RU2637279C2 - Способ фотодинамической терапии - Google Patents

Способ фотодинамической терапии Download PDF

Info

Publication number
RU2637279C2
RU2637279C2 RU2015155983A RU2015155983A RU2637279C2 RU 2637279 C2 RU2637279 C2 RU 2637279C2 RU 2015155983 A RU2015155983 A RU 2015155983A RU 2015155983 A RU2015155983 A RU 2015155983A RU 2637279 C2 RU2637279 C2 RU 2637279C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
stem cells
particles
pmhc
pdt
tumor
Prior art date
Application number
RU2015155983A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2015155983A (ru
Inventor
Сергей Петрович Кречетов
Александр Викторович Мелерзанов
Андрей Александрович Темнов
Original Assignee
Сергей Петрович Кречетов
Александр Викторович Мелерзанов
Андрей Александрович Темнов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сергей Петрович Кречетов, Александр Викторович Мелерзанов, Андрей Александрович Темнов filed Critical Сергей Петрович Кречетов
Priority to RU2015155983A priority Critical patent/RU2637279C2/ru
Publication of RU2015155983A publication Critical patent/RU2015155983A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2637279C2 publication Critical patent/RU2637279C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/409—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having four such rings, e.g. porphine derivatives, bilirubin, biliverdine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к фотодинамической терапии опухолей. Для этого изготавливают микрочастицы из сополимера молочной и гликолевой кислот, содержащие фотосенсибилизатор. К стволовым клеткам добавляют полученные микрочастицы и проводят их совместное культивирование. После этого осуществляют введение стволовых клеток субъекту с опухолью и на зону опухолевого роста воздействуют световым облучением в дозе, достаточной для полного или частичного разрушения опухоли. Способ обеспечивает адресность воздействия при увеличении количества транспортируемого фотосенсибилизатора, снижении токсического воздействия последнего на стволовые клетки и исключении системного фототоксического поражения. 9 з.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр., 2 ил.

Description

Фотодинамическая терапия (ФДТ) является одним из эффективных методов лечения как онкологических, так и неонкологических заболеваний.
В основе фотодинамической терапии лежит накопление фотосенсибилизатора (ФС) в патологически измененной ткани с последующим облучением светом с определенной длиной волны. В результате светового воздействия химическое превращение ФС вызывает образование активных форм кислорода, приводящих к разрушению прилежащих тканей. Кроме того, в результате деструкции клеток эндотелия происходит тромбоз мелких и средних сосудов, питающих опухоль.
Основным преимуществом ФДТ является отсутствие токсических системных эффектов и возможность проведения локального разрушения опухолевой ткани.
Недостатком метода ФДТ является длительная кожная фототоксичность, требующая строго соблюдения светового режима. Кроме того, данный метод лечения требует системного введения препарата и градиент концентрации между нормальной и патологически измененной ткани является незначительным.
Поэтому, поиск методов адресной доставки ФС в патологически измененную ткань является актуальной задачей современной биологии и медицины.
Среди биосовместимых биодеградируемых полимеров, широко используемых в нанофармацевтических исследованиях, особое внимание привлекают алифатические эфиры молочной и гликолевой кислот (polylactic-co-glycolic acid - PLGA), которые могут использоваться для контролируемого высвобождения различных низкомолекулярных лекарственных субстанций, белков и пептидов. Преимуществами PLGA является биосовместимость, нетоксичность, возможность регулировать скорость деградации, возможность модификации поверхности для улучшения взаимодействия с целевыми биообъектами.
Известны частицы, предназначенные для доставки лекарственного средства в организм, в частности фотосенсибилизатора и/или химиопрепарата для лечения рака. Это наночастицы, имеющие оболочку и ядро из синтетически биоразлагаемого полимера (в частности PLGA) с загруженным фотосенсибилизатором и/или химиопрепаратом (WO 2014141289 А1, 18.09.2014).
Причем доставка этих наночастиц может осуществляться пассивными или направленными механизмами, где активное нацеливание достигается путем конъюгирования частиц с лигандами, такими как моноклональное антитело (например, CD20, CD33, CD34, CD38, CD44, CD47, CD52 CD90, CD-123, CD-I 33, EGFR, PDGFR), пептиды (например РГД, CR.GD, LyP-1 пептид, bombes в (BBNi) pepiide, FSH33, усеченный человеческий основной фактор роста фибробластов пептид (tbFG F) октреотид и т.д.,), малые молекулы (folid кислоты, маннозы, гиалуроновая кислота), белки (трансферрин).
Одним из способов повысить концентрацию лекарственного препарата в патологически измененной ткани (опухоли) является использование стволовых клеток, в цитоплазму которых введены ЛП.
Так как известно, что стволовые клетки после трансплантации в организм способны активно мигрировать в опухолевую ткань или зону острого повреждения (Kathryn С. et al., 19F magnetic resonance imaging for stem/progenitor cell tracking with multiple unique perfluorocarbon nanobeacons, The FASEB Journal, 2007 June, vol. 21, p. 1647-1654; Kraitchman D.L. et al. (2003) In vivo magnetic resonance imaging of mesenchymal stem cells in myocardial infarction. Circulation 107, 2290-2293; Arbab A.S. et al. (2006) Magnetic resonance imaging and confocal microscopy studies of magnetically labeled endothelial progenitor cells trafficking to sites of tumor angiogenesis. Stem Cells 24, 671-678).
Ближайшим аналогом изобретения является способ лечения злокачественных опухолей, включающий проведение фотодинамической терапии с введением стволовых клеток, содержащих частицы эмульсии перфторуглеродов и покрытых фотосенсибилизатором (радахлорином) (RU 2440158, 20.01.2012).
В данном способе создают частицы путем добавления фотосенсибилизатора к наночастицам эмульсии перфторуглеродов (ПФУ), состоящим из перфтордекалина и перфторметилциклогексилпиперидина, стабилизированных раствором проксанола 268. Затем добавляют эмульсию ПФУ с ФС к стволовым клеткам костного мозга, проводят их совместное культивирование и осуществляют введение СККМ после культивирования субъекту, страдающему злокачественными опухолями.
Однако недостатком данного метода является низкая сорбционная способность частиц ПФУ эмульсии сорбировать препарат для ФДТ. Кроме того, при инкубации со стволовыми клетками частиц, покрытых препаратом для ФДТ, наступает процесс десорбции, что приводит к гибели части стволовых клеток под воздействием свободного препарата для ФДТ.
В основе предложенного нами метода лежит создание частиц субмикронных размеров (50-1000 нм), изготовленных из сополимера молочной и гликолевой кислот (ПМГК), содержащих препарат для ФДТ (фотосенсибилизатор) и предназначенных для введения в стволовые клетки.
Использование таких частиц позволяет осуществлять адресную доставку токсичного и биологического активных веществ и резко снизить общий токсический эффект на организм.
Таким образом, техническим результатом предлагаемого способа является увеличение количества «транспортируемого» препарата для фотодинамической терапии путем создания поглощаемых стволовыми клетками микрочастиц, изготовленных из биосовместимого биодеградируемого полимера ПМГК и содержащих препарат для ФДТ, позволяющих увеличить насыщение стволовых клеток препаратом для ФДТ в процессе их совместного культивирования, а также снизить токсическое воздействие свободного препарата для ФДТ на стволовые клетки.
Изобретение иссюстрировано фигурами:
Фигура 1 - Стволовая клетка костного мозга с частицами, содержащими хлорин е6 в цитоплазме: А - УФ-микроскопия (свечение свидетельствует о наличие хлорина еб в частицах); Б - световая микроскопия того же объекта.
Фигура 2 - Мезенхимальные стволовые клетки, содержащие частицы ПМГК с ФС, после воздействия лазера (662 нм).
Способ осуществляли следующим образом:
A) изготавливают микрочастицы из сополимера молочной и гликолевой кислот (ПМГК), содержащие фотосенсибилизатор (ФС);
Б) добавляют микрочастицы, изготовленные из ПМГК и содержащие ФС, к стволовым клеткам (СК) и проводят их совместное культивирование;
B) после культивирования и отмывки от непоглощенных частиц осуществляют введение СК субъекту, нуждающемуся в ФДТ;
Г) на зону опухолевого роста воздействуют световым облучением в дозе, достаточной для полного или частичного разрушения опухоли.
В другом варианте, микрочастицы ПМГК, содержащие ФС, перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают перфторуглеродной эмульсией (ПФУЭ) или раствором полоксамера (блок-сополимера полиоксиэтилена и полиоксипропилена), или дисперсией фосфолипидов.
При этом ПФУЭ в качестве дисперсной фазы содержит 10 об.% смеси перфторуглеродов: перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидин, перфтортрибутиламин и перфтороктилбромид в соотношении 9:1:0,01:0,01, а в качестве эмульгатора в ней используется полоксамер или фосфолипиды.
В другом варианте изобретения частицы содержат перфторуглерод (ПФУ): перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидина, перфтортрибутиламина и перфтороктилбромида в соотношении 9:1:0,01:0,01.
Также микрочастицы ПМГК, содержащие ФС, могут создаваться в условиях повышенного >21% содержания кислорода.
ПРИМЕР 1. Получение частиц ПМКГ, содержащих ФС.
Для включения ФС в полимерную матрицу (ПМКГ) используется метод двойной эмульсии вода/масло/вода.
Вариант А. Получение частиц по эмульсионной технологии В1/М/В2.
Сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) растворяют в дихлорметане (первичная дисперсная среда М). Водный раствор ФС (дисперсная фаза В1) диспергируют в полученном растворе сополимера сначала на Vortex, а затем с помощью ультразвукового гомогенизатора. Полученную первичную эмульсию В1/М диспергируют с использованием Ultra Turrax в холодном водном растворе поливинилового спирта и метилцеллюлозы (вторичная дисперсная среда В2). Готовую тройную эмульсию (В1/М/В2) смешивают с большим количеством холодной воды и выдерживают при постоянном перемешивании с повышением температуры до комнатной в течение нескольких часов. Созревшие микрочастицы осаждают центрифугированием и промывают водой.
Вариант Б.
Сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) растворяют в дихлорметане (первичная дисперсная среда M1). Водный раствор ФС (дисперсная фаза В) диспергируют в полученном растворе сополимера сначала на Vortex, а затем с помощью ультразвукового гомогенизатора. Полученную первичную эмульсию диспергируют с использованием Ultra Turrax в смеси диметикона с дихлорметаном и span 80 (вторичная дисперсная среда М2). Готовую тройную эмульсию при легком перемешивании оставляют созревать в течение нескольких часов в открытой емкости. Созревшие частицы осаждают центрифугированием и отмывают гептаном. Затем частицы сушат продувкой азотом. Для удаления не включившегося в частицы ФС полученные частицы промывают водой.
ПРИМЕР 2. Получение частиц ПМГК, содержащих фотосенсибилизатор (ФС) и обработанных перфторуглеродной эмульсией (ПФУЭ).
Частицы ПМГК, содержащие ФС (полученные способами, указанными в примере 1), перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают перфторуглеродной эмульсией (ПФУЭ), с дисперсной фазой 10 об. %, состоящей из смеси перфторуглеродов: перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидин, перфтортрибутиламин и перфтороктилбромид в соотношении 9:1:0,01:0,01. Для стабилизации ПФУЭ в качестве эмульгатора используется полоксамер (например, 4% проксанол 286) или фосфолипиды (например, соевый лецитин).
ПРИМЕР 3. Получение частиц ПМГК, содержащих фотосенсибилизатор (ФС) и обработанных раствором полоксамера или дисперсией фосфолипидов.
Частицы ПМГК, содержащие ФС ГК (полученные способами, указанными в примере 1), перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают раствором полоксамера (например, 4% проксанола 286) или дисперсией фосфолипидов (например, соевого лецитина).
ПРИМЕР 4. Получение частиц ПМГК, содержащих перфторуглерод (ПФУ).
Сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) растворяют в дихлорметане. В полученном растворе растворяют перфтороктилбромид или смесь перфторуглеродов: перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидин, перфтортрибутиламин и перфтороктилбромид в соотношении 9:1:0,01:0,01. Приготовленную фазу диспергируют с использованием Ultra Turrax в холодном водном растворе поливинилового спирта и метилцеллюлозы. Полученную эмульсию смешивают с большим количеством холодной воды и выдерживают при постоянном перемешивании с повышением температуры до комнатной в течение нескольких часов. Созревшие микрочастицы осаждают центрифугированием и промывают водой.
ПРИМЕР 5. Получение частиц ПМКГ, содержащих фотосенсибилизатор (ФС) и перфторуглерод (ПФУ).
Сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) растворяют в дихлорметане. В полученном растворе растворяют перфтороктилбромид или смесь перфторуглеродов: перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидин, перфтортрибутиламин и перфтороктилбромид в соотношении 9:1:0,01:0,01. В приготовленной дисперсной среде диспергируют водный раствор ФС сначала на Vortex, а затем с помощью ультразвукового гомогенизатора. Полученную первичную эмульсию диспергируют с использованием Ultra Turrax в холодном водном растворе поливинилового спирта и метилцеллюлозы. Готовую тройную эмульсию смешивают с большим количеством холодной воды и выдерживают при постоянном перемешивании с повышением температуры до комнатной в течение нескольких часов. Созревшие микрочастицы осаждают центрифугированием и промывают водой.
ПРИМЕР 6. Получение частиц ПМГК, содержащих фотосенсибилизатор (ФС) и/или перфторуглерод (ПФУ), обработанных раствором полоксамера или дисперсией фосфолипидов.
Частицы ПМГК, содержащие ФС ГК (полученные способами, указанными в примерах 4 и 5), перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают раствором полоксамера (например, 4% проксанола 286) или дисперсией фосфолипидов (например, соевого лецитина).
ПРИМЕР 7. Введение частиц ПМГК, содержащих ФС, в стволовые клетки.
Получение стволовых клеток. В качестве доноров стволовых клеток были использованы мыши линии C57blackl0 GFP, цитоплазма которых содержит белок, флюоресцирующий (зеленый цвет) под действие УФ-излучения. Клетки костного мозга выделяли из бедренной кости и культивировали в среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 5 мкг/л инсулина, 10 нМ дексаметазона в течение 5 дней при 37°С.
Для введения в стволовые клетки использовали частицы, полученные по примеру 1-6. В качестве фотосенсибилизатора использовали хлорином е6. После 5 дней культивирования к клеткам костного мозга добавляли частицы, содержащие хлорин е6, и инкубировали в течение 30 минут при 37°С. После 5-кратной отмывки раствором Хенкса клетки снимали трипсином и рекультивировали в среде DMEM.
Как видно из представленной таблицы 1 частицы, содержащие ФС, по-разному проникают в цитоплазму стволовых клеток в зависимости от размера и предварительной обработки полоксамером или ПФУ эмульсией.
Мелкие частиц (до 100 нм), которые предварительно не обрабатывались (пример 1) лучше проникают в стволовые клетки по сравнению с обработанными частицами.
Однако, крупные частицы (свыше 100 нм) после обработки полоксамерами или ПФУ эмульсией лучше проникают в цитоплазму стволовых клеток по сравнению с необработанными. Данное различие можно использовать для решения конкретной клинической или экспериментальной задачи, которая может возникнуть.
Таким образом, увеличение количества частиц, захваченное стволовыми клетками, и использование частиц свыше 100 нм позволяет резко увеличить количество препарата, проникающего в клетку, т.е. увеличить количество ФС «транспортируемого» стволовыми клетками в зону, которая будет подвергнута фотодинамической терапии.
В ходе работы было показано, что частицы ПМГК, содержащие ФС, проникают внутрь стволовых клеток костного мозга (Фигура 1).
Проведенные эксперименты показали, что данный метод позволяет существенно увеличить количество препарата для ФДТ переносимой стволовыми клетками. По заявленному методу 10000 стволовых клеток может содержать в своей цитоплазме до 805,4±1,2 пг ФС, находящегося в частицах ПМГК. В качестве сравнения 10000 стволовых клеток с частицами ПФУЭ в цитоплазме и с сорбированным на их поверхности ФС (полученные по методу, описанному в патенте №2440158) содержат около 5,1±0,3 пг ФС.
Таким образом, создание частиц из полимера, содержащих препарат для ФДТ, позволяет увеличить насыщение стволовых клеток в процессе их совместного культивирования и, следовательно, увеличить количество «транспортируемого» препарата для фотодинамической терапии.
Введение частиц ПМКГ, содержащих препарат для ФДТ, не приводит к достоверному снижению жизнеспособности стволовых клеток в процессе культивирования. Так жизнеспособность стволовых клеток составила не ниже 98% в течение 48 часов инкубации.
Таким образом, введение частиц ПМГК, содержащих ФС, позволяет снизить токсическое воздействие свободного (десорбированного) препарата для ФДТ на стволовые клетки.
ПРИМЕР 8. Трансплантация стволовых клеток. Стволовые клетки, содержащие частицы ПМГК с хлорином е6, трансплантировали реципиенту в/в и в/брюшинно в дозе от 2×104 до 2×107 клеток. Реципиентами являлись однородные по группе беспородные мыши, не содержащие GFP и содержащиеся в условиях вивария. Через 3-7 дней после трансплантации животных забивали, извлекали костный мозг и готовили клеточную суспензию. Под микроскопом в УФ-диапазоне проводили поиск клеток, содержащих зеленый белок, и после обнаружения облучали их лазером (662 нм) мощностью 1 Дж/см, в течение 1 минуты. В качестве источника светового излучения использовали полупроводниковый лазерный аппарат «ЛАМИ» длиной волны лазерного излучения 662 нм, что соответствует максимуму спектрального поглощения используемых фотосенсибилизаторов. Мощность излучения на конце световода 1,3 Вт (peг. номер 29/10020203/5212-03 от 20.05.2003 г.) код ОКП 944420, класс II А. Затем в видимом свете проводили фотографирование облученной клетки в течение 3 минут с интервалом 15 секунд.
В ходе работы было показано, что частицы ПМГК, содержащие ФС, проникают внутрь стволовых клеток костного мозга.
При обработке клеток, содержащих частицы с хлорином е6, лазером мощностью 1 Дж/см выделяются активные формы кислорода, что приводит к гибели клетки. Так на Фигура 2 представлен процесс разрушения мембраны клетки (стрелки - образование вакуолей).
Приготовление частиц, содержащих хлорин е6, и получение стволовых клеток осуществляли способом, описанным в примере 6.
Стволовые клетки трансплантировали реципиенту внутривенно в дозе от 2×10'' до 2×10' клеток. Реципиентами являлись мыши линии С57 black, не содержащие GFP и содержащиеся в условиях вивария. Всего в эксперименте использовали 25 животных. У данных животных развивался спонтанный рак молочной железы. Масса животных составляла 28,3±4,0 гр.
Через 5 дней после трансплантации животных забивали, извлекали опухоль, печень, селезенку. Выделенные ткани подвергали спектрометрии и оценивали содержание хлорина е6 основываясь на характерных пиках. Было показано в результате проведенного исследования, что ткань опухоли (100±15 мг) накапливает около 35% клеток, содержащих частицы с ФС (35,4±5,1%).
Введение стволовых клеток с ФС у здоровых беспородных мышей показало следующее распределение клеток: печень 8,3±1,1%, селезенка 5,2±1,2%, костный мозг - 12±2%. Масса животных составляла 25,3±2,8 гр.
Из проведенного исследования видно, что накопление стволовых клеток с ФС осуществляется прежде всего в опухоли, что согласуются с известными работами по распределению стволовых клеток в организме (Kathryn С. et al., 19F magnetic resonance imaging for stem/progenitor cell tracking with multiple unique perfluorocarbon nanobeacons, The FASEB Journal, 2007 June, vol. 21, p. 1647-1654; Kraitchman D.L. et al. (2003) In vivo magnetic resonance imaging of mesenchymal stem cells in myocardial infarction. Circulation 107, 2290-2293; Arbab A.S. et al. (2006) Magnetic resonance imaging and confocal microscopy studies of magnetically labeled endothelial progenitor cells trafficking to sites of tumor angiogenesis. Stem Cells 24, 671-678).
ПРИМЕР 8. Применение стволовых клеток с частицами ПМГК, содержащими ФС, для проведения фотодинамической терапии.
Реципиентами являлись мыши линии С 57 black, не содержащие GFP и содержащиеся в условиях вивария. У данных животных развивался спонтанный рак молочной железы. Всего для эксперимента было взято 63 мыши.
Через 5 дней после трансплантации животных облучали контактным способом с помощью микролинзы на поверхность ткани в зоне опухоли. В качестве светового излучения использовали полупроводниковый лазерный аппарат «ЛАМИ» длиной волны лазерного излучения 662 нм.
ФДТ осуществляли при следующих параметрах: плотность энергии лазерного излучения 200-300 Дж/см, плотность мощности - 0,141-0,39 Вт/см. Продолжительность облучения (Т, мин) определяли по формуле: Т=E/PS, где Ps - плотность мощности излучения (Вт/см), Е - заданная величина плотности энергии (доза лазерного облучения).
Ps=PB/S, где Рв - мощность лазерного излучения на выходе световода (Вт), S - площадь светового пятна (см). С целью облегчения расчетов использовали таблицу плотности мощности (Ps) в зависимости от выходной мощности на конце световода (Рв) и размеров светового пятна. С целью измерения мощности лазерного излучения нами применялся дозировщик мощности ДИ-6А. Непосредственные, ближайшие и отдаленные результаты ФДТ оценивалась:
- полный регресс - полное исчезновение опухоли;
- частичный регресс - уменьшение опухоли более чем на 50%;
- отсутствие эффекта - уменьшение опухоли менее чем на 50%,
состояние без изменений или увеличение размеров опухоли.
Проведенные исследования показали полный регресс-32% особей, частичный регресс - 58% особей, отсутствие эффекта - 10% особей.
Затем животные забивались и проводилось исследование гистологической картины опухолей. Гистологическая картина соответствовала результатам лечения.
Таким образом, предлагаемый способ может быть широко применен в лечении злокачественных новообразований, для которых применимо использование фотодинамической терапии путем введения стволовых клеток с частицами из сополимера молочной и гликолевой кислот, содержащими фотосенсибилизатор (ФС).
Figure 00000001

Claims (14)

1. Способ фотодинамической терапии субъектов, страдающих злокачественными опухолями, включающий проведение фотодинамической терапии (ФДТ), отличающийся тем, что способ осуществляют следующим образом:
A) изготавливают микрочастицы из сополимера молочной и гликолевой кислот (ПМГК), содержащие фотосенсибилизатор (ФС);
Б) к стволовым клеткам (СК) добавляют полученные микрочастицы и проводят их совместное культивирование;
B) осуществляют введение СК после культивирования субъекту, нуждающемуся в ФДТ;
Г) на зону опухолевого роста воздействуют световым облучением в дозе, достаточной для полного или частичного разрушения опухоли.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что частицы ПМГК, содержащие ФС, перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают перфторуглеродной эмульсией (ПФУЭ), которая в качестве дисперсной фазы содержит 10 об. % смеси перфторуглеродов: перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидин, перфтортрибутиламин и перфтороктилбромид в соотношении 9:1:0,01:0,01, а в качестве эмульгатора в ней используется полоксамер или фосфолипиды.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что частицы ПМГК, содержащие ФС, перед инкубацией со стволовыми клетками предварительно обрабатывают раствором полоксамера (блок-сополимера полиоксиэтилена и полиоксипропилена) или дисперсией фосфолипидов.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что частицы содержат перфторуглерод (ПФУ): перфтордекалин, перфторметилциклогексилпиперидина, перфтортрибутиламина и перфтороктилбромида.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что частицы ГТМГК и содержащие ПФУ создаются в условиях повышенного >21% содержания кислорода.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве ФС выступает хлорин е6.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве злокачественной опухоли выступает рак молочной железы.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве стволовых клеток выступают аутологичные стволовые клетки костного мозга.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве субъекта выступает млекопитающее.
10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что в качестве млекопитающего выступает человек.
RU2015155983A 2015-12-25 2015-12-25 Способ фотодинамической терапии RU2637279C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015155983A RU2637279C2 (ru) 2015-12-25 2015-12-25 Способ фотодинамической терапии

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015155983A RU2637279C2 (ru) 2015-12-25 2015-12-25 Способ фотодинамической терапии

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015155983A RU2015155983A (ru) 2017-06-27
RU2637279C2 true RU2637279C2 (ru) 2017-12-01

Family

ID=59240471

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015155983A RU2637279C2 (ru) 2015-12-25 2015-12-25 Способ фотодинамической терапии

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2637279C2 (ru)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2318500C2 (ru) * 2005-10-18 2008-03-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотехнология" Способ воздействия на организм путем адресной доставки биологически активных веществ в митохондрии, фармацевтическая композиция для его осуществления и соединение, применяемое для этой цели
RU2010106294A (ru) * 2010-02-25 2011-08-27 Юрий Александрович Белый (RU) Способ фотодинамической терапии субъектов, страдающих злокачественными опухолями
JP5476342B2 (ja) * 1999-10-05 2014-04-23 ユニヴェルスィテ・ドゥ・モントリオール 光力学診断及び治療のためのローダミン誘導体
WO2014141289A1 (en) * 2013-03-12 2014-09-18 Amrita Vishwa Vidyapeetham University Photo - chemo composition on the basis of microcapsules with a core -shell structure
US20150335746A1 (en) * 2012-11-14 2015-11-26 Universidad Autonoma De Madrid Use of a photosensitive agent capable of producing reactive oxygen species in the production of a drug for the photodynamic therapy of a disease related to stem cells, in vitro use, and pharmaceutical composition

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5476342B2 (ja) * 1999-10-05 2014-04-23 ユニヴェルスィテ・ドゥ・モントリオール 光力学診断及び治療のためのローダミン誘導体
RU2318500C2 (ru) * 2005-10-18 2008-03-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Митотехнология" Способ воздействия на организм путем адресной доставки биологически активных веществ в митохондрии, фармацевтическая композиция для его осуществления и соединение, применяемое для этой цели
RU2010106294A (ru) * 2010-02-25 2011-08-27 Юрий Александрович Белый (RU) Способ фотодинамической терапии субъектов, страдающих злокачественными опухолями
RU2440158C2 (ru) * 2010-02-25 2012-01-20 Юрий Александрович Белый Способ фотодинамической терапии субъектов, страдающих злокачественными опухолями
US20150335746A1 (en) * 2012-11-14 2015-11-26 Universidad Autonoma De Madrid Use of a photosensitive agent capable of producing reactive oxygen species in the production of a drug for the photodynamic therapy of a disease related to stem cells, in vitro use, and pharmaceutical composition
WO2014141289A1 (en) * 2013-03-12 2014-09-18 Amrita Vishwa Vidyapeetham University Photo - chemo composition on the basis of microcapsules with a core -shell structure

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHRESTHA TB et al. Stem cell-based photodynamic therapy. Photochem Photobiol Sci. 2012 Jul;11(7):1251-8. *
USACHEVA M et al. Enhanced photodynamic therapy and effective elimination of cancer stem cells using surfactant-polymer nanoparticles. Mol Pharm. 2014 Sep 2;11(9):3186-95. *
МЕЛЕШИНА А. В. Исследование взаимодействия мультипотентных мезенхимных стволовых клеток с опухолями методами флуоресцентного имиджинга: автореф. канд. биол. наук, Санкт-Петербург, 2014, 21 с. *
МЕЛЕШИНА А. В. Исследование взаимодействия мультипотентных мезенхимных стволовых клеток с опухолями методами флуоресцентного имиджинга: автореф. канд. биол. наук, Санкт-Петербург, 2014, 21 с. USACHEVA M et al. Enhanced photodynamic therapy and effective elimination of cancer stem cells using surfactant-polymer nanoparticles. Mol Pharm. 2014 Sep 2;11(9):3186-95. SHRESTHA TB et al. Stem cell-based photodynamic therapy. Photochem Photobiol Sci. 2012 Jul;11(7):1251-8. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015155983A (ru) 2017-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mao et al. AIEgen-coupled upconversion nanoparticles eradicate solid tumors through dual-mode ROS activation
Yan et al. Protoporphyrin IX (PpIX)‐coated superparamagnetic iron oxide nanoparticle (SPION) nanoclusters for magnetic resonance imaging and photodynamic therapy
Lu et al. Porphyrin‐based Covalent organic framework for imaging‐guided cancer Combinatorial Immuno‐sonodynamic therapy
Wang et al. Nanoparticulate delivery system targeted to tumor neovasculature for combined anticancer and antiangiogenesis therapy
Liu et al. Human iPS cells loaded with MnO 2-based nanoprobes for photodynamic and simultaneous enhanced immunotherapy against cancer
Wang et al. An Ultra‐Stable, Oxygen‐Supply Nanoprobe Emitting in Near‐Infrared‐II Window to Guide and Enhance Radiotherapy by Promoting Anti‐Tumor Immunity
Juengpanich et al. Pre-activated nanoparticles with persistent luminescence for deep tumor photodynamic therapy in gallbladder cancer
Zhang et al. Multifunctional magnetic nanoclusters can induce immunogenic cell death and suppress tumor recurrence and metastasis
Xia et al. Integrated manganese (III)-doped nanosystem for optimizing photothermal ablation: Amplifying hyperthermia-induced STING pathway and enhancing antitumor immunity
Zhao et al. Ultrasound targeted microbubble destruction-triggered nitric oxide release via nanoscale ultrasound contrast agent for sensitizing chemoimmunotherapy
Bae et al. Bone marrow-targetable Green Tea Catechin-Based Micellar Nanocomplex for synergistic therapy of Acute myeloid leukemia
Lin et al. “Two birds with one stone” strategy for the lung cancer therapy with bioinspired AIE aggregates
Wang et al. Laser‐Activatable In Situ Vaccine Enhances Cancer‐Immunity Cycle
Liu et al. Photodynamic therapy mediated by upconversion nanoparticles to reduce glial scar formation and promote hindlimb functional recovery after spinal cord injury in rats
Tian et al. Precision Delivery of Dual Immune Inhibitors Loaded Nanomodulator to Reverse Immune Suppression for Combinational Photothermal‐Immunotherapy
Li et al. Palliating the escalated post-PDT tumor hypoxia with a dual cascade oxygenation nanocomplex
Xu et al. MnO2 coated multi-layer nanoplatform for enhanced sonodynamic therapy and MR imaging of breast cancer
CN116115751B (zh) 一种共组装光热饥饿治疗纳米调节剂及其制备方法
CN106606783B (zh) 一种靶向共递释光敏剂与化疗药物的药物递释系统
RU2637279C2 (ru) Способ фотодинамической терапии
CN115317605B (zh) 一种自主供氧复合光敏剂及其应用
RU2440158C2 (ru) Способ фотодинамической терапии субъектов, страдающих злокачественными опухолями
Zhang et al. Nanoengineered M1 macrophages enhance photodynamic therapy of melanoma through oxygen production and subsequent antitumor immunity
Zhang et al. Comparative study on the antitumor effects of gemcitabine polybutylcyanoacrylate nanoparticles coupled with anti-human MUC1 and CA199 monoclonal antibodies on pancreatic cancer in vitro and in vivo
Cheng et al. Osteosarcoma-targeted Cu and Ce based oxide nanoplatform for NIR II fluorescence/magnetic resonance dual-mode imaging and ros cascade amplification along with immunotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20171226