RU2658918C1 - Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes - Google Patents
Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes Download PDFInfo
- Publication number
- RU2658918C1 RU2658918C1 RU2017141984A RU2017141984A RU2658918C1 RU 2658918 C1 RU2658918 C1 RU 2658918C1 RU 2017141984 A RU2017141984 A RU 2017141984A RU 2017141984 A RU2017141984 A RU 2017141984A RU 2658918 C1 RU2658918 C1 RU 2658918C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- glycosaminoglycans
- ethanol
- raw materials
- spray dryer
- temperature
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 title claims abstract description 23
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 7
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 7
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 8
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 8
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 101100519432 Rattus norvegicus Pdzd2 gene Proteins 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010828 animal waste Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003011 chondroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к технологии выделения биологически активных соединений, и может быть использовано для изготовления лекарственных средств или биологически активных веществ, действие которых направлено на улучшение состояния соединительной ткани.The invention relates to medicine, in particular to a technology for isolating biologically active compounds, and can be used for the manufacture of drugs or biologically active substances, the action of which is aimed at improving the condition of connective tissue.
Различные биохимические изменения, наблюдаемые в соединительной ткани с возрастом, непосредственно влияют на процесс старения и возникновение при этом определенных патологических процессов.Various biochemical changes observed in connective tissue with age directly affect the aging process and the occurrence of certain pathological processes.
Заболевания опорно-двигательного аппарата являются существенной причиной преждевременной потери трудоспособности и инвалидности. В связи с наблюдаемым существенным постарением населения вопросы профилактики и лечения данного заболевания приобретают особую актуальность.Diseases of the musculoskeletal system are a significant cause of premature disability and disability. In connection with the observed significant aging of the population, the issues of prevention and treatment of this disease are of particular relevance.
Для остановки разрушения хрящевой ткани и восстановления ее структуры с успехом применяются хондропротекторы - препараты, действие которых направлено на питание и образование новых клеток хрящевой ткани, а также на выработку синовиальной жидкости - смазки сустава.To stop the destruction of cartilage tissue and restore its structure, chondroprotectors are successfully used - drugs whose action is aimed at nutrition and the formation of new cells of cartilage tissue, as well as the production of synovial fluid - lubrication of the joint.
Гликозаминогликаны (ГАГ), выделяемые из различного сырья, применяются в составе препаратов с целью хондропротекторного действия на соединительную ткань. Доказано, что после 20 лет у человека практически в 6 раз уменьшается обмен гликозаминогликанов в сравнении с новорожденными, что соответственно приводит к развитию заболевание опорно-двигательного аппарата.Glycosaminoglycans (GAGs), isolated from various raw materials, are used as part of preparations with the goal of chondroprotective action on connective tissue. It has been proven that after 20 years, a person’s metabolism of glycosaminoglycans is reduced by almost 6 times compared with newborns, which accordingly leads to the development of a disease of the musculoskeletal system.
На сегодняшний день существуют различные способы выделения гликозаминогликанов. Однако известные технологии продолжительны по времени, а сырье, используемое для выделения, является достаточно дорогим.To date, there are various ways of isolating glycosaminoglycans. However, the known technologies are time consuming, and the raw materials used for isolation are quite expensive.
Так, известен (RU, патент 2089201, опубл. 10.09.1997) способ выделения гликозаминогликанов из фиброзного хряща путем протеолиза измельченного образца папаином, депротеинизации гидролизата трихлоруксусной кислотой и осаждения гликозаминогликанов этанолом.Thus, there is a known (RU, patent 2089201, publ. 10.09.1997) method for isolating glycosaminoglycans from fibrous cartilage by proteolysis of the ground sample with papain, deproteinization of the hydrolyzate with trichloroacetic acid and precipitation of glycosaminoglycans with ethanol.
Недостатками такого способа является невысокий выход гликозаминогликанов. Также метод не позволяет удалить белковые фракции, что значительно уменьшает чистоту конечного продукта.The disadvantages of this method is the low yield of glycosaminoglycans. Also, the method does not allow to remove protein fractions, which significantly reduces the purity of the final product.
Известен способ выделения сульфатированных полисахаридов из животных тканей (RU, патент 2056851, опубл. 27.03.1996). Способ заключается в том, что гидролиз роговиц активированным папаином проводят после добавления 2,5%-ного раствора папаина на 1 кг сырого веса ткани, после чего гидролизат кипятят 10-15 мин, добавляют к нему трихлоруксусную кислоту и после отделения осадка диализуют против смеси 1 н хлористого натрия и спирта в соотношении 7:3, насыщенного хлористого натрия и дистиллированной воды.A known method for the allocation of sulfated polysaccharides from animal tissues (RU, patent 2056851, publ. 03/27/1996). The method consists in the fact that hydrolysis of the cornea with activated papain is carried out after adding a 2.5% solution of papain per 1 kg of wet tissue weight, after which the hydrolyzate is boiled for 10-15 minutes, trichloroacetic acid is added to it and after separation of the precipitate it is dialyzed against mixture 1 n sodium chloride and alcohol in a ratio of 7: 3, saturated sodium chloride and distilled water.
Недостатки способа: трудоемкость, использование достаточно дорогого сырья, а также не высокий выход целевого продукта.The disadvantages of the method: the complexity, the use of fairly expensive raw materials, and also not a high yield of the target product.
Также известен способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов из биологических тканей (RU, патент 2273486, опубл. 10.04.2006). Способ включает механическую очистку ткани, размельчение, отмывку буферным раствором, обработку ферментным папаином, диализ, осаждение этанола и центрифугирование, высушивают и фасуют.Also known is a method of isolating sulfated glycosaminoglycans from biological tissues (RU, patent 2273486, publ. 10.04.2006). The method includes mechanical cleaning of the tissue, grinding, washing with a buffer solution, treatment with papain enzyme, dialysis, ethanol precipitation and centrifugation, dried and packed.
К недостаткам способа можно отнести то, что для проведения ферментативного гидролиза сырья используется один фермент папин, который не обеспечивает максимального выхода гликозаминогликанов из биологических тканей.The disadvantages of the method include the fact that for the enzymatic hydrolysis of raw materials one papin enzyme is used, which does not provide maximum yield of glycosaminoglycans from biological tissues.
Известен способ выделения гликозаминогликанов из минерализованной соединительной ткани (RU, патент 2325902, опубл. 10.06.2008). Способ включает ферментативный гидролиз ферментом пепсином, депротеинизацию сульфатом аммония, осаждение 4%-ным ацетатом калия в 96% этаноле, переосаждение этанолом и лиофильную сушку.A known method of isolating glycosaminoglycans from mineralized connective tissue (RU, patent 2325902, publ. 10.06.2008). The method includes enzymatic hydrolysis with pepsin, deproteinization with ammonium sulfate, precipitation with 4% potassium acetate in 96% ethanol, reprecipitation with ethanol and freeze drying.
Недостатком способа является высокая продолжительность ферментативного гидролиза, что значительно увеличивает время проведения исследований.The disadvantage of this method is the high duration of enzymatic hydrolysis, which significantly increases the time of research.
Наиболее близким аналогом изобретения является способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов (RU, патент 2304441, опубл. 20.08.2007), который заключается в механической очистке биологических тканей, промывкой фосфатным буфером, отмывке, гидролизе отмытой ткани активированным папаином, осаждении этанолом, отделение осадка и высушивание.The closest analogue of the invention is a method for the isolation of sulfated glycosaminoglycans (RU, patent 2304441, publ. 08.20.2007), which consists in mechanical cleaning of biological tissues, washing with phosphate buffer, washing, hydrolysis of washed tissue with activated papain, precipitation with ethanol, separation of the precipitate and drying.
Данный способ не обеспечивает максимального выхода гликозаминогликанов из сырья, за счет использования одного фермента при проведении ферментативного гидролиза.This method does not provide maximum yield of glycosaminoglycans from raw materials, due to the use of one enzyme during enzymatic hydrolysis.
Задачей настоящего изобретения является разработка технологии выделения гликозаминогликанов высокого качества из дешевого вторичного коллагенсодержащего сырья.The objective of the present invention is to develop a technology for the isolation of high-quality glycosaminoglycans from cheap secondary collagen-containing raw materials.
Технический результат, достигаемый при реализации разработанного способа, состоит в получении выхода до 98% гликозаминогликанов высокой степени очистки.The technical result achieved by the implementation of the developed method consists in obtaining a yield of up to 98% glycosaminoglycans with a high degree of purification.
Технический результат достигается тем, что были подобраны такие технологические режимы переработки биологической ткани, которые позволяют уменьшить продолжительность процесса выделения ГАГ, увеличить выход ГАГ из сырья с высокой степенью очистки, а также снизить стоимость готового продукта по сравнению с известными аналогами за счет использования более дешевого сырья для выделения ГАГ.The technical result is achieved by the fact that such technological modes of biological tissue processing were selected that allow to reduce the duration of the GAG extraction process, increase the GAG yield from raw materials with a high degree of purification, and also reduce the cost of the finished product compared to known analogues due to the use of cheaper raw materials to highlight GAG.
Для достижения указанного технического результата предложено использовать разработанный способ, согласно которому биологическую ткань, являющуюся отходами животноводства (шкуры, жилки, фасции, хрящи и т.п.), очищают от примесей и измельчают через мясорубку или нарезанием на небольшие кусочки, измельченную ткань промывают фосфатным буфером и подвергают ферментативному гидролизу выбранными ферментами, осаждают ГАГ 96%-ным этиловым спиртом, после чего осадок отделяют центрифугированием и переосаждают этанолом, снова собирают и высушивают на распылительной сушилке Mini Spray Dryer В-290, после чего проводят очистку ГАГ с помощью гель-хроматографии.To achieve the specified technical result, it is proposed to use the developed method, according to which biological tissue, which is animal waste (skins, veins, fascia, cartilage, etc.), is cleaned of impurities and ground through a meat grinder or cut into small pieces, the ground tissue is washed with phosphate buffer and subjected to enzymatic hydrolysis of the selected enzymes, precipitated GAG 96% ethanol, after which the precipitate was separated by centrifugation and reprecipitated with ethanol, collected and dried again at the spray dryer Mini Spray Dryer B-290, followed by purification of GAGs by gel chromatography.
Разработанный способ реализуют следующим образом.The developed method is implemented as follows.
Вторичное коллагенсодержащее сырье (шкуры, жилки, фасции, хрящи и т.п.) удаляют от посторонних примесей и измельчают. Затем измельченную ткань промывают 0,1 М фосфатным буфером рН 5,8-6,0 при температуре 60-65°С в соотношении 1:2 в течение 20-30 минут. Данная стадия использована для того, чтобы обеспечить больший выход ГАГ из сырья и уменьшить время воздействия ферментов на сырье. Далее проводят ферментативный гидролиз выбранными ферментами (коллагеназа и папаин) в концентрации 200 ед/г в течение 6-10 часов при температуре 40°С и рН 6,5-7,5. При этом ферменты вносятся последовательно, что обеспечивает полное разрушение ткани и высокий выход ГАГ. Далее ГАГ осаждают 96%-ным этиловым спиртом, осадок центрифугируют, переосаждают этанолом, осадок собирают и высушивают на распылительной сушилке. После чего проводят разделение и очистку ГАГ с помощью гель-хроматографии, что позволяет достичь величин степени очистки ГАГ от балластных веществ и белковых фракций до 98%.Secondary collagen-containing raw materials (skins, veins, fascia, cartilage, etc.) are removed from impurities and crushed. Then the crushed tissue is washed with 0.1 M phosphate buffer pH 5.8-6.0 at a temperature of 60-65 ° C in a ratio of 1: 2 for 20-30 minutes. This stage was used in order to provide a greater output of GAG from raw materials and to reduce the time of exposure of enzymes to raw materials. Next, enzymatic hydrolysis of the selected enzymes (collagenase and papain) is carried out at a concentration of 200 u / g for 6-10 hours at a temperature of 40 ° C and a pH of 6.5-7.5. In this case, the enzymes are introduced sequentially, which ensures complete destruction of the tissue and a high yield of GAG. Next, the GAG is precipitated with 96% ethanol, the precipitate is centrifuged, reprecipitated with ethanol, the precipitate is collected and dried on a spray dryer. After that, the separation and purification of GAG by gel chromatography is carried out, which allows achieving the degree of purification of GAG from ballast substances and protein fractions up to 98%.
Пример выполненияExecution example
Вторичное коллагенсодержащее сырье очищают от посторонних примесей и измельчают на мясорубке или нарезанием на мелкие кусочки, размером не более 5×5 мм. Очищенную и измельченную ткань промывают 0,1 М фосфатным буфером рН 5,8-6,0 при температуре 60-65°С в соотношении 1:2 в течение 20-30 минут.Secondary collagen-containing raw materials are cleaned of impurities and crushed in a meat grinder or cut into small pieces, no larger than 5 × 5 mm. The cleaned and ground tissue is washed with 0.1 M phosphate buffer pH 5.8-6.0 at a temperature of 60-65 ° C in a ratio of 1: 2 for 20-30 minutes.
Промытую ткань подвергают ферментативному гидролизу ферментами (коллагеназа и папаин). Ферментативный гидролиз проводят при последовательном добавлении ферментов. Сначала гидролиз ведут при внесении фермента коллагеназы в концентрации 200 ед/г при рН 7,5 и температуре 40-50°С в течение 3-5 часов, а затем вносят папаин в концентрации 200 ед/г и проводят гидролиз при рН 6,5 и температуре 40-50°С в течение 3-5 часов. Ферментативный гидролиз ведут при постоянном перемешивании. Далее ГАГ осаждают 96%-ным этиловым спиртом при температуре 20-25°С в течение 1,0-3,0 часов, а осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10-30 минут.The washed tissue is subjected to enzymatic hydrolysis with enzymes (collagenase and papain). Enzymatic hydrolysis is carried out with the sequential addition of enzymes. First, hydrolysis is carried out with the introduction of the collagenase enzyme at a concentration of 200 u / g at pH 7.5 and a temperature of 40-50 ° C for 3-5 hours, and then papain is introduced at a concentration of 200 u / g and hydrolysis is carried out at pH 6.5 and a temperature of 40-50 ° C for 3-5 hours. Enzymatic hydrolysis is carried out with constant stirring. Next, the GAG is precipitated with 96% ethyl alcohol at a temperature of 20-25 ° C for 1.0-3.0 hours, and the precipitate is separated by centrifugation at 3000 rpm for 10-30 minutes.
Полученный осадок отбирают и проводят переосаждение этанолом, для чего осадок промывают 96%-ным этилом спиртом 3-6 раз, а затем осадок фильтруют для отделения от спирта и снова центрифугируют в течение 5-10 минут.The resulting precipitate was collected and reprecipitation was carried out with ethanol, for which the precipitate was washed with 96% ethyl alcohol 3-6 times, and then the precipitate was filtered to separate from alcohol and centrifuged again for 5-10 minutes.
Осадок высушивают на распылительной сушилке Mini Spray Dryer В-290 при следующих параметрах: температура входа - 250-300°С, температура выхода - 180-220°С, скорость воздушного потока - 45-55 м3/ч, скорость подачи раствора - 35-40 мл/мин.The precipitate is dried on a Mini Spray Dryer B-290 spray dryer with the following parameters: inlet temperature - 250-300 ° C, outlet temperature - 180-220 ° C, air flow rate - 45-55 m 3 / h, solution flow rate - 35 -40 ml / min.
Очистку полученных ГАГ осуществляют гель-хроматографией с использованием сефадекса G25. Элюирование проводят дистиллированной водой со скоростью 6 мл/мин. Регистрация гликозаминогликанов осуществляется путем определения оптической плотности элюата спектрофотоместрически на детекторе при длине волны λ=220 нм. Полученные после проведения гель-хроматографии фракции ГАГ высушивают на распылительной сушилке. Степень очистки фракций составляет до 98%, при этом содержание белка либо не определялось, либо не превышает 0,03%, что существенным образом не повлияет на качество конечного продукта.Purification of the obtained GAG is carried out by gel chromatography using Sephadex G25. Elution is carried out with distilled water at a rate of 6 ml / min. Registration of glycosaminoglycans is carried out by determining the optical density of the eluate spectrophotometrically at the detector at a wavelength of λ = 220 nm. GAG fractions obtained after gel chromatography are dried on a spray dryer. The degree of purification of the fractions is up to 98%, while the protein content is either not determined or does not exceed 0.03%, which will not significantly affect the quality of the final product.
Сравнение разработанного способа выделения ГАГ из вторичного коллагенсодержащего сырья для обоснования достижения указанного технического результата проведено с ближайшим аналогом. 
Таким образом, установлено, что предлагаемый способ выделения ГАГ из биологических тканей позволяет получить высококачественные и высокоочищенные ГАГ для использования в медицине для создания биологически активных веществ или лекарственных препаратов.Thus, it was found that the proposed method for the isolation of GAG from biological tissues allows one to obtain high-quality and highly purified GAG for use in medicine to create biologically active substances or drugs.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017141984A RU2658918C1 (en) | 2017-12-01 | 2017-12-01 | Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017141984A RU2658918C1 (en) | 2017-12-01 | 2017-12-01 | Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2658918C1 true RU2658918C1 (en) | 2018-06-26 |
Family
ID=62713557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017141984A RU2658918C1 (en) | 2017-12-01 | 2017-12-01 | Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2658918C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2129871C1 (en) * | 1998-09-17 | 1999-05-10 | Ларионов Евгений Викторович | Method of glycoseaminoglycans preparing |
| RU2139715C1 (en) * | 1999-02-23 | 1999-10-20 | Ларионов Евгений Викторович | Method of preparing glycosamonoglycans |
| RU2273486C1 (en) * | 2004-08-17 | 2006-04-10 | Андрей Федорович Панасюк | Method for separating sulfated glycosoamineglycanes from biological tissue |
| RU2304441C1 (en) * | 2005-10-27 | 2007-08-20 | Дмитрий Алексеевич Саващук | Method for obtaining sulfated glycosaminoglycans out of biological tissues |
| RU2325902C2 (en) * | 2003-10-27 | 2008-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А.Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "РНЦ "ВТО" им.акад. Г.А. Илизарова Росмедтехнологий") | Method of glycosaminoglycan release from mineralised connective tissue |
-
2017
- 2017-12-01 RU RU2017141984A patent/RU2658918C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2129871C1 (en) * | 1998-09-17 | 1999-05-10 | Ларионов Евгений Викторович | Method of glycoseaminoglycans preparing |
| RU2139715C1 (en) * | 1999-02-23 | 1999-10-20 | Ларионов Евгений Викторович | Method of preparing glycosamonoglycans |
| RU2325902C2 (en) * | 2003-10-27 | 2008-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А.Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "РНЦ "ВТО" им.акад. Г.А. Илизарова Росмедтехнологий") | Method of glycosaminoglycan release from mineralised connective tissue |
| RU2273486C1 (en) * | 2004-08-17 | 2006-04-10 | Андрей Федорович Панасюк | Method for separating sulfated glycosoamineglycanes from biological tissue |
| RU2304441C1 (en) * | 2005-10-27 | 2007-08-20 | Дмитрий Алексеевич Саващук | Method for obtaining sulfated glycosaminoglycans out of biological tissues |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US2583096A (en) | Process for the production of high viscosity hyaluronic acid | |
| JP2722014B2 (en) | Method for extracting natural collagen from pigment-free fish skin, natural collagen obtained from pigment-free fish skin and biomaterial | |
| FR2516927A1 (en) | PROCESS FOR THE INDUSTRIAL PREPARATION OF COLLAGENIC MATERIALS FROM HUMAN PLACENTAL TISSUES, HUMAN COLLAGENIC MATERIALS OBTAINED, THEIR APPLICATION AS BIOMATERIALS | |
| JP2000506367A (en) | Preparation of type II collagen | |
| EA004702B1 (en) | Sulfated saccharides | |
| KR910006811B1 (en) | Process for preparing high purity dermatan sulfate | |
| WO2017209587A1 (en) | Method for the extraction and purification of native marine collagen from sardina pilchardus sardine scales | |
| RU2658918C1 (en) | Method for isolating glycosaminoglycans from secondary collagen-containing wastes | |
| KR101407863B1 (en) | Process for the isolation and stabilization of low molecular weight aminoglycans from waste egg shells | |
| JP2006104461A (en) | Method for removing impurity in glycosaminoglycan fraction | |
| JP2870871B2 (en) | A method for treating crustacean shells using enzymes | |
| EA023370B1 (en) | Shark-like chondroitin sulphate and process for the preparation thereof | |
| KR20190065935A (en) | refining method for mass production of marine collagen | |
| Tonégawa | Isolation and characterization of a particulate cell‐aggregation factor from sea urchin embryos | |
| US2585546A (en) | Production of high viscosity hyaluronic acid | |
| RU2304441C1 (en) | Method for obtaining sulfated glycosaminoglycans out of biological tissues | |
| RU2055079C1 (en) | Method for production of preparation of hyaluronic acid | |
| JP3762234B2 (en) | Sulfated polysaccharide cross-linked with polycationic substance and process for producing the same | |
| RU2821585C1 (en) | Method of producing vegetable protein | |
| RU2821584C1 (en) | Method of producing vegetable protein from flax cake | |
| JPS6159291B2 (en) | ||
| US3262854A (en) | Method for the recovery of heparin | |
| JP7138873B2 (en) | Methods for producing collagen-containing compositions and collagen isolates | |
| RU2139716C1 (en) | Method of preparing proteoglycan aggregates from agriculture animal cartilage | |
| RU2273486C1 (en) | Method for separating sulfated glycosoamineglycanes from biological tissue |