RU2664252C1 - Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность - Google Patents
Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность Download PDFInfo
- Publication number
- RU2664252C1 RU2664252C1 RU2017139043A RU2017139043A RU2664252C1 RU 2664252 C1 RU2664252 C1 RU 2664252C1 RU 2017139043 A RU2017139043 A RU 2017139043A RU 2017139043 A RU2017139043 A RU 2017139043A RU 2664252 C1 RU2664252 C1 RU 2664252C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- fusarium equiseti
- fusarium
- human
- activity against
- Prior art date
Links
- 241000879295 Fusarium equiseti Species 0.000 title claims abstract description 34
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title abstract 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims abstract description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 6
- 201000005264 laryngeal carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 229930191716 enniatin Natural products 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 108010079684 beauvericin Proteins 0.000 description 5
- GYSCAQFHASJXRS-FFCOJMSVSA-N beauvericin Chemical compound C([C@H]1C(=O)O[C@@H](C(N(C)[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)O[C@@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)O[C@@H](C(=O)N1C)C(C)C)C(C)C)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GYSCAQFHASJXRS-FFCOJMSVSA-N 0.000 description 5
- GYSCAQFHASJXRS-UHFFFAOYSA-N beauvericin Natural products CN1C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GYSCAQFHASJXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 5
- MIZMDSVSLSIMSC-VYLWARHZSA-N enniatin B Chemical compound CC(C)[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C(C)C)OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C(C)C)OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C1=O MIZMDSVSLSIMSC-VYLWARHZSA-N 0.000 description 5
- 108010081513 enniatins Proteins 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- COSICWYFCAPPJB-UHFFFAOYSA-N Fusarochromanone Chemical compound OCC(N)CC(=O)C1=CC=C2OC(C)(C)CC(=O)C2=C1N COSICWYFCAPPJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 4
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 4
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 101150017459 fer1 gene Proteins 0.000 description 3
- UJHBVMHOBZBWMX-UHFFFAOYSA-N ferrostatin-1 Chemical compound NC1=CC(C(=O)OCC)=CC=C1NC1CCCCC1 UJHBVMHOBZBWMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 229940049735 fusarium extract Drugs 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 241001533085 Aquilaria sinensis Species 0.000 description 2
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000879141 Fusarium tricinctum Species 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- QNQBPPQLRODXET-YPFNAWONSA-N (3e,5r)-3-[[(1s,2r,4as,6r,8ar)-1,6-dimethyl-2-[(e)-prop-1-enyl]-4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2h-naphthalen-1-yl]-hydroxymethylidene]-5-(hydroxymethyl)-1-methylpyrrolidine-2,4-dione Chemical compound O/C([C@@]1(C)[C@@H]2CC[C@@H](C)C[C@H]2C=C[C@H]1/C=C/C)=C1\C(=O)[C@@H](CO)N(C)C1=O QNQBPPQLRODXET-YPFNAWONSA-N 0.000 description 1
- QNQBPPQLRODXET-AIMHRHHOSA-N (3e,5s)-3-[[(1s,2r,4as,6r,8ar)-1,6-dimethyl-2-[(e)-prop-1-enyl]-4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2h-naphthalen-1-yl]-hydroxymethylidene]-5-(hydroxymethyl)-1-methylpyrrolidine-2,4-dione Chemical compound O/C([C@@]1(C)[C@@H]2CC[C@@H](C)C[C@H]2C=C[C@H]1/C=C/C)=C1\C(=O)[C@H](CO)N(C)C1=O QNQBPPQLRODXET-AIMHRHHOSA-N 0.000 description 1
- 208000036832 Adenocarcinoma of ovary Diseases 0.000 description 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100133185 Caenorhabditis elegans nep-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000226657 Clarkia concinna Species 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000758536 Dikarya Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241001208371 Fusarium incarnatum Species 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000221775 Hypocreales Species 0.000 description 1
- 241000257212 Hypocreomycetidae Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 241000414067 Inonotus obliquus Species 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 231100000757 Microbial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000147158 Nectriaceae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010061328 Ovarian epithelial cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000588265 Peneothello cyanus Species 0.000 description 1
- 241001326562 Pezizomycotina Species 0.000 description 1
- 231100000674 Phytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 101100496572 Rattus norvegicus C6 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241001326533 Sordariomycetes Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005911 anti-cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- MIZMDSVSLSIMSC-OGLSAIDSSA-N enniatin Chemical compound CC(C)C1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C1=O MIZMDSVSLSIMSC-OGLSAIDSSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- QNQBPPQLRODXET-UHFFFAOYSA-N equisetin Natural products CC=CC1C=CC2CC(C)CCC2C1(C)C(O)=C1C(=O)C(CO)N(C)C1=O QNQBPPQLRODXET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 208000013371 ovarian adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006588 ovary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000210 trichothecene group Chemical class [H][C@]12O[C@]3([H])[C@H]([*])[C@@H]([*])[C@@](C)(C33CO3)C1(C[*])C([*])C([*])C(C)=C2 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti Т-14 обладает ингибирующей активностью против вируса простого герпеса 2 типа, вируса гриппа A/H1N1/California/2009 и цитостатической противоопухолевой активностью в отношении карциномы гортани (Нер-2), миеломы костного мозга человека (IM-9), лимфомы человека (Namalva). Штамм Fusarium equiseti депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ F–1302 и может быть использован для получения противоопухолевых и противовирусных препаратов. Изобретение позволяет получать соединения, проявляющие ингибирующую активность в отношении клеток опухолей и некоторых вирусов, патогенных для человека. 1 ил., 4 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к штамму микроскопического гриба Fusarium equiseti, этилацетатный экстракт которого содержит комплекс соединений, проявляющих противоопухолевую и противовирусную активность и может быть использован в биотехнологии и микробиологической промышленности для получения противоопухолевых и противовирусных препаратов.
Заявляемый штамм относится к роду анаморфных плесневых микроскопических грибов Fusarium.
Известно, что штаммы гриба Fusarium equiseti обладают способностью продуцировать такие метаболиты, как циклогексадепсипептиды боверицин [Logrieco A, Moretti A, Castella G, Kostecki М, Golinski Р, Ritieni А, Chelkowski. Beauvericin production by Fusarium species. J. Appl Environ Microbiol. 1998. 64(8):3084-8] и энниотины A, A1, В, B1 [Covarelli L, Beccari G, Prodi A, Generotti S, Etruschi F, Meca G, Juan C, Manes J. Biosynthesis of beauvericin and enniatins in vitro by wheat Fusarium species and natural grain contamination in an area of central Italy. Food Microbiol. 2015. 46:618-26], эквизетин [M.H. Wheeler, R.D. Stipanovic, L.S. Puckhaber. Phytotoxicity of equisetin and epi-equisetin isolated from Fusarium equiseti and F. pallidoroseum. Mycological Research, Volume 103, Issue 8, 1999, Pages 967-973; патент США US 3959468 A] и фузарохроманон [Elahe Mahdavianl, Phillip Palyok, Steven Adelmund, Tara Williams-Hart, Brian D Furmanski, Yoon-Jee Kim, Ying Gu, Mansoureh Barzegar, Yang Wu, Kaustubh N Bhinge, Gopi K Kolluru, Quincy Quick, Yong-Yu Liu, Christopher G Kevil, Brian A Salvatore, Shile Huang and John L Clifford. Biological activities of fusarochromanone: a potent anti-cancer agent. Mahdavian et al. BMC Research Notes 2014, 7:601].
Смесь энниатинов A, A1, В, B1 в микромолярных концентрациях может оказывать цитостатическое или цитотоксическое действие на ряд клеточных линий, полученных из таких разных опухолевых тканей, как карциномы, саркомы, лейкемии и нейронного происхождения [Dornetshuber R, Heffeter Р, Kamyar MR, Peterbauer T, Berger W, Lemmens-Gruber R. Enniatin exerts p53-dependent cytostatic and p53-independent cytotoxic activities against human cancer cells.Chem Res Toxicol. 2007. 20(3):465-73]. Энниатины A1, B, B1, выделенные из эндофитного штамма Fusarium tricinctum, проявили умеренную цитотоксичность (АС50 10-25 мкМ) в отношении линии Hep G2 (культура опухолевых клеток человека, полученная из ткани донора с высокодифференцированной гепатоцеллюлярной карциномой) и клеток глиомы крысы С6, но обладали более сильным воздействием (АС50 1-2,5 мкМ) на клетки гепатомы крысы H4IIE [
W, Debbab A, Hohlfeld A, Chovolou Y, 
A, Edrada RA, Ebel R, Hakiki A, Mosaddak M, Totzke F, Kubbutat MH, Proksch P. Enniatins A1, В and B1 from an endophytic strain of Fusarium tricinctum induce apoptotic cell death in H4IIE hepatoma cells accompanied by inhibition of ERK phosphorylation. Mol Nutr Food Res. 2009. 53(4):431-40].
В опытах in vitro смесь энниатинов A, A1, B, B1 предотвращала индуцируемую HIV-1 гибель лимфобластоидных клеток человека с «терапевтическим индексом» около 200 [McKee ТС, Bokesch HR, McCormick JL, Rashid MA, Spielvogel D, Gustafson KR, Alavanja MM, Cardelline JH 2nd, Boyd MR. Isolation and characterization of new anti-HIV and cytotoxic leads from plants, marine, and microbial organisms. J Nat Prod. 1997. 60(5):431-8].
Показана цитотоксичность микромолярных концентраций боверицина в опытах с линиями мастоцитомы Р815, лимфомы Yac-1 и тимомы EL-4 мышей [Ojcius DM, Zychlinsky A, Zheng LM, Young JD-E. Ionophoreinduced apoptosis: role of DNA fragmentation and calcium fluxes. Exp Cell Res 1991; 197:43-9], опухоли RBL-1 крысы, фибробластоидных клеток африканской зеленой мартышки CV-1, лимфомы Беркетта IARC/BL 41, карциномы Hela и гепатомы Hep G2 [Logrieco A, Moretti A, Ritieni A, Caiaffa MF, Macchia L. Beauvericin: chemistry biology and significance. In: Upadhyay R, editor. Advances in microbial toxin research and its biotechnological exploitation. New York: Kluwer Academic; 2002. p.23-30; Macchia L, Di Paola R, Fornelli F, Nenna S, Moretti A, Napoletano R, Logrieco A, Caiaffa MF, Tursi A, Bottalico A. Cytotoxicity of beauvericin to mammalian cells. In: Proceedings of the International Seminar on Fusarium Mycotoxin, Taxonomy and Pathogenicity, 1995 May 9-13; Martina Franca, Bari, Italy. Abstract book. p. 72-3]. Боверицин способен вызывать апоптоз клеточных линий миелоидного происхождения [Calo L, Fornelli F, Ramires R, Nenna S, Tursi A, Caiaffa MF, Macchia L. Cytotoxic effects of the mycotoxin beauvericin to human cell lines of myeloid origin.Pharmacol Res. 2004. 49(l):73-7] и немелкоклеточнго рака легкого А549 [Lu CL, Lin HI, Chen BF, Jow GM. Beauvericin-induced cell apoptosis through the mitogen-activated protein kinase pathway in human nonsmall cell lung cancer A549 cells. J Toxicol Sci. 2016; 41(3):429-37].
Известен способ получения биологически активного вещества циклодепсипептида, обладающего иммуностимулирующим действием на организм путем многоступенчатой экстрации трихлорэтиленом мицелия штамма микроскопического гриба Fusarium equiseti (номер штамма Saccardo №213107) с последующей обработкой полученного осадка гексаном и повторной экстракцией раствором метанола (патент США №4233291, МПК А61К 39/00, опубл. 18.07.1982 г.).
Известен способ ингибирования ангиогенеза у людей или животных, включающий введение указанным пациентам терапевтически активной дозы водорастворимого фузарохроманона, выделенного из грибных культур, где указанный водорастворимый фузарохроманон вводят через фармацевтически или ветеринарно приемлемый носитель на некоторое время, эффективный для ингибирования образования новых кровеносных сосудов у указанного пациента. Указанный водорастворимый фузарохроманон выбран из группы, состоящей из FC101 и аналога FC101. Водорастворимый фузарохроманон выделяют из культур Fusarium equiseti (заявка США №2001011100, МПК A61K 36/06; А61Р 35/00, опубл. 02.08.2001 г.).
Наиболее близким аналогом (прототипом) является эндофитный штамм Fusarium equiseti, из культуральной жидкости которого получают путем этилацетатной экстракции биологически активные вещества, обладающие противоопухолевой и антимикробной активностью [Cui JL, Guo SX, Xiao PG. Antitumor and antimicrobial activities of endophytic fungi from medicinal parts of Aquilaria sinensis. J Zhejiang Univ Sci B. 2011.12(5):385-92]. Штаммы Fusarium equiseti выделены из ткани стебля Aquilaria sinensis. Экстракт штамма Fusarium equiseti HNAS 11 обладал высокой ингибирующей активностью зон роста Bacillus subtilis, а экстракт штамма Fusarium equiseti YNAS07 проявил высокую антагонистическую способность в отношении Staphylococcus aureus и среднюю ингибирующую скорость роста опухолевых клеток линий SKOV3 (клетки аденокарциномы яичника человека) и 293-Т (клеточная линия, полученная из эмбриональных клеток человека).
Однако во всех выше приведенных аналогах и прототипе отсутствуют сведения о том, что экстракты веществ из биомассы штаммов микроскопического гриба Fusarium equiseti обладают одновременно противоопухолевым и противовирусным действием.
Техническим результатом заявляемого изобретения является получение штамма микроскопического гриба Fusarium equiseti, продуцирующего соединения, экстрагируемые этилацетатом, проявляющие активность в отношении клеток опухолей и некоторых вирусов, патогенных для человека.
Указанный технический результат достигается получением из природной среды нового штамма гриба Fusarium equiseti Т-14 (авторское название), этилацетатные экстракты которого содержат соединения с противовирусной и противоопухолевой (цитостатической) активностью. Ингибирующая активность проявляется против вируса простого герпеса 2 типа, вируса гриппа A/H1N1/California/2009 и цитостатическую противоопухолевую активность в отношении карциномы гортани (Нер-2), миеломы костного мозга человека (IM-9), лимфомы человека (Namalva). Штамм Fusarium equiseti Т-14 выделен из бесплодного тела трутовика скошенного Inonotus obliquus (чага) с. Малиновка Новосибирской обл. в сентябре 2014 г.и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером F-1302 (справка о депонировании прилагается).
Культурально-морфологические особенности штамма на агаризованной питательной среде. На картофеле-глюкозной среде (КГА) образует колонии с беловато-песочным плотным мицелием, колонии с ровным краем, мицелий немного поднимающийся. Размер колоний (при определенном времени инкубации) - 30 мм - 3 суток, 60 мм - 5 суток, 90 мм - 10 суток. Воздушный мицелий песочного цвета, спороношение конидиями, цвет обратной стороны колонии (реверзум) - светло-коричневый. У длительно хранящихся культур цвет колоний становится коричневатым.
Микроморфологические признаки. Гифы с перегородками тонкие, до 2-3-х мкм в диаметре. По мере старения мицелий становится коричневым, в гифах появляются жировые включения. Конидиеносцы у основания прямые, затем образуют ответвления гиф, на которых формируются пучки конидий. Конидии - макроконидии чаще изогнутой, слегка серповидной формы, с 1-5 перегородками, чаще с 3-4, размером 15-40×3-5 мкм, микроконидии образуются редко. По мере старения содержимое средних клеток конидий становится резко очерченным, светящимся при просмотре под микроскопом, концевые клетки при этом выглядят темными, лишенными своего содержимого. В культуре на мицелии образуются округлые коричневые хламидоспоры, размером 7-10 мкм, в цепочках или в виде компактных комочков.
Идентификация штамма Т-14 проведена во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) на основании генетического анализа последовательности 18S rRNA (Отчет ВКПМ от 22.12.2015).
Этапы анализа.
а) Секвенирование участков последовательности, кодирующей ген 18S рРНК.
При секвенировании участка ДНК, кодирующего ген 18S рДНК исследуемого штамма, получена следующая последовательность:
б) Анализ последовательностей гена, кодирующего 18S рРНК.
Анализ сходства нуклеотидной последовательности гена, кодирующего 18S рДНК, изучаемого штамма был проведен с помощью сервера BLAST [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast].
Результаты.
Первичный скрининг по базе данных GenBank показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующей систематической группе: Eukaryota; Fungi; Dikarya; Ascomycota; Pezizomycotina; Sordariomycetes; Hypocreomycetidae; Hypocreales; Nectriaceae; Fusarium.
Для установления филогенетического родства близких видов был использован метод сравнения нуклеотидных последовательностей, кодирующих домен D1/D2 гена 26S р РНК.
При секвенировании участка ДНК, кодирующего домен D1/D2 гена 26S рРНК, получена следующая последовательность:
Анализ филогенетического родства, построенный с использованием штаммов близкородственных микроорганизмов, показал, что наиболее близкими к исследуемому штамму являются виды Fusarium equiseti и Fusarium oxysporum.
Для точного определения видовой принадлежности использовали метод идентификации с помощью видоспецифических праймеров.
Результаты исследования с использованием праймеров, специфичных для и Fusarium oxysporum (FOF1 и FOR1) и Fusarium equiseti (FEF1 и FER1), представлены на фиг. 1., где:
1. Маркер 1kb DNA GeneRuler (10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н., снизу вверх)
2. Результаты реакции с использованием праймеров FOF1 и FOR1
3. Результаты реакции с использованием праймеров FEF1 и FER1
Отсутствие фрагментов п.н. при использовании видоспецифических праймеров FOF 1 и FOR1 позволяет утверждать, что исследуемый штамм не относится к виду Fusarium oxysporum. Наработка фрагмента ДНК размером 389 п.н. при использовании видоспецифических праймеров FEF1 и FER1, позволяет отнести исследуемый штамм к виду Fusarium equiseti.
По результатам проведенного анализа нуклеотидной последовательности, кодирующей часть генов рРНК, а также метода идентификации с использованием видоспецифических праймеров установлено, что исследуемый штамм наиболее близок к виду Fusarium equiseti (97%).
Биологическая активность веществ, содержащихся в биомассе заявляемого штамма определяется в отношении вирусов и опухолевых клеток. Для ее определения могут быть использованы этилацетатные экстракты биомассы гриба, выращенной в глубинной культуре или на агаризованной среде.
Активность определяется по способности в условиях in vitro тормозить рост опухолевых клеток, например, Нер-2 (карцинома гортани) или оказывать вирулицидный эффект (ингибировать процесс репликации вируса) в клеточных культурах (Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное сырье. - М.: Медицина, 1990. - II изд. - Вып. 2. - Т. 2. - С. 187-209; Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с; Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США, под ред. З.П. Софьиной, А. Голдина. М.: Медицина, 1980. - С. 105-106).
Штамм хранится в виде культур, выращенных на скошенной агаризованной среде (картофельно-глюкозный агар, среда Чапека) в пробирках при температуре (2-6)°С - 12 месяцев, а также в виде агаровых блоков в стерильной воде при (2-6)°С -12 месяцев.
Оптимальные среды для пересевов:
- жидкая на основе мелассы и кукурузного экстракта, г: кукурузный экстракт- 10,0; меласса свекловичная - 80,0; KH2PO4 - 1,2; MgSO4 × 7H2O - 2,0; NaNO3 - 3.0, вода водопроводная - до 1 л.
- агаризованная на основе мелассы и кукурузного экстракта (к жидкой среде, указанной выше, добавляется агар-агар из расчета 20 г на 1 л подготовленной среды).
Штамм не является генетически модифицированным и не содержит генов других организмов, перенесенных генов резистентности, генетических изменений, связанных с использованием генно-технических методик.
Преимуществом заявляемого штамма является способность этилацетатных экстрактов ингибировать развитие некоторых патогенных вирусов и опухолевых клеток человека.
Оценка токсигенного потенциала патентуемого штамма проводилась методом ВЭЖХ/МС, в Раменском центре контроля зерна с использованием утвержденного способа определения зараженности кормовых и пищевых продуктов. При используемых условиях культивирования не показано наличия в биомассе микотоксинов трихотеценового ряда, фуманизинов и группы других микотоксинов, синтезируемых представителями видов грибов рода Fusarium.
На фиг. 1 представлена электрофореграмма, касающаяся исследования видовой принадлежности исследуемого штамма с использованием видоспецифических праймеров.
Пример 1. Выращивание биомассы гриба на основе заявляемого штамма Fusarium equiseti Т-14 глубинным способом. Глубинное культивирование осуществляется на жидкой среде: кукурузный экстракт - 10,0; меласса свекловичная - 80,0; KH2PO4 - 1,2; MgSO4 × 7H2O - 2,0; NaNO3 - 3.0; вода водопроводная - до 1 л.
Среда разливается в колбы по 100 мл, засев производится спорово-мицелиальной суспензией гриба из расчета 5 мл на 100 мл среды. Суспензию получают из агаризованной культуры гриба, выращенной в биологической пробирке на скошенном агаре. В пробирку вливают 20 мл стерильной воды, при помощи стерильной стеклянной пипетки или шпателя снимают мицелий с конидиями и производят встряхивание для получения более равномерного распределения конидий и обрывков гиф в воде. Колбы помещают в термостатированные качалки в течение 3-4-х суток производится выращивание биомассы при температуре 28°С и скорости 180 оборотов/мин. Готовая биомасса имеет светло коричневатый цвет и творожистую консистенцию, а также содержит не менее 15 г/л сухих веществ.
Используют следующие схемы выделения метаболитов, обладающих интересуемым спектром биологической активности.
Пример 2. Получение экстрактов из биомассы и культуральной жидкости Fusarium equiseti Т-14. Полученную глубинную жидкую культуру разделяли пропусканием через стеклянный фильтр №3, покрытый бумажным фильтром (типа «красная лента»). Влажную биомассу (мицелий) промывали дистиллированной водой и высушивали при 30°С в течение 12 часов. Извлечение метаболитов проводили экстракцией этил ацетатом в отношении 1:5 (масса:объем) при комнатной температуре в течение 24 часов. Операцию повторяли трижды. Объединенные экстракты промывали дистиллированной водой в делительной воронке. Концентрирование верхней фазы органического растворителя проводили выпариванием под вакуумом на роторном испарителе при температуре 45°С. Получали маслянистую жидкость коричневого цвета.
Экстракцию из культуральной жидкости проводили трижды этилацетатом в сотношении 1:2 (объем:объем). Экстракты объединяли, промывали дистиллированной водой и концентрировали выпариванием в вакууме на роторном испарителе при 45°С. Выход интересующей фракции составил около 200 мг/1 литр жидкой культуры гриба.
Пример 3. Определение цитотоксической активности заявляемого штамма Fusarium equiseti Т-14 в отношении клеток карциномы гортани Нер-2. Для изучения цитотоксической активности использовали МТТ-тест. Изучаемые соединения тестировали в трех параллельных измерениях при 6-и концентрациях - 10-8, 10-7, 10-6, 10-5, 10-4 и 10-3. Затем по кривой зависимости роста клеток от концентрации соединения определяли ИК50, то есть концентрацию препарата, вызывающую торможение роста клеток на 50%. После определения ИК50 проводили дополнительное тестирование при 4-5 концентрациях, близких к ИК50.
Критерий оценки цитотоксического эффекта. Соединение считается цитотоксически активным при ИК50≤10-4, аналог известного противоопухолевого препарата оценивается как цитотоксичный, если его ИК50≤ИК50 препарата сравнения.
МТТ-тест основан на ферментном восстановлении неокрашенной соли тетразолия (3-[4,5-диметилтиозол-2-ил]-2,5-дифенилтетрозолия бромид, МТТ) в живых метаболически активных клетках с образованием голубых кристаллов формазана.
Постановка эксперимента. Культуру клеток карциномы гортани Нер-2 в концентрации 5×103 в 100 мкл среды Игла MEM (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора), содержащей 10% сыворотки крови плодов коровы (Gibco, США), помещали в 96-луночный планшет и инкубировали 24 ч при 37°С. Затем добавляли исследуемые соединения в различных концентрациях и инкубировали 48 ч при тех же условиях. После этого, в каждую лунку планшета добавляли по 5 мкл готового раствора МТТ (Sigma, США) (исходная концентрация 5 мг/мл) и дополнительно инкубировали 4 ч. По окончанию инкубации добавляли в каждую лунку планшета по 100 мкл диметилсульфоксида (ДМСО) для растворения образовавшихся в результате реакции синих кристаллов формазана и оценивали значения оптической плотности субстрата в лунках на микропланшетном ридере Tecan Sunrise (Tecan, Австрия) при длине волны 492 нм.
В качестве отрицательного контроля использовали клетки Нер-2 без добавления исследуемого препарата. В качестве референс-препарата (положительный контроль) использовали противоопухолевый препарат Цисплатин (Лэнс-Фарм, Россия).
Образец этилацетатного экстракта фузариума (штамм Fusarium equiseti Т-14) показал цитотоксический эффект (таблица 1) в концентрациях 10-3 и 10-5, сравнимый с положительным контролем (Цисплатином) в этих же концентрациях. Так, экстракт фузариума в концентрации 10-5 показал % жизнеспособности клеток 56,83%, Цисплатин в этой же концентрации - 52,45%; экстракт фузариума в концентрации 10" показал 37,85%, Цисплатин в этой же концентрации 31,32%.
Таким образом, можно сделать вывод, что образец экстракта фузариума (штамм Fusarium equiseti Т-14) оказывал цитотоксическое действие на культуру клеток Нер-2 в МТТ-тесте, сравнимое с противоопухолевым препаратом Цисплатином.
Пример 4. Определение цитотоксической активности заявляемого штамма Fusarium equiseti Т-14 в отношении клеток миеломы костного мозга человека (IM-9), лимфомы человека (Namalva). В соответствии с методикой, приведенной в примере 3, были проведены исследования на цитотоксичность этилацетатного экстракта биомассы штамма Fusarium equiseti Т-14 в отношении других опухолевых клеток: миеломы костного мозга человека (IM-9), лимфомы человека (Namalva). Результаты, свидетельствующие о цитостатической активности экстрактов из глубинной культуры Fusarium equiseti Т-14, представлены в таблице 2.
Пример 5. Исследование токсичности и противовирусной активности этилацетатного экстракта Fusarium equiseti Т-14 в отношении вируса простого герпеса второго типа (ВПГ-2). Оценку активности этилацетатного экстракта из глубинной культуры Fusarium equiseti Т-14 в отношении вируса простого герпеса 2 типа проводили в культуре клеток Vero. В работе был использован штамм MS вируса простого герпеса 2 типа (получен из Американской коллекции типовых культур). Приготовленные разведения препаратов наносили на двухсуточную культуру (по 3 повторам на каждое разведение), за исключением контрольных лунок (контроль вируса и контроль клеток). Для оценки токсичности образцов клетки окрашивали раствором генциан-виолета. Результаты окрашивания регистрировали с помощью фотометра 680 Земфира с управляющим компьютером BioRed RU Zemf в соответствии с инструкцией производителя. Получали показатели оптической плотности (ОП) для каждой из лунок планшета при длине волны 570 нм. Вычисляли среднее значение ОП для каждой группы из трех лунок с различными концентрациями образца. По полученным значениям строили график зависимости ОП от концентрации образца. По графикам определяли 50% токсическую концентрацию (ТС50). Для определения противовирусной активности в лунки добавляли вирус в дозе 2×10-5 БОЕ/клетку (объем рабочей смеси составлял 100 мкл). Учет реакции проводили на 4 сутки. Оценка активности проводилась при помощи метода ингибирования бляшкообразования. Клетки окрашивали генциан-виолетом. Процент ингибирования бляшкообразования (%ИБ) определяли по формуле: %ИБ=[1 - (число бляшек в тесте / количество бляшек в контроле вируса)] × 100. Определяли концентрацию, способную ингибировать развитие 50% бляшкообразующих единиц (БОЕ) от количества БОЕ в контроле (50% ингибирующую концентрацию - IC50). Вычисляли среднее значение %ИБ для каждой группы из двух лунок с различными концентрациями образца. По полученным значениям строили график зависимости %ИБ от концентрации образца. По графикам определяли IC50 - Индекс селективности (IS) определяли как отношение 50% токсической дозы к 50% ингибирующей дозы. Результаты приведены в таблице 3.
Примечание: TC50 - 50% токсическая доза: доза препарата, подавляющая рост клеток на 50%.
IC50 - ингибирующая доза: доза препарата, ингибирующая размножение вируса на 50%.
IS - индекс селективности, или терапевтический индекс: равен отношению 50% токсической дозы препарата к 50% ингибирующей дозе (TC50//IC50).
Препараты с IS>10 считали высокоактивными, а препараты с IS<2 не активными, препараты с IS между 2 и 10 считали средне активными (Paragas J. et al, 2004).
Пример 4. Исследование токсичности и противовирусной активности этилацетатного экстракта Fusarium equiseti Т-14 отношении вируса гриппа A/California/07/09 (H1N1pdm09) в культуре клеток MDCK (клетки почки собаки). Клетки MDCK рассевали в 96-луночных планшетах с посевной концентрацией 300000 кл./мл по 100 мкл в лунке Разведения исследуемых образцов этилацетатного экстракта из глубинной культуры Fusarium equiseti Т-14 готовили в поддерживающей среде. В работе использовали последовательные двоичные разведения образцов. Приготовленные разведения препаратов наносили на суточную культуру (по 3 повтора на каждое разведение), за исключением контрольных лунок (контроль вируса и контроль клеток). Для определения противовирусной активности в лунки добавляли вирус в дозе 100 ТЦИД50/лунку. Учет реакции проводили на 3 сутки. Оценка активности образцов была проведена с использованием красителя нейтрального красного. Результаты теста регистрировали с помощью фотометра 680 Земфира с управляющим компьютером BioRed RU Zemf в соответствии с инструкцией производителя. Получены показатели оптической плотности при длине волны 490 нм для каждой из лунок планшета. Для каждого разведения вычисляли среднее значение ОП. По полученным значениям строили графики зависимости ОП от концентрации препарата. По графикам определяли ТС50 и IC50. Индекс селективности (IS) рассчитывали, как отношение ТС50 к IC50 Результаты представлены в таблице 4.
Таким образом, данные, приведенные в примерах 2-5 подтверждают заявляемый технический результат, заключающийся в том, что штамм гриба Fusarium equiseti Т-14 продуцирует соединения, экстрагируемые из биомассы этилацетатом, проявляющие ингибирующую активность в отношении клеток опухолей и некоторых вирусов, патогенных для человека.
Claims (1)
- Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti Т-14, содержащий в биомассе биологически активные вещества, проявляющие ингибирующую активность против вируса простого герпеса 2 типа, вируса гриппа A/H1N1/California/2009 и цитостатическую противоопухолевую активность в отношении карциномы гортани (Нер-2), миеломы костного мозга человека (IM-9), лимфомы человека (Namalva) и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИгенетика под номером F-1302.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139043A RU2664252C1 (ru) | 2017-11-09 | 2017-11-09 | Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139043A RU2664252C1 (ru) | 2017-11-09 | 2017-11-09 | Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2664252C1 true RU2664252C1 (ru) | 2018-08-15 |
Family
ID=63177361
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017139043A RU2664252C1 (ru) | 2017-11-09 | 2017-11-09 | Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2664252C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114836330A (zh) * | 2022-06-14 | 2022-08-02 | 甘肃中商食品质量检验检测有限公司 | 一种蜡样芽孢杆菌的抑制物制备方法及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4233291A (en) * | 1977-11-30 | 1980-11-11 | Science Union Et Cie | Novel biological substance from a fungus and the process for producing the same |
-
2017
- 2017-11-09 RU RU2017139043A patent/RU2664252C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4233291A (en) * | 1977-11-30 | 1980-11-11 | Science Union Et Cie | Novel biological substance from a fungus and the process for producing the same |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CUI JL, GUO SX, XIAO PG. et. al., Antitumor and antimicrobial activities of endophytic fungi from medicinal parts of Aquilaria sinensis, J Zhejiang Univ Sci B., 2011, 12(5), p. 385-392. * |
| RUBELLA S. GOSWAMI, et.al., Host range and mycotoxin production by Fusarium eauiseti isolates originating from ginseng fields, Can. J. plant Phatol, 2008, v.30, p. 155-160. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114836330A (zh) * | 2022-06-14 | 2022-08-02 | 甘肃中商食品质量检验检测有限公司 | 一种蜡样芽孢杆菌的抑制物制备方法及应用 |
| CN114836330B (zh) * | 2022-06-14 | 2024-03-29 | 甘肃中商食品质量检验检测有限公司 | 一种蜡样芽孢杆菌的抑制物制备方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Choi et al. | Apoptosis‐inducing effect of diketopiperazine disulfides produced by Aspergillus sp. KMD 901 isolated from marine sediment on HCT116 colon cancer cell lines | |
| Sun et al. | Antifungal and cytotoxic activities of the secondary metabolites from endophytic fungus Massrison sp. | |
| CN111000876B (zh) | 红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤多药耐药性为敏感性的药物中的应用 | |
| Chatterjee et al. | Inhibition of biofilm-and hyphal-development, two virulent features of Candida albicans by secondary metabolites of an endophytic fungus Alternaria tenuissima having broad spectrum antifungal potential | |
| Bhimba et al. | Characterization of cytotoxic compound from mangrove derived fungi Irpex hydnoides VB4 | |
| Gozari et al. | Screening and characterization of marine actinomycetes from the northern Oman Sea sediments for cytotoxic and antimicrobial activity | |
| Hussein et al. | Improving conditions for gliotoxin production by local isolates of Aspergillus fumigatus | |
| Ruiz-Torres et al. | Marine invertebrate extracts induce colon cancer cell death via ROS-mediated DNA oxidative damage and mitochondrial impairment | |
| Karanam et al. | Anticancer effect of marine sponge-associated Bacillus pumilus AMK1 derived dipeptide Cyclo (-Pro-Tyr) in human liver cancer cell line through apoptosis and G2/M phase arrest | |
| Boulis et al. | Diverse bioactive metabolites from Penicillium sp. MMA derived from the red sea: structure identification and biological activity studies | |
| Liu et al. | Elicitation of alkaloids in in vitro PLB (protocorm-like body) cultures of Pinellia ternata | |
| Qian et al. | A bilobalide-producing endophytic fungus, Pestalotiopsis uvicola from medicinal plant Ginkgo biloba | |
| Lakshmi et al. | Anticancer potentials of secondary metabolites from endophytes of Barringtonia acutangula and its molecular characterization | |
| Bhimba et al. | Phthalate derivatives from the marine fungi Phoma herbarum VB7 | |
| RU2664252C1 (ru) | Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность | |
| CN113801032B (zh) | 一种长链脂肪酸甘油醇类化合物Rubracin B、制备方法及其应用 | |
| Hussein et al. | Cytotoxicity and 1H NMR metabolomics analyses of microalgal extracts for synergistic application with Tamoxifen on breast cancer cells with reduced toxicity against Vero cells | |
| Setyowati et al. | In-vitro cytotoxicity and apoptosis mechanism of ethyl acetate extract from Trichoderma reesei strain TV221 associated with marine sponge: Stylissa flabelliformis | |
| CN110590769B (zh) | 一对喹唑啉酮生物碱对映体及其制备方法和应用 | |
| Shanmugam et al. | Developmental stages and secondary compound biosynthesis of mycobiont and whole thallus cultures of Buellia subsororioides | |
| Suja et al. | Anticancer activity of compounds isolated from marine endophytic fungus Aspergillus terreus | |
| CN107903210B (zh) | 一种小分子抑制剂sld4650及其在制药中的应用 | |
| Salem et al. | GC–MS analysis, cytotoxicity, and molecular docking studies of bioactive alkaloids extracted from tomato leaves inoculated with endophytic fungus Beauveria sp. AUMC 15401 | |
| Lee et al. | EffectsEffects of Myxococcus fulvus KYC4048 Metabolites on Breast Cancer Cell Death | |
| Bakhtra et al. | Cytotoxic activity of marine sponge-derived fungus Penicillium citrinum Xt6 |