RU2673729C1 - Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma - Google Patents
Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2673729C1 RU2673729C1 RU2018111913A RU2018111913A RU2673729C1 RU 2673729 C1 RU2673729 C1 RU 2673729C1 RU 2018111913 A RU2018111913 A RU 2018111913A RU 2018111913 A RU2018111913 A RU 2018111913A RU 2673729 C1 RU2673729 C1 RU 2673729C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell
- cells
- rc291c
- cell line
- tumor
- Prior art date
Links
- 208000009060 clear cell adenocarcinoma Diseases 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 73
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims abstract description 3
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 11
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 abstract description 6
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 abstract description 5
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 abstract description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 abstract 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N arachidonyl-2'-chloroethylamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NCCCl SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- MISZALMBODQYFT-URVXVIKDSA-N 125-69-9 Chemical compound Br.C([C@@H]12)CCC[C@]11CCN(C)[C@H]2CC2=CC=C(OC)C=C21 MISZALMBODQYFT-URVXVIKDSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100395310 Homo sapiens HLA-A gene Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 206010050513 Metastatic renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000448 cultured tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000000661 isochromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 210000005088 multinucleated cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000007425 progressive decline Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, в частности, к получению и применению клеточных линий, используемых для клеточных технологий в медицине, среди которых создание биомедицинских клеточных продуктов - противоопухолевых вакцин, диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов, тестирование активности различных фармацевтических препаратов.The invention relates to the field of medical biotechnology, in particular, to the production and use of cell lines used for cell technology in medicine, among which the creation of biomedical cell products - antitumor vaccines, diagnostic kits and test systems for the development of new drugs and new therapeutic approaches, testing the activity of various pharmaceuticals.
Прогресс современной биомедицинской науки и биотехнологии в значительной степени обусловлен применением культивируемых in vitro клеток различного происхождения. Метод культур клеток является уникальным и вместе с тем широко применяется в настоящее время, как в практических, так и в научных исследованиях. Появилась возможность использования клеток животных для получения генно-инженерных препаратов, заместительной терапии, производство препаратов для иммунопрофилактики, диагностики и лечения в значительной мере зависит от стабильности и воспроизводимости свойств используемых клеток. Основой получения любого безопасного биопродукта должна быть стандартизованная и аттестованная культура клеток. В настоящее время использование подобных клеточных линий является неотъемлемым условием при проведении исследований или разработке новых технологий, а также для обеспечения стабильного и безопасного производства биотехнологических препаратов (Мензоров А.Г., Серов О.Л. Зачем нужны коллекции линий клеток // Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2016. - Т. 20(6). - С. 945-948. DOI 10.18699/VJ16.215).The progress of modern biomedical science and biotechnology is largely due to the use of in vitro cultured cells of various origins. The method of cell culture is unique and at the same time is widely used at present, both in practical and in scientific research. It became possible to use animal cells to obtain genetically engineered drugs, substitution therapy, the production of drugs for immunoprophylaxis, diagnosis and treatment largely depends on the stability and reproducibility of the properties of the cells used. The basis for any safe bio-product should be a standardized and certified cell culture. Currently, the use of such cell lines is an essential condition for research or the development of new technologies, as well as to ensure stable and safe production of biotechnological preparations (Menzorov A.G., Serov OL.Why do we need collections of cell lines // Vavilovsky Journal of Genetics and selection. - 2016. - T. 20 (6). - S. 945-948. DOI 10.18699 / VJ16.215).
Рак почки занимает одно из ведущих мест по темпам прироста среди онкоурологических заболеваний. По данным статистики, в 2016 г. в России было зарегистрировано 108,9 случаев злокачественных новообразований почки на 100000 тыс. населения по сравнению с 78,5 в 2011 г. (Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой Состояние онкологической помощи населению России в 2016 году. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2017. - илл. - 236 с. ISBN 978-5-85502-231-5). Течение этого заболевания таково, что у 25-50% больных на момент установления диагноза уже определяются метастазы, приблизительно у половины пациентов болезнь приобретет системный характер в разные сроки после оперативного лечения. Биологической особенностью почечноклеточного рака является способность к метастазированию в любые органы и ткани организма. Традиционные виды системного лечения, назначаемые при распространенных формах опухолей, оказываются неэффективными у больных почечноклеточным раком. Однако рак почки относится к группе новообразований, чувствительных к иммунотерапевтическому воздействию (Cho Y.H., Kim M.S., Chung H.S., Chang E.Novel immunotherapy in metastatic renal cell carcinoma // Investig Clin Urol. - 2017 - Vol. 58(4). - P. 220-227. doi: 10.411 l/icu.2017.58.4.220).Kidney cancer is one of the leading growth rates among oncourological diseases. According to statistics, in 2016, 108.9 cases of malignant neoplasms of the kidney were recorded in Russia per 100,000 thousand of the population, compared with 78.5 in 2011 (Edited by A.D. Kaprin, V.V. Starinsky, G.V. Petrova The state of oncological care for the population of Russia in 2016. - M.: P. Herzen MNIIO - branch of FSBI “NIIRTS” Ministry of Health of Russia, 2017. - ill. - 236 pp. ISBN 978-5-85502 -231-5). The course of this disease is such that in 25-50% of patients at the time of diagnosis, metastases are already being determined, in about half of patients, the disease will acquire a systemic character at different times after surgical treatment. The biological feature of renal cell carcinoma is the ability to metastasize to any organs and tissues of the body. Traditional types of systemic treatment prescribed for common forms of tumors are ineffective in patients with renal cell carcinoma. However, kidney cancer belongs to the group of neoplasms sensitive to immunotherapeutic effects (Cho YH, Kim MS, Chung HS, Chang E. Novel immunotherapy in metastatic renal cell carcinoma // Investig Clin Urol. - 2017 - Vol. 58 (4). - P . 220-227. Doi: 10.411 l / icu.2017.58.4.220).
Активная иммунотерапия включает в себя: 1) неспецифическую иммунотерапию (индуцирование активного воспалительного процесса, неспецифическая вакцинация, местное и системное использование БЦЖ, применение левамизола, интерферонов α и γ, фактора некроза опухолей, интерлейкинов, колониестимулирующих факторов, высоких доз антиэстрогенов), 2) специфическую иммунотерапию с иммунизацией опухолевыми антигенами (вакцинотерапию), 3) генную терапию. В настоящее время ведется поиск опухолеассоциированных антигенов (ОАА), использование которых в качестве мишеней для иммунотерапии позволило бы вывести эти методы на качественно новый уровень (Schumacher T.N., Schreiber R.D. Neoantigens in cancer immunotherapy // Science. - 2015. - Vol. 348, Issue 6230. - P. 69-74. DOI: 10.1126/science. 4971). Процесс создания и отбора опухолевых клеточных линий, способных стабильно продуцировать высокий уровень ОАА, является базой для производства противоопухолевых клеточных вакцин, в том числе вакцин на основе дендритных клеток (ДК). Создание противоопухолевых вакцин с использованием ДК является перспективным направлением в терапии онкологических заболеваний, так как позволяет активировать защитные системы организма больного, используя естественные пути распознавания опухолевых антигенов и их последующую элиминацию. Опухолевые антигены, полученные из разрушенных клеток опухоли, в большей степени подходят для нагрузки ДК, так как в этом случае в клетку попадает весь набор опухолеассоциированных и опухолеспецифических антигенов (Балдуева И.А. Иммунотерапия злокачественных новообразований: взгляд в будущее. Аллергология и иммунология - 2014. - №4. - С. 266-268). В качестве носителей ОАА используют аутологичные и аллогенные цельные или лизированные опухолевые клетки, причем каждая опухолевая клеточная линия обладает специфическим уникальным набором ОАА, и расширение спектра клеточных линий позволяет создать более широкий пул данных антигенов, которые могут стать доступны для таких антигенпрезентирующих клеток? как ДК в процессе манипуляций in vitro при создании противоопухолевых вакцин, что позволяет с наибольшей эффективностью индуцировать противоопухолевый иммунитет (Monjazeb A.M., Hsiao Н.Н., Sckisel G.D., Murphy W.J. The role of antigen-specific and non-specific immunotherapy in the treatment of cancer // J Immunotoxicol. - 2012. - Jul-Sep; 9(3). - P. 248-58. - doi: 10.3109/1547691X.2012.685527). ДК-вакцины успешно применяют для лечения пациентов с раком почки как в виде монотерапии, так и в составе комбинированной противоопухолевой терапии (Amin A., Dudek A.Z., Logan T.F. et al. Survival with AGS-003, an autologous dendritic cell-based immunotherapy, in combination with sunitinib in unfavorable risk patients with advanced renal cell carcinoma (RCC): Phase 2 study results // J Immunother Cancer. 2015 Apr 21; 3:14. doi: 10.1186/s40425-015-0055-3).Active immunotherapy includes: 1) non-specific immunotherapy (inducing an active inflammatory process, non-specific vaccination, local and systemic use of BCG, the use of levamisole, interferons α and γ, tumor necrosis factor, interleukins, colony-stimulating factors, high doses of antiestrogens), 2) specific immunotherapy with immunization with tumor antigens (vaccine therapy), 3) gene therapy. Currently, a search is underway for tumor-associated antigens (OAAs), the use of which as targets for immunotherapy would bring these methods to a whole new level (Schumacher TN, Schreiber RD Neoantigens in cancer immunotherapy // Science. - 2015. - Vol. 348, Issue 6230. - P. 69-74. DOI: 10.1126 / science. 4971). The process of creating and selecting tumor cell lines capable of stably producing high levels of OAA is the basis for the production of antitumor cell vaccines, including dendritic cell (DC) vaccines. The creation of antitumor vaccines using DC is a promising direction in the treatment of cancer, as it allows you to activate the protective system of the patient’s body, using the natural ways of recognizing tumor antigens and their subsequent elimination. Tumor antigens obtained from destroyed tumor cells are more suitable for loading DK, since in this case the whole set of tumor-associated and tumor-specific antigens enters the cell (Baldueva I.A. Immunotherapy of malignant neoplasms: a look into the future. Allergology and Immunology - 2014 . - No. 4. - S. 266-268). Autologous and allogeneic whole or lysed tumor cells are used as OAA carriers, each tumor cell line having a specific unique set of OAAs, and expanding the spectrum of cell lines allows you to create a wider pool of these antigens that can become available for such antigen-presenting cells? as a DC in the process of in vitro manipulation when creating antitumor vaccines, which allows the most effective induction of antitumor immunity (Monjazeb AM, Hsiao NN, Sckisel GD, Murphy WJ The role of antigen-specific and non-specific immunotherapy in the treatment of cancer // J Immunotoxicol. - 2012. - Jul-Sep; 9 (3) .- P. 248-58. - doi: 10.3109 / 1547691X.2012.685527). DC vaccines have been successfully used to treat patients with kidney cancer, both as monotherapy and as part of combination antitumor therapy (Amin A., Dudek AZ, Logan TF et al. Survival with AGS-003, an autologous dendritic cell-based immunotherapy, in combination with sunitinib in unfavorable risk patients with advanced renal cell carcinoma (RCC): Phase 2 study results // J Immunother Cancer. 2015 Apr 21; 3:14. doi: 10.1186 / s40425-015-0055-3).
Техническим результатом изобретения является расширение арсенала клеточных линий, используемых для создания цельноклеточных и генноинженерных противоопухолевых вакцин, что дает возможность повысить эффективность лечения и увеличить продолжительность жизни при лечении злокачественных новообразований.The technical result of the invention is the expansion of the arsenal of cell lines used to create whole-cell and genetically engineered antitumor vaccines, which makes it possible to increase the effectiveness of treatment and increase life expectancy in the treatment of malignant neoplasms.
Кроме того, полученная новая клеточная линия может использоваться для тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов, тест-систем и экспериментальных моделей для разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов.In addition, the obtained new cell line can be used to test the activity of various pharmaceuticals, create diagnostic kits, test systems and experimental models for the development of new drugs and new therapeutic approaches.
Указанный технический результат достигается применением клеточной линии светлоклеточного рака почки человека RC291C, экспрессирующей раково-тестикулярные антигены, хранящейся в специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 724Д, для приготовления биомедицинских клеточных продуктов, тестирования противоопухолевых био- и химиопрепаратов.The specified technical result is achieved by using the cell line of human kidney cell cancer of the kidney RC291C, expressing cancer testicular antigens stored in a specialized collection of vertebrate cell cultures of the Russian collection of cell cultures under registration number RKKK (P) 724D, for the preparation of biomedical cell products, testing of anti-tumor bio- and chemotherapy drugs.
Полученная клеточная линия RC291C обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Родословная клеточной линии RC291C представлена следующим образом.The obtained cell line RC291C has stable cultural and morphological characteristics. The pedigree of the cell line RC291C is presented as follows.
Клеточная линия получена из метастаза опухоли в легкое больной Ц., 65 л., проходившей лечение в специализированном онкологическом медицинском учреждении/. Материал получен при хирургическом удалении метастатического образования. Получение клеточной линии RC291C осуществлено следующим образом.The cell line was obtained from metastasis of the tumor into the lung of patient C., 65 l., Undergoing treatment in a specialized oncological medical institution. Material obtained by surgical removal of a metastatic lesion. Obtaining cell line RC291C as follows.
Опухолевая ткань получена хирургическим путем. Измельченные стерильным скальпелем образцы опухоли (1-3 мм3) подвергали механической дезагрегации в автоматическом режиме Медимашины (DAKO, Дания) в течение 30-60 сек, помещая их на стерильные ножи медиконы. Полученную суспензию клеток пропускали последовательно через стерильные нейлоновые фильтры 100 мкм, 70 мкм, 50 мкм, суспендировали в полной питательной среде и переносили в культуральную посуду, в которой осуществляли культивирование в течение длительного времени. Стабильно растущая клеточная линия была получена на 22 пассаже.Tumor tissue obtained by surgery. Tumor samples ground with a sterile scalpel (1-3 mm 3 ) were subjected to mechanical disaggregation in automatic mode of the Medimachine (DAKO, Denmark) for 30-60 seconds, placing them on sterile medicon knives. The resulting cell suspension was passed sequentially through sterile nylon filters of 100 μm, 70 μm, 50 μm, suspended in a complete nutrient medium and transferred to a culture dish in which cultivation was carried out for a long time. A stably growing cell line was obtained at passage 22.
Морфологические признаки клеточной линии RC291C характеризуются следующим образом.The morphological characteristics of the cell line RC291C are characterized as follows.
Культура представлена клетками полигональной или округлой формы, содержащими крупные ядра с одним или двумя ядрышками. Встречаются многоядерные клетки. Ядра 78% клеток окрашиваются в ходе иммуноцитохимической реакции с моноклональными антителами против маркера пролиферации Ki-67.The culture is represented by polygonal or round cells containing large nuclei with one or two nucleoli. Multinucleated cells are found. The nuclei of 78% of the cells are stained during the immunocytochemical reaction with monoclonal antibodies against the Ki-67 proliferation marker.
Маркерные признаки клеточной линии RC291C следующие.Marker signs of the RC291C cell line are as follows.
Методом проточной цитометрии определена поверхностная экспрессия антигенов HLAA/B/C, раково-тестикулярных антигенов NY-ESO-1 и семейств MAGE, GAGE. Методом иммуноцитохимии определена экспрессия антигена RCC (renal cell carcinoma antigen).Using surface cytometry, surface expression of HLAA / B / C antigens, cancer-testicular antigens NY-ESO-1, and the MAGE, GAGE families were determined. The method of immunocytochemistry determined the expression of RCC antigen (renal cell carcinoma antigen).
Культуральные свойства клеточной линии RC291C представлены следующим образом.The cultural properties of the cell line RC291C are presented as follows.
Клеточная линия культивируется в питательной среде DMEM/F12 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамина (365 мг/л), инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селена (5 нг/мл), антибиотиков (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно). Культивирование осуществляется при 37°С, 5% CO2, 100% влажности. Культура имеет адгезионный монослойный тип роста. Во флаконы объемом 25 см2 в 5 мл среды засевают 1×106 клеток. При субкультивировании клетки снимают 2 раза в неделю в соотношении 1:2 с использованием стандартного раствора 0,25% трипсина.The cell line is cultured in DMEM / F12 medium supplemented with 20% fetal calf serum, glutamine (365 mg / l), insulin (5 μg / ml), transferrin (5 μg / ml), selenium (5 ng / ml), antibiotics (penicillin with streptomycin at a concentration of 100 u / ml and 100 μg / ml, respectively). Cultivation is carried out at 37 ° C, 5% CO 2 , 100% humidity. The culture has an adhesive monolayer type of growth. In vials of 25 cm 2 in 5 ml of medium sow 1 × 10 6 cells. When subcultured, cells are removed 2 times a week in a 1: 2 ratio using a standard solution of 0.25% trypsin.
Условия криоконсервации следующие.Cryopreservation conditions are as follows.
Для длительного хранения клетки консервируют путем замораживания в жидком азоте. Криосреда: DMEM/F12 50%, эмбриональная телячья сыворотка 40%, DMSO 10%; 3×106 клеток/мл на ампулу. Клетки клеточной линии ресуспендируют в среде для замораживания. Режим замораживания: жидкий азот, снижение температуры на 1°С в минуту до -25°С, затем быстрое замораживание до минус 70°С. Хранение в жидком азоте при температуре -196°С. Размораживание быстрое, при 37°С. Клетки разводят в 10 мл бессывороточной среды и осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 5 мл той же среды, содержащей 20% эмбриональной телячьей сыворотки, и переносят в культуральный флакон объемом 25 см2. Жизнеспособность клеток оценивают по включению трипанового синего. Жизнеспособность клеток после криоконсервации составляет 92%.For long-term storage, cells are preserved by freezing in liquid nitrogen. Cryomedia: DMEM / F12 50%, fetal calf serum 40%, DMSO 10%; 3 × 10 6 cells / ml per vial. Cell line cells are resuspended in freezing medium. Freezing mode: liquid nitrogen, temperature decrease by 1 ° С per minute to -25 ° С, then quick freezing to minus 70 ° С. Storage in liquid nitrogen at a temperature of -196 ° C. Defrosting is quick at 37 ° C. Cells are diluted in 10 ml of serum-free medium and precipitated by centrifugation, resuspended in 5 ml of the same medium containing 20% fetal calf serum, and transferred to a 25 cm 2 culture vial. Cell viability is assessed by the inclusion of trypan blue. Cell viability after cryopreservation is 92%.
Контаминация исследована следующим образом.Contamination is investigated as follows.
При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Иммунофлуоресцентный тест на микоплазму отрицателен.With prolonged observation, bacteria and fungi were not found in the culture. Mycoplasma immunofluorescence test is negative.
Кариологическая характеристика клеточной линии RC291C следующая:The karyological characteristics of the RC291C cell line are as follows:
47,X,-X,+t(1;7)(q21;p22),+t(1:7)(q21;p22),+del(4)(q),+t(7:?)(p22;?),-8,del(9)(p22),-14,-15,+del(17)(q),+20,-21.47, X, -X, + t (1; 7) (q21; p22), + t (1: 7) (q21; p22), + del (4) (q), + t (7:?) ( p22;?), - 8, del (9) (p22), - 14, -15, + del (17) (q), + 20, -21.
При этом del (4)(q) встречается в 62% клеток в виде del (4)(q23) и в 38% клеток в виде del (4)(q31). Делеция del(17)(q) встречается в 77% клеток в виде del(17)(q11.2) и в 23% клеток в виде del(17)(q22). Наиболее часто встречаемые маркеры, характеризующие культуру RC291C:Moreover, del (4) (q) occurs in 62% of cells as del (4) (q23) and in 38% of cells as del (4) (q31). Deletion of del (17) (q) occurs in 77% of cells as del (17) (q11.2) and in 23% of cells as del (17) (q22). The most common markers characterizing the culture of RC291C:
1. Нереципрокная (невзаимная) транслокация между 1 и 7 хромосомами [t(l;7)(q21;p22)]. Выявлена в 95% случаев, при этом в количестве 2 в 75% клеток, в количестве 1 - в 16% клеток, в количестве 3 - в 4 клетках из 100.1. Non-reciprocal (non-reciprocal) translocation between chromosomes 1 and 7 [t (l; 7) (q21; p22)]. Identified in 95% of cases, with 2 in 75% of the cells, 1 in 16% of the cells, 3 in 4 of the 100 cells.
2. Дериват хромосомы 7, или транслокация 7 в локусе р22 [t(7;?)(p22;?)]. Выявлена в 56% клеток, при этом в основном в количестве 1 и только в 4%>клеток в количестве 2.2. Derivative of chromosome 7, or translocation 7 at the p22 locus [t (7;?) (P22 ;?)]. It was detected in 56% of the cells, while mostly in the amount of 1 and only 4%> cells in the amount of 2.
3. Изохромосома 9q выявлена в 35% клеток, в основном в количестве 1.3. Isochromosome 9q was detected in 35% of cells, mainly in an amount of 1.
4. Делеция хромосомы 4 в локусе q23 встречается в 72% клеток, при этом в основном в количестве 1.4. Deletion of chromosome 4 at the q23 locus occurs in 72% of the cells, with a majority of 1.
5. Делеция 4q13 встречается в 29% клеток, при этом в 6% клеток в количестве 2.5. Deletion of 4q13 occurs in 29% of cells, while in 6% of cells in an amount of 2.
6. Делеция 7 хромосомы в локусе q11.2 встречается в 55% клеток, при этом в 12% клеток в количестве 2 и в 3% клеток в количестве 3.6. Deletion of chromosome 7 at the q11.2 locus occurs in 55% of cells, while in 12% of cells in an amount of 2 and in 3% of cells in an amount of 3.
7. Делеция 6 хромосомы в локусе q23 отмечена в 5% клеток.7. Deletion of chromosome 6 at the q23 locus was noted in 5% of the cells.
8. Делеция 9 хромосомы в локусе р22 отмечена в 61% клеток, в основном в количестве 1.8. Deletion of chromosome 9 at the p22 locus was observed in 61% of cells, mainly in an amount of 1.
9. Маркер в виде 10(р) отмечен в 9% клеток.9. A marker in the form of 10 (p) is noted in 9% of the cells.
Использование клеточной линии RC291C представлено следующими примерами.The use of the cell line RC291C is represented by the following examples.
Пример 1. Использование клеточной линии RC291C для приготовления противоопухолевых вакцин на основе активированных дендритных клеток.Example 1. The use of the cell line RC291C for the preparation of antitumor vaccines based on activated dendritic cells.
1. Клеточную линию RC291C культивировали в пластиковых флаконах в полной питательной среде DMEM/F12 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамина (365 мг/л), инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селена (5 нг/мл), пенициллина (100 ед/мл), стрептомицина (100 мкг/мл). Культивирование осуществляли при 37°С, 5% CO2, 100%) влажности в СО2-инкубаторе «Heracel» (TermoElectronLTDGmbH, Германия).1. The RC291C cell line was cultured in plastic bottles in complete DMEM / F12 culture medium supplemented with 20% fetal calf serum, glutamine (365 mg / l), insulin (5 μg / ml), transferrin (5 μg / ml), selenium ( 5 ng / ml), penicillin (100 units / ml), streptomycin (100 μg / ml). Cultivation was carried out at 37 ° C, 5% CO 2 , 100%) humidity in a Heracel CO 2 incubator (TermoElectronLTDGmbH, Germany).
2. При достижении конфлюэнтного монослоя производили пересев клеток и дальнейшее пассирование культуры с рассевом 1:2.2. Upon reaching the confluent monolayer, the cells were reseeded and the culture was further passaged with a 1: 2 sieving.
3. Из флакона удаляли культуральную среду, омывали поверхность флакона небольшим количеством ферментативного раствора (0,25% трипсина и 0,02% раствора версена в равных пропорциях) и затем к клеткам добавляли 1-3 мл этого раствора. Помещали флаконы в CO2-инкубатор и проводили визуальный контроль состояния клеток.3. The culture medium was removed from the vial, the surface of the vial was washed with a small amount of enzymatic solution (0.25% trypsin and 0.02% versene solution in equal proportions), and then 1-3 ml of this solution was added to the cells. The vials were placed in a CO 2 incubator and the cells were visually checked.
4. Клетки собирали серологической пипеткой, отмывали двукратным центрифугированием в 10 мл 0,9% раствора хлорида натрия при 1000 об/мин в течение 10 мин.4. Cells were collected with a serological pipette, washed twice by centrifugation in 10 ml of a 0.9% sodium chloride solution at 1000 rpm for 10 minutes.
5. Производили подсчет клеток и оценку их жизнеспособности.5. Cells were counted and their viability evaluated.
6. Для приготовления опухолевого лизата клеток линии RC291C проводили шесть последовательных циклов моментального замораживания до -196°С и оттаивания до комнатной температуры в фосфатно-солевом буфере без криопротектора, качество лизиса контролировали с помощью 0,1% трипанового синего и светового микроскопа.6. To prepare a tumor lysate of RC291C cell lines, six consecutive cycles of instant freezing to -196 ° С and thawing to room temperature in phosphate-buffered saline without cryoprotectant were carried out; the quality of lysis was monitored using a 0.1% trypan blue and light microscope.
7. Осуществляли осаждение клеточного детрита центрифугированием (10 мин, 3000 об/мин), фильтрацию надосадочной фракции через фильтр 0,2 мкм и расфасовку опухолевого лизата в криопробирки для хранения при -20°С до использования.7. Cell detritus was precipitated by centrifugation (10 min, 3000 rpm), the supernatant fraction was filtered through a 0.2 μm filter and the tumor lysate was packed in cryovials for storage at -20 ° С until use.
8. Вносили лизат с клеточной линией RC291C в культуры незрелых дендритных клеток пациентов на 5-й день культивирования (иммунофенотип CD14-CD1a+CD83-) в соотношении 3 лизированные опухолевые клетки на 1 ДК, добавляли ростовые факторы: гранулоцитарно-макрофагальный фактор роста (72 нг/мл), интерлейкин - 4 (20 нг/мл) и фактор некроза опухолей альфа (20 нг/мл). Инкубировали в условиях 37°С, 5% CO2, 100% влажности в CO2-инкубаторе «Heracel» (TermoElectronLTDGmbH, Германия) в течение 48 часов.8. A lysate with the RC291C cell line was introduced into the cultures of immature dendritic cells of patients on the 5th day of cultivation (immunophenotype CD14 - CD1a + CD83 - ) in the ratio of 3 lysed tumor cells per DC, growth factors were added: granulocyte-macrophage growth factor (72 ng / ml), interleukin - 4 (20 ng / ml) and tumor necrosis factor alpha (20 ng / ml). Incubated at 37 ° C, 5% CO 2 , 100% humidity in a Heracel CO 2 incubator (TermoElectronLTDGmbH, Germany) for 48 hours.
9. В результате получали активированные ДК с иммунофенотипом CD14-/CD1a-/CD83+/CD80+/CD86+/HLADR+/CD209+/CCR7+.9. As a result, activated DCs with the immunophenotype CD14 - / CD1a - / CD83 + / CD80 + / CD86 + / HLADR + / CD209 + / CCR7 + were obtained.
Пример 2. Использование клеточной линии RC291C для создания экспериментальной системы in vitro, позволяющей оценить активность цитотоксических Т-лимфоцитов.Example 2. The use of the cell line RC291C to create an experimental in vitro system that allows to evaluate the activity of cytotoxic T-lymphocytes.
1. Клеточную линию RC291C культивировали, как описывается выше. После пересева клетки собирали, осуществляли подсчет их количества, оценку жизнеспособности и высевали в планшету Е-16 (ACEA Bioscience Inc., США) в количестве 10 тыс. кл/лунка.1. The cell line RC291C was cultured as described above. After subculture, the cells were harvested, their number was counted, their viability was assessed, and 10 thousand cells / well were sown on an E-16 plate (ACEA Bioscience Inc., USA).
2. Два часа инкубировали планшету с клетками RC291C в условиях 37°С, 5% CO2, 100% влажности в CO2-инкубаторе «Heracel» (TermoElectron LTD GmbH, Германия).2. For two hours, the plate with RC291C cells was incubated at 37 ° C, 5% CO 2 , 100% humidity in a Heracel CO 2 incubator (TermoElectron LTD GmbH, Germany).
3. Вносили в каждую лунку планшеты специфически активированные CD3+CD8+ лимфоциты больного раком почки в соотношении 1 оп. кл. /5 лимфоцитов, 1/10 и 1/50, соответственно.3. Specific activated CD3 + CD8 + lymphocytes of a kidney cancer patient in a ratio of 1 op were added to each well of the plate. class / 5 lymphocytes, 1/10 and 1/50, respectively.
4. Инкубировали в условиях CO2-инкубатора 30 минут, после чего устанавливали планшету в автоматический клеточный анализатор xCELLigence (ACEA Bioscience Inc., США). Программировали систему регистрации параметров жизнеспособности и пролиферации прикрепившихся культивируемых опухолевых клеток RC291C на 48 ч.4. Incubated under the conditions of a CO 2 incubator for 30 minutes, after which the plate was placed in an xCELLigence automatic cell analyzer (ACEA Bioscience Inc., USA). Programmed a system for recording the parameters of viability and proliferation of adherent cultured tumor cells RC291C for 48 hours
5. Оценили изменения жизнеспособности и скорости роста культуры RC291C по изменению значений электрического импеданса, которые автоматически контролировались системой xCELLigence и были выражены в виде клеточного индекса (CI).5. The changes in the viability and growth rate of the RC291C culture were evaluated by the change in the electrical impedance values, which were automatically controlled by the xCELLigence system and expressed as a cell index (CI).
6. Наблюдали прогрессивное уменьшение CI культуры RC291C при кокультивировании в течение 48 ч. с активированными CD3+CD8+ лимфоцитами: 1,049 в контроле и 0,0027 при соотношении опухолевая клетка/лимфоцит 1/50.6. A progressive decrease in the CI culture of RC291C was observed upon cultivation for 48 hours with activated CD3 + CD8 + lymphocytes: 1.049 in the control and 0.0027 in the ratio of tumor cell / lymphocyte 1/50.
Заявляемый способ расширяет арсенал клеточных линий, используемых для создания цельноклеточных и генноинженерных противоопухолевых вакцин, способствуе тповышению эффективности лечения и увеличению продолжительность жизни пациентов при лечении злокачественных новообразований. Полученная новая клеточная линия RC291C может использоваться для создания противоопухолевых вакцин, диагностических наборов, тест-систем с целью разработки новых лекарственных средств и новых терапевтических подходов, для тестирования эффективности различных фармацевтических препаратов.The inventive method expands the arsenal of cell lines used to create whole-cell and genetically engineered antitumor vaccines, helping to increase the effectiveness of treatment and increase the life expectancy of patients in the treatment of malignant neoplasms. The obtained new cell line RC291C can be used to create antitumor vaccines, diagnostic kits, test systems in order to develop new drugs and new therapeutic approaches, to test the effectiveness of various pharmaceutical preparations.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111913A RU2673729C1 (en) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111913A RU2673729C1 (en) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2673729C1 true RU2673729C1 (en) | 2018-11-29 |
Family
ID=64603591
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018111913A RU2673729C1 (en) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2673729C1 (en) |
-
2018
- 2018-04-02 RU RU2018111913A patent/RU2673729C1/en active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| МИНГАЛЕЕВА Р.Н. и др. Применение культур клеток и тканей для скрининга противоопухолевых препаратов in vitro. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, том VIII, N2, 2013, с.20-28. * |
| МИНГАЛЕЕВА Р.Н. и др. Применение культур клеток и тканей для скрининга противоопухолевых препаратов in vitro. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, том VIII, N2, 2013, с.20-28. Отв. Ред. М.С. БОГДАНОВА, Клеточные культуры, Информационный бюллетень, Выпуск 26, Санкт-Петербург, 2010, с.42. * |
| Отв. Ред. М.С. БОГДАНОВА, Клеточные культуры, Информационный бюллетень, Выпуск 26, Санкт-Петербург, 2010, с.42. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101644984B1 (en) | Method For Producing Natural Killer Cells, Natural Killer Cells Produced Thereby, And Composition For Treating Cancers And Infectious Diseases Containing The Same | |
| AU2023202977A1 (en) | Optimally activated dendritic cells that induce an improved or increased anti-tumor immune response | |
| RU2573940C1 (en) | Cell line of human kidney cancer ibgvat r 6 | |
| Sabado et al. | Dendritic cell vaccines | |
| RU2673729C1 (en) | Application of cell line of rc291c clear cell adenocarcinoma | |
| KR100363587B1 (en) | Dendritic cell-cancer fusion hybrid for anti-cancer cellular vaccine | |
| RU2573938C1 (en) | Cell line of human kidney cancer ibgvat r 27 | |
| RU2642265C1 (en) | Application of cell line of 369 admel human skin melanoma | |
| RU2402602C1 (en) | CELL LINE OF HUMAN MELANOMA mel Rac, APPLIED FOR OBTAINING ANTITUMOUR VACCINE | |
| RU2650757C1 (en) | Human colorectal cancer cell line 485 colo can | |
| AR Aleixo et al. | Immunotherapy with dendritic cells as a cancer treatment: perspectives and therapeutic potential | |
| RU2650759C1 (en) | Human ovarian cancer cell line 533 oos | |
| RU2742244C1 (en) | Human bladder cancer cell line 587 blcan tvv | |
| RU2287576C1 (en) | HUMAN MELANOMA CELLULAR LINE mel Ibr USED IN PREPARING ANTITUMOR VACCINE | |
| RU2733230C1 (en) | Human bladder cancer cell line 198 blcan rla | |
| RU2675541C1 (en) | APPLICATION OF HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINE 388mel | |
| RU2740800C1 (en) | Human synovial sarcoma cell line 716 ss mnv | |
| RU2796356C9 (en) | HUMAN ALVEOLAR SARCOMA CELL LINE 9927 AlS SIO | |
| RU2796356C1 (en) | Human alveolar sarcoma cell line 9927 ais sio | |
| RU2287575C1 (en) | HUMAN MELANOMA CELLULAR LINE mel P USED IN PREPARING ANTITUMOR VACCINE | |
| RU2287578C1 (en) | HUMAN MELANOMA CELLULAR LINE mel Kor USED IN PREPARING ANTITUMOR VACCINE | |
| RU2742245C1 (en) | Human bladder cancer cell line 398 blcan kae | |
| RU2779948C1 (en) | Human bladder cancer cell line 190 bican kag | |
| RU2714208C1 (en) | Cell product for loading and activation of human dendrite cells | |
| RU2722867C1 (en) | Osteogenic human sarcoma cell line 793 ossar rvv |