RU2563171C1 - Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих - Google Patents
Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2563171C1 RU2563171C1 RU2014141721/15A RU2014141721A RU2563171C1 RU 2563171 C1 RU2563171 C1 RU 2563171C1 RU 2014141721/15 A RU2014141721/15 A RU 2014141721/15A RU 2014141721 A RU2014141721 A RU 2014141721A RU 2563171 C1 RU2563171 C1 RU 2563171C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nanoparticles
- triphosphate
- sio
- pppazt
- azidothymidine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N [[(2s,3s,5r)-3-azido-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N 0.000 title claims abstract description 13
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 6
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 42
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- -1 pentafluorophenyl ester Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 9
- LUNANQGAUIBJMR-UHFFFAOYSA-N 5-oxo-5-prop-1-ynoxypentanoic acid Chemical compound C(#CC)OC(CCCC(=O)O)=O LUNANQGAUIBJMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 21
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims description 16
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 claims description 4
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 claims description 4
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical compound CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 2
- JKEHVODXCBMNKF-UHFFFAOYSA-N 6-prop-1-ynoxyhexanoic acid Chemical compound C(#CC)OCCCCCC(=O)O JKEHVODXCBMNKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 abstract 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 38
- GLWHPRRGGYLLRV-SPDVFEMOSA-N [[(2S,5R)-3-azido-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(N=[N+]=[N-])C1 GLWHPRRGGYLLRV-SPDVFEMOSA-N 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 239000002114 nanocomposite Substances 0.000 description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 8
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 5
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 4
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 4
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- QJHMHZVVRVXKOY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,5-pentafluoro-6-(2,3,4,5,6-pentafluorophenoxy)benzene Chemical compound FC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F QJHMHZVVRVXKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- HWOLQKJPMRZMEX-PJKMHFRUSA-N diazonio-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]azanide Chemical class O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@]1(N=[N+]=[N-])O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 HWOLQKJPMRZMEX-PJKMHFRUSA-N 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N TTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 description 1
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области химии, биологии и молекулярной медицины. Способ относится к получению наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих и включает модификацию носителя, в качестве которого используют коммерческие аминосодержащие наночастицы диоксида кремния размером до 20 нм, путем суспендирования последних в ДМСО, содержащем 5% триэтиламин, до конечной концентрации 50-100 мг/мл с последующей обработкой полученной суспензии равным объемом 5% N-гидроксисукцинимидного эфира 5-(пропинилокси)-5-оксопентановой кислоты или 10% пентафторфенилового эфира 6-пропинилоксигексановой кислоты в ДМСО и последующую иммобилизацию трифосфата азидотимидина на полученных алкино-модифицированных наночастицах. Изобретение обеспечивает сокращение длительности способа и повышение функциональных возможностей целевого продукта. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области химии, биологии и молекулярной медицины и может быть использовано для получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в эукариотические клетки с целью создания эффективного противовирусного препарата.
Наночастицы вносят существенный вклад в развитие методов доставки лекарственных препаратов. В качестве наночастиц используются золотые наночастицы (Young K.L., et al., Nano Lett. 2012, v. 12, p. 3867-3871), полимеры (полимерные наночастицы, мицеллы, дендримеры) и органометаллические соединения (наночастицы, нанотрубки) (Cho К., et al., Clin. Cancer Res. 2008, v. 14, p. 1310-1316).
Известно использование наночастиц диоксида кремния (SiO2) для увеличения эффективности действия терапевтических агентов в раковых клетках, решения проблем растворимости и стабильности некоторых лекарств, а также адресной доставки лекарств и их последующего контролируемого высвобождения (Slowing I.I, et al., Adv. Drag Deliv. Rev. 2008, v. 60, p. 1278-1288; Manzano M., et al., Expert Opin. Drag Deliv. 2009, v. 6, p. 1383-1400; Vivero-Escoto J.L., et al., Small 2010, v. 6, p. 1952-1967).
В качестве противовирусных, противораковых и в меньшей степени противогрибковых препаратов достаточно широко используются аналоги нуклеозидов (N). Активной формой, воздействующей на вирус, являются не сами по себе аналоги нуклеозидов, а их фосфорилированные формы - 5′-трифосфаты (pppN), которые являются основными субстратами для ДНК и РНК полимераз (Galmarini С.М., et al., Lancet. Oncol. 2002, v. 3(7), p. 415-424).
Известен аналог нуклеозида - азидотимидин (AZT), который, попадая в клетку, подвергается фосфорилированию клеточными ферментами с образованием трифосфата AZT (pppAZT), избирательно подавляющего репликацию вирусной ДНК, конкурируя с трифосфатом тимидина (природного нуклеозида) за встраивание в растущие цепи вирусной РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратная транскриптаза) и подавляя тем самым репликацию вирусной ДНК (Lavie A. et al. Nat Med. 1997 v. 3(8), p. 922-941; Olivero O.A. Environ Mol Mutagen. 2007 v. 48(3-4), p. 215-223). Как и во всех случаях использования аналогов нуклеозидов, pppAZT проникает в клетки с низкой эффективностью, поэтому используют нефосфорилированный азидотимидин, что влечет необходимость использования больших доз препарата.
Решением проблемы токсичности может быть использование в качестве антивирусных препаратов не аналогов нуклеозидов (N), а уже готовых фосфорилированных форм - трифосфатов. Создание эффективного способа доставки трифосфатов нуклеозидов (pppN) является, таким образом, актуальной задачей, решение которой позволит использовать эти соединения в качестве лекарственных препаратов.
Известен способ получения наноразмерной системы доставки pppN в клетки путем их инкапсулирования в эритроциты (Magnani Μ., et al., J. Leukoc. Biol. 1997, v. 62, p. 133-137). Использование такой системы доставки pppN ограничено из-за трудности хранения, возможности загрязнения и недостаточной разработанности процедуры приготовления.
Известен способ получения наноразмерной системы доставки pppN в клетки в виде комплекса pppN с катионными наногелями, представляющими собой сополимер полиэтиленимина и полиэтиленгликоля (Vinogradov S.V., Expert Opin. Drug. Deliv. 2007, v. 4(1), p. 5-17; Vinogradov S.V., Curr. Pharm. Des. 2006, v. 12, p. 36). Предварительно полученный наногель диспергируют в воде при рН 10 для депротонирования аминогрупп, затем титруют его полученным раствором нуклеозидтрифосфата до рН 7.5, концентрируют в вакууме, пропускают через колонку NAP-20 и лиофилизуют.
Недостатками известного способа являются длительность и низкое качество целевого продукта, вследствие недостаточно прочной связи pppN с носителем.
Во всех упомянутых выше способах молекулы pppN связаны с носителями нековалентно, в частности за счет ионообменных взаимодействий. Это является причиной относительно быстрой кинетики высвобождения pppN из наноконструкции, его деградации и выведения из организма и, как следствие, больших потерь лекарства. Этот недостаток может быть преодолен путем создания такой системы доставки, в которой pppN ковалентно, т.е. достаточно прочно, связан с носителем.
Наиболее близким к заявляемому способу - прототипом - является способ получения системы доставки pppN в клетки млекопитающих (патент RU 2527681 C1, опубл. 10.09.2014), включающий модификацию носителя, в качестве которого используют коммерческие аминосодержащие наночастицы диоксида кремния (SiO2~NH2) размером до 24 нм, путем обработки последних N-гидроксисукцинимидным эфиром алифатической азидокислоты, далее получение модифицированного нуклеозидтрифосфата (pppN) путем обработки последнего смесью трифенилфосфин/дитиодипиридин с последующим инкубированием образующегося активного производного pppN с 3-пропинилоксипропиламином и последующую иммобилизацию модифицированного pppN на полученных азидо-модифицированных наночастицах в течение 2-4 ч. Полученный нанокомпозит SiO2~pppN выделяют центрифугированием. Емкость полученных наночастиц SiO2~pppN по нуклеозиду составляет 0.2-0.3 мкмоль/мг.
Недостатками известного способа являются длительность и ограниченные функциональные возможности целевого продукта, поскольку в качестве трифосфата нуклеозида используют трифосфат цитидина или уридина (природных нуклеозидов), не обладающие противовирусными свойствами.
Задачей изобретения является создание более простого способа получения наноразмерной системы доставки трифосфата нуклеозида в клетки.
Техническим результатом является упрощение и сокращение длительности способа, а также расширение функциональных возможностей целевого продукта.
Поставленная задача достигается заявляемым способом, заключающимся в следующем.
Предварительно получают алкино-модифицированные наночастицы диоксида кремния (≡L~SiO2). Для этого исходные аминосодержащие наночастицы (SiO2~NH2) размером до 20 нм добавляют в диметилсульфоксид (ДМСО), содержащий 5% триэтиламина (ТЭА), до конечной концентрации 50-100 мг/мл и суспендируют с помощью ультразвука. Затем к полученной суспензии добавляют равный объем 5% N-гидроксисукцинимидного эфира 5-(пропинилокси)-5-оксопентановой кислоты или 10% пентафторфенилового эфира 6-пропинилоксигексановой кислоты в ДМСО. Реакционную смесь перемешивают в течение 40-60 минут при комнатной температуре. Полученные алкино-модифицированные наночастицы (≡L~SiO2) отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и серным эфиром и высушивают на воздухе. Замена аминогрупп на линкер с алкиногруппами происходит с выходом 85%. Процедура получения ≡L~SiO2 занимает около 2-х часов.
Далее проводят ковалентное присоединение трифосфата азидотимидина (pppAZT), полученного известным способом (Abramova T.V., et al., Tetrahedron Letters, 2004, v. 45, p.4361-1364), к алкино-модифицированным наночастицам. Для этого к ≡L~SiO2, суспендированным в воде с помощью ультразвука до конечной концентрации 30-70 мг/мл, добавляют 3-5-кратный объем 10 мМ водного раствора pppAZT и 1-1.5-кратный объем 1 М буферного раствора ацетата триэтиламмония, рН 7.0, содержащего 50 мМ сульфата меди(II) и 0.1 Μ аскорбата натрия. Реакционную смесь дегазируют 2 мин аргоном и перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученный целевой нанокомпозит (pppAZT*~L~SiO2) отделяют центрифугированием, затем высушивают и получают 10-20 мг целевого нанокомпозита (85-90% выход). В целом процесс получения наноразмерной системы доставки (нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2) занимает не более 1 суток. Емкость полученных наночастиц pppAZT*~L~SiO2 по нуклеозиду составляет 0.3-0.39 мкмоль/мг.
Заявляемый способ позволяет сократить число стадий приготовления нанокомпозита и общую длительность приготовления целевого продукта с 3-х до 1 суток. При этом обеспечивается практически такая же высокая прочность связывания pppAZT с частицами, большая емкость нанокомпозита и способность проникать в клетки и быть субстратом для ДНК-полимеразы, как и в известном способе (прототипе).
Определяющими отличиями предлагаемого способа от прототипа, являются:
1. В качестве объекта для присоединения к системе доставки используют трифосфат азидотимидина (pppAZT), обладающий противовирусными свойствами, что позволяет расширить функциональные возможности целевого продукта, а также сократить длительность процесса получения целевого продукта, поскольку не требуется дополнительная модифицкация трифосфата нуклеозида. В прототипе в качестве трифосфата нуклезида использовали трифосфаты цитидина или уридина (природных нуклеозидов), не обладающие ингибирующими противовирусными (или противоопухолевыми) свойствами.
2. Суспензию, содержащую ДМСО, 5% ТЭА и коммерческие SiO2~NH2 в концентрации 50-100 мг/мл, обрабатывают равным объемом 5% N-оксисукцинимидным эфиром 5-(пропинилокси)-5-оксопентановой кислоты или 10% пентафторфениловым эфиром 6-пропинилоксигексановой кислоты, что позволяет получить алкино-модифицированные наночастицы (≡L~SiO2) для последующего присоединения трифосфата азидотимидина (pppAZT). При этом первый линкер несет в своей структуре сложноэфирную группировку, которая в дальнейшем под действием клеточных ферментов внутри клетки может разрушаться, приводя к высвобождению из нанокомпозита трифосфата производного азидотимидина. В прототипе использовались азидо-модифицированные наночастицы и линкеры, не содержащие эфирные группы.
3. Полученные алкино-модифицированные наночастицы суспендируют в воде с помощью ультразвука до конечной концентрации 30-70 мг/мл, к полученной суспензии добавляют 3-5-кратный объем 10 мМ водного раствора pppAZT и 1-1.5-кратный объем 1М буферного раствора ацетата триэтиламмония, рН 7.0, содержащего 50 мМ сульфата меди(II) и 0.1 Μ аскорбата натрия, что обеспечивает получение стабильной и эффективной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Получение нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2 (1) (Фиг. 1, соединение 4)
Вначале получают алкино-модифицированные наночастицы (≡L-SiCO2). Для этого исходные NH2~SiO2-наночастицы (SkySpring Nanomaterials, Inc., USA) размером до 20 нм (10 мг, 5 мкмоль NH2-групп) суспендируют с помощью ультразвука в 0.1 мл ДМСО, содержащего 5% ТЭА, добавляют 0.1 мл 5% раствора N-оксисукцинимидного эфира 5-(пропинилокси)-5-оксопентановой кислоты (ООО «Нанотех-С», Новосибирск, Россия), предварительно растворенные в ДМСО. После перемешивания в течение 40 мин при комнатной температуре реакционную смесь центрифугируют (7000 об/мин, 5 мин), супернатант удаляют, а частицы промывают ацетоном (2×1 мл), эфиром (1×1 мл) и сушат на воздухе 30 мин. Получают 10 мг модифицированных наночастиц ≡L~SiO2 (SiO2-NH-CO-(CH2)3-CO-O-CH2-C≡CH, Фиг. 1, соединение 1) с выходом 86%. Замена аминогрупп на линкер с алкиногруппами происходит с выходом 85% (количество непрореагировавших аминогрупп определяют титрованием пикриновой кислотой и составляет не более 15%).
Затем полученные модифицированные наночастицы ≡L~SiO2 (10 мг, 4.3 мкмоль алкиногрупп), суспендируют в 0.3 мл воды с помощью ультразвука, добавляют 1 мл 10 мМ водного раствора pppAZT (~5 мг), 50 мМ раствор сульфата меди(II) в воде (0.1 мл), 1М ТЭААс буфер (рН 7, 0.1 мл) и 0.1 Μ свежеприготовленный раствор аскорбата натрия в воде (0.1 мл). Реакционную смесь дегазируют 2 мин аргоном и перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученный целевой нанокомпозит (pppAZT*~L~SiO2) (Фиг. 1, соединение 4) отделяют центрифугированием и промывают последовательно физиологическим раствором NaCl (1.5 мл), 10% ЭДТА, водой (2×1,5 мл), ацетоном (1.5 мл) и серным эфиром (1.5 мл). Частицы высушивают на воздухе и получают 10.37 мг целевого нанокомпозита (90% выход). Емкость нанокомпозита по нуклеозидтрифосфату, определенная по количеству присоединенного pppAZT*, составляет 0.39 мкмоль/мг.
Пример 2. Получение нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2 (Фиг. 1, соединение 5)
Способ осуществляли аналогично примеру 1, за исключением того, что в реакции используют 20 мг SiO2~NH2-наночастиц, суспендированных в 0.4 мл ДМСО, содержащего 5% ТЭА, и пентафторфениловый эфир 6-пропинилоксигексановой кислоты (0.4 мл 10% раствора в ДМСО) (С6Н5-O-СО-(СН2)5-O-СН2-С≡СН (ООО «Нанотех-С», Новосибирск, Россия)), а перемешивание осуществляют в течение 60 мин. Получают 20 мг (92%) модифицированных наночастиц ≡L~SiO2 (SiO2~NH-CO-(CH2)3-CO-O-CH2-С≡СН, Фиг. 1, соединение 2). Замена аминогрупп на линкер с алкиногруппами происходит с выходом 85%.
Полученные наночастицы (20 мг, 8.4 мкмоль алкиногрупп) суспендируют в 0.3 мл воды, а все остальные реагенты используют в 1.5 раза большем количестве, чем указано в примере 1. Получают 19.5 мг целевого нанокомпозита (85% выход) (pppAZT*~L~SiO2) (Фиг. 1, соединение 5). Емкость нанокомпозита по нуклеозидтрифосфату, определенная по количеству присоединенного pppAZT*, составляет 0.3 мкмоль/мг.
Пример 3. Получение флуоресцеин-содержащего нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2-Flu (Фиг. 1, соединение 6)
Вначале получают алкино-модифицированные наночастицы ≡L~SiO2(Flu), несущие остаток флуоресцеина (Фиг. 1, соединение 3). Для этого исходные NH2~SiO2-наночастицы (10 мг, 5 мкмоль NH2-групп) суспендируют с помощью ультразвука в 0.2 Μ растворе NaHCO3 (0.1 мл), добавляют раствор флуоресцеинизотиоцианата (1 мг, 2.6 мкмоль, 0.5 экв) в ДМСО (20 мкл). После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь центрифугируют (7000 об/мин, 5 мин), супернатант удаляют, а частицы промывают 0.1 Μ раствором NaCl (1 мл), водой (2×1 мл), ацетоном (2×1 мл), эфиром (1 мл) и сушат на воздухе 30 мин.
Полученные наночастицы (SiO2(Flu)~NH2 (10 мг) суспендируют в 0.2 мл ДМСО, содержащего 5% ТЭА, и далее проводят реакцию с пентафторфениловым эфиром 6-пропинилоксигексановой кислоты (0.2 мл 10% раствора в ДМСО). Получают 10 мг модифицированных наночастиц (SiO2(Flu)-NH~NH-CO-(CH2)5-O-CH2-C≡CH (80%) (=L~SiO2(Flu), Фиг. 1, соединение 3). Замена аминогрупп на остаток Flu и затем на линкер с алкиногруппами происходит на 10% и 75%, соответственно.
На следующей стадии получают флуоресцеин-содержащий нанокомпозит pppAZT*~L~SiO2-Flu (Фиг. 1, соединение 6) аналогично примеру 1, за исключением того, что вместо алкино-модифицированных частиц ≡L~SiO2 без остатка флуоресцеина используют флуоресцеин-содержащие наночастицы ≡L~SiO2(Flu) (10 мг). Получают 9.7 мг целевого нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2-Flu (90% выход). Емкость нанокомпозита по нуклеозидтрифосфату, определенная по количеству присоединенного pppAZT*, составляет 70 наномоль/мг. Флуоресцентная метка необходима для дальнейшего исследования способности нанокомпозита проникать в клетки.
Пример 4. Оценка способности нанокомпозитов pppAZT*~L~SiO2-Flu проникать в клетки
В эксперименте используют клетки Vero, Hoechst 33343, Cell Mask Plasma Membrane Stain, клеточную среду IMDM, эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС), антибиотики, фосфатный буфер (PBS), рН 7.4. Для экспериментов клетки рассеивают в необходимой концентрации на 8-луночные камеры (Chamber Slide, Nunc. Inc.) и культивируют в среде IMDM, содержащей 10% ЭТС и антибиотики (пенициллин и стрептомицин, по 100 ед./мл) до достижения 70% монослоя, после этого заменяют культуральную среду на среду (200 мкл) без сыворотки и антибиотика. К клеткам добавляют суспензию, содержащую исследуемый образец pppAZT*~L~SiO2-Flu, полученный, как описано в примере 3, разбавленный буфером до концентрации 0.1 мг/мл (конечная концентрация в клеточной среде - ~0.01 мг/мл). После 24 ч инкубации клетки отмывают PBS, фиксируют 3.7% формалином (10 мин) и окрашивают Hoechst 33343 и Cell Mask Plasma Membrane Stain в течение 10 мин. Полученный образец анализируют с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа LSM 510 UV Meta Microscope (Carl Zeiss, Inc., Германия) (Центр коллективного пользования ИЦИГ СО РАН).
На Фиг. 2 представлено изображение клеток после инкубации с исследуемым образцом pppAZT*~L~SiO2-Flu. В черно-белом изображении нанокомпозиты внутри клеток проявляются в виде белых точек.
Пример 5. Оценка цитотоксичности наночастиц и нанокомпозитов
Для оценки токсичности и противовирусной эффективности препаратов используют перевиваемую культуру клеток Vero, полученных из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». Суспензию клеток с концентрацией 1×105 кл./мл питательной среды DMEM (ООО «БиолоТ» г. Санкт-Петербург) вносят в объеме 100 мкл/лунку 96-луночного планшета. Планшеты с клетками помещают в термостат на 2-3 сут до образования монослоя при температуре 37°С, 5% CO2 и 100% влажности.
При определении токсических доз препараты pppAZT*~L~SiO2, AZT и pppAZT разводят средой DMEM до концентраций 150, 75, 30, 15 и 7,5 нмоль/мл (в случае препартов с наночастицами это соответствует концентрациям 1000, 500, 200, 100 и 50 мкг/мл по наночастицам при емкости нанокомпозитов по нуклеозиду по AZT 150 нмоль/мг). Образцы разведений препаратов вносят в лунки, содержащие монослой клеток Vero, по 100 мкл/лунку, и планшеты оставляют при температуре 37°С, 5% CO2 и 100% влажности. Через 4 сут с помощью инвертированного микроскопа оценивают деструктивные изменения в монослое клеток Vero, инкубированных с разными концентрациями препаратов. В качестве контроля используют монослой культуры клеток Vero без препарата. Результаты приведены в Табл. 1
Концентрация нанокомпозита pppAZT*~L~SiO2, приводящая к гибели 50% клеток (ТС50), оценена как 500 мкг/мл (75 нмоль/мл для нуклеозида в составе нанокомпозита), в то время как ТС50 для AZT оценена как 150 нмоль/мг, а трифосфат AZT не вызывал гибель клеток во всей области исследуемых концентраций.
Пример 6. Исследование противовирусных свойств исследуемых образцов
В работе использовали ортопоксвирусы: вирус осповакцины (штамм Л-ИВП) и вирус простого герпеса 2-го типа (штамм MS), полученные из коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор».
При исследовании противовирусной активности препаратов использовали нетоксические концентрации, в несколько раз меньшие по сравнению с величиной ТС50 (100 мкг/мл по частицам или 15 нмоль/мл по нуклеозиду).
В среде DMEM готовили 8 разведений вируссодержащей культуральной жидкости (ВКЖ) с десятикратным шагом. На монослой клеток Vero вносили разведения препарата в объеме 100 мкл/лунку и разведения ВКЖ (с 1-го по 8-е) в объеме 100 мкл/лунку. Клетки инкубировали 4 сут при температуре 37°С в атмосфере 5% CO2. Затем в каждой лунке с помощью инвертированного микроскопа регистрировали цитопатическое действие в монослое клеток. Определяли титры вирусов в клетках в величинах log ТЦД50/мл в опыте и контроле (т.е. с препаратом и без препарата). Для того чтобы определить, во сколько раз исследуемые препараты подавляют репродукцию вирусов, величины log ТЦД50/мл переводили в ТЦД50/мл (Табл. 2) и полученные значения ТЦД50/мл сравнивали с соответствующим значением для титра вируса в клетках, не обработанных препаратами:
Контрольные образцы AZT и pppAZT, не связанные с наночастицами, а также исходные наночастицы SiO2~NH2 показали очень низкую противовирусную активность (подавление репродукции вирусов происходило не более чем на один порядок). В то же время полученный препарат pppAZT*~L~SiO2 оказался эффективным и ингибировал вирус осповакцины и простого герпеса в ~300 и ~1000 раз соответственно.
Использование предлагаемого способа позволит существенно сократить его длительность и обеспечить получение стабильной и эффективной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих.
Claims (3)
1. Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих, включающий получение модифицированных наночастиц диоксида кремния с последующим присоединением к полученным модифицированным наночастицам трифосфата нуклеозида, отделением целевого продукта центрифугированием и высушиванием, отличающийся тем, что исходные аминосодержащие наночастицы добавляют в диметилсульфоксид, содержащий 5% триэтиламина, до конечной концентрации 50-100 мг/мл и суспендируют, затем к полученной суспензии добавляют равный объем 5% N-оксисукцинимидного эфира 5-(пропинилокси)-5-оксопентановой кислоты или 10% пентафторфенилового эфира 6-пропинилоксигексановой кислоты в ДМСО, далее полученные алкино-модифицированные наночастицы суспендируют в воде до конечной концентрации 30-70 мг/мл, к полученной суспензии добавляют 3-5-кратный объем 10 мМ водного раствора трифосфата азидотимидина и 1-1.5-кратный объем 1М буферного раствора ацетата триэтиламмония, pH 7.0, содержащего 50 мМ сульфата меди(II) и 0.1 M аскорбата натрия, с последующим отделением и высушиванием целевого продукта.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что суспендирование наночастиц в реакционной смеси осуществляют при помощи ультразвука.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что все реакции с участием наночастиц диоксида кремния проводят при перемешивании при комнатной температуре, а промежуточные и целевые продукты выделяют центрифугированием.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014141721/15A RU2563171C1 (ru) | 2014-10-15 | 2014-10-15 | Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014141721/15A RU2563171C1 (ru) | 2014-10-15 | 2014-10-15 | Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2563171C1 true RU2563171C1 (ru) | 2015-09-20 |
Family
ID=54147706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014141721/15A RU2563171C1 (ru) | 2014-10-15 | 2014-10-15 | Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2563171C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2646113C1 (ru) * | 2016-09-06 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527681C1 (ru) * | 2013-03-26 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения наноразмерной системы доставки нуклеозидтрифосфатов в клетки млекопитающих |
-
2014
- 2014-10-15 RU RU2014141721/15A patent/RU2563171C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527681C1 (ru) * | 2013-03-26 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения наноразмерной системы доставки нуклеозидтрифосфатов в клетки млекопитающих |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Galmarini C.M., Mackey J.R. Nucleoside analogues and nucleobases in cancer treatment. Lancet Oncol. 2002 Jul;3(7):415-24. abstract . В.В. СЕВЕРОВ "Перспективы использования методов клик-химии в биологии и медицине" Эфферентная и физико-химическая медицина, 1/2012, стр.10-17. Vinogradov S.V. Colloidal microgels in drug delivery applications. Curr Pharm Des. 2006;12(36):4703-12 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2646113C1 (ru) * | 2016-09-06 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Algarni et al. | In vivo delivery of plasmid DNA by lipid nanoparticles: the influence of ionizable cationic lipids on organ-selective gene expression | |
| Ju et al. | Specific inhibition of viral MicroRNAs by carbon dots-mediated delivery of locked nucleic acids for therapy of virus-induced cancer | |
| US20230257738A1 (en) | Modified messenger rna comprising functional rna elements | |
| KR101764427B1 (ko) | 미셀성 어셈블리 | |
| Calarco et al. | The genotoxicity of PEI-based nanoparticles is reduced by acetylation of polyethylenimine amines in human primary cells | |
| US8507270B2 (en) | Method of transfecting cells with nucleic acids using acidified polyethylenimine | |
| EP2479268B1 (en) | Dissociation method and dissociation agent for avidin and biotinderivatives | |
| Ma et al. | Anti-inflammatory activity of chitosan nanoparticles carrying NF-κB/p65 antisense oligonucleotide in RAW264. 7 macropghage stimulated by lipopolysaccharide | |
| WO2012112689A1 (en) | Nanoparticle, liposomes, polymers, agents and proteins modified with reversible linkers | |
| WO2019051001A1 (en) | SIGNALING AND BIFUNCTIONAL RECEPTORS HAVING ANTIGENS (SABR) | |
| JP2011520901A (ja) | 治療剤の細胞内送達のためのミセル | |
| WO2000040962A1 (en) | Cyclodextrin polymers for use as drug carriers | |
| Loutfy et al. | Antiviral activity of chitosan nanoparticles encapsulating silymarin (Sil–CNPs) against SARS-CoV-2 (in silico and in vitro study) | |
| Yamala et al. | Poly-N-acryloyl-(L-phenylalanine methyl ester) hollow core nanocapsules facilitate sustained delivery of immunomodulatory drugs and exhibit adjuvant properties | |
| EP4255495A1 (en) | Polymer nanoparticle and dna nanostructure compositions and methods for non-viral delivery | |
| Vasilyeva et al. | SiO2 nanoparticles as platform for delivery of nucleoside triphosphate analogues into cells | |
| WO2020043668A1 (en) | Pkc inhibitors for the treatment of septic cholestasis with ctm targeting | |
| CN102925487B (zh) | 一种阳离子脂质载体及其制备方法和应用 | |
| RU2563171C1 (ru) | Способ получения наноразмерной системы доставки трифосфата азидотимидина в клетки млекопитающих | |
| CN1318453C (zh) | 荧光标记疏水改性壳寡糖聚合物及制备方法和应用 | |
| US9168230B2 (en) | Tetrary gene delivery system for gene therapy and methods of its use | |
| Levina et al. | Impact of delivery method on antiviral activity of phosphodiester, phosphorothioate, and phosphoryl guanidine oligonucleotides in MDCK cells infected with H5N1 bird flu virus | |
| US20180016582A1 (en) | Dna aptamer binding to non-small cell lung cancer cells (h1975) | |
| Ficociello et al. | Evaluation of the efficacy of carbon nanotubes for delivering peptides into mitochondria | |
| RU2527681C1 (ru) | Способ получения наноразмерной системы доставки нуклеозидтрифосфатов в клетки млекопитающих |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171016 |