RU2607369C1 - Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов - Google Patents
Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2607369C1 RU2607369C1 RU2015127843A RU2015127843A RU2607369C1 RU 2607369 C1 RU2607369 C1 RU 2607369C1 RU 2015127843 A RU2015127843 A RU 2015127843A RU 2015127843 A RU2015127843 A RU 2015127843A RU 2607369 C1 RU2607369 C1 RU 2607369C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- simulators
- simulator
- biological agent
- pathogenic biological
- suspension
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской микробиологии и санитарной эпидемиологии. Предложен способ получения имитаторов патогенных биологических агентов путем обработки суспензии клеток возбудителя опасного инфекционного заболевания СВЧ-облучением с частотой 2450 МГц, мощностью 6 Вт/см3 двукратно по 5 минут. Инактивированные бактерии стабилизировали защитной средой и высушивали в сублимационной камерной установке до остаточной влажности 2-5%. Целевой продукт состоит из сухой культуры инактивированных бактерий (91,5%), талька (8%) и аэросила (0,5%). Способ обеспечивает получение безопасного при использовании и длительно сохраняющего свои индикационные свойства имитатора патогенного биологического агента. 2 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к способам получения имитаторов патогенных биологических агентов (ПБА), содержащих инактивированные бактерии возбудителей опасных инфекционных заболеваний, в частности к способам приготовления имитационных средств, предназначенных для учебных, тренировочных, научно-исследовательских целей (обучение методам специфической индикации ПБА, подготовка проб, индикация и идентификация возбудителей опасных инфекционных заболеваний), и может быть использовано специалистами учреждений Роспотребнадзора и Министерства обороны России.
В качестве имитаторов ПБА возможно использование: вакцин на основе живых и убитых бактерий, диагностикумов, содержащих клеточные антигены, а также микроорганизмов, не имеющих патогенных свойств, но относящихся к тому же виду, что и возбудители опасных инфекционных заболеваний [МУ 4.2.1103-02. Приготовление проб с имитаторами патогенных биологических агентов: Методические указания. Утв. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, 27.01.2002 г.].
Известен способ получения имитатора возбудителя холеры (Vibrio cholerae), в качестве которого используется убитая корпускулярная (цельно клеточная) вакцина, состоящий в приготовлении взвеси холерных вибрионов в физиологическом растворе, убитых при 58°С, с последующим добавлением 0,5% фенола и 0,5% формалина [Е.И. Коробкова. Микробиология и эпидемиология холеры. - М.: Медгиз, 1959]. Общим с заявленным способом является температурное инактивирующее воздействие на клетки. К недостаткам этого способа относится снижение чувствительности методов специфической индикации возбудителя из-за наличия в составе имитатора свободного формальдегида.
Также известен способ получения имитатора возбудителя сибирской язвы в виде сибиреязвенной вакцины [Способ получения сухой комбинированной сибиреязвенной вакцины, патент РФ 2181294], состоящий в приготовлении жидкого полуфабриката из равных объемов двух компонентов. Первый компонент - разведенная физиологическим раствором споровая суспензия Bacillus anthracis штамма СТИ-1 до концентрации от 0,8 до 1,2 спор/см3, смешанная со стерильным 40% раствором сахарозы в объемных соотношениях 1:1. Второй компонент - разведенный физиологическим раствором до содержания 400 среднеэффективных иммунизационных доз в см3 концентрат сорбированного протективного антигена, полученного из микробной культуры В. anthracis штамма 55/5. Последующее лиофильное высушивание жидкого полуфабриката в камерных сушильных установках в режиме: температура полуфабриката при замораживании от минус 35 до минус 40°С; время замораживания от 3 до 4 часов; разрежение в сублиматоре от 20 до 25 Па; температура полуфабриката при досушивании от 30 до 32°С; время досушивания от 10 до 12 часов.
Общим с заявленным способом является использование защитной среды, а также высушивание жидкого полуфабриката для получения сухой формы препарата. Недостатками данного способа получения имитатора являются многостадийность и длительность приготовления; обязательный контроль качества сырья, вспомогательных материалов, а также конечного и промежуточных продуктов; невозможность получения имитаторов других возбудителей опасных инфекционных заболеваний.
В качестве прототипа выбран способ приготовления имитатора возбудителя сапа (Burkholderia mallei) [МУ 4.2.1103-02], заключающийся в обеззараживании формалином, в конечной концентрации 1%, смешанной взвеси бактерий В. mallei штаммов 10230, Р-1 и 712, выращенных при 37°С в течение 1-2 суток на мясопептонном агаре с 5% глицерина. К недостаткам данного способа следует отнести помимо снижения чувствительности специфической индикации из-за с наличия в пробах формалина ограниченный срок годности препарата, связанный с лизисом клеток в жидкой среде имитатора, и отсутствие контроля полноты инактивации и безвредности имитатора.
Задачей изобретения является разработка способа получения сухих имитаторов ПБА, обладающих индикационными характеристиками, присущими бактериальным возбудителям опасных инфекционных заболеваний, длительно сохраняющих свои свойства в условиях хранения.
Поставленная задача решается благодаря тому, что в способе приготовления имитаторов ПБА, включающем получение бактериальной суспензии с последующим ее обеззараживанием, предусмотрены следующие отличия: тепловая инактивация (стерилизация) бактерий с помощью СВЧ-излучения; использование защитной (стабилизирующей) среды высушивания; сублимационное обезвоживание и получение имитатора путем смешения с наполнителем и дезагрегантом.
Способ осуществляется следующим образом.
Суспензию, содержащую бактерии возбудителя, помещают в емкость из термостойкого стекла. Инактивацию микробной суспензии проводят в микроволновой печи с частотой СВЧ-излучения 2450 кГц. Режим инактивации:
- удельная мощность СВЧ-излучения - 6 Вт/см3;
- продолжительность - 5 минут, двукратно с промежуточным охлаждением до 20°С.
Стерильность инактивированной суспензии контролируют культуральным способом [Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспособности микроорганизмов. Пущино, 1990] путем посева на плотную питательную среду для культивирования бактерий и инкубирования посевов в условиях, определяемых видом возбудителя. Взвеси признают стерильными при отсутствии на поверхности плотной питательной среды как характерных, так и нехарактерных колоний.
Инактивированную суспензию бактерий в объемном соотношении 2:1 стабилизируют защитной средой следующего состава, процент (по массе):
- лактоза - 3;
- тиомочевина - 3;
- аскорбиновая кислота - 3;
- дистиллированная вода - 91.
Использование среды указанного состава позволяет предохранить белково-липидные и нуклеиновые структуры бактерий от повреждений при обезвоживании и последующем хранении.
Высушивание жидкого полуфабриката проводят на сублимационной камерной установке согласно инструкции по эксплуатации в режиме, обеспечивающем получение сухой инактивированной культуры с остаточной влажностью от 2 до 5%.
Имитатор получают после смешения сухой инактивированной культуры (91,5%) с наполнителем - тальком (8,0%) и дезагрегантом - гидрофобизированным аэросилом (0,5%). Использование указанных веществ снижает силы адгезии и препятствует слеживаемости частиц в препарате. Агрегатно-устойчивая структура имитатора позволяет хранить его при температуре от 0 до 4°С в течение 2 лет.
Безвредность имитатора контролируют постановкой биологических проб на токсичность с использованием лабораторных животных [МУК 4.1/4.2.588-96. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям: Методические указания. - М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998]. Имитатор считают безвредным, если все животные остались живы, не имели признаков заболевания, не уменьшили массу тела.
Индикационные характеристики имитаторов оценивают по результатам специфической индикации методами экспресс-анализа ИФА, РИГА, ПЦР [Специфическая индикация патогенных биологических агентов. Практическое руководство. Под ред. Г.Г. Онищенко. - М.: МП «Гигиена», 2006].
Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существующих признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в таблице 1.
Изобретение позволяет получать безвредные для человека и животных имитаторы на основе инактивированных бактерий, обладающие индикационными характеристиками соответствующих ПБА, сохраняющимися в течение 2 лет. Единый подход к созданию сухой формы препарата позволяет получить имитаторы на основе возбудителей чумы, холеры, сапа, туляремии, сибирской язвы, мелиоидоза, бруцеллеза и т.п. и использовать их для конструирования проб.
Возможность осуществления заявленного изобретения показана следующими примерами.
Пример 1
Приготовление имитатора возбудителя сибирской язвы
Получали культуру В. anthracis штамма СТИ-1, культивируя в матрацах со скошенным агаром Хоттингера, содержащим (0,5±0,1) г/дм аминного азота при температуре от 33 до 35°С в течение 48 часов [Специфическая индикация патогенных биологических агентов. Практическое руководство. Под ред. Г.Г. Онищенко. - М.: МП «Гигиена», 2006]. Типичный рост на поверхности представляет собой толстую шероховатую пленку серого цвета. В стерильных условиях смывали культуру с поверхности агара физиологическим раствором. Смытую с матрацев культуру разводили физиологическим раствором до концентрации 50 млрд кл./см3 по стандарту мутности. 100 см3 микробной суспензии помещали в емкость из термостойкого стекла и обрабатывали в микроволновой печи при мощности облучении 600 Вт двукратно по 5 минут с охлаждением между нагревами до 20°С. Полноту инактивации оценивали культуральным способом после высева цельного разведения суспензии на плотную питательную среду, инкубации при температуре от 33 до 35°С в течение 48 часов. Отсутствие роста на поверхности среды свидетельствовало о полной инактивации клеток.
Взвесь инактивированных бактерий в соотношении 2 части к 1 стабилизировали защитной средой, состоящей из 3% лактозы, 3% тиомочевины, 3% аскорбиновой кислоты и 91% дистиллированной воды.
Высушивание полученного жидкого полуфабриката проводили в установке МАСС-5-02 при температуре инактивированной суспензии от минус 36°С до минус 26°С, температуре конденсатора-вымораживателя от минус 60°С до минус 48°С и общей продолжительностью 38 часов. Получили сухую культуру инактивированных спор с остаточной влажностью 3,5%.
Готовили имитатор возбудителя сибирской язвы, смешивая 91,5% сухой культуры инактивированных клеток В.anthracis, 8% талька и 0,5% аэросила. Безвредность имитатора оценивали после постановки биопробы на белых мышах обоего пола, массой 18-20 г и морских свинках обоего пола, массой 250-350 г. Имитатор посчитали безвредным по отсутствию у лабораторных животных клинических симптомов интоксикации и характерных признаков местно-раздражительного действия.
Результаты оценки качества и индикационные характеристики имитатора возбудителя сибирской язвы представлены в таблице 2.
Пример 2
Приготовление имитатора возбудителя сапа
Получали культуру В. mallei штамма Ц-5, культивируя на мясопептонном агаре с 5% глицерина при температуре 37°С в течение 48 часов. Дальнейшее приготовление и контроль проводили, как описано в примере 1. Результаты оценки качества и индикационные характеристики имитатора возбудителя сапа представлены в таблице 2.
Пример 3
Приготовление имитатора возбудителя холеры
Получали культуру V. cholerae штамма МО-45, культивируя на питательной среде для выделения и культивирования холерного вибриона при температуре от 35 до 37°С в течение 18 часов. Дальнейшее приготовление и контроль проводили, как описано в примере 1. Результаты оценки качества и индикационные характеристики имитатора возбудителя холеры представлены в таблице 2.
Пример 4
Приготовление имитатора возбудителя туляремии
Получали культуру Francisella tularensis штамма 15 НИИЭГ, культивируя на питательной среде для культивирования и выделения туляремийного микроба (FT) при температуре от 36 до 38°С в течение 48 часов. Дальнейшее приготовление и контроль проводили, как описано в примере 1. Результаты оценки качества и индикационные характеристики имитатора возбудителя туляремии представлены в таблице 2.
Пример 5
Приготовление имитатора возбудителя чумы
Получали культуру Yersinia pestis штамма 926 (Otten), культивируя на агаре Хоттингера с 0,025% сульфацила натрия при температуре от 28 до 30°С в течение 48 часов. Дальнейшее приготовление и контроль проводили, как описано в примере 1. Результаты оценки качества и индикационные характеристики имитатора возбудителя чумы представлены в таблице 2.
Claims (1)
- Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов, включающий обработку суспензии клеток возбудителя опасного инфекционного заболевания инактивирующим воздействием, отличающийся тем, что суспензию клеток подвергают СВЧ-облучению с частотой 2450 МГц, мощностью 6 Вт/см3, двукратно по 5 минут, смешивают в соотношении 2:1 с защитной средой, состоящей из дистиллированной воды (91%), лактозы (3%), тиомочевины (3%), аскорбиновой кислоты (3%), высушивают в сублимационной камерной установке с получением целевого продукта, состоящего из сухой культуры инактивированных бактерий (91,5%), талька (8%) и аэросила (0,5%) с остаточной влажностью 2-5%.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015127843A RU2607369C1 (ru) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015127843A RU2607369C1 (ru) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2607369C1 true RU2607369C1 (ru) | 2017-01-10 |
Family
ID=58452647
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015127843A RU2607369C1 (ru) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2607369C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2746022C1 (ru) * | 2020-04-03 | 2021-04-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации | Способ стабилизации бактериальных клеток чумного микроба перед сублимационным высушиванием |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1123705A1 (ru) * | 1982-12-24 | 1984-11-15 | Институт медико-биологических проблем МЗ СССР | Способ стерилизации медицинских инструментов |
RU2098134C1 (ru) * | 1995-02-01 | 1997-12-10 | Акционерное общество "Титан" | Способ инактивации инфекционной активности возбудителей кишечных инфекций и вакцина для иммунизации животных |
RU2115433C1 (ru) * | 1992-08-28 | 1998-07-20 | Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ | Вакцина сибиреязвенная комбинированная |
RU2181294C2 (ru) * | 1999-08-11 | 2002-04-20 | Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ | Способ получения сухой комбинированной сибиреязвенной вакцины |
-
2015
- 2015-07-09 RU RU2015127843A patent/RU2607369C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1123705A1 (ru) * | 1982-12-24 | 1984-11-15 | Институт медико-биологических проблем МЗ СССР | Способ стерилизации медицинских инструментов |
RU2115433C1 (ru) * | 1992-08-28 | 1998-07-20 | Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ | Вакцина сибиреязвенная комбинированная |
RU2098134C1 (ru) * | 1995-02-01 | 1997-12-10 | Акционерное общество "Титан" | Способ инактивации инфекционной активности возбудителей кишечных инфекций и вакцина для иммунизации животных |
RU2181294C2 (ru) * | 1999-08-11 | 2002-04-20 | Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ | Способ получения сухой комбинированной сибиреязвенной вакцины |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2746022C1 (ru) * | 2020-04-03 | 2021-04-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт" Министерства обороны Российской Федерации | Способ стабилизации бактериальных клеток чумного микроба перед сублимационным высушиванием |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Svetlakova et al. | Rehydration mechanism of prokaryotic cells of the genus salmonella by physiologically optimal diluent | |
RU2520082C2 (ru) | Способ получения "теней"бактериальных клеток (bg) | |
Kisluk et al. | Quantification of low and high levels of Salmonella enterica serovar Typhimurium on leaves | |
Yaniarti et al. | The effect of temperature and Pasteurization time on Staphylococcus aureus isolates from dairy products | |
CN106591231A (zh) | 促进cik细胞增殖分化的卡介菌多糖核酸、培养基、培养方法和应用 | |
Kulkarni et al. | Avian macrophage responses to virulent and avirulent Clostridium perfringens | |
RU2607006C1 (ru) | Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae | |
RU2607369C1 (ru) | Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов | |
Zhang et al. | Immunomodulatory and antitumor activities of the exopolysaccharide produced by potential probiotic Lactobacillus plantarum YW11 in a HT-29 tumor-burdened nude mouse model | |
Akter et al. | Seroprevalence of salmonellosis in layer chickens with isolation, identification and antibiogram study of their causal agents | |
Shoaib | Mycoplasmosis in poultry, a perpetual problem | |
Ferreira et al. | Screening of feral pigeons (Columba livia) for pathogens of veterinary and medical importance | |
Buncic et al. | Relationship between variations in pathogenicity and lag phase at 37 C of Listeria monocytogenes previously stored at 4 C | |
CN111836883B (zh) | 芽孢杆菌属细菌、白介素-22产生诱导剂、皮肤屏障功能增强剂 | |
Moore et al. | The effect of thermal stress on Campylobacter coli | |
Aisha et al. | Isolation of Listeria monocytogenes recovered from some ready-to-eat foods sold in Kano, North-Western Nigeria | |
Suryani et al. | New Probiotic Isolation of Coconut Water's Helpful Lactic Acid Bacteria Cure Covid-19 Patients | |
Verma | Brucellosis in animals and human beings with special reference to Indian subcontinent | |
RU2550256C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий | |
RU2639544C1 (ru) | Средство для лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта птицы | |
RU2741643C1 (ru) | Ассоциированная вакцина против миксоматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов | |
RU2696480C1 (ru) | Способ производства гамма-глобулинового полуфабриката с повышенным содержанием противовирусных антител из боенской крови вакцинированных коров | |
RU2787392C1 (ru) | Штамм бактерий gallibacterium anatis, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику галлибактериоза сельскохозяйственных птиц | |
El-Maghraby et al. | Sequencing of bcfC Gene of Salmonella Typhimurium Isolated from Ducks in Egypt | |
RU2695137C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180710 |