RU2589706C2 - Нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, защищающие против инфекций верхних дыхательных путей - Google Patents
Нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, защищающие против инфекций верхних дыхательных путей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2589706C2 RU2589706C2 RU2013126599/15A RU2013126599A RU2589706C2 RU 2589706 C2 RU2589706 C2 RU 2589706C2 RU 2013126599/15 A RU2013126599/15 A RU 2013126599/15A RU 2013126599 A RU2013126599 A RU 2013126599A RU 2589706 C2 RU2589706 C2 RU 2589706C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactobacillus
- ncc
- replicating
- composition according
- paragraphs
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 90
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 63
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 52
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 63
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims abstract description 47
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 43
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 43
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 40
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 claims description 26
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 claims description 26
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 claims description 25
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 claims description 17
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 13
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 12
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 12
- 241000901050 Bifidobacterium animalis subsp. lactis Species 0.000 claims description 11
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 10
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 10
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 claims description 8
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 claims description 8
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 claims description 7
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 7
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 claims description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 7
- 229940009289 bifidobacterium lactis Drugs 0.000 claims description 6
- 241001213452 Bifidobacterium longum NCC2705 Species 0.000 claims description 5
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 claims description 5
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 claims description 5
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 claims description 5
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 claims description 5
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 claims description 5
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 claims description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 4
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 4
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 claims description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 4
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 2
- 241001134770 Bifidobacterium animalis Species 0.000 claims description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 claims description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 claims description 2
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 claims description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 claims description 2
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 claims description 2
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 2
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 claims description 2
- 241000194034 Lactococcus lactis subsp. cremoris Species 0.000 claims description 2
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 claims description 2
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 claims description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036366 Sensation of pressure Diseases 0.000 claims description 2
- 235000014962 Streptococcus cremoris Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940118852 bifidobacterium animalis Drugs 0.000 claims description 2
- 208000001606 epiglottitis Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 claims description 2
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 2
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 claims description 2
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 claims description 2
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 2
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 claims description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 26
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 26
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 21
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 21
- 102000014158 Interleukin-12 Subunit p40 Human genes 0.000 description 17
- 108010011429 Interleukin-12 Subunit p40 Proteins 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 14
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 14
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 14
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 11
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 10
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 9
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 5
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 102100037437 Beta-defensin 1 Human genes 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000952040 Homo sapiens Beta-defensin 1 Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 4
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 2
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 2
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 101001033233 Homo sapiens Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 2
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 102000052620 human IL10 Human genes 0.000 description 2
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 2
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 150000003272 mannan oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000796654 Axos Species 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 101710178505 Defensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001302654 Escherichia coli Nissle 1917 Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 1
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 1
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 101710180319 Protease 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 101710137710 Thioesterase 1/protease 1/lysophospholipase L1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000011126 aluminium potassium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 108050002883 beta-defensin Proteins 0.000 description 1
- 102000012265 beta-defensin Human genes 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 description 1
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 230000004682 mucosal barrier function Effects 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- -1 oligosaccharose Chemical class 0.000 description 1
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229940050271 potassium alum Drugs 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию, содержащую нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, предназначенные для применения в целях профилактики или терапии инфекций верхних дыхательных путей и/или их симптомов, где нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы были сделаны нереплицирующимися посредством тепловой обработки при 120-140°С в течение краткосрочного периода 1-120 секунд. Изобретение обеспечивает повышение иммунитета и противовоспалительных свойств за счет развивающегося нового противовоспалительного иммунного профиля, а также улучшения уже имеющегося противовоспалительного профиля. 11 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к нереплицирующимся пробиотическим микроорганизмам и оказываемой ими пользе для здоровья. Например, настоящее изобретение относится к содержащей нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы композиции, предназначенной для применения в профилактики инфекций верхних дыхательных путей и/или их симптомов. Воплощения настоящего изобретения предоставляют средство, помогающее родителям защищать их детей от таких инфекций верхних дыхательных путей.
Организмы, производящие в качестве главного метаболического компонента молочную кислоту, известны на протяжении длительного времени. Эти бактерии могут быть найдены в молоке или, соответственно, на молочных заводах, на живых или разлагающихся растениях, а также в кишечнике человека и животных. Эти микроорганизмы, совокупно именуемые термином «молочнокислые бактерии», представляют довольно неоднородную группу и содержат, например, роды Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Pediococcus и т.д.
Молочнокислые бактерии применяются в качестве сбраживающих агентов для сохранения пищевых продуктов, получающих выгоды от низкого pH и действия продуктов ферментации, вырабатываемых в ходе ферментативной активности, с тем, чтобы замедлить рост бактерий, вызывающих порчу. Кроме того, молочнокислые бактерии также используются для приготовления из молока множества различных пищевых продуктов, таких как сыры, йогурты и другие ферментированные молочные продукты. Совсем недавно молочнокислые бактерии стали привлекать повышенное внимание в связи с обнаружение того, что некоторые штаммы демонстрируют ценные качества при приеме внутрь человеком или животным. В частности, найдено, что определенные штаммы Lactobacillus или Bifidobacterium способны колонизировать слизистую оболочку кишечника и содействовать обеспечению хорошего самочувствия человека или животного.
В этом отношении EP 0768375 раскрывает специфические штаммы рода Bifidobacterium, которые способны внедряться в кишечную флору и могут удерживаться на кишечных клетках. Сообщается, что эти Bifidobacteria, обладая способностью конкурентно исключать адгезию к кишечным клеткам патогенных бактерий, тем самым помогают в иммуномодуляции и поддержании здоровья человека.
Также исследования сосредоточилось на потенциале применения молочнокислых бактерий в качестве пробиотических агентов. Пробиотиками считаются жизнеспособные микробные препараты, которые способствуют поддержанию здоровья индивидуума посредством сохранения естественной микрофлоры кишечника. Полагают, что пробиотики прикрепляются к слизистой оболочке кишечника, колонизируют кишечный тракт и таким образом препятствуют закреплению на ней вредных микроорганизмов. Критически важное условие для осуществления их активности состоит в том, что они должны достичь слизистой оболочки кишечника в надлежащей и жизнеспособной форме и не разрушались бы в верхней части желудочно-кишечного тракта, в частности, под действием преобладающего в желудке низкого pH.
При этом часть исследовательских усилий направлена на обеспечение новых штаммов пробиотических бактерий, способных показывать новые полезные свойства для людей и/или животных, таких как домашние животные.
В этой связи WO 2008042101 предлагает способы снижения заболеваемости детей респираторными заболеваниями, содержащие: обеспечение культуры L. acidophilus; обнаружение детей, подверженных риску развития респираторных заболеваний; и введение культуры L. acidophilus детям с повышенным риском при таких условиях, которые снижают риск респираторных заболеваний.
Однако такое добавление живых пробиотических бактерий к продуктам, чтобы они оставались жизнеспособными до момента потребления, представляет собой нетривиальную задачу. Особенно труднодостижимо это для продуктов с длительными сроками хранения и может потребовать дополнительных технических усилий.
Поэтому было бы желательным иметь в наличии композицию, которая могла бы предоставлять полезные пробиотические эффекты, являясь при этом несложной в приготовлении и пригодной для хранения без потери активности.
Цель авторов настоящего изобретения состоит в предоставлении композиции, которая помогала бы родителям защищать себя и их детей от инфекций верхних дыхательных путей. Такая композиция должна быть несложной в приготовлении, а ее активность должна сохраняться высокой даже в условиях возможного хранения продукта в течение длительного времени. Такая композиция должна позволять безопасное осуществление терапии или профилактики инфекций верхних дыхательных путей без побочных эффектов. Должно быть уменьшено время протекания инфекций верхних дыхательных путей. Также должен быть снижен риск приобретения инфекций верхних дыхательных путей.
То есть цель настоящего изобретения состоит в обеспечении в данной области композиции, которая обращалась бы к одной или нескольким представленным выше потребностям.
Авторы настоящего изобретения с удивлением обнаружили, что они могут достигнуть этого с помощью объектов независимых пунктов формулы изобретения. Основную идею настоящего изобретения развивают дополнительные пункты формулы изобретения.
Соответственно, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, предназначенные для применения в профилактике или терапии инфекций верхних дыхательных путей.
Настоящее изобретения также относится к применению нереплицирующихся пробиотических микроорганизмов для приготовления композиции, предназначенной для профилактики или терапии инфекций верхних дыхательных путей.
Композиции настоящего изобретения могу применяться для введения в течение осеннего и/или зимнего периода. В это время вероятность приобретения инфекций верхних дыхательных путей особенно высока.
Например, композиции могут предназначаться для приема утром с тем, чтобы укрепить защитную систему организма против инфекций верхних дыхательных путей в течение дня.
Композиция настоящего изобретения может предназначаться для приема людьми или домашними животными. Домашние животные могут быть, например, собаками или кошками.
Дети весьма вероятно приобретают инфекции верхних дыхательных путей, поскольку они вступают в тесный контакт со многими другими людьми, например, в школе или в детском саду.
Поэтому композиция настоящего изобретения может быть применимой для назначения детям, например, маленьким детям или младенцам.
У людей дети имеют возраст вплоть до 18 лет. Маленькие дети имеют возраст вплоть до 12 лет, а младенцами являются дети младше 12 месяцев.
«Нереплицирующиеся» пробиотические микроорганизмы включают пробиотические бактерии, подвергнутые тепловой обработке. Они включают микроорганизмы, которые являются инактивированными, мертвыми, нежизнеспособными и/или присутствующими в виде фрагментов, таких как ДНК, метаболиты, цитоплазматические соединения или материалы клеточной оболочки.
«Нереплицирующиеся» означает, что никаких жизнеспособных клеток и/или колониеобразующих единиц классическими методами культивирования обнаружено быть не может. Такие классические методы культивирования сведены воедино в книге по микробиологии James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden. 2005. Modern food microbiology («Современная микробиология пищевых продуктов»). 7 издание, Springer Science, Нью-Йорк, N.Y. 790 стр. Как правило, отсутствие жизнеспособных клеток может быть показано следующим образом: отсутствие каких-либо видимых колоний на чашках с агаровой средой или отсутствие возрастающего помутнения в жидкой среде для выращивания после засева бактериальными препаратами в различных концентрациях («нереплицирующиеся» образцы) и выдерживания в подходящих условиях (аэробная и/или анаэробная атмосфера на протяжении по меньшей мере 24 час).
Пробиотики для целей настоящего изобретения определяются как «препараты микробиологических клеток или компоненты микробиологических клеток, обладающие благотворным воздействием на состояние здоровья или самочувствие организма». (Salminen S, Ouwehand A. Benno Y. и др. "Probiotics: how should they be defined" («Пробиотики: как их следует определять») Trends Food Sci. Technol. 1999:10 107-10).
Возможность применения нереплицирующихся пробиотических микроорганизмов предлагает несколько преимуществ. У младенцев или маленьких детей с серьезными иммунными нарушениями применение живых пробиотиков может быть ограничено исключительными случаями, обусловленными наличием потенциального риска развития бактериемии. Нереплицирующиеся пробиотики могут применяться безо всяких проблем.
Помимо этого, снабжение нереплицирующимися пробиотическими микроорганизмами делает возможным восстановление в горячей воде при сохранении полезных для здоровья качеств.
Композиция настоящего изобретения может быть любым видом композиции, подходящей для введения людям или домашним животным. Соответственно, данная композиция может быть пищевым продуктом, кормовым продуктом для домашнего животного, нутрицевтиком, пищевой добавкой, порошкообразной питательной композицией, добавкой к пищевому продукту или напитком.
Инфекции верхних дыхательных путей могут выбираться из группы, состоящей из ринита, риносинусита, назофарингита, фарингита, эпиглоттита, ларингита, ларинготрахеита, трахеита или их комбинаций.
Симптомы инфекций верхних дыхательных путей могут выбираться из группы, состоящей из кашля, боли в горле, выделений из носа, заложенности носа, головной боли, слабых проявлений лихорадки, ощущение давления в области лица, чихания и их комбинаций.
Так как инфекции верхних дыхательных путей обычно ассоциируются с дискомфортом, ухудшением производительности и потерей концентрации, имеется необходимость в защите детей против инфекций верхних дыхательных путей.
Авторы данного изобретения с удивлением обнаружили, что, например, в отношении укрепления иммунной системы и/или с точки зрения противовоспалительного действия нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы могут быть даже более эффективными, чем реплицирующиеся пробиотические микроорганизмы.
Помимо этого, нереплицирующиеся, подвергнутые тепловой обработке La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225) вызвали выраженную экспрессию дефензина. Дефензины представляют один из наиболее важных классов антимикробных пептидов у людей. Дефензины вырабатываются эпителиальными клетками легких, кожи, полости рта, мочеполового, дыхательного и желудочно-кишечного тракта. Среди них имеется семейство β-дефензинов, включающее дефензин 1 (hBDl) и 2 (hBD2). Например, было найдено, что подвергнутый тепловой обработке L. johnsonii (Lai, NCC 533, депозитарный номер CNCM 1-1225) активирует hBDl более сильно, чем его живая копия. HBD1 демонстрирует антибактериальную активность против широкого спектра бактерий, включая Е. coli и Pseudomonas aeruginosa, Н. pylori (Nuding, S., и др., 2009, Microbes.Infect. 11:384-393) и также против дрожжевых грибков, таких как Candida albicans (O′Neil, D.A. 2003, Mol. Immunol 40:445-450) и вирусы (вирус иммуннодефицита человека) (Kota, S. и др., 2008, J. Biol. Chem 283:22417-22429). Таким образом, эти антимикробные пептиды укрепляют мукозальный барьер и тем самым ограничивают бактериальную адгезию и инвазию.
Соответственно, композиция настоящего изобретения может быть предназначена для применения в целях защиты детей от инфекций верхних дыхательных путей.
В частности, композиция настоящего изобретения предоставляет родителям возможность защитить их детей от инфекций верхних дыхательных путей.
Композиция настоящего изобретения может также применяться для укрепления способности ребенка бороться с инфекциями верхних дыхательных путей. Активный образ жизни детей исключительно важен для их развития, но при этом также подразумевает контакт со многими возможными источниками инфекций. Сильные защитные механизмы против нежелательных инфекций будут содействовать их хорошему самочувствию.
Следовательно, композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть также предназначена для применения в целях содействия в менее частом приобретении детьми инфекций верхних дыхательных путей. Вероятность приобретения детьми инфекций верхних дыхательных путей может быть снижена по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30% или предпочтительно по меньшей мере на 50%.
Улучшенные противовоспалительные свойства, улучшенная способность к укреплению иммунитета композиций настоящего изобретения и/или повышенная экспрессии дефензина композицией настоящего изобретения усиливают защитные механизмы, приводя к меньшему количеству инфекций верхних дыхательных путей.
Композиция настоящего изобретения также может быть предназначена для применения в целях сокращения времени протекания инфекций верхних дыхательных путей. Например, продолжительность инфекций верхних дыхательных путей может быть снижена по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30% или предпочтительно по меньшей мере на 50%.
То есть нереплицирующиеся пробиотики настоящего изобретения представляют безопасную и естественную альтернативу лекарственной терапии.
Композиция настоящего изобретения может также содержать пребиотики. Пребиотики могут поддерживать рост пробиотиков до того, как те переводятся в нереплицирующееся состояние. Под «пребиотиком» подразумеваются неусваиваемые пищевые материалы, которые поддерживают рост полезных для здоровья микроорганизмов и/или пробиотиков в кишечнике. Они не подвергаются расщеплению в желудке и/или верхних отделах кишечника и не всасываются желудочно-кишечным трактом принимающего их человека, но они ферментируются желудочно-кишечной микробиотой и/или пробиотиками. Пребиотики, например, определяются публикацией Glenn R. Gibson and Marcel В. Roberfroid Dietary Modulation of the Human Colonic Microbiota: Introducing the Concept of Prebiotics (Диетическое модифицирование толстокишечной микробиоты человека: представление концепции пребиотиков), J. Nutr. 1995 125: 1401-1412.
Пребиотики, которые могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением, специальным образом не ограничиваются и включают все пищевые материалы, которые способствуют росту пробиотиков или полезных для здоровья микроорганизмов в кишечнике. Предпочтительно они могут выбираться из группы, состоящей из олигосахаридов, необязательно содержащих фруктозу, галактозу, маннозу; пищевых волокон, в частности, растворимых волокон, волокон сои; инулина или их смесей. Предпочтительные пребиотики являются фруктоолигосахаридами (FOS), галактоолигосахаридами (IOS), изомальтоолигосахаридами (IMO), ксилоолигосахаридами (XOS), арабино-ксилоолигосахаридами (AXOS), маннанолигосахаридами (MOS), олигосахаридами сои, гликозилсахарозой (GS), лактосахарозой (LS), лактулозой (LA), палатинозоолигосахаридами (РАО), мальтоолигосахаридами, камедями и/или их гидролизатами, пектинами и/или их гидролизатами. Например, данные композиции могут содержать олигофруктозу, инулин или их комбинацию.
Композиция согласно настоящему изобретению может содержать нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в любом эффективном количестве, например, в количестве, соответствующем по сухой массе до около 106-1012 КОЕ/г.
Композиции настоящего изобретения содержат нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в количестве, достаточном для по меньшей мере частичного обеспечения благотворного воздействия на здоровье. Подходящее для обеспечения такого действия количество определяется как «терапевтически эффективная доза». Эффективные для этих целей количества зависят от многих известных специалистам в данной области факторов, таких как масса тела и общее состояние здоровья ребенка, а также от эффекта, оказываемого матрицей пищевого продукта.
При профилактических применениях композиции согласно изобретению назначаются восприимчивым или иным образом подверженным риску развития определенного заболевания индивидуумам в количестве, которое является достаточным для по меньшей мере частичного снижения риска развития такого заболевания. Такое количество определяется как представляющее собой «профилактически эффективную дозу». Аналогично, точные количества зависят от ряда таких факторов, как состояние здоровья и масса ребенка, а также от эффекта, оказываемого матрицей пищевого продукта.
Специалисты в данной области смогут отрегулировать терапевтически эффективную дозу и/или, соответственно, профилактически эффективную дозу.
В целом композиция настоящего изобретения содержит нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в терапевтически эффективной дозе и/или в профилактически эффективной дозе.
Как правило, терапевтически эффективная доза и/или профилактически эффективная доза находится в диапазоне около 0,005 мг - 1000 мг нереплицирующихся пробиотических микроорганизмов в сутки.
В численном выражении подвергнутые «кратковременной высокотемпературной» обработке нереплицирующиеся микроорганизмы могут присутствовать в композиции в количествах, эквивалентно соответствующих между 104 и 1012 КОЕ/г сухой композиции. Очевидно, что нереплицирующиеся микроорганизмы не образуют колоний, поэтому этот термин следует понимать как количество нереплицирующихся микроорганизмов, которое получается из от 104 до 1012 КОЕ/г реплицирующихся бактерий. Они включает микроорганизмы, которые являются инактивированными, мертвыми, нежизнеспособными и/или присутствуют в виде фрагментов, таких как ДНК или цитоплазматические соединения. Другими словами, количество микроорганизмов, которое содержит данная композиция, вне зависимости от того, являются ли они на самом деле живыми, инактивированными, мертвыми или фрагментированными, или же представляют собой смесь любых из этих состояний, выражается в терминах способности данного количества микроорганизмов образовывать колонии (КОЕ), как если бы все эти микроорганизмы являлись бы живыми.
Предпочтительно нереплицирующиеся микроорганизмы присутствуют в количестве, эквивалентном величине между 104 и 109 КОЕ/г сухой композиции, еще более предпочтительно в количестве, эквивалентном величине между 105 и 109 КОЕ/г сухой композиции.
Пробиотики могут быть приведены в нереплицирующееся состояние любым известным в данной области способом.
Имеющиеся в настоящее время технологии, пригодные для приведения пробиотика в нереплицирующееся состояние, обычно представлены тепловой обработкой, γ-облучением, ультрафиолетовым светом или применением химических реагентов (формалин, параформальдегид).
Предпочтительной для приведения пробиотика в нереплицирующееся состояние была бы технология, которая являлась бы относительно простой в применении в производственных условиях пищевой промышленности.
Большинство представленных в настоящее время на рынке продуктов содержат пробиотики, подвергнутые в процессе их изготовления тепловой обработке. Поэтому было бы удобным иметь возможность обрабатывать пробиотики нагреванием либо вместе с вырабатываемым продуктом, либо по меньшей мере подобным способом, при том, чтобы пробиотики сохраняли или улучшали свои полезные качества, или даже приобретали бы новые полезные для потребителя свойства.
Однако инактивация пробиотических микроорганизмов тепловой обработкой по литературным данным, как правило, связана с по меньшей мере частичной потерей активности пробиотика.
Авторы настоящего изобретения в данное время с удивлением обнаружили, что приведение пробиотических микроорганизмов в нереплицирующееся состояние, например, тепловой обработкой не приводит к потере полезных для здоровья качеств пробиотика, но, наоборот, может усиливать имеющийся благотворный эффект и даже приводить к созданию новых благоприятствующих здоровью свойств.
В этой связи одним воплощением настоящего изобретения является композиция, в которой нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы приводятся в нереплицирующееся состояние тепловой обработкой.
Такая тепловая обработка может выполняться при по меньшей мере 71,5°C в течение по меньшей мере 1 секунды.
Может применяться как длительная тепловая обработка, так и кратковременная тепловая обработка.
В промышленных масштабах в настоящее время предпочтительными обычно являются способы краткосрочной тепловой обработки, такие как подобные UHT (ультравысокотемпературная) тепловой обработке. Этот вид тепловой обработки снижает бактериальную нагрузку и сокращает продолжительность обработки, тем самым снижая ухудшение качества питательных веществ.
Авторы данного изобретения впервые продемонстрировали, что пробиотические микроорганизмы, подвергнутые тепловой обработке при высоких температурах в течение непродолжительного времени, демонстрируют противовоспалительные иммунные профили независимо от своих исходных свойств. В частности, либо вырабатывается новой противовоспалительный профиль, либо существующий противовоспалительный профиль в результате такой тепловой обработки усиливается.
Поэтому теперь оказывается возможным вырабатывать нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы с противовоспалительными иммунными профилями, применяя специальные параметры тепловой обработки, которые соответствуют типичным применяемым при тепловой обработке в промышленности, даже если их живые аналоги не являются штаммами, обладающими противовоспалительной активностью.
Поэтому тепловая обработка может представлять собой, например, высокотемпературную обработку при около 71,5-150°C в течение около 1-120 секунд. Высокотемпературная обработка может являться высокотемпературной/кратковременной (HTST) обработкой или ультравысокотемпературной (UHT) обработкой.
Пробиотические микроорганизмы могут быть подвергнуты высокотемпературной обработке при около 71,5-150°C в течение короткого времени около 1-120 секунд.
Более предпочтительно микроорганизмы могут быть подвергнуты высокотемпературной обработке при около 90-140°C, например, при 90-120°C в течение короткого времени около 1-30 секунд.
Эта высокотемпературная обработка переводит микроорганизмы, по меньшей мере частично, в нереплицирующееся состояние.
Высокотемпературная обработка может проводиться при нормальном атмосферном давлении, но также может быть выполнена под повышенным давлением. Типичные диапазоны давлений составляют от 1 до 50 бар, предпочтительно от 1 до 10 бар, еще более предпочтительно от 2 до 5 бар. Очевидно, что предпочтительным будет, если пробиотики подвергаются тепловой обработке в питательной среде, которая при приложении теплоты является жидкостью или твердым веществом. Поэтому идеальная величина прикладываемого давления будет зависеть от природы композиции, которая обеспечивается микроорганизмами, и от используемой температуры.
Высокотемпературная обработка может выполняться в интервале температур около 71,5-150°C, предпочтительно около 90-120°C, еще более предпочтительно около 120-140°C.
Высокотемпературная обработка может проводиться в течение короткого времени около 1-120 секунд, предпочтительно около 1-30 секунд, еще более предпочтительно около 5-15 секунд.
Данный временной интервал относится ко времени, в течение которого пробиотические микроорганизмы подвергаются воздействию данной температуры. Следует заметить, что в зависимости от природы и количества обеспечиваемой микроорганизмами композиции, а также в зависимости от конструкции применяемого нагревательного устройства, продолжительность применяемого нагревания может изменяться.
Однако, как правило, композиция настоящего изобретения и/или микроорганизмы подвергаются высокотемпературной кратковременной (HTST) обработке, мгновенной пастеризации или ультравысокотемпературной () обработке.
обработка является ультравысокотемпературной обработкой или ультратепловой обработкой (обе сокращаются аббревиатурой UHT), включающей по меньшей мере частичную стерилизацию композиции при нагревании ее в течение короткого времени, приблизительно 1-10 секунд, при температуре, превышающей 135°C (275°F), которая является температурой, необходимой для уничтожения в молоке спор бактерий. Например, такая обработка молока с помощью температур, превышающих 135°C, делает возможным снижение величины бактериальной нагрузки при таком обязательным времени пребывания (до 2-5 с), которое позволяет использовать режим непрерывного потока.
Есть два основных типа UHT-систем: прямые и непрямые системы. В прямой системе продукты обрабатываются впрыскиванием пара или нагнетанием пара, тогда как в непрямой системе продукты подвергаются тепловой обработке с помощью пластинчатого теплообменника, трубчатого теплообменника или скребкового теплообменника. В процессе обработки продукта комбинации UHT-систем могут применяться на любом этапе или на ряде этапов.
Обработка HTST определяется следующим образом (высокая температура/короткое время): способ пастеризации, предназначенный для пятикратного по логарифмической шкале снижения количества жизнеспособных микроорганизмов в молоке с уничтожением 99,9999% их общего содержания. Это считается подходящим для истребления почти всех дрожжей, плесневых грибков и обычных вызывающих порчу бактерий, а также для обеспечения надлежащего уничтожения обычных патогенных теплоустойчивых организмов. При способе HTST молоко 15-20 секунд нагревается до 71,7°C (161°F).
Мгновенная пастеризация является способом тепловой пастеризации скоропортящихся напитков, таких как фруктовые и овощные соки, пиво и молочные продукты. Она выполняется перед расфасовкой в контейнеры для уничтожения вызывающих порчу микроорганизмов, придания продуктам большей безопасности и увеличения продолжительности их хранения. Жидкость двигается в контролируемом непрерывном потоке и при этом в течение около 15-30 секунд подвергается воздействию температур от 71,5°C (160°F) до 74°C (165°F).
Для целей настоящего изобретения термин «кратковременная высокотемпературная обработка» включает, например, кратковременную обработку при высокой температуре (HTST), UHT-обработку и мгновенную пастеризацию.
Так как такая тепловая обработка придает нереплицирующимся пробиотикам улучшенный противовоспалительный профиль, композиция настоящего изобретения может быть применена в профилактике или терапии воспалительных нарушений.
Если для приведения пробиотических микроорганизмов в нереплицирующееся состояние применяется длительная тепловая обработка, такая тепловая обработка может осуществляться в интервале температур около 70-150°C в течение около 3 минут - 2 часов, предпочтительно в диапазоне 80-140°C от 5 минут до 40 минут.
В то время как существующий уровень техники в основном указывает, что бактерии, приведенные в нереплицирующееся состояние с помощью длительной тепловой обработки, обычно менее эффективны, чем живые клетки, в отношении проявления их пробиотических качеств, авторы настоящего изобретения смогли продемонстрировать, что подвергнутые тепловой обработке пробиотики превосходят свои живые аналоги в способности стимулировать иммунную систему.
Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей пробиотические микроорганизмы, приведенные в нереплицирующееся состояние тепловой обработкой в течение по меньшей мере около 3 минут при по меньшей мере около 70°C.
Усиливающее иммунную систему действие нереплицирующихся пробиотиков было подтверждено in vitro иммунным профилем. В применяемой in vitro модели используется цитокиновый профиль человеческих мононуклеаров периферической крови (РВМС) и хорошо принимается в данной области в качестве стандартной модели для исследования иммуномодулирующих соединений (Schultz и др., 2003, Journal of Dairy Research 70, 165-173; Taylor и др., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235; Kekkonen и др., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203).
Испытания РВМС in vitro применялись несколькими авторами / исследовательскими группами, например, для классифицирования пробиотиков согласно их иммунным профилям, то есть по их анти- или провоспалительным показателям (Kekkonen и др., 2008, World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203). Было показано, например, что такие испытания позволяют прогнозировать противовоспалительное действие исследуемых пробиотиков в отношении кишечного колита в моделях на мышах (Foligne В. и др., 2007, World J. Gastroenterol. 13:236-243). Более того, это испытание регулярно применяется в качестве показательного в клинических исследованиях и была продемонстрирована его способность представлять результаты, согласующиеся с клиническими данными (Schultz и др., 2003, Journal of Dairy Research 70, 165-173; Taylor и др., 2006, Clinical and Experimental Allergy, 36, 1227-1235).
За последние десятилетия непрерывно увеличивается распространенность аллергических заболеваний и в настоящее время они рассматриваются ВОЗ в качестве эпидемических. В общих чертах аллергия, как полагают, является следствием дисбаланса между иммунными ответами Th1 и Th2, приводящего к сильному сдвигу в сторону продуцирования медиаторов Th2. Поэтому аллергия может быть смягчена, подавлена или предотвращена посредством восстановления надлежащего соответствия между Th1 и Th2 компонентами иммунной системы. Это подразумевает необходимость в снижении Th2-ответов или усилении, по меньшей мере временном, ответа Th1. Последнее было бы показателем укрепления иммунной системы, часто сопровождаемого, например, высокими уровнями IFNγ, TNF-α и IL-12 (World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203; Viljanen M. и др., 2005, Allergy, 60, 494-500).
Композиция настоящего изобретения позволяет поэтому излечивать или предупреждать нарушения, связанные с повреждениями иммунной защиты.
Описанная в настоящем изобретении композиция позволяет также усиливать реакцию на вакцины, в частности, на пероральные вакцины.
Эффективными могут быть любые количества нереплицирующихся микроорганизмов. Однако предпочтительно, чтобы в целом по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%, идеально по меньшей мере 99,9%, наиболее идеально все пробиотики являлись бы нереплицирующимися.
В одном воплощении настоящего изобретения все микроорганизмы являются нереплицирующимися.
Соответственно, в композиции настоящего изобретения по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%, идеально по меньшей мере 99,9%, наиболее идеально все пробиотики являются нереплицирующимися.
Для целей настоящего изобретения могут применяться любые пробиотические микроорганизмы.
Например, пробиотические микроорганизмы могут выбираться из группы, состоящей из бифидобактерий, молочнокислых бактерий, пропионовокислых бактерий или их комбинаций, например, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli и/или их смесей.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением может, например, содержать пробиотические нереплицирующиеся микроорганизмы, выбранные из группы, состоящей из Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus johnsonii Lai, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus reuteri DSM17983, Lactobacillus reuteri ATCC55730, Streptococcus thermophilus NCC 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825), Escherichia coli Nissle, Lactobacillus bulgaricus NCC 15, Lactococcus lactis NCC 2287 или их комбинаций.
Все эти штаммы были или депонированы согласно Будапештскому договору, и/или являются предлагаемыми в продаже.
Депонированными согласно Будапештскому договору являются следующие штаммы:
| Bifidobacterium longum NCC 3001 | ATCC BAA-999 |
| Bifidobacterium longum NCC 2705 | CNCM I-2618 |
| Bifidobacterium breve NCC 2950 | CNCM I-3865 |
| Bifidobacterium lactis NCC 2818 | CNCM I-3446 |
| Lactobacillus paracasei NCC 2461 | CNCM I-2116 |
| Lactobacillus rhamnosus NCC 4007 | CGMCC 1.3724 |
| Streptococcus themophilus NCC 2019 | CNCM I-1422 |
| Streptococcus themophilus NCC 2059 | CNCM I-4153 |
| Lactococcus lactis NCC 2287 | CNCM I-4154 |
| Lactobacillus casei NCC 4006 | CNCM I-1518 |
| Lactobacillus casei NCC 1825 | ACA-DC 6002 |
| Lactobacillus acidophilus NCC 3009 | ATCC 700396 |
| Lactobacillus bulgaricus NCC 15 | CNCM I-1198 |
| Lactobacillus johnsonii Lai | CNCM I-1225 |
| Lactobacillus reuteri DSM17983 | DSM17983 |
| Lactobacillus reuteri ATCC55730 | ATCC55730 |
| Escherichia coli Nissle 1917 | DSM 6601 |
Штаммы, именуемые ATCC, были депонированы в Американской коллекции типовых культур (ATCC Patent Depository), 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110, США.
Штаммы, именуемые CNCM, были депонированы в COLLECTION NATIONALE DE CULTURES DE MICROORGANISMES (CNCM), 25 rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS Cedex 15, Франция.
Штаммы, именуемые CGMCC, были депонированы в Китайском главном коллекционном центре микробиологических культур, Институт микробиологии Академии наук Китая, Zhongguancun, Р.О.Вох2714, Пекин 100080, Китай.
Штаммы, именуемые АСА-DC, были депонированы в Греческом координационном центре коллекций микроорганизмов, Лаборатория молочных продуктов, Отдел теоретических основ и технологии пищевых продуктов, Сельскохозяйственный университет Афин, 75, Ieraodos, Botanikos, Афины, 118 55, Греции.
Штаммы, именуемые DSM, были депонированы в DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr., 7 B, 38124 Braunschweig, Германия.
Специалистам в данной области очевидно, что они могут свободно объединять все описанные здесь признаки настоящего изобретения без отступления от его раскрываемого здесь объема.
Дальнейшие признаки и преимущества настоящего изобретения будут явствовать из следующих далее чертежей и примеров.
Фигуры 1A и B показывают усиление противовоспалительных иммунных профилей пробиотиков, подвергнутых «кратковременной высокотемпературной обработке».
Фигура 2 показывает штаммы пробиотиков, не обладающие противовоспалительными качествами, которые становились противовоспалительными, то есть демонстрирующими выраженный противовоспалительный профиль in vitro после «кратковременной высокотемпературной» обработки.
Фигуры 3A и B показывают штаммы пробиотиков, применяемые в коммерчески доступных продуктах, которые демонстрируют усиленные или новоприобретенные противовоспалительные иммунные профили in vitro после «кратковременной высокотемпературной» обработки.
Фигуры 4A и B показывают штаммы молочной закваски (то есть заквасочные штаммы Lc1), которые демонстрируют усиленные или новоприобретенные противовоспалительные иммунные профили in vitro после кратковременной обработки при высоких температурах.
Фигура 5 показывает штамм пробиотика, не обладающий противовоспалительными качествами, который демонстрирует противовоспалительный иммунный профиль in vitro после HTST-обработки.
Фигура 6 - Метод главных компонент на данных РВМС (IL-12p40, IFN-γ, TNF-α, IL-10), демонстрируемых пробиотическими и молочными заквасочными штаммами в их живом и подвергнутом тепловой обработке (140°C в течение 15 секунд) состоянии. Каждая точка представляет один штамм, живой либо подвергнутый тепловой обработке и идентифицируемый его NCC-номером или названием.
Фигура 7 показывает отношения IL-12p40/IL-10 живых и подвергнутых тепловой обработке (85°C, 20 мин) штаммов. В целом тепловая обработка в течение 20 минут при 85°C приводит к возрастанию величин отношения IL-12p40/IL-10 по сравнению с кратковременной высокотемпературной обработкой настоящего изобретения (Фигуры 1, 2, 3,4 и 5).
Фигура 8 показывает повышение in vitro секреции цитокина из человеческих РВМС, стимулируемой подвергнутыми тепловой обработке бактериями.
Фигура 9 показывает процентную интенсивность диареи, наблюдаемой у OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации солевым раствором (отрицательный контроль), OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации OVA (положительный контроль) и OVA-сенсибилизированных мышей, подвергнутых провокации OVA и терапии подвергнутыми тепловой обработке или живыми Bifidobacterium breve NCC2950. Результаты отображены в виде процента от интенсивности диареи (среднее ±SEM, рассчитанное по 4 независимым экспериментам) со 100% интенсивностью диареи, соответствующей симптомам, развившимся в группе с положительным контролем (сенсибилизация и провокация аллергеном).
Фигура 10 показывает, что La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225), подвергнутый тепловой обработке в течение 15 с при 120°C, очень сильно по сравнению с другими подвергнутыми тепловыми обработке штаммами индуцирует экспрессию мРНК hBD1 в кишечных эпителиальных клетках in vitro. С подвергнутыми тепловыми обработке штаммами в течение 4 час инкубировались клетки Т84. Экспрессия гена hBD1 анализировалась с помощью ПЦР в реальном времени. Столбцы представляют средние величины ±sem (стандартная погрешность среднего), нормализованные относительно базисной экспрессии не стимулировавшихся клеток.
Фигура 11 демонстрирует, что высокая температура и короткое время обработки La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225) показывает тенденцию к улучшению индуцирования экспрессию мРНК hBD1. Клетки Т84 стимулировались в течение 4 час с живым и подвергнутым тепловой обработке La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225) в течение 15 с при 120°C или 20 мин при 85°C. Экспрессия гена hBD1 анализировалась с помощью ПЦР в реальном времени. Столбцы представляют средние величины ±sem (стандартная погрешность среднего), нормализованные относительно базисной экспрессии не стимулировавшихся клеток.
Пример 1
Методика
Бактериальные препараты
Польза, предоставляемая живыми пробиотиками иммунной системе организма, как правило, рассматривается как штамм-специфическая. Было показано, что пробиотики, приводящие к высоким уровням IL-10 и/или вызывающие снижение уровней провоспалительных цитокинов in vitro (испытание РВМС) являются действенными противовоспалительными штаммами in vivo (Foligné В. и др., 2007, World J. Gastroenterol. 13:236-243).
При исследованиях противовоспалительных свойств подвергнутых тепловой обработке пробиотиков было использовано несколько пробиотических штаммов. Это были Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825) и Escherichia coli Nissle. Были также исследованы несколько штаммов заквасочных культур, включая некоторые штаммы, применяемые промышленно для получения ферментированных Lcl продуктов Nestle: Streptococcus thermophilus NCC 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus bulgaricus NCC 15 и Lactococcus lactis NCC 2287.
Бактериальные клетки культивировались в условиях, оптимизированных для каждого штамма, в 5-15 л биореакторах. Пригодными являются любые стандартные среды для выращивания бактериальных культур. Такие среды известны специалистам в данной области. После доведения pH до 5,5 в непрерывном режиме добавлялся 30% основной раствор (либо NaOH, либо Са(OH)2). Когда это было необходимо, создавались анаэробные условия заполнением свободного пространства газообразным CO2. Е. coli выращивалась при стандартных аэробных условиях.
Бактериальные клетки собирались центрифугированием (g, 4°C) и ресуспендировались в фосфатно-солевом буфере (PBS) в объемах, подходящих для достижения конечной концентрации около 109-1010 КОЕ/мл. Часть препарата была заморожена при -80°C с 15% глицерином. Другая часть клеток была подвергнута тепловой обработке с помощью:
- ультравысокой температуры: 140°C в течение 15 с; впрыскиванием глухого пара;
- высокой температуры в течение короткого времени (HTST): 74°C, 90°C и 120°C в течение 15 с впрыскиванием глухого пара;
- низкой температуры в течение длительного времени (85°C, 20 минут) на водяной бане;
При тепловой обработке образцы перед применением сохранялись в замороженном при -80C состоянии.
Оценка in vitro иммунного профиля бактериальных препаратов
Были выполнены оценки иммунных профилей живых и подвергнутых тепловой обработке бактериальных препаратов (то есть способность индуцировать секрецию специфических цитокинов клетками крови человека in vitro). Мононуклеары периферической крови (РВМС) человека были выделены из фильтров для крови. После разделения по градиенту плотности клеток были отобраны мононуклеарные клетки и дважды промыты сбалансированным солевым раствором Хэнкса. Клетки затем были ресуспендированы в среде Дульбекко, модифицированной по способу Исков, (IMDM, Sigma), дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Bioconcept, Париж, Франция), 1% L-глютамина (Sigma), 1% пенициллина/стрептомицина (Sigma) и 0,1% гентамицина (Sigma). РВМС (7×105 клеток на лунку) затем инкубировались с живыми и подвергнутыми тепловой обработке бактериями (эквивалент 7×106 КОЕ на лунку) в 48-луночных планшетах в течение 36 час. Влияние живых и подвергнутых тепловой обработке бактерий было проверено на РВМС, полученных от 8 различных доноров, разделенных на два отдельных эксперимента. После 36 час инкубации культуральные планшеты были заморожены и до измерений цитокинов сохранялись при -20°C. Определение цитокиновых профилей выполнялось параллельно (то есть в одном эксперименте на одной и тоже серии РВМС) для живых бактерий и для их экземпляров, подвергнутых тепловой обработке.
После 36 час инкубации в супернатантах клеточной культуры были определены уровни цитокинов (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α и IL-10) методом ELISA (иммуноферментный анализ) (R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA Human IL12p40, BD OptEIA Human TNFα, BD OptEIA Human IFN-γ) согласно инструкциям производителя. IFN-γ, IL-12p40 и TNF-α являются провоспалительными цитокинами, тогда как IL-10 является мощным противовоспалительным медиатором. Результаты выражены в виде среднего (пг/мл) +/- SEM по 4 индивидуальным донорам и являются репрезентативными для двух отдельных экспериментов, выполненных с 4 донорами в каждом. Для каждого штамма было вычислено отношение IL-12p40/IL-10 в качестве прогностического показателя in vivo противовоспалительного эффекта (Foligné В. и др., 2007, World J. Gastroenterol. 13:236-243).
Численные характеристики цитокинов (пг/мл), определенные по данным ELISA (см. выше) для каждого штамма, были введены в программу BioNumerics v5.10 ((Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Бельгия). К этому набору данных был применен метод главных компонент (РСА, методика задания размерности). В этот анализ было включено определение разницы средних величин по признакам и деление полученного показателя на величину дисперсии по этим признакам.
Результаты
Противовоспалительные профили, обеспечиваемые видами обработки, сходными с ультравысокотемпературной (UHT) / кратковременной высокотемпературной (HTST) обработкой.
Штаммы пробиотиков при исследовании были подвергнуты серии тепловых обработок (ультравысокотемпературная (UHT), кратковременная высокотемпературная (HTST) и 20 мин при 85°C), и их иммунные профили были сравнены с аналогичными профилями живых клеток in vitro. Живые микроорганизмы (пробиотики и/или молочные заквасочные культуры) при инкубации с человеческими РВМС индуцировали различные уровни продуцирования цитокинов (Фигуры 1, 2, 3, 4 и 5). Тепловая обработка этих микроорганизмов модифицировала уровни продуцируемых РВМС цитокинов температурно зависимым образом. «Кратковременная высокотемпературная» обработка (120°C или 140°C в течение 15 с) приводила к получению нереплицирующихся бактерий с противовоспалительными иммунными профилями (Фигуры 1, 2, 3 и 4). Фактически, штаммы, подвергнутые обработке, подобной ультравысокотемпературной (140°C, 15 с) индуцировали меньше провоспалительных цитокинов (TNF-α, IFN-γ, IL-12p40) при сохранении или стимулировании продуцирования дополнительного IL-10а (в сравнении с живыми аналогами). Полученные величины отношения IL-12p40/IL-10a для всех штаммов, подвергнутых UHT-подобной обработке, по сравнению с живыми клетками были сниженными (Фигуры 1, 2, 3 и 4). Это наблюдение было также действительно и для бактерий, подвергнутых HTST-подобной обработке, то есть 15 с при 120°C (Фигуры 1, 2, 3 и 4), или 15 с при 74°C и 90°C (Фигура 5). Тепловые обработки (UHT-подобные или HTST-подобные) имели сходное воздействие на in vitro иммунные профили штаммов пробиотиков (Фигуры 1, 2, 3 и 5) и молочных заквасочных культур (Фигура 4). Метод главных компонент на данных РВМС, полученных с живыми и подвергнутыми тепловой обработке (140°C, 15 с) штаммами пробиотиков и молочных заквасок, выявил, что живые штаммы распределяются по всей оси X, что показывает, что эти штаммы демонстрируют сильно различающиеся иммунные профили in vitro, от слабой (левая сторона) до сильной (правая сторона) индукции провоспалительных цитокинов. Группа подвергнутых тепловой обработке штаммов с левой стороны графика показывает, что подвергнутыми тепловой обработке штаммами провоспалительные цитокины индуцируются в значительно меньшей степени (Фигура 6). В отличие от этого, бактерии, подвергнутые тепловой обработке в течение 20 мин при 85°C, индуцировали больше провоспалительных цитокинов и меньше IL-10а, чем живые клетки, приводя к более высоким показателям отношения IL-12p40/IL-10a (Фигура 7).
Противовоспалительные профили, усиленные или полученные в результате UHT-подобной и HTST-подобной обработки.
Подвергнутые UHT- и HTST-обработке штаммы демонстрируют противовоспалительные профили независимо от их соответствующих исходных иммунных профилей (живые клетки). Было показано, что штаммы пробиотиков, известные в качестве противовоспалительных in vivo и демонстрирующие противовоспалительные профили in vitro (В. longum NCC 3001, В. longum NCC 2705, В. breve NCC 2950, В. lactis NCC 2818), демонстрируют усиленные противовоспалительные профили in vitro после «кратковременной высокотемпературной» обработки. Как показано на Фигуре 1, отношения IL-12p40/IL-10a подвергнутых UHT-подобной обработке штаммов Bifidobacterium были ниже, чем у живых аналогов, тем самым показывая улучшенные противовоспалительные профили образцов, подвергнутых UHT-подобной обработке. Еще более удивительно образование противовоспалительных профилей под действием UHT-подобной и HTST-подобной обработки, подтвержденное также и у не обладавших противовоспалительной активностью живых штаммов. Оба штамма живых L. rhamnosus NCC 4007 и L. paracasei NCC 2461 показывают высокие величины отношения IL-12p40/IL-10a in vitro (Фигуры 2 и 5). Было показано, что эти два живых штамма не обладают протективным действием против TNBS-индуцированного колита у мышей. Величины индуцированного L. rhamnosus NCC 4007 и L. paracasei NCC 2461 отношения IL-12p40/IL-10a резко снижались после «кратковременной высокотемпературной» обработки (UHT или HTST), достигая столь же низких уровней, как и полученные со штаммами Bifidobacterium. Такие низкие показатели отношения IL-12p40/IL-10a являются результатом низких уровней продуцирования IL-12p40 в сочетании с отсутствием изменений (L. rhamnosus NCC 4007) или сильным индуцированием секреции IL-10a (L. paracasei NCC 2461) (Фигура 2).
Как следствие:
- противовоспалительные профили живых микроорганизмов могут быть усилены UHT-подобной и HTST-подобной тепловой обработкой (например, В. longum NCC 2705, В. longum NCC 3001, B. breve NCC 2950, В. lactis NCC 2818);
- противовоспалительные профили могут быть получены у не обладающих противовоспалительной активностью живых микроорганизмов (например, L. rhamnosus NCC L. paracasei NCC 2461, молочные закваски S. thermophilus NCC 2019) посредством применения UHT-подобной и HTST-подобной тепловой обработки;
- продемонстрировано также наличие противовоспалительных профилей у штаммов, выделенных из представленных в продаже продуктов (Фигуры 3A и B), включая штамм пробиотической Е. coli.
Действие UHT/HTST-подобной обработки было сходным для всех исследовавшихся пробиотиков и молочных заквасок, например, молочнокислых бактерий, бифидобактерий и стрептококков.
UHT/HTST-подобная обработка применялась к нескольким видам молочнокислых бактерий, бифидобактерий и стрептококков, демонстрирующим различные in vitro иммунные профили. Все штаммы после UHT/HTST-подобной обработки индуцировали меньше провоспалительных цитокинов, чем их живые экземпляры (Фигуры 1, 2, 3, 4, 5 и 6), демонстрируя, что действие UHT/HTST-подобной обработки на иммунные свойства конечных нереплицирующихся бактерий может быть обобщено на все пробиотики, в частности, на молочнокислые бактерии, бифидобактерии и определенные штаммы Е. coli, а также на все молочные заквасочные культуры, в частности, стрептококки, лактококки и молочнокислые бактерии.
Пример 2
Методика
Бактериальные препараты
При исследовании усиления иммунных свойства нереплицирующихся пробиотиков было использовано пять пробиотических штаммов: 3 вида бифидобактерии (В. longum NCC3001, В. lactis NCC2818, В. breve NCC2950) и 2 молочнокислых бактерий (L. paracasei NCC2461.Z. rhamnosus NCC4007).
Бактериальные клетки выращивались на среде MRS в режиме периодического культивирования в течение 16-18 час при 37C без контроля pH. Бактериальные клетки центрифугировались (5000 g, 4°C) и ресуспендировались в фосфатно-солевом буфере перед разведением в водно-солевом растворе до достижения конечной концентрации около 1010 КОЕ/мл. В. longum NCC3001, В. lactis NCC2818, L. paracasei NCC2461, L. rhamnosus NCC4007 были подвергнуты тепловой обработке в течение 20 мин при 85°C на водяной бане. В. breve NCC2950 нагревались 30 минут на водяной бане при 90°C. Подвергнутые тепловой обработке бактериальные суспензии аликвотировались и до применения сохранялись в замороженном при -80°C состоянии. Живые бактерии до применения сохранялись при -80°C в смеси PBS-глицерин (15%).
Оценка in vitro иммунного профиля бактериальных препаратов
Были выполнены оценки иммунных профилей живых и подвергнутых тепловой обработке бактериальных препаратов (то есть способность индуцировать секрецию специфических цитокинов клетками крови человека in vitro). Мононуклеары периферической крови (РВМС) человека были выделены из фильтров для крови. После разделения по градиенту плотности клеток были отобраны мононуклеарные клетки и дважды промыты сбалансированным солевым раствором Хэнкса. Клетки затем были ресуспендированы в среде Дульбекко, модифицированной по способу Исков, (IMDM, Sigma), дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Bioconcept, Париж, Франция), 1% L-глютамина (Sigma), 1% пенициллина/стрептомицина (Sigma) и 0,1% гентамицина (Sigma). РВМС (7×105 клеток на лунку) затем инкубировались с живыми и подвергнутыми тепловой обработке бактериями (эквивалент 7×106 КОЕ на лунку) в 48-луночных планшетах в течение 36 час. Влияние живых и подвергнутых тепловой обработке бактерий было проверено на РВМС, полученных от 8 различных доноров, при разделении на два отдельных эксперимента. После 36 час инкубации культуральные планшеты были заморожены и до измерений цитокинов сохранялись при -20°C. Определение цитокиновых профилей выполнялось параллельно (то есть в одном эксперименте на одной и тоже серии РВМС) для живых бактерий и для их экземпляров, подвергнутых тепловой обработке.
После 36 час инкубации в супернатантах клеточной культуры были определены уровни цитокинов (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α и IL-10) методом ELISA (иммуноферментный анализ) (R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA Human IL12p40, BD OptEIA Human TNFα, BD OptEIA Human IFN-γ) согласно инструкциям производителя. IFN-γ, IL-12p40 и TNF-γ являются провоспалительными цитокинами, тогда как IL-10 является мощным противовоспалительным медиатором. Результаты выражены в виде среднего (пг/мл) +/- SEM по 4 индивидуальным донорам и являются репрезентативными для двух отдельных экспериментов, выполненных с 4 донорами в каждом.
Эффект in vivo живых и подвергнутых тепловой обработке Bifidobacterium breve NCC2950 в профилактике аллергической диареи.
Для проверки Th1-промотирующего действия В. breve NCC2950 использовалась модель аллергической диареи на мышах (Brandt Е.В и др. JCI 2003; 112 (11): 1666-1667). После сенсибилизации (2 интраперитонеальные инъекции яичного альбумина (OVA) и алюминиевокалиевых квасцов с интервалом в 14 дней; дни 0 и 14), самцы мышей линии Balb/c были подвергнуты 6-кратной пероральной провокации OVA (дни 27, 29, 32, 34, 36, 39), приводящей к кратковременным клиническим симптомам (диарея) и изменению иммунных параметров (плазменная концентрация общего IgE, OVA-специфического IgE, протеазы-1 тучных клеток мышей, то есть ММСР-1). Bifidobacterium breve NCC2950, живые или подвергнутые 30 мин тепловой обработке при 90°C, вводились чреззондовым питанием за 4 дня до OVA-сенсибилизации (дни -3, -2, -1, 0 и дни 11, 12, 13 и 14) и во время провокационного периода (дни 23 - 39). Использовалась суточная доза бактерий около 109 колониеобразующих единиц (КОЕ) или эквивалентные количества в выражении КОЕ/мышь.
Результаты
Индукция секреции «провоспалительных» цитокинов после тепловой обработки
Была оценена in vitro способность подвергнутых тепловой обработке бактериальных штаммов стимулировать секрецию цитокинов мононуклеарами периферической крови (РВМС) человека. Иммунные профили, основанные на четырех цитокинах, продуцируемых при стимулировании РВМС подвергнутыми тепловой обработке бактериями, сравнивались с индуцируемыми живыми бактериальными клетками в условиях одинаковых испытаний in vitro.
Подвергнутые тепловой обработке препараты высевались на чашки и оценивались на отсутствие какого-либо количества жизнеспособных микроорганизмов. Подвергнутые тепловой обработке бактериальные препараты не образовывали колоний после высевания на чашки.
Живые пробиотики при инкубации с человеческими РВМС индуцировали различные и зависящие от вида штамма уровни цитокинов (Фигура 8). Тепловая обработка пробиотиков модифицировала уровни продуцируемых РВМС цитокинов по сравнению с их живыми аналогами. Подвергнутые тепловой обработке бактерии индуцировали больше провоспалительных цитокинов (TNF-α, IFN-γ, IL-12p40), чем их живые аналоги. Напротив, подвергнутые тепловой обработке бактерии в сравнении с живыми клетками индуцировали подобные или более низкие количества IL-10а (Фигура 8). Эти данные показывают, что подвергнутые тепловой обработке бактерии способны в большей степени стимулировать иммунную систему, чем их живые аналоги, и поэтому могут эффективнее укреплять ослабленную иммунную защиту. Другими словами, in vitro данные иллюстрируют улучшение эффекта укрепления иммунитета бактериальными штаммами после тепловой обработки.
Для того чтобы показать повышенную эффективность подвергнутых тепловой обработке В. breve NCC2950 (по сравнению с живыми клетками) в отношении действия на иммунную систему, и живые, и подвергнутые тепловой обработке В. breve NCC2950 (штамм А) были проверены в модели аллергической диареи на животных.
По сравнению с группой позитивного контроля интенсивность диареи после терапии с подвергнутыми тепловой обработке В. breve NCC2950 была значительно и устойчиво снижена (41,1±4,8%), тогда как интенсивность диареи после терапии с живыми В. breve NCC2950 была снижена только на 20±28,3%. Эти результаты показывают, что подвергнутые тепловой обработке В. breve NCC2950 демонстрируют более выраженное протективное действие против аллергической диареи, чем их живые эквиваленты (Фигура 9).
В результате показано улучшение способности пробиотиков усиливать иммунную защиту после подвергания их тепловой обработке.
Пример 3
Описание эксперимента
Использовались клетки Т84 из пассажа 30-40 и культивировались в модифицированной по Дульбекко минимальной незаменимой среде / F-12 (Sigma D 6421), содержащей 5% эмбриональной бычьей сыворотки (FCS) (Amined BioConcept) и 2 ммоль глутамина. Клетки были высеяны в концентрации 2×106 клеток на лунку в 6-луночных культуральных планшетах и выращивались в виде монослоев при 37°C в атмосфере из 5% CO2 и 95% воздуха. Клетки, выращенные к 1 неделе, после достижения конфлюэнтности инкубировались в не содержащей сыворотки и антибиотиков питательной среде в течение по меньшей мере 12 час. Этот этап был необходим для исключения вызываемой сывороткой экспрессии дефензина и предотвращения любого влияния антибиотиков на пробиотики и клеточный иммунный ответ. Далее клетки инкубировались с пробиотиками или подвергнутыми тепловой обработке штаммами в течение 4 час. После завершения инкубационного периода клетки промывались PBS и собирались с помощью изолирующего реагента TriPureTM согласно рекомендациям поставщика. Экспрессия генов человека hBD1 и hBD2 в подвергшихся такой обработке клетках оценивалась количественной ПЦР.
Использовавшиеся в этом эксперименте бактериальные штаммы были представлены В. longum (NCC 2705, депозитарный номер CNCM I-2618), В. lactis (NCC 2818, депозитарный номер CNCM I-3446), L.johnsonii (Lai, NCC 533, депозитарный номер CNCM I-1225), L. paracasei (ST11, NCC 2461, депозитарный номер CNCM I-2116). Эти исследовавшиеся штаммы были живыми или подвергнутыми тепловой обработке либо в течение 15 с при 120°C, либо в течение 20 мин при 85°C.
Результаты
Подвергшиеся тепловой обработке в течение 15 с при 120°C La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225), продемонстрировали сильную способность к индуцированию экспрессии мРНК hBD1 после 4 час инкубации (Фигура 10) в отличие от других исследовавшихся подвергнутых тепловых обработке штаммов. Эти данные являются уникальными, так как в настоящее время в научном сообществе считается, что являющаяся избирательной экспрессия HBD1 фактически не поддается модулированию микроорганизмами, микробными продуктами или воспалительными реакциями.
Как живые, так и подвергнутые тепловой обработке La1 (NCC533, депозитарный номер CNCM I-1225), вызывали сильную экспрессию мРНК hBD1, но наиболее высокая способность к индуцированию hBD1 проявлялась подвергнутыми тепловой обработке La1 (высокотемпературная и кратковременная обработка) (Фигура 11).
Claims (12)
1. Композиция, содержащая нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, предназначенная для применения в целях профилактики или терапии инфекций верхних дыхательных путей и/или их симптомов, где нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы были сделаны нереплицирующимися посредством тепловой обработки при 120-140°С в течение краткосрочного периода 1-120 секунд.
2. Композиция по п. 1, предназначенная для назначения детям.
3. Композиция по любому из пп. 1-2, в которой инфекции верхних дыхательных путей выбираются из группы, состоящей из ринита, риносинусита, ринофарингита, фарингита, эпиглоттита, ларингита, ларинготрахеита, трахеита или их комбинаций, а симптомы выбираются из группы, состоящей из кашля, болей в горле, выделений из носа, заложенности носа, головной боли, слабых проявлений лихорадки, ощущения давления в области лица, чихания и их комбинаций.
4. Композиция по любому из пп. 1-2, предназначенная для применения в целях защиты детей от инфекций верхних дыхательных путей.
5. Композиция по любому из пп. 1-2, предназначенная для применения в целях укрепления способности ребенка бороться с инфекциями верхних дыхательных путей.
6. Композиция по любому из пп. 1-2, предназначенная для применения в целях сокращения продолжительности протекания инфекций верхних дыхательных путей.
7. Композиция по любому из пп. 1-2, предназначенная для применения в целях содействия менее частому приобретению детьми инфекций верхних дыхательных путей.
8. Композиция по любому из пп. 1-2, содержащая нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы в количестве, соответствующем от 106 до 1012 КОЕ.
9. Композиция по любому из пп. 1-2, в которой по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%, идеально по меньшей мере 99,9%, наиболее идеально все пробиотики являются нереплицирующимися.
10. Композиция по любому из пп. 1-2, в которой пробиотические микроорганизмы выбираются из группы, состоящей из бифидобактерий, молочнокислых бактерий, пропионовокислых бактерий или их комбинаций, например Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii, Escherichia coli и/или их смесей.
11. Композиция по любому из пп. 1-2, в которой пробиотические микроорганизмы выбираются из группы, состоящей из Bifidobacterium longum NCC 3001, Bifidobacterium longum NCC 2705, Bifidobacterium breve NCC 2950, Bifidobacterium lactis NCC 2818, Lactobacillus johnsonii La1, Lactobacillus paracasei NCC 2461, Lactobacillus rhamnosus NCC 4007, Lactobacillus reuteri DSM17983, Lactobacillus reuteri ATCC55730, Streptococcus thermophilus NCC 2019, Streptococcus thermophilus NCC 2059, Lactobacillus casei NCC 4006, Lactobacillus acidophilus NCC 3009, Lactobacillus casei ACA-DC 6002 (NCC 1825), Escherichia coli Nissle, Lactobacillus bulgaricus NCC 15, Lactococcus lactis NCC 2287 или их комбинаций.
12. Композиция по любому из пп. 1-2, содержащая в расчете на суточную дозу 0,005 мг - 1000 мг нереплицирующихся микроорганизмов.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10190819A EP2455092A1 (en) | 2010-11-11 | 2010-11-11 | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
| EP10190819.2 | 2010-11-11 | ||
| PCT/EP2011/069692 WO2012062780A1 (en) | 2010-11-11 | 2011-11-09 | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013126599A RU2013126599A (ru) | 2014-12-20 |
| RU2589706C2 true RU2589706C2 (ru) | 2016-07-10 |
Family
ID=43645899
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013126599/15A RU2589706C2 (ru) | 2010-11-11 | 2011-11-09 | Нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, защищающие против инфекций верхних дыхательных путей |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9370538B2 (ru) |
| EP (2) | EP2455092A1 (ru) |
| CN (1) | CN103547276A (ru) |
| AU (1) | AU2011328136A1 (ru) |
| BR (1) | BR112013011881A2 (ru) |
| CA (1) | CA2817689A1 (ru) |
| CL (1) | CL2013001316A1 (ru) |
| IL (1) | IL226212A0 (ru) |
| MX (1) | MX2013005371A (ru) |
| RU (1) | RU2589706C2 (ru) |
| SG (2) | SG190215A1 (ru) |
| WO (1) | WO2012062780A1 (ru) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2455092A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
| GB201112091D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Gt Biolog Ltd | Bacterial strains isolated from pigs |
| GB201117313D0 (en) | 2011-10-07 | 2011-11-16 | Gt Biolog Ltd | Bacterium for use in medicine |
| GB201306536D0 (en) | 2013-04-10 | 2013-05-22 | Gt Biolog Ltd | Polypeptide and immune modulation |
| EP3068404B1 (en) | 2013-11-15 | 2021-01-06 | Société des Produits Nestlé S.A. | Compositions for use in the prevention or treatment of urt infections in infants or young children at risk |
| CN104957260B (zh) * | 2014-03-07 | 2018-07-24 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 具有缓解咽喉部炎症功效的益生菌食品组合物及食品 |
| WO2015140299A1 (en) | 2014-03-20 | 2015-09-24 | Universiteit Antwerpen | Oronasopharyngeal probiotics |
| CN113862175A (zh) | 2014-12-23 | 2021-12-31 | 4D制药研究有限公司 | 免疫调控 |
| MX2017008449A (es) | 2014-12-23 | 2017-10-12 | 4D Pharma Res Ltd | Polipeptido de pirina y modulacion inmune. |
| MA41010B1 (fr) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| CA2988695A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-22 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
| AU2016278067B2 (en) | 2015-06-15 | 2022-09-22 | Cj Bioscience, Inc. | Compositions comprising bacterial strains |
| CN114984057A (zh) | 2015-06-15 | 2022-09-02 | 4D制药研究有限公司 | 包含细菌菌株的组合物 |
| MA41060B1 (fr) | 2015-06-15 | 2019-11-29 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| US10821139B2 (en) * | 2015-08-31 | 2020-11-03 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Method of using bifidobacterium longum to treat depressive symptoms |
| GB201520497D0 (en) | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| PT3209310T (pt) | 2015-11-20 | 2018-04-20 | 4D Pharma Res Ltd | Composições compreendendo estirpes bacterianas |
| GB201520638D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| GB201520631D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| CA3016179C (en) | 2016-03-04 | 2019-08-13 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial blautia strains for treating visceral hypersensitivity |
| GB201612191D0 (en) | 2016-07-13 | 2016-08-24 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
| CN106176820A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-12-07 | 成都圣凯生物科技有限公司 | 一种改善上呼吸道微生态平衡的益生菌制剂及其制备方法 |
| TWI802545B (zh) | 2016-07-13 | 2023-05-21 | 英商４Ｄ製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
| GB201621123D0 (en) | 2016-12-12 | 2017-01-25 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
| EP3589726A1 (en) * | 2017-02-28 | 2020-01-08 | Alimentary Health Limited | Bifidobacterium longum able to beneficially modulate immune response to respiratory virus infection |
| CA3054099A1 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | Alimentary Health Limited | Bifidobacterium longum able to beneficially modulate immune response to respiratory virus infection |
| PL3630136T3 (pl) | 2017-05-22 | 2021-09-13 | 4D Pharma Research Limited | Kompozycje zawierające szczepy bakteryjne |
| WO2018215782A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strain |
| DK3600364T3 (da) | 2017-06-14 | 2020-08-31 | 4D Pharma Res Ltd | Sammensætninger omfattende en bakteriestamme af slægten megasphaera og anvendelser deraf |
| WO2018229188A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
| CN107213338A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-09-29 | 颐和益生（北京）科技有限公司 | 一种具有预防呼吸道感染的抗雾霾组合物、制备方法及应用 |
| CN108004189B (zh) * | 2018-01-18 | 2021-07-27 | 北京科拓恒通生物技术股份有限公司 | 一种复合益生乳酸菌粉剂及其制备方法与应用 |
| JP7013419B2 (ja) * | 2019-08-07 | 2022-02-15 | 日清食品ホールディングス株式会社 | 炎症性サイトカインの産生誘導活性は低いが抗炎症性サイトカインの産生誘導活性が高いビフィズス菌 |
| CN111529703B (zh) * | 2020-06-17 | 2023-09-15 | 湖南循天然营养有限公司 | 一种组合物及其制备方法与在制备免疫佐剂中的应用 |
| CN113249244B (zh) * | 2021-03-25 | 2022-10-14 | 上海理工大学 | 一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌 |
| EP4366750A1 (en) * | 2021-07-09 | 2024-05-15 | Claudio De Simone | SPECIES, STRAINS AND COMPOSITIONS OF LACTIC ACID BACTERIA CAPABLE OF MODULATING BODY OXYGENATION BY INCREASING HIF-1alpha LEVELS |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2258524C2 (ru) * | 2003-10-23 | 2005-08-20 | Закрытое акционерное общество "Партнер" | Композиция для лечения острых респираторных заболеваний hib-этиологии у детей и способ лечения |
| WO2007093619A1 (en) * | 2006-02-15 | 2007-08-23 | Nestec S.A. | Use of bifidobacterium longum for the prevention and treatment of inflammation |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2102485T3 (es) | 1992-07-06 | 1997-08-01 | Nestle Sa | Bacteria lactica. |
| AU1201801A (en) * | 1999-10-15 | 2001-08-07 | Van Kampen Group, Inc., The | Treatment of dermal tumors, warts, and viral infections using heat-killed p. acnes |
| FR2809312B1 (fr) * | 2000-05-25 | 2002-07-12 | Gervais Danone Sa | Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes |
| US20050180962A1 (en) * | 2003-01-30 | 2005-08-18 | Eyal Raz | Inactivated probiotic bacteria and methods of use thereof |
| US7862808B2 (en) * | 2004-07-01 | 2011-01-04 | Mead Johnson Nutrition Company | Method for preventing or treating respiratory infections and acute otitis media in infants using Lactobacillus rhamnosus LGG and Bifidobacterium lactis Bb-12 |
| WO2006124630A2 (en) * | 2005-05-13 | 2006-11-23 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Compositions and methods for enhancing the efficacy of vaccines |
| BRPI0719787A2 (pt) | 2006-10-02 | 2014-11-25 | Danisco | Probióticos para uso na redução da incidência e duração de enfermidade |
| WO2008053444A2 (en) * | 2006-11-01 | 2008-05-08 | The Procter & Gamble Company | Treating a respiratory condition with bifidobacterium |
| CN101636172A (zh) * | 2007-02-28 | 2010-01-27 | 美赞臣营养品公司 | 用于儿童或婴幼儿的含有灭活益生菌的产品 |
| CA2707656C (en) * | 2007-12-06 | 2018-05-22 | Arla Foods Amba | Probiotic bacteria and regulation of fat storage |
| US20100055082A1 (en) * | 2008-09-04 | 2010-03-04 | Jacques Alain Bauer | Immunomodulatory extracts from lactobacillus bacteria and methods of manufacturing and use thereof |
| US8137718B2 (en) * | 2008-09-19 | 2012-03-20 | Mead Johnson Nutrition Company | Probiotic infant products |
| EP2429538B1 (en) * | 2009-05-11 | 2015-10-21 | Nestec S.A. | Non-replicating bifidobacterium longum ncc2705 and immune disorders |
| EP2449890A1 (en) * | 2010-11-05 | 2012-05-09 | Nestec S.A. | Powdered cereal compositions comprising non-replicating probiotic microorganisms |
| EP2455093A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic bacteria and prevention or treatment of infections in children |
| EP2455092A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
-
2010
- 2010-11-11 EP EP10190819A patent/EP2455092A1/en not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-11-09 US US13/884,514 patent/US9370538B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-11-09 WO PCT/EP2011/069692 patent/WO2012062780A1/en active Application Filing
- 2011-11-09 CN CN201180064474.7A patent/CN103547276A/zh active Pending
- 2011-11-09 MX MX2013005371A patent/MX2013005371A/es unknown
- 2011-11-09 EP EP11784979.4A patent/EP2637678A1/en not_active Withdrawn
- 2011-11-09 RU RU2013126599/15A patent/RU2589706C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-11-09 SG SG2013035571A patent/SG190215A1/en unknown
- 2011-11-09 BR BR112013011881A patent/BR112013011881A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-11-09 SG SG10201508826YA patent/SG10201508826YA/en unknown
- 2011-11-09 AU AU2011328136A patent/AU2011328136A1/en not_active Abandoned
- 2011-11-09 CA CA2817689A patent/CA2817689A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-05-07 IL IL226212A patent/IL226212A0/en unknown
- 2013-05-10 CL CL2013001316A patent/CL2013001316A1/es unknown
-
2016
- 2016-05-11 US US15/151,762 patent/US20160250265A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2258524C2 (ru) * | 2003-10-23 | 2005-08-20 | Закрытое акционерное общество "Партнер" | Композиция для лечения острых респираторных заболеваний hib-этиологии у детей и способ лечения |
| WO2007093619A1 (en) * | 2006-02-15 | 2007-08-23 | Nestec S.A. | Use of bifidobacterium longum for the prevention and treatment of inflammation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2817689A1 (en) | 2012-05-18 |
| EP2455092A1 (en) | 2012-05-23 |
| IL226212A0 (en) | 2013-07-31 |
| SG10201508826YA (en) | 2015-11-27 |
| US20130224253A1 (en) | 2013-08-29 |
| US9370538B2 (en) | 2016-06-21 |
| CL2013001316A1 (es) | 2013-10-18 |
| SG190215A1 (en) | 2013-06-28 |
| BR112013011881A2 (pt) | 2016-11-01 |
| MX2013005371A (es) | 2013-06-28 |
| US20160250265A1 (en) | 2016-09-01 |
| WO2012062780A1 (en) | 2012-05-18 |
| EP2637678A1 (en) | 2013-09-18 |
| RU2013126599A (ru) | 2014-12-20 |
| CN103547276A (zh) | 2014-01-29 |
| AU2011328136A1 (en) | 2013-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2589706C2 (ru) | Нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, защищающие против инфекций верхних дыхательных путей | |
| RU2564139C2 (ru) | Смесь для питания младенцев и маленьких детей, содержащая пробиотики для младенцев и маленьких детей | |
| JP2013542947A (ja) | 非複製性プロバイオティクス微生物を含有するドリンキングヨーグルト調製物 | |
| RU2568830C2 (ru) | Нереплицирующиеся пробиотические микроорганизмы, защищающие детей против желудочно-кишечных инфекций | |
| MX2013005374A (es) | Preparaciones de yogur de consistencia espesa que contienen microorganismos probioticos no replicadores. | |
| US20130224167A1 (en) | Non-replicating probiotic bacteria and prevention or treatment of infections to reduce absence from school or daycare |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171110 |