RU2615346C2 - Терапевтическая вакцина против рака - Google Patents
Терапевтическая вакцина против рака Download PDFInfo
- Publication number
- RU2615346C2 RU2615346C2 RU2013143741A RU2013143741A RU2615346C2 RU 2615346 C2 RU2615346 C2 RU 2615346C2 RU 2013143741 A RU2013143741 A RU 2013143741A RU 2013143741 A RU2013143741 A RU 2013143741A RU 2615346 C2 RU2615346 C2 RU 2615346C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cancer
- cells
- cancer cells
- vaccine
- mycobacterium
- Prior art date
Links
- 229940022511 therapeutic cancer vaccine Drugs 0.000 title description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 211
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 188
- 241001494992 Mycobacterium indicus pranii Species 0.000 claims abstract description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 35
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 25
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 38
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 30
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 269
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 46
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 36
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 33
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 30
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 27
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 15
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 13
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 13
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 13
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 12
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 10
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 10
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 10
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 6
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 6
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101100327819 Caenorhabditis elegans chl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100020870 La-related protein 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050008265 La-related protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910017262 Mo—B Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000545499 Mycobacterium avium-intracellulare Species 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100058191 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) bcp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101710148027 Ribulose bisphosphate carboxylase/oxygenase activase 1, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KYIKRXIYLAGAKQ-UHFFFAOYSA-N abcn Chemical compound C1CCCCC1(C#N)N=NC1(C#N)CCCCC1 KYIKRXIYLAGAKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- FMWLUWPQPKEARP-UHFFFAOYSA-N bromodichloromethane Chemical compound ClC(Cl)Br FMWLUWPQPKEARP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000010453 lymph node cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940115256 melanoma vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011338 personalized therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5152—Tumor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения вакцины лечения рака у млекопитающего. Раковая вакцина включает экспрессирующие один или более антигенов раковые клетки и эксципиенты, где указанный антиген экспрессируется раковыми клетками с повышенным уровнем p38 и где указанные раковые клетки получены приведением в контакт указанных раковых клеток и Mycobacterium w. Группа изобретений относится также к способу лечения рака у млекопитающего, включающему введение млекопитающему терапевтически эффективного количества вышеуказанной раковой вакцины. Использование данной группы изобретений позволяет индуцировать как гуморальный, так и клеточно-опосредованный иммунный ответ против гомологичных, а также гетерологичных опухолевых клеток. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 4 пр., 1 табл., 10 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Область настоящего изобретения относится к терапевтическим вакцинам, предназначенным для применения в лечении злокачественных опухолей, обладающим иммуногенностью по отношению к гетерогенным раковым антигенам, специфичным для ткани/органа. Изобретение также предоставляет способ для приготовления указанного.
Уровень техники
Известно, что злокачественные опухоли содержат в своем составе много различных типов клеток. Эти клетки имеют гены и белки, которые сильно отличаются друг от друга. И растут они с различными скоростями. Это известно как гетерогенность. Гетерогенность приводит также к необходимости для эффективного лечения злокачественных опухолей соединять химиотерапию с радиотерапией и/или другим типом химиотерапии в комбинации.
У специфичного для ткани/органа рака число хорошо охарактеризованных антигенов недостаточно. Для преодоления этой проблемы в качестве антигена используют раковые клетки. Использование раковых клеток обеспечивает преимущество ассортимента антигенов, присутствующих на раковых клетках.
Раковые клетки могут быть отобраны у тех же самых пациентов (аутологичные) или у другого пациента (аллогенные).
Использование в вакцинах аутологичных раковых клеток представляет собой персонализованную терапию и сопряжено с практическими трудностями. Аутологичные клетки могут не быть доступными у всех пациентов. Если же они доступны, они могут быть не в нужном количестве и/или не нужного качества. Этот подход также отнимает много времени. Этот подход связан также с трудностями урегулирования.
Заманчиво использовать аллогенные клетки в качестве антигена в терапевтической вакцине. Однако такой подход чреват отсутствием общего антигена (общих антигенов), поскольку раковые клетки из ткани/органа по своей природе гетерогенны. Аллогенные раковые клетки не способны обеспечить иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа. К примеру линии аллогенных клеток рака поджелудочной железы Mia-paca-2 и Panc-1 создают иммунный ответ на самих себя. Однако линия клеток Mia-paca-2 не может обеспечить иммунный ответ на Panc-1, а Panc-1 не может обеспечить иммунный ответ на Mia-paca-2.
Это можно преодолеть использованием в вакцине множественно гетерогенных аллогенных раковых клеток или идентификацией антигена, присутствующего в раковой ткани, и использованием специфической вакцины к нему.
Гетерогенность опухоли затрудняет получение терапевтической вакцины с одиночным антигеном для обеспечения иммунной реакции на все клетки/большинство клеток, содержащихся в опухоли. По этой причине необходимо в терапевтической вакцине объединять аллогенные клетки/антигены, чтобы она была эффективной против опухоли в целом.
Было продемонстрировано, что проблема гетерогенности рака/опухолей разрешается использованием в качестве антигена более одной клетки. Emens et al. продемонстрировали использование более чем одной линии аллогенных клеток для перекрывания антигенного ассортимента гетерогенной опухоли/рака (Emens L.A. et al; J. Clin. Oncol. 2009 Dec 10; 27(35): 5911-8). В то же время Laheru D. et al. продемонстрировали использование GM CSF с целью повышения иммуногенности вакцины с аллогенными раковыми клетками для лечения рака. (Clin. Cancer Res. 2008 Mar 1; 14(5): 1455-63).
To, что фиксированные формалином опухолевые клетки эффективно индуцируют противоопухолевый иммунитет как в профилактических, так и в терапевтических условиях, было объяснено Chikage Obata в Journal of dermatological science, Volume 34, issue 2, Pages 209-219 (May 2004). Результаты клинического исследования противоопухолевой вакцины с фиксированными формалином аутологичными клетками у пациентов с множественными формами глиобластомы опубликованы Ishikawa Е. в Cancer Sci. 2007. Aug; 98(8): 1226-33. Epub 2007 May 22. В обоих исследованиях была установлена эффективность по отношению к гомологичным раковым клеткам/опухолям, Но никто не продемонстрировал убиение вакциной гетерогенных раковых клеток, специфичных для ткани/органа.
Поэтому существует необходимость получения терапевтической вакцины с использованием в качестве антигена аллогенных клеток для применения в лечении рака, которая вызывает иммунную реакцию на гетерогенный раковый антиген (антигены), специфичный (специфичные) для ткани/органа. Например, терапевтическая вакцина для рака поджелудочной железы, использующая линию клеток Mia-paca-2, вызывает иммунную реакцию на Panc-1 и другие клетки рака поджелудочной железы.
Гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа, - это раковые клетки, которые присутствуют в тех же самых ткани/органе или происходят из тех же самых ткани/органа, но не способны создавать иммунный ответ и/или реагировать с иммунным ответом, создаваемым раковыми клетками, которые присутствуют в тех же самых ткани/органе или происходят из тех же самых ткани/органа.
Методы отбора раковых клеток и их сохранения или их поддержания хорошо известны. Эти методы можно использовать как для аутологичных, так и для аллогенных клеток. Список некоторых имеющихся линий аллогенных раковых клеток для разных типов опухолей приведен далее. Линии клеток могут быть получены из различных хранилищ, таких как American Type Culture Collection (USA); Cell bank Australia (Australia); Coriell Cell Repositories (New Jersey USA); European Collection of Cell Cultures (ECACC) (UK); German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (Germany); Japanese Collection of Research Bioresources (JCRB) (Japan); German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (Germany); Korean Cell bank (Korea); RIKEN Biresource Centre (Japan); Human Genetics Resource Center (USA); National Centre for Cell Science (India); MMRRC: Mutant Mouse Regional Resource Centers (USA); National Human Neural Stem Cell Resource (USA); UK Stem Cell Bank (UK) и NCCS (India).
Эти или новые линии клеток или специфические раковые клетки могут быть также выделены, как описано в работе Eton О. et al. Active immunotherapy with В irradiated autologous whole melanoma cells plus DETOX in patients with metastatic melanoma. // Clinical cancer research, March 1998, Vol.4, 619-627. Свежую опухоль получали во время хирургической операции в отделе замороженных препаратов и измельчали нарезанием. Для получения максимального выхода жизнеспособных опухолевых клеток для приготовления вакцины опухолевую массу фрагментировали с помощью коллагеназы 1 типа (2 мг/мл) и ДНКазы IV типа (0,4 мг/мл) по прописи Sigma chemical Co., St Loius, MO, ссылка 25. Эти ферменты могут изменять иммуногенность полученного препарата клеток. Диссоциированные клетки промывали HBSS с гентамицином и ресуспендировали в равных объемах HBSS и охлажденного раствора 10% ДМСО +4% человеческого сывороточного альбумина. Аликвоты, содержавшие 1,5-2×107 жизнеспособных опухолевых клеток, хранили в жидком азоте.
Robert О et al. (Induction of Delayed-Type Hypersensitivity to Autologous Tumor is Associated with Improved Survival // Cancer biotherapy and Radiopharmaceuticals. Volume 17, Number 1, 2002) описали применение облученных клеток из линий аутологичных опухолевых клеток как специфичную для пациента вакцинотерапию у 125 пациентов с метастазирующим раком. Они создали краткосрочные культуры чистых опухолевых клеток для использования в качестве вакцин из аутологичных опухолевых клеток в попытке исследовать эффекты специфичной для пациента иммунотерапии. От пациентов с метастазирующим раком получали хирургически удаленные свежие опухоли. Жизнеспособные линии опухолевых клеток (5×107) доращивали до 108 клеток, облучали и криоконсервировали для клинического использования. После исходного теста на гиперчувствительность замедленного типа (delayed-type hypersensitivity, DTH) к внутрикожному введению 106 облученных аутологичных опухолевых клеток пациенты получали 3 еженедельных подкожных инъекции 107 клеток. Затем на 4-й неделе проводили повторный DTH тест, после чего пациенты получали ежемесячные вакцинации в течение 5 месяцев. Позитивный DTH тест определяли как уплотнение размером ≥10 мм; выживание отсчитывали от первого DTH теста.
Опубликована работа Dillman R.O. et al. Establishing in vitro cultures of autologous tumor cells for use in active specific immunotherapy in emphasis // Tumor Immunol. 1993 Jul; 14(1): 65-69. Авторы отбирали свежие опухоли и пытались создать краткосрочные культуры опухолевых клеток для получения 108 клеток, которые потом могли быть использованы в программах получения вакцин с аутологичными опухолевыми клетками. Свежие опухоли механически обрабатывали, чтобы положить начало первичным культурам в среде RPMI-1640, содержащей 1 мМ пируват натрия, 2 мМ глутамин, 10 мМ N-(2-оксиэтил)-пиперазин-N'-(2-этансульфоновую) кислоту, 15% сыворотку коровьего эмбриона (FBS) и антибиотики, и инкубировали при 37°C в 5% CO2. Авторам удалось вырастить 87 культур всего из 142 опухолей [61%, (95% доверительный интервал 55-68%)], в том числе 39 из 58 меланом (67%), 10 из 10 карцином клеток почки (100%), 14 из 14 сарком (100%) и 23 из 54 различных аденокарцином (43%).
Опубликована работа Jaffee Е.М. Development and characterization of a cytokine secreting pancreatic adenocarcinoma vaccine from primary tumors for use in clinical trials // Cancer journal from scientific American, Vol.4, Issue 3, PP: 194. Клетки свежеразрушенной опухоли высевали в 2-х повторах в количестве по 2×106 клеток во флаконы 25 см2. Для каждого варианта порознь определяли условия роста, а также комбинации других ростовых добавок. Исходными компонентами проверяемых ростовых сред были различные среды, включая RPMI, DMEM, Ham's и Aim V, и различные количества FBS. После установления оптимальной среды и сыворотки систематически проверяли добавки. Количество каждой добавки доводили до такого уровня, когда в культурах начинали преобладать либо клетки эпителия, либо клетки типа фибробластов.
Методы выращивания первичных клеток и опухолевых клеток и превращения их в клеточные линии описаны также в книге «Culture of animal cells - A manual of Basic technique», Fifth edition, Protocol-24.3, pp: 429-430.
Список раковых клеток, доступных для получения из различных хранилищ
Рак шеи: HeLa S3, HeLa 229, H1HeLa, Hs 588.T, GH329, GH354, HeLa NR1, C-4 I, C-4 II, DoTc2 4510, C-33 A, SW756 SiHa
Рак толстой кишки: NCI-H548, Hs 255.T, HCT-8 (HRT-18), Hs 675.T
Рак мочевого пузыря: Hs 195.Т, Hs 228.T, Hs 172.T5637, HT-1376, HT-1197, UM-UC-3, SW 780, J82 SCaBER, T24, TCCSUP, Hs 789.T, Hs 769.T, RT4
Рак почки: A704, A-704, NCI-H1373, NCI-H1395, Hs 618.T, SK-LU-1, HCC2935, HCC4006, HCC827, ACHN 786-0769-P, Caki-2, HTB-47, A-498, A-549, A-427, SW156, G-402, Hs 926.T, G-401
Рак молочной железы: Hs 274.T, Hs 280.T, Hs 281.T, Hs 343.T, Hs 362.T, Hs 739.T, Hs 741.T, Hs 742.T, Hs 190.T, Hs 319.T, Hs 329.T, Hs 344.T, Hs 350.T, Hs 371.T, Hs 748.T, Hs 841.T, Hs 849.T, Hs 851.T, Hs 861.T, Hs 905.T, Hs 479.T, Hs 540.T, Hs 566(B).T, Hs 605.T, Hs 606, BT-20, HT 762.T, UACC-812, HCC1954, Hs 574.T, BT-483, BT-549, DU4475, Hs 578T, BT-474, HCC1806, UACC-893, HCC38, HCC70, HCC202, HCC1143, HCC1187, HCC1395, HCC1419, HCC1500, HCC1599, HCC1937, HCC2157, HCC2218, HCC1569
Рак яичников: Caov-3, TOV-21G, Hs 38.T, Hs 571.T, ES-2, ТЕ 84.T
Рак поджелудочной железы: BxPC-3, HPAF-II, HPAC, Panc 03.27, Panc 08.13, Panc 02.03, Panc 02.13, Panc 04.03, Panc 05.04, Capan-2, CFPAC-1, PL45, Panc 10.05, MIA PaCa-2, PANC-1
Рак легких: Hs 229.Т, NCI-H2135, NCI-H2172, NCI-H2444, NCI-H835, UMC-11, NCI-Н727, NCI-H720, Hs 573.Т, NCI-H596, NCI-H1688, NCI-H1417, NCI-H1836, NCI-Н1672, HLF-a, NCI-H292, NCI-H2126, Calu-6, NCI-H2170, NCI-H520, SW 900, Hs 57.T
Колоректальный рак: NCI-H716, NCI-H747, NCI-H508, NCI-H498, SNU-C2B, SNU-С2А, LS513, LS1034, LS411N, WiDr, COLO 320DM, COLO 320HSR, DLD-1, HCT-15, SW480, SW403, SW48, SW1116, SW948, SW1417, LS 123, LS 180, LS 174T, C2BBe1, Hs 257.T, Hs 587.lnt, Caco-2, HT-29, HCT 116, ATRFLOX, SW1463, Hs 200.T, Hs 219.T, Hs 722.T
Немелкоклеточный рак легких: NCI-H1581, NCI-H23, NCI-H522, NCI-H1435, NCI-H1563, NCI-H1651, NCI-H1734, NCI-H1793, NCI-H1838, NCI-H1975, NCI-H2073, NCI-H2085, NCI-H2228, NCI-H2342, NCI-H2347, NCI-H2066, NCI-H2286, NCI-H1703, SW 1573, NCI-H358, NCI-H810, DMS 79, DMS 53, DMS 114, SW 1271, NCI-H2227, NCI-HI 963, SHP-77, H69AR
Рак кожи: 182-PF, SK 166-ME, SK, ТЕ 354.T, A-431, A431NS, A253*, Hs 357.T, Hs 941.T, Hs 295.T, Hs 63.T, Hs 892.T, Hs 898.T, Hs 416.T, Hs 925.T, Hs 156.T, WM-115, Hs 600.T, Hs 688(A).T, Hs 839.T, Hs 852.T, Hs 906(A).T, Hs 906(B).T, Hs 908.Sk, Hs 936.T, Hs 936.T (C1), Hs 939.T, A101D, CHL-1, HMCB (Human Melanoma Cell Bowles), C32TG, C32, G-361, A-375, A375.S2, COLO 829, Hs 940.T, HT-144, Malme-3M, RPMI-7951, SK-MEL-5, SK-MEL-24, SK-MEL-28, SK-MEL-31, WM278, 451 Lu, WM1552C, WM35, WM793B, 1205Lu, WM39, A7
Рак печени: C3A, SNU-398, SNU-449, SNU-182, SNU-475, Hep 3B2.1-7, Hep G2, SNU-387, SNU-423, PLC/PRF/5
Рак мозга: A172, U-138 MG, DBTRG-05MG, LN-18, LN-229, U-87 MG, U-118 MG, M059K, M059J, LNZTA3WT4, LNZTA3WT11, Hs 683, PFSK-1, CHP-212, IMR-32, H4
Рак костей/костного мозга: Hs 819.T, SW 1353, TF-1,TF-1a, TF-1.CN5a.1, HEL 92.1.7, KG-1, Hs 709.T, Hs 454.T, NCI-H929, 143.98.2, G-292, clone A141B1, MG-63, HOS, KHOS/NP (R-970-5), KHOS-240S, KHOS-321H, MNNG/HOS (CI #5), Hs 3.T, Hs 39.T, Hs 184.T, Hs 188.T, Hs 387.T, Hs 704.T, Hs 707(A).T, Hs 735.T, Hs 755(B).T, Hs 781,T, Hs 792(B).T, Hs 805.T, Hs 811.T, Hs 866.T, Hs 870.T, Hs 871.T, Hs 889.T, Hs 890.T, R-970-5, ТЕ 417.T, ТЕ 418.T, TO 203.T, HT 728.T, Hs 14.T, T1-73, 143 В, 143B PML BK TK, Saos-2, U-2 OS, Hs 88.T, Hs 864.T, SJSA-1, Hs 900.T, Hs 903.T, Hs 919.T, SK-ES-1, Hs 706.T, Hs 737.T, Hs 821.T, Hs 846.T, Hs 883.T, Hs 822.T, Hs 863.T, RD-ES, ТЕ 76.T, ТЕ 130.T, Hs 814.T, Hs 324.T, SW 982, MEG-01
Рак крови: SUP-B15, CCRF-SB, 8E5, TALL-104, MOLT-4, CCRF-CEM, CCRF-HSB-2, MOLT-3, CEM/C2, CEM/C1, THP-1, TIB-202, AML-193, Kasumi-1, Kasumi-3, BDCM, AML14.3D10/CCCKR3 Clone 16, Kasumi-6, HL-60, Clone 15 HL-60, HL-60/MX2, HL-60/MX1, J.CaM1.6, Jurkat, Clone E6-1, J.RT3-T3.5, D1.1, J45.01, MV-4-11, Kasumi-4, KU812, KU812E, KU812F, RPMI 6666, U266B1, RPMI 8226, Mo, Mo-B, SUP-T1, JM1, GDM-1, CESS, ARH-77, 1A2, H9/HTLV-IIIB, HuT 78, JSC-1, BCP-1, 2B8, Daudi, EB-3, Raji, Jiyoye, NAMALWA, HS-Sultan, CA46, GA-10, GA-10 (Clone 4), GA-10 (Clone 20), NC-37, 20B8, HKB-11.1G2, HH, H9, MJ, BC-1, BC-2, Toledo, U-937, TUR, DB, BC-3
Саркома: ТЕ 441.T, ТЕ 617.Т, Hs 729.Т, ТЕ 381.Т, RD, А-673, Hs 729, А-204, Hs 94.Т, Hs 132.Т, Hs 127.Т, Hs 701.T, HT-1080, Hs 778(A).Т, Hs 778(В).Т, Hs 15.Т SW 684, ТЕ 115.T, Hs 93.T, Hs 934.T, Hs 935.T
Рак лимфатических узлов: Hs 604.Т, Hs 751.Т, Hs 445, Hs 611.T, Hs 616, Hs 505.T, Hs 491.T
Сущность изобретения
Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы изменить профиль иммуногенности раковых клеток таким образом, чтобы они стали лучшим иммуногеном.
Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы изменить профиль иммуногенности раковых клеток таким образом, чтобы они стали иммуногенными для гетерогенного ракового антигена (гетерогенных раковых антигенов), специфичного (специфичных) для ткани/органа.
Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить терапевтическую вакцину, предназначенную для применения в лечении злокачественной опухоли (злокачественных опухолей), обладающую иммуногенностью для гетерогенного ракового антигена (гетерогенных раковых антигенов), специфичного (специфичных) для ткани/органа.
Еще одна цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить способ приготовления терапевтической вакцины, предназначенной для применения в лечении злокачественной опухоли (злокачественных опухолей), обладающей иммуногенностью для гетерогенного ракового антигена (гетерогенных раковых антигенов), специфичного (специфичных) для ткани/органа.
Еще одна цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить антиген для терапевтической вакцины, предназначенной для применения в лечении злокачественной опухоли (злокачественных опухолей), которая обеспечивает иммунный ответ на гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа.
Еще одна цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить аллогенную раковую вакцину, не индуцирующую канцерогенез.
Еще одна цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить терапевтические вакцины против злокачественной опухоли (злокачественных опухолей), которые стимулируют клеточный иммунный ответ, специфичный как для гомологичных, так и для гетерологичных раковых клеток, специфичных для ткани/органа.
Еще одна цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить терапевтические вакцины против злокачественной опухоли (злокачественных опухолей), которые стимулируют гуморальный иммунный ответ, специфичный как для гомологичных, так и для гетерологичных раковых клеток, специфичных для ткани/органа.
Описание рисунков
Фиг.1: Иммунореактивность препарата раковой вакцины по отношению к гомологичным раковым клеткам из поджелудочной железы, определенная путем выявления антител с помощью вестерн-блотирования в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг.2: Иммунореактивность препарата раковой вакцины в соответствии с настоящим изобретением к гомологичным и гетерологичным раковым клеткам из поджелудочной железы, определенная по числу клеток, секретирующих ИФН-γ.
Фиг.3: Иммунореактивность препарата раковой вакцины в соответствии с настоящим изобретением к гомологичным и гетерологичным раковым клеткам из поджелудочной железы, определенная по убиению гомологичных и гетерологичных раковых клеток.
Фиг.4: Иммунореактивность препарата раковой вакцины в соответствии с настоящим изобретением к гомологичным и гетерологичным раковым клеткам из поджелудочной железы, определенная по числу клеток, секретирующих ИФН-γ.
Фиг.5: Иммунореактивность препарата раковой вакцины в соответствии с настоящим изобретением к гомологичным и гетерогенным раковым клеткам из поджелудочной железы, определенная путем выявления антител с помощью вестерн-блотирования гомологичных и гетерогенных раковых клеток в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг.6: Добавление «Mycobacterium W» усиливает эффекторную функцию убитых нагреванием раковых клеток как терапевтической раковой вакцины.
Фиг.7: Добавление «Mycobacterium W» усиливает эффекторную функцию обработанных формальдегидом раковых клеток как терапевтической раковой вакцины.
Фиг.8: Добавление различных адъювантов повышает эффективность использующей убитые раковые клетки терапевтической раковой вакцины, предназначенной для применения в лечении злокачественных опухолей.
Фиг.9: Регрессия in vivo опухоли меланомы: лечение рака у млекопитающего в соответствии с настоящим изобретением без ограничения пределов охвата изобретения.
Фиг.10: Регрессия in vivo опухоли поджелудочной железы: лечение рака у млекопитающего в соответствии с настоящим изобретением без ограничения пределов охвата изобретения.
Детальное описание изобретения
Непредсказуемо наблюдается, что раковые клетки изменяют свои иммунологические характеристики в присутствии Mycobacterium w. После изменения иммунологических характеристик раковые клетки удерживают иммуноген, которым владеют совместно с гетерогенными раковыми клетками, специфичными для ткани/органа. Однако приобретенный таким образом иммуноген не реагирует с нормальными клетками, а также с опухолями, появляющимися в другом органе/ткани.
Поэтому согласно настоящему изобретению иммуногенный профиль раковых клеток, происходящих из органа, в присутствии Mycobacterium w (Mw) становится измененным. Благодаря измененному иммуногенному профилю раковые клетки осуществляют иммунную реакцию в ответ на гомогенные клетки и на гетерогенные клетки, присутствующие в том же самом органе/ткани (появляющиеся из того же самого органа/ткани). Обычно создание иммунной реакции на гетерогенную клетку не наблюдается в раковых клетках.
Раковые клетки в соответствии с настоящим изобретением изменяют иммунологический профиль, когда выравнивается уровень внутриклеточного p38. Раковые клетки по настоящему изобретению могут быть живыми, убитыми или в состоянии старения.
Раковые клетки по настоящему изобретению могут быть убитыми, но не ограничены их физической обработкой и/или химической обработкой.
Раковые клетки по настоящему изобретению убиваются нагреванием, кипячением или обработкой паром.
Раковые клетки по настоящему изобретению убиваются обработкой химическими соединениями/веществами, такими как альдегид, кетон, кислота, щелочь, соль, простой эфир, сложный эфир и т.д.
Отношение числа раковых клеток к числу клеток Mycobacterium w в соответствии с настоящим изобретением находится в диапазоне от 10:1 до 1:10000, что приводит к изменению иммунологических характеристик раковых клеток.
Отношение числа раковых клеток к числу клеток Mycobacterium w в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно находится в диапазоне от 1:10 до 1:1000.
Наиболее предпочтительное отношение числа раковых клеток к числу клеток Mycobacterium w в соответствии с настоящим изобретением находится в диапазоне от 1:10 до 1:100.
В соответствии с настоящим изобретением раковые клетки для приобретения этого нового иммунологического профиля не обязательно должны находиться внутри тела.
Время, в течение которого присутствие Mycobacterium w необходимо для изменения иммунологического профиля раковых клеток, составляет 1 минуту или более. Этот промежуток времени может ограничиваться моментом введения раковых клеток в тело.
Температура, при которой имеет место изменение иммунного профиля раковых клеток, находится в диапазоне от 1° до 60°C.
Окружающая среда, необходимая для изменения иммунного профиля раковых клеток, выбрана из солевого раствора, буфера, питательной среды или их комбинации. Питательной средой является среда, в которой раковые клетки размножаются и/или поддерживаются живыми.
В соответствии с настоящим изобретением раковые клетки погибают в присутствии Mycobacterium w.
В соответствии с настоящим изобретением степень гибели, индуцированной Mycobacterium w, составляет более 10% от общего количества клеток, предпочтительно более 30% и наиболее предпочтительно от 60% до 80% от общего количества раковых клеток.
Раковые клетки для целей настоящего изобретения могут быть живыми раковыми клетками или убитыми раковыми клетками.
В соответствии с настоящим изобретением раковые клетки, приобретшие иммунологический профиль, сохраняют его, даже будучи убитыми. Раковые клетки, приготовленные в соответствии с настоящим изобретением, индуцируют иммунную реакцию.
Раковые клетки, используемые в настоящем изобретении, могут быть аллогенными раковыми клетками или аутологичными раковыми клетками. Аллогенные раковые клетки выделяют, очищают, получают и/или модифицируют из другого организма/млекопитающего/человека/пациента того же биологического вида. Аллогенные раковые клетки могут быть также созданной и/или иммортализованной линией клеток, произведенной или поставленной из хранилища.
Аутологичные раковые клетки выделяют, очищают, получают и/или модифицируют из того же самого организма/млекопитающего/человека/пациента
Mycobacterium w - это непатогенный штамм Mycobacterium spps, выделенный из почвы. Широкие сопоставления геномов вместе с такими методами молекулярного филогенетического анализа, как флуоресцентный анализ полиморфизма длин амплифицированных фрагментов (fluorescent amplified fragment length polymorphism, FAFLP), генотипирование на основе консенсуса энтеробактериальных межгенных повторов (enterobacterial repetitive intergenic consensus, ERIC) и секвенирование предполагаемых ортологов (candidate orthologues sequencing), показали, что штамм Mw был предком высоко патогенного комплекса Mycobacterium avium- intracellulare complex (MAIC), который не претерпел паразитической адаптации вследствие редукционной генной эволюции и поэтому предпочитал жизненный стиль свободного существования. Дополнительный анализ позволил предположить, что бациллы MAIC существовали в водной фазе совместно с ранними патогенными формами Mycobacterium, задолго до того, как последняя разделилась на «специалистов» (Ahmed N, et al. (2007) Molecular Analysis of a Leprosy Immunotherapeutic Bacillus Provides Insights into Mycobacterium Evolution. // PLoS ONE 2(10): e968). При тестировании уреазой, гидролизом твином 80 и ниацином организм дает отрицательные результаты, но дает положительный результат в тесте восстановления нитрата.
Измененный иммунологический профиль клеток проявляется в измененной иммунной реакции иммунной системы организма, которому введена вакцина. Измененную иммунную реакцию можно определить по клеточной иммунной реакции или/и гуморальной иммунной реакции. Применяемые для этой цели общепринятые методы - это ELISPOT, определение эффекторной функции (метод «effector function»), вестерн-блотирование и т.п.
Эффективность терапевтической раковой вакцины определяется по ее способности индуцировать иммунную реакцию на специфический антиген и также ее способности реагировать на антиген. Для настоящего изобретения антигенами являются раковые клетки с иммунологическими свойствами, измененными путем совместной инкубации раковых клеток с Mycobacterium w.
Эффективность этих раковых клеток определяли по способности иммунной системы соответствующего хозяина как индуцировать иммунную реакцию, так и реагировать с антигеном. Эффективность терапевтической вакцины в индукции иммунной реакции изучали, определяя методом ELISPOT увеличение числа клеток, продуцирующих интерферон-гамма (ИФН-γ) в ответ на антиген. Эта техника обеспечивает указание на индукцию клеточного иммунного ответа. Гуморальную иммунную реакцию исследовали, определяя появление в сыворотках мышей специфических антител в ответ на введение вакцины.
Подобным же образом способность индуцировать гетерогенную иммунную реакцию, при этом специфичную для ткани/органа, определяли также по специфической иммунной реакции в ответ на стимул в виде линий негомологичных (гетерогенных) раковых клеток, специфичных для ткани/органа. Гетерогенную реакцию оценивали также как по клеточному ответу с помощью теста ELISPOT на интерферон-гамма, так и гуморальному иммунному ответу с использованием вестерн-блотирования.
Способность реагировать с клетками-мишенями определяли методом эффекторной функции. Это метод, с помощью которого определяют, убиваются ли клетки-мишени (раковые клетки) клетками иммунной системы, стимулированной/активированной введением вакцины. Терапевтическая раковая вакцина проявляла способность убивать раковые клетки-мишени обоих типов, то есть гомологичные и гетерогенные раковые клетки одной и той же ткани (одного и того же органа).
Пример 1: Способ изменения иммуногенного профиля раковых клеток таким образом, что они становятся иммуногенными по отношению к гетерогенному раковому антигену (гетерогенным раковым антигенам), специфичному (специфичным) для ткани/органа
A) Аллогенные раковые клетки Mia-paca-2 собирают и промывают забуференным фосфатом солевым раствором Dulbelco (Dulbelco's Phosphate buffer saline, DPBS) для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:100. Суспензию клеток инкубируют при 37°С в течение 6 ч. Суспензию клеток центрифугируют при 350 g в течение 10 мин для отделения и удаления «Mycobacterium w». Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину, или они могут быть затем включены в рецептуру (formulated). При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
B) Аллогенные клетки меланомы B16 собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:100. Суспензию клеток инкубируют при температуре 10°C до введения - предпочтительно в течение 4-6 ч. Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем p38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
C) Аллогенные раковые клетки NFS60 (клетки лейкемии) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:10. Суспензию клеток инкубируют при 60°С в течение 10 мин. Клетки центрифугируют при 350 g в течение 10 мин для удаления «Mycobacterium w». Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
D) Аллогенные раковые клетки (Panc-1) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:10. Суспензию клеток инкубируют при 37° в течение 4-6 ч. Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
E) Аллогенные раковые клетки А549 (рак легких) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:1000. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 37°C в течение 4-6 ч. Клетки центрифугируют при 350 g в течение 10 мин для удаления «Mycobacterium w». Измеряют уровни внутриклеточного p38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
F) Аллогенные раковые клетки РС-3 (рак простаты) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:1000. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 25°C в течение 24 ч. Измеряют уровни внутриклеточного p38. Клетки с повышенным уровнем p38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
G) Аллогенные раковые клетки AsPC собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:10000. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 30°C в течение 6 ч. Клетки центрифугируют при 350 g в течение 10 мин для удаления «Mycobacterium w». Измеряют уровни внутриклеточного p38. Клетки с повышенным уровнем p38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
H) Аллогенные раковые клетки Mia-paca-2 собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:10000. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 37°C в течение 120 мин. Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
I) Аллогенные раковые клетки MCF 1 (рак молочной железы) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:1. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 40°C в течение 5 ч. Клетки центрифугируют при 350 g в течение 10 мин для удаления «Mycobacterium w». Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
J) Аллогенные раковые клетки, отобранные у пациента с меланомой, культивируют в лаборатории, собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:1. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 50°C в течение 4-6 ч. Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
K) Аллогенные раковые клетки (Panc-1) собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:10. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 37°C в течение 4-6 ч. Добавленные клетки Mw отделяют центрифугированием при 350 g в течение 10 мин. Измеряют уровни внутриклеточного p38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
L) Аллогенные раковые клетки, отобранные у пациента с меланомой, культивируют в лаборатории, собирают и промывают DPBS для удаления следов сыворотки. Подсчитывают число жизнеспособных клеток и к клеткам добавляют «Mycobacterium w» при отношении числа клеток к «Mycobacterium w» 1:1. Эту суспензию клеток инкубируют при температуре 50°C в течение 4-6 ч. Добавленные клетки Mw отделяют центрифугированием при 350 g в течение 10 мин. Измеряют уровни внутриклеточного р38. Клетки с повышенным уровнем р38 используют как вакцину или они могут быть затем включены в рецептуру. При необходимости к вакцине можно добавлять адъювант (адъюванты).
Пример 2: Следующий пример иллюстрирует улучшенную иммунную реакцию в соответствии с настоящим изобретением без ограничения области охвата изобретения
А. Терапевтическая вакцина вызывает клеточную иммунную реакцию на гомологичные раковые клетки, демонстрируемую с помощью анализа ELISPOT на интерферон-гамма
Терапевтические раковые вакцины, приготовленные способом, описанным в примере 1, иммуногенны и вызывают иммунную реакцию Th1 типа, как демонстрирует исследование иммуногенности на мышиной модели. Вкратце, мышей иммунизировали внутрикожным введением в дни 0 и 21 контроля плацебо или вакцинной рецептуры, содержащей 2×106 клеток. Животных на 28-й день подвергали эвтаназии повышенным содержанием CO2 и определяли иммунный статус по числу секретирующих ИФН-γ клеток среди спленоцитов. Как показано в таблице 1, было обнаружено существенное увеличение (в 8,4 раза) числа секретирующих ИФН-γ клеток в группе, иммунизированной вакцинной рецептурой, по сравнению с контролем плацебо.
Таблица 1 | |
Иммуногенность раковой вакцины, определенная по числу клеток, секретирующих ИФН-γ | |
Группа | Число продуцирующих интерферон-гамма клеток на 0,1 млн спленоцитов |
Контроль плацебо | 15 клеток |
Раковая вакцина | 126 клеток |
В. Терапевтическая вакцина вызывает гуморальную иммунную реакцию на гомологичные раковые клетки, демонстрируемую с помощью вестерн-блотирования
Мышей распределяли случайным образом по двум группам. Первую группу мышей иммунизировали в дни 0 и 21 внутрикожным введением терапевтической раковой вакцины, приготовленной в соответствии с примерами 1-6, а вторую группу, то есть контрольную группу, иммунизировали забуференным фосфатом солевым раствором (PBS). На 28-й день исследования у всех мышей отбирали пробы сыворотки для выявления образования антител к вакцине.
Вестерн-блотирование лизатов гомологичных раковых клеток (Mia-paca-2) проводили с пробами сыворотки мышей из каждой группы. Для обнаружения антител, связанных с белком в лизате, использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела к мышиному IgG с DAB (диаминобензидин) в качестве окрашивающего агента и H2O2 как субстрата.
По данным анализа вестерн-блотированием установлено, как показано на фиг.1, что иммунизация терапевтической раковой вакциной вызывает образование антител к лизату гомологичных клеток.
Пример 3: Следующий пример иллюстрирует иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа, в соответствии с настоящим изобретением без ограничения области охвата изобретения
А. Терапевтическая вакцина вызывает клеточную иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, демонстрируемую по повышению числа клеток, продуцирующих интерферон-гамма, методом ELISPOT
Мышей иммунизировали в дни 0 и 21 внутрикожным введением контроля или рецептуры раковой вакцины, содержащей 2×106 клеток Mia-paca-2, приготовленной, как описано в примере 1. Животных на 28-й день подвергали эвтаназии повышенным содержанием CO2. У каждой мыши извлекали селезенку и выделяли спленоциты. 5×105 спленоцитов от каждой мыши высевали на планшеты ELISPOT фирмы R&D Systems, покрытые фиксирующими антителами к ИФН-γ. Клетки стимулировали in-vitro 10 мкг/мл лизатов клеток Mia-PaCa-2, Panc-1 и AsPC-1 и инкубировали при 37°C и 6% CO2 в течение около 36 ч. В конце периода инкубации планшеты проявляли в соответствии с инструкциями поставщика. Вкратце, ячейки отмывали от клеток и добавляли детектирующие антитела. Планшеты инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем добавляли фермент, конъюгированный с стрептавидином-ALP, после чего добавляли осаждающий субстрат BCIP-NBT. Интенсивность пятен определяли автоматическим сканирующим устройством для иммуноферментного анализа. Иммунореактивность вакцинного препарата по отношению к гомологичным клеткам (Mia-paca-2) и гетерогенным раковым клеткам (Panc-1 и AsPC-1) из поджелудочной железы выражали числом секретирующих ИФН-γ клеток, как представлено на фиг.2. Полученные данные позволяют предположить, что приготовленная в соответствии с настоящим изобретением раковая вакцина с использованием клеток Mia-paca-2 способна вызывать иммунную реакцию не только на клетки Mia-paca-2 (гомологичные), но и на клетки Panc-1 и AsPC-1 (гетерологичные). Нет существенного различия в иммунной реакции на различные типы клеток.
B. Терапевтическая вакцина вызывает клеточную иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, демонстрируемую по эффекторной функции - убиению раковых клеток-мишеней
Мышей линии Balb/c иммунизировали в дни 0 и 21 либо раковыми клетками (Mia-Paca-2), либо терапевтической раковой вакциной, приготовленной, как описано в примерах 1-6. Мышей забивали, и выделенные спленоциты использовали как эффекторные клетки против линий клеток Mia-paca-2 и Panc-1. Представленные на фиг.3 результаты показывают, что терапевтическая раковая вакцина способна осуществлять перекрестную иммунизацию раковых клеток. Терапевтическая раковая вакцина проявляет эффекторную функцию против обеих линий клеток, то есть против гомологичных (Mia-paca-2) и против гетерогенных раковых клеток (Panc-1 и AsPC-1) из поджелудочной железы.
C. Обработка «Mycobacterium w» усиливает перекрестное предъявление раковых клеток для создания гетерогенного иммунитета
Первую группу мышей иммунизировали в дни 0 и 21 внутрикожным введением клеток Mia-paca-2 cells, а вторую - введением терапевтической раковой вакцины, приготовленной в соответствии с примерами 1-6. На 28-й день исследования от всех мышей получали суспензию спленоцитов (107 клеток/мл) для определения числа секретирующих ИФН-γ клеток методом ELISPOT.
Клетки спленоцитов контрольной и тестовой групп вносили в различные ячейки планшета для ELISPOT в количестве 1×106 клеток на ячейку. Планшеты инкубировали при 37°C и 6% CO2 в течение 36-48 ч. После завершения периода инкубации клетки декантировали с планшета и промывали DPBS. В каждую ячейку добавляли 100 мкл разведенных 1:100 детектирующих антител. Планшет инкубировали при 4°C в течение ночи, затем его промывали и осушали. Конъюгат стрептавидин-ALP разбавляли 1:1000 в PBS с 0,5% FBS. В каждую ячейку добавляли 100 мкл разбавленного 1:1000 конъюгата стрептавидин-ALP и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч в темноте. Планшет промывали и осушали. В каждую ячейку добавляли 100 мкл субстрата BCIP-NBT. Планшет вновь инкубировали при комнатной температуре в темноте до появления пятен. Реакцию останавливали промыванием планшета водой. Планшет сушили в течение ночи при 37°C. На основании представленных на фиг.4 результатов очевидно, что терапевтическая раковая вакцина, приготовленная в соответствии с настоящим изобретением, повышает иммунореактивность мышей к гетерогенным раковым клеткам.
D. Терапевтическая вакцина вызывает гуморальную иммунную реакцию на гетерологичные раковые клетки той же самой ткани (того же самого органа), как продемонстрировано реакционной способностью антител по отношению к лизатам гетерологичных раковых клеток с помощью вестерн-блотирования
Мышей иммунизировали в дни 0 и 21 внутрикожным введением терапевтической раковой вакцины. На 28-й день исследования у мышей отбирали пробы сывороток для определения появления антител к вакцине и гетерогенной реактивности мышиных антител к раковой вакцине по отношению к другим клеткам (гетерогенным) из поджелудочной железы, а именно SW1990 и AsPC.
Осуществляли вестерн-блотирование лизатов клеток Mia-paca-2, AsPC-1, SW-1990 и раковых клеток различного происхождения, как НЕK-293 (почки), РС-3 (простата), MCF-7 (молочная железа), А549 (легкие), РА-1 (яичники), с первичными антителами, образующимися у мышей в ответ на терапевтическую раковую вакцину. Для выявления первичных антител, связавшихся в антигеном (антигенами) лизата, использовали конъюгированные с пероксидазой хрена козьи антитела к мышиному IgG с DAB (диамино-бензидин) в качестве окрашивающего/детектирующего агента.
Анализ с помощью вестерн-блотирования показывает (фиг.5), что мышиные антитела к раковой вакцине обладают гетерогенной реактивностью по отношению к лизатам других раковых клеток из различных тканей/органов.
E. Убитые теплом раковые клетки, усиленные «Mycobacterium w», вызывают иммунную реакцию на гомологичные и гетерологичные раковые клетки той же самой ткани (того же самого органа), что установлено по эффекторной функции.
Мышей линии Balb/c в дни 0 и 21 иммунизировали введением убитых нагреванием раковых клеток (клетки Mia-paca-2 рака поджелудочной железы), смешанных в соотношении 1:100 с «Mycobacterium w». На 28-й день мышей забивали, выделяли спленоциты и использовали их как эффекторные клетки против линии гомологичных раковых клеток.
Представленные на фиг.6 результаты показывают, что добавление «Mycobacterium w» улучшает эффективность терапевтической вакцины, использующей убитые нагреванием клетки, в воздействии на злокачественную опухоль (злокачественные опухоли), что вызывает иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа, что продемонстрировано по эффекторной функции - убиению раковых клеток-мишеней.
F. Обработанные формальдегидом убитые раковые клетки, усиленные «Mycobacterium w», вызывают иммунную реакцию на гомологичные и гетерологичные раковые клетки той же самой ткани (того же самого органа), что установлено по эффекторной функции
Мышей линии Balb/c в дни 0 и 21 иммунизировали введением обработанных формальдегидом раковых клеток (клетки Mia-paca-2 рака поджелудочной железы), смешанных в различных соотношениях с «Mycobacterium w». Мышей забивали, выделяли спленоциты и использовали их как эффекторные клетки против линии гомологичных раковых клеток.
Представленные на фиг.7 результаты показывают, что добавление «Mycobacterium w» улучшает эффективность терапевтической вакцины, использующей обработанные формальдегидом клетки, в воздействии на злокачественную опухоль (злокачественные опухоли), что вызывает иммунную реакцию на гетерогенные раковые клетки, специфичные для ткани/органа, что продемонстрировано по эффекторной функции - убиению раковых клеток-мишеней.
G. Убитые раковые клетки, усиленные другими адъювантами, вызывают иммунную реакцию на гомологичные раковые клетки той же самой ткани (того же самого органа), что определено методом анализа ELISPOT
Мышей линии Balb/c в дни 0 и 21 иммунизировали введением убитых раковых клеток (клетки Mia-paca-2 рака поджелудочной железы), смешанных с различными адъювантами, а именно: «Mycobacterium w», ВВ2, G1, Cadi OFF 10 и их комбинациями. Мышей забивали, и выделенные спленоциты использовали для анализа лизата гомологичных раковых клеток на секрецию ИФН-γ методом ELISPOT (фиг.8).
Представленные на фиг.8 результаты показывают, что добавление адъюванта улучшает эффективность терапевтической раковой вакцины, использующей убитые раковые клетки, при использовании для воздействия на злокачественную опухоль (злокачественные опухоли).
Пример 4: Следующие примеры иллюстрируют лечение рака у млекопитающих в соответствии с настоящим изобретением без ограничения области охвата изобретения
A. Регрессия опухоли in vivo: лечение рака у млекопитающих в соответствии с настоящим изобретением без ограничения области охвата изобретения
Для исследования использовали 30 мышей-самцов линии Balb/C в возрасте 6-8 недель. Животных случайным образом распределяли по группам с учетом веса тела. Индукцию опухолей осуществляли подкожной инъекцией 1×105 клеток B16-F1 в заднюю лапу. Мышам давали время для развития опухолей до среднего размера около 100-150 мм3 и распределяли случайным образом (рандимизировали) на 2 группы по 15 мышей в каждой с учетом размера опухоли. Первую группу мышей иммунизировали в дни 0 и 10 после рандомизации внутрикожным введением меланомной вакцины (приготовленной, как описано в примере 1), а вторую, т.е. контрольную, группу мышей оставляли без иммунизации (без воздействия). Дважды в неделю регистрировали размер опухолей вплоть до того момента, когда размер опухоли достигал 10% от веса тела животного.
Объем опухолей в группе воздействия не увеличивался по сравнению с контрольной группой (фиг.9). В действительности в группе с воздействием наблюдалось уменьшение размера опухолей, что указывает на ослабление условий болезни. В общем в группе с воздействием увеличилась выживаемость и уменьшился размер опухолей.
В группе с воздействием обнаружено замедленное развитие опухолей и регрессия массы опухолей по сравнению с животными, не подвергавшимися воздействию.
B. Регрессия опухоли in vivo: лечение рака у млекопитающих в соответствии с настоящим изобретением без ограничения области охвата изобретения
Для исследования использовали 20 мышей-самцов линии С57 в возрасте 6-8 недель. Животных случайным образом распределяли по группам с учетом веса тела. Индукцию опухолей осуществляли подкожной инъекцией мышам 1×105 клеток Pan 02 в заднюю лапу. Мышам давали время для развития опухолей до среднего размера около 200 мм3 и распределяли случайным образом (рандимизировали) на 2 группы по 10 мышей в каждой с учетом размера опухоли. Первую группу мышей иммунизировали в дни 0 и 10 после рандомизации внутрикожным введением раковой панкреатической вакцины (приготовленной в соответствии с примером 1), а вторую, т.е. контрольную, группу мышей оставляли без иммунизации (без воздействия). Дважды в неделю регистрировали размер опухолей вплоть до того момента, когда размер опухоли достигал 10% от веса тела животного.
Объем опухолей в группе воздействия не увеличивался по сравнению с контрольной группой (фиг.10). В действительности в группе с воздействием наблюдалось уменьшение размера опухолей, что указывает на ослабление условий болезни. В общем в группе с воздействием увеличилась выживаемость и уменьшился размер опухолей.
В группе с воздействием обнаружено замедленное развитие опухолей и регрессия массы опухолей по сравнению с животными, не подвергавшимися воздействию.
Эти примеры с очевидностью демонстрируют, что вакцина из раковых клеток с использованием в рецептуре «Mycobacterium w» обладает усиленной иммуногенностью и иммунореактивностью по отношению к гетерогенному раковому антигену (гетерогенным раковым антигенам), специфичному (специфичным) для ткани/органа.
Другие эксперименты с мышами и иммуноанализ ex vivo показывают, что вакцина из раковых клеток способна генерировать эффекторную функцию, означающую, что иммунная система и ее часть способны эффективно убивать раковые клетки-мишени гетерогенной природы, специфичные для ткани/органа. Вакцина обладает также эффективностью in vivo в лечении рака.
Таким образом, раковая вакцина использована для того, чтобы справляться с раком, с точки зрения задерживания, подъема или лечения рака. Вакцина может также использоваться для регрессии существующих опухолей и подавления раковых клеток.
Claims (12)
1. Раковая вакцина, включающая экспрессирующие один или более антигенов раковые клетки и эксципиенты, где указанный антиген экспрессируется раковыми клетками с повышенным уровнем p38 и где указанные раковые клетки получены приведением в контакт указанных раковых клеток и Mycobacterium w.
2. Раковая вакцина по п. 1, где количество экспрессирующих антиген раковых клеток в рецептуре раковой вакцины находится в диапазоне от 104 до 109.
3. Раковая вакцина по п. 1, которая при введении млекопитающему вызывает клеточную иммунную реакцию, специфичную для ткани/органа, к которым принадлежат раковые клетки.
4. Раковая вакцина по п. 1, которая при введении млекопитающему вызывает гуморальную иммунную реакцию, специфичную для ткани/органа, к которым принадлежат раковые клетки.
5. Раковая вакцина по п. 1, дополнительно содержащая адъювант.
6. Раковая вакцина по п. 5, где адъювантом является Mycobacterium w.
7. Раковая вакцина по п. 1, где раковые клетки получают от пациента и/или из хранилища клеток.
8. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества раковой вакцины по п. 1.
9. Способ по п. 8, где рак представлен гомологичными или гетерологичными клетками.
10. Способ по п. 8, где раковая вакцина включает раковые клетки, полученные от того же или другого млекопитающего.
11. Способ по п. 8, где путь введения является парентеральным.
12. Способ по п. 8, где путь введения является внутрикожным.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IN555/MUM/2011 | 2011-02-28 | ||
IN555MU2011 | 2011-02-28 | ||
PCT/IB2012/050876 WO2012117323A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-02-27 | Therapeutic cancer vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013143741A RU2013143741A (ru) | 2015-04-10 |
RU2615346C2 true RU2615346C2 (ru) | 2017-04-04 |
Family
ID=45888440
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013143741A RU2615346C2 (ru) | 2011-02-28 | 2012-02-27 | Терапевтическая вакцина против рака |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20130330375A1 (ru) |
EP (2) | EP3424523A1 (ru) |
JP (1) | JP6148179B2 (ru) |
AU (1) | AU2012222992B2 (ru) |
CA (1) | CA2828401C (ru) |
RU (1) | RU2615346C2 (ru) |
WO (1) | WO2012117323A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012117323A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | Cadila Pharmaceuticals Limited | Therapeutic cancer vaccine |
EP2729166B1 (en) * | 2011-07-05 | 2017-09-06 | Cadila Pharmaceuticals Limited | Cancer antigen |
CN103908468B (zh) * | 2014-04-21 | 2017-02-08 | 上海捌加壹医药科技有限公司 | 环二核苷酸cGAMP在制备抗肿瘤药物中的应用 |
TW202134430A (zh) | 2019-12-03 | 2021-09-16 | 美商紐沃進公司 | 腫瘤細胞疫苗 |
CN111458519B (zh) * | 2020-04-07 | 2023-04-11 | 江门市中心医院 | Hlf在肺癌干预中的用途 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050106130A1 (en) * | 1998-01-14 | 2005-05-19 | Lawman Michael J.P. | Antigen modified cancer cell vaccines for cancer therapy |
WO2006114680A2 (en) * | 2005-04-25 | 2006-11-02 | Bakulesh Mafatlal Khamar | Vaccine adjuvants |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1119354A (en) * | 1914-01-05 | 1914-12-01 | Adelbert Armstrong | Broom-holder. |
JP4705697B2 (ja) * | 2001-04-24 | 2011-06-22 | 吉川 和宏 | Mn/ca9由来のhla−a24拘束性腫瘍抗原ペプチド |
EP1447091A4 (en) * | 2001-09-28 | 2008-02-13 | Institute Of Can International | NEW METHOD FOR INDUCTION OF ANTIGEN SPECIFIC T CELLS |
WO2003049751A1 (en) * | 2001-12-10 | 2003-06-19 | Bakulesh Mafatlal Khamar | The process of manufacturing a pharmaceutical composition useful for management of cancer |
UA79952C2 (en) * | 2001-12-10 | 2007-08-10 | Kabulesh Mafatlal Khamar | MYCOBACTERIUM w APPLICATIONS FOR CANCER TREATMENT |
MXPA05012080A (es) * | 2003-05-08 | 2006-02-22 | Xcyte Therapies Inc | Generacion y aislamiento de celulas t especificas al antigeno. |
US20080038251A1 (en) * | 2006-03-20 | 2008-02-14 | Silvia Pastorekova | MN/CA IX and MAPK inhibition |
WO2008114119A2 (en) * | 2007-03-20 | 2008-09-25 | Cadila Pharmaceuticals Limited | P38 inhibitors |
GB2463434B (en) * | 2007-06-28 | 2013-01-30 | Cadila Pharmaceuticals Ltd | Mitogen activated protein kinase modulator |
WO2011083493A1 (en) * | 2010-01-08 | 2011-07-14 | National Institute Of Immunology | Human chorionic gonadotropin (hcg) based vaccine for prevention and treatment of cancer |
EP2537030B1 (en) * | 2010-02-19 | 2017-08-30 | Cadila Pharmaceuticals Ltd. | A pharmaceutical composition of killed cells with substantially retained immunogenicity |
WO2012117323A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | Cadila Pharmaceuticals Limited | Therapeutic cancer vaccine |
-
2012
- 2012-02-27 WO PCT/IB2012/050876 patent/WO2012117323A1/en active Application Filing
- 2012-02-27 US US14/001,795 patent/US20130330375A1/en not_active Abandoned
- 2012-02-27 AU AU2012222992A patent/AU2012222992B2/en active Active
- 2012-02-27 JP JP2013555966A patent/JP6148179B2/ja active Active
- 2012-02-27 RU RU2013143741A patent/RU2615346C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-02-27 CA CA2828401A patent/CA2828401C/en active Active
- 2012-02-27 EP EP18178074.3A patent/EP3424523A1/en not_active Withdrawn
- 2012-02-27 EP EP12710789.4A patent/EP2680882A1/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-01-20 US US15/410,842 patent/US10335472B2/en active Active
-
2019
- 2019-05-07 US US16/404,902 patent/US11219674B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050106130A1 (en) * | 1998-01-14 | 2005-05-19 | Lawman Michael J.P. | Antigen modified cancer cell vaccines for cancer therapy |
WO2006114680A2 (en) * | 2005-04-25 | 2006-11-02 | Bakulesh Mafatlal Khamar | Vaccine adjuvants |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ALEMAN M. et al. Mycobacterium tuberculosis triggers apoptosis in peripheral neutrophils involving toll-like receptor 2 and p38 mitogen protein kinase in tuberculosis patients // Infect Immun., 2004, Sep;72(9):5150-8.. JIANG X.P. et al. Vaccination with a mixed vaccine of autogenous and allogeneic breast cancer cells and tumor associated antigens CA15-3, CEA and CA125--results in immune and clinical responses in breast cancer patients // Cancer Biother Radiopharm., 2000, Oct;15(5):495-505. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3424523A1 (en) | 2019-01-09 |
US10335472B2 (en) | 2019-07-02 |
JP2014510070A (ja) | 2014-04-24 |
US20190262443A1 (en) | 2019-08-29 |
CA2828401A1 (en) | 2012-09-07 |
WO2012117323A1 (en) | 2012-09-07 |
EP2680882A1 (en) | 2014-01-08 |
US20170157231A1 (en) | 2017-06-08 |
AU2012222992A1 (en) | 2013-10-17 |
CA2828401C (en) | 2023-01-10 |
JP6148179B2 (ja) | 2017-06-14 |
US20130330375A1 (en) | 2013-12-12 |
US11219674B2 (en) | 2022-01-11 |
AU2012222992B2 (en) | 2016-10-27 |
RU2013143741A (ru) | 2015-04-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11219674B2 (en) | Therapeutic cancer vaccine | |
Niederkorn et al. | Alloantigens placed into the anterior chamber of the eye induce specific suppression of delayed-type hypersensitivity but normal cytotoxic T lymphocyte and helper T lymphocyte responses. | |
Ley et al. | Interleukin 2‐dependent activation of tumor‐specific cytotoxic T lymphocytes in vivo | |
Fink et al. | Immune reactions to a murine leukemia virus. I. Induction of immunity to infection with virus in the natural host | |
JP2000506518A (ja) | 免疫原性分子および、アジュバントとして顆粒球―マクロファージコロニー刺激因子を含有する組成物 | |
NO326035B1 (no) | Allogent immunterapeutisk middel, agens, sammensetning og vaksine for behandling av prostatakreft, og anvendelse av disse. | |
Delorme et al. | The cellular immune response to primary sarcomata in rats I. The significance of large basophilic cells in the thoracic duct lymph following antigenic challenge | |
Niederkorn et al. | Intracamerally induced concomitant immunity: mice harboring progressively growing intraocular tumors are immune to spontaneous metastases and secondary tumor challenge. | |
US8748170B2 (en) | Polypeptides derived from cyclin B1 and uses thereof | |
Clarkson | Immunological responses to Histomonas meleagridis in the turkey and fowl. | |
DE69927286T2 (de) | Verwendung von humanen prostatazellinien zur behandlung von prostatakrebs | |
CN109908334B (zh) | 肿瘤疫苗及其制备方法和用途 | |
Prehn | Immunostimulation of highly immunogenic target tumor cells by lymphoid cells in vitro | |
US9714275B2 (en) | Cancer antigen | |
US20040009195A1 (en) | Modified sialic acid vaccines | |
SU548947A1 (ru) | Вакцина дл специфической профилактики и трерапии трихофитии лошадей | |
Levisohn et al. | Isolation, ultrastructure and antigenicity of Mycoplasma gallisepticum membranes | |
Kearns et al. | Kinetics and maintenance of acquired resistance in mice to Listeria monocytogenes | |
Ehrlich et al. | The effect of H-ras expression on tumorigenicity and immunogenicity of Balb/c 3T3 fibroblasts | |
JP6421208B2 (ja) | がん抗原 | |
Devens et al. | Immune response to weakly immunogenic virally induced tumors. IX. Mice injected with the in vitro variant of YAC tumor (YAC-1) resist lethal doses of the tumorgenic YAC cells | |
Snippe et al. | Bacteriophage MS-2 in the immune response | |
Eggers et al. | T Cell Nature of Adjuvant Peptide-Induced Antitumor Cell-Mediated Cytotoxicity | |
Alexander | Immunity in Malignant Disease [Abridged] Immunotherapy of Cancer—Experience with Primary Sarcoma in the Rat | |
EP3775894A1 (en) | Method for predicting human immune response |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20160531 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20160531 |