RU2528065C1 - РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai - Google Patents
РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai Download PDFInfo
- Publication number
- RU2528065C1 RU2528065C1 RU2013116206/10A RU2013116206A RU2528065C1 RU 2528065 C1 RU2528065 C1 RU 2528065C1 RU 2013116206/10 A RU2013116206/10 A RU 2013116206/10A RU 2013116206 A RU2013116206 A RU 2013116206A RU 2528065 C1 RU2528065 C1 RU 2528065C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- wound
- trichoderma harzianum
- healing agent
- wound healing
- gel
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при заживлении раневых повреждений кожного покрова. Ранозаживляющее средство представляет собой концентрат культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № ВКПМ: F-180, в качестве продуцента L-лизин-альфа-оксидазы и может быть применен как ранозаживляющее средство при повреждении кожного покрова. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, обеспечивающих заживление раневых повреждений кожи. 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологической промышленности, ветеринарии, косметологии и предназначено для заживления раневых повреждений кожи.
Известен ранозаживляющий пробиотический препарат, включающий культуры бактерий Bacillus subtilis и Lactobacterium plantarum (Патент РФ №2401116). Недостатком препарата является многокомпонентность используемых культур и сложность приготовления средства.
Известен ингибитор вируса герпеса простого 1-ного типа (Патент РФ №2022012, 1994), известен ингибитор вируса иммунодефицита человека (Патент РФ №2022011,1994). В качестве ингибиторов использовался метаболит штамма Trichoderma harzianum Rifai - ВКПМ F-180-гомогенный фермент L-лизин-а-оксидаза (Патент РФ №2022011, 1994). Сведения о ранозаживляющем свойстве данного препарата отсутствуют.
Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств для заживления ран, возникающих при повреждении кожного покрова.
Технический результат достигается тем, что в качестве ранозаживляющего средства при повреждении кожного покрова, применяют концентрат культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под №F-180.
Данный штамм является известным (Авторское свидетельство №1044043, 1991 г.), однако впервые обнаружено неизвестное из уровня техники свойство, обеспечивающее применение концентрата культуральной жидкости данного штамма в качестве средства для заживления раневых повреждений кожи.
Например, возможно создание мазевой композиции как ранозаживляющего средства, предназначенного для лечения раневых повреждений кожи.
Условия культивирования штамма Trichoderma harzianum Rifai ВКПМ F-180 и получение концентрата культуральной жидкости.
Ферментация штамма производилась на оборудовании Опытной технологической установки ИБФМ РАН им. Г.К. Скрябина (г.Пущино). Использовали ферментер типа БИОР-01 производства ОКБ ТБМ, г.Кириши, объемом 100 л с коэффициентом заполнения 0,6. Ферментер оснащен магнитной мешалкой, фильтрами тонкой очистки воздуха, датчиками температуры и pH. Питательную среду готовили непосредственно в аппарате. Для этого в аппарат заливали 60 л водопроводной воды, вносили 1% пшеничных отрубей, стимулятор - 0,1%, 1,3% сульфата аммония, значение pH 5.8-6,0 устанавливали 10% раствором HCl. Пшеничные отруби и стимулятор предварительно замачивали в 10 литрах воды в течение 4-х часов, стерилизовали в автоклаве 1 час при температуре +125°C.
Подготовленный ферментер засевали посевным материалом из колб. Посевная доза не менее 5%. Культивирование проводили при температуре +26°C, расход воздуха на протяжении всей ферментации 30 л в минуту, скорость вращения мешалки 200 оборотов в минуту. Величину pH в процессе роста корректировали до 6,5. Продолжительность выращивания 94-98 часов, конечные значения pH от 5,3 до 7.5.
По окончании ферментации культуральную жидкость направляли на участок предварительной очистки, где мицелий гриба отделяли фильтрованием под вакуумом на нутч-фильтре. Вес полученной биомассы составил 3,5 кг. Полученный нативный раствор подвергали дополнительному сепарированию на сепараторе типа ОСБ при 9000 об./мин, в течение часа при температуре +2-4°C. Затем нативный раствор в объеме 55 л, полученный после отделения биомассы, концентрировали до 1,5 л (концентрат).
Полученный концентрат культуральной жидкости с активностью L-лизин-α-оксидазы 5,4 Ед/мл представляет собой непрозрачную жидкость светло-желтого цвета со слабым грибным запахом, стабильную при хранении. L-лизин-α-оксидаза, белок, ненасыщенные жирные кислоты, моно- и дисахара, крахмал, клетчатка, органические кислоты, витамин B1, витамин B2 (придает окраску), витамин PP, железо, калий, кальций, магний, натрий, фосфор, нитрат натрия.
Условия создания ранозаживляющего средства
Выбор оптимального количества концентрата культуральной жидкости штамма, обеспечивающей достаточный противовоспалительный и ранозаживляющий эффекты, основывался на проведенных ранее исследованиях, целью которых являлось определение активности фермента L-лизин-α-оксидазы на животных (лабораторные морские свинки). Для разработки состава и технологии геля изготовлены модельные образцы с 1%-концентрацией фермента.
Выбор структурообразующих компонентов для изготовления геля осуществлен с учетом терапевтических, технологических и потребительских требований, предъявляемых к препаратам этой группы (Семкина О.А., Джавахян М.А., Левчук Т.А., Охотникова В.Ф. Вспомогательные вещества, используемые в технологии мягких лекарственных форм (мазей, гелей, линиментов, кремов) // Химико-фармацевтический журнал, Т.39, №9, 2005. - С.45-48; Семкина О.А., Суслина С.Н. Краснюк И.И. Обоснование состава геля Эвкалимина на основе сравнительного изучения реологических параметров редкосшитых акриловых полимеров. // Вестник Российского университета дружбы народов, серия "Медицина", специальность "Фармация", №4 (28), 2004. С.216-222). В качестве основ для геля выбраны гидрофильные основы редкосшитых акриловых полимеров (мАРС и Карбопол) и производных метилцеллюлозы (МЦ).
Таким образом, в результате комплекса физико-химических, биологических и реологических исследований разработан следующий состав геля с L-лизин-α-оксидазой. Состав ранозаживляющего средства, мас.%:
Пример №1
Карбопол (974 Р NF)
Европейская фармакопея 2001 г. ст.«Carbomers» | 0,8 |
Концентрат культуральной жидкости с | |
L-лизин-α-оксидазной активностью 5,4 Ед/мл | 0,8 |
Раствор натрия гидроксида (30%) (ГОСТ 4328-77) | до pH 6,0-6,5 |
Вода очищенная (ФС 42-2619-97) | до 100,0 |
Пример №2
Карбопол (974 Р NF)
Европейская фармакопея 2001 г. ст.«Carbomers» | 1,2 |
Концентрат культуральной жидкости с | |
L-лизин-α-оксидазной активностью 5,4 Ед/мл | 1,2 |
Раствор натрия гидроксида (30%) (ГОСТ 4328-77) | до pH 6,0-6,5 |
Вода очищенная (ФС 42-2619-97) | до 100,0 |
Изготовление геля начинают с подготовки ранозаживляющего вещества и основы. В операцию подготовки основы входит процесс растворения и набухания, а также регулирование значения pH с помощью гидроксида натрия.
Изготовление основы “РАП: вода”. В производственную емкость отмеривают рассчитанное количество воды очищенной. Порошок РАПа (карбопол) наслаивают на поверхность воды и оставляют набухать в течение 1 часа, затем систему перемешивают с помощью механической мешалки (ЭКРОС-8100) со скоростью 100-120 об./мин до получения гомогенного геля. После этого при постоянном перемешивании добавляют рассчитанное количество натрия гидроксид, для получения заданного значения pH среды (5,5-6,5). Введение нейтрализующего агента приводит к загущению системы и повышает уровень вязкости. Ингредиенты тщательно перемешивают с помощью высокоскоростной мешалки (ЭКРОС-8100). Полученный гель оставляют до полного завершения структурообразования в течение 4-6 ч.
Изготовление геля с концентратом культуральной жидкости Trichoderma harzianum Rifai-F-180 и исследование ранозаживляющего средства.
Культуральную жидкость (концентрат к.ж.) вносят в полученную основу геля и гомогенизируют на лопастной мешалке (ЭКРОС-8100, 120 об./мин) в течение 10 минут. Проведен опыт на 20 морских свинках, самцах, массой 320±15 г (табл.). Установлено, что гель с концентратом культуральной жидкости Trichoderma harzianum Rifai-F-180 (1%) оказывает ранозаживляющее действие, сокращая средние сроки заживления ран у животных на 5,4 дня по сравнению с контрольной группой (без лечения) и на 4,2 дня по сравнению с плацебо геля соответственно.
Из данных таблицы видно, что разница в сроках излечения животных, относящихся к разным опытным группам, достоверна.
Таблица | ||||||
Сроки заживления ран (в сутках) | ||||||
Форма препарата | Животных в группе | Время заживления раны, (сутки) | t1 | t2 | tп | tк |
Контроль без лечения (к) | 5 | 12,0±0,4 (11,6÷12,4) | 5,4 | 3,4 | 1,2 | - |
Гель с L-лизин-α-оксидазой 1% на карбополе(1) | 5 | 6,60±0,48 (6,12÷7,08) | - | -2 | -4,2 | -5,4 |
Гель с L-лизин-α-оксидазой 1% на фосфолипидной основе (2) | 5 | 8,60±0,48 (8,12÷9,02) | 2 | - | -2,2 | -3,4 |
Гель карбопола (без добавления L-лизин-α-оксидазы)(п) | 5 | 10,80±0,32 (10,48÷11, 12) | 4,2 | 2,2 | - | -1,2 |
Примечание: t1 - время заживления ран с использованием геля с 1% L-лизин-α-оксидазой на карбополе;
t2 - время заживления ран с использованием геля с 1% L-лизин-α-оксидазой на фосфолипидной основе;
tп - время заживления ран на карбополе без L-лизин-α-оксидазы;
tк - время заживления ран (контроль) без лечения.
Полученные результаты экспериментальных исследований показали высокую ранозаживляющую активность геля с 1% концентратом культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai-F-180.
Предлагаемое ранозаживляющее средство оказывает выраженный ранозаживляющий эффект, способствует более раннему заживлению раны у животных и может применяться при наличии гнойно-некротических масс в ране в ветеринарии.
Claims (1)
- Применение концентрата культуральной жидкости штамма Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № F-180, в качестве ранозаживляющего средства при повреждении кожного покрова.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013116206/10A RU2528065C1 (ru) | 2013-04-10 | 2013-04-10 | РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013116206/10A RU2528065C1 (ru) | 2013-04-10 | 2013-04-10 | РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2528065C1 true RU2528065C1 (ru) | 2014-09-10 |
Family
ID=51540229
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013116206/10A RU2528065C1 (ru) | 2013-04-10 | 2013-04-10 | РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2528065C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2719723C1 (ru) * | 2019-07-03 | 2020-04-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Орловский государственный аграрный университет имени Н.В. Парахина" | Линимент ранозаживляющий, содержащий бактериостатические метаболиты T. atrobrunneum F-1434 и сумму биофлавоноидов гречихи |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2100026C1 (ru) * | 1997-02-27 | 1997-12-27 | Чумаян Саида Пайлаковна | Средство для местного применения "астхик", обладающее антиинфекционным, антиаллергическим, обезболивающим, рассасывающим, регенерирующим, восстанавливающим и повышающим сопротивляемость организма свойствами |
RU2180241C2 (ru) * | 2000-04-18 | 2002-03-10 | Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат" | Ранозаживляющее средство |
RU2429865C1 (ru) * | 2010-05-24 | 2011-09-27 | Надежда Николаевна Прутовых | Средство, обладающее репаративным и ранозаживляющим действием |
-
2013
- 2013-04-10 RU RU2013116206/10A patent/RU2528065C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2100026C1 (ru) * | 1997-02-27 | 1997-12-27 | Чумаян Саида Пайлаковна | Средство для местного применения "астхик", обладающее антиинфекционным, антиаллергическим, обезболивающим, рассасывающим, регенерирующим, восстанавливающим и повышающим сопротивляемость организма свойствами |
RU2180241C2 (ru) * | 2000-04-18 | 2002-03-10 | Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат" | Ранозаживляющее средство |
RU2429865C1 (ru) * | 2010-05-24 | 2011-09-27 | Надежда Николаевна Прутовых | Средство, обладающее репаративным и ранозаживляющим действием |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
КАРИМОВА Е.В., и др., Изучение эффективности L-лизин-α- окисдазы и биологических пестицидов в отношении бактериальных болезней, Проблемы медицинской микологии, Т.15, N2, 2013, стр. 82-83 * |
См. интернет www.kbsu.ru/docs/otchety/ot-2539_3.doc. , 2011 год. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2719723C1 (ru) * | 2019-07-03 | 2020-04-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Орловский государственный аграрный университет имени Н.В. Парахина" | Линимент ранозаживляющий, содержащий бактериостатические метаболиты T. atrobrunneum F-1434 и сумму биофлавоноидов гречихи |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11279962B2 (en) | Chitin and chitosan producing methods | |
EP2324840B1 (en) | Production of caffeoylquinic acids from plant cell cultures of echinacea angustifolia | |
CN104147051B (zh) | 一种多效皮肤保健组合物及其制剂 | |
WO2006079288A1 (fr) | Emploi de lysozyme humaine dans la préparation de produits cosmétiques contre l'acné | |
RU2528065C1 (ru) | РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai | |
DE60223707T2 (de) | Calcium-l-threonat zur behandlung von knochenfrakturen | |
JP2019523654A (ja) | ユーグレナ溶解産物組成物ならびに該組成物および精製されたベータ−1,3−グルカンを生産するための方法 | |
US20230250199A1 (en) | Low molecular weight chondroitin sulfate, composition, preparation method and use thereof | |
RU2367433C1 (ru) | Препарат для лечения мастита у коров в период лактации | |
JP2015518871A (ja) | 小麦からのサッカリド画分、単離方法及び本発明の使用分野 | |
KR102246949B1 (ko) | 해조류 유래 폴리데옥시리보뉴클레오타이드 및 폴리뉴클레오타이드 추출물을 이용한 피부재생효과를 갖는 사료첨가제 조성물 및 이의 제조방법 | |
US11572421B2 (en) | Low molecular weight chondroitin sulfate, composition, preparation method and use thereof | |
RU2679741C2 (ru) | Средства для поддержания недифференцированного состояния и стимуляции пролиферации стволовых клеток | |
US20020114794A1 (en) | Staphylococcus aureus culture and preparation thereof | |
KR20190138640A (ko) | 피부 병변의 치료에 사용되는 박테리아성 세크레톰 | |
CN106178140A (zh) | 一种纯天然水溶性人体润滑剂及其制备方法与应用 | |
CN111265594A (zh) | 用于修复伤口的药物制剂及制备方法 | |
CN114470007A (zh) | 含乳酸菌发酵产物之创伤外用组合物及其用途 | |
JP2009143854A (ja) | 創傷治癒促進剤 | |
EP1881838B1 (en) | Antitumor agent on the base of bcg vaccine, method for its preparation and its use | |
RU2657774C2 (ru) | Способ получения косметической маски | |
JP3172599B2 (ja) | 細胞賦活剤 | |
Revin et al. | Effect of Biocomposites on Bacterial Cellulose-Based Hydrogel and Physiologically Active Compounds on Regeneration Processes in the Skin’s Lipid Phase After Burn Injury | |
RU2539378C2 (ru) | Состав для лечения повреждений кожи | |
CN104997731B (zh) | 一种组合物及含有该组合物的气雾剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180411 |