RU2523119C2 - Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны - Google Patents
Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны Download PDFInfo
- Publication number
- RU2523119C2 RU2523119C2 RU2012141627/10A RU2012141627A RU2523119C2 RU 2523119 C2 RU2523119 C2 RU 2523119C2 RU 2012141627/10 A RU2012141627/10 A RU 2012141627/10A RU 2012141627 A RU2012141627 A RU 2012141627A RU 2523119 C2 RU2523119 C2 RU 2523119C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vitalang
- rna
- oleic acid
- biological membranes
- cells
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Проводят количественную оценку эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны. В качестве биологической мембраны используют клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus. В качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8% и составляющую комплекс с РНК. Для сравнения используют препарат Виталанг-1, содержащий чистую РНК. Клетки помело заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в количестве по 4,8 мл в каждом флакончике. Инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре. С помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность растворов против дистиллированной воды, определяя содержание РНК в клетках помело и окружающем растворе. В результате сравнения полученных значений оптической плотности растворов делают вывод о том, что Виталанг-2 проникает через биологические мембраны в 4,7-4,9 раза эффективнее Виталанга-1. Устанавливают, что спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений. Изобретение позволяет оценить эффективность олеиновой кислоты, используемой в качестве переносчика РНК через биологические мембраны. 1 пр.
Description
Изобретение относится к области биохимии и фундаментальной медицины, в частности к средствам, облегчающим первичный скрининг потенциальных лекарственных препаратов, и может быть использовано, например, для подбора эффективных переносчиков РНК через биологические мембраны.
Прогресс в области молекулярной биологии и биотехнологии в последние десятилетия позволил медицине вплотную приблизиться к лечению наследственных болезней путем управления экспрессией генов с помощью чужеродной РНК. Осталась нерешенной проблема направленной доставки этой РНК внутрь клеток через биологические мембраны. Предлагают использовать с этой целью наночастицы алмазов и окислов некоторых металлов, аполипопротеин А-1 и др. Выбрать лучшее из предложенного трудно, поскольку для регистрации трансмембранного переноса авторы используют качественные и полуколичественные методы. В частности, известен и широко применяется флуоресцентный метод, основанный на присоединении флуоресцирующего красителя к РНК, инкубации этого комплекса в присутствии переносчика с суспензией клеток и последующего наблюдения свечения в клетках с помощью микроскопа [см., напр. 1]. Результат анализа качественный.
Целью настоящего изобретения является создание простого, но полноценного количественного метода для оценки эффективности переносчиков РНК через биологические мембраны.
Цель достигается тем, что в качестве модели для такой оценки используются сочные мешочки спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus со спектрофотометрическим определением РНК в клетках и окружающем растворе.
Пример осуществления предлагаемого способа
Препарат Виталанг-1, представляющий собой чистую высокополимерную дрожжевую РНК с теоретической весовой экстинкцией 20,0 ОЕ260/мг, выделяли по методу [2].
Препарат Виталанг-2 с весовой экстинкцией 17,8 ОЕ260/мг выделяли по методу [3]. Препарат содержит в своем составе 10,8% олеиновой кислоты.
Для определения способности препаратов Виталанг-1 и Виталанг-2 проникать через биологические мембраны в 3 одинаковых стеклянных флакончика на 6 мл с завинчивающимися пробками помещали по 7 продолговатых сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus и заливали их:
1-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-1 (27,3 ОЕ260/мл),
2-й - 4,8 мл водного раствора Виталанга-2 (27,1 ОЕ260/мл),
3-й - 4,8 мл дистиллированной воды.
Через 22 ч инкубации при комнатной температуре замеряли оптическую плотность растворов в 1-ом и 2-ом флакончиках против 3-го. Получилось: в 1-ом - 26,4 ОЕ260/мл, во 2-ом - 22,9 ОЕ260/мл.
Т.е. клетки поглотили Виталанга-2 в 4,7 раза больше, чем Виталанга-1. Далее растворы из флакончиков сливали и промывали каждый 5-ю порциями по 5 мл дистиллированной воды. Замерив оптическую плотность 5-й порции из 1-го и 2-го флакончика против 3-го, получили:
в 1-ом - 0,024 ОЕ260/мл,
во 2-ом - 0,019 ОЕ260/мл.
Сочные мешочки во всех 3-х флакончиках измельчали стеклянной палочкой, из полученных суспензий отбирали по 100 мкл раствора и, разбавив его в 50 раз дистиллированной водой, замеряли оптическую плотность растворов из 1-го и 2-го флакончика против 3-го. Получилось:
в 1-ом - 0,065 ОЕ260/мл,
во 2-ом - 0,318 ОЕ260/мл.
Т.е. Виталанг-2 проникает через биологические мембраны минимум в 4,9 раза эффективнее Виталанга-1, при этом спектры поглощения извлеченной из сочных мешочков РНК идентичны таковым для исходных соединений.
Таким образом, предложенный метод позволяет количественно оценить способность переносчика (в нашем случае олеиновой кислоты) транспортировать РНК через биологические мембраны. Для более точной количественной оценки эффективности переносчика нетрудно снять и соответствующие кинетические кривые.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).
Источники информации
1. Зубжицкий Ю.Н. Метод люминесцентной микроскопии в микробиологии, вирусологии и иммунологии, Л., 1964.
2. Патент RU 2392328 С2, 10.10.2009.
3. Патент RU 2403288 С1, 10.11.2010.
Claims (1)
- Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика РНК через биологические мембраны, представляющие собой клетки сочных мешочков спелой пульпы плода медового помело из рода Citrus, характеризующийся тем, что в качестве переносчика РНК используют олеиновую кислоту, содержащуюся в препарате Виталанг-2 в количестве 10,8 %, для чего указанные клетки заливают раздельно водными растворами препаратов Виталанг-1, Виталанг-2 и дистиллированной водой в равных количествах, инкубируют в течение 22 ч при комнатной температуре, с помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность РНК в указанных клетках и окружающем растворе с последующей оценкой эффективности.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012141627/10A RU2523119C2 (ru) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012141627/10A RU2523119C2 (ru) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012141627A RU2012141627A (ru) | 2014-04-10 |
| RU2523119C2 true RU2523119C2 (ru) | 2014-07-20 |
Family
ID=50435736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012141627/10A RU2523119C2 (ru) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | Способ количественной оценки эффективности олеиновой кислоты как переносчика рнк через биологические мембраны |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2523119C2 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489167C2 (ru) * | 2007-10-24 | 2013-08-10 | Нэшнл Инститьют Оф Эдванст Индастриал Сайенс Энд Текнолоджи | Модифицированная липидом двухцепочечная рнк, обладающая эффектом рнк-интерференции |
-
2012
- 2012-09-28 RU RU2012141627/10A patent/RU2523119C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2489167C2 (ru) * | 2007-10-24 | 2013-08-10 | Нэшнл Инститьют Оф Эдванст Индастриал Сайенс Энд Текнолоджи | Модифицированная липидом двухцепочечная рнк, обладающая эффектом рнк-интерференции |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Фармацевтический дайджест. Спектрофотометрия. Лабораторное оборудование. Apteka-95. 03.10.2011, с.3 [Найдено в Интернет 23.10.2013] * |
| ЦИБУЛЬКИНА Е.А. Иммунолипосомальные системы направленного транспорта малых интерферирующих РНК в клетки-мишени. Автореферат диссертации на соиск. уч. степ. к.х.н., М., 2008, (с.5, 8, рис.3) [Найдено в Интернет 23.10.2013]. . Под ред. СЕВЕРИНА Е.С. Биохимия: Учебник для вузов, 2003, с.238-211, 245. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012141627A (ru) | 2014-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gulati et al. | In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms | |
| Gunjal et al. | Nitrogen doped waste tea residue derived carbon dots for selective quantification of tetracycline in urine and pharmaceutical samples and yeast cell imaging application | |
| US10301682B2 (en) | Fluidic device, exosome analysis method, biomolecule analysis method, and biomolecule detection method | |
| Xu et al. | Induction of ganoderic acid biosynthesis by Mn2+ in static liquid cultivation of Ganoderma lucidum | |
| Li et al. | Fe3+-functionalized carbon quantum dots: a facile preparation strategy and detection for ascorbic acid in rat brain microdialysates | |
| Xiao et al. | Heterogeneity of buoyancy in response to light between two buoyant types of cyanobacterium Microcystis | |
| Zuehlke et al. | Impact of sulfur dioxide and temperature on culturability and viability of Brettanomyces bruxellensis in wine | |
| CN105017196B (zh) | 一种检测肼的近红外比率荧光探针及其应用 | |
| Chen et al. | The fluorescent bioprobe with aggregation-induced emission features for monitoring to carbon dioxide generation rate in single living cell and early identification of cancer cells | |
| Regueiro et al. | Urinary tartaric acid as a potential biomarker for the dietary assessment of moderate wine consumption: a randomised controlled trial | |
| Guo et al. | Detecting the adulteration of antihypertensive health food using G-insertion enhanced fluorescent DNA-AgNCs | |
| CN104155273B (zh) | 一种基于荧光和比色双重检测体系测定腺苷的方法 | |
| CN109609653B (zh) | 诊断或治疗胶质瘤的分子标记物及其应用 | |
| CN109406487A (zh) | 一种检测阿尔茨海默症标志物的拉曼生物传感器及其制备方法和应用 | |
| Shen et al. | Comprehensive maturity of nuclear pore complexes regulates zygotic genome activation | |
| Qin et al. | Sulfur dioxide inhalation stimulated mitochondrial biogenesis in rat brains | |
| ES2624665T3 (es) | Medio cromogénico selectivo | |
| CN109307773A (zh) | 一种蛋白糖基化检测试剂盒、检测方法及应用 | |
| CN105445248A (zh) | 一种快速测定蓝藻细胞凋亡率的方法 | |
| Kuypers et al. | Unsupervised Machine Learning‐Based Clustering of Nanosized Fluorescent Extracellular Vesicles | |
| Maas et al. | Orally administered 5-aminolevulinic acid for isolation and characterization of circulating tumor-derived extracellular vesicles in glioblastoma patients | |
| CN105950740B (zh) | 一种用于早期诊断克柔念珠菌的lamp试剂盒及其专用引物 | |
| CN102023207B (zh) | 在整体斑马鱼上进行酶联免疫吸附检测的方法及其应用 | |
| TW201732040A (zh) | 結合於分子標靶醫藥之ｄｎａ適體及使用其之分子標靶醫藥之檢測方法 | |
| Cui et al. | Repurposing FDA‐approved drugs for temozolomide‐resistant IDH1 mutant glioma using high‐throughput miniaturized screening on droplet microarray chip |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180929 |