RU2646160C2 - Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth - Google Patents
Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth Download PDFInfo
- Publication number
- RU2646160C2 RU2646160C2 RU2016119265A RU2016119265A RU2646160C2 RU 2646160 C2 RU2646160 C2 RU 2646160C2 RU 2016119265 A RU2016119265 A RU 2016119265A RU 2016119265 A RU2016119265 A RU 2016119265A RU 2646160 C2 RU2646160 C2 RU 2646160C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- pseudomonas fluorescens
- phenazine
- bacteria
- vkm
- Prior art date
Links
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 title claims abstract description 42
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 14
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 46
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 18
- KPZYYKDXZKFBQU-UHFFFAOYSA-N alpha-Amidophenazin Natural products C1=CC=C2N=C3C(C(=O)N)=CC=CC3=NC2=C1 KPZYYKDXZKFBQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 41
- JGCSKOVQDXEQHI-UHFFFAOYSA-N phenazine-1-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2N=C3C(C(=O)O)=CC=CC3=NC2=C1 JGCSKOVQDXEQHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 23
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 16
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 10
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 abstract description 9
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 abstract description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 abstract description 7
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 31
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 11
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 9
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 9
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 241001508365 Gaeumannomyces tritici Species 0.000 description 6
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 5
- 241001645955 Pseudomonas chlororaphis subsp. aureofaciens Species 0.000 description 5
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- 241000190150 Bipolaris sorokiniana Species 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N hydrogen cyanide Chemical compound N#C LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 3
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 3
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 3
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N monobenzone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 150000002988 phenazines Chemical class 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241000190146 Botryosphaeria Species 0.000 description 2
- 229910014497 Ca10(PO4)6(OH)2 Inorganic materials 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000113395 Cercospora capsici Species 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001135514 Paraburkholderia caryophylli Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 241000589157 Rhizobiales Species 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N epsilon-caprolactam Chemical compound O=C1CCCCCN1 JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N phenanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 235000010958 polyglycerol polyricinoleate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 1
- 241000412366 Alternaria mali Species 0.000 description 1
- 241000212253 Alternaria panax Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241001157813 Cercospora Species 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- 241000222290 Cladosporium Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241001208371 Fusarium incarnatum Species 0.000 description 1
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 description 1
- 241001149504 Gaeumannomyces Species 0.000 description 1
- 241001149475 Gaeumannomyces graminis Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 241001344131 Magnaporthe grisea Species 0.000 description 1
- 241000947859 Microdochium Species 0.000 description 1
- 241001459558 Monographella nivalis Species 0.000 description 1
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000233614 Phytophthora Species 0.000 description 1
- 241000960597 Pseudomonas fluorescens group Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000228453 Pyrenophora Species 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 239000000589 Siderophore Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241001085826 Sporotrichum Species 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 241000722133 Tilletia Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000221566 Ustilago Species 0.000 description 1
- 241000082085 Verticillium <Phyllachorales> Species 0.000 description 1
- 240000005616 Vigna mungo var. mungo Species 0.000 description 1
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 1
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000250 adipic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- HUSUHZRVLBSGBO-UHFFFAOYSA-L calcium;dihydrogen phosphate;hydroxide Chemical compound O.[Ca+2].OP([O-])([O-])=O HUSUHZRVLBSGBO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 1
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N cefepime Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1(C)CCCC1 HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N 0.000 description 1
- 229960002100 cefepime Drugs 0.000 description 1
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 1
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000002036 chloroform fraction Substances 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 229960002260 meropenem Drugs 0.000 description 1
- DMJNNHOOLUXYBV-PQTSNVLCSA-N meropenem Chemical compound C=1([C@H](C)[C@@H]2[C@H](C(N2C=1C(O)=O)=O)[C@H](O)C)S[C@@H]1CN[C@H](C(=O)N(C)C)C1 DMJNNHOOLUXYBV-PQTSNVLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940075566 naphthalene Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 150000003018 phosphorus compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001863 plant nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000004476 plant protection product Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fertilizers (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности и биотехнологии и касается нового бактериального штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ В-2955Д, обладающего способностью подавлять развитие фитопатогенных грибов и бактерий за счет продукции феназиновых антибиотиков и стимулировать рост растений за счет растворения неорганических фосфатов. Предлагаемый штамм может быть использован для получения на его основе бактериального препарата.The invention relates to the microbiological industry and biotechnology, and relates to a new bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D, which has the ability to inhibit the development of phytopathogenic fungi and bacteria due to the production of phenazine antibiotics and stimulate plant growth by dissolving inorganic phosphates. The proposed strain can be used to obtain on its basis a bacterial preparation.
В настоящее время одной из наиболее важных мировых проблем остается обеспечение продуктами сельскохозяйственного производства растущего населения планеты. Серьезной проблемой растениеводства являются фитопатогенные микроорганизмы и вредители, приводящие ежегодно к 30% потерям в мировом сельскохозяйственном производстве (Tilman D., Balzer C., Hill J., Beford B.L. Global food demand and the sustainable intensification of agriculture // Proc. Natl. Acad. Sci. - 2011. - №108. - P. 20260-20264). Поэтому повышение урожайности сельскохозяйственных культур и создание эффективных и экологичных способов борьбы с фитопатогенными микроорганизмами становится все более актуальной задачей.At present, one of the most important global problems remains the provision of agricultural products to a growing population of the planet. A serious problem of crop production is phytopathogenic microorganisms and pests, resulting in 30% losses in global agricultural production annually (Tilman D., Balzer C., Hill J., Beford BL Global food demand and the sustainable intensification of agriculture // Proc. Natl. Acad . Sci. - 2011. - No. 108. - P. 20260-20264). Therefore, increasing crop yields and creating effective and environmentally friendly ways to combat phytopathogenic microorganisms is becoming an increasingly urgent task.
Анализ мирового опыта показывает возрастающую роль биологических средств защиты растений в комплексе природоохранных мероприятий, которые в отличие от химических пестицидов, безвредны для окружающей среды и потребителя. Разработкой и производством коммерческих биопрепаратов для сельского хозяйства на основе PGPR Pseudomonas интенсивно занимаются практически во всех развитых странах (Lucy М., Reed Е., Glick B.R. Applications of free living plant growth-promoting rhizobacteria // Antonie van Leeuwenhoek. - 2004. - V. 86. - P. 1-25).The analysis of world experience shows the growing role of biological plant protection products in the range of environmental measures, which, unlike chemical pesticides, are harmless to the environment and the consumer. The development and production of commercial agricultural biological products based on PGPR Pseudomonas is intensively engaged in almost all developed countries (Lucy M., Reed E., Glick BR Applications of free living plant growth-promoting rhizobacteria // Antonie van Leeuwenhoek. - 2004. - V 86. - P. 1-25).
Известно, что PGPR Pseudomonas способны продуцировать широкий спектр антибиотических веществ, которые ингибируют рост и метаболизм других микроорганизмов при незначительных концентрациях (Haas D., and 
Известен штамм бактерий Pseudomonas sp. ЦМПМ В-348, используемый для получения препарата при защите злаковых от возбудителя обыкновенной корневой гнили Helminthosporium sativum (Авторское свидетельство СССР №1464468).A known strain of bacteria Pseudomonas sp. TsMPM B-348, used to obtain the drug for the protection of cereals from the causative agent of ordinary root rot Helminthosporium sativum (USSR Author's Certificate No. 1464468).
Однако этот штамм неэффективен для подавления корневой гнили злаков, вызываемой комплексом грибов Fusarium spp. и Helminthosporium sativum.However, this strain is ineffective for suppressing the root rot of cereals caused by a complex of fungi Fusarium spp. and Helminthosporium sativum.
Известен штамм бактерий Pseudomonas putida BKM В-1743Д, подавляющий рост грибов рода Fusarium, и предназначенный для получения препарата, используемого для стимуляции роста растений и защиты растений от грибных патогенов (Патент RU 1805849).A known bacterial strain Pseudomonas putida BKM B-1743D, inhibiting the growth of fungi of the genus Fusarium, and intended to obtain a drug used to stimulate plant growth and protect plants from fungal pathogens (Patent RU 1805849).
Недостатком штамма является узкий спектр антагонистического действия.The disadvantage of the strain is a narrow spectrum of antagonistic action.
Известен штамм бактерий Pseudomonas species В-696, проявляющий антагонистическую активность к фитопатогенным грибам Alternaria spp., Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum, Fusarium gibbosum, Fusarium sumbucinum, и препарат на его основе, используемый для стимуляции роста и защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов (Патент RU 2130261).A known bacterial strain Pseudomonas species B-696, which exhibits antagonistic activity against phytopathogenic fungi Alternaria spp., Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum, Fusarium gibbosum, Fusarium sumbucinum, and a drug based on it, used to stimulate growth and protect plants from pathogenic microorganisms (pathogenic microorganisms RU 2130261).
Однако отсутствуют сведения о действии этого штамма на такие широко распространенные возбудители болезней растений, как Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium nivale, Fusarium semitectum, Fusarium solani.However, there is no information on the effect of this strain on such widespread pathogens of plant diseases as Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium nivale, Fusarium semitectum, Fusarium solani.
Известен штамм бактерий Pseudomonas aureofaciens ИБ 51, проявляющий антагонистическую активность по отношению к фитопатогенным грибам Alternaria alternata, Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum, Fusarium gibbosum, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium nivale, Fusarium oxysporum, Fusarium semitectum, Fusarium solani, Penicillium funiculosum (Патент RU 2203945).A bacterial strain Pseudomonas aureofaciens IB 51 is known that exhibits antagonistic activity against phytopathogenic fungi Alternaria alternata, Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum, Fusarium gibbosum, Fusarium culmorum, Fusarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium fiumarium givumium fiumarium fivarium fivarium givumium fiumarium givumarium graminearum RU 2203945).
Однако отсутствуют сведения о действии этого штамма на такой широко распространенный возбудитель заболевания корней пшеницы как Gaeumannomyces graminis var. tritici.However, there is no information on the effect of this strain on such a widespread pathogen of wheat root disease as Gaeumannomyces graminis var. tritici.
Известен штамм бактерий Pseudomonas aureofaciens Тх-1 (АТСС 55670) и метод его применения для контроля грибных и бактериальных инфекций растений. Метод основан на применении культуральной жидкости штамма Pseudomonas aureofaciens Тх-1, содержащей бактериальные клетки данного штамма и биологически активные метаболиты, главным образом феназин-1-карбоновую кислоту. Метод применим для обработки двудольных, однодольных и хвойных растений, рассады и семян (Patent US 6348193).A known bacterial strain Pseudomonas aureofaciens Tx-1 (ATCC 55670) and a method for its use to control fungal and bacterial infections of plants. The method is based on the use of culture fluid of the strain Pseudomonas aureofaciens Tx-1 containing bacterial cells of this strain and biologically active metabolites, mainly phenazine-1-carboxylic acid. The method is applicable for processing dicotyledonous, monocotyledonous and coniferous plants, seedlings and seeds (Patent US 6348193).
Однако отсутствуют сведения о содержании в культуральной жидкости бактериального штамма Pseudomonas aureofaciens Тх-1 других феназиновых производных, в частности феназин-1-карбоксамида.However, there is no information on the content in the culture fluid of the bacterial strain Pseudomonas aureofaciens Tx-1 of other phenazine derivatives, in particular phenazine-1-carboxamide.
Известен трансгенный флуоресцирующий штамм бактерий Pseudomonas sp. для биоконтроля грибных болезней растений. Данный штамм содержит локус для биосинтеза феназин-1-карбоновой кислоты, стабильно встроенный в геном и собственные гены для продукции антибиотика 2,4-диацетилфлороглюцина. Таким образом, штамм способен продуцировать два антибиотика - феназин-1-карбоновую кислоту и 2,4-диацетилфлороглюцин. Штамм подавляет фитопатогенные грибы родов Rhizoctonia, Gaeumannomyces graminis и Pythium (Patent US 6277625).Known transgenic fluorescent strain of bacteria Pseudomonas sp. for biocontrol of fungal diseases of plants. This strain contains a locus for the biosynthesis of phenazine-1-carboxylic acid, stably integrated in the genome and its own genes for the production of the
Недостатком штамма является то, что он получен в результате генетических манипуляций и представляет собой генетически модифицированный микроорганизм.The disadvantage of the strain is that it is obtained as a result of genetic manipulations and is a genetically modified microorganism.
Известен биоинженерный штамм Pseudomonas sp., для продукции нового микробиологического фунгицида, главным компонентом которого является феназин-1-карбоксамид. Данный штамм получен в результате трансформации родительского штамма-продуцента феназин-1-карбоновой кислоты Pseudomonas spp. M18 или M18G рекомбинантной плазмидой, несущей ген phzH, в результате чего биоинженерный штамм становится способным продуцировать феназин-1-карбоксамид. Штамм подавляет фитопатогенные грибы родов Pythium, Phytophthora и Rhizoctonia (Patent US 20140309232).Known bioengineered strain Pseudomonas sp., For the production of a new microbiological fungicide, the main component of which is phenazine-1-carboxamide. This strain was obtained as a result of transformation of the parent producer strain of phenazine-1-carboxylic acid Pseudomonas spp. M18 or M18G recombinant plasmid carrying the phzH gene, as a result of which the bioengineered strain becomes able to produce phenazine-1-carboxamide. The strain suppresses phytopathogenic fungi of the genera Pythium, Phytophthora and Rhizoctonia (Patent US 20140309232).
Недостатком штамма является то, что он получен в результате генетических манипуляций и представляет собой генетически модифицированный микроорганизм.The disadvantage of the strain is that it is obtained as a result of genetic manipulations and is a genetically modified microorganism.
Особенностью изобретения является использование в качестве фунгицида культуральной жидкости (fermentation broth), содержащей феназин-1-карбоксамид или выделенный из нее антибиотик.A feature of the invention is the use as a fungicide of a culture fluid (fermentation broth) containing phenazine-1-carboxamide or an antibiotic isolated from it.
Известен штамм Pseudomonas aeruginosa B5 и метод получения из его культуральной жидкости рамнолипида B и оксихлорорафина (феназин-1-карбоксамида). Штамм проявляет антифунгальную активность против фитопатогенных грибов М. grisea, Alternaria mali, Alternaria panax, Alternaria slani, Botryosphaeria dothidia, Cercospora capsici, Botryosphaeria dothidia, Cercospora capsici, Cercospora kikuchi, Cladosporium и т.д. (Patent KR 20010038285).A known strain of Pseudomonas aeruginosa B5 and a method for producing ramolipid B and oxychlororaphine (phenazine-1-carboxamide) from its culture fluid. The strain exhibits antifungal activity against phytopathogenic fungi M. grisea, Alternaria mali, Alternaria panax, Alternaria slani, Botryosphaeria dothidia, Cercospora capsici, Botryosphaeria dothidia, Cercospora capsici, Cercospora kikuchi, Cladosporium, etc. (Patent KR 20010038285).
Недостатком штамма является то, что вид бактерий Pseudomonas aeruginosa относится к условно-патогенным микроорганизмам (4 группа патогенности).The disadvantage of the strain is that the bacterial species Pseudomonas aeruginosa belongs to opportunistic microorganisms (pathogenicity group 4).
В качестве прототипа выбран штамм Pseudomonas chlororaphis NCIMB 40616, обладающий способностью продуцировать биологически активные антифунгальные метаболиты, подавляющие рост фитопатогенных грибов родов Drechslera, Microdochium, Tilletia и Ustilago, которые вызывают наиболее распространенные инфекционные болезни зерновых культур. Штамм может быть применим для обработки семян растений, вегетирующих растений и среды для выращивания растений (Patent US 5,900,236).As a prototype, the strain Pseudomonas chlororaphis NCIMB 40616 was selected, which has the ability to produce biologically active antifungal metabolites that inhibit the growth of phytopathogenic fungi of the genera Drechslera, Microdochium, Tilletia and Ustilago, which cause the most common infectious diseases of crops. The strain may be useful for treating plant seeds, vegetative plants, and plant growth media (Patent US 5,900,236).
Однако в патенте отсутствуют сведения о химической природе продуцируемых антифунгальных метаболитов. Из описания не ясно, имеются ли в культуральной жидкости бактериального штамма Pseudomonas chlororaphis NCIMB 40616 феназиновые производные, в частности феназин-1-карбоновая кислота и феназин-1-карбоксамид. Отсутствуют сведения о действии этого штамма на такой широко распространенный возбудитель пшеницы как Gaeumannomyces graminis var. tritici, а также на фитопатогенные грибы родов Pythium, Fusarium и Rhizoctonia.However, the patent does not contain information on the chemical nature of the produced antifungal metabolites. It is not clear from the description whether phenazine derivatives, in particular phenazine-1-carboxylic acid and phenazine-1-carboxamide, are present in the culture fluid of the bacterial strain Pseudomonas chlororaphis NCIMB 40616. There is no information on the effect of this strain on such a common wheat pathogen as Gaeumannomyces graminis var. tritici, as well as phytopathogenic fungi of the genera Pythium, Fusarium and Rhizoctonia.
Кроме того, во всех перечисленных аналогах и прототипе нет сведений о способности штаммов-антагонистов фитопатогенных грибов повышать доступность труднорастворимых фосфатов.In addition, in all of the listed analogues and prototype there is no information about the ability of strains of antagonists of phytopathogenic fungi to increase the availability of insoluble phosphates.
Известно, что фосфор является вторым элементом после азота по значению в питании растений. Он присутствует в почве в виде органических (отложения растительного, животного и микробного происхождения) и неорганических или минеральных соединений. Однако из этого общего пула фосфорных соединений только 1-5% доступны растениям (Molla М., and Chowdhury АА. Microbial mineralization of organic phosphate in soil // Plant Soil. - 1984. - V. 78. - P. 393-399). Некоторые микроорганизмы, в особенности микоризные грибы и некоторые ризобактерии, принадлежащие к родам Pseudomonas, Bacillus и Rhizobium, способны усиливать поступление фосфора в растения (Rodriguez Н., Fraga R. Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotion // Biotechnol. Adv. - 1999. - V. 17(4-5). - P. 319-339). Способность ризосферных бактерий растворять неорганические фосфаты почвы считается одним из важнейших фитостимулирующих свойств и учитывается при использования таких микроорганизмов для создания биопрепаратов.Phosphorus is known to be the second element after nitrogen in importance in plant nutrition. It is present in the soil in the form of organic (deposits of plant, animal and microbial origin) and inorganic or mineral compounds. However, of this total pool of phosphorus compounds, only 1-5% is available to plants (Molla M., and Chowdhury AA. Microbial mineralization of organic phosphate in soil // Plant Soil. - 1984. - V. 78. - P. 393-399) . Some microorganisms, in particular mycorrhizal fungi and some rhizobacteria belonging to the genera Pseudomonas, Bacillus and Rhizobium, are able to enhance the phosphorus intake in plants (Rodriguez N., Fraga R. Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotion // Biotechnol. Adv. - 1999. - V. 17 (4-5). - P. 319-339). The ability of rhizospheric bacteria to dissolve inorganic soil phosphates is considered one of the most important phytostimulating properties and is taken into account when using such microorganisms to create biological products.
Задачей изобретения является выделение нового природного штамма бактерий, используемого для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий за счет синтеза гетероциклических антибиотиков феназин-1-карбоновой кислоты и феназин-1-карбоксамида и стимуляции роста растений за счет растворения неорганических фосфатов.The objective of the invention is the selection of a new natural strain of bacteria used to protect plants from phytopathogenic fungi and bacteria by synthesizing heterocyclic antibiotics phenazine-1-carboxylic acid and phenazine-1-carboxamide and stimulating plant growth by dissolving inorganic phosphates.
Техническим эффектом, который может быть получен при использовании предлагаемого штамма, является улучшение урожайности сельскохозяйственных культур и качества сельскохозяйственной продукции за счет подавления грибных и бактериальных инфекций растений и повышения биодоступности фосфатов.The technical effect that can be obtained by using the proposed strain is to improve the yield of crops and the quality of agricultural products by suppressing fungal and bacterial infections of plants and increasing the bioavailability of phosphates.
Поставленная задача достигается выявлением и использованием бактериального штамма Pseudomonas fluorescens О9-10, выделенного из ризосферы диких злаков, растущих на территории очистных сооружений г. Пущино (Московская область).The task is achieved by identifying and using the bacterial strain Pseudomonas fluorescens O9-10, isolated from the rhizosphere of wild cereals growing in the territory of sewage treatment plants in Pushchino (Moscow region).
Штамм Pseudomonas fluorescens O9-10 имеет лабораторный номер BS1506 и депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Т.К. Скрябина РАН под номером ВКМ В-2955Д.The strain Pseudomonas fluorescens O9-10 has laboratory number BS1506 and is deposited in the All-Russian collection of microorganisms IBPM them. T.K. Scriabin RAS under the number VKM V-2955D.
Штамм Pseudomonas fluorescens ВКМ В-2955Д характеризуется следующими признаками.The strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is characterized by the following features.
Среды культивированияCultivation media
Штамм хорошо растет на следующих средах (г/л, мл/л): LB (бакто-триптон - 10, дрожжевой экстракт - 5, хлористый натрий - 10, pH 7.2); Кинга Б (пептон - 20, K2HPO4 - 1.5, MgSO4×7H2O - 1.5, глицерин - 10); триптозо-соевом агаре (триптозо-соевый экстракт - 30); минеральной синтетической среде М9 (Na2HPO4 - 6, KH2PO4 - 3, NH4Cl - 1, NaCl - 0.5, 1М MgSO4 - 2,1M CaCl2 - 1, глюкоза - 2).The strain grows well on the following media (g / l, ml / l): LB (bacto-tryptone - 10, yeast extract - 5, sodium chloride - 10, pH 7.2); King B (peptone - 20, K 2 HPO 4 - 1.5, MgSO 4 × 7H 2 O - 1.5, glycerol - 10); tryptose-soybean agar (tryptose-soybean extract - 30); mineral synthetic medium M9 (Na 2 HPO 4 - 6, KH 2 PO 4 - 3, NH 4 Cl - 1, NaCl - 0.5, 1M MgSO 4 - 2,1M CaCl 2 - 1, glucose - 2).
Морфология колонийColony morphology
Морфологию колоний на питательных средах определяли после 4-5 сут роста при 28°C.The colony morphology on nutrient media was determined after 4-5 days of growth at 28 ° C.
Колонии на среде LB круглые с ровными краями, гладкие, слабовыпуклые, непрозрачные, бежевые, не слизистой консистенции, диаметр 5-6 мм, пигмент не выражен.Colonies on LB medium are round with smooth edges, smooth, slightly convex, opaque, beige, not mucous, diameter 5-6 mm, pigment is not pronounced.
На среде Кинга Б колонии зеленые, пигмент интенсивно-зеленый флуоресцирующий, диффундирует в среду.On King B medium, the colonies are green, the pigment is intensely green fluorescent, diffuses into the medium.
Культурально-морфологические признакиCultural and morphological features
Клетки подвижные, палочковидные, с полярными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.The cells are mobile, rod-shaped, with polar flagella, gram-negative, do not form a spore.
Физиолого-биохимические признакиPhysiological and biochemical characteristics
Облигатный аэроб, температурный оптимум роста 24-30°C, растет при 4°C, растет в пределах pH среды от 5.2 до 8.0; оптимальное для роста значение pH 6.8-7.4.Obligate aerob, temperature optimum of growth of 24-30 ° C, grows at 4 ° C, grows within the pH range from 5.2 to 8.0; pH optimum for growth is 6.8-7.4.
В дополнительных факторах роста не нуждается (прототроф).It does not need additional growth factors (prototroph).
В качестве источника углерода использует глюкозу, трегалозу, глицерин, янтарную кислоту, бензойную кислоту, антранилат, мезо-инозит.As a carbon source, it uses glucose, trehalose, glycerin, succinic acid, benzoic acid, anthranilate, meso-inositol.
Разжижает желатинThins gelatin
Проверенные неиспользуемые источники углерода: ксилоза, сахароза, гиппуровая кислота, фенилуксусная кислота, адипиновая кислота, салициловая кислота, нафталин, фенантрен, камфора, гексадекан, капролактам.Proven unused carbon sources: xylose, sucrose, hippuric acid, phenylacetic acid, adipic acid, salicylic acid, naphthalene, phenanthrene, camphor, hexadecane, caprolactam.
Устойчивость к антибиотикамAntibiotic resistance
Штамм проявляет устойчивость к карбенициллину (1000 мкг/мл), цефтазидиму (20 мкг/мл), цефепиму (20 мкг/мл), меропенему (20 мкг/мл), гентамицину (20 мкг/мл), амикацину (30 мкг/мл), тобрамицину (50 мкг/мл), стрептомицину (50 мкг/мл), тетрациклину (30 мкг/мл), хлорамфениколу (100 мкг/мл). Чувствителен к канамицину (50 мкг/мл). В скобках указана максимальная концентрация антибиотика в мкг/мл в агаризованной среде LB, при которой наблюдается рост бактерий.The strain is resistant to carbenicillin (1000 μg / ml), ceftazidime (20 μg / ml), cefepime (20 μg / ml), meropenem (20 μg / ml), gentamicin (20 μg / ml), amikacin (30 μg / ml ), tobramycin (50 μg / ml), streptomycin (50 μg / ml), tetracycline (30 μg / ml), chloramphenicol (100 μg / ml). Sensitive to kanamycin (50 mcg / ml). The maximum concentration of the antibiotic in μg / ml in LB agar medium at which bacteria growth is observed is indicated in parentheses.
Хромосомная устойчивость к тяжелым металламChromosomal resistance to heavy metals
Штамм обладает исходным уровнем хромосомной устойчивости к цинку и меди. Максимальная толерантная концентрация (МТК) цинка - 2.0 мМ, меди - 1.5 мМ.The strain has an initial level of chromosomal resistance to zinc and copper. The maximum tolerated concentration (MTK) of zinc is 2.0 mM, copper - 1.5 mM.
Штамм способен к росту при повышенных концентрациях (5%) хлористого натрия в среде выращивания.The strain is capable of growth at elevated concentrations (5%) of sodium chloride in the growing medium.
Принципиальные физиологические свойстваPrincipal physiological properties
Штамм обладает фунгицидными и бактерицидными свойствами.The strain has fungicidal and bactericidal properties.
Принципиальные специфические продукты.Principal specific products.
Штамм синтезирует гетероциклические феназиновые антибиотики феназин-1-карбоновую кислоту и феназин-1-карбоксамид, цианид водорода (HCN), сидерофоры, индолил-3-уксусную кислоту.The strain synthesizes heterocyclic phenazine antibiotics phenazine-1-carboxylic acid and phenazine-1-carboxamide, hydrogen cyanide (HCN), siderophores, indolyl-3-acetic acid.
Сведения по биологической безопасностиBiosafety Information
Штамм не патогенен для теплокровных животных и человека. Не обладает фитопатогенной активностью, о чем свидетельствует отсутствие мацерации на ломтиках картофеля при нанесении на них уколом живых клеток штамма.The strain is not pathogenic for warm-blooded animals and humans. It does not have phytopathogenic activity, as evidenced by the absence of maceration on the potato slices when applied to them with an injection of live strain cells.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ В-2955Д хранят на чашках со средой LB при 4-7°C. Пересевы на свежие среды - один раз в месяц. Может храниться не менее 1 года в 15% глицерине при -20°C, не более 10 лет под вазелиновым маслом в полужидкой среде следующего состава (г/л): питательный бульон (Difco) - 4, NaCl - 5, агар - 6, рН 6.8.The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is stored on plates with LB medium at 4-7 ° C. Reseeding on fresh environments - once a month. It can be stored for at least 1 year in 15% glycerol at -20 ° C, for no more than 10 years under liquid paraffin in a semi-liquid medium of the following composition (g / l): nutrient broth (Difco) - 4, NaCl - 5, agar - 6, pH 6.8.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D угнетает рост следующих фитопатогенных грибов: Gaeumannomyces graminis var. tritici штамм Ggt 1818, Gaeumannomyces graminis var. tritici штамм 119(2), Gaeumannomyces graminis var. tritici штамм PIT, Fusarium graminearum, Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum, Fusarium geterosporum, Fusarium culmorum, Fusarium sporotrichum, Fusarium solani ВКМ F-2316, Rhizoctonia solani, Verticillium alba-artrum, Verticillium dahliae ВКМ F-933, Sclerotonia sclerotiorum, Alternaria brassicae ВКМ F-4284.The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D inhibits the growth of the following phytopathogenic fungi: Gaeumannomyces graminis var. tritici strain Ggt 1818, Gaeumannomyces graminis var. tritici strain 119 (2), Gaeumannomyces graminis var. tritici strain PIT, Fusarium graminearum, Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum, Fusarium geterosporum, Fusarium culmorum, Fusarium sporotrichum, Fusarium solani VKM F-2316, Rhizoctonia solanumllium fibrium albium albium fibrium alba albium albium albium albium alba albium albium alba albom F-4284.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D угнетает рост фитопатогенных бактерий Pectobacterium carotovorum В15 и Burkholderia caryophylli ВКМ В-1296.The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D inhibits the growth of phytopathogenic bacteria Pectobacterium carotovorum B15 and Burkholderia caryophylli VKM B-1296.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D может быть использован для защиты растений от широкого круга фитопатогенных инфекций.The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D can be used to protect plants from a wide range of phytopathogenic infections.
Возможность осуществления предлагаемых объектов изобретений подтверждается следующими примерами, но не ограничивается ими.The possibility of implementing the proposed objects of the invention is confirmed by the following examples, but is not limited to.
Пример 1. Получение биомассы бактериального штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D.Example 1. Obtaining biomass of the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D.
Штамм выращивают в течение 24 ч при 24-30°С с аэрацией до титра 109 КОЕ/мл на среде LB следующего состава (г/л): пептон - 10, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 10, вода водопроводная - 1 л. При необходимости суспензию клеток разводят водой до необходимого титра.The strain is grown for 24 hours at 24-30 ° C with aeration to a titer of 10 9 CFU / ml on LB medium of the following composition (g / l): peptone - 10, yeast extract - 5, sodium chloride - 10, tap water - 1 l If necessary, the cell suspension is diluted with water to the desired titer.
Пример 2. Антагонистическая активность штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D в отношении фитопатогенных грибов родов Gaeumannomyces, Fusarium, Rhizoctonia, Verticillium, Sclerotonia, Alternaria.Example 2. Antagonistic activity of the strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D against phytopathogenic fungi of the genera Gaeumannomyces, Fusarium, Rhizoctonia, Verticillium, Sclerotonia, Alternaria.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D выращивают в жидкой среде LB 18 ч. На чашку Петри с агаризованной средой Каннера сеют 5 мкл бактериального штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D (пятном The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is grown in LB liquid medium for 18 h. 5 μl of the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is sown on a Petri dish with agar medium Kanner.
диаметром 5 мм на расстоянии 3-3.5 см от центра чашки) и выращивают в течение 2 суток для достижения полного синтеза вторичных метаболитов. Затем в центр чашки Петри на поверхность агара помещают сегмент мицелия (диаметром 5-10 мм) грибного штамма. Мицелий гриба выращивают заранее на глюкозо-картофельном агаре при комнатной температуре в течение 7 суток.5 mm in diameter at a distance of 3-3.5 cm from the center of the cup) and grown for 2 days to achieve complete synthesis of secondary metabolites. Then, a mycelial segment (5-10 mm in diameter) of the fungal strain is placed in the center of the Petri dish on the surface of the agar. The fungal mycelium is grown in advance on glucose-potato agar at room temperature for 7 days.
Чашки Петри заклеивают парафильмом для поддержания необходимой влажности и инкубируют при комнатной температуре в течение 5-10 суток, после чего визуально оценивают наличие зоны подавления роста фитопатогенов (таблица 1, фиг. 1).Petri dishes are sealed with parafilm to maintain the necessary humidity and incubated at room temperature for 5-10 days, after which the presence of a zone of inhibition of growth of phytopathogens is visually assessed (table 1, Fig. 1).
Из таблицы 1 следует, что бактериальный штамм Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D ингибирует, в той или иной степени, все используемые в данном эксперименте фитопатогенные грибы.From table 1 it follows that the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D inhibits, to one degree or another, all phytopathogenic fungi used in this experiment.
На фиг. 1 показано подавление роста мицелия фитопатогенных грибов Gaeumannomyces graminis var. tritici (штамм Ggt 1818) (а) и Fusarium graminearum (б) предлагаемым штаммом бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D (1) и ризосферными штаммами бактерий (2, 3), не являющимися продуцентами феназиновых антибиотиков. Хорошо видна зона подавления роста тест-гриба около штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ В-2955D (1). Ризосферные штаммы (2, 3) не оказывают ингибирующего влияния на формирование мицелия исследуемых грибов. Зон подавления вокруг них нет.In FIG. 1 shows the inhibition of mycelial growth of phytopathogenic fungi Gaeumannomyces graminis var. tritici (strain Ggt 1818) (a) and Fusarium graminearum (b) with the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D (1) and rhizospheric bacterial strains (2, 3), which are not producers of phenazine antibiotics. The growth inhibitory zone of the test fungus is clearly visible near the Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D strain (1). Rhizospheric strains (2, 3) do not inhibit the mycelium formation of the studied fungi. There are no suppression zones around them.
Пример 3. Антибактериальная активность штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D.Example 3. The antibacterial activity of the strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D.
Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D и тест-микроорганизмы, приведенные в таблице 2, выращивают в жидкой среде LB 18 ч. Используют неразбавленную культуру тест-микроорганизмов, а также ее разведения в 10, 100 и 1000 раз. 100 мкл культуры тест-микроорганизмов наносят на предварительно подсушенную агаризованную среду LB и равномерно распределяют микробиологическим шпателем. Затем на расстоянии 3-3.5 см от центра чашки наносят 3-5 мкл культуры штамма The bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D and the test microorganisms shown in Table 2 are grown in LB liquid medium for 18 hours. An undiluted culture of the test microorganisms is used, as well as its
бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D. Чашки инкубируют в течение 7 суток при 24°С. Наличие зоны подавления роста тест-микроорганизмов определяют визуально на 1, 3 и 7 сутки (таблица 2, фиг. 2). Зоны измеряют в мм, измеряя от края колонии штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D.bacteria Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D. Cups are incubated for 7 days at 24 ° C. The presence of a zone of inhibition of growth of test microorganisms is determined visually on
Из таблицы 2 следует, что штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D ингибирует, в той или иной степени, все используемые в данном эксперименте тест-микроорганизмы. Штамм угнетает рост как грамотрицательных, так и грамположительных бактерий.From table 2 it follows that the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D inhibits, to one degree or another, all test microorganisms used in this experiment. The strain inhibits the growth of both gram-negative and gram-positive bacteria.
На фиг. 2 показано подавление роста бактериального штамма Burkholderia caryophylli ВКМ В-1296 (0 разведение) предлагаемым штаммом бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D (1) и ризосферными штаммами бактерий (2, 3), не являющимися продуцентами феназиновых антибиотиков. Хорошо видна зона подавления роста тест-микроорганизма около штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D (1). Ризосферные штаммы (2, 3) не оказывают ингибирующего влияния на развитие тест-микроорганизма. Зон подавления вокруг них нет.In FIG. Figure 2 shows the inhibition of the growth of the bacterial strain Burkholderia caryophylli VKM B-1296 (0 dilution) with the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D (1) and rhizospheric bacterial strains (2, 3), which are not producers of phenazine antibiotics. The zone of inhibition of growth of the test microorganism is clearly visible near the Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D strain (1). Rhizospheric strains (2, 3) do not inhibit the development of the test microorganism. There are no suppression zones around them.
Пример 4. Способность бактериального штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D продуцировать феназиновые антибиотики.Example 4. The ability of the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D to produce phenazine antibiotics.
Качественный анализ феназиновых антибиотиков (феназин-1-карбоновой кислоты и феназин-1-карбоксамида) проводят с использованием метода тонкослойной хроматографии (ТСХ). Для экстрагирования феназинов бактериальные культуры выращивают в течение 72 ч при 24°С в 10 мл триптозно-соевого бульона или среды Кинга Б. После осаждения клеток (5 мин, 10000 об/мин) супернатант подкисляют с помощью HCl до рН 2 и экстрагируют равным объемом хлороформа. После центрифугирования отбирают хлороформенную фракцию и выпаривают.Qualitative analysis of phenazine antibiotics (phenazine-1-carboxylic acid and phenazine-1-carboxamide) is carried out using the method of thin-layer chromatography (TLC). To extract phenazines, bacterial cultures were grown for 72 hours at 24 ° C in 10 ml of tryptose-soy broth or King B. After sedimentation of the cells (5 min, 10,000 rpm), the supernatant was acidified with HCl to
Для ТСХ пробы растворяют в 20 мкл ацетонитрила. 3-5 мкл раствора наносят на силикагелевые пластины с флуоресцентным анализатором (Fluka, Германия) и применяют систему растворителей хлороформ : этилацетат : For TLC, samples were dissolved in 20 μl of acetonitrile. 3-5 μl of the solution is applied to silica gel plates with a fluorescence analyzer (Fluka, Germany) and a chloroform: ethyl acetate solvent system is used:
муравьиная кислота (5:4:1). В качестве стандартов используют феназин-1-карбоновую кислоту и феназин-1-карбоксамид (Sigma, США).formic acid (5: 4: 1). Phenazine-1-carboxylic acid and phenazine-1-carboxamide (Sigma, USA) are used as standards.
На фиг. 3 приведена тонкослойная хроматография феназин-1-карбоновой кислоты (величина Rf 0.8) (4), феназин-1-карбоксамида (величина Rf 0.7) (5), экстрактов культуральной жидкости (6, 7) ризосферных штаммов, не являющихся антагонистами фитопатогенных грибов и продуцентами феназиновых антибиотиков и экстракта культуральной жидкости (8) предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D.In FIG. Figure 3 shows thin-layer chromatography of phenazine-1-carboxylic acid (Rf value 0.8) (4), phenazine-1-carboxamide (Rf value 0.7) (5), culture fluid extracts (6, 7) rhizospheric strains that are not antagonists of phytopathogenic fungi and producers of phenazine antibiotics and culture fluid extract (8) of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D.
На ТСХ видно, что в экстракте культуральной жидкости (8) предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D накапливается целый ряд соединений. Два соединения (величины Rf 0.8 и 0.7) по окраске в видимом свете, флуоресценции под действием УФ и по значениям Rf идентичны феназин-1-карбоновой кислоте (4) и феназин-1-карбоксамиду (5). При длительном выращивании предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D возможно выпадение феназиновых антибиотиков в виде сине-зеленых кристаллов в среде культивирования.TLC shows that a number of compounds accumulate in the culture fluid extract (8) of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D. The two compounds (Rf values 0.8 and 0.7) are identical in color to visible light, UV fluorescence, and Rf in identical phenazine-1-carboxylic acid (4) and phenazine-1-carboxamide (5). With prolonged cultivation of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D, phenazine antibiotics may precipitate in the form of blue-green crystals in the culture medium.
В экстрактах культуральной жидкости (6, 7) ризосферных штаммов, не являющихся антагонистами фитопатогенных грибов, не накапливается указанных феназиновых антибиотиков. Пятна со значениями Rf 0.8 и 0.7 отсутствуют на пластине ТСХ.The extracts of the culture fluid (6, 7) of rhizospheric strains that are not antagonists of phytopathogenic fungi do not accumulate the indicated phenazine antibiotics. Spots with Rf values of 0.8 and 0.7 are absent on the TLC plate.
Пример 5. Способность бактериального штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D к растворению неорганических фосфатов.Example 5. The ability of the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D to dissolve inorganic phosphates.
Способность к растворению неорганических фосфатов оценивают по появлению прозрачных зон (гало) при культивировании бактерий на селективной минеральной среде с гидроксиапатитом кальция (Са10(PO4)6(ОН)2) или фосфатом кальция (Са3(PO4)2) в качестве единственного источника фосфора.The ability to dissolve inorganic phosphates is evaluated by the appearance of transparent zones (halo) during the cultivation of bacteria on a selective mineral medium with calcium hydroxyapatite (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 ) or calcium phosphate (Ca 3 (PO 4 ) 2 ) as the only source of phosphorus.
Селективная среда с гидроксиапатитом кальция содержит в г/л: MgSO4×7Н2О - 2; NaCl - 1; NH4Cl - 10; трис (трис(гидроксиметил)аминометан) - 1; глюкоза - 10, агар - 15, раствор гидроксиапатита кальция - 5%. Раствор гидроксиапатита кальция (Са10(PO4)6(ОН)2) (Calcium phosphate hydroxide, type 3, Sigma, США) готовят заранее. Для этого 10 г гидроксиапатита кальция 10-15 раз промывают деионизованной водой. Отмытый гидроксиапатит кальция заливают 100 мл деионизованной воды и стерилизуют. К расправленной агаризованной среде (20 мл) добавляют 1 мл приготовленной суспензии гидроксиапатита кальция, интенсивно перемешивают на шейкере и разливают по чашкам Петри.A selective medium with calcium hydroxyapatite contains in g / l: MgSO 4 × 7H 2 O - 2; NaCl - 1; NH 4 Cl - 10; tris (tris (hydroxymethyl) aminomethane) -1; glucose - 10, agar - 15, calcium hydroxyapatite solution - 5%. A solution of calcium hydroxyapatite (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 ) (Calcium phosphate hydroxide,
Бактериальные штаммы выращивают заранее на полноценной среде LB. Биомассу ресуспендируют в физ. растворе (0.85% NaCl) и наносят по 3-5 мкл на чашки с агаризованной селективной средой с гидроксиапатитом кальция или фосфатом кальция. Через 5-7 суток культивирования определяют появление прозрачных зон (гало) вокруг бактериальной культуры.Bacterial strains are grown in advance on complete LB medium. Biomass is resuspended in physical. solution (0.85% NaCl) and apply 3-5 μl to plates with agarized selective medium with calcium hydroxyapatite or calcium phosphate. After 5-7 days of cultivation, the appearance of transparent zones (halo) around the bacterial culture is determined.
На фиг. 4 видно, что наибольшая зона растворения гидроксиапатита кальция (более 3 мм) наблюдается около колонии предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D (1).In FIG. Figure 4 shows that the largest dissolution zone of calcium hydroxyapatite (more than 3 mm) is observed near the colony of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D (1).
Ризосферные штаммы бактерий, не способные к растворению фосфатов и не являющиеся продуцентами феназиновых антибиотиков могут расти на данной селективной среде, но зоны просветления либо не образуются (2, 3), либо образуются в радиусе 0.5-1 мм от них (9).Rhizospheric bacterial strains that are not capable of dissolving phosphates and are not producers of phenazine antibiotics can grow on this selective medium, but enlightenment zones either do not form (2, 3) or form within a radius of 0.5-1 mm from them (9).
Пример 6. Определение фитостимулирующей способности у предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D.Example 6. Determination of phytostimulating ability of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D.
Определение способности стимулировать рост корней растений (пшеница, рожь, маш (фасоль золотистая)) проводят в чашках Петри, сравнивая обработанные предлагаемым штаммом семена с контрольными. Семена растений одного размера (20 штук) помещают в пробирку с разведенной в 100 раз культурой штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D и встряхивают их до полного смачивания. Семена инкубируют при комнатной температуре в течение 2 часов, затем равномерно раскладывают в чашки Петри на поверхность бумажного фильтра, смоченного 10 мМ раствором сульфата магния. В качестве контроля используют семена, помещенные в пробирку с 10 мл раствора 10 мМ сульфата магния без бактерий. Чашки инкубируют в термостате при 24°C в темноте в течение 3 суток. Измеряют среднюю и суммарную длину корней инокулированных проростков и сравнивают с контролем (необработанные проростки). Повторность эксперимента 3-х кратная.The ability to stimulate the growth of plant roots (wheat, rye, mung bean (golden beans)) is determined in Petri dishes by comparing the seeds treated with the proposed strain with the control ones. The seeds of plants of the same size (20 pieces) are placed in a test tube with a 100-fold diluted culture of the bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D and shake them until completely wetted. Seeds are incubated at room temperature for 2 hours, then evenly laid out in Petri dishes on the surface of a paper filter moistened with a 10 mm solution of magnesium sulfate. As control use seeds placed in a test tube with 10 ml of a solution of 10 mm magnesium sulfate without bacteria. The plates are incubated in a thermostat at 24 ° C in the dark for 3 days. Measure the average and total length of the roots of inoculated seedlings and compare with the control (untreated seedlings). The experiment is repeated 3 times.
Из таблицы 3 видно, что длина корней проростков, обработанных предлагаемым штаммом бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D, больше по сравнению с контрольными растениями. Средняя длина корня у обработанных проростков маша увеличивается на 10%, у ржи на 45%, у пшеницы на 54%.From table 3 it can be seen that the length of the roots of seedlings treated with the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is longer compared to control plants. The average root length in processed mash seedlings increases by 10%, in rye by 45%, in wheat by 54%.
Пример 7. Влияние обработки штаммом Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D на развитие грибных заболеваний и урожайность озимой пшеницы в полевых экспериментах.Example 7. The effect of treatment with the strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D on the development of fungal diseases and yield of winter wheat in field experiments.
Исследования проведены на опытном поле муниципального бюджетного учреждения «Благоустройство» городского округа г. Пущино Московской области. Тип почвы - серая лесная.The studies were conducted on the experimental field of the municipal budget institution "Accomplishment" of the urban district of Pushchino, Moscow region. Type of soil - gray forest.
Посев семян озимой пшеницы сорта Губернатор Дона проведен в первой декаде сентября с нормой высева 2.5 ц/га на глубину 5-7 см по черному пару.The sowing of winter wheat seeds of the Governor of the Don variety was carried out in the first ten days of September with a sowing rate of 2.5 c / ha to a depth of 5-7 cm in black steam.
Подготовку опытного образца биопрепарата на основе предлагаемого штамма Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D проводят следующим образом. Штамм выращивают в течение 24 ч при 24-30°С с аэрацией до титра 109-1010 КОЕ/мл на среде LB. Культуру разводят в 100 раз водопроводной водой до титра 107-108 КОЕ/мл. Опрыскивание растений озимой пшеницы проводят с помощью ранцевого опрыскивателя дважды за вегетационный период: в фазе кущения - начала выхода в трубку (5 мая) и по флаговому листу (31 мая) в норме расхода рабочего раствора 300 л/га. Для сравнения используют коммерческий биопрепарат Псевдобактерин-2 на основе штамма бактерий Pseudomonas aureofaciens BS1393. В качестве контроля используют растения без обработки. Опрыскивание растений проводят в утренние часы при безветрии. Площадь делянок 20 м2, повторность 4-кратная.The preparation of a pilot sample of a biological product based on the proposed strain of Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is carried out as follows. The strain is grown for 24 hours at 24-30 ° C with aeration to a titer of 10 9 -10 10 CFU / ml in LB medium. The culture is diluted 100 times with tap water to a titer of 10 7 -10 8 CFU / ml Winter wheat plants are sprayed using a knapsack sprayer twice during the growing season: in the tillering phase - the beginning of the exit to the tube (May 5) and on the flag sheet (May 31) in the normal flow rate of a working solution of 300 l / ha. For comparison, a commercial biological product Pseudobacterin-2 based on the bacterial strain Pseudomonas aureofaciens BS1393 is used. Plants without treatment are used as a control. Spraying plants is carried out in the morning with no wind. The plot area is 20 m 2 , the repetition is 4-fold.
Наблюдения за пораженными растениями и их учет проводят в течение всей вегетации перед обработками и после обработок (на 10-20 день). Учет листовых болезней осуществляют путем отбора проб и последующим анализом в лабораторных условиях.Observations of affected plants and their accounting are carried out throughout the growing season before treatments and after treatments (on 10-20 days). Accounting for leaf diseases is carried out by sampling and subsequent analysis in the laboratory.
Интенсивность развития болезни определяют по площади пораженной поверхности листьев, покрытых пятнами, налетами, пустулами. Развитие болезни учитывают глазомерно, с помощью специальной палетки, повышающей точность оценки, и определяют процент поверхности пораженной ткани растения.The intensity of the development of the disease is determined by the area of the affected surface of the leaves, covered with spots, plaques, pustules. The development of the disease is taken into account eyeballs, using a special palette that increases the accuracy of the assessment, and determine the percentage of the surface of the affected tissue of the plant.
Распространенность болезни устанавливают по общепринятой формуле:The prevalence of the disease is established by the generally accepted formula:
Р(%)=(n×100)/N, гдеP (%) = (n × 100) / N, where
Р - распространенность болезни;P is the prevalence of the disease;
n - количество больных растений в пробах;n is the number of diseased plants in the samples;
N - общее количество растений в пробах.N is the total number of plants in the samples.
Учет технической (биологической) эффективности защитного мероприятия ведут по формуле:Accounting for the technical (biological) effectiveness of the protective measure is carried out according to the formula:
Б=((Рк-Po)×100)/Рк, гдеB = ((P to -P o ) × 100) / P to , where
Б - биологическая эффективность в %;B - biological effectiveness in%;
Рк - показатель развития болезни в контроле;P to - an indicator of the development of the disease in the control;
Po - аналогичный показатель в опыте.P o - a similar indicator in the experience.
Хозяйственную эффективность определяют разницей фактического урожая на обработанном и контрольном участках в пересчете на 1 га по формуле:Economic efficiency is determined by the difference in the actual yield on the cultivated and control plots in terms of 1 ha according to the formula:
Х=((А-В)×100)/А, гдеX = ((AB) × 100) / A, where
X - хозяйственная эффективность в %;X - economic efficiency in%;
А - урожай на обработанном участке поля;A - crop on the cultivated field;
В - урожай в контроле.In - harvest in control.
Уборку зерна озимой пшеницы осуществляют 7 июля в фазе полной спелости площадочным способом (4×0.25 м2 на делянках). Массу 1000 зерен определяют по ГОСТ 10842-89. Данные учета болезней и урожайности зерна Harvesting grain of winter wheat is carried out on July 7 in the phase of full ripeness using the platform method (4 × 0.25 m 2 in plots). A mass of 1000 grains is determined according to GOST 10842-89. Disease and Grain Productivity Data
подвергают математической обработке методом дисперсионного анализа.subjected to mathematical processing by analysis of variance.
Результаты обработок озимой пшеницы предлагаемым штаммом бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D на зараженность растений грибными патогенами представлены в таблице 4.The results of treating winter wheat with the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D for infection of plants with fungal pathogens are presented in table 4.
Из таблицы видно, что распространенность грибных заболеваний на флаговом листе у растений, обработанных предлагаемым штаммом, была ниже после первой и второй обработок (23 и 60% соответственно) по сравнению с контролем (47 и 72% соответственно).The table shows that the prevalence of fungal diseases on the flag leaf of plants treated with the proposed strain was lower after the first and second treatments (23 and 60%, respectively) compared with the control (47 and 72%, respectively).
Распространенность грибных заболеваний на первом листе у растений, обработанных предлагаемым штаммом, после первой обработки, также ниже (81%) по сравнению с контролем (91%).The prevalence of fungal diseases on the first leaf in plants treated with the proposed strain, after the first treatment, is also lower (81%) compared with the control (91%).
Биологическая эффективность предлагаемого штамма бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D сравнима с коммерческим препаратом Псевдобактерин-2 (таблица 4).The biological effectiveness of the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is comparable to the commercial drug Pseudobacterin-2 (table 4).
Влияние обработок предлагаемым штаммом Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D на урожайность озимой пшеницы представлено в таблице 5. Прибавка урожая при обработке предлагаемым штаммом Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D составляет 2.1 ц/га (6.9%) по сравнению с контролем и выше по сравнению с коммерческим биопрепаратом Псевдобактерин-2 (1.2 ц/га, 2.9%). Хозяйственная эффективность предлагаемого штамма в данных условиях составляет 6.4%.The effect of treatments with the proposed strain of Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D on winter wheat productivity is presented in table 5. The yield increase during processing of the proposed strain of Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D is 2.1 kg / ha (6.9%) compared with the control and higher compared to the commercial biological product Pseudobacterin-2 (1.2 kg / ha, 2.9%). The economic efficiency of the proposed strain in these conditions is 6.4%.
Таким образом, предлагаемый штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВКМ B-2955D обладает способностью к подавлению роста широкого круга фитопатогенов и растворению фосфатов. Штамм не токсичен для растений в рекомендуемых для обработок концентрациях. Он может быть использован для создания на его основе биопрепарата, предназначенного для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений за счет повышения биодоступности фосфатов.Thus, the proposed bacterial strain Pseudomonas fluorescens VKM B-2955D has the ability to inhibit the growth of a wide range of phytopathogens and dissolve phosphates. The strain is not toxic to plants in concentrations recommended for treatments. It can be used to create on its basis a biological product designed to protect plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulate plant growth by increasing the bioavailability of phosphates.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016119265A RU2646160C2 (en) | 2016-05-18 | 2016-05-18 | Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016119265A RU2646160C2 (en) | 2016-05-18 | 2016-05-18 | Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016119265A RU2016119265A (en) | 2017-11-23 |
| RU2646160C2 true RU2646160C2 (en) | 2018-03-01 |
Family
ID=61568832
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016119265A RU2646160C2 (en) | 2016-05-18 | 2016-05-18 | Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2646160C2 (en) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111690700B (en) * | 2020-07-01 | 2022-03-18 | 上海农乐生物制品股份有限公司 | Shenqinmycin fermentation process |
| CN114836352B (en) * | 2022-05-19 | 2023-07-21 | 东莞市农业科学研究中心 | Plant rhizosphere growth-promoting strain F13 and application thereof |
| CN114990009B (en) * | 2022-05-19 | 2023-07-21 | 东莞市农业科学研究中心 | Application of plant rhizosphere growth-promoting strain F13 in preparation of disease-resistant growth-promoting yield-increasing microbial agent |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5900236A (en) * | 1994-04-18 | 1999-05-04 | Bioagri Ab | Composition and method for controlling plant diseases using Pseudomonas chlororaphis strain NCIMB 40616 |
| RU2235771C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-09-10 | Государственное унитарное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" | Strain of bacterium pseudomonas fluorescens p469 for preparing preparation against plant diseases caused by phytopathogenic fungi and microorganisms |
| WO2013121248A1 (en) * | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Alma Mater Studiorum - Universita' Di Bologna | Novel pseudomonas fluorescens strain and uses thereof in the biological control of bacterial or fungal diseases |
-
2016
- 2016-05-18 RU RU2016119265A patent/RU2646160C2/en active IP Right Revival
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5900236A (en) * | 1994-04-18 | 1999-05-04 | Bioagri Ab | Composition and method for controlling plant diseases using Pseudomonas chlororaphis strain NCIMB 40616 |
| RU2235771C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-09-10 | Государственное унитарное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" | Strain of bacterium pseudomonas fluorescens p469 for preparing preparation against plant diseases caused by phytopathogenic fungi and microorganisms |
| WO2013121248A1 (en) * | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Alma Mater Studiorum - Universita' Di Bologna | Novel pseudomonas fluorescens strain and uses thereof in the biological control of bacterial or fungal diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| САЗОНОВА О.И. И ДР. Новые ризосферные штаммы псевдомонад, перспективные для защиты растений от фитопатогенов // Молодой ученый, май 2015, N.9.2 (89.2), с. 62-64. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016119265A (en) | 2017-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Elshahawy et al. | First report of Pythium aphanidermatum infecting tomato in Egypt and its control using biogenic silver nanoparticles | |
| Konappa et al. | Evaluation of biological efficacy of Trichoderma asperellum against tomato bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum | |
| JP5331010B2 (en) | A pure culture of Bacillus berecensis strain AH2 and a biological control organism that biologically controls phytopathogenic fungi | |
| KR101569737B1 (en) | Novel endophytic bacteria Bacillus oryzicola isolated from rice rhizosphere and development of a natural biopesticide and plant strengthener using same | |
| Coninck et al. | Trichoderma atroviride as a promising biocontrol agent in seed coating for reducing Fusarium damping‐off on maize | |
| Khairy et al. | Eco-friendly application of nano-chitosan for controlling potato and tomato bacterial wilt | |
| Golparyan et al. | Endophytes of Lippia citriodora (Syn. Aloysia triphylla) enhance its growth and antioxidant activity | |
| Rajendran et al. | Endophytic Bacillus species confer increased resistance in cotton against damping off disease caused by Rhizoctonia solani | |
| RU2646160C2 (en) | Strain of pseudomonas fluorescens for protecting plants from phytopathogenic fungi and bacteria and stimulating plant growth | |
| Gowtham et al. | Biological control of Phomopsis leaf blight of brinjal (Solanum melongena L.) with combining phylloplane and rhizosphere colonizing beneficial bacteria | |
| WO2019035067A1 (en) | Organic fungicide derived through microbial fermentation | |
| Ramyabharathi et al. | Potential of a rhizobacterium Bacillus subtilis (Bbv 57) on Fusarium oxysporum f. sp. gerberae and Meloidogyne incognita infecting Gerbera grown in protected cultivation | |
| Klaram et al. | Efficacy of marine antagonist, Trichoderma spp. as halo-tolerant biofungicide in controlling rice diseases and yield improvement | |
| Jan et al. | In vitro assessment of Bacillus subtilis FJ3 affirms its biocontrol and plant growth promoting potential | |
| KR20150113255A (en) | Beauveria bassiana having insect pathogenicityand agent for prevention of rice vermin using the same | |
| Antonelli et al. | Plant growth‐promoting bacteria from solarized soil with the ability to protect melon against root rot and vine decline caused by Monosporascus cannonballus | |
| Nguyen et al. | Biological control of fusarium root rot of Indian mulberry (Morinda officinalis How.) with consortia of agriculturally important microorganisms in Viet Nam | |
| EP2765185A2 (en) | Strain of Brevibacillus parabrevis and controlled release composition based on it | |
| Valan Arasu et al. | Biocontrol of Trichoderma gamsii induces soil suppressive and growth‐promoting impacts and rot disease‐protecting activities | |
| Marimuthu et al. | Synergistic effect of combined application of Azospirillum and Pseudomonas fluorescens with inorganic fertilizers on root rot incidence and yield of cotton/Synergistische Wirkung der kombinierten Anwendung von Azospirillum und Pseudomonas fluorescens mit anorganischen Düngern auf die Wurzelfäule und den Ertrag von Baumwolle | |
| JP2019165676A (en) | Plant disease control agent and method of controlling plant disease | |
| AU2018267591A1 (en) | An Herbicidal Composition for Controlling Parthenium Weed and Strain Thereof | |
| Li et al. | Characterization of Bacillus amyloliquefaciens BA-4 and its biocontrol potential against Fusarium-related apple replant disease | |
| WO2017204288A1 (en) | Composition for enhancing disease resistance of plants or controlling plant disease, and method for using same | |
| JPH06133763A (en) | Novel microorganism and blight control agent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180519 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20190801 |