RU2637937C2 - Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот - Google Patents
Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот Download PDFInfo
- Publication number
- RU2637937C2 RU2637937C2 RU2014118123A RU2014118123A RU2637937C2 RU 2637937 C2 RU2637937 C2 RU 2637937C2 RU 2014118123 A RU2014118123 A RU 2014118123A RU 2014118123 A RU2014118123 A RU 2014118123A RU 2637937 C2 RU2637937 C2 RU 2637937C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- 2ohoa
- enzyme
- cancer
- enantiomer
- activity
- Prior art date
Links
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 title description 34
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 title description 34
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 title description 34
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 title description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 70
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims abstract description 55
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 52
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 15
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 15
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 14
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 12
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 11
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 10
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims description 8
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 claims description 8
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims description 8
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims description 7
- 230000006439 vascular pathology Effects 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 6
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 121
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 99
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 94
- 102000005993 Sphingomyelin synthase Human genes 0.000 description 74
- 108020003486 sphingomyelin synthase Proteins 0.000 description 74
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 73
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 72
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 57
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 57
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 57
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 55
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 39
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 36
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 33
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 32
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 29
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 21
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 12
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 12
- 238000011161 development Methods 0.000 description 12
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 12
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 12
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 12
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 11
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 11
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 11
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 11
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 10
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 10
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 10
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 9
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 9
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 9
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 9
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 101710174798 Lysenin Proteins 0.000 description 8
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 8
- -1 for example Chemical class 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 8
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 8
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 8
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 7
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 7
- 102000015785 Serine C-Palmitoyltransferase Human genes 0.000 description 7
- 108010024814 Serine C-palmitoyltransferase Proteins 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 7
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 7
- JBSOOFITVPOOSY-KTKRTIGZSA-N 2-hydroxyoleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCC(O)C(O)=O JBSOOFITVPOOSY-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 6
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 6
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 6
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 5
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 5
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 5
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 5
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 5
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 5
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 5
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 4
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 4
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 4
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 3
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- OPBQGEUEOCKQDP-QNEBEIHSSA-N (6z,9z,12z)-2-hydroxyoctadeca-6,9,12-trienoic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)C(O)=O OPBQGEUEOCKQDP-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 2
- JQXGCBKGIBTCHY-PDBXOOCHSA-N 2-HoTrE Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(O)C(O)=O JQXGCBKGIBTCHY-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- AFDSETGKYZMEEA-HZJYTTRNSA-N 2-hydroxylinoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCC(O)C(O)=O AFDSETGKYZMEEA-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 2
- KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyoctadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940125664 ABTL0812 Drugs 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087894 Fatty acid desaturases Proteins 0.000 description 2
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 2
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 2
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- 102100028897 Stearoyl-CoA desaturase Human genes 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940053200 antiepileptics fatty acid derivative Drugs 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000019439 energy homeostasis Effects 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000010666 regulation of catalytic activity Effects 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YJFZUQCTMYDSCN-DOFZRALJSA-N (5z,8z,11z,14z)-2-hydroxyicosa-5,8,11,14-tetraenoic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)C(O)=O YJFZUQCTMYDSCN-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- LMKIIOSMODSXGM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxydocosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=C(O)C(O)=O LMKIIOSMODSXGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKOQIEFWZHFFQS-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexadec-2-enoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC=C(O)C(O)=O HKOQIEFWZHFFQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGDOCGARYFJEEV-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyicosa-2,4,6,8,10-pentaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=C(O)C(O)=O WGDOCGARYFJEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPUHAXBCXWSQMM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyoctadec-2-enoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC=C(O)C(O)=O JPUHAXBCXWSQMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFMJWERISIRPMN-FPLPWBNLSA-N 2-hydroxypalmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCC(O)C(O)=O MFMJWERISIRPMN-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 1
- TXQVZEVUMHJHJK-UHFFFAOYSA-N 2-methyloctadec-2-enoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC=C(C)C(O)=O TXQVZEVUMHJHJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- YNFOLLHVUPQJGW-QXMHVHEDSA-N CCCCCCCC/C=C\CCCCCCC(CC)(C(O)=O)O Chemical compound CCCCCCCC/C=C\CCCCCCC(CC)(C(O)=O)O YNFOLLHVUPQJGW-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 102000013444 Diacylglycerol Cholinephosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010051225 Diacylglycerol cholinephosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 101000876610 Dictyostelium discoideum Extracellular signal-regulated kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N Formic acid Chemical compound OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000034354 Gi proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006101 Gi proteins Proteins 0.000 description 1
- UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N Glycerol 1,2-diacetate Chemical compound CC(=O)OCC(CO)OC(C)=O UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 102000004232 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000744 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001661345 Moesziomyces antarcticus Species 0.000 description 1
- 206010027951 Mood swings Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003728 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000029 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000015537 Protein Kinase C-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010050276 Protein Kinase C-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001003495 Pseudomonas fluorescens Lipase Proteins 0.000 description 1
- 101001064559 Pseudomonas fluorescens Lipase Proteins 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006583 body weight regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000036978 cell physiology Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 125000001549 ceramide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 230000001278 effect on cholesterol Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- QOPCRGAQWHGTKN-QXMHVHEDSA-N ethyl (z)-2-hydroxyoctadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCC(O)C(=O)OCC QOPCRGAQWHGTKN-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000004030 farnesyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000004136 fatty acid synthesis Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000002686 geranylgeranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004322 lipid homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001767 medulla oblongata Anatomy 0.000 description 1
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000021281 monounsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 150000002943 palmitic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000005195 poor health Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000007398 protein translocation Effects 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029865 regulation of blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000012958 reprocessing Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- LKOVPWSSZFDYPG-WUKNDPDISA-N trans-octadec-2-enoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC\C=C\C(O)=O LKOVPWSSZFDYPG-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 235000010692 trans-unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 201000011531 vascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010055031 vascular neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
- A61K31/201—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having one or two double bonds, e.g. oleic, linoleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
- C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C51/487—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
- C07C51/493—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification whereby carboxylic acid esters are formed
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C59/40—Unsaturated compounds
- C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к энантиомеру [-] формулы: [-]NaOOC-HOCH-(CH2)6-(CH=CH-CH2)1-(CH2)6-CH3, а также к фармацевтической композиции для лечения патологии, вызванной аномально низким уровнем сфингомиелина, и/или аномально низким уровнем глиофибриллярного кислого белка (ГФКБ), и/или аномально высоким уровнем дигидрофолатредуктазы (ДГФР), содержащей терапевтически эффективное количество энантиомера следующей формулы: [-]HOOC-HOCH-(CH2)6-(CH=CH-CH2)1-(CH2)6-CH3 и/или по меньшей мере одной из его фармацевтически приемлемых солей и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение также относится к способу лечения патологий, общая этиология которых представляет собой аномально низкий уровень сфингомиелина, и/или аномально низкий уровень глиофибриллярного кислого белка (ГФКБ), и/или аномально высокий уровень дигидрофолатредуктазы (ДГФР), включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества энантиомера следующей формулы: [-]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 и/или по меньшей мере одной из его фармацевтически приемлемых солей или композиции, содержащей указанный энантиомер и/или по меньшей мере одну из его фармацевтически приемлемых солей. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 10 ил., 5 табл., 9 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к способу синтеза рацемических продуктов 2-гидроксипроизводных жирных кислот и разделения оптических изомеров [-] (который соответствует S-энантиомеру) и [+] (который соответствует R-энантиомеру), самим выделенным энантиомерам, содержащих их фармацевтическим композициям и применению указанных соединений в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний, общая этиология которых основана на изменениях (независимо от их природы) липидов клеточной мембраны, таких как, например, изменения уровня, состава или структуры указанных липидов, а также для лечения заболеваний, при которых регулирование состава и структуры липидов в мембране может вызвать ремиссию патологического состояния. Терапевтический эффект достигается предпочтительно посредством регулирования (активации или ингибирования) активности фермента церамид : фосфохолинхолинфосфотрансферазы (также известного как сфингомиелинсинтаза, или ЕС 2.7.8.27 согласно номенклатуре ферментов IUBMB) или уровней продукта реакции, катализируемой указанным ферментом, - сфингомиелина (СМ). В результате активности указанного фермента, выработки СМ и накопления указанного продукта в мембране опухолевых клеток происходит повышение (вплоть до 600%) уровня глиофибриллярного кислого белка (ГФКБ) и снижение (вплоть до более чем на 90%) уровня фермента дигидрофолатредуктазы (ДГФР). Таким образом как ГФКБ, так и ДГФР могут быть применены для определения терапевтической эффективности лекарственных средств для лечения заболеваний, обусловленных активностью сфингомиелинсинтазы или самим СМ. Настоящее изобретение также относится к разработке набора для обнаружения указанных заболеваний.
Кроме того, и фермент ЕС 2.7.8.27, и сфингомиелин (СМ) могут быть применены в качестве молекулярных маркеров действия соединений согласно настоящему изобретению в отношении вышеупомянутых заболеваний. Таким образом, настоящее изобретение также включает способ in vitro диагностики/прогнозирования указанных заболеваний на основании активности оценки регуляции активности или уровня указанного фермента ЕС 2.7.8.27 и/или уровня СМ, ГФКБ или ДГФР, а также наборы, включающие специально разработанные средства для осуществления указанных диагностики/прогнозирования. Указанные способы и наборы будут основаны на определении изменений, вызванных лечением с применением молекул, упомянутых в настоящей заявке, или на возможности изменения вышеупомянутых химических соединений при применении указанных способов лечения.
Кроме того, фермент ЕС 2.7.8.27 и/или СМ могут быть применены в качестве терапевтических мишеней, на которые можно направить молекулы, которые способны обеспечивать измененное состояние и, таким образом, лечить такие патологические процессы, которые, возможно, уже развились или могут развиться в будущем в результате аномальной активности фермента ЕС 2.7.8.27 или аномального уровня СМ. Таким образом, как фермент ЕС 2.7.8.27, так и сам СМ могут быть применены в качестве основы для разработки способов скрининга (отбора) возможных соединений для получения молекул, которые подобно, например, энантиомерам [-] (также известному как S) и [+] (соответствующему форме R) 2-гидроксипроизводных жирных кислот согласно настоящему изобретению, способны регулировать активность фермента ЕС 2.7.8.27 и/или уровня СМ, оказывая терапевтический эффект.
Таким образом, благодаря широкому спектру применения настоящее изобретение может быть в целом отнесено к области медицины и фармации. Необходимо отметить, что регулирующие органы в области фармации требуют наличия способов или наборов для мониторинга эффективности соединения, обладающего определенной терапевтической активностью, поэтому не только описание указанных соединений, но и описание их синтеза, их терапевтических возможностей и их обнаружения следует рассматривать как части настоящего изобретения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Клеточные мембраны представляют собой структуры, которые определяют целостность клеток и органелл внутри них. Большинство биологических процессов происходят в клетках или рядом с ними. Липиды не только играют структурную роль, но также регулируют активность важных процессов. Более того, регуляция липидного состава мембраны также влияет на расположение или функционирование важных белков, участвующих в управлении клеточной физиологией, таких как G-белки или РКС ( с соавт., 1995; с соавт., 1997; Yang с соавт., 2005; с соавт., 2005). Указанные и другие исследования демонстрируют важность липидов для управления важными клеточными функциями. Действительно, многие заболевания людей, такие как (среди прочих) рак, сердечно-сосудистые заболевания, нейродегенеративные процессы, ожирение, нарушения обмена веществ, воспаление, инфекционные заболевания и аутоиммунные заболевания, связывают с изменениями уровней или состава липидов, присутствующих в биологических мембранах, что также доказывает, что положительные эффекты лечения с применением других жирных кислот, отличных от предложенных в настоящем изобретении и которые регулируют состав и структуру липидов мембран, могут быть применены для обеспечения ремиссии указанных заболеваний ( с соавт., 2006).
Липиды, которые мы принимаем с пищей, регулируют липидный состав клеточных мембран (Alemany с соавт., 2007). В то же время различные физиологические и патологические состояния могут изменять липиды, присутствующие в клеточных мембранах (Buda с соавт., 1994; с соавт., 2006). Изменения липидного состава мембран могут влиять на клеточную сигнализацию, вызывая развитие заболеваний или их ремиссию ( с соавт., 2006).
Различные исследования, проведенные в последние годы, свидетельствуют о том, что липиды в мембране играют намного более важную роль, чем предполагалось до настоящего времени ( с соавт., 2008). Одним из примеров указанной важной роли служат рыбы, которые живут в реках с различной температурой: их липиды подвергаются важным изменениям (касающимся количества и видов липидов в мембране) при падении температуры от 20°С (летом) до 4°С (зимой) (Buda с соавт., 1994). Указанные изменения позволяют поддерживать работоспособность самых разных видов клеток. На основании этого авторы настоящего изобретения могут утверждать, что мембранные липиды могут определять правильность или неправильность функционирования многочисленных механизмов клеточной сигнализации. Учитывая, что пораженный заболеванием организм болен, поскольку больны его клетки, изменения липидов мембран могут вызывать возникновение заболеваний. Аналогичным образом, терапевтические, нутрицевтические или косметические составы, которые ориентированы на регулирование уровней липидов мембран, могут предотвращать и вызывать ремиссию (излечение) патологических процессов. Кроме того, многочисленные исследования свидетельствуют о том, что потребление насыщенных и транс-мононенасыщенных жиров связано с ухудшением здоровья. Сосудистые заболевания и опухоли в числе прочих непосредственно связаны с указанным видом липидов (Stender с соавт., 2004). Указанное ухудшение состояния организма может выражаться в появлении указанных и других видов заболеваний.
Клеточные мембраны образуют селективный барьер, через который клетка обменивается метаболитами и информацией с другими клетками и с внешней средой. Однако мембраны обладают и другими важными функциями на клеточном уровне. С одной стороны, указанные мембраны выступают в качестве носителя для белков, участвующих в приеме и передаче сообщений, которые управляют важными органическими параметрами. Указанные сообщения с помощью многочисленных гормонов, нейромедиаторов, цитокинов, факторов роста и т.д. активируют мембранные белки, которые распространяют полученный сигнал внутрь клетки с помощью других белков, некоторые из которых также расположены в мембране. Учитывая, что (1) указанные системы функционируют как каскады усиления и что (2) мембранные липиды могут регулировать расположение и функционирование вышеуказанных белков, липидный состав мембран может оказывать значительное влияние на клеточные функции. Более конкретно, взаимодействие некоторых белков (известных как периферические белки, такие как G-белки, протеинкиназа С, белок Ras и т.д.) с клеточной мембраной зависит от липидного состава указанной мембраны ( с соавт., 2004; с соавт., 2008). С другой стороны, липидный состав клеточных мембран зависит от вида и количества принимаемых липидов (Perona с соавт., 2007). Отсюда может быть сделать вывод, что потребление липидов может регулировать липидный состав мембран, а это может в свою очередь регулировать взаимодействие (и, следовательно, активность) белков, важных для обеспечения клеточной сигнализации (Yang с соавт., 2005).
Тот факт, что мембранные липиды могут управлять клеточной сигнализацией, свидетельствует о том, что указанные липиды также могут регулировать физиологическое состояние клеток. Действительно, было описано как положительное, так и отрицательное влияние липидов на здоровье ( с соавт., 2006; с соавт., 2008). Предварительные исследования показали, что 2-гидроксиолеиновая кислота, которая представляет собой мононенасыщенную жирную кислоту, способна вызывать ремиссию некоторых патологических состояний, таких как избыточный вес, гипертония и рак (Alemany с соавт., 2004; с соавт., 2005; с соавт., 2008).
Сердечно-сосудистые заболевания часто связаны с гиперпролиферацией клеток, образующих сердечную и сосудистую ткань. Указанная гиперпролиферация сердечно-сосудистых клеток приводит к образованию отложений во внутреннем просвете сосудов и полостей сердечно-сосудистой системы, которые вызывают широкий диапазон заболеваний, таких как гипертония, артериосклероз, ишемическая болезнь, сердечные приступы и т.д. (Schwartz с соавт., 1985). Разработка лекарственного средства, которое позволяет предотвратить пролиферацию клеток, фактически была предложена для предотвращения и лечения сердечно-сосудистых заболеваний (Jackson с соавт., 1992).
Ожирение или избыточный вес являются результатом изменения баланса между поступлением энергии в организм и ее расходом, частично вследствие изменений механизмов, которые регулируют указанные процессы. С другой стороны, указанная патология характеризуется гиперплазией (увеличением числа клеток) или гипертрофией (увеличением их размера) клеток жировой ткани, то есть адипоцитов. Многие исследования свидетельствуют о том, что жирные кислоты как свободные радикалы или как часть других молекул могут влиять на ряд параметров, связанных с энергетическим гомеостазом, в том числе таких как масса жира в организме, метаболизм липидов, термогенез или потребление ( с соавт., 2008). В этом смысле модификация жирных кислот может представлять собой способ регулирования энергетического гомеостаза и, следовательно, массы тела. Действительно, настоящее изобретение демонстрирует, как низкие уровни СМ в клетках связаны с повышенной клеточной пролиферацией и что указанное изменение связано с патологическим состоянием клеток человека. Кроме того, регулирование фермента ЕС 2.7.8.27 с применением молекул, описанных в настоящем изобретении, может нормализовать уровни СМ в патологических клетках и таким образом способствовать ремиссии патофизиологических изменений, описанных в настоящей заявке. В случае метаболических патологий потребление липидов помимо ожирения также определяет возможность возникновения других патологических процессов, таких как гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия, диабет или метаболический синдром (Sloan с соавт., 2008).
Нейродегенеративные процессы приводят к возникновению ряда заболеваний с различными симптомами, но с общей особенностью, заключающейся в том, что указанные заболевания вызваны дегенерацией клеток центральной и/или периферической нервной системы. Некоторые из указанных нейродегенеративных процессов предполагают значительное снижение когнитивной способности пациентов, как в случае болезни Альцгеймера или старческого слабоумия. Другие нейродегенеративные процессы вызывают изменения двигательных способностей, как в случае болезни Паркинсона или различных видов склероза. Наконец, некоторые нейродегенеративные заболевания могут вызывать процессы, которые приводят к слепоте, проблемам со слухом, нарушению пространственной ориентации, перепадам настроения и т.д.
Одним из примеров хорошо охарактеризованного нейродегенеративного расстройства является болезнь Альцгеймера, в ходе которой наблюдается образование сенильных бляшек, состоящих из остатков неправильно переработанных мембранных белков (таких как β-амилоидный пептид), которые накапливаются на внешней поверхности клеток, и клубков нейрофиламентов тау-белка, которые появляются внутри клетки. Указанный процесс связан с изменениями метаболизма холестерина и возникающим в результате изменением уровней холестерина в клеточных мембранах (Sagin с соавт., 2008). Действительно, развитие указанного заболевания связано с другими заболеваниями, при которых были описаны изменения метаболизма липидов, в частности холестерина, как в случае сердечно-сосудистых заболеваний.
С другой стороны, склероз и другие нейродегенеративные процессы связаны с «демиелинизацией», конечным результатом которой является потеря липидов оболочкой нейрональных аксонов, что приводит к изменениям процесса распространения электрических сигналов, в котором задействованы указанные аксоны. Миелин представляет собой липидный слой вокруг аксонов многих нейронов и образован несколькими спиральными складками плазматической мембраны клеток глии (шванновских клеток). Исходя из всего вышеизложенного очевидно, что липиды играют очень важную роль в развитии нейродегенеративных заболеваний. Более того, было продемонстрировано, что неизмененные природные полиненасыщенные жирные кислоты оказывают умеренное профилактическое воздействие на развитие нейродегенеративных процессов (Lane с соавт., 2005).
Нарушения обмена веществ составляют группу патологий, характеризующихся накоплением или дефицитом некоторых молекул. Типичным примером является накопление холестерина и/или триглицеридов выше нормальных уровней. Повышение уровней холестерина и/или триглицеридов как на системном (например, повышение уровней в плазме), так и на клеточном (например, в клеточных мембранах) уровне, связано с изменениями клеточной сигнализации, которые приводят к функциональным нарушениям на нескольких уровнях, и которые обычно обусловлены отклонениями в активности некоторых ферментов или управлении указанными белками. Было обнаружено, что одними из основных метаболических патологий являются гиперхолестеринемия (высокий уровень холестерина) и гипертриглицеридемия (высокий уровень триглицеридов). Для указанных заболеваний характерны повышенные показатели заболеваемости, развития осложнений и смертности, поэтому их лечение является первоочередной задачей. Кроме того, принимаемые липиды могут обуславливать появление диабета (Sloan с соавт., 2008).
Защитная роль некоторых ненасыщенных жирных кислот в отношении некоторых заболеваний уже была описана различными исследователями. Таким образом, ненасыщенные жирные кислоты замедляют развитие рака и обеспечивают положительные эффекты, направленные против развития сердечно-сосудистых заболеваний, нейродегенеративных патологий, патологий обмена веществ, ожирения, воспаления и т.д. (Trombetta с соавт., 2007; Jung с соавт., 2008; Florent с соавт., 2006). Однако фармакологическая активность указанных соединений сильно ограничена вследствие быстрого метаболизма и короткого периода полураспада в крови. Следовательно, необходимо разработать ненасыщенные жирные кислоты, которые характеризуются более медленным метаболизмом, приводящим к увеличению количества указанных кислот в клеточной мембране по сравнению с ненасыщенными жирными кислотами, применяемыми до сих пор, и облегчают взаимодействие между периферическими белками при клеточной сигнализации. Молекулы, описанные в настоящей заявке, соответствуют структурным характеристикам, которые обуславливают положительное воздействие некоторых природных жирных кислот на здоровье, в сочетании с молекулярными модификациями, которые усиливают воздействие первоначальных молекул и, кроме того, предотвращают их быстрый метаболизм, причем обе эти характеристики являются существенными для определения их фармакологической активности.
Говоря подробнее о важности липидов в клеточной мембране, следует заметить, что сфинголипиды или сфингофосфолипиды представляют собой важный класс липидов клеточной мембраны и наиболее распространенный класс липидов в тканях более сложных организмов. Молекулы сфинголипидов проявляют амфипатические свойства, то есть как гидрофобные, так и гидрофильные свойства, которые позволяют указанным молекулам играть важную роль в образовании биологических мембран. Некоторые из глюкосфинголипидов находятся на поверхности красных кровяных телец и в других клетках, действуя в качестве антигенов и определяя группы крови.
Таким образом, сфинголипиды очень важны с биологической точки зрения ввиду той роли, которую они играют в клеточной сигнализации. Если быть точным, СМ представляет собой вид сфинголипида, который в большом количестве содержится в клеточной мембране всех организмов (Huitema с соавт., 2004). Указанный липид в основном находится во внешнем монослое плазматической мембраны, где выполняет основную функцию в образовании микродоменов, известных как липидные рафты, которые являются специализированными частями клеточной мембраны с важными ролями в клеточной сигнализации, так как белки, которые взаимодействуют друг с другом благодаря сближению, которое происходит в результате их соединения с липидами, сконцентрированы в указанных доменах (Simons у Toomre, 2000). Фермент ЕС 2.7.8.27 отвечает за синтез СМ посредством переноса фосфохолина к первичной гидроксильной группе церамида с получением СМ и 1,2-диацилглицерола (ДАГ). Указанный фермент занимает центральное место в метаболизме сфинголипидов и глицерофосфолипидов. ЕС 2.7.8.27 находится в плазматической мембране, в аппарате Гольджи, активность указанного фермента также зафиксирована в ядерной мембране и в хроматине (Albi с соавт., 1999). ЕС 2.7.8.27 также регулирует уровни церамидов и диацилглицерола (ДАГ), при этом обе указанные молекулы являются в свою очередь регуляторами программируемой гибели клеток посредством апоптоза и аутофагии (Jiang с соавт., 2011; Van Helvoort с соавт., 1994; Tafesse с соавт., 2006). Полярная «головка» СМ имеет очень большой размер и препятствует закреплению белков, подобных Ras, которые содержат разветвленные липиды (подобные изопренильному, фарнезильному или геранил геранильному фрагментам), и при этом способствует закреплению других белков с фрагментами насыщенных жирных кислот (подобных миристиновой или пальмитиновой кислотам).
Таким образом, принимая во внимание важность фермента ЕС 2.7.8.27 и СМ для правильного функционирования и структуры клеточной мембраны и зная о связи между структурными и функциональными изменениями липидов, расположенных в клеточной мембране, и возникновением различных заболеваний, таких как, например, рак, сердечно-сосудистые заболевания, ожирение, нейродегенеративные расстройства и нарушения обмена веществ, было бы очень важно обнаружить соединения, способные регулировать активность указанного фермента и, как следствие, уровень СМ, с тем чтобы иметь возможность обеспечить ремиссию патологий, происхождение которых обусловлено аномальной активностью фермента и/или изменением уровня СМ. Учитывая, что органы регулирования фармацевтического рынка, такие как Испанское фармацевтическое агентство, Европейское агентство лекарственных средств (ЕАЛС) и Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов, в настоящее время требуют наличия методик, позволяющих контролировать эффективность лекарственных средств, выявление молекул, на основании изменений экспрессии или активности (в числе прочих) которых можно было бы прогнозировать эффективность соединения, является желательным, чтобы гарантировать получение пациентами надлежащего лекарственного средства. Таким образом, изобретения, которые позволяют корректировать применение указанных способов лечения, могут считаться родственными изобретениями. Настоящее изобретение относится к синтезу ряда 2-гидроксипроизводных жирных кислот, разделению их рацемических форм и способам терапевтического применения указанных соединений. Кроме того, настоящее изобретение также включает описание клеток, на которые нацелена активность указанных соединений, активности указанных соединений и, кроме того, описание биомаркеров, которые позволяют определить эффективность указанных соединений, а также способ, применяемый для данной цели.
Более того, важно обнаружить соединения, которые могут регулировать активность других ферментов, участвующих в метаболизме липидов, например фермента серинпальмитоилтрансферазы (ЕС 2.3.1.50) или фермента стеароил-коА-десатуразы (ECD, ЕС 1.14.19.1), который отвечает за синтез олеиновой кислоты. Церамид, вырабатываемый вследствие активности ЕС 2.3.1.50, является липидной молекулой, представляющей большой биологический интерес. Важная роль, относящаяся к церамиду, заключается в его участии в индукции апоптоза, также известного как программируемая гибель клеток ( с соавт., 2010). Апоптоз представляет собой высокорегулируемый биологический процесс, функция которого заключается в уничтожении бесполезных клеток или клеток, которые представляют собой угрозу для здоровья организма. Таким образом, опухолевые клетки часто разрабатывают молекулярные механизмы избегания апоптоза ( с соавт., 2010).
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Краткое описание изобретения
Предпочтительно настоящее изобретение направлено на устранение изменений уровня СМ в клетках, в результате чего предложены соединения, которые могут инвертировать измененный уровень экспрессии фермента ЕС 2.7.8.27 посредством активации (в случае если фермент недостаточно экспрессирован или обладает пониженной активностью) или ингибирования (в случае если фермент сверхэкспрессирован или обладает повышенной активностью) с обеспечением таким образом регуляции уровня СМ, синтезируемого указанным ферментом, и ремиссии патологических процессов, вызванных дерегуляцией указанного фермента или аномальным уровнем СМ.
Таким образом, для достижения указанного результата в настоящем изобретении осуществляют способ, в котором молекулы синтезируют в их рацемической форме и далее выделяют [-]- и [+]-энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот, которые, как показано в приведенных ниже примерах, способны регулировать активность фермента ЕС 2.7.8.27 и, следовательно, уровень синтезируемого СМ. Указанные жирные кислоты характеризуются большим периодом полураспада в крови, чем природные жирные кислоты. Фактически настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат вышеуказанные энантиомеры, и к их применению в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний, общая этиология которых основана на изменениях (независимо от их происхождения) липидов клеточной мембраны, таких как, например, изменения уровня, состава или структуры указанных липидов, а также для лечения заболеваний, при которых регулирование структуры и состава липидов мембраны может вызвать ремиссию патологического состояния. Терапевтический эффект предпочтительно достигается посредством регулирования (активации или ингибирования) активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или уровня продукта реакции, катализируемой указанным ферментом, - СМ - или даже уровня ГФКБ и/или ДГФР.
Помимо регулирования фермента ЕС 2.7.8.27 настоящее изобретение демонстрирует, что соединение 2OHOA (2-гидроксиолеиновая кислота) регулирует активность других ферментов, участвующих в метаболизме липидов, например, в клетках U118. Так, например, был исследован фермент ЕС 2.3.1.50. В настоящем изобретении показано, что 2OHOA стимулирует активность ЕС 2.3.1.50 (Пример 8 и Фигура 9), вызывая программируемую гибель лейкозных клеток человека. С другой стороны, в мембранах клеток U118, подвергаемых лечению 2OHOA, было также обнаружено значительное снижение уровня олеиновой кислоты, что свидетельствует о том, что 2OHOA является мощным ингибитором фермента ЕС 1.14.19.1, отвечающего за синтез олеиновой кислоты из стеариновой кислоты (Пример 9 и Фигура 10). В связи с этим необходимо отметить, что как ЕС 2.7.8.27, так и ЕС 2.3.1.50 представляют собой ферменты, отвечающие за метаболизм сфинголипидов, которые связаны друг с другом тем, что принадлежат к метаболическому пути одного вида молекул. С другой стороны, фермент ЕС 1.14.19.1 представляет собой модификатор жирных кислот. Связь указанного фермента с двумя другими ферментами заключается в том, что сфинголипиды всегда содержат в своей структуре цепи жирных кислот. Поскольку каждая жирная кислота обеспечивает различные свойства сфинголипидов, то обстоятельство, что они могут быть модифицированы, влияет на их биологическую активность. Таким образом, можно констатировать, что три фермента, упомянутые в настоящем изобретении, тесно связаны друг с другом и, следовательно, это нормально, что всего лишь одна молекула может регулировать активность указанных трех ферментов.
В настоящем изобретении [-]-энантиомеры (также изомер S) и [+] (также изомер R) отличаются направлением отклонения поляризованного света. В случае если оптический изомер поворачивает поляризованный свет вправо (по часовой стрелке), его обозначают знаком [+] (указанный изомер представляет собой правовращающий изомер или правую форму). Однако в случае если оптический изомер поворачивает поляризованный свет влево (против часовой стрелки), его обозначают знаком [-] (указанный изомер представляет собой левовращающий изомер или левую форму).
Конкретно в данном случае настоящее изобретение демонстрирует, что [-]-энантиомер 2-гидроксипроизводных жирных кислот действует как активатор фермента ЕС 2.7.8.27, осуществляя положительное регулирование синтеза СМ, представляющего собой сфинголипид, который, как указано выше, является соединением, преобладающим в мембранах клеток человека и животных, и является незаменимым для формирования правильной структуры липидного бислоя и функционирования клетки. Таким образом, указанный [-]-энантиомер может быть применен для получения фармацевтической композиции, предназначенной для лечения таких патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях липидов, расположенных в клеточной мембране, таких как рак, ожирение, гипертония, гипертриглицеридемия, гиперхолестеринемия или диабет и т.д., обусловленных аномально низкой активностью указанного фермента ЕС 2.7.8.27. Кроме того, рацемическая форма представляет собой активатор указанного фермента, принимая во внимание тот факт, что активность изомера [-] (который представляет собой активное вещество) является преобладающей по сравнению с изомером [+] (который не вызывает ферментативную активность). В связи с этим полагают, что положительная активность рацемической формы обусловлена тем обстоятельством, что активация, которая вызывает синтез новых молекул СМ, является более сильной в отношении активности данного фермента, чем ингибирование, которое может «выключить» молекулы фермента, которые ранее не были активны. В любом случае сила активирующего воздействия рацемической формы меньше, чем сила активирующего воздействия [-]-энантиомера, что объясняет более низкую терапевтическую активность рацемической формы.
Как можно увидеть из примеров в настоящем изобретении, важным является тот факт, что [-]-энантиомер 2-гидроксипроизводных жирных кислот проявляет улучшенный терапевтический эффект по сравнению с рацематом (который содержит равные количества обоих энантиомеров). Более того, следует подчеркнуть, что [-]-энантиомер 2-гидроксипроизводных жирных кислот имеет более низкую токсичность и меньше побочных эффектов, чем рацемат и [+]-энантиомер (см. Таблицу 3, Пример 7).
Кроме того, настоящее изобретение также демонстрирует, что [+]-энантиомер 2-гидроксипроизводных жирных кислот действует как ингибитор фермента ЕС 2.7.8.27, осуществляя отрицательное регулирование синтеза СМ, и может быть применен в фундаментальном исследовании для изучения регуляции самого фермента ЕС 2.7.8.27 или для лечения заболеваний, характеризующихся аномально высокой активностью фермента ЕС 2.7.8.27 и/или аномально высоким уровнем СМ, таких как, например, муковисцидоз (Slomiany с соавт., 1982). С другой стороны, высокий уровень холестерина и триглицеридов связан с важными изменениями в сердечно-сосудистой системе. В связи с этим холестерин обычно связывается с СМ для образования высоко упорядоченных мембранных доменов, известных в научной литературе как «липидные рафты» или «Lo» (liquid ordered, то есть жидкая упорядоченная фаза). Увеличение количества холестерина способствует увеличению указанных липидных областей, которое вызывает изменения клеточной сигнализации, которые могут привести к различным сердечно-сосудистым и метаболических изменениям или заболеваниям. Таким образом, снижение уровня СМ в случае гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии может помочь снизить уровни холестерина и триглицеридов в плазме и мембранах. Соответственно, [+]-энантиомер играл бы защитную роль при нескольких видах нарушений, таких как гиперхолестеринемия и гипертриглицеридемия, поскольку указанный энантиомер вызывает снижение уровней указанных липидов в сыворотке крови, а также снижение уровня СМ, которое приводит к снижению плотности липидных рафтов в клетках.
Кроме того, учитывая, что фермент ЕС 2.7.8.27 отвечает за синтез СМ и, следовательно, за правильную структуру и функцию клеточной мембраны, как указанный фермент, так и сам СМ следует рассматривать в качестве молекулярных маркеров, применяемых для осуществления способа in vitro диагностики и/или прогнозирования заболеваний на основе изменений в клеточной мембране. Указанные изменения не происходят в естественных условиях, напротив, они вызваны активностью соединений, описанных в настоящем изобретении. Кроме того, было подтверждено, что соединения согласно настоящему изобретению также регулируют уровни белков ГФКБ и/или ДГФР. В результате настоящее изобретение также относится к способу/набору для осуществления диагностики или прогнозирования таких патологий, связанных с измененными уровнями белков ГФКБ и ДГФР по отношению к нормальным уровням. Указанный набор включает реагенты или средства, с помощью которых можно оценить активность фермента ЕС 2.7.8.27 и/или уровень СМ, ГФКБ или ДГФР и, соответственно, осуществить указанные диагностику/прогнозирование как способ мониторинга эффективности лечения пациентов.
В связи с этим указанный фермент ЕС 2.7.8.27 и/или продукт реакции, катализируемой указанным ферментом, представляющий собой СМ, можно рассматривать в качестве терапевтических мишеней, на которые можно направить молекулы, способные регулировать активность указанного фермента и/или уровень СМ и, таким образом вызывать ремиссию тех патологических процессов, которые могли развиться или могут начать развиться в будущем в результате изменений активности указанного фермента или уровня СМ, ГФКБ или ДГФР. Таким образом, например, [-]-энантиомер в настоящем изобретении приведен для иллюстрации возможного применения фермента ЕС 2.7.8.27 в качестве терапевтической мишени путем активации ферментативной функции указанного фермента в ходе патологических процессов, при которых указанная функция является недостаточной, с восстановлением таким образом нормального уровня СМ. С другой стороны, измерение активности фермента ЕС 2.7.8.27, и/или уровня СМ, и/или уровня ГФКБ, и/или уровня ДГФР также было бы подходящим для осуществления способов скрининга для отбора соединений-кандидатов для получения других молекул, которые подобно [-]- и [+]-энантиомерам согласно настоящему изобретению должны быть способны регулировать активность фермента ЕС 2.7.8.27, и/или уровень СМ, и/или уровень ГФКБ, и/или уровень ДГФР, а следовательно, способны вызывать ремиссию патологических процессов.
Следовательно, настоящее изобретение демонстрирует исключительную важность отбора соединений с особыми структурными характеристиками, таких как жирные кислоты с по меньшей мере одной двойной связью, общим количеством атомов углерода (С), равным или меньшим 20, и заместителем, представляющим собой радикал, в частности гидроксильный радикал (ОН) при атоме углерода в положении 2 (или атома углерода в α-положении).
Точнее, настоящее изобретение относится к соединениям, которые представляют собой [-]- и [+]-энантиомеры Формулы I:
где a, b и c независимо принимают значения от 0 до 6 с учетом того, что общее количество атомов углерода в молекуле ≤20.
Кроме того, установлено, что предпочтительная терапевтическая форма согласно настоящему изобретению представляет собой [-]-энантиомер (соответствующий пространственной конфигурации S) Формулы I, который, как показано, является наиболее эффективной формой при активации фермента ЕС 2.7.8.27, более эффективной, чем рацемическая форма и [+]-энантиомер (соответствующий пространственной конфигурации R) Формулы I, который, как показано, является ингибитором фермента ЕС 2.7.8.27.
В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение, в частности, относится к [-]- и [+]-энантиомерам Формулы I со следующими значениями a, b и с:
В особенно предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение, в частности, относится к [-]-энантиомеру формулы [-] НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3, для целей настоящего изобретения именуемому [-]2OHOA.
Другой особенно предпочтительный вариант реализации настоящего изобретения относится к [+]-энантиомеру формулы [+] НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3, для целей настоящего изобретения именуемому [+]2OHOA.
В качестве примера, заболевания, характеризующиеся недостаточной активностью фермента ЕС 2.7.8.27 и, следовательно, аномально низким уровнем СМ в клеточных мембранах, которые могли бы быть подвергнуты лечению с применением [-]-энантиомера согласно настоящему изобретению, включают:
- рак: рак предстательной железы, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, лейкоз, рак матки, рак толстой кишки, рак мозга, рак легких, злокачественную меланому и рак печени (см. Таблицу 2);
- сосудистые патологии: гипертонию, артериосклероз, кардиомиопатии, ангиогенез, гиперплазию сердца и т.д.;
- патологии обмена веществ: диабет, метаболический синдром или ожирение;
- другие патологии: поражения продолговатого мозга, болезнь Альцгеймера, склероз, целлюлит и т.д.
Таким образом, более конкретно первый вариант реализации настоящего изобретения относится к [-]- или [+]-энантиомеру соединения Формулы I и/или по меньшей мере одной из его фармацевтически приемлемых солей:
характеризующегося тем, что а, b и с независимо могут принимать значения от 0 до 6 с учетом того, что общее количество атомов углерода в молекуле ≤20. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения указанное соединение получается при выборе по меньшей мере одной из следующих комбинаций значений для а, b и c: а=6, b=1, и с=6; а=6, b=1 и с=4; а=6, b=2 и с=3; а=6, b=3 и с=0; у а=3, b=3 и с=3.
Кроме того, предпочтительный вариант реализации настоящего изобретения относится к соединениям формулы [+]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3. В качестве примера, заболевания, характеризующиеся избытком активности фермента ЕС 2.7.8.27 и, следовательно, аномально высоким уровнем СМ в клеточных мембранах, которые могли бы быть подвергнуты лечению или предотвращены с применением [+]-энантиомера согласно настоящему изобретению, представляют собой муковисцидоз, гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию.
Другой особенно предпочтительный вариант реализации настоящего изобретения относится к соединениям формулы [-]НООС-НОСН-(СН2)б-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3.
Второй вариант реализации настоящего изобретения относится к применению по меньшей мере одного из ранее упомянутых соединений для получения фармацевтической композиции для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых представляет собой структурные и/или функциональные изменения клеточной мембраны вследствие дерегуляции активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или уровня или концентрации СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР в клетках вообще и в мембранах в частности.
Более того, настоящее изобретение относится к по меньшей мере одному из вышеупомянутых соединений для применения в лечении и/или для предотвращения патологий, общая этиология которых представляет собой структурные и/или функциональные изменения клеточной мембраны вследствие дерегуляции активности фермента ЕС 2.7.8.27, уровня или концентрации СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР в клетках вообще и в мембранах в частности.
Настоящее изобретение относится еще и к самой фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одно из вышеупомянутых соединений и, необязательно, фармацевтически приемлемые носители. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены отдельно или приготовлены в виде фармацевтических композиций, которые объединяют со вспомогательными веществами, такими как, например: связывающие агенты, заполнители, разрыхлители, смазывающие вещества, покрытия, подсластители, ароматизаторы, красители, транспортеры и т.д., а также комбинации указанных веществ. В то же время соединения согласно настоящему изобретению могут входить в состав фармацевтических комбинаций в комбинации с другими активными ингредиентами.
При применения соединений согласно настоящему изобретению в качестве лекарственных средств их введение можно осуществлять в любой форме, например: энтерально (через пищеварительную систему), перорально (посредством пилюлей, капсул или сиропов), ректально (посредством клизм или суппозиториев), местно (посредством кремов или пластырей), путем ингаляции, путем парентеральной инъекции, путем внутривенной инъекции, путем внутримышечной инъекции или путем подкожной инъекции, в указанной выше форме или в любой другой фармацевтически приемлемой форме, такой как, например, метилы, этилы, фосфаты, другие радикалы в форме сложного эфира, простого эфира, алкила и т.д.
В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к применению соединения [-]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 для получения фармацевтической композиции для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие недостаточной активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или аномально низкого уровня СМ в клеточной мембране, аномально низкого уровня ГФКБ или аномально высокого уровня ДГФР; причем указанные патологии предпочтительно выбраны из рака, предпочтительно рака предстательной железы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, лейкоза, рака матки, рака толстой кишки, рака мозга, рака легких, злокачественной меланомы и рака печени; сосудистых патологий, предпочтительно гипертонии, артериосклероза, кардиомиопатий, ангиогенеза, гиперплазии сердца, или метаболических патологий, предпочтительно диабета, метаболического синдрома или ожирения.
Аналогичным образом настоящее изобретение относится к соединению [-]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 для применения для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие недостаточной активности фермента ЕС 2.7.8.27, аномально низкого уровня СМ в клеточной мембране, аномально низкого уровня ГФКБ или аномально высокого уровня ДГФР, причем указанные патологии предпочтительно выбраны из рака, предпочтительно рака предстательной железы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, лейкоза, рака матки, рака толстой кишки, рака мозга, рака легких, злокачественной меланомы и рака печени; сосудистых патологий, предпочтительно гипертонии, артериосклероза, кардиомиопатий, ангиогенеза, гиперплазии сердца, или метаболических патологий, предпочтительно диабета, метаболического синдрома или ожирения.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к применению соединения формулы [+]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 для получения фармацевтической композиции, предназначенной для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в функциональных и/или структурных изменениях клеточной мембраны вследствие избыточной активности фермента ЕС 2.7.8.27, аномально высокого уровня СМ в клеточной мембране, аномально высокого уровня ГФКБ или аномально низкого уровня ДГФР, причем указанная патология представляет собой, например, муковисцидоз, гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию.
Аналогичным образом настоящее изобретение относится к соединению формулы [+]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 для применения для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие избыточной активности фермента ЕС 2.7.8.27, аномально высокого уровня СМ в клеточной мембране, аномально высокого уровня ГФКБ или аномально низкого уровня ДГФР, причем указанная патология представляет собой, например, муковисцидоз, гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию.
Третий аспект настоящего изобретения относится к способу лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие дерегуляции активности фермента ЕС 2.7.8.27, уровня СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного/одной из ранее упомянутых соединений или композиций, которые содержат указанные соединения.
В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие недостаточной активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или аномально низкого уровня СМ в клеточной мембране, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения [-]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 или композиции, которая содержит указанное соединение. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения указанные патологии предпочтительно выбраны из рака, предпочтительно рака предстательной железы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, лейкоза, рака матки, рака толстой кишки, рака мозга, рака легких; злокачественной меланомы и рака печени; сосудистых патологий, предпочтительно гипертонии, артериосклероза, кардиомиопатий, ангиогенеза, гиперплазии сердца; или метаболических патологий, предпочтительно диабета, метаболического синдрома или ожирения.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны вследствие избыточной активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или аномально высокого уровня СМ в клеточной мембране, который включает введение терапевтически эффективного количества соединения [+]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3 или композиции, которая содержит указанное соединение. В предпочтительном варианте реализации патология представляет собой, например, муковисцидоз, гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию.
Для целей настоящего изобретения под «терапевтически эффективным количеством» понимают количество, которое вызывает ремиссию заболевания или предотвращает указанное заболевание, не демонстрируя вредных побочных эффектов. Под «терапевтически эффективным количеством» также понимают количество, которое при оказании значительного терапевтического эффекта имеет приемлемый уровень токсичности в случае, когда заболевание, подвергаемое лечению, является очень серьезным или смертельным.
Четвертый вариант реализации настоящего изобретения относится к способу in vitro отбора соединений-кандидатов, которые подходят для лечения и/или предотвращения патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях клеточной мембраны, который включает оценку изменений, обеспечиваемых в отношении активности фермента ЕС 2.7.8.27, уровня СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР в присутствии указанного соединения-кандидата. То есть настоящее изобретение включает применение фермента ЕС 2.7.8.27 или СМ, ГФКБ или ДГФР в качестве терапевтических мишеней, на которые должны быть направлены соединения с целью предотвращения и/или лечения описанных выше патологий, с целью разработки терапевтических средств, способных изменять активности или уровни вышеуказанных соединений (см., например, Фигуру 5).
Пятый вариант реализации настоящего изобретения относится к in vitro способу прогнозирования/диагностики патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях липидов, расположенных в клеточной мембране, который включает определение дерегуляции активности фермента ЕС 2.7.8.27 и/или наличия аномального уровня СМ, ГФКБ или ДГФР в клеточных мембранах или других частях клетки. Таким образом, настоящее изобретение включает применение фермента ЕС 2.7.8.27 или СМ, ГФКБ или ДГФР в качестве молекулярных маркеров для обеспечения прогнозирования и/или диагностики патологий, описанных выше. Важная роль СМ в отношении структуры и активности клеточной мембраны, а также важная роль фермента ЕС 2.7.8.27, отвечающего за выработку указанного липида, позволяет применять обнаружение концентрации/активности в клетках тканей, плазмы, спинномозговой жидкости, моче и/или других жидкостях организма средством для создания наборов для обнаружения, диагностики и мониторинга различных патологий, рассматриваемых в настоящем изобретении, таких как, например, рак, гипертония, ожирение и нарушения обмена веществ. В связи с этим не только как СМ, но и фермент ЕС 2.7.8.27, ДГФР и ГФКБ представляют собой биомаркеры для обнаружения заболеваний человека и, как отмечалось выше, являются терапевтическими мишенями для разработки новых способов лечения людей.
В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу in vitro прогнозирования/диагностики патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях липидов, расположенных в клеточной мембране, который включает определение недостаточной активности фермента ЕС 2.7.8.27, наличия аномально низкого уровня СМ в клеточной мембране, аномально низкого уровня ГФКБ или аномально высокого уровня ДГФР в клетке, при этом указанные патологии предпочтительно выбраны из рака, предпочтительно рака предстательной железы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, лейкоза, рака матки, рака толстой кишки, рака мозга, рака легких, злокачественной меланомы и рака печени; сосудистых патологий, предпочтительно гипертонии, артериосклероза, кардиомиопатий, сердечного толчка, ангиогенеза, гиперплазии сердца; или метаболических патологий, предпочтительно диабета, метаболического синдрома или ожирения.
В другом предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к in vitro способу прогнозирования/диагностики патологий, общая этиология которых заключается в структурных и/или функциональных изменениях липидов, расположенных в клеточной мембране, который включает определение избыточной активности фермента ЕС 2.7.8.27, наличия аномально высокого уровня СМ в клеточной мембране, аномально высокого уровня ГФКБ или аномально низкого уровня ДГФР, где указанная патология предпочтительно представляет собой муковисцидоз гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию.
Шестой вариант реализации настоящего изобретения относится к наборам для применения в способе прогнозирования/диагностики, описанного выше, который включает подходящие средства для определения активности фермента ЕС 2.7.8.27, уровня СМ в клеточной мембране, уровня/активности ГФКБ и/или уровня/активности ДГФР. Указанные подходящие средства включают методы ТСХ и ВЭТСХ, газовую хроматографию, анализ изображений, абсорбционную или флуоресцентную спектроскопию, оптическую флуоресцентную микроскопию, конфокальную микроскопию, иммуноблоттинг, иммуноцитохимию, твердофазный ИФА или аналогичные методы (РИА, дот/слот-блоттинг, ФИА и т.д.).
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения набор характеризуется тем, что прогнозирование/диагностику осуществляют путем прямого количественного определения уровня сфингомиелина и/или косвенного количественного определения уровня указанного соединения с помощью его предшественников (например, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина, церамида и т.д.) или его производных (например, сфинголипидов). Предпочтительно указанный предшественник представляет собой церамид, производное представляет собой NBD-Cer или NBD-SM, а косвенное измерение производят с помощью лизенина.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу синтеза рацемических соединений и выделения и очистки энантиомеров молекул согласно настоящему изобретению, который включает следующие этапы:
1. Гидроксилирование в кислой среде ненасыщенной жирной кислоты для получения рацемического продукта.
2. Очистка посредством перекристаллизации и осаждения рацемической 2-гидроксилированной жирной кислоты в форме натриевой соли.
3. Этерификация рацемической смеси 2-гидроксилированной жирной кислоты в форме ее натриевой соли с применением раствора серной кислоты в этаноле, предпочтительно в концентрации 10%.
4. Энантиоселективный гидролиз сложного эфира, катализируемый липазой pseudomonas fluorescens (Amane Lipase, cas #9001-62-1) при 25°C.
5. Мониторинг хода реакции посредством жидкостной хроматографии.
6. Гидролиз смеси с применением разбавленной HCl до pH менее 2.
7. Экстракция продуктов метил-трет-бутиловым эфиром (МТБЭ) и промывка органической фазы.
8. Удаление растворителя в вакууме с получением исходного материала со смесью кислоты и сложного эфира.
9. Разделение кислоты и сложного эфира посредством кристаллизации кислоты.
10. Возвращение на этап 1 в случае кислоты и на этап 2 в случае сложного эфира для начала повторной обработки каждой выделенной фракции (кислоты и сложного эфира) до достижения желаемой энантиометрической чистоты (энантиомерный избыток 95%, который составляет 97,5% желаемого энантиомера и 2,5% нежелательного энантиомера).
Разделение и выделение двух энантиомеров 2OHOA на сегодняшний день неизвестно. Из-за технической трудности выделения конкретно [-]-энантиомера указанное выделение невозможно было осуществить до настоящего времени.
Настоящее изобретение также относится к способу in vitro мониторинга клеточных изменений, произведенных в клетках, пораженных болезнью, посредством воздействия соединений согласно настоящему изобретению или других соединений, которые действуют на тот же клеточный процесс или на клеточные процессы, связанные с указанным процессом, производя лечение или улучшение состояния пораженных клеток у пациента. Другими словами, настоящее изобретение включает применение фермента ЕС 2.7.8.27 или СМ, ГФКБ или ДГФР в качестве молекулярных маркеров, изменения которых, вызванные лечением с применением молекул согласно настоящему изобретению, позволяют узнать, вызывается ли у указанного пациента ответ на лечение, и, следовательно, определить эффективность лечения и время, в течение которого его следует осуществлять. Указанные способы также могут позволить прогнозировать, имеет ли пациент возможность отвечать на лечение с применением молекул согласно настоящему изобретению, таким образом, они могут быть применены для осуществления диагностики и/или прогнозирования вышеупомянутых патологий. Учитывая, что изменение состава мембраны, а конкретно уровня СМ, вызывает изменения уровней белков ГФКБ и ДГФР, предпочтительный аспект настоящего изобретения относится к способу, который позволяет отслеживать изменения, вызванные молекулами согласно настоящему изобретению или другими молекулами, которые оказывают аналогичное действие на патологические клетки. Таким образом, применение СМ, фермента ЕС 2.7.8.27, ГФКБ и/или ДГФР обеспечивает возможность того, что проводимая терапия может изменить уровни или активности указанных соединений. Цель указанного определения состоит в том, чтобы (1) прогнозировать эффективность лечения, для того чтобы предотвратить появление потенциально нечувствительных пациентов в результате неэффективной терапии, и (2) узнать об изменениях состояния пациентов, для того чтобы подтвердить, что он или она отвечает на терапию, и знать, каковы доставляемые дозы в зависимости от стадии лечения, а также какова продолжительность указанных стадий и самого лечения в целом. Поскольку указанные аспекты имеют крайне важное значение для недопущения ненужных фармацевтических расходов и для способности применить наиболее целесообразную терапию из всех возможных, крупные организации по регулированию в области фармации требуют наличия биомаркеров и диагностических систем, таких как те, которые описаны в настоящей заявке.
Аналогичным образом настоящее изобретение относится к способу лечения пациентов, страдающих от вышеупомянутых патологий, который включает определение наличия указанной дерегуляции фермента ЕС 2.7.8.27, уровня СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР, самих по себе и лечения пациента, у которого проявляется указанная дерегуляция, с применением соединений согласно настоящему изобретению.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способу выбора терапии для пациента с патологией, описанной в настоящем изобретении, который включает определение наличия указанной дерегуляции фермента ЕС 2.7.8.27, уровня СМ, уровня ГФКБ или уровня ДГФР и основанный на указанном определении выбор терапии на основе соединений согласно настоящему изобретению.
Следующие определения включены с целью иллюстрации настоящего изобретения:
- Высокая/низкая активность фермента ЕС 2.7.8.27: ферментативная активность, которая приводит к возникновению высокого или низкого уровней СМ в мембранах соответственно.
- Высокий/низкий уровень сфингомиелина: считается, что низкие уровни сфингомиелина представляют собой уровни, которые составляют менее 15% от общего содержания фосфолипидов в мембране. Считается, что высокие уровни сфингомиелина представляют собой уровни указанного фосфолипида, которые составляют 15% или более относительно общего содержания фосфолипидов.
- Высокий/низкий уровень ГФКБ: считается, что высокий уровень ГФКБ представляет собой уровень относительно общего содержания белка в миллиграммах, который вдвое или более чем вдвое (≥200%) превосходит нормальные уровни в клетках глии. Считается, что низкий уровень ГФКБ представляет собой уровень относительно общего содержания белка в миллиграммах, который подразумевает уровни вдвое меньше нормальных уровней в клетках глии или еще ниже (≤50%).
- Высокий/низкий уровень ДГФР: считается, что высокий уровень ДГФР представляет собой уровень относительно общего содержания белка в миллиграммах, который вдвое или более чем вдвое (≥200%) превосходит нормальные уровни в покоящихся клетках независимо от их вида. Считается, что низкий уровень ГФКБ представляет собой уровень относительно общего содержания белка в миллиграммах, который подразумевает уровни вдвое меньше нормальных уровней в покоящихся клетках независимо от их вида или еще ниже (≤50%).
Краткое описание чертежей
Фигура 1
А. Соединение 2OHOA вызывает значительное усиление синтеза СМ в различных клеточных линиях рака мозга человека (U118, SF767 и 1321N1), клетках рака легких человека (А549) и клетках лейкоза человека (Jurkat), но не в неопухолевых клетках (фибробластах легких человека MRC5). В то же время было изучено противоопухолевое воздействие на указанные и другие линии опухолевых клеток (см. Таблицу 2). Клетки подвергали воздействию носителя (вода с 5% этанола, контроль) или соединения 2OHOA в течение 24 часов в концентрации 200 мкМ. Значения на оси ординат представляют собой средние значения ±SEM (стандартные ошибки среднего при количестве экспериментов n=3-5) уровней СМ (процент от общего количества фосфолипидов), определенные с помощью хроматографических методов (ТСХ или ВЭ-ТСХ с последующим спектроскопическим определением и количественным определением посредством анализа изображений), в виде процента от общего количества липидов по сравнению с их уровнями в клетках, не подвергнутых воздействию лекарственного средства (контролем). Уровни СМ, измеренные в опухолевых клетках, были значительно ниже, чем указанные уровни в нормальных клетках, и только соединение 2OHOA вызывало значительные изменения в раковых клетках. Указанные результаты свидетельствуют о том, что фермент ЕС 2.7.8.27 представляет собой терапевтическую мишень при лечении рака и биомаркер для мониторинга указанной патологии и развития указанной патологии на протяжении проводимой терапии, а с другой стороны, что соединение 2OHOA является активатором указанного фермента и инвертирует низкие уровни СМ, демонстрируемые для раковых клеток. Наряду со способами измерения ферментативной активности и уровней СМ, описанными выше, были испытаны другие способы, которые приводят к очень похожим результатам, такие как газовая хроматография, конфокальная микроскопия, флуоресцентная спектроскопия и т.д.
B. На изображениях конфокальной микроскопии представлено свечение клеточного СМ посредством соединения с лизенином в клетках глиомы человека U118, подвергаемых обработке носителем (контроль) или 2OHOA (200 мкМ). В случае опухолевых клеток можно оценить, что количество СМ в мембране является недостаточным, и что способы лечения с применением 2OHOA вызывают значительное увеличение количества СМ в мембране, представляющее собой яркий показатель активации фермента ЕС 2.7.8.27. Кроме того, указанный эксперимент явным образом показывает, что повышение уровня клеточного СМ происходит в основном за счет накопления в плазматической мембране опухолевых клеток.
C. Верхняя группа изображений: полученное посредством иммуноцитохимических способов специфическое мечение СМ (левая колонка: лизенин, отслеживаемый по антителу, меченному флуорофором Alexa 488), ядерной ДНК с применением Hoechst 33258 (центральная колонка: Hoechst) или и того, и другой (правая колонка, наложение). Данные фигуры представляют собой части опухолей легких человека (клетки А549), образовавшихся у иммунодепрессированных мышей, подвергнутых воздействию носителя (контроль) или [-]2OHOA в количестве 600 мг/кг в сутки или 900 мг/кг в сутки (перорально, 50 суток). Указанные результаты четко показывают, что уровни СМ в указанных опухолях значительно повышаются после начала лечения с применением [-]2OHOA, но не повышаются в естественных условиях.
Центральная группа изображений: фрагмент, представляющий собой мечение СМ (слева), ядерной ДНК (в центре) или и того, и другой (справа) в клетке, находящейся в срезе опухоли, развившейся у мыши, зараженной раком легких человека (А549) и подвергнутой воздействию [-]2OHOA (600 мг/кг в сутки, перорально, 50 суток). Изображение демонстрирует потерю ядерной ДНК, представляющую собой яркий показатель начала клеточной гибели, параллельно с увеличением СМ.
Нижняя диаграмма: ось ординат отображает количественную оценку интенсивности флуоресценции (в условных единицах) посредством конфокальной микроскопии в частях опухолей, представленных на верхней группе изображений (среднее значение ± стандартная ошибка среднего), полученных у животных, подвергнутых воздействию носителя (контроль) или 2OHOA в количестве 600 мг/кг в сутки (Л600) или 900 мг/кг в сутки (Л900) в течение 50 суток. *** Р<0,001.
D. Определение уровней СМ посредством флуоресцентной спектроскопии.
Модельные мембраны (липосомы) с различным содержанием СМ сначала инкубировали в присутствии лизенина, а затем в присутствии антитела к лизенину, меченного флуорофором Alexa 488. Флуоресцирующие вещества, связывание с мембранами (уровни СМ) отделяли от несвязанных с мембранами путем центрифугирования при 80000×g в течение 30 минут. Пеллеты ресуспендировали в среде с детергентом (1% додецилсульфат натрия) и оценивали флуоресценцию количественно (условные единицы в осадке) в каждой пеллете (ордината) как функцию концентрации СМ (абсцисса). Для обнаружения данного липида может быть использован любой флуорофор, который связывается с антителом или лизенином.
Фигура 2. Соединение 2OHOA вызывает усиление синтеза СМ, зависящее от концентрации и продолжительности лечения. Значения на оси ординат представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего уровней СМ (процент от общего количества фосфолипидов) по сравнению с контролем, не подвергаемым воздействию лекарственного средства (n=3-5). Уровни СМ определяли посредством тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ, то есть высокоэффективной тонкослойной хроматографии), мониторинг которых проводили посредством анализа изображений или газовой хроматографии:
A. Раковые клетки глиомы человека U118 подвергали воздействию 2OHOA в концентрации 200 мкМ в течение различных периодов времени (2, 6, 12, 24, 48 и 72 часа). Белые столбики соответствуют клеткам, подвергнутым воздействию носителя (контролю).
B. Клетки U118 в течение 24 часов подвергали воздействию 2OHOA в различных концентрациях (25-400 мкМ).
Фигура 3. Соединение 2OHOA вызывает увеличение количества СМ в ядрах. Раковые клетки U118 в течение 24 часов подвергали воздействию носителя (контроль) или 2OHOA в концентрации 200 мкМ. Значения на оси ординат представляют собой средние значения ±ESM (n=3-5) уровней СМ по сравнению с контролем, не подвергаемым воздействию лекарственного средства (100%).
Фигура 4. Соединение 2OHOA действует непосредственно на фермент ЕС 2.7.8.27. Что касается диаграмм А, В, С, во всех случаях авторы настоящего изобретения инкубировали клетки или клеточные экстракты или средства инкубации с флуоресцентным субстратом указанного фермента NBD-Cer [(нитробензоксадиазолил)церамидом] в присутствии (черные столбики) или в отсутствие (контроль, белые столбики) 2OHOA. Затем подвергали липиды экстракции и определяли уровни образования NBD-SM посредством ВЭТСХ (ВЭ-ТСХ, высокоэффективной тонкослойной хроматографии). Значения представлены на оси ординат в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего (n=3-5).
A. In vivo эксперимент по определению активности фермента ЕС 2.7.8.27: клетки U118 с NBD-Cer инкубировали в течение 4 часов, а затем подвергали воздействию соединения 2OHOA (200 мкМ) в течение различных периодов времени (5, 15, 60 минут и 24 часов). Далее клетки гомогенизировали и измеряли метаболизм флуорофора NBD-Cer с получением NBD-SM.
B. In vitro эксперимент по определению активности фермента ЕС 2.7.8.27 в клеточных экстрактах, в ходе которого измеряли активность указанного фермента после разрушения клеток. Указанный эксперимент свидетельствует о том, что соединение 2OHOA способно активировать фермент ЕС 2.7.8.27 посредством прямого взаимодействия. В рамках указанных экспериментов гомогенизированные клетки инкубировали с соединением 2OHOA (200 мкМ) и NBD-Cer в течение 2 часов.
C. Воздействие соединения 2OHOA на активность изоформ 1 и 2 фермента ЕС 2.7.8.27. Активацию изоформ ЕС 2.7.8.27 (1) и ЕС 2.7.8.27 (2) определяли путем исследования их активности на поверхности клеток.
Фигура 5. Взаимосвязь между структурой и функцией при активации фермента ЕС 2.7.8.27. Увеличение количества СМ в клетках, U118 вызванное различными жирными кислотами (200 мкМ, 24 ч). Контроль: носитель; 18:1n-9 (октадеценовая кислота); 2Ме-18:1n-9 (2-метилоктадеценовая кислота); 2OH-16:1 (2-гидроксигексадеценовая кислота); 2ОН-18:0 (2-гидроксиоктадекановая кислота); 2OHOA (2OH-18:1n-9, 2-гидроксиоктадеценовая кислота); 2OH-18:2n-6 (2-гидроксилинолевая кислота); 2OH-18:3n-6 (2-гидрокси-γ-линоленовая кислота); 2OH-18:3n-3 (2-гидрокси-α-линоленовая кислота); 2ОН-20:4n-6 (2-гидроксиарахидоновая кислота); 2ОН-20:5n-3 (2-гидроксиэйкозапентаеновая кислота); 2OH-22:6n-3 (2-гидроксидокозагексаеновая кислота). Значения на оси ординат представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего (n=3-5) уровней СМ, определенные посредством тонкослойной хроматографии по сравнению с контролем, не подвергаемым воздействию лекарственного средства (100%). Жирные кислоты, содержащие 20 или более атомов углерода, не вызывают значительных изменений активности указанного фермента. Наличие других радикалов у атома углерода в положении 2 (таких как H или СН3) и отсутствие двойных связей в структуре жирной кислоты приводит к возникновению неактивных молекул.
Фигура 6.
А: Демонстрирует, что изменения композиции клеточной мембраны вызывают транслокацию белка Ras из мембраны в цитоплазму. Высокие уровни 2OHOA и СМ в мембране препятствуют закреплению белка Ras на мембране. На указанной фигуре представлены изображения клеток глиомы человека (SF767) полученные посредством оптической микроскопии с фазовым контрастом (ф.к.), и изображения, полученные посредством конфокальной микроскопии с применением антитела, специфичного к Ras, которое является флуоресцентно меченным, после подвергания воздействию носителя (контроль) или соединения 2OHOA в течение 10 минут (конфокальная микроскопия 1) и 24 часов (конфокальная микроскопия 2).
В: Транслокация белка Ras препятствует инактивации белка Raf, а также последующей активации белка MEK в сигнальном каскаде, что можно заметить по уменьшению количества обоих белков в состоянии фосфорилированной (активной) формы, определенного посредством иммуноблоттинга клеток U118, культивированных в отсутствие (контроль) или в присутствии 150, 200 или 250 мкМ 2OHOA.
С: Наконец, представлено значительное снижение состояния активности киназы белка MAP (ERK1 и ERK2), также определенного посредством иммуноблоттинга с применением специфических антител при концентрациях 2OHOA, указанных в B.
D: Состояние активности (уровни фосфорилированных форм) Akt и EGFR также снижается после инкубации с 250 мкМ 2OHOA.
На диаграммах B-D на оси ординат представлено процентное содержание фосфобелка по отношению к клеткам SF767, не подвергаемым воздействию лекарственного средства (контроль). На оси абсцисс представлена концентрация (микромолярная) соединения 2OHOA.
Е: Верхняя группа изображений: уровни экспрессии ДГФР в опухолях, полученных из клеток глиомы человека (SF767), имплантированных бесшерстным мышам, которые подвергали воздействию 2OHOA в течение 50 суток (600 мг/кг в сутки, перорально). На диаграмме слева представлены средние значения (n=4) флуоресценции, определенные посредством иммуноцитохимии с применением специфического антитела, меченного с применением флуоресценции, а фотографии справа представляют собой типичные изображения. Нижняя группа изображений: экспрессия ДГФР в клетках рака легких человека (А459). Все экспериментальные условия и детали указанной диаграммы аналогичны соответствующим условиям и деталям, относящимся к верхней группе изображений. Указанные результаты свидетельствуют о том, что уровни ДГФР изменяются в результате лечения с применения молекул согласно настоящему изобретению, так что активность или уровни указанного белка могут быть применены в качестве биомаркеров для мониторинга терапевтической эффективности соединений, описанных в настоящей заявке, или соединений, действующих аналогичным образом. Кроме того, можно сделать вывод, что опухоли, в которых уровни ДГФР являются высокими, могут хорошо отвечать на лечение с применением соединений согласно настоящему изобретению, так что указанный белок представляет собой хороший биомаркер для прогнозирования возможной эффективности энантиомеров, полученных из жирных кислот, и, соответственно, демонстрации эффективности лечения с применением указанных соединений.
F: Левая группа изображений: уровни ГФКБ в сыворотке животных с опухолью (глиомой) человека, определенные посредством иммуноблоттинга. Бесшерстных мышей инфицировали с применением клеток SF767 и подвергали воздействию носителя (глиома) или 2OHOA (леч., 600 мг/кг в сутки, 28 суток). Иммунологическую реактивность в отношении фрагментированного пептида из ГФКБ (см. фотографию) в сыворотке указанных животных, выраженную в процентах, сравнивали с иммунной активностью, обнаруженной у животных, не имеющих опухоли, и животных, не подвергаемых воздействию лекарственного средства (контроль). Правая группа изображений: проводили аналогичные эксперименты, но иммунологическую реактивность определяли посредством твердофазного ИФА в сыворотке животных, подвергнутых обработке 600 мг/кг 2OHOA (перорально) в течение 7 суток (7с600) или 28 суток (28с600). Во всех экспериментах применяли специфическое антитело против ГФКБ. Указанные результаты свидетельствуют о том, что уровни ГФКБ изменяются в результате лечения с применением молекул согласно настоящему изобретению, так что уровни указанного белка могут быть применены в качестве биомаркеров для контролирования терапевтической эффективности соединений, описанных в настоящей заявке, или соединений, действующих аналогичным образом. Кроме того, можно сделать вывод, что опухоли, в которых уровни ГФКБ являются низкими, могут иметь хороший ответ на лечение с применением соединений согласно настоящему изобретению, так что указанный белок представляет собой хороший биомаркер для прогнозирования возможной эффективности энантиомеров производных жирных кислот, и, соответственно, демонстрации эффективности лечения с применением указанных соединений. Для измерения ДГФР и ГФКБ были применены различные способы, которые включают электрофорез, иммуноблоттинг, твердофазный ИФА и аналогичные способы, такие как ОТ-ПЦР и т.д. Все указанные и другие аналогичные способы могут быть применены при определении уровней или активности ДГФР и ГФКБ.
Фигура 7. А) Специфичность действия [-]- и [+]-энантиомеров, рацемической смеси +/-2OHOA на активность фермента ЕС 2.7.8.27. На фигуре представлены уровни СМ (процент СМ от общего количества липидов) в клетках глиомы U118 после лечения с применением рацемической (+/-) смеси изомеров 2-гидроксиолеиновой кислоты, соединения [-]2OHOA и соединения [+]2OHOA. Клетки подвергали воздействию указанных соединений в концентрации 50 мкМ (50) и 100 мкМ (100) в течение 24 часов. Значения на оси ординат представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего (n=3-5) уровней СМ, определенные посредством тонкослойной хроматографии, в виде процентов от общего количества липидов по сравнению с уровнями в клетках, не подвергаемых воздействию лекарственных средств (контроль). Как можно оценить, [-]-энантиомер вызывает увеличение количества СМ, которое указывает на то, что указанный энантиомер является активатором фермента ЕС 2.7.8.27, и [+]-энантиомер вызывает снижение уровней СМ (особенно заметное при воздействии [+]2OHOA в концентрации 100 мкМ), которое указывает на то, что указанный энантиомер является ингибитором указанного фермента. В данном контексте и без влияния на уровни других соединений было доказано, что смеси, содержащие указанный энантиомер, вызывают активацию фермента ЕС 2.7.8.27, причем рацемическая смесь представляет собой частный случай молекулярной смеси, хотя положительный эффект также был доказан в случае смесей [-]-энантиомера и различных носителей или различных терапевтических соединений.
В) Влияние [+]-формы (также энантиомер R: черные столбцы), [-]-формы (также энантиомер S: белые столбцы) и рацемической формы (серые столбцы), на уровни СМ в мембранах клеток U118 (значения измеряли после инкубации с указанными соединениями в концентрации 100 мкМ в течение 24 ч). Примененные лекарственные средства представляли собой носитель (контроль), 2-гидроксипальмитолеиновую кислоту (2OH16:1), 2-гидроксиолеиновую кислоту (2OH18:1), 2-гидроксилинолевую кислоту (2OH18:2), 2-гидрокси-α-линоленовую кислоту (2OH18:3a) и 2-гидрокси-γ-линоленовую кислоту (2OH18:3g).
Фигура 8. На указанной фигуре представлено влияние рацемической смеси (+/-) кислоты 2OHOA и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA на различные патологические процессы у животных моделей.
A. Влияние на объем опухолей, полученных из клеток рака легких человека (А549): иммунодепрессированных мышей инфицировали клетками рака легких человека и 7 суток спустя (когда опухоли становились заметными) начинали лечение с применением носителя (контроль), рацемической смеси (+/-) 2OHOA и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA (600 мг/кг в сутки, 15 суток, перорально). Столбики соответствуют средним значениям из среднего ± стандартная ошибка среднего увеличения объема (мм3) опухолей (n=6). Лечение с применением рацемической смеси (+/-) 2OHOA вызывало значительное снижение (Р<0,01) по сравнению с контролем. Оптический изомер [-]2OHOA вызывал значительное снижение по сравнению со всеми остальными видами лекарственных средств (Р<0,01).
B. Влияние на артериальное давление: гипертензивных крыс (линии SHR) подвергали воздействию рацемической смеси (+/-) 2OHOA и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA (600 мг/кг каждые 12 ч, 15 суток, перорально). Все молекулы вызывали значительное понижение (Р<0,01) систолического артериального давления (мм рт.ст., ось ординат у) у крыс SHR, причем изомер [-]2OHOA являлся наиболее мощным средством, вызывавшим эффект понижения давления. Представлены средние значения систолического давления ± стандартная ошибка среднего (n=6).
C. Влияние на массу тела: крыс SHR подвергали воздействию рацемической смеси (+/-) 2OHOA и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA (600 мг/кг в сутки, 5 суток, перорально). Все молекулы вызывали значительное снижение (Р<0,01) массы тела животных, как на 3-и сутки лечения, причем изомер [-]2OHOA являлся наиболее мощным средством, вызывавшим снижение массы тела. Представлены средние значения массы тела ± стандартная ошибка среднего (ось абсцисс, n=6).
D. Влияние на уровни холестерина и триглицерида: крыс SHR подвергали воздействию рацемической смеси (+/-) 2OHOA и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA (600 мг/кг каждые 12 ч, 15 суток, перорально). Все молекулы вызывали значительное снижение (Р<0,01) уровней триглицерида (ТГ) и общего холестерина (ОХС), причем оптический изомер [-]2OHOA являлся наиболее мощным средством, вызывавшим снижение уровней указанных липидов. Представлены средние значения уровней липидов в сыворотке, выраженные в мг/дл, ± стандартная ошибка среднего (ось ординат; n=6).
E. Влияние на гликемию (уровни глюкозы в плазме): крыс SHR подвергали воздействию носителя (контроль), рацемической смеси 2OHOA (2OHOA) и оптических изомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA (600 мг/кг, 12 ч, 15 суток, перорально). Рацемическое соединение и изомер [-] 2OHOA вызывали значительное снижение (*Р<0,05; **Р<0,01) уровней глюкозы в плазме (мг/дл, ось ординат). [+]-энантиомер вызвал незначительное снижение в данных условиях. Представленные значения среднее ± стандартная ошибка среднего уровней липидов в сыворотке выраженные в мг/дл (ось ординат, n=6).
Фигура 9. Регулирование активности фермента 2.3.1.50. На оси ординат (y) представлен уровень включения [3Н]пальмитата [(расп./мин)/мг белка] в различные липидные фракции клеток U118, инкубированных в отсутствие (контроль, белые столбики) или в присутствии 2OHOA (черные столбики). Значительное повышение радиоактивности обнаруживали только во фракциях сфингомиелина (СМ) и церамида (Cer), что ясно указывает на селективную активацию ферментов ЕС 2.7.8.27 и 2.3.1.50.
Фигура 10. Регулирование активности фермента 1.14.19.1. На оси ординат (оси y) представлен уровень включения [3Н]олеата [(расп./мин)/мг белка] в клеточные мембраны U118, инкубированные в отсутствие (контроль, белый столбик) или в присутствии 2OHOA (черный столбик). Снижение включения меченного тритием олеата в липиды клеточных мембран, инкубированных в присутствии 2OHOA, свидетельствует об ингибировании фермента 1.14.19.1.
Подробное описание настоящего изобретения
Далее представлены примеры, которые иллюстрируют подробные и предпочтительные варианты реализации настоящего изобретения без ограничения объема его охраны настоящего изобретения.
Пример 1. Методика получения рацемических соединений и разделения [+]- и [-]-энантиомеров производных 2-гидроксилированных жирных кислот
Методика
Синтез рацемического соединения
Описанная далее методика, представляет собой подробности синтеза натриевых солей жирной 2-гидроксикислоты со степенью чистоты 99% посредством образования дианиона олеиновой кислоты путем реакции с ЛДА и последующего гидроксилирования с применением молекулярного кислорода; полученный таким образом необработанный материал обрабатывали NaOH с получением соли натрия и подвергали очистке посредством двух последовательных перекристаллизаций в МеОН/воде (избегая применения хроматографических колонок).
С помощью указанной методики можно получить от нескольких грамм до нескольких тонн конечного продукта. Продукт может иметь фармацевтическое качество чистоты и может быть произведен в условиях, соответствующих стандарту GMP («Надлежащей практике организации производства»), которые указывают в случае потребления продукта человеком.
Схема
На следующей схеме реакции показано этапа, а именно гидроксилирование и очистка:
причем R представляет собой -(СН2)a-(СН=СН-СН2)b-(СН2)c-СН3 при условии, что общее количество всех атомов углеродов в R равно или больше 12 или равно или меньше 18 (при общей длине молекулы от 14 до 20 атомов углерода).
Описание способа
Этап 1: гидроксилирование
В эмалированном реакторе вместимостью 100 л в инертной атмосфере раствор диизопропиламина (1,7 кг) в ТГФ (11 л) охлаждали до температуры ниже 5°С. К раствору порциями добавляли n-BuLi (23% в гексане) (4,6 кг), не позволяя температуре подниматься выше 17°С. После завершения добавления добавляли один эквивалент ДМПМ (1,0 кг) и раствор олеиновой кислоты (2,0 кг) в ТГФ (2.6 л), не позволяя температуре подниматься выше 20-25°С. Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 30 минут и снова охлаждали до 20°С. В этот момент подсоединяли баллон, содержавший O2, и производили барботирование реакционной смеси кислородом в течение приблизительно 45 минут со скоростью потока 25 л/мин. После завершения барботирования раствор охлаждали до 10°С и подвергали гидролизу с применением 3 M HCl (20 л) до pH=1, регулируя температуру, чтобы она не поднималась выше 40°С. Необработанный материал подвергали экстракции этилацетатом (6 л), промывали смесью 3 М HCl/рассол (1:1), бисульфитом натрия (9 л) и рассолом (до тех пор, пока pH не становился равным 3 или менее 3) и раствор концентрировали досуха в роторном испарителе. Получали примерно 2 кг необработанного материала со степенью чистоты ≥70%.
Этап 2: очистка
Необработанный материал растворяли в 7,2 л этанола при 40°С в реакторе вместимостью 10 л и обрабатывали водным раствором гидроксида натрия (134 г в 1,4 л воды), повышая температуру до 50°С, с получением однородного раствора. Указанный раствор охлаждали до 5°С в течение по меньшей мере 6 ч для осаждения соли натрия, которую отфильтровывали и промывали ацетоном. Твердое вещество дважды подвергали перекристаллизации в (10%) H2O/МеОН (0,5 л Н2О/5,0 л МеОН) при 50°С до полного завершения растворения и охлаждали до 0-5°С в течение минимум 6 ч. Конечный продукт отфильтровывали, промывали ацетоном и сушили в вакууме. Указанный продукт суспендировали в метаноле и получение соли завершали посредством добавления метоксида натрия. Производили полное осаждение продукта ацетоном (5 л) при охлаждении до 0-5°С в течение по меньшей мере 10 ч. Твердое вещество отфильтровывали, промывали ацетоном и сушили в вакууме.
Получение энантиомеров [+] (R) и [-] (S)
100 г натриевой соли 2OHOA помещали в реактор вместимостью 1 л и добавляли 500 мл серной кислоты в этаноле (10% по массе). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 часов и с помощью ТСХ устанавливали, что превращение завершалось. После завершения реакции реакционную смесь нейтрализовали с применением насыщенного раствора бикарбоната натрия и концентрировали в вакууме для удаления этанола. 250 мл AcOEt (этилацетата) добавляли к водной эмульсии таким образом, чтобы экстрагировать этиловый эфир 2-гидроксиолеиновой кислоты, который сушили над сульфатом и концентрировали досуха.
100 г этилового эфира 2-гидроксиолеиновой кислоты (рацемической смеси) растворяли в 50 мл МТБЭ в реакторе вместимостью 1 л при механическом перемешивании. К раствору добавляли 267 мл фосфатного буфера (1 М, pH 7) и 1,3 г липазы АК бактерий рода Pseudomonas. Эмульсию перемешивали при комнатной температуре (25°С) до достижения 50% превращения (ВЭЖХ, Luna С8, 5 мкм, МеОН/вода/НСООН). Реакцию останавливали посредством гидролиза с применением 3 н. HCl до достижения pH кислого раствора (менее 2), реакционную смесь подвергали экстракции с применением МТБЭ и промывали солевым раствором до того, пока pH водной фазы не составил 5 или более. Неочищенный продукт очищали посредством кристаллизации, чтобы разделить фракцию гидролизованной кислоты (60% энантиомерного избытка) и фракцию негидролизованного сложного эфира (75% энантиомерного избытка).
Для каждой фракции требовалось две повторных обработки, при которых повторяли процедуру этерификации/гидролиза фракций по отдельности до достижения энантиомерного избытка ≥95% для каждого энантиомера, который подвергали гидролизу и превращали в конечную натриевую соль. Конечный выход энантиомеров, полученных указанным способом, составлял 40-50% (20-25% каждого энантиомера).
Использованная методика
Условия, описанные для кинетического оптического расщепления, являются наилучшими условиями, полученными в процессе оптимизации после изучения двух липаз (липазы, полученной из Pseudomonas, и липазы из Candida Antarctica), растворителей (водного, органического или двухфазного), температур, ионной силы, встряхивания, pH и растворения. Также был определен наиболее подходящий способ мониторинга реакции гидролиза и очистки продуктов. Таким образом, способ получения энантиомеров гидроксилированных производных жирных кислот отличается от любого из способов, которые могут быть найдены в литературе, большинство из которых требует высокой степени растворения и очистки посредством хроматографии.
Масштабирование способа
Способ осуществляли в масштабе 1-150 г, получая аналогичные и воспроизводимые результаты. Энантиомеры могут быть разделены посредством кристаллизации, которая облегчает осуществление способа в килограммовом масштабе. Снижение выхода происходит вследствие воздействия и обработки. Однако новые примеси не образуются, и фазы после промывки и кристаллизации могут быть снова объединены и подвергнуты повторной обработке.
Пример 2. Опухолевые клетки имели более низкие уровни СМ в мембранах, которые повышались после лечения с применением молекул согласно настоящему изобретению
Уровни СМ, достигнутые в отсутствие (контроль) или в присутствии 200 мкМ [-]2OHOA, измеряли в мембранах нормальных клеток (MRC-5 и IMR90), а также в нескольких видах опухолевых клеток (см. Таблицу 2). Во всех случаях было обнаружено, что уровни СМ в мембранах опухолевых клеток составляли примерно половину или треть от уровней в нормальных клетках (Фигура 1). Таким образом, можно утверждать, что концентрация СМ представляет собой биомаркер, который служит признаком онкогенности клеток человека. С другой стороны, способы лечения с применением молекул согласно настоящему изобретению вызывают увеличение СМ в клетках опухолей, которое не происходит в естественных условиях. Таким образом, при обнаружении СМ с применением лизенина и последующим соединением с флуоресцирующим антителом и обнаружении флуоресценции посредством конфокальной микроскопии было выявлено большее количество меток (то есть большее количество СМ) в опухолях животных, подвергнутых лечению с применением молекул согласно настоящему изобретению (Фигура 1с). Аналогичным образом другие способы обнаружения на основе связывания лизенина с СМ мембраны и обнаружения посредством спектроскопических исследований раствора или посредством твердофазного ИФА демонстрировали, что мембраны клеток опухолей содержали более высокий уровень СМ только тогда, когда указанные клетки инкубировали в присутствии молекул согласно настоящему изобретению (Фигура 1). Например, спектрофотометрическое определение уровней СМ на основе флуоресценции раствора является очень простым, быстрым и эффективным способом анализа (Фигура 1D). Таким образом, в рамках настоящего изобретения создан способ диагностики для обнаружения описанных патологических процессов и патологий, при которых происходят изменения уровня СМ, позволяющие предсказать, может ли быть эффективным лечение с применением молекул согласно настоящему изобретению, а также для мониторинга эффективности терапии с применением молекул согласно настоящему изобретению и других молекул, проявляющих аналогичную активность. Исходя из указанной информации настоящее изобретение также включает диагностические наборы для изначальной оценки потенциальной возможности применения данной терапии и для мониторинга эффективности лечения указанных заболеваний с применением молекул согласно настоящему изобретению после его проведения.
(1) Антипролиферативный эффект: + ингибирование роста клеток, - отсутствие эффекта.
(2) Способ, применяемый для анализа: 1) ТСХ или ВЭТСХ, 2) газовая хроматография, 3) анализ изображений, 4) флуоресцентная спектроскопия, 5) конфокальная или флуоресцентная микроскопия.
Пример 3. 2OHOA повышает уровни СМ посредством активации фермента ЕС 2.7.8.27
2OHOA повышает уровни СМ в опухолевых клетках, подвергнутых воздействию, описанному выше. Увеличение количества СМ в опухолевых клетках, подвергнутых воздействию 2OHOA, зависело от продолжительности лечения и использованной для него концентрации (Фигура 2), что свидетельствует о специфичности указанной молекулы. СМ представляет собой мембранный липид, который препятствует связыванию некоторых молекул, участвующих в пролиферации клеток, таких как белок Ras. Таким образом, уровни Ras измеряли посредством конфокальной микроскопии с применением флуоресцентно меченного антитела, и можно было обнаружить, что метка переходила из мембраны (Фигура 6: 95-99% от общей флуоресценции обнаружено в мембране перед лечением) в цитоплазму (94-97% флуоресценции, обнаруженной внутри клетки после лечения с применением 2OHOA) клеток глиомы, рака легких и лейкоза человека. Транслокация Ras из мембраны в цитоплазму означает отсутствие эффективного взаимодействия между Ras и рецепторной тирозинкиназой (РТК) или между Ras и Raf, вследствие чего белки в МАР-киназном пути не активируются, опухолевые клетки перестают размножаться и начинается программируемая гибель клеток. Изменения физиологии клеток, вызванные молекулами согласно настоящему изобретению, в качестве промежуточного эффекта (до гибели раковых клеток или регулирования активности других клеток) вызывали резкое снижение уровней ДГФР и резкое повышение уровней ГФКБ (Фигура 6).
Другим эффектом, связанным со снижением пролиферации клеток, является повышение уровней СМ в ядрах. Способы лечения с применением 2OHOA вызывали повышение уровня СМ в ядрах (Фигура 3), которое свидетельствовало о том, что указанные способы вызывали ингибирование пролиферации клеток.
Пример 4. Регулирование фермента ЕС 2.7.8.27 зависит от молекулярной структуры жирной кислоты
Исследования in vitro с применением специфического флуоресцентного субстрата фермента ЕС 2.7.8.27, представлявшего собой NBD-Cer, демонстрировали, что 2OHOA взаимодействовала непосредственно с указанным ферментом и активация фермента была заметна с первых нескольких минут инкубации клеточных культур (Фигура 4А). Скорость указанного процесса явно указывает на непосредственное и эффективное взаимодействие между энантиомером 2OHOA и ферментом ЕС 2.7.8.27. Таким образом, настоящее изобретение относится к применению вышеупомянутых соединений в качестве активаторов ([-]-энантиомер) или ингибиторов ([+]-энантиомер), специфичных к ферменту ЕС 2.7.8.27.
С другой стороны, активация фермента ЕС 2.7.8.27 зависит от количества атомов углерода в жирной кислоте, так что жирные кислоты, содержащие более 20 атомов углерода, не вызывали значительных изменений активности указанного фермента (Фигура 5). Кроме того, другими необходимыми условиями активации фермент ЕС 2.7.8.27 являются присутствие группы ОН у атома углерода в положении 2 и одна или более двойных связей, тогда как присутствие других радикалов (таких как H или СН3) и отсутствие двойных связей в структуре жирной кислоты приводили к появлению неактивных молекул (Фигура 5). СМ имеет молекулярную структуру, которая определяет влияние на клеточную физиологию, и которой объясняется обеспечение ремиссии различных патологических процессов. Объемная полярная «головка» указанной молекулы препятствует закреплению Ras на мембране с помощью изопренильного фрагмента (который «предпочитает» участки мембраны с фосфолипидами с полярной «головкой» небольшого размера, подобными фосфатидилэтаноламину), что в свою очередь препятствует дальнейшей сигнализации с помощью белков в МАР-киназном каскаде. Инактивация указанного пути вызывала помимо других процессов остановку пролиферации опухолевых клеток (Фигура 8А и Таблица 2). Соединения согласно настоящему изобретению демонстрировали способность регулировать уровни СМ в клетках в положительном (повышение) или отрицательном (снижение) ключе. Учитывая, что состав мембраны имеет очень важное значение для правильной работы указанной мембраны, терапевтической активностью обладают не только активаторы (энантиомеры S или -), но и ингибиторы (энантиомеры R или +) фермента ЕС 2.7.8.27, как было продемонстрировано в настоящей заявке. Указанная активация основана на структурных особенностях и находится в зависимости от структурно-функциональных параметров любой другой молекулы, обладающей терапевтической активностью.
Пример 5. [-]-Изомеры жирных кислот С18, такие как [-]2OHOA, являются специфическими активаторами фермента ЕС 2.7.8.27
Относительная конфигурация гидроксильных групп у атомов углерода в положениях 1 и 2 (С1 и С2) приводит к образованию двух энантиомеров или оптических изомеров, которые обозначены как [-] (который соответствует конфигурации S) и [+] (который соответствует конфигурации R). С применением способа, описанного в настоящем изобретении (Пример 1), были синтезированы и выделены рацемическое соединение, которое обладало способностью как положительно, так и отрицательно регулировать фермент ЕС 2.7.8.27, а также энантомеры и оптические изомеры, была доказана и измерена их способность активировать фермент ЕС 2.7.8.27. На Фигуре 7А представлена активация указанного фермента, оцениваемая с помощью уровней СМ в мембранах клеток глиомы человека U118 через 24 часа инкубирования в присутствии 50 и 100 мкМ каждого изомера, а также рацемической смеси (которая содержит более или менее одинаковое количество обоих изомеров). Фигура 7А демонстрирует, как рацемическая смесь 2OHOA вызывала значительное повышение уровней СМ в мембранах клеток U118. В то же время, оптический изомер [-]2OHOA (соответствующий оптическому изомеру S) способен вызывать еще большее повышение уровней СМ. Таким образом, конкретно в случае указанного фермента присутствие смесей, содержащих некоторый процент [-]2OHOA (рацемическое соединение представляет собой особый случай) действует как специфический активатор ЕС 2.7.827. С другой стороны, оптический изомер [+]2OHOA не только не вызывал увеличение количества СМ, но также обеспечивал снижение уровня СМ в мембранах. Указанные данные свидетельствуют о том, что оптический изомер [-]2OHOA представляет собой специфический активатор фермента ЕС 2.7.8.27 и что оптический изомер [+]2OHOA (то есть R-энантиомер) представляет собой специфический ингибитор указанного фермента. Таким образом, настоящее изобретение защищает применение оптического изомера [-]2OHOA (S) в качестве активатора фермента ЕС 2.7.8.27 и оптического изомера [+]2OHOA (R) в качестве специфического ингибитора указанного фермента в способах терапевтического применения. Указанные результаты могут распространяться на все ненасыщенные жирные кислоты, содержащие 14 или более атомов углерода и 20 или менее атомов углерода, которые содержат одну или более двойных связей и гидроксильный радикал у атома углерода С2 (углерода в положении альфа) (Фигура 7В).
Пример 6. [-]-Изомеры жирных кислот С18, такие как [-]2OHOA, применяли в качестве терапевтических агентов для лечения заболеваний человека
Энантиомер [-]2OHOA и его производные, представленные в настоящем изобретении, имеют терапевтическое применение в различных областях, таких как лечение рака, ожирения, сердечно-сосудистых патологий, диабета, метаболического синдрома, повреждений спинного мозга, болезни Альцгеймера и других процессов (Фигуры 6 и 8; Таблицы 2-5). С другой стороны, энантиомер [+]2OHOA оказывал положительное влияние на уровни холестерина и триглицерида, поскольку указанный энантиомер вызывал значительное снижение уровней указанных липидов в плазме, высокий уровни которых считаются негативно влияющими на здоровье человека (Фигура 8). Таким образом, был изучен терапевтический эффект каждого изомера, а также рацемической смеси, на различных патологических моделях.
На Фигуре 8А представлено влияние пероральных способов лечения (15 суток, 600 мг/кг ежесуточно, n=6) с применением рацемической смеси 2OHOA и энантиомеров [-]2OHOA и [+]2OHOA на объем опухолей, образовавшихся из рака легких человека (клетки А549) у бесшерстных мышей. Как можно увидеть, влияние оптического изомера [-]2OHOA выше, чем рацемата. С другой стороны, после 15 суток лечения с применением оптического изомера [+]2OHOA не произошло значительного изменения объема опухолей. Указанные результаты свидетельствуют о том, что изомер [-]2OHOA является соединением, которое активирует фермент ЕС 2.7.8.27 и обладает терапевтической противоопухолевой активностью. С другой стороны, противоопухолевая активность указанных соединений была исследована на различных линиях клеток рака человека (см. Таблицы 2, 4 и 5). В связи с этим все [-]-энантиомеры согласно настоящему изобретению демонстрировали большую активность в лечении рака, чем рацемат и [+]-энантиомер, которая соответствовала значительно более низким значениям IC50 при ингибировании роста клеток рака легких человека (линия А549). Кроме того, была доказана активность указанных энантиомеров против очень большого числа видов рака человека различной природы, с учетом чего можно отметить, что [-]-энантиомеры 2-гидроксилированных жирных кислот обладают высокой активностью в лечении любого вида рака. Указанная активность, так или иначе, оказалась еще выше в случае солей (главным образом, натриевых солей указанных молекул), чем в случае жирной кислоты в свободном состоянии (результаты не показаны). В любом случае [-]-энантиомеры как в форме кислоты, так и в форме соли постоянно демонстрировали большую активность в ингибировании роста опухолей, чем любая из альтернативных молекулярных форм.
Кроме того, было изучено влияние вышеуказанных изомеров на артериальное давление, массу тела и уровень холестерина, триглицеридов и гликемии (глюкозы в плазме) у крыс SHR (Фигуры 8В, 8С и 8D и 8Е). Аналогично результатам, указанным выше, был отмечен больший терапевтический эффект в отношении регулирования кровяного давления, массы тела и гликемии в случае применения изомера [-]2OHOA, тогда как энантиомер [+]2OHOA оказывал больший терапевтический эффект в отношении лечения гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии. Таким образом, у животных, получавших лечение с применением изомера [-]2OHOA, было показано снижение систолического давления более чем на 60 мм рт.ст., тогда как у животных, подвергнутых воздействию изомера [+]2OHOA и рацемического продукта, был отмечен значительный, но меньший терапевтический эффект. Аналогично в течение периода между 1-ми и 5-ми сутками лечения крысы, подвергнутые воздействию рацемической смеси, теряли 11 граммов массы (примерно 3% от массы их тела), тогда как животные из группы, подвергнутой воздействию энантиомера [-]2OHOA, теряли 21 грамм, а животные из группы, подвергнутой воздействию энантиомера [+]2OHOA, теряли только 7 граммов массы. С другой стороны, больший эффект в отношении снижения уровней триглицерида (ТГ) и общего холестерина (ОХС) наблюдался для энантиомера [+]2OHOA (Фигура 8D). В связи с этим базальный уровень ТГ в плазме крыс SHR составлял 108 мг/дл и снижался до 56 мг/дл через 2 недели лечения с применением энантиомера [+]2OHOA. С другой стороны, лечение с применением энантиомера [+]2OHOA вызывало снижение уровня ТГ в плазме до 47 мг/дл, тогда как энантиомер [-]2OHOA вызывал лишь незначительное снижение до 81 мг/дл. Параллельно уровни ОХС снижались от 73 мг/дл до 43 мг/дл (рацемат), 36 мг/дл (энантиомер [+]2OHOA) и 59 мг/дл (энантиомер [-]2OHOA) соответственно. Наконец, лечение с применением энантиомеров согласно настоящему изобретению также вызывало значительное снижение уровней глюкозы в плазме (Фигура 8Е). В указанном случае как рацемат (2OHOA), так и энантиомер [-]2OHOA вызывали значительное снижение гликемии у крыс (Р<0,05 и Р<0,01 соответственно) (Фигура 8Е). Тем не менее, R-энантиомер ([+]2OHOA) вызывал небольшое снижение, которое не обладало статистической значимостью.
Вследствие всего вышеописанног, в настоящем изобретении доказано, что оптические изомеры [+] [-] ненасыщенных гидроксилированных жирных кислот, содержащих 18 атомов углерода, представляют собой молекулы, которые эффективны и обладают терапевтической активностью при лечении вышеупомянутых патологий. Во всех изученных случаях было продемонстрировано, что один и только один из энантиомеров имеет более высокую активность, чем другие молекулярные формы (статистическая значимость всегда Р<0,05). Таким образом, было продемонстрировано, что [-]-энантиомер является более эффективным при лечении рака, ожирения, диабета, гипертонии и т.д., тогда как [+]-энантиомер демонстрировал большую эффективность в борьбе с гиперхолестеринемией или гипертриглицеридемией. В указанных случаях было продемонстрировано, что рацемическое соединение является промежуточным состоянием, способным оказывать положительный эффект, подобный эффекту каждого из оптических изомеров, но с более низкой активностью вследствие более низкой концентрации активного энантиомера в каждом случае. Кроме того, применение «неправильного» энантиомера вызывало нежелательные побочные эффекты, которых избегали, применяя терапевтические дозы наиболее активного энантиомера (Таблица 3).
Пример 7. Эффективность, токсичность и побочные эффекты энантиомеров согласно настоящему изобретению
В указанном примере описано исследование, проведенное на иммунодепрессированных мышах, инфицированных клетками глиомы человека (SF767) и в течение 15 суток подвергаемых лечению (пероральному) с применением указанных доз лекарственного средства (Таблица 3). В указанной таблице представлены объем опухолей в конце лечения и симптомы, наблюдаемые в течение периода лечения. Следует еще раз отметить, что эффективность энантиомера [-]2OHOA была выше, чем рацемического соединения 2OHOA, и что энантиомер [+]2OHOA демонстрировал отсутствие активности после 15 суток лечения с применением указанных доз энантиомера.
С другой стороны, доза, которая вызывала уменьшение объема опухолей примерно на треть, не оказывала побочных эффектов на животных, подвергнутых воздействию [-]2OHOA (50 мг/кг), тогда как у животных, подвергнутых воздействию рацемического соединения 2OHOA в дозе, которая вызывала аналогичное уменьшение объема опухолей (600 мг/кг), наблюдались опасные побочные эффекты (Таблица 3). Кроме того, в дозе 200 мг/кг энантиомер [-]2OHOA вызывал уменьшение объема опухоли на 89% без наблюдаемых вредных побочных эффектов, тогда как рацемическое соединение вызывало уменьшение объема опухоли только на 23% и у некоторых животных в ответ на лечение наблюдались вредные побочные эффекты.
Из указанных результатов можно сделать вывод, что энантиомер [-]2OHOA обладает большей активностью и в максимальной терапевтической дозе не вызывает вредных побочных эффектов, тогда как рацемическое соединение оказывает меньшее воздействие и вызывает некоторые нежелательные побочные эффекты в терапевтических дозах. Различия в эффективности при лечении опухолевых процессов между энантиомером [-]2OHOA и рацематом могут означать различия в ожидаемой продолжительности жизни пациентов, составляющие месяцы или годы. Кроме того, различия в эффективности могут означать излечение пациента от конкретного вида рака или отсутствие выздоровления. С другой стороны, различия в токсичности при воздействии в терапевтических дозах могут означать более высокое качество жизни для пациентов, которые получают энантиомерную форму [-]2OHOA. Учитывая, что механизм активации соединения связан с активностью фермента ЕС 2.7.8.27 и [-]- и [+]-энантиомеры оказывают противоположное влияние на указанный фермент (Фигура 7), введение рацемического соединения предполагает присутствие молекулярной формы, которая вызывает эффект, противоположный эффекту активного компонента ([-]2OHOA), инвертируя часть терапевтического эффекта последнего.
1. Изменение размера опухоли после 15 суток лечения с применением (пероральным) лекарственного средства в указанной дозе по сравнению с животными, не подвергнутыми воздействию лекарственного средства (n=6 во всех группах). В указанном случае значение 100% было присвоено объему опухоли контрольных животных (подвергнутых воздействию носителя) по истечении 15 суток лечения.
2. Отмеченные симптомы и процент животных, у которых они наблюдались. Симптомы, относящиеся к поведению, включают снижение подвижности в течение по меньшей мере 30 минут, вставание шерсти дыбом, прыжки или пребывание в углу клетки.
В исследованиях, выполненных с применением рацемических и энантиомерных соединений согласно настоящему изобретению, было доказано, что во всех случаях [-]-энантиомер обладал более высокой противоопухолевой активностью в отношении ингибирования роста раковых клеток человека (А459, Таблица 4), чем другие молекулярные формы. В связи с этим концентрации, которые ингибировали рост клеток опухолей (IC50), в случае энантиомера S ([-]) были ниже во всех изученных линиях клеток опухолей (Таблица 5). С другой стороны, указанные соединения не вызывали гибель нормальных клеток (MRC-5, IMR90). Во всех случаях примененные молекулы находились в форме натриевой соли.
Пример 8. Регулирование активности фермента ЕС 2.3.1.50 посредством соединений согласно настоящему изобретению
Клетки глиомы человека U118 инкубировали в присутствии или в отсутствие (контроль) 2OHOA (200 мкМ, 24 ч), а затем инкубировали с [3Н]пальмитатом в течение 5 минут. После завершения указанных периодов инкубации клеточные липиды экстрагировали и разделяли посредством ТСХ. Полосы, соответствовавшие каждому экстрагированному виду липида, и количество включенного радиоактивного пальмитата измеряли посредством жидкостной сцинтилляции. Как можно оценить, происходило не только значительное включение во фракцию СМ (показатель активности фермента ЕС 2.7.8.27), но и во фракцию церамида, что свидетельствует об активности фермента ЕС 2.3.1.50 (серинпальмитоилтрансферазы). Таким образом, можно сделать вывод о том, что 2OHOA представляет собой специфический активатор фермента ЕС 2.3.1.50 (Фигура 9).
Пример 9. Регулирование активности фермента ЕС 1.14.19.1 посредством соединений согласно настоящему изобретению
Олеиновая кислота синтезируется из стеариновой кислоты благодаря активности фермента стеароил-СоА-десатуразы (ЕС 1.14.19.1). Указанный фермент играет крайне важную роль в метаболизме липидов, так как представляет собой ограничитель синтеза жирных кислот. Чтобы понять, происходило ли указанное уменьшение вследствие регулирования фермента ЕС 1.14.19.1, клетки U118 инкубировали в присутствии или в отсутствие 2OHOA (200 мкМ, 24 ч) и далее в присутствии [3Н]олеата (5 минут). Может быть подтверждено, что включение радиоактивной олеиновой кислоты в мембраны клеток U118, инкубированных в присутствии 2OHOA, было значительно меньшим, чем в контрольные клетки (Фигура 10). Указанные результаты свидетельствуют о том, что 2OHOA представляет собой мощный ингибитор фермента ЕС 1.14.19.1, регулирование которого, как предполагают, является важным для лечения различных патологий человека.
ИСТОЧНИКИ
1. Albi E. and M.V. Magni (1999). Sphingomyelin synthase in rat liver nuclear membrane and chromatin. FEBS Lett 460: 369-72.
2. Alemany R, S, Baamonde C, Benet M, O, PV. (2004) 2-hydroxyoleic acid: a new hypotensive molecule. Hypertension. 43: 249-54.
3. Alemany R, Perona JS, JM, Montero E, J, Brezan R, PV and Ruiz-Gutierrez V (2007) G protein-coupled receptor systems and their lipid environment in health disorders during aging. BBA Biomembr. 1768: 964-975.
4. Buda C, Dey I, Balogh N, Horvath LI, Maderspach K, Juhasz M, Yeo YK, Farkas T (1994) Structural order of membranes and composition of phospholipids in fish brain cells during thermal acclimatization. Proc. Natl. Acad. Sci USA 91: 8234-8238.
5. Escriba PV, Sastre M, Garcia-Sevilla JA. (1995) Disruption of cellular signaling pathways by daunomycin through destabilization of nonlamellar membrane structures. Proc Natl Acad Sci USA. 92: 7595-7599.
6. Escriba PV, Ozaita A, Ribas C, Miralles A, Fodor E, Farkas T, Garcia-Sevilla JA (1997) Role of lipid polymorphism in G protein-membrane interactions: nonlamellar-prone phospholipids and peripheral protein binding to membranes. Proc Natl Acad Sci USA. 94: 11375-11380.
7. PV (2006) Membrane-lipid therapy: a new approach in molecular medicine. Trends Mol. Med. 12: 34-43.
8. PV, JM, FM, Kinnunen PKJ, Vigh L, L, AM, Busquets X, I, G (2008) Membranes: A meeting point for lipids, proteins and therapies. J Cell. Mol. Med. 12: 829-875.
9. Florent S, Malaplate-Armand C, Youssef I, Kriem B, Koziel V, MC, Fifre A, Sponne I, Leininger-Muller B, Olivier JL, Pillot T, Oster T. (2006) Docosahexanoic acid prevents neuronal apoptosis inducced by soluble amyloid-beta oligomers. J Neurochem. 96: 385-95.
10. Huitema K., et al. (2004). Identification of a family of animal sphingomyelin synthases. EMBO J 23: 33-44.
11. Jackson CL, Schwartz SM (1992) Pharmacology of smooth muscle cell replication. Hypertension 20: 713-716.
12. Jiang Q, et al. (2011). Gamma-tocotrienol induces apoptosis and autophagy in prostate cancer cells by increasing intracellular dihydrosphingosine and dihydroceramide. Int J Cancer, doi: 10.1002/ijc.26054.
13. Jung UJ, Torrejon C, Tighe AP, Deckelbaum RJ. (2008). N-3 Fatty acids and cardiovascular disease mechanisms underlying beneficial effects. Am J Clin Nutr. 87: 2003S-2009S.
14. Lane RM, Farlow MR. (2005) Lipid homeostasis and apolipoprotein E in the development and progression of Alzheimer’s disease. J Lipid Res. 46: 949-968.
15. V, Gutierrez A, J, et al. Minerval induces apoptosis in Jurkat and other cancer cells. J. Cell Mol Med. 2010; 13: 1-12.
16. J, O, Casas J, F, Alemany R, Prades J, Nagy T, Baamonde C, Kasprzyk P, S, Saus C, PV. (2005) Membrane structure modulation, protein kinase С alpha activation, and anticancer activity of minerval. Mol Pharmacol 67: 531-40.
17. Perona JS, O, JM, Montero E, PV and Ruiz-Gutierrez EV (2007) Consumption of virgin olive oil influences membrane lipid composition and regulates intracellular signaling in elderly adults with type 2 diabetes mellitus. J. Gerontol A Biol Sci Med Sci 62: 256-263.
18. Sagin FG, Sozmen EY (2008) Lipids as key players in Alzheimer disease: alterations in metabolism and genetics. Curr Alzheimer Res 5: 4-14.
19. Simons K. and D. Toomre (2000). Lipid rafts and signal transduction. Nat Rev Mol Cell Biol 1: 31-9.
20. Sloan F.A., Bethel M.A, Ruiz D. Jr., Shea A.M & Feinglos M.N. The growing burden of diabetes mellitus in the US elderly population. Arch. Intern. Med. 168, 192-199 (2008).
21.Slomiany A, Murty VL, Aono M, Snyder СЕ, Herp A and Slomiany BL (1982) Lipid composition of tracheobronchial secretions from normal individuals and patients with cystic fibrosis. Biochim Biophys Acta. 10: 106-111 D.
22. Stender S, Dyerberg J (2004) Influence of trans fatty acids on health. Ann. Nutr. Metab. 48: 61-66.
23. Schwartz SM, Campbell GR, Campbell JH. (1985). Replication of smooth muscle cells in vascular disease. Ore Res 58: 427-444.
24. Tafesse F.G., P. Ternes, et al. (2006). The multigenic sphingomyelin synthase family. J Biol Chem 281: 29421-5.
25. Trombetta A, Maggiora M, Martinasso G, Cotogni P, Canuto RA, Muzio G. (2007). Arachidonic and docosahexanoic acids reduce the growth of A549 human lung tumor cells increasing lipid peroxidation and PPARs. Chem Biol Interact. 165: 239-50.
26. Van Helvoort A., W. van’t Hof, et al. (1994). Conversion of diacylglycerol to phosphatidylcholine on the basolateral surface of epithelial (Madin-Darby canine kidney) cells. Evidence for the reverse action of a sphingomyelin synthase. J Biol Chem 269: 1763-9.
27. O, Casas J, D, Nagy T, Borchert G, Martorell G and PV. (2004) The G betagamma dimer drives the interaction of heterotrimeric Gi proteins with nonlamellar membrane structures. J Biol Chem. 279: 36540-36545.
28. O, A, Alemany R, S, M, Quevedo J, Pereg V, F and PV. (2008) Structure-effect relation of C18 long-chain fatty acids in the reduction of body weight in rats. Int J Obes. 32: 464-473.
Claims (14)
1. Энантиомер [-] формулы:
[-]NaOOC-HOCH-(CH2)6-(CH=CH-CH2)1-(CH2)6-CH3.
2. Фармацевтическая композиция для лечения патологии, вызванной аномально низким уровнем сфингомиелина, и/или аномально низким уровнем глиофибриллярного кислого белка (ГФКБ), и/или аномально высоким уровнем дигидрофолатредуктазы (ДГФР), содержащая терапевтически эффективное количество энантиомера следующей формулы:
[-]HOOC-HOCH-(CH2)6-(CH=CH-CH2)1-(CH2)6-CH3
и/или по меньшей мере одной из его фармацевтически приемлемых солей и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.
3. Фармацевтическая композиция по п. 2, в которой указанная фармацевтически приемлемая соль представляет собой [-]NaOOC-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3.
4. Способ лечения патологий, общая этиология которых представляет собой аномально низкий уровень сфингомиелина, и/или аномально низкий уровень глиофибриллярного кислого белка (ГФКБ), и/или аномально высокий уровень дигидрофолатредуктазы (ДГФР), включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества энантиомера следующей формулы:
[-]НООС-НОСН-(СН2)6-(СН=СН-СН2)1-(СН2)6-СН3
и/или по меньшей мере одной из его фармацевтически приемлемых солей или композиции, содержащей указанный энантиомер и/или по меньшей мере одну из его фармацевтически приемлемых солей.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанная фармацевтически приемлемая соль представляет собой [-]NaOOC-HOCH-(CH2)6-(CH=CH-CH2)1-(CH2)6-CH3.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что подвергаемая лечению патология выбрана из группы, состоящей из рака, сосудистых патологий и метаболических патологий.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из рака печени, меланомы, рака предстательной железы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, лейкоза, рака матки, рака толстой кишки, рака мозга и рака легких.
8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что сосудистая патология выбрана из группы, состоящей из гипертонии, атеросклероза, кардиомиопатий, ангиогенеза и гиперплазии сердца.
9. Способ по п. 6, отличающийся тем, что метаболическая патология выбрана из группы, состоящей из диабета, метаболического синдрома и ожирения.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES201131622 | 2011-10-07 | ||
ES201131622A ES2401629B1 (es) | 2011-10-07 | 2011-10-07 | Enantiómeros de 2-hidroxiderivados de ácidos grasos y su uso como medicamentos. |
US201261610762P | 2012-03-14 | 2012-03-14 | |
US61/610,762 | 2012-03-14 | ||
PCT/ES2012/070697 WO2013050644A1 (es) | 2011-10-07 | 2012-10-08 | Enantiómeros de 2-hidroxiderivados de ácidos grasos |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017141446A Division RU2687967C2 (ru) | 2011-10-07 | 2012-10-08 | Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014118123A RU2014118123A (ru) | 2015-11-20 |
RU2637937C2 true RU2637937C2 (ru) | 2017-12-08 |
Family
ID=48043212
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014118123A RU2637937C2 (ru) | 2011-10-07 | 2012-10-08 | Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот |
RU2017141446A RU2687967C2 (ru) | 2011-10-07 | 2012-10-08 | Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017141446A RU2687967C2 (ru) | 2011-10-07 | 2012-10-08 | Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9359281B2 (ru) |
EP (2) | EP3287437B1 (ru) |
JP (1) | JP2014530806A (ru) |
CN (1) | CN104321300A (ru) |
DK (1) | DK2774910T3 (ru) |
ES (3) | ES2401629B1 (ru) |
HU (1) | HUE035430T2 (ru) |
IN (1) | IN2014CN03111A (ru) |
PL (1) | PL2774910T3 (ru) |
PT (1) | PT2774910T (ru) |
RU (2) | RU2637937C2 (ru) |
WO (1) | WO2013050644A1 (ru) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2345241B1 (es) * | 2009-03-16 | 2011-09-08 | Lipopharma Therapeutics | Uso de 2-hidroxiderivados de acidos grasos poliinsaturados como medicamentos. |
JP6348229B2 (ja) * | 2014-10-21 | 2018-06-27 | ユニバーシタット デ レス イレス バレアレス | ヒドロキシ−トリグリセリドの合成方法、および疾患の予防および処置のためのその使用 |
BR112019023944A2 (pt) * | 2017-05-16 | 2020-06-09 | Ability Pharmaceuticals S L | combinação farmacêutica para o tratamento de um câncer |
WO2019099664A1 (en) * | 2017-11-16 | 2019-05-23 | The Research Foundation For The State University Of New York | Use of 2-hydroxyoleic acid for the treatment of systemic lupus erythematosus and other immune pathologies |
CA3233141A1 (en) * | 2020-01-29 | 2021-08-05 | Universitat De Les Illes Balears | Alpha-hydroxylated fatty acids metabolites, medical uses of same and use as biomarkers |
ES2846824B2 (es) * | 2020-01-29 | 2022-01-19 | Univ Illes Balears | Profarmacos de acidos grasos poliinsaturados y usos medicos de los mismos |
ES2911474B2 (es) * | 2020-11-17 | 2023-02-06 | Univ Illes Balears | Profarmacos de acidos grasos monoinsaturados y sus metabolitos: usos medicos y como biomarcadores |
AU2021220258A1 (en) * | 2020-02-10 | 2022-06-30 | Ability Pharmaceuticals S.L. | A pharmaceutical combination for the treatment of a cancer |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1435235A1 (en) * | 2001-10-11 | 2004-07-07 | Universitat de les Illes Balears | Use of hydroxyoleic acid and similar compounds in the production of medicaments |
RU2235541C2 (ru) * | 1994-10-04 | 2004-09-10 | Эмори Юниверсити | Лечение атеросклероза и других сердечно-сосудистых и воспалительных заболеваний |
WO2010066931A1 (es) * | 2008-12-09 | 2010-06-17 | Universitat De Les Illes Balears | Alfa-derivados de ácidos grasos cis-monoinsaturados para ser usados como medicamento |
WO2010106211A1 (es) * | 2009-03-16 | 2010-09-23 | Lipopharma Therapeutics, S.L | Uso de derivados de ácidos grasos poliinsaturados como medicamentos |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AUPR547601A0 (en) * | 2001-06-05 | 2001-06-28 | Carcraft Qld Pty Ltd | Tab with writing surface |
-
2011
- 2011-10-07 ES ES201131622A patent/ES2401629B1/es active Active
-
2012
- 2012-10-08 PL PL12838506T patent/PL2774910T3/pl unknown
- 2012-10-08 WO PCT/ES2012/070697 patent/WO2013050644A1/es active Application Filing
- 2012-10-08 ES ES17191078T patent/ES2773784T3/es active Active
- 2012-10-08 CN CN201280060748.XA patent/CN104321300A/zh active Pending
- 2012-10-08 ES ES12838506.9T patent/ES2653675T3/es active Active
- 2012-10-08 EP EP17191078.9A patent/EP3287437B1/en active Active
- 2012-10-08 RU RU2014118123A patent/RU2637937C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-10-08 PT PT128385069T patent/PT2774910T/pt unknown
- 2012-10-08 HU HUE12838506A patent/HUE035430T2/en unknown
- 2012-10-08 IN IN3111CHN2014 patent/IN2014CN03111A/en unknown
- 2012-10-08 RU RU2017141446A patent/RU2687967C2/ru active
- 2012-10-08 JP JP2014533953A patent/JP2014530806A/ja active Pending
- 2012-10-08 US US14/349,962 patent/US9359281B2/en active Active
- 2012-10-08 EP EP12838506.9A patent/EP2774910B1/en active Active
- 2012-10-08 DK DK12838506.9T patent/DK2774910T3/en active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2235541C2 (ru) * | 1994-10-04 | 2004-09-10 | Эмори Юниверсити | Лечение атеросклероза и других сердечно-сосудистых и воспалительных заболеваний |
EP1435235A1 (en) * | 2001-10-11 | 2004-07-07 | Universitat de les Illes Balears | Use of hydroxyoleic acid and similar compounds in the production of medicaments |
WO2010066931A1 (es) * | 2008-12-09 | 2010-06-17 | Universitat De Les Illes Balears | Alfa-derivados de ácidos grasos cis-monoinsaturados para ser usados como medicamento |
WO2010106211A1 (es) * | 2009-03-16 | 2010-09-23 | Lipopharma Therapeutics, S.L | Uso de derivados de ácidos grasos poliinsaturados como medicamentos |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Waldemar Adam et al. "Synthesis of Optically Active alfa-Hydroxy Acids by Kinetic Resolution Through Lipase-catalyzed Enantioselective Acetylation" Eur. J. Org. Chem., 1998, p. 2013-2018. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2401629B1 (es) | 2014-03-04 |
PT2774910T (pt) | 2018-01-03 |
CN104321300A (zh) | 2015-01-28 |
RU2017141446A3 (ru) | 2019-02-13 |
RU2014118123A (ru) | 2015-11-20 |
PL2774910T3 (pl) | 2018-03-30 |
EP2774910A1 (en) | 2014-09-10 |
JP2014530806A (ja) | 2014-11-20 |
US20140288176A1 (en) | 2014-09-25 |
HUE035430T2 (en) | 2018-05-02 |
US9359281B2 (en) | 2016-06-07 |
ES2401629A1 (es) | 2013-04-23 |
EP3287437B1 (en) | 2019-12-11 |
EP3287437A1 (en) | 2018-02-28 |
IN2014CN03111A (ru) | 2015-07-03 |
ES2773784T3 (es) | 2020-07-14 |
RU2687967C2 (ru) | 2019-05-17 |
EP2774910A4 (en) | 2015-02-25 |
DK2774910T3 (en) | 2018-01-08 |
RU2017141446A (ru) | 2019-02-13 |
WO2013050644A1 (es) | 2013-04-11 |
ES2653675T3 (es) | 2018-02-08 |
EP2774910B1 (en) | 2017-09-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2637937C2 (ru) | Энантиомеры 2-гидроксипроизводных жирных кислот | |
JP2014530806A5 (ru) | ||
AU2020205214B2 (en) | Use of derivatives of polyunsaturated fatty acids as medicaments | |
JP2019142887A (ja) | Pufa誘導体による酸化ストレス障害の緩和 | |
JP2007119361A (ja) | ホスホリパーゼa2阻害剤 | |
JP7361124B2 (ja) | キャップされた3-ヒドロキシカルボン酸およびそれらの塩およびエステルの製造方法 | |
RU2441061C2 (ru) | Производные докозагексаеновой кислоты и их применение в качестве лекарственных средств | |
WO2022050355A1 (ja) | ドコサヘキサエン酸、ドコサヘキサエノイル基含有ホスファチジン酸、又はその誘導体によるセロトニントランスポーター関連精神疾患の予防・治療剤 | |
Morito et al. | Fatty Acid Metabolism in Peroxisomes and Related Disorders | |
Huguenard | Characterization of Lipid Bioenergetic Markers in Alzheimer’s Disease (AD) in Apolipoprotein E4 (APOE) and non-E4 Carriers. | |
JP2018505889A (ja) | アテローム形成を治療するためのシステムおよび方法 | |
Akbar et al. | Role of omega-3 fatty acids in the brain and their signaling mechanisms |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA93 | Acknowledgement of application withdrawn (no request for examination) |
Effective date: 20151009 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20161021 |
|
HC9A | Changing information about inventors |