RU2532849C2 - Method to cultivate sublimated strains of microorganisms - Google Patents

Method to cultivate sublimated strains of microorganisms Download PDF

Info

Publication number
RU2532849C2
RU2532849C2 RU2012140298/10A RU2012140298A RU2532849C2 RU 2532849 C2 RU2532849 C2 RU 2532849C2 RU 2012140298/10 A RU2012140298/10 A RU 2012140298/10A RU 2012140298 A RU2012140298 A RU 2012140298A RU 2532849 C2 RU2532849 C2 RU 2532849C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strains
sublimated
medium
microorganisms
growth
Prior art date
Application number
RU2012140298/10A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2012140298A (en
Inventor
Сергей Михайлович Кальной
Владимир Иванович Винокуров
Юлия Юрьевна Гаркуша
Андрей Владимирович Зыков
Original Assignee
Сергей Михайлович Кальной
Владимир Иванович Винокуров
Юлия Юрьевна Гаркуша
Андрей Владимирович Зыков
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сергей Михайлович Кальной, Владимир Иванович Винокуров, Юлия Юрьевна Гаркуша, Андрей Владимирович Зыков filed Critical Сергей Михайлович Кальной
Priority to RU2012140298/10A priority Critical patent/RU2532849C2/en
Publication of RU2012140298A publication Critical patent/RU2012140298A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2532849C2 publication Critical patent/RU2532849C2/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnologies.
SUBSTANCE: method to cultivate sublimated strains of microorganisms includes introduction of a growth stimulant and a source of carbon into a dense nutrient medium with subsequent seeding of microorganism cells, incubation of seeds and accounting of viable microbial cells. Sublimated strains of microorganisms include Yersinia pestis EV, Escherichia coli C600, Bacillus anthracis "СТИ", Vibrio cholerae NAG 504, Brucella abortus 19BA. The growth stimulant and carbon source is 96% ethyl alcohol in the amount of 1.0-2.0% of the medium volume. If necessary, they add gentian violet in concentration of 1:100000.
EFFECT: improved yield of viable strain cells on dense nutrient media.
1 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при культивировании сублимированных культур вакцинных и референтных (экспериментальных) штаммов микроорганизмов после длительного хранения или пребывания в неблагоприятных условиях, а также при контроле исходных штаммов в производстве вакцины.The invention relates to microbiology and can be used in the cultivation of sublimated cultures of vaccine and reference (experimental) strains of microorganisms after prolonged storage or exposure to adverse conditions, as well as in the control of the initial strains in the production of vaccines.

Общепринятые в микробиологии способы культивирования микроорганизмов предусматривают использование элективных питательных сред, содержащих ингибиторы, стабилизаторы, стимуляторы роста, энергообеспечивающие, чаще всего углеродсодержащие вещества, способствующие выделению культур.Methods of microorganism cultivation generally accepted in microbiology include the use of selective nutrient media containing inhibitors, stabilizers, growth stimulants, energy-providing, most often carbon-containing substances that promote the isolation of crops.

Как правило, преследуется цель повышения эффективности выживаемости культур сублимированных штаммов, увеличения выхода бактериальной массы, сокращение времени культивирования.As a rule, the aim is to increase the survival rate of cultures of sublimated strains, increase the yield of bacterial mass, and reduce the time of cultivation.

Известен способ выделения холерных вибрионов, включающий посев и выращивание исследуемого материала из объектов внешней среды на щелочную питательную среду (Хоттингера, Мартена, из сердечной мышцы, рН 7,8-8,0), в которую добавлена сахароза, теллурит калия и фосфомицин [Патент РФ №2039826, C12Q 1/04, C12N 1/00, от 20.07.95, Бюл. №20]. Использование этого способа исключает пересев материала, ускоряет анализ и обеспечивает надежность обнаружения возбудителя холеры в объектах внешней среды.A known method for the isolation of cholera vibrios, including sowing and growing the test material from environmental objects on an alkaline nutrient medium (Hottinger, Marten, from the heart muscle, pH 7.8-8.0), which added sucrose, potassium tellurite and fosfomycin [Patent RF №2039826, C12Q 1/04, C12N 1/00, dated 20.07.95, Bull. No. 20]. Using this method eliminates the reseeding of the material, accelerates the analysis and ensures the reliability of detection of the cholera pathogen in environmental objects.

Известна питательная среда для выращивания холерного вибриона на основе бульона Хоттингера, в которую в качестве стимулятора роста добавляют смесь ганглиозидов из мозгов быка или свиньи [А.с. СССР №1637326, C12N 1/20, C12Q 1/04, 1989]. При использовании этой среды скорость размножения вибрионов увеличивается в 3-3,5 раза. Известна плотная питательная среда для выращивания чумного микроба на основе гидролизата казеина и бульона Хоттингера, которая в качестве стимулятора роста содержит дрожжевой экстракт, в качестве углевода - маннит, а также минеральные соли [А.с. СССР №738998, C12K 1/06, 07.06.81, Бюл. №21].A known nutrient medium for growing cholera vibrio is based on the Hottinger broth, to which a mixture of gangliosides from the brains of a bull or a pig is added as a growth stimulator [A.s. USSR No. 1637326, C12N 1/20, C12Q 1/04, 1989]. When using this medium, the rate of propagation of vibrios increases by 3-3.5 times. A dense nutrient medium is known for growing a plague microbe based on casein hydrolyzate and Hottinger broth, which contains yeast extract as a growth promoter, mannitol as well as mineral salts as a carbohydrate [A.S. USSR No. 738998, C12K 1/06, 06/07/81, Bull. No. 21].

Использование такой среды обеспечивает получение бактериальной массы с полноценным антигенным составом фракций FI, V и W, необходимых для получения вакцин.The use of such a medium ensures the production of a bacterial mass with a full antigenic composition of the FI, V, and W fractions necessary for obtaining vaccines.

В микробиологической промышленности известно использование ряда эффективных стимуляторов роста микроорганизмов. При использовании в питательной среде ферментативного гидролизата плодов крупного рогатого скота в качестве белковой основы наблюдается значительное повышение выхода биомассы Yersinia pestis EV, Escherichia coli по сравнению с питательной средой на основе бульона Хоттингера культур за счет сбалансированного содержания азота, белка, кальция, магния, железа, фосфора [А.с. СССР №1586180, C12N 1/20, 1989].In the microbiological industry, the use of a number of effective microbial growth stimulants is known. When using the enzymatic hydrolyzate of cattle fruits in the nutrient medium as the protein base, a significant increase in the biomass yield of Yersinia pestis EV, Escherichia coli is observed compared to the nutrient medium based on the Hottinger broth cultures due to the balanced content of nitrogen, protein, calcium, magnesium, iron, phosphorus [A.S. USSR No. 1586180, C12N 1/20, 1989].

Значительно повышается выход биомассы и сокращается время культивирования микроорганизмов бруцеллеза, кишечных инфекций, сибирской язвы и др. при внесении в питательную среду в качестве стимуляторов роста диметилсульфоксида, питуитрина или гифотоцина, последние из которых являются гормональными препаратами [А.с. СССР №1834288, C12N 1/20, 1/38, 1990].The yield of biomass is significantly increased and the time of cultivation of microorganisms of brucellosis, intestinal infections, anthrax, etc. is reduced when dimethyl sulfoxide, pituitrin or hyphothocin are added to the growth medium, the latter of which are hormonal preparations [A.S. USSR No. 1834288, C12N 1/20, 1/38, 1990].

Анализ известных решений и их экспериментальные испытания свидетельствуют о некоторых общих недостатках.An analysis of the known solutions and their experimental tests indicate some common disadvantages.

Основным недостатком является то, что не учитывается тот факт, что при хранении культур сублимированных штаммов часть клеток теряет свою жизнеспособность, что снижает их способность к росту, биосинтезу, сохранению специфической морфологической структуры.The main disadvantage is that it does not take into account the fact that when storing cultures of sublimated strains, some of the cells lose their viability, which reduces their ability to grow, biosynthesis, and preserve their specific morphological structure.

Известна среда для регидратации лиофилизированной культуры возбудителя мелиоидоза, содержащая раствор хлорида натрия, агар-агар, гидролизат казеина, желатину и сахарозу [А.с. СССР №1616137, C12N 1/20, 1/04 // (C12N 1/20; C12R 1/38), 1989].A known medium for rehydration of a lyophilized culture of the causative agent of melioidosis, containing a solution of sodium chloride, agar-agar, casein hydrolyzate, gelatin and sucrose [A.S. USSR No. 1616137, C12N 1/20, 1/04 // (C12N 1/20; C12R 1/38), 1989].

Однако при культивировании штаммов после долгого хранения на такой среде не обеспечивается достаточной степени повышения жизнеспособности клеток.However, when culturing the strains after long storage on such a medium, a sufficient degree of increase in cell viability is not provided.

Известен способ культивирования лиофилизированной культуры возбудителя мелиоидоза, согласно которому культуру высевают на плотную питательную среду на основе мясопептонного бульона и глицерина и обогащенную после ее охлаждения пируватом натрия в количестве 0,3-1,2% от объема среды с последующим инкубированием в желатине в течение 72 часов. Пируват натрия представляет собой соль пировиноградной кислоты. [А.с. СССР №1616138, C12N 1/20 (C12N 1/20, C12R 1/38), 1989].A known method of cultivating a lyophilized culture of the causative agent of melioidosis, according to which the culture is seeded on a dense nutrient medium based on meat and peptone broth and glycerol and enriched after its cooling with sodium pyruvate in an amount of 0.3-1.2% of the volume of the medium, followed by incubation in gelatin for 72 hours. Sodium pyruvate is a pyruvic acid salt. [A.S. USSR No. 1616138, C12N 1/20 (C12N 1/20, C12R 1/38), 1989].

Недостатком прототипа является недостаточно высокий выход жизнеспособных клеток.The disadvantage of the prototype is not a high yield of viable cells.

Известно использование этилового спирта в количестве 1,0-1,5% от массы среды в качестве источника углерода в селективной среде для выделения флуоресцирующих псевдомонад, которая также содержит в качестве стимулятора роста и источника азота - диаммоний янтарнокислый и, кроме того, калий фосфорнокислый двузамещенный, сернокислый магний, краситель, агар и воду [А.с. СССР №1299142, C12N 1/20, C12R 1/40, 1985].It is known to use ethyl alcohol in an amount of 1.0-1.5% by weight of the medium as a carbon source in a selective medium for isolating fluorescent pseudomonads, which also contains amber diammonium and, in addition, potassium phosphate disubstituted as a growth stimulator and a nitrogen source. , magnesium sulfate, dye, agar and water [A.S. USSR No. 1299142, C12N 1/20, C12R 1/40, 1985].

Известно использование этилового спирта в количестве 4,0-7,0% от объема среды в качестве стимулятора роста в питательной среде для выращивания белок А продуцирующих бактерий, которая содержит также глюкозу и в качестве питательной основы - ферментативно-кислотные гидролизаты форменных элементов крови сыворотки крупного рогатого скота [А.с. СССР №16303146 C12N 1/20, 1989]. Использование 96° этилового спирта в питательных средах, указанного выше состава, в первом случае обеспечивает углеродный энергетический запас среды при селективном выделении флуоресцирующих псевдомонад, во втором значительное увеличение выхода биомассы белок А продуцирующих бактерий за счет стимуляции их роста по сравнению с выращиванием в бульоне Хоттингера (без спиртовой добавки), однако при культивировании долго хранившихся сублимированных штаммов или исследуемого материала, пребывавшего в неблагоприятных условиях, не обеспечивается контролируемого повышения жизнеспособности клеток.It is known to use ethyl alcohol in an amount of 4.0-7.0% of the volume of the medium as a growth promoter in a nutrient medium for growing protein A producing bacteria, which also contains glucose and, as a nutrient base, enzymatic acid hydrolysates of large blood serum formed elements cattle [A.S. USSR No. 16303146 C12N 1/20, 1989]. The use of 96 ° ethanol in nutrient media of the above composition, in the first case, provides a carbon energy reserve of the medium during the selective isolation of fluorescent pseudomonads, in the second, a significant increase in the biomass yield of protein A-producing bacteria due to the stimulation of their growth compared to growing in Hottinger broth ( without alcohol additives), however, when cultivating long-stored freeze-dried strains or test material in adverse conditions, do not provide A controlled increase in cell viability is observed.

Наиболее близким к заявляемому способу культивирования сублимированных культур микроорганизмов является описание способов повышения выживаемости микробных клеток в сухих живых вакцинах и пробиотиках (Светлакова Е.В., 2003). Это описание приведено в диссертационных материалах Е.В. Светлаковой, показаны свойства стимулятора роста микроорганизмов (СРМ ТС-1), получаемого на основе «чайного гриба» - Medusomyces Gisevi. В культуральной жидкости «чайного гриба» сохраняются основные компоненты чая (кофеин, танин, витамины Bi, С, Р и др.), а также образуется небольшое количество спирта, углекислого газа, сахара, уксусной кислоты, а также вещества, подавляющие развитие ряда микроорганизмов. Кроме того, в вышеназванной работе показано: «Добавление определенного количества СРМ ТС-1 к основным питательным средам приводит к увеличению накопления общей биологической массы культивируемых микробов на 22-48%, увеличению количества живых микробных клеток на 11-35%, а также обеспечиванию наибольшей выживаемости микробных клеток после лиофильной сушки. При этом не только сохраняются, но и повышаются антигенные и иммуногенные свойства перечисленных микроорганизмов. (Светлакова Е.В. Совершенствование способов повышения выживаемости микробных клеток в сухих живых вакцинах и пробиотиках: диссертация… кандидата биологических наук: 03.00.23. - Ставрополь, 2003. - 164 с.: ил. РГБ ОД, 61-033/1093-3). См. сайт: © 2007-2013 Электронная библиотека диссертаций .Closest to the claimed method of cultivating sublimated cultures of microorganisms is a description of ways to increase the survival of microbial cells in dry live vaccines and probiotics (Svetlakova E.V., 2003). This description is given in the dissertation materials of E.V. Svetlakova, the properties of a microorganism growth stimulator (CPM TS-1), obtained on the basis of “Kombucha” - Medusomyces Gisevi, are shown. The main components of tea (caffeine, tannin, vitamins Bi, C, P, etc.) are preserved in the culture fluid of “tea mushroom”, and a small amount of alcohol, carbon dioxide, sugar, acetic acid, as well as substances that inhibit the development of a number of microorganisms, are formed . In addition, in the above work it was shown: “Adding a certain amount of CPM TS-1 to the main nutrient media leads to an increase in the accumulation of the total biological mass of cultivated microbes by 22-48%, an increase in the number of living microbial cells by 11-35%, and also to ensure the greatest microbial cell survival after freeze drying. At the same time, not only the antigenic and immunogenic properties of these microorganisms are preserved, but also increased. (Svetlakova E.V. Improvement of methods for increasing the survival of microbial cells in dry live vaccines and probiotics: dissertation ... candidate of biological sciences: 03.00.23. - Stavropol, 2003. - 164 pp., Ill. RSL OD, 61-033 / 1093- 3). See the site: © 2007-2013 Electronic library of dissertations.

Техническим результатом изобретения является повышение выхода жизнеспособных клеток сублимированных культур вакцинных и референтных штаммов, высеваемых на элективных плотных питательных средах.The technical result of the invention is to increase the yield of viable cells of sublimated cultures of vaccine and reference strains seeded on elective solid nutrient media.

Указанный технический результат достигается тем, что способ культивирования сублимированных культур вакцинных и референтных штаммов микроорганизмов: Yersinia pestis EV, Brucella abortus 19 BA, Bacillus anthracis СТИ, Eschericha coli С 600, Vibrio NAG 504, включающий внесение в элективную для каждого вида плотную питательную среду в качестве стимулятора роста и источника углерода 96° этилового спирта в количестве 1,0-2,0% от объема среды для увеличения их выживаемости.The specified technical result is achieved by the fact that the method of cultivating sublimated cultures of vaccine and reference strains of microorganisms: Yersinia pestis EV, Brucella abortus 19 BA, Bacillus anthracis STI, Eschericha coli C 600, Vibrio NAG 504, which includes introducing a dense nutrient medium into the selective medium for each species as a growth promoter and a carbon source of 96 ° ethyl alcohol in an amount of 1.0-2.0% of the volume of the medium to increase their survival.

По отношению к прототипу заявляемый способ имеет следующие отличительные признаки.In relation to the prototype of the claimed method has the following distinctive features.

Введение в питательную среду в качестве стимулятора роста и источника углерода этилового спирта в количестве 1,0-2,0% от объема среды увеличивает выход жизнеспособных клеток на 30-49% по сравнению с культивированием на традиционных элективных питательных средах. Снижение вводимого стимулятора ниже 1,0% не обеспечивает необходимого эффекта, а увеличение более 2,0% приводит к подавлению роста бактерий.The introduction into the culture medium as a growth promoter and a carbon source of ethyl alcohol in an amount of 1.0-2.0% of the volume of the medium increases the yield of viable cells by 30-49% compared with cultivation on traditional elective culture media. A decrease in the stimulant administered below 1.0% does not provide the desired effect, and an increase of more than 2.0% leads to inhibition of bacterial growth.

Точные количественные характеристики повышения эффективности роста сублимированных культур вакцинных и референтных штаммов микроорганизмов могут быть получены при последующем посеве материала на элективной плотной питательной среде за счет добавления стимулятора роста - 96% этилового спирта в оптимальной концентрации, определенной опытным путем.The exact quantitative characteristics of increasing the growth efficiency of sublimated cultures of vaccine and reference strains of microorganisms can be obtained by subsequent sowing of the material on an electrically dense nutrient medium by adding a growth promoter - 96% ethyl alcohol in the optimal concentration determined experimentally.

Использование в питательных средах в качестве стимулятора роста и источника углерода этилового спирта в заявляемых количествах - 1,0-2,0% к объему среды - обеспечивает повышение выхода жизнеспособных клеток различных видов микроорганизмов на 30-49% по сравнению с плотными питательными средами на основе агара Хоттингера рН 7,3, рН 7,8, Альбими агара, соответственно, используемых для культивирования возбудителей чумы, сибирской язвы, кишечной палочки, вибрионов бруцелл.The use of ethyl alcohol as a growth promoter and a carbon source in the claimed amounts of 1.0-2.0% by volume of the medium provides an increase in the yield of viable cells of various types of microorganisms by 30-49% compared to dense nutrient media based on Hottinger agar pH 7.3, pH 7.8, Albimi agar, respectively, used for the cultivation of plague, anthrax, Escherichia coli, brucella vibrios.

Сравнительные результаты влияния различных количеств этилового спирта на выживаемость некоторых грамотрицательных и грамположительных бактерий приведены в таблице 1. Эти данные получены на основании средних результатов не менее трех раз повторенных опытов.Comparative results of the influence of various amounts of ethyl alcohol on the survival of some gram-negative and gram-positive bacteria are shown in table 1. These data were obtained on the basis of average results of at least three times repeated experiments.

Возможность практического использования заявляемого способа иллюстрируется примерами его конкретного выполнения.The possibility of practical use of the proposed method is illustrated by examples of its specific implementation.

Пример 1. Плавили агар Хоттингера в объеме 400 мл и в 8 мерных флаконов вносили по 50 мл агара. В каждый из 7 флаконов при температуре 45-47°C дополнительно вносили соответствующие объемы 96° стерильного этилового спирта (0,25, 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,8 мл). Из каждого флакона готовили по 2 чашки, которые подсушивали. Хранившиеся >10 лет сублимированные культуры чумного вакцинного штамма ресуспендировали в 2 мл физиологического раствора и затем посевные дозы его раститрованной суспензии по 0,5 мл наносили на каждую чашку из разведений 10-6, 10-7, 10-8. Культивировали при 28-30°C. Учет посевов производили через 48±2, 72±3 часов. Подсчитывали среднее число выросших колоний из различных разведений на средах с различным содержанием этилового спирта, определяли увеличение выживаемости клеток чумного вакцинного штамма в процентах по отношению разницы КОЕ/из посевной дозы в опыте и контроле к контролю, данные систематизировали в таблице 1.Example 1. Hottinger agar was melted in a volume of 400 ml and 50 ml of agar were added to 8 measured vials. In each of 7 vials at a temperature of 45-47 ° C, the corresponding volumes of 96 ° sterile ethanol (0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.8 ml) were additionally added ) From each vial, 2 cups were prepared and dried. Sublimated cultures of the plague vaccine strain that were stored for> 10 years were resuspended in 2 ml of physiological saline and then 0.5 ml of a diluted suspension of culture solution was applied to each dish from 10 -6 , 10 -7 , 10 -8 dilutions. Cultivated at 28-30 ° C. Crops were recorded after 48 ± 2, 72 ± 3 hours. The average number of grown colonies from various dilutions on media with different ethanol contents was calculated, the increase in the survival rate of plague vaccine strain cells as a percentage of the difference in CFU / sowing dose in the experiment and control to control was calculated, the data were systematized in table 1.

Примеры 2 и 3. Не отличаются по методике выполнения от примера 1, за исключением того, что в них испытаны штаммы кишечной палочки и сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ, а посевы культивировали при 37°C.Examples 2 and 3. Do not differ in the method of execution from example 1, except that they tested strains of Escherichia coli and anthrax vaccine strain STI, and crops were cultured at 37 ° C.

Пример 4. Не отличается по методике выполнения от примера 1, за исключением того, что в нем испытана культура штамма неагглютинирующегося вибриона и использован элективный щелочной агар (рН 7,8), а посевы культивировали при 37°C.Example 4. It does not differ in the method of execution from example 1, except that it tested the culture of a strain of non-agglutinating vibrio and used selective alkaline agar (pH 7.8), and the crops were cultured at 37 ° C.

Пример 5. Не отличается по методике выполнения от примера 1, за исключением того, что в нем испытана сублимированная культура бруцеллезного вакцинного штамма и использовали элективную плотную питательную среду Альбими, а посевы культивировали при 37°C.Example 5. It does not differ in the method of execution from example 1, except that it tested a freeze-dried culture of the brucellosis vaccine strain and used Albimi selective solid nutrient medium, and the crops were cultured at 37 ° C.

Таким образом, заявляемый способ практически осуществим и прост в исполнении. Использование предлагаемого способа культивирования сублимированных культур вакцинных и референтных штаммов микроорганизмов в микробиологической практике и экспериментальной работе повысит надежность анализов при культивировании материала после длительного хранения, а также при контроле штаммов и наращивании бактериальной массы в производстве вакцины.Thus, the claimed method is practicable and simple to implement. Using the proposed method for the cultivation of sublimated cultures of vaccine and reference strains of microorganisms in microbiological practice and experimental work will increase the reliability of the analyzes during cultivation of the material after long-term storage, as well as in the control of strains and the growth of bacterial mass in the production of vaccines.

Figure 00000001
Figure 00000001

Примечание к таблице 1: выживаемость определяли по отношению разницы КОЕ/из посевной дозы в опыте и контроле к контролю. «-» - нет роста.Note to table 1: survival was determined by the ratio of the difference CFU / from the inoculated dose in the experience and control to control. “-” - no growth.

Claims (1)

Способ культивирования сублимированных штаммов микроорганизмов, включающий внесение в плотную питательную среду стимулятора роста и источника углерода с последующим посевом клеток микроорганизма, инкубацией посевов и учетом жизнеспособных микробных клеток, отличающийся тем, что сублимированными штаммами микроорганизмов являются Yersinia pestis EV, Escherichia coli C600, Bacillus anthracis СТИ, Vibrio cholerae NAG 504, Brucella abortus 19BA, в качестве стимулятора роста и источника углерода используют 96% этиловый спирт в количестве 1,0-2,0% от объема среды, при этом происходит стимуляция роста на плотных питательных средах, при необходимости добавляют генцианвиолет в концентрации 1:100000. A method of cultivating sublimated strains of microorganisms, comprising introducing into a dense nutrient medium a growth promoter and a carbon source followed by seeding microorganism cells, incubating the cultures and taking into account viable microbial cells, characterized in that the sublimated microorganism strains are Yersinia pestis EV, Escherichia coli C600, Bacillus anthrac anthrac , Vibrio cholerae NAG 504, Brucella abortus 19BA, 96% ethyl alcohol in an amount of 1.0-2.0% of the volume of the medium is used as a growth promoter and carbon source, and stimulation occurs Growth tions on solid nutrient media, gentian violet was added at a concentration of 1, if necessary: 100000.
RU2012140298/10A 2012-09-20 2012-09-20 Method to cultivate sublimated strains of microorganisms RU2532849C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012140298/10A RU2532849C2 (en) 2012-09-20 2012-09-20 Method to cultivate sublimated strains of microorganisms

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012140298/10A RU2532849C2 (en) 2012-09-20 2012-09-20 Method to cultivate sublimated strains of microorganisms

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012140298A RU2012140298A (en) 2014-03-27
RU2532849C2 true RU2532849C2 (en) 2014-11-10

Family

ID=50342774

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012140298/10A RU2532849C2 (en) 2012-09-20 2012-09-20 Method to cultivate sublimated strains of microorganisms

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2532849C2 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1616138A1 (en) * 1989-05-24 1999-04-27 Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт NUTRIENT ENVIRONMENT FOR THE CULTIVATION OF THE LYOPHILIZED CULTURE OF THE PATIENT OF MELIOIDOSIS
SU1616137A1 (en) * 1989-05-24 1999-05-20 Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт ENVIRONMENT FOR REDIRATION OF LYOPHYLIZED CULTURE OF THE PATHOGENER OF MELIOIDOSIS

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1616138A1 (en) * 1989-05-24 1999-04-27 Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт NUTRIENT ENVIRONMENT FOR THE CULTIVATION OF THE LYOPHILIZED CULTURE OF THE PATIENT OF MELIOIDOSIS
SU1616137A1 (en) * 1989-05-24 1999-05-20 Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт ENVIRONMENT FOR REDIRATION OF LYOPHYLIZED CULTURE OF THE PATHOGENER OF MELIOIDOSIS

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRIED V.A. AT AL. Organic solvents as probes for the structure and function of the bacterial membrane: effects of ethanol on the wild type and an ethanol-resistant mutant of Esherichia coli K-12 // Journal of Bactriology, Apr. 1973, p.239-248. CHATTERJEE I. ET AL. Very low ethanol concentration affect the viability and growth recovery in post-stationary-phase Staphylococcus aureus populations // Applied and Environmental Microbiology, Apr. 2006, p. 2627-2636. ABBOTT B.J. Ethanol inhibition of a bacterium (Acinetobacter calcoaceticus) in chemostat culture // Journal of General Microbiology (1973), 75, p. 383-389. НЕТРУСОВ А.И. И ДР. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений. - М.: Издательский центр "академия", 2005, с. 162-164 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2012140298A (en) 2014-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sizonenko et al. The New Efficiency of the «Srmp»–Listerias Growth-Promoting Factor during Factory Cultivation”
Amin et al. Axenization and optimization of in vitro growth of clonal cultures of Tetratrichomonas gallinarum and Trichomonas gallinae
RU2687488C1 (en) Poly-strain formolated vaccine against calves pneumonia streptococcal etiology
RU2532849C2 (en) Method to cultivate sublimated strains of microorganisms
RU2388489C1 (en) Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias
RU2649754C2 (en) Method of manufacture of formolvaccine of hydrooxyaluminum polystammal against streptococcal diseases of large cattle
RU2350648C1 (en) Method of estimation of probiotics opposing activity on basis of lyophilised biomass of anaerobic bacteria in relation to pathogenic micobacteria
Sarwar et al. Optimization of physico-chemical factors augmenting in vitro biomass production of Pasteurella multocida.
RU2571852C2 (en) BACTERIA Enterococcus faecium STRAIN HAVING ANTAGONIST ACTIVITY IN RELATION TO BACTERIA OF Listeria GENUS AND Enterococcus faecalis SPECIES
US20200181565A1 (en) Bacterial Growth on Non-Animal Derived Media
RU2267530C2 (en) Broth for enteric bacterium accumulation
RU2325183C1 (en) Production method of animal colibacillosis vaccine
RU2247775C1 (en) Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis
RU2184774C1 (en) Strain of bacterium bacillus subtilis used for preparing probiotic preparation designated for prophylaxis and treatment of gastroenteric diseases in animals, poultry and piscine
RU2722668C1 (en) Method of producing inactivated vaccine against pulmonary diseases of young animals of productive animals
RU2115720C1 (en) Method of preparing microorganism growth stimulating agent and its utilization
RU2733431C2 (en) Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella
RU2085584C1 (en) Method of preparing recombinant tularemia microorganisms - producers of virulence factors, recombinant strain of francisella tularensis subspecies, holarctica r5s - producer of virulence factor francisella tularensis nearctica shu, recombinant strain of francisella tularensis holarctica rn4 - a producer of virulence factor pseudomonas tularensis subspecies holarctica r1a - a producer of virulence factor francisella tularensis nearctica b 399 a cole
Bana et al. Biomedical Application of Industrial Microbiology
RU2756201C1 (en) Storage nutrient medium for transportation of biomaterial and environmental objects contaminated with foreign microflora to be examined for brucellosis
RU2723711C1 (en) Method for preparing vaccine with aluminium hydroxide against mastitis of cows streptococcal aetiology
Lapteva Development of submerged cultivation method for vaccine Mycoplasma mycoidessubsp. mycoidesstrain
RU2484141C1 (en) Elective-differential nutrient medium for extraction of choleraic vibrios
RU2214453C2 (en) Nutrient medium for accumulation of anthrax microbe
RU2739427C1 (en) Strain of enterococcus faecium bacteria having antagonist activity on escherichia coli species, enterococcus and listeria genera