RU2644282C2

RU2644282C2 - Means for non-alcoholic fatty liver disease treatment and prevention

Info

Publication number: RU2644282C2
Application number: RU2016126245A
Authority: RU
Inventors: Алексей Алексеевич Тиньков; Евгения Рамильевна Гатиатулина; Валентина Сергеевна Полякова; Ольга Николаевна Немерешина; Александр Александрович Никоноров; Анатолий Викторович Скальный
Original assignee: Алексей Алексеевич Тиньков; Евгения Рамильевна Гатиатулина; Валентина Сергеевна Полякова; Ольга Николаевна Немерешина; Александр Александрович Никоноров; Анатолий Викторович Скальный
Priority date: 2016-06-29
Filing date: 2016-06-29
Publication date: 2018-02-08

Abstract

FIELD: pharmacology.

SUBSTANCE: means for the treatment and prevention of non-alcoholic fatty liver disease based on water extract of plantain leaves (Plantago maxima Juss. Et Jacq).

EFFECT: means is effective for non-alcoholic fatty liver disease treatment and prevention.

3 cl, 2 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии, и касается профилактики и лечения неалкогольной жировой болезни печени.The invention relates to medicine, in particular to hepatology, and for the prevention and treatment of non-alcoholic fatty liver disease.

Неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) характеризуется развитием макровезикулярного стеатоза более чем в 5% гепатоцитов у лиц, не злоупотребляющих алкоголем. НАЖБП может приводить к развитию цирроза, гепатоцелюллярной карциномы и повышению смертности от дисфункции печени. Частота развития данной патологии неуклонно увеличивается, достигая 35% в некоторых развитых странах и являясь самой частой причиной хронического заболевания печени (Loomba, R., & Sanyal, А.J. (2013). The global NAFLD epidemic. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology, 10(11), 686-690).Non-alcoholic fatty liver disease (NLBF) is characterized by the development of macrovesicular steatosis in more than 5% of hepatocytes in people who do not abuse alcohol. NAFLD can lead to the development of cirrhosis, hepatocellular carcinoma and increased mortality from liver dysfunction. The frequency of development of this pathology is steadily increasing, reaching 35% in some developed countries and being the most common cause of chronic liver disease (Loomba, R., & Sanyal, A.J. (2013). The global NAFLD epidemic. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology, 10 (11), 686-690).

В связи с наличием множественных механизмов, приводящих к развитию НАЖБП, лечение и профилактика данного состояния крайне проблематичны. Более того, не существует общепринятых схем лечения НАЖБП. В настоящее время в качестве препаратов для лечения используются тиазолидиндионы, метформин, статины. Также оценивается эффективность препаратов против ожирения, селективных блокаторов рецепторов к канабиноидам, агонистов

и

. В то же время эффективность данных средств не доказана (Mishra, Р., & Younossi, Z.М. (2007). Current treatment strategies for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Current drug discovery technologies, 4(2), 133-140). Сомнительной также представляется возможность применения данных препаратов для профилактики данной патологии.Due to the presence of multiple mechanisms leading to the development of NAFLD, treatment and prevention of this condition are extremely problematic. Moreover, there are no generally accepted treatment regimens for NAFLD. Currently, thiazolidinediones, metformin, and statins are used as drugs for treatment. The effectiveness of drugs against obesity, selective blockers of receptors for cannabinoids, agonists is also evaluated.

and

. At the same time, the effectiveness of these drugs has not been proven (Mishra, R., & Younossi, Z.M. (2007). Current treatment strategies for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Current drug discovery technologies, 4 (2), 133-140). The possibility of using these drugs for the prevention of this pathology is also doubtful.

В частности, заявлено средство лечения и профилактики НАЖБП, представляющее собой композицию, включающую гидроксихлорохин, бигуаниды и статины. Экспериментальное обоснование эффективности средства проводилось на лабораторных животных, получающих 10% раствор фруктозы в течение 2 недель (Pareek, Anil. "Pharmaceutical compositions for the treatment/prophylaxis of non-alcoholic fatty liver disease." U.S. Patent Application No. 13/501, 342). Учитывая тот факт, что применение лишь растворов фруктозы с концентрацией более 30%, а также высокожировых диет с содержанием жиров 30-75% или же в сочетании с углеводным компонентом позволяет эффективно смоделировать НАЖБП с соответствующим метаболическим профилем (Kanuri, G., & Bergheim, I. (2013). In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International journal of molecular sciences, 14(6), 11963-11980), сомнительно, что предложенное средство может быть эффективным для профилактики тяжелой НАЖБП. Наличие побочного действия у статинов и бигуанидов, входящих в состав предлагаемого средства, также существенно ограничивает его применение с целью профилактики НАЖБП.In particular, the claimed treatment and prophylaxis of NAFLD, which is a composition comprising hydroxychloroquine, biguanides and statins. An experimental rationale for the effectiveness of the drug was carried out in laboratory animals receiving a 10% solution of fructose for 2 weeks (Pareek, Anil. "Pharmaceutical compositions for the treatment / prophylaxis of non-alcoholic fatty liver disease." US Patent Application No. 13/501, 342 ) Given the fact that the use of only fructose solutions with a concentration of more than 30%, as well as high-fat diets with a fat content of 30-75% or in combination with a carbohydrate component, it is possible to effectively model NAFLD with the corresponding metabolic profile (Kanuri, G., & Bergheim, I. (2013). In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International journal of molecular sciences, 14 (6), 11963-11980), it is doubtful that the proposed tool can be effective for the prevention of severe NAFLD. The presence of side effects in statins and biguanides, which are part of the proposed product, also significantly limits its use for the prevention of NAFLD.

В качестве альтернативного подхода к лечению и профилактике НАЖБП используются фитотерапевтические препараты и композиции, наиболее исследованным из которых является силимарин - липофильный экстракт из Silybum marianum, и его основное действующее вещество силибин (Milosevic, N., Milanovic, М., Abenavoli, L., & Milic, N. (2014). Phytotherapy and NAFLD-from Goals and Challenges to Clinical Practice. Reviews on recent clinical trials, 9(3), 195-203). В частности, введение силибина сопровождалось уменьшением степени стеатоза, что было продемонстрировано экспериментально с использованием модели НАЖБП на db/db мышах, содержащихся на метионин-холин дефицитной диете (Salamone, Federico. "Method for the treatment of heart related disorders in nafld patients." U.S. Patent Application No. 13/721, 568). Однако стоит отметить, что использование метионин-холин дефицитной диеты не позволяет добиться успешного моделирования НАЖБП ввиду отсутствия развития инсулинорезистентности (Rinella, М.Е., & Green, R.М. (2004). The methionine-choline deficient dietary model of steatohepatitis does not exhibit insulin resistance. Journal of hepatology, 40(1), 47-51). В то же время, несмотря на значительное уменьшение количества пораженных гепатоцитов, при приеме силибина явления стеатогепатита оставались достаточно выраженными, особенно в центролобулярных участках.As an alternative approach to the treatment and prevention of NAFLD, phytotherapeutic drugs and compositions are used, the most studied of which is silymarin - a lipophilic extract from Silybum marianum, and its main active ingredient is silybin (Milosevic, N., Milanovic, M., Abenavoli, L., & Milic, N. (2014). Phytotherapy and NAFLD-from Goals and Challenges to Clinical Practice. Reviews on recent clinical trials, 9 (3), 195-203). In particular, the introduction of silibin was accompanied by a decrease in the degree of steatosis, which was experimentally demonstrated using the NAFLD model in db / db mice on a methionine-choline-deficient diet (Salamone, Federico. "Method for the treatment of heart related disorders in nafld patients." US Patent Application No. 13/721, 568). However, it is worth noting that the use of a methionine-choline deficient diet does not allow successful modeling of NAFLD due to the lack of development of insulin resistance (Rinella, M.E., & Green, R.M. (2004). The methionine-choline deficient dietary model of steatohepatitis does not exhibit insulin resistance. Journal of hepatology, 40 (1), 47-51). At the same time, despite a significant decrease in the number of affected hepatocytes, when taking silibin, the phenomena of steatohepatitis remained quite pronounced, especially in centrolobular areas.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому средству является использование экстракта травы вербейника сухого (Lysimachiae Foenum-Graeci), эффективность которого показана в экспериментах на мышах, содержащихся на высокожировом рационе с содержанием жиров 60% от общего калоража в течение 6 недель, и выражалась в снижении степени стеатоза, в виде уменьшения размера жировых включений на фоне приема предлагаемого средства (Композиция, содержащая экстракт травы вербейника сенного, для профилактики и лечения заболеваний обмена веществ. Заявка 2010126032 на патент на изобретение в РФ, http://www.findpatent.ru/patent/248/2481851.html). В то же время распространение сырья, необходимого для получения данного средства (Lysimachia Foenum-Graecum), ограничено Китаем (Seidemann J. World Spice Plants: Economic Usage, Botany, Taxonomy. Springer, Berlin-Heidelberg, 2005), а именно отдельными провинциями Гуанси и Юньнань (Li, X.R., Xin, В., Wang, G.L., Dai, Z., & Lin, R.C. (2010). Two new triterpenes from Lysimachia foenum-graecum. Journal of Asian natural products research, 12(3), 204-208), что существенно ограничивает его доступность.The closest in technical essence to the proposed tool is the use of an extract of dry loosestrife grass (Lysimachiae Foenum-Graeci), the effectiveness of which is shown in experiments on mice kept on a high-fat diet with a fat content of 60% of total calorie content for 6 weeks, and was expressed in a decrease the degree of steatosis, in the form of a decrease in the size of fat inclusions on the background of taking the proposed product (Composition containing extract of grass of loosestrife hay, for the prevention and treatment of metabolic diseases. ka 2010126032 for a patent for an invention in the Russian Federation, http://www.findpatent.ru/patent/248/2481851.html). At the same time, the distribution of the raw materials necessary to obtain this product (Lysimachia Foenum-Graecum) is limited to China (Seidemann J. World Spice Plants: Economic Usage, Botany, Taxonomy. Springer, Berlin-Heidelberg, 2005), namely, individual provinces of Guangxi and Yunnan (Li, XR, Xin, B., Wang, GL, Dai, Z., & Lin, RC (2010). Two new triterpenes from Lysimachia foenum-graecum. Journal of Asian natural products research, 12 (3), 204-208), which significantly limits its availability.

Таким образом, наличие выраженных побочных эффектов у существующих препаратов для лечения НАЖБП, невозможность их использования в качестве профилактических средств, а также ограничения по использованию фитопрепаратов ввиду их недостаточной эффективности или сложности производства, диктуют необходимость поиска новых средств для лечения и профилактики НАЖБП.Thus, the presence of pronounced side effects in existing drugs for the treatment of NAFLD, the inability to use them as prophylactic agents, as well as restrictions on the use of herbal remedies due to their insufficient effectiveness or complexity of production, necessitate the search for new drugs for the treatment and prevention of NAFLD.

Заявляемое средство решает задачу расширения арсенала средств для профилактики и лечения НАЖБП.The inventive tool solves the problem of expanding the arsenal of tools for the prevention and treatment of NAFLD.

Отличительным признаком настоящего изобретения является использование водного извлечения из листьев Plantago maxima Juss. et Jacq в качестве средства для лечения и профилактики НАЖБП. Подорожник наибольший (Plantago maxima Juss. et Jacq) является гемикриптофитом и в степной зоне произрастает на солонцеватых, пойменных остепненных лугах, по берегам рек и озер. Ареал распространения данного вида включает в себя Западную Сибирь, Европейскую часть России, а также районы Болгарии, Румынии и Венгрии (Tzonev, R., & Karakiev, Т. (2007). Plantago maxima (Plantaginaceae): a relict species new for the Bulgarian flora. Phytol. Balcan, 13(3), 347-350), что отражает большую сырьевую базу для получения указанного средства.A distinctive feature of the present invention is the use of aqueous extract from the leaves of Plantago maxima Juss. et Jacq as a treatment and prophylaxis of NAFLD. The largest plantain (Plantago maxima Juss. Et Jacq) is hemicryptophyte and grows in the steppe zone in solonetzic, floodplain steppe meadows, along the banks of rivers and lakes. The distribution range of this species includes Western Siberia, the European part of Russia, as well as areas of Bulgaria, Romania and Hungary (Tzonev, R., & Karakiev, T. (2007). Plantago maxima (Plantaginaceae): a relict species new for the Bulgarian flora. Phytol. Balcan, 13 (3), 347-350), which reflects a large raw material base for obtaining the specified funds.

Сбор растительного сырья для изготовления предлагаемого средства производился в соответствии с анатомо-морфологическими характеристиками вида (Plantago maxima Juss. et Jacq) в различных местах обитания лесостепного и степного Предуралья с резко-континентальным климатом.The collection of plant materials for the manufacture of the proposed product was carried out in accordance with the anatomical and morphological characteristics of the species (Plantago maxima Juss. Et Jacq) in various habitats of the forest-steppe and steppe Urals with a sharply continental climate.

Объектом наблюдения являлись крысы-самки линии Wistar в возрасте 2 мес. Животные были равномерно разделены на 4 группы по 8 в каждой. До начала эксперимента животные находились на карантине в условиях вивария в течение 2 недель. Содержание животных осуществлялось в условиях искусственной вентиляции и 12-часового светового дня. Животные всех групп имели доступ к питью и пище ad libitum.The object of observation were female rats of the Wistar strain at the age of 2 months. Animals were evenly divided into 4 groups of 8 each. Before the experiment, the animals were quarantined in vivarium conditions for 2 weeks. The animals were kept under artificial ventilation and a 12-hour daylight hours. Animals of all groups had access to drink and food ad libitum.

Стандартный рацион с общей энергетической ценностью 270 ккал/100 г содержал 20% белка, 70% углеводов и 10% жиров.A standard diet with a total energy value of 270 kcal / 100 g contained 20% protein, 70% carbohydrates and 10% fat.

В качестве модели НАЖБП выбрано алиментарное воздействие с избыточным поступлением жиров и углеводов, в частности высокожировой высокоуглеводный рацион, основанный на добавлении к стандартному рациону свиного сала с итоговым содержанием жиров - 60%, белков - 10%, углеводов - 20%. С целью увеличения поступления углеводов в организм питьевая вода замещалась на 10% раствор сахарозы на весь период исследования. Сочетание избытка жиров и углеводов в рационе животных приводит к интенсивному прогрессированию НАЖБП с развитием более поздних стадий заболевания по сравнению с использованием лишь высокожирового или же высокоуглеводного рациона (Kanuri, G., & Bergheim, I. (2013). In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International journal of molecular sciences, 14(6), 11963-11980).As an NAFLD model, an alimentary effect with an excess intake of fats and carbohydrates was selected, in particular, a high-fat, high-carb diet based on the addition of lard with a total fat content of 60%, protein - 10%, and carbohydrates - 20%. In order to increase the intake of carbohydrates in the body, drinking water was replaced with a 10% sucrose solution for the entire study period. The combination of excess fats and carbohydrates in the animal diet leads to intensive progression of NAFLD with the development of later stages of the disease compared to using only a high-fat or high-carb diet (Kanuri, G., & Bergheim, I. (2013). In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International journal of molecular sciences, 14 (6), 11963-11980).

Предлагаемое средство - извлечение из подорожника наибольшего (Plantago maxima Juss. et Jacq), собранного в период цветения, готовилось согласно статье Государственной Фармакопеи X №349. Для этого сырье (лист) подорожника наибольшего непосредственно перед взвешиванием измельчали до 3-5 мм. Навеску заливали экстрагентом (вода бутилированная с общей минерализацией <250 мг/л) при соотношении сырье:экстрагент 1:10 и учете коэффициента водопоглощения. Экстракция производилась путем настаивания на кипящей водяной бане при температуре 85-90°C в течение 30 минут с периодическим помешиванием. После охлаждения экстракта до комнатной температуры производилась фильтрация с помощью бумажного фильтра с целью избавления от механических включений. После экстракции шрот дополнительно отжимался с целью повышения выхода предлагаемого средства. Полученный экстракт дополнительно подвергался фильтрации. Предлагаемое средство предоставлялось животным вместо бутилированной питьевой воды ad libitum.The proposed tool is the extraction of the greatest plantain (Plantago maxima Juss. Et Jacq), collected during the flowering period, was prepared according to the article of the State Pharmacopoeia X No. 349. For this, the raw material (leaf) of the greatest plantain was crushed to 3-5 mm immediately before weighing. A portion was poured with an extractant (bottled water with a total salinity <250 mg / l) with a ratio of raw materials: extractant 1:10 and taking into account the coefficient of water absorption. The extraction was carried out by insisting on a boiling water bath at a temperature of 85-90 ° C for 30 minutes with periodic stirring. After cooling the extract to room temperature, filtering was performed using a paper filter in order to get rid of mechanical impurities. After extraction, the meal was additionally squeezed in order to increase the yield of the proposed product. The obtained extract was additionally subjected to filtration. The proposed product was provided to animals in place of ad libitum bottled drinking water.

Животные I группы содержались на стандартном рационе и получали чистую бутилированную питьевую воду и являлись контрольными.Animals of group I were kept on a standard diet and received clean bottled drinking water and were control.

Животные II группы содержались на высокожировом высокоуглеводном рационе с целью моделирования НАЖБП.Animals of group II were kept on a high-fat high-carb diet for the purpose of modeling NAFLD.

Крысы III группы являлись положительным контролем и получали предлагаемое средство на фоне стандартного рациона.Rats of group III were a positive control and received the proposed tool against the background of a standard diet.

Животные IV группы содержались на высокожировом высокоуглеводном рационе на фоне приема предлагаемого средства. Углеводный компонент формировался путем добавления требуемого количества сахарозы в полученное водное извлечение. Предлагаемое средство применялось в течение всего эксперимента наряду с алиментарным воздействием. Длительность эксперимента составила 6 недель.Animals of group IV were kept on a high-fat high-carb diet against the background of taking the proposed remedy. The carbohydrate component was formed by adding the required amount of sucrose to the resulting aqueous extract. The proposed tool was used throughout the experiment along with nutritional effects. The duration of the experiment was 6 weeks.

По окончании эксперимента у животных производился забор печени. Правые фрагменты срединной доли печени (De Godoy, J.L., Malafosse, R., Fabre, M., Mitchell, C., Mehtali, M., Houssin, D., & Soubrane, O. (2000). A preclinical model of hepatocyte gene transfer: the in vivo, in situ perfused rat liver. Gene therapy, 7(21), 1816-1823) забирались у всех животных в пластиковые кассеты и фиксировались в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в парафиновые блоки и изготовлением срезов толщиной 5 мкм. Срезы окрашивались гематоксилином Майера и эозином. Полученные микропрепараты использовались для визуальной оценки и микрофотографирования посредством микроскопа ЛОМО Микмед-6 (Россия) при искусственном освещении. Морфометрия структур (ядра, жировые включения) осуществлялась с помощью программного пакета ImageJ. Статистическая обработка полученных данных производилась с использованием программного пакета Statistica 10.0 (Statsoft, Tulsa, OK, US). Анализ характера распределения данных производился с использованием теста Шапиро-Уилка. Поскольку распределение являлось отличным от нормального, для описательной статистики использовались медианы и соответствующие значения 25 и 75 перцентилей. Сравнение погрупповых данных осуществлялось посредством использования непараметрического U-критерия Манна-Уитни; различия считались достоверными при p<0,05.At the end of the experiment, animals were taken liver. Right fragments of the median lobe of the liver (De Godoy, JL, Malafosse, R., Fabre, M., Mitchell, C., Mehtali, M., Houssin, D., & Soubrane, O. (2000). A preclinical model of hepatocyte gene transfer: the in vivo, in situ perfused rat liver. Gene therapy, 7 (21), 1816-1823) were collected from all animals in plastic cassettes and fixed in 10% neutral formalin, followed by pouring into paraffin blocks and making sections with a thickness of 5 microns. Sections were stained with Mayer hematoxylin and eosin. The obtained micropreparations were used for visual assessment and microphotography using a LOMO Mikmed-6 microscope (Russia) under artificial lighting. Morphometry of the structures (nuclei, fatty inclusions) was carried out using the ImageJ software package. Statistical processing of the obtained data was carried out using the software package Statistica 10.0 (Statsoft, Tulsa, OK, US). Analysis of the nature of the distribution of data was performed using the Shapiro-Wilk test. Since the distribution was different from normal, median and the corresponding values of 25 and 75 percentiles were used for descriptive statistics. Comparison of group data was carried out using the nonparametric Mann-Whitney U-test; differences were considered significant at p <0.05.

У интактных животных отмечается нормальная ультраструктура печени как в перипортальных (Фиг. 1А), так и в центролобулярных (Фиг. 2А) зонах. Как центролобулярные, так и периферические клетки имеют разные по размерам ядра и разную степень их плоидности. Двуядерные гепатоциты преобладают среди центролобулярных клеток. Средние значения размера ядер гепатоцитов в центролобулярных и перипортальных зонах составляют 84 (72-98) и 88 (73-100) мкм² соответственно. Различимых при использовании указанного увеличения включений в цитоплазме гепатоцитов не наблюдается.In intact animals, a normal ultrastructure of the liver is observed both in the periportal (Fig. 1A) and in the centrolobular (Fig. 2A) zones. Both centrolobular and peripheral cells have nuclei of different sizes and varying degrees of ploidy. Binuclear hepatocytes prevail among centrolobular cells. The average size of the hepatocyte nuclei in the centrolobular and periportal zones is 84 (72-98) and 88 (73-100) μm ^2, respectively. Notable when using the indicated increase in inclusions in the cytoplasm of hepatocytes is not observed.

Содержание животных на высокожировом высокоуглеводном рационе сопровождается появлением крупнокапельного жирового стеатоза преимущественно в перипортальных зонах долек печени (Фиг. 1B). В этих зонах в результате выраженной жировой дистрофии обнаруживается некроз отдельных групп гепатоцитов. Увеличение размера гепатоцитов у животных данной группы, очевидно, указывает на присоединение гидропической дистрофии. Среди центролобулярных гепатоцитов данных животных наблюдаются явления как мелкокапельного, так и крупнокапельного стеатоза, однако количество погибших некрозом гепатоцитов меньше, чем в перипортальной зоне (Фиг. 2B). Описываемые гистологические изменения относительно контрольной группы отмечались у 100% экспериментальных животных. При этом площадь жировых включений в гепатоцитах в перипортальной и центролобулярной зонах составляет 101 (58-198) и 88 (54-143) мкм² соответственно. Размер ядер существенно уменьшается относительно контрольных значений на 25% (p<0,001) в центролобулярных, составляя 63 (54-76) мкм², а также на 30% (p<0,001) в перипортальных зонах, составляя 62 (53-75) мкм².Keeping animals on a high-fat, high-carb diet is accompanied by the appearance of large-drop fat steatosis mainly in the periportal zones of the liver lobules (Fig. 1B). In these areas, as a result of severe fatty degeneration, necrosis of certain groups of hepatocytes is detected. An increase in the size of hepatocytes in animals of this group, obviously, indicates the addition of hydropic dystrophy. Among the centrolobular hepatocytes of these animals, phenomena of both small-droplet and large-droplet steatosis are observed, however, the number of hepatocyte necrosis killed is less than in the periportal zone (Fig. 2B). The described histological changes relative to the control group were observed in 100% of experimental animals. The area of fat inclusions in hepatocytes in the periportal and centrolobular zones is 101 (58-198) and 88 (54-143) μm ^2, respectively. The size of the nuclei significantly decreases relative to the control values by 25% (p <0.001) in centrolobular, amounting to 63 (54-76) μm ² , and also by 30% (p <0.001) in the periportal zones, making 62 (53-75) μm ² .

Применение средства на фоне стандартной диеты не приводит к изменениям структуры печени. Структура печени как в перипортальной (Фиг. 1С), так и в центролобулярной (Фиг. 2С) зонах идентична таковой в группе интактных животных. Размер ядер гепатоцитов у данных животных сопоставим с контрольными значениями в центролобулярной (78 (62-88) мкм²) и перипортальной зонах (82 (67-94) мкм²). Различимых жировых включений в цитоплазме гепатоцитов не отмечается.The use of the drug on the background of a standard diet does not lead to changes in the structure of the liver. The structure of the liver both in the periportal (Fig. 1C) and in the centrolobular (Fig. 2C) zones is identical to that in the group of intact animals. The size of the hepatocyte nuclei in these animals is comparable with the control values in the centrolobular (78 (62-88) μm ² ) and periportal zones (82 (67-94) μm ² ). There are no distinguishable fat inclusions in the cytoplasm of hepatocytes.

Применение предлагаемого средства на фоне высокожирового высокоуглеводного рациона сопровождается меньшей степенью кумуляции липидов, что гистологически проявляется мелкокапельной дистрофией в перипортальных (Фиг. 1D) и центролобулярных зонах (Фиг. 2D). Так, медиана площади жировых включений в перипортальной зоне в характеризуется в 2 раза меньшими значениями по сравнению с группой животных на высокожировом высокоуглеводном рационе, составляя 46 (23-103) мкм² (p<0,001). Также отмечается уменьшение площади жировых капель в центролобулярной зоне на 23% (p<0,001) относительно соответствующих значений в группе животных на высокожировом высокоуглеводном рационе, не принимающих предлагаемое средство, составляя 68(44-111) мкм². Также отмечается увеличение количества двуядерных клеток. При этом размер ядер центральных и периферических гепатоцитов превышает соответствующие значения в группе животных с алиментарной нагрузкой, не принимающих предлагаемое средство, на 6% (p=0,006) и 18% (p<0,001), составляя 67 (56-77) мкм² и 73 (62-84) мкм² соответственно. Гистологически описываемое улучшение относительно модельной группы животных с крупнокапельным жировым стеатозом на фоне приема предлагаемого средства отмечалось у 90% животных.The use of the proposed agent on the background of a high-fat, high-carb diet is accompanied by a lower degree of lipid accumulation, which is histologically manifested by small-drop dystrophy in the periportal (Fig. 1D) and centrolobular zones (Fig. 2D). Thus, the median of the area of fat inclusions in the periportal zone is characterized by 2 times lower values compared to the group of animals on a high-fat high-carb diet, amounting to 46 (23-103) μm ² (p <0.001). There is also a decrease in the area of fat droplets in the centrolobular zone by 23% (p <0.001) relative to the corresponding values in the group of animals on a high-fat, high-carb diet that does not accept the proposed drug, amounting to 68 (44-111) μm ² . An increase in the number of binuclear cells is also noted. The size of the nuclei of the central and peripheral hepatocytes exceeds the corresponding values in the group of animals with nutritional load, not taking the proposed tool, by 6% (p = 0.006) and 18% (p <0.001), amounting to 67 (56-77) μm ² and 73 (62-84) μm ^2, respectively. The histologically described improvement with respect to the model group of animals with large droplet fat steatosis while taking the proposed drug was observed in 90% of the animals.

Таким образом, употребление предлагаемого средства предотвращало развитие выраженного диета-индуцированного стеатоза и сопровождалось уменьшением количества и площади поперечного сечения жировых включений в центролобулярной и перипортальной зонах, а также ассоциировалось с увеличением площади ядер гепатоцитов центролобулярной и перипортальной зон.Thus, the use of the proposed agent prevented the development of pronounced diet-induced steatosis and was accompanied by a decrease in the number and cross-sectional area of fatty inclusions in the centrolobular and periportal zones, and was also associated with an increase in the area of hepatocyte nuclei in the central and lateral zones.

Средство по настоящему изобретению может быть использовано в исходном виде или же введено в композицию, включающую в себя фармацевтически приемлемый носитель после предварительной концентрации или высушивания. Под термином "фармацевтически приемлемый носитель" понимается носитель, не вызывающий каких-либо неблагоприятных эффектов у пациентов на фоне его введения.The agent of the present invention may be used as it is or may be formulated into a composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier after preconcentration or drying. The term "pharmaceutically acceptable carrier" means a carrier that does not cause any adverse effects in patients against the background of its administration.

Средство по настоящему изобретению может быть включено в состав различных фармацевтических композиций. Фармацевтическая композиция заявляемого средства может быть составлена в виде множества форм, включая жидкую, гелеобразную, капсулированную или таблетированную в случае выпаривания и концентрации. Фармацевтическая композиция заявляемого средства разработана для введения перорально.The agent of the present invention may be included in various pharmaceutical compositions. The pharmaceutical composition of the inventive agent can be formulated in a variety of forms, including liquid, gel, capsule or tablet in case of evaporation and concentration. The pharmaceutical composition of the inventive agent is formulated for oral administration.

Таким образом, приведенные выше данные свидетельствуют о возможности использования водного извлечения листьев подорожника наибольшего (Plantago maxima Juss. et Jacq), в том числе в составе композиций, для лечения и профилактики неалкогольной жировой болезни печени.Thus, the above data indicate the possibility of using water extraction of the greatest plantain leaves (Plantago maxima Juss. Et Jacq), including in the compositions, for the treatment and prevention of non-alcoholic fatty liver disease.

Claims

1. The treatment and prevention of non-alcoholic fatty liver disease based on the aqueous extraction of the leaves of the greatest plantain (Plantago maxima Juss. Et Jacq).

2. The tool according to p. 1, characterized in that it contains a pharmaceutically acceptable carrier.

3. The tool according to p. 1, characterized in that it is made in the form of a solution for oral administration, syrup, gel, encapsulated or tablet form.