RU2625740C1 - Средство для лечения ишемии сосудов головного мозга - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинона в качестве средства для лечения ишемии сосудов головного мозга при острых нарушениях мозгового кровообращения. Изобретение приводит к более быстрому снижению зоны отека в сравнении с аналогами. Низкая токсичность 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинона, хорошая растворимость в физиологическом растворе и длительность хранения выгодно отличают заявляемое средство от аналогов. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств, предназначенных для лечения ишемии сосудов головного мозга при острых нарушениях мозгового кровообращения. 8 ил., 5 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для лечения ишемического повреждения мозга.

Одним из известных препаратов, улучшающих кровоснабжение мозга, является кавинтон [Машковский М.Д. // Лекарственные средства, 15 издание, Москва, Новая Волна, 2005, 407-408]. Его лечебное действие является однонаправленным и заключается в расширении сосудов головного мозга. Положительным эффектом кавинтона, как избирательного церебрального вазодилататора у больных с цереброваскулярными расстройствами, является активация гликолиза мозговой ткани [Чуканова Е.И. // Кавинтон в комплексном лечении пациентов с хронической цереброваскулярной недостаточностью. Ж. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2009. Т. 109. №9. С. 35-39].

Однако этого эффекта недостаточно для улучшения кровоснабжения мозга. Известно, что ишемия мозговой ткани приводит к резкому ухудшению не только кровоснабжения, но и трофики ткани - накоплению окисленных продуктов обмена веществ, что в свою очередь инактивирует мембраносвязанные ферменты (супероксиддисмутазу и каталазу) и приводит к дальнейшему расстройству обмена веществ. Для предотвращения этих последствий необходимо восстановление механизмов антиоксидантной защиты мозга.

Еще одним известным препаратом для лечения больных ишемией является антиоксидантный препарат эмоксипин (6-метил-2-этилпиридин-3-ол), действие которого было изучено на моделях экспериментального ишемического инсульта [28]. Эмоксипин оказался эффективным при терапии острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК), вызванного окклюзией сонных артерий крыс. Он достоверно снижал смертность животных, уменьшал тяжесть локальной и общемозговой неврологической симптоматики, увеличивал латентный период развития выраженных клинических проявлений. Высокая терапевтическая эффективность эмоксипина в эксперименте на крысах обусловлена ингибированием свободно-радикального окисления мембранных липидов, что обеспечивает снижение уровня продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Агафонова И.Г. и др. Сравнительный анализ изменения мозгового кровообращения у крыс с индуцированным острым нарушением мозгового кровообращения методом магнитно-резонансной томографии // Тихоокеанский медицинский журнал. 2012. №1. С. 104-107]. Эмоксипин не оказывает влияния на образовавшиеся тромбы во время ишемии.

Известен препарат гистохром®, разработанный в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН (ТИБОХ), используемый для лечения ишемической болезни сердца и ограничения зоны некроза при инфаркте миокарда [RU 2137472 С1, 20.09.1999], воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаза [RU 2134107 С1, 10.08.1999], а также для лечения геморрагического инсульта [RU 2266737 С1, 27.12.2005]. Он представляет собой лекарственную форму индивидуального вещества - природного хиноидного пигмента морских беспозвоночных эхинохрома А (2,3,5,6,8-пентагидрокси-7-этил-1,4-нафтохинона, номер государственной регистрации Р №002362/01-2003) [RU 1833544 С].

Эффективность гистохрома при геморрагическом инсульте была изучена в клинике у больных с кровоизлиянием в головной мозг, развившимся вследствие артериальной гипертензии. Препарат назначался ежедневно на протяжении пяти дней для введения по 5 мл 1% раствора гистохрома внутривенно. Характер инсульта верифицировался методом магнитно - резонансной томографии (МРТ). Согласно данным МРТ были выявлены размеры гематомы и смещение срединных структур мозга. Положительный терапевтический эффект после применения гистохрома был отмечен у неврологических больных через две недели после терапии.

Однако гистохром достаточно лабилен на воздухе; его субстанция характеризуется низкой растворимостью в воде и физиологическом растворе.

С целью поиска веществ, свободных от вышеуказанных недостатков, в ТИБОХ был синтезирован ряд полигидрокси-1,4-нафтохинонов и, в частности, 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинон формулы (1), обозначенный (GluNAZ) [SU 1822549 A3, 20.08.1996; Anufriev V.Ph., Novikov V.L., et. al. // Synthesis of some hydroxynaphthazarins and their cardioprotective effects under ischemia-reperfusion in vivo. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. Vol.8. No. 6. P. 587-592].

Фармакологические исследования показали, что эти соединения обладают свойством протектора миокарда при его ишемии и реперфузии, в частности, GluNAZ сокращает зону инфаркта миокарда до 50%. Эффект GluNAZ и других производных нафтазарина в одних и тех же экспериментальных условиях сравнивался с верапамилом (блокатором кальциевых каналов) и нитроглицерином (кардиопротекторным средством). Было установлено, что соединение GluNAZ увеличивает продолжительность жизни животных после индуцированной ишемии миокарда, улучшает неврологический статус животных и поисково - исследовательскую активность животных.

Указание на его противоишемические свойства, проявляемые при воздействии на сосуды головного мозга, подверженные ишемическому повреждению, в доступной патентной и научно-технической литературе не обнаружено.

Задача изобретения - расширение арсенала средств для лечения головного мозга от ишемического повреждения при острых нарушениях мозгового кровообращения.

Поставленная задача решена применением 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинона в качестве средства для лечения сосудов головного мозга от ишемического повреждения при острых нарушениях мозгового кровообращения.

GluNAZ нормализует механизм антиоксидантной защиты ткани мозга при ишемии и гипоксии. Его противоишемическое действие обусловлено антигипоксическим и антиагрегантным эффектом, увеличением кровоснабжения мозга. Изобретение может быть использовано для лечения ишемического повреждения мозга.

Новое применение GluNAZ в качестве средства для лечения головного мозга от ишемических повреждений при острых нарушениях мозгового кровообращения не вытекает из уровня техники в данной области и не очевидно для специалиста.

Соединение GluNAZ получено, как описано в SU 1822549 A3, 20.08.1996 (пример 6).

Исследование противоишемического действия GluNAZ на сосуды головного мозга

Авторами проведено сравнительное изучение терапевтического действия заявляемого средства - GluNAZ и препарата гистохром®, который применяется для лечения геморрагического инсульта.

Изучение противоишемического эффекта GluNAZ проводили на крысах линии Вистар. С этой целью были выполнены следующие исследования.

Тестирование животных перед экспериментом

Для определения устойчивости к эмоциональному стрессу все животные за неделю до операции были протестированы в тесте «Открытое поле» и на основании полученных результатов разделены на три группы: 1 - устойчивые, 2 - предрасположенные к стрессу, 3 - средние (промежуточные) [Агафонова И.Г., Колосова Н.Г. и др. // Влияние гистохрома на состояние сосудов головного мозга и поисково-исследовательскую активность преждевременно стареющих крыс OXYS. Магнитно-резонансная томография в диагностике хронической ишемии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т. 143. Вып. 4. С. 446-450]. Для эксперимента были отобраны животные, предрасположенные к эмоциональному стрессу.

Модель острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК)

В исследование были включены 72 крысы-самки линии Вистар в возрасте 8 месяцев и массой 200-220 г. Животные были размещены по 2 особи в клетке, находились в стандартных условиях содержания в виварии при естественном световом режиме и свободном доступе к воде и пище.

Индукцию ОНМК вызывали окклюзией левой средней мозговой артерии (лСМА) у предварительно обездвиженных крыс внутрибрюшинной инъекцией раствора рометара (xylazinum, SPORA, Prague) в концентрации 5,5 мг/кг и раствора реланиума в концентрации 37 мг/кг. Крысам была наложена постоянная лигатура на левую среднюю мозговую артерию согласно [Агафонова И.Г., Котельников В.Н. и др. // Сравнительное изучение влияния гистохрома и мексидола на структурно-функциональные характеристики мозга преждевременно стареющих крыс OXYS методом МРТ. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 150. Вып. 12. С. 686-691].

В левой средней мозговой артерии, после наложения постоянной лигатуры, был сделан прокол иглой для удаления крови из артерии, а затем в артерию снова была введена собранная из проколотой артерии кровь крысы. В качестве контроля использовали ложно оперированных животных.

После индукции ишемии у животных был определен каскад ишемических повреждений. После окклюзии лСМА в контрольной группе отмечалось до 40% падения животных в первые сутки после операции. Из выживших животных были сформированы контрольная и экспериментальные группы по 12 голов в каждой. В таблице 1 приведены данные о количестве выживших животных после терапии.

Оценка поведенческих реакций животных

По мере нарастания симптомов нарушения мозгового кровообращения, вызванного механической окклюзией лСМА, отмечено нарастание у животных когнитивных расстройств. Задержка латентного периода выхода оперированных животных в центр исследуемого пространства через 24 ч после операции составила 21-30 мин по сравнению с интактным контролем (1-2 мин). Через 48 ч после операции время латентного периода сократилось до 18-21 мин. Через 72 ч время латентного периода сократилось до 17-20 мин. Через неделю латентный период существенно сократился, приблизившись к 7-12 мин. Через три недели латентный период восстанавливался до нормы 1-3 мин.

После терапии эффект исследуемых веществ в течение первых 48 ч статистически не отличался. Время латентного периода составляло: через 24 часа - 21-24 мин для обоих препаратов гистохром/GluNAZ; через 48 часов 13-16/11-14 мин, соответственно; через 72 часа 12-16/7-10 мин; через неделю 9-12/3-7 мин; через три недели 7-12/3-6 мин. В промежутках животные не тестировались, что исключало фактор тренировки.

На фиг. 1 представлены результаты исследования поведенческой реакции крыс после ОНМК. Выход животного в центр поля.

Оценка неврологических нарушений

Оценку неврологических нарушений проводили по шестибальной шкале Menzes. Она состоит из следующих позиций: 6 - отказ вытянуть левую переднюю лапу полностью; 5 - неустойчивое кружение налево; 4 - постоянное кружение налево; 3 - падение налево; 2 - никакого движения; 1 - отсутствие спонтанных движений; 0 - подавленный уровень сознания. Оценку симптомов по шкале проводили за сутки до операции, и после через 6, 12, 24, 48 и 72 ч, затем 7, 14 и 21 суток. У контрольных животных после операции отмечен подавленный уровень сознания. Около 40% животных в контроле погибли, у остальных крыс неврологический статус восстанавливался медленно. Через 48 ч крысы начинали двигаться с падением и кружением налево. Через 72 ч начинали двигаться с неустойчивым движением налево. Животные экспериментальных групп после терапии препаратами восстанавливались быстрее и уже через 48 ч начинали двигаться с неустойчивым движением налево.

На фиг. 2 представлены результаты исследования неврологического статуса животных после терапии.

Острая токсичность

Для определения токсичности использовали лабораторных белых беспородных мышей. Острую токсичность препаратов оценивали по формуле Кербера:

LD₅₀=LD₁₀₀-Σ(z×d)/m;

где ЛД₅₀ - показатель гибели 50% животных; ЛД₁₀₀ - показатель гибели всех животных; z - половина суммы числа животных, павших от двух последних доз; d - интервал между каждыми двумя последними дозами; m - число животных на каждую дозу [Бойд У. Основы иммунологии, (под ред. Гурвич А.Е.) М.: Мир. 1969. 647 С.]. В результате тестирования препаратов была установлена доза 50%-ной гибели животных: LD₅₀ гистохрома >30 мг/кг; LD₅₀ GluNAZ>1480 мг/кг.

Терапия

Курсовое лечение исследуемыми препаратами проводили согласно инструкциям к применению 1% гистохрома, как препаратом сравнения. Раствор 1% гистохрома вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг, пятикратно, в течение 5 дней, через неделю и через две недели повторяли схему. GluNAZ вводили в той же дозе и по той же схеме, за одним исключением - однократную дозу делили пополам и вводили два раза в сутки. Первую инъекцию препаратов начинали через 15 мин после операции. Следующую инъекцию делали через сутки. Ложнооперированным животным вводили физиологический раствор в эквивалентной дозе по схеме, идентичной введению препаратов.

Измерение артериального давления

Уровень артериального давления (систолического и диастолического, САД/ДАД) измеряли у спящих крыс, чтобы избежать излишнего элемента волнения. Введение исследуемых веществ интактным крысам не вызывал резкого изменения артериального давления, после операции резкого снижения артериального давления также не отмечалось. Результаты представлены в таблице 2.

Электрокардиография

На протяжении всего эксперимента вели мониторинг ЭКГ, частоту сердечных сокращений (ЧСС), а также контролировали температуру и дыхание животных во время и после операции. Для этого была использована приставка к томографу «Animal Physiological Monitoring and Gating System», предназначенная для мониторинга ЭКГ, ЧСС, дыхания и температуры тела животных. Данные ЭКГ снимали у наркотизированных животных. Работу сердечной мышцы регистрировали во II втором отведении.

На фиг. 3 (а-в) представлена ЭКГ крыс до и после индукции острого нарушения мозгового кровообращения по ишемическому типу: а) ЭКГ интактного животного до операции, сердечный ритм в норме; б) состояние тахикардии через 15 мин после операции; в) состояние брадикардии через 1 ч после операции. Через неделю после терапии обоими препаратами ЭКГ и ЧСС стабилизировались до нормы контрольного животного.

Томография и ангиография

Томография головного мозга и ангиография сосудов были выполнены на томографе для экспериментальных исследований «PharmaScan US 70/16» (Bruker) с напряженностью магнитного поля 7.0 Тесла, частотой процессора 300 MHz и катушкой типа BGA 09Р. Используемые протоколы томографии: Turbo spin echo sequence для получения T₁ - взвешенных изображений (T₁-ВИ) и Т₂ - взвешенных изображений (Т₂-ВИ). Используемые протоколы ангиографии: 3 - Dimensional Time of Flight (3D-TOF) ангиография и 2D-TOF flow compensation, PC angiography, Head_Angio.

Перед сканированием животных обездвиживали внутрибрюшинной инъекцией раствора рометара (xylazinum, SPORA, Prague) в концентрации 5,5 мг/кг и раствора реланиума в концентрации 37 мг/кг. Первое сканирование животного проводили до операции, второе сразу после операции.

Трехмерное изображение сосудистого бассейна получали в трехмерном изображении FLASH_3D со следующими параметрами: TR/TE=15.0/2.2; угол наклона 20; поле изображения 4,0/4,0/4,0; эффективная толщина среза 40 мм; перекрытие 40,0 мм; матрица 256/192/192 элементов; одно усреднение сигнала, время сканирования 14 мин. С помощью программного обеспечения томографа была выполнена МIР - реконструкция сосудов (Maximal Intensity Projection) для выявления вазомоторной реакции с использованием пакета ROI (Region of Instrument), предназначенного для обсчета данных. Оценку сосудистого бассейна выполняли после МIР - реконструкции. Диаметр сосудов церебрального бассейна крыс в течение эксперимента измеряли с использованием двух точек устанавливаемых МРТ - курсором: первой - на границе адвентиция / медия латеральной стенки артерии, второй - на границе медия / адвентиция медиальной стенки до и после операции.

На фиг. 4 представлена ангиография ГМ крысы линии Вистар через 15 мин после окклюзии лСМА, где верифицировано отсутствие кровенаполнения артерий средней мозговой артерии после индукции ОНМК. В зоне левого полушария регистрируется потеря сигнала от артерий, а в зоне правого полушария происходит усиление интенсивности сигнала от артерий неповрежденного полушария.

Дальнейший мониторинг артериального кровенаполнения показывает, что постепенно, в течение двух недель происходит перераспределение кровенаполнения по свободным от окклюзии артериям. В контрольной группе животных после операции интенсивность сигнала от артерий неповрежденного полушария интенсивно увеличивалась в течение трех суток, затем начинала снижаться. При оперативной терапии исследуемыми веществами, в интервале терапевтического окна, интенсивность сигнала от артерий левого полушария постепенно увеличивалась в среднем до 24% по сравнению с контролем. Это говорит о восстановлении кровоснабжения мелких артерий после ишемии. Интенсивность сигнала от артерий правого полушария также менялась. У контрольных животных после операции она была увеличена почти до 20% и в течение трех суток постепенно снижалась. Это говорит о перераспределении кровенаполнения мелких артерий. Изменение размеров мозговых артерий (в мм) после окклюзии представлено в таблице 3.

Статистический анализ

Результаты обрабатывали по правилам вариационной статистики с использованием пакета программы MS Office Excel 2003 и пакетом программ STATISTICA 5.5. Достоверность различий между группами вычисляли t-критерием Стьюдента с определением средней арифметической (М) и ее стандартной ошибки (m). Достоверным считали значение при р<0,05. Количество измерений размера сосудов было выполнено программным обеспечением томографа и составило до 90 измерений на каждую крысу (таблицы 2, 3).

Томография

Через сутки после операции у крыс начали появляться гиперинтенсивные зоны в области коры головного мозга. На фиг. 5 (1-16) продемонстрированы участки головного мозга на Т₂-ВИ. Для количественной оценки зоны повреждения, вызванного ишемией, мозг сканировали в трех направлениях: фронтальной, сагиттальной и аксиальной плоскостях. Для получения Т₂-взвешенных изображений (Т₂-ВИ) использовали импульсную последовательность Head_Turbo_RARE_T₂ со следующими параметрами: матрица 256×256, толщина среза 1 мм, площадь обзора 4.0×4.0 см², TR/TE - 2500/33.0 мсек. Для получения T₁-взвешенных изображений (T₁-ВИ) использовали импульсную последовательность Head Turbo RARE T₁: матрица 256×192, толщина среза 1 мм, площадь обзора 4.0×4.0 см², TR/TE - 1300/9.0 мсек с использованием программного обеспечения томографа ParaVision 3.0.2. Сканирование животных проводили до операции (контроль) и через 15 мин после операции. Далее мониторинг велся через 1, 2, 3, 6, 12, 24, 48 и 72 ч; затем - через 7, 14 и 21 суток [Агафонова И.Г., Колосова Н.Г. и др. Влияние гистохрома на состояние сосудов головного мозга и поисково-исследовательскую активность преждевременно стареющих крыс OXYS. Магнитно-резонансная томография в диагностике хронической ишемии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т. 143. Вып. 4. С. 446-450].

На фиг. 5 показаны изображения ГМ до операции (1-8) и после операции (9-16). На изображениях (12-14) - полукругом обведен участок мозга, где прослеживаются зоны точечного ишемического повреждения в виде гиперинтенсивных точек на Т₂-ВИ по сравнению с контролем (3-5). Зона отека, вызванная ишемией, наблюдалась в левом полушарии. Через 24 ч после ишемии на Т₂-ВИ определялась зона повышенного сигнала за счет развития цитотоксического отека. По результатам морфометрического анализа показано, что поврежденное полушарие деформировано, и его объем увеличивался на 11-14% по сравнению с контралатеральным полушарием за счет субарахноидального пространства и сдавливания желудочков. К концу недели у оперированных крыс объем деформированного полушария уменьшался, не достигая первоначального на 3-6%. Объем отека контрольных оперированных крыс верифицировался уже через сутки на Т₂-ВИ и через неделю достигал 39±4,3% от всего объема полушария, (Р<0,05).

Полученные данные показывают, что на разработанной модели ишемии мозга экспериментальных животных, основной очаг поражения развивается в первые сутки после начала ишемии. При этом у контрольных оперированных животных очаг продолжал увеличиваться за счет зоны пенумбры. У леченых животных зона цитотоксического отека не увеличивалась.

Локализация очагов повреждения полностью совпадала с гипотетическими зонами мозга, ответственными за иннервацию конечностей животных. Степень ответа поврежденной лапы (контралатеральной поврежденному полушарию) снижалась постепенно в течение двух недель и к концу этого периода почти приближалась к норме до 92±2,6%, (р<0,05).

У леченых крыс процесс восстановления поврежденной зоны мозга происходил быстрее, к концу первой недели степень ответа составляла 87±5,4%, (Р<0,05). При этом через две недели восстанавливался вес животных (контрольных и леченых) со 186,5±5,2 г после операций почти до первоначального 226,2±3,3 (по сравнению с интактными - 241±2,1).

В течение «терапевтического окна» - отрезка времени, равного 3-6 ч, проводили терапию исследуемыми препаратами. Длительность существования «ишемической полутени» индивидуальна для каждого животного. У более гиперактивных крыс (предрасположенных к стрессу) этот эффект наблюдался быстрее, по сравнению с крысами более пассивного статуса, поэтому в эксперименте оценивали крыс, предрасположенных к стрессу. Формирование очага ишемии у контрольных оперированных животных увеличивалось в течение недели. У леченых животных зона отека после ишемии была меньших размеров (таблица 2).

При окклюзии лСМА происходит целый каскад повреждений, в частности агрегация тромбоцитов и увеличение вязкости крови, что приводит к образованию микротромбов. Повреждение эндотелиального слоя сосудистой стенки также ведет к патологическим последствиям, а именно возможна гиперплазия интимы или атеросклеротическое поражение медии. При снижении кровотока происходит изменение функции эндотелия (выделение оксида азота, вызывающего дилатацию сосуда) [Agafonova I.G., Kotel’nikov V.N., Eichoff U. // Applied Magnetic Resonance. 2014. Vol. 45. No 5. Р. 527-536].

В таблице 4 представлены данные изменения интенсивности сигнала (ИС) от поврежденного и неповрежденного полушарий в двух режимах.

Как видно из таблицы 4, ИС на Т₂-ВИ ткани левого полушария (К*) через 24 ч значительно более выражена относительно ткани симметричного правого полушария. Это говорит о нарастании цитотоксического отека после ишемии. Через 72 ч отек продолжал увеличиваться. После терапии гистохромом и GluNAZ через 48 ч на Т₂-ВИ интенсивность сигнала снижена по сравнению с К* на 23-28%, через 72 ч область отека не увеличивалась.

На фиг. 6 (а-б) представлены места локализации цитотоксического отека у крыс после ОНМК. Стрелками указаны гиперинтесивные области двух смежных по вертикали срезов головного мозга животного. В левом полушарии, в области лСМА выявлены изменения, соответствующие острому нарушению кровообращения. Определяется гиперинтенсивная зона MP-сигнала на Т₂-ВИ, соответствующая зоне нарушения мозгового кровообращения по ишемическому типу. У оперированных животных увеличение объема цитотоксического отека отмечено через 24 ч, которое продолжает увеличиваться и через 72 ч. Исследуемые вещества сдерживают увеличение зоны ишемии. Причем эффект GluNAZ проявляется уже через 24 ч, у гистохрома эффект более пролонгированный и отмечен через 48 ч. Основными зонами ишемического повреждения в данной модели является кора, включая сенсомоторную область, и область стриатума.

На фиг. 7 показано морфометрическое измерение патологических зон у крыс после операции с помощью программного обеспечения томографа ROI (Region of Interest). Зеленым цветом выделена зона отека кортикальной зоны через 24 ч. Желтым цветом выделен участок ишемии, который появляется через 72 ч у животных без терапии. Зона отека оперированных контрольных животных продолжает увеличиваться в течение трех суток, как в корковом слое, так и в области стриатума. В таблице 5 представлены данные по изменению объема отека после терапии.

Как видно из таблицы 5, объем отека увеличивался на протяжении трех суток до 34-40% по отношению к среднему объему мозга крыс. У животных после гистохрома зона отека выросла примерно в среднем до 17-19% по отношению к среднему объему головного мозга крыс. Этот объем цитотоксического отека оставался увеличенным на протяжении 72 ч. Затем зона отека постепенно уменьшалась.

GluNAZ также задерживал увеличение зоны отека до 19-21% по отношению к общему-объему головного мозга крыс. Эффективность действия препарата наблюдалась уже через 24-48 ч. Это может свидетельствовать о начале реперфузии и снижении цитотоксического отека в данной зоне патологии. Возможно, оба препарата снижают процессы тромбообразования и восстанавливают мозговое кровообращение в капиллярах и мелких артериях.

Для верификации нарушения и/или восстановления проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) использовался контрастный препарат «Магневист» (Schering AG, Германия). Накопление контраста в очаге ишемии связано с повреждением эндотелия капилляров. В течение формирования ишемического повреждения на T₁-ВИ получали сигнал от ткани, который соответствовал локализации повреждения. Используемый контрастный агент снижает время спин-спиновой релаксации, тем самым, усиливая сигнал на T₁-ВИ.

На фиг. 8 (а-б) показана динамика накопления контрастного препарата в зоне отека после индукции ОНМК у крыс. На фиг. 8 (б) стрелками показаны участки повреждения ГЭБ и накопления контраста.

Результаты исследований величины зоны отека во время терапевтического окна показывают, что заявляемое средство проявляет антиоксидантные свойства подобно гистохрому. Однако эффект GluNAZ проявляется быстрее по сравнению с гистохромом. Заявляемое средство на протяжении 24-48 ч снижает зону ишемии на 18% быстрее по сравнению с гистохромом. Низкая токсичность GluNAZ, хорошая растворимость и длительность хранения выгодно отличают заявляемое средство от гистохрома.

По данным ЭКГ и ЧСС инъекция GluNAZ в концентрации, превышающей терапевтическую дозу более чем в 10 раз, не оказывает негативного эффекта на увеличение частоты сердечных сокращений у интактных животных. При исследовании возможных побочных эффектов в экспериментах in vivo (МРТ, МРА) проводили мониторинг состояния всех внутренних органов крыс, особенно сосудов, печени, почек, селезенки. После применения исследуемых веществ никаких побочных эффектов на внутренние органы животных не отмечены.

Claims (1)

1. Применение 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинона в качестве средства для лечения ишемии сосудов головного мозга при острых нарушениях мозгового кровообращения.

Images