекций сохраняются в течение всей лактации или жизни коровы. Обнаружения лучше всего делать по результатам анализа молока на количество соматических клеток (преимущественно нейтрофилов) либо с помощью Калифорнийского мастит-теста или автоматизированных способов улучшения организации молочного стада. Соматические клетки положительно коррелируют с наличием инфекции. Хотя переменчиво (особенно, если анализ был проведен единожды), коровы с количеством соматических клеток ≥280,000 клеток/мл (≥ линейных 5 баллов) имеют >80% вероятность заражения. Аналогично, чем больше соматических клеток в наливной цистерне с молоком, тем выше распространенность инфекции в стаде. Возбудители должны быть идентифицированы бактериальной культурой молока.

Клинический мастит - воспалительная реакция к инфекции в результате чего видимо анормальное молоко (например, цвет, сгустки фибрина). С увеличением степени воспаления, могут также проявляться изменения в вымени (отек, жар, боль, покраснение). Клинические случаи, которые включают только местные признаки называются легкими или умеренными. Если воспалительный процесс включает системное вовлечение (лихорадка, анорексия, шок), то случай называют тяжелыми. Если начало заболевания очень быстрое, как часто происходит в тяжелых клинических случаях, то это называется острым случаем тяжелого мастита. Более серьезно пострадавшие коровы, как правило, имеют больше серозных выделений в затронутой четверти вымени.

Хотя любое количество четвертей может быть заражено одновременно субклиническим маститом, как правило, только одна четверть на время будет показывать клинический мастит. Тем не менее, не редкость для клинических эпизодов, вызванных микоплазмой затрагивать несколько четвертей. Более тяжелым гангренозный мастит может становиться в периоды иммуносупрессии (например, при родах), в частности при субклинической, хронической инфекции золотистого стафилококка. При субклиническом мастите культура образцов молока, собранных из пораженных четвертей, представляет собой единственный надежный способ для определения этиологии клинических случаев.

Во всех стадах молочного скота есть коровы с субклиническим маститом; однако, распространенность инфицированных коров колеблется от 15 до 75%, а четвертей вымени от 5 до 40%. Различные патогенные микроорганизмы могут стать причиной хронической инфекции, но только в некоторых случаях будут проявляться клинические признаки мастита. Основное целью в большинстве программ по борьбе с субклиническим маститом уделяется снижению распространенности инфекционных патогенов Streptococcus agalactiae и Staphylococcus aureus, а также другие грамположительные кокки, особенно Streptococcus dysgalactiae (который также может быть заразным или возбудителем с окружающей среды), Streptococcus uberis, энтерококки и другие многочисленные коагулазонегативные стафилококки, в том числе S hyicus, S epidermidis, S xylosus, и S intermedius.

Для инфекционных возбудителей, взрослый крупный рогатый скот, который доится, подвергаются наибольшему риску заражения, либо во время лактации, либо в период сухостоя. Основным вместилищем инфекции являются молочные железы; заражение происходит при доении руками доярки либо доильным оборудованием, выступающим в качестве механического переносчика. Впервые беременные телки, как сообщалось, заражались стафилококками и стрептококками до отела, хотя распространенность инфекции очень варьирует среди стада и географических регионов. Причиной дерматита сосков коровьих молочных желез является жигалка малая коровья (Haematobia irritans), которые могут быть местом скопления золотистого стафилококка и связаны с повышенным риском заражения телок, особенно в теплом климате.

Обычно используемые способы лечения включают использование антибиотиков, которые представляют угрозу для молока, полученного от животного, так как антибиотики отразятся на вымени. Молоко не может быть использовано в течение по меньшей мере 3 дней после введения антибиотика. Применение иммунизации невозможно, так как существует большое число потенциальных патогенов, вовлеченных в заболевание маститом. Основные рекомендации для улучшения санитарных условий: усиление чистоты в доильном зале и в местах, часто посещаемые животными. В настоящее время, никакие имеющиеся подходы не были признаны эффективным и безопасным для лечения мастита.

В одном аспекте, настоящее изобретение включает в себя способ лечения животного, имеющего заболевание или расстройство, связанное с микробной инфекции. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение животному эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением. В другом варианте реализации изобретения способ включает введение животному эффективного количества композиции, содержащей органическую кислоту. Такие заболевания и расстройства могут включать в себя, без ограничения, такие как диарея, пищевое отравление, или расстройство желудка, или интрамаммарную инфекцию, такую как субклинический или клинический мастит. Следует также понимать, что составы и композиции настоящего изобретения не ограничиваются лечением какого-то конкретного типа объекта. В соответствии с этим положением, объектом может быть любое животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно домашний скот, такой как крупный рогатый скот, овцы, или свиньи, или даже человек. В одном варианте реализации изобретения животное представляют собой крупный рогатый скот, свиней и овец. В другом варианте реализации изобретения животное представляет собой человека.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ лечения коров, имеющих диарею. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение корове эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ лечения свиней, имеющих диарею. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение свинье эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ лечения коров, имеющих мастит. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение корове эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ лечения овец, у которых мастит. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение овцам эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением.

В другом аспекте, настоящее изобретение включает способ лечения человека, имеющего желудочно-кишечные заболевания. В одном варианте реализации изобретения способ включает введение человеку эффективного количества композиции в соответствии с настоящим изобретением. В одном варианте реализации изобретения желудочно-кишечные заболевания представляют собой пищевое отравление или гастроэнтерит.

Комплексная терапия

Композиции настоящего изобретения предназначены для возможного использования в комбинациях с одним или более дополнительными веществами. Не ограничиваясь примерами, композиции изобретения могут использоваться в комбинации с одним или более лечебными средствами (солями, сольватами или пролекарствами). Не ограничивающие примеры лечебных средств включают антибиотики, такие как Байтрил, сульфаниламиды, Нуфлор, Тилан 40-50, Эксид, Окситетрациклин LA, Драксин, и тетрациклин, вакцины, такие как Инфорс 3, мультивитамины, пробиотики, и абсорбенты токсинов, такие как Токсибан, или другие терапевтические агенты, такие как Суприо.

В другом варианте реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться в комбинации с детергентом. В одном варианте реализации изобретения детергент действует как растворитель для композиции для удаления нежелательного бактериального загрязнения инфицированных зон субъекта, и любых других возможных источников инфекции, таких как подстилки, инструменты, или места, где обитает субъект. В качестве неограничивающего примера композиции настоящего изобретения могут быть использованы в обработке вымени, подстилок крупного рогатого скота, которые представляют собой основные источники загрязнения болезнетворными микроорганизмами, а также инструменты, используемые в процессе доения, которые были определены как потенциальные источники инфекции, такие как зараженные растворы для обработки сосков вымени, интрамаммарные инъекции, шланги для воды, используемые в подготовке вымени для доения, водоемы или рытвины для сгребания грязи, поражения кожи, травмы сосков, и мухи. Не ограничивающие примеры детергентов включают Sucragel CF, Chemoxide CAW, BioSoft D40, Lathanol LAL, BioTerge AS-40, Nacconol 90G, и кокоат калия.

Фармацевтические композиции и способы лечения

Успешное введение композиции в рамках настоящего изобретения может быть реализовано многими различными способами, с применением способов, общепринятых в данной области техники. Терапевтические и профилактические способы в соответствии с настоящим изобретением, таким образом, охватывают применение фармацевтических композиций, которые содержат композиции, используемые в способах практического применения по данному изобретению. Фармацевтические композиции, которые используют в практической реализации изобретения, могут вводить в дозах от 1 мг/кг/день до 100 мг/кг/день.

Относительное количество активного вещества, с фармацевтически приемлемым носителем, и каким-либо дополнительным веществом в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, варьируется в зависимости от индивидуальных особенностей, размера, состояния субъекта и в дальнейшем в зависимости от способа, по которому композиция вводится. Например, композиция может содержать от 0,1% до 100% (масса/масса) активного вещества.

Хотя описание фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, принципиально относится к фармацевтическим композициям, которые пригодны для введения человеку, должно быть понятно, специалисту в данной области техники, что такие композиции, как правило, пригодны для введения животным всех видов. Модификация фармацевтических композиций, пригодных для введения человеку, с целью придания композиции пригодности для введения различным животным хорошо изучены и обычно специалист ветеринар/ фармаколог может разрабатывать и выполнять такую модификацию всего-навсего обыкновенным экспериментом. Субъекты, которым вводятся фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя, но не ограничиваются этим, людей и других приматов, млекопитающих, в том числе коммерческих млекопитающих, таких как приматов, не относящихся к человеку, крупный рогатый скот, свиней, лошадей, овец, кошек и собак.

Как правило, дозы, которые могут быть введены по способу согласно настоящего изобретения животному, предпочтительно человеку, находятся в диапазоне от 0,5 мкг до около 50 мг на килограмм массы тела животного. Хотя точная доза будет варьировать в зависимости от любого числа факторов, включая, но не ограничиваясь, видом животного и болезнью, которую лечат, возрастом животного и способом введения, доза композиции, предпочтительно варьирует приблизительно от 1 мкг до 10 мг на килограмм массы тела животного. Более предпочтительно, дозировка варьирует от около 3 мкг до 1 мг на с

Фармацевтические композиции, используемые в способах в соответствии с настоящим изобретением, могут быть приготовлены, упакованы или проданы в композициях, подходящих для перорального, парентерального, наружного, трансбуккального, или другого пути введения. Другие предусмотренные композиции включают предполагаемые наночастицы, липосомные препараты, активные вещества против склеивания эритроцитов, и иммунологически активные композиции.

Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, могут быть подготовлены любым из общепринятых способов, или будут разработаны позднее в фармакологии. В общем, такие подготовительные способы включают стадию объединения активного вещества в ассоциацию с фармацевтически приемлемым носителем или одним или более другими дополнительными ингредиентами, и затем, если необходимо или целесообразно, фасовка и упаковка продукта в желаемый одно- или многодозный контейнер. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена, упакована или продана на развес, в виде единичной или множества единичных доз. Используемая в настоящем документе “разовая доза” - это дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей определенное количество активного вещества. Количество активного вещества обычно составляет дозу активного вещества, которое будет вводиться субъекту или удобная доля такой дозы, такая как, например, половина или треть такой дозы.

В одном варианте реализации изобретения композиция в соответствии с настоящим изобретением приготовлена с использованием одного или более фармацевтически приемлемых наполнителей или носителей. В одном варианте реализации изобретения фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением включают терапевтически эффективное количество композиции в соответствии с настоящим изобретением и его фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемые носители, которые используются, включают в себя, но не ограничиваясь этим, глицерин, воду, физиологический раствор, этанол и другие фармацевтически приемлемые солевые растворы, такие как фосфаты, и соли органических кислот. Примеры этих и других фармацевтически приемлемых носителей описаны в Remington Pharmaceutical Sciences (1991, Mack Publication Co., Нью-Джерси).

Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащий, например, воду, этанол, многоатомные спирты (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), приемлемые смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и использование поверхностно-активных веществ. Профилактика влияния микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях будет предпочтительным включать изотонические агенты, например сахара, хлорид натрия, или многоатомные спирты, такие как маннит и сорбит в композицию. Пролонгирование всасывания композиций для инъекций может быть осуществлено путем включения в композицию агента, который задерживает абсорбцию, например моностеарата алюминия или желатина. В одном варианте реализации изобретения фармацевтически приемлемый носитель не является только ДМСО.

Композиции могут быть использованы в смеси с обычными носителями, т.е. фармацевтически приемлемыми органическими или неорганическими веществами-носителями, подходящими для перорального, парентерального, назального, внутривенного, подкожного, энтерального, или любого другого подходящего способа введения известного в данной области техники. Фармацевтические препараты могут быть простерилизованы и, желательно, в смеси со вспомогательными агентами, например, смазывающими веществами, консервантами, стабилизаторами, смачивающими агентами, эмульгаторами, солями, влияющими на осмотическое давление в буферных растворах, красителями, вкусовыми и/или ароматическими веществами и тому подобным. Они также могут быть объединены, если это желательно, с другими активными агентами, например, с другими анальгетиками.

Используемые в данном документе «дополнительные ингредиенты» включают, не ограничиваясь, один или более ингредиентов из следующих: наполнители; поверхностно-активные вещества; диспергаторы; инертные разбавители; разрывающие и разрыхляющие вещества; связывающие агенты; смазывающие агенты; подсластители; ароматизирующие агенты; красители; консерванты; физиологически разлагаемые композиции, такие как желатин; водные растворители и растворяющие вещества; масляные растворители и сольвенты; суспендирующие агенты; диспергирующие или смачивающие агенты; эмульгаторы, успокоительные средства; буфера; соли; загустители; наполнители; эмульгаторы; антиоксиданты; антибиотики; противогрибковые средства; стабилизирующие агенты; и их фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные вещества. Другие «дополнительные ингредиенты», которые могут содержаться в фармацевтических композициях в соответствии с настоящим изобретением известны в данной области техники и описаны, например, у Genaro, изд. (1985, Remington Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA), который включен в настоящее описание посредством ссылки.

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может содержать консервант около от 0,005% до 2,0% от общей массы композиции. Консервант используется для предотвращения порчи в случае воздействия загрязняющих веществ окружающей среды. Примерами консервантов, используемых в соответствии с настоящим изобретением, включают, но не ограничиваются ими, и те, которые выбраны из группы, состоящей из бензилового спирта, сорбиновой кислоты, парабенов, имидомочевины и их комбинаций. Наиболее предпочтительным консервантом является комбинация около от 0,5% до 2,0% бензилового спирта и от 0,05% до 0,5% сорбиновой кислоты.

Фармацевтическая композиция предпочтительно включает антиоксидант и хелатирующий агент, который ингибирует деградацию препарата. Предпочтительными антиоксидантами для некоторых композиций представляют собой бутилгидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол, альфа-токоферол и аскорбиновую кислоту в предпочтительном диапазоне приблизительно от 0,01% до 0,3% и более предпочтительный диапазон для бутилгидрокситолуола от 0,03% до 0,1% по массе от общей массы композиции. В предпочтительном варианте, хелатирующий агент присутствует в количестве от 0,01% до 0,5% по массе от общей массы композиции. Наиболее предпочтительные хелатирующие агенты включают этилендиаминтетраацетат (например, динатрия эдетат) и лимонную кислоту в весовом диапазоне приблизительно от 0,01% до 0,20%, а в более предпочтительном диапазоне от 0,02% до 0,10% по массе от общей массы композиции. Хелатообразователь используемый для хелатирования ионов металлов в композиции, может негативно влиять на срок годности препарата. В то время как бутилгидрокситолуол и динатрия эдетат представляют собой наиболее предпочтительные антиоксидант и хелатирующий агент, соответственно, для некоторых композиции наиболее подходящими и равноценными могут быть другие антиоксиданты и хелатообразующие агенты, а следовательно должны быть известны специалистам в данной области техники.

Жидкие суспензии могут быть приготовлены с использованием традиционных способов для получения суспензии активным ингредиентом в водном или масляном растворителе. Водные растворители включают, например, воду, физиологический и изотонический раствор. Масляные растворители включают, например, миндальное масло, жирные сложные эфиры, этиловый спирт, растительные масла, такие как арахисовое, оливковое, кунжутное, кокосовое масло или ректифицированные растительные масла и минеральные масла такие как жидкий парафин. Водные суспензии могут дополнительно содержать один или более «дополнительных ингредиентов», включая, но не ограничиваясь этим, суспендирующие агенты, диспергирующие или смачивающие агенты, эмульгаторы, успокоительные средства, консерванты, буфера, соли, ароматизаторы, красители и подсластители. Масляные суспензии могут также содержать загуститель. Известные суспендирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, сорбитный сироп, гидрогенизированные пищевые жиры, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовую камедь, аравийскую камедь и производные целлюлозы, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, стеароксигидроксипропилметилцеллюлозу. Известные диспергирующие или смачивающие агенты включают, но не ограничиваются ими, природные фосфатиды, такие как лецитин, продукты конденсации окиси алкилена с жирной кислотой с длинной цепью алифатического спирта, с неполным эфиром, полученным из жирной кислоты и гексита или неполным эфиром, полученным из жирной кислоты и ангидрид гексита (например, полиоксиэтилена стеарат, гептадекаэтиленоксицетанол, моноолеат полиоксиэтилен сорбита и моноолеат полиоксиэтиленсорбитана, соответственно). Известные эмульгаторы включают, но не ограничиваются ими, лецитин и аравийскую камедь. Известные консерванты включают, но не ограничиваются ими, метил-, этил- или н-пропил- парагидроксибензоат, аскорбиновая кислота и сорбиновая кислота. Известные подсластители включают, например, глицерин, пропиленгликоль, сорбит, сахарозу, и сахарин. Известные загустители для масляных суспензий включают, например, пчелиный воск, твердый парафин и цетиловый спирт.

Жидкие растворы активного вещества в водных или масляных растворителях могут быть получены, преимущественно, таким же образом как и жидкие суспензии, основная разница заключается в том что активное вещество растворено, а не суспендируют в растворителе. Как используется в настоящем описании, "масляная" жидкость одна, которая содержит жидкую молекулу углеводорода и которая проявляет менее полярные свойства, чем вода. Жидкие растворы фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением могут содержать каждый из компонентов, описанных в связи с жидкими суспензиями и, следует отметить, что суспендирующие агенты не обязательно способствуют растворению активного вещества в растворителе. Водные растворители содержат, например, воду, физиологический и изотонический раствор. Масляные растворители включают, например, миндальное масло, жирные сложные эфиры, этиловый спирт, растительные масла, такие как арахисовое, оливковое, кунжутное, кокосовое масло или ректифицированные растительные масла и минеральные масла, такие как жидкий парафин.

Порошкообразные и гранулированные составы фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с применением общепринятых способов. Такие композиции могут быть введены непосредственно субъекту, например, в форме таблеток, капсул или приготовлены на водной или масляной суспензии или растворе с добавлением водного или масляного растворителя к нему. Каждая из этих композиций может дополнительно содержать один или более диспергирующих или смачивающих агентов, суспендирующих агентов и консервантов. Дополнительные наполнители, такие как заполнители и подсластители, вкусовые добавки или красители, также могут быть включены в эти композиции.

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть также приготовлена, упакована или продана в виде эмульсии типа «масло в воде» или в виде водно-жировой эмульсии. Масляная фаза может представлять собой растительное масло такое как оливковое или арахисовое масло, минеральное масло такое как жидкий парафин, или их комбинации. Такие композиции могут дополнительно содержать один или более эмульгирующих агентов, таких как природные смолы, такие как аравийская камедь или смола трагаканта, фосфатиды природного происхождения, такие как соя или лецитин, сложные эфиры или неполные эфиры, полученные из комбинаций жирных кислот и ангидридов гексита, такие как сорбитан моноолеат, и продукты конденсации таких неполных эфиров с этиленоксидом, такие как моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Эти эмульсии могут также содержать дополнительные ингредиенты, включая, например, подсластители или ароматизаторы.

Способы пропитки или нанесения химической композиции на материал, как известно в данной области техники, включают, не ограничиваясь, способы нанесения или закрепления химической композиции на поверхности, способы включения химической композиции в структуру материала во время синтеза материала (т.е., например, с физиологически разлагаемым материалом), и способы поглощения водного или масляного раствора или суспензии абсорбирующим материалом, с последующей сушкой или без нее.

Контроль или замедление высвобождение композиции с препарата в соответствии с настоящим изобретением могут быть сделаны с использованием традиционной технологии, в дополнение к изобретению, изложенному в данном описании. В некоторых случаях лекарственные формы, которые должны будут использоваться могут замедлено или контролируемо высвобождать одно или более активных веществ с применением, например, гидроксипропилметилцеллюлозы, других полимерных матриц, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микросферы или или их комбинаций, с целью обеспечения желаемого профиля высвобождения в различных пропорциях. Подходящие препараты с контролируемым высвобождением, известные специалистам в данной области техники, в том числе описанные в данном документе, могут быть легко выбраны для использования с композициями в соответствии с настоящим изобретением.

Контролируемое высвобождение активного ингредиента можно стимулировать различными индукторами, например, рН, температурой, ферментами, водой или другими физиологическими условиями или соединениями. Термин «контролируемое высвобождение компонента» в контексте настоящего изобретения определяется в данном документе как соединение или соединения, включая, но не ограничиваясь этим, полимеры, полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, липосомы, наночастицы, или микросферы или их комбинации, которая облегчают контролируемое высвобождение активного ингредиента.

Введение / Дозирование

Режим введения может влияет на то, какое количество композиции эффективно. Терапевтические композиции могут быть введены субъекту либо до, либо после точного определения заболевания. Кроме того, несколько отдельных доз, такие как дозы вводимые в шахматном порядке или вводимые ежедневно или последовательно, или введение ударной дозы вещества. Кроме того, дозы терапевтических композиций могут быть пропорционально увеличены или уменьшены, о чем свидетельствуют острые терапевтические или профилактические ситуации.

Введение композиций в соответствии с настоящим изобретением субъекту, предпочтительно млекопитающему, более предпочтительно человеку, может быть осуществлено с использованием общепринятых способов, в дозах и в течение периода времени, эффективных для профилактики или лечения заболевания. Эффективное количество терапевтической композиции, необходимой для достижения терапевтического эффекта может меняться в зависимости от таких факторов, как активности конкретной используемой композиции; времени введения; скорости выведения композиции; продолжительности лечения; других лекарственных средств, композиции или веществ, используемых в комбинации с композицией; течения заболевания или расстройства, возраста, пола, веса, состояния, общего состояния здоровья и предварительной истории болезни пациента, подвергаемого лечению, и подобных факторов, хорошо известных в области медицины. Схема дозировок может изменяться для обеспечения оптимального терапевтического ответа. Например, несколько раздельных доз можно вводить ежедневно, или доза может быть пропорционально уменьшена о чем свидетельствует терапевтическая ситуация. Не ограничивающий пример эффективного диапазона доз для терапевтической композиции согласно настоящему изобретению составляет около от 1 до 5000 мг/кг массы тела/ сутки. Специалист в данной области техники будет в состоянии изучить соответствующие факторы и сделать определение эффективного количества терапевтической композиции без излишнего экспериментирования.

Композиция может быть введена животному с частотой в несколько раз в день, или может вводится реже, например, раз в день, раз в неделю, раз в две недели, раз в месяц, или даже реже, например, раз в каждые несколько месяцев или даже один раз в год или еще меньше. Частота дозы будет очевидна специалистам в данной области техники и будут зависеть от любого числа факторов, таких как, не ограничиваясь, тип и тяжесть заболевания, которое лечат, тип и возраст животного и т.д. Композиции из фармацевтических композиции, описанные в данном документе, могут быть приготовлены любым из общепринятых способов или способов которые будут разработаны позднее в фармакологии. В общем, такие способы подготовки включают в себя этап внесения активного ингредиента в ассоциацию с носителем или одним или более другими вспомогательными компонентами, а затем, если необходимо фасуют и упаковывают продукт в желаемые одно- или многодозные контейнеры.

Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях данного изобретения могут изменяться таким образом, чтобы получить количество активного ингредиента, которое является эффективным для достижения желаемого терапевтического ответа для конкретного субъекта, композиции и способа введения, не будучи при этом токсичным для субъекта.

Врач, например, терапевт или ветеринар, обычный специалист в данной области техники может легко определить и прописать эффективное количество фармацевтической композиции, которое требуется. Например, терапевт или ветеринар может назначать дозы композиций в соответствии с настоящим изобретением, используемой фармацевтической композиции на уровнях ниже, чем требуется для достижения желаемого терапевтического эффекта и постепенно увеличивать дозировку до тех пор, пока желаемый эффект будет достигнут.

В конкретном варианте реализации изобретения наиболее выгодно разрабатывать композиции в виде дозатора для упрощения введения и единообразия дозы. Лекарственная форма, используемая в настоящем документе, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для субъектов подлежащих лечению; каждый блок, содержащий заданное количество терапевтической композиции, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в ассоциации с требуемым носителем. Лекарственная форма в соответствии с настоящим изобретением диктуется и непосредственно зависит от (а) уникальных характеристик терапевтической композиции и конкретного терапевтического эффекта, который нужно достичь, и (б) ограничений в данной области техники, присущих смеси/композиции в такой терапевтической композиции для лечения заболевания у субъекта.

В одном варианте реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением вводят субъекту в дозах, которые варьируются от одного до пяти раз в день или больше. В другом варианте реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением вводят субъекту в диапазоне доз, которые включают, но не ограничиваясь, один раз в день, каждые два дня, каждые три дня или раз в неделю, и раз в две недели. Очевидно для специалиста в данной области техники, что частота применения различных комбинаций композиций в соответствии с настоящим изобретением будет варьироваться от субъекта к субъекту в зависимости от многих факторов, в том числе, не ограничиваясь, возрастом, заболеванием или расстройством, которое лечат, полом, общим состоянием здоровья и другими факторами. Таким образом, изобретение не должно быть истолковано ограничением какой-либо определенной дозировки и режима точного дозирования и композицией, которые будут применены в отношении любого субъекта, будут определяться лечащим врачом, принимая во внимания все другие факторы о субъекте.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением для введения варьируют в диапазоне около от 0,1 мг до 1000 мг, приблизительно от 0,2 мг до 950 мг, приблизительно от 0,4 мг до 900 мг, приблизительно от 1 мг до 850 мг, приблизительно от 5 мг до 750 мг, приблизительно от 20 мг до 700 мг, приблизительно от 30 мг до 600 мг, приблизительно от 50 мг до 500 мг, приблизительно от 75 мг до 400 мг, приблизительно от 100 мг до 300 мг, около от 120 мг до 250 мг, и с любым целым, либо дробным шагом между ними.

В некоторых вариантах реализации изобретения доза композиции в соответствии с настоящим изобретением составляет приблизительно от 1 мг и до 2500 мг. В некоторых вариантах реализации изобретения доза композиции в соответствии с настоящим изобретением, используемые в композициях, описанных в данном документе, менее чем около 10000 мг, или менее чем около 8000 мг, или менее чем около 6000 мг, или менее чем приблизительно 5000 мг, или менее чем приблизительно 3000 мг, или менее чем приблизительно 2000 мг, или менее чем около 1000 мг, или менее чем около 500 мг, или менее чем около 200 мг, или менее чем около 50 мг. Аналогично, в некоторых вариантах реализации изобретения доза второй композиции (т.е., препарат, используемый для лечения того же или другого заболевания, какие лечат композициями в соответствии с настоящим изобретением), как описано в данном документе, меньше чем около 1000 мг, или менее чем приблизительно 800 мг, или менее чем около 600 мг, или менее чем около 500 мг, или менее чем около 400 мг, или менее чем около 300 мг, или менее чем около 200 мг, или менее чем около 100 мг, или менее чем около 50 мг, или менее чем около 40 мг, или менее чем около 30 мг, или менее чем около 25 мг, или менее чем около 20 мг, или менее чем около 15 мг, или менее чем около 10 мг, или менее чем около 5 мг, или менее чем около 2 мг, или менее чем около 1 мг, или менее чем около 0,5 мг, и с любым целым, либо дробным шагом между ними.

В одном варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к упаковке фармацевтической композиции в контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество композиции в соответствии с настоящим изобретением, отдельно или в комбинации со вторым фармацевтическим агентом; и инструкцией по использованию композиции для лечения, предупреждения или уменьшения одного или нескольких симптомов заболевания у субъекта.

Способ применения

Способы введения любой из композиций в соответствии с настоящим изобретением включают пероральный, назальный, ректальный, парентеральный, сублингвальный, трансдермальный, чресслизистый (например, подъязычный, язычный, (транс)буккальный (транс)уретральный, вагинальный (например, транс - и околовагинальный), (интра)назальный, и (транс)ректальный), интравезикальный, внутрилегочный, интрадуоденальный, внутрижелудочный, интратекальный, подкожный, внутримышечный, интрадермальный, интраартериального, внутривенозный, эндобронхиальный, ингаляционный и наружного применения.

Подходящие композиции и лекарственные формы включают, например, таблетки, капсулы, каплеты, таблетки, гелевые капсулы, пастилки, дисперсии, суспензии, растворы, сиропы, гранулы, шарики, трансдермальные пластыри, гели, порошки, гранулы, утфели, леденцы, кремы, пасты, пластыри, примочки, диски, свечи, жидкости, спреи для назального или перорального применения, сухой порошок или аэрозольные лекарственные формы для ингаляции, композиций и препараты для интравезикального введения и тому подобное. Следует понимать, что составы и композиции, которые использовались в настоящем изобретении, не ограничены конкретными составами и композициями, описанных в настоящем документе.

Пероральное введение

Для перорального применения наиболее подходящими являются таблетки, драже, жидкости, капли, суппозитории или капсулы, каплеты и желатиновые капсулы. Другие препаративные формы пригодные для перорального введения включают, не ограничиваясь, порошкообразной или зернистой препаративной формой, водной или масляной суспензии, водного или масляного раствора, пасты, геля, зубной пасты, жидкости для полоскания рта, обволакивающее средство и ополаскиватель для ротовой полости, или эмульсии. Композиции, предназначенные для перорального использования, могут быть получены в соответствии с любым способом, известным специалистам в данной области техники, и такие композиции могут содержать один или более агентов, выбранных из группы, состоящей из инертных, нетоксичных фармацевтически вспомогательных веществ, которые пригодны для изготовления таблеток. Такие наполнители включают, например, инертный разбавитель, такой как лактоза; измельчитель и разрыхлитель, такие как кукурузный крахмал; связующие агенты, такие как крахмал; смазывающие агенты, такие как стеарат магния.

Таблетки могут быть без покрытия или они могут быть покрыты известными способами для достижения замедленного распада в желудочно-кишечном тракте субъекта, тем самым обеспечивая замедленное высвобождение и всасывание активного ингредиента. Например, такое вещество, как глицерил моностеарат или глицерил дистеарат может быть использован для покрытия таблеток. Далее, например, таблетки могут быть покрыты, с применением способов, описанных в патентах США№4,256,108; 4,160,452; и 4,265,874 с получением таблеток с осмотически контролируемым высвобождением. Таблетки могут дополнительно содержать ароматизатор, вкусовую добавку, краситель, консервант, или любую их комбинацию в целях обеспечения фармацевтически оригинального и приятного на вкус препарата.

Твердые капсулы, содержащие активное вещество, могут быть приготовлены с помощью физиологически расщепляемых композиций, таких как желатин. Такие твердые желатиновые капсулы состоят из активного ингредиента, и могут дополнительно содержать дополнительные ингредиенты, включая, например, инертный твердый разбавитель, например карбонат кальция, фосфат кальция или каолин.

Мягкие желатиновые капсулы, содержащие активное вещество, могут быть приготовлены с помощью физиологически расщепляемых композиций, таких как желатин. Такие мягкие желатиновые капсулы, которые содержат активное вещество, которое может быть смешано с водой или масляной средой, например, арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением для перорального употребления могут быть в виде таблеток или капсул, приготовленные известным способом с фармацевтически приемлемыми наполнителями, такими как вяжущие вещества; наполнители; смазочные вещества; разрыхлители; или смачивающие агентами. При желании, таблетки могут быть покрыты, с использованием подходящих способов и материалов для покрытия, таких как OPADRY™ систем покрытия пленочной оболочкой с Colorcon, Вест-Пойнт, штат Пенсильвания (например, OPADRY™ OY Type, OYC Type, Organic Enteric OY-P Type, Aqueous Enteric OY-A Type, OY-PM Type и OPADRY™ White, 32K18400).

Жидкие препараты для перорального употребления могут быть в форме растворов, сиропов или суспензий. Жидкие препараты могут быть приготовлены известными способами с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие агенты (например, сорбитный сироп, метилцеллюлоза или пищевые гидрогенизированные жиры); эмульгаторы (например, лецитин или аравийская камедь); безводные растворители (например, миндальное масло, жирный сложный эфир или этиловый спирт); и консерванты (например, метил- или пропил- парагидроксибензоат или сорбиновая кислота). Жидкие лекарственные формы фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, пригодные для перорального введения могут быть приготовлены, упакованы и проданы либо в жидкой форме или в форме сухого продукта, предназначенного для разбавления водой или другим подходящим растворителем перед использованием.

Таблетка, содержащая активное вещество, может, например, быть изготовлена путем прессовки или формовки активного ингредиента, по выбору с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть приготовлены путем сжатия в соответствующем устройстве активного вещества в сыпучей форме, такой как порошок или гранулированный препарат, по выбору смешанный с одним или более из связывающих веществ, смазок, наполнителей, поверхностно-активныв веществ, и диспергирующими веществами. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формовки в соответствующем устройстве смеси активного ингредиента и фармацевтически приемлемого носителя и по меньшей мере достаточного количества жидкости, для увлажнения смеси. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в производстве таблеток, включают, но не ограничиваясь этим, инертные разбавители, разрывающие и разрыхляющие вещества, связывающие и смазывающие вещества. Известные диспергирующие агенты включают, не ограничиваясь, картофельный крахмал и натрия крахмала гликолят. Известные поверхностно-активные вещества включают, не ограничиваясь, лаурилсульфат натрия. Известные разбавители включают, не ограничиваясь, карбонат кальция, карбонат натрия, лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, фосфат кальция, дикальцийфосфат и фосфат натрия. Известные разрывающие и разрыхляющие вещества включают, не ограничиваясь, кукурузный крахмал и альгиновую кислоту. Известные связующие вещества включают, не ограничиваясь, желатин, аравийскую камедь, предварительно клейстеризованный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон и гидроксипропилметилцеллюлозу. Известные смазывающие включают, но не ограничиваясь этим, стеарат магния, стеариновую кислоту, диоксид кремния и тальк.

Способы гранулирования для модификации исходных порошков или других твердых веществ активного ингредиента хорошо известны в фармацевтической области. Порошки, как правило, смешанные со связующим веществом в более менее крупные постоянные сыпучие агломераты или гранулы называют «гранулированными». Например, процесс «влажной» грануляции с использованием растворителя, как правило, отличающийся тем, что порошки сочетают со связующим материалом или смачивают водой или органическим растворителем в условиях, приводящих к образованию влажной гранулированной массы, из которой затем выпаривают растворитель.

Гранулирование из расплава, как правило, заключается в использовании веществ, твердых или полутвердых при комнатной температуре (т.е. обладающих относительно низкой температурой размягчения и диапазоном плавления) способствуют грануляции порошкообразных или других материалов, по сути, без добавления воды или других жидких растворителей. Твердые тела с низкими температурами плавления, при нагревании до температуры в диапазоне плавления, разжижаются и выступают в качестве связующего вещества при гранулировании носителя. Разжиженные твердые вещества сами расползаются по поверхности порошкообразных материалов, с которыми они связались, и при охлаждении, образует твердую гранулированную массу, в которой исходные вещества связаны друг с другом. В результате грануляции расплав может подаваться в таблеточный пресс или быть инкапсулированым для приготовления пероральной лекарственной формы. Грануляции расплава повышает скорость растворения и биодоступность активного (т.е. лекарственного средства) путем образования твердой дисперсии или густого раствора.

Патент США №5169645 непосредственно описывает прессуемые гранулы, содержащие воск и имеющие улучшенные свойства сыпучести. Гранулы получают и когда воски подмешивают к расплаву с определенными добавками, улучшающими текучесть, в последующем охлаждая и гранулируя эту смесь. В некоторых вариантах реализации изобретения только воск обособленно плавится в смеси воска(ов) и добавки(ок), и в других случаях, воск(и) и добавок(и) будут плавиться.

Настоящее изобретение также включает многослойную таблетку, содержащую слой, предусматривающий замедленное высвобождение одной или более композиций в соответствии с настоящим изобретением, и дополнительный слой, предусматривающий немедленное высвобождение лекарственного средства для лечения заболевания. С использованием воска/смеси рН-чувствительных полимеров, может быть получена композиция нерастворимая в желудочном соке, которая содержит активное вещество, тем самым обеспечивая его замедленное высвобождение.

Парентеральное введение

Используемое в настоящем документе “парентеральное введение” фармацевтического состава включает любой способ введения, характеризуемый физическим нарушением тканей субъекта и введения фармацевтической композиции сквозь прокол в ткани. Таким образом, парентеральное введение включает, не ограничиваясь, введение фармацевтической композиции путем инъекции композиции, путем нанесения композиции через хирургический разрез, путем нанесения композиции через проникающие нехирургические раны, и тому подобное. В частности, парентеральное введение предполагает, но не ограничивается, внутриглазным, интравитреальным введением, подкожным, внутрибрюшным, внутримышечным инъекциями, внутриопухолевыми, и техниками перитонеального диализа.

Составы фармацевтической композиции, подходящие для парентерального введения, включают активное вещество в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический солевой раствор. Такие составы могут быть подготовлены, упакованы или проданы в форме, пригодной для болюсного введения или непрерывного введения. Инъекционные составы могут быть приготовлены, упакованы или проданы в стандартной лекарственной форме, например в ампулах или в многодозных контейнерах, содержащих консервант. Композиции для парентерального введения включают, не ограничиваясь, суспензии, растворы, эмульсии на масляных или водных носителях, пасты, и имплантируемые замедлено высвобождаемые или биоразлагаемые составы. Такие препараты могут дополнительно содержать один или более дополнительных ингредиентов, включая, но не ограничиваясь, суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. В одном варианте реализации изобретения композиция для парентерального введения, содержит активное вещество в сухой форме (т.е. виде порошка или гранул) для разведения с подходящим носителем (например, стерильной апирогенной водой) перед парентеральным введением восстановленной композиции.

Фармацевтические композиции могут быть подготовлены, упакованы, или проданы в виде стерильных инъекционных водных или масляных суспензий или растворов. Эта суспензия или раствор может быть приготовлена в соответствии с известным уровнем техники, и может содержать, в дополнение к активному ингредиенту, дополнительные вещества, такие как диспергирующие вещества, смачивающие вещества, или суспендирующие вещества, описанные в данном документе. Такие стерильные инъекционные композиции могут быть приготовлены с использованием нетоксичного парентерально-приемлемого разбавителя или растворителя, например, в воде или 1,3-бутандиоле. Других приемлемые разбавители и растворители включают, не ограничиваясь, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия, и нелетучие масла, такие как синтетические моно- или ди-глицериды. Другие парентерально вводимые композиции, которые могут быть использованы включают те, которые содержат активное вещество в микрокристаллической форме, в липосомных препаратах или в качестве компонента биоразлагаемых полимерных систем. Композиции для замедленного высвобождения или имплантации могут включать фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные вещества, такие как эмульсии, ионообменные смолы, труднорастворимые полимеры, или труднорастворимые соли.

Местное применение

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена, упакована или продана в рецептуре, подходящей для местного применения. Есть несколько преимуществ в доставке композиции, в том числе лекарств или других лекарственных средств, в кожу (дермальная доставка лекарственных средств) или в организм через кожу (трансдермальная доставка лекарственных средств). Трансдермальная доставка композиции предлагает привлекательную альтернативу инъекции и пероральным лекарственным средствам. Дермальная доставка композиции предлагает эффективный способ доставить композицию на кожу млекопитающего, предпочтительно человека, и обеспечивает способ лечения кожи, или обеспечивает иной способ воздействия на кожу, без необходимости повреждения или нарушения целостности наружного слоя кожи. В настоящем изобретении, дермальная доставка, путем воздействия на кожу композиции в соответствии с настоящим изобретением, обеспечивает следующие преимущества для лечения связанных с состоянием кожи расстройств или заболеваний.

Ряд соединений, в том числе некоторые лекарственные средства, будут эффективно проникать в кожу лишь потому, что молекулы невелики и мощны в малых дозах от 0,1 мг до 15 мг/сут (Kanikkannan et al., 2000, Curr. Med. Chem. 7:593-608). Многие другие соединения и лекарственные препараты могут быть доставлены только при наличии дополнительной системы усиления, которая «заставляет» их пройти сквозь кожу. Среди нескольких способов трансдермальной доставки лекарственных средств выделяют электропорацию, сонофорез, ионофорез, усилители проницаемости (циклодекстрины), и липосомы. Хотя вышеупомянутые способы, также включены в настоящее изобретение для дермальной доставки композиций в соответствии с настоящим изобретением, липосомы представляют собой предпочтительный кожный способ доставки лекарственных средств.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут содержать активное вещество отдельно, в форме, пригодной для введения субъекту, или композиция может содержать по меньшей мере одно активное вещество и один или более фармацевтически приемлемых носителей, один или более дополнительных ингредиентов, или некоторые их комбинации. Действующее активное вещество может присутствовать в композиции в форме физиологически приемлемого сложного эфира или соли, например, в комбинации с физиологически приемлемым катионом или анионом, как хорошо известно в данной области техники. Композиции настоящего изобретения также следует понимать, охватывают фармацевтические композиции, используемые для лечения других состояний, расстройств и заболеваний, связанных с кожей.

В одном аспекте, кожная доставка лекарственного средства в соответствии с настоящим изобретением представляет собой композицию, содержащую по меньшей мере одно первое соединение, которое может способствовать дермальной доставке по меньшей мере одного второго соединения, связанного с ним или находящегося в непосредственной физической близости к композиции, содержащей первое соединение. Как будет понятно специалистам в данной области техники, готовым к описанию, изложенному в настоящем документе, такие средства доставки включают, не ограничиваясь, липосомы, наносомы, фосфолипидные не липосомные композиции (например, выбранные кохлеаты), в числе прочих.

Композиции, подходящие для местного применения, включают, не ограничиваясь, жидкие или полужидкие препараты, такие как линименты, лосьоны, водно-жировые эмульсии или эмульсии типа "масло в воде", такие как кремы, мази или пасты, или растворы и суспензии. Препараты для местного применения могут, например, содержать около от 0,001% до 90% (масса/масса) активного ингредиента, хотя концентрация активного ингредиента может быть столь же высока как предел растворимости активного ингредиента, находящегося в растворителе. Композиции для местного применения могут дополнительно содержать один или более дополнительных ингредиентов, описанных в данном документе.

В одном аспекте настоящего изобретения система кожной доставки включает в себя систему доставки липосом, и что настоящее изобретение не должно рассматривать ограниченной какой-либо конкретной системой доставки липосом. На основе описания, изложеннего в настоящем документе, специалистам в данной области понятно, как определена система доставки липосом, используемая в настоящем изобретении.

Настоящее изобретение также охватывает усовершенствование дермальной и трансдермальной доставки лекарственных средств путем использования усилителей всасывания (также называемые сорбционные промоторы или катализаторы), которые проникают в кожу для обратимого снижения барьера сопротивления. Многие вещества известные в данной области техники усиливают проникающую активность в том числе окись сернистого алкила (такая как диметилсульфоксид, ДМСО), азоны (например, лаурокапрам), кетопироллидин (например, 2-пирролидон, 2Р), спирты и алканолы (этанол, или деканол), гликоли (например, пропиленгликоль, ПГ, распространенный наполнитель лекарственных форм используемый для наружного применения), поверхностно-активные вещества (также распространены в лекарственных средствах) и терпены. Другие усилители включают олеиновую кислоту, олеиловый спирт, этоксидигликоль, лаурокапрам, насыщенную карбоновую кислоту, диметилсульфоксид, полярные липиды, или н-метил-2-пирролидон.

В альтернативных вариантах реализации изобретения местно активные фармацевтические или косметические композиции могут быть по выбору сочетаться с другими ингредиентами, такими как увлажнители, косметические адъюванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты, поверхностно-активные вещества, вспенивающие агенты, кондиционеры, увлажнители, смачивающие агенты, эмульгаторы, ароматизаторы, загустители, буферные агенты, консерванты, солнцезащитные средства и тому подобное. В другом варианте реализации изобретения усилители проницаемости и всасывания входит в композицию и являются эффективными в улучшении трансдермального проникновения активных ингредиентов через роговой слой относительно композиции лишенной усилителя проницаемости. Различные усилители проницаемости, в том числе олеиновая кислота, олеиловый спирт, этоксидигликоль, лаурокапрам, насыщенная карбоновая кислота, диметилсульфоксид, полярные липиды, или н-метил-2-пирролидон, известны специалистам в данной области техники.

В другом аспекте, композиция может дополнительно содержать гидротропное вещество, которое действуя, увеличивает беспорядок в структуре рогового слоя, и тем самым позволяет увеличить транспорт через роговой слой. Различные гидротропные вещества, такик как изопропиловый спирт, пропиленгликоль, ксилол сульфонат натрия, известные специалистам в данной области техники. Композиции данного изобретения могут также содержать активное количество ретиноидов (т.е. соединений, которые связываются с любыми рецепторами семейства ретиноидов), в том числе, например, третиноин, ретинол, эфиры третиноина и/или ретинола и тому подобное.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут содержать консервант около от 0,005% до 2,0% от общей массы композиции. Консервант используется для предотвращения порчи в случае неоднократного использования пациентами водного геля, когда она подвергается воздействию загрязняющих веществ окружающей среды, например, воздействию воздуха или кожи пациента, включая контакт с пальцами, используемые для нанесения композиции настоящего изобретения, такие как лечебный гель или крем.

Примеры консервантов, используемые в соответствии с настоящим изобретением включены, но не ограничены теми, которые выбраны из группы, включающей бензиловый спирт, сорбиновую кислоту, парабены, имидомиочевину и их комбинации. Наиболее предпочтительный консервант представляет собой комбинацию приблизительно от 0,5% до 2,0% бензилового спирта и от 0,05% до 0,5% сорбиновой кислоты.

Композиция предпочтительно включает антиоксидант и хелатирующий агент, который ингибирует деградацию композиции при использовании в настоящем изобретении водно-гелевой композиции. Предпочтительные антиоксиданты для некоторых соединений бутилгидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол, альфа-токоферол и аскорбиновая кислота в предпочтительном диапазоне приблизительно от 0,01% до 5% и более предпочтительный диапазон для бутилгидрокситолуола от 0,01% до 1% по массе от общей массы композиции. Предпочтительно, хелатирующий агент присутствует в количестве от 0,01% до 0,5% по массе к общей массе композиции. Наиболее предпочтительные хелатирующие агенты включают этилендиаминтетраацетат (например, динатрия эдетат) и лимонную кислоту в весовом диапазоне приблизительно от 0,01% до 0,20%, а в более предпочтительном диапазоне от 0,02% до 0,10% по массе от общей массы композиции. Хелатообразователь, используемый для хелатирования ионов металлов в композиции, может негативно влиять на срок годности препарата. В то время как бутилгидрокситолуол и динатрия эдетат представляют собой наиболее предпочтительные антиоксидант и хелатирующий агент, соответственно, для некоторых композиций наиболее подходящими и равноценными могут быть другие антиоксиданты и хелатообразующие агенты, а следовательно, должны быть известны специалистам в данной области техники.

Дополнительные компоненты могут содержать, не ограничиваясь, в том числе воду, масла (например, оливковое масло/ ПЭГ7), масло алоэ, воск (например, воск жожоба), сквален, миристат (например, изопропиловый миристат), триглицериды (например, каприловый триглицерид), Солюлан 98, какао-масло, масло ши, спирт (например, бегениловый спирт), стеарат (например, глицерин-моностеарат), хелатирующие агенты (например, ЭДТА), пропиленгликоль, SEPIGEL (Seppic, Inc., Fairfield, Нью-Джерси, США), силикон и силиконовые производные (например, диметикон, циклометикон), витамины (например, витамин E), среди прочих.

Трансбуккальное введение

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена, упакована или продана в композиции пригодной для трансбуккального введения. Такие композиции могут, например, иметь форму таблеток или пастилок, приготовленные с использованием общепринятых способов, и могут, например, содержать от 0,1 до 20% (масса/масса) активного ингредиента, содержащий остаток растворимой или разлагаемой в ротовой полости композиции, и, по выбору, дополненной одним или более дополнительными ингредиентами, описанными в данном документе. В альтернативном варианте препараты, пригодные для трансбуккального введения могут содержать порошок или аэрозоль или раствор или суспензию, содержащие активное вещество. Такие порошковые, аэрозоли или аэрозольные композиции, при распылении, предпочтительно имеют средний размер частиц или размер капель в диапазоне приблизительно от 0,1 до приблизительно 200 нм, и могут дополнительно содержать один или более дополнительных ингредиентов, описанных в данном документе.

Ректальное введение

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена, упакована или продана в композиции пригодной для ректального введения. Такая композиция может быть в форме, например, суппозитория, микроклизмы с удержанием, и раствора для гидроколонотерапии.

Суппозитории могут быть приготовлены комбинированием активного ингредиента с нераздражающим фармацевтически приемлемым наполнителем, который является твердым при обычной комнатной температуре (т.е. около 20°С), и который становится жидким при ректальной температуре субъекта (т.е. около 37°С у здорового человека). Подходящие фармацевтически приемлемые наполнители включают, не ограничиваясь, какао-масло, полиэтиленгликоль, а также различные глицериды. Суппозитории могут дополнительно содержать различные дополнительные ингредиенты, включая, не ограничиваясь, антиоксиданты и консерванты.

Удерживающая композиции микроклизма и растворы для гидроколонотерапии могут быть получены путем комбинирования активного вещества с фармацевтически приемлемым жидким носителем. Как хорошо известно в данной области техники, препараты могут быть введены с использованием клизмы, и могут быть помещены внутрь устройством, адаптированным к ректальной анатомии субъекта. Композиция в клизме может дополнительно содержать различные дополнительные ингредиенты, включая, но не ограничиваясь, антиоксиданты и консерванты.

Дополнительные лекарственные формы

Дополнительные лекарственные формы настоящего изобретения включают лекарственные формы, как описано Патентах США №6340475; 6488962; 6451808; 5972389; 5582837 и 5007790. Дополнительные лекарственные формы данного изобретения также включают лекарственные формы, как описано в патентных заявках США №20030147952, 20030104062, 20030104053, 20030044466, 20030039688, и 20020051820. Дополнительные лекарственные формы данного изобретения также включают лекарственные формы, как описано в заявках РСТ к №03/35041 WO, WO 03/35040, 03/35029 WO, WO 03/35177, 03/35039 WO, WO 02/96404, 02/32416 WO, WO 01/97783, 01/56544 WO, WO 01/32217, 98/55107 WO, WO 98/11879, 97/47285 WO, WO 93/18755, и WO 90/11757.

Контролируемое высвобождение композиций и система доставки лекарственных средств

Контролируемое или замедленное высвобождение составов фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением может быть изготовлено с применением общеизвестных технологий, например, использование белков с рН-чувствительными доменами или протеазо-расщепляемыми фрагментами. В некоторых случаях используемые лекарственные формы, могут приводить к медленному или контролируемому высвобождению одного или более активных ингредиентов в них с помощью, например, гидроксипропилметилцеллюлозы, других полимерных матриц, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом или микросфер или их сочетаний для обеспечения желаемого профиля высвобождения в различных пропорциях. Любые составы с контролируемым высвобождением известны специалистами в данной области техники, включая описанные в настоящем документе, и могут быть легко выбраны для применения в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, однодозный контейнер лекарственного средства подходящий для перорального введения, такой как таблетки, капсулы, гелевые капсулы, и каплеты, которые приспособлены для контролируемого высвобождения, охватываются настоящим изобретением.

Большая часть фармацевтических композиций с контролируемым высвобождением имеют общую цель улучшить медикаментозную терапию, по сравнению с неконтролирующими высвобождение аналогами. В идеале, использование оптимально спроектированных препаратов с контролируемым высвобождением для медикаментозной терапии, характеризуется уменьшением лекарственного вещества, используемого для лечения, или контролем за состоянием в минимальный промежуток времени. Преимущества композиций с контролируемым высвобождением включает продление действия препарата, сокращение частоты приема лекарственных средств и улучшение соблюдения режима терапии. Кроме того, используемые композиции с контролируемым высвобождением влияют на время начала действия или другие характеристики, такие как уровень лекарственного средства в крови, и, таким образом можно повлиять на возникновение побочных эффектов.

Большая часть композиций с контролируемым высвобождением предназначены для первоначально усвоения некоторого количества препарата, который оперативно производит желаемый терапевтический эффект, и постепенного и непрерывного усвоения других количеств лекарственных средств для поддержания этого уровня терапевтического эффекта в течение длительного периода времени. Для того чтобы сохранить этот постоянный уровень лекарства в организме, препарат должен высвобождаться из лекарственной формы со скоростью, которая заменит количество препарата метаболизируемого и выводимого из организма.

Контролируемое высвобождение активного ингредиента может быть простимулировано различными индукторами, например рН, температурой, ферментами, водой или другими физиологическими условиями или соединениями. Термин «контролируемое высвобождение компонента» в контексте настоящего изобретения определяется в данном документе как соединение или соединения, включая, но не ограничиваясь, полимеры, полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, липосомы или микросферы или их сочетание, облегчающие контролируемое высвобождение активного ингредиента.

В определенных вариантах реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть, но не ограничиваясь, с кратковременным действием, с ускоренным выведением, а также контролируемые, например, с замедленным высвобождением, отсроченным высвобождением и пульсирующим высвобождением.

Термин "замедленное высвобождение" используется в его общепринятом смысле для обозначения лекарственной формы, которая обеспечивает постепенное высвобождение препарата в течение длительного периода времени, и которое может, хотя и необязательно, привести к значительному постоянному уровню препарата в крови в течение длительного периода времени. Период времени может быть меньше месяца или больше и высвобождение должно быть более продолжительным, чем при болюсном введении того же количества вещества.

Для замедленного высвобождения, композиции могут быть приготовлены с помощью подходящего полимера или гидрофобного вещества, обеспечивающего композиции замедленное высвобождение. Как например, композиции используемые по способу в соответствии с настоящим изобретением могут вводиться в виде микрочастиц, например, путем инъекций или в виде имплантируемых пластин или дисков.

В предпочтительном варианте реализации изобретения композиции в соответствии с настоящим изобретением вводят субъекту, отдельно или в комбинации с другим фармацевтическим веществом, с использованием состава с замедленным высвобождением.

Термин "замедленное высвобождение" используется в данном документе в его обычном смысле для обозначения лекарственной формы для первоначально усвоения препарата через некоторое время после его введения и, что это покрытие, хотя и не обязательно, включает в себя задержку около от 10 минут до 12 часов.

Термин пульсирующее высвобождение используемый в данном документе в его обычном смысле для обозначения лекарственной формы, которая обеспечивает высвобождение препарата таким образом, чтобы произвести пульсирующий профиль препарата в плазме после его введения.

Термин "немедленное высвобождение" используется в его общепринятом смысле для обозначения лекарственной формы, которая обеспечивает высвобождение препарата сразу после его введения.

Используемое в данном документе кратковременное действие относится к любому периоду времени, вплоть до около 8 часов, около 7 часов, около 6 часов, около 5 часов, около 4 часов, около 3 часов, около 2 часов, около 1 часа, около 40 минут, около 20 минут, или около 10 минут и с любым целым, либо дробным шагом между ними после введения лекарственного средства.

Используемое в настоящем документе ускоренное выведение понимается как любой период времени до и включая около 8 часов, около 7 часов, около 6 часов, около 5 часов, около 4 часов, около 3 часов, около 2 часов, около 1 часа, около 40 минут, около 20 минут, или около 10 минут, и с любым целым, либо дробным шагом между ними после введения лекарственного средства.

Соответственно, в одном варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, содержащей пропановую кислоту, изомасляную кислоту по меньшей мере один сложный эфир, и по меньшей мере один носитель, причем, химический состав оказывает антибактериальное действие в применении к экскрементам человека или животных. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый бутират. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель представляет собой носитель на основе кремнезема. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель выбран из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый бутират составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановой кислоты, изомасляной кислоты и изоамилового бутирата составляет около 7 частей двух кислот и 2 части изоамилового бутирата. В другом варианте реализации изобретения, химическая композиция содержит преимущественно пропановую кислоту, изомасляную кислоту, изоамиловый бутират и носитель. В другом варианте реализации изобретения носитель выбран из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте реализации изобретения химическая композиция оказывает антибактериальное действие в применении к экскрементам человека и животных.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, которая содержит пропановую кислоту, изомасляную кислоту по меньшей мере один сложный эфир по меньшей мере один носитель и по меньшей мере один гриб. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый бутират. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель представляет собой носитель на основе кремнезема. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель выбран из группы, которая состоит из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый бутират составляет около 3.5:3.5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановой кислоты, изомасляной кислоты и изоамилового бутирата составляет около 7 частей двух кислот и 2 частей изоамилового бутирата. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один гриб представляет собой эндофит. В другом варианте реализации изобретения эндофит пренадлежит роду Fusarium. В другом варианте реализации изобретения эндофит представляет собой F. subglutinans.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, которая содержит пропановую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир, содержащий кислотный остаток с 6-12 атомами углерода, отличающийся тем, что химическая композиция имеет соотношение пропановая кислота: сложный эфир около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый гексаноат. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну пищевую добавку и по меньшей мере одну соль. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, сывороточный белок, хлорид калия, сульфат магния, и хлорид натрия. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорил натрия и ацетат магния. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия, ацетат магния, и калий монофосфат. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте реализации изобретения носитель представляет собой кремофор. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит преимущественно пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат в соотношении пропановая кислота: изоамиловый гексаноат около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, которая содержит преимущественно пропановую кислоту, изоамиловый гексаноат и носитель.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, которая содержит пропановую кислоту и сложный эфир, содержащий кислотный остаток с одним атомом углерода, отличающийся тем, что химическая композиция имеет соотношение пропановая кислота: сложный эфир около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый формиат. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит преимущественно пропановую кислоту и изоамиловый формиат в соотношении пропановая кислота: изоамиловый формиат около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит, как минимум один носитель. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель представляет собой носитель на основе кремнезема. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один носитель выбран из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте реализации изобретения, химическая композиция содержит преимущественно пропановую кислоту, изоамиловый формиат и носитель.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение включает в себя химическую композицию, которая содержит пропановую кислоту, изоамиловый формиат, и по меньшей мере один гриб. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изоамиловый формиат составляет около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один гриб представляет собой эндофит. В другом варианте реализации изобретения эндофит принадлежит роду Fusarium. В другом варианте реализации изобретения эндофит представляет собой F. subglutinans.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к способу обработки экскрементов человека и животных, включающий взаимодействие экскрементов человека и животных с композицией, содержащей пропановую кислоту, изомасляную кислоту и по меньшей мере один сложный эфир, отличающаяся тем, что композиция убивает или ингибирует рост бактерий в экскрементах человека и животных. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к способу обработки экскрементов человека и животных, включающий взаимодействие экскрементов человека и животных с композицией, содержащей пропановую кислоту, изомасляную кислоту по меньшей мере один сложный эфир и по меньшей мере один гриб, отличающийся тем, что пропановая кислота, изомасляная кислота и по меньшей мере один сложный эфир, убивают или снижают рост бактерий в экскрементах человека и животных, и по меньшей мере один гриб увеличивает скорость разложения экскрементов человека и животных. В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к способу устранения или снижения микробного роста на очистной в обрабатываемой зоне, включающий взаимодействие места обработки с композицией, которая содержит пропановую кислоту и по меньшей мере один сложный эфир в соотношении пропановая кислота: сложный эфир приблизительно 7:2, в котором сложный эфир представляет собой изоамиловый формиат или изоамиловый гексаноат и композиция убивает или снижает рост бактерий в экскрементах человека и животных. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к способу обработки экскрементов человека и животных, включающий взаимодействие экскрементов человека и животных с композицией, которая содержит пропановую кислоту, изоамиловый формиат в соотношении пропановая кислота: изоамиловый формиат около 7:2, и по меньшей мере один гриб, отличающийся тем, что смесь пропановой кислоты и изоамилового формиата убивает или уменьшает рост микробов в экскрементах человека и животных, и по меньшей мере один гриб увеличивает скорость разложения экскрементов человека и животных. В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения животного, имеющего заболевание или расстройство, связанное с микробной инфекцией, который включает введение животному эффективного количества композиции, содержащей по меньшей мере одну органическую кислоту. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит преимущественно органическую кислоту. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит органическую кислоту. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере одна органическая кислота представляет собой пропановую кислоту. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере одна органическая кислота представляет собой изомасляную кислоту. В другом варианте реализации изобретения животное представляет собой человека. В другом варианте изобретения заболевание или расстройство представляет собой желудочно-кишечное заболевание. В другом варианте реализиции изобретения животное представляет собой домашнего быка, свинью или овцу. В другом варианте реализации изобретения заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из желудочно-кишечных заболеваний и интрамаммарных инфекций. В другом варианте реализации изобретения желудочно-кишечное заболевание представляет собой диарея. В другом варианте реализации изобретения интрамаммарная инфекция представляет собой субклинический или клинический мастит. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере один сложный эфир. В другом варианте реализации изобретения, по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый гексаноат. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну пищевую добавку и по меньшей мере одну соль. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, сывороточный белок, хлорид калия, сульфат магния, и хлорид натрия. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, натрия хлорид и ацетат магния. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит глюкозу, глицин, хлорид калия, хлорид натрия, ацетат магния, и калий монофосфат. В другом варианте реализации изобретения композиция дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте реализации изобретения носитель представляет собой кремофор. В другом варианте реализации изобретения композиция содержит пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат в соотношении пропановая кислота:изоамиловый гексаноат около 7:2 объем/объем. В другом варианте реализации изобретения по меньшей мере один сложный эфир представляет собой изоамиловый гексаноат. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота: изомасляная кислота: изоамиловый гексаноат составляет около 3,5:3,5:2 объем/объем/объем. В другом варианте реализации изобретения соотношение пропановая кислота, изомасляная кислота и изоамиловый гексаноат составляет около 7 частей двух кислот и 2 части изоамилового бутирата.

В другом варианте реализации изобретения настоящее изобретение относится к химической композиции, которая содержит преимущественно пропановую кислоту, изомасляную кислоту, изоамиловый гексаноат и носитель. В другом варианте реализации изобретения носитель выбран из группы, состоящей из бентонита, цеолита и перлита. В другом варианте химический состав оказывает антибактериальное действие в применении к экскрементам человека и животных.

Специалистам в данной области техники будет понятно, или они могут убедиться, используя не более чем обычное экспериментирование, многочисленные эквиваленты конкретных процедур, варианты реализации изобретения, формулы изобретения и примеры, описанные в данном документе. Такие эквиваленты были рассмотрены в рамках настоящего изобретения и охвачены прилагаемой формулой изобретения. Например, следует понимать, что модификации условий реакции, включая, но не ограничиваясь, временем реакции, размером/объемом реакции, и экспериментальными веществами, такими как растворители, катализаторы, давление, условия, например, атмосфера азота, и восстановители/окислители, с признаваемыми в данной области альтернативными техниками и используя не более чем обычное экспериментирование, входят в пределы объема настоящей заявки.

Следует понимать, что везде, где значения и диапазоны, предусмотренные настоящим документом, все значения и диапазоны не охватывают эти значения и диапазоны, которые должны быть охвачены в пределах настоящего изобретения. Более того, все значения, которые попадают в эти диапазоны, а также верхние или нижние пределы диапазона значений, также рассматриваются в настоящей заявке.

Приведенные далее примеры дополнительно иллюстрируют аспекты настоящего изобретения. Однако они ни в коей мере не ограничены сведениями или описаниями настоящего изобретения, как изложено в настоящем документе.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫ

Далее настоящее изобретение будет описано со ссылкой на нижеследующие примеры. Эти примеры приведены с целью иллюстрации, и данное изобретение не ограничивается этими примерами, но скорее охватывает все вариации, которые очевидны в результате сведений предоставленных в настоящем документе.

Пример 1

Обсуждаемые ниже различные эксперименты привели к открытию F. subglutinans и систем 1 и 2, которые могут применяться в различных устройствах по обработке экскрементов человека и животных, а также с подстилками для животных, в стойлах и т.д.

Таблица 1. Показывает ингибирующую активность различных сложных эфиров (используются в сочетании со смесью изомасляной и пропановой кислот 1:1 объем/объем и таким же образом смесь двух кислот сочетается со сложным эфиром в пропорции 7:2 объем/объем) в серии тестов грибов и бактерий, обычно используемых для определения антибиотической активности. На основании этих данных для применения в этом изобретении были выбраны системы 1 и 2 (см. выделенные области в таблице).

Таблица 2. Для различных вновь изолированных Fusarium spp, растущих на экскрементах человека в присутствии системы 2 (с бентонитом или цеолитом в качестве носителя), получены молекулярно-генетические данные. Отсюда очевидно, что любой из этих организмов почти равноценен или, в большинстве случаев лучше, чем Fusarium culmorum (P2-24), субъект ранее выданного патента. Массив данных P2-24 также включен.

Таблица 3. Рост различных Fusarium на экскрементах человека приводит к уменьшению сухой массы на 7 неделю эксперимента. Экспериментальная установка содержала 0,5 г бентонита с системой 2 на чашке Петри со средой, содержащей около 100 мг сырой массы экскрементов человека и небольшой агаровый блок с тестовым Fusarium. Инкубационный период составлял 7 недель при 22°С. Остатки человеческих экскрементов были физически удалены и высушены в течение 4 часов при 80°С и затем взвешены.

Фиг. 1. Продемонстрировано, какие анализы были сделаны для получения массива данных в таблице 1. Для тестирования различные сложные эфиры комбинировали со смесью изомасляной и пропановой кислот 1:1 (объем/объем) и эту смесь добавляли к сложному эфиру в пропорции 7:2 объем/объем. После этого 9 мкл помещали в центральную лунку с отдельными тест-организмами в агаровых блоках на периферии, как показано на фигуре.

Фиг. 2. Продемонстрирована эффективность системы 1 (выше) в уничтожении и ингибировании роста бактерий, ассоциированных с экскрементами человека. Свежие экскременты человека собирали и затем около 5 мг равномерно распределяли на поверхности чашки Петри с картофельно-декстрозным агаром. Чашки Петри инкубировали в течение 2 дней и затем фотографировали. Чашка Петри справа представляет собой необработанный контроль, средняя содержит 0,5 г бентонит без антибиотика, а левая содержит 0,5 г системы 1.

Фиг. 3. Продемонстрирована эффективность системы 2 (выше) в уничтожении и ингибировании роста бактерий, ассоциированных с экскрементами человека. Свежие экскременты человека собирали и затем около 5 мг равномерно распределяли на поверхности чашки Петри с картофельно-декстрозным агаром. Чашки Петри инкубировали в течение 2 дней и затем фотографировали. Чашка Петри справа представляет собой необработанный контроль, средняя содержит 0,5 г бентонит без антибиотика, а левая содержит 0,5 г системы 2.

Фиг. 4. Иллюстрирует два кошачьих туалета с кошачьими фекалиями в каждой от 5 разных кошек около 140 гр. Контейнер справа был обработан Системой 1 на бентоните (0,5 мл / 100 г бентонита). После 5 дней замеры аммиака показали 14 мд в контрольном контейнере (слева) и 0 мд в обработанном контейнере. В целом запах был значительно ослаблен в обработанном контейнере.

Фиг. 5. Продемонстрировано, каким образом гриб может расти на свежих экскрементах человека и снижать уровень запаха. Обработка около 140 г экскрементов человека в присутствии урины с Fusarium subglutinans 06-1 и наличии системы 2 (1 мл на 10 г цеолита). Спустя 3 недели отмечен существенный рост F. subglutinans (белый мицелий в правом контейнере). Уровень аммиака составил 71,4 в контрольном контейнере слева и 12.1 в обработанном контейнере справа.

Фиг. 6. Продемонстрирован рост различных вновь изолированных Fusarium spp по сравнению с ростом F. culmorum (р-2-24) на экскрементах человека. Показан поступательный прирост Fusarium spp на маленьких около 100 мг (сырая масса) кусочках экскрементов человека на протяжении многих дней. Сравнение роста недавно выделенных и охарактеризованных Fusarium spp по сравнению с Р2-24, представляет собой Fusarium culmorum, субъект ранее выданного патента. Новые Fusarium spp.в частности E06-1 и E06-5 действительно растут быстрее на экскрементах человека. Рост измеряли радиусом удаления мицелия от агарового блока, размещенного на кусочке экскрементов человека.

Фиг. 7. Вверх - шестидневная культура гриба Fusarium subglutinans E06-1, который предпочтительно применяют для обработки экскрементов человека и животных в сочетании с системой 2. Внизу - световая микроскопия спор и гифов F. subglutinans (снизу). Споры слегка изогнуты и имеют 9.8 - 12×2.5 мкм.

Фиг. 8. Fusarium subglutinans (E06-8) интенсивно растет на экскрементах человека (центр) в присутствии Системы 2. Обратите внимание на ингибирование бактериального роста в правой части культуральной чашки, которые подвергаются влиянию испарений из Системы 2, исходящих от частиц бентонита на левой стороне чашки, что обеспечивает грибковый рост. Там было добавлено 0,5 г обработанного бентонита, около 100 мг экскрементов человека и чашки Петри инкубированы в течение 12 дней. См. фиг. 6 со сравнительными измерениями роста.

Способ 1 - способ экспериментального выделения эндофитов Fusarium spp

Изоляты Fusarium spp. могут быть получены согласно стандартным способом понятным специалистам в данной области техники. Вкратце, фрагменты побега тщательно смачивали 70%-ным водным раствором этилового спирта для дезинфекции поверхности, а затем стерильным скальпелем удаляли первичную кору/эпидермис. Небольшие фрагменты асептичной вторичной коры, переносили на поверхность водного агара (ВА) и глицерин - аргининовой питательной среды (ГАС). После инкубации в течение нескольких дней при 25°C, концы гифов, развивающихся грибов, асептически извлекали и помещали на картофельно-декстрозный агар (КДА). Чистые культуры грибов были получены таким образом. В частности изоляты, имеющие от розового до красного окрашивания, и обладающие серповидной формой спор, скорее всего, представляют собой эндофитные Fusarium spp. Дальнейшая характеристика может быть сделана с использованием молекулярных методов как понятно специалистам в данной области техники. Эта процедура была использована для поиска каждого из организмов, используемых и описанных в данном документе.

В таблице 1 показан ингибирующий и уничтожающий эффект пропановой кислоты, и изомасляной кислоты вместе и по отдельности и с различными сложными эфирами. Тесты проводили в течение 30 ч при 22°С. Измерения проводили с соответствующими мерами предосторожности и, таким образом, можно рассчитать процент ингибирования роста для обработанных и контрольных организмов (необработанных). Бактерии и дрожжеподобные организмы были оценены на основе относительных темпов роста после 30 час. Эти выделенные области на таблице показывают соединения (сложные эфиры), обладающие наибольшей совместимостью со смесью изомасляной и пропановой кислот 1:1 (объем/объем) с соответствующими сложными эфирами в соотношении 7 к 2, систем 1 и 2 описанных выше. Именно благодаря этим тестам были открыты системы 1 и 2. Кислоты добавляют по 7 мкл отдельно и комбинируют со сложными эфирами с доведением до уровня в 9 мкл в тесте с чашками Петри.

Таблица 1. Тест-организм

Тестируемое вещество	Cercospora beticola	Phytophthora cinnamomi	Verticillium dahliae	Sclerotinia sclerotiorum	Pythium ultimum
Контроль	0%	0%	0%	0%	0%
						Изомасляная кислота + пропановая кислота	95%	87%	70%	20%	89%
Изомасляная кислота	95%	100%	90%	40%	100%
						Пропановая кислота	95%	67%	96%	60%	91%
Этилизобутират	95%	100%	80%	90%	100%
						Изопропилизобутират	95%	-33%	96%	30%	100%
Изобутилизобутират	95%	0%	92%	75%	100%
						Бутилизобутират	95%	0%	60%	0%	100%
Изобутилбурат	100%	33%	96%	70%	100%
						Изоамилбутират	100%	100%	100%	95%	100%
Изоамилизобутират	95%	97%	96%	80%	100%
						Изобутилпропионат	100%	33%	88%	80%	100%
Изобутилацетат	95%	67%	60%	20%	100%
						Пропилизобутират	95%	87%	88%	40%	98%
Изобутилизовалерат	95%	100%	96%	0%	100%

	Fusarium subglutinans	Trichoderma viridae	Rhizoctonia solani	Aspergillus fumigatus
Контроль	0%	0%	0%	0%
					Изомасляная кислота + Propanoic Acid	-3%	20%	86%	0%
Изомасляная кислота	67%	27%	86%	90%
					Пропановая кислота	83%	53%	100%	80%
Этилизобутират	67%	67%	100%	80%
					Изопропилизобутират	33%	20%	43%	0%
Изобутилизобутират	50%	47%	86%	80%
					Бутилизобутират	0%	40%	97%	0%
Изобутилбутират	33%	47%	100%	0%
					Изоамилбутират	100%	90%	100%	90%
Изоамилизобутират	67%	67%	100%	80%
					Изобутилпропионат	67%	40%	100%	80%
Изобутилацетат	67%	20%	57%	0%
					Пропилизобутират	50%	33%	97%	50%
Изобутилизовалерат	67%	20%	94%	0%

	Candida albicans	Escherichia coli	Bacillus subtilis	Saccharomyces cerevicae
Контроль	Наблюдали рост	Наблюдали рост	Наблюдали рост	Наблюдали рост
					Изомасляная кислота + пропановая кислота	Наблюдали рост	Ингибирование роста	Ингибирование роста	Ингибирование роста
Изомасляная кислота	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
					Пропановая кислота	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
Этилизобутират	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
					Изопропилизобутират	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
Изобутилизобутират	Наблюдали рост	Ингибирование роста	Ингибирование роста	Наблюдали рост
					Бутилизобутират	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
Изобутилбутират	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
					Изоамилбутирал	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
Изоамилизобутират	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
					Изобутилпропионат	Наблюдали рост	Видимого роста не наблюдали	Видимого роста не наблюдали	Наблюдали рост
Изобутилацетат	Наблюдали рост	Ингибирование роста	Ингибирование роста	Наблюдали рост
					Пропилизобутират	Наблюдали рост	Ингибирование роста	Ингибирование роста	Наблюдали рост
Изобутилизовалерат	Наблюдали рост	Ингибирование роста	Ингибирование роста	Наблюдали рост

ПРИМЕЧАНИЕ: Если было отмечено 100% ингибирование или отсутствие роста, то микроорганизмы были мертвы и не способны к восстановлению.

В таблице 2 приведено описание данных молекулярной генетики (ниже), полученных от новых штаммов Fusarium, которые были испытаны на их способность к разложению экскрементов человека. Каждый из этих изолятов обозначен как заголовок. Подробная информация о получении данных предоставляется в конце таблицы.

Таблица 2.

E 06-05 Fusarium subglutinans

Последовательность (480 оснований):

AACATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCAGCTTGGTGTTGGGACTCGCGAGTCAAATCGCGTTCCCCAAATTGATTGGCGGTCACGTCGAGCTTCCATAGCGTAGTAGTAAAACCCTCGTTACTGGTAATCGTCGCGGCCACGCCGTTAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAA (SEQ ID №: 1)

Соответствия NCBI BLAST

Описание	Максимальное значение	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	E-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК Fusarium verticillioides паспорт штамма UOA/HCPF 14862 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	KC709665.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 штамма 186_Jm Fungal sp. AM2013 (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2, (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	KC506334.1
Ген 18S рРНК штамма H1 Fusarium subglutinans ген 18S рРНК (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JX960431.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sacchari (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JN997445.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. PRE4b (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|KC254039.1\|), ген 18S рРНК Gibberella intermedia колллекции культур UOA/HCPF<GRC>: 12610, (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JN254793.1
Ген 18S рРНК изолята FM2 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JF499676.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК Gibberella moniliformis, штамм MAFF 240085 (частичная и полная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	AB587012.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК, Gibberella moniliformis штамм CBS 576.78 (частичная и полная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	AB587010.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК Fusarium subglutinans, штамм ATCC 38016 (частичная и полная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	AB587008.1
Ген 18S рРНК штамма Gm3 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	HQ718417.1

E 06-08 Fusarium subglutinans

Последовательность (478 оснований):

CATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCAGCTTGGTGTTGGGACTCGCGAGTCAAATCGCGTTCCCCAAATTGATTGGCGGTCACGTCGAGCTTCCATAGCGTAGTAGTAAAACCCTCGTTACTGGTAATCGTCGCGGCCACGCCGTTAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAA (SEQ ID №: 2)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК Fusarium verticillioides паспорт штамма UOA/HCPF 14862 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	KC709665.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 штамма 186_Jm Fungal sp. AM2013 (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность	883	883	100%	0.0	100%	KC506334.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 штамма 165_Gbp Fungal sp. AM2013 (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	KC506316.1
Ген 18S рРНК штамма H1 Fusarium subglutinans (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	JX960431.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sacchari (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	JN997445.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 изолята FM11 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	HQ995666.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. PRE4b, (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|KC254039.1\|), ген 18S рРНК Gibberella intermedia коллекции культур UOA/HCPF<GRC>:12610 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	JN254793.1
Ген 18S рРНК изолята FM2 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	JF499676.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК Gibberella moniliformis штамм: MAFF 240085 (частичная и полная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	AB587012.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК Gibberella moniliformis, штамм: CBS 576.78 (частичная и полная последовательность)	883	883	100%	0.0	100%	AB587010.1

E 4 -5 Fusarium sp.

Последовательность (488 оснований):

CTTAATGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCGCCCCGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCAAACTCTAATGTTTCTTATTGTAACTTCTGAGTAAAACAAACAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCTGGTATTCCGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGTTTGGTGTTGGGGATCGGCTCTGCCTTCTGGCGGTGCCGCCCCCGAAATACATTGGCGGTCTCGCTGCAGCCTCCATTGCGTAGTAGCTAACACCTCGCAACTGGAACGCGGCGCGGCCATGCCGTAAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAG (SEQ ID №: 3)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК некультивируемого клона R1_12 Fusarium (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	KC753424.1
Геномная ДНК, содержащая ген 18S рРНК, ITS1, ген 5.8S рРНК, ITS2 и ген 28S рРНК некультивируемого клона RRA10 Fusarium,	900	900	99%	0.0	100%	HE977525.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 изолята XSCZ07 Fusarium tricinctum (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	JQ676180.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 некультивируемого клона Hyp12 гриба (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	JQ618507.1
Ген 18S, внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 2, и участок гена 28S рРНК рРНК изолята UASWS0796 Fusarium tricinctum	900	900	99%	0.0	100%	JN662408.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность) Fusarium sp. NRRL 52933	900	900	99%	0.0	100%	JF740937.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность) Fusarium sp. NRRL 52714; и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	JF740911.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность) Fusarium sp. NRRL 25129; и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JF740916.1)\|, внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sp. NRRL 52726, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JF740917.1)\|, внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sp. NRRL 52727, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JF740918.1\|) внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sp. NRRL 52730, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	JF740895.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 Fusarium sp. NRRL 25128 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	JF740894.1
Ген 18S рРНК (частичная последовательность) изолята 3214 Gibberella avenacea; внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	900	900	99%	0.0	100%	FJ224099.1

PC-2-24 (Контроль) Fusarium culmorum

Последовательность (477 оснований):

CATACCTTATGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCGCCCCGTAAAAAGGGACGGCCCGCCGCAGGAACCCTAAACTCTGTTTTTAGTGGAACTTCTGAGTATAAAAAACAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCAGCTTGGTGTTGGGAGCTGCAGTCCTGCTGCACTCCCCAAATACATTGGCGGTCACGTCGAGCTTCCATAGCGTAGTAATTTACATATCGTTACTGGTAATCGTCGCGGCCACGCCGTTAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAG (SEQ ID №: 4)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 Fusarium sp. OTU930 (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	881	990	100%	0.0	100%	GU934527.1
Ген 18S рРНК Fusarium culmorum изолята 149 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	880	880	99%	0.0	100%	KC989094.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК (частичная и полная последовательность) штамма MAFF 101144 Fusarium cerealis	880	880	99%	0.0	100%	AB820718.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК Fusarium culmorum штамм MAFF 241212 >dbj\|AB820717.1\| (частичная и полная последовательность), гены, содержащие 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК (частичная и полная последовательность) штамма MAFF 241212 Fusarium cerealis	880	880	99%	0.0	100%	AB586990.1
Ген 18S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 2, и область гена 28S рРНК штамма FC3 Fusarium cerealis	880	880	99%	0.0	100%	JF303876.1
Ген 18S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 2, и область гена 28S рРНК штамма FC2 Fusarium cerealis	880	880	99%	0.0	100%	JF303871.1
Ген 18S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 2, и область гена 28S рРНК штамма FC1 Fusarium cerealis	880	880	99%	0.0	100%	JF303867.1
Ген 18S рРНК штамма G5 Fusarium culmorum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	880	880	99%	0.0	100%	GU566271.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 некультивируемого клона B2_i_ITS1F Hypocreales (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК (полная последовательность); и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (частичная последовательность)	880	880	99%	0.0	100%	EU754930.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1 некультивируемого клона B3_1_c_ITS1F Hypocreales (частичная последовательность); ген 5.8S рРНК (полная последовательность); и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (частичная последовательность)	880	880	99%	0.0	100%	EU754928.1

E 30 -14 Fusarium avenaceum

Последовательность (485 оснований):

CAGAAGTTGGGGTTTTACGGCATGGCCGCGCCGCGTTCCAGTTGCGAGGTGTTAGCTACTACGCAATGGAGGCTGCAGCGAGACCGCCAATGTATTTCGGGGGCGGCACCGCCAGAAGGCAGAGCCGATCCCCAACACCAAACCCGGGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCGGAATACCAGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTTATTTGTTTGTTTTACTCAGAAGTTACAATAAGAAACATTAGAGTTTGGGTCCTCTGGCGGGCCGTCCCGTTTTACGGGGCGCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACATTAAGGTATGTTCACAGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCA (SEQ ID №: 5)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	ЕЕ-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JX402187.1\|)	896	896	100%	0.0	100%	JX402184.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	00.0	100%	JX402183.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	JX402180.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	JX402179.1
Ген 18S рРНК штамма wxm38 Fusarium tricinctum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	HM037940.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК (частичная и полная последовательность) изолята TS08-58-2 Fusarium tricinctum	896	896	100%	0.0	100%	AB470855.1
Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК изолята TS08-86-1 Fusarium tricinctum (частичная и полная последовательность >dbj\|AB470818.1 \|), Гены 18S рРНК, ITS1, 5.8S рРНК, ITS2, 28S рРНК изолята TS08-70-1 Fusarium tricinctum (частичная и полная последовательность >gb\|GU586834.1\|), ген 18S рРНК изолята Ppf30 Fusarium tricinctum; внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	AB470859.1
Ген 18S рРНК изолята FA37 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	FJ602983.1
ген 18S рРНК изолята FA18 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ602975.1\|), ген 18S рРНК изолята FA29 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ603000.1\|), ген 18S рРНК изолята FA54 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	FJ602964.1
ген 18S рРНК изолята FA17 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ602968.1\|), ген 18S рРНК изолят FA22 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ602973.1\|), ген 18S рРНК изолята FA27 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ602981.1\|), ген 18S рРНК изолята FA35 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|FJ602999.1\|), ген 18S рРНК изолята FA53 Gibberella avenacea (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	896	896	100%	0.0	100%	FJ602963.1

E 06-7 Fusarium subglutinans

Последовательность (469оснований):

CAGAAGTTGGGGTTTAACGGCGTGGCCGCGACGATTACCAGTAACGAGGGTTTTACTACTACGCTATGGAAGCTCGACGTGACCGCCAATCAATTTGGGGAACGCGATTTGACTCGCGAGTCCCAACACCAAGCTGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTTATTTATGGTTTTACTCAGAAGTTACATATAGAAACAGAGTTTAGGGGTCCTCTGGCGGGCCGTCCCGTTTTACCGGGAGCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACAATTGGTATGTTCACAGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGC (SEQ ID №: 6)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием, %	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК Fusarium verticillioides паспорт штамма UOA/HCPF 14862 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	KC709665.1
Ген 18S рРНК штамма AAFC-Fcir-012 Fusarium subglutinans (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	KC464632.1
Геномная ДНК штамма DBT-112 Gibberella moniliformis, содержащая ген 18S рРНК, ITS1, ген 5.8S рРНК, ITS2 и ген 28S рРНК,	867	1017	100%	0.0	100%	HF570008.1
Ген 18S рРНК изолята SIDV20110221051 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	KC143121.1
Внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 подобный гену (частичная последовательность) Gibberella intermedia паспорт штамма LFG4-3BBRS; митохондриальный	867	867	100%	0.0	100%	JQ272470.1
Ген 18S рРНК штамма CB1 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	JX511973.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAG40 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	JF773630.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAG38 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	JF773629.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAG34 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	JF773628.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAG32 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	867	867	100%	0.0	100%	JF773627.1

E-30 -7 Fusarium avenaceum

Последовательность (480 оснований):

GAAGTTGGGGTTTTACGGCATGGCCGCGCCGCGTTCCAGTTGCGAGGTGTTAGCTACTACGCAATGGAGGCTGCAGCGAGACCGCCAATGTATTTCGGGGGCGGCACCGCCAGAAGGCAGAGCCGATCCCCAACACCAAACCCGGGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCGGAATACCAGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTTATTTGTTTGTTTTACTCAGAAGTTACAATAAGAAACATTAGAGTTTGGGTCCTCTGGCGGGCCGTCCCGTTTTACGGGGCGCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACATTAAGGTATGTTCACAGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCC (SEQ ID №: 7)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием,%	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК изолята 143 Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	KC989099.1
Ген 18S рРНК некультивируемого клона R1_12 Fusarium (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	KC753424.1
Ген рРНК малой субъединицы рибосомы Fusarium avenaceum штамм Fk15 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген рРНК большой субъединицы рибосомы РНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	KC464345.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JX402187.1\|), ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JX402188.1\|), ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JX402189.1\|), ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|JX402190.1)\| ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JX402184.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JX402183.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JX402180.1
Ген 18S рРНК Fusarium avenaceum (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JX402179.1
Геномная ДНК некультивируемого клона RRF01 Fusarium, содержит ген 18S рРНК, ITS1, ген 5.8S рРНК, ITS2 и ген 28S рРНК	887	887	100%	0.0	100%	HE977545.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAM47 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JF773662.1
Ген 18S рРНК Fusarium sp. CHTAM2 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	887	887	100%	0.0	100%	JF773634.1

E 06-01 Fusarium subglutinans

Последовательность (468 оснований):

GAAGTTGGGGTTTAACGGCGTGGCCGCGACGATTACCAGTAACGAGGGTTTTACTACTACGCTATGGAAGCTCGACGTGACCGCCAATCAATTTGGGGAACGCGATTTGACTCGCGAGTCCCAACACCAAGCTGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTTATTTATGGTTTTACTCAGAAGTTACATATAGAAACAGAGTTTAGGGGTCCTCTGGCGGGCCGTCCCGTTTTACCGGGAGCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACAATTGGTATGTTCACAGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCA (SEQ ID №: 8)

Соответствия NCBI BLAST:

Описание	Наибольший вес участка выравнивания	Общий вес выравнивания	Покрытие выравниванием, %	Е-уровень	Максимальный процент совпадения	Идентификационный код последовательностей
Ген 18S рРНК Fusarium verticillioides паспорт штамма UOA/HCPF 14862 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	KC709665.1
Геномная ДНК штамма DBT-112 Gibberella moniliformis содержит ген 18S рРНК, ITS1, ген 5.8S рРНК, ITS2 и ген 28S рРНК,	865	1016	100%	0.0	100%	HF570008.1
Ген 18S рРНК изолята SIDV20110221051 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	KC143121.1
Ген 18S рРНК штамма CB1 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	JX511973.1
Ген 18S рРНК изолята FM13 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	HQ995667.1
Ген 18S рРНК изолята FM2 Gibberella moniliformis (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	JF499676.1
Fusarium sp. Ljf001 ген 18S рРНК, частичная последовательность; внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2, полная последовательность; и ген 28S рРНК, частичная последовательность	865	865	100%	0.0	100%	HQ025928.1
Ген 18S рРНК изолята FS-74(3) Gibberella sp. FLS-2010 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|HQ023214.1\|), ген 18S рРНК изолята FS-78 (3) Gibberella sp. FLS-2010 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность >gb\|HQ023215.1\|) , ген 18S рРНК изолята FS-55(3), Aspergillus sp. FLS-2010 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	HQ023213.1
Ген 18S рРНК изолята FS-48.5(1) Gibberella sp. FLS-2010 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	HQ023211.1
Ген 18S рРНК изолят FS-82(3) Gibberella sp. FLS-2010 (частичная последовательность); внутренний транскрибируемый спейсер 1, ген 5.8S рРНК, и внутренний транскрибируемый спейсер 2 (полная последовательность); и ген 28S рРНК (частичная последовательность)	865	865	100%	0.0	100%	HQ023203.1

Филогенетический анализ основанный на ITS

Филогенетический анализ этих организмов осуществляли путем изучения ITS последовательностей генов 5.8 S рРНК. Грибы культивировали на КДА в течение 7 дней и ДНК-матрицы подготовили с использованием Prepman Ultra Sample Preparation Reagent (Applied Biosystems, США) согласно рекомендациям производителя. ITS области гриба были амплифицированы универсальными ITS праймерами ITS1 (5' TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3'; SEQ ID №: 9) и ITS4 (5'TCCTCCGCTTATTGATATGC 3'; SEQ ID №: 10) с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР). Условия ПЦР были следующими: начальная денатурация - при 94°C в течение 3 мин, затем 30 циклов при 94°C в течение 15 сек., 50°C в течение 30 сек., 72°C в течение 45 сек., и финальная элонгация при 72°C в течение 5 мин. В 50 мкл реакционной смеси, содержащейся 1х ПЦР-буфер, 200 мкм каждого дНТФ, 1,5 ммоль MgCl₂, 10 пмоль каждого праймера, 1-5 нг ДНК и 2,5 ед Taq-полимеразы. Амплифицированный продукт (5 мкл) визуализировали в 1% (масса/объем) агарозном геле для подтверждения наличия одной амплифицированной полосы. Амплифицированные продукты были очищены в колонках Amicon Ultra (Millipore, США) и использовались по 20-40 нг в 10 мкл секвенирующей реакции с Big Dye Terminator sequencing kit (v. 3.1) с 2 пмоль прямого или обратного праймера в реакции цикла секвенирования. Двадцать циклов 96°C в течение 10 сек, 50°C в течение 5 С и 60°С в течение 4 мин были выполнены и продукты элонгации были очищены путем осаждения этанолом, растворяли в 10 мкл высокоочищенногой деионизированного формамида, инкубировали при 95°C в течение 1 мин и загружали на I Prism 377 Genetic Analyzer (Perkin-Elmer, США) для секвенирования. Все реагенты для секвенирования были из Applied Biosystems, США. Амплифицированные продукты подвергали секвенированию и выравнивали с последовательностями в базе данных GenBank с помощью программы BLASTN (Altschul и соавт., 1997). Секвенирование проводили в Калифорнийском университете, Беркли.

Как видно из таблицы 3 рост различных фузариев на экскрементах человека приводит к уменьшению сухой массы на 7 неделю эксперимента. Экспериментальная установка содержала 0,5 г бентонита с системой 2 на чашке Петри со средой, содержащей около 100 мг сырой массы экскрементов человека и небольшой агаровый блок с тестовым Fusarium. Инкубационный период составлял 7 недель при 22°С. Остатки человеческих экскрементов были физически удалены и высушены в течение 4 часов при 80°С и затем взвешены.

Таблица 3.

Наименование изолятов Fusarium	Сухая масса человеческих фекалий после 7 недель, мг.
Контроль- не фузарий	43
EC-4-5	14
E06-7	23
E 06-7	25
P2-24 Fusarium culmorum контроль	24
E30-2	18
E 30 -7	27
E 06-1	16
E 30 -14	15
E06-8	14

Пример 2

Разработка смеси С-3 и С-4

Для определения биологической активности различных тестируемых смесей против панели тестовых микроорганизмов были проведены тесты, как описано аналогично для систем 1 и 2 выше (фиг. 9). Небольшой блок с каждым микроорганизмом помещали по периферии чашки Петри с картофельно-декстрозным агаром (КДА). В центральную лунку помещали исследуемый раствор в пластиковом подстаканнике. Контрольная чашка Петри (А) также была установлена. После 30 ч роста тест-организмов по сравнению с контролем рассчитывали % ингибирования. Чашка Петри (Б), содержала исследуемую смесь. Через 30 ч после того как была установлена чашка Петри были выполнены измерения.

Следует отметить, что смеси систем 1 и 2, описанные в данном документе, содержат около 3,5 частей пропановой кислоты вместе с 3,5 частями изомасляной кислоты и, наконец, две части сложного эфира либо изоамилбутирата (система 1) или изоамилизобутирата (система 2). Понятно, что в то время как эти смеси являются эффективными в большом количестве практических применений могут быть и другие смеси, которые еще более эффективны в большом количестве практических применений. С этой целью был проведен поиск с применением стандартной пропановой кислоты в качестве отправной точки в тоже время исключая изомасляную кислоту (из-за ее неприятного запаха), и теперь включая сложные эфиры с большой молекулярной массой в качестве сложного эфира как компонента. Совершенно неожиданно и непредвиденно, было обнаружено, что применение семи частей пропановой кислоты и двух частей изоамилового гексаноата образовывало летучую смесь с биологической активностью, превышающей B-23 (смотри ниже), и С-1, как показано в таблице 4. Эта новая смесь называется как система 3, в то время как композиция, содержащая пропановую кислоту (7) и формиат (2) называется как система 4. Следует отметить, что система 4 менее активна против большинства испытуемых микроорганизмов чем системы 3, но система 4 полностью уничтожает кишечную палочку, тем самым позволяя расти Fusarium. В этих целях система 4 представляет собой эффективную смесь, которую можно применять в обработке экскрементов человека совместно с Fusarium spp.

Таблица 4. Влияние различных сложных эфиров и пропановой кислоты на рост тест-организмов оценивали после 30 ч культивирования при комнатной температуре. Влияние отражено в виде процента ингибирования роста при непосредственном сравнении с ростом неинокулированного контроля. Измерения (среднее значение по двум значениям) проводили по мере роста гиф от края инокулированного блока.

	Cercospora beticola	Phytophthora cinnamomi	Verticillium dahliae	Sclerotinia sclerotiorum	Pythium ultimum
Раствор C-1	100	72	92	0	100
						B-23**	92	89	42	66	100
Изоамиловый гексаноат (2 мкл)	83	13	0	66	28
Пропановая кислота	66	38	83	0	100
						Пропановая кислота с изоамилформиатом (7:2)= С-4	100	72	100	0	100
Пропановая кислота с изобулформиатом (7:2)	100	79	98	0	100
						Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (7:2) = С-3*	100	100	100	100	100
Пропановая кислота с изоамилформиатом и цинеолом (7:1:1)	100	92	100	94	100
						Пропановая кислота с равной смесью формиатов и валенсена (7:2:0.5)	95	89	100	50	100
												Пропановая кислота с равной смесью формиатов (7:2)	98	92	100	64	100
Пропановая кислота с гексил формиатом (7:2:)	100	88	87	60	100

	Fusarium solani	Trichoderma viridae	Rhizoctonia solani	Aspergillus flavus
Раствор C-1	72	56	100	86
B-23**	32	32	81	29
Изоамиловый гексаноат (2 мкл)	83	13	0	66
Пропановая кислота	17	45	81	52
Пропановая кислота с изоамилформиатом (7:2) = С-4	53	25	85	0
Пропановая кислота с изобутилформиатом (7:2)	0	32	47	29
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (7:2)= С-3*	95	58	100	83
Пропановая кислота с изоамилформиатом и цинеолом (7:1:1)	69	35	74	0
Пропановая кислота с равной смесью формиатов и валенсена (7:2:0.5)	74	35	77	43
Пропановая кислота с равной смесью формиатов (7:2)	58	30	77	29
Пропановая кислота с гексил формиатом (7:2:)	86	49	93	90

Активность против дрожжей и бактерий

Да = Рост

Умеренная = Некоторый рост

Нет = Отсутствие роста

	Candida albicans	Escherichia coli	Bacillus subtilus	Saccharomyces cereviceae
Раствор C-1	Некоторый рост	Нет	Нет	Да
B-23**	Да	Нет	Нет	Некоторый рост
Изоамиловый гексаноат (2 мкл)	Да	Да	Да	Да
Пропановая кислота	Умеренная	Нет	Нет	Да
Пропановая кислота с изоамилформиатом (7:2) = С-4	Умеренная	Нет	Нет	Да
Пропановая кислота с изобутилформиатом (7:2)	Да	Нет	Нет	Да
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (7:2)= С-3*	Едва заметный рост	Нет	Нет	Да
Пропановая кислота с изоамилформиатом и цинеолом (7:1:1)	Нет	Нет	Нет	Да
Пропановая кислота с равной смесью формиатов и валенсена (7:2:0.5)	Нет	Умеренная	Нет	Умеренная
Пропановая кислота с равной смесью формиатов (7:2)	Да	Нет	Нет	Умеренная
Пропановая кислота с гексил формиатом (7:2:)	Да	Нет	Нет	Умеренная

* Тестирование С-3 проводили в течение 30 ч при комнатной температуре, а затем измеряли и фотографировали. Измерения проводили от края инокулированного блока до края грибной колонии.. Два проведенных измерения затем усредняли. Тесты проводили при комнатной температуре. Результаты показывают, что С-3 был самой биологически активной смесью среди тестируемых растворов. Также обратите внимание, С-3 - подавлял Erwinia carotovora на 80 - 90% и подавлял Lactobacillus sp. на, около 50%.

** Тестируемая композиция B-23 представляла собой: 1.39 частей ацетальдегида; 2.83 частей 2-бутанона; 30.56 частей пропановой кислоты, 2-метиловый и метиловый сложный эфир, 2.29 частей уксусной кислоты, 2-метилпропиловый сложный эфир; 1.09 частей пропановой кислоты, 2-метиловый-, 2-метилпропиловый сложный эфир; 1.78 частей 1-пропанол, 2-метил-; 1.51 частей 2-бутеналь, 2-метил-, (E)-; 4.79 частей 1-бутанол, 3-метилацетат; 4.78 частей пропаной кислоты 2-метил-, 2-метилбутил сложный эфир; 5.38 частей 1-бутанол, 3-метил-; 351.18 частей пропановой кислоты, 2-метил-; 1.31 частей уксусной кислоты, 2-фенилэтил эфир.

Следует отметить, что смесь С-3 дала 100% ингибирование многих испытуемых микроорганизмов (таблица 4). Эффект был выше чем при применении изоамилового гексаноата или пропановой кислотой по отдельности. Таким образом, в некоторых случаях смесь оказывала сильный синергетический эффект т.е. 66% ингибирования Sclerotina sclerotiorum гексаноатом, 0% - пропановой кислотой и 100% - при объединении обоих компонентов. Некоторые другие организмы реагирует таким же образом как Rhizoctonia solani. Кроме того оказалось, что С-3 был более активным, чем С-1, а также B-23 и, конечно, изоамиловый гексаноат или пропановая кислота по отдельности (таблица 4). Другие комбинации пропановой кислоты с другими сложными эфирами или комбинации сложных эфиров и терпеноидов, таких как цинеол или валенсен, были не столь эффективны (таблица 4). Композиция С-4, хотя и не так активна, как С-3, и не так сильно влияет на Fusarium, но зато подавляет других микроорганизмов и, таким образом, может лучше подходит в качестве применяемого агента в обоработке человеческих экскрементов в сочетании с Fusarium. В тестах С-3 убивает обоих бактериальных тест-организмов (таблица 4). С-3 также действует Erwinia и Lactobacillus sp. (Таблица 4).

Определение соответствующих соотношений ингредиентов С-3

Смеси пропановой кислоты в изоамилового гексаноата варьировали, а затем испытывали в соответствии с процедурами, изложенными выше. Оказывается, в смеси из двух ингредиентов соотношение 7: 2 наиболее эффективно (Таблица 5). Все другие сочетания показали более низкие показатели ингибирования (таблица 5). Добавление терпеноидов, таких как валенсен, не повышали биологическую активность. Таким образом, соотношение двух компонентов 7:2 объем/объем является наиболее предпочтительным для практического применения.

Таблица 5. Влияние различных соотношений пропановой кислоты и изоамилового гексаноата на панель тест-организмов. Все тесты были проведены как описано в таблице 4.

	Cercospora beticola	Phytophthora cinnamomi	Verticillium dahliae	Sclerotinia sclerotiorum	Pythium ultimum
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (7:2) = С-3	100	100	100	100	100
						Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (5:4)	86	95	100	70	100
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (3:6)	95	95	94	60	100
						Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом и валенсеном (6:2:1)	100	95	94	20	100

	Fusarium solani	Trichoderma viridae	Rhizoctonia solani	Aspergillus flavus
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (7:2)	95	58	100	83
					Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (5:4)	58	59	89	50
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (3:6)	72	62	93	50
					Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом и валенсеном (6:2:1)	72	59	93	50

Да = Рост

Умеренная = Некоторый рост

Нет = Отсутствие роста

	Candida albicans	Escherichia coli	Bacillus subtilus	Saccharomyces cereviceae
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноат (7:2)	Да	Отсутствие роста	Отсутствие роста	Некоторый рост
					Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (5:4)	Да	Едва заметный рост	Отсутствие роста	Некоторый рост
Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом (3:6)	Да	Да	Едва заметный рост	Некоторый рост
					Пропановая кислота с изоамиловым гексаноатом и валенсеном (6:2:1)	Да	Некоторый рост	Нет	Некоторый рост

С. Испытание других сложных эфиров с пропановой кислотой

Как показано в таблице 6 (ниже), альтернативные сложные эфиры были протестированы в смеси с пропановой кислотой в соотношении 7: 2 пропановая кислота: сложный эфир. Эти композиции в дополнение к композициям С-1, С-2, С-3 и С-4, и, соответственно, части композиций в соответствии с настоящим изобретением. Следует также иметь в виду, что настоящее изобретение может включать несколько сложных эфиров или комбинации любых из сложных эфиров, описанных в данном документе повсюду, в сочетании с пропановой кислотой, предпочтительно в соотношении 7: 2 пропановая кислота: сложный эфир.

Таблица 6. Тестирование сложных эфиров
	Cercospora beticola	B. Phytophthora Cinnamomi*	C. Verticillium dahliae	D. Sclerotinia sclerotiorum	E. Pythium ultimum
Исследуемый раствор
Пропановая кислота с изоамилбензоатом (7:2)	96	-	100	80	100
						Пропановая кислота с изоамил фенилацетатом (7:2)	80	-	100	59	100
												Пропановая кислота с изоамил циннаматом	96	-	100	59	100
Пропановая кислота с изоамил октаноатом (7:2)	96	-	100	54	100
						Пропановая кислота с изоамил салицилатом (7:2)	88	-	100	49	100
Пропановая кислота с изоамил лауратом (7:2)	72	-	100	45	100

Организм не доступен

	F. Fusarium solani	G. Trichoderma viridae	H. Rhizoctonia solani	I. Aspergillus flavus
Пропановая кислота с изоамилбензоатом (7:2)	0	77	74	92
					Пропановая кислота с изоамил фенилацетатом (7:2)	0	60	54	92
										Пропановая кислота с изоамил циннаматом	74	66	64	96
Пропановая кислота с изоамил октаноатом (7:2)	66	64	62	96
					Пропановая кислота с изоамиловым салицилатом (7:2)	0	64	43	92
Пропановая кислота с изоамил лауратом (7:2)	0	47	62	20

Да = Рост

Умеренная = Некоторый рост

Нет = Отсутствие роста

	C. albicans	E. coli	Bacillus subtilus	S. cereviceae	Lactobacillus	Erwinia carotovora
Пропановая кислота с изоамил бензоатом (7:2)	Едва заметный рост	Нет	Нет	Едва заметный рост	Некоторый рост	Да
Пропановая кислота с изоамил фенилацетатом (7:2)	Едва заметный рост	Нет	Нет	Некоторый рост	Некоторый рост	Да
Пропановая кислота с изоамил циннаматом	Едва заметный рост	Нет	Нет	Некоторый рост	Едва заметный рост	Да
Пропановая кислота с изоамил октаноатом (7:2)	Едва заметный рост	Нет	Нет	Едва заметный рост	Едва заметный рост	Да
Пропановая кислота с изоамил салицилатом (7:2)	Да	Нет	Нет	Едва заметный рост	Едва заметный рост	Да
Пропановая кислота с изоамил лауратом (7:2)	Да	Нет	Нет	Едва заметный рост	Едва заметный рост	Да
Контроль	Да	Да	Да	Да	Да	Да

Все тесты проводили в соответствии со способами в таблице 4

Пример 3

Тесты по деконтаминации кукурузы

Кукуруза ферментируется в этанол. Ее измельчали, нагревали до бесформенной массы и обрабатывали ферментами перед добавлением дрожжей в конечный препарат. Также добавляли один или более антибиотических препаратов, как правило, для подавления конкурирующих микроорганизмов в противном случае нарушающих процесс брожения. Поскольку такие антибиотики изымаются с продажи, необходимы другие антимикробные препараты. Чтобы определить, эффективность препарата С-3 в отношении контамиинации микроорганизмами кукурузы было проделано следующее:

приблизительно 5 г молотой кукурузы (дробленое зерно) обрабатывали в течение 1 часа с 10 мл 0% (контроль), 0,25%, 0,5% и 1% растворами С-3, изготовленных в соотношении 7: 2 объем / объем, плюс 10 мкл Triton-X-100 (в 10 мл). Обработку проводили в течение 1 ч и продукт сушили на влажной салфетке для удаления избытка жидкости. Около 2 г материала было помещено непосредственно в чашке Петри с КДА и инкубировали в течение 2 дней до фотографирования. В другом случае, дробленые зерна сушили под вытяжкой, а затем высевали на КДА.

Результаты показали что уровни обработки 0,5% и 1,0% С-3 в течение 1 ч полностью удалили бактериальную контаминацию частиц дробленой кукурузы (фиг. 10). Когда частицы кукурузы были высушены и далее сушили и испытывали таким же образом, результаты были практически одинаковыми.

В целом, полученные результаты свидетельствуют о том, что раствор С-3 может применяться для обеззараживания в сельском хозяйстве и продовольственных продуктах и материалах. Это также относится к инструментам, оборудованию, снаряжению и продуктам питания, обрабатываемых для употребления в пищу.

Пример 4

Использование С-4 в обработке человеческих экскрементов с Fusarium subglutinans.

Было проведено тестирование композиций С-3 и С-4 с целью узнать их эффективность в обработке бактерий человеческих экскрементов. Тестирование проводили с использованием 0,5 г бентонита, в пропорциях 1 мл С-1, С-2, С-3 или С-4 или В-23 на 10 г бентонита. Контроль не содержал смесей веществ. Семена ячменя, зараженные Fusarium subglutinans (тот самый, который использовался ранее) размещали на чашках КДА. В середину чашки Петри с полосами чистой культуры E.coli, полученной из человеческих экскрементов. Накрывали крышкой и запечатывали парафильмом, затем инкубировали в течение 3 дней и фотографировали. С-3 и С-4 убивали E. coli, но менее эффективно, чем B-23. В присутствии С-3 Fusarium рос лучше, чем с С-4. Как показано на фиг. 11 E.coli росла в контроле и слабо росла в присутствии B-23. Следует отметить, что С-4 в бентоните привела к полной гибели E.coli, поэтому наблюдали рост Fusarium. Это же можно сказать об обработке С-1 и С-3, но рост Fusarium был ингибирован в большей степени. В-23 в качестве контроля также эффективно убивал кишечную палочку, но не в такой же мере. Результаты показывают, что С-4 представляет собой хороший и обоснованный препарат для обработки человеческих экскрементов, уничтожения кишечных бактерии с сопутствующими контаминантами с использованием Fusarium для разложения человеческих экскрементов.

Пример 5

Обработка С-3 животных экскрементов

С-3 наносили в пропорции 3 мл на фунт (453 г) цеолита. Для проверки ее эффективности в обработке экскрементов животных с контролем бактериального роста были проведены следующие эксперименты. Обработанный цеолит (0,5 г) помещали в центральную лунку чашки Петри с КДА (вырезали). Чашка Петри была полностью покрыта полосами и суспензией бактериальных клеток, полученных из куриных, кошачьих, козьих и лошадиных экскрементов. Чашки Петри закрывали и запечатывали парафильмом, а затем наблюдали и после 3-4 дневной инкубации фотографировали. Результаты во всех случаях показали, что С-3 представляет собой эффективную антимикробную смесь так как влечет за собой образование зон ингибрования на чашках Петри. Данный эффект также был отмечен и в случае с бактериями кошачьих, козьих и лошадиных экскрементов (фиг. 12). Полученные результаты свидетельствуют о том, что цеолит в сочетании с С-3 имеет потенциал для применения в обработке кошачьих туалетов или для обработки курятников или в качестве средства для обработки подстилок животных.

Пример 6

Было проведено дополнительное тестирование эффективности С-3 в обработке кошачьих туалетов и подстилок для животных.

Тестирование сравнительной эффективности обработки наполнителя кошачьего туалета

В 1 фут^-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху были заполнены подстилкой, требующей обработки, и необработанным бентонитом в соотношении указанном в инструкции на упаковке (фигура 13). Для этих испытаний, были протестированы CLOE (применяют из расчета 4 мл на фунт (453 г)) и контрольный необработанный бентонит. В тестируемых контейнерах поддерживали постоянную температуру на протяжении всего эксперимента (например, 70°F (21°С)). В обработанные контейнеры добавили около 50 г кошачьих фекалий и 5 мл урины. В каждом контейнере с интервалом в 24 часа с помощью газоанализатора Z-800 измеряли уровень аммиака. Измерения проводили путем размещения газоанализатора внутри каждой коробки на соответствующие 5-минутные интервалы, что позволяло минимизировать время открытого контейнера. Газоанализатор аммиака выводил средний уровень аммиака в течение пяти минут, а также пиковый уровень аммиака, достигнутый в течение пяти минут. После завершения измерений, однодневные фекалии убирали, и добавляли около 50 г свежих фекалий и 5 мл урины. Контейнеры закрывали. Для определения относительной эффективности средства эти действия совершали ежедневно в течение 1 недели. Один раз с интервалом в один час получали данные по концентрации аммиака по каждому из контейнеров.

После 8 дней средний уровень аммиака, считываемый в течение 5-минутных интервалов каждые 24 часа, показал, что продуцирование аммиака в обработанной CLOE подстилке было значительно ниже, чем в необработанном контроле (см. Фигуры 14А и 14Б).

Пример 7

Микробиологический анализ

Микробиологические исследования были проведены для демонстрации прямой связи процессов образования запаха и микробиологической активности в отходах и отходах окружающей среды. Подавление или контроль микробной активности окажет благотворное влияние на ослабление неприятных запахов. CLOE оказывает непосредственное влияние на эту микробную активность, вместо уменьшения интенсивности запахов, путем их поглощая, как это делают другие средства для обработки. Для демонстрации этого качества, приблизительно 0,5 г CLOE помещали в центральную лунку чашки Петри с картофельно-декстрозным агаром (КДА), покрытой с газоном бактерий, полученных из свежих твердых кошачьих экскрементов. Чашки Петри инкубировали при 23°С в течение 1 недели и фотографировали. Серия фотографий, показанных на рисунках 15А и 15Б, указывают на то, что в контрольном варианте опыта с бентонитом (15А) было огромное количество бактериальных колоний, которые вырастали на чашке Петри, в том числе в тех областях, близких к лунке, содержащих подстилку. В противоположность этому, обработанные CLOE (4 мл С-3 в расчете на фунт (453 г) носителя, 15Б) чашки Петри был практически свободными от бактериальных колоний по всем лункам, но отмечали некоторый рост Penicillium sp., представляет собой неотъемлемую часть вещества-носителя и не способствует образованию запаха. Пожалуйста, обратите внимание на Penicillium sp. в контрольной лунке.

Очевидно, что антимикробная активность препарата CLOE напрямую связана с его эффективностью в качестве обработки наполнителя для кошачьего туалета и его способность снижать уровень аммиака и других запахов, исходящих от животных (в частности от кошачьих) экскрементов, о чем свидетельствует применение многими пользователями. Это также подтверждают способность средства угнетать и убивать микроорганизмы, ассоциированные с отходами, такие как E. coli. Препарат CHLOE абсорбируется веществом-носителем, но также медленно высвобождается в течение долгого времени, и, таким образом, может эффективно действовать на некотором расстоянии от точечного источника несущей частицы бентонита или цеолита.

Пример 8

Тестирование сравнительной эффективности улучшающих добавок для куриных подстилок

1 фут^-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху, заполненные сосновыми стружками и подстилкой рекомендуемо обработанной в пропорции указанной в инструкции на упаковке (фиг. 16). Для этих испытаний были протестированы Barnyard Bedding из расчета 15 мл на фунт (453 г) цеолита и необработанный цеолит (контроль), так как эти продукты представляют собой востребованный на рынке товар. В тестируемых контейнерах поддерживали постоянную температуру на протяжении всего эксперимента (например, 70°F (21°С)). В обработанные контейнеры добавили около 50 г куриного помета и опрыснули около 2 мл воды. В каждом контейнере с интервалом в 24 часа с помощью газоанализатора Z-800 измеряли уровень аммиака. Измерения проводили путем размещения газоанализатора внутри каждой коробки на соответствующие 5-минутные интервалы, что позволяло минимизировать время открытого контейнера. Газоанализатор аммиака выводил средний уровень аммиака в течение пяти минут, а также пиковый уровень аммиака, достигнутый в течение пяти минут. После завершения измерений каждый день добавляли около 50 г свежего помета и 2 мл воды и контейнеры закрывали. Для определения относительной эффективности средства эти действия совершали ежедневно в течение 3 недель. Один раз с интервалом в один час получали данные по концентрации аммиака по каждому из контейнеров.

После 8 дней средний уровень аммиака, считываемый в течение 5-минутных интервалов каждые 24 часа, показал, что продуцирование аммиака было самым высоким в цеолите (контроль) и самым низким в подстилке обработанной Barnyard Bedding (Фигуры 17А и 17Б).

Пример 9

Тестирование сравнительной эффективности улучшающих добавок для подстилок в стойлах крупного рогатого скота

1 фут^-2 пластиковые контейнеры плотно закрытые сверху, заполненные сосновыми стружками и подстилкой рекомендуемо обработанной в пропорции указанной в инструкции на упаковке (фиг. 18). Для этих испытаний были протестированы Barnyard Bedding и необработанный цеолит (контроль). В тестируемых контейнерах поддерживали постоянную температуру на протяжении всего эксперимента (например, 70°F (21°С)). В обработанные контейнеры добавили около 100 г лошадиных фекалий и 10 мл урины. В каждом контейнере с интервалом в 24 часа с помощью газоанализатора Z-800 измеряли уровень аммиака. Измерения проводили путем размещения газоанализатора внутри каждой коробки на соответствующие 5-минутные интервалы, что позволяло минимизировать время открытого контейнера. Газоанализатор аммиака выводил средний уровень аммиака в течение пяти минут, а также пиковый уровень аммиака, достигнутый в течение пяти минут. После завершения измерений, однодневные фекалии и пропитанные мочой сосновые стружки убирали. Добавляли рекомендуемую пропорцию к обработке подстилок с мокрыми пятнами около 100 г свежего навоза и 10 мл урины и каждый контейнер закрывали. Для определения относительной эффективности средства эти действия совершали ежедневно в течение 1 недели. Один раз с интервалом в один час получали данные по концентрации аммиака по каждому из контейнеров.

После 8 дней средний уровень аммиака, считываемый в течение 5-минутных интервалов каждые 24 часа, показал, что продуцирование аммиака было самым высоким в контрольной подстилке и самым низким в подстилке, обработанной Barnyard Bedding (фигуры 19А и 19Б).

Пример 10

Лечение диареи у теленка с применением композиции С-3

Диарея у телят - это острая кишечная инфекция у телят, вызванная в первую очередь вирусными и бактериальными инфекциями теленка. В некоторых случаях понос может возникнуть в свыше 70% телят в стаде, и привести к смерти 50% инфицированных телят. Хотя существует и вирусная этиология таких инцидентов, наиболее распространенная причина представляет собой один из наиболее патогенных штаммов бактерий Escherichia coli, а затем штаммов Cryposporidia и Salmonella.

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) С-3 для E.coli, <0,00125%. Также см Таблицу 5 (выше). Соответственно, раствор приблизительно от 1% С-3 в 50 мл может быть эффективным для лечения теленка, страдающего диареей. Раствор (С-X) был приготовлен для тестирования на телятах с диагностированными классическими симптомами диареи.

Композиция С-Х содержит следующие ингредиенты:

На 100 мл:

1 г глюкозы

1 г сывороточного белка

0.25 г KCl

0,25 г MgSO₄

0,5 г NaCl в

1 мл С-3

Глюкоза и сывороточный белок добавлены, в качестве биологически активной добавки для животных, которых лечат, тогда как другие соли добавлены для повышения электролитного баланса животного. Добавленная композиция С-3 подавляет и убивает патогенные бактерии.

Первый тест был сделан на 5 новорожденных телят голштинской породы, не имеющих диареи, для того чтобы узнать, если в растворе С-Х токсических или приводящих к каким-либо побочным эффектам веществ. Каждому здоровому теленку вводили 50 мл С-Х раствора и через 1 день, и несколько недель позже, никаких побочных эффектов замечено не было, и, в частности, не было признаков химических побочных эффектов или ненормального поведения.

Мероприятия по тестированию раствора С-Х на животных проводили в условиях in vivo, на ранчо Бозман в штате Монтана. Диарея у животных (абердин-ангусская порода) впервые была отмечена в холодную влажную погоду за несколько недель до начала экспериментов. Каждое животное с диареей имело все симптомы связанные с этой болезнью. Дозы для каждого животного были установлены на уровне 50 мл на одно животное на курс лечения.

Пятнадцать телят, которых аутентифицировали как имеющих диарею, лечили 50 мл раствора через ротовую полость с помощью трубки. Тринадцать телят, будучи обработанными 1 дозой, выздоровели за ночь. Двум животным потребовалась вторая доза лекарственного средства и выздоровление наступило в течение ночи после введения второй дозы. На фиг. 20А продемонстрирован один из двух телят, страдающих диареей (бирка 166), которому пришлось получить вторые 50 мл С-Х раствора для лечения (изображения взяты до приема раствора С-Х). Обратите внимание на большие кучи экскрементов в правом нижнем углу и поникшие голову и уши (фиг. 20А). Один день после второй обработки С-Х раствором и теленок стал ходячим и свободным от диареи (фиг. 20Б). Второй день после второй обработки С-Х раствором, теленок сосал свою мать.

Никаких смертей в эксперименте зарегистрировано не было. Владельцы ранчо сообщали, что раствор С-Х значительно превосходит все другие современные способы лечения, которые они применяли. Соответственно, раствор С-Х представляет собой безопасное, быстрое и эффективное средство для лечения диареи.

Пример 11

Лечение диареи в животноводчестве

Разработан состав для лечения диареи, которая содержит композиции С-3 с добавлением сахара, аминокислот, хлорида натрия и калия и ацетата магния. Многих животных, имеющих инфекционную диарею (вызванную патогенным микроорганизмом) излечивали. Обычно инфекционная диарея предполагает стул от желтого до коричневато- зеленоватого цвета. Это очевидно если паразит представляет собой причину диареи, с кровью в фекалиях. Неинфекционная диарея (молочная диарея) предполагает беловатые фекалии. В этом исследовании как минимум двое животных имели молочную диарею и их не вылечить. Кроме того, оказалось, что у одного животного было паразитарная диарея и его тоже не вылечить. В принципе, все остальные животные (имеющие вирусную или бактериальную причину диареи) выздоровели, после проведения обработки С-Х. В около 90% случаев восстановление наступало в течение 12-24 ч с признаками восстановления, происходящими в течение 3-4 час. В некоторых случаях на выздоровление уходило два дня и требовалось повторное введение препарата. Это не похоже на любой другой способ лечения. Материал доставляли перорально через желудочный зонд или шприц. Другие способы лечения с помощью антибиотиков и питательных электролитических растворов позволяют помочь животному, но выздоровление не происходит наверняка, как в большинстве случаев с применением препарата С-3 для лечения.

Образцовые композиции и лечение диареи у телят

В расчете на 90 мл воды:

1 г глюкозы

1 г глицина

0,5 г NaCl

0.25 г KCl

0,25 г мг ацетата магния

1 мл С-3, содержащий 0,7 мл пропановой кислоты и 0,2 мл изоамиловый гексаноата.

Вводить с применением шприца или желудочного зонда 50 мл на животное на курс лечения и если некоторые животные не выздоравливают в течение 24 час, необходимо повторное лечение.

Образцовые композиции и лечение диареи у поросят

В расчете на 90 мл воды:

1 г глюкозы

1 г глицина

0,5 г NaCl

0.25 г KCl

0,25 г ацетата магния

0,1 г КН₂РО₄

2 мл С-3, содержащий 0,7 мл пропановой кислоты и 0,2 мл изоамилового гексаноата.

Вводить с применением шприца 1-2 мл на поросенка.

Полевые исследования лечения диареи С-Х раствором

Случай 1 - Ранчо 1

16 мая 2014 - один теленок заболел диареей 6 мая, лечили с применением баномина и двух инъекций LA-2009 (антиинфекционное лекарственное средство). Также ежедневно вводили 1 пинту раствора электролитов; однако животное не выздоравливало и страдало от 9 до 10 дней хронической диареей. Больному диареей теленку утром 17 мая перорально с использованием шприца ввели 50 мл раствора С-Х. Было отмечено, что состояние теленка кардинально улучшилось к вечеру и утром 18 мая отметили полное выздоровление. По состоянию на 22 мая 2014 года признаки диареи у теленка замечены не были. Эти результаты показывают, что практически все способы лечения диареи не удались и у животного не наступал этап выздоровления, до тех пор пока не применили препарат С-3.

Случай 2 - Ранчо 2

Диарея у телят и летальные исходы наводнили ранчо 2 в конце зимы 2014 года. Раствор С-Х был предоставлен скотоводам, и они применили раствор для лечения телят, используя для его введения желудочные трубки. Таким образом лечили троих телят. Телята выздоравливали от диареи в течение 24 часов после обработки, и не было никаких других известных препаратов, назначаемых одновременно с применением С-Х, которые приводили бы к выздоровлению. Больных животных отправляли в хлев и фотографировали в процессе их восстановления. Одно из таких животных представлено на фиг. 21.

Случай 3 - Ранчо 3

Ранчо 3 испытывали особенно холодную зиму в течение сезона отела, в том числе сильные ветры и большое количества осадков в виде снега. В таких условиях диарея у телят обычное явление.

Лечение диареи у телят С-X раствором проводили на ранчо с 2 апреля по 24 апреля 2014 года. Одиннадцать животных лечили дозами 50 мл используя метод зондирования желудка. Результаты были успешными: одной дозой вылечили девять голов; в то время как одному животному проводили повторную процедуру и еще одно животное нуждалось в трех раздельных процедурах. В некоторых случаях применение раствора С-Х было не единственным способом лечения. Некоторые животных у которых также развились симптомы пневмонии нуждались в Байтрил, сульфамидных таблетках, или Нуфлор. Все животные, которых лечили раствором С-Х, выздоравливали, а большинство (9) выздоравливало в течение 24 часов после процедуры.

Случай 4 - Коровник 1

15 мая 2014 года - Коровник1 представляет собой производственный процесс выращивания голштинской молочной коровы. Этот коровник с 300 животными чье здоровье и повседневные нужды должны быть удовлетворены. Коровник продемонстрировал, что причиной диареи является ротавирус, на который указал ветеринарный центр, расположенный рядом с их коровником. Путем прерольного введения шприцем раствора С-Х проводили лечение 7 молодых животных, имеющих диарею. Все животные, которых лечили раствором С-Х, выздоровели. Все животные кроме одного выздоровели в течение 24 часов, и один после повторного лечения С-Х. раствором.

По данным коровника 1, в декабре 2013 года, 30 телят погибли от диареи, хотя этих телят лечили электролитическими растворами, а также антибиотиками. Лечение телят обычно занимает 5-7 дней с проведением повторных процедур, по сравнению с 1 днем и 1-2 дозами лечения С-Х. В коровнике 1 отдали предпочтение пероральному введению, лекарственного средства и доказали его эффективность.

Оператор Коровника 1 отметил, что «нужно больше, так как вещество действительно работает». Она имела в виду раствор С-Х и их успех с этими препаратом. Коровник продолжит лечение диареи у телят технологией С-Х, а также предоставление информации о животных, которые впоследствии протестируют с применением С-Х препарата.

Случай 5 - Ранчо 4

Также С-Х технология была испытана свиноводческом производстве хуттеритов в течение недели после 14 апреля 2014 года, где у сотни поросят обнаружили диарею. Наличие вируса эпизоотической диареи свиней (ЭДС) в популяции свиней был подтверждено лабораторией Ньюпорта, Уортингтон, Миннесота. По словам производителя, более 850 поросят погибли за предыдущие три недели, что составляет почти 100 процентную смертность среди инфицированных поросят.

Производитель рассказал о результатах его испытаний с препаратом для поросят по технологии С-Х в лечении диареи у свиней по состоянию на 19 апреля 2014 года. Производитель отметил, что около 12-го апреля, 2014 8-дневным поросятам с диареей вводили перорально шприцем 6 мл препарата С-Х. После 5 часов состояние поросят улучшилось, и на следующий день не было никаких признаков диареи. Более того, по состоянию на 15 апреля 10 поросят, которые все 14 дней от рождения страдали диареей с классическими признаками темно-желтого жидкого стула. Этим поросятам вводили перорально шприцем 4 мл С-Х раствора и в течение 24 часов каждое животное становилось полностью «сухим». Производитель также указал, что из исходя из предыдущего опыта с этой болезнью, он ожидал много летальных исходов.

В дополнение, около 19 апреля десяти 3-х дневным поросятам у которых обнаружили признаки диареи ввели шприцем 2 мл С-Х раствора. После нескольких недель все эти поросята остались живы. 30 трехдневным поросятам с признаками диареи было назначено другое лечение. Этим 30 поросята ввели 3 мл С-Х раствора и все поросята остались живы. Основываясь на предыдущем опыте производителя, если не проводят лечение, то ожидается летальный исход практически для всех животных. Производитель также вводил Тилан 40-50 каждому исследуемому 3-х суточному поросенку, чье лечение проводили между 15-ым и 19-ым апрелем. Тилан представляет собой антибиотик, используемый для лечения пневмонии. Производитель полагал, что Тилан-40 в паре с обработкой С-Х отвечает за выживаемость молодняка; однако, по мнению специалистов в этой области техники, антибиотики вообще не эффективны против вирусных и бактериальных кишечных инфекций. Не желая быть связанным какой-либо конкретной теорией, в данном случае, Тилан-40 скорее всего, не оказывал никакого влияния на выживаемость поросят.

Благодаря раствору С-Х для лечения поросят, производитель не потерял животных от диареи. Кроме того, по состоянию на 27 мая 2014, пробы от поросят, которые были отправлены в лабораторию Норуолка после лечения С-Х, подтвердили отсутствие ЭДС. Эта находка указывает на то, что раствор С-Х был успешен в лечении диареи у свиней поселения Харловтаун. Кроме того, исчезновение вируса ЭДС из этого района может быть связано с лечением С-X, так как все поросята с диареей, которых лечили с применением этой технологии, выздоровели.

Случай 6 - Ранчо 5

5 ранчо неподалеку от канадской границы применял С-Х для лечения диареи в их скотоводческом хозяйстве. Температура во время сезона отела были особенно низкими в течение прошлой зимы с сильными ветрами и снегопадами. Раствор С-Х был предоставлен в начале апреля и 6 апреля 2014 года было первой датой его применения. Двадцать одно животное обрабатывали только раствором С-Х при наличии диареи и животных лечили введением 50 мл С-Х раствора с помощью желудочной трубки. После 24 часов, 18 телят, которые были обработаны раствором С-Х выздоровели; однако, 3 животным потребовалась повторное введение дозы. Эти животные вскоре восстановились после курса лечения. Из 21 животного, которых лечили, 8 имели выраженные симптомы пневмонии и им вводили Нуфлор. Выздоровление животных, получавших С-Х, не связано с лечением пневмонии. Последний день лечения был 18 апреля 2014 года. В целом, приблизительно 85 процентов животных, которых лечили с применением С-Х технологии, выздоровели с одной дозы раствора. Полученные результаты показывают, что технология С-Х требует меньше времени и более эффективна, чем традиционные формы лечения диареи животных.

Случай 7 - Ранчо 6

Ранчо 6 представляет собой коровник, который применял С-Х технологии для лечения диареи в середине апреля 2014 года. На ферме около 100 голов молочного скота голштинской породы с различными другими животными, в том числе мясным скотом. Заболеваемость диареей на ранчо особенно высока и большинство животных приобретают диарею вскоре после рождения. Коровнику предоставили препарат С-Х и назначали телятам мясных пород и телятам голштинской породы в дозах 50 мл вводимых шприцем перорально.

Первоначально лечение препаратом С-Х проводили 8 телятам в дозах 50 мл через шприц, у 7 из которых была проявлена типично кремово-желтая диарея, и 1 теленок (номер 80) с белой пастообразной диареей, а после двух дней водянистой диареей. У этого теленка была характерная молочная диарея. Этого конкретного теленка также лечили С-Х, но после его симптомы развились, и он умер через 4 дня. Было подозрение исходя из характеристик поноса, что у этого конкретного теленка диарея была вызвана питанием, в этом случае технология С-Х не эффективна. Большинство животных, которые были обработаны раствором С-Х, восстанавливались и полностью выздоравливали в течение 24 часов; однако, у одного теленка гольштинской породы полное выздоровление заняло 48 часов. Кроме того, один теленок мясной породы (номер 34 в качестве контроля) на ранчо у которого отмечали признаки диареи и не лечили С-Х раствором вместе с другими животными, умер в течение двух недель. Фигура 23 представляет собой серию изображений, показывающих теленка, обрабатываемого С-Х до и после лечения.

Случай 8 - Ранчо 7

Владельцы ранчо 7 были заинтересованы в применении С-Х технологии ранней весной 2014 года для лечения новорожденных телят, у которых обнаруживали диарею. Раствор С-Х был передан хозяевам и в течение нескольких недель телят, у которых отмечали признаки диареи немедленно обрабатывали на пастбище 50 мл С-Х раствора в два приема по 25 мл перорально шприцем. По меньшей мере15 телят лечили С-Х раствором и каждый из них, за исключением одного, выздоровели в 24 часа. Один теленок, не выздоровевший в течение 24 часов, имел белый кал, который может быть отнесен к «молочной диареи». У этого теленка также было воспаление легких, поэтому его лечили Нуфлор в больших дозах. Также были проведены две дополнительные обработки С-Х раствором. Теленок выздоровел от диареи и сейчас в нормальном состоянии. Владелец отметил, что чаще всего телята восстанавливались в течение 3-4 часов после процедуры введения С-Х раствора. Владелец также отметил, что было отмечено прекращение «скрежетания зубами» у телят, и общее улучшение состояния. Владелец отметил, что способом перорального введения шприцем С-Х раствора очень легко вводить дозы телятам с массой до 100 фунтов (45,35 кг). Эти результаты демонстрируют, что введение С-Х может быть выполнено с использованием желудочного зонда или шприца.

Случай 9 - Ранчо 8

Эксперименты на телятах мясных пород с диареей проходили на ранчо 8 в на высоте 4,459 футов, с 4 мая 2013 года по 21 мая 2014 года, преимущественно весной 2013 года и зимой и весной 2014 года. На этом ранчо весной и осенью рождается по 300 телят. Сто сорок два различных теленка лечили раствором С-Х или комбинацией раствора SX и других медикаментов. Начальный препарат С-Х использовали до конца января 2014 г, после чего применяли усовершенствованный препарат С-Х технологии для лечения диареи.

Температура варьировалась от -20°F до 50°F (от -6°С до 10°С) в течение месяцев февраля и марта. Значительные снегопады и ветры наблюдали в этот период времени и регистрировали кардинальные перепады температур.

У большого количества телят наблюдали клинические признаки диареи (лопоухость, угрюмые глаза и профузная диарея). Этим телятам вводили 50 мл С-Х раствора желудочным зондом и проверяли около шесть часов спустя, определяя, восстановились ли они или необходимо повторное введение препарата. Из 243 телят, которых лечили, 36 вводили либо только раствор, одну или две дозы, или раствор с добавлением витаминной добавки, а остальным назначали стандартные антибиотики наряду с С-Х лечением диареи. Двенадцати телятам назначали вторую или третью дозу раствора С-Х в тот же день. В целом, 243 процедуры включали раствор С-Х, и 29 из которых вводили или 2 или 3 раза. Всего телят, обработанных обеими препаратами, насчитывалось 142. Препараты, которые обычно применяли вместе с С-Х обработкой включали: Эксид (лечит респираторные инфекции), пробиотики, Токсибан (абсорбирует токсины с углем), Окситетрациклин LA (антибиотик для лечения конъюнктивита, копытной гнили и других инфекций), поливитамины, Инфорс 3 (вакцина для профилактики респираторных заболеваний), Draxxin (антибиотик для лечения конъюнктивита, копытной гнили и других инфекций), а также сульфамидные таблетки (сульфаниламиды для антибактериальной обработки).

Владельцы ранчо 8 было опрошены по 3 марта 2014 г. об их опытах с С-Х по лечению диареи. Диарея впервые зарегистрирована в сезон отела 27 февраля 2014, в наличии было 40 доз по 50 мл каждая. С 27 февраля до 3 марта, 15 телятам с признаками диареи лечили с применением С-Х технологии. 13 из этих 15 телят выздоровели за одну ночь после введения одной дозы, в то время как 2 потребовалась вторая доза и выздоровление наступило в течение ночи, без летальных исходов в любом случае. Половину телят лечили на пастбище, только 6 привезли в сарай. Нормальное лечение диареи включает электролитические растворы, внутривенное введение жидкостей, а также некоторые антибиотики, такие как тетрациклин.

Производители отметили, что некоторых телят лечили от пневмонии и назначали другие лекарства; однако, было также отмечено, что средство С-Х намного превосходит другие препараты и приписывают его применение для скорейшего и полного выздоровления. Было подсчитано, что без С-Х одна треть или более телят с диареей умерли бы. Дополнительные наблюдения лечения С-Х заключаются в том, что она легка в применении и переносима при работе в стаде, что это вариант быстрого лечения, и не требующий применения антибиотиков, если диарея обнаружена достаточно быстро. Фигура 24 представляет собой серию изображений, показывающих теленка до и после лечения С-Х.

Таблица 7 изображает введение С-Х средства на ранчо 3, 5, и 8 без каких-либо дополнительных препаратов, помимо витаминных добавок.

Таблица 7: С-X Лечение без других медикаментов

Ранчо	C-X	Дата	Теленок	Номер обработки
8	C-1	5/4/2013	Y122	1-й
8	C-1	5/4/2013	Y306B	1-й
8	C-1	5/6/2013	Y350a	1-й
8	C-3	2/24/2014	Y3742	1-й
8	C-3*	2/27/2014	Y26262	1-й
8	C-3*	2/27/2014	Y321	1-й
8	C-3*	2/27/2014	Y383	1-й
8	C-3	3/2/2014	R18361	1-й
8	C-3	3/2/2014	Y3730	1-й
8	C-3	3/2/2014	Y387	1-й
8	C-3	3/3/2014	G032	1-й
8	C-3	3/3/2014	Y166461	1-й
8	C-3	3/3/2014	Y402	1-й
8	C-3	3/4/2014	G03	2-й
8	C-3	3/4/2014	G3731	1-й
8	C-3	3/4/2014	R1396	1-й
8	C-3	3/4/2014	Y29092	1-й
8	C-3	3/5/2014	G309	1-й
8	C-3	3/5/2014	Y29902	1-й
8	C-3	3/5/2014	Y3311	1-й
8	С-3	3/5/2014	Y8A20	1-й
8	С-3	3/6/2014	R2451	2-й
8	С-3	3/6/2014	Y163391	1-й
8	С-3	3/9/2014	Y2014	2-й
8	С-3	3/12/2014	R215	1-й
8	С-3	3/15/2014	Y16629	3-й
8	С-3	3/15/2014	Y2014	2-й
8	С-3	3/16/2014	R26861	2-й
8	С-3	3/16/2014	Y2062	2-й
8	С-3	3/16/2014	Y3619	1-й
8	С-3	3/17/2014	Y20060	2-й
8	С-3	3/18/2014	Y3630	2-й
8	С-3	3/18/2014	Y80842	2-й
8	С-3	3/27/2014	R616	2-й
8	С-3	3/27/2014	Y411	2-й
8	С-3	3/30/2014	R616	1-й
5	С3	4/6/2014	516	1-й
5	С3	4/6/2014	1122	1-й
5	С3	4/6/2014	1255	1-й
5	С3	4/6/2014	8104	1-й
5	С3	4/6/2014	9203	1-й
5	С3	4/7/2014	7490	1-й
5	С3	4/8/2014	173	1-й
5	С3	4/8/2014	1241	1-й
5	С3	4/8/2014	5416	1-й
5	С3	4/12/2014	1203	2-й
5	С3	4/12/2014	2487	1-й
5	С3	4/12/2014	2637	1-й
5	С3	4/16/2014	1219	2-й
5	С3	4/18/2014	711	1-й
5	С3	4/18/2014	1000	1-й
5	С3	4/18/2014	1636	1-й
5	С3	4/18/2014	k23	1-й
3	С-X	4/18/2014	2431	1-й
* Получали поливитаминный препарат

Таблица 8 показывает данные по всем процедурам С-X вне зависимости от того, были ли введены какие-либо дополнительные лекарства в ранчо 3, 5, и 8.

Таблица 8: Все обработки С-X

Ранчо	С-X	Дата	Теленок	Номер обработки	Дополнительные лекарственные средства
8	С-1	5/4/2013	Y122	1-й
8	С-1	5/4/2013	Y306B	1-й
8	С-1	5/6/2013	Y350a	1-й
8	С-1	5/15/2013	Y163	1-й	Окситетрациклин LA, Токсибан, Нас
8	С-1	5/15/2013	Y169	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-1	5/15/2013	Y3351	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-1	5/18/2013	R22326	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-1	5/18/2013	Y169	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-1	5/18/2013	Y3351	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-1	5/29/2013	Y2886	1-й	Окситетрациклин LA, Токсибан
8	С-1	10/21/2013	Y311	1-й	Эксид 5 куб. см
8	С-1	10/23/2013	R287	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-1	10/25/2013	R325	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-1	10/25/2013	Y238	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	2/23/2014	G309	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y124981	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y14146	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y17739	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y36192	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y3742	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y405	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/23/2014	Y420	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан, сульфамиды
8	С-3	2/24/2014	Y3742	1-й
8	С-3	2/27/2014	Y26262	1-й	Поливитамины
8	С-3	2/27/2014	Y321	1-й	Поливитамины
8	С-3	2/27/2014	Y336	1-й	Окситетрациклин LA, поливитамины
8	С-3	2/27/2014	Y383	1-й	поливитамины
8	С-3	2/27/2014	Y422	1-й
8	С-3	3/2/2014	R18361	1-й
8	С-3	3/2/2014	Y3730	1-й
8	С-3	3/2/2014	Y387	1-й
8	С-3	3/3/2014	G032	1-й
8	С-3	3/3/2014	Y166461	2-й
8	С-3	3/3/2014	Y188352	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан, поливитамины
8	С-3	3/3/2014	Y402	1-й
8	С-3	3/4/2014	G03	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан, поливитамины
8	С-3	3/4/2014	G03	2-й
8	С-3	3/4/2014	G3731	1-й
8	С-3	3/4/2014	R1396	1-й
8	С-3	3/4/2014	Y29092	1-й
8	С-3	3/4/2014	Y389	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан
8	С-3	3/5/2014	G309	1-й
8	С-3	3/5/2014	Y29902	1-й
8	С-3	3/5/2014	Y3311	1-й
8	С-3	3/5/2014	Y3779	1-й	Токсибан
8	С-3	3/5/2014	Y8A20	1-й
8	С-3	3/6/2014	G0561	1-й	Токсибан
8	С-3	3/6/2014	G3731	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан
8	С-3	3/6/2014	R1396	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан
8	С-3	3/6/2014	R2451	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан
8	С-3	3/6/2014	R2451	2-й
8	С-3	3/6/2014	R2456	1-й	Токсибан
8	С-3	3/6/2014	Y163391	1-й
8	С-3	3/6/2014	Y20251	1-й	Токсибан
8	С-3	3/6/2014	Y3859	1-й	Окситетрациклин LA , Токсибан
8	С-3	3/6/2014	Y408	1-й	Токсибан
8	С-3	3/7/2014	G03	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	G522	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	R22519	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	Y16131	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	Y1951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	Y29961	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	Y29962	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/7/2014	Y3779	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/8/2014	R2451	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/8/2014	Y28869	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/8/2014	Y29962	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/9/2014	G235	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	R13951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y163391	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y1954	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y2014	2-й
8	С-3	3/9/2014	Y2014	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y2220	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y3016	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y3042	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/9/2014	Y3562	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/10/2014	Y166461	1-й	Токсибан
8	С-3	3/10/2014	Y19541	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/10/2014	Y2366	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/10/2014	Y28392	1-й	Токсибан
8	С-3	3/10/2014	Y2985	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/10/2014	Y3630	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/10/2014	Y365	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/10/2014	Y401	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/11/2014	R2391	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/11/2014	Y2014	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/11/2014	Y2162	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/11/2014	Y2985	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/11/2014	Y2985	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/11/2014	Y3042	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/12/2014	R215	1-й
8	С-3	3/12/2014	Y19349	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/12/2014	Y2116	1-й	Эксид
8	С-3	3/12/2014	Y2366	1-й	Эксид 5 куб. см
8	С-3	3/12/2014	Y2985	1-й	Эксид
8	С-3	3/12/2014	Y29962	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/12/2014	Y3630	1-й	Эксид 5 куб. см
8	С-3	3/12/2014	Y64659	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/13/2014	G3731	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/13/2014	R215	1-й	Эксид 5 куб. см, Токсибан
8	С-3	3/13/2014	Y16629	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/13/2014	Y19349	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/13/2014	Y28392	1-й	Эксид
8	С-3	3/14/2014	Y1106	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/14/2014	Y16629	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/14/2014	Y2951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/15/2014	R26861	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/15/2014	R2902	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/15/2014	Y16629	3-й
8	С-3	3/15/2014	Y2014	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/15/2014	Y2014	2-й
8	С-3	3/15/2014	Y2366	1-й	Экс
8	С-3	3/15/2014	Y28392	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/15/2014	Y2985	1-й	Драксин
8	С-3	3/15/2014	Y356	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/15/2014	Y3619	1-й	Окситетрациклин LA
8	С-3	3/16/2014	R21441	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см, Токсибан
8	С-3	3/16/2014	R26861	2-й
8	С-3	3/16/2014	Y2062	2-й
8	С-3	3/16/2014	Y2062	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/16/2014	Y2382	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/16/2014	Y264	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/16/2014	Y3619	1-й
8	С-3	3/17/2014	G235	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	G3731	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	R13951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	R317	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y20060	2-й
8	С-3	3/17/2014	Y20060	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y2116	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y2382	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y264	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y2951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y3630	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/17/2014	Y80842	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/18/2014	G34491	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/18/2014	G4335	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/18/2014	Y3630	2-й
8	С-3	3/18/2014	Y64659	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/18/2014	Y80842	2-й
8	С-3	3/19/2014	R215	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	R29092	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y2382	3-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y2951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y2985	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y3619	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y64659	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/19/2014	Y80842	3-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/20/2014	Y2951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/20/2014	Y411	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/20/2014	Y80B42	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/22/2014	R616	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/22/2014	Y411	3-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	3/23/2014	R20016	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/23/2014	R616	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/23/2014	Y2382	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/23/2014	Y2951	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/24/2014	R1836	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/24/2014	R29092	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/24/2014	R616	3-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/24/2014	Y10651	1-й	Драксин, Инфорс 3
8	С-3	3/24/2014	Y321	1-й	Драксин, Инфорс 3
8	С-3	3/24/2014	Y3619	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/24/2014	Y411	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/25/2014	R1836	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/25/2014	R290	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/25/2014	R29092	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/25/2014	Y29852	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/25/2014	Y3619	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/25/2014	Y368	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/25/2014	Y3742	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/25/2014	Y3862	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	G1310	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	R239	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	R239	2-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	R3000	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	R3041	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y1606	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y20142	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/26/2014	Y259	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/26/2014	Y28869	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y29062	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y30162	2-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y30162	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/26/2014	Y331	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/26/2014	Y3619	3-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/27/2014	R1836	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/27/2014	R616	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/27/2014	R616	2-й
8	С-3	3/27/2014	R8461	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/27/2014	Y411	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/27/2014	Y411	1-й
8	С-3*	3/28/2014	Y1361	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/28/2014	Y1606	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/28/2014	Y266962	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/29/2014	G1310	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/29/2014	R2028	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/29/2014	Y16932	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/29/2014	Y18835	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/29/2014	Y3590	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/30/2014	G3060	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/30/2014	R616	1-й
8	С-3*	3/30/2014	Y166461	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/30/2014	Y2116	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/30/2014	Y259	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/31/2014	G131	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/31/2014	G5052	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/31/2014	G57	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/31/2014	R3691	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/31/2014	Y1124	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/31/2014	Y119	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/31/2014	Y26682	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	3/31/2014	Y2839	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/31/2014	Y36192	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/31/2014	Y365	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	3/31/2014	Y384	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	3/31/2014	Y386	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	3/31/2014	Y424	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	4/1/2014	B1395	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/1/2014	G5052	2-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	4/1/2014	Y1126	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	4/1/2014	Y2446	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	4/1/2014	Y266962	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	4/1/2014	Y29852	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	4/1/2014	Y3279	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/1/2014	Y3412	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/1/2014	Y43	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/1/2014	Y592	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/2/2014	Y17739	1-й	Драксин
8	С-3*	4/2/2014	Y26262	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3	4/2/2014	Y29852	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3*	4/2/2014	Y399	1-й	Драксин, сульфамиды
8	С-3*	4/3/2014	Y121242	1-й	Драксин
8	С-3*	4/3/2014	Y16936	1-й	Драксин
8	С-3*	4/3/2014	Y411	1-й	Драксин
8	С-3	5/21/2014	G34491	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	5/21/2014	R1836	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	5/21/2014	R20016	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	5/21/2014	R2616	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	5/21/2014	R29092	1-й	Эксид 3 куб. см
8	С-3	5/21/2014	Y411	2-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
8	С-3	5/21/2014	Y5861	1-й	Окситетрациклин LA 5 куб. см
5	С3	4/6/2014	8104	1-й
5	С3	4/6/2014	9203	1-й
5	С3	4/6/2014	1122	1-й
5	С3	4/6/2014	516	1-й
5	С3	4/6/2014	1255	1-й
5	С3	4/7/2014	1255	2-й	Нуфлор
5	С3	4/7/2014	7490	1-й
5	С3	4/8/2014	1203	1-й	Нуфлор
5	С3	4/8/2014	1241	1-й
5	С3	4/8/2014	5416	1-й
5	С3	4/8/2014	173	1-й
5	С3	4/12/2014	2363	1-й	Нуфлор
5	С3	4/12/2014	9203	1-й	Нуфлор
5	С3	4/12/2014	1203	2-й
5	С3	4/12/2014	2637	1-й
5	С3	4/12/2014	2487	1-й
5	С3	4/12/2014	2763	1-й	Нуфлор
5	С3	4/14/2014	1219	1-й	Нуфлор
5	С3	4/16/2014	1219	2-й
5	С3	4/18/2014	1000	1-й
5	С3	4/18/2014	1636	1-й
5	С3	4/18/2014	k23	1-й
5	С3	4/18/2014	711	1-й
3	С-X	4/8/2014	2012	1-й	Слабительное
3	С-X	4/18/2014	Y273	1-й	Слабительное, Байтрил
3	С-X	4/18/2014	2431	1-й
3	С-X	4/18/2014	Y177	1-й	Байтрил
3	С-X	4/22/2014	Y82	1-й	Слабительное, Байтрил
3	С-X	4/23/2014	Y273	1-й	Суприо
3	С-X	4/24/2014	2811	1-й	Слабительное, Нуфлор
3	С-X	4/24/2014	wI	1-й	Слабительное, Нуфлор, сульфамиды
3	С-X	4/24/2014	1100	1-й	Байтрил
3	С-X	4/25/2014	841	1-й	Слабительное
3	С-X	4/25/2014	longhorn	1-й	Слабительное
3	С-X	4/25/2014	452	1-й	Слабительное, Нуфлор

* указывает на лечение С-X через носовые проходы (2 куб. см)

Пример 12

Лечения мастита у животных

Проблема мастита в молочных железах у животных обычно возникает из-за инфекций, вызванных E. coli или Staphyloccous aureus и других бактериальных патогенов. Соска воспаляется и в конечном итоге состояние может распространиться на все другие сектора молочной железы. Выработка молока прекращается. При отсутствии лечения животное может погибнуть. Большинство антибиотиков для лечения являются дорогостоящими и неэффективными. В последние три месяца, овечку и две дойные коровы, страдающие маститом, лечили 15 мл раствора на сосок. Фиг. 25А изображает сосок овцы, больной маститом. Животное, которое лечили, были хорошо развитым по отношению к болезни и оно не умрет, а останется здоровым. Молочная железа перестала функционировать. Препарат С-3 вводили с использованием шприца (фиг. 25Б). Две коровы, страдающие маститом, были на ранних стадиях этого заболевания. Каждую обрабатывали по 15 мл на зараженный сосок и полное восстановление отмечали в течение 24 час.

Образцовые композиции и лечение маститов сельскохозяйственных животных

В расчете на 90 мл воды:

5 мг кремофора или других подходящих поверхностно-активных веществ

0.7 мл пропановой кислоты и 0,2 мл изоамилового гексаноата

Композицию хорошо взбалтывали и вводили корове до 15 мл на сосок с помощью шприца. Кремофор действует для приведения ингредиентов композиции С-3 в раствор.

Пример 13

Тестирование МИК С-3 и С-4 композиций

Протокол МИК для тестирования С-3 и С-4

Мутная бактериальная культура, выращенная в соответствующем питательном бульоне, была доведена до ОП₆₅₀ = 0.4 и затем ее разводили 1:100 в бульоне, что составляет 1×10⁶КОЕ/мл. 50 мкл этой культуры добавляли в каждую лунку, за исключением отрицательного контроля, в которую было добавлено 50 мкл бульона. Конечное количество бактерий в каждой лунке было 5×10⁶ КОЕ.

20 мкл маточного раствора антибиотика B-23 добавляли к 480 мкл бульона. 250 мкл этого раствора разбавляли 1:2. Это повторяли дважды для приготовления четырех последовательно разбавленных антибактериальных растворов. Разведения были таковы, что конечная концентрация антибиотика в соответствующих лунках была равна 1%, 0.5%, 0.25%, и 0,125% маточного раствора антибиотика B-23.

Использовали 96-луночный титрационный микропланшет. Всего было применено 6 обработок: 1%, 0.5%, 0.25%, 0.125%, 0.061%, 0.03% и 0% антибиотиком с бактериальным инокулятом; и без бактериального инокулята. Каждую обработку повторяли трехкратно.

Бульон добавляли в каждую лунку, доводя до конечного объема в 200 мкл. В лунках без бактериального инокулята или раствора антибиотика, дополнительно добавляли 50 мкл бульона.

Титрационные микропланшеты инкубировали в подходящих для роста условиях, в контрольные моменты времени результаты заносили в таблицы. Конечные точки выбраны, когда положительный контроль становился мутным. Точка МИК была взята при наименьшей концентрации, при которой рост не был очевиден.

Результаты

Минимальные ингибирующие концентрации были следующими для следующих микроорганизмов:

Bacillus subtilis: 0.06125%

Vibrio cholerae: 0.06125%

Pseudomonas aeruginosa: 0.125%

Salmonella enterica серовар Typhimurium: 0.06125%

Escherichia coli: 0.125%

Метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus: 0.06125%

Для других тестов МИК - использовали картофельно-декстрозный бульон вместо питательного бульона и испытания проводили тем же способом. Результаты:

Erwinia amylovora: 0.0612%

Lactobacillus sp.: 0.0625%

Erwinia carotovora: 0.125%

Результаты демонстрируют, что С-3 и С-4 могут применяться для лечения заболеваний у растений, животных и человека, вызываемых микроорганизмами. К таким заболеваниям относятся болезни растений, вызываемые Erwinia и проблемы в ферментации зерна при производства этанола, вызванные Lactobacillus spp., биопленки, образуемые бактериями Pseudomonas. Другие заболевания включают пищевые инфекции, вызванные Salmonella, E. coli и главной причиной вызываемых заболеваний является метициллин-резистентный Staphylococcus aureus.

Пример 14

Обработка малины

Результаты, описанные в данном документе, показывают, что С-Х технологии могут применяться для сохранения фруктов и овощей во время транспортировки и хранения. Препарат С-3 смешивали в виде двух композиций: 1 мл раствора С-3 на 10 г бентонита (смесь 1:10); 1 мл раствора С-3 с 20 г бентонита (смесь 1:20) или другим носителем. 1 грамм смеси помещали в небольшой пластиковый стаканчик с приобретенной в магазине малины. Материалы помещали в небольшую прозрачную пластиковую коробку, которую опечатывали и держали при комнатной температуре в течение 1 недели, затем осматривали на наличие контаминирующих грибов. Полученные результаты свидетельствуют, что естественная микрофлора плодов быстро приводит к загниванию после 1 недели при комнатной температуре (фиг. 26А). Однако, применение смеси 1:10 не приводило к гниению (фиг. 26Б). Тем не менее, смесь 1:20 не справлялась так же хорошо, как смесь 1:10, и по меньшей мере одна ягода загнивала. Тем не менее, смесь 1:20 можно использовать для профилактики загнивания ягод, а очищенные ягоды оставались съедобными. Аналогичный эксперимент был проведен с приобретенным в магазине вкусным виноградом сорта Томпсон, результаты были похожими, при этом у контрольного винограда наблюдали гниение, в то время как обработанный виноград не гнил. Виноград также оставался съедобным, 4 человека употребляли его в пищу и дали приемлемую оценку.

Пример 15

Лечение пищевого отравления и/или расстройства желудка у человека с применением С-X.

Симптомы и характеристики пищевого отравления и/или расстройства желудка у людей похожи на те, которые происходят у животных, страдающих диареей. Например, возможные симптомы включают: боль в животе, диарею (нередко с кровью), жар и озноб, головную боль, тошноту, рвоту, общую слабость (могут быть серьезными). Большинство людей просто страдают (12-48 ч), делая все возможное, чтобы отдохнуть, проводят регидратационную терапию, возмещая жидкость и минеральные вещества, которые теряют из-за диареи и рвоты. Похоже, что нет доступного средства, которое обеспечивает мгновенное облегчение.

Однако, десять добровольцев, страдающих одним или несколькими из этих симптомов по меньшей мере 10-15 мл 1 % препарата С-3 принимали внутрь при появлении симптомов или в течение нескольких часов после появления симптомов. Во всех случаях пациенты описывали улучшения в течение одного, двух часов после приема средства. Прекращались лихорадка, боль в животе, понос и рвота, и пациенты полностью выздоравливали. Все пациенты были взрослыми, обоих полов, как мужского, так и женского. Один пациент, однако сообщил, что не отметил никакой разницы в состоянии желудка после приема 10 мл дозы 1 % препарата С-3. Хотя и не желая быть связанным какой-либо конкретной теорией, предполагается, что пациент имел вирусную инфекцию желудка, которая не поддается лечению С-Х. Тем не менее, тот факт, что 90% людей, которых лечили, немедленно и полностью выздоравливали, в сочетании с исследованиями диареи у животных, подтверждается гипотеза, что С-3 может применяться для лечения людей, страдающих от расстройств желудка и отравлений, вызванных бактериями. Эта гипотеза дополнительно подкрепляется впечатляющими значениями минимальных ингибирующих концентраций E coli и S. aureus, которые представляют собой двух известных возбудителей пищевых отравлений у людей (пример 13).

Пример 16

Мастит в молочном скотоводстве и С-Х технологии

Лечение:

Препарат, содержащий 2 % композицию С-3 с 5 мг кремофора (неионный растворитель) в чистой воде тщательно перемешивали, и применял как лечебное средство. Восемь коров и быков молочных пород, страдающих доклиническим и субклиническим маститом лечили 12 мл препарата на сосок. В семи случаях обработку повторяли в течение одного дня. Во всех случаях животные полностью выздоровели на следующий день. Хотя и не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, выздоровление животных, вероятно, вызвано тем, что наиболее часто встречающиеся бактериальные причины мастита, такие как E.coli и S. aureus, которые крайне чувствительны к композициям С-Х, описанных в данном документе (см. пример 13.)

Пример 17

Тестирование моющего средства С-3

Несколько моющих средств, которые получили посредством пробного заказа, испытаны с раствором С-3 в эффективности на поверхностях, которые, как известно, охвачены различными патогенами. Эти поверхности включают лабораторный пол, и пол в женской уборной, унитаз и дверную ручку. Для тестирования пола, около 5 мл каждого из растворов моющих средств (1 мл С-3 в 100 мл деионизированной воды) выливали на разные участки пола и вытирали насухо бумажным полотенцем. Когда этот участок пола высыхал, его протирали тряпкой Kimwipe и затем этой тряпкой проводили по всей поверхности картофельно-декстрозного бульона в чашках Петри. Для тестирования унитаза, бумажное полотенце увлажняли раствором моющего средства и протирали часть поверхности. После того как поверхность высыхала, снова использовали Kimwipe, и далее проводили от края до края по поверхности картофельно-декстрозного агара чашек Петри. Процедура тестирования дверной ручки была такая же, что и для раковины унитаза, за исключением только одного из моющих средств, наряду с контролем. Результаты представлены в таблицах 9 и 10 ниже.

Таблица 9: Результаты лабораторного этажа

		Эксперимент 1	Эксперимент 2
	Объем детергента	Количество колоний	Количество колоний
Контроль		22	23
Sucragel CF	1 мл	1	0
Chemoxide CAW	2 мл	1	2
BioSoft D40	0.5 мл	0	3
Lathanol LAL		2	1
BioTerge AS-40	1 мл	1	2
Nacconol 90G		1	4
Кокоат калия	2 мл	1	1

Таблица 9 показывает число бактериальных или грибковых колоний, выросших на картофельно-декстрозном бульоне в чашках Петри, которые были исполосанны образцами, которые протирали различными моющими средствами или только с Kimwipe качестве контроля после 48 часов. Один миллилитр С-3 был использован на 100 мл деионизированной воды.

Таблица 10: тестирование моющих средств женской уборной

	Объем детергента	Колонии напольного покрытия	Колонии раковины унитаза	Колонии дверной ручки
Контроль		12	6	2
Sucragel CF	1 мл	1	0	0
Chemoxide CAW	2 мл	0	1
BioSoft D40	0.5 мл	0	0
Lathanol LAL		2	16
BioTerge AS-40	1мл	4	21
Кокоат калия		0	4
Nacconol 90G	2 мл	1	0

Таблица 10 показывает результаты тестирования женской уборной на различных поверхностях (пол, унитаз, и дверная ручка), и количество бактериальных или грибковых колоний снятых с поверхностей Kimwipe, которые выросли после 48 часов в чашках Петри на картофельно-декстрозном бульоне.

Пример 17

Эксперимент Verticillium

Тридцать семян гороха инокулировали Verticillium sp., размещая на чашке Петри с растущим грибом. Семена свободно вращали, затем образцы гриба соскабливали и помещали с семенами гороха в чашку Петри, которую запечатывали парафильмом и оставляли на три дня. Спустя три дня картофельно-декстрозные агаровые пластинки помещали в центр стерилизованных колпачков и заполняли 50 мкл С-3, 20 мкл С-3, или оставляли пустыми в качестве контроля. Десять семян гороха с инокулированной группы были помещены в каждую из трех чашек Петри, содержащих картофельно-декстрозный агар с заполненными или незаполненными колпачками. Горох оставляли на двое суток, а затем проверяли на грибной рост и всхожесть. Результаты эксперимента представлены в таблице 11.

Таблица 11: Инокулированные Verticillium семена гороха

Обработка	Процент грибного роста
Контроль	100
20 мкл С-3	0
50 мкл С-3	0

Процент семян гороха, зараженных Verticillium sp. которые проросли и продемонстрировали грибной рост спустя 48 часов в контрольном варианте опыта (без С-3), с 20 мкл С-3 и 50 мкл С-3.

Пример 17

Эксперимент с рыжиком

Семена рыжика известны своей пораженностью различными грибными и бактериальными патогенами были взяты и размещены с С-3 для выяснения вероятности остановки грибного и бактериального роста. Некоторые чашки Петри с картофельно-декстрозным бульоном использовали вместе с колпачками для размещения С-3. Около сорока семян помещали в одну из чашек Петри и в пустую, стерилизированные колпачки помещали в центре в качестве контрольной группы. Эти чашки Петри запечатывали парафильмом и оставляли на два дня для определения всхожести и грибного и бактериального роста. Более ста семян помещали на другой чашке Петри со стерилизованными колпачками, заполненные 50 мкл С-3. Эти семена оставляли с С-3 в плотно запечатанных парафильмом чашках Петри на следующие временные интервалы: 1 час, 2 часа, 4 часа, 8 часов, 16 часов, 24 часа и 48 часов, после чего от двадцати до тридцати семян доставали и помещали отдельно на чашку Петри. Для каждого из интервалов чашки Петри, семена выдерживали в течение 48 часов, а затем проверяли на прорастание и рост патогенных микроорганизмов.

Таблица 12: Прорастание семян рыжика и патогенный рост

	Количество семян на чашку Петри	Прорастание, %	Процент с патогенным ростом
Контроль	39	100	56
50 мкл С-3:
1 час	29	97	45
2 часа	25	96	40
4 часа	22	100	9

Таблица 12 показывает процент всхожести инфицированных семян рыжика и процент с патогенным ростом, которые помещали без С-3 (контроль), или с, покрывали 50 мкл С-3 с часовыми интервалами. Все образцы были записаны спустя 48 часов после того, как их поместили на чашки Петри с картофельно-декстрозным бульоном.

Описание каждого патента, патентной заявки и публикации, цитируемые в данном документе, включены в данном документе в качестве ссылки во всей их полноте.

Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на конкретные варианты реализации изобретения, очевидно, что другие варианты реализации изобретения и вариации этого изобретения могут быть разработаны другими специалистами в данной области техники без отступления от сущности и объема настоящего изобретения. Прилагаемая формула изобретения имеет цель истолковать включение все таких вариантов и эквивалентных вариантов реализации изобретения.

Claims

1. Химическая композиция, обладающая антимикробной активностью, включающая антимикробный компонент, содержащий пропановую кислоту и изоамиловый гексаноат, и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аминокислоты, глюкозы, хлорида натрия, хлорида калия и ацетата магния.

2. Композиция по п. 1, где по меньшей мере один компонент представляет собой одну аминокислоту и по меньшей мере одну соль.

3. Композиция по п. 2, где соотношение пропановая кислота:изоамилгексаноат составляет около 7:2 объем/объем.

4. Химическая композиция, обладающая антимикробной активностью, включающая антимикробный компонент, состоящий из пропановой кислоты, изомасляной кислоты и изоамилового гексаноата, и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аминокислоты, глюкозы, хлорида натрия, хлорида калия и ацетата магния.

5. Химическая композиция по п. 4, где соотношение пропановая кислота:изомасляная кислота:изоамилгексаноат составляет около 3,5:3,5:2 объем/объем/объем.

6. Химическая композиция по п. 5, где по меньшей мере один компонент представляет собой аминокислоту и хлорид натрия, хлорид калия или оба.

7. Композиция по п. 4, где соотношение пропановой кислоты и изомасляной кислоты вместе к изоамилгексаноату составляет около 7:2 объем/объем.

8. Антимикробный компонент для применения непосредственно или как часть антимикробной композиции, обладающей антимикробной активностью, состоящей из комбинации изоамилового гексаноата и по меньшей мере одной кислоты, выбранной из группы, состоящей из пропановой кислоты и изомасляной кислоты.

9. Антимикробный компонент по п. 8, где соотношение кислоты к изоамиловому гексаноату в комбинации составляет около 7:2 объем/объем.

10. Антимикробный компонент по п. 9, где кислотой в комбинации является пропановая кислота.

11. Антимикробный компонент по п. 8, где кислотой в комбинации является пропановая кислота и соотношение пропановой кислоты к изоамиловому гексаноату составляет от около 3:6 объем/объем до около 7:2 объем/объем.

12. Антимикробный компонент по п. 8, где кислотой в комбинации является пропановая кислота и изомасляная кислота, соотношение пропановая кислота:изомасляная кислота составляет около 1:1 и соотношение пропановая кислота:изомасляная кислота:изоамиловый гексаноат составляет около 3,5:3,5:2 объем/объем/объем.

13. Антимикробный компонент для применения непосредственно или как часть антимикробной композиции, обладающей антимикробной активностью, состоящей из комбинации изоамилового гексаноата и по меньшей мере одной кислоты, выбранной из группы, состоящей из пропановой кислоты и изомасляной кислоты, и подходящего носителя.

14. Антимикробный компонент по п. 13, где соотношение кислоты к изоамиловому гексаноату в комбинации составляет около 7:2 объем/объем.

15. Антимикробный компонент по п. 14, где кислотой в комбинации является пропановая кислота.

16. Антимикробный компонент по п. 14, где кислотой в комбинации является пропановая кислота и изомасляная кислота, соотношение пропановая кислота:изомасляная кислота составляет около 1:1 объем/объем и соотношение пропановая кислота:изомасляная кислота:изоамиловый гексаноат составляет около 3,5:3,5:2 объем/объем/объем.

17. Способ лечения человека или животного, имеющего заболевание, связанное с микробной инфекцией, включающий введение человеку или животному эффективного количества композиции по п. 1.

18. Способ лечения человека или животного, имеющего заболевание, связанное с микробной инфекцией, включающий введение человеку или животному эффективного количества композиции по п. 13.

19. Способ по п. 17, где микробная инфекция вызвана по меньшей мере одной из следующих бактерий: E.Coli, S.aureus и Salmonella.

20. Способ по п. 18, где микробная инфекция вызвана по меньшей мере одной из следующих бактерий: E.Coli, S.aureus и Salmonella.