RU2602449C1 - Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния - Google Patents
Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния Download PDFInfo
- Publication number
- RU2602449C1 RU2602449C1 RU2015148444/15A RU2015148444A RU2602449C1 RU 2602449 C1 RU2602449 C1 RU 2602449C1 RU 2015148444/15 A RU2015148444/15 A RU 2015148444/15A RU 2015148444 A RU2015148444 A RU 2015148444A RU 2602449 C1 RU2602449 C1 RU 2602449C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mcl
- magnesium
- scion
- naoh
- anaemia
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для определения угрозы формирования в организме беременной анемии при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого выполняют гистохимическую реакцию в эритроцитах периферической крови на магний с помощью инкубационного раствора, приготовленного из 500 мкл воды, 250 мкл 10% вольфрамата натрия и 250 мкл 0,67N серной кислоты, с последующим отбором 625 мкл его и добавлением капли индикатора метилового красного и 0,2N NaOH до установления желтой окраски с последующим внесением 250 мкл 2% гидроксиламингидросульфата, 250 мкл 0,075% титанового желтого и 500 мкл 1,5N NaOH, причем в 250 мкл полученного раствора вносят 250 мкл цельной крови с коагулянтом, которые инкубируют в течение 15 минут, центрифугируют и из осадка изготавливают монослойные мазки, которые изучают с помощью цифрового микроскопа в программе «Scion», и при повышении титра антител IgG к ЦМВ до 1:1600, увеличении содержания магния до 72,20±1,65 пикселей/ммк2 в отдельно выделенном эритроците автоматически по программе «Scion» и снижении оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови до 86,50±1,3% создается угроза формирования у беременной анемии. Способ позволяет оценить угрозу формирования в организме беременной анемии при простоте его исполнения. 3 ил.
Description
1. Цель изобретения - разработать способ, позволяющий оценить влияние обострения цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина на третьем триместре гестации при повышении содержания в эритроцитах периферической крови ионов магния.
2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке метода, позволяющего оценить влияние цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на снижение оксигенации гемоглобина на фоне увеличения в эритроцитах ионов магния.
3. Раскрытие изобретения
Ионы Mg2++, которые содержатся в эритроцитах в пределах 1,75 ммоль/л эритроцитарной массы [4], образуют комплексы с 2,3ДФГ (дифосфоглицерофосфорной кислотой), что приводит к уменьшению концентрации свободного 2,3ДФГ, способного реагировать с гемоглобином [5, 6]. Сами по себе ионы Mg2++, а также комплексы с 2,3ДФГ с гемоглобином не реагируют [2]. Таким образом, на связь кислорода с деоксигемоглобином сильное влияние оказывает присутствие в эритроците анионов и катионов, к числу которых относится Mg2++, связь которого с 2,3ДФГ снижает его свободное содержание, подавляя тем самым оксигенацию гемоглобина. Увеличение в составе эритроцитов Mg2++ возможно при нарушении строения его мембраны [7, 9], что и происходит при контакте ее с цитомегаловирусом. В состав оболочки цитомегаловируса входят белковые частицы gp64 [8, 10], слияние которых с белками мембраны эритроцита позволяет изменять конформацию белков мембраны и формировать в ней поры, через которые из окружающей среды могут проникать вовнутрь эритроцита различные ионы, в том числе и ионы Mg2++. Таким образом, в эритроците накапливается повышенное количество ионов Mg2++, которые образуют комплексы с 2,3ДФГ и тем самым снижают оксигенацию гемоглобина.
4. Новая техническая задача
Разработать способ, позволяющий оценить подавляющее влияние цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при увеличении ионов магния в эритроцитах, количественное содержание которых определялось в отдельно взятом эритроците гистохимическим методом.
5. Придавая большое значение ионам магния в тканевом метаболизме организма, авторы считают [3], что для оценки содержания магния в крови нужно определять его не в сыворотке, поскольку этот метод малоинформативен, а учитывать его содержание в эритроцитах. В данной работе мы прибегли к методу определения магния в пиксель/ммк2 в отдельно взятых эритроцитах по программе «Scion» (США), что позволяет в зависимости от его количества при воздействии цитомегаловирусной инфекции оценить уровень оксигенации гемоглобина в эритроцитах. Подобного рода работ в доступной литературе мы не обнаружили.
6. Осуществление изобретения
6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 20 рожениц в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 10 беременных без патологии (контрольная группа). Диагноз обострения хронической цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности (65%), а также наличия ДНК к ЦМВ.
6.2. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2008 г. и правил клинической практики в Российской Федерации, утвержденных приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.
6.3. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методика ПЦР на аппарате ДТ-96 (Россия) с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
6.4. Содержание магния в отдельно взятых эритроцитах определяли гистохимическим методом. Магний в щелочной среде образует комплекс бурого цвета с титановым желтым, присутствие гидроксиламина стабилизирует окраску. При анализе эритроцитов белки осаждают вольфраматом натрия.
Последовательные этапы реакции
1. 0,075%-ный раствор титанового желтого: 18,7 мг вещества растворяют в 25 мл воды, хранят в холодильнике в темной склянке (реактив очень светочувствителен, годен не более 10 дней).
2. 2%-ный раствор гидрохлорида гидроксиламина: 2 г гидроксиламинагидро-сульфата (H2NOH-·H2SO4) растворяют в 100 мл воды.
3. 0,1%-ный раствор метилового красного в 95%-ном этиловом спирте (индикатор с зоной перехода рН 4,4-6,2).
4. 0,2N NaOH.
5. 1,5N NaOH.
6. 10%-ный раствор вольфрамовокислого натрия: 10 г вольфрамата натрия (Na2WO4) растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.
7. 0,67N серная кислота. Методика выявления магния.
Субстратом служили: 500 мкл воды с добавлением 250 мкл 10%-ного вольфрамата натрия и 250 мкл 0,67N серной кислоты. В отдельной пробирке готовили инкубационный раствор, отбирая 625 мкл раствора, к нему добавляли каплю индикатора метилового красного и 0,2N NaOH до установления желтой окраски. После этого вносили 250 мкл 2%-ного гидроксиламинагидросульфата, 250 мкл 0,075%-ного титанового желтого и 500 мкл 1,5N NaOH. В отдельную пробирку вносили 250 мкл полученного раствора и 250 мкл цельной крови с коагулянтом, взятой из локтевой вены утром натощак в стандартизованные вакуумные пробирки PUTH, КЗ ЭДТА. Инкубацию проводили в течение 15 мин при комнатной температуре, после чего готовили монослойный мазок на центрифуге «Diffe Spin-2». Полученные мазки высушивали и изучали с помощью цифрового микроскопа МТ (Япония), связанного с программно-аппаратным комплексом «Scion» (США). Далее в программе «PhotoShop» выделяют отдельно взятый эритроцит (фигура 1) и через программу «Scion», откалиброванную в компьютере, автоматически определяют в пикселях/ммк2 выделенный участок - отдельно взятый эритроцит.
6.5. Для контроля брали адекватное количество фосфатного буфера рН 7,4-7,6.
6.6. Содержание оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Меллой [1].
7. Статистическую обработку данных осуществляли по критерию Манна-Уитни, гипотезу о статистической значимости различий двух выборок - с помощью t критерия Стьюдента. Значения считали достоверными при р<0,01.
8. Полученные данные
Исследования показали, что при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра антител IgG к ЦМВ 1:1600 на третьем триместре гестации в периферической крови увеличивается содержание ионов магния до 72,20±1,65 пикселей/ммк2 (фигура 2) (контроль - 8,88±0,80 пикселей/ммк2) (фигура 3). В периферической крови в эритроцитах снижается оксигенация гемоглобина до 86,50±1,3%, что становится угрозой формирования у беременной анемии.
Литература
1. Покровский А.А. Справочник. Биохимические методы исследования. М.: Медицина. 1969. 337 с.
2. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция. М.: Медицина. 1976. 538 с.
3. Юлиш Е.И. Роль магния в патологии // Здоровье ребенка. - Донецк. - 2007. - Т. 5, №8. - С. 5-8.
4. Elin R.J. Magnesium metabolism in health and disease. Diseas - A - Morth. 1998. Vol. 3. P. 173.
5. Garby L., de Verdier C. Affinity of human hemoglobin A to 2,3-diphosphoglycerate. Effect of hemoglobin concentration and pH // Scand J. Clin. Labor. Invest. 1971. Vol. 27. P. 345-350.
6. Garby L. In: Synthesis, structure and function of hemoglobin. Molecular biology and clinical aspects. Ed. H. Martin L., Nowicki, J. Lehmanns Munchen, 1972. Vol. 10.
7. Levin S., Korenstein R. Membrane flucluations in erythrocytes are linked to Mg ATP-dependent dynamic assembly of the membrane skeleton // Biophys. J. 1991. 60(3). P. 733-737.
8. Li Z., Blissard G. Baculovirus GP64 disulfide bonds: the intermolecular disulfide bond of AcMNPV GP64 is not essential for membrane fusion and virion bundding // J. Virol. 2011. 8(23). P. 12492-12504.
9. Tuvia S., Levin S., Korenstein R. Oxygenation-deoxygenation cycle of erythrocytes modulates submicron cell membrane fluctuations // J. Biophys. 1992. 63(2). P. 599-602.
10. Xu R., Wilson I.A. Structural characterization of an early fusion intermediate of influenza virus hemagglutenin // J. Virol. 2011. Vol. 85. P. 5172-5182.
Claims (1)
- Способ определения угрозы формирования в организме беременной анемии при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации, включающий выполнение гистохимической реакции в эритроцитах периферической крови на магний с помощью инкубационного раствора, приготовленного из 500 мкл воды, 250 мкл 10% вольфрамата натрия и 250 мкл 0,67N серной кислоты с последующим отбором 625 мкл его и добавлением капли индикатора метилового красного и 0,2N NaOH до установления желтой окраски с последующим внесением 250 мкл 2% гидроксиламингидросульфата, 250 мкл 0,075% титанового желтого и 500 мкл 1,5N NaOH, причем в 250 мкл полученного раствора вносят 250 мкл цельной крови с коагулянтом, которые инкубируют в течение 15 минут, центрифугируют и из осадка изготавливают монослойные мазки, которые изучают с помощью цифрового микроскопа в программе «Scion», и при повышении титра антител IgG к ЦМВ до 1:1600, увеличении содержания магния до 72,20±1,65 пикселей/ммк2 в отдельно выделенном эритроците автоматически по программе «Scion» и снижении оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови до 86,50±1,3% создается угроза формирования у беременной анемии.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015148444/15A RU2602449C1 (ru) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015148444/15A RU2602449C1 (ru) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2602449C1 true RU2602449C1 (ru) | 2016-11-20 |
Family
ID=57759941
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015148444/15A RU2602449C1 (ru) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2602449C1 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2306564C1 (ru) * | 2006-05-10 | 2007-09-20 | ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности |
US20080096795A1 (en) * | 1997-05-13 | 2008-04-24 | The Regents Of The University Of California | Novel Antiangiogenic Peptide Agents and Their Therapeutic and Diagnostic Use |
-
2015
- 2015-11-10 RU RU2015148444/15A patent/RU2602449C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080096795A1 (en) * | 1997-05-13 | 2008-04-24 | The Regents Of The University Of California | Novel Antiangiogenic Peptide Agents and Their Therapeutic and Diagnostic Use |
RU2306564C1 (ru) * | 2006-05-10 | 2007-09-20 | ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЛУЦЕНКО М.Т. и др. "Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного комплекса у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, и патоморфологические изменения в органах плода"// Архив патологии, 2010, том 72, n.4, с.47-49. KAMILOVA N et al. Diagnostic indices of fetoplacental complex in pregnancy assessment of women with genital infections// Georgian Med News. 2008 Nov;(164):23-7. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Raess et al. | A semi-automated method for the determination of multiple membrane ATPase activities | |
CN110579593A (zh) | 一种刺激性促甲状腺激素受体抗体浓度的检测试剂盒 | |
CN105699665A (zh) | 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂盒 | |
CN110531085A (zh) | 一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
RU2602449C1 (ru) | Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина при повышении в эритроцитах содержания ионов магния | |
CN101738474A (zh) | 一种巨细胞病毒、风疹病毒联合检测试剂检测卡 | |
RU2459207C1 (ru) | Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при нарастании в них перекисей жирных кислот и обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции | |
CN108982868A (zh) | 核体蛋白sp110及含有该蛋白的试剂盒在制备酒精性心肌病早期诊断试剂中的应用 | |
RU2612010C1 (ru) | Способ определения угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность SH-групп в эритроцитах и приводящей к снижению оксигенации гемоглобина | |
El Sanousi et al. | Comparison of real-time PCR versus ELISA in the diagnosis of cytomegalovirus infection in pregnant women | |
Omoregie et al. | Prevalence of antibodies to HAART agents among HIV patients in Benin City, Nigeria | |
EP3521443A1 (en) | Saliva test for early cancer diagnosis | |
Smolarczyk et al. | The biochemical functions of the renal tubules and glomeruli in the course of intrahepatic cholestasis in pregnancy | |
Lawrie | The excretion of l (—)-tyrosine in urine | |
AU2021105747A4 (en) | Application of diagnostic kit and MAK16 in preparation of reagent for early diagnosis of systemic lupus erythematosus | |
RU2486520C1 (ru) | Способ экспресс-диагностики антигенов энтеровирусов в цереброспинальной жидкости | |
RU2454670C1 (ru) | Способ оценки влияния активности аргининдегидрогеназы на уровень гистамина в крови беременных, перенесших в третьем триместре гестации обострение герпес-вирусной инфекции с титром антител герпеса 1:12800 | |
CN110687285A (zh) | 诊断试剂盒及mak16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用 | |
Mahmooda et al. | Studying of some proteins levels and enzymes activities in the amniotic fluid for pregnant associated with premature birth | |
RU2596798C1 (ru) | Способ оценки влияния снижения магния в эритроцитах периферической крови беременных на развитие позднего токсикоза | |
RU2546531C1 (ru) | Способ определения пиридоксальфосфата в эритроцитах периферической крови | |
RU2536235C1 (ru) | Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции у беременной на третьем триместре гестации на содержание метгемоглобина и оксигенацию гемоглобина в периферической крови новорожденного | |
CN108872605A (zh) | 一种美洲锥虫病的检测试剂盒及其检测方法 | |
RU2577300C1 (ru) | Способ оценки подавления активности аденилатциклазы в мембранах эритроцитов при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременных на третьем триместре гестации | |
RU2535055C1 (ru) | Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171111 |