RU2662094C1 - Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью - Google Patents
Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2662094C1 RU2662094C1 RU2017129063A RU2017129063A RU2662094C1 RU 2662094 C1 RU2662094 C1 RU 2662094C1 RU 2017129063 A RU2017129063 A RU 2017129063A RU 2017129063 A RU2017129063 A RU 2017129063A RU 2662094 C1 RU2662094 C1 RU 2662094C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peat
- interleukin
- humic
- sphagnum
- production
- Prior art date
Links
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims description 5
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims abstract description 87
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims abstract description 43
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 10
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 claims description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 18
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 abstract description 9
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 abstract description 8
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 abstract description 8
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 abstract description 8
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 abstract description 7
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 abstract description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 abstract description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 abstract description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 abstract description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 abstract description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 abstract 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 abstract 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 18
- 125000003118 aryl group Chemical class 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 10
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 10
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 10
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 9
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- -1 silts Substances 0.000 description 8
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 7
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 2
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000005420 bog Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 239000003864 humus Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 229960002796 polystyrene sulfonate Drugs 0.000 description 2
- 239000011970 polystyrene sulfonate Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003026 Acene Polymers 0.000 description 1
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 101100259985 Caenorhabditis elegans tbg-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000577218 Phenes Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 229930189077 Rifamycin Natural products 0.000 description 1
- 238000011869 Shapiro-Wilk test Methods 0.000 description 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 description 1
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 150000003934 aromatic aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-BQVAUQFYSA-N chembl1523493 Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O\C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)/C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C(O)=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2C=NN1CCN(C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-BQVAUQFYSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N cinnamic acid group Chemical class C(C=CC1=CC=CC=C1)(=O)O WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 238000001663 electronic absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002265 electronic spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000002509 fulvic acid Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000004442 gravimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000403 immunocorrecting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000002440 industrial waste Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 125000002080 perylenyl group Chemical group C1(=CC=C2C=CC=C3C4=CC=CC5=CC=CC(C1=C23)=C45)* 0.000 description 1
- CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N peryrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=3C2=C2C=CC=3)=C3C2=CC=CC3=C1 CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004291 polyenes Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 229960003292 rifamycin Drugs 0.000 description 1
- HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N rifamycin SV Chemical compound OC1=C(C(O)=C2C)C3=C(O)C=C1NC(=O)\C(C)=C/C=C/[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@@H](OC)\C=C\O[C@@]1(C)OC2=C3C1=O HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004016 soil organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004449 solid propellant Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N stilbene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000457 tarsus Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/02—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution from inanimate materials
- A61K35/10—Peat; Amber; Turf; Humus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается водорастворимых гуминовых кислот, выделенных из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа для коррекции нарушений в иммунной системе при патологических состояниях, связанных с недостаточностью Th1-зависимого иммунного ответа. Изобретение обеспечивает расширение арсенала таргетных нетоксичных иммуномодулирующих средств растительного происхождения за счет селективного повышения продукции провоспалительных цитокинов интерлейкина-2, интерлейкина-12, фактора некроза опухоли-альфа макрофагами и интерферона-гамма лимфоцитами, сопровождающееся отсутствием влияния на продукцию интерлейкина-4 и интерлейкина-10. 2 ил., 12 табл., 2 пр.
Description
Изобретение, относящееся к медицине, конкретно к фармакологии, результаты которого могут быть использованы для коррекции нарушений в иммунной системе при патологических состояниях, связанных с недостаточностью Th1-зависимого иммунного ответа (хронические, вялотекущие и рецидивирующие инфекционные, а также онкологические заболевания).
Гуминовые вещества - основная органическая составляющая почвы, воды, твердых полезных ископаемых, образующихся при разложении растительных и животных остатков под действием микроорганизмов и абиотических факторов окружающей среды. Запасы гуминовых веществ планеты можно считать неограниченными, поскольку гумификация - это «всеобщий процесс постмортального превращения органических остатков, он может протекать в почвах, природных водах, илах, торфах, при углеобразовании и образовании горючих сланцев, любых каустобиолитов… его нельзя ограничивать только почвенной средой» [13]. Гумификация является глобальным явлением, свойственным любой почве, начиная от старых почв арктических пустынь, черноземов и тропиков до довольно молодых на техногенных отвалах или вулканических пеплах. В процессе гумификации образуется особый класс высокомолекулярных органических азотсодержащих природных соединений, не существующих в живых организмах - гумусовых кислот (гидрокси-, оксокарбоновых кислот с ароматическим ядром), делящихся, в свою очередь, на темноокрашенные гуминовые кислоты (ГК), растворимые в щелочах и нерастворимые в кислотах, гиматомелановые кислоты, растворимые в этаноле и фульвовые кислоты, растворимые в водных растворах кислот [3].
Состав гумусовых веществ торфяников, содержание функциональных групп и молекулярных фрагментов (по данным 13С-ЯМР) зависит от ботанического вида исходных растительных остатков, степени гумификации (разложения) растительного опада, а также климатических условий периода формирования почвенного органического вещества [4, 6, 12, 15, 29].
Гуминовые кислоты торфа - высокомолекулярные азотсодержащие соединения циклического строения, представляющие собой смесь темноокрашенных органических, высокомолекулярных, в основном ароматических, метоксисодержащих, гидрокси- и оксокарбоновых кислот, объединенных общим типом строения, но имеющих некоторые различия, определяемые их происхождением [11].
Несмотря на недостаточную изученность, вещества гуминовой природы давно и широко применяются во многих отраслях деятельности человека: в промышленности при нефте- и газодобыче, для ремедиации территорий, загрязненных отходами производства, в сельском хозяйстве в качестве ветеринарных препаратов [24] и компонентов органоминеральных удобрений [16].
В последние годы и в экспериментальной медицине наблюдается повышение интереса к использованию ГК. Получены весомые результаты, как подтверждающие их фармакологические противоопухолевые, гепатопротекторные, ранозаживляющие свойства, так и предполагаемые механизмы действия [2, 9, 27, 28]. Показано, что ГК различной этиологии и разных физико-химических характеристик обладают широким спектром плейотропных иммунологических эффектов - оказывают влияние на поляризацию иммунокомпетентных клеток по классическому или альтернативному пути за счет селективной секреции про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α и ИНФ-γ) [18, 25], обладают противовирусной активностью против вирусов герпеса 1 и 2 типов (HSV1, HSV2), респираторного и цитомегаловируса человека (HCMV, RSV) in vitro [17] и иммунокоррегирующими свойствами на фоне антибактериальной терапии рядом антибиотиков (ампициллин, амикацин, доксициклин, рифампицин, рифамицин), а также способствует значительной локализации воспаления и усилению сосудообразования при ксенотрансплантации [22]. Также ГК способны действовать как мощные антиприонные агенты при лечении нейродегенеративных расстройств у животных [21] и проявлять синергический цитотоксический эффект на β-амилоидный белок на модели SK-N-MC нервных клеток человека [19]. Кроме того, ГК не проявляют токсических эффектов в широкой линейке доз у экспериментальных животных при пероральном или накожном применении [8, 26].
Известно, что эффективный иммунный ответ зависит от поляризации антигенпрезентирующих клеток, прежде всего макрофагов. Функциональное состояние МФ определяется способом утилизации L-аргинина и изменением цитокинового профиля: Th1-цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-12, ИНФ-γ и ФНО-α), стимулируя цитотоксические лимфоциты и натуральные киллеры, являются основными индукторами клеточно-опосредованного иммунного ответа и ассоциированных с ним воспалительных реакций; Тh2-цитокины (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-13, ТФР-β активируют В-лимфоциты и определяют таким образом гуморальный иммунный ответ. Классически активированные МФ преобразуют L-аргинин с помощью индуцибельной NO-синтазы в оксид азота и цитруллин, а альтернативно активированные - с помощью аргиназы в мочевину и орнитин, приводя, соответственно, к развитию Th1 или Th2 типа иммунного ответа [20, 23].
Однако применение гуминовых веществ в медицине на текущий момент является сложной задачей. Это связано с тем, что ГК не имеют привычного стехиометрического состава и регулярного строения, обладают полидисперсностью и широкой гетерогенностью структурных элементов, а также могут значительно отличаться между собой по свойствам в зависимости не только от вида исходного сырья, но и от способа их извлечения - выщелачивающего реагента [1, 7]. Так, извлечение ГК из торфа водными растворами гидроксидов щелочных металлов представляет собой процесс образования солей, имеющих большую степень ионизации в водных растворах, чем сами ГК. Гидроокись натрия среди всех известных экстрагентов ГК имеет самую наибольшую степень диссоциации в водных растворах, поэтому данный экстрагент обладает высокой извлекающей способностью, т.к. растворимость ГК усиливается повышением содержания гидроксильных ионов. При использовании другого щелочного экстрагента - децимолярного раствора пирофосфата натрия происходит внутрисферное замещение лигандов в металло-гуминовых комплексах, поэтому вся специфичность действия пирофосфата натрия сводится к образованию нерастворимых осадков с кальцием и другими многовалентными катионами. Пирофосфат натрия, за счет своих комплексоообразующих свойств, способен разрушать комплексы ковалентного и ионного типов. Пирофосфаты кальция, железа и алюминия труднорастворимы, поэтому параллельно протекает процесс декальцинирования, что способствует более полной экстракции именно свободных (истинных) ГК [10]. Полученные таким образом ГК торфа представляют собой водорастворимый аморфный порошок темно-коричневого цвета, без запаха.
В предыдущих исследованиях нами показано, что ГК, как базовый компонент гуминовых веществ, способны дозозависимо усиливать продукцию оксида азота, не влияя на активность аргиназы, перитонеальными макрофагами (МФ), что предполагает наличие у них потенциальной иммуномодулирующей активности [5].
Задачей данного изобретения является расширение арсенала иммуномодулирующих средств природного происхождения, обладающих способностью избирательной стимуляции продукции макрофагами интерлейкина-12, фактора некроза опухоли-альфа и лимфоцитами интерферона-гамма.
Поставленная задача решается путем применения водорастворимых гуминовых кислот, выделенных экстракцией пирофосфатом натрия из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа, отобранного с глубины 10-50 см на торфяном месторождении «Васюганское» (участок Высокий рям) Бакчарского района Томской области, обладающие способностью к избирательной стимуляции продукции ИЛ-12, ФНО-α и ИФН-γ, для коррекции нарушений в иммунной системе при патологических состояниях, связанных с недостаточностью Th1-зависимого типа иммунного ответа (хронические, вялотекущие и рецидивирующие инфекционные, а также онкологические заболевания).
Принципиально новым в предлагаемом изобретении является применение в качестве иммуномодулирующего средства водорастворимых ГК, выделенных из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа экстракцией пирофосфатом натрия. Новое свойство водорастворимых ГК, выделенных при экстракции пирофосфатом натрия из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа, было обнаружено в результате экспериментальных исследований и для специалиста явным образом не вытекает из уровня техники, и описание этого свойства не обнаружено авторами в патентной и научно-медицинской литературе.
Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям изобретения, а именно - «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».
Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных фигур 1 и 2. На фиг. 1 представлен абсорбционный спектр гуминовых кислот, выделенных из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа. На фиг. 2 представлен молекулярный спектр гуминовых кислот верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа.
С целью получения представительного среднего образца торфа, в котором наиболее полно отражена неоднородность химического состава всей партии анализируемого материала, отбор пробы торфа проводили буром ТБГ-1 в генетическом центре торфяного месторождения «Васюганское» (участок Высокий рям) Бакчарского района Томской области, из середины однородного по ботаническому составу горизонта с глубины 10-50 см, в летний период (июнь-август) согласно ГОСТ 17644-83 «Торф. Методы отбора проб из залежи и обработки их для лабораторных испытаний». В скважине с каждой глубины отбирали только один раз, масса одной пробы составляла не менее 600 г, количество скважин - не менее 50, средняя масса пробы торфа составляла более 30 кг. Согласно проведенному ботаническому и гравиметрическому анализу, а также общетехнической характеристики, отобранный торф охарактеризован как верховой тип, сосново-сфагново-пушицевый вид, степень разложения растительных остатков 30-35%, содержание минеральной примеси (общей золы) - не более 7,2%, содержание биологически активных гуминовых кислот 13,2 масс. %.
Партию торфа высушивали при комнатной температуре на воздухе в хорошо проветриваемом помещении, периодически перемешивая, до воздушно-сухого состояния, измельчали в роторно-ножевой мельнице и просеивали через сито с диаметром отверстий 3 мм, обрабатывали 0,1 моль/л раствором пирофосфата натрия (Na4P2O7) в массовом соотношении 1:50-1:100 в течение 8 часов при постоянном перемешивании в реакторе Р-100 при температуре 25-27°C, отделяли жидкую фазу (экстракт ГК) от осадка (остатка торфа) фильтрованием при помощи системы вакуумной фильтрации (нутч-фильтр), для осаждения ГК из экстракта жидкую фазу обрабатывали хлороводородной кислотой до pH 1-2, выделившиеся ГК разделяли в поле центробежных сил (центрифугированием), отмывали водой очищенной до pH 7 и высушивали при комнатной температуре.
Полученные вышеописанным способом гуминовые кислоты из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа были охарактеризованы по физико-химическим параметрам: элементному составу, электронным и молекулярным спектральным свойствам, молекулярному весу.
1. Элементный состав ГК определяли методом сожжения на C,H,N - анализаторе «Carlo Erba Strumentazione» модель 1106, содержание кислорода определяли по разности.
Элементный состав ГК верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа, представленный в таблице 1, показывает распределение основных конституционных элементов молекулярной структуры вещества и является диагностическим показателем для характеристики субстанции. Атомное отношение элементов углерода и водорода (Н/С=1,11) указывает на ароматический характер молекулы ГК, т.к. содержание водорода всего на 11% выше углерода, следовательно, алифатическая часть молекулы выражена незначительно и/или является полизамещенной различными кислород и азотсодержащими функциональными группами. Соотношение содержания кислорода в ГК относительно углерода порядка 45% свидетельствуют о большом количестве кислородсодержащих функциональных групп, в основном фенольных, карбонильных и карбоксильных групп. Содержание азота в молекуле ГК относительно количества углерода незначительно (около 4%).
2. Регистрацию электронных спектров поглощения 0,001% водных растворов ГК проводили на спектрофотометре Unico 2800 (производство США) в диапазоне длин волн 190-800 нм в кварцевой кювете толщиной 1 см. Из полученных спектров определяли коэффициенты экстинкции, которые характеризуют оптические плотности раствора ГК для слоя 1 см, при концентрации ГК 0,001% при длине волны 465 нм (А465) и 650 нм (A650) и вычисляли коэффициент цветности Q4/6 по Е. Вельте [30] как отношение оптических плотностей при длинах волн 465 и 650 нм (А465/А665).
Электронный спектр ГК верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа представлен на фиг. 1, согласно которой в видимой области (400-800 нм) спектр не имеет четко выраженных максимумов поглощения, и выглядит как пологая кривая, характеризующая сплошное поглощение с постепенным уменьшением оптической плотности по мере увеличения длины волны. В ультрафиолетовой области спектра (200-400 нм) поглощение света резко возрастает в коротковолновую сторону. При этом в области 275 нм выделяется плечо, характерное для фенольных, карбонильных, карбоксильных групп и полиеновых цепей, что, вероятнее всего, соответствуют n→π*-переходам, присущим для ароматических альдегидов, кетонов, карбоновых кислот и их функциональных и гетерофункциональных производных. Кроме того, в этой же области расположены: полосы поглощения 1) n→π*-переходов вызванные ауксохромными группами, такими как -O-R, -NHR, -NR2 и др., находящимися в p-π- и π-p-π-сопряжениях с бензольными кольцами; 2). π→π*- и n→π*-переходами в виду наличия в структуре ГК фрагментов с цепью π-π-сопряжений ароматического кольца и карбонильных групп с кратными C=C-связями (структурные фрагменты стильбенового типа, коричных кислот и т.п.), ката-конденсированных и периконденсированных ароматических систем типа «аценов», «фенов», пиренов, периленов и др. Характер n→π*-перехода в ГК подтверждается также смещением полосы (275 нм) в коротковолновую область спектра при протонировании молекулы ГК.
Важным диагностическим параметром ГК, как темноокрашенных соединений [13], является интенсивность поглощения света. Полученные гуминовые кислоты характеризовались невысокими коэффициентами цветности (Q4/6) и экстинкции (ЕA465, ЕA650), обуславливающими высокую поляризованность молекулы ГК (Таблица 2).
3. Исследование молекулярных параметров структуры ГК проводили методом инфракрасной (ИК) спектроскопии на ИК - Фурье - спектрометре ФСМ 1201 (ООО «Инфраспек») в таблетках с KBr (в соотношении 1:100 соответственно), в интервале значений частоты от 500 до 4000 см-1. Для количественной оценки интенсивности полос поглощения и относительных концентраций функциональных групп использован метод относительных оптических плотностей полос поглощения (ОППП).
Молекулярный спектр ГК верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа (фиг. 2), выявил широкую интенсивную полосу поглощения с максимумом при 3500-3300 см-1, обусловленную переменными валентными колебаниями гидроксильных групп (ион) алифатического и ароматического характера, связанных преимущественно водородными связями, наличие которых проявляется максимумом поглощения в интервале 1270-1220 и 1170-1040 см-1. В длинноволновом крыле главной полосы при 3250-3200 см-1 обнаруживается поглощение средней интенсивности, имеющее вид уступа (перегиба) и отвечающее колебаниям N-H (υNH) в структуре амида, аминов, связанных водородными связями. Полосы средней интенсивности хорошо видны при 2928-2921 см-1 и 2855-2842 см-1 за счет переменных валентных колебаний -CH3 и -CH2 групп боковых цепей в молекулах ГК, в том числе связанных с ароматическими фрагментами, судя по наличию полосы поглощения в области 1385 см-1. Отмечается слабое поглощение при 2700-2400 см-1 присущее димерам карбоновых кислот. Отчетливый максимум сильной интенсивности обнаруживается в интервале 1725 см-1-1710 см-1, свойственном для валентных колебаний карбонильных групп (υС=О), которые могут быть представлены кетонами, альдегидами, карбоновыми кислотами и их функциональными производными. В ИК-спектре ГК обнаруживается сильная полоса в области 1650-1600 см-1, обусловленная плоскостными валентными колебаниями сопряженных углерод-углеродных (ароматические, υС=С) и углерод-кислородных связей (карбонилы, связанные водородными связями, карбоксилат-ионы, υC=O) в ароматическом скелете и хинонах. Полоса поглощения около 1513 см-1 (υС-С) указывает на наличие неконденсированных моноароматических структур. В данной области наблюдаются также колебания связей полипептидов в составе ГК, связанных с атомами азота и кислорода (N-H, N-C=O): первичной (1580-1632 см-1) и вторичной (1512-1560 см-1) аминогрупп. Колебания в области 1264-1225 см-1 определяются в основном валентными (υС-О) и деформационными колебаниями (δО-Н) связей недиссоциированных карбоновых кислот и их функциональных производных (в основном сложных эфиров как арильного, так и алкильного типов). За поглощение излучения в коротковолновой части спектра в области 1175-1000 см-1 ответственны валентные колебания гидроксильных групп (ион) спиртов и углеводов. В интервале около 1075-1013 см-1 (υС-О) поглощают излучение первичные спирты, при 1125-1100 см-1 (υС-О) - вторичные спирты и при 1175-1150 см-1 (υС-О) - третичные спирты. Поглощение в данной области (1175-1000 см-1) может быть также обусловлено валентными колебаниями (υC-O-C) гликозидных связей углеводов, лактонов, С-О-С-связями циклических и алифатических простых эфиров, при этом присутствие С-O связей полисахаридов также подтверждается колебаниями в области 830-1100 см-1. В области волновых чисел от 800 до 600 см-1 наблюдаются слабые полосы поглощения, возможно обусловленные внеплоскостными деформационными колебаниями (бон) в ароматических кольцах, имеющих два и более незамещенных атомов водорода, и в том числе присутствием конденсированных многоядерных аренов (755-760 см-1).
Спектральные коэффициенты являются характерным диагностическим показателем структуры ГК. Высокая интенсивность полос поглощения говорит о большей обогащенности функциональными группами, т.е. чем выше интенсивность поглощения, тем больше содержание этой группы или фрагмента. Относительная количественная оценка содержания функциональных групп в молекулах ГК по данным ИК-спектроскопии дана на основании отношений оптических плотностей полос поглощения (ОППП) кислородсодержащих функциональных групп (υОН3400 см-1, υС=О 1720 см-1, υC-O, С-О-С 1225 см-1, υC-O 1035 см-1,) к оптическим плотностям полос поглощения, соответствующим ароматическим (υС=С1610 см-1) и алифатическим (υAlif2920 см-1) фрагментам структуры, и представлена в таблице 3.
Одними из основных кислородсодержащих функциональных групп в молекуле ГК верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа являются: гидроксильные (υOH3400-3300 см-1, υС-О 1150-1000 см-1) группы, карбоксильные группы и их функциональные производные (υС=О 1725-1700 см-1, υС-О 1260-1225 см-1), а также простые эфирные группы (υC-O-C 1050-1035 см-1). Рассматривая отношения ОППП алифатических фрагментов структуры к ароматическим (AAlif2920/AC=C 1610) можно отметить, что наблюдается преобладание ароматических структур над алкильными и над кислородсодержащими функциональными группами. Также наблюдается обратная зависимость в отношениях ОППП кислородсодержащих функциональных групп к алифатическим фрагментам структуры, где в основном преобладают группы карбоновых кислот и сложных эфиров.
4. Молекулярную массу определяли методом гель-проникающей хроматографии на приборе Ultimate 3000 (Thermo Scientific, США) с использованием колонки Ultrahydrogel 250, 300×7,8 мм, подвижная фаза - 0,1 М NaNO3, 0,01% NaN3 в воде, скорость потока 1 мл/мин. Детектирование спектрофотометрическое при длине волны 200 нм. Расчет молекулярной массы проводили по калибровочному графику log Mw=f(tR) построенному по стандартам PSS (polystyrene sulfonate) 891 - 976000 Da (Polymer Standarts Service Service GmbH, Германия). Среднечисленная молекулярная масса ГК составила 6110,2 Да; среднемассовая молекулярная масса составила 22783,9; полидисперсность - 3,7; медиана - 11798,9 Да.
Биологическую активность ГК оценивали на линейных мышах C57BL/6 [14]. Животные в возрасте 8-10 недель были получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томский НИМЦ РАН (ветеринарное свидетельство 270 №0008633 15 июля 2015 г.). Все процедуры (содержание, введение исследуемых веществ, умерщвление) были проведены в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета ЕС по охране животных используемых в научных целях, ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными». В качестве контроля в экспериментах in vivo использовали ликопид и пирогенал, in vitro - мурамилдипептид.
Макрофаги получали из суспензии перитонеальных клеток, для чего животных забивали дислокацией шейного отдела позвоночника, брюшную полость промывали ледяным изотоническим раствором хлорида натрия (ФР), клетки осаждали, ресуспендировали в культуральной среде и оценивали их жизнеспособность в тесте с 0,1% трипановым синим. В экспериментах использовали суспензии, содержащие не менее 95% жизнеспособных клеток. Далее клетки (1,5-2,0×106/мл) помещали в пластиковые чашки Петри, культивировали 2 ч при 37°C (в атмосфере 5% СО2 и абсолютной влажности) в среде RPMI 1640 («Sigma»), 10% ЭТС («Hyclone»), 20 мМ HEPES («Sigma»), 0,05 мМ 2-меркаптоэтанол («Sigma»), 50 мкг/мл гентамицин («Sigma»), 2 мМ L-глютамин («Sigma»)). Полученные после прилипания макрофаги переносили в плоскодонные 96-луночные планшеты (2,5-3,0×106 клеток/мл) и культивировали в указанных выше условиях в присутствии ГК (100 мкг/мл); 1 мкг/мл ЛПС (серотип O111:В4, «Sigma»); 10 мкг/мл мурамилдипептида (МДП) (N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин, «Calbiochem»). Продукцию монокинов стимулировали добавлением ЛПС (1 мкг/мл), лимфокинов - конканавалином А (4 мкг/мл) или митогеном лаконоса (5 мкг/мл). Через 24 ч от начала культивирования собирали из лунок надосадок и замеряли в нем концентрацию цитокинов твердофазным иммуноферментным методом при помощи тест-систем согласно прилагаемым протоколам: ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12 и ИФН-γ («eBioscience»).
Количество цитокинов, вырабатываемых мононуклеарами периферической крови человека (Мн), определяли в супернатантах клеток, получаемых следующим образом. Жидкость для сепарации клеток «Histopaque-1077» («Sigma-Aldrich») с плотностью 1,077 помещали в пробирки, затем осторожно наслаивали цельную кровь здоровых доноров с добавлением гепарина (10 ЕД/мл). После 15-минутного центрифугирования при 400 g собирали клетки, сформировавшие кольцо на градиенте плотности, трижды отмывали их холодным ФР, ресуспендировали в культуральной среде, оценивали жизнеспособность. Далее Мн (2,5-3,0×106 клеток/мл) помещали в 96-луночный планшет и вносили ГК (100 мкг/мл), продукцию цитокинов стимулировали добавлением митогенов, как указано выше. Через 24 ч инкубации собирали бесклеточный супернатант, в котором иммуноферментным методом при помощи тест-систем определяли количество цитокинов согласно прилагаемым протоколам: ИЛ-10 и ИФН-γ («R@D Systems»), ФНО-α - («Вектор-Бэст»).
ГК вводили мышам ежедневно внутрибрюшинно в течение 10 дней. В предварительных экспериментах in vivo было выявлено, что для проявления иммуномодулирующего эффекта оптимальной суточной дозой ГК является концентрация 1 мг/кг массы тела, пирогенала (Филиал «Медгамал» ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, Россия) - 5 мкг/кг и ликопида (ЗАО «Пептек», Россия) - 2 мг/кг. Для индукции Th1-зависимого типа иммунного ответа через 5 дней от начала введения ПС животных иммунизировали внутрибрюшинной инъекцией эритроцитов барана (5×107).
Для оценки действия ГК на клеточное звено иммунитета использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа. Для этого на 5-е сутки после иммунизации животным проводили вторую (разрешающую) инъекцию эритроцитов барана в подушечку задней лапы - «опытная лапа» (108 эритроцитов барана в 0,05 мл изотонического раствора хлорида натрия). В контрлатеральную лапу вводили 0,05 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия («контрольная лапа»). Через 24 часа животных забивали, обе лапы отрезали по выступу кости ниже сочленения мало- и большеберцовой кости и выше пяточного сустава, местную воспалительную реакцию оценивали по разнице массы опытной и контрольной лап.
Влияние ГК на гуморальное звено иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке, для чего животных, получавших курс ПС, забивали на 5-е сутки после иммунизации эритроцитами барана (на пике IgM-AOK и IgG-АОК, соответственно).
Полученные в ходе исследования данные будут обрабатываться с помощью пакета статистических программ Statistica 8,0. Для каждой выборки будет вычисляться среднее арифметическое (X), ошибка среднего арифметического (m), среднее арифметическое отклонение (σ). Проверка на нормальность распределения будет проводиться с помощью критерия Шапиро-Уилка. Сравнение выборочных средних будет осуществляться по критерию Даннета для сравнения нескольких экспериментальных выборок с одной контрольной в случае нормального распределения или по критерию Крускалла-Уоллиса для к-несвязанных выборок (к>2) и критерия Данна в случае распределения, отличающегося от нормального.
Пример 1.
ГК, выделенные из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа с глубины 10-50 см торфяного месторождения «Васюганское» (участок Высокий рям) Бакчарского района Томской области, при культивировании с интактными МФ значительно, в 28 раз, увеличивали концентрацию ИЛ-12 - ключевого цитокина, ответственного за эффективность Т-клеточного иммунного ответа (Таблица 4) - с 0,166±0,018 пг/мл в контроле до 4,480±0,702 пг/мл. При культивировании макрофагов без добавления каких-либо стимуляторов (среда) сколько-нибудь значимых количеств данного цитокина в супернатанте обнаружено не было, а ЛПС даже снижал показатель в 2,1 раза. Активирующее действие мурамилдипептид (МДП) также было значительным относительно контроля и существенно не отличалось от ГК.
Примечания:* - достоверные различия с контролем; • - достоверные различия с митогеном; n=6.
ГК значительно, в 2,5 раза, усиливали секрецию другого провоспалительного цитокина ИЛ-2 митогенстимулированными спленоцитами мышей с 105,453±16,797 пг/мл при стимуляции Кон А до 268,310±3,170 пг/мл при добавлении ГК (Таблица 5). Кроме того, под влиянием ГК концентрация ИФН-γ увеличивалась в 5,9 раза с 2,901±0,543 в контроле до 17,101±2,521 пг/мл в опыте.
Примечания:* - достоверные различия с контролем; • - достоверные различия с митогеном. n=6.
В отсутствии каких-либо стимуляторов макрофаги продуцировали 20,048±5,036 пг/мл ИЛ-10. При добавлении стандартного активатора макрофагов ЛПС концентрация цитокина в супернатанте увеличилась в 6,9 раза до 138,770±7,635 пг/мл и в 4,6 (до 91,805±12,882 пг/мл) и 5 (до 100,567±5,485 пг/мл) раз в присутствии МДП и ГК, соответственно. Однако в условиях экспериментального воспаления (ЛПС стимуляция) ГК резко, в 1,5 раза, снижали митогенстимулированную продукцию ИЛ-10, в отличие от МДП, сохранявшего свои активирующие свойства (Таблица 6).
ГК не влияли на продукцию ИЛ-4 спленоцитами мышей, стимулированную митогеном лаконоса (Таблица 7).
Примечания:* - достоверные различия с контролем; • - достоверные различия с митогеном. n=6.
Примечания: * - достоверные различия с контролем. n=6.
На модели моноцитов периферической крови человека показано (Таблица 8), что при добавлении водорастворимых гуминовых кислот верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа концентрация ФНО-α резко увеличивалась с 1,486±0,92 пг/мл в контроле до 92,176±3,354 пг/мл как при культивировании с ГК, так и с МДП до 151,070±11,263 пг/мл. Активирующее действие ГК сохранялось и при оценке их влияния на продукцию ИФН-γ лимфоцитами: концентрация цитокина увеличивалась в 66,9 раза с 0,042±0,007 до 2,809±2,144 пг/мл.
Примечание: * - различия с контролем достоверны. n=6.
Оценка влияния исследуемых веществ на секрецию ИЛ-10 показала, что ГК не влияют на спонтанную продукцию цитокина в отличие от МДП, который ее значительно, в 7,1 раза, усиливал. Более того, инкубация мононуклеаров с ГК в условиях ЛПС-моделированного воспаления приводила к существенному снижению в 3,8 раза концентрации цитокина (Таблица 9). ГК не усиливали митогенстимулированную продукцию ИЛ-4 (Таблица 10).
Примечания: * - достоверные различия с контролем; • - достоверные различия с митогеном. n=6.
Примечания:* - достоверные различия с контролем. n=6.
Таким образом, экспериментально установлено, что ГК, выделенные из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа, снижают продукцию ИЛ-10 на фоне стимуляции выработки антигенпрезентирующими клетками ключевых провоспалительных цитокинов ИЛ-2, ИЛ-12, ФНО-α и ИФН-γ лимфоцитами. Следует отметить, что по своему цитокин-стимулирующему действию ГК значительно превосходят препарат сравнения МДП.
Пример. 2.
Курсовое введение ГК верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа животным на фоне развития у них Th1-зависимого иммунного ответа, индуцированного введением эритроцитов барана, привело к подавлению реакции ГЗТ - маркерной реакции клеточного Тh1 иммунного ответа (Таблица 11). Курсовое введение препарата сравнения - ликопида - усиливало показатель в 1,3 раза. Величина отека при применении ГК и пирогенала снижалась в 1,6 по сравнению с контролем и в 2-2,2 раза относительно ликопида.
Примечание: * - различия с контролем достоверны. n=8.
Пример 3.
Влияние исследуемых гуминовых кислот на гуморальное звено Th1-зависимого иммунного ответа оценивали по количеству АОК. Показано, что курсовое введение ГК, выделенных при экстракции пирофосфатом натрия из верхового сосново-сфагново-пушицевого торфа, животным на фоне развития у них Th1-зависимого иммунного ответа, приводило к достоверному повышению числа АОК (Таблица 12). Показатель увеличивался как у мышей, получавших ликопид, так и ГК в 1,2 и 1,7 раза, соответственно. Пирогенал, напротив, значительно, в 3,5 раза, снижал интенсивность антителообразования. При этом титр гемаагглютининов неизменно увеличивался при курсовом введении всех исследуемых веществ в 1,8 (ликопид), 1,7 (пирогенал) и в 2,8 (ГК) раза. Более того, ГК в среднем в 1,5 раза усиливали РГА по сравнению с ликопидом и пирогеналом.
Примечание: * - различия показателя с контролем достоверны; • - различия показателя со ликопидом достоверны; ■ - различия показателя с пирогеналом достоверны. n=6.
Таким образом, экспериментально установлено, что гуминовые кислоты, выделенные из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа, снижают продукцию ИЛ-10 на фоне стимуляции выработки ключевых провоспалительных цитокинов антигенпрезентирующими клетками - ИЛ-2, ИЛ-12, ФНО-α и лимфоцитами - ИФН-γ. Курсовое введение гуминовых кислот снижает интенсивность реакции клеточного иммунитета и усиливает показатели гуморального иммунитета. Гуминовые кислоты, выделенные из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа, являются активаторами воспалительных свойств макрофагов по Th1-зависимому типу иммунного ответа и могут расширить арсенал малотоксичных средств растительного происхождения, способных стимулировать иммунный ответ при инфекционно-воспалительных процессах, хронических и онкологических заболеваниях.
Список литературы
1. Бакина, Л.Г. Особенности извлечения гумусовых кислот из почв растворами пирофосфата натрия различной щелочности / Л.Г. Бакина, Н.Е. Орлова // Почвоведение. - 2012. - №4. - С. 445-452.
2. Бузлама, А.В. Анализ фармакологических свойств, механизмов действия и перспектив применения гуминовых веществ в медицине / А.В. Бузлама, Ю.Н. Чернов // Экспер. и клин. фармакол. - 2010. - Т. 73, - №9. - С. 43-48.
3. Ваксман, С.А. Гумус, происхождение, химический состав и значение в природе / С.А. Ваксман // М.: Сельхозгиз. - 1937. - 437 с.
4. Василевич, Р.С. Строение высокомолекулярных органических веществ тундровых бугристых торфяников / Р.С. Василевич, В.А. Безносиков, Е.Д. Лодыгин // Материалы VI Всероссийской научной конференции с международным участием «Гуминовые вещества в биосфере». - Сыктывкар. - 2014. - c. 49-52.
5. Влияние гуминовых кислот торфа различного генеза на продукцию оксида азота in vitro (скрининговое исследование) / Е.С. Трофимова [и др.] // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. - 2016. - №5. - С. 626-636.
6. Гостищева, М.В. Характеристика органического вещества торфяных почв эвтрофного болота Таган Томской области / М.В. Гостищева, Л.И. Инишева, А.И. Щеголихина // Вестник ТГПУ. - 2010. - №3. - С. 114-119.
7. Гуминовые кислоты торфа и препараты на их основе / И.И. Лиштван [и др.] // Природопользование. - 2004. - Вып. 10. - С. 114-119.
8. Исматова, Р.Р. Низкая токсичность и противовоспалительная активность гуматов, выделенных из торфа и сапропеля Томской области / Р.Р. Исматова, А.У. Зиганшин, С.Е. Дмитрук, И.В. Федько // Казанский медицинский журнал. - 2006. - Т. 87. - №6. - С. 454-455.
9. Исследование гепатозащитных свойств нативных гуминовых кислот низинного торфа Томской области / М.В. Белоусов [и др.] // Хим.-фарм. журн. - 2014. Т. 48, №4. С. 28-31.
10. Комиссаров, И.Д. Влияние способа извлечения гуминовых кислот из сырья на химический состав полученных препаратов / И.Д. Комиссаров, И.Н. Стрельцова // Гуминовые препараты: Научный трактат. Т. XIV. Тюмень. - 1974. - С. 48-62.
11. Кухаренко, Т.А. Об определении понятия и классификации гуминовых кислот / Т.А. Кухаренко // Химия твердого топлива. - 1979. - №5. - С. 3-11.
12. Левашенко, Д.В. Климатический оптимум голоцена в дельте Печоры / Д.В. Левашенко, Е.С. Малясова // Известия РАН. Сер. географическая. - 2007. - №4. - С. 125-132.
13. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. - М.: МГУ, 1990. - 325 с.
14. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. 4.1. - М.: Гриф и К. 2013. - С. 64-79.
15. Сартаков, М.П. Графостатистический анализ и спектроскопия 13С-ЯМР молекул гуминовых кислот торфов Среднего Приобья / М.П. Сартаков, В.Д. Тихова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - №6. - С. 76-80.
16. Хричтева, Л.А. Роль гуминовой кислоты в питании высших растений и гуминовые удобрения / Л.А. Хричтева // Труды почвенного института им. В.В. Докучаева, М.: 1951. - Т. 38. - 314 с.
17. In vitro evaluation of the antiviral properties of Shilajit and investigation of its mechanisms of action / V. Cagno [et al.] // Journal of Ethnopharmacology. - 2015. -, V. 166. P. - 129-134.
18. Inglot, A.D. A. A method to assess the immunomodulating effects of the Tolpa Torf Preparation (TTP) by measuring the hyporeactivity to interferon induction and tumor necrosis factor response / A.D. Inglot, 
A.Sypula // Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis. - 1993. - V. 41. - Is. 1. - P. - 87-93.
19. Li, H.H. Humic Acid Increases Amyloid β-Induced Cytotoxicity by Induction of ER Stress in Human SK-N-MC Neuronal Cells / H.H. Li [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2015. -V. 16. - Is. 5. - P. - 10426-10442.
20. Mosmann, T.R. TH1 and TH2 cells: different patterns of lymfokine secrecion lead to different functional properties / T.R. Mosmann, R.L. Coffman // Ann. Rev. Immunol. - 1989. - V. 7. - P. 145-173.
21. Prion protein interaction with soil humic substances: environmental implications / G. Giachin [et al.] // PloS one. - 2014. - V. 9. - Is. 6. - P. - e100016. (DOI: 10.1371/journal.pone.0100016).
22. 
D.M. Angiomodulatory properties of some antibiotics and Tolpa Peat Preparation / D.M. [et al.] // Central-European Journal of Immunology. - 2016. -V. 41. - Is. 1. - P. - 19-24.
23. Rivera, A. Innate cell communication kick-starts pathogen-specific immunity / A. Rivera, [et al.] // Nature Immunology. - 2016. - V. 17. - Is.4. - P. - 356-363.
24. Van Rensburg, C. J.In vitro and in vivo assessment of humic acid as an aflatoxin binder in broiler chickens / C. J. van Rensburg [et al.] // Poultry Science - 2006. - V. 85. - Is.9. - P. - 1576-1583.
25. Van Rensburg, C.E. Potassium humate inhibits complement activation and the production of inflammatory cytokines in vitro / C.E. Van Rensburg, P.J. Naude // Inflammation - 2009. - V. 32. - Is. 4. - P. - 270-276.
26. Van Rensburg, С.E. Topical application of oxifulvic acid suppresses the cutaneous immune response in mice / С. E. J. Van Rensburg, S. С. K. Malfeld, J. Dekker // Chemotherapy. - 2002. - V. 48. - P. - 138-143.
27. Vetvicka, V. Prophylactic effects of humic acid-glucan combination against experimental liver injury / V. Vetvicka, J.M. Garcia-Mina, J.C. Yvin // Journal of Intercultural Ethnopharmacology. - 2015. - V. 4. - Is. 3. - P. - 249-255.
28. Vetvicka, V. The relative abundance of oxygen alkyl-related groups in aliphatic domains is involved in the main pharmacological-pleiotropic effects of humic acids / V. Vetvicka [et al.] // Journal of Medicinal Food. - 2013. - V. 16. - Is. 7. - P. - 625-632.
29. Worall, F. Can climate change explain increases in DOC flux from upland peat catchments? / F. Worall, T. Burt, J. Adamson // Science of the Total Enviroment. - 2004. - N. 326. - P. - 95-112.
30. Welte, E. Zur Konzentrationsmessung von Huminsauren / E. Welte // Z. Pflanzenernahr., Dung., Bodenkunde. - 1956. - V. 74. - №3.
Claims (1)
- Применение водорастворимых гуминовых кислот, выделенных из верхового сосново-сфагново-пушицевого вида торфа экстракцией пирофосфатом натрия, в качестве средства, обладающего иммуномодулирующей активностью и стимулирующего развитие реакций Th1-зависимого типа иммунного ответа.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017129063A RU2662094C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017129063A RU2662094C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2662094C1 true RU2662094C1 (ru) | 2018-07-23 |
Family
ID=62981640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017129063A RU2662094C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2662094C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750098C1 (ru) * | 2020-03-16 | 2021-06-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Средство гуминовой природы, обладающее противоаллергической активностью |
| RU2753609C1 (ru) * | 2020-10-16 | 2021-08-18 | Николай Иванович Милов | Противовирусное гуминовое средство |
| RU2756353C1 (ru) * | 2020-10-16 | 2021-09-29 | Николай Иванович Милов | Иммуномодулирующее гуминовое средство |
| RU2783772C1 (ru) * | 2022-03-04 | 2022-11-17 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующим действием |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2357741C1 (ru) * | 2007-10-15 | 2009-06-10 | Государственное Научное Учреждение Сибирский Научно-Исследовательский Институт Сельского Хозяйства И Торфа Сибирского Отделения Россельхозакадемии (Гну Сибниисхит Со Россельхозакадемии) | Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки |
-
2017
- 2017-08-14 RU RU2017129063A patent/RU2662094C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2357741C1 (ru) * | 2007-10-15 | 2009-06-10 | Государственное Научное Учреждение Сибирский Научно-Исследовательский Институт Сельского Хозяйства И Торфа Сибирского Отделения Россельхозакадемии (Гну Сибниисхит Со Россельхозакадемии) | Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JUNEK R., et al. Bimodal effect of humic acids on the US-induced TNF-alpha release from differentiated U937 cells // Phytomedicine. - 2009. - Vol. 16, N. 5. - P. 470-476. * |
| И.И. ЛИШТВАН и др. Гуминовые кислоты торфа и препараты на их основе // Природопользование. - 2004. - Вып. 10. - С. 114-119. * |
| И.И. ЛИШТВАН и др. Гуминовые кислоты торфа и препараты на их основе // Природопользование. - 2004. - Вып. 10. - С. 114-119. JUNEK R., et al. Bimodal effect of humic acids on the US-induced TNF-alpha release from differentiated U937 cells // Phytomedicine. - 2009. - Vol. 16, N. 5. - P. 470-476. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750098C1 (ru) * | 2020-03-16 | 2021-06-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Средство гуминовой природы, обладающее противоаллергической активностью |
| RU2753609C1 (ru) * | 2020-10-16 | 2021-08-18 | Николай Иванович Милов | Противовирусное гуминовое средство |
| RU2756353C1 (ru) * | 2020-10-16 | 2021-09-29 | Николай Иванович Милов | Иммуномодулирующее гуминовое средство |
| RU2783772C1 (ru) * | 2022-03-04 | 2022-11-17 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующим действием |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2662094C1 (ru) | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью | |
| Israilides et al. | In vitro cytostatic and immunomodulatory properties of the medicinal mushroom Lentinula edodes | |
| EP0382840B1 (en) | Aloe compositions and uses thereof | |
| RU2124361C1 (ru) | Способ выделения полисахаридной фракции смолы трагакант из растения рода astragalus, композиция на основе полисахаридной фракции, способ ингибирования роста раковой опухоли, способ ингибирования вирусных инфекций | |
| AU2019200361B2 (en) | Compositions and methods of aloe polysaccharides | |
| Wangkheirakpam et al. | Hepatoprotective effect of Auricularia delicata (Agaricomycetes) from India in rats: biochemical and histopathological studies and antimicrobial activity | |
| Nagababu et al. | Pharmacological assessment, green synthesis and characterization of silver nanoparticles of Sonneratia apetala buch.-ham. leaves | |
| Bayro et al. | Preliminary characterization, antioxidant and antiproliferative properties of polysaccharide from Caulerpa taxifolia | |
| KR20050107352A (ko) | 옻나무 추출물을 이용한 신규의 천연물 항암제 | |
| Sipping et al. | Antioxidant and anti-inflammatory activities of Ganoderma resinaceum (Boud) fruiting bodies extracts | |
| Büssing | Immune modulation using mistletoe (Viscum album L.) extracts Iscador | |
| Trofimova et al. | Immunomodulating properties of humic acids extracted from oligotrophic sphagnum magellanicum peat | |
| RU2716504C1 (ru) | Средство, гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующей активностью | |
| Saeidi et al. | Determination of mucilage content of mullein (Verbascum songaricum) populations | |
| Malakyan et al. | RADIOPROTECTIVE ACTIVITY OF CALLISIA FRAGRANS GROWN IN SOILLESS (HYDROPONICS) AND SOIL CULTURE CONDITIONS. | |
| RU2610446C2 (ru) | СРЕДСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ ПРОДУКЦИЮ ОКСИДА АЗОТА МАКРОФАГАМИ in vitro, НА ОСНОВЕ ГУМИНОВЫХ КИСЛОТ ИЗ ТОРФА БОЛОТ ТОМСКОЙ ОБЛАСТИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | |
| RU2783772C1 (ru) | Средство гуминовой природы, обладающее иммуномодулирующим действием | |
| KR20100025724A (ko) | 면역증진 조성물 및 그 제조방법 | |
| Sneha et al. | Evaluation of Terminalia arjuna in Comparison to Taurine against Experimental Hepatotoxicity due to Cisplatin in Rats | |
| Dhikale et al. | Amelioration of CFA induced arthritis in rats by buchnania lanzan | |
| RU2727692C1 (ru) | Средство гуминовой природы для повышения физической работоспособности и выносливости | |
| Sadeghi-Aliabadi et al. | Cytotoxic Effects of Iranian Mistletoe Extract on a Panel of Cancer Cells: Cytotoxicity of Mistletoe | |
| Tahvildari et al. | Investigation of poly aromatic hydrocarbons adsorption using chitosan and its synthetic derivatives | |
| Isoe et al. | Evaluation of antioxidant properties of strobilanthes kunthiana nees t, anderson ex, benth leaves organic solvent extracts | |
| KR100348870B1 (ko) | 느릅나무 유래의 단백다당체 및 그의 제조방법 |