RU2646793C1 - Dog remedy regenerative activity - Google Patents
Dog remedy regenerative activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2646793C1 RU2646793C1 RU2016148716A RU2016148716A RU2646793C1 RU 2646793 C1 RU2646793 C1 RU 2646793C1 RU 2016148716 A RU2016148716 A RU 2016148716A RU 2016148716 A RU2016148716 A RU 2016148716A RU 2646793 C1 RU2646793 C1 RU 2646793C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- msc
- extract
- dog
- conditioned medium
- drug
- Prior art date
Links
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 title claims description 24
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims abstract description 30
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 238000004378 air conditioning Methods 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 24
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008439 repair process Effects 0.000 abstract description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 abstract 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 44
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 40
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 3
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 206010037569 Purulent discharge Diseases 0.000 description 2
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 2
- 208000010040 Sprains and Strains Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- ZYLKCEKZZWDRSF-VTLYIQCISA-N 2,2-dichloro-n-[(1r,2r)-1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide;5-methyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O.ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ZYLKCEKZZWDRSF-VTLYIQCISA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 101000635799 Homo sapiens Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 208000034693 Laceration Diseases 0.000 description 1
- 206010024453 Ligament sprain Diseases 0.000 description 1
- 241000195947 Lycopodium Species 0.000 description 1
- JKWKMORAXJQQSR-MOPIKTETSA-N Nandrolone Decanoate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCC)[C@@]1(C)CC2 JKWKMORAXJQQSR-MOPIKTETSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 102100030852 Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Human genes 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- OXXNTXVXBWLYQE-PVHICTMWSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s,17s)-13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl] dodecanoate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@]1(C)CC2 OXXNTXVXBWLYQE-PVHICTMWSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 231100000439 acute liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001764 biostimulatory effect Effects 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 1
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001632 homeopathic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229960001935 nandrolone decanoate Drugs 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной терапии, и может быть использовано для стимуляции регенеративных процессов в организме собаки - в послеоперационный период, при дегенеративных заболеваниях органов и систем органов, острых и хронических заболеваниях кожи, улучшает качество жизни стареющих животных.The invention relates to veterinary medicine, in particular to veterinary therapy, and can be used to stimulate regenerative processes in the dog’s body - in the postoperative period, with degenerative diseases of organs and organ systems, acute and chronic skin diseases, improves the quality of life of aging animals.
Уровень техникиState of the art
Известны синтетические аналоги, обладающие регенеративной активностью, такие как натрия нуклеинат, метилурацил и прочие. Подобные лекарственные средства обладают восстановительными свойствами, улучшают гемапоэз, однако обладают относительно низкой эффективностью и узконаправленностью действия, при этом обладают рядом противопоказаний, связанных с риском угнетения нервной системы, возникновения брадикардии, обострения онкологических патологий системы крови, возникновения аллергических реакций.Known synthetic analogues having regenerative activity, such as sodium nucleinate, methyluracil and others. Such drugs have restorative properties, improve hemapoiesis, however, they have a relatively low effectiveness and narrow action, with a number of contraindications associated with the risk of depression of the nervous system, the occurrence of bradycardia, exacerbation of oncological pathologies of the blood system, and the occurrence of allergic reactions.
Существует регенеративный препарат «Лаураболин 50» (другие названия - ретаболил, нандролона деканоат для собак), представляющий собой инъекционный анаболический стероид (нандролон лаурат), который применяют в качестве общеукрепляющего средства, при лечении терапевтических и хирургических заболеваний с существенным повреждением тканей. Недостатком данного препарата является его стероидная природа, что в совокупности с длительным курсом лечения, может оказать негативное, опасное влияние на весь организм (особенно почки, печень и мозг) и отрицательно сказаться на синтезе собственных гормонов организма животного.There is a regenerative drug “Laurabolin 50” (other names - retabolil, nandrolone decanoate for dogs), which is an injectable anabolic steroid (nandrolone laurate), which is used as a general strengthening agent in the treatment of therapeutic and surgical diseases with significant tissue damage. The disadvantage of this drug is its steroid nature, which, in combination with a long course of treatment, can have a negative, dangerous effect on the whole body (especially the kidneys, liver and brain) and adversely affect the synthesis of the animal's own hormones.
Также известен гомеопатический препарат системного воздействия на организм на растительной основе «Лиарсин», в состав которого входит три компонента - растительное сырье Lycopodium и минеральные соединения - Arsenicum и Phosphorus. Лиарсин используется для восстановления водно-солевого баланса организма собак после перенесенных кишечных инфекций или воспалительных заболеваний ЖКТ. К недостаткам известного средства можно отнести невысокую биологическую активность препарата и ограниченную сферу применения, так как используется только при заболеваниях ЖКТ.Also known is the homeopathic preparation of systemic effects on the plant-based organism “Liarsin”, which consists of three components - plant raw materials Lycopodium and mineral compounds - Arsenicum and Phosphorus. Liarsin is used to restore the water-salt balance of the dog’s body after intestinal infections or inflammatory diseases of the gastrointestinal tract. The disadvantages of the known funds include the low biological activity of the drug and the limited scope, since it is used only for diseases of the gastrointestinal tract.
Прототипом изобретения является препарат «Гамавит» - комплексный препарат, основу которого составляют плацента, денатурированная эмульгированная и нуклеинат натрия. Препарат выпускается в жидкой форме на основе ростовой питательной среды, содержащей сбалансированный раствор солей, аминокислот и витаминов [Патент РФ №2005475 С1, 01.10.91]. Для данного прототипа описаны следующие эффекты для собак: нормализует обменные процессы, обладает биостимулирующим, дезинтоксикационным, иммуномодулирующим и адаптогенным действием.The prototype of the invention is the drug "Gamavit" - a complex preparation, the basis of which is the placenta, denatured emulsified and sodium nucleinate. The drug is available in liquid form based on a growth medium containing a balanced solution of salts, amino acids and vitamins [RF Patent No. 20055475 C1, 01.10.91]. For this prototype, the following effects for dogs are described: normalizes metabolic processes, has biostimulating, detoxifying, immunomodulating and adaptogenic effects.
Указанный прототип обладает рядом недостатков. Один из основных компонентов средства - плацента - может нести риск развития аллергической реакции. Указанное сырье, используемое для получения данного препарата, не стандартизировано, поэтому и несет опасность развития нежелательной микрофлоры, что несет угрозу инфицирования животных при применении препарата. Также использование «Гамавита» длительно и требует введения большого количества препарата (при профилактике в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела, в ходе лечения - по 0,3-0,5 мл в течение 2-4 недель). Кроме того, препарат выпускается в жидкой форме, что значительно сокращает срок его хранения.The specified prototype has several disadvantages. One of the main components of the drug - the placenta - may carry a risk of developing an allergic reaction. The specified raw materials used to obtain this drug are not standardized, therefore, they carry the risk of developing undesirable microflora, which poses a risk of infection of animals when using the drug. Also, the use of "Gamavit" is long-term and requires the introduction of a large amount of the drug (for prophylaxis at a dose of 0.1 ml per 1 kg of body weight, during treatment - 0.3-0.5 ml for 2-4 weeks). In addition, the drug is available in liquid form, which significantly reduces its shelf life.
Стратегия регенеративной медицины, основанная на стимулировании собственного восстановительного потенциала, применяется при создании лекарственных средств для человека, например, кондиционная среда, обладающая лечебным эффектом при термических ожогах [патент RU №2292212, 27.01.07], однако не используется в ветеринарии.The strategy of regenerative medicine, based on stimulating one's own regenerative potential, is used to create medicines for humans, for example, a conditioned environment that has a therapeutic effect in thermal burns [RU patent No. 2292212, 01/27/07], but is not used in veterinary medicine.
Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Настоящее изобретение ставит перед собой задачу обеспечения стимуляции регенеративных процессов в организме собаки при широком спектре дегенеративных заболеваний и расширения арсенала лекарственных средств, применяемых в восстановительной ветеринарии для собак.The present invention aims at providing stimulation of regenerative processes in the dog’s body with a wide range of degenerative diseases and expanding the arsenal of drugs used in restorative veterinary medicine for dogs.
Технический результат достигается путем разработки ветеринарного препарата для собак, обладающего регенеративной активностью, и, как следствие, - терапевтическим эффектом - в отношении широкого спектра заболеваний собак.The technical result is achieved by developing a veterinary preparation for dogs with regenerative activity, and, as a consequence, a therapeutic effect in relation to a wide range of diseases of dogs.
Патогенез дегенеративных заболеваний связан с нарушением способности отдельных тканей организма к восстановлению и компенсации путем реализации собственного регенераторного потенциала. Существующие прототипы обладают фармакологическим действием, на стимуляции либо замещении функций сохранившихся клеточных элементов. Однако концепция компенсации нарушений деятельности и повреждений органов-мишеней за счет указанных приспособительных процессов в значительном числе случаев оказывается несостоятельной.The pathogenesis of degenerative diseases is associated with a violation of the ability of individual body tissues to recover and compensate by realizing their own regenerative potential. Existing prototypes have a pharmacological effect on the stimulation or replacement of the functions of preserved cellular elements. However, the concept of compensation for impaired activity and damage to target organs due to the indicated adaptive processes in a significant number of cases is untenable.
МСК обладают способностью секретировать широкий спектр хемокинов и ростовых факторов и быстро реагировать на изменение гомеостаза ткани модификацией профиля их секреции. Таким образом, с участием мезенхимальных клеток осуществляется природный механизм регуляции регенерации тканей. Мезенхимальные клетки присутствуют во всех органах взрослого организма и могут быть выделены и культивированы in vitro.MSCs have the ability to secrete a wide range of chemokines and growth factors and to respond quickly to changes in tissue homeostasis by modifying their secretion profile. Thus, with the participation of mesenchymal cells, a natural mechanism for regulating tissue regeneration is implemented. Mesenchymal cells are present in all organs of the adult body and can be isolated and cultured in vitro.
Реализация данного подхода может быть обеспечена использованием препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК костного мозга и жировой ткани, регенеративная активность которого обусловлена действием комплекса цитокинов, секретируемых МСК в культуральную среду.The implementation of this approach can be achieved by using a preparation based on the extract and the conditioned culture medium of MSCs of bone marrow and adipose tissue, the regenerative activity of which is due to the action of a complex of cytokines secreted by MSCs in the culture medium.
Изобретение представляет собой экстракт и кондиционную среду (КС) культуры мезенхимальных стволовых клеток (МСК) (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак.The invention is an extract and a conditioned medium (CS) of a culture of mesenchymal stem cells (MSCs) (both de novo isolated and deconserved) from the bone marrow and / or adipose tissue of dogs.
Изготовление заявленного препарата выполняется в следующие этапы:The manufacture of the claimed drug is carried out in the following steps:
1. Накопление клеточной массы и формирование кондиционной среды. Для этого выполняют деконсервирование полученных ранее или непосредственное выделение мезенхимальных стволовых клеток из костного мозга либо жировой ткани собак. МСК собаки культивируют в ростовой среде на основе DMEM с 10% содержанием фетальной бычьей сыворотки (ФБС) до образования кондиционной среды, приемлемость которой оценивается по содержанию интерлейкинов (концентрация ИЛ-1β - не менее 2 пг/мл, ИЛ-2 - не менее 2 пг/мл, ИЛ-6 - не менее 10 пг/мл, ИЛ-10 - не менее 2 пг/мл).1. The accumulation of cell mass and the formation of a conditioned environment. For this, deconservation of previously obtained or direct isolation of mesenchymal stem cells from bone marrow or adipose tissue of dogs is performed. MSCs in dogs are cultured in DMEM-based growth medium with 10% fetal bovine serum (PBS) until a conditioned medium is formed, the acceptability of which is assessed by the content of interleukins (IL-1β concentration of at least 2 pg / ml, IL-2 of at least 2 pg / ml, IL-6 - at least 10 pg / ml, IL-10 - at least 2 pg / ml).
2. Приготовление полупродукта на основе кондиционной среды и экстракта МСК. На данном этапе осуществляют сбор кондиционной среды, удовлетворяющей критериям приемлемости по концентрации интерлейкинов, снятие с подложки и диспергирование монослоя мезенхимальных стволовых клеток, получение экстракта клеток путем замораживания-оттаивания клеточной суспензии, объединение экстракта с кондиционной средой, полученной в ходе культивирования МСК собаки.2. Preparation of the intermediate product on the basis of the conditioned medium and MSC extract. At this stage, a conditioned medium is collected that meets the criteria for acceptability for interleukin concentration, removed from the substrate and dispersed a monolayer of mesenchymal stem cells, a cell extract is obtained by freezing and thawing a cell suspension, and the extract is combined with a conditioned medium obtained by culturing a dog MSC.
3. Изготовление конечного продукта. Полученный на предыдущем этапе полупродукт стабилизируют посредством добавления глицина в концентрации 20 мг на 1 мл раствора для лиофилизации, подвергают стерилизующей фильтрации, осуществляют розлив во флаконы в асептических условиях и сублимационную сушку.3. The manufacture of the final product. The intermediate obtained in the previous step is stabilized by adding glycine at a concentration of 20 mg per 1 ml of lyophilization solution, subjected to sterilizing filtration, and bottling under aseptic conditions and freeze-drying.
Краткое описание иллюстративного материалаBrief description of illustrative material
Изобретение поясняется, графиками и таблицами:The invention is illustrated in graphs and tables:
График 1. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС МСК КМ), (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на пролиферативный индекс культур клеток первичных дермальных фибробластов собак.Figure 1. The effect of the drug based on the extract and the conditioned medium of bone marrow mesenchymal stem cells (CS MSC KM), (CS + MSC VT) and deconserved bone marrow MSC (SC + MSC CM decons) on the proliferative index of dog cell cultures of primary dermal fibroblasts.
График 2. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на активность АлТ в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).Figure 2. The effect of the drug on the basis of the extract and conditioned medium of bone marrow mesenchymal stem cells (KS + MSC KM), adipose tissue (KS + MSC MF) and deconserved MSC of bone marrow (SC + MSC KM decons) on the activity of Alt in rat serum when modeling acute liver pathology (AKI).
График 3. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на активность АсТ в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).Chart 3. The effect of the drug based on the extract and the conditioned medium of bone marrow mesenchymal stem cells (KS + MSC KM), adipose tissue (KS + MSC MF) and deconserved MSC of bone marrow (SC + MSC KM decons) on the activity of AcT in rat serum when modeling acute liver pathology (AKI).
График 4. Влияние препарата на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс) на содержание белка в сыворотке крови крыс при моделировании острой патологии печени (ОПП).Figure 4. The effect of the preparation based on the extract and the conditioned medium of bone marrow mesenchymal stem cells (KS + MSC KM), adipose tissue (KS + MSC MF) and deconserved MSC of bone marrow (SC + MSC KM decons) on the protein content in rat serum when modeling acute liver pathology (AKI).
Таблица 1. Значение ИП первичной культуры дермальных фибробластов при добавлении разных концентраций регенеративного препарата.Table 1. The IP value of the primary culture of dermal fibroblasts with the addition of different concentrations of the regenerative drug.
Таблица 2. Биохимические параметры поражения печени в исследуемых группах животных.Table 2. Biochemical parameters of liver damage in the studied groups of animals.
Таблица 3. Данные клинических показателей собак при лечении регенеративным препаратом на основе экстракта и кондиционной среды мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КС+МСК КМ), жировой ткани (КС+МСК ЖТ) и деконсервированных МСК костного мозга (СК+МСК КМ деконс).Table 3. The clinical data of dogs treated with a regenerative preparation based on the extract and conditioned medium of bone marrow mesenchymal stem cells (KS + MSC KM), adipose tissue (KS + MSC MF) and deconserved MSC of bone marrow (SK + MSC KM decons).
Таблица 4. Данные гематологический и биохимический показателей сыворотки крови собак.Table 4. Data on hematological and biochemical parameters of blood serum of dogs.
Возможность осуществления изобретения и эффективность его применения поясняется примерами.The possibility of carrying out the invention and the effectiveness of its application is illustrated by examples.
Пример 1. Получение препарата на основе экстракта МСК жировой ткани собаки (как выделенных de novo, так и деконсервированных) и кондиционной среды, образующейся в процессе роста данных клеток.Example 1. Obtaining a preparation based on an extract of MSCs from adipose tissue of a dog (both de novo isolated and deconserved) and a conditioned medium formed during the growth of these cells.
Мезенхимальные стволовые клетки получали из подкожной жировой ткани собаки: под местной анестезией делали кожный разрез длиной 2-4 см, из места разреза отбирали небольшой кусок подкожного жира, объемом 0,5-1,0 мл, помещали в пробирку с буферным раствором Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (PBS) (Biowest, USA), содержащем гентамицин (80 мкг/мл, Биолот, Россия). Жировую ткань фрагментировали до однородной массы, используя стерильные инструменты, после чего подвергали ступенчатой ферментативной обработке. Ферментативную обработку выполняли следующим образом: к измельченной жировой ткани добавляли питательную среду DMEM high glucose (Biowest, USA) с добавлением антибиотика и антимикотика, а также фермента трипсина (Biowest, USA) до конечной концентрации 0,1-0,15%, выдерживали 30±5 минут при температуре 37±1°С и постоянном перемешивании на магнитной мешалке, затем среду с клетками фильтровали через нейлоновые мембраны с размером пор 100 мкм (BD) и добавляли 0,2-0,5% ФБС (Sigma-Aldrich, USA), для инактивации трипсина. Повторяли описанную операцию дважды со снижением времени инкубации до 15±5 минут.Mesenchymal stem cells were obtained from the subcutaneous adipose tissue of a dog: a 2-4 cm long skin incision was made under local anesthesia, a small piece of subcutaneous fat 0.5-1.0 ml was taken from the incision site, and placed in a test tube with Dulbecco's Phosphate Buffered buffer solution Saline (PBS) (Biowest, USA) containing gentamicin (80 μg / ml, Biolot, Russia). Adipose tissue was fragmented to a homogeneous mass using sterile instruments, and then subjected to a stepwise enzymatic treatment. The enzymatic treatment was performed as follows: DMEM high glucose nutrient medium (Biowest, USA) was added to the crushed adipose tissue with the addition of an antibiotic and antimycotics, as well as trypsin enzyme (Biowest, USA) to a final concentration of 0.1-0.15%, 30 ± 5 minutes at a temperature of 37 ± 1 ° C and constant stirring on a magnetic stirrer, then the medium with cells was filtered through nylon membranes with a pore size of 100 μm (BD) and 0.2-0.5% PBS was added (Sigma-Aldrich, USA ), to inactivate trypsin. The described operation was repeated twice with a decrease in incubation time to 15 ± 5 minutes.
После фильтрации клеточную суспензию центрифугировали в течение 10 мин при 1200 об/мин, супернатант полностью удаляли. Полученный осадок ресуспендировали в питательной среде DMEM high glucose (Biowest, USA) с 10% ФБС (Sigma-Aldrich, USA), после чего клетки высевали в культуральные флаконы (70±5 мл клеточной суспензии/флакон) с площадью ростовой поверхности 175 см2 (SPL, Корея) с концентрацией 1×106 кл/мл и культивировали при 37°С с 5%-ной концентрацией СО2.After filtration, the cell suspension was centrifuged for 10 min at 1200 rpm, the supernatant was completely removed. The resulting pellet was resuspended in DMEM high glucose growth medium (Biowest, USA) with 10% PBS (Sigma-Aldrich, USA), after which the cells were seeded in culture vials (70 ± 5 ml of cell suspension / vial) with a growth surface area of 175 cm 2 (SPL, Korea) with a concentration of 1 × 10 6 cells / ml and cultured at 37 ° C with a 5% concentration of CO 2 .
Спустя сутки после начала культивирования производили ополаскивание средой с антибиотиком для удаления не прикрепившихся клеток и производили замену ростовой среды. В дальнейшем замену среды выполняли раз в 3-4 суток. По достижению конфлюентности монослоя (контролируется визуально при помощи инвертированного микроскопа) не менее 85%, его дезагрегировали диспергирующим раствором (0,05-0,1% трипсина (Biowest, USA) в растворе Версена (ПанЭко, Россия)) и проводили посев в новые культуральные флаконы с коэффициентом пересева 1:3.A day after the start of cultivation, rinsing was performed with an antibiotic medium to remove non-adherent cells and the growth medium was replaced. Subsequently, the medium was replaced every 3-4 days. To achieve the confluence of the monolayer (visually checked with an inverted microscope) at least 85%, it was disaggregated with a dispersing solution (0.05-0.1% trypsin (Biowest, USA) in Versen's solution (PanEco, Russia) and inoculated in new culture bottles with a reseeding ratio of 1: 3.
Для получения кондиционной среды культуру вели в течение 3-4 пассажей, затем выполняли посев в культуральные флаконы из расчета 5-15×103 клеток на 1 см2 площади ростовой поверхности в 90±5 мл ростовой среды и культивировали в описанных выше условиях до достижения необходимой концентрации интерлейкинов в среде.To obtain a conditioned medium, the culture was carried out for 3-4 passages, then inoculation was carried out in culture bottles at the rate of 5-15 × 10 3 cells per 1 cm 2 of the surface area in 90 ± 5 ml of growth medium and cultivated under the conditions described above until the necessary concentration of interleukins in the environment.
При достижения необходимой концентрации биологически активных веществ кондиционную среду, содержащую все продукты секреции МСК, собирали в стерильные центрифужные пробирки, очищали путем центрифугирования при 3000 об/мин и температуре 5±1°С в течение 10 минут от клеточного дебриса.Upon reaching the required concentration of biologically active substances, a conditioned medium containing all MSC secretion products was collected in sterile centrifuge tubes, purified by centrifugation at 3000 rpm and a temperature of 5 ± 1 ° C for 10 minutes from cell debris.
Полученная кондиционная среда может использоваться непосредственно по назначению или храниться в течение продолжительного времени в определенных условиях (до семи суток - при температуре 3±1°С, более длительно хранение требует температуры не выше минус 20°С).The resulting conditioned medium can be used directly for its intended purpose or stored for a long time under certain conditions (up to seven days at a temperature of 3 ± 1 ° C, longer storage requires a temperature of no higher than minus 20 ° C).
После сбора кондиционной среды получали экстракт МСК КМ: клеточный монослой, при конфлюентности не менее 90%, дезагрегировали указанным выше диспергирующим раствором, добавляли 0,9%-й раствор хлорида натрия (5-10 мл на 1 культуральный флакон), подвергали замораживанию при температуре минус 20±2°С, после чего выполняли оттаивание при комнатной температуре. Полученный экстракт МСК КМ собирали в стерильные центрифужные пробирки, очищали от клеточного дебриса путем центрифугирования при 3000 об/мин и температуре 5±3°С в течение 10 минут.After collecting the conditioned medium, an extract of MSC KM was obtained: a cell monolayer, with a confluency of at least 90%, was disaggregated with the above dispersing solution, 0.9% sodium chloride solution (5-10 ml per 1 culture bottle) was added, it was frozen at a temperature minus 20 ± 2 ° C, after which thawing was performed at room temperature. The obtained MSC KM extract was collected in sterile centrifuge tubes, purified from cell debris by centrifugation at 3000 rpm and a temperature of 5 ± 3 ° C for 10 minutes.
Для получения регенеративного препарата осадок после центрифугирования, представляющий собой экстракт МСК КМ, объединяли с кондиционной средой, добавляли глицин (до конечной концентрации 20 мг/мл), разливали во флаконы по 1 мл и лиофильно высушивали.To obtain a regenerative preparation, the centrifugation pellet, which is an extract of MSC KM, was combined with a conditioned medium, glycine was added (to a final concentration of 20 mg / ml), 1 ml was poured into vials, and freeze-dried.
Так, к концу четвертой недели от начала культивирования МСК КМ собаки можно получить до 3000 мл (при посевной концентрации на этапе выделения не менее 1×106 кл/мл) раствора для лиофилизации на основе экстракта и кондиционной среды МСК КМ, который может быть использован для приготовления препарата, стимулирующего регенеративные процессы организма собаки.So, by the end of the fourth week from the beginning of the cultivation of MSC KM dogs, you can get up to 3000 ml (at inoculum concentration at the stage of isolation of at least 1 × 10 6 cells / ml) of a lyophilization solution based on the extract and conditioned medium of MSC KM, which can be used for the preparation of a drug that stimulates the regenerative processes of the dog's body.
Пример 2. Специфическая активность препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак, на модели in vitro.Example 2. The specific activity of the drug based on the extract and the conditioned medium of the culture of MSCs (both de novo isolated and deconserved) from the bone marrow and / or adipose tissue of dogs, in an in vitro model.
Для этого первичные дермальные фибробласты собак брали на 3 пассаже, высеивали в 12-луночные культуральные планшеты (SPL, Германия) с добавлением в ростовую среду разной концентрации (1%, 5%, 10%) исследуемого регенеративного препарата, культивировали в течение трех суток в стандартных условиях (инкубировали во влажной камере в CO2-инкубаторе при 37°С и 5% СО2) с добавлением 10% ФБС (Sigma-Aldrich, USA) к среде 199 (ГУЛ ИПВЭ им. М.П. Чумакова, Россия). Посевная концентрация клеток - 8-10×104 кл/мл среды. В качестве контроля использовали клетки, выращенные в ростовой среде без добавления регенеративного препарата.For this, the primary dermal fibroblasts of dogs were taken at passage 3, seeded in 12-well culture plates (SPL, Germany) with the addition of different concentrations (1%, 5%, 10%) of the studied regenerative preparation into the growth medium, and cultured for three days in standard conditions (incubated in a humid chamber in a CO 2 incubator at 37 ° C and 5% CO 2 ) with the addition of 10% PBS (Sigma-Aldrich, USA) to medium 199 (GUL IPVE named after MP Chumakov, Russia) . Inoculum cell concentration is 8-10 × 10 4 cells / ml of medium. As a control, cells grown in growth medium without the addition of a regenerative preparation were used.
По окончании инкубации проводили снятие культуры дермальных фибробластов собаки с поверхности пластика и определение пролиферативного индекса. Индекс пролиферации определяли как отношение количества клеток в 1 мл суспензии, полученной в результате снятия клеток с подложки по достижению конфлюентности монослоя к посевной концентрации клеток (количество клеток в мл раствора при посеве на культуральные планшеты).At the end of the incubation, a culture of the dog’s dermal fibroblasts was removed from the plastic surface and the proliferative index was determined. The proliferation index was determined as the ratio of the number of cells in 1 ml of the suspension obtained by removing the cells from the substrate to achieve confluence of the monolayer to the inoculum cell concentration (the number of cells in ml of the solution when plated on culture plates).
Были получены данные (табл. 1 и график 1), которые свидетельствуют о повышении уровня пролиферативных свойств клеток модельной культуры при добавлении в ростовую среду регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) собаки на 17-90% в зависимости от концентрации, в которой исследуемый препарат добавлялся в ростовую среду, по сравнению с контролем, при этом наблюдалась линейная зависимость между концентрацией препарата и значением индекса пролиферации (ИП).Data were obtained (Table 1 and Figure 1), which indicate an increase in the proliferative properties of model culture cells when a regenerative preparation based on the extract and conditioned MSC medium (both de novo and deconserved) dogs was added to the growth medium 90% depending on the concentration in which the test drug was added to the growth medium, compared with the control, while there was a linear relationship between the concentration of the drug and the value of the proliferation index (PI).
Пример 3. Исследование гепатопротекторных свойств препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак.Example 3. The study of the hepatoprotective properties of the drug based on the extract and the conditioned medium of the culture of MSCs (both de novo isolated and deconserved) from the bone marrow and / or adipose tissue of dogs.
Регенеративное действие препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток костного мозга или жировой ткани было изучено на модели острого поражения печени (МОПП) крыс (in vivo). Модель острого поражения печени была выполнена путем однократного введения крысам в желудок через зонд парацетамола (N-(4-гидроксифенил)ацетамида) в виде суспензии в дозе 700 мг на 1 кг массы тела. Процедура лечения после МОПП заключалась в ежедневном внутримышечном введении 0,5 мл исследуемого препарата животным опытной группы в течение 5 дней. В качестве контроля использовали крыс с МОПП, которые не подвергались терапевтическим воздействиям.The regenerative effect of the drug based on the extract and the conditioned culture medium of mesenchymal stem cells of bone marrow or adipose tissue was studied in rats in vivo acute liver injury (MOPP) model. The model of acute liver damage was performed by a single injection of rats into the stomach through a probe of paracetamol (N- (4-hydroxyphenyl) acetamide) in the form of a suspension at a dose of 700 mg per 1 kg of body weight. The treatment procedure after MOPP consisted in daily intramuscular administration of 0.5 ml of the studied drug to the animals of the experimental group for 5 days. As a control, rats with MOPP that were not subjected to therapeutic effects were used.
Спустя сутки после окончания курса лечения крыс выводили из эксперимента путем декапитации, предварительно обеспечив наркоз за счет внутрибрюшинного введения хлоралгидрата в дозе 400 мг на 1 кг массы тела животного. В сыворотке крови определили активность ферментов аспартат-(АсТ) и аланинаминотрансферазы (АлТ) с помощью стандартного набора Vital и содержание общего белка - биуретовым методом. Исследованные биохимические параметры отражают функциональное состояние печени. Ферменты АсТ и АлТ присутствуют в значительных количествах в печени и почках, поэтому в норме концентрации АсТ и АлТ в крови невелики. При повреждении гепатоцитов происходит потеря ферментов АсТ и АлТ, и концентрация этих биохимических маркеров в крови возрастает. Изменение уровня общего белка (признак грубой патологии печени) не наблюдалось.A day after the end of the course of treatment, the rats were removed from the experiment by decapitation, having previously provided anesthesia due to the intraperitoneal administration of chloral hydrate at a dose of 400 mg per 1 kg of animal body weight. In the blood serum, the activity of the aspartate- (AcT) and alanine aminotransferase (ALT) enzymes was determined using a standard Vital kit and the total protein content was determined using the biuret method. The studied biochemical parameters reflect the functional state of the liver. The enzymes AcT and Alt are present in significant quantities in the liver and kidneys, therefore, normally, the concentrations of AcT and Alt in the blood are low. When hepatocytes are damaged, the enzymes AcT and Alt are lost, and the concentration of these biochemical markers in the blood increases. A change in the level of total protein (a sign of gross pathology of the liver) was not observed.
По результатам исследования было показано, что применение регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды МСК как костного мозга, так и жировой ткани и деконсервированных, в течение пяти дней у животных с ОПП происходило значительное улучшение состояния, судя по исследованным маркерам повреждения печени (показатели уровней АсТ, АлТ) в группе животных, получавших регенеративный препарат, значимо не отличались от показателей в группе интактных крыс (табл. 2 и графики 2-4).According to the results of the study, it was shown that the use of a regenerative preparation based on the extract and the conditioned environment of MSCs of both bone marrow and adipose tissue and deconserved, a significant improvement occurred in animals with AKI over five days, judging by the studied markers of liver damage (level indicators AcT, Alt) in the group of animals treated with the regenerative preparation did not significantly differ from those in the group of intact rats (Table 2 and graphs 2-4).
Таким образом, регенеративный препарат на основе экстракта и кондиционной среды МСК обладал в наших опытах выраженным терапевтическим эффектом при остром поражении печени животных. Существенных различий в эффективности препарата на основе кондиционной среды и экстракта мезенхимальных стволовых клеток, полученных из различных источников, также не было выявлено.Thus, the regenerative preparation based on the extract and the conditioned MSC medium in our experiments had a pronounced therapeutic effect in acute liver damage of animals. Significant differences in the effectiveness of the drug based on the conditioned medium and the extract of mesenchymal stem cells obtained from various sources were also not detected.
Пример 4. Влияние регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры МСК (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собаки на ранозаживление на модели механической раны у мышей in vivo.Example 4. The effect of a regenerative preparation based on the extract and conditioned medium of MSC culture (both de novo isolated and deconserved) from the bone marrow and / or adipose tissue of a dog on wound healing in an in vivo model of a mechanical wound in mice.
Другая модель, использованная для изучения регенеративной активности препарата in vivo, представляет собой модель глубокой механической раны, края которой для предупреждения стягивания были подшиты к пластиковому кольцу. Препарат вводили на ранних этапах раневого процесса (в течение первых пяти дней после моделирования раны) в виде подкожных инъекций. Исследование проводили на 30 белых беспородных мышах (15 мышей - группа контроля (без лечения), 15 мышей - опытная группа, которой подкалывали исследуемый препарат).Another model used to study the regenerative activity of the drug in vivo is a model of a deep mechanical wound, the edges of which were sewn to a plastic ring to prevent contraction. The drug was administered in the early stages of the wound healing process (during the first five days after modeling the wound) in the form of subcutaneous injections. The study was carried out on 30 white outbred mice (15 mice — the control group (without treatment), 15 mice — the experimental group, which was used to pin the studied drug).
Спустя пять дней, после моделирования ран, у животных опытной группы в ране отсутствовал фибрин, экссудация и гиперемия окружающих тканей были слабо выражены, отмечалось набухание краев раны, что свидетельствовало о стихании воспаления. Смещение пика фазы воспаления в опытной группе на более ранний срок наиболее вероятно связано с действием факторов роста и цитокинов, содержащихся в исследуемом препарате. К концу фазы пролиферации на 14 сутки от начала эксперимента в контрольной группе наблюдали продолжающийся процесс эпителизации раневой поверхности, тогда как у животных опытной группы отмечали полное заживление раны и признаки процесса ремоделирования тканей, что указывало на более высокие темпы регенерации при использовании исследуемого препарата.Five days later, after modeling the wounds, the animals of the experimental group did not have fibrin in the wound, exudation and hyperemia of the surrounding tissues were weak, swelling of the edges of the wound was observed, which indicated the subsidence of inflammation. An earlier shift of the peak of the phase of inflammation in the experimental group is most likely due to the action of growth factors and cytokines contained in the study drug. At the end of the proliferation phase, on the 14th day from the start of the experiment, the control group observed the ongoing process of epithelization of the wound surface, while the animals of the experimental group noted complete wound healing and signs of tissue remodeling, which indicated a higher rate of regeneration when using the studied drug.
Пример 5. Исследование аномальной токсичности изобретения.Example 5. The study of the abnormal toxicity of the invention.
Испытания на аномальную токсичность исследуемого препарата проводили на белых мышах массой от 19 до 21 г. Препарат, подогретый до 37°С, вводили внутрибрюшинно в количестве 0,5 мл 20-ти мышам. Наблюдение за состоянием здоровья животных осуществляли в течение 7 суток. Считали, что образец выдерживает испытание, если в течение срока наблюдения не погибнет ни одно животное.Tests for abnormal toxicity of the studied drug were carried out on white mice weighing from 19 to 21 g. The drug, heated to 37 ° C, was administered intraperitoneally in an amount of 0.5 ml to 20 mice. Monitoring the health of animals was carried out for 7 days. It was believed that the sample withstands the test if no animals die during the observation period.
Заявленный препарат не вызывал у животных признаков токсичности или других побочных признаков.The claimed preparation did not cause signs of toxicity or other side effects in animals.
Пример 6. Клинические исследования регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак при гепатозах.Example 6. Clinical studies of a regenerative preparation based on the extract and conditioned medium of a culture of mesenchymal stem cells (both de novo isolated and deconserved) from bone marrow and / or adipose tissue of dogs with hepatosis.
Согласно предлагаемому изобретению заявляемый препарат вводили 11 собакам с признаками гепатозов разного возраста и пола, принадлежащим частным лицам.According to the invention, the claimed drug was administered to 11 dogs with signs of hepatosis of different ages and sex belonging to private individuals.
Заявляемый препарат вводили собакам по 0,2 мл (предварительно растворив содержимое флакона в 1,0 мл физиологического раствора) на 1 кг веса животного внутримышечно ежедневно в течение 5 суток.The inventive preparation was administered to dogs of 0.2 ml (previously having dissolved the contents of the vial in 1.0 ml of physiological saline) per 1 kg of animal weight intramuscularly daily for 5 days.
За больными животными проводили клиническое наблюдение. Для оценки состояния здоровья брали пробы крови для лабораторных исследований в день поступления, на третьи, шестые и двенадцатые сутки с начала терапии.Sick animals were clinically monitored. To assess the state of health, blood samples were taken for laboratory tests on the day of admission, on the third, sixth and twelfth day from the start of therapy.
При клиническом наблюдении обращали внимание на общее состояние животных, изменение аппетита, наличие рвоты, изменение приема жидкости, состояние кожи и слизистых оболочек (желтушность), проводили макроскопическую оценку физиологических экскрементов.Clinical observation drew attention to the general condition of the animals, a change in appetite, the presence of vomiting, a change in fluid intake, the condition of the skin and mucous membranes (yellowness), and a macroscopic assessment of physiological excrement was performed.
Улучшение общего состояния животных констатировали при уменьшении или исчезновении желтушной окраски кожи и видимых слизистых оболочек, диспепсических явлений, снижении болезненности при пальпации печени, нормализации общего клинико-физиологического состояния собак, а также появлении положительной динамики в биохимическом исследовании проб сыворотки крови.An improvement in the general condition of the animals was observed with a decrease or disappearance of icteric coloration of the skin and visible mucous membranes, dyspeptic symptoms, a decrease in pain during palpation of the liver, normalization of the general clinical and physiological state of dogs, as well as the appearance of positive dynamics in the biochemical study of blood serum samples.
Анализ полученных клинических данных при лечении собак выявил следующее: к третьим суткам, прошедшим с начала проведения лечения заявляемым препаратом, улучшение общего состояния наступило у восьми животных. Они стали более активными, появился аппетит. Особой динамики клинических симптомов не наблюдали.An analysis of the obtained clinical data in the treatment of dogs revealed the following: by the third day that had passed since the treatment with the claimed drug began, an improvement in general condition occurred in eight animals. They became more active, appetite appeared. No particular dynamics of clinical symptoms were observed.
К шестым суткам, общее состояние улучшилось у всех одиннадцати животных, у девяти собак значительно уменьшилась желтушность видимых слизистых оболочек, посветлела моча, кал принял обычную естественную окраску.By the sixth day, the general condition improved in all eleven animals, in nine dogs the yellowness of the visible mucous membranes decreased significantly, urine brightened, the stool assumed its usual natural color.
К 9-12 суткам все животные выздоровели. Полученные данные представлены табл. 3.By 9-12 days, all animals recovered. The data obtained are presented in table. 3.
Из данных, представленных в табл. 4, видно, что к шестому дню наблюдения, у собак показатели активности АсТ, концентрации билирубина в сыворотке крови нормализовались, показатели активность АлТ характеризуются тенденцией к снижению, что свидетельствует о репаративных процессах в печени данных животных. Нормализация показателей СОЭ и концентрации лейкоцитов у животных свидетельствуют об ослаблении воспалительного процесса в печени к этому дню. К 12 дню заболевания на фоне проводимой терапии у собак нормализовались все показатели крови.From the data presented in table. 4, it can be seen that by the sixth day of observation, in dogs, the indicators of ACT activity, serum bilirubin concentrations returned to normal, and the indicators of ALT activity are characterized by a decrease, which indicates reparative processes in the liver of these animals. Normalization of ESR and leukocyte concentration in animals indicate a weakening of the inflammatory process in the liver by this day. By the 12th day of the disease, all the blood indices returned to normal on the background of the therapy.
Пример 7. Клинические исследования регенеративного препарата на основе экстракта и кондиционной среды культуры мезенхимальных стволовых клеток (как выделенных de novo, так и деконсервированных) из костного мозга и/или жировой ткани собак при заживлении травм (ран, ожогов, растяжений связок).Example 7. Clinical studies of a regenerative preparation based on an extract and conditioned medium of a culture of mesenchymal stem cells (both de novo isolated and deconserved) from bone marrow and / or adipose tissue of dogs during the healing of injuries (wounds, burns, sprains).
1. Собака породы пекинес по кличке «Алиса», 5 лет, была укушена в области шеи. При обследовании: рваная рана с сильным отеком, кровотечение. Лечение проводили заявленным препаратов в виде внутримышечных инъекций в дозе 1 мл 1 раз в день. Через 3 дня после начала лечения наступили значительные улучшения: отек и болезненность практически исчезли, появилась грануляции, началась краевая эпителизация раны. На 5-6-й день лечения наступило полное заживление раны.1. A Pekingese dog named Alice, 5 years old, was bitten in the neck. On examination: laceration with severe swelling, bleeding. The treatment was carried out with the claimed preparations in the form of intramuscular injections at a dose of 1
2. Собака породы лабрадор по кличке «Феликс», 3 года. Диагноз: ожоги II-IIIA степени в области холки размером с ладонь. Было назначено следующее лечение: место ожога протирать хлоргексидином, мазать «Спасателем» и раз в день внутримышечные инъекции заявленного препарата по 1 мл в течение 4 дней. На 3-и сутки после начала лечения значительно уменьшался отек краев раневого дефекта, снижались гиперемия и инфильтрация тканей, от края раны начинал нарастать эпителий. На 5-е сутки ожоговая рана заполнилась грануляционной тканью, происходило частичное отторжение струпа. Полностью рана эпитализировались к 7 суткам.2. A dog of the breed Labrador nicknamed "Felix", 3 years. Diagnosis: burns of the II-IIIA degree in the withers area the size of a palm. The following treatment was prescribed: wipe the place of the burn with chlorhexidine, smear with “Rescuer” and once a day intramuscular injections of the claimed drug, 1 ml for 4 days. On the 3rd day after the start of treatment, edema of the edges of the wound defect significantly decreased, hyperemia and tissue infiltration decreased, and the epithelium began to grow from the edge of the wound. On the 5th day, the burn wound was filled with granulation tissue, partial scab rejection occurred. The wound was completely epithelized by 7 days.
3. Собака породы китайская хохлатая по кличке «Тильда», 3,5 года. Диагноз: долго незаживающая гнойная рана в области бедра (полученная в результате укуса). Проводимое ранее лечение (левомиколь) не дало результатов. Было назначено заявляемое средство внутримышечно по 1 мл 1 раз в день. После первой инъекции уменьшились гнойные выделения, уменьшился отек. На 2-й день лечения признаки воспаления и гнойные выделения исчезли, наблюдаются активная грануляция и эпителизация пораженного места. Всего было сделано 3 инъекции препарата, после чего наступило полное заживление раны уже на 4-5 день, после начала лечения.3. Dog Chinese Crested named Tilda, 3.5 years old. Diagnosis: long non-healing purulent wound in the thigh (obtained as a result of a bite). Previous treatment (levomikol) has not yielded results. The claimed agent was prescribed intramuscularly in a dose of 1 ml once a day. After the first injection, purulent discharge decreased, swelling decreased. On the 2nd day of treatment, signs of inflammation and purulent discharge disappeared, active granulation and epithelization of the affected area are observed. In total, 3 injections of the drug were made, after which complete healing of the wound occurred already on the 4th-5th day, after the start of treatment.
4. Собака породы кане-корсо, 11 месяцев, кличка «Леон». Диагноз: растяжение связок в коленном суставе. Назначено заявленное средство в дозе 1 мл внутримышечно, 1 раз в день. Уже после первой инъекции наблюдалось улучшение состояния (уменьшение отека, болезненности), после 3-й инъекции - прошла хромота.4. Dog breed Cane Corso, 11 months old, nicknamed "Leon". Diagnosis: sprain in the knee joint. The claimed drug was prescribed in a dose of 1 ml intramuscularly, 1 time per day. After the first injection, an improvement was observed (reduction of edema, soreness), after the 3rd injection, lameness passed.
5. Собака породы немецкая овчарка по кличке «Барон», 7 лет. Диагноз: мокнущая экзема (долго не заживала). Лечение: ежедневные инъекции заявляемого препарата по 1 мл в комплексе с (уже применяемыми ранее) повязками с левомеколем. Уже на 2-й день лечения покраснение пораженной поверхности заметно уменьшилось, уменьшился зуд, после 3-го дня лечения - стадия «мокнутия» перешла в корковую - на месте повреждений кожи образовались корки, участки кожи вокруг них стали сухими и начали покрываться чешуйками. К 6-7 дню лечения наблюдалось выздоровление.5. Dog breed German shepherd nicknamed "Baron", 7 years old. Diagnosis: weeping eczema (did not heal for a long time). Treatment: daily injections of the inventive preparation of 1 ml in combination with (already used previously) dressings with levomecol. Already on the 2nd day of treatment, the redness of the affected surface decreased markedly, itching decreased, after the 3rd day of treatment - the “wet” stage went into the cortical - crusts formed on the site of skin lesions, the skin around them became dry and began to become covered with scales. By the 6-7th day of treatment, recovery was observed.
Таким образом, заявляемый препарат показывает терапевтический эффект во всех наблюдаемых случаях применения, обладает выраженными регенеративной, тонизирующей, противовоспалительной, иммуностимулирующей активностью и предназначен для терапии в послеоперационный период, улучшения уровня жизни стареющих животных, а также для лечения дегенеративных заболеваний (цирроза печени, фиброза легких и др.), острых и хронических заболеваний кожи.Thus, the claimed drug shows a therapeutic effect in all observed cases of use, has pronounced regenerative, tonic, anti-inflammatory, immunostimulating activity and is intended for therapy in the postoperative period, to improve the living standards of aging animals, as well as for the treatment of degenerative diseases (liver cirrhosis, pulmonary fibrosis etc.), acute and chronic skin diseases.
Рекомендации по применению предлагаемого препарата:Recommendations for the use of the proposed drug:
заявленный препарат рекомендовано применять путем внутримышечных или внутривенных инъекций один раз в день в течение 3-7 дней ежедневно. При необходимости курс повторить через 3-4 дня.The claimed preparation is recommended to be applied by intramuscular or intravenous injection once a day for 3-7 days daily. If necessary, repeat the course after 3-4 days.
Источники информацииInformation sources
1. Иммуномодулятор-метаболик-детоксикант-адаптоген-радиопротектор. Патент на изобретение №2194502. Приор. 27.12.2000.1. Immunomodulator-metabolic-detoxicant-adaptogen-radioprotector. Patent for invention No. 2194502. Prior. 12/27/2000.
2. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Клеточная терапия: новые подходы // Наука в России. - Москва: Изд-во «Наука», 2009. - Том 169. - №1. С. 4-8.2. Digay A.M., Zyuzkov G.N. Cell therapy: new approaches // Science in Russia. - Moscow: Publishing House "Science", 2009. - Volume 169. - No. 1. S. 4-8.
3. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Мирошниченко Л.А., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Удут Е.В., Фонима Т.Н., Ветошкина Т.В., Хричкова Т.Ю., Ермакова Н.Н., Плотников М.Б., Алиев О.И., Чернышова Г.А. Фармакологические аспекты регенеративной медицины // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2008. - Приложение 2. - С. 14-21.3. Goldberg ED, Dygay AM, Zhdanov VV, Zyuzkov GN, Miroshnichenko LA, Simanina EV, Stavrova LA, Udut EV, Fonima T. N., Vetoshkina T.V., Khrichkova T.Yu., Ermakova N.N., Plotnikov M.B., Aliev O.I., Chernyshova G.A. Pharmacological aspects of regenerative medicine // Bull. an experiment. biol. and medicine. - 2008. -
4. Патофизиология: Учебник для медицинских ВУЗов. / Под ред. В.В. Новицкого, Е.Д. Гольдберга. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 2001. - 681-687.4. Pathophysiology: Textbook for medical universities. / Ed. V.V. Novitsky, E.D. Goldberg. - Tomsk: Publishing house of Tomsk University, 2001. - 681-687.
5. Дыгай A.M., Зюзьков Т.Н., Жданов В.В., Мадонов П.Г., Артамонов А.В., Бекарев А.А., Удут В.В. Иммобилизированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические свойства и перспективы использования. - Томск: Изд-во: ООО «Печатная мануфактура», 2011. - 149 с. 5. Digay A.M., Zyuzkov TN, Zhdanov VV, Madonov PG, Artamonov AV, Bekarev AA, Udut VV Immobilized granulocyte colony stimulating factor. Pharmacological properties and prospects of use. - Tomsk: Publishing House: LLC Printing Manufactory, 2011. - 149 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016148716A RU2646793C1 (en) | 2016-12-13 | 2016-12-13 | Dog remedy regenerative activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016148716A RU2646793C1 (en) | 2016-12-13 | 2016-12-13 | Dog remedy regenerative activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2646793C1 true RU2646793C1 (en) | 2018-03-07 |
Family
ID=61568397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016148716A RU2646793C1 (en) | 2016-12-13 | 2016-12-13 | Dog remedy regenerative activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2646793C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112584846A (en) * | 2018-06-15 | 2021-03-30 | 路易斯·马里纳斯·帕尔多 | Pharmaceutical composition for skin diseases and use thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU93056731A (en) * | 1993-12-22 | 1996-10-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Научно-внедренческое предприятие "АПТ-Экология" | MEANS FOR PREVENTING OSTEOGENESIS ACTION |
| RU2341270C2 (en) * | 2006-12-28 | 2008-12-20 | Александр Сергеевич Ботин | Composition for stimulation of cell growth and regeneration, and methods of production thereof |
| US20100273141A1 (en) * | 2005-08-12 | 2010-10-28 | Bakaltcheva Irina B | Glycine stabilized lyophilized plasma |
| RU2495565C1 (en) * | 2012-10-03 | 2013-10-20 | Игорь Николаевич Габриэль | Method to stimulate growth and to improve resistance of farm animals |
-
2016
- 2016-12-13 RU RU2016148716A patent/RU2646793C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU93056731A (en) * | 1993-12-22 | 1996-10-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Научно-внедренческое предприятие "АПТ-Экология" | MEANS FOR PREVENTING OSTEOGENESIS ACTION |
| US20100273141A1 (en) * | 2005-08-12 | 2010-10-28 | Bakaltcheva Irina B | Glycine stabilized lyophilized plasma |
| RU2341270C2 (en) * | 2006-12-28 | 2008-12-20 | Александр Сергеевич Ботин | Composition for stimulation of cell growth and regeneration, and methods of production thereof |
| RU2495565C1 (en) * | 2012-10-03 | 2013-10-20 | Игорь Николаевич Габриэль | Method to stimulate growth and to improve resistance of farm animals |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КАЛИНОВСКИЙ А.А. Актуальные проблемы применения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в современной ветеринарной медицине/ Ветеринария Кубани. 2011. N3. С. 28-31. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112584846A (en) * | 2018-06-15 | 2021-03-30 | 路易斯·马里纳斯·帕尔多 | Pharmaceutical composition for skin diseases and use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2490715T3 (en) | Compositions comprising undifferentiated fetal cells for the treatment of skin disorders | |
| ES2880084T3 (en) | Therapies using fat cells and cellular secretions | |
| ES2369945B1 (en) | PROCEDURE FOR OBTAINING A COMPOSITION CONTAINING GROWTH FACTORS FROM A BLOOD COMPOUND, AND COMPOSITION OBTAINABLE BY SUCH PROCEDURE. | |
| RU2619862C1 (en) | Method of treatment of subclinical mastitis in lactating cows | |
| CN110604810A (en) | Hydrolyzed collagen gel for gynecology and preparation method thereof | |
| US11273114B2 (en) | Compound additive having biological activation function, preparation method therefor and use thereof | |
| KR102257386B1 (en) | Stem cell material and method of manufacturing | |
| RU2646793C1 (en) | Dog remedy regenerative activity | |
| RU2292212C1 (en) | Conditioning medium with therapeutic effect | |
| RU2646791C1 (en) | Remedy for cats with regenerative activity | |
| US11324780B2 (en) | Amniotic fluid composition and method of using | |
| CN111759896A (en) | Pharmaceutical application of total triterpene of pawpaw | |
| CN106491652A (en) | Goose eggembryosin preparation method and application | |
| CN102389402B (en) | Recombinant bovine basic fibroblast growth factor freeze-dried formulation for external application | |
| RU2646792C1 (en) | Horse remedy with regenerative activity | |
| RU2209074C2 (en) | Method for treating burns | |
| WO2004089430A1 (en) | New dressing material promoting recovery of skin wound | |
| CN113143970A (en) | Methods and compositions for promoting tissue repair in diabetic subjects | |
| Zhang et al. | dECM restores macrophage immune homeostasis and alleviates iron overload to promote DTPI healing | |
| RU2720800C1 (en) | Agent for cattle, having anti-inflammatory, regenerative, immunomodulating, detoxification, adaptogenic activity and able to regulate metabolism | |
| CN104147044A (en) | Composition for treating piglet staphylococcal exudative epidermitis | |
| RU2720812C1 (en) | Method of producing agent possessing anti-inflammatory, regenerative, immunomodulating, detoxification, adaptogenic activity and capable of regulating metabolism | |
| WO2023143519A1 (en) | Cell repair protein extract, and preparation method therefor and use thereof | |
| Perwira et al. | Physiobiochemical and microbiologic stability characteristics of freeze-dried cartilage secretome Adipose Mesenchymal Stem Cell (AdMSC) | |
| CN102362856B (en) | Recombinant bovine basic fibroblast grow factor external solution |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191214 |
|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: CORRECTION TO CHAPTER -MM4A- IN JOURNAL 28-2020 |