RU2649774C1 - Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome - Google Patents
Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome Download PDFInfo
- Publication number
- RU2649774C1 RU2649774C1 RU2016147469A RU2016147469A RU2649774C1 RU 2649774 C1 RU2649774 C1 RU 2649774C1 RU 2016147469 A RU2016147469 A RU 2016147469A RU 2016147469 A RU2016147469 A RU 2016147469A RU 2649774 C1 RU2649774 C1 RU 2649774C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- level
- outcome
- mtdna
- blood
- copies
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 6
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 6
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 5
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 5
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 5
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 5
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 4
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 3
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 2
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 2
- ATADHKWKHYVBTJ-UHFFFAOYSA-N hydron;4-[1-hydroxy-2-(methylamino)ethyl]benzene-1,2-diol;chloride Chemical compound Cl.CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 ATADHKWKHYVBTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 2
- 238000011471 prostatectomy Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 1
- 208000004434 Calcinosis Diseases 0.000 description 1
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 description 1
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000006029 Cardiomegaly Diseases 0.000 description 1
- 206010065929 Cardiovascular insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010052337 Diastolic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010061435 Enalapril Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010054805 Macroangiopathy Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000011682 Mitral valve disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 206010042602 Supraventricular extrasystoles Diseases 0.000 description 1
- 201000001943 Tricuspid Valve Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000009729 Ventricular Premature Complexes Diseases 0.000 description 1
- 206010047289 Ventricular extrasystoles Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229940049949 atorvastatin 20 mg Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- VHYCDWMUTMEGQY-UHFFFAOYSA-N bisoprolol Chemical compound CC(C)NCC(O)COC1=CC=C(COCCOC(C)C)C=C1 VHYCDWMUTMEGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002781 bisoprolol Drugs 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013155 cardiography Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000002586 coronary angiography Methods 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 1
- GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N enalapril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 229960000873 enalapril Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000005246 left atrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000004115 mitral valve Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229940080133 omeprazole 20 mg Drugs 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 238000005554 pickling Methods 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003587 tachysystolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования исходов острой ишемии миокарда.The present invention relates to medicine, namely to cardiology, and can be used to predict the outcome of acute myocardial ischemia.
Известно, что своевременная диагностика острых ишемических повреждений миокарда обуславливает эффективность их профилактики и лечения. Одним из показателей интенсивности цитолитических процессов является свободно циркулирующая митохондриальная ДНК (мтДНК) крови, уровень которой устанавливают для прогноза развития осложнений при злокачественных опухолях, септических процессах [Ellinger J., 
Известен способ прогнозирования атеросклеротической ишемической болезни сердца путем определения количественного уровня поврежденной митохондриальной ДНК (Пат.2243558 Российская Федерация, МПК G01N 33/48, C12Q 1/68. Повреждения митохондриальной ДНК как прогностический признак атеросклеротической ишемической болезни сердца / РАНДЖ Маршалл С., БАЛЛИНДЖЕР Скотт В., ВАН ХАУТЕН Беннетт; заявитель и патентообладатель РИСЕРЧ ДИВЕЛОПМЕНТ ФАУНДЕЙШН (US). - №2001122724/15; заявл. 14.01.2000; опубл. 27.12.2004).A known method for predicting atherosclerotic coronary heart disease by determining the quantitative level of damaged mitochondrial DNA (Pat.2243558 Russian Federation, IPC G01N 33/48, C12Q 1/68. Damage to mitochondrial DNA as a prognostic sign of atherosclerotic coronary heart disease / RANGE Marshall S., BALLINGER Scott V., VAN HOUTEN Bennett; applicant and patent holder RICHERD DEVELOPMENT FOUNDATION (US). - No. 2001122724/15; application. January 14, 2000; publ. December 27, 2004).
Известный способ осуществляют следующим образом. У пациента берут образец крови, в котором определяют количественный уровень повреждений митохондриальной ДНК методом количественной полимеразной цепной реакции (ПНР). Определение количественного уровня повреждений митохондриальной ДНК проводят по методу количественной ПЦР по амплификации продукта размером 16,2 т.п.н. После чего проводят сравнение количественного уровня повреждений митохондриальной ДНК в образце крови пациента с контрольным образцом крови субъекта, не страдающего атеросклерозом. По мнению авторов известного способа высокий количественный уровень повреждений митохондриальной ДНК у пациента, по сравнению с контрольным образцом, является прогностическим признаком атеросклеротической ишемической болезни сердца.The known method is as follows. A blood sample is taken from the patient, in which the quantitative level of mitochondrial DNA damage is determined by the method of quantitative polymerase chain reaction (NDP). The determination of the quantitative level of mitochondrial DNA damage is carried out according to the method of quantitative PCR by amplification of a product of 16.2 kbp. Then a comparison is made of the quantitative level of mitochondrial DNA damage in a patient’s blood sample with a control blood sample of a subject not suffering from atherosclerosis. According to the authors of this method, a high quantitative level of mitochondrial DNA damage in a patient, in comparison with a control sample, is a prognostic sign of atherosclerotic coronary heart disease.
К основным недостаткам данного способа следует отнести то, что он не может быть использован конкретно для прогнозирования исхода острой ишемии миокарда, т.к. предназначен для прогнозирования констатации атеросклеротической ишемической болезни сердца.The main disadvantages of this method include the fact that it cannot be used specifically to predict the outcome of acute myocardial ischemia, because designed to predict the establishment of atherosclerotic coronary heart disease.
Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ прогнозирования исхода при адреналиновом миокардите в эксперименте путем определения уровня свободно циркулирующей митохондриальной ДНК (мтДНК) крови (Судаков Н.П., Попкова Т.П. и др. Уровень свободно циркулирующей митохондриальной ДНК крови при дислипопротеидемии и адреналиновом миокардите (экспериментальное исследование) // Известия Ирк. гос. ун-та. - Серия «Биология. Экология», - 2011.- т. 4, №4, - с. 136-142).The closest in technical essence to the proposed one is a method for predicting the outcome of adrenaline myocarditis in an experiment by determining the level of freely circulating mitochondrial DNA (mtDNA) blood (Sudakov NP, Popkova TP, etc. The level of freely circulating mitochondrial blood DNA with dyslipoproteinemia and adrenaline myocarditis (experimental study) // Bulletin of the Irk. State University - Series "Biology. Ecology", - 2011.- vol. 4, No. 4, - pp. 136-142).
Известный способ заключается в следующем. Экспериментальным животным - крысам линии «Вистар», моделировали адреналиновый миокардит путем подкожного введения адреналин-гидрохлорида из расчета 0,2 мг на 100 г массы животного. Забор проб крови на исследование проводили через 2, 4, 16, 24, 48 и 72 часа после инъекции адреналина. Из плазмы крови выделяли ДНК с помощью набора реагентов «ДНК-проба». Количественный анализ мтДНК осуществляли методом полимеразно-цепной реакции в реальном времени, при этом амплифицируют фрагмент гена 16S рРНК, используя амплификаторы iCycler IQ4 (Bio-Rad, США) и DTlite (ДНК-технология, Россия). Амплифицировали фрагмент 16S рРНК - прямой праймер: 5'-TGCAGAAGCTATTAATGGTTCG-3', обратный - 5'-TTGGCTCTGCCACCCTAATA-3' (Ellinger J., Miiller S.C., Wernert N. et al. Mitochondrial DNA in serum of patients with prostate cancer: a predictor of biochemical recurrence after prostatectomy. // BJU Int. 2008. V. 102. P. 628-632), при этом использовали реакционную смесь, содержащую краситель SYBR Green (MaximaTM SYBR Green/ROX qPCR Master Mix - Fermentas, Латвия).A known method is as follows. The experimental animals - Wistar rats - were modeled with adrenaline myocarditis by subcutaneous administration of adrenaline hydrochloride at a rate of 0.2 mg per 100 g of animal weight. Blood sampling for the study was carried out 2, 4, 16, 24, 48 and 72 hours after the injection of adrenaline. DNA was isolated from blood plasma using a DNA sample reagent kit. Quantitative analysis of mtDNA was carried out by real-time polymerase chain reaction, and the 16S rRNA gene fragment was amplified using iCycler IQ4 amplifiers (Bio-Rad, USA) and DTlite (DNA technology, Russia). The 16S rRNA fragment was amplified - forward primer: 5'-TGCAGAAGCTATTAATGGTTCG-3 ', reverse - 5'-TTGGCTCTGCCACCCTAATA-3' (Ellinger J., Miiller SC, Wernert N. et al. Mitochondrial DNA in serum of patients with prostate cancer: predictor of biochemical recurrence after prostatectomy. // BJU Int. 2008. V. 102. P. 628-632), using a reaction mixture containing dye SYBR Green (MaximaTM SYBR Green / ROX qPCR Master Mix - Fermentas, Latvia).
Было установлено нарастание уровня свободно циркулирующей мито-хондриальной ДНК на 3-й сутки, который составил 1,26×107 копий/мл, что в 2.8 раза превысил уровень мтДНК контроля - 3,04×106 копий/мл (p=0,16). Полученные данные свидетельствуют, что при острой ишемии миокарда, вызванной подкожным введением адреналингидрохлорида, в миокарде возрастает активность патологических процессов, способствующих активному выходу в плазму крови митохондриальной ДНК, являющейся молекулярным показателем - биомаркером острого повреждения ткани миокарда.It was found that the level of freely circulating mitochondrial DNA increased on the 3rd day, which amounted to 1.26 × 10 7 copies / ml, which was 2.8 times higher than the mtDNA control level - 3.04 × 10 6 copies / ml (p = 0 ,16). The data obtained indicate that in acute myocardial ischemia caused by subcutaneous administration of adrenaline hydrochloride, the activity of pathological processes in the myocardium increases that promotes the active release of mitochondrial DNA into the blood plasma, which is a molecular indicator - a biomarker of acute myocardial tissue damage.
К недостаткам известного способа следует отнести то, что он не может быть использован для прогнозирования исхода острой ишемии миокарда у людей, поскольку разработан для определения уровня мтДНК плазмы крови экспериментальных животных, косвенно характеризуя процесс ишемии кардиомиоцитов при повреждении миокарда.The disadvantages of this method include the fact that it cannot be used to predict the outcome of acute myocardial ischemia in humans, since it was developed to determine the plasma mtDNA level of experimental animals, indirectly characterizing the process of cardiomyocyte ischemia in case of myocardial damage.
Задачей заявляемого изобретения является разработка способа прогнозирования исхода острой ишемии миокарда на основе определения молекулярного биомаркера повреждения кардиомиоцитов в клинической кардиологической практике.The objective of the invention is to develop a method for predicting the outcome of acute myocardial ischemia based on the determination of the molecular biomarker of damage to cardiomyocytes in clinical cardiological practice.
Техническим результатом предлагаемого способа является объективное обоснование раннего прогнозирования исхода течения острой ишемии миокарда.The technical result of the proposed method is an objective justification for early prediction of the outcome of the course of acute myocardial ischemia.
Технический результат достигается тем, что способ прогнозирования исхода острой ишемии миокарда включает определение в плазме крови уровня свободно циркулирующей митохондриальной ДНК (мтДНК) методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с амплифицированием фрагмента гена 16S рРНК с прямым и обратным праймерами.The technical result is achieved by the fact that a method for predicting the outcome of acute myocardial ischemia involves determining in blood plasma the level of freely circulating mitochondrial DNA (mtDNA) by real-time polymerase chain reaction with amplification of a 16S rRNA gene fragment with direct and reverse primers.
Отличия предлагаемого способа заключаются в том, что уровень свободно циркулирующей мтДНК крови определяют в первые сутки заболевания, при этом амплифицируют фрагмент гена 16S рРНК прямым праймером 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3' и обратным праймером 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3. При уровне менее 900 копий/мл прогнозируют благоприятный исход, а при уровне более 1800 копий/мл прогнозируют неблагоприятный исход.The differences of the proposed method are that the level of freely circulating mtDNA of blood is determined on the first day of the disease, while the 16S rRNA gene fragment is amplified with the direct primer 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3 'and the reverse primer 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3. A favorable outcome is predicted at a level of less than 900 copies / ml, and an unfavorable outcome is predicted at a level of more than 1800 copies / ml.
Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию изобретения «новизна».A comparative analysis of the proposed technical solution with the prototype allows us to conclude that the claimed technical solution meets the criteria of the invention of "novelty."
Проведенный анализ патентной и научно-медицинской литературы показал, что предлагаемый способ содержит признаки, отличающие его не только от прототипа, но и от других способов прогнозирования исхода острой ишемии миокарда.The analysis of patent and medical literature has shown that the proposed method contains features that distinguish it not only from the prototype, but also from other methods for predicting the outcome of acute myocardial ischemia.
Определение уровня свободно циркулирующей мтДНК крови в первые сутки заболевания позволяет объективно осуществить ранний прогноз исхода острой ишемии миокарда. При прогнозировании неблагоприятного исхода принять интенсивные профилактические мероприятия к выведению пациента из угрожающего здоровью состояния.Determining the level of freely circulating blood mtDNA on the first day of the disease allows you to objectively make an early prognosis of the outcome of acute myocardial ischemia. When predicting an adverse outcome, take intensive preventive measures to remove the patient from a health-threatening condition.
Авторами с использованием программы Vector NTI 10 подобраны прямой праймер 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3' и обратный праймер 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3, которые позволили осуществить амплифицирование фрагмента гена 16S рРНК и определить уровень мтДНК крови.Using the Vector NTI 10 program, the authors selected a direct primer 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3 'and a reverse primer 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3, which allowed amplification of a 16S rRNA gene fragment and determination of blood mtDNA level.
Авторами заявляемого способа установлено, что уровень мтДНК менее 900 копий/мл свидетельствует о низком риске, т.е. о благоприятном исходе заболевания, а уровень мтДНК, равный 1800 копий/мл и выше, свидетельствует о высоком риске неблагоприятного исхода острого коронарного синдрома. Уровень мтДНК от 900 до 1800 копий/мл является показателем неопределенного прогноза исхода острой ишемии миокарда.The authors of the proposed method found that the level of mtDNA less than 900 copies / ml indicates low risk, i.e. a favorable outcome of the disease, and a mtDNA level of 1800 copies / ml and higher indicates a high risk of an adverse outcome of acute coronary syndrome. An mtDNA level of 900 to 1800 copies / ml is an indicator of an uncertain prognosis of the outcome of acute myocardial ischemia.
Проведенный поиск известных в клинической и экспериментальной медицине решений показал, что полученные результаты не были обнаружены в известных решениях и ранее не применялись для прогнозирования исхода острой ишемии миокарда.A search for solutions known in clinical and experimental medicine showed that the results were not found in the known solutions and were not previously used to predict the outcome of acute myocardial ischemia.
Заявляемый способ обеспечивает достижение усматриваемого заявителем технического результата, а именно объективное обоснование раннего прогнозирования исхода течения острой ишемии миокарда.The inventive method ensures the achievement of the technical result perceived by the applicant, namely, an objective justification for early prediction of the outcome of the course of acute myocardial ischemia.
Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого технического решения критерию патентоспособности «изобретательский уровень».The above allows us to conclude that the proposed technical solution meets the patentability criterion of "inventive step".
Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, в частности кардиологии. Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке приемами и средствами, следовательно, заявляемое техническое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».The method comprising the claimed invention is intended for use in medicine, in particular cardiology. The possibility of its implementation is confirmed by the methods and means described in the application, therefore, the claimed technical solution meets the criteria of the invention "industrial applicability".
Предложенный способ осуществляют следующим образом.The proposed method is as follows.
Пациенту с диагнозом острый коронарный синдром в первые сутки заболевания берут пробу крови, в плазме которой определяют уровень свободно циркулирующей мтДНК. Для этого после выделения суммарной ДНК крови проводят полимеразную цепную реакцию в реальном времени с использованием реакционной смеси, содержащей краситель SYBR Green. Амплифицируют фрагмент гена 16S рРНК с прямым праймером 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3' и обратным праймером 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3'. Определяют уровень мтДНК. При уровне мтДНК менее 900 копий/мл прогнозируют благоприятный исход, а при уровне более 1800 копий/мл прогнозируют высокий риск неблагоприятного исхода острой ишемии миокарда.A patient with a diagnosis of acute coronary syndrome on the first day of the disease takes a blood sample, in the plasma of which the level of freely circulating mtDNA is determined. For this, after isolation of the total blood DNA, a polymerase chain reaction is carried out in real time using a reaction mixture containing SYBR Green dye. The 16S rRNA gene fragment was amplified with the 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3 'forward primer and the 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3' reverse primer. The mtDNA level is determined. At a mtDNA level of less than 900 copies / ml, a favorable outcome is predicted, and at a level of more than 1800 copies / ml, a high risk of an adverse outcome of acute myocardial ischemia is predicted.
Сущность предлагаемого способа прогнозирования исхода острой ишемии миокарда поясняется примерами конкретного выполнения.The essence of the proposed method for predicting the outcome of acute myocardial ischemia is illustrated by examples of specific performance.
Пример 1.Example 1
Больной К. Дата рождения: 31.10.1967 г. Даты: поступления в стационар: 19.09.2014 г., выписка; 03.10.2014 г.Patient K. Date of birth: 10/31/1967 Dates: admission to the hospital: 09/19/2014, discharge; 10/03/2014
Основное заболевание: ИБС, инфаркт миокарда с зубцом Q передне-перегородочно-боковой и задней стенки левого желудочка от 19.09.14 г.The main disease: coronary heart disease, myocardial infarction with Q wave of the anterior-septal-lateral and posterior wall of the left ventricle from 09/19/14
Данные коронарографии: Окклюзия проксимального сегмента общей нисходящей артерии (ОНА). Реканализация и стентирование правой нисходящей артерии (ПНА) с восстановлением кровотока. Стеноз среднего сегмента правой коронарной артерии (ПКА) до 50%. Осложнения основного заболевания: Хроническая сердечная недостаточность, 2 АФК, 2 Killip I.Coronary angiography data: Occlusion of the proximal segment of the common descending artery (OH). Recanalization and stenting of the right descending artery (PNA) with the restoration of blood flow. Stenosis of the middle segment of the right coronary artery (PKA) up to 50%. Complications of the underlying disease: Chronic heart failure, 2 ROS, 2 Killip I.
Обследование: Общий анализ крови, биохимические показатели, коагулограмма с незначительными отклонениями. Электрокардиограмма: ритм синусовый с ЧСС 75 ударов/мин. Закономерная динамика острого трансмурального инфаркта миокарда передне-перегородочно-боковой и задней стенки левого желудочка. Холтер мониторинг ЭКГ (ХМ ЭКГ): синусовый ритм с минимальной ЧСС 60 ударов/ мин, максимальная ЧСС 111 в мин, средняя ЧСС 81 в мин, зарегистрировано 142 желудочковых экстрасистол, в том числе вставочные, 40 суправен-трикулярных экстрасистол, парные. Пауз продолжительностью больше 2000 мсек не зарегистрировано. На протяжении всей записи зарегистрирована элевация сегмента ST, обусловленная инфарктом миокарда. Эхокардиография: АО-3.4 см, ЛП - 3.3×4.4 см, ПП - 2.8×3.8 см, ПЖ - 2.3 см, КДР лж - 5.5 см, КСР лж - 3.5 см, ТМЖП - 1.0 см, ТЗСЛЖ - 1.0 см, ФВ(Т) - 64%, ФВ (5) - 42%. Акинез верхушки, среднего и верхушечного сегментов переднеперегородочной стенки, передней и боковой стенок в верхушечном сегменте. Заключение: Диастолическая дисфункция левого желудочка. Рентген грудной клетки: Легкие, сердце, аорта без особенностей. Коронарокардиография: Окклюзия проксимального сегмента правой нисходящей артерии. Реканализация и стентирование правой нисходящей артерии с восстановлением кровотока. Стеноз среднего сегмента ПКА до 50%.Examination: Complete blood count, biochemical parameters, coagulogram with minor deviations. Electrocardiogram: sinus rhythm with a heart rate of 75 beats / min. The regular dynamics of acute transmural myocardial infarction of the anterior-septal-lateral and posterior walls of the left ventricle. Holter ECG monitoring (XM ECG): sinus rhythm with a minimum heart rate of 60 beats / min, maximum heart rate of 111 beats per minute, average heart rate of 81 beats per minute, 142 ventricular extrasystoles, including insertion, 40 supraven-tricular extrasystoles, paired. No pauses longer than 2000 ms were recorded. Throughout the recording, ST segment elevation was recorded due to myocardial infarction. Echocardiography: AO-3.4 cm, PL - 3.3 × 4.4 cm, PP - 2.8 × 3.8 cm, RV - 2.3 cm, CRD of the lie - 5.5 cm, CSR of the left - 3.5 cm, TMZHP - 1.0 cm, TZSLZH - 1.0 cm, PV ( T) - 64%, PV (5) - 42%. Akinesis of the apex, middle and apical segments of the anterior septum wall, anterior and lateral walls in the apical segment. Conclusion: Diastolic dysfunction of the left ventricle. Chest X-ray: Lungs, heart, aorta without features. Coronarocardiography: Occlusion of the proximal segment of the right descending artery. Recanalization and stenting of the right descending artery with restoration of blood flow. Stenosis of the middle segment of PKA up to 50%.
19.09.2014 г., т.е. в день поступления больного К. в стационар, было проведено определение уровня мтДНК в плазме крови этого больного. Для этого была проведена полимеразная цепная реакция в реальном времени с использованием реакционной смеси, содержащей краситель SYBR Green. Амплифицируют фрагмент гена 16S рРНК с прямым праймером 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3' и обратным праймером 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3'. Уровень мтДНК в плазме крови больного К. составил 10 коп/мл. Прогноз исхода течения заболевания благоприятный.09/19/2014, i.e. on the day of patient K.'s admission to the hospital, the level of mtDNA in the blood plasma of this patient was determined. For this, a real-time polymerase chain reaction was carried out using a reaction mixture containing SYBR Green dye. The 16S rRNA gene fragment was amplified with the 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3 'forward primer and the 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3' reverse primer. The mtDNA level in the blood plasma of patient K. was 10 kopecks / ml. The prognosis of the outcome of the disease is favorable.
Больному К. проведено лечение: Гепарин 1000 ЕД/ч в/в насос, Ацетилсалициловая кислота 0.5 К тх 1 раз утром, Клопидофел 75 м×1 раз, Бисопролол 5 мг 1/2 т утром, Эналаприл 2.5 мг×2 раза, Омепразол 20 мг×2 раза, Аторвастатин 20 мг вечером.Patient K. received treatment: Heparin 1000 IU / h IV pump, Acetylsalicylic acid 0.5 K tx 1 time in the morning, Clopidofel 75 m × 1 time, Bisoprolol 5 mg 1/2 t in the morning, Enalapril 2.5 mg × 2 times, Omeprazole 20 mg × 2 times, Atorvastatin 20 mg in the evening.
Выписан в удовлетворительном состоянии. 19.09.14=75.2 AT V2 (48±6 ч после СКС)-21.09.14=55.7Discharged in satisfactory condition. 09/19/14 = 75.2 AT V2 (48 ± 6 h after SCS) -21.09.14 = 55.7
Визит отдаленной оценки 20.10.14. ПЦР анализ уровня свободно пикулирующей митохондриальной ДНК крови - 10 коп/мл. Подтвержден прогноз благоприятного исхода течения острой ишемии миокарда у пациента К.Visit of the remote assessment 10/20/14. PCR analysis of the level of freely pickling mitochondrial blood DNA - 10 kopecks / ml. The prognosis of a favorable outcome of the course of acute myocardial ischemia in patient K. has been confirmed.
Пример 2.Example 2
Больная М., 87 лет (22.01.1927 г.р.) поступила 13.11.2014 г.Patient M., 87 years old (born January 22, 1927) was admitted on November 13, 2014.
Основное заболевание: Кардиомегалия, пневмосклероз. Атеросклероз аорты. ЭКГ: Фибрилляция предсердий, Q инфаркт передне-перегородочно-боковой области.Main disease: Cardiomegaly, pneumosclerosis. Atherosclerosis of the aorta. ECG: Atrial fibrillation, Q infarct of antero-septal-lateral region.
Обследование: В общем анализе крови - лейкоцитоз 15,5×109/л со сдвигом формулы влево; Тропониновый тест - 0,44 нг/мл. На чрескожном вмешательстве: окклюзивный тромбоз правой нисходящей артерии. Выполнено стентирование.Examination: In a general blood test - leukocytosis 15.5 × 10 9 / l with a shift of the formula to the left; Troponin test - 0.44 ng / ml. On percutaneous intervention: occlusive thrombosis of the right descending artery. Stenting completed.
В день поступления больной М. в стационар был проведен ГЩР анализ уровня свободно цикулирующей митохондриальной ДНК крови. Уровень мтДНК в плазме крови составил 6800 коп/мл. Прогноз исхода заболевания неблагоприятный.On the day the patient M. was admitted to the hospital, a GSR analysis of the level of freely circulating mitochondrial blood DNA was performed. Plasma mtDNA was 6,800 kopecks / ml. The prognosis of the outcome of the disease is unfavorable.
Рентгенография органов грудной клетки: Легкие небольшого объема, рисунок деформирован. Корни легких значительно расширены, «обрублены». Слева синусы завуалированы. Сердце расширено больше влево, «талии» нет, широкая аорта с кальцинатами.X-ray of the chest: Lungs of a small volume, the figure is deformed. The roots of the lungs are significantly expanded, "chopped off." On the left, the sinuses are veiled. The heart is expanded more to the left, there is no "waist", a wide aorta with calcifications.
Заключение: Порок митрального клапана с преобладанием стеноза. Дилатация левого предсердия, правых отделов. Недостаточность трикуспидального клапана. Легочная гипертензия 2 ст. Гипертрофия миокарда левого желудочка. Дегенеративные изменения артального, митрального клапанов. OAK в динамике: некоторое снижение количества лейкоцитов до 12,7. В Б/Х: ЛДГ 743 МЕ/л, креатинкиназа 526 МЕ/л, ККМВ 141,7 МЕ/л, в динамике нарастание азотемии (креатинин 0,121 ммоль/л->0,15 ммоль/л->0,233 ммоль/л), СКФ (МОВО) - 39 мл/мин/1,73 кв.см.Conclusion: Mitral valve disease with a predominance of stenosis. Dilation of the left atrium, right departments. Tricuspid valve insufficiency. Pulmonary hypertension 2 tbsp. Left ventricular myocardial hypertrophy. Degenerative changes in the articular, mitral valves. OAK in dynamics: a slight decrease in the number of leukocytes to 12.7. In B / X: LDH 743 IU / L, creatine kinase 526 IU / L, KKMV 141.7 IU / L, in the dynamics of an increase in azotemia (creatinine 0.121 mmol / L -> 0.15 mmol / L -> 0.233 mmol / L) , GFR (MOVO) - 39 ml / min / 1.73 sq.cm.
16.11.2014 г. Состояние пациентки нестабильное, без улучшения, с отрицательной динамикой, нарастала сердечно-сосудистая недостаточность. В 03.20 констатирована биологическая смерть.November 16, 2014. The patient's condition is unstable, without improvement, with negative dynamics, cardiovascular insufficiency increased. At 03.20 biological death was ascertained.
Заключительный диагноз: Сахарный диабет 2 типа, целевой уровень гликированного гемоглобина менее 7,5%. Осложнения: Макроангиопатия коронарных артерий:. Q-инфаркт миокарда передене-перегородочно-боковой стенки левого желудочка от 13.11.2014 г. Экстренная коронарокардиография: Окклюзивный тромбоз ПНА. Прямое стентирование правой нисходящей артерии от 13.11.2014 г. Стеноз дистального сегмента ПКА до 50%. Ишемическая кардиомиопатия. Атеросклеротический митральный порок с преобладанием стеноза. Постоянная фибрилляция предсердий, тахисистолический вариант. Killip III, ХСН 2А ФК 3, ХБП Зв стадии. Полиорганная недостаточность. Сопутствующий: Гипертоническая болезнь 3 стадии, риск 4 (ИБС, возраст). Сахарный диабет 2 типа. Целевой уровень гликированного гемоглобина менее 8,0%. 19.10.14 г.Final diagnosis: Type 2 diabetes mellitus, target glycated hemoglobin level of less than 7.5%. Complications: Coronary artery macroangiopathy :. Q myocardial infarction of the anterior-septal-lateral wall of the left ventricle dated 11/13/2014. Emergency coronary cardiography: Occlusive thrombosis of PNA. Direct stenting of the right descending artery from 11/13/2014. Stenosis of the distal PKA segment up to 50%. Ischemic cardiomyopathy. Atherosclerotic mitral defect with a predominance of stenosis. Constant atrial fibrillation, tachysystolic variant. Killip III, CHF 2A FC 3, CKB Sv stage. Multiple organ failure. Concomitant: Stage 3 hypertension, risk 4 (CHD, age). Type 2 diabetes. The target glycated hemoglobin level is less than 8.0%. 10/19/14
По предлагаемому способу проведено прогнозирование исхода заболевания 14 пациентам.The proposed method predicts the outcome of the disease in 14 patients.
В исследование ретроспективно были включены результаты обследования 14-ти пациентов с диагнозом острой ишемии миокарда, подписавших информированное согласие на обработку их персональных данных.The study retrospectively included the results of a survey of 14 patients with a diagnosis of acute myocardial ischemia who signed an informed consent to the processing of their personal data.
Пациенты поступали по экстренным показаниям в Иркутскую государственную областную клиническую больницу для чрескожного вмешательства со стентированием коронарных сосудов по поводу острого коронарного синдрома.Patients were admitted for emergency reasons to the Irkutsk State Regional Clinical Hospital for percutaneous intervention with stenting of the coronary vessels for acute coronary syndrome.
Для анализа уровня свободно циркулирующей мтДНК было предоставлено 14 пронумерованных образцов плазмы крови, взятых в первые сутки у пациентов с острой ишемией миокарда. Количественный анализ мтДНК проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с использованием реакционной смеси, содержащей SYBR Green (Maxima™ SYBR Green/ROXq PCR Master Mix - Thermo Fisher Scientific Inc., США). Амплифицировали фрагмент гена 16S рРНК (прямой праймер: 5'-СAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3', обратный праймер: 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3') длиной 230 п.н. (Ellinger, 2008).To analyze the level of freely circulating mtDNA, 14 numbered blood plasma samples were taken from patients with acute myocardial ischemia on the first day. Quantitative analysis of mtDNA was carried out by real-time polymerase chain reaction using a reaction mixture containing SYBR Green (Maxima ™ SYBR Green / ROXq PCR Master Mix - Thermo Fisher Scientific Inc., USA). A 16S rRNA gene fragment was amplified (forward primer: 5'-CAGCCGCTATTAAAGGTTCG-3 ', reverse primer: 5'-GGGCTCTGCCATCTTAACAA-3') 230 bp in length. (Ellinger, 2008).
Для построения калибровочной прямой использовали серию образцов с известной концентрацией фрагмента указанного выше гена длиной 490 п.н. (прямой праймер: 5'-GGGATAACAGCGCAATCCTA-3', обратный праймер: 5'-ACGTTGGGGCCTTTGCGTAG-3'), содержащего в своем составе анализируемую последовательность длиной 230 п.н. Синтез используемых олигонуклеотидов осуществлен в ООО «Синтол» (г. Москва, Россия). Для проведения ПЦР в реальном времени использовали амплификатор «DT lite» (ДНК-технология, Россия).To construct the calibration line, we used a series of samples with a known concentration of a fragment of the above gene 490 bp in length. (forward primer: 5'-GGGATAACAGCGCAATCCTA-3 ', reverse primer: 5'-ACGTTGGGGCCTTTTGCGTAG-3') containing in its composition an analyzed sequence of 230 bp in length. The synthesis of the oligonucleotides used was carried out at Syntol LLC (Moscow, Russia). For real-time PCR, a DT lite amplifier (DNA technology, Russia) was used.
Статистическую значимость различий уровня мтДНК в группах выживших и умерших пациентов определяли с помощью критерия Манна-Уитни.The statistical significance of differences in mtDNA levels in groups of surviving and deceased patients was determined using the Mann-Whitney test.
Для оценки прогностических возможностей уровня свободно циркулирующей мтДНК при остром коронарном синдроме пациенты были подразделены на 2 группы: группа №1 - благоприятный исход, №2 - неблагоприятный исход.To assess the prognostic capabilities of the level of freely circulating mtDNA in acute coronary syndrome, patients were divided into 2 groups: group No. 1 — favorable outcome, No. 2 — unfavorable outcome.
Анализ уровня свободно циркулирующей мтДНК в крови этих пациентов показал, что у пациентов с благоприятным исходом заболевания значение данного показателя в 164 раза меньше в сравнении с неблагоприятным исходом (p=0,049). Взаимосвязь уровня мтДНК с наступлением летального исхода, характеризуемая коэффициентом корреляции Спирмена (R2), составляет 0,4 (p=0,01). При этом результаты логистического регрессионного анализа вероятности смерти у пациентов с острым коронарным синдромом в зависимости от уровня свободно циркулирующей митохондриальной ДНК плазмы крови при поступлении в стационар свидетельствовали, что вероятность гибели пациента с повышенным уровнем мтДНК (свыше 1800 копий/мл) объективно возрастает.An analysis of the level of freely circulating mtDNA in the blood of these patients showed that in patients with a favorable outcome of the disease the value of this indicator is 164 times less in comparison with an unfavorable outcome (p = 0.049). The relationship between the mtDNA level and the onset of death, characterized by Spearman's correlation coefficient (R2), is 0.4 (p = 0.01). Moreover, the results of a logistic regression analysis of the probability of death in patients with acute coronary syndrome, depending on the level of freely circulating mitochondrial DNA of blood plasma upon admission to the hospital, showed that the probability of death of a patient with an increased level of mtDNA (over 1800 copies / ml) objectively increases.
Диапазон значений уровня мтДНК свыше от 900 копий/мл до 1800 копий/мл не позволяет однозначно прогнозировать исход заболевания и определяет необходимость интенсивной терапии.The range of mtDNA levels above 900 copies / ml to 1800 copies / ml does not allow us to unambiguously predict the outcome of the disease and determines the need for intensive care.
Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает объективную возможность раннего прогноза исхода течения острой ишемии миокарда для превентивного принятия интенсивных профилактических или терапевтических мероприятий. Полученные данные представляются перспективными для трансляционной медицины, направленной на внедрение в клиническую кардиологию результатов фундаментальных исследований.Thus, the proposed method provides an objective opportunity for early prediction of the outcome of the course of acute myocardial ischemia for the preventive adoption of intensive preventive or therapeutic measures. The data obtained seem promising for translational medicine aimed at introducing the results of basic research into clinical cardiology.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147469A RU2649774C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147469A RU2649774C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2649774C1 true RU2649774C1 (en) | 2018-04-04 |
Family
ID=61867401
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016147469A RU2649774C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2649774C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2466396C1 (en) * | 2011-10-27 | 2012-11-10 | Елена Сергеевна Акарачкова | Method for prediction of probability of fatal outcome of ischemic stroke in patients without depression of consciousness |
| RU2524417C2 (en) * | 2012-08-24 | 2014-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ГНИЦПМ" Минздрава России) | Method of determining risk of development of cardiovascular complications in patients with chronic ischemic heart disease within next 3 years |
| RU2527768C1 (en) * | 2013-06-10 | 2014-09-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им И.М. Сеченова Минздрава России) | Method for prediction of unfavourable outcome of hypertrophic cardiomyopathy |
| RU2566212C1 (en) * | 2014-12-08 | 2015-10-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО НГМУ Минздрава России) | Method for multifactor prediction of remote unfavourable outcomes in patients suffered acute coronary syndrome with persistent st-segment elevation |
| RU2570089C1 (en) * | 2014-12-26 | 2015-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ГНИЦПМ" Минздрава России) | Method for evaluating risk of remote death and nonfatal cardiovascular complications in patients with chronic ischemic heart disease |
-
2016
- 2016-12-02 RU RU2016147469A patent/RU2649774C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2466396C1 (en) * | 2011-10-27 | 2012-11-10 | Елена Сергеевна Акарачкова | Method for prediction of probability of fatal outcome of ischemic stroke in patients without depression of consciousness |
| RU2524417C2 (en) * | 2012-08-24 | 2014-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ГНИЦПМ" Минздрава России) | Method of determining risk of development of cardiovascular complications in patients with chronic ischemic heart disease within next 3 years |
| RU2527768C1 (en) * | 2013-06-10 | 2014-09-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им И.М. Сеченова Минздрава России) | Method for prediction of unfavourable outcome of hypertrophic cardiomyopathy |
| RU2566212C1 (en) * | 2014-12-08 | 2015-10-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО НГМУ Минздрава России) | Method for multifactor prediction of remote unfavourable outcomes in patients suffered acute coronary syndrome with persistent st-segment elevation |
| RU2570089C1 (en) * | 2014-12-26 | 2015-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ГНИЦПМ" Минздрава России) | Method for evaluating risk of remote death and nonfatal cardiovascular complications in patients with chronic ischemic heart disease |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Применение ингибиторов АПФ у больных острым инфарктом миокарда и их влияние на выживаемость и качество жизни в отдаленном периоде // Перспективы оптимизации работы многопрофильных стационаров на основе стандартизации в здравоохранении. М., 2000, с. 49-53. * |
| Судаков Н.П. и др. Уровень свободно циркулирующей митохондриальной ДНК крови при дислипопротеидемии и адреналиновом миокардите (экспериментальное исследование) // Известия Ирк. гос. ун-та. - Серия "Биология. Экология". 2011. т. 4, N4, с. 136-142. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guo et al. | Implication of peripheral blood miRNA-124 in predicting acute myocardial infarction. | |
| Matta et al. | Takotsubo cardiomyopathy | |
| RU2287158C1 (en) | Method for predicting the dvelopment for hypertonic disease according to genetic risk factors | |
| JP2019530878A5 (en) | ||
| US11761966B2 (en) | Nourin gene-based RNA molecular network: novel early diagnostic and prognostic biomarkers for coronary artery disease, unstable angina, STEMI/NSTEMI and heart failure | |
| US20230416822A1 (en) | Detection and treatment of conditions characterized by perfusion shortage | |
| RU2649774C1 (en) | Method for prediction of acute myocardial ischemia outcome | |
| CN104630339B (en) | Circulation miRNAs and its application for acute coronary syndrome early diagnosis | |
| US20230135486A1 (en) | Circulating rna signatures specific to preeclampsia | |
| Lassailly et al. | effects of bariatric surgery on severe liver injury in morbid obese patients with proven Nash: a prospective study: 213 | |
| CN109136374B (en) | Detection kit for auxiliary diagnosis of intracranial aneurysm and application thereof | |
| RU2587753C1 (en) | Method for prediction of risk of development of infectious endocarditis | |
| Fang et al. | Hirsutella sinensis fungus improves cardiac function in mouse model of heart failure | |
| Vaze et al. | Plasma MicroRNAs relate to atrial fibrillation recurrence after catheter ablation: longitudinal findings from the MiRhythm study | |
| RU2804657C1 (en) | Method for determining high risk of developing life-threatening arrhythmias and sudden cardiac death in patients with coronary heart disease | |
| Aouad | Systup-plus study evaluation of stroke risk score by stroke riskometer tmo | |
| RU2678441C1 (en) | Method for predicting risk of development of hypertensive disease factored in genetic and environmental factors | |
| RU2642284C1 (en) | Method for selection of perindopril dosage forpatients with ischemic heart disease on background of arterial hypertension | |
| Fesyun | RELAPSE OF VARICOSE VEINS OF LOWER EXTREMITIES | |
| Bhasin et al. | IS AUTOMATED AND UNOBSERVED OFFICE BLOOD PRESSURE MEASUREMENT IN CHRONIC KIDNEY DISEASE (CKD) THE NEED OF THE HOUR? | |
| RU2772359C1 (en) | Method for predicting the development of various degrees of severity of chronic heart failure | |
| Pjanykh et al. | EFFECT OF SPECIALIZED CONFECTIONARY PRODUCTS ‘0 CALORIES’INTAKE ON GLUCOSE LEVEL IN DIABETIC PATIENTS | |
| RU2811933C1 (en) | Method of diagnosing genetic predisposition to development of phenomenon of coronary microvascular obstruction during percutaneous coronary interventions in patients with myocardial infarction with st segment elevation | |
| Bisogni et al. | ADRENAL VEIN SAMPLING-GUIDED ADRENALECTOMY. AN EFFECTIVE WAY TO RESOLVE DRUG-RESISTANT HYPERTENSION? | |
| Trofimova et al. | DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE OF MITOCHONDRIAL DNA IN SOCIALLY SIGNIFICANT DISEASES |