RU2533739C2

RU2533739C2 - Method for simulating chronic inflammatory diseases of female genital organs experimentally

Info

Publication number: RU2533739C2
Application number: RU2012129418/14A
Authority: RU
Inventors: Эдуард Карпович Айламазян; Дарико Александровна Ниаури; Александр Мкртичевич Гзгзян; Ляиля Харрясовна Джемлиханова; Юлия Александровна Радькова; Артём Николаевич Савельев; Елена Олеговна Усольцева
Priority date: 2012-07-11
Filing date: 2012-07-11
Publication date: 2014-11-20
Also published as: RU2012129418A

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to simulation in medicine, and can be used for simulating the female genital diseases experimentally. Endometriosis is simulated by taking rectangular portions 2×3mm of the endometrium for auto-grafting and anchoring with the use of microsurgical instruments and injury-free synthetic non-absorbable mono-filament suture 9/0 in four sutures in the corners of the endometrial portions in the form of two double knots in each suture. Chronic endometritis is simulated by fixing the endometrial portions with the general surgical instruments and the synthetic non-absorbable suture material 4/0 in four sutures in the corners of the endometrial portions in the form of three knots in each suture; before and after surgical intervention, oestrogen is administered into the animal according to the following regimen: 0.1% synestrol 1.0 ml every second day intramuscularly once a day; 7 days before the auto-grafting, on the 7^th, 5^th and 3^rd days, on the pre-operative and operative day, on the post-operative days synestrol is administered in the same single dose on the 2^nd, 4^th and 6^th days.

EFFECT: method enables reducing the time of simulating the model.

2 dwg

Description

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования хронического воспаления эндометрия с целью создания новых способов лечения. Экспериментальные модели на животных необходимы, поскольку не все особенности воспаления эндометрия могут быть изучены на людях.The invention relates to experimental medicine and can be used to model chronic inflammation of the endometrium in order to create new methods of treatment. Experimental animal models are necessary because not all features of endometrial inflammation can be studied in humans.

Известны способы моделирования хронического воспаления эндометрия на самках самых разных лабораторных и домашних животных путем введения (часто под наркозом) в различные отделы матки и влагалища микробных тел в соответствующих концентрациях (1-3, 13, 16, 18, 20, 22, 23, 29, 30). Так, беспородным крысам-самкам в заднебоковую стенку средней трети влагалища под слизистую вводился Staphylococcus aureus, штамм 25923, в дозе 3·10⁶ микробных тел (1). В других случаях вводили в оба яйцевода флогоген в виде 0,1 мл суточной культуры золотистого стафилококка - штамм 209, содержащий 50 млн. микробных тел при одномоментном точечном десерозировании медицинским скарификатором в 8-10 точках висцеральной брюшины яйцеводов с двух сторон, покровного эпителия яичников медицинским скарификатором с двух сторон, затем распыляли над десерозированными участками медицинский тальк в дозе 0,1 мг/см² (2). Флогогенные агенты - Staphylococcus aureus и/или Escherichia coli в дозе 3·10⁶микробных тел вводили крысам в парацервикальную клетчатку в области перешейка матки (3). В некоторых случаях крысам предварительно вводили в полость матки 3% уксусной кислоты, а затем осуществляли бактериальную инокуляцию смешанной культурой патогенов (18). Эти модели использовались для апробации новых препаратов. Мышам для изучения патогенеза трихомониаза и отработки методов лечения интравагинально вводили 100 Trichomonad foetus или 10⁶ Trichomonad vaginalis (13). Методами генетической инженерии мышам осуществляли активацию онкогена K-ras в эпителиальных клетках поверхности яичников. Восемь месяцев спустя у половины животных развивается эндометриоз (16). У коров модель эндометрита создавалась через 10-11 недель после отела и 6-8 дней после овуляции. Специфическое воспаление вызывали внутриматочным введением С.fetus ssp. veneralis животным, иммунизированным этими бактериями подкожно или внутриматочно. Неспецифическое воспаление вызывали введением липополисахарида (ЛПС) в левый маточный рог. Модель применялась для изучения роли иммунитета при эндометрите (20). Самкам крыс линии Sprague-Dawley (неинфицированным, в возрасте 11 недель) вводили культуры микроорганизмов, выделенных из образцов ткани матки людей, страдающих эндометритом. Культуры микроорганизмов Е.coli и В.fragilis, культивировали in vitro, затем 0,05 мл суспензии бактерий, содержащих 1,1×10⁵ Е.coli или 1,3×10⁵ В.fragilis вводили через разрез на передней брюшной стенке в правую половину полости матки. Инфекция развивалась в пределах матки. Модель применялась для исследований терапевтического эффекта антимикробных препаратов (22). Для изучения патогенеза инфекции и иммунного ответа на нее использовали мышиные модели, в т.ч. на «голой» мыши (иммунодефицитной). Мыши получали прогестерон, затем их однократно интравагинально инокулировали 100 (иногда меньше) единицами культуры Chlamydia muridarum. Урогенитальная инфекция сероварами С.trachomatis человека осуществлялась в дозе 1-10 единиц (23). Максимально близкая человеку модель острого сальпингита и восходящей хламидийной инфекции получалась на нечеловекообразных обезьянах (свинохвостые макаки, мартышки, зеленые мартышки) инокуляцией С.trachomatis непосредственно в маточные трубы или в полость матки, с повторными инокуляциями в шейку матки (23). Для оценки эффективности препаратов для лечения трихомониаза у крупного рогатого скота создана модель на мышах линии BALB/c, (возраст 6 недель). Размноженные in vitro культуры Tritrichomonas foetus (простейшего) в объеме 20 мкл (8,6×10⁵ клеток) были введены мышам интравагинально через 2 суток после проведения подкожной инокуляции силиконовых трубочек, содержащих 15 пг 17P-эстрадиола, и вновь в той же дозе на следующий день. У мышей развивались значимые изменения толщины стенки матки, серозная эритема, или пиометра (гнойное воспаление матки). У многих - гистологические изменения маточного эпителия (29). Модель, применимая для изучения патологической анатомии, патогенеза и иммунного ответа на генитальную инфекцию, вызываемую С.trachomatis, создана на неинфицированных специфическими патогенами самках свиней (возраст 13 недель). Культуры С.trachomatis типов Е strain Bour и serovar E genital isolate, полученные из образцов зараженной ими женщины, были размножены in vitro и введены интравагинально свиньям, в количестве 10⁸ клеток. Особенность модели в том, что она основана на применении крупного животного. При этом свинья весьма сходна с человеком по генетическим и физиологическим параметрам (30).Known methods for modeling chronic inflammation of the endometrium in females of various laboratory and domestic animals by introducing (often under anesthesia) into various departments of the uterus and vagina of microbial bodies in appropriate concentrations (1-3, 13, 16, 18, 20, 22, 23, 29 , thirty). Thus, Staphylococcus aureus strain 25923 was introduced into the posterior lateral wall of the middle third of the vagina under the mucous female rats at a dose of 3 × 10 ⁶ microbial bodies (1). In other cases, phlogogen was introduced into both oviducts in the form of 0.1 ml daily culture of Staphylococcus aureus - strain 209, containing 50 million microbial bodies at a single point deserting with a medical scarifier at 8-10 points of the visceral peritoneum of the oviducts on both sides, and the integumentary epithelium of the medical ovaries a scarifier on both sides, then medical talcum powder at a dose of 0.1 mg / cm ^{2 was} sprayed over deserted areas (2). Phlogogenic agents - Staphylococcus aureus and / or Escherichia coli at a dose of 3 · 10 ⁶ microbial bodies were injected into rats in paracervical tissue in the area of the uterine isthmus (3). In some cases, rats were previously injected with 3% acetic acid into the uterine cavity, and then bacterial inoculation was performed with a mixed culture of pathogens (18). These models were used to test new drugs. To study the pathogenesis of trichomoniasis and develop treatment methods, mice were injected intravaginally with 100 Trichomonad foetus or 10 ⁶ Trichomonad vaginalis (13). By genetic engineering, mice were activated with K-ras oncogen in epithelial cells of the ovarian surface. Eight months later, half of the animals develop endometriosis (16). In cows, an endometritis model was created 10-11 weeks after calving and 6-8 days after ovulation. Specific inflammation was caused by intrauterine administration of C. fetus ssp. veneralis to animals immunized with these bacteria subcutaneously or intrauterine. Non-specific inflammation was caused by the introduction of lipopolysaccharide (LPS) into the left uterine horn. The model was used to study the role of immunity in endometritis (20). Female Sprague-Dawley rats (uninfected, 11 weeks old) were injected with cultures of microorganisms isolated from uterine tissue samples from people with endometritis. Microorganisms cultures of E. coli and B. fragilis were cultured in vitro, then 0.05 ml of a suspension of bacteria containing 1.1 × 10 ⁵ E. coli or 1.3 × 10 ⁵ B. fragilis was introduced through an incision on the anterior abdominal wall in the right half of the uterine cavity. The infection developed within the uterus. The model was used to study the therapeutic effect of antimicrobial agents (22). To study the pathogenesis of the infection and the immune response to it, mouse models were used, including on a naked mouse (immunodeficiency). Mice received progesterone, then they were once intravaginally inoculated with 100 (sometimes less) Chlamydia muridarum culture units. Urogenital infection with human S. trachomatis serovars was carried out at a dose of 1-10 units (23). The closest human model of acute salpingitis and ascending chlamydial infection was obtained on non-human monkeys (pigtail macaques, monkeys, green monkeys) by inoculation of C. trachomatis directly into the fallopian tubes or into the uterine cavity, with repeated inoculations into the cervix (23). To evaluate the effectiveness of drugs for treating trichomoniasis in cattle, a model was created on mice of the BALB / c line, (age 6 weeks). In vitro propagated cultures of Tritrichomonas foetus (protozoa) in a volume of 20 μl (8.6 × 10 ⁵ cells) were introduced into mice intravaginally 2 days after subcutaneous inoculation of silicone tubes containing 15 pg of 17P-estradiol, and again at the same dose on the next day. Mice developed significant changes in the thickness of the uterine wall, erythema serosa, or pyometra (purulent inflammation of the uterus). Many have histological changes in the uterine epithelium (29). A model applicable to the study of pathological anatomy, pathogenesis, and the immune response to the genital infection caused by C. trachomatis was created on female pigs uninfected with specific pathogens (13 weeks of age). C. trachomatis cultures of types E strain Bour and serovar E genital isolate, obtained from samples of the infected women, were propagated in vitro and introduced intravaginally to pigs, in an amount of 10 ⁸ cells. The peculiarity of the model is that it is based on the use of a large animal. Moreover, the pig is very similar to humans in terms of genetic and physiological parameters (30).

К сожалению, приведенные модели воспалительных заболеваний женских половых органов односторонне освещают воспалительный процесс как локальную иммунную реакцию на микробный агент, в то время как хроническое воспаление всегда сопровождается разной степенью дисфункции системного иммунного ответа (6, 14). Используя в качестве возбудителя моноагент, экспериментаторы воспроизводят классическую специфическую реакцию, тогда как в современной этиологии хронических воспалительных заболеваний половых органов превалирует микст-инфекция (12, 17, 24). Кроме того, воспалительный процесс, вызванный инфекционным агентом, невозможно регулировать по степени выраженности и другим показателям, необходимым для полноценного планирования эксперимента.Unfortunately, the presented models of inflammatory diseases of the female genital organs unilaterally illuminate the inflammatory process as a local immune response to a microbial agent, while chronic inflammation is always accompanied by varying degrees of dysfunction of the systemic immune response (6, 14). Using a monoagent as a causative agent, the experimenters reproduce a classic specific reaction, whereas mixed infection prevails in the modern etiology of chronic inflammatory diseases of the genital organs (12, 17, 24). In addition, the inflammatory process caused by an infectious agent cannot be regulated by the degree of severity and other indicators necessary for the full planning of the experiment.

Для изучения влияния лечебного препарата на центральное звено иммуногенеза при хронических воспалительных заболеваниях женских половых органов модель эндометрита воспроизводили на беспородных крысах-самках следующим образом. В качестве антигена использовали 2%-ный водно-солевой экстракт ткани матки и яичника. Иммунизацию проводили по схеме: антиген с полным адъювантом Фрейнда (Дикфа) вводили в переднюю брюшную стенку в дозе 5 мг/кг (по белку), через 7 дней - в аналогичной дозе внутрибрюшинно, через 14 дней - внутривенно без стимулятора в дозе 3 мг/кг (4). Для оценки фармакотерапевтической эффективности лекарственного препарата для лечения эндометрита у белых крысах линии Wistar модель создавалась экспериментальным повреждение матки. Это осуществлялось введением 0,1 мл 2% водного раствора формалина внутрь матки. Однако у большинства крыс развивался острый, а не хронический эндометрит (5). В экспериментах на «голых» мышах (SCID mice) проводили двустороннюю оофоректомию (удаление яичников) либо введение антипрогестеронового препарата, затем вводили микроисточник экзогенного эстрогена в ксенографт человеческой нормальной эндометриальной ткани и имплантировали такой ксенографт в брюшную полость мыши. Источники экзогенного эстрогена добавляют мыши и после имплантации ксенографта, который разрастается и имитирует развитие эндометриальной ткани человека. Двусторонняя оофоректомия (удаление яичников) либо введение антипрогестеронового препарата производятся минимум за неделю до имплантации ксенографта. Эта модель применима для изучения молекулярных и иммуногистохимических/иммуногистопатологических профилей эндометриоза человека, биомаркеров заболевания. Может найти применение для оценки потенциальных способов лечения и профилактики эндометриоза: доз препаратов, схем терапии, методов и путей доставки (10).To study the effect of the drug on the central link of immunogenesis in chronic inflammatory diseases of the female genital organs, the model of endometritis was reproduced on outbred female rats as follows. As an antigen, a 2% aqueous-salt extract of uterine and ovarian tissue was used. Immunization was carried out according to the scheme: antigen with Freund's complete adjuvant (Dikf) was injected into the front abdominal wall at a dose of 5 mg / kg (for protein), after 7 days - in the same dose intraperitoneally, after 14 days - intravenously without a stimulant at a dose of 3 mg / kg (4). To evaluate the pharmacotherapeutic efficacy of a drug for the treatment of endometritis in white Wistar rats, an experimental uterine injury model was created. This was carried out by introducing 0.1 ml of a 2% aqueous formalin solution into the uterus. However, most rats developed acute rather than chronic endometritis (5). In experiments on naked mice (SCID mice), they performed bilateral oophorectomy (removal of the ovaries) or the introduction of an antiprogesterone preparation, then a micro source of exogenous estrogen was introduced into a xenograft of human normal endometrial tissue and such a xenograft was implanted into the abdominal cavity of the mouse. Sources of exogenous estrogen are added to the mouse after xenograft implantation, which grows and mimics the development of human endometrial tissue. Bilateral oophorectomy (removal of the ovaries) or administration of an antiprogesterone drug is performed at least one week before xenograft implantation. This model is applicable for studying molecular and immunohistochemical / immunohistopathological profiles of human endometriosis, disease biomarkers. It can be used to evaluate potential methods of treatment and prevention of endometriosis: doses of drugs, treatment regimens, methods and delivery routes (10).

Данные способы моделирования хронических воспалительных заболеваний женских половых органов не подходят для воспроизведения в эксперименте хронического эндометрита, приближенного к его реальным клинико-морфологическим характеристикам, ввиду сложности постановки и наличия множества побочных моментов.These methods of modeling chronic inflammatory diseases of the female genital organs are not suitable for reproducing in the experiment chronic endometritis, close to its real clinical and morphological characteristics, due to the complexity of the formulation and the presence of many side effects.

Известны способы моделирования хронических заболеваний женских половых органов, основанные на трансплантации фрагментов эндометриальной ткани (часто отделенной от миометрия) и подшивании к различным тканям организма с помощью микрохирургической техники (11, 15, 16, 21, 25, 26, 28, 31). На разных этапах развития заболеваний или после введения лекарственных препаратов животных забивают и извлекают трансплантаты для гистологического изучения. Сравнивая полученные результаты с контрольной группой животных, делают выводы о механизмах развития заболевания и оценивают потенциал лекарственных средств. В некоторых случаях сравнение производят на наркотизированных животных после предварительного разреза кожи и обеспечения доступа к имплантату с последующим ушиванием раны. Для оценки эффективности доксициклина в отношении инволюции эндометриальной ткани у взрослых самок крыс линии Wistar Albino (не беременных) вырезали фрагмент (5×5 мм) аутологичной эндометриальной ткани, отделенной от миометрия, и подшивали этот фрагмент на внутреннюю поверхность брюшной полости справа (11). Для изучения действия противовоспалительных и иммуномодулирующих препаратов при эндометриозе у мышей и крыс удаляли матку, нарезали ее на мелкие фрагменты, которые подшивали в брюшную полость. В большинстве случаев эндометрий не отделяли от миометрия и подшивали вместе (16). Для изучения механизмов развития эндометриоза оценки потенциала лекарственных средств у «голых» мышей или иммунодефицитных трансгенных мышей RAG-2/γ(c)KO осуществляли ксенотрансплантацию в брюшную полость или подкожно фрагментов эндометриальной ткани человека, полученной в фазах пролиферации или секреции менструального цикла, либо менструального эндометрия (16). У макак и бабуинов менструальную кровь направляли в брюшную полость путем репозиции шейки матки или ее перевязывания - создается ретроградный ток менструальной крови. Либо подшивали фрагменты аутологичной эндометриальной ткани в брюшную полость, либо «засевали» ее фрагментами эндометриальной ткани (подшивание не производят). Это позволяет изучать роль иммунной системы в появлении и прогрессировании эндометриоза (16). Для исследования экспрессии alpha-TNF в ткани эндометрия и ее динамики под воздействием разных факторов, а также исследования роли воспаления в инволюции эндометрия у взрослых самок крыс линии Wistar Albino фрагмент средней трети левого рога матки размером 5×5 мм и подшивали вблизи кровеносного сосуда на внутреннюю поверхность брюшной полости справа (21). У взрослых самок макак: «свинохвостой» (Масаса nemestrina) и Макаки-резус (Масаса mulatta) в ходе лапаротомии, фрагменты бахромы (каймы) маточных труб нарезали на мелкие фрагменты и аутотрансплантировали под кожу, в карманы, формируемые на передней брюшной стенке. При трансплантации эпителия ампулы и перешейка маточных труб их сепарировали от гладкомышечного слоя, нарезали на фрагменты по 4-6 мм, и проводили аутотрансплантацию аналогично. Овариеэктомию не проводили. Затем в эти «карманы» инокулировали размноженными in vitro культурами С.trachonatis (по 100 тыс. единиц, что соответствует 10 минимальным дозам инфицирования). Эта модель предназначена для изучения иммунопатологии хламидиозной окологенитальной инфекции. Авторы отмечают, что модель применима и в отношении иных патогенов человека (25). Для изучения потенциала лекарственного средства в лечении эндометриоза взрослым самкам крыс линии Sprague-Dawley выполняли имплантацию фрагментов ткани эндометрия разного размера к боковой стенке брюшной полости (28). Коровам и кобылам осуществляли введение в матку человеческого рекомбинантного интерлейкина-8 (rhIL-8; 1,25 микрограмм на кобылу и 5 микрограмм на корову, растворенных в 50 мл фосфатно-солевого буфера). Это простая модель развития эндометрита, основанная на «прямом» подходе: полиморфоядерные нейтрофильные гранулоциты (ПНГ) привлекаются в полость матки введением провоспалительного аттрактанта. Модель предназначена для исследования параметров миграции ПНГ в матку в разных условиях. Предложенная in vivo модель превосходит используемые in vitro модели трансмиграции (31). Кролику проводили трансплантацию фрагментов аутологичного эндометрия в глаз (ксенотрансплантация человеческого эндометрия в данном случае не работает, т.к. отторжение происходит за неделю). Важной особенностью этой модели является то, что модель действует долго (181 день). При этом возможно наблюдение in vivo за морфологией имплантата при помощи глазной лампы, возможен забор водянистой влаги глаза для исследований. Модель хорошо подходит для изучения морфологии (например, васкуляризации) и биохимии эндометрия (26).Known methods for modeling chronic diseases of the female genital organs, based on transplantation of fragments of endometrial tissue (often separated from the myometrium) and stitching to various tissues of the body using microsurgical techniques (11, 15, 16, 21, 25, 26, 28, 31). At different stages of the development of diseases or after administration of drugs, animals are killed and grafts are removed for histological examination. Comparing the results with a control group of animals, they draw conclusions about the mechanisms of the development of the disease and evaluate the potential of drugs. In some cases, comparisons are made on anesthetized animals after a preliminary skin incision and access to the implant, followed by suturing of the wound. To evaluate the effectiveness of doxycycline with respect to endometrial tissue involution in adult female Wistar Albino rats (non-pregnant), a fragment (5 × 5 mm) of autologous endometrial tissue separated from the myometrium was excised and this fragment was sutured to the right inner abdominal surface (11). To study the effect of anti-inflammatory and immunomodulating drugs in endometriosis in mice and rats, the uterus was removed, cut into small fragments, which were sutured into the abdominal cavity. In most cases, the endometrium was not separated from the myometrium and was sutured together (16). To study the mechanisms of development of endometriosis, assessing the potential of drugs in nude mice or immunodeficient transgenic mice RAG-2 / γ (c) KO, xenografts were performed in the abdominal cavity or subcutaneously of fragments of human endometrial tissue obtained in the phases of proliferation or secretion of the menstrual cycle or menstrual endometrium (16). In macaques and baboons, menstrual blood was sent to the abdominal cavity by repositioning the cervix or bandaging it - a retrograde flow of menstrual blood is created. Either fragments of autologous endometrial tissue were sutured into the abdominal cavity, or they were “sown” with fragments of endometrial tissue (suturing was not performed). This allows us to study the role of the immune system in the appearance and progression of endometriosis (16). To study the expression of alpha-TNF in endometrial tissue and its dynamics under the influence of various factors, as well as to study the role of inflammation in endometrial involution in adult female Wistar Albino rats, a fragment of the middle third of the left uterine horn is 5 × 5 mm in size and was sutured near the blood vessel to the inner abdominal surface on the right (21). In adult female macaques: “pigtail” (Masasa nemestrina) and Rhesus macaques (Masasa mulatta) during laparotomy, fragments of the fringe (rim) of the fallopian tubes were cut into small fragments and autotransplanted under the skin into pockets formed on the anterior abdominal wall. During epithelial transplantation, the ampoules and the isthmus of the fallopian tubes were separated from the smooth muscle layer, cut into fragments of 4-6 mm, and autotransplantation was performed similarly. Ovariectomy was not performed. Then, C. trachonatis cultures propagated in vitro (100,000 units, which corresponds to 10 minimal doses of infection) were inoculated into these “pockets”. This model is designed to study the immunopathology of chlamydial perinogenital infection. The authors note that the model is applicable to other human pathogens (25). To study the potential of the drug in the treatment of endometriosis, adult female Sprague-Dawley rats implanted fragments of endometrial tissue of different sizes to the lateral wall of the abdominal cavity (28). Cows and mares were injected with human recombinant interleukin-8 into the uterus (rhIL-8; 1.25 micrograms per mare and 5 micrograms per cow dissolved in 50 ml of phosphate-buffered saline). This is a simple model of the development of endometritis, based on a “direct” approach: polymorphonuclear neutrophilic granulocytes (PNH) are attracted to the uterine cavity by the introduction of a pro-inflammatory attractant. The model is designed to study the parameters of APG migration into the uterus in different conditions. The in vivo model is superior to the in vitro transmigration models (31). The rabbit underwent transplantation of autologous endometrial fragments into the eye (xenograft of the human endometrium in this case does not work, because rejection occurs within a week). An important feature of this model is that the model is valid for a long time (181 days). In this case, it is possible to observe in vivo the morphology of the implant using an eye lamp, it is possible to collect aqueous humor of the eye for research. The model is well suited for studying morphology (e.g., vascularization) and endometrial biochemistry (26).

Известен способ моделирования хронических воспалительных заболеваний женских половых органов на кроликах, выбранный нами в качестве прототипа (15). Для создания модели осуществляли трансплантацию эндометриальной ткани кролика в его брюшную полость. Изменения имплантата изучали через 12 недель. Только к этому моменту эндометриальные имплантаты имели кистозную структуру. Макроскопический и гистологический вид имплантатов соответствовал эндометриозу. Гормональная терапия не проводилась. Использование микрохирургической техники фиксации имплантов позволяла предотвратить образование спаек между маточными трубами и яичниками. Это позволило использовать данную модель для изучения влияния хронических воспалительных заболеваний женских половых органов на фертильность - способность к зачатию.A known method of modeling chronic inflammatory diseases of the female genital organs in rabbits, we have chosen as a prototype (15). To create a model, the endometrial tissue of a rabbit was transplanted into its abdominal cavity. Implant changes were studied after 12 weeks. Only at this point did endometrial implants have a cystic structure. The macroscopic and histological appearance of the implants corresponded to endometriosis. Hormone therapy was not performed. Using the microsurgical technique of implant fixation prevented the formation of adhesions between the fallopian tubes and ovaries. This allowed us to use this model to study the effect of chronic inflammatory diseases of the female genital organs on fertility - the ability to conceive.

Недостатком этого способа моделирования является довольно большой срок создания модели - 3 месяца (15).The disadvantage of this modeling method is the rather long term for creating the model - 3 months (15).

Целью нашего изобретения явилось уменьшение времени получения модели хронических воспалительных заболеваний женских половых органов.The aim of our invention was to reduce the time to obtain a model of chronic inflammatory diseases of the female genital organs.

Для достижения поставленной цели вначале кролику проводят гормональную терапию (эстрогенизацию) по определенной схеме, затем под наркозом в стерильных условиях проводят аутотрансплантацию участков эндометрия. Для этого после лапаротомии из маточного рога выделяют несколько прямоугольных участков эндометрия размером 2×3 мм и подшивают их к париетальной брюшине различными способами. После ушивания раны животное выхаживают и проводят гормональную терапию, но уже по другой схеме. Если подшивание участков эндометрия проводят микрохирургическими инструментами и атравматическим синтетическим нерассасывающимся монофиламентным шовным материалом 9/0 четырьмя швами по углам участка эндометрия двумя двойными узлами в каждом шве, то через 2 недели у кролика развивается эндометриоз. В случае, если подшивание участков эндометрия осуществляют общехирургическими инструментами и синтетическим нерассасывающимся шовным материалом 4/0 четырьмя швами по углам участка эндометрия тремя узлами в каждом шве, то в имплантате через 2 недели наблюдают все признаки хронического эндометрита. Предоперационную эстрогенизацию проводят внутримышечным (в.м.) введением 0,1% синестрола по 1,0 мл в день, начиная за 7 дней до планируемой операции (в 7-й день, в 5-й день, в 3-й день, в день перед операцией) и в день операции. После операции синестрол вводят в.м. в той же дозе однократно на 2-й, 4-й и 6-й день.To achieve this goal, first, the rabbit undergoes hormonal therapy (estrogenization) according to a certain scheme, then under anesthesia in sterile conditions, autotransplantation of endometrial sites is performed. For this, after laparotomy, several rectangular sections of the endometrium 2 × 3 mm in size are isolated from the uterine horn and hemmed to the parietal peritoneum in various ways. After suturing the wound, the animal is nursed and hormone therapy is carried out, but according to a different scheme. If hemming of endometrial sites is carried out with microsurgical instruments and atraumatic synthetic non-absorbable monofilament suture 9/0 with four sutures at the corners of the endometrial site with two double nodes in each suture, then after 2 weeks the rabbit develops endometriosis. If hemming of the endometrial sites is carried out with general surgical instruments and synthetic non-absorbable suture material 4/0 with four sutures at the corners of the endometrial site with three nodes in each suture, then all signs of chronic endometritis are observed in the implant after 2 weeks. Preoperative estrogenization is carried out by intramuscular (m) administration of 0.1% Sinestrol at 1.0 ml per day, starting 7 days before the planned operation (on the 7th day, on the 5th day, on the 3rd day, on the day before surgery) and on the day of surgery. After the operation, sinestrol is administered in m. in the same dose once on the 2nd, 4th and 6th day.

Положительный эффект от внедрения предлагаемого способа состоит в том, что уменьшение времени создания модели приводит к повышению интенсивности научно-исследовательской работы и экономии материальных ресурсов, необходимых для содержания лабораторных животных. В ходе создания модели и последующей работы с ней возможно проведение визуального мониторинга состояния имплантатов эндометрия. Морфологические методы исследования позволяют дать адекватную оценку результатам моделирования. Данная экспериментальная модель пригодна для изучения различных терапевтических воздействий, в том числе клеточного продукта на основе эндометриальных стволовых клеток, на ткань поврежденного эндометрия и оценки эффективности этих воздействий. Кроме этого, разработанная модель обладает характеристиками, обеспечивающими возможность ее использования для апробации современных хирургических технологий, в том числе изучения воздействия различных видов энергии (электрокоагуляции, лазеров, плазменного потока и т.д.) для лечения хронического эндометрита.The positive effect of the implementation of the proposed method is that reducing the time to create a model leads to an increase in the intensity of research work and saving material resources necessary for the maintenance of laboratory animals. During the creation of the model and subsequent work with it, it is possible to conduct visual monitoring of the status of endometrial implants. Morphological research methods allow an adequate assessment of the simulation results. This experimental model is suitable for studying various therapeutic effects, including a cellular product based on endometrial stem cells, on damaged endometrial tissue and evaluating the effectiveness of these effects. In addition, the developed model has characteristics that make it possible to use it to test modern surgical technologies, including studying the effects of various types of energy (electrocoagulation, lasers, plasma flow, etc.) for the treatment of chronic endometritis.

На фиг.1 представлена морфологическая картина имплантата через 14 дней после имплантации с использованием микрохирургической техники (модель эндометриоза). Окраска гематоксилином-эозином. Увеличение 360 х.Figure 1 shows the morphological picture of the implant 14 days after implantation using a microsurgical technique (endometriosis model). Hematoxylin-eosin stain. 360x magnification.

На фиг.2 - морфологическая картина имплантата через 14 дней после имплантации с использованием общехирургической техники (модель хронического эндометрита). Окраска гематоксилином-эозином. Увеличение 120 х.Figure 2 - morphological picture of the implant 14 days after implantation using general surgical technique (model of chronic endometritis). Hematoxylin-eosin stain. Magnification 120 x.

Способ осуществляется следующим образом. Для моделирования заболеваний эндометрия использовали половозрелых самок кроликов породы Шиншилла массой 2,5-3,5 кг, возраст от 1 года до 2,5 лет. Перед операцией проводили эстрогенизацию животных путем в.м. введения 0,1% синестрола по следующей схеме: введение через день по 1,0 мл внутримышечно в мышцы заднего отдела бедра один раз в день, начиная за 7 дней до планируемой операции (в 7-й день, в 5-й день, в 3-й день, в день перед операцией) и в день операции. После обработки операционного поля под тиопенталовым наркозом (30-40 мг/кг массы тела животного) выполняли нижнесрединную лапаротомию длиной 6 см. Послойно рассекали: кожу, подкожную жировую клетчатку, поверхностную фасцию, белую линию, предбрюшинную клетчатку, брюшину. Отграничение подкожной клетчатки салфетками не проводили. Производили гемостаз - лигирование сосудов. Проводили отграничение петель тонкой кишки влажными салфетками. Правый маточный рог выделяли и резецировали на протяжении 3 см. Резекция выполнялась без использования электрокоагуляции острым путем с помощью ножниц. Гемостаз - лигирование сосудов. Удаленный препарат рассекали продольным разрезом ножниц, вскрывая полость матки. Разрез выполняли на стороне, противоположной прикреплению брыжейки матки. Эндометрий из центра препарата отделяли острым путем при помощи острого лезвия и микрохирургического анатомический пинцета и его фрагменты 2×3 мм подшивали к париетальной брюшине передней брюшной стенки. Местом фиксации был участок интактной брюшины справа и слева от операционной раны на расстоянии 2 см от краев. Фрагменты подшивали на расстоянии 2 см друг от друга с каждой стороны по 2 фрагмента для обеспечения независимого процесса приживления. Для создания модели эндометриоза подшивание фрагментов производили с использованием микрохирургического инструмента (иглодержатель для микрохирургических игл и микрохирургический анатомический пинцет) и атравматического синтетического нерассасывающегося монофиламентного шовного материала 9/0. Для улучшения визуализации использовали бинокулярную лупу (БЛ2-1, Россия). Данная толщина нити была минимальной, позволяющей для микрохирургической техники осуществить надежную фиксацию фрагмента эндометрия к брюшине четырьмя швами по углам участка эндометрия двумя двойными узлами в каждом шве с минимальной травмой пересаживаемого участка и подлежащих тканей. Использование монофиламентного атравматического материала позволило свести к минимуму операционную травму. Для создания модели хронического эндометрита для фиксации эндометрия к брюшине использовали общехирургические инструменты (иглодержатель для атравматических игл) и атравматический синтетический пересасывающийся шовный материал 4/0. Данная толщина нити была минимальной, позволяющей для общехирургической техники осуществить надежную фиксацию фрагмента эндометрия 2×3 мм к брюшине при помощи четырех швов по углам. Швы фиксировали при помощи трех узлов, обеспечивающих надежность шва. После проверки гемостаза и удаления отграничивающих салфеток рану послойно ушивали с наложением на кожу шелковых швов по Донати. В послеоперационном периоде всем модельным животным с целью профилактики послеоперационных осложнений применяли антибиотики (цефтриаксон в дозе 50 мг/кг/сут) в течение 5 суток. Производили повторную (послеоперационную) эстрогенизацию 0,1% раствором синестрола по следующей схеме: введение через день по 1,0 мл внутримышечно в мышцы заднего отдела бедра, начиная со второго дня после операции три раза (однократно на 2-й, 4-й и 6-й день).The method is as follows. To model endometrial diseases, we used sexually mature female Chinchilla rabbits weighing 2.5-3.5 kg, age from 1 year to 2.5 years. Before the operation, the animals were estrogenized by means of m. the introduction of 0.1% sinestrol according to the following scheme: the introduction in a day of 1.0 ml intramuscularly into the muscles of the hind femur once a day, starting 7 days before the planned operation (on the 7th day, on the 5th day, 3rd day, the day before surgery) and the day of surgery. After processing the surgical field under thiopental anesthesia (30-40 mg / kg body weight of the animal), a lower middle laparotomy was performed 6 cm long. The skin, subcutaneous fatty tissue, superficial fascia, white line, peritoneal tissue, peritoneum were dissected in layers. Delineation of subcutaneous tissue with napkins was not performed. Produced hemostasis - ligation of blood vessels. The loops of the small intestine were delimited with wet wipes. The right uterine horn was isolated and resected for 3 cm. The resection was performed without the use of electrocoagulation in an acute way using scissors. Hemostasis - ligation of blood vessels. The removed preparation was dissected with a longitudinal section of scissors, opening the uterine cavity. The incision was performed on the side opposite to the attachment of the mesentery of the uterus. The endometrium from the center of the preparation was separated sharply using a sharp blade and microsurgical anatomical forceps and its fragments 2 × 3 mm were sutured to the parietal peritoneum of the anterior abdominal wall. The fixation site was a section of the intact peritoneum to the right and left of the surgical wound at a distance of 2 cm from the edges. Fragments were sutured at a distance of 2 cm from each other on each side for 2 fragments to ensure an independent engraftment process. To create a model of endometriosis, the hemming of fragments was performed using a microsurgical instrument (needle holder for microsurgical needles and microsurgical anatomical tweezers) and atraumatic synthetic non-absorbable monofilament suture material 9/0. A binocular magnifier (BL2-1, Russia) was used to improve visualization. This thread thickness was minimal, allowing microsurgical technique to securely fix the endometrial fragment to the peritoneum with four sutures at the corners of the endometrial site with two double nodes in each suture with minimal trauma to the transplanted area and underlying tissues. The use of monofilament atraumatic material made it possible to minimize surgical trauma. To create a model of chronic endometritis for fixing the endometrium to the peritoneum, we used general surgical instruments (needle holder for atraumatic needles) and atraumatic synthetic resorbable suture material 4/0. This thread thickness was minimal, allowing for general surgical technique to securely fix a 2 × 3 mm endometrial fragment to the peritoneum using four stitches in the corners. Seams were fixed using three nodes, ensuring the reliability of the seam. After checking hemostasis and removing boundary wipes, the wound was sutured in layers with the application of silk sutures on the skin according to Donati. In the postoperative period, all model animals were used antibiotics (ceftriaxone at a dose of 50 mg / kg / day) for 5 days to prevent postoperative complications. Repeated (postoperative) estrogenization with a 0.1% sinestrol solution was performed as follows: every other day, 1.0 ml was administered intramuscularly into the muscles of the posterior thigh, starting from the second day after surgery three times (once on the 2nd, 4th and 6th day).

Повторное оперативное вмешательство - забор материала и выведение всех модельных животных производили через 14 дней после оперативного вмешательства. После обработки операционного поля под тиопенталовым наркозом (30-40 мг/кг массы тела в.м. в мышцы заднего отдела бедра) выполняли минилапаротомию длиной 2,5 см по средней линии передней брюшной стенки, на 1 см отступя от верхнего конца послеоперационного рубца. Кожу передней брюшной стенки захватывали кожно-бельевыми зажимами по средней линии на уровне нижнего конца послеоперационного рубца и по сосковой линии на уровне середины послеоперационного рубца справа и слева (3 зажима) и поднимали. При этом производили визуальное обследование (макроскопическая оценка) состояния операционного поля, состояния имплантированного эндометрия и забор материала для морфологического исследования. Последовательно осматривали область послеоперационного рубца, брюшину правой и левой половины передней брюшной стенки, петли тонкой и толстой кишки, левый (интактный) маточный рог. Забор гистологического материала для исследования у всех модельных животных выполняли путем эксцизионной биопсии имплантов эндометрия в пределах неизмененных тканей. После выделения левого маточного рога его резецировали ножницами на протяжении не менее 3 см. Удаленный препарат рассекали ножницами продольно, вскрывая полость матки. Разрез выполняли на стороне, противоположной прикреплению широкой связки матки. Эндометрий из центра препарата (интактный участок левого маточного рога) отделяли острым способом при помощи лезвия.Repeated surgery - sampling and breeding of all model animals was performed 14 days after surgery. After treatment of the surgical field under thiopental anesthesia (30-40 mg / kg of body weight im. Into the muscles of the posterior thigh), minilaparotomy was performed 2.5 cm long along the midline of the anterior abdominal wall, 1 cm departing from the upper end of the postoperative scar. The skin of the anterior abdominal wall was grasped with skin-linen clamps along the midline at the level of the lower end of the postoperative scar and along the nipple line at the level of the middle of the postoperative scar on the right and left (3 clamps) and lifted. In this case, a visual examination (macroscopic assessment) of the state of the surgical field, the condition of the implanted endometrium, and sampling of the material for morphological studies were performed. Sequentially examined the area of the postoperative scar, the peritoneum of the right and left half of the anterior abdominal wall, the loop of the small and large intestine, the left (intact) uterine horn. The collection of histological material for the study in all model animals was performed by excision biopsy of endometrial implants within unchanged tissues. After isolation of the left uterine horn, it was resected with scissors for at least 3 cm. The removed preparation was dissected longitudinally with scissors, revealing the uterine cavity. The incision was performed on the side opposite to the attachment of the wide ligament of the uterus. The endometrium from the center of the preparation (the intact portion of the left uterine horn) was separated sharply using a blade.

Подготовку препаратов ткани эндометрия для морфологического исследования проводили на основании фиксации в 10% нейтральном формалине не менее 10 суток с последующей проводкой по схеме:Preparation of endometrial tissue preparations for morphological studies was carried out on the basis of fixation in 10% neutral formalin for at least 10 days, followed by posting according to the scheme:

1) спирт в течение 1 часа1) alcohol for 1 hour

2) спирт в течение 1 часа2) alcohol for 1 hour

3) спирт в течение 1 часа3) alcohol for 1 hour

4) спирт в течение 1 часа4) alcohol for 1 hour

5) спирт-касторовое масло (50%-50%) при 37°C в термостате в течение суток5) alcohol-castor oil (50% -50%) at 37 ° C in a thermostat during the day

6) хлороформ в течение 30 минут6) chloroform for 30 minutes

7) хлороформ в течение 30 минут7) chloroform for 30 minutes

8) парафин-хлороформ (50%-50%) при 60°C в термостате в течение часа.8) paraffin-chloroform (50% -50%) at 60 ° C in a thermostat for an hour.

Окраску препаратов осуществляют гематоксилином-эозином и по Ван-Гизон по стандартной методике (8).The color of the preparations is carried out with hematoxylin-eosin and according to Van Gieson according to the standard technique (8).

Макроскопическая характеристика имплантатов ткани эндометрия в группах животных с использованием микрохирургической техники следующая: объемные импланты ярко-розового цвета в виде четко выраженной полусферы; возвышающиеся над поверхностью брюшины; незначительная гиперемия зоны имплантации по всей площади, включая места наложения швов; отсутствие кровоизлияний в зоне имплантации как в центре, так и по периферии; отсутствие спаечного процесса. При морфологическом анализе тканей имплантов, фиксированных к брюшине с использованием микрохирургической техники было обнаружено: над поверхностью всех имплантов прослеживается брюшинный покров; наличие хорошо выраженных эндометриальных желез с четкими контурами и жизнеспособным неслущенным эпителием; отдельные железы проникают в мышечный слой брюшной стенки, что свидетельствует о прогрессирующем срастании тканей; стромальный компонент хорошо выражен, прослеживаются слабо выраженные признаки отека тканей; отсутствие кровоизлияний; по периферии имплантатов наблюдается умеренно выраженная полиморфноклеточная инфильтрация; отсутствие границы между имплантом и подлежащими тканями, свидетельствующее о срастании тканевых элементов; кистевидное расширение части эндометриальных желез (фиг.1).The macroscopic characteristics of endometrial tissue implants in animal groups using the microsurgical technique are as follows: bright pink volumetric implants in the form of a pronounced hemisphere; towering above the surface of the peritoneum; slight hyperemia of the implantation area over the entire area, including suturing sites; the absence of hemorrhages in the implantation zone both in the center and on the periphery; lack of adhesive process. A morphological analysis of implant tissues fixed to the peritoneum using microsurgical techniques revealed the following: a peritoneal cover is traced over the surface of all implants; the presence of well-defined endometrial glands with clear contours and viable unhealed epithelium; individual glands penetrate the muscle layer of the abdominal wall, indicating a progressive fusion of tissues; the stromal component is well defined, mild signs of tissue edema are traced; lack of hemorrhage; at the periphery of the implants, a moderate polymorphic cell infiltration is observed; the absence of a border between the implant and underlying tissues, indicating the fusion of tissue elements; racemose part of the endometrial glands (figure 1).

В группе животных с использованием общехирургической техники на обзорной лапароскопии на 14 день после моделирования имплантаты характеризовались следующим образом: округлые имплантаты бледно-розового цвета возвышались над поверхностью брюшины в виде уплощенной полусферы; выраженная гиперемия зоны имплантации, максимально интенсивная в местах наложения швов; наличие в некоторых случаях плоскостных спаек длиной 2-3 мм между имплантатом и кишкой, между кишкой и париетальной брюшиной; При морфологическом анализе имплантатов, фиксированных к брюшине с помощью общехирургической техники, выявлены следующие изменения: железистый компонент в виде желез с частично спущенным эпителием; эндометриальная строма в состоянии дистрофии, выраженный отек межклеточных промежутков, проявляющийся ослаблением тинкториальных свойств; кровоизлияния в имплант и подлежащие ткани брюшной стенки, более выраженные в зоне наложения швов; полиморфноклеточная инфильтрация импланта и подлежащей ткани, наиболее интенсивная в зоне наложения швов; прослеживается неравномерный промежуток в виде щели между имплантом и подлежащей брюшиной (фиг.2).In the group of animals using general surgical techniques on a survey laparoscopy on day 14 after modeling, the implants were characterized as follows: round pink-colored implants towered above the surface of the peritoneum in the form of a flattened hemisphere; severe hyperemia of the implantation zone, the most intense in the places of suturing; the presence in some cases of planar adhesions 2-3 mm long between the implant and the intestine, between the intestine and the parietal peritoneum; The morphological analysis of implants fixed to the peritoneum using the general surgical technique revealed the following changes: glandular component in the form of glands with partially deflated epithelium; endometrial stroma in a state of dystrophy, pronounced edema of the intercellular spaces, manifested by a weakening of tinctorial properties; hemorrhages in the implant and underlying tissues of the abdominal wall, more pronounced in the suture area; polymorphic cell infiltration of the implant and underlying tissue, the most intense in the suture area; there is a non-uniform gap in the form of a gap between the implant and the underlying peritoneum (figure 2).

Хронический воспалительный процесс считается воспроизведенным, если в имплантатах эндометрия присутствуют следующие морфотипические признаки: наличие инфильтратов, состоящих преимущественно из лимфоидных элементов в сочетании с лейкоцитами и гистиоцитами, плазматических клеток, отек стромы и ее очаговый фиброз, стаз эритроцитов и склеротические изменения стенок спиральных артерий эндометрия (7). Таким образом, из полученных нами результатов видно, что уже через 2 недели после аутотрансплантации участков эндометрия, выделенных из маточного рога к париетальной брюшине, при дополнительной эстрогенизации животного и в зависимости от способа фиксации в этих аутотрансплантатах, происходят такие изменения эндометриальной ткани, которые характерны для эндометриоза и хронического эндометрита у женщин (9, 19, 27).A chronic inflammatory process is considered to be reproduced if the following morphotypic signs are present in endometrial implants: the presence of infiltrates, consisting mainly of lymphoid elements in combination with leukocytes and histiocytes, plasma cells, stromal edema and its focal fibrosis, erythrocyte stasis and sclerotic changes in the walls of the spiral arteries 7). Thus, it can be seen from our results that already 2 weeks after the autotransplantation of endometrial sites isolated from the uterine horn to the parietal peritoneum, with additional estrogenization of the animal and depending on the fixation method in these autografts, changes in the endometrial tissue occur that are characteristic of endometriosis and chronic endometritis in women (9, 19, 27).

Список литературыBibliography

1. Патент RU 2142163. Способ моделирования воспалительных заболеваний женских половых органов. Дата подачи заявки: 17.07.1996.1. Patent RU 2142163. A method for modeling inflammatory diseases of the female genital organs. Application submission date: 07/17/1996.

2. Патент RU 2224297. Способ моделирования хронического воспаления придатков матки Дата подачи заявки: 28.06.2002.2. Patent RU 2224297. Method for modeling chronic inflammation of the uterine appendages Date of application: June 28, 2002.

3. Патент RU 2279142. Способ моделирования воспалительных заболеваний верхних отделов женских половых органов. Дата подачи заявки: 12.11.2004.3. Patent RU 2279142. A method for modeling inflammatory diseases of the upper parts of the female genital organs. Application submission date: 12.11.2004.

4. Абильдаева А.Ж., С.М.Адекенов. Противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства сесквитерпенового лактона арглабин при экспериментальном хроническом эндометрите. Российский биотерапевтический журн. - 2005. - Т.4. - №2. - С.50-53.4. Abildaeva A.Zh., S.M. Adekenov. Anti-inflammatory and immunomodulating properties of sesquiterpene lactone arglabin in experimental chronic endometritis. Russian biotherapeutic journal. - 2005. - T.4. - No. 2. - S.50-53.

5. Ботоева Е.А., И.П.Убеева, С.М.Николаев. Оценка фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта ортилии однобокой. Бюллетень ВСНЦ СО РАМП. - 2009. - Т.66. - №2. - С.100-102.5. Botoeva EA, I.P. Ubeeva, S. M. Nikolayev. Evaluation of the pharmacotherapeutic efficacy of a dry extract of ortilia one-sided. Bulletin of the VSNS SB RAMP. - 2009. - T.66. - No. 2. - S. 100-102.

6. Калинина Н.М. и др. Показатели иммунитета у женщин с нарушением репродуктивной функции. Цитокины и воспаление. 2002. - Т.1. - №2. - С.276-277.6. Kalinina N.M. and other indicators of immunity in women with impaired reproductive function. Cytokines and inflammation. 2002. - T.1. - No. 2. - S.276-277.

7. Кузнецова А.В. Хронический эндометрит. Архив патологии. 2000. - №3. - С.48-52.7. Kuznetsova A.V. Chronic endometritis Pathology Archive. 2000. - No. 3. - S. 48-52.

8. Меркулов Г.А. Основы патогистологической техники. - М.: Медицина. 1961. - 187 с.8. Merkulov G.A. Fundamentals of histopathological techniques. - M.: Medicine. 1961 .-- 187 p.

9. Сухих, Г.Т. Хронический эндометрит: руководство. Г.Т.Сухих, А.В.Шуршалина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 64 с.9. Sukhikh, G.T. Chronic endometritis: a guide. G.T.Suhikh, A.V.Shurshalina. - M .: GEOTAR-Media, 2010 .-- 64 p.

10. Патент US6429353. Endometriosis mouse model. Дата подачи заявки 25.03.1998. Дата публикации 06.08.2002.10. Patent US6429353. Endometriosis mouse model. Application submission date 03.25.1998. Date of publication 06.08.2002.

11. Akkaya P., Onalan G., Haberal N., Bayraktar N., Mulayim В., Zeyneloglu H. B. Doxycycline causes regression ofendometriotic implants: a rat model. Hum. Reprod. - 2009. - V.24 (8). - P.1900-1908.11. Akkaya P., Onalan G., Haberal N., Bayraktar N., Mulayim B., Zeyneloglu H. B. Doxycycline causes regression ofendometriotic implants: a rat model. Hum. Reprod. - 2009 .-- V.24 (8). - P. 1900-1908.

12. Brook I. Microbiology and management ofpolymicrobial female genital tract infections in adolescents. J. Pediatr. Adolesc. Gynecol. - 2002. - V.15 (4). - P.217-226.12. Brook I. Microbiology and management ofpolymicrobial female genital tract infections in adolescents. J. Pediatr. Adolesc. Gynecol. - 2002 .-- V.15 (4). - P.217-226.

13. Cobo E.R., Eckmann L., Corbeil L.B. Murine models of vaginal trichomonad infections. Am J. Trop. Med. Hyg. - 2011. - V.85(4). - P.667-673.13. Cobo E.R., Eckmann L., Corbeil L. B. Murine models of vaginal trichomonad infections. Am J. Trop. Med. Hyg. - 2011 .-- V.85 (4). - P.667-673.

14. Disep В., et al. Immunohistochemical characterization ofendometrial leucocytes in endometritis. Histopathology. - 2004. - V.45 (6). - P.625-632.14. Disep B., et al. Immunohistochemical characterization of endometrial leucocytes in endometritis. Histopathology - 2004 .-- V.45 (6). - P.625-632.

15. Dunselman, G.A., D.Willebrand, et al. A rabbit model ofendometriosis. Gynecol. Obstet. Invest. - 1989. - V.27 (1). - P.29-33.15. Dunselman, G. A., D. Willebrand, et al. A rabbit model ofendometriosis. Gynecol. Obstet Invest. - 1989 .-- V.27 (1). - P.29-33.

16. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. - 2006. - V.12 (5). - P.641-649.16. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. - 2006 .-- V.12 (5). - P.641-649.

17. Haggerty C.L., et al. Bacterial vaginosis and anaerobic bacteria are associated with endometritis. Clin. Infect. Dis. - 2004. - V.39 (7). - P.990-995.17. Haggerty C. L., et al. Bacterial vaginosis and anaerobic bacteria are associated with endometritis. Clin. Infect. Dis. - 2004 .-- V.39 (7). - P.990-995.

18. He Chong-Yi.Wu Rui, Li Li, Wang Xiao-Xu, Wang Jian-Fa, Wang Shuang, Liu Wen, Yang Ke-Li. Establishment of a rat model of endometritis and its treatment with a Chinese-Western medicine emulsion. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. - 2008. - V.3 (12). - P.842-851.18. He Chong-Yi.Wu Rui, Li Li, Wang Xiao-Xu, Wang Jian-Fa, Wang Shuang, Liu Wen, Yang Ke-Li. Establishment of a rat model of endometritis and its treatment with a Chinese-Western medicine emulsion. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. - 2008 .-- V.3 (12). - P.842-851.

19. Kitaya K., Т.Yasuo. Immunohistochemistrical and clinicopathological characterization of chronic endometritis. Am J. Reprod. Immunol. - 2011. - Jul 12. - P.4108-4155.19. Kitaya K., T. Yasuo. Immunohistochemistrical and clinicopathological characterization of chronic endometritis. Am J. Reprod. Immunol. - 2011. - Jul 12. - P.4108-4155.

20. Klucinski W., Targowski S.P., Winnicka A., Miernik-Degorska E. Immunological induction ofendometritis-model investigations in cows. Zentralbl Veterinarmed A. - 1990. - V.37 (2). - P.148-153.20. Klucinski W., Targowski S.P., Winnicka A., Miernik-Degorska E. Immunological induction ofendometritis-model investigations in cows. Zentralbl Veterinarmed A. - 1990. - V.37 (2). - P.148-153.

21. Kondo W., dal Lago E.A., Noronha L., Olandoski M., Kotze P. G., Amaral V. F. Effect ofanti-TNF-a on peritoneal endometrial implants of rats. Rev. Col. Bras. Cir. -2011. - V.38 (4). - P.266-273.21. Kondo W., dal Lago E.A., Noronha L., Olandoski M., Kotze P. G., Amaral V. F. Effect ofanti-TNF-a on peritoneal endometrial implants of rats. Rev. Col. Bras. Cir. 2011. - V.38 (4). - P.266-273.

22. Mikamo H., Kawazoe K., Sato Y., Izumi K., Tamaya T. Therapeutic effects of a new quinolone, DU-6859a, on polymicrobial infections in a newly designed model of rat uterine endometritis. J Antimicrob Chemother. - 1998. - V.41 (1). - P.131-133.22. Mikamo H., Kawazoe K., Sato Y., Izumi K., Tamaya T. Therapeutic effects of a new quinolone, DU-6859a, on polymicrobial infections in a newly designed model of rat uterine endometritis. J Antimicrob Chemother. - 1998 .-- V.41 (1). - P.131-133.

23. Miyairi I., Ramsey K.H., Patton D. L. Duration of untreated chlamydial genital infection and factors associated with clearance: review of animal studies. J Infect Dis. - 2010. - V.201, Suppl. 2. - P.S96.103.23. Miyairi I., Ramsey K.H., Patton D. L. Duration of untreated chlamydial genital infection and factors associated with clearance: review of animal studies. J Infect Dis. - 2010 .-- V.201, Suppl. 2.- P.S96.103.

24. Nasraty S. Infections of the female genital tract. Prim. Care. - 2003. - V.30 (1). - P.193-203.24. Nasraty S. Infections of the female genital tract. Prim. Care - 2003 .-- V.30 (1). - P.193-203.

25. Patton D. L., Kuo C.C., Brenner R.M. Chlamydia trachomatis oculogenital infection in the subcutaneous autotransplant model of conjunctiva, salpinx and endometrium. Br. J. Exp. Pathol. - 1989. - V.70 (3). - P.357-367.25. Patton D. L., Kuo C.C., Brenner R.M. Chlamydia trachomatis oculogenital infection in the subcutaneous autotransplant model of conjunctiva, salpinx and endometrium. Br. J. Exp. Pathol. - 1989 .-- V.70 (3). - P.357-367.

26. Rock, J.A., R.A.Prendergast, et al. Intraocular endometrium in the rabbit as a model for endometriosis. Fertil Steril. - 1993. - V.59 (1). - P.232-235.26. Rock, J.A., R.A. Prendergast, et al. Intraocular endometrium in the rabbit as a model for endometriosis. Fertil Steril. - 1993 .-- V.59 (1). - P.232-235.

27. Smith M., et al. Chronic endometritis: a combined histopathologic and clinical review of cases from 2002 to 2007. Int. J. Gynecol. Pathol. - 2010. - V.29 (1). - P.44-50.27. Smith M., et al. Chronic endometritis: a combined histopathologic and clinical review of cases from 2002 to 2007. Int. J. Gynecol. Pathol. - 2010 .-- V.29 (1). - P.44-50.

28. Tjaden В., D. Galetto D. et al. Time-related effects ofRU486 treatment in experimentally induced endometriosis in the rat. Fertil. Steril. - 1993. - V.59 (2). - 437-440.28. Tjaden B., D. Galetto D. et al. Time-related effects of RU486 treatment in experimentally induced endometriosis in the rat. Fertil. Steril. - 1993 .-- V.59 (2). - 437-440.

29. Van Andel R.A., Franklin C.L., St Claire M.C., Riley L.K., Besch-Williford C.L., Hook R.R. Jr. Lesions of experimental genital Tritrichomonas foetus infections in estrogenized BALB/c mice. Vet. Pathol. - 1996. - V.33 (4). - P.407-411.29. Van Andel R.A., Franklin C.L., St Claire M.C., Riley L.K., Besch-Williford C.L., Hook R.R. Jr. Lesions of experimental genital Tritrichomonas foetus infections in estrogenized BALB / c mice. Vet. Pathol. - 1996. - V.33 (4). - P.407-411.

30. Vanrompay D., Hoang T.Q., De Vos L., Verminnen K., Harkinezhad Т., Chiers K., Morre S.A., Cox E. Specific-pathogen-free pigs as an animal model for studying Chlamydia trachomatis genital infection. Infect Immun. - 2005. - V.73 (12). - P.8317-8321.30. Vanrompay D., Hoang T.Q., De Vos L., Verminnen K., Harkinezhad T., Chiers K., Morre S.A., Cox E. Specific pathogen-free pigs as an animal model for studying Chlamydia trachomatis genital infection. Infect Immun. - 2005 .-- V.73 (12). - P.8317-8321.

31. Zerbe H., Schuberth H. J., Engeike F., Frank J., Klug E., Leibold W. Development and comparison of in vivo and in vitro models for endometritis in cows and mares. Theriogenology. - 2003. - V.60 (2). - P.209-223.31. Zerbe H., Schuberth H. J., Engeike F., Frank J., Klug E., Leibold W. Development and comparison of in vivo and in vitro models for endometritis in cows and mares. Theriogenology. - 2003 .-- V.60 (2). - P.209-223.

Claims

A method for modeling diseases of the female genital organs in an experiment by means of autotransplantation of endometrial sites isolated from the uterine horn to the parietal peritoneum, characterized in that for the modeling of endometriosis for autotransplantation, rectangular portions of the endometrium of 2 × 3 mm are taken and hemmed with microsurgical instruments using atraumatic synthetic non-absorbable mono-absorbable mono-absorbable 9/0 material with four seams at the corners of the endometrial site with two double nodes in each seam or for modellers Nia chronic endometritis fixing portions endometrial carried general surgical instruments synthetic 4/0 nonabsorbable sutures four sutures at the corners portion endometrial three nodes in each seam; pre- and postoperative estrogenization of the animal is carried out according to the following scheme: administration of 1.0 ml of 0.1% sinestrol intramuscularly once a day, starting 7 days before autotransplantation - on the 7th day, on the 5th day, in On the 3rd day, the day before the operation and on the day of the operation, after the operation, sinestrol is administered in the same dose once on the 2nd, 4th and 6th day.