RU2573938C1

RU2573938C1 - Cell line of human kidney cancer ibgvat r 27

Info

Publication number: RU2573938C1
Application number: RU2014149917/10A
Authority: RU
Inventors: Елена Юрьевна Лысюк; Марина Игоревна Лукашина; Алексей Владимирович Кибардин; Николай Васильевич Гнучев; Георгий Павлович Георгиев; Светлана Викторовна Ткаченко; Юлия Вячеславовна Ольшанская; Дмитрий Михайлович Коновалов; Сергей Сергеевич Ларин
Original assignee: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук
Priority date: 2014-12-11
Filing date: 2014-12-11
Publication date: 2016-01-27

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: cell line can be used, for example to create antitumor vaccines (whole-cell or genetic engineering), testing of activity of various pharmaceuticals, creation of diagnostic kits and test systems for development of new medicines. The cell line is deposited in the Russian national collection of industrial microorganisms (RNCIM) under the registration number H-152.

EFFECT: obtained new cell line of human kidney cancer IBGVAT R 27 has stable cultural and morphological characteristics.

1 ex

Description

Область техники настоящего изобретенияThe technical field of the present invention

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, в частности к получению клеточных линий, используемых для клеточных технологий, среди которых создание противоопухолевых вакцин, тестирование активности различных фармацевтических препаратов, разработка диагностических наборов, а также тест-систем для разработки новых лекарственных средств.The invention relates to the field of medical biotechnology, in particular to the production of cell lines used for cell technology, including the creation of antitumor vaccines, testing the activity of various pharmaceutical preparations, the development of diagnostic kits, as well as test systems for the development of new drugs.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION

В структуре заболеваемости злокачественными заболеваниями в РФ в 2012 году на долю рака почки приходилось около 4% [1]. По статистике приблизительно треть пациентов с раком почки на момент постановки диагноза уже имеют отдаленные метастазы, а среди остальных пациентов приблизительно у половины эти метастазы скорее всего разовьются [2, 3]. К сожалению, метастатический рак почки высоко рефрактерен к традиционным схемам химиотерапии [3], что делает весьма актуальным поиск дополнительных и/или альтернативных методов лечения.In the structure of the incidence of malignant diseases in the Russian Federation in 2012, kidney cancer accounted for about 4% [1]. According to statistics, approximately a third of patients with kidney cancer at the time of diagnosis already have distant metastases, and among the remaining patients, approximately half of these metastases will most likely develop [2, 3]. Unfortunately, metastatic kidney cancer is highly refractory to traditional chemotherapy regimens [3], which makes the search for additional and / or alternative methods of treatment highly relevant.

В последние годы много исследований посвящено возможности использования различных иммунологических подходов к терапии онкологических патологий. В основе всех этих подходов лежит идея использования и/или усиления естественных иммунных процессов для борьбы с опухолью. С этой целью исследуются или уже применяются для лечения различные цитокины (например, интерферон-альфа, интерлейкин-6 и др.) [3], моноклональные антитела к опухолевым антигенам для непосредственного блокирования жизнедеятельности опухолевых клеток или направленной доставки к ним противоопухолевых препаратов [4-6]. Кроме того, к иммунотерапевтическим методам лечения относятся аутологичные или аллогенные вакцины [7, 8], принцип действия которых основан на индукции противоопухолевого иммунитета.In recent years, many studies have been devoted to the possibility of using various immunological approaches to the treatment of cancer pathologies. All of these approaches are based on the idea of using and / or enhancing natural immune processes to fight the tumor. For this purpose, various cytokines (for example, interferon-alpha, interleukin-6, etc.), monoclonal antibodies to tumor antigens for directly blocking the activity of tumor cells or targeted delivery of antitumor drugs to them are being studied or already used for treatment [4- 6]. In addition, immunotherapeutic methods of treatment include autologous or allogeneic vaccines [7, 8], the principle of action of which is based on the induction of antitumor immunity.

Центральным событием в процессе Т-клеточной иммунной реакции против опухолевых клеток является стимуляция распознавания Т-клеточными рецепторами антигенных детерминант, избирательно экспрессированных на опухолевых клетках. Опухолевые антигены перед их презентацией, как правило, подвергаются процессингу в контексте молекул гистосовместимости на поверхности клеток [9]. Известно несколько групп антигенов, специфических для опухолевых клеток, например раково/тестикулярные антигены, дифференцировочные антигены и др. Экспрессия таких опухолевых маркеров играет одну из ключевых ролей в индукции противоопухолевого иммунитета.A central event in the T-cell immune response against tumor cells is the stimulation of T-cell receptors to recognize antigenic determinants selectively expressed on tumor cells. Tumor antigens before their presentation, as a rule, are processed in the context of histocompatibility molecules on the cell surface [9]. Several groups of tumor cell specific antigens are known, for example, cancer / testicular antigens, differentiation antigens, etc. Expression of such tumor markers plays a key role in the induction of antitumor immunity.

Основная сложность при использовании иммунотерапии для лечения онкологических патологий заключается в ее недостаточной эффективности, часто связанной с существованием механизма ускользания опухоли от иммунологического надзора. Это может быть следствием экспрессии на опухолевых клетках опухолевых антигенов [10, 11] или повышением содержания в организме клеток с ингибиторными свойствами [12]. К последним относятся, в частности, регуляторные клетки (Трег), которые важны для предотвращения чрезмерного активационного ответа на чужеродные воздействия во избежание аутореактивности. Снижение содержания таких клеток часто ассоциировано с аутоиммунными заболеваниями [13, 14], и в таких случаях иммунотерапия может быть направлена на восстановление в организме их количества [15, 16]. В то же время при многих онкологических заболеваниях содержание Трег повышено, они могут формировать толерантность организма к опухолевым клеткам и в таких случаях терапия может быть направлена на снижение их содержания [17, 18].The main difficulty in using immunotherapy for the treatment of cancer pathologies is its lack of effectiveness, often associated with the existence of a mechanism for the tumor to escape from immunological surveillance. This may be a consequence of the expression of tumor antigens on tumor cells [10, 11] or an increase in the content of cells with inhibitory properties in the body [12]. The latter include, in particular, regulatory cells (Treg), which are important for preventing an excessive activation response to foreign influences in order to avoid autoreactivity. A decrease in the content of such cells is often associated with autoimmune diseases [13, 14], and in such cases, immunotherapy can be aimed at restoring their number in the body [15, 16]. At the same time, for many oncological diseases, the Treg content is increased, they can form the body's tolerance to tumor cells, and in such cases, therapy can be aimed at reducing their content [17, 18].

Вакцинотерапия как способ лечения опухоли направлена на активацию противоопухолевого иммунитета в ответ на дополнительное введение в организм опухолевых антигенов. Особое внимание здесь уделяется цельноклеточным вакцинами, представляющим собой инактивированные облучением аллогенные или аутологичные опухолевые клетки.Vaccine therapy as a method of treating a tumor is aimed at activating antitumor immunity in response to the additional introduction of tumor antigens into the body. Particular attention is paid to whole-cell vaccines, which are allogeneic or autologous tumor cells inactivated by radiation.

Аутологичные/сингенные цельные опухолевые клетки заключают в себе практически все антигены, экспрессированные опухолью хозяина, что снижает риск появления аллергических реакций на чужеродные неопухольспецифичные антигены, а также снижает риск контаминации патогенными вирусами и внутриклеточными паразитами. Показана эффективность такой вакцины в качестве адъювантной терапии для лечения карциномы почки [19].Autologous / syngeneic whole tumor cells contain almost all the antigens expressed by the host tumor, which reduces the risk of allergic reactions to foreign non-tumor-specific antigens, and also reduces the risk of contamination by pathogenic viruses and intracellular parasites. The efficacy of such a vaccine as adjuvant therapy for the treatment of renal carcinoma has been shown [19].

Разнообразие спектра опухолевых антигенов, включенных в состав противоопухолевой вакцины, позволяет с наибольшей эффективностью индуцировать противоопухолевый иммунитет. Такого разнообразия можно добиться путем правильного подбора клеточных линий для разработки противоопухолевых вакцин. Вакцины, состоящие из нескольких клеточных линий (поливалентные вакцины), содержат широкий спектр опухолевых антигенов и используются как аллогенные. Например, поливалентная вакцина для терапии меланомы [7] состоит из трех аллогенных меланомных клеточных линий с высокой экспрессией поверхностных иммуногенных глико-, липопротеинов и ганглиозидов. Клинические испытания такой вакцины показали, что развитие иммунного ответа как клеточного, так и гуморального типа на эти антигены коррелировало с повышением выживаемости пациентов. Небольшое количество исследований, связанных с использованием аллогенных вакцин для терапии рака почки, позволяет предполагать их потенциальную эффективность для лечения данной патологии [20, 21].The diversity of the spectrum of tumor antigens included in the antitumor vaccine allows the most effective induction of antitumor immunity. Such diversity can be achieved by the proper selection of cell lines for the development of antitumor vaccines. Vaccines consisting of several cell lines (multivalent vaccines) contain a wide range of tumor antigens and are used as allogeneic. For example, a multivalent vaccine for the treatment of melanoma [7] consists of three allogeneic melanoma cell lines with high expression of surface immunogenic glyco-, lipoproteins and gangliosides. Clinical trials of such a vaccine have shown that the development of an immune response of both cellular and humoral type to these antigens correlated with increased patient survival. A small number of studies related to the use of allogeneic vaccines for the treatment of kidney cancer suggests their potential effectiveness in the treatment of this pathology [20, 21].

Задачей настоящего изобретения является получение новой опухолевой клеточной линии рака почки человека, для которой потенциально возможно использование в создании противоопухолевых вакцин.The present invention is to obtain a new tumor cell line of human kidney cancer, for which it is potentially possible to use in the creation of antitumor vaccines.

Технический результат, получаемый при использовании изобретения, выражается в расширении арсенала клеточных линий, используемых для создания противоопухолевых вакцин (цельноклеточных или генноинженерных), что дает возможность повысить эффективность лечения и увеличения продолжительности жизни при лечении злокачественных новообразований. Кроме того, полученная новая клеточная линия может использоваться для тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств.The technical result obtained by using the invention is expressed in expanding the arsenal of cell lines used to create antitumor vaccines (whole-cell or genetically engineered), which makes it possible to increase the effectiveness of treatment and increase life expectancy in the treatment of malignant tumors. In addition, the resulting new cell line can be used to test the activity of various pharmaceuticals, create diagnostic kits and test systems for the development of new drugs.

Поставленная задача решается тем, что получена новая клеточная линия IBGVAT R 27 из опухолевого образца рака почки человека.The problem is solved in that a new cell line IBGVAT R 27 was obtained from a tumor sample of human kidney cancer.

Полученная клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Хранится в коллекции клеточных культур во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером Н-152.The resulting cell line has stable cultural and morphological characteristics. It is stored in the collection of cell cultures in the All-Russian collection of industrial microorganisms under the number H-152.

Родословная клеточной линии IBGVAT R 27Pedigree of the cell line IBGVAT R 27

Линия получена из первичной опухоли пациента с диагнозом рак почки. Материал получен путем удаления первичной опухоли при оперативном вмешательстве (нефроэктомии).The line is derived from a primary tumor of a patient diagnosed with kidney cancer. The material was obtained by removing the primary tumor during surgery (nephroectomy).

Получение клеточной линии IBGVAT R 27Obtaining cell line IBGVAT R 27

Опухолевая ткань получена хирургическим путем при нефроэктомии. Полученную суспензию клеток засевали во флаконы и культивировали в течение длительного времени. Стабильно растущая клеточная линия была получена на 15 пассаже.Tumor tissue obtained surgically with nephroectomy. The resulting cell suspension was seeded into vials and cultured for a long time. A stably growing cell line was obtained at passage 15.

Морфологические признаки клеточной линии IBGVAT R 27Morphological characteristics of the cell line IBGVAT R 27

IBGVAT R 27 представлена фибробластоподобными клетками, образующими тяжи.IBGVAT R 27 is represented by fibroblast-like cells forming strands.

На окрашенных препаратах клеточные элементы веретеновидной формы с обильной слабоэозинофильной гомогенной цитоплазмой. Ядра правильной формы, минимально овоидные, хроматин мелокодисперсный, распределен в ядре равномерно. Немногочисленные клетки содержат два и, реже, более ядра. Фигуры митозов редки. Клетки формируют шториформные пласты без боковых контактов.On stained preparations, spindle-shaped cellular elements with abundant weakly eosinophilic homogeneous cytoplasm. The nuclei are regular in shape, minimally ovoid, and finely dispersed chromatin is evenly distributed in the nucleus. Few cells contain two or, more rarely, more nuclei. Figures of mitoses are rare. Cells form stormiform formations without lateral contacts.

Культуральные свойства IBGVAT R 27Cultural properties of IBGVAT R 27

Клеточная линия IBGVAT R 27 культивируется в ростовой среде DME/F12 с добавлением 10% телячьей эмбриональной сыворотки, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. В культуральные флаконы объемом 25 см в 7 мл среды засевают 1*10⁵ клеток. Культивирование проводят в CO₂-инкубаторе при 37°C в атмосфере 5% CO₂. При субкультивировании клетки снимаются с использованием стандартных растворов 0,25% трипсина и 0,02% раствора Версена в соотношении 1:1.The IBGVAT R 27 cell line is cultured in DME / F12 growth medium supplemented with 10% calf fetal serum, 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. In culture bottles with a volume of 25 cm in 7 ml of medium, 1 * 10 ⁵ cells are seeded. The cultivation is carried out in a CO ₂ incubator at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ . When subcultured, cells are removed using standard solutions of 0.25% trypsin and 0.02% Versen's solution in a 1: 1 ratio.

Условия криоконсервапииCryopreservation Conditions

Для длительного хранения клетки консервируют путем замораживания в жидком азоте. Клетки ресуспендируют в среде для замораживания, состоящей из 80% ростовой среды, 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% DMSO. Для хранения замороженного материала используют жидкий азот (температура -196°C). Размораживание быстрое, при 37°C. Клетки разводят в 10 мл ростовой среды и осаждают центрифугированием, осадок ресуспендируют в 5-7 мл ростовой среды и переносят в культуральный флакон 25 см². Жизнеспособность клеток оценивают по включению трипанового синего. Жизнеспособность клеток IBGVAT R 27 после размораживания составляет 80-90%.For long-term storage, cells are preserved by freezing in liquid nitrogen. Cells are resuspended in a freezing medium consisting of 80% growth medium, 10% fetal calf serum and 10% DMSO. Liquid nitrogen is used to store frozen material (temperature -196 ° C). Defrosting fast at 37 ° C. Cells are diluted in 10 ml of growth medium and precipitated by centrifugation, the pellet is resuspended in 5-7 ml of growth medium and transferred to a culture vial of 25 cm ² . Cell viability is assessed by the inclusion of trypan blue. The viability of IBGVAT R 27 cells after thawing is 80-90%.

КонтаминацияContamination

При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Тест на микоплазму отрицателен.With prolonged observation, bacteria and fungi were not found in the culture. Mycoplasma test is negative.

Кариологическая характеристика IBGVAT R 27Karyological characteristics of IBGVAT R 27

46, Х0, +der(7)t(1;7)(q21; p22), +iso(8q),t(9;10)(p11;p11), -14, -15, der(21)t(15;21),+20 [15]46, X0, + der (7) t (1; 7) (q21; p22), + iso (8q), t (9; 10) (p11; p11), -14, -15, der (21) t (15; 21), + 20 [15]

Примеры использования клеточной линии IBGVAT R 27Examples of the use of the cell line IBGVAT R 27

Пример 1. Культивирование клеточной линии IBGVAT R27Example 1. Cultivation of the cell line IBGVAT R27

Фрагмент опухолевой ткани, полученной при нефроэктомии, освобождали от окружающих тканей и помещали в транспортировочный контейнер со стерильной ростовой средой, состоящей из питательной среды DME/F12, содержащей 2,5 мМ L-глутамина, с добавлением 10% телячьей эмбриональной сыворотки (ТЭС) и антибиотиков (пенициллин 100 ед./мл и стрептомицин 100 мкг/мл). Опухолевую ткань доставляли в лабораторию в течение одних суток после забора материала.A fragment of the tumor tissue obtained by nephroectomy was freed from the surrounding tissues and placed in a shipping container with a sterile growth medium consisting of DME / F12 growth medium containing 2.5 mM L-glutamine supplemented with 10% calf fetal serum (TES) and antibiotics (penicillin 100 units / ml and streptomycin 100 μg / ml). Tumor tissue was delivered to the laboratory within one day after taking the material.

Образец опухолевой ткани асептически отделяли от соединительной и жировой тканей, а также удаляли некротизированные области. Фрагмент опухоли механически измельчали в ростовой среде на фрагменты величиной 2-3 мм³, после чего ткань диссоциировали смесью ферментов (ДНКаза и коллагеназа I типа) в течение 1-1,5 часов при 37°C. Образовавшуюся клеточную суспензию фильтровали через клеточное сито, центрифугировали в течение 5 мин при 250g, клетки отмывали один раз в бессывороточной среде DME/F12. Осадок клеток ресуспендировали в питательной среде из расчета 2*10⁵ клеток/мл, по 5 мл полученной суспензии помещали в культуральные флаконы 25 см². Клетки культивировали в питательной среде DME/F12, содержащей 2,5 мМ L-глутамина, с добавлением 15% ТЭС, антибиотиков (пенициллин 100 ед./мл и стрептомицин 100 мкг/мл), а также комплекса витаминов и аминокислот. После 15 пассажа была получена стабильно растущая клеточная линия.A sample of tumor tissue was aseptically separated from the connective and adipose tissues, and necrotic areas were removed. A tumor fragment was mechanically ground in a growth medium into fragments of 2-3 mm ³ in size, after which the tissue was dissociated with a mixture of enzymes (DNase and type I collagenase) for 1-1.5 hours at 37 ° C. The resulting cell suspension was filtered through a cell sieve, centrifuged for 5 min at 250 g, the cells were washed once in serum-free DME / F12 medium. The cell pellet was resuspended in a nutrient medium at a rate of 2 * 10 ⁵ cells / ml, 5 ml of the resulting suspension was placed in 25 cm ² culture bottles. Cells were cultured in DME / F12 growth medium containing 2.5 mM L-glutamine supplemented with 15% TES, antibiotics (penicillin 100 units / ml and streptomycin 100 μg / ml), as well as a complex of vitamins and amino acids. After passage 15, a stably growing cell line was obtained.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫBIBLIOGRAPHY

1. Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность), ed. А.Д. Каприн, В.В. Старинский, and Г.В. Петрова. 2014, Москва: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России.1. Malignant neoplasms in Russia in 2012 (morbidity and mortality), ed. HELL. Kaprin, V.V. Starinsky, and G.V. Petrova. 2014, Moscow: Federal State Budgetary Institution MNIII named after P.A. Herzen »Ministry of Health of Russia.

2. Stewart, S.L., et al., Cancer mortality surveillance-United States, 1990-2000. MMWR Surveill Summ, 2004. 53(3): p. 1-108.2. Stewart, S. L., et al., Cancer mortality surveillance-United States, 1990-2000. MMWR Surveill Summ, 2004.53 (3): p. 1-108.

3. Passalacqua, R., et al., Immunotherapy options in metastatic renal cell cancer: where we are arid where we are going. Expert Rev Anticancer Ther, 2006. 6(10): p. 1459-72.3. Passalacqua, R., et al., Immunotherapy options in metastatic renal cell cancer: where we are arid where we are going. Expert Rev Anticancer Ther, 2006.6 (10): p. 1459-72.

4. Jubb, A.M. and A.L. Harris, Biomarkers to predict the clinical efficacy of bevacizumab in cancer. Lancet Oncol, 2010. 11(12): p. 1172-83.4. Jubb, A.M. and A.L. Harris, Biomarkers to predict the clinical efficacy of bevacizumab in cancer. Lancet Oncol, 2010.11 (12): p. 1172-83.

5. Escudier, В., et al., Bevacizumab plus interferon alfa-2a for treatment of metastatic renal cell carcinoma: a randomised, double-blind phase III trial. Lancet, 2007. 370(9605): p. 2103-11.5. Escudier, B., et al., Bevacizumab plus interferon alfa-2a for treatment of metastatic renal cell carcinoma: a randomized, double-blind phase III trial. Lancet, 2007.370 (9605): p. 2103-11.

6. Тиллиб С.В., et al., Наноантитела для детекции и блокирования биологической активности фактора роста эндотелия сосудов А165 человека. Биохимия, 2012. 77(6): р. 809-817.6. Tillib SV, et al., Nanoantibodies for detecting and blocking the biological activity of human vascular endothelial growth factor A165. Biochemistry, 2012.77 (6): p. 809-817.

7. Morton, D.L., et al., Polyvalent melanoma vaccine improves survival of patients with metastatic melanoma. Ann N Y Acad Sci, 1993. 690: p. 120-34.7. Morton, D.L., et al., Polyvalent melanoma vaccine improves survival of patients with metastatic melanoma. Ann N Y Acad Sci, 1993.690: p. 120-34.

8. Larin, S.S., et al., Immunotherapy with autologous tumor cells engineered to secrete Tag7/PGRP, an innate immunity recognition molecule. J Gene Med, 2004. 6(7): p. 798-808.8. Larin, S.S., et al., Immunotherapy with autologous tumor cells engineered to secrete Tag7 / PGRP, an innate immunity recognition molecule. J Gene Med, 2004.6 (7): p. 798-808.

9. Бережной A.E., et al., Молекулярные механизмы взаимодействия опухоли и иммунной системы. Вопросы онкологии, 2008. 54(6): р. 669-683.9. Berezhnoy A.E., et al., Molecular mechanisms of interaction between the tumor and the immune system. Oncology issues, 2008.54 (6): p. 669-683.

10. Бережной А.Е., et al., Индукция экспрессии молекулы HLA-E на поверхности опухолевых клеток интерфероном-гамма приводит к защите опухолевых клеток от цитотоксического действия лимфоцитов. Вопросы онкологии, 2009. 55(2): р. 224-229.10. Berezhnoy AE, et al., Induction of HLA-E molecule expression on the surface of tumor cells with interferon-gamma leads to the protection of tumor cells from the cytotoxic effect of lymphocytes. Questions of Oncology, 2009.55 (2): p. 224-229.

11. Бережной А.Е., et al., Анализ экспрессии молекул HLA-E в клетках меланомы человека. Российский биотерапевтический журнал, 2006. 5(3): р. 66-71.11. Berezhnoy AE, et al., Analysis of the expression of HLA-E molecules in human melanoma cells. Russian Biotherapeutic Journal, 2006. 5 (3): p. 66-71.

12. Закеева И.Р., et al., Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их роль в противоопухолевом иммунитете. Вопросы онкологии, 2007. 53(2): р. 140-149.12. Zakeeva IR, et al., Inhibitory receptors of lymphocytes and their role in antitumor immunity. Questions of Oncology, 2007.53 (2): p. 140-149.

13. Brusko, T.M., A.L. Putnam, and J.A. Bluestone, Human regulatory T cells: role in autoimmune disease and therapeutic opportunities. Immunol Rev, 2008. 223: p. 371-90.13. Brusko, T.M., A.L. Putnam, and J.A. Bluestone, Human regulatory T cells: role in autoimmune disease and therapeutic opportunities. Immunol Rev, 2008.223: p. 371-90.

14. Lyssuk, E.Y., et al., Reduced number and function of CD4+CD25highFoxP3+ regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus. Adv Exp Med Biol, 2007. 601: p. 113-9.14. Lyssuk, E.Y., et al., Reduced number and function of CD4 + CD25highFoxP3 + regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus. Adv Exp Med Biol, 2007. 601: p. 113-9.

15. Fisson, S., et al., Therapeutic potential of self-antigen-specific CD4+CD25+ regulatory T cells selected in vitro from a polyclonal repertoire. Eur J Immunol, 2006. 36(4): p. 817-27.15. Fisson, S., et al., Therapeutic potential of self-antigen-specific CD4 + CD25 + regulatory T cells selected in vitro from a polyclonal repertoire. Eur J Immunol, 2006.36 (4): p. 817-27.

16. Быковская C.H. и Е.Ю. Лысюк. Способ обогащения регуляторных CD4+CD25+FOXP3+T-клеток человека ex vivo. Патент на изобретение №2437933, 201116. Bykovskaya C.H. and E.Yu. Lysyuk. The method of enrichment of regulatory CD4 + CD25 + FOXP3 + T-cells human ex vivo. Patent for invention No. 2437933, 2011

17. de Rezende, L.C., et al., Regulatory T cell as a target for cancer therapy. Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 2010. 58(3): p. 179-90.17. de Rezende, L.C., et al., Regulatory T cell as a target for cancer therapy. Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 2010.58 (3): p. 179-90.

18. Dannull, J., et al., Enhancement of vaccine-mediated antitumor immunity in cancer patients after depletion of regulatory T cells. J Clin Invest, 2005. 115(12): p. 3623-33.18. Dannull, J., et al., Enhancement of vaccine-mediated antitumor immunity in cancer patients after depletion of regulatory T cells. J Clin Invest, 2005.115 (12): p. 3623-33.

19. Jocham, D., et al., Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy: phase III, randomised controlled trial. Lancet, 2004. 363(9409): p. 594-9.19. Jocham, D., et al., Adjuvant autologous renal tumor cell vaccine and risk of tumor progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy: phase III, randomized controlled trial. Lancet, 2004.336 (9409): p. 594-9.

20. Kugler, A., et al., Autologous and allogenic hybrid cell vaccine in patients with metastatic renal cell carcinoma. Br J Urol, 1998. 82(4): p. 487-93.20. Kugler, A., et al., Autologous and allogenic hybrid cell vaccine in patients with metastatic renal cell carcinoma. Br J Urol, 1998. 82 (4): p. 487-93.

21. Hu, Z., et al., Anti-tumor effects of fusion vaccine prepared by renal cell carcinoma 786-O cell line and peripheral blood dendritic cells of healthy volunteers in vitro and in human immune reconstituted SCID mice. Cell Immunol, 2010. 262(2): p. 112-9.21. Hu, Z., et al., Anti-tumor effects of fusion vaccine prepared by renal cell carcinoma 786-O cell line and peripheral blood dendritic cells of healthy volunteers in vitro and in human immune reconstituted SCID mice. Cell Immunol, 2010.262 (2): p. 112-9.

Claims

The human kidney cancer cell line IBGVAT R 27, used to test antitumor drugs, is stored in the All-Russian collection of industrial microorganisms under the number H-152.