RU2510851C1 - Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени - Google Patents
Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени Download PDFInfo
- Publication number
- RU2510851C1 RU2510851C1 RU2012143477/10A RU2012143477A RU2510851C1 RU 2510851 C1 RU2510851 C1 RU 2510851C1 RU 2012143477/10 A RU2012143477/10 A RU 2012143477/10A RU 2012143477 A RU2012143477 A RU 2012143477A RU 2510851 C1 RU2510851 C1 RU 2510851C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- bluetongue
- serotype
- btv
- culture
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложенная тест-система для обнаружения РНК вируса блютанга включает серогруппспецифичные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные участкам консервативного 10-го сегмента, имеющие следующий нуклеотидный состав (5' - 3'): BTV/10/qf - ACKggTgCWACgCAAACACA; BTV/10/z - FAM - AARgCTgCATTCgCATCgTACGC - BHQ1; BTV/10/qr - ACRTCATCACgAAACgCTTC. Данная тест-система обладает высокой чувствительностью, специфичностью и быстротой при проведении анализа и позволяет с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени обнаруживать РНК вируса блютанга 25 серотипов. 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к генетической инженерии, и может быть использовано в ветеринарной вирусологии для генодиагностики, а именно для обнаружения РНК вируса блютанга.
Вирус блютанга (ВБ), вызывающий заболевание у домашних и диких жвачных животных, является одним из видов рода Orbivirus, семейства Reoviridae [1]. Геном вируса состоит из 10-ти сегментов дцРНК, упакованных в икосаэдрический нуклеокапсид, состоящий из семи структурных белков [2]. Десять линейных дцРНК сегментов генома ВБ варьируют по размеру от 3944 п.о. до 822 п.о. (пример для ВБ 8 серотипа) [3]. Они обозначены как сегменты 1-10, в соответствии с уменьшением молекулярной массы. Геном ВБ кодирует 10 белков вируса, каждый белок - одним из сегментов дцРНК [4]. Семь белков (VP1-VP7) являются структурными компонентами вирусной частицы, остальные три (NS1,NS2 и NS3) являются неструктурными белками, которые синтезируются во время репликации вируса в инфицированных клетках. Наименьший из неструктурных белков, NS3, кодируемый 10 сегментом, является четвертым наиболее вариабельным из белков ВБ [3], анализ которого позволил разделить изоляты вируса на несколько кладов [3], однако он считается умеренно консервативным относительно других сегментов. Например, NS3 белок вируса АЧЛ имеет чрезвычайно высокий уровень вариаций, что позволило сгруппировать последовательности 10 сегмента в 3 кластера - альфа, бета и гамма [5]. Вне Африки вспышек АЧЛ было относительно немного и поэтому отсутствие любого географического группирования вирусов по 10 сегменту отражает ограничение вируса Африканским континентом. NS3 участвует в процессе освобождения частиц ВБ из инфицированной клетки хозяина [6].
В настоящее время известно о существовании 26-ти генотипов вируса, 25 из которых в антигенном отношении соответствуют 1-24 и 26 серотипам вируса. Данные молекулярной эпидемиологии свидетельствуют о высокой генетической гетерогенности его популяции, которая позволяет разделить вирусы на типы, топотипы, квазитипы. На настоящий момент известно более 300-т вариантов вируса, генетически отличающихся друг от друга.
Существует необходимость совершенствования средств и методов лабораторной диагностики, постановки диагноза при бессимптомном течении болезни и появлении новых генетических вариантов вируса, а именно разработка серогруппспецифической тест-системы для обнаружения РНК вируса блютанга методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени, позволяющей в короткие сроки установить наличие генома возбудителя в образцах биологического материала от инфицированных животных. Трудности в ее разработке обусловлены несколькими факторами: во-первых, это структура генома, так как он представлен 10-ю сегментами дцРНК, и как результат - это известный на данный момент факт частой реассортации вирусов как полевых вариантов, так и полевых с вакцинными, не только внутри одного серотипа, но и между серотипами.
Известен количественный метод ОТ-ПЦР в режиме реального времени для обнаружения вакцинных и/или полевых штаммов ВБ. С того момента, как обнаружение ПЦР-продуктов стало основано на флюоресцентной интенсивности, это значительно увеличило производительность теста и снизило риск контаминации. Были разработаны два универсальных теста, основанных на ОТ-ПЦР в режиме реального времени, они позволили обнаруживать все серотипы ВБ [7, 8, 9]. Все тест-системы были разработаны за рубежом и на период, когда было известно о существовании только 24 серотипов вируса. Существенным недостатком служит их дороговизна и длительный срок поставки в РФ, а также валидация только с использованием 24 серотипов, что может привести к ложноотрицательным результатам при исследовании материала, содержащего вирус блютанга новых генетических вариантов, или к снижению специфичности наборов.
Целью настоящего изобретения является создание серогруппспецифической тест-системы для РНК обнаружения вируса блютанга в пробах биологического материала, основанной на амплификации 10-го сегмента генома вируса блютанга.
Поставленная цель достигается тем, что предлагаемая тест-система для обнаружения генома вируса блютанга путем проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени включает синтетические олигонуклеотидные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные участкам консервативного 10-го сегмента, имеющие следующий нуклеотидный состав (5' - 3'):
BTV/10/qf - ACKggTgCWACgCAAACACA
BTV/10/z - FAM - AARgCTgCATTCgCATCgTACGC - BHQ1
BTV/10/qr - ACRTCATCACgAAACgCTTC
Технический результат заключается в повышении эффективности обнаружения РНК вируса блютанга в образцах различных видов биологического материала, возможность определения серотипа вируса блютанга с помощью ПЦР с этапом обратной транскрипции в режиме реального времени, а также повышение специфичности и чувствительности, сокращение времени проведения работы по определению серотипа вируса блютанга в образцах исследуемого биологического материала.
Сущность изобретения состоит в том, что при помощи указанных серогруппспецифических олигонуклеотидных праймеров и ДНК-зонда проводят ОТ-ПЦР в режиме реального времени, позволяющую выявить РНК вируса блютанга 25 серотипов (1-24, 26). Данная система позволяет повысить специфичность и чувствительность реакции.
В основе используемого способа - ПЦР в режиме реального времени, технология гибридизационных зондов TaqMan, контролирующая кинетику ПЦР непосредственно в ходе амплификации с использованием резонансного тушения флуоресценции. Для детекции использовали зонд, несущий флуорофор и тушитель, комплементарный части амплифицируемого со специфическими праймерами фрагмент.
Таблица 1
Серогруппспецифические праймеры и ДНК-зонд для обнаружения РНК вируса блютанга
| ПЦР-мишень | праймер/ДНК-зонд | нуклеотидная последовательность 5' - 3' | локализация (NS3 ген, 8 серотип, FJ183383) |
| 10 сегмент | BTV/10/qf | ACKggTgCWACgCAAACACA | 212-231 |
| BTV/10/z | AARgCTgCATTCgCATCgTACGC | 242-264 | |
| BTV/10/qr | ACRTCATCACgAAACgCTTC | 266-285 |
Выбор и анализ серогруппспецифических праймеров и зондов (табл. 1) проводили при помощи пакета прикладных программ «Bio Edit http://www.mbio.ncsu.edu/bioedit/BioEdit_708_062707.zip», «Oligo 6.0» на основании анализа нуклеотидных последовательностей 10-го сегмента референтных штаммов и изолятов 26 (1-26) серотипов вируса, опубликованных в GenBank. В качестве источника флуоресценции на 5' конце зонда применяли краситель FAM, а для тушения флуоресценции на 3' конце BHQ1.
Пример конкретного выполнения
Обнаружение генома вируса блютанга в образцах биологического материала (кровь от инфицированных блютангом животных, культуральный материал вируса, лиофилизированный культуральный материал вируса из музея штаммов микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, а также в образцах интактных культур клеток, кровь от интактных животных и культуральный материал гетерологичных вирусов).
Из представленных образцов с использованием реагента Тризол (Invitrogen) и согласно инструкции производителя были выделены нуклеиновые кислоты. Далее препараты нуклеиновых кислот использовали в реакции: 8 мкл образца добавляли к реакционной смеси для денатурации. В пробирку с денатурированной РНК добавляли смесь для реакции обратной транскрипции. Препараты полученных комплементарных ДНК в количестве 10 мкл использовали для постановки собственно ПЦР в режиме реального времени (результаты представлены в таблице 2).
Проведение реакции обратной транскрипции
В подготовленные пробирки вносят по 7 мкл смеси для денатурации, сверху наслаивают 40 мкл минерального масла. Под масло вносят 8 мкл препарата РНК. Реакцию денатурации проводят при температуре 95°С в течение 5 минут. Далее необходимо заморозить смесь после денатурации, поместив пробирки в штатив с хладагентом.
Готовят смесь для обратной транскрипции, для этого на одну пробу в отдельной пробирке смешивают 9,5 мкл смеси для обратной транскрипции и 0,2 мкл (40 ед) MMLV-ревертазы, смесь перемешивают. В пробирки после денатурации вносят по 9,7 мкл смеси для обратной транскрипции. Обратную транскрипцию проводят при температуре 42°С в течение 30-ти минут. После окончания реакции препарат кДНК используют для постановки ПЦР.
Проведение ПЦР в режиме реального времени
В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на необходимое количество образцов, для этого на одну пробу добавляют 8 мкл смеси для ПЦР, 7 мкл смеси праймеров и 0,2 мкл (1 ед) Taq-полимеразы. Смесь перемешивают, избегая образования пены, и раскапывают по 15 мкл в пробирки объемом 0,2 см3, на поверхность смеси вносят воск в объеме 15 мкл.
В подготовленные для ПЦР пробирки на воск вносят по 10 мкл кДНК.
Профиль реакции:
1. Удержание температуры 95°C - 3 мин
2. Циклирование
95°C - 10 c
60°С - 20 с
72°С - 15 с
Цикл повторить 5 раз.
3. Циклирование с детекцией 2
95° C - 10 c
60° С - 20 с - Детекция
72° С - 15 с
Цикл повторить - 40 раз.
Флуоресценцию измеряют по каналу Green при температуре 60°С.
Учет и интерпретация результатов амплификации
Результаты интерпретируют на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на уровне пороговой линией (Threshold), что соответствует наличию/отсутствию значения Ct в соответствующей графе в таблице результатов.
Таблица 2
Результаты обнаружения РНК вируса блютанга методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени с использованием серогруппспецифической тест-системы
| № проб | Характеристика биоматериала | Результат ОТ-ПЦР в режиме реального времени |
| 1 | культуральный вирус блютанга 1 серотип, RSArrrr/01 (AJ585122) референтный штамм | + |
| 2 | культуральный вирус блютанга 2 серотип, RSArrrr/02 (AJ585123) референтный штамм | + |
| 3 | культуральный вирус блютанга 3 серотип, RSArrrr/03 (AJ585124) референтный штамм | + |
| 4 | культуральный вирус блютанга 4 серотип, RSArrrr/04 (AJ585125) референтный штамм | + |
| 5 | культуральный вирус блютанга 5 серотип, RSArrrr/05 (AJ585126) референтный штамм | + |
| 6 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 6 серотип, RSArrrr/06 (AJ585127) референтный штамм | + |
| 7 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 7 серотип, RSArrrr/07 (AJ585128) референтный штамм | + |
| 8 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 8 серотип, RSArrrr/08 (AJ585129) референтный штамм | + |
| 9 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 9 серотип, RSArrrr/09 (AJ585130) референтный штамм | + |
| 10 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 10 серотип, RSArrrr/10 (AJ585131) референтный штамм | + |
| 11 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 11 серотип, RSArrrr/11 (AJ585132) референтный штамм | + |
| 12 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 12 серотип, RSArrrr/12 (AJ585133) референтный штамм | + |
| 13 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 13 серотип, RSArrrr/13 (AJ585134) референтный штамм | + |
| 14 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 14 серотип, RSArrrr/14 (AJ585135) референтный штамм | + |
| 15 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 15 серотип, RSArrrr/15 (AJ585136) референтный штамм | + |
| 16 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 16 серотип, RSArrrr/16 (AJ585137) референтный штамм | + |
| 17 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 17 серотип, RSArrrr/17 (AJ585138) референтный штамм | + |
| 18 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 18 серотип, RSArrrr/18 (AJ585139) референтный штамм | + |
| 19 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 19 серотип, RSArrrr/19 (AJ585140) референтный штамм | + |
| 20 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 20 серотип, RSArrrr/20 (AJ585141) референтный штамм | + |
| 21 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 21 серотип, RSArrrr/21 (AJ585142) референтный штамм | + |
| 22 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 22 серотип, RSArrrr/22 (AJ585143) референтный штамм | + |
| 23 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 23 серотип, RSArrrr/23 (AJ585144) референтный штамм | + |
| 24 | лиофилизированный культуральный вирус блютанга 24 серотип, RSArrrr/24 (AJ585145) референтный штамм | + |
| 25 | культуральный вирус блютанга 26 серотип, KUW2010/02 (HM590642) | + |
| 26 | кровь ягненка, экспериментально инфицированного вирусом блютанга 14-го серотипа, 90-е сутки после заражения | + |
| 27 | кровь крупного рогатого скота, инфицированного вирусом блютанга 14-го серотипа | + |
| 28 | интактная культура клеток Vero | - |
| 29 | интактная культура клеток ВНК-21 | - |
| 30 | кровь от интактного животного (корова) | - |
| 31 | кровь от интактного животного (овца) | - |
| 32 | культуральный вирус ЭГБО, штамм «Нью-Джерси», 1 серотип | - |
Таким образом, разработана тест-система, позволяющая с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени обнаруживать РНК вируса блютанга 25 серотипов (1-24, 26).
Основными преимуществами заявляемого изобретения являются:
- высокая специфичность и чувствительность тест-системы для обнаружения РНК вируса блютанга, благодаря избирательному выявлению уникальной нуклеотидной последовательности 10-го сегмента генома вируса;
- быстрота проведения анализа, благодаря исключению ряда процедур, необходимых для регистрации продуктов амплификации в классической ПЦР;
- простота выполнения методики, исключающая необходимость привлечения высококвалифицированного персонала;
- относительная дешевизна метода, благодаря использованию ОТ-ПЦР в режиме реального времени для идентификации генома возбудителя.
Источники информации
1. The dsRNA viruses/ P.P.C. Mertens// Virus Res. - 2004. -Vol.101. - P.3-13.
2. Bluetongue virus assembly and morphogenesis/ P. Roy, R. Noad// Curr Top Microbiol Immunol. - 2006. - Vol.309. - P.87-116.
3. Sequence analysis of bluetongue virus serotype 8 from the Netherlands 2006 and comparison to other European strains/ S. Maan, N. S. Maan, N. Ross-smith, C. A. Batten, A. E. Shaw, S. J. Anthony, A. R. Samuel, K. E. Darpel, E. Veronesi, C. A. L. Oura, K. P. Singh, K. Nomikou, A. C. Potgieter, H. Attoui, E. van Rooij, P. van Rijn, K. D. Clercq, F. Vandenbussche, S. Zientara, E. Bre´ard, C. Sailleau, M. Beer, B. Hoffman, P.S. Mellor and P. P. C. Mertens// Virology. - 2008. - Vol. 377. - P.308-18.
5. Mertens, P.P.C. Assignment of the genome segments of bluetongue virus type 1 to the proteins which they encode/ P.P.C. Mertens, F. Brown and D.V. Sangar// Virology. - 1984. - Vol.135. - P.207-17.
6. Sailleau, C. Nucleotide sequence comparison of the segments S10 of the nine African horsesickness virus serotypes/ C. Sailleau, S. Moulay and S. Zientara// Arch. Virol. - 1997. - Vol.142. - P.965-78.
7. Hyatt, A.D. Release of bluetongue virus-like particles from insect cells is mediated by BTV nonstructural protein NS3/NS3a/ A.D. Hyatt, Y. Zhaoand, P. Roy// Virology. - 1993. - Vol.193. - P.592-603.
8. Development and initial evaluation of a real-time RT-PCR assay to detect bluetongue virus genome segment 1/ A.E. Shaw, P. Monaghan, H.O. Alpar, S. Anthony, K.E. Darpel, C.A. Batten, A. Guercio, G. Alimena, M. Vitale, K. Bankowska, S. Carpenter, H. Jones, C.A.L. Oura, D.P. King, H. Elliott, P.S. Mellor, P.P.C. Mertens// http://www.sciencedirect.com/science/journal/01660934. - 2007. -http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_hubEid=1-s2.0-S0166093407X03136&_cid=271147&_pubType=JL&view=c&_auth=y&_acct=C000228598&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=3ce2e4caaf5a1dbc305c242f8e5a2345 P.115-126.
9. Bluetongue virus detection by two real-time RT-qPCRs targeting two different genomic segments/ J.F. Toussaint, C. Sailleau, E. Breard, S. Zientara, K. De Clercq// Journal of Virological Methods. - 2007. - Vol.140. - P.115-123.
10. Rapid detection and quantitation of Bluetongue virus (BTV) using a Molecular Beacon fluorescent probe assay/ G. Orr`u , M. L. Ferrando, M. Meloni, M. Liciardi, G. Savini, P. De Santis// Journal of Virological Methods. - 2006. - Vol.137. - P.34-42.
Claims (1)
- Тест-система для обнаружения 10-го сегмента генома вируса блютанга путем проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени, включающая серогруппспецифические олигонуклеотидные праймеры и ДНК-зонд, комплементарные участкам консервативного 10-го сегмента, имеющие следующий нуклеотидный состав (5' - 3'):
BTV/10/qf - ACKggTgCWACgCAAACACA
BTV/10/z - FAM - AARgCTgCATTCgCATCgTACGC - BHQ1
BTV/10/qr - ACRTCATCACgAAACgCTTC
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012143477/10A RU2510851C1 (ru) | 2012-10-11 | 2012-10-11 | Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012143477/10A RU2510851C1 (ru) | 2012-10-11 | 2012-10-11 | Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2510851C1 true RU2510851C1 (ru) | 2014-04-10 |
Family
ID=50437672
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012143477/10A RU2510851C1 (ru) | 2012-10-11 | 2012-10-11 | Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2510851C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108342510A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-07-31 | 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | Btv-11型、17型、20型、23型、24型基因型分型鉴别的多重rt-pcr试剂盒及其检测方法 |
| CN108588275A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-09-28 | 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | Btv-10型、20型、23型基因型分型的多重rt-pcr试剂盒及其检测方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2385943C2 (ru) * | 2007-11-23 | 2010-04-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Олигонуклеотидные праймеры, способ и тест-система для выявления генома вируса блютанга методом полимеразной цепной реакции в формате электрофоретической детекции продуктов амплификации |
-
2012
- 2012-10-11 RU RU2012143477/10A patent/RU2510851C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2385943C2 (ru) * | 2007-11-23 | 2010-04-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Олигонуклеотидные праймеры, способ и тест-система для выявления генома вируса блютанга методом полимеразной цепной реакции в формате электрофоретической детекции продуктов амплификации |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHAW A.E. et al, Development and initial evaluation of a real-time RT-PCR assay to detect bluetongue virus genome segment 1, Journal of Virological Methods, 2007, Vol.145, p.115-126. . TOUSSAINT J.F. et al, Bluetongue virus detection by two real-time RT-qPCRs targeting two different genomic segments, Journal of Virological Methods, 2007, Vol.140, p.115-123 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108342510A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-07-31 | 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | Btv-11型、17型、20型、23型、24型基因型分型鉴别的多重rt-pcr试剂盒及其检测方法 |
| CN108588275A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-09-28 | 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | Btv-10型、20型、23型基因型分型的多重rt-pcr试剂盒及其检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Belák | Molecular diagnosis of viral diseases, present trends and future aspects: A view from the OIE Collaborating Centre for the Application of Polymerase Chain Reaction Methods for Diagnosis of Viral Diseases in Veterinary Medicine | |
| Monaco et al. | Differentiation between field and vaccine strain of bluetongue virus serotype 16 | |
| Chatzinasiou et al. | Assessment of bluetongue viraemia in sheep by real-time PCR and correlation with viral infectivity | |
| CN109593883B (zh) | 猪圆环病毒多重实时荧光pcr检测引物对、探针、及制备的试剂盒 | |
| Guionie et al. | Laboratory evaluation of a quantitative real-time reverse transcription PCR assay for the detection and identification of the four subgroups of avian metapneumovirus | |
| CN103509880A (zh) | 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的lamp检测试剂盒 | |
| RU2510851C1 (ru) | Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга методом от-пцр в режиме реального времени | |
| CN107190103B (zh) | 同时检测三种鱼类病毒的多重pcr引物组、试剂盒及方法 | |
| CN110257561B (zh) | 用于鹿流行性出血热病毒检测的试剂、检测方法及应用 | |
| CN113249517A (zh) | 一种牛疫病实时荧光定量pcr检测用引物和探针及试剂盒 | |
| Liu et al. | Establishment of reverse transcription loop-mediated isothermal amplification for rapid detection and differentiation of canine distemper virus infected and vaccinated animals | |
| Orlowska et al. | Comparison of real-time PCR and heminested RT-PCR methods in the detection of rabies virus infection in bats and terrestrial animals | |
| Elia et al. | Use of real-time RT-PCR as a rapid molecular approach for differentiation of field and vaccine strains of bluetongue virus serotypes 2 and 9 | |
| RU2499054C1 (ru) | Тест-система для обнаружения рнк вируса блютанга 14-го серотипа методом от-пцр в режиме реального времени | |
| KR101236197B1 (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| CN110257560B (zh) | 一种用于蓝舌病病毒8型检测的试剂、检测方法及应用 | |
| CN108411042A (zh) | 一种检测乙型脑炎病毒的荧光定量pcr引物及试剂盒 | |
| RU2714045C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд, способ и тест-система для выявления генома вируса заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) КРС в реакции полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| Gill et al. | Comparative prevalence and molecular characterization of group A rotavirus in cow calves of Punjab, India | |
| Mahajan et al. | Comparative evaluation of RT-PCR with sandwich-ELISA for detection of Peste des petits ruminant in sheep and goats | |
| RU2534358C1 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры для идентификации вируса блютанга нуклеотипа а (4, 10, 11, 17, 20 и 24 серотипы) методом от-пцр | |
| CN114196786A (zh) | 禽腺病毒4型、8型双重荧光定量pcr快速检测试剂盒及方法 | |
| Anghel et al. | African swine fever virus genome detection using Real Time Q PCR polymerase chain reaction method-comparison of two sample specimen (blood and organs) | |
| RU2548799C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры, днк-зонд и способ для идентификации вируса инфекционной анемии лошадей методом пцр или от-пцр в режиме реального времени | |
| RU2606253C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры и флюоресцентный зонд с внутренним гасителем, комплементарные участку гена Р30 (CP204L) вируса африканской чумы свиней, для использования в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161012 |